Антимикробная активность комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с производным нитроимидазола и их влияние на течение инфекционного процесса

Московцев, Сергей Иванович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Антимикробная активность комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с производным нитроимидазола и их влияние на течение инфекционного процесса
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Антимикробная активность комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с производным нитроимидазола и их влияние на течение инфекционного процесса"

На правах рукописи

МОСКОВЦЕВ СЕРГЕЙ ИВАНОВИЧ

АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСОВ ЦИНКА, МЕДИ, КОБАЛЬТА И МАРГАНЦА С ПРОИЗВОДНЫМ НИТРОИМИДАЗОЛА И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ТЕЧЕНИЕ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов - 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Лазурина Людмила Петровна.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Девдариани Зураб Леванович,

доктор биологических наук, старший научный сотрудник Игнатов Олег Владимирович.

Ведущая организация:

Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.М. Габричевского.

Защита диссертации состоится ^( 2004 Г. в "часов

на заседании диссертационного совета Д 208.078.01 по присуждению ученой степени доктора (кандидата) наук при Российском научно-исследовательском противочумном институте «Микроб» Минздрава России (410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского научно-исследовательского противочумного института «Микроб».

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Слудский А.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

В настоящее время инфекционные заболевания имеют большой удельный вес в общей структуре патологии человека. Выделено и идентифицировано более 600 видов микроорганизмов — возбудителей инфекционных процессов различной локализации. Однако во многих случаях лечение и профилактика инфекционных заболеваний продолжают оставаться сложной и трудноразрешимой проблемой в связи с распространением резистентности различных видов микроорганизмов к имеющимся антибактериальным средствам.

Поэтому поиск биологически активных веществ, которые надежно и в короткий срок могут подавлять рост инфекционного агента, купировать болевой синдром и адсорбировать экссудат, т.е. обладать выраженным многонаправленным действием, остается в настоящее время актуальной задачей.

Значительно повысился интерес к использованию лекарственных средств, которые учитывали бы индивидуальные особенности организма больного (и, в первую очередь, состояние иммунной системы), специфику инфекционного процесса и стадии его развития. Одним из факторов, отягощающих течение инфекционной патологии, является нарушение баланса биометаллов.

Комплексообразование уже известных лекарственных средств с биометаллами является одним из эффективных направлений поиска новых биологически активных соединений, так как оно позволяет сочетать в одном веществе различные виды активности, которые к тому же могут взаимно усиливать друг друга, расширять спектр действия, снижать токсичность лекарственных средств.

Настоящая работа посвящена изучению биологической активности новых синтезированных комплексных соединений in vitro и на модели инфицированной раны, а также возможности коррекции баланса биометаллов при этой патологии.

В качестве металлов-комплексообразователей были выбраны марганец, цинк, медь и кобальт, а в качестве лиганда - производное 5-нитроимидазола (метронидазол).

Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.20.02 14925).

Целью работы явилось изучение антимикробной активности новых комплексных соединений цинка, меди, кобальта и марганца с метронидазолом и оценка возможности их использования для лечения экспериментальной инфицированной раны и коррекции металло-лигандного гомеостаза.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач.

1. Изучение биологической активности новых комплексных соединений (антимикробная активность, токсичность, врр^одэдМНЖтмЙЯ'! 1тус ор-

I БИБЛИОТЕКА ^

ганизма) с целью дальнейшего использования наиболее эффективных из них в составе антимикробных лекарственных препаратов.

2. Исследование влияния новых биокомплексов на течение экспериментальной стафилококковой инфекции.

3. Разработка состава гидрофильной мази, содержащей новые биокомплексы, предназначенной для лечения гнойно--воспалительных заболеваний.

4. Изучение антимикробной и ранозаживляющей активности много -компонентных мазей в эксперименте при моделировании инфицированной раны.

5. Исследование возможности- коррекции металло-лигандного гомео-стаза новым комплексным соединением цинка с метронидазолом в эксперименте на модели инфицированной раны.

Научная новизна работы определяется следующим:

-впервые изучена биологическая активность новых синтезированных комплексных соединений металлов с метронидазолом.. Установлено, что новые биокомплексы марганца (II), меди (II), цинка (II) и кобальта (II) с метронидазо-лом обладают выраженным антимикробным и иммуномодулирующим действием и относятся к классу малотоксичных веществ;

-на модели экспериментальной стафилококковой инфекции показана высокая терапевтическая эффективность комплексов меди, цинка и кобальта с , метронидазолом;

- в эксперименте на животных при лечении инфицированной раны выявлена высокая ранозаживляющая активность разработанной мази на гидрофильной основе, содержащей в своем составе новые комплексы металлов с метро-нидазолом, тримекаин спирулину платенсис и аскорбиновую кислоту.

Показана возможность коррекции металло-лигандного гомеостаза биокомплексом цинка с метронидазолом при моделировании гнойно-воспалительного процесса.

Практическая значимость работы. Установленная высокая антимикробная активность новых биокомплексов позволяет рекомендовать эти соединения для дальнейшего изучения в качестве препаратов выбора при лечении инфекций, вызванных различными видами облигатно и факультативно анаэробных микроорганизмов.

Предложен состав многокомпонентной мази на гидрофильной основе для лечения инфицированных ран, обеспечивающий выраженный антимикробный и ранозаживляющий эффект и сокращающий сроки лечения.

В эксперименте на модели инфицированной раны установлена возможность коррекции металло-лигандного гомеостаза при использовании нового биокомплекса цинка с метронидазолом.

Проведенные исследования позволяют предложить пути модификации известных лекарственных средств и биологически активных соединений с це-

лью получения высокоэффективных нетоксичных антимикробных препаратов.

По материалам диссертации опубликованы «Методические рекомендации по изготовлению, контролю качества и использованию мазей на полимерных основах, содержащих метронидазол и биокомплекс цинка с метронидазолом» (утверждены ректором Курского государственного медицинского университета 5 января 2004 г.).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Новые биокомплексы марганца (II), цинка (II), меди (II) и кобальта (II) с метронидазолом обладают выраженной антимикробной активностью и низкой токсичностью. Комплексообразование с металлами повышает антибактериальное и иммуномодулирующее действие исходного лиганда — метронида-зола.

2. Биокомплексы марганца (II), цинка (II), меди (II) и кобальта (II) с метронидазолом характеризуются высокой терапевтической эффективностью на модели экспериментальной стафилококковой инфекции.

3. Состав и технология гидрофильной мази, содержащей биокомплекс цинка (II), кобальта (II), марганца (II) или меди (II) с метронидазолом, местный анестетик тримекаин, спирулину платенсис, аскорбиновую кислоту и обладающей антимикробным и ранозаживляющим действием.

4. Применение нового биокомплекса цинка с метронидазолом способствует коррекции нарушения металло-лигандного гомеостаза, возникающего при развитии экспериментального инфекционного процесса в организме.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложений. Содержит 137 страниц машинописного текста, 28 таблиц и 12 рисунков. Библиографический указатель включает 218 источников литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач применен комплекс современных микробиологических, иммунологических, физико-химических, гистологических и математических методов, обеспечивающих реализацию поставленных цели и задач. В качестве объектов исследования использованы образцы цельной крови и некоторые органы экспериментальных животных. Объем исследования биологической активности синтезированных биокомплексов составил 659 проб биологических объектов (кровь и органы животных), на содержание в них металлов - 244 пробы, 135 объектов для гистологического и 144 пробы для микробиологического исследования мазей, т.е. всего 1182 биопробы.

Сложность лечения инфекционных заболеваний различной этиологии традиционными лекарственными средствами и сопутствующее им нарушение баланса микроэлементов обусловили необходимость синтеза комплексных соединений металлов с антимикробными препаратами. В качестве биологически активного лиганда был выбран метронидазол (1-(р-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол), который в последние годы часто применяется для лечения и профилактики различных инфекционных осложнений. В качестве металлов-комплексообразовагелей для синтеза были выбраны медь (II), цинк (II), марганец (II) и кобальт (И), доказана индивидуальность выделенных комплексов, установлен их состав.

Определение антимикробной активности в отношении облигатно анаэробных микроорганизмов проводили методом двухслойной агаровой культуры. Для исследования антимикробного действия в отношении анаэробных микроорганизмов были использованы как спорообразующие, так и неспорообра-зующие тест-культуры микроорганизмов из коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасе-вича (г. Москва). Спорообразующие микроорганизмы - Clostridium perfringens 271, неспорообразующие - Bacteroides fragilis 323, Bacteroides melaninogenicus 1011, Fusobacterium necrophorum VPJ 2523, Peptococcus magnus 336, Peptostreptococcus HC.

Антибактериальную активность метронидазола, его комплексных соединений с биометаллами и мазей, приготовленных на их основе, в отношении факультативно анаэробных микроорганизмов определяли in vitro методом диффузии в агар (Государственная фармакопея. XI издание, 1990 - ГФ XI). В соответствии с рекомендациями ВОЗ для оценки активности новых биокомплексов в качестве тест-культур использовали штаммы аэробных бактерий и грибов из коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича, (Москва): Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus 209 Р, Bacillus subtilis ATCC 6633, Bacillus cereus ATCC 10702, Eschenchia coli ATCC 25922, Proteus vuigaris ATCC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Candida albicans NCTC 2625.

Активность биокомплексов in vivo изучали на белых мышах (весом 18-20 г) при моделировании - стафилококковой инфекции. Для этого мышей внутрибрюшинно заражали- взвесью суточной агаровой культуры Staphylococcus aureus № 554 в дозе 1х107 микробных тел/мл, вызывающей гибель 50% мышей в течение 7 суток, и через сутки после заражения в течение 7 дней ежедневно внутримышечно вводили исследуемые препараты.

Терапевтическую эффективность биокомплексов оценивали по выживаемости животных.

Определение токсичности биокомплексов проводили на мышах при внутрибрюшинном способе введения (Арзамасцев Е.И, 1988; Беленький МЛ.', 1963).

Изучение влияния биокомплексов на показатели иммунологической реактивности организма проведено на крысах-самцах линии Вистар массой 100-120 г. Препараты вводились внутримышечно в дозе 30 мг/кг животного один раз в сутки в течение 11 дней. По истечении определенного времени животных усыпляли эфиром, вскрывали грудную полость и производили забор крови из нисходящей части грудной аорты. Из факторов неспецифическоюза-щиты определяли фагоцитарную активность лейкоцитов, активность бактерицидных систем фагоцитов (кислородзависимых и кислороднезависимых), резервную функцию системы фагоцитоза, уровень, сывороточного лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови.

Фагоцитарная реакция оценивалась в отношении S.aureus 209 Р с определением процента активных фагоцитов (фагоцитарный индекс) и числа поглощенных частиц в пересчете на одну фагоцитирующую клетку (фагоцитарное число). Завершенность фагоцитоза определялась как процент микробных клеток, подвергшихся разрушению фагоцитами при двухчасовом инкубировании.

Оценка состояния кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов проводилась in vitro с помощью НСТ-теста, отражающего способность супер-оксиданиона восстанавливать нитросиний тетразолий в диформазан. НСТ-тест оценивали по степени восстановления нитросинего тетразолия в спонтанной и продигиозан-стимулированной реакциях при учете внутриклеточных отложений диформазана. В работе использовали НСТ фирмы «Lachema» (Чехия). Резервная функция системы фагоцитоза оценивалась как разница между показателями стимулированного и спонтанного теста (Виксман М.Е, Маянский А.Н., 1979).

Для определения активности кислороднезависимой бактерицидной системы использовали лизосомально-катионный тест, основанный на определении лизосомальных катионных белков в гранулах лейкоцитов периферической крови в мазках, окрашенных бромфеноловым синим (Шубич М.Г., 1974; Пигарев-ский В.Е., 1979).

Уровень лизоцима определяли по методу О.В. Бухарина (1997), бактерицидную активность сыворотки - по О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1966).

Для изучения действия новых биокомплексов на клеточный и гуморальный иммунный ответ крысам-самцам линии Вистар исследуемые препараты вводили внутримышечно в твине и физрастворе в , течение 5 дней в дозе 30 мг/кг с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана и определением уровня развития гуморального иммунного ответа путем определения в селезенке количества антитело- и розеткообразующих клеток.

Для изучения терапевтической эффективности мазей, содержащих новые биокомплексы, на крысах-самцах линии Вистар моделировали инфицированную гнойную рану. Под гексеналовым наркозом в асептических условиях наносилась полнослойная кожная рана на предварительно выбритой спине крысы по паравертебральной линии 2x2 см2, которую инфицировали 0,2 мл взвеси суточной агаровой культуры 8.аигеш № 552, содержащей 1х109 микробных тел/мл. На 3 сутки от момента инфицирования развивалось острое гнойное воспаление - формировался выраженный воспалительный процесс с отеком и гиперемией кожи. Начиная с 3 суток проводилось лечение раны мазями, содержащими биокомплексы металлов с метронидазолом. Морфологические исследования тканей раны, изучение обсемененности и показателей иммунореактивности производили после декапитации животных на 3, 5, 7, 9 и 15 сутки. Оценка динамики репаративных процессов в ране производилась с учетом наличия и характера воспалительной реакции, состояния краев и дна раны, сроков очищения ран от некротических тканей и появления грануляций, сроков эпителизации раны. Скорость заживления ран определяли в динамике заживления путем измерения площади раны, зарисованной перманентным маркером на прозрачной диапозитивной пленке. Гистоструктурные изменения в раневых биоптатах изучали при исследовании препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Изучение иммуиореактивности производилось по изложенным выше методикам.

Количественное содержание биометаллов в крови и органах экспериментальных животных в ответ на реактивные изменения в организме проведено с помощью метода атомно-эмиссионной спектроскопии с индуктивно-связанной плазмой (АЭС-ИСП). Координационное соединение метронидазола с цинком вводили внутримышечно в дозе 27 мг/кг один раз в сутки ежедневно в течение 7 дней после моделирования патологического процесса.

Все полученные данные подвергнуты статистической обработке с определением критерия Стьюдента при помощи программы «Вюз1а1» на 1ВМ РС компьютере.

Результаты исследования и их обсуждение

Для лечебно-профилактических целей был синтезирован ряд биокомплексов марганца меди, цинка и кобальта с метронндазолом и изучена их биологическая активность, так как ее определение является важной задачей не только в

связи с возможностью их практического использования, но и может служить теоретической основой для целенаправленного синтеза соединений с заданными свойствами.

Учитывая имеющиеся в литературе данные о том, что инфекционные процессы чаще всего вызываются смешанной микрофлорой, особый интерес представляло изучение действия комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с метронидазолом на факультативные анаэробы, так как, по литературным данным, сам метронидазол мало активен в отношении этих микроорганизмов. Антимикробная активность синтезированных комплексов была исследована в отношении тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-Х1.

Изучение антимикробного действия новых биокомплексов по отношению к облигатно анаэробным микроорганизмам при помощи метода двухслойной агаровой культуры показало отсутствие достоверных различий между исходным лигандом и его комплексами с металлами. Таким образом, введение в состав метронидазола эссенциальных металлов не оказывало отрицательного действия на его активность в отношении основных мишеней действия препарата.

В результате проведенных сравнительных исследований на факультативно анаэробных микроорганизмах было выяснено, что биокомплексы обладают антимикробной активностью, но в разной степени (табл. 1). Наиболее выраженное антимикробное действие было обнаружено у биокомплексов меди, кобальта и цинка в отношении всех исследованных тест-микробов. При этом биокомплекс меди с метронидазолом показал наилучшие результаты.в отношении P.vulgaris, B.subtilis, S.aureus 209 Р и C.albicans, причем зоны задержки роста практически во всех случаях были достоверно больше, чем у комплексных соединений цинка и кобальта с метронидазолом.

Таблица 1

Антимикробная активность комплексов метронидазола с металлами

Тест-культура Диаметр зоны задержки роста бактерий исследованными препаратами в мм (М±ш)

MN- MNCu MNCo MNZn MNMn

Staphylococcus aureus АТСС 25923 9,2±0Д 24,3±0,5 20,3 ±0,4 24,6±0,5 18,3±0,4

Staphylococcus aureus 209 Р 8,2±0,2 25,3 ±0,5 23,1 ±0,5 23,3±0,4 15,3±0,3

Bacillus subtilis АТСС 6633 9,8±0Д 33,3±0,6 29,3±0,6 27,0±0,5 17,6+0,4

Bacillus cereus АТСС 10702 6,8±0,3 27,3 ±0,5 27,0±0,5 24,3±0,5 17,0±0,4

Escherichia coli АТСС 25922 8,2±0,3 20,3 ±0,4 23,0±0,4 25,0±0,5 18,3±0,5

Proteus vulgaris АТСС 4636 7,9±0,3 25,0±0,6 20,2±0,4 20,6±0,4 16,6±0,3

Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 7,0±0,2 24,7±0,5 32,3±0,6 19,0±0,5 16,6±0,3

Candida albicans NCTC 2625 8,0± 0,2 19,0±0,4 14,0±0,3 16,0±0,3 11,6±0,2

Примечание: МИ - метронидазол; \lNCu - комплекс меди с метронидазолом; МЫСо - комплекс кобальта с метронидазолом; М^п - комплекс цинка с метронидазолом; ШМп - комплекс марганца с метронидазолом. Антимикробная активность комплексов достоверно отличается от показателей метронидазола

В случае использования комплекса кобальта с метронидазолом наибольшая активность наблюдалась в отношении Р.аегщтсйа, В^иЫ!^. Антимикробная активность комплексного соединения цинка с метронидазолом наиболее ярко проявилась в отношении 8.аигеш, Е.соК и В^иЫПк

Комплексное соединение марганца с метронидазолом обладало меньшим антимикробным действием по сравнению с другими биокомплексами, но гораздо большим, чем сам метронидазол.

Таким образом, испытания антимикробной активности препаратов показали, что комплексообразование марганца, цинка, меди и кобальта с метронида-золом позволяет значительно увеличить антимикробную активность и расширить спектр действия комплексов по сравнению с исходным лекарственным средством.

Также была проведена сравнительная оценка антимикробной активности метронидазола, бензилпенициллина, оксациллина и цефазолина.

Установлено, что антимикробная активность наиболее эффективного из этих препаратов цефазолина в 4-5 раз превосходит активность метронидазола в отношении 8.аигеш 209 Р и В^иЬй^ и в 3-4 раза - в отношении В.сеТеш, Е.ссИ, Р.уи1§ап8 и Р.аеги§1пс8а.

Для более полной характеристики антимикробного действия препарата в отношении указанных тест-штаммов аэробных бактерий изучен механизм действия препаратов (бактерицидный или бактериостатический) и установлены их минимальные подавляющие концентрации. Для достижения указанных целей исследовано антибактериальное действие метронидазола и его комплексов с металлами методом серийных разведений в жидкой питательной среде.

Показано, что метронидазол оказывает подавляющее действие на 8.аигеш, Е.соК, В^иЫ!^, В.сегеш, С.а1Ысаш в концентрации 2,5 мг/мл, а на Р.уи^ат, P.aerugiпсsa - в концентрации 5,0 мг/мл.

Дальнейшие исследования антимикробной активности комплексных соединений метронидазола с металлами показали, что комплекс метронидазол -кобальт оказывает бактерицидное действие на все тест-культуры в дозе 0,63 мг/мл. Наименьшие бактерицидные концентрации в отношении исследованных штаммов микроорганизмов были установлены для комплекса меди с метрони-дазолом в отношении тест-культур: 8.аигеш АТСС 25923 и 209 Р, и

Е.соК - 0,63 мг/мл, в отношении В.сегеш, P.vu1garis, P.aerugiпсsa и С.а1Ысаш -1,25 мг/мл. Минимальные бактерицидные концентрации комплекса метронида-зол - цинк изменялись в диапазоне от 0,63 до 1,25 мг/мл, а для комплекса мет-ронидазол - марганец - от 1,25 до 2,5 мг/мл в отношении исследованных штаммов.

Исследованные комплексы в порядке убывания их антибактериального действия можно расположить следующим образом:

Таким образом, комплексообразование меди, цинка, марганца и кобальта с метронидазолом повышает его активность, что позволяет рекомендовать данные комплексные соединения в качестве антимикробных лекарственных средств для лечения гнойно-воспалительных заболеваний.

Однако данный вывод требовал подтверждения в опытах на лабораторных животных, поскольку далеко не всегда антимикробное действие препарата, установленное in vitro, может совпадать с его активностью в живом организме. Поскольку все исследованные биокомплексы, за исключением комплекса мет-ронидазол - марганец, показали выраженную активность в отношении стафилококков, то были проведены исследования протективной активности комплексов меди, марганца, кобальта и цинка в опытах на мышах при внутрибрюшинном их заражении культурой S.aureus. Еще одной предпосылкой к использованию модели с применением стафилококков было то, что S.aureus, по данным литературы, является наиболее часто встречающимся ассоциантом при хирургической инфекции.

Следует отметить значительное увеличение in vivo биологической активности биокомплексов по сравнению с исходным лигандом. Выживаемость животных при лечении комплексными соединениями меди, кобальта и марганца с метронидазолом составила 90, 80 и 65% соответственно, тогда как гибель мышей в контрольной группе на 7 день составила 50%. В случае использования для лечения комплексного соединения цинка с метронидазолом практически все животные были живы.

Таким образом, исследование антибактериальной активности комплексов метронидазола с металлами позволяет сделать заключение, что в большинстве случаев включение металлов (кобальт, медь, цинк, марганец) в структуру лекарственного средства приводит к повышению специфической активности исходного лиганда и расширению спектра его действия.

Поскольку известно, что микроэлементы принимают активное участие в процессах иммуногенеза, то нами были предприняты опыты по оценке влияния биокомплексов метронидазола с металлами на показатели иммунного ответа. Было установлено, что введение метронидазола существенно не влияло на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана (табл. 2). Об этом свидетельствоват тот факт, что количества АОК в селезенке крыс, получавших физ. раствор и метронидазол, существенно не отличались друг от друга.

Однако повышение числа РОК почти в 2 раза по сравнению с контролем, отмеченное в случае введения метронидазола в твине, указывает на влияние данного препарата на Т-клеточное звено иммунитета. У биокомплекса марганца с метронидазолом не наблюдалось достоверных отличий в показателях имму-нореактивности по сравнению с лигандом. Введение же биокомплексов цинка, кобальта и, особенно, меди с метронидазолом активизировало иммуномодули-

рующее действие лиганда на формирование гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Об этом свидетельствовал факт повышения по сравнению с лигандом количества АОК в 1,5-2 раза. Количество РОК в селезенке крыс, получавших биокомплексы метронидазола, существенно не отличались от лнган-да, за исключением соединения с цинком.

Таблица 2

Нммуномодулирующие свойства новых биокомплексов метронидазола

Таким образом, комплексные соединения цинка, меди и кобальта с мет-ронидазолом оказывают стимулирующее действие на гуморальное звено иммунного ответа.

Важным фактором антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является ее неспецифическое звено. Результаты исследования влияния биокомплексов на фагоцитарную активность лейкоцитов показали, что более высокие показатели фагоцитоза отмечены в группах животных, которым вводили биокомплексы цинка, кобальта и меди с метронидазолом. Так, у этих животных фагоцитарный индекс значительно превышал показатели как контрольной группы, которой вводили физ. раствор, так и группы, которой вводили метронидазол.

Изучение активности кислородзависимых бактерицидных систем ней-трофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) также свидетельствует о стимулирующем влиянии исследованных биокомплексов.

При этом наиболее высокие показатели отмечаюсь в группе животных, получавших комплекс цинка с метронидазолом. Отсутствие разницы в показателях спонтанного НСТ-теста и наличие положительной динамики в стимулированном его варианте привело к увеличению функционального резерва нейтрофи-лов. Использование же комплекса кобальта с метронидазолом оказывало выраженный стимулирующий эффект на кислороднезависимые бактерицидные системы нейтрофилов, определяемые в тесте на лизосомальные катионные белки. Стимуляция бактерицидных систем нейтрофилов послужила источником усиления завершенности фагоцитоза под действием комплексов метронидазола с металлами.

Что касается воздействия исследованных препаратов на гуморальные факторы неспецифической защиты организма животных, то можно отметить их положительное влияние. Изменения такого интегрального показателя гуморальных факторов неспецифической защиты организма, как бактерицидная активность сыворотки крови, характеризовались статистически более высокими значениями в группах опытных животных по сравнению с группой контроля.

Таким образом, установлено, что изучаемые биокомплексы повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и стимулируют бактерицидную активность сыворотки крови крыс. Кроме того, на основании полученных данных можно констатировать факт более выраженного по сравнению с метронидазо-лом иммуномодулирующего действия биокомплексов метронидазола на гуморальное звено иммунитета.

Определение токсичности координационных соединений метронидазола с металлами были выполнены на нелинейных мышах (самцы и самки весом 18-20 г) при внутрибрюшинном способе введения. Исследуемые вещества вводили в виде свежеприготовленных подогретых водных растворов в концентрации от 120 до 1400 мг/кг веса. Длительность наблюдения за подопытными животными после введения препаратов составляла 14 дней.

Установлено, что наименее токсичным по показателю ЛД50 является мет-ронидазол, а наибольшей токсичностью обладает его комплекс с кобальтом. Однако следует отметить, что как сам метронидазол, так и синтезированные на его основе биокомплексы цинка, кобальта, меди и марганца характеризуются сравнительно низкой токсичностью и в соответствии с классификацией токсичности, принятой ВОЗ, относятся к классу малотоксичных веществ.

Учитывая их низкую токсичность, отсутствие раздражающего эффекта и антибактериальную активность целесообразно было испытать указанные комплексы при экспериментальной гнойной ране.

Так как в терапии раневой инфекции наиболее часто используются различные мази, то нами при разработке мази учитывалась природа носителя. Выбор мазевой основы осуществляли с учетом ее способности к высвобождению действующих веществ. Мазь готовили на общеизвестных и широко используе-

мых в производстве мазей основах липофильной (вазелин; вазелин в сочетании с ланолином (9:1); эмульсионная основа (вазелин : эмульгатор Т2: вода дистиллированная)) и гидрофильной (сплав полиэтиленоксидов (ПЭО); 5%-й глицеро-гель натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ)) природы. Антимикробную активность мазей исследовали в опытах in vitro методом диффузии в агар (табл. 3).

Таблица 3

Зависимость антимикробного действия метронидазола* от вида мазевой основы

№ гр. Основы для мячей Диаметр зоны задержки роста 1ест-штаммов, мм (М±т)

S.aureus 209 Р E.coli АТСС 2S922 B.subtilis АТСС 6633 B.cereus АТСС 10702 P.aerugi-nosa АТСС 27853 C.albicans NCTC 2625

1 Вазелин 9,3 ±0,3 9,0±0,3 7,8±0,2 9,5±0,3 10,0±0,3 9,3 ±0,3

2. Вазелин-ланолин 8,5±0,2 10,0±0,4 8,0±0,2 9,3±0,3 9,3 ±0,3 10,0±0,3

3. Эмульсионная 10,3±0,3|Д 10,0±0,4 9,3±0,3 9,3±0,3 10,6±0,3 8,8±0,3

4. ПЭО 14,6+0,3 IO.SHU1'23 13,8±0,3и"' 13,5±0,3UJ 13,3±0,31АЗ 12,7±0,31АЗ

5. 5%-й глицеро-геяь ИаКМЦ 14,8±0,3W 10,1±0,3W 12,8±0,3W 13,710,31,2,1 12,1±0,3Ш 11,3±0,3Ш

Примечание: цифрами обозначены мазевые основы, в отношении которых различия достоверны (р<0,05), * концентрация метронидазола в мазях 0,5%

Установлено, что мази на гидрофильных основах в отношении всех изученных тест-штаммов обладают антимикробной активностью, так как диаметры зон задержки роста микроорганизмов увеличиваются в 1,5-2 раза относительно мазей, приготовленных на вазелиновой, вазелин-ланолиновой и эмульсионных основах. Кроме того, введение биокомплексов в состав мази также увеличивает ее антимикробную активность (табл. 4).

Для мазей с биокомплексами кобальта, меди и цинка с метронидазолом диаметр зоны задержки роста тест-микробов в среднем в 1,5 раза превышал показатели, полученные при использовании мази, содержащей метронидазол.

Наибольшей антимикробной активностью обладали мази, содержавшие комплексы цинка, кобальта, меди с метронидазолом в отношении S.aureus, E.coli, B.subtilis, B.cereus. Антимикробная активность мази, содержащей биокомплекс марганца с метронидазолом в отношении S.aureus, В. subtilis и B.cereus, незначительно отличалась от активности мази, содержащей метронидазол; в отношении E.coli, активность комплекса была почти в 2 раза больше, чем активность мази, содержащей метронидазол.

Таблица 4

Сравнительная оценка антимикробного действия мазей, приготовленных на основе полиэтиленоксида

Основной Диаметр зоны задержки роста тест-штаммов, мм (М±т)

антимик- в.аигеиз Е.соН В.$иЬ- В.сегеш Р.аеги^- С.а1Ысам

робный 209 Р АТСС 11118 АТСС по$а 1ЧСТС

компонент 25922 АТСС 10702 АТСС 2625

мази 6633 27853

Ш 14,6±0,3 10,810,3 13,8+0,3 13,510,3 13,3±0,3 12,7±0,3

мыгп 20,4±0,4 15,3±0,2 20,0±0,4 17,510,3 15,2±0,3 14,510,3

МИСо 19,1 ±0,4 16,5±ОД 19,3±0,4 19,8±0,4 14,8±0,2 16,2±0,3

МИСи 21,1±0,4 20,9±0,4 21,3±0,4 20,0±0,4 19,510,4 18,5Ю,4

МЫМп 15,8±0,3 18,3±ОД 16,4±0,3 16,1±0,2 16,8±0,2 15,7±0,2

Примечание: MN - метронидазол, М^п - комплекс цинка с метронидазолом, ММСо - комплекс кобальта с метронидазолом, ММСи - комплекс меди с метронидазотом, MNMn - комплекс марганца с метронидазолом

В результате проведенных исследований установлено, что достаточной антимикробной активностью обладают 1-2%-е мази как метронидазола, так и его комплексных соединений, а основы, наиболее полно и быстро высвобождающие действующее вещество, - сплав погиэтиленоксидов с молекулярной массой 400 и 1500 в соотношении 8:2 соответственно и 5%-й глицерогель ИаКМЦ.

Введение в состав мазей тримекаина, спирулины платенсис и аскорбиновой кислоты увеличивает их антибактериальную активность по сравнению с мазями, содержащими только биокомплексы.

Изучение терапевтической эффективности мазей с биокомплексами на модели полнослойной гнойной раны показало, что их применение быстро купировало воспалительный процесс, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденной ткани. Это проявлялось в активизации образования демаркационной линии очага воспаления, более быстром развитии грануляционной соединительной ткани по сравнению с контролем. Подтверждением усиления процессов репаративной регенерации при использовании биокомплексов являются достоверно более ранние сроки образования струпа по сравнению как с контрольной группой, так и с группами, где использовалась мазь, содержащая метронидазол или применялась мазь «Левомеколь» (табл. 5).

Это сопровождалось уменьшением размеров кожной раны, более быстрым очищением ее от гноя и сокращением сроков начала образования грануляций. Причем мази, в состав которых, кроме биокомплексов были добавлены тримекаин, спирулина платенсис и аскорбиновая кислота, стимулировали репа-ративные процессы достоверно быстрее по сравнению с аналогами.

Таблица 5

Сроки заживления инфицированной раны у крыс при различных способах лечения

№ Наименование группы Сроки образова-

груп- ния струпа,

пы сутки.

1. Контроль раны 14,2±0,2

2. Лечение мазью, содержащей метронидазол 13,5±ОД1

3. Лечение мазью «Левомеколь» 13,5+ОД1

4. Лечение мазью, содержащей \lNCu 12,5+0,2и'5

5. Лечение мазью, содержащей \INZn 12,0±0,21,2,3

6. Лечение мазью, содержащей ММ Со 12,0+0,2й'3

7. Лечение мазью, содержащей МЫМп 13,0±0,21АЗ

8. Лечение мазью, содержащей МЫ Си, тримекаин, спирулину, аскорбиновую кислоту 10,5±0,11А3'4

9. Лечение мазью, содержащей тримекаин, спирулину, аскорбиновую кислоту ю.ой.г1'2'3'5

. 10. Лечение мазью, содержащей МЫСо, тримекаин, спирулину, аскорбиновую кислоту 10,5+0,11АЗ'6

11. Лечение мазью, содержащей \lNMn, тримекаин, спирулину, аскорбиновую кислоту 11,5+0,2 й"3'7

Примечание: цифры надстрочного индекса обозначают номера групп, по сравнению с которыми наблюдается достоверные различия (р<0,05)

Положительная динамика морфологических изменений в ране сопровождалась стимуляцией факторов антиинфекционной защиты. Начиная с 5 суток раневого процесса отмечались более высокие, чем в контроле, значения фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и завершенности фагоцитоза при использовании исследованных мазей. Это сопровождалось к концу опыта более высокими, чем в контроле, показателями стимулированного НСТ-теста при отсутствии разницы по спонтанному НСТ-тесту. Вследствие данного факта в опытных группах отмечались более высокие показатели функционального резерва фагоцитов. Различия по остальным исследованным параметрам антиинфекционной защиты были недостоверны. Однако следует отметить, что наибольшие значения указанных показателей отмечались при использовании мазей, содержащих дополнительно тримекаин, спирулину платенсис и аскорбиновую кислоту. Кроме того, наиболее выраженным иммуностимулирующим действием обладали мази, содержащие биокомплексы цинка и меди.

Таким образом, применение мазей, содержащих биокомплексы цинка, меди, кобальта и марганца с производным 5-нитроимидазола, позволяет получить хороший эффект при лечении гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии. Введение в состав мазей дополнительно тримекаина, спирулины

платенсис и аскорбиновой кислоты усиливает их антимикробную активность и ранозаживляющее действие.

Исследования в области биохимии патологических процессов свидетельствуют о значительных изменениях в обмене и балансе микроэлементов на субклеточном, тканевом и организменном уровнях, своевременная коррекция которых, согласно экспериментальным и клиническим данным, может привести к хорошему терапевтическому эффекту. В связи с этим нами было изучено нарушение обмена биометаллов на модели инфицированной раны, представляющей форму патологии, сопровождающейся инфекционным воспалением и снижением иммунореактивности организма. При этом установлены значительные сдвиги в содержании цинка, марганца, меди и кобальта в крови и паренхиматозных органах экспериментальных животных по сравнению с показателями здоровых. Корреляционный анализ позволил установить парную корреляционную зависимость в крови животных. Прямая корреляционная зависимость выявлена для пар: цинк/кобальт, медь/марганец и обратная - цинк/медь, цинк/марганец, медь/кобальт (коэффициент корреляции в интервале от ±0,75 до ±0,85), что и послужило основой правомерности выбора пар элементов для расчета их коэффициентов соотношений.

В результате опытов была выявлена закономерность в изменении показателей соотношений элементов в крови и органах экспериментальных животных при моделировании инфицированной раны, заключающаяся в снижении коэффициентов соотношений цинк/медь, цинк/марганец и увеличении -медь/кобальт и медь/марганец.

Это подтверждает правомерность изучения не столько абсолютных уровней отдельных элементов, сколько отношений тех пар, которые близки по характеру участия в микроэлементном обмене и других биохимических процессах, но в то же время способны проявлять конкурирующие свойства в зависимости от целого ряда условий.

Основываясь на выявленных нарушениях топографии биометаллов в крови и органах, корреляционных зависимостях и показателях соотношений, представилось возможным в качестве объективного прогностического критерия при инфицированной ране выбрать соотношение цинк/медь, являющееся отражением реактивности организма при нарушении металлсмтигандного гомеостаза.

Показано, что снижение показателя цинк/медь более чем в 4 раза свидетельствует о тяжести и неблагоприятном протекании инфицированной раны.

Установленные закономерности изменения уровней биометатлов и показателей их соотношений при инфицированной ране показали необходимость коррекции нарушенного метатло-лигандного гомеостаза. С этой целью была изучена возможность использования нового координационного соединения цинка (И) с метронидазолом.

Анализ полученных результатов показал, что именно введение синтезированного биокомплекса при моделировании инфицированной раны способствует накоплению цинка в крови (рис. 1) и стремлению цинка к вероятностно-нормальному уровню в крови и к нормализации показателей выбранного соотношения. Гистологические исследования показали, что при введении данного нового биокомплекса отмечаются менее выраженные деструктивные процессы в паренхиматозных органах по сравнению с введением метронидазола.

Таким образом, проведенные исследования показали целесообразность коррекции металло-лигандного гомеостаза при инфицированной ране координационным соединением цинка (И) с метронидазолом, оказывающим эффективное ранозаживляющее действие, быстрое купирование воспалительного процесса и активизирующим иммунную систему.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что новые координационные соединения цинка, кобальта, меди и марганца с метронидазолом обладают более выраженным антимикробным действием в отношении тест-штаммов микроорганизмов по сравнению с метронидазолом.

2. На модели экспериментальной стафилококковой инфекции установлена высокая терапевтическая эффективность исследованных биокомплексов метронидазола с металлами, заключающаяся в снижении смертности животных при их инфицировании.

3. Комплексообразование цинка (II), кобальта (II), меди (II) и марганца (II) с метронидазолом приводит к усилению стимулирующего действия на факторы неспецифической резистентности (фагоцитоз, бактерицидная активность сыворотки крови), гуморального иммунного ответа; установлена низкая токсичность и отсутствие раздражающего эффекта изучаемых биокомплексов.

4. Обоснован состав и разработана технология мази, содержащей биокомплексы металлов (цинк, кобальт, медь и марганец) с метронидазолом (1%), местный анестетик тримекаин (3%), спирулину платенсис (1%), аскорбиновую кислоту (5%) и предназначенной для лечения местных гнойно-воспалительных процессов. Оптимальными основами из изученных в эксперименте являются полимерные, представляющие собой сплав полиэтиленоксидов с молекулярными массами 400 и 1500 в соотношении 8:2 соответственно и 5%-ый глицерогель ИаКМЦ.

5. На модели полнослойной кожной гнойной раны доказано, что разработанные мази, содержащие комплексные соединения цинка, кобальта, меди и марганца с метронидазолом обладают более выраженным, по сравнению с содержащей метронидазол мазью, антимикробным и ранозаживляющим действием. Показано, что многокомпонентная мазь, содержащая в своем составе кроме

биокомплексов тримекаин, спирулину платенсис и аскорбиновую кислоту, обладает высокой антимикробной и ранозаживляющей активностью.

6. Установлена возможность коррекции металло-лигандного гомеостаза координационным соединением цинка с метронидазолом в эксперименте на модели инфицированной раны.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Московцев СИ. Изучение антимикробной активности растворов некоторых биокомплексов производного 5-нитроимидазола в отношении аэробных микроорганизмов / СИ. Московцев, И.В. Рылина, Л.П. Лазурина // Матер, науч.-практ. конф. «Медицина будущего» - Краснодар, 2002. - С. 64.

2. Московцев СИ. Сравнительная характеристика антимикробной активности некоторых новых биокомплексов с металлами / СИ. Московцев, И.В. Рылина, Е.В. Цуканова // Сб. матер. Всеармейской науч.-практ. конф. с междунар. участием «Инфекция в хирургии - проблема современной медици-ны».-М, 2002.-С. 172-173.

3. Московцев СИ. Ранозаживляющая и иммуномодулирующая активность некоторых новых производных 5-нитроимидазола / СИ. Московцев, Л.П. Лазурина, В.М. Соломка // Сб. науч. раб. конф. «Актуальные проблемы медицины и биологии». - Томск, 2003. - С. 34.

4. Московцев СИ. К вопросу повышения эффективности лекарственных средств / СИ. Московцев, И.В. Самохвалова, А.А. Краснов, Л.П. Лазурина // Сб. матер. VI междунар. науч. конф_ «Медико-экологические информационные технологии». — КурскГТУ, Курск, 2003. — С. 117-119.

5. Московцев СИ. Изучение биологической активности некоторых новых координационных соединений с металлами / СИ. Московцев, И.В. Самохвалова, А.А. Краснов, Л.П. Лазурина // Сб. матер. VI междунар. науч. конф. «Медико-экологические информационные технологии». - Курск, 2003. - С. 125126.

6. Московцев СИ. Разработка антимикробных мазей на основе кохта-гена / СИ. Московцев, А.А. Краснов, О.И. Басарева, Л.П. Лазурина, В.М. Соломка// Сб. науч. тр. междунар. науч.-практ. молодеж. конф. молодых ученых и специалистов «Социально-экономическое развитие регионов: реальность и перспективы». - Воронеж, 2003. - С. 103.

7. Московцев СИ. Антимикробная активность мазей, содержащих некоторые производные 5-нитроимидазола / СИ. Московцев, А.А. Краснов, Л.П. Лазурина // Сб. науч. тр. междунар. науч.-практ. молодеж. конф. молодых ученых и специалистов «Социально-экономическое развитие регионов: реальность и перспективы». - Воронеж, 2003. - С. 105.

8. Московцев СИ. Изучение ранозаживляющего действия многокомпонентных мазей, содержащих биокомплексы металлов / СИ. Московцев,

И.В. Самохвалова, А.А. Краснов, Л.П. Лазурина, Н.А. Кореневский // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2003. - Т. 2, № 3. -С. 225-227.

9. Московцев СИ. Разработка многокомпонентных мазей, содержащих новые биокомплексы, для лечения гнойной инфекции / СИ. Московцев, И.В. Самохвалова, А.А. Краснов, Л.П. Лазурина // Сб. матер. VI междунар. науч. конф. «Медико-экологические информационные технологии». - Курск, 2003.-С. 127-129.

10. Московцев СИ. Антимикробная активность некоторых биокомплексов с металлами / СИ. Московцев, Л.П. Лазурина, В.М. Соломка // Сб. матер. Всерос. науч.-практ. конф. «Новые медицинские технологии в охране здоровья здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных. - Пенза, 2003. - С. 78-79.

11. Московцев СИ. Антимикробная активность многокомпонентных мазей, содержащих новых биокомплексы / СИ. Московцев, А.В. Завьялов, Л.П. Лазурина, В.М. Соломка, И.В. Самохвалова // Сб. науч. тр. межрегион, на-уч.-практ. конф. «Актуальные проблемы формирования и обеспечения здорового образа жизни, сохранения, укрепления и восстановления здоровья населения». - Липецк, 2003. - С 153.

12. Московцев СИ. Сравнительная характеристика антимикробной активности спирулина платенсис и аскорбиновой кислоты / СИ. Московцев, А.В. Завьялов, Л.П. Лазурина, В.М. Соломка, И.В. Самохвалова // Сб. науч. тр. межрегион, науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы формирования и обеспечения здорового образа жизни, сохранения, укрепления и восстановления здоровья населения». -Липецк, 2003. - С. 153-154.

13. Московцев СИ. Изучение токсичности некоторых новых биокомплексов с металлами / СИ. Московцев, И.В. Самохвалова // Матер, науч. конф. «Вклад земляков-орловцев в развитие и становление Российской науки, культуры и образования». - Орел, 2003. - С 52-53.

14. Московцев СИ. Эффективность терапии раневой инфекции многокомпонентными мазями, содержащими новые биокомплексы /СИ. Московцев, И.В. Самохвалова // Матер, науч. конф. «Вклад земляков-орловцев в развитие и становление Российской науки, культуры и образования». - Орел, 2003. - С 5354.

15. Московцев СИ. Изучение влияния комплексных соединений цинка, меди, кобальта и марганца с производным 5-нитроимидазола на антимикробную активность мазей / СИ. Московцев, И.В. Самохвалова, Л.П. Лазурина, Н.А. Кореневский, А.А. Краснов // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 326-327.

16. Московцев СИ. Методические рекомендации по изготовлению, контролю качества и использованию мазей на полимерных основах, содержащих

метронидазол и биокомплекс цинка с метронидазолом / СИ. Московцев, Л.П. Лазурина, И.В. Самохвалова, В.М. Соломка, Е.В. Каштанова. — Курск: КГМУ, 2004 - 8 с.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 16,08.2004 г. Подписано в печать 20,08.2004 г. Формат 30x421/8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 48А. Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

04-15723

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Московцев, Сергей Иванович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Пути повышения антимикробной активности лекарственных средств.

1.2. Влияние микроэлементов на течение различных патологических процессов.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Исследование антимикробной активности препаратов in vitro и in vivo.

2.2. Моделирование раневого процесса и исследование антимикробной активности препаратов в эксперименте.

2.3. Оценка динамики репаративных процессов в инфицированной ране.

2.4. Оценка факторов антиинфекционной защиты организма животных.

2.5. Индукция и оценка выраженности иммунного ответа.

2.6. Определение токсичности препаратов.

2.7. Определение содержания металлов в биологических объектах.

2.8 Статистическая обработка полученных данных

ГЛАВА III. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ МЕТРОНИДАЗОЛА.

3.1. Исследование антимикробной активности некоторых производных метронидазола in vitro и in vivo.

3.2. Исследование иммуномодулирующей активности и токсичности координационных соединений металлов с метронидазолом.

ГЛАВА IV. ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ МАЗЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ БИОКОМПЛЕКСЫ ЦИНКА, МЕДИ, КОБАЛЬТА И МАРГАНЦА С МЕТРОНИДАЗОЛОМ.

4.1. Исследование влияния на антимикробную активность мазевой основы и состава многокомпонентной мази, содержащей биокомплексы.

4.2. Изучение совместимости и биофармацевтической доступности метронидазола и тримекаина при разработке многокомпонентной мази.

ГЛАВА V. ИЗУЧЕНИЕ РАНОЗАЖИВЛЯЮЩИХ СВОЙСТВ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ МАЗЕЙ.

ГЛАВА VI. ИЗУЧЕНИЕ ОБМЕНА ЦИНКА, МЕДИ, КОБАЛЬТА И МАРГАНЦА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ИНФИЦИРОВАННОЙ РАНЫ И ВОЗМОЖНОСТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ БИОКОМПЛЕКСОМ ЦИНКА С

МЕТРОНИДАЗОЛОМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Антимикробная активность комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с производным нитроимидазола и их влияние на течение инфекционного процесса"

В настоящее время инфекционные заболевания имеют большой удельный вес в общей структуре патологии человека. Выделено и идентифицировано более 600 видов микроорганизмов - возбудителей инфекционных процессов различной локализации. Однако во многих случаях лечение и профилактика инфекционных заболеваний продолжает оставаться сложной и трудноразрешимой проблемой в связи с распространением резистентности различных видов микроорганизмов к имеющимся антибактериальным средствам.

В последние годы значительно повысился интерес к использованию лекарственных средств, которые учитывали бы индивидуальные особенности организма больного (и в первую очередь состояние иммунной системы), специфику инфекционного процесса и стадии его развития. Одним из факторов, отягощающих течение инфекционного процесса, является нарушение баланса биометаллов. Известно, что неорганические соли биометаллов не нашли широкого применения в медицине, так как они проявляют относительно низкую биологическую активность и обладают выраженной токсичностью.

Большой интерес вызывает рациональное использование уже известных лекарственных средств и их комплексообразование с металлами. В связи с этим изучение биологической активности новых комплексных соединений металлов является важной задачей и может служить теоретической основой для целенаправленного синтеза соединений с заданными свойствами.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

1. Изучение биологической активности новых комплексных соединений (антимикробная активность, токсичность, влияние на иммунный статус организма) с целью дальнейшего использования наиболее эффективных из них в составе антимикробных лекарственных препаратов.

2. Исследование влияния новых биокомплексов на течение экспериментальной стафилококковой инфекции.

3. Разработка состава гидрофильной мази, содержащей новые биокомплексы, предназначенной для лечения гнойно-воспалительных заболеваний.

4. Изучение антимикробной и ранозаживляющей активности многокомпонентных мазей в эксперименте при моделировании инфицированной раны.

5. Исследование возможности коррекции металло-лигандного гомеостаза новым комплексным соединением цинка с метронидазолом в эксперименте на модели инфицированной раны.

Научная новизна работы определяется следующим:

- впервые изучена биологическая активность новых синтезированных комплексных соединений металлов с метронидазолом. Установлено, что новые биокомплексы марганца (II), меди (II), цинка (И) и кобальта (II) с метронидазолом обладают выраженным антимикробным и иммуномодулирующим действием и относятся к классу малотоксичных веществ.

- на модели экспериментальной стафилококковой инфекции показана высокая терапевтическая эффективность комплексов меди, цинка и кобальта с метронидазолом.

- в эксперименте на животных при лечении инфицированной раны выявлена высокая ранозаживляющая активность разработанной мази на гидрофильной основе, содержащей в своем составе новые комплексы металлов с метронидазолом, тримекаин, спирулину платенсис и аскорбиновую кислоту.

- показана возможность коррекции металло-лигандного гомеостаза биокомплексом цинка с метронидазолом при моделировании гнойно-воспалительного процесса.

Проведенные исследования позволяют предложить пути модификации известных лекарственных средств и биологически активных соединений с целью получения высокоэффективных нетоксичных антимикробных препаратов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Новые биокомплексы марганца (II), цинка (II), меди (II) и кобальта (И) с метронидазолом обладают выраженной антимикробной активностью и низкой токсичностью. Комплексообразование с металлами повышает антибактериальное и иммуномодулирующее действие исходного лиганда - метронидазола.

3. Состав и технология гидрофильной мази, содержащей биокомплекс цинка (II), кобальта (II), марганца (II) или меди (И) с метронидазолом, местный анестетик тримекаин, спирулину платенсис, аскорбиновую кислоту и обладающей антимикробным и ранозаживляющим действием.

Апробация результатов работы. Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2001, 2002 гг.), научно-практической конференции «Медицина будущего» (Краснодар, 2002 г.), конференции «Актуальные проблемы медицины и биологии» (Томск, 2003 г.), Всероссийской научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в охране здоровья здоровых, в диагностике, лечении и реабилитации больных» (Пенза, 2003 г.), межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы формирования и обеспечения здорового образа жизни, сохранения, укрепления и восстановления здоровья населения» (Липецк, 2003 г.), научной конференции «Вклад земляков-орловцев в развитие и становление Российской науки, культуры и образования» (Орел, 2003 г.), межкафедральной научной конференции Курского государственного медицинского университета (Курск, 2003 г.).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Московцев, Сергей Иванович

110 выводы

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Не возникает сомнения в том, что антибиотикотерапия была и остается наиболее эффективным методом лечения инфекционно-воспалительных процессов различной этиологии. Антибиотики наряду с вакцинацией больше чем какие-либо другие достижения медицинской науки повлияли на жизнь человечества. Вместе с тем арсенал антибактериальных средств постоянно расширяется и обновляется в связи с неуклонным ростом резистентности микрофлоры, во многом обусловленным нерациональным их применением. Возможности для открытия новых препаратов практически исчерпаны и основные усилия, по мнению многих авторов, должны быть направлены на повышение эффективности и усовершенствование имеющихся лекарственных средств.

Кроме того, повысился интерес к использованию препаратов, которые учитывали бы индивидуальные особенности организма больного (и в первую очередь состояние иммунной системы), специфику инфекционного процесса и стадии его развития. Поэтому модификация широко использующихся антимикробных препаратов становится одним из основных вопросов современной медицины.

Особенно привлекательными в этом отношения являются комплексы лекарственных средств с эссенциальными металлами. Это связано с тем, что развитие патологических процессов в организме сопровождается нарушением естественного баланса микроэлементов. Применение же указанных комплексов может восполнить этот дефект и, тем самым, способствовать скорейшему выздоровлению больного. Имеется много примеров не только увеличения антибактериальной активности препаратов после включения в их состав различных биометаллов, но и расширения спектра действия.

Эффективность действия введенных в организм микроэлементов, связанных с лекарственными средствами, зависит от нескольких важных факторов - от природы центрального атома, характера и прочности связи ме-талл-лиганд, от исходного содержания вводимых (в виде биокомплексов лекарственных средств) микроэлементов в крови, печени и пораженных органах при конкретной патологии, а также от влияния указанных микроэлементов на рост бактерий, вызывающих эту патологию.

Из анализа литературных данных следует, что, учитывая возможность комплексообразования лекарственных средств in vivo, можно путем целенаправленного синтеза биокомплексов металлов с лекарственными средствами не только снижать их отрицательные побочные действия, но и в ряде случаев значительно усилить фармакологическую активность [68, 69]. К тому же, введение в состав комплексов биометаллов, обладающих определенной иммуностимулирующей активностью, позволяет получать соединения с аналогичными свойствами.

Одними из препаратов, применяемых в терапии анаэробных или смешанных анаэробно-аэробных инфекций различной локализации, являются производные 5-нитроимидазола [63, 197, 215]. В основном, они активны против простейших и анаэробных бактерий, но известно и их антибактериальное действие и в отношении ряда факультативно анаэробных микроорганизмов [100, 181, 204]. Эти данные, наряду с описанной в литературе способностью эссенциальных металлов расширять спектр действия лигандов при комплексо-образовании, явились предпосылками к изучению влияния некоторых металлов на антимикробную активность метронидазола - производного 5-нитроимидазола.

Для лечебно-профилактических целей был синтезирован ряд биокомплексов марганца, меди, цинка и кобальта с метронидазолом и изучена их биологическая активность, прежде всего в отношении тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-XI, методом диффузии в агар и двухслойной агаровой культурой. В результате проведенных сравнительных исследований было выяснено, что изучаемые биокомплексы обладают антимикробной активностью, но в разной степени. Что касается основных представителей облигатных анаэробов, то введение в состав метронидазола указанных металлов незначительно повышало их активность. Наиболее выраженным антимикробное действие было у биокомплексов меди, кобальта и действие было у биокомплексов меди, кобальта и цинка в отношении всех исследованных штаммов факультативных анаэробов. При этом биокомплекс меди с метронидазолом показал наилучшие результаты в отношении S. aureus 209 Р, P. vulgaris, В. subtilis и С. albicans, причем зоны задержки роста были достоверно больше, чем у комплексных соединений цинка и кобальта с метронидазолом. В случае использования в составе комплекса кобальта наибольшая активность наблюдалась в отношении P. aeruginosa и В. subtilis. Антимикробная же активность комплексного соединения цинка с метронидазолом наиболее значимо проявилась в отношении S. aureus, Е. coli и В. subtilis. Наименее активным было комплексное соединение марганца с метронидазолом.

Также была проведена сравнительная оценка антимикробной активности метронидазола, бензилпенициллина, оксациллина и цефазолина, Установлено, что антимикробная активность наиболее эффективного из этих препаратов -цефазолина - в 4-5 раз превосходит активность метронидазола в отношении S. aureus 209 Р и В. subtilis и в 3-4 раза - в отношении В. cereus, Е. coli, P. vulgaris и P. aeruginosa.

Таким образом, исследования антимикробной активности препаратов методом диффузии в агар показали, что комплексообразование марганца, цинка, меди и кобальта с метронидазолом позволяет значительно увеличить антимикробную активность и расширить спектр действия биокомплексов по сравнению с исходным лекарственным средством (в отношении целого ряда факультативно анаэробных возбудителей). Это можно объяснить тем, что в составе биокомплексов биометаллы оказывают существенное синергидное действие, оказывая влияние на специфическую активность лиганда.

Очень важной характеристикой антибактериальных препаратов является их характер действия (бактерицидный или бактериостатический) и определение минимальной бактерицидной концентрации. Это связано с тем, что увеличение концентрации нитроимидазолов может сопровождаться различными побочными эффектами вследствие способности к кумуляции. Поэтому важно было, чтобы синтезированные биокомплексы по минимальной бактерицидной концентрации, как минимум, не уступали исходному лиганду. Для достижения указанных целей было исследовано антибактериальное действие метронидазола и его комплексов с металлами методом серийных разведений в жидкой питательной среде.

Данные опытов показали, что метронидазол оказывает бактерицидное действие на S. aureus, Е. coli, В. subtilis, В. cereus, С. albicans в концентрации 2,5 мг/мл, а на P. vulgaris, P. aeruginosa - в концентрации 5,0 мг/мл. Исследованные комплексы в порядке убывания силы их антибактериального действия можно расположить в следующем порядке:

MNCo-►MNCu-►MNZn-►MNMn-►MN

Комплексообразование меди, цинка, марганца и кобальта с метронидазолом повышает его активность, что позволяет рекомендовать данные комплексные соединения в качестве антимикробных лекарственных средств при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний.

Однако данный вывод требовал подтверждения в опытах на лабораторных животных, поскольку далеко не всегда антимикробное действие препарата, установленное in vitro может совпадать с его активностью в живом организме. Поскольку все исследованные биокомплексы, за исключением биокомплекса метронидазол-марганец, показали выраженную активность в отношении стафилококков, то были проведены исследования протективной активности биокомплексов меди, марганца, кобальта и цинка с метронидазолом в опытах на мышах при внутрибрюшинном их заражении культурой S.aureus. Выживаемость животных при лечении комплексными соединениями меди, кобальта и марганца с метронидазолом составила 90, 80 и 65% соответственно тогда как применение одного лиганда при введении той же самой дозы возбудителя увеличивало выживаемость мышей по сравнению с контролем всего на 10%. В случае использования для лечения комплексного соединения цинка с метронидазолом практически все животные остались живы.

Таким образом, исследование антибактериальной активности комплексов метронидазола с металлами позволяет сделать заключение, что в большинстве случаев включение металлов (кобальт, медь, цинк, марганец) в структуру лекарственного средства приводит к повышению активности исходного лиган-да и расширению спектра его действия.

Определение показателей токсичности соединений для мышей проведенное с использованием комбинированного метода определения ЛД50 и метода пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону свидетельствует о том, что наименее токсичным из исследованных препаратов является производное 5-нитроимидазола (метронидазол), а наиболее токсичным - комплекс кобальта с производным 5-нитроимидазола. Следует отметить, однако, что как базовый препарат, так и синтезированные на его основе биокомплексы цинка, кобальта, меди и марганца характеризуются сравнительно низкой токсичностью и в соответствии с классификацией токсичности, принятой ВОЗ, относятся к классу малотоксичных веществ.

Кроме того, установлено, что новые биокомплексы металлов с метронидазолом не обладали раздражающим и аллергизирующим действием на кожу морских свинок в 0,1% и 0,5%-ных концентрациях, не оказывали отрицательного воздействия на морфологическую структуру кожи и печени. Препараты не проявляли общетоксического действия на экспериментальных животных: аппетит, привес, реактивность, подвижность, состояние кожи и шерсти не отличались от контроля.

Поскольку одним из непременных условий эффективной терапии инфекционных процессов является адекватный иммунологический ответ, то интересно было исследовать воздействие новых биокомплексов на показатели антиинфекционной защиты организма экспериментальных животных, так как известно, что использованные в комплексах металлы, обладают высокой активностью в процессах иммуногенеза [65].

Фактором антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является её неспецифическое звено. Результаты исследования влияния биокомплексов на фагоцитарную активность лейкоцитов показали, что более высокие показатели фагоцитоза, в первую очередь фагоцитарного индекса, отмечены в группах животных, которым вводили биокомплексы цинка, кобальта и меди с метронидазолом. У этих животных отмечалось повышение фагоцитарного индекса по сравнению как с контрольной группой, так и с группой, которой вводили метронидазол, увеличение активности кислородзависимых бактерицидных систем нейтрофилов и их функционального резерва (особенно при применении биокомплекса цинка с метронидазолом). Использование же биокомплекса кобальта с метронидазолом оказывало выраженный стимулирующий эффект на кислороднезависимые бактерицидные системы нейтрофилов. Стимуляция бактерицидных систем нейтрофилов послужила источником усиления завершённости фагоцитоза под действием биокомплексов метронидазола с металлами.

Отмечалось положительное влияние исследованных препаратов на гуморальные факторы неспецифической защиты организма животных. Стимулирующее действие биокомплексов на гуморальное звено неспецифической резистентности организма животных было подтверждено статистически более высокими значениями в опытных группах животных по сравнению с группой контроля такого интегрального показателя, как бактерицидная активность сыворотки крови.

Изучение иммуномодулирующих свойств новых биокомплексов при иммунизации крыс эритроцитами барана показало, что введение метронидазола существенно не влияло на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана. Об этом свидетельствовал тот факт, что количество АОК в селезенке крыс, получавших физиологический раствор в твине и метронидазол, существенно не отличались друг от друга.

Однако повышение числа РОК в 2 раза по сравнению с контролем, отмеченное в случае введения метронидазола в твине, указывает на влияние данного препарата на Т-клеточное звено иммунитета. У биокомплекса марганца с метронидазолом не наблюдалось достоверных отличий в показателях иммуно-реактивности по сравнению с лигандом. Введение же биокомплексов цинка, кобальта и, особенно, меди с метронидазолом активизировало иммуномодулирующее действие лиганда на формирование гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Об этом свидетельствовал факт повышения по сравнению с лигандом количества АОК в 1,5-2 раза. Количество РОК в селезёнке крыс, получавших биокомплексы 5-нитроимидазола, существенно не отличались от лиганда, за исключением соединения с цинком, где оно было выше почти в 2 раза.

Таким образом, установлено, что изучаемые биокомплексы повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и стимулируют бактерицидную активность сыворотки крови крыс. Кроме того, на основании полученных данных можно констатировать факт более выраженного по сравнению с метронидазолом иммуномодулирующего действия биокомплексов метронидазола с металлами на гуморальное звено иммунитета.

Выявленная высокая специфическая активность и эффективность действия комплексов, возможно, объясняется проявлением аналогии строения биокомплексов (где металл связан с 5-нитроимидазольными остатками через атом азота в положении 3 и молекулой воды) и активного центра важнейшего фермента - карбоангидразы (где, в частности, цинк связан с тремя имидазольными остатками гистидина и одной молекулой воды).

Учитывая антибактериальную активность биокомплексов и отсутствие раздражающего эффекта целесообразно было провести испытания биологической активности этих соединений при экспериментальной гнойной ране. Местное применение лекарственных средств при очаговых поражениях, к которым относятся гнойные раны, является наиболее предпочтительным, поскольку позволяет создать максимальные концентрации их в ране и снизить общее отрицательное воздействие на организм больного [7, 158]. Эффективность местной лекарственной терапии определяется суммарным действием целого ряда факторов, среди которых важное значение имеет терапевтическая активность используемых лекарственных средств [47]. Достижения современной медицинской науки позволили сформулировать основные требования к лекарственным средствам для лечения гнойных ран. Основное из этих требований состоит в том, что применяемый препарат должен способствовать скорейшему заживлению гнойной раны [46, 48]. Однако реализовать это требование на практике оказывается далеко не просто. Успех лечения определяется тем, насколько применённый лекарственный препарат будет соответствовать биологическим процессам, протекающим в ране в этот период.

Необходимость в интенсивном местном лечении ран после хирургической обработки диктуется тем фактом, что радикальная санация раны хирургическим путем практически невозможна. Успех лечения определяется одновременным и комплексным действием препарата как на микробную флору, так и на основные факторы патогенеза раневого процесса, определяющие сущность каждой его фазы [46, 62, 126]. Использование лекарственных препаратов, применяемых на рану после ее адекватной хирургической обработки должны подавить остатки микробной флоры и ликвидировать причины, обуславливающие прогрессирование гнойного воспаления - ацидоз, гипергидратацию, нарушения микроциркуляции и т.д.

Наиболее часто для этих целей применяются антимикробные мази. На основании анализа литературных данных, посвящённых разработкам мягких лекарственных форм для наружного применения, основной антимикробный компонент чаще всего используется в диапазоне концентраций от 0,1 до 3,0% [8, 33, 125]. При разработке мази учитывалась природа носителя, так как она имеет большое влияние на терапевтическую активность лекарственных веществ в мазях [49]. В связи с этим выбор мазевой основы осуществлялся с учетом требований современной медицины и, особенно, с учетом такого показателя как способность основ к высвобождению действующих веществ [88, 120, 178, 189,216].

Антимикробную активность мазей исследовали вначале в опытах in vitro методом диффузии в агар. Была изучена антимикробная активность мазей, содержащих биокомплексы цинка, кобальта, меди и марганца с метронидазолом. Мази готовили как на гидрофильных, так и на гидрофобных основах и в результате проведенных исследований показано, что антимикробная активность мазей на гидрофильных основах (полиэтиленоксидная основа и 5%-ый глице-рогель NaKMLQ в 1,5-2 раза выше, чем у мазей на гидрофобных основах. Повышение же концентрации основного активного компонента выше 2% нецелесообразно, так как при дальнейшем повышении концентрации не наблюдается значительного повышения антимикробной активности мази.

Поскольку при разработке мази необходимо учитывать такой важный показатель, как способность основы к высвобождению действующего вещества, то его оценку проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Установлено, что гидрофильные основы не препятствуют высвобождению активного компонента. ПЭО-основа обеспечивает наиболее быстрое и полное высвобождение биокомплексов из мази. К 4 часам эксперимента в диализате из мази на этой основе обнаружено 95,41±0,71% активного вещества.

Введение изучаемых биокомплексов в состав мазей, усиливало в 2-3 раза антимикробное действие мази в отношении изученных тест-штаммов. Наибольшей антимикробной активностью в отношении S. aureus, Е. coli, В. subtilis, В.cereus обладали мази, содержавшие комплексы цинка, кобальта и меди с метронидазолом.

Таким образом, установлено, что введение биокомплексов металлов с метронидазолом в состав мазей расширяет спектр их действия, а наиболее полное и быстрое высвобождение препаратов из мази обеспечивает ПЭО-основа и 5%-ный гель ЫаКМЦ.

Кроме того, при лечении ран одной из главных задач является проблема устранения болевого синдрома. Довольно часто для этих целей используется тримекаин. Принимая во внимание положительные стороны данного анестетика (по силе и продолжительности анестезирующего эффекта тримекаин в 3-5 раз превосходит новокаин, сохраняет свою активность в кислой среде, которой характеризуется гнойная рана, и при сочетании с рядом лекарственных веществ усиливает их активность), его вводили в состав разрабатываемой сложной мази в концентрации 3,0%.

Таким образом, мы полагаем, что введение тримекаина в состав многокомпонентных мазей, содержащих биокомплексы, обеспечивает ценные качества, необходимые в терапии гнойно-воспалительных процессов.

Учитывая то, что применяемые для лечения ран препараты должны воздействовать на все составляющие патогенеза инфекционной раны мы считали целесообразным включить в их состав такие вещества, как спирулина платенсис и аскорбиновая кислота, так как установлено их участие как в процессах дезинтоксикации, так и в стимуляции репаративных процессов и механизмов резистентности.

В эксперименте in vitro нами установлена небольшая антибактериальная активность спирулины платенсис и аскорбиновой кислоты в отношении всех тест-микробов. Можно предположить, что введение спирулины платенсис и аскорбиновой кислоты в состав мазей для лечения инфицированных ран существенно не отразится на антимикробной активности мазей, но может повысить её ранозаживляющие свойства, что подтвердилось проведенными in vivo экспериментальными исследованиями.

В результате проведения комплексного исследования разработан состав многокомпонентной мази, способной обеспечить разнонаправленное действие в терапии местных гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек.

Учитывая активность биокомплексов в отношении S. aureus и тот факт, что этот микроорганизм часто выделяется из ран, исследование эффективности применения многокомпонентных мазей для лечения раневой инфекции было произведено на модели полнослойной кожной раны, инфицированной стафилококком, создаваемой у крыс линии Вистар.

Применение для лечения экспериментальных животных мазей, содержащих биокомплексы цинка, меди, кобальта и марганца с метронидазолом, позволило повысить эффективность лечения гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии.

По данным гистологических исследований использование разработанных многокомпонентных мазей, содержащих биокомплексы, быстро купировало воспалительный процесс, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, что проявлялось в активации образования демаркационной линии очага воспаления, более быстром развитии грануляционной соединительной ткани по сравнению с контролем. Ускорение процессов репаративной регенерации при использовании биокомплексов подтверждалось достоверно ранними сроками образования струпа по сравнению с контрольной группой и группами животных, которых лечили мазью с метронидазолом или мазью «Левомеколь».

Гистологическая картина раневого материала хорошо коррелировала со скоростью заживления ран и изменением площади раневой поверхности.

Цитограмма клеток также подтверждала ускорение процессов очищения раны и её регенерации (уменьшение количества нейтрофилов, увеличение числа макрофагов и фибробластов).

Положительная динамика морфологических изменений в ране сопровождалась стимуляцией факторов антиинфекционной защиты. Начиная с 5 суток раневого процесса, отмечались более высокие, чем в контроле, значения фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса, активности кислородзависимых бактерицидных систем и, как следствие, завершённости фагоцитоза при использовании исследованных мазей. Кроме того, это сопровождалось к концу опыта более высокими, чем в контроле, показателями функционального резерва фагоцитов. Следует отметить, что наибольшие значения указанных показателей отмечались при использовании мазей, содержащих дополнительно тримекаин, спирулину платенсис и аскорбиновую кислоту. Кроме того, наиболее выраженным иммуностимулирующим действием обладали мази, содержащие биокомплексы цинка и меди.

Таким образом, проведенные исследования показали, что введение в'состав мази биокомплексов цинка, меди, кобальта и марганца с метронидазолом оказывает существенное влияние на антимикробную активность мази, приводя как к ее увеличению, так и к расширению спектра действия. Поскольку известно, что биокомплексы металлов с лекарственными препаратами обычно выполняют транспортную и аккумулирующую роль, а также выступают как функционирующие модели активного центра ферментных систем, то усиление активности метронидазола может быть объяснено именно присутствием данных металлов.

Эффективность многокомпонентной мази, очевидно, основана на сочетании действия антимикробного вещества, местного анестетика, растворов спирулины платенсис и аскорбиновой кислоты, оказывающих влияние на иммунную систему, регенерацию тканей (кроме того витамин С выступал в качестве консерванта) и гидрофильной основы.

Синергичные и антагонистические взаимоотношения биометаллов являются важными критериями, определяющими специфическую активность биокомплексов in vivo. Испытания новых биокомплексов на животных позволило установить не только их выраженную протективную активность, но и способность стимулировать факторы антиинфекционной защиты организма.

Согласно литературным данным различные патологические процессы могут сопровождаться нарушением баланса микроэлементов в организме [1], поэтому представляло интерес изучение обмена цинка, меди, кобальта и марганца при моделировании инфицированной раны. Одним из путей успешной и целенаправленной коррекции нарушенного баланса микроэлементов является установление закономерности в изменении микроэлементного состава крови, поражённых органов и тканей при той или иной патологии. Сведения об изменении микроэлементного баланса при патологических состояниях организма исключительно важны, но до настоящего времени разрознены [15, 167, 176], авторами применяются различные методы исследования и способы количественной оценки результатов определения микроэлементов в биологических объектах, поэтому полученные данные могут сравниваться лишь по общей направленности сдвигов в микроэлементном обмене.

В связи с этим были изучены нарушения обмена биометаллов при моделировании инфицированной раны, представляющей форму патологии, которая сопровождается инфекционным воспалением и снижением иммунореактивно-сти организма.

Проведенные нами исследования были направлены на раскрытие положения о том, что изменения коэффициентов соотношений металлов в крови и органах являются одними из важнейших критериев степени реактивности организма при нарушении металло-лигандного гомеостаза.

На основании микроэлементного анализа крови методом атомно-эмиссионной спектроскопии с индуктивно-связанной плазмой выявлены в эксперименте закономерности изменения содержания цинка, кобальта, меди и марганца при моделировании инфицированной раны.

Изменения со стороны микроэлементов свидетельствуют о включении компенсаторно-приспособительных реакций организма, нацеленных на восстановление нарушенного металло-лигандного гомеостаза и затрагивающих сложные процессы перераспределения металлов между органами, мобилизуя их из органов-депо в системы с защитно-регулирующими функциями, что подтверждалось нарушением содержания элементов в изучаемых органах экспериментальных животных.

Корреляционный анализ позволил установить парную корреляцию в крови экспериментальных животных. Прямая корреляционная зависимость выявлена для пар: медь/марганец, цинк/кобальт, и обратная - цинк/медь, цинк/марганец, медь/кобальт и марганец/кобальт (коэффициент корреляции в интервале от ±0,75 до ±0,85), что и послужило основой правомерности выбора пар элементов для расчета их коэффициентов соотношений.

В результате работы была выявлена закономерность в изменении показателей соотношений элементов в крови экспериментальных животных при моделировании инфицированной раны, заключающаяся в изменении коэффициентов соотношений - цинк/медь, цинк/марганец, медь/марганец, цинк/кобальт, медь/кобальт.

Такие изменения взаимосвязей между биометаллами, по-видимому, отражают более глубокие перестройки в метаболизме при моделировании разных патологических процессов, являющиеся выражением адаптации организма к этим процессам.

Следует выделить значение существующей сопряжённости в метаболических процессах в организме биометаллов, обладающих переменной валентностью, что с позиций электронной структуры элементов, устойчивости координационных связей во многом определяет способность к проявлению свойств антагонистов или конкурентов за места связывания в активных центрах.

Вышесказанное подтверждает правомерность изучения не столько абсолютных уровней отдельных элементов, сколько отношений тех пар, которые близки по характеру участия в микроэлементном обмене и других биохимических процессах, но в то же время способны проявлять конкурирующие свойства в зависимости от целого ряда условий.

Основываясь на выявленных нарушениях топографии биометаллов в крови экспериментальных животных, корреляционных зависимостях и показателях соотношений, представилось возможным в качестве объективного прогностического критерия при инфицированной ране выбрать соотношение цинк/медь, являющееся отражением реактивности организма при нарушении металло-лигандного гомеостаза.

Выявленные закономерности изменения уровней биометаллов и показателей их соотношений при экспериментальной инфицированной ране показали необходимость коррекции нарушенного металло-лигандного гомеостаза. С этой целью была изучена возможность использования нового координационного соединения цинка (II) с метронидазолом. Анализ полученных результатов показал, что именно введение синтезированного биокомплекса при моделировании инфицированной раны способствует накоплению цинка в крови и стремлению других металлов к вероятностно-нормальному уровню в крови экспериментальных животных и к нормализации показателя выбранного соотношения. Установлена также тенденция к нормализации показателя соотношения цинк/медь.

Нормализация соотношений металлов в крови и органах животных при применении для лечения инфицированной раны биокомплекса метронидазол-цинк нашло подтверждение на клеточном уровне. В результате проведенного гистологического исследования органов и тканей установлены определенные структурные изменения поджелудочной железы, печени, почек и селезенки. Положительный эффект введения биокомплекса цинка (II) с метронидазолом подтверждался менее выраженными деструктивными процессами в паренхиматозных органах по сравнению с введением чистого метронидазола и модельными экспериментами.

Введение биокомплекса быстрее купировало воспалительные процессы, способствовало нормализации структуры печени и почек, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления лимфоцитопоэза в селезёнке, активизируя, таким образом, защитно-приспособительные процессы в организме.

Эффективность действия координационного соединения цинка (П) с метронидазолом при экспериментальной гнойной ране выражалась в ослаблении экссудативно-инфильтративных явлений в коже и прилегающих мышцах, активизации формирования грануляционной ткани, ускорении очищения раны от струпа по сравнению с моделью и использованием чистого метронидазола.

Новый методический прием коррекции нарушенного металло-лигандного гомеостаза организма при патологических состояниях, заключающийся в применении новых синтезированных координационных соединений металлов, позволит расширить область их применения в лечебных и лечебно-профилактических мероприятиях, а также подтверждает необходимость разработки комплекса тонких и аналитически значимых методов, включающих исследование среды обитания и позволяющих выявлять ранние изменения в организме.

Таким образом, завершённое на данном этапе исследование, последующие теоретические и методические обобщения, систематизация полученных новых результатов и в дальнейшем будут способствовать реализации цели - укрепления здоровья, снижения заболеваемости и сохранения активного долголетия.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Московцев, Сергей Иванович, Саратов

1. Авцын, А. П. Микроэлементозы человека. / А.П. Авцын, А.А. Жаворонков, М.А. Рши, Л.С. Строчкова. - М.: Медицина, 1991. - 495 с.

2. Агаджанян, Н.А. Микроэлементы как один из показателей нарушения обменных процессов при желчекаменной болезни / Н.А. Агаджанян, И.Н. Полунин, В.А. Зурнаджьянс // Экология человека. 2000. - №3. -С.16-18.

3. Акбаров, А.Б. Бионеорганическая химия металлов, аминокислот и био-комплексов/А.Б. Акбаров, Ю.Я. Харитонов. Ташкент: Фан, 1994. - 324 с.

4. Акбаров, А.Б. Синтез и исследование координационных соединений га-логенидов некоторых 3<1-элементов с метилметионинсульфония хлоридом / А.Б. Акбаров // Узбекский хим. журн. Ташкент, 1983. - Деп.в ВИНИТИ 19.04.93.-N2034-83.

5. Акбаров, А.Б. К некоторым аспектам направленном синтеза биокомплексов с заданной специфической активностью/ А.Б. Акбаров, Ю.Я. Харитонов//Доклады АН СССР. 1990. - Т.310, Вып.1. - С. 103-106.

6. Алексеев, К.В. Современные покрытия для ожоговых ран / К.В. Алексеев, О.Л. Бондаренко, А.И. Чирков, М.Т. Алюшин // Воен.-мед. журн. -1986. №9. - С.77-79.

7. Арсагова, Н.С. Содержание некоторых МЭ в крови и мышцах матки у больных раком матки и их динамика в процессе лечения: Автореф. дис. канд. биол. наук/ Н.С. Арсагова. Л, 1972. - 19 с.

8. Астожников, Ю.В. Бактероидная инфекция в хирургии / Ю.В. Астожни-ков, Н.С. Богомолова, Г.В. Еремина // Хирургия. 1983. - №12. - С. 111116.

9. Афанасьев, Ю.И. Роль микроэлементов в нарушении и коррекции металлолигандного гомеостаза / Ю.И. Афанасьев, Н.И.Калетина, Ю.Я. Харитонов, Л.П. Лазурина // Вестник РАМН. 1995. - №10. -С.44-48.

10. Афзалетдинова, Н.Г. Получение, ранозаживляющее и противоязвенное действие комплекса хитозана с родием (III)/ Н.Г.Афзалетдинова, Ю.И. Муринов, И.Р. Муллагалиев // Хим.-фарм журнал. 2000. - Т.34, №5. -С.26-27.

11. Бабенко, Г.А. Микроэлементы в экспериментальной и клинической медицине/ Г.А. Бабенко. Киев: Здоровье, 1965. - 183 с.

12. Бабенко, Г.А. Применение микроэлементов в медицине / Г.А. Бабенко, Л.П. Решеткина. Киев: Здоровья, 1971.- 166 с.

13. Баженов, Л.Г. Бактероидные инфекции в хирургии/ Л.Г. Баженов, Х.М. Исхакова// 1983. - №3. - С. 120-122.

14. Бала, Ю.И. О некоторых компенсаторных механизмах нарушения обмена микроэлементов в условиях патологии/ Ю.И. Бала, Г.И. Аксенов // Терапевт. арх. 1970. - №4. - С.81-84.

15. Бала, Ю.М. Микроэлементы в клинике внутренних болезней/ Ю.М. Бала, В.М. Лифшиц. Воронеж, 1973. - 139 с.

16. Балебанова, Е.В. Влияние металлокомплексов 1-замещенных 3,4дигидроизохинолинов на систему гомеостаза/ Е.В. Балебанова, В.В. Давыдов, А.Н. Зорин//Хим.-фарм.журнал. 1996. - №8. - С.17-19.

17. Балтрашевич, А.К. Микробы семейства Bacteroides в патологии человека и животных/ А.К. Балтрашевич // Журн. микробиол. 1979. - №10. - С. 1420.

18. Бахина, Т.С. Содержание микроэлементов (цинк, медь, марганец, никель, свинец) в эритроцитах, плазме и цельной крови больных хроническим панкреатитом: Автореф. дис. канд. мед. наук / Т.С. Бахина; Омск, 1972.- 17 с.

19. Беленький, M.JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ M.JI. Беленький. М.: Наука, 1963. - 177 с.

20. Белозеров, Е.С. К вопросу о динамике некоторых биоэлементов при инфекционном гепатите: Дисс. канд. мед. наук. / Е.С. Белозеров. Свердг ловск, 1966.

21. Бикулова, А.Т. /А.Т. Бикулова, В.М. Иванов, Е.А. Медведева// Хим.-фарм.журнал. 1986. - Т.20. -№2. -С.162-164.

22. Биологические аспекты координационной химии /Под ред. К.Б. Яцимир-ского. Киев: Наукова думка, 1974. - 205 с.

23. Бисимидазол- (1,10)- фенантролин меди (2) дихлорид, проявляющий антибактериальную и антибластическую активность, способ его получения/ В.В. Власов, С.А. Казаков, В.М. Плотников и др.// Патент РФ №200110315/04 от 02.02.2001.

24. Бондарев, JI.C. Динамика содержания некоторых микроэлементов при эпидемическом гепатите и обтурационных желтухах: Дисс. канд. мед. наук. / JI.C. Бондарев. Симферополь, 1963.

25. Бондаренко, В.М. Микроэлементы и инфекция/ В.М. Бондаренко, В.Ф. Чубуков, В.М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол., иммуноби-ол. 1987.-№11.-С.118-126.

26. Борисенкова, Р.В. Канцерогенная опасность никеля и его соединений / Р.В. Борисенкова, JI.JI. Гвоздева, JI.A. Луценко // Медицина труда ипромышленная экология. 2001. - №1. - С.27-31.

27. Бородулин, В.Б. Химия для медицины и ветеринарии /В.Б. Бородулин, А.Д. Шебалдова, Т.К. Корниенко. Саратов: Изд-во Саратов, ун-та, 1998.28 с.

28. Боцюрко, В.И. Обмен железа, меди и цинка у больных ревматизмом/ В.И. Боцюрко // Врачебное дело. 1977. - №2. - С.50-52.

29. Бут-Гусим, A.M. Лечение трофических язв цинк желатиновыми повязками с постоянным орошением облепиховым маслом/ A.M. Бут-Гусим // Эффективность внедрения изображений и рационализаторских предложений в медицинскую практику. - JI, 1983. - С.72-74.

30. Быстринина, В.И. Синтез и биологическая активность комплексов родия (3+) азот, кислород и серосодержащими лигандами/ В.И. Быстринина, А.Д. Щебалдова, JLK. Куликова // Хим.-фарм. журн. 1986. - №9. -С. 1074-1077.

31. Венчиков, А.И. Основные приемы статистической обработки результатов наблюдений в области физиологии / А.И. Венчиков, В.А. Венчиков. М.: Медицина, 1974. - 152 с.

32. Волькенштейн, М.В. Бионеорганическая химия и молекулярная биология/ М.В. Волькенштейн// Молекул, биол. 1982. - Т.16, №5. - С.901-929.

33. Воронков, М.Г. Антибактериальные и гемостатические свойства серебряных солей полиакриловой кислоты/ М.Г. Воронков, JI.M. Антоник, А.С. Коган// Хим.-фарм.журнал. 2002. - Т.36, №2. - С.27-29.

34. Гарипов, М.К. Динамика содержания микроэлементов (Fe, Zn, Си, Со) в крови и некоторые функциональные пробы печени у больных с нагнои-тельными заболеваниями легких: Автореф. дис. канд. мед. наук. / М.К.Гарипов. Душанбе, 1972. - 12 с.

35. Гирева, Р.Н. / Р.Н. Гирева, Г.А. Алешина, JI.A. Резниченко // Хим.-фарм.журнал. 1974. - №10. - С.25-29.

36. Гиттер, А.А. Справочник по клиническим функциональным исследованиям/ А.А. Гиттер. М.: Медицина, 1966. - 611 с.

37. Губергриц, А.Я., Ревуцкий Б.И., Нечаев Е.Н. Соотношение микроэлементов и ферментов в соке поджелудочной железы у больных хроническим пакреатитом / А.Я. Губергриц, Б.И. Ревуцкий, Е.Н. Нечаев // Врачеб.дело. 1972.-№11.-С.62-65.

38. Гусейнов, А.З. Влияние иммунотерапии на пато- и морфогенез гнойного воспаления мягких тканей: Автореф. дис. канд. мед. наук/ А.З. Гусейнов; М., 1990.-24 с.

39. Государственная фармакопея. XI издание. -М., 1990. В.2. - С.210-214.

40. Дарьина, А.Н. Обмен микроэлементов при перитоните у детей / А.Н. Дарьина, В.Б. Красовская // Хирургия. 1983. - №5.- С.70-73.

41. Даценко, Б.М. Гнойная рана/ Б.М. Даценко, С.Т. Бесов, Т.И. Тамм. Киев: Здоровье. - 1985. - 136 с.

42. Даценко, Б.М. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран / Б.М. Даценко, Н.Ф. Калиниченко, В.К. Лепехин и др. -М., 1989.-45 с.

43. Даценко, В.М. Местное лечение гнойных ран. / В.М. Даценко, Б.М. Кос-тюченок, И.М. Перцев и др. //Хирургия. 1984. - №1. - С.136-141.

44. Дашевская, Б.И. Использование ПЭО в производстве мазей / Б.И. Дашев-ская, В.М. Бодня, М.Х. Глузман // Фармация. 1990. - №6. - С.31-34.

45. Диланян, Э.Р. Синтез и противоопухолевая активность новых бистиосе-микарбазонов метилглиоксаля, глюказона и их медных комплексов /Э.Р. Диланян, Т.Р. Овсепян, Г.М. Степанян //Хим-фарм. журнал. 2000. -Т.34, №8. - С. 16-17.

46. Динамика некоторых показателей иммунитета у больных гнойно-септическими заболеваниями/ О.В. Смирнова, Г.К. Вандяева, И.Б. Иси-ченко и др.// Хирургия. 1980. -№11.- С.30-36.

47. Довглялло, Г.Х. Некоторые цинкосодержащие дегидрогеназы при остром инфаркте миокарда/ Г.Х. Довглялло, В.Г. Тишковский // Терапевт, архив. 1970. - Т.42, №4. - С.84-86.

48. Дорофейчук, В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лаб.дело. 1968. - №1. - С.28-30.

49. Дэвени, Т.И. Аминокислоты, пептиды, белки/ Т.И. Дэвени, Я.М. Гергий.-М.: Мир, 1986. 364 с.55:Егорова, В.И. /В.И. Егорова, Л.Н. Нескладнова, Ю.А. Харитонов// Координационная химия. 1985. - Т.11, №5. - С.672-674.

50. Ежова, Л.А. Комплексные соединения никеля и меди с биологически активными производными тиосалициловой кислоты/ Л.А. Ежова, В.Н. Михайлова // Проблемы современной бионеорганической химии.- Новосибирск: Наука, 1986. С.223-228.

51. Елецкий, Ю.К. Роль парасимпатической нервной системы в регуляции обмена некоторых макро- и микроэлементов/ Ю.К. Елецкий, А.Ю. Цибульский // Микроэлементозы человека. М., 1989. - С.90-91.

52. Ершов, Ю.А. Механизмы токсического действия неорганических соединений/ Ю.А. Ершов, Т.В. Плетенева.- М.: Медицина, 1989. 272 с.

53. Ивашкевич, Г.А. Комплексное лечение больных с гнойными процессами / Г.А. Ивашкевич, И.Г. Голых, JI.P. Крышпальская и др. — Кшв: Здоров'я, 1979.- 128 с.

54. Ивченко, В.М. Применение метронидазола и его аналогов в хирургии/

55. B.М. Ивченко, В.М. Мельник // Клин.хир. 1983. - №1. - С.45-48.

56. Ирадян, М.А. Производные имидазола. XIX. Синтез и биологическая активность производных 4-нитро-5-тио-имидазола/ М.А. Ирадян, А.Х. Айвазян, B.C. Мирзоян// Хим.-фарм.журнал. 1987. - №6. - С.667-672.

57. Исмаилов, Т.А. Клеточные механизмы иммуномодулирующего действия некоторых микроэлементов/ Т.А. Исмаилов, Дж.Г. Тагдиси, Я.Д. Маме-дов, С.Д. Алиев// Экспериментальная и клиническая иммунология и аллергология. Чебоксары, 1985. - С.57-60.

58. Исмаилова, Г.М. Получение комплексных соединений Mg(II) с никотиновой кислотой и никодином / Г.М. Исмаилова, И.М. Иминова, А.А. Ту-лаганов// Хим-фарм. журнал. №36. - №6. - 2002. - С. 42- 43.

59. Казаченко, А.С. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений золота с глицином, гистидином и триптофаном /А.С. Казачен-ко, Е.В. Леглер, О.В. Перьянова //Хим-фарм. журнал. 1999. - Т.З, №91. C.11-13.

60. Калетина, Н.И. N-гликозиламины и микроэлементы/ Н.И. Калетина.- Ереван: Изд. АН Арм. ССР. 1988. - 145 с.

61. Каюми, А.К. Экспериментальное обоснование лечения гнойных ран препаратом меди/А.К. Каюми// Клинич. хирургия. 1979. - №6. - С.24-27.

62. Кикоть, В.А. Содержание железа, меди, кобальта и цинка в тканях организма при остром холецистите: Автореф.дис. канд. мед. наук. /В.А. Ки-коть. Ив.-Франковск, 1970. - 23 с.

63. Коломийцева, М.Г. Микроэлементы в медицине/ М.Г. Коломийцева, Р.Д. Габович. М.: Медицина, 1970. - 286 с.

64. Корниенко, Т.К. /Т.К. Корниенко, А.Д. Шебалдова, В.И. Марьин// Хим.-фарм. журнал. 1984. - Т. 18. -№11. - С. 1339-1344.

65. Кортеев, А.И. Биоэлементы и патология человека/ А.И. Кортеев, Г.И. Донцов, А.П. Ляшева. Свердловск, 1972. - 301 с.

66. Костюченок, Б.М. Современные принципы местного медикаментозного лечения гнойных ран / Б.М. Костюченок, Б.М. Даценко, Л.А. Блатун и др. // Тез. докл. 11 Всесоюз. конф. «Раны и раневая инфекция». — М., 1986. -С.128-130.

67. Косырева, Н.С. Исследование влияния мазевых основ на скорость всасывания и специфическую активность мазей с фосфорноуксусной кислотой / Н.С. Косырева, И.А. Елагина, Н.Д. Львов// МРЖ. Раздел 22. -1991. -№4-6.-С.15.

68. Кошланд, Д.Е. Молекулярные основы энзиматического катализа и регуляции ферментов/ Д. Е. Кошланд // Журн. Всесоюзн. хим. общ. им. Д. И. Менделеева. 1971. - Т.16, Вып.2. - С. 158-161.

69. Крисс, Е.Е. Координационные соединения металлов в медицине / Е.Е. Крисс, И.И. Волченкова, А.С. Григорьева //.- Киев: Наук.думка, 1986. — 216 с.

70. Кудрин, А.В. Цинк и иммунный ответ / А.В. Кудрин // Южнороссийский медицинский журнал. 1998. - №4. - С.42-46.

71. Кудрин, А.В. Микроэлементозы человека /А.В. Кудрин// Международный медицинский журнал. 1998. - №11-12. - С. 1000-1006.

72. Кузин, М. И. Профилактическое применение антибиотиков в плановой абдоминальной хирургии / М.И. Кузин, JI.A. Блатун, B.C. По ли лов // Хирургия. 1983. - №7. - С.131-135.

73. Кузин, М.И. Новый анестетик тримекаин/ М.И. Кузин, Н.Г. Прянишникова// Эксперим. хирургия и анестезиология. 1989. - №5. - С.93-96.

74. Курбангалеев, С.М. Гнойная инфекция в хирургии/ С.М. Курбангалеев.-М.: Медицина, 1985. 273 с.

75. Кутузова, И.В. Сравнительная оценка высвобождения препарата полиненасыщенных жирных кислот из мазей в опытах in vitro и in vivo/ И.В. Кутузова, Н.К. Бабанова, А.И. Тенцова и др.//Фармация. 1990. - №1. - С. 1822.

76. Кутузова, И.В. Технология и исследование мазей, содержащих композицию биополиена и каротолина/ И.В. Кутузова, Н.К. Бабанова, А.И. Тенцова и др.//Фармация. 1994. - №3. - С.31-37.

77. Кэбот, Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия: Пер. с англ. М., 1968.-684 с.

78. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований/ А.С.Лабинская. М.: Медицина, 1978. - 391 с.

79. Лазурина, Л.П. Комплексные соединения. Применение в медицине и фармации / Л.П. Лазурина, А.А. Хабаров, Д.А. Новиков // Курск: «Флэш», 1999.- 171 с.

80. Лазурина, Л.П. Роль комплексных соединений металлов в становленииметалло-лигандного гомеостаза и донозологический диагностике: Авто-реф. дис. д-ра биол. наук./ Л.П. Лазурина; -М, 1995. 43с.

81. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М., 1980. - 293 с.

82. Леглер, Е.В. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений серебра с аргинином и глутаминовой кислотой /Е.В. Леглер, А.С. Ка-заченко, В.И. Казбанов // Хим-фарм.журнал. 2001. - Т.35. - №9. - С.35-36.

83. Мальберг, К. Метод локального гемолиза / К. Мальберг, Э. Зигль // Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. Г. Фримеля. М.: Медицина, 1987. -С.57-72.

84. Матусис, З.Е. К методике определения индекса завершенности фагоцитоза / З.Е. Матусис, С.И. Пылаева // Лаб.дело. 1972. - №4. - С.237-240.

85. Машковский, М.Д. Лекарственные средства /М.Д. Машковский. 9-е изд.- М.:Медицина, 1984 - Т.2.- с.129.

86. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. /М.Д. Машковский.-Харьков: Торсинг, 1997. Т.1. -592 е.; Т.2. - 560 с.

87. Методические рекомендации по экспертному изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран. МЗ СССР, Фармакологический комитет. -М, 1989, 44 с.

88. Морозова, И.А. Всасывание и секреция в тонкой кишке/ И.А. Морозова, Ю.А. Лысиков., Б.В. Питран., С.И. Хвыля. М.: Медицина, 1988. - С.194-195.

89. Муравьева, Т.И. Эссенциальные микроэлементы. Их роль в сохранении здоровья, предупреждении и коррекции заболеваний / Т.И. Муравьева // Новая аптека. Итоги 6-й конференции, 2001. №1. -с. 27-31.

90. Насолодин, В.В. Взаимосвязь между некоторыми микроэлементами в процессе обмена их в организме/ В.В. Насолодин, В.Я. Русин // Вопр. питания. 1986. - №6. - С.9-13.

91. Насолодин, В.В. Взаимодействия микроэлементов в процессе их обмена в организме человека/ В.В. Насолодин, В.А. Широков, А.В. Рудин //Вопр. питания. 1999. - №4. - С. 10-13.

92. Николаенко, JI.B. Изменение содержания некоторых эссенциальных элементов при различных формах перитонита / JI.B. Николаенко, B.C. Заугольников B.C. // Вятский медицинский вестник. 1999. - №4. -С.19-21.

93. Ноздрюхина, J1.P. Биологическая роль микроэлементов в организме животных, человека и в растениях/ JI.P. Ноздрюхина, М.И. Гринкевич.- М.: Наука, 1980.-243 с.

94. Ноздрюхина, JI.P. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции/ JI.P. Наздрюхина, Н.И. Гринкевич. М: Наука, 1980. - 278 с.

95. Овсепян, Т.Р. Синтез и противоопухолевая активность медных комплексов 4 алкоксибензилзамещенных тиосемикарбазонов ароматических альдегидов / Т.Р. Овсепян, Г.Е. Габрилян, Т.К. Симонян и др. //Хим-фарм. журнал. - 2000. - Т.34, №5. - С.21- 23.

96. Ольгина, Ф.П. Обмен некоторых микроэлементов (железо, медь, цинк, кобальт) при болезни Боткина, хроническом гепатите и циррозе печени: Дисс. канд. мед. наук. / Ф.П. Ольгина. Донецк, 1966.

97. Омонов, Ш.Э. Количественное содержание некоторых микроэлементов в крови у детей, больных хроническим гнойным отитом / Ш.Э. Омонов // Журнал ушных, носовых и горловых болезней. 1997. - №1. - С.43-46.

98. Осипова, Н.В. Клиническое значение изменений содержания микроэлементов в сыворотке крови и желчи у детей с билиарной патологией: Автореф. дис. канд. мед. наук. / Н.В. Осипова. Казань, 2000. - 19 с.

99. ПЗ.Отаров, А.О. Изменение уровня некоторых микроэлементов в крови,мышцах и вилочковой железе больных миастенией по данным эмиссионного спектрального анализа: Автореф. дис. канд. мед. наук. / А.О. Ота-ров. -М., 1973.- 22 с.

100. Павлов, П.А. Синтез и антимикробная активность некоторых нитрофу-рансодержащих имидазотриазолов /П.А. Павлов, Н.Ю. Басова, П.П. Павлов //Хим.-фарм. журнал. 1998. - №7.- С.33-34.

101. Павлов, П.А. Синтез и антимикробная активность некоторых нитрофу-рансодержащих азометинов / П.А. Павлов, Н.Ю. Басова, П.П. Павлов// Хим. журнал. 2000. - Т.34, №6. - С.24-25

102. Пейве, Я. В. Микроэлементы и ферменты/ Я.В. Пейве. Рига, 1960. - 180 с.

103. Петков, В. Лекарство, организм, фармакологический эффект/ В. Петков. София: Медицина и спорт, 1974. - 164 с.

104. Пигаревский, В.Е. Лизосомально-катионный тест. Метод, рек. / В.Е. Пигаревский // НИИЭМ АМН СССР. - М., 1979. - 57 с.

105. Ппохинский, Н.А. Математические методы в биологии / Н.А. Плохин-ский.-М., 1978.-342 с.

106. Полимеры в фармации / Под ред. А.И. Тенцовой, М.Т. Алюшина.-М.: Медицина, 1985. 256 с.

107. Поляк, М.С. Антибиотикотерапия: проблемы и перспективы. Лекции по фармакотерапии / М.С.Поляк. СПб, 2001. - 19 с.

108. Попов, И.П. Взаимоотношения между содержанием железа, меди, цинка, кобальта и активностью дыхательных металлоферментов в тканях при острой гипоксии / И.П. Попов // Патол. физиология и экспериментальная терапия. 1974. - №1. - С.44-49.

109. Пегг, С.П. The role of drugs in management of burns/ С.П. Пегг //Drugs. -1982.-V.24. №3. - P.256-260.

110. Ревуцкий, В.И. Электролиты и микроэлементы крови и желчи у больных хроническими заболеваниями печени и желчевыводящих путей/ В. И. Ревуцкий // Врачеб. дело. 1977. - №9. - С.81-86.

111. Регистр лекарственных средств России / Под ред. Ю.Ф.Крылова. М.: «РЛС-2000»,1998. - 1072 с.

112. Рычков, Ю.Г. Физиологическая генетика человека в проблеме заживления ран / Ю.Г. Рычков, Ю.Г. Шапошников, Е.А. Решетников и др. М.: Наука, 1985.- 183 с.

113. Савадян, Э.Ш. Использование препаратов серебра в хирургии и травматологии. Обзор зарубеж. литер./Э.Ш. Савадян //Хирургия. 1989. -№8. -С. 135-139.

114. Савадян, Э.Ш. Современные тенденции использования серебросодер-жащих антисептиков/ Э.Ш. Савадян, В.М. Меньшикова, Г.П. Беликов //Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т.34, №11. - С.874-878.

115. Сапин, М.Р. Иммунные структуры пищеварительной системы/ М.Р. Са-пин. М.: Медицина, 1987. - 217 с.

116. Саркисов, Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза/ Д.С. Сар-кисов. М.: Медицина, 1977. - 351 с.

117. Саркисов, Д.С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций/ Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1987. - 442 с.

118. Сафронов, В.В. Содержание микроэлементов у рожениц и новорождённых при некоторых патологических состояниях во время беременности /В.В. Сафронов, Л.И. Мальцева, Е.С. Валиев// Педиатрия. -1996.-№5.-С.17-21.

119. Сафронова, Л.А. Синтез и антибактериальная активность комплексов палладия и кобальта с замещенными фуранами/ Л.А. Сафронова, Т.К. Корниенко, Т.М. Шуб, А.Д. Шебалдова// Хим.-фарм журнал. 2000. -Т.34.-№9.-С.22-23.

120. Светлов, А.В. Доступные отечественные местные анестетики для повседневной практики. Лидокаин и тримекаин в практике эпидуральной анестезии /А.В. Светлов, С.П. Козлов, А.В. Гнездилов и др. //Новые лекарственные препараты. 1991. - №7. - С.9-14.

121. Сигидин, Я.А. Лекарственная терапия воспалительного процесса: Экспериментальная и клиническая фармакалогия противовоспалительных препаратов/ Я.А. Сигидин, Г.Я. Шварц, А.П. Арзамасцев, С.С. Либерман. -М, 1988.-238 с.

122. Сильва, Джозев (младший). Инфекции хирургических ран и их профилактика (США) / Джозев Сильва // Хирургия. 1994. - №9. - С. 10-13.

123. Сливкин, А.И. Физико-химические и биологические методы оценки качества лекарственных средств/ А.И. Сливкин, В.Ф. Семенев, Е.А. Сухо-верхова. Воронеж.: Изд-во Воронежского государственного университета, 1999.-366 с.

124. Смирнова, О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии. / О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина// Журн. микробиологии. 1966. - №4. - С.8-12.

125. Сорока, В.Г. Обмен микроэлементов при хронической пневмонии / В.Г. Сорока, Л.Г. Кац // Врачебное дело. 1977. - №1. - С.85-90.

126. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия. Метод, рек. / Сост. М.Е. Виксман, А.Н. Маянский. - Казань, 1979. - 14 с.

127. Стручков, В.И. Хирургическая инфекция: Руководство для врачей/ В.И. Стручков, В.К. Гостищев, Ю.В. Стручков. 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1991. - 559 с.

128. Стручков, В.И. Гнойная инфекция в хирургии / В.И. Стручков// Сб. науч. тр. XXX съезда хирургов. Мн., 1983. - С. 14-19.

129. Стручков, Ю.В. Профилактика нагноений и лечение гнойных ран. (Кли-нико-экспериментальные исследования): Автореферат, дис. д-ра мед. наук. / Ю.В.Стручков. М., 1982. - 41с.

130. Сульфат ди-1-(р-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол. кобальта (И) ди-гидрат, проявляющий бактериостатическую активность/Л.П. Лазурина, Н.И. Калетина, Н.Ю. Якушева и др. Патент PON 491972/04 (014380) от 4.02.92.

131. Сульфат тетра 1-(р-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол.цинка (И) гидрат, проявляющий бактериостатическую активность/Л.П. Лазурина, Н.И. Калетина, Н.Ю. Якушева и др. Патент РФ N4918648/04 (014391) от 4.02.92.

132. Сурина, Л.В. Разработка и исследование многокомпонентных мазей на полимерной основе антимикробного, анестезирующего действия: Дис. .канд. фарм. наук. / Л.В.Сурина. Курск, 1995. - 128 с.

133. Сусликов, А.В. Геохимическая экология болезней. Т.2. Ато-мовиты/ А.В. Сусликов. М.: Гелиос АРВ, 2000. - 672 с.

134. Таджибаев, К. Влияние панкреато-специфической иммунизации на обмен цинка и меди: Автореф. дис. канд. мед. наук. / К. Таджибаев. -Ташкент, 1975. 20 с.

135. Тенцова, А.И. Биологическая доступность и методы ее определения / А.И. Тенцова, Т.С. Киселева// Фармация. 1980. - С. 10-14.

136. Теория и практика местного лечения гнойных ран // Под ред. Б.М. Да-ценко. Киев: Здоровье, 1995. - 384 с.

137. Теплова, С.Н. Оценка факторов неспецифической защиты организма от инфекции в клинической практике (Метод, рек.) / С.Н. Теплова. Челябинск, 1978. - 57 с.

138. Терехов, В.И. Антимикробная активность и токсичность нового нитро-фурана / В.И. Терехов, П.А. Павлов // Антибиотики и химиотерапия. -1995. №4. - С.34-36.

139. Терехов, В.И. Эффективность терапевтического действия фуразолидона и дифурацила (БАП-49) при экспериментальной стафилококковой и эше-рихиоозной септицемии /В.И. Терехов, А.П. Павлов// Антибиотики и химиотерапия. 1995. - №4. - С.37-39.

140. Трапков, В.А. Синтез и противоязвенная активность медь- и цинксо-держащих кумариновых антиоксидантов/ В.А. Трапков, Э.А. Парфенов, Л.Д. Смирнов//Хим.-фарм.журнал. 1996. - №7. - С.20-21.

141. Трубников, Г. В. Содержание микроэлементов в плазме и эритроцитах крови в тканях легкого и печени у больных острыми пневмониями/ Г.В. Трубников//Терапевт, арх. 1976. - Т. 12. - С. 106-110.

142. Трубников, Г.В. Микроэлементы при воспалительных и опухолевых заболеваниях легких: Автореф. дис. д-ра мед. наук. /Г.В. Трубников. -Омск, 1973.-34 с.

143. Фесенко, В.П. К лечению гнойных ран / В.П. Фесенко, А.К. Бабалич, М.Н. Степанов и др. // Тр. 1-й Всесоюз. конф. по ранам и раневой инфекции. -М., 1977. С.134-136.

144. Франклин, Т. Биохимия антимикробного действия/ Т. Франклин, Дж. Сноу. М.: Мир, 1984. - 355 с.

145. Хакимов, Х.Х. Периодическая система и биологическая роль элементов / Х.Х. Хакимов, А.З. Татарская//. Медицина, Ташкент, 1978. - 484 с.

146. Ходжаев, Ш.Н. Особенности заживления ран у больных, имевших контакт с бутифосом: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Ш.Н.Ходжаев. М., 1981.-22 с.

147. Чайцев, В.Г. Клинико-экспериментальное изучение нарушений обмена микроэлементов при инфекционном гепатите: Дисс. канд. мед. наук. /В .Г. Чайцев. Воронеж, 1969.

148. Чащина, С.В. Фармакологическая эффективность мазей с новым анестетиком аналокаином: Автореф. дис. канд. биол. наук. /С.В.Чащина. -Томск, 1991.-23 с.

149. Черномор дик, А.Б. Применение антибиотиков и других химио-терапевтических препаратов /А.Б. Черномордик. Киев: Здоровье, 1988. -320 с.

150. Чуднов, Э.Г. Использование индуктивно-связанной плазмы в элементном анализе/ Э.Г. Чуднов // Журн. аналит. химии 1986. - Т.41.-№12.1. С.2117-2134.

151. Шпак, Б.Ю. Баланс некоторых микроэлементов и активность металло-ферментов у больных острой пневмонией / Б.Ю. Шпак// Клинич. Медицина. 1979.-№4.-С.41-44.

152. Шпак, Б.Ю. Роль микроэлементов в диагностике острых пневмоний / Б.Ю. Шпак, Е.М. Нейко // Врачебное дело. 1978. - №2. - С.10-12.

153. Шубич, М.Г. Выявление катионных белков в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего / М.Г. Шубич // Цитология. 1974. -Т.16.-№10.-С.13-21.

154. Щерба, М.М. Всасывание железа / М.М. Щерба. // Физиология всасывания. Л., 1977. - С.223-248.

155. Юдина, Т.В. Теоретические и методические основы физико-химического контроля в гигиенической диагностике: Дисс. д-ра мед. наук.// Т.В. Юдина. М., 1992. - 347 с.

156. Юсупов, Ф.И. Применение тримекаина и пиромекаина для местной анестезии в оториноларингологии/ Ф.И. Юсупов, Н.П. Мешкова, А.А. Али-мова//Журн. ушных, носовых и горловых болезней. 1991. - №4. - С.54-55.

157. Aggett, P. I. Physiology and metabolism of essential trace elements: An outline / P. I. Aggett // Clin. Endocrinol. Metab. 1985. - V.14, №3. - P.513-543.

158. Ali, B.H. Pharmacological, therapeutic and toxicological properties of furazolidone: some recent research / B.H. Ali// Vit Res Commun. 1999. - №23. -P.343-360.

159. American society of regional anesthesia/ Meeting. 1990. -Orlando, Fla //Scietific abstracts American society of regional anesthesia: Annu.meet., Orlando, Fla., March. 25-28, 1990. - Philadelphia: Lippincoti, 1990. - 92 p.

160. Arzamastsev, E.V. Combined method for the determination of LD50/E.V.Arzamastsev, M.I.Mironova, O.A.Terehova //Zent. Bl. Pharm., pharmakother.,lab.Diagn. Berlin. 1988. - V. 127, №5. - P310-311

161. Ash, S. Determination of free and bound mangenese (II) in hepatocytes fromfed and fasted rats/ S. Ash, M. Schramm // J. biol. Chem. 1982. - V.257. -P.9261-9264.

162. Badruk, A. Tronce element regulation of immunity and infection /А. Badruk, K.A. Chowdhury, R.K. Chandra // Front. gastrointest.Res. 1986. - V.13. -P.134-137.

163. Bialik, W. Application of the simple mathematical function for the quantitative description of in vitro release of drug agents from the ointment bases/ W. Bialik // Die Pharmazie. 1984. -V.39, №11. - P.763-764.

164. Bogden, J. D. Effect of pulmonary tuberculosis on blood concentrations of copper and zinc/ J.D. Bogden, D.I. Lintz, M.M. Joselow // Am. J. Clin. Pathol. 1977. - V.67.-P.251-256.

165. Brock, J. H. Iron and infection / J.H. Brock // Haematol.- 1987. V.20, №4. -P.237-246.

166. Clark, J. Metronidazole gel in managing malodorous fimgating wounds / Jane Clark// "British Journal of Nursing". 2002. - V.l 1, №6. - P.55-60.

167. Coudron, P.E. In vitro evaluation as an alternative agent for metronidazole in combination antimicrobal therapy against Helicobacter pylori /Р.Е. Condron, C.W. Stratton //J. Antimicrob. Chemother. 1998. - №42. - P.657-660.

168. Cousins, R.J. Absorption, transport and hepatic metabolism of copper and zinc specal reference to metallothionein and ceruloplasmin /R.J. Cousins// Physiol.Rev. 1985. - V.65. - P.238-310.

169. Cox, T.M. Studies on the binding of iron by rabit intestinal microvillus membranes/ T.M. Cox , M.W. O'Donnel // Biochem. J. 1981. - V.l94. - P.753-759.

170. Dallman, P.R. Iron deficiency and the immune response/P.R. Dallman //Amer. J. Clin. Nutrition. 1987. - V.46. - P.329-334.

171. Dani, R. Omeprasole, clarithromycin and furazolidone for the eradication of Helicobacter pilori in patients with duodenal ulcer / R. Dani, D.M. Queiroz, M.G. Dias //Aliment. Pharmacol. Ther. 1999. - №13. - P. 1647-1652.

172. Davis, M.A. Lymphoid cell functions during copper deficiency/ M.A. Davis,

173. W.Th. Johnson, M. Briske-Anderson, T.R. Kramer // Nutr. Res. 1987. - V.7, №2. -P.211-222.

174. Dodd, M. The in vitro bacteriostatic action of some simple furan derivatives /М. Dodd, W. Stillman // J. Pharm. Exper. Ther. 1944. - №82. - P. 11-13.

175. El.-Fallam, Т.Н. Determination on the release and the efficacy of the two new antibacterial agents from the different ointment bases / Т.Н. El.-Fallam, S. Shnoky, E. Abdel-Meduid // Die Pharmazie. 1989. - V.44, №3. - P.211.

176. Felner, J. M. "Bacteroides" Bacteremia/ J.M. Felner, V.R. Dowell // Am. J. Med. 1971. -V.50, №6. - P.787-796.

177. Gadomska-Nowar, M. Badania dostepnosci farmaceutycznej chlorowodorku chlorotetracycliny w wybranych podlozach masciowych / M. Gadomska-Nowar, H. Wojdar, J. Godlewska //Acta pol.pham. 1989. - V.46, №1. - S.70-73.

178. George, L.M. Is the molecular basis of metronidasole resistance in mi-croaerophilic organisms understood / L. Mends George, Francis Megraud // TRENDS in Microbiology. 2002. - V.10, №8. - P.370-375.

179. Huand, X. Economic assessment of three antimicrobial therapies for uncomplicated urinary tract infection in women /X. Huand, A.G. Hartzema, R.H. Raasch // Clin. Ther. 1999. - №21. - P. 1578-1588.

180. Jondal, M. Surface markers on human T- and B-lymphocytes. 1. A largepopulation of lymphocytes forming nonimmune rosettes with sheep red blood cells / M. Jondal, G. Holm, H. Wigzell // J. Exp. Med. 1972. - V.136, №11.-P.207-209.

181. Keiser, T.A. Prophylactic metronidasole in appendectomy: A double-blind controlled trial / T.A. Keiser, R.L. MacKenzie, R. Feld, N. Leers// Surgery. -1983. January. - P.201-203.

182. Koller, L.D. Immunodisfunction in rats fed a diet deficient in copper/ L.D. Roller, S.A. Mulhern, N.C. Frankel // Am. J. Clin. Nutr. 1987. - V.45. -P.997-1006.

183. Kuvibidila, S. Iron deficiency cell-mediated immunity and resistance against infections / S. Kuvibidila //Nutr. Res. 1987. - V.7, №7. - P.989-1003.

184. Lamothe, F. Bacteroides fragilis resistant to both metronidazole and imipenem / F. Lamothe, C. Fijakowski, F. Maionin // J. Antimicrob. Chemother. 1986. - V.18, №5. - P.641-643.

185. Mc.Call, D. Kinetics of thallium exchange in cultured rat myocardial cells/ D. Mc.Call, L. Zimmer, A. Katz // Circulat. Res. 1985. - V.56, №3. - P.370-376.

186. Methfessel, A. M. Zinc metabolism in the rat. II Secretion of Zinc into intestine/ A. M. Methfessel, H. Spencer // J. Appl. Physiol. 1973. - V.34 - P.63-67.

187. Mikio, K. Ceruloplasmin receptors in liver cell suspensions are limited to the endothelium/ K. Mikio, M. Tavassoli // Exp. Cell Res. 1984. - V.155, №1. -P.232-240.

188. Nagaraja, P. Spectrophotometric determination of metronidazole and tinida-zole in pharmaceutical preparations / P. Nagaraja, K.R. Sunitha, R.A. Vasan-tha, H.S. Yathirajan // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. -2002. №28. - P.527-535.

189. Narcisi, E.M. In vitro effect of tinidazole and furazolidone on metronidazole resistant Thricomonas vaginalis /Е.М. Narcisi, W.E. Secor // Antimicrob. Agents Chemother. - 1996. - №40. - P.l 121-1125.

190. Pekarek, R. S. Serum zinc, iron and copper concentrations during typhoid fever in man. Effect of Chloramphenicol therapy / R. S. Pekarek, R.M. Kluge, H.

191. Du Pont et al. // Clin. Chem. 1975. - V.21. - P.528-532.

192. Pekarek, R.S. The effect of leucocytic endogenous mediator (LEM) on the tissue distribution of zinc and iron / R.S. Pekarek, R.W. Wannermacker, W.R. Beisel // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1972. - V.140. - P.685-688.

193. Pekarek, R.S. The effect of leucocytic endogenous mediator (LEM) on serum copper and ceruloplasmin concentrations in the rat / R.S. Pekarek, M.C. Powanda, R.W. Wannermacker // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1972. - V.141. -P. 1029-1032.

194. Plaque techniques for recognising individually antibody-forming cells / N.K. Gerne, C. Henry, A.A. Nordin et all. // Methods in Immunology and Immuno-chemistry/Ed. C.A. Williams and M.W. Chase. New York: Academic Press, 1976. - V.5. - P.335-370.

195. Riordan, J.R. Human fetal liver contains both zinc and copper rich forms of metallothionein/ J.R. Riordan, V.Richards // J. biol. Chem. - 1980. - V.255. -P.5380-5383.

196. Rostan, E.F. Evidence supporting zinc as an important antioxidant for skin/ E.F. Rostan, Holly V. DeBuys, Doren L. Madey, Sheldon R. Pinnell// The International Society of Dermatology. 2002. - №41. - P.606-611.

197. Sieman, D.W. Cytotoxicity of duad function nitrofurans in rodent and human tumor cells/ D.W. Sieman, Hint J. Rad. Oncol. Biol. Phys. 1992. - №22. -P.697-700.

198. Sunderman, W. Effect of nickel chloride and diethyldithiocarbamate on metallothionein in rat liver and kidney/ W. Sunderman, G. Fraser // Ann. Clin. Lab. Sci 1983. - V.13, №6. - P.489-495.

199. Sur, B. Studies on the antineoplasticity of Schiff bases containing 5-nitrofuran and pyrimiadine/ B. Sur, S.P. Chatterjee, P. Sur// Oncology. 1990. - №47. - P.433-438.

200. Ward, C.G. Influence of iron on infection / C.G.Ward // Amer. J. Surg. -1986. V.151, №2. - P.291-295.

201. Wouwe, J.P. Susacute zinc deficiency in children with recurrent upper respiratory tract infetion / J.P. Wouwe, H.H. Gelderen, J.H. Bos // Europ. J. Pediar.- 1987. V.146, №3. - P.293-295.

Информация о работе

Московцев, Сергей Иванович
кандидата медицинских наук
Саратов, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Антимикробная активность комплексов цинка, меди, кобальта и марганца с производным нитроимидазола и их влияние на течение инфекционного процесса - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы