Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Совершенствование терапии мастита коров препаратом со сверхнизким содержанием лекарственных веществ

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование терапии мастита коров препаратом со сверхнизким содержанием лекарственных веществ"

На правах рукописи

ФИЛАТОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕРАПИИ МАСТИТА КОРОВ ПРЕПАРАТОМ СО СВЕРХНИЗКИМ СОДЕРЖАНИЕМ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией; 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Новосибирск — 2014

о 4 СЕН 2014

005552231

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, доцент

Шкиль Николай Николаевич

Официальные оппоненты: Герунова Людмила Карловна,

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина, профессор кафедры;

Кашапова Светлана Викторовна

кандидат ветеринарных наук, ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет», доцент кафедры

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «/#» 2014 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д.006.045.01., созданного на базе ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Красно-обск, ГНУ ИВСиДВ, а/я 8, тел/факс (383) 348-44-62, E-mail: dis.ievsidv@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии и на сайте ИЭВСиДВ: www.ievsidv.ru: автореферат размещен на сайте ВАК РФ: www.vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан » 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. ветеринар, наук

Г.М. Стеблева

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Маститы наносят большой ущерб молочному скотоводству, который складывается из снижения продуктивности коров, ухудшения технологических свойств молока, вынужденной выбраковки животных по причине rano- и агалактии, а также заболеваемости телят вследствие потребления ими молозива, содержащего условно-патогенную микрофлору, затрат на ветеринарные мероприятия (А.И. Ивашура, 1972; В.М. Карта-шова с соавт., 1982; В.А. Париков, 1986; В.П. Гончаров с соавт., 1987; В.П. Пономарев с соавт., 1991; Е.Ю. Смертина, 1998; В.А. Париков с соавт., 2000; В.А. Сидоркин с соавт., 2007; Б.С. Мойканов с соавт., 2007; В.В. Васильев, 2008; A.A. Богуш с соавт., 2009).

Для терапии маститов используют антибиотики, преимущественно пени-циллинового и аминогликозидного рядов (пенициллин, кламоксил, синулокс, стрептомицин, неомицин и др.), а также антибактериальные композиции (мас-тисан; мастицид, мастоприм, мамифорте, мастиет форте, мастилекс и др.). Общими недостатками лечения коров при маститах антибиотиками являются браковка молока после лечения, стихийная селекция антибиотикоустойчивых штаммов микроорганизмов, снижение молочной продуктивности вследствие дистрофии ткани вымени в результате переболевания маститом (С.М. Навашин, 1982; В.М. Ивченко, 1988; В.И. Слободяник с соавт., 1994; Г.Н. Кузьмин, 1995; А.И. Ивашура с соавт., 1998; C.B. Шабунин, 2011; М.М. Kapian, 1977; M.D. Rapeanu, 1977; N. Richard, 1978; D.E. Jasper, 1982).

В соответствии с «Техническим регламентом на молоко и молочную продукцию» (ФЗ РФ № 88) от 12 июня 2008 года повышается требование к санитарному качеству молока и ограничивается остаточное содержание антибактериальных веществ в получаемой продукции, что обусловливает поиск новых методов лечения заболевания.

Степень разработанности темы. Очевидной альтернативой преодоления негативных последствий применения антибактериальных препаратов при терапии маститов коров является разработка новых высокоэффективных экологически безопасных лечебных средств, не вызывающих браковку молока и позволяющих получать продукцию молочного животноводства высокого санитарного качества.

В настоящее время одним из перспективных направлений фармакологии является гомеопатический метод лечения (В.Д. Соколов с соавт., 2005), который широко применяется при лечении гипофункции яичников (В.Н. Бочкарев с соавт., 2008), профилактики желудочно-кишечных заболеваний норок (A.C. Ка-рамян, 2009), травматизме (Ф.В. Шакирова, 2009), суставной патологии (A.B. Шадская, 2009), коррекции стрессов птиц (М.Б. Славецкая с соавт., 2010) и лошадей (О.Г. Сапожникова с соавт., 2010).

Цель и задачи исследования. Целью исследования является разработка способа лечения субклинического, серозного и катарального маститов коров с применением препарата со сверхнизким содержанием лекарственных веществ и изучение его терапевтической эффективности.

з

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи

1. Определить видовой состав микрофлоры, выделенной из молока, при различных формах маститов коров и её антибиотикочувствительность.

2. Изучить влияние лекарственных веществ в сверхнизких концентрациях на опсонофагоцитарную реакцию нейтрофилов коров in vitro.

3. Обосновать состав и разработать способ применения лекарственного препарата Мастигом для лечения субклинического, серозного и катарального маститов коров.

4. Изучить токсикологические характеристики и терапевтическую эффективность препарата Мастигом.

5. Дать экономическую оценку применения гомеопатического препарата Мастигом при лечении маститов коров.

Научная новизна. Подтверждена роль условно-патогенной микрофлоры в этиологии маститов и определены показатели её антибиотикочувствительности. Разработан состав и способ применения лекарственного препарата Мастигом со сверхнизким содержанием лекарственных веществ для лечения различных форм маститов. Установлено влияние гомеопатических препаратов на опсонофагоцитарную реакцию нейтрофилов коров in vitro. Обоснован новый подход к терапии маститов коров, позволяющий получать продукцию молочного животноводства высокого санитарного качества.

Подана заявка на патент «Тканевый нозод, препарат на его основе для лечения мастита крупного рогатого скота и способ применения препарата» № 2013140846 от 04.09.2013г.

Теоретическая и практическая значимость. Изучено влияние гомеопатических препаратов на фагоцитарную активность нейтрофилов коров in vitro. Установлены особенности изменения показателей фагоцитарной активности нейтрофилов коров in vitro в зависимости от вида применяемого препарата. Разработан новый высокоэффективный экологически безопасный препарат, содержащий биологически активные вещества для терапии различных форм маститов коров. Изучен терапевтический и экономический эффект применения препарата Мастигом при лечении субклинического, серозного и катарального маститов коров.

Материалы исследований вошли в методическое пособие «Рекомендации по диагностике и лечению мастита коров с применением препаратов в сверхмалых дозах», утвержденные на заседании учёного совета подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №1 от 07.02.2012г.).

Методология и методы исследования. Методологическая основа исследований - анализ литературных источников по проблеме мастита коров представленной в отечественных и зарубежных источниках литературы, а также полученных экспериментальных данных о влиянии веществ в сверхнизких разведениях на показатели опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов коров in vitro. По результатам исследований разработан препарат для лечения маститов коров с оценкой его токсикологических свойств. Изучена терапевтическая и обоснована экономическая эффективность применения препарата Мастигом при тера-

4

пии различных форм маститов коров.

В работе использованы следующие методы исследований: клинические, микробиологические, цитологические, иммунологические, токсикологические.

Положения, выносимые на защиту:

1. Видовой состав микрофлоры молока и её антибиотикочувствительность при субклиническом, серозном и катаральном маститах.

2. Влияние веществ в сверхнизких концентрациях на опсонофагоцитарную реакцию нейтрофилов коров in vitro.

3. Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность препарата Мастигом при лечении субклинического, серозного и катарального маститов коров.

4. Экономическая эффективность применения гомеопатического препарата Мастигом при лечении маститов коров.

Степень достоверности и апробация работы. Достоверность результатов подтверждается большим объёмом микробиологических, цитологических, иммунологических методов исследований, проведенных с 2010 по 2013 гг., а также статистической обработкой полученных цифровых данных.

Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на II Сибирском ветеринарном конгрессе Новосибирского ГАУ (Новосибирск, 2010), III съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011), X Сибирской ветеринарной конференции (Новосибирск, 2011), V Международной научно-практической конференции «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых» (п. Краснообск, 2012), XI Сибирской ветеринарной конференций (Новосибирск, 2012), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Инновационные решения актуальных проблем в АПК», (Екатеринбург, 2013), Всероссийском молодёжном научном форуме «Наука, инновации, бизнес в АПК» (Новосибирск, 2013), XII Сибирской ветеринарной конференции (Новосибирск, 2013).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнау-ки РФ («Вестник НГАУ» и «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки»).

Объем н струюура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах компьютерного текста и включает в себя введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список сокращений, используемых в диссертации, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 13 таблицами. Список литературы включает 240 источников, в том числе 183 отечественных и 57 иностранных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы

Исследования проводили в 2010-2013 гг. в лаборатории по разработке новых методов лечения животных Государственного научного учреждения Ин-

5

статут экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхо-закадемии.

Диагностику мастита коров проводили, руководствуясь «Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактике мастита у коров» (2007). Общее клиническое обследование животных начинали с определения состояния долей вымени методом осмотра и пальпации. Обращали внимание при осмотре на цвет кожи, форму вымени, величину сосков, симметричность четвертей, а также состояние сфинктера соскового канала. После доения определяли болевую реакцию, консистенцию, температуру молочной железы, состояние надвыменных лимфатических узлов. Тонус сфинктера соскового канала, его проходимость, цвет, количество, вид секрета, однородность, наличие в нем сгустков и хлопьев определяли пробным сдаиванием.

Для изучения видового состава микрофлоры при маститах коров проведено исследование проб молока от 320 голов в хозяйстве Новосибирской области. Бактериологические исследования секрета молочной железы проводили при его посеве на 5% кровяной агар, мясопептонный агар (МПА) с 1% глюкозой, среду Эндо.

Идентификацию микрофлоры, выделенной от больных коров, осуществляли с учетом культуральных, морфологических и биохимических свойств бактерий по общепринятым методикам (М.А. Сидоров, 1982), «Определитель бактерий Берджи» (1997) и рекомендациям Михайловой H.H. (1983), Карташовой В.М. (1988). Изучение биохимических свойств бактерий проводили набором реагентов - пластины биохимические, дифференцирующие энтеробактерий, стафилококков, стрептококков ООО НПО «Диагностические системы» г. Нижний Новгород.

Определение антибиотикочувствительности изолятов бактерий, выделенных из молока коров с субклинической, серозной и катаральной формой маститов, проводили дискодиффузионным методом в соответствии с «Лабораторными методами исследований инфекционной патологии животных» (2008).

Оценку влияния гомеопатических средств на опсонофагоцитарную реакцию (ОФР) нейтрофилов коров in vitro проводили согласно методике «Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных» (2003), включающей изучение фагоцитирущей активности нейтрофилов (ФА), фагоцитарного числа (ФЧ), фагоцитарного индекса (ФИ), фагоцитарной ёмкости (ФЁ), переваривающей способности крови (ПСК). Для исследований были использованы готовые формы лекарственных веществ (ГОСТ 7060-79) производство ООО, «ГМСЦ» г. Новосибирск. В экспериментах использованы фармакопейньле разведения веществ, применяемых в сверхнизких концентрациях: D6 - 10 " г/мл; D15 -1015; С6 - 10"12; С12 - 10 "24; СЗО -10 -60; С20О -10 -400 г/мл.

Для изучения влияния гомеопатических лекарственных средств на ОФР нейтрофилов коров in vitro использовали лейкоцитарную взвесь в объеме 0,5 мл, к которой добавляли 0,5 мл препаратов Фитолакки в разведении С12, 200; Ипекакуаны С6, 200; Нукс вомики С6, 200; Аписа С12, 200; Меркуриус ко-розивуса С6, 200; Фосфора С6, 200; Ацидум фосфорикума С6, 200; Ацидум му-риатикума С6, 200; Гепар сульфура С12; Сульфура С6, 12, 200; Белладонны

6

С12, 30; Аконита С6, 12, 200; Кониума С30; Калькареи карбоники С6, 50; Арсе-никум альбума С6, 12, 30, 200, Фенугросци С6, 12; Арники С12; Лахезиса Д15, С12, 30, 200; Силиции СЗО; Тканевого нозода Д6; Мастигома, помещали в термостат на 1 час при Т = 37°С. Затем вносили взвесь микробных тел референтного штамма Staphylococcus albus № 182 по 0,5 мл, содержащую 1 млрд. КОЕ/ 1 мл. Пробирки помещали в термостат на 30 минут при Т = 37 С. После инкубации готовили и фиксировали мазки крови в спирт-формалине (40% р-р формалина и 96% спирт) в течение 10 минут и окрашивали по Романовскому-Гимза в течение 30 минут. В контрольных группах были использованы индифферентные вещества - лактоза и 0,85% водный раствор NaCl - 1 контрольная группа включала в себя: (1 гранулу лактозы + 0,85% водный раствор NaCl); 2 контрольная группа (0,85% водный раствор NaCl); 3 контрольная группа (4 гранулы лактозы + 0,85% водный раствор NaCl); 4 контрольная группа (плацебо-контроль).

Разработанный лабораторный образец гомеопатического препарата Маститом для лечения субклинического, серозного, катарального маститов коров содержит стерильные водные растворы Апис С12 - 0,05 мл, Сульфур С200 -0,05 мл, Кониум СЗО - 0,05 мл, Фитолакка С12 - 0,1 мл, Силиция СЗО - 0,1 мл, Белладонна С12 - 0,1 мл, тканевый нозод D6 - 0,1 мл, хлорида натрия 0,85% до 1 мл.

Изучение токсикологических характеристик препарата Мастигом проводили на 100 белых мышах, 24 крысах, 12 кроликах и 10 морских свинках, а определение его терапевтической эффективности оценивали на 320 коровах черно-пестрой породы.

Срок лечения мастита коров определяли по результатам исследований проб молока с подсчётом соматических клеток (в счётной камере Горяева) по Н.М. Хилькевичу (1968) и посева на МПА с целью определения содержания КОЕ микроорганизмов в 1 мл, при одновременном исследовании с димастино-вой пробой.

Изучение острой токсичности препарата Мастигом проводили на белых мышах (массой 18-22 г), крысах (150-240 г), морских сзинках (450-500 г), кроликах (2-2,5 кг) согласно ГФ XI вып. 2 (1986); «Методические рекомендации по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» ВГНКИ (1988). Исследования раздражающего действия препарата Мастигом определяли на клинически здоровых коровах по методике Л.П. Маланина (1988).

Для оценки сравнительной эффективности лабораторного образца препарата Мастигом использовали препарат Неотил, применяемый для лечения мастита коров. Испытание терапевтической эффективности лабораторного образца Мастигом осуществляли при субклиническом, серозном и катаральном маститах коров. Животным опытной группы с диагнозом субклинический (п=50), серозный (п=90), катаральный (п=20) маститы вводили интрацистернально гомеопатический препарат Мастигом в дозе 10 мл 1 раз в сутки. Коровам контрольной группы с диагнозом субклинический (п=50), серозный (п=90), катаральный (п=20) маститы вводили антибактериальный препарат Неотил интра-

7

цистернально в дозе 10 мл, 1 раз в сутки в течение 3-5 дней согласно инструкции по применению препарата. Расчеты экономической эффективности применения препарата Мастигом проводили согласно методике Никитина И.Н. (2007). Статистическую обработку данных производили в программе «Microsoft Excel».

2.2. Результаты собственных исследований 2.2.1 Результаты бактериологических исследований проб молока при различных формах мастита коров

При микробиологических исследованиях проб молока коров с субклинической формой мастита выделили микроорганизмы родов Streptococcus (Str. dis-galactiae, Str. agalactiae, Str. pyogenes) в 70% проб, Staphylococcus (St. aureus, St. epidermidis) — в 21% и E. coli -в 9% проб (табл. 1).

Таблица 1 — Микроорганизмы, выделенные из молочного секрета при субклиническом, серозном и катаральном маститах коров

Микроорганизмы Мастит

субклинический, n=100 серозный, n=180 катаральный, п=40

количество изолятов % количество изолятов % количество изолятов %

Streptococcus (Str. disgalactiae, Str. agalactiae, Str. pyogenes) 70 70 119 66,1 22 55

Staphylococcus (St. aureus, St. epidermidis) 21 21 54 30 11 27,5

E. coli 9 9 7 3,9 7 17,5

При серозной форме мастита коров изолировали микроорганизмы родов Streptococcus {Str. disgalactiae, Str. agalactiae, Str. pyogenes) — в 66,1%, Staphylococcus (St. aureus, St. epidermidis) 30% и E. coli - в 3,9% проб. Бактериологическое исследование молока, при катаральной форме мастита, выявило изоляты родов: Streptococcus (Str. disgalactiae, Str. agalactiae, Str. pyogenes) — в 55%, Staphylococcus (St. aureus, St. epidermidis) - в 27,5%, E. coli — в 17,5% проб.

При микробиологических исследованиях проб молока коров с субклинической формой мастита в исследуемом материале наиболее часто встречались следующие ассоциации микроорганизмов: Str. disgalactiae + Str. agalactiae (66,7%); Str. agalactiae + St. aureus (9,3%); Str. pyogenes + St. aureus (6,7%); St. epidermidis + St. aureus + E. coli (6,7%); Str, agalactiae + St. epidermidis (5,3%); Str. pyogenes + E. coli (5,3%). До лечения субклинического мастита установлена чувствительность к неомицину - у 54% выделенных изолятов, при этом резистентность к ципрофлоксацину отмечали - у 12%, к тобромицину, не-тилмицину - у 58%, к тетрациклину - у 79%, к полимиксину - у 85% исследованных микроорганизмов.

Исследование проб молока при серозной форме мастита показало наличие следующих ассоциаций микроорганизмов: Str. disgalactiae + Str. agalactiae (52,4%); Str. agalactiae + St. aureus (21,3%); Str. pyogenes + St. aureus (14,0%); Str. agalactiae + St. epidermidis (6,5%); Str. pyogenes + E. coli (3,3%); St. epider-midis + St. aureus + E. coli (2,5%). Антибиотикочувствительность выделенной микрофлоры до лечения серозного мастита выявляли к неомицину - у 101 пробы (56,6%), к эритромицину - у 76 (42,2%), при этом резистентность к ампик-локсу отмечали - у 125 проб (69,4 %), к тобромицину - у 138 (76,6 %), к тетрациклину - у 147 (81,6%), к полимиксину, энрофлоксацину - у 157 (87,2%), к ципрофлоксацину - у 166 (92,2 %) проб.

При микробиологических исследованиях проб молока коров с катаральной формой мастита в исследуемом материале наиболее часто встречались следующие ассоциации микроорганизмов: Str. disgalactiae + Str. agalactiae (51,9%); St. epidermidis + St. aureus + E. coli (18,5%); Str. agalactiae + St. aureus (14,8%); Str. pyogenes + E. coli (7,4%); Str. pyogenes + St. aureus (3,7%); Str. agalactiae + St. epidermidis (3,7%). До лечения катарального мастита установлена чувствительность к неомицину - у 52,7%, к эритромицину - у 42,2%, при этом резистентность к ампиклоксу отмечали - у 63,8%, к нетилмицину - у 66,5%, к тобромицину - у 74,1%, к тетрациклину - у 80,1%, к полимиксину - у 85,1%, к ципрофлоксацину - у 88,5%, к энрофлоксацину - у 89,4% исследованных микроорганизмов.

Чувствительность выделенных бактерий до лечения катарального мастита отмечена к неомицину - у 19 (47,5%) проб, в то время как резистентность к нетилмицину выявили - у 30 (75%), к тетрациклину - у 31 (77,5%), к ципрофлоксацину - у 35 (87,5%), к тобромицину - у 35 (87,5%), к энрофлоксацину - у 38 (95%), соответственно (табл. 2).

Таблица 2 — Ассоциации микроорганизмов, выделенных при субклиническом, серозном, катаральном маститах коров

Ассоциации микроорганизмов Форма мастита

субклинический серозный катаральный

количество % количество % количество %

Str. disgalactiae + Str. agalactiae 50 66,7 64 52,4 14 51,9

Str. agalactiae + St. aureus 7 9,3 26 21,3 4 14,8

Str. pyogenes + St. aureus 5 6,7 17 14 1 3,7

St. epidermidis + St. aureus + E. coli 5 6,7 3 2,5 5 18,5

Str. pyogenes + E. coli 4 5,3 4 3,3 2 7,4

Str. agalactiae + St. epidermidis 4 5,3 8 6,5 1 3,7

Всего 75 100 122 100 27 100

В результате исследований установлено, что микроорганизмы рода Str. agalactiae, Str. disgalactiae, Str. pyogenes, выделенные из молока коров, больных субклиническим, серозным, катаральным маститом, обладали высокой чувствительностью к неомицину (60%), к ампиклоксу (46%) и резистентностью к эритромицину (57,6%), к тобромицину (62%), к тетрациклину (81%), к ци-профлоксацину (83%), к полимиксину (83%) и к энрофлоксацину (94,1%). Бактериологическое исследование молока при серозной форме мастита показало присутствие представителей St. aureus, St. epidermidis, чувствительных к неомицину в 54% проб, при этом установлена резистентность к нетилмицину в 62%, к тобромицину в 68%, к ампиклоксу в 73,6%, к тетрациклину в 77%, к энрофлоксацину в 85%, к полимиксину в 87,1% и к ципрофлоксацину в 84%.

Изучение антибиотикочувствительности микроорганизмов Е. coli, изолированных от животных с катаральной формой мастита, выявило резистентность к неомицину (55,9%), к нетилмицину (71%), к тетрациклину (82,2%), к энрофлоксацину (89%), к ципрофлоксацину (83%), к тобромицину (92,4%). При определении чувствительности изолированной микрофлоры молока при субклиническом, серозном и катаральном маститах коров в 8 (2,5%) пробах выявлена полная резистентность к антибактериальным препаратам.

2.2.2 Влияние лекарственных веществ в сверхнизких концентрациях на опсонофагоцитарную реакцию нейтрофилов коров in vitro

Длительное и бессистемное применение химиотерапевтических средств в животноводстве приводит к снижению их эффективности при лечении инфекционных заболеваний из-за образования лекарственно устойчивых штаммов микроорганизмов (В.М. Ивченко,1991; А.И. Ивашура с соавт., 1994; В.И. Сло-бодяник с соавт., 1994; В.К. Копытин с соавт., 1997; A.B. Ходаков, 2000).

Гомеопатические препараты, содержащие лекарственные вещества в сверхнизких концентрациях, влияют на широкий круг физиологических процессов: обмен веществ (А.Г. Кухарская с соавт., 2008; Л.А. Луткова, 2009), центральную нервную систему (A.A. Комисаренко, 2000), а также стимулируют различные иммунологические реакции (В.Н. Бочкарев с соавт., 2008, 2010;

М.Б. Славецкая, 2010).

Исследованиями Barrio M.B. et al. (2003) установлено, что опсонофагоци-тарная реакция (ОФР) нейтрофилов играет ведущую роль в развитии патогенеза и определяет длительность лечения мастита с участием St. aureus. В связи с этим проведено исследование по изучению влияния гомеопатических лекарственных веществ на фагоцитарную активность нейтрофилов.

При изучении влияния гомеопатических препаратов на количественные и качественные показатели ОФР нейтрофилов установлен разнонаправленный эффект в зависимости от степени разведения и вида препарата (табл. 3).

Таблица 3 - Показатели ОФР нейтрофилов коров после контакта с гомеопатическими лекарственными веществами, %

Препарат и степень его разведения Показатель ОФР нейтрофилов, %

ПСК • ФИ ФЧ ФЁ ФА

Фитолахка С12 107 66 57,6 3,8 8,6

Белладонна С12 -2 -0,8 -1,2 50 56,5

Сульфур С200 12,2 -2,8 -3,2 34,6 30,7

Апис С12 117,6 62,5 53,8 5,6 10,9

Кониум СЗО -16,4 -2 -4 22,7 30,7

Силиция СЗО 93 51 48 30 52

Тканевой нозод Г>6 110 93 62 58 63

Мастигом 530,1 340,6 489,3 560,3 641,8

Изучение качественных характеристик опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов (ФИ, ФЧ) выявило отсутствие прямой зависимости от степени разведения. Рост показателей ФИ, ФЧ после контакта с гомеопатическими лекарственными средствами в разведениях от С12 до С200 составил от 51 до 66% и от 48 до 57,6%. Так, выраженный рост показателя (ФИ нейтрофилов) наблюдали при воздействии тканевого нозода Д6 - на 93%, Фитолакки С12 - на 66%, Апис С12 - на 62,5% и Силиция СЗО - на 51%. Также отмечен рост показателя ФЧ при действии тканевого нозода Д6 - на 62%, Фитолакки С12 - на 57,6%, Аписа С12 - на 53,8%, Силиции СЗО - на 48%, относительно результатов в контрольных группах.

При изучении влияния гомеопатических препаратов на функциональную активность нейтрофилов установлена более выраженная активация их количественных характеристик. Так, с тканевым нозодом Д6 рост ФЁ нейтрофилов составил 58%, Белладонной (С12) - 50, Сульфуром (С200) - 34,6, Силицией (СЗО) - 30, Кониумом (СЗО) - 22,7% соответственно.

Максимальный рост показателя ПСК выявлен после контакта с гомеопатическими лекарственными средствами в разведениях от С12 до С200 составил от 12,2 до 117,6%. Так, с Силицией СЗО показатель ПСК возрос - на 93%, Фито-лаккой (С 12) - на 107%, тканевым нозодом (Д6) - на 110%, Аписом (С12) - на 117,6%, относительно результатов в контрольных группах. В то время как у Белладонны С12 и Кониума СЗО отмечено незначительное снижение показателя (ПСК) на 2 и 16,4%.

Изучение влияния гомеопатических препаратов на ОФР нейтрофилов крови показало, что максимальную активацию наблюдали при контакте нейтрофилов с комплексным препаратом Мастигом, характеризующимся ростом показателей ФА - на 641,8%, ФЁ - на 560,3, ПСК - на 530, ФЧ - на 489,3, ФИ - на 340,6% соответственно.

При определении компонентов лекарственного препарата для терапии субклинической, серозной и катаральной форм маститов коров были выбраны лекарственные вещества, применяемые в гомеопатической практике лечения, которые соответствуют клиническим признакам проявления заболевания, а также

11

обладающие высокой стимулирующей активностью на показатели клеточного иммунитета, подтверждённые в ОФР с нейтрофилами крупного рогатого скота. Препарат содержит - Апис С12, Сульфур С200, Кониум СЗО, Фитолакку С12, Силицию СЗО, Белладонну С12, тканевый нозод Б6.

2.2.3 Изучение острой токсичности препарата Мастигом, его месгно-раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки

лабораторных животных

Исследование острой токсичности препарата Мастигом проводили на лабораторных животных. Препарат вводили внутрижелудочно белым мышам (25 мл/кг) и крысам (15 мл/кг на 1 кг живой массы), внутрибрюшинно мышам (50 мл/кг) и крысам (25 мл/кг на 1 кг живой массы). Исследование острой токсичности препарата Мастигом на белых мышах и крысах позволило установить, что введение препарата внутрижелудочно и внутрибрюшинно не вызывает изменение клинического состояния и гибель лабораторных животных.

Изучение раздражающего действия лабораторного образца Мастигом на слизистые оболочки проводили на клинически здоровых кроликах. Препарат вводили в конъюнктивальный мешок глаза в количестве 1-2 капли. Учет реакции проводили через 15 минут, 3, 8 и 24 часа от начала проведения опыта. Признаков конъюнктивита не наблюдали, что свидетельствовало об отсутствии раздражающего действия препарата Мастигом при нанесении на слизистые оболочки.

Исследование местно-раздражающего действия препарата Мастигом проводили методом эпикутанных аппликаций на боковой поверхности туловища клинически здоровых кроликов, морских свинок. На основании проведенных исследований установлено отсутствие местно-раздражающего действия на месте аппликаций препарата Мастигом через 12,24 и 48 часов.

2.2.4 Оценка раздражающего действия препарата Мастигом

на молочную железу коров

Проведены исследования раздражающего действия препарата Мастигом на пяти клинически здоровых коровах. Препарат вводили интрацистернально в левые доли вымени в дозе 10 мл, правые доли служили контролем (вводили 0,85% водный раствор №С1). После введения препарата Мастигом на 6, 12, 24 и 48 час учитывали состояние вымени, а также брали пробы молока для подсчета количества соматических клеток. При исследовании проб молока на содержание соматических клеток отмечено незначительное их повышение (до 456,7+21,1 тыс./мл) спустя 6 часов после введения препарата, а через 12 часов после введения препарата Мастигом количество соматических клеток снизилось (до 236,8+17,6 тыс./мл) и находилось в пределах физиологической нормы (табл. 4).

Таблица 4 - Содержание соматических клеток в молоке здоровых коров после интрацистернального введения препарата Мастигом, (тыс.кл./мл /%)

Группа Срок исследования, час

до введения 6 12 24 48

контрольная (0,85% ЛВД 498,5+23,7 510,2+11,7/ 2,3 417,5+21,3/ -16,2 467,5+10,4/ -6,2 485,1+16,5/ -2,7

опытная (Мастигом) 423,6+11,7* 456,7+21,1*/ 7,8 236,8+17,6**/ -44,1 282,1+10,7*/ -33,4 398,7+12,9*/ -5,9

Примечание: * Р<0,01, ** Р<0,05

Таким образом, Мастигом не оказывает раздражающего действия на молочную железу коров и может быть рекомендован для интрацистернального введения.

2.2.5 Терапевтическая эффективность препарата Мастигом при лечении мастита коров

Оптимальную терапевтическую дозу препарата Мастигом при разных формах течения мастита коров определяли при интрацистернальном введении от 1 до 15 мл 1 раз в сутки. Результаты исследований показали, что 10 мл является наиболее эффективной дозой препарата, оказывающего выраженный терапевтический эффект при субклинической, серозной и катаральной формах маститов коров при наименьшем сроке лечения 2,7+0,2; 3,2+0,3 и 3,7+0,3 дней соответственно (табл. 5).

Таблица 5 - Определение эффективной дозы препарата Мастигом

Доза, мл Результаты лечения мастита

субклинический серозный катаральный

выздоровело срок ле- выздоровело срок лече- выздоровело срок лече-

гол % чения, дн. гол. % ния, дн. гол. % ния, дн.

1 5 100 4,3+0,3 5 100 5,4+0,3 5 100 5,1+0,3

5 5 100 3,0+0,2 5 100 3,4+0,1 5 100 4,5+0,2

10 5 100 2,7+0,2 5 100 3,2+0,3 5 100 3,7+0,3

15 5 100 2,9+0,2 5 100 3,5+0,2 5 100 4,0+0,2

При терапии субклинического мастита коров препаратом Мастигом у 45 (90%) голов через 10-12 часов наблюдали уплотнение, отёчность, увеличение в объёме, повышенную чувствительность и гиперемию вымени. Температура тела находилась в пределах физиологической нормы, надвыменные лимфатические узлы при пальпации не были увеличены. Исчезновение клинической реак-

ции на введение препарата регистрировали на второй день у 43 (95,5%), на третий день — у 2 голов (4,5%).

В процессе лечения субклинического, серозного и катарального маститов в пробах секрета вымени от коров опытных и контрольных групп отмечалось снижение содержания соматических клеток и бактериальных клеток.

При лечении коров, больных катаральной формой мастита препаратом Маститом у 13 (65%) голов через 12-14 часов наблюдали обострение клинического проявления мастита в виде повышенной чувствительности, увеличения лимфатических узлов, густого хлопьевидного молочного секрета, с увеличением количества соматических клеток на 35,6% относительно показателя до начала лечения. Полное исчезновение этих признаков регистрировали на второй день у 7 голов (53,8%), на третий день - у 4 (30,8%) на четвертый день - у 2 (15,4%). Аналогичная реакция была выявлена при терапии катаральной формы мастита коров и соответствует реакции обострения, которую отмечали при лечении гомеопатическими препаратами.

В процессе лечения в пробах секрета вымени от коров опытных и контрольных групп отмечалось снижение содержания соматических клеток при субклиническом, серозном и катаральном маститах. Также отмечено снижение уровня бактериальных клеток (табл. 6).

Таблица 6 - Содержание в молоке соматических и бактериальных клеток при лечении мастита коров

Срок исследования Вид мастита

субклинический серозный катаральный

контрольная группа опытная группа контрольная группа опытная группа контрольная группа опытная группа

количество соматических клеток, тыс./мл

до лечения 1368,9+ 28,3 1098,9+ 26,8* 988,9+ 27,6 904,8+ 22,8* 991,6+ 29,1 1073,6+ 23,6*

после лечения 339,6± 10,7 273,1+ 9,8* 367,8+ 11,3 281,9+ 9,7* 420+ 12,7 286,5± 10,3*

изменение показателя, тыс. кл. 1029,3 825,8 621,1 622,9 571,6 787,1

% -75,2 -75,1 -62,8 -68,8 -57,6 -73,3

количество бакте риальных клеток, КОЕ/мл

до лечения 12000,0 + 137,8 11280,0 + 114,7* 9870,0 ± 156,1 10320,0 ± 137,3** 10637,3 ± 178,5 14689,5 + 124,8*

после лечения 473,6 + 17,4 423,8 + 19,8** 487,9 ± 18,3 491,4 + 12,9* 379,6,+ 11,4 415,8 ±11,7*

изменение показателя, КОЕ/мл 11526,4 10856,2 9382,1 9828,6 10257,7 14273,7

% -96 -96,2 -95,1 -95,2 -96,4 -97,2

Примечание: *Р<0,01, **Р<0,05

Учет среднесуточного удоя показал, что продуктивность здоровых коров составила в период опыта 18,5±0,1 л в сутки, в то время как больных субклиническим, серозным, катаральным маститом - 12,0±0,2, 10,0±0,4 и 7,0±0,1 л, что ниже на 6,5 (35%), 8,5 (46%) и 11,5 л (62,2%) соответственно.

Средняя продолжительность лечения субклинического мастита у коров контрольных групп препаратом Неотил составила 4,5 ± 0,3 суток. При этом молоко от этих коров утилизировалось в течение 3 суток, согласно инструкции по применению препарата. Таким образом, общий срок выбраковки молока от больных субклиническим маститом контрольных коров составил 7,5 суток, в то время как при терапии этого же мастита препаратом Мастигом средний срок лечения составил 2,7 суток.

При серозной форме мастита средний срок лечения препаратами Неотил составил 6,2 ± 0,6, а Мастигом - 3,2 ± 0,1 суток, при этом срок выбраковки молока - 9,2 суток в контрольной и 3,2 суток в опытной группах.

В результате терапии катарального мастита средний срок лечения препаратами Неотил и Мастигом составил 7,1 ± 0,4 и 3,7 ± 0,2 суток соответственно, при этом средний срок браковки молока у коров контрольной составил 10,1 суток, а опытной - 3,7 суток.

2.2.6 Экономическая оценка применения гомеопатического препарата Мастигом при лечении мастита коров

При лечении субклинического мастита коров препаратом Неотил отмечен убыток от проводимых ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат (- 0,2 руб.), который складывается из затрат на ветеринарные мероприятия (7543 руб.), экономического ущерба от снижения продуктивности (47356,2 руб.), ущерба от браковки молока (39984 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (5585 руб.), в то время как при терапии этого же вида мастита препаратом Мастигом экономическая эффективность проводимых ветеринарных мероприятий составила (10,9 руб.), которая включала затраты на ветеринарные мероприятия (2759,5 руб.), экономический ущерб от снижения продуктивности (12285 руб.), ущерб от браковки молока (22680 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (33075 руб.).

В результате лечения серозного мастита коров препаратом Неотил (табл. 7) отмечен убыток при проведении ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат (-23,7 руб.), который складывается из затрат на ветеринарные мероприятия (19407,5 руб.), экономического ущерба от снижения продуктивности (76876,8 руб.), браковки молока (86436 руб.), расчета ущерба от недополучения готовой продукции (молока) от выбракованных коров (761656 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (- 440133 руб.), в то время как при терапии этого же мастита препаратом Мастигом экономическая эффективность проводимых ветеринарных мероприятий составила (5,8 руб.), включающий затраты на ветеринарные мероприятия (5694 руб.), экономический ущерб от снижения продуктивности (26608 руб.), ущерб от браковки молока (40936 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (380944 руб.).

15

Таблица 7 - Экономическая эффективность лечения субклинического, серозного и катарального маститов у коров препаратами Неотил и Мастигом

Показатель Форма мастита

субклинический серозный катаральный

контроль опыт контроль опыт контроль опыт

Число коров в группе, гол. 50 ■ 50 90 90 20 20

Вынужденный убой больных коров, гол. - - 4 - 2 -

Закупочная цена 1 кг молока, руб. 14

Среднесуточный удой 1 здоровой коровы, л 18,5

Среднесуточный удой 1 больной коровы, л 12 10 7

Средний срок лечения 1 коровы, сут. 4,5+0,3 2,7+0,1 6,2+0,6 3,2+0,1 7,1+0,4 3,7+0,2

Средний срок выбраковки молока, сут. 7,5±0,4 2,7+0,1 9,2+0,3 3,2±0,2 10,1 ±0,9 3,7+0,1

Расход препарата на 1 введение, мл 10

Стоимость 1 дозы препарата, руб. 21 10 21 10 21 10

па курс лечения по группе, руб. 7543 2759,5 19407,5 5694 5617,6 1411,8

Ущерб, руб. от снижения продуктивности 47356,2 12285 76876,8 26608 24560,9 6734

от браковки молока, руб. 39984 22680 86436 40936 18508 7252

от выбраковки коров, руб. - - 761656 - 425068 -

Предотвращенный экономический ущерб, руб. 5585 33075 -440133 380944 -324713,6 35224

Экономический эффект, проводимых ветеринарных мероприятий, руб. -1958 33016 -459540,5 33016 -330407,8 33812

Экономическая эффективность проводимых ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат, руб. -0,2 10,9 -23,7 5,8 -58 23,9

При лечении катарального мастита коров препаратом Неотил выявлен убыток (-58 руб.) экономической эффективности ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат, который складывался из затрат на ветеринарные мероприятия (5617,6 руб.), экономического ущерба от снижения продуктивности (24560,9 руб.), браковки молока (18508 руб.), расчета ущерба от недополучения готовой продукции (молока) от выбракованных коров (425068 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (-324713,6 руб.), в то время как при терапии этого же мастита препаратом Мастигом, экономическая эффективность проводимых ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат составила (22,4 руб.), который слагается из затрат на ветеринарные мероприятия (1411,8 руб.), экономического ущерба от снижения продуктивности (6734 руб.) ущерба от браковки молока (7252 руб.) и предотвращенного экономического ущерба (35224 руб.).

3 ВЫВОДЫ

1. При субклинической форме мастита коров из 70% проб молока выделили микроорганизмы родов Streptococcus (Str. disgalactiae, Str. agalactiae, Str. pyogenes); в 21%, - Staphylococcus (St. aureus, St. epidermidis) и в 9% - E. coli, при серозной форме - 66,1, 30 и 3,9% и катаральной форме - 55, 27,5 и 17,5% соответственно. Антибиотикочувствительность выделенной микрофлоры до лечения субклинического, серозного, катарального маститов коров составила к не-омицину от 47,5 до 56,6%, к эритромицину 42,2%, при этом резистентность к нетилмицину отмечали от 58 до 75%, к ампиклоксу 69,4%, к тобромицину от 58 до 87,5%, к тетрациклину от 77,5 до 81,6%, к полимиксину от 85 до 87,2%, к ципрофлоксацину от 12 до 92,2%, к энрофлоксацину от 87,2 до 95% исследованных микроорганизмов.

2. Установлено влияние разных веществ в сверхнизких разведениях на активизацию различных показателей нейтрофилов коров in vitro (ФА, ФИ, ФЧ, ФЁ). Так, выраженный рост качественных (ФИ, ФЧ) характеристик ОФР нейтрофилов наблюдали при воздействии тканевого нозода D6 - на 62-93%, Фитолакки С12 - на 57,6-66%, Аписа С12 - на 53,8-62,5%, Силиции СЗО - на 48-51%, также отмечено увеличение количественных показателей (ФА, ФЁ) у Белладонны С12 - на 50-56,5%, Сульфура С200 на - 30,7-34,6%, Кониума СЗО - на 22,7-30,7%, относительно результатов в контрольных группах.

3. Препарат Мастигом содержит компоненты - Апис С12, Сульфур С200, Кониум СЗО, Фитолакка С12, Силиция СЗО, Белладонна С12, тканевый нозод D6, которые максимально повышают фагоцитарную активность нейтрофилов коров in vitro. Установлено наибольшее влияние препарата Мастигом на рост показателей ОФР нейтрофилов в сравнении с действием отдельно взятых его компонентов in vitro.

4. Изучение параметров острой токсичности препарата Мастигом, а также аллергизирующего, раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки позволяет отнести его к IV классу опасности.

5. При терапии субклинического, серозного и катарального маститов коров гомеопатическим препаратом Мастигом средний срок лечения животных составил 2,7+0,1, 3,2+0,1, 3,7+0,2 суток, что на 66,6%, 93,7%, 91,7% меньше по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе.

6. Экономический эффект ветеринарных мероприятий на 1 руб. затрат при терапии субклинического, серозного и катарального маститов коров препаратом Мастигом составил 10,9; 5,8; 23,9 рублей соответственно.

4 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для терапии субклинического, серозного, катарального маститов коров рекомендуем применять гомеопатический препарат Мастигом интрацистер-нально в дозе 10 мл 1 раз в сутки.

По результатам исследований разработано методическое пособие «Рекомендации по диагностике и лечению мастита коров с применением препаратов в сверхмалых дозах», утвержденные на заседании подсекции «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 1 от 07.02.2012 г.).

Результаты исследований используются в учебном процессе при подготовке студентов по специальности «Ветеринария» и научно-исследовательской работе на факультетах ветеринарной медицины Иркутского ГСХА, Омского ГАУ им. П.А. Столыпина, Новосибирского ГАУ.

5 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Филатова, Е.В. Сравнительная оценка терапевтической и экономической эффективности мастита коров гомеопатическим и антибактериальным препаратами / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Вестник НГАУ. -2011. - № 4. - С. 97-100.

2. Филатова, Е.В. Изменение антибиотикочувствительности выделенной микрофлоры при терапии маститов у коров / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Вестник НГАУ. - 2012. - № 4. - С. 78-80.

3. Филатова, Е.В. Применение лекарственных веществ в сверхнизких концентрациях при лечении мастита коров / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2013. — № 4. - С. 46-51.

4. Филатова, Е.В. Сравнительная эффективность лечения мастита коров антибактериальным и гомеопатическим препаратом / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль, H.A. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы 2-й Сиб. ветеринар, конгр. - Новосибирск, 2010. - С. 107-108.

5. Филатова, Е.В. Влияние различных методов лечения на эффективность диагностики субклинического мастита коров / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: материалы III съезда фармакологов и токсикологов России. — СПб., 2011.-С. 467-469.

6. Филатова, E.B. Сравнительная эффективность лечения субклинического мастита коров препаратами различных фармакологических групп / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы X Сибирской конф., посвящ. 75-летию НГАУ. - Новосибирск, 2011. -С. 102-103.

7. Филатова, Е.В. Влияние веществ в сверхнизких концентрациях на клеточный иммунитет / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы XI Сибирской конф., НГАУ. - Новосибирск,

2012.-С. 175-176.

8. Филатова, Е.В. Оценка влияния гомеопатических препаратов на опсо-нофагоцитарную активность нейтрофилов / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых ученых: тр. V междунар. науч.-практ. конф. молодых учёных, посвящ. 10-летаю её проведения. - Новосибирск, 2012. - С. 144-146.

9. Филатова, Е.В. Изменение антибиотикочувствительности выделенной микрофлоры при терапии субклинического, серозного и катарального маститов у коров / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Инновационные решения актуальных проблем в АПК: сб. материалов Всерос. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. - Екатеринбург, 2013. - С. 199-203.

10. Филатова, Е.В. Опыт применения гомеопатического препарата Маститом при лечении мастита коров / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы XI Сибирской конф., НГАУ. -Новосибирск, 2013. - С. 62-64.

11. Филатова, Е.В. Перспективы применения гомеопатических препаратов в ветеринарии / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль, H.A. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы XI Сибирской конф., НГАУ. -Новосибирск, 2013. - С. 72-73.

12. Филатова, Е.В. Влияние препаратов в сверхнизких концентрациях на ОФР нейтрофилов крупного рогатого скота / Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Молодежь в аграрной науке и образовании - инновационный потенциал будущего: материалы Всерос. науч.-практ. конф. - Новосибирск, 2013. -С. 142-143.

Подписано в печать 18.07.2014 г. Формат 60 * 84 '/и. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 58._

Отпечатано в ГНУ СибНСХБ Россельхозакадемии 630501, Новосибирская обл., пос. Краснообск