Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Создание с помощью методов генной инженерии штаммов Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris-продуцентов фибробластного интерферона человека, выделение и очистка рекомбинантного белка

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Парфенова, Любовь Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. ЦИТОКИНЫ, ИХ ЗНАЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ.

Ы.Интерфероны: биологическое значение и применение.

1.2.Строение молекулы (З-ИФН.

2.МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ р - ИНТЕРФЕРОНА.

2.1. JAK-STAT путь- главный путь передачи сигнала цитокинов.

2.2. Рецептор fl-ИФН, передача сигнала по JAK-STAT пути.

2.3. Факторы, активируемые ИФН.

3. ПРИМЕНЕНИЕ (З-ИФН В КЛИНИКЕ. 22 3.1. Механизм действия [З-ИФН при рассеянном склерозе.

3.1.1. Влияние на презентацию антигена :/З^ИФН- гшмуномодулятор.

3.1.2. Роль (З-ИФН в развитии иммунного ответа, влияние на продукцию цитокинов различными клетками иммунной системы.

3.1.3. Влияние (З-ИФН на инфильтрацию лимфоцитов ЦНС.

4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДОВ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ ИММУННО

БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ.

5. РЕГУЛЯЦИЯ БИОСИНТЕЗА КФ2.

5.1. Транскрипционный активатор, кодируемый геном PHQ4.

5.2. Транскрипционный активатор, кодируемый геном PHQ2.

5.3. Белки-регуляторы, кодируемые генами PHQ80 и РН085.

5.4. Белок, кодируемый геном PHQ81.

6. СЕКРЕЦИЯ БЕЛКОВ У ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES SEREVISIAE. 40 6.1. Гликозилирование секреторных белков.

6.2. Роль протеолиза в секреции чужеродных белков. 44 7. ЭКСПРЕССИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ГЕНОВ В МЕТИЛОТРОФНЫХ

ДРОЖЖАХ PICHIA PASTORIS.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. МАТЕРИАЛЫ

1.1. Список сокращений.

1.2. Штаммы.

1.3. Плазмиды. 57 1 АУсловия культивирования штаммов.

2. МЕТОДЫ. 60 2.1. Трансформация бактерий E.coli.

2.2 Трансформация дрожжей плазмидной ДНК.

2.3 Выделение плазмидной ДНК из клеток Е. coli.

2.4. Методы молекулярного клонирования. 62 2.5 Электрофорез фрагментов ДНК.

2.6. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей.

2.7. Выделение хромосомной ДНК из дрожжей.

2.8. Количественное определение активности кислых фосфатаз.

2.9. Определение концентрации белка.

2.10. Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсулъфата натрия.

2.11. Иммуноблотинг.

2.12. Гель-фильтрация на сефакриле S(300) и сефарозе 6В.

2.13. Определение биологической активности /3-ИФН.

2.14. Определение нуклеотидной последовательности (секвенирование) молекул ДНК.

2.15. Полимеразная цепная реакция.

2.16. Количественное определение активности Д-галактозидазы

2.17. Определение удельной активности цитохром-С-оксидазы.

2.18 Выделение митохондрий из дрожжей.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

1 .ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДЫ PHBI.

2.СОЗДАНИЕ ШТАММА ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE - ПРОДУЦЕНТА Р-ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕКА.

2.1. Характеристика штаммов реципиентов.

2.2. Измерение удельной активности КФ штаммов-реципиентов.

2.3. Получение штаммов-продуцентов и определение синтеза ft-ИФН человека клетками S.cerevisiae.

2.4. Анализ частоты потери плазмиды рНВТ штаммами-продуцентами Р-ИФН человека.

2.5. Сравнение кривых роста штаммов-реципиетов и продуцентов.

2.6. Сравнение диплоидного и гаплоидного штаммов-продуцентов.

3.ВЛИЯНИЕ СИНТЕЗА Р-ИНТЕРФЕРОНА НА МЕТАБОЛИЗМ КЛЕТКИ S.CEREVISIAE. 83 3.1. Сравнение уровня экспрессии гена HSP82 у исходного штамма и штамма-продуцента Р-ИФН.

3.1.1. Получение плазмиды pRS426-beta

3.1.2. Измерение активности [3-галактозидазы у штамма-реципиента и штамма, несущего плазмиду pRS426-beta.

4.РАЗРАБОТКА СХЕМЫ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА-Р, СИНТЕЗИРОВАННОГО В ДРОЖЖАХ

5.CEREVISIAE. 89 5.СОЗДАНИЕ РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЛАЗМИДЫ pHIF, ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕЙ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА Р-ИФН

ЧЕЛОВЕКА И СЕКРЕЦИЮ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ДРОЖЖАМИ PICHIA PASTORIS.

5.1. Создание вектора экспрессии pHIF.

5.2. Определение нуклеотидной последовательности амплифицированного гена Р-ИФН человека.

5.3. Создание вектора экспрессии, обеспечивающего синтез нативного [3-ИФН человека (pHIF2).

6. СОЗДАНИЕ ШТАММОВ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS-ПРОДУЦЕНТОВ Р-ИФН ЧЕЛОВЕКА.

6.1. Трансформация штамма GS115 генетическими конструкциями, содержащими ген (3-ИФН и селекция трансформантов.

6.2. Подбор условий культивирования трансформантов, индукции синтеза и секреции рекомбинантного (3-ИФН человека.

6.3. Определение наличия углеводного компонента в составе молекулы Р-ИФН человека, секретируемого клетками P.pastoris.

6.4. Определение уровня продукции (3-ИФН человека штаммом дрожжей P.pastoris. Ill

7. РАЗРАБОТКА СХЕМЫ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО Р-ИФН ЧЕЛОВЕКА, СЕКРЕТИРУЕМОГО КЛЕТКАМИ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS. 111 Оценка влияния замен АК в последовательности 3-ИФН человека на биологические функции рекомбинантного белка.

8. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММА ПРОДУЦЕНТА ДРОЖЖЕЙ

P.PASTORIS ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕГО ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО (3-ИФН ЧЕЛОВЕКА.

5.1. Создание вектора экспрессии рШУВ и получение штамма продуцента, обеспечивающего внутриклеточный синтез 3-ИФН.

8.2. Оценка уровня продукции рекомбинантного (3-ИФН человека штаммом GS115/рШУВ.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Создание с помощью методов генной инженерии штаммов Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris-продуцентов фибробластного интерферона человека, выделение и очистка рекомбинантного белка"

Актуальность проблемы. Открытие и изучение цитокинов позволило установить, что иммунный ответ подчиняется тем же закономерностям, что и процессы с участием классических гормонов и их рецепторов.

Цитокины являются не только регуляторами иммунных реакций, но и ключевыми факторами, инициирующими воспалительную реакцию, участвующими в элиминации опухолевых клеток, модифицирующими функциональные состояния нервной и эндокринной системы. Изучение цитокинов имеет не только теоретическое, но и прикладное значение.

Использование белков-иммуномодуляторов человека для лечения заболеваний различной этиологии имеет существенные преимущества по сравнению с традиционными химиотерапевтическими методами лечения за счет широкого спектра действия, обусловленного активацией иммунной системы, и из-за отсутствия побочных эффектов. Применение непатогенных микроорганизмов (дрожжей), не содержащих токсических и пирогенных факторов, в качестве продуцентов рекомбинантных белков человека позволяет использовать рекомбинантные белки в клинической практике.

Целью данной работы является получение с помощью методов генной инженерии штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris- продуцентов биологически активного (3- интерферона человека.

В задачи исследования входит:

- получение векторов экспрессии, обеспечивающих синтез рекомбинантного Р- интерферона человека

- получение штаммов-продуцентов, подбор условий культивирования, выращивания штаммов-продуцентов и индукции синтеза рекомбинантного белка

- разработка схем очистки (3-интерферона человека, синтезированного в клетках дрожжей

- сравнение на примере Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris-систем «гетерологичный белок- клетка продуцент»

Научная новизна исследования. Впервые в России и в мире получены штаммы-продуценты рекомбинатного (3- интерферона человека, обладающего биологической активностью, на основе дрожжей Pichia pastoris. Впервые в мире показано, что токсичный эффект синтеза (3-интерферона человека в клетках Saccharomyces cerevisiae может быть обусловлен негативным воздействием на функции митохондрий. Установлено, что Pichia pastoris являются более предпочтительным продуцентом рекомбинатного (3- интерферона человека, по сравнению с Saccharomyces cerevisiae.

Практическая ценность. В настоящее время (3-интерферон человека является эффективным препаратом для лечения и увеличения периода ремиссии рассеянного склероза, а также вирусных и онкологических заболеваний. Существующие на рынке России зарубежные препараты рекомбинантного (3-интерферона получены на основе условно-патогенных бактерий, поэтому их применение характеризуется рядом побочных эффектов. Созданные в настоящей работе на основе дрожжей штаммы-продуценты рекомбинантного (3-интерферона человека ВКПМ Y-2286 и ВКПМ Y-2470 представляют уникальные разработки, защищены патентом Российской Федерации и могут быть использованы для производства отечественного препарата рекомбинантного (3-интерферона человека.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Парфенова, Любовь Владимировна

ВЫВОДЫ.

1. Получен штамм дрожжей S.cerevisiae ВКПМ Y-2286 (2Р4-GRF18/pHBI)- продуцент Р-ИФН человека, с уровнем продукции 1 мг/л среды, в два раза выше, чем у штамма-прототипа ВКПМ Y-876.

2. Показано, что мутация в гене РН085, кодирующем фосфопротеинкиназу приводят к нежизнеспособности штамма-продуцента Р-ИФН человека.

3. Впервые получены штаммы дрожжей P.pastoris ВКПМ Y-2470 и GS115/рН1УВ-продуценты внутриклеточного и секреторного Р-ИФН человека, продуктивность которых в 15-20 раз выше, чем у штамма дрожжей S.cerevisiae.

4. Показано, что клетки P.pastoris секретируют две формы Р-ИФН человека 18 и 20 кДа, отличающиеся различной степенью гликозилирования.

5. Рекомбинантный Р-ИФН человека, синтезируемый клетками дрожжей S.cerevisiae и P.pastoris, обладает биологической активностью.

6. Показано, что замены аспарагина в положении 87 и лизина в положении 99 не оказывают влияния на биологическую активность Р-ИФН человека клетками P.pastoris, однако влияют на уровень продукции рекомбинантного белка.

7. Предложена схема получения частично-очищенного рекомбинантного Р-ИФН человека из клеток дрожжей штамма ВКПМ Y-2286 S.cerevisiae и из культуральной среды штамма-продуцента ВКПМ Y-2470 P.pastoris.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Парфенова, Любовь Владимировна, Санкт-Петербург

1. Белова И.В., Самбук Е.В., Падкина М.В., Смирнов М.Н. Активаторы транскрипции РН02 и GCN4 в регуляции синтеза кислых фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Генетика.- 1992.- т.28.- с. 11-18.

2. Дебабов В.Г. Микробный синтез интерферонов человека// Биотехнология.- 1985.-т.6.- с.1-14.

3. Дебабов В.Г., Лившиц В. А. Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов//В сб.:Биотехнология:Учеб.пособие для вузов. Кн.2.- «Высшая школа».- 1988.

4. Ершов Ф.И., Новохатский А.С. Интерферон и его индукторы // М., Медицина.- 1980.

5. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при паталогии // М., Медицина,- 1996.

6. Завьялов В.П. Структурно-функциональная классификация и эволюция цитокинов // Вестник Российской Академии Медицинских Наук.-1993.-Т.2.- с.8-9.

7. Кетлинский С.А., Белов Д.А. Фактор некроза опухоли и лимфотоксин-эндогенные противоопухолевые антибиотики IIУ спехи современной биологии.-1989.- т. 107.- с.78-91.

8. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Воробьев Ф.Ф. Эндогенные иммуно-модуляторы// Ст.-Петербург, "Гиппократ",-1992.-с.256.

9. Котельникова А.В., Звягилевская Р.А. Биохимия дрожжевых митохондрий // М., Наука.- 1973.

10. Маниатис Т., Фриг Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии: Молекулярное клонирование // М., Мир.- 1984.

11. Марстон Ф.А.О. Выделение эукароитических полипептидов, продуцируемых в клетках Е. coli.- В кн.: "Новое в клонировании ДНК."// М, Мир. 1989.-с. 95-137.

12. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.// М. Мир.-1976.-с.324.

13. Николаев Я.В., Парфенова JI.B., Падкина М.В. Экспрессия рекомбинантного у-интерферона быка в дрожжах Pichia pastoris // Биотехнологии-2000.-Тезисы.-2000.- с.98.

14. Падкина М.В. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей: Характеристика кислых фосфатаз разных штаммов // Генетика.-1974.- t.11.N.9.- с. 34-43.

15. Падкина М.В., Парфенова JI.B., Самбук Е.В., Смирнов М.Н. Штамм дрожжей Pichia pastoris- продуцент фибробластного интерфероначеловека, рекомбинантная плазмидная ДНК pHIF и способ ее конструирования // Патент РФ RU 2180687 С1.- 2002,- Бюл. N8.

16. Попова Ю.Г., Падкина М.В., Самбук Е.В. Влияние мутаций в генах РН085 и РН04 на утилизацию пролина у дрожжей Saccharomyces cerevisiae. II Генетика.- 2000.- т.36,- с. 18-19.

17. Самбук Е.В., Аленин В.В.,Кожин С.А. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей // Генетика.- 1985.- т.9.- с.1449-1454.

18. Самбук Е.В., Падкина М.В., Смирнова Т.М., Парфенова Л.В., Сахарова Е.Д., Смирнов М.Н. Создание штамма дрожжей Pichia pastoris- продуцента рекомбинантного пресинаптического глутаматного рецептора мозга крысы // Биотехнология.- 2001.- N 2.- с. 23-30.

19. Смит К.Ф. Регуляция функций Т- и В-клеток лимфокинами. // В кн.: "Иммунология".М., Мир. 1988.- т.2.- с.396-425.

20. Тер-Аванесян М.Д. Генетический контроль экзогенной кислой фосфатазы I у дрожжей Saccharomycer cerevisiae// Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. 1974.

21. Троценко Ю.А. Метилотрофные эукариоты // Успехи микробиологии.-1983.- т.18.- с.18-37.

22. Чередеев А.Н., Ковальчук JI.B. Клеточные и молекулярные аспекты иммунных процессов // В кн.:"Итоги науки и техники. Иммунология". ВИНИТИ.- М.- 1989.- т.19.-с. 239.

23. Affolter М., Schier A., Gehring W.J. Homeodomain proteins and regulation of gene expression // Curr.Opin.Cell Biol.- 1990.- v.2 -p.485-495.

24. Arndt K.T., Styles C.A., Fink G.R. Multiple global regulators control HIS4 transcription in yeast // Science.- 1987. v.237.- p.874-880.

25. Aulitzky W.E., Peschel C., Despres D. et al. Divergent in vivo and in vitro antileukemic activity of recombinant interferon beta in patients with chronic-phase chronic myelogenous leukemi //- Annals of Hematology.- 1993.- v.67.- p. 205-211.

26. Austin A.J., Jones C.E. and Heeke G.V. Production of human tissue factor using the Pichia pastoris exspression system //Protein Expr Purif.- 1998.- v. 13.-p.136-142.

27. Ballou C.E. A study of the immunogenicity of three yeast mannans // J.Biol.Chem.- 1970.- v.245.- p. 1197-1203.

28. Barbaric S., Munsterkotter M., Goding C., Horz W. Cooperative Pho2-Pho4 interaction at the PH05 promoter are critical for binding of Pho4 to UASp 1 and efficient transactivation by Pho4 at UASp2 // Mol.Cell Biol.- 1998.- v.18.-p.2629-2639.

29. Barbieri G., Velazquez L., Scrobogna M. et al. Activation of the protein tyrosine kinase tyk2 by interferon Alpha / Beta. // European J. of Biochemistry.-1994. v.223.- p. 427-435.

30. Barr P.J., Gibson H.L., Lee-Ng C.T. et al. Heterogous expressin in yeast Saccharomyces serevisiaell The alko simposium on industrial yeast genetics 1987 v.5 pp. 139-149

31. Bateman A. and Chothia C. Fibronektine type III domains in yeast detected by a hidden Markov model // Current Biology.- 1996.- v.6.- p. 1544-1547.

32. Bathurst I.C., Brennan S.O., Carrell R.W. et al. Yeast KEX2 protease has the properties of a human proalbumin converting enzyme // Science.- 1987.-v.235.- p.348-350.

33. Bazan J.F. Structural disign and molecular evolution of cytokine receptor superfamily//Proc. Nat. Acad. Sci.- 1990.-v. 87.-p. 6934-6938.

34. Beggs J.D. Transformation of yeast by a replicating hibrid plasmid // Nature.- 1978.- v. 275.- p. 104-109.

35. Berben G., Legrain M., Hilger F. Studies on the structure, expression and function of the yeast regulatory gene PH02 // Gene.- 1988.- v.66.- p.307-312.

36. Bergman L.W. A DNA fragment containing the upstream activator sequence determines nucleosome positioning of the trancriptionally repressed PH05 gene of Saccharomyces cerevisiae // Mol.Cell Biol.- 1986.- v.6.- p.2298-2304.

37. Bidwai A.P., Hanna D.E., Glover C.V.C. Purification and characterization of casein kinase II (CK II) from AckalAcka2 S.cerevisiae rescued by Drosophila CKII subunits// J.Biol.Chem.-1992. -v.267.- p.790-796.

38. Birnboim H.C., Doly L.J. A rapid alkalin extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA.//Nucleic Acids Res.- 1970.- v. 7.- p. 1513.

39. Bitter G.A., Chen K.K., Banks A.R. et al. Secretion of foreign proteins from Saccharomyces cerevisiae directed by a a-factor gene fusions // Proc. Natl. Acad. Sci.- 1984.- v.81.- p. 5330-5334.

40. Bitter G.A., Egan K.M., Koski R.A. et al. Expression and secretion vectors for yeast // Methods Enzymol.- 1987.- v. 153.- p.516-544.

41. Boehm Т., Pirie-Shepard S., Trink L.B. Disruption of the KEXI gene in Pichia pastoris allows expression of full-length murine and human endostatin // Yeast.- 1999.- v. 15.- p.563-572.

42. Bradford M.A. A rapide and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein- dye binding.// 1976.- Academic press. Virginia. p.10.

43. Braus G., Mosch H.-U., Vogel K. et al. Interpathway regulation of the TRP4 gene of yeast // EMBO J.- 1989. -v.8.- p.939-945.

44. Brazas R.M., Bhoite L.T., Murphy M.D., Yu Y.X., Chen Y.Y., Neklason D.W., Stillman D.J. Determining the requirements for cooperative DNA binding by Swi5p and Pho2p (Grfl0p/Bas2p) at the HO promoter // J.Biol.Chem.-1995.-v.270.- p.29151-29161.

45. Bretthauer R.K and Castellino F.J. Glycosylation of Pichia pastoris-derived proteins // Biotechnol.Appl.Biochem.- 1999,- v.30.- p.193-200.

46. Broach J.R. Construction of high copi yeast vectors using 2- circle sequence //Methods Enzimol.- 1983.- v. 101.- p. 307-325.

47. Bulawa C.E. Genetics and molecular biology of chitin sinthesis in fungi // Ann.Rev.Microbiol.- 1993.- v.47.- p.505-534.

48. Burglin T.R. The yeast regulatory gene PH02 encodes a homeo box // Cell.-1988.- v.53.- p.339-340.

49. Butcher E.C., Picker LJ. Lymphocyte homing and homeostasis // Science.-1996.-v.272.- p.60-66.

50. Cabiscol E., Piulats E., Echave P. et al. Oxidative stress promotes specific protein damage in Saccharomyces cerevisiae II J.Biol.Chem.- 2000.- v.275.-p.27393-27398.

51. Campbell J., Hedrick J., Zlotnik A. et al. Chemokines and the arrest of lymphocytes rolling under flow conditions // Science.- 1998.- v.279.- p.381-384.

52. Cannella В., Cross A.H., Raine C.S. et al. Adhesion-related molecules in the CNS. Upregulation correlates with inflammatory cell influx during relapsing autoimmune encephalomyelitis // Lab.Invest.- 1991.- v.65.- p.23-31.

53. Caplan A.J. Hsp90's secrets unfold: new insights from structural and functional staudies // Trends Cell Biol.- 1999.- v.9.- p.262-268.

54. Caunt P., Impoolsup A., Greenfield P.F. Stability of recombinant plasmid in yeast.//J. of Biotechnology.- 1988.-v.8.- p.173-192.

55. Cereghino G.P.L., Cregg J.M. Application of yeast in biotechnology: protein production and genetic analysis // Curr.Opin.Biotech.- 1999,- v. 10.- p.422-427.

56. Chabot S., Williams G., Yong V.W. Microglia production of TNF-a is induced by activated T-limphocytes: involvement of VLA-4 and inhibition by interferon(3-lb // J.Clin.Invest.- 1997.- v. 100.- p.604-612.

57. Chen D.C., Chen S.Y., Gee M.F. A variant of Saccharomyces cerevisiae pep4 strain with improved oligotrophic proliferation, cell survival and heterologous secretion of alpha-amylase 11 Appl.Microbiol.Biotechnol.- 1999.-v.51(2)- p.185-192.

58. Conradt P., von Kleist R., Muhlardt P.F. et al. Structute of the carbohydrate moiety of human interferon-beta secreted by a recombinant Chinese hamster ovary cell lines.// J.Biol.Chem.,- 1987.- v.262.- p. 14600-14605.

59. Correale J., Gilmore W., McMillan M. et al. Patterns of cytokine secretion by autoreactive protein-specific T cell clones during the course of multiple sclerosis.- J.Immunol.- 1995,- v.154.- p.2959-2968.

60. Couderc R., Baratti J. Oxidation of methanol by yeast Pichia pastoris. Purification and properties of alcohol oxidase // Agric.Biol.Chem.- 1980.- v.44.-p.2279-2289.

61. Cregg J.M., Madden K.N. Development of the methylotrophic yeast, Pichia pastoris, as a host system for production of foreign proteins // Dev. in Industrial Microbiol.- 1988.- v.29.-p.33-42.

62. Cregg J.M., Tschopp J.F., Stillman C. et al. High-level expression and efficient assembly of hepatitis В surface antigen in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. II Bio/Technology.- 1987.- v.5.- p. 479-485.

63. Croze E., Russell-Harde D., Charis T. eta al. The human type I interferon receptor.- J.Biol.Chem.- 1996.- v.271.- p.33165-33168.

64. Daignan-Fornier В., Fink G.R. Coregulation of purine and histidine biosynthesis by the transcriptional activators BAS1 and BAS2 // Proc.Natl.Acad.Sci.- 1992,- v.89.- p.6746-6750.

65. Darnell J.E.Jr., Kerr I.M., Stark G.R. Jak-STAT pathways and transcriptional activation in response to IFNs and other extracellular signalling proteins // Science.-1994.- v.264.-p.l415-1421.

66. David M., Petricoin III E., Larner A.C. Activation of protein kinase A inhibits interferon induction of the Jak/Stat pathway in U266 cells. // J.Biol.Chem.- 1996.- v.271.- p.4585-4588.

67. De Batselier A., Vasvada A., Dohet P. et al. Fermentation of yeast producing A.niger glucose oxidase: Scale-up, purification and characterisation of the recombinant enzime // Bio/Technology.- 1991.- v.9.- p.559-561.

68. De Braud F., Colleoni M., Noli F. et al. Home treatment with interleukin 2 and Beta-interferon in patients with colorectal cancer and hepatocellular carcinoma // Oncology.-1994.- v.51.- p.472-476.

69. Deming O.B. Interferon beta treatment of multiple sclerosis //Neurology.-1994,- v.44.- p.186-186.

70. Digan M.E., Tschop J., Grinna L. et al. Secretion of heterologous proteins from yeast, Pichia pastoris. // Dev. in Industrial Microbiol.- 1988.- v.29.- p.59-68.

71. Duman J.C., Miele R.G., Liang H. et al. O-Mannosylation of Pichia pastoris cellular and recombinant proteins // Biotechnol .Appl. Biochem.- 1998.- v.28.-p.39-45.

72. Eid P., Langer J.A., Bailly F. et al. Localization of a receptor nonapeptide with a possible role in the binding of the type I interferons // Eur.Cytokine Netw.- 2000.- v.l 1.- p.560-573.

73. Feldman D.E., Frydman J. Protein folding in vivo: the importance of molecular chaperones // Curr.Opin.in Struct.Biol.- 2000.- v.l0.-p.26-33.

74. Frydman J., Hartl F.U. Principle of chaperone-assisted protein folding: differences between in vitro and in vivo mechanisms // Science.- 1996.- v.212-p.1497-1502.

75. Fujimura H., Sakuma Y. Simplified isolation of chromosomal and plasmid DNA from yeast // Biotechniques.- 1997.- v.14.- p. 538-539.

76. Galilov E.E., Smirnov O.Yu. Nucleotide sequence of Yersinia pestis gene encoding F1 antigen and the primary structure of the protein (putative T and В epitopes) //FEBS Lett.1990. v.277.pp.230-323.

77. Gann A.F., Himmerfarb H.J., Ptashne M GAL11, GAL 1 IP and the action of GAL4 // in "Transcriptional regulation".- 1992.- p. 931-946.

78. Gemmill T.R., Trimble R.B. Overview of N- and O-linked oligosaccharide structures found in various yeast species // BBA.- 1999.- v. 1426.- p. 227-237.

79. Gene K., Dona D.L., Reder А/Т/ Increased CD80(+) В cells in active multiple sclerosis and reversal by intereferon beta-lb // J.Clin.Invest.- 1997.-v.99.- p.2664-2671.

80. Gessani S., Puddu P., Varano B. et al. Role of endogenous interferon-beta in the restriction of HIV replication in human monocyte/macrophages.// J. of Leucocyte Biology.-1994.- v.56.- p. 358-361

81. Goodin D.S. Therapeutic developments in multiple sclerosis // Expert. Opin. Investig. Drugs.- 2000.-v.9.- p.655-670.

82. Grossberg S.E., Taylor J.L., Kurshnaryov V.M. Interferon receptors and their role in interferon action// Experientia.- 1989.- v.45.- p.508-518.

83. Guidotti L.G., Guilhot S., Chisari F.V. Interleukin-2 and alpha/beta interferon down-regulate hepatitis В virus gene expression in vivo by tumor necrosis factor-depended and -independent pathways.// J. of Virology.- 1994 v.68.- p.1265-1270.

84. Justice M.C., Hogan B.P., Vershon A.K. Homeodomain-DNA interactions of the Pho2 protein are promoter-dependent . // Nucl.Acids Res.- 1997.- v.25, p. 4730-4739.

85. Hagenson M.J., Holden K.A., Parker K.A. et al. Expression of streptokinase in Pichia pastoris yeast. // Enzyme Microb.Technol.- 1989.- v.l 1, p.650-656.

86. Haguenauar-Tsapis R. and Hinnen A. A deletion that includes the signal peptidase cleavage site impairs processing, glycosylation and secretion of cell surface yeast acid phosphatase //Mol.Cell.Biol.- 1984.- v. 4, p. 2668-2675.

87. Hall G.L., Wing M.G., Compston D.A. (3-interferon regulates the immunomodulatory activity of neonotal rodent micriglia. // J.Neuroimmunol.-1997.-v.l.-p.11-19.

88. Harada H., Fujita Т., Miyamoto et al. Structurally similar, but fimctinally distinct facrors, IRF-1 and IRF-2, bind to the same regulatory elements of IFN and IFN-inducible genes // Cell.- 1989.- v.58, p. 729-739.

89. Hinnen A., Meyack B. and Heim J. Heterologous expression in yeast. In Barr P.J., Brake A.J., Valenzuela P. (Eds.) // Yeast Genetic Engineering Butterworths.- 1989.- p.193-213.

90. Hirst K., Fisher F., McAndrew P.C., Goding C.R. The transcription factor, the cdk, its cyclin and their regulator: directing the transcriptional response to a nutritional signal // EMBO J.- 1989.- v. 13.- p.5410-5420.

91. Hitzeman R.A., Hagie F.E., Levine H.L. et al. Expression of human gene for inetrferon in yeast //Nature.- 1981.-v.293, p. 717-722.

92. Hitzeman R.A., Leung D.W., Perry L.J. et al. Secretion of human interferons by yeast // Science.- 1983.- v.219, p. 620-625.

93. Holland J.M., Holland J.P. Isolation and indetification of yeast messenger ribonucleic acids coding for enolase, glyceraldehyde- 3-phosphate dehydrogenase and phosphoglycerate kinase // Biochemistry.- 1978.- v. 17 .-p.4900-4907.

94. Ikeda F., Shimomura H., Miake M. Early clearance of circulating hepatitis С virus enhanced by induction therapy with twice-a-day intravenous injection of IFN-beta // .Interferon Cytokine Res.- 2000.- v.20, p.831-836.

95. Isaacs A. and Lindenmann J. Virus interference, I. The interferon.// Proc. Roy.Soc.- 1957 .- v.147.- p.257-267.

96. Ito H., Fucuda Y., Murata K. et al. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations//J. Bacteriol. 1983.-v. 153,-p. 163-168.

97. Itoh Y., Hayakawa Т., Fujisawa Y. Expression of hepatitis В virus surfase antigen P31 gene in yeast // Bioch. And Bioph Research Commun.- 1986.-v.138.- p.268-274.

98. Kaffman A., Herskowitz I., Tjian R., O'Shea E.K. Phosphorilation of the transcription factor PH04 by cyclin-cdk complex, PH080-PH085 // Science.-1994.- v.263.-p.l 153-1156.

99. Kang H.A., Kim S.J., Choi E.S. et al. Efficient production of intact human parathyroid hormone in a Saccharomyces cerevisiae mutant deficient in yeast aspartic protease 3 (YAP3) // Appl.Microbiol.Biotechnol.- 1998.- v.50(2)-p.187-192.

100. Karpusas M., Nolte M., Benton M. et al. The crystal structure of human interferon p at 2.2-A resolution // Proc.Nat.Acad.Sci.- 1997.- v.94.- p.l 181311818.

101. Kawakami Т., Matsumato M., Sato M. et al. Possible involvement of the transcription factor ISGF3gamma in virus-induced expression of the IFN-beta gene // FEBS.- 1995.- v.358.- p. 225-229.

102. Kerry-Williams S.M., Gilbert S.C., Evans L.R. Disruption of the Saccharomyces cerevisiae YAP3 gene reduces the proteolytic degradation of secreted recombinant human albumin // Yeast.- 1998.- v. 14(2).- p. 161-169.

103. Kingsman S.M., Kingsman A.J., Mellor J. The production of mammalian proteins in Saccharomyces cerevisiae // Trends Biotechnol.- 1987. -v. 5.- p.53-57.

104. Knobler R.L., Greenstein J.I., Johnson K.P. et al. Systemic recombinant interferon-beta treatment of relapsing-remitting multiple sclerosis: Pilot study analisis and six-year follow-up.// J. of Interferon Research.- 1993.- v. 13.- p.333-340.

105. Komano H., Fuller R.S. Shared functions in vivo of a glycosyl-phosphatidylinositol-linked aspartyl protease, Mkc7, and the proprotein processing protease Kex2 in yeast // PNAS- 1993.-v.92(23)- p.10752-10756.

106. Kukuruzinska M.A, Bergh M.L., Jackson B.L. Protein glycosylation in yeast // Ann.Rev.Biochem.- 1987.- v.56.- p. 915-944.

107. Kuniyasu H., Yasui W., Kitahara K. Growth inhibitory effect of interferon-beta is associated with the induction of cycline-dependent kinase inhibitor p27Kipl in human gastric carcinoma cell line // Cell Growth Differ.- 1997.-v.8.- p.47-52.

108. Laemmli U.K.Cleavage of structural proteins during the assembly of the head bacteriofag T4 // Nature.- 1970.-v.227.- p.681.

109. Legrain M., De-Wilde M., Hilger F. Isolation, physical characterization and expression analysis of the Saccharomyces cerevisiae positive regulatory gene PH04 // Nucl.Acids Res.- 1986.- v. 14.- p.3059-3073.

110. Liberati A.M., De Angelis V., Fizzolotti M. et al. Natural-killer-stimulatory effect of combined low-dose interleukin 2 and interferon Beta in hairy-cellleukemia patient. // Cancer Immunology, Immunotherapy.-1994- v.38- p.323-331.

111. Liu В., Liao J., Rao X. Inhibition of Stat 1-mediated gene activation by PIAS1 // PNAS.- 1998.- v.95.- p. 10626-10631.

112. Louis J.-C., Magal E., Takayama S et al. CNTF protection of oligodendrocytes against natural and tumor necrosis factor-a-induced death // Science.- 1993.-v.259.- p.689-692.

113. Lux S.E., John K.M., Bennett V. Analysis of cDNA for human erythrocyte ankyrin indicates a repeated structure with homology to tissue-differentiation and cell-cycle control proteins // Nature.- 1990,- v.344.- p.36-42.

114. Madden S.L., Johnson D.L.,Bergman L.W. Molecular and expression analysis of the negative regulators involved in the transcriptional regulation of acid phosphotase production in Saccharomices cerevisiae // Mol.Cell.Biol.-1990.-v.ll.- p.5950-5957.

115. Mark D.F., Lu S.D., Creasey A.A. et al. Site-specific mutagenesis of human fibroblast interferon gene.// Proc. Nat. Acad Sci.- 1984,- v.81.- p. 5662-5666.

116. Martinet W., Saelens X., Deroo T. Protection of mice against a lethal influenza challenge by immunization with yeast-derived recombinant influenza neuraminidase // Eur.J.Biochem.- 1997.- v.247.- p.332-338.

117. McDonald S., Chang A.Y., Rubin P. et al. Combined Betaseron R (recombinant human interferon beta) and radiation for iniperable non-small cell lung cancer // Internat.J. of Radiat.Oncolog, Biol. Phisics.- 1993.-v.27.- p.613-619.

118. Meurs E.F., Galabru J., Barber G.N. Tumor supressor function of the interferon-induced double-stranded RNA-activated protein kinase // PNAS-1993.- v.90.- p.232-236.

119. Molto L., Carballido J., Manzano L. et al., Interferon Beta enhances the natural killer activity of patients with bladder carcinoma. // Cancer Immunology. Immunoterapy. 1994.- v.38.- p.406-410.

120. MoirD.T., DavidowL.S. Production of proteins by secretion from Yeast// Meth. Enzymol.- 1991.- v.194.- p.491-497.

121. Moutoussamy S., Kelly P.A., Finidory J. Growth-hormone-receptor and cytokine-receptor-family signalling // Eur.J.Biochem.- 1998.- v.255.- p. 1-11.

122. Nagatani Т., Okazawa H., Kambara T. Effect of natural interferon-beta on the growth of melanoma cell lines // Melanoma Res.- 1998.- v.8.- p. 295-299.

123. Noronha A., Toskas A., Jensen M.A. et al. Interferon (3 decreases T cell activation and interferon у production in multiple sclerosis // J.Neuroimmunol.-1993.-v.46.-p.l45-154.

124. Novick D., Cohen В., Rubinstein M. The human interferon alpha/beta receptor: characterization and molecular cloning // Cell.-1994.- v.77.- p.391-400.

125. Ogawa N., Oshima Y. Functional domains of a positive regulatory protein, PH04, for transcriptional control of the phosphatase regulon in Saccharomyces cerevisiae//Mol.Cell Biol.- 1990.-v. 10.-p.2224-2236.

126. Ogawa N., Noguchi K., Yamashita Y. et al. Promoter analysis of the PH081 gene encoding a 134 kDa protein bearing ankyrin repeats in the phosphatase regulon of Saccharomyces cerevisiae // Mol. Gen.Genet.- 1993.- v.238.- p.444-454.

127. Ogawa N., Noguchi K., Sawai H. et al. Functional domains of Pho81p, an inhibitor of Pho85p protein kinase, in the transduction pathway of Pi signals in Saccharomyces cerevisiae // Mol. Cell Biol.- 1995.- v. 15,- p.997-1004.

128. Ohi H., Ohtani W., Okazaki N. Et al. Cloning and caracterization of the Pichia pastoris PRC1 gene encoding carboxypeptidase Y // Yeast.- 1998.- v.12.-p.31-40.

129. O'Neil E.M., KaffmanA., Jolly E.R. et al. Regulation of Pho4 nuclear localization by the Pho80-Pho85 cyclin-CDK complex // Science.- 1996.-v.271.- p.209-212.

130. Padkina M.V., Karsten S.L., Sambuk E.V. PH02 and PH04 proteins are involved in the regulation of CIT1 gene transcription in yeast. // Abstr. of the yeast genetics and mol. biology meeting of GSA. Madison. USA, p.241A, 1996.

131. Patarca R., Schartz J. et al. Rpt-1, an intracellular protein from helper/inducer T-cells that regulates gene expression of interleukin-2 receptor and human immunodificiency virus type 1 // PNAS.- 1988.- v. 85.- p. 2733-2737.

132. Pestka S., Langer J.A., Zoon K.C., Samuel C.E. Interferons and their actions //Ann.Rev.Biochem.- 1987.- v.56.- p.727-777.

133. Priestle J.P., Schar H.-P. et al. Crystal structure of the cytokine interleukine-1 beta // EMBO J.- 1988,- v. 7.- p. 339-349.

134. Primrose S.B. The application of geneticalli engineered micro-organisms in the production of drugs // J. Appl. Bacterid.- 1986.- v. 61.- p. 99-116.

135. Remaut E., Stansser P., Simons G. et al. Use of the phage lamda Pi promoter for high-level expression of human interferons in Echerichiacoli// Methods in enzymology.- 1986.- v.l 19- p.366-375.

136. Rockley P.F., Tyring S.K. Intrferons alpha, betta and gamma therapy of anogenftal human papillomavirus infection// Pharmacology and Therapeutics.-1995.-v.65.-p. 265-287.

137. Rolfes R.J., Zhang F., Hinnebusch A.G. The transcriptional activators Basl, Bas2 and Abfl bind positive regulatory sites as the critical elements for adenine regulation of ADE5,7 //J.Biol.Chem.- 1997.- v.272.- p.13343-13354

138. Romanos M.A., Scorer C.A., Clare J.A. Foreign gene expression: a review // Yeast.- 1992.- v.8.-p.423-488.

139. Ronni Т., Melen K., Malygin A. Control of interferon-inducible MxA gene expression in human cells // J.Immunol.- 1993,- v.150.- p.1715-1726.

140. Rott O., Fleischer В., Cash E. Interleukine-10 prevents experimental allergic encephalomyelitis // Eur.J.Immunol.- 1994.- v.24.- p. 1434-1440.

141. Runkel L., deDios C., Karpusas M. Systemic mutational mapping of sites on human inteferon-P-la that are important for receptor binding and functional activity // Biochemistry- 2000.- v.39.- p.2538-2551.

142. Runkel L., Meier W., Pepinsky H. Structural and functional diferences between glycosylated and non- glycosylated forms of human interferon-beta (IFN-beta) // PharmRes.- 1998.- v.15.- p.641-649.

143. Rusconi S., Agarossi A., Ravasi L. et al. Serum 2'-5'-oligoadenylate synthetase levels and clinical response to inteferon-Beta therapy in women with genital papillomavirus infection // J. of Infectious Diseases.- 1994.- v. 169.-p.1112-1115.

144. Samuel C.E. Interferon induction of the antiviral state proteins induced by inteferons and their possible roles in the antiviral mechanismes of action.- in "Interferon Action"(ed. Pfeffer L.M.), CRC Press, Boca Raton, FL.- 1987.-p.110-130.

145. Schultz L.D., Tanner J., Hofmann K.J. et al. Expression and secretion in yeast of a 400-kDa envelope glycoprotein derived from Epstein-Barr virus // Gene.- 1987.- v.54.- p.l 13-123,

146. Schaber M.D., Dechiara T.M., Kramer R.A. Yeast vectors for production of interferon // Methods in enzymology.- 1986.- v.l 19.- p.183-192.

147. Sengstag C., Hinnen A. A 28-bp segment of the Saccharomyces cerevisiae PH05 upstream activator sequence confers phosphate control to the CYC 1 -lacZ gene fusion // Gene.- 1988.-v.67.- p.223-228.

148. Shao D., Creasy C.L., Bergman L.W. Interaction of Saccharomyces cerevisiae Pho2 with Pho4 increases the accessibility of the activation domain of Pho4 // Mol.Gen.Genet.- 1996.- v.251.- p.358-364.

149. Shao D., Creasy C.L., Bergman L.W. A cysteine residue in helix II of the bHLH domain is essential for homodimerization of the yesat transcription factor Pho4p // Nucl. Acids Res.- 1998.- v.26.- p.710-714.

150. Shen S., Suiter G., Jeffries T.W. et al. A strong nitrogen source-regulated promoter for controlled expresion of foreign gnes in the yeast Pichia pastoris II Gene.- 1998.-v.216.- p.93-102.

151. Schindler C., Darnell J.E.,Jr. Transcriptional responses to polypeptide ligands: the JAK-STAT pathway // Annu.Rev.Biochem.- 1995.- v.64.-p.621-651.

152. Shepard H.M., Leuing D., Stebbing N. et al. A single amino acid change in IFN-pi abolishes its antiviral activity//Nature 1981 v.294 pp.563-565.

153. Schneider J.C., Guarente L. Vectors for expression of cloned genes in Yeast: Regulation, Overproduction and Underproduction // Meth. Enzymol.-1991.- v.l94.- p.373-387.

154. Schneider K.R., Smith R.L., O'Shea E.K. Phosphate-regulated inactivation of the kinase PH080-PH085 by the cdk inhibitor PH081 // Science.- 1994.-v.266.- p. 122-126.

155. Serrano M., Hannon G.J., Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4 // Nature.- 1993.- v.366.

156. Smeltz R.B., Swanborg R.H. Concordance and contradiction concerning cytokines and chemokinees in experimental demyelinating disease // J.Neurosci.Res.- 1998.- v.51.- p.147-153.

157. Songs M.M. et al. The supressor of cytokine signalling (SOCS)l and SOCS3 but not SOCS2 proteins inhibit interferon-mediated antiviral and antiproliferative activities // J.Biol.Chem.- 1998.- v.273.- p.35056-35062.

158. Sreekrishna K., Potenz R.B., Cruze J.A. et al. High level exspression of heterologous protein in methylotrophic yeast Pichia pastoris II J.Basic Microbiol.- 1988.-v.28.- p.265-278.

159. Sreekrishna K., Tschopp J.K. and Fluke M. Invertase gene (SUC2) of Saccharomyces cerevisiae as a dominant marker for transformation of Pichia pastoris. //Gene.- 1987.- v.59.-p.l 15-125.

160. Starr R., Willson T.A., Viney E.M. et al. A family of cytokine-inducible inhibitors of signalling //Nature.- 1997.- v.386.- p.917-921.

161. Stone L.A., Frank J.A., Albert P.S. et al. The effect of interferon-beta on blood-brain barrier disruptions demonstrated by contrast-enhanced magnetic resonance imaging in relapsing-remitting multiple sclerosis // Ann.Neurol.-1995.- у31.- p.611-619.

162. Storrie В., Madden A. Isolation of subcellular organelles// Methods in Enzimol.-l990,-v. 182 .-p.203-225.

163. Sudbery P.E. The expression of recombinant proteins in yeast // Current Opin.in Biotech.- 1996,- v.7.- p.517-524.

164. Svaren J., Horz W. Transcription factor vs nucleosomes: regulation of the PH05 promoter in yeast // Trends Biochem.Sci.- 1997.- v.22.- p.93-97.

165. Taniguchi Т., Ohno S., Fujii-Kriyana Y. Construction and indentification of a bacterial plasmid containing the human fibroblast interferon gene sequence // Proc. Japan. Acad.- 1979.- v.55.- p. 464-469.

166. Thill G.P., Kramer R.A., Turner K.J. et al. Comparative analysis of the 5'-end regions of two repressible acid phosphotase genes in Saccharomyces cerevisiae 11 Mol.Cell Biol.- 1983.- v.3.- p.570-579.

167. Toh-e A., Tanaka K., Uesono Y., Wicker R.B. PH085, a negative regulator of the PHO system, is a homolog of the protein kinase gene, CDC28, of Saccharomyces cerevisiae // Mol.Gen.Genet.- 1988.- v.214.- p.162-164.

168. Trimble R.B., Atkinson P.H., Tschopp J.F.et al. Structure of oligosaccharides on Saccharomyces SUCZ invertase secreted by the methylotrophic yeast Pichia pastoris II J.Biol Chem.- 1991.- v.266.- p.22807-22817.

169. Tschopp J.F, Sverlow G., Kosson R. et al. High-level secretion of glycosylated invertase in the methylotrophic yeast Pichia pastoris II Bio/Technology.- 1987.- v.5.- p.1305-1308.

170. Tuite M.F., Dobson M.J., Roberts N.A. et al. Regulated high efficiency, expression of human interferon-alpha in S. cerevisiae // EMBO.- 1982.- v.l.-p.603-608.

171. Valenzuela, P.,Medina A. and Rutter W.J. Synthesis and assembly of hepatit В virus surface antigen partical in yeast // Nature.- 1982.- v.298.- p.347-350.

172. Venter U., Svaren J., Schmitz J., Schmid A., and Нцгг W. A nucleosome precludes binding of the transcription factor Pho4 in vivo to a critical target site in the PH05 promoter // EMBO J. 1994. v. 13. p.4848-4855.

173. Vogel K., Horz W., Hinnen A. The two positively acting regulatory proteins PH02 and PH04 physically interact with PH05 upstream activation regions // Mol.Cell Biol.- 1989.-v.9.- p.2050-2057.

174. Waterham H.R., Digan M.E., Koutz P.J. et al. Isolation of the Pichia pastoris glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene and regulation and use of its promoter// Gene.- 1998.- v.186.- p.37-44.

175. Woolford C.A., Daniels L.B., Park F.J. et al. The PEP4 gene encodes aspartyl protease implicated in the posttranslation regulation of Saccharomyces cerevisiae vacuolar hydrolases // Mol.Cell.Biol.- 1986.- v.6 (7).- p.2500-2510.

176. YaDeau J.T., Klein C., Blobel G. Yeast signal peptidase contains a glycoprotein and the SecII gene product // PNAS.- 1991.- v.88.- p.517-521.

177. Yamada K., Wang J., Osawa H. et al. Efficient large-scale transformation of yeast II Biotechniques.- 1998.- v.24.- p.596-598.

178. Yong V.W., Krekoski C.A., Forsith P.A. et al. Matrix metalloproeinases and desesases of the central nervous system II Trends Neurosci.- 1998.- v.24.- p.3-15.

179. Yong V.W., Chabot S., Stuve O. Interferon beta in the treatment of multiple sclerosis //Neurology. 1998,- v.51.- p.682-689.

180. Zabriskie D.W., Arcuri E.J. Factors influencing productivity of fermentation employing recombinant microorganisms //Enzyme Microb. TechnoL- 1986.-v.8.- p. 706-717.

181. Zhang W., Espinoza D., Hines V. et al. Characterization of beta-amiloid peptide precursor processing by the yeast Yap3 and Mkc7 proteases // BBA.-1997.- v.1359(2).- p.l 10-122,

182. Zang K. and Kumar R. Interferon-a inhibits cycline E- and cycline DI-dependent CDK-2 kinase activity associated with RB protein and E2F in Daudi cells //Biochem.Biophys.Res.Commun.- 1994.- v.200.- p.522-528.

183. Zhou A., Hassel B.A., Silverman R.H. Expressing cloning of 2-5'A-dependend RNAase: a uniquely regulated mediator of interferon action II Cell.-1993.-v.72.- p.753-765.

184. Zinser E., Daum G. Isolation and biochemical characterization of organelles from yeast Saccharomyces cerevisiae// Yeast.-1995.-v. 11.- p.348-361.