Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование способов повышения воспроизводительных качеств свиней и овец
ВАК РФ 06.02.07, Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
Автореферат диссертации по теме "Совершенствование способов повышения воспроизводительных качеств свиней и овец"
На правах рукописи
ЕПИШИНА ичЬЯНА МИХАЙЛОВНА
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПОСОБОВ ПОВЫШЕНИЯ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫХ КАЧЕСТВ СВИНЕЙ И ОВЕЦ
06.02.07 - Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
9 ЦЮН 2011
Москва- 2011
4849472
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государствен!! академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина
Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук,
член-корреспондент РАСХН, профессор Кабанов Виктор Данилович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор
Решетникова Нина Михайловна доктор биологических наук, профессор Скрипниченко Георгий Григорьевич доктор биологических наук, профессор Абилов Ахмедага Имаш оглы
Ведущая организация (предприятие): ГОУ ВПО «Мордовски государственный университет имени Н.П.Огарева».
Защита диссертации состоится « /$» июня 2011 г в Ю00 часов н заседании диссертационного совета Д 220.042.03 при ФГОУ ВП ^(Московская государственная академия ветеринарной медицины биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москв ул. Академика Скрябина, д 23.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВП «Московская государственная академия ветеринарной медицин и биотехнологии имени К.И. Скрябина»
Автореферат разослан « мая 2011г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Н.Н. Шумилина
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Среди фундаментальных проблем зоотехнической науки одной из наиболее актуальных является повышение эффективности воспроизводства стада путем максимального использования высокоценных племенных производителей, что имеет большое значение для обеспечения дальнейшего прогресса в животноводстве. Важное направление улучшения репродукции - применение метода искусственного осеменения. Одним из определяющих факторов результативности искусственного осеменения является совершенствование методов хранения спермы животных в охлажденном или глубокозамороженном состоянии.
При технологической обработке спермы, разбавлении ее синтетическими средами и хранении в охлажденном или глубокозамороженном состоянии происходят значительные структурные и биологические повреждения сперматозоидов, которые приводят к нарушению проницаемости плазматических мембран и выхода из сперматозоидов ряда ферментов и других компонентов клеточного метаболизма, что значительно снижает фертильность спермы (Курбатов А.Д., Платов Е.М., и др., 1988; Ерохин A.C., 1995; 1996; Шапиев И.Ш., 1998; Нарижный А.Г. и др. 1995; 2005). В качестве нашей рабочей гипотезы служило предположение, что степень выхода ферментов из сперматозоидов зависит от вида животных, локализации фермента и прочности связывания его со структурами сперматозоида, состава используемой среды, режимов хранения и др. Поэтому выяснение состояния аминокислотно-белкового, углеводного, липидного и липопротеидного обмена, системы ферментативной антиоксидантной защиты, развитие процессов пероксидного окисления липидов в процессе хранения разбавленной спермы, позволит наметить новые пути повышения биологической полноценности сперматозоидов при краткосрочном и долговременном хранении спермопродукции. Решению этой важной проблемы могут послужить сравнительные исследования межвидовых особенностей сперматозоидов хряков и баранов, по-разному реагирующих на термодинамические процессы, а, следовательно, на формирование защитных реакций и адаптационных свойств при хранении вне организма.
В этой связи представляется перспективным разработать по результатам биохимических исследований более эффективные синтетические среды для краткосрочного и долговременного хранения спермы хряков и баранов с применением антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов.
Приобретает большое значение применение физических способов обработки спермы, в частности, с использованием низкоинтенсивного лазерного излучения, и улучшение технологии оттаивания спермы баранов.
Актуальной и важной задачей является совершенствование методов повышения воспроизводительной способности свиноматок. В условиях промышленных технологий нередко отмечается замедление полового созревания свинок и задержка наступления эструса у свиноматок после очередного отъема поросят. Результативность осеменения и многоплодие маток в данных условиях тоже понижены.
Кроме того, в летнее время у большинства свиноматок наступает депрессия половой функции, что проявляется длительным анэструсом и снижением результативности осеменения животных. Это приводит к нарушению ритмичности циклов производства продукции в крупных свиноводческих комплексах. В этой связи, необходимы дальнейшие исследования по совершенствованию способов стимуляции эструса у основных свиноматок и ремонтных свинок.
Цель исследований: совершенствование методов краткосрочного и длительного хранения спермы хряков и баранов, повышение эффективности стимуляции эструса у свиноматок и разработка на этой основе результативных способов улучшения репродуктивных качеств свиней и овец.
Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:
- изучить видовые особенности изменения активности ферментов аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы (ACT, AJIT), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержания общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина и системы ферментативной антиоксидантной защиты - супероксид-дисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР) и каталазы в семенной плазме нативной спермы хряков и баранов, а также влияние хранения разбавленной спермы на выход указанных высокомолекулярных биохимических соединений из сперматозоидов в семенную плазму;
- определить концентрацию продуктов пероксидного окисления липидов в нативной, а затем в разбавленной и сохраняемой при температуре 16°С сперме сравниваемых видов животных, и в оттаянной после глубокого замораживания до -19б°С сперме баранов;
- осуществить поиск и изучить влияние на сперму хряков и баранов новых синтетических и натуральных антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов;
- разработать синтетические среды для долговременного и
краткосрочного хранения спермы хряков, сохраняемой при температуре 16-17°С;
- разработать более эффективные криозащитные среды для сперматозоидов баранов при глубоком замораживании спермы;
- провести сравнительное исследование криопротективного влияния низкоинтенсивного излучения гелий-неонового и арсенид-галлиевого лазеров на биологическую полноценность сперматозоидов хряков и баранов;
- разработать технологию оттаивания спермы баранов в модифицированных электрооттаивателе ОГСБ-2М и гидрооттаивателе ОГСБВ;
- выяснить эффективность стимуляции эструса у основных свиноматок и ремонтных свинок с помощью однократной электропунктуры биологически активных точек с применением аппарата «ДЭНАС», или однократной внутримышечной инъекции антиоксиданта амбиола.
Научная новизна исследований. В проведенных впервые сравнительных исследованиях спермы хряков и баранов выявлены видовые особенности изменения метаболизма и защитных свойств гамет, сохраняемых in vitro при различных температурных режимах хранения во времени, выражающиеся в выходе окислительных и гидролитических ферментов и других компонентов клеточного метаболизма из сперматозоидов в семенную плазму, инициацией ПОЛ, и ингибированием ферментативной антиоксидантной активности (АОА).
Выявлено, что активность ферментов ACT, AJ1T, ЩФ, СОД, ГПО, ГР и содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина в семенной плазме нативной спермы баранов выше, чем хряков, активность ЛДГ выше у хряков, чем у баранов. Хранение разбавленной спермы индуцирует выход из сперматозоидов в семенную плазму изученных ферментов и других компонентов клеточного метаболизма и усиливает пероксидное окисление липидов преимущественно в сперме баранов. Замораживание-оттаивание спермы баранов приводит к более глубоким изменениям метаболизма сперматозоидов.
На основе полученных результатов биохимических исследований разработаны усовершенствованные синтетические среды для хранения спермы хряков, охлажденной до температуры 16-17°С, и спермы бараков, сохраняемой при температуре -196°С с применением антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов.
В практику свиноводства внедрены новые синтетические среды для долговременного (до 5-ти суток) и краткосрочного хранения
спермы хряков при температуре 16-17°С (патент № 2370033).
В практику овцеводства внедрены новые усовершенствованные синтетические среды для глубокого замораживания спермы баранов (патенты: № 2048796, № 2083183, № 2323702, № 2198622) и на основании изучения оптимального режима оттаивания спермы баранов внедрены модифицированные электрооттаиватель ОГСВ-2М и гидрооттаиватель ОГСБВ.
Разработан новый способ повышения оплодотворяющей способности спермы баранов после глубокого ее замораживания с применением препарата ФЛПГ (патент № 2297197).
Выявлены видовые различия воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на сперматозоиды хряков и баранов. При этом установлено, что обработка спермы сравниваемых видов животных оказывает защитное действие на биологическую полноценность спермы баранов и не оказывает влияния на сперму хряков, а действие арсенид-галлиевого лазера более эффективно по сравнению с гелий-неоновым лазером.
Разработан и внедрен в практику свиноводства способ стимуляции эструса у свиней, однократной электропунктурой биологически активных точек, с использованием нового электростимулятора «ДЭНАС» или однократной внутримышечной инъекции синтетического антиоксиданта амбиола.
Теоретическая и практическая значимость.
Полученные результаты на основе биохимических исследований по изучению анткоксидантного статуса гамет с избыточным образованием свободных радикалов и конечных метаболитов типа ТБК (тиобарбитуровая кислота) - реагирующих продуктов положены в основу разработки новых, более эффективных способов усовершенствования синтетических сред, повышающих крио резистентность, биологическую полноценность и фертильность спермы, которые могут быть применены при совершенствовании методов разбавления и хранения спермы других видов животных. Экспериментальное использование полученных научных разработок будет способствовать дальнейшему развитию теории биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных на молекулярном уровне с учетом новых достижений в биохимии и генетике.
Усовершенствованные синтетические среды для долговременного и краткосрочного хранения спермы хряков при температуре 16-17°С, и глубокого замораживания спермы баранов, сохраняемой при температуре -196°С, способствуют повышению биологической полноценности и оплодотворяющей способности спермы.
Применение низкоинтенсивного лазерного излучения позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец охлажденной спермой.
Улучшенная технология оттаивания замороженной спермы баранов в электро- и гидроотгаивателе оказывает положительное влияние на качество и фертильность спермы.
Однократная стимуляция половых функций свиноматок и ремонтных свинок электропунктурным методом с применением аппарата «ДЭНАС» или внутримышечной инъекцией антиоксиданта амбиола ускоряет наступление эструса и повышает результативность искусственного осеменения.
Широкое использование в зоотехнической практике выполненных в диссертации научных разработок и предложений производству будет способствовать решению важной научно-хозяйственной проблемы повышения биологической полноценности и оплодотворяющей способности спермы хряков и баранов, улучшению воспроизводительных качеств свиней и овец, сохранения и рационального использования генофонда племенных животных, повышению эффективности свиноводства и овцеводства.
Реализация результатов исследований. Материалы, полученные в данной работе, использованы при разработке научно-методических документов:
1. Наставление по применению ГЖУК-трис-буферной среды для разбавления, замораживания, хранения и использования спермы баранов-производителей. - Разработано во ВНИИплем (1992) в соответствии с решением Госагропрома, одобрено и рекомендовано в практику Ветеринарным фармакологическим советом ГУВ Госагропром.
2. Монография «Повышение репродуктивных качеств свиней и овец».- Москва 2009 г.
3. Национальная технология искусственного осеменения овец -Одобрена и рекомендована в практику Ученым Советом ВНИИплем (2010)
4. Синтетические среды для длительного и краткосрочного хранения спермы хряков в охлажденном состоянии внедрены в хозяйствах Владимирской области и республики Мордовия.
5. Усовершенствованные среды для глубокого замораживания спермы баранов применяются в хозяйствах Саратовской области, республики Калмыкия, Ставропольского края и Горного Алтая.
6. Оттаиватель ОГСБ-2М для спермы баранов, замороженной в виде гранул, широко применяется в хозяйствах Саратовской области и республики Калмыкия.
7. Стимуляция эструса у свиней электропунктурным методом
аппаратом «ДЭНАС» применяется в хозяйствах Владимирской области и республики Мордовия.
Результаты полученных разработок подтверждены актами производственных испытаний и внедрений.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: - координационных совещаниях по воспроизводству овец на ВДНХ СССР и ВВЦ (1990-1995 г.г.); -совещании зооветспециалистов Хакасского племобъединения (1994); -конференции «Научно-производственные аспекты развития отрасли свиноводства», Бугульма (2000); - 5-ой Европейской конференции по биологии размножения домашних животных, Вена (2001); Международной научно-практической конференции « К 100-летию со дня рождения академика В.К.Милованова и профессора И.И.Соколовской», Дубровицы (2004); - Международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», Дубровицы (2004); Международной научно-практической конференции по биологии размножения животных, ВИЖ, Дубровицы (2007); - Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных», ВИЖ, Дубровицы (2008); - Международной научно-практической конференции «Инновационные технологии в свиноводстве», Геленджик (2008); - межкафедральном заседании ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина» (2010).
Основные положения выносимые на защиту:
результаты биохимических исследований видовых особенностей сперматозоидов хряков и баранов по активности ключевых ферментов и других компонентов клеточного метаболизма, изучение антиоксидантного статуса гамет при хранении спермопродукции;
- разработка и практическое применение усовершенствованных сред для краткосрочного и длительного хранения спермы хряков в охлажденном состоянии и при глубоком замораживании спермы баранов;
- физические способы повышения биологической полноценности спермы хряков и баранов, сохраняемой в охлажденном до плюсовых температур состоянии, с применением низкоинтенсивного излучения арсенид-галлиевого и галий-неонового лазеров, и установление оптимальной технологии оттаивания глубокозомороженной спермы баранов в злектро - и гидрооттаивателях ОГСБ-2М и ОГСБВ;
- новые способы стимуляции половой доминанты у свиноматок и ремонтных свинок с применением однократной электропунктуры
аппаратом «ДЭНАС» или однократного внутримышечного введения синтетического водорастворимого антиоксиданта амбиола.
Публикации результатов исследований. По теме диссертации получено 6 патентов на изобретение; опубликованы: - монография «Повышение репродуктивных качеств свиней и овец» (2009); - статьи в журналах «Зоотехния», «Ветеринария», «Свиноводство», «Овцы, козы, шерстяное дело», «Сельскохозяйственная биология», «Доклады РАСХН», «Ветеринарная патология», «Ветеринария и кормление», в тематических сборниках Международных научно-практических конференций. Рекомендации по технологии замораживания спермы баранов включены в «Наставление по применению ГЖУК-трис-буферной среды для разбавления, замораживания, хранения и использования спермы баранов производителей» (1992), и «Национальная технология искусственного осеменения овец» (2010). Всего по теме диссертации опубликовано 60 работ, из которых 16 в центральных рецензируемых журналах ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 293 стр. машинописного текста и включает 78 таблиц и 30 иллюстраций. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Список литературы включает 467 источников, в том числе 166 на иностранных языках.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Научно - исследовательская работа проводилась в период 19922011 гг. Объектом исследований служила сперма хряков и баранов -животных эволюционно отдаленных видов, имеющих существенные различия в биологических свойствах спермопродукции, изучение которых на субклеточном уровне будет способствовать разработке эффективных способов повышения живучести сперматозоидов in vitro и их фертильности. Научно-производственные опыты по искусственному осеменению свиней и овец проведены на базе хозяйств Московской, Ярославской, Белгородской, Ростовской, Владимирской областей, Мордовской и Хакасской республик. В экспериментах было использовано около 40 тысяч эякулятов спермы, осеменено 2860 свиноматок и 2563 овцематки. Работа проведена согласно прилагаемой схеме исследований (рис.1).
Для исследования семенной плазмы неразбавленной спермы хряков и баранов, нативную сперму с подвижностью 80 - 90 %
Разработка способов повышения воспроизводительных качеств свиней и овец
Изучение видовых особенностей изменения метаболизма гамет хряков и баранов сохраняемых in vitro
Активность ферментов в семенной плазме: ACT, АЛТ, ЛДГ, ЩФ (п=876)
Содержание в семенной плазме: общего белка, альбумина, мочевины, холестерина, триглицеридов (п=--138б)
Содержание продуктов ПОЛ в сперме: ДК, КД (п=46), МДА (п=1020)
Активность антиоксидантных ферментов в семенной плазме: каталазы, СОД, ГПО, ГР (п=960)
Повышение биологической полноценности спермы хряков и баранов
Биологические способы воздействия на сперму
С применением анти-оксидантов (п=4854)
С применением криопро-текторов (п=1272)
Стимуляция эструса у основных свиноматок и ремонтных свинок
Физические способы воздействия на сперму
С приме- С применени-
нением ем низкоин-
БАВ тенсивного
(п-2445) лазерного
излучения
(п=2466)
Биологические способы стимуляции
Физические способы стимуляции эструса
Совершенствование технологии оттаивания спермы баранов (п=1152)
С применением антиоксиданта (п=663)
С применением электропунктуры БАТ (п=1227)
Повышение результативности искусственного осеменения свиней и овец (осеменено: 2860 свиноматок, 2563 овцематки)
Рисунок 1- Общая схема исследований
центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 минут и анализировали семенную плазму. Затем сперму хряков разбавляли (глюкозо-хелато-цитратно-сульфатной) ГХЦС-средой, сперму баранов - (глюкозо-цитратно-желточной) ГЦЖ средой в два раза и сохраняли в течение 120 часов при температуре 16 С. Через определенные интервалы времени хранения (24, 48, 72 и 120 часов) образцы центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 минут и анализировали семенную плазму разбавленной спермы.
Активность ферментов ACT, АЛТ, ЛДГ, ЩФ и содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина определяли по общепринятым методикам против контрольного стандарта на биохимическом анализаторе «ANALYSER/INDUSTRIES» с использованием диагностических наборов реактивов производства «Biocon Diagnostik Cmb H.» (Германия). Активность антиоксидантных ферментов определяли с использованием диагностических наборов реактивов производства «Randox Laboratorirs Ltd» (Англия). Активность каталазы определяли колориметрическим методом по методике Королюк М.А. с соавт. (1988).
Определение концентрации диеновых (кетодиеновых) конъюгатов (ДК), (КД) полиненасыщенных жирных кислот и малонового диальдегида (МДА) в сперме проводили по методу Архипова A.B. (2004). Для определения оптической плотности использовали спектрофотометр Novaspek (Англия).
Исследование антиоксидантной активности препарата ИХФГАН-3 на сперматозоиды баранов в образцах заморожено-оттаянной спермы проводили с помощью метода индуцированной ионами железа хемилюминесценции (Владимиров Ю.А., и др., 1991).
Оптимальные концентрации препаратов подбирали по подвижности и абсолютному показателю живучести сперматозоидов по методике Милованова В.К. (1962). Концентрацию сперматозоидов у хряков определяли на фотометре SDM-5 (Германия), концентрацию сперматозоидов баранов определяли в камере Горяева.
Для изучения защитного влияния испытуемых веществ при хранении спермы хряков в охлажденном до температуры 4°С или 16-17°С, использовали эякуляты с подвижностью 80-90% и концентрацией сперматозоидов не ниже 0,30 млрд/мл. Искусственное осеменение свиноматок проводили двукратно в течение спонтанного эструса, внутриматочно, дозой 100 мл, содержащей 3 млрд подвижных сперматозоидов.
Для изучения защитного влияния испытуемых веществ, при хранении спермы баранов в охлажденном состоянии и при её замораживании, использовали зякуляты с подвижностью 80 - 90% и концентрацией сперматозоидов не ниже 2 млрд/мл.
Для глубокого замораживания спермы баранов разбавленную
ГЖУК-трис-буферной средой сперму с добавлением различных концентраций изучаемых веществ охлаждали в холодильнике в течение двух часов до 2-4°С и замораживали в форме открытых гранул объемом 0,2 см3 на фторопластовой пластине до с использованием
жидкого азота. После оттаивания через определенные промежутки времени определяли подвижность сперматозоидов и вычисляли абсолютный показатель их живучести. Искусственное осеменение овец проводили однократно или двукратно в течение спонтанного эструса. Сперму вводили цервикально в объеме 0,2 см . В дозе содержалось 80100 млн подвижных сперматозоидов.
Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на живучесть сперматозоидов хряков и баранов при хранении в охлажденном при температуре 4, 16 и 17°С изучали с использованием арсенид-галлиевого и гелий-неонового лазеров. Обработку спермы хряков и баранов проводили на лазерном приборе ALIT - ЗВ. Источниками излучения служили гелий-неоновый (He-Ne, длина волны 0,63 мкм) и арсенид-галлиевый (Ars-Ga, длина волны 0,89 мкм) лазеры. Эксперименты проводили в 5 различных режимах (R2-R32), отличающихся по частоте излучения лазера (0,6-10 кГц), мощности излучения (0,15-2,4 мВт) и времени экспозиции (30-300 секунд) с определением подвижности абсолютного показателя живучести сперматозоидов и репродуктивных показателей овцематок.
Для определения эффективности оттаивания криоконсервиро-ванной спермы баранов в электро- и гидрооттаивателях конструкции ВНИИплем, изучали модифицированные гидрооттаиватель ОГСБВ и электрооттаиватель ОГСБ-2М с различными диаметрами туб и температурными параметрами оттаивания. При этом анализировали биологическую полноценность и фертильность оттаянного семени.
Стимуляцию эструса у ремонтных свинок и у свиноматок через сутки после отъема поросят двух биологически активных точек 38 и 41 (Hsia I., Lee L., 1988) проводили с применением нового медицинского портативного электростимулятора «ДЭНАС», воздействующего на точки акупунктуры импульсным током с частотой 10 Гц и напряжением в 9 вольт. Сертификат соответствия № РОСС РУ. МЕ27. В05035. Производство ООО «РЦ APT», Екатеринбург,
При статистической обработке данных использовали компьютерные программы «Microsoft Excel-2007». Всего биометрически обработано 18463 показателя.
Ряд исследований выполнялось совместно с сотрудниками отдела биологии воспроизведения и искусственного осеменения животных ВНИИ племенного дела (руководитель д.б.н., профессор A.C. Ерохин). Вклад автора в организацию и проведение исследований составляет 85%, анализ и обобщение результатов выполнено лично автором в полном объеме.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 ИЗУЧЕНИЕ ВИДОВЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ИЗМЕНЕНИЯ МЕТАБОЛИЗМА ГАМЕТ ХРЯКОВ И БАРАНОВ ПРИ ХРАНЕНИИ IN VITRO
Процессы получения, разбавления и хранения спермы в охлажденном или глубокозамороженном состоянии вызывают структурные и функциональные нарушения сперматозоидов, что приводит к снижению их оплодотворяющей способности.
Наши исследования были направлены на выяснение видовых особенностей изменения метаболизма сперматозоидов хряков и баранов в результате технологической обработки спермы, для выявления предпосылок разработки более эффективных способов повышения оплодотворяющей способности спермы животных, сохраняемой вне организма, с целью улучшения репродуктивных качеств свиней и овец.
Для этого мы проводили биохимические исследования семенной плазмы нативной спермы и семенной плазмы разбавленной спермы хряков и баранов, сохраняемой в охлажденном до плюсовых температур состоянии.
Изменение углеводного обмена (анаэробного гликолиза) контролировали путем определения ключевых ферментов анаэробного гликолиза - лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и щелочной фосфатазы (ЩФ);
аминокислотно-белкового метаболизма - путем определения активности ключевых ферментов - ACT и AJIT, содержания альбумина и мочевины;
липидного и липопротеидного обмена - определением содержания общего белка, холестерина и триглицеридов.
Состояние антиоксидантной защиты контролировали определением активности антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР) и каталазы.
Интенсивность свободнорадикального окисления липидов при хранении разбавленной спермы хряков и баранов в охлажденном состоянии и при глубоком замораживании спермы баранов контролировали путем определения содержания диеновых (кетодиеновых) конъюгатов и малонового диальдегида.
Динамика изменения активности ферментов ACT, AJIT, ЛДГ, ЩФ в семенной плазме нативной спермы и в семенной плазме разбавленной спермы хряков и баранов сохраняемой при температуре 16°С, и у баранов, сохраняемой при 4°С представлены графически на рисунках 2-5. О выходе ферментов из сперматозоидов судили косвенным путем по их суммарной активности в семенной плазме.
«в» „п 4?ч
багренная
Время инкубации
Ш семенная плазма хряков ннкуЗйцкчпри-Н ci3C @ семенная плазш баранов инкубация при -И#С 0 «МШМШ1ИВ баране® |елу5адияпри+43С
«ерш- пк- 24ч 45ч ?2Ч
^яелаеая йл&леима-я
Время инкубации
Рис.2- Изменение активности ACT Рис.3- Изменение активности AJIT
Мб» pas- 2<ч 18ч Пч
__ _Время инкубации
48ч 72ч 120ч Время инкубации
Рис.4- Изменение активности ЛДГ Рис.5- Изменение активности ЩФ
Результаты анализа семенной плазмы нативной спермы хряков и баранов свидетельствуют что, активность ферментов ACT. AJIT и ЩФ в семенной плазме хряков достоверно ниже, чем баранов. Активность ЛДГ ниже в семенной плазме бараяов, чем хряков.
После разбавления спермы активность ферментов в семенной шшуе животных снижается на статистически достоверную величину Р< 0,05.
В процессе хранения разбавленной спермы было зарегистрировано достоверное повышение активности ферментов ACT, АЛТ, ЛДГ и 1ЦФ в семенной плазме. Выявлены видовые особенности в изменении активности ферментов ACT и ЛДГ в семенной плазме животных.
В семенной плазме хряков активность фермента ACT достоверно повышается через 72 часа хранения разбавленной спермы в среднем на 26.5%, в семенной плазме баранов активность фермента ACT достоверно повышается через 48 часов хранения в среднем на 20,7% и увеличивается е процессе хранения (Р< 0,05).
Активность фермента ЛДГ в семенной плазме хряков достоверно повышается через 48 часов хранения разбавленной спермы и превышает первоначальную в среднем на 31,8%. В семенной плазме баранов активность фермента ЛДГ повышается через 24 часа хранения, превышая первоначальную на 40,2%, в процессе хранения активность фермента увеличивается (PO,J5).
Наибольшую активность проявила щелочная фосфатаза,
достоверное повышение которой установлено через 24 часа хранения в семенной плазме разбавленной спермы хряков на 43%, баранов на 30%, (Р<0,05).
Достоверное повышение активности фермента АЛТ в семенной | плазме хряков и баранов было зарегистрировано через 72 часа хранения разбавленной спермы в среднем на 12,4% у хряков, и 16,4% у баранов ( (Р<0,05).
Далее мы определяли изменение содержания общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов и холестерина в семенной плазме нативной спермы и в семенной плазме разбавленной спермы хряков и баранов, сохраняемой при температуре 16°С, и у баранов, сохраняемой при 4°С. Результаты представлены графически на рисунках 6-10.
Рис.9- Содержание триглицеридов
В семенная плазма хряков инкубация при 16°С
Я семенная плазма баранов инкубация при 16°С
□ семенная плазма баранов инкубация при 4°С
Рис.8- Содержание мочевины
)ч 48ч 72ч 120ч Время инкубации
Рис. 10- Содержание холестерина
В результате исследований было установлено, что содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов и холестерина в семенной плазме хряков достоверно ниже чем, баранов на 42, 65, 30, 83 и 86% соответственно (Р<0,05).
Хранение разбавленной спермы повлияло на изменение содержания общего белка, альбумина, мочевины и холестерина в семенной плазме животных.
В семенной плазме хряков достоверное повышение общего белка и холестерина зарегистрировано через 72 часа хранения в среднем на 18,2% и 42,8% соответственно, альбумина и мочевины через 120 часов хранения в среднем на 37,58% и на 38,43% соответственно при температуре инкубации 16°С.
В семенной плазме баранов достоверное повышение содержания общего белка и мочевины отмечено через 48 часов хранения в среднем на 16,2%, и 37,0% соответственно при температуре инкубации 16 С и на 13,8% и 34,52% соответственно при температуре инкубации 4°С. Достоверное повышение содержания альбумина и холестерина отмечено через 72 часа хранения в среднем на 36,5% и 34,9% соответственно при температуре инкубации 16°С и 4°С (Р<0,05).
Анализ биохимических показателей свидетельствуют об изменении метаболизма в половых клетках хряков и баранов при разбавлении и хранении в охлажденном до плюсовых температур состоянии.
Нарушение метаболизма в сперматозоидах, находящихся in vitro, может быть связано с дисбалансом антиокислительных систем с избыточным образованием свободных радикалов и конечных метаболитов типа ТБК (тиобарбитуровая кислота) - реагирующих продуктов.В этой связи, в следующих наших экспериментах мы провели сравнительное исследование влияния хранения спермы животных на концентрацию в ней продуктов пероксидного окисления липидов. Активность свободнорадикального окисления липидов оценивали по накоплению липидных перекисей, которые определяли в форме малонового диальдегида, и определением диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) полиненасыщенных жирных кислот.
В результате исследований содержания продуктов ПОЛ в свежеполученной неразбавленной сперме хряков и баранов было установлено, что в сперме животных существует определенный физиологический уровень пероксидации липидов, о чем свидетельствует присутствие в свежеполученной сперме диеновых (кетодиеновых) коньюгатов и малонового диальдегида.
В следующем эксперименте мы изучали накопление продуктов ПОЛ после разбавления ГЖУК-трис-буферной средой, замораживания и оттаивания спермы баранов, анализируя образцы спермы сразу после оттаивания и через определенные интервалы времени при инкубации 18°С, таблица 1.
Таблица 1- Концентрация продуктов пероксидного окисления липидов после замораживания-оттаивания и хранения спермы баранов при 18 С
Время инкубации оттаянной спермы при 18 С, мин п Подвижность сперматозоидов, % ДК, КД, Ед.опт.пл/мг МДА, мкмоль/л
3 10 38,0 ±0,65 0,357 ± 0,02 4,65 ±0,19
20 10 35,4 ±1,38 0,342 ± 0,03 4,87 ±0,13
40 10 30,0 ± 1,12х 0,325 ±0,01 5,96± 0,13х
60 10 24,1 ± 0,92х 0,321 ±0,04 6,00 ± 0,24х
90 10 20,0 ± 0,52х | 0,212 ± 0,02х 6,10 ± 0,20х
х -Р < 0,05
На основании проведенных исследований установлено, что в заморожено-оттаянной сперме баранов активируется процесс пероксидного окисления липидов (ПОЛ).
В процессе инкубации оттаянной спермы при температуре 18°С происходит накопление МДА с 4,65 до 6,10 мкмоль/л и понижение концентрации ДК, КД с 0,357 до 0,212 ед/мг (Р < 0,05).
Известно, что повышение концентрации диеновых (кетодиеновых) коньюгатов и малонового диальдегида свидетельствует об усилении процессов ПОЛ. Значительное падение концентрации диеновых (кетодиеновых) коньюгатов приводит к более глубоким деструктивным процессам биологических мембран (Кондрахин И.П., Архипов A.B. и др. 2004), что и показали результаты наших исследований. Следовательно, замораживание-оттаивание спермы баранов приводит к более глубоким изменениям метаболизма сперматозоидов.
Для изучения уровня ПОЛ в сперме хряков и баранов сохраняемой при температуре 16 С сперму хряков разбавляли ГХЦС средой, сперму баранов ГЦЖ средой в два раза и сохраняли в течение 72 часов при температуре 16°С, таблица 2.
Таблица 2- Изменения концентрации продуктов ПОЛ и подвижности сперматозоидов в зависимости от сроков хранения спермы при 16 С
Время инкубации спермы 1 sOs^ при 16 С, час. Сперма хряков разбавленная ГХЦС средой (1:1) (п=15) Сперма баранов разбавленная ГЦЖ средой (1:1) (п=15)
Подвижность сперматозоидов, % ДК,КД ед/мг МДА, мкмоль/л Подвижность сперматозоидов, % дк,кд ед/мг МДА, мкмоль/л
1 80,5 ±2,10 0,210 ±0,01 4,01 ±0,07 80,6 ±2,40 0,308 ±0,02 4,32 ±0,08
24 75,0 ±1,51 0,232 ±0,03 4,28 ±0,09 58,0Л ±1,91 0,392л ±0,01 5,02х ±0,09
48 60,5 х ±1,03 0,325л ±0,02 4,88Л ±0,13 45,5х ±1,41 0,404л ±0,03 5,14х ±0,10
72 54,0х ±2,64 0,342* ±0,01 4,96л ±0,11 19,0Л ±1,58 0,418* ±0,02 6,19х ±0,12
х -Р < 0,05
Данные таблицы показывают, что хранение спермы хряков и баранов при 16°С в течение 72 часов, привело к достоверному увеличению концентрации продуктов пероксидации липидов. Выявлены видовые различия в характере изменения концентрации продуктов пероксидного окисления липидов, и влияния их на изменение подвижности сперматозоидов в процессе инкубации спермы. Изменения концентрации продуктов ПОЛ наблюдались в большей степени в сперме баранов, чем хряков, как по скорости протекания, так и по степени их выраженности. Если при хранении спермы хряков через 24 часа изменения были незначительны, то в сперме баранов они были статистически достоверны (ДК,КД-24%, МДА-16%). Подвижность сперматозоидов за это время у баранов снизилась на 22%, составляя 58%, у хряков примерно аналогичная подвижность 60,5% была через 48 часов хранения (Р<0,05). Проведен анализ корреляционной зависимости между временем инкубации и концентрацией продуктов ПОЛ в разбавленной сперме животных и сохраняемой при температуре 16°С. Выявлена прямая достоверная корреляционная связь между концентрацией продуктов ПОЛ и временем инкубации спермы, у хряков по ДК,КД (г = 0,95) и МДА (г = 0,96), у баранов по ДК, КД (г = 0,88) и МДА (г = 0,95).
Подвижность сперматозоидов находится в обратной зависимости от времени инкубации спермы у хряков (г = - 0,98), у баранов (г = - 0,99) и отрицательно коррелирует с концентрацией продуктов ПОЛ у хряков с ДК,КД (г = - 0,99) и МДА (г= - 0,98), у баранов ДК, КД (г = - 0,92) и МДА (г = - 0,98). Чем выше концентрация продуктов ПОЛ в сперме животных в процессе её хранения, тем ниже подвижность сперматозоидов, что может свидетельствовать об изменении жирнокислотного состава мембран органелл, обеспечивающих эластичность, избирательную проницаемость и регулирующих внутриклеточный обмен веществ.
Повышение концентрации продуктов ПОЛ может быть связано с изменением системы антиоксидантной защиты (АОЗ) сперматозоидов в процессе хранения спермы. Поэтому в следующих наших исследованиях мы определяли уровень содержания антиоксидантных ферментов (АОФ) в семенной плазме сравниваемых видов животных при хранении спермы в охлажденном до температуры 16°С состоянии (таблица 3).
Хранение разбавленной спермы животных в охлажденном до 16°С состоянии инициировало выход антиоксидантных ферментов из сперматозоидов в семенную плазму, что согласуется с имеющимися литературными данными о выходе антиоксидантных ферментов при хранении спермы хряков и баранов при 4°С и при глубоком замораживании до -196°С (Нарижный А.Г. и др., 1995; Ерохин A.C. и др., 1995;1996).
Таблица 3 - Влияние сроков хранения разбавленной спермы при 16°С на активность антиоксидантных ферментов в семенной плазме животных
Срок хранения спермы при Активность ферментов в плазме разбавленной спермы хряков ГХЦС средой (1:1) (п=22) Активность ферментов в плазме разбавленной спермы баранов ГЦЖ средой (1:1) (п=22)
ГПО, Е/л ГР, Е/л Е/мг ПЮ, Е/л ГР, Е/л
неразбавленная 12,2± 1,22 232,54 ± 8,80 36,24 ± 2,44 17,64 ± 1,38 295,20 ± 8,25 310,68 ± 4,34
разбавленная 6,54 ± 0,09 126,20 ± 2,10 14,12± 0,31 8,05 ± 0,24 148,70 ± 4,36 124,25± 5,12
8 6,96 ± 0,12 134,80 ± 3,78 14,78 ± 0,54 9,84 ± 0,36х 183,64 ± 3,28х 165,44± 4,30х
24 8,48 ± 0,10х 165,42 ± 4,14х 15,84 ± 0,12х 9,96 ± 0,28х 192,70 ± 2,24х 172,12± 6,70х
48 8,73 ± 0,14х 170,18± 3,24 х 16,15 ± 0,38х 10,12 ± 0,25х 200,24 ± 2,68х 185,15* 4,28х
72 8,26 ± 0,17х 164,58 ± 5,82х 15,28 ± 0,72х 12,00 ± 0,20х 205,32 ± 5,33х 193,71± 4,36х
х - Р < 0,05
Выявлены существенные межвидовые различия в увеличении активности антиоксидантных ферментов в семенной плазме животных в процессе хранения разбавленной спермы при температуре 16°С.
В семенной плазме хряков, достоверное увеличение активности антиоксидантных ферментов отмечено через 24 часа хранения, баранов через 8 часов.
Активность супероксиддисмутазы в семенной плазме хряков за 24 часа хранения достоверно повысилась с 6,54 до 8,48 Е/л, глутатионпероксидазы со 126,2 до 165,42 Е/л, глутатионредуктазы с 14,12 до 15,84 Е/л оставаясь на таком уровне до конца исследований (Р<0,05). В семенной плазме баранов через 8 часов хранения активность супероксиддисмутазы в семенной плазме достоверно повысилась с 8,05 до 9,96 Е/л, глутатионпероксидазы со 148,70 до 183,64 Е/л, глутатионредуктазы со 124,25 до 165,44 Е/л и продолжала увеличиваться в процессе хранения (Р<0,05).
Установлена высокодостоверная зависимость между увеличением активности антиоксидантных ферментов в семенной плазме и временем хранения разбавленной спермы животных. У хряков время инкубации спермы коррелирует с активностью супероксиддисмутазы (СОД) (г = 0,76), глутатионпероксидазы (ГПО) (г = 0,71) и глутатионредуктазы (ГР) (г = 0,83), у баранов с СОД (г = 0,89), с ГПО (г = 0,82) и ГР (г = 0,85). Подвижность сперматозоидов хряков находится в обратной связи с активностью СОД (г = -0,97), ГПО (г = -0,96) и ГР (г = -0,98) в семенной плазме животных. Аналогичное наблюдается и с подвижностью сперматозоидов баранов, во всех случаях коэффициент корреляции оказался равен (г = - 0,99).
Выход супероксиддисмутазы и глутатионзависимых ферментов из половых клеток у баранов происходил интенсивнее, чем таковой у хряков. Можно выделить следующие наиболее важные видовые особенности выхода антиоксидантных ферментов из сперматозоидов в процессе хранения спермы хряков и баранов:
- у баранов раньше достигается пороговый уровень выхода ферментов из сперматозоидов, чем у хряков. Имеется в виду уровень повышения, следующий за разбавлением спермы, на статистически достоверную величину. Такой пороговый уровень по супероксидцисмутазе и глутатионзависимым ферментам у баранов был достигнут в 8-часовом интервале инкубации спермы, а у хряков - в 24 часа. Это может быть обусловлено более ранними биодеструктивными изменениями в структуре плазматических мембран сперматозоидов;
- после порогового уровня активность ферментов в семенной плазме у баранов в абсолютном большинстве случаев неуклонно увеличивается, а у хряков до определенного времени увеличивается незначительно, или остается примерно на стабильном уровне;
- у баранов количественный выход ферментов отличается в большей степени, чем у хряков, а, следовательно, идет активнее нарушение клеточных структур и функциональной деятельности белков, чем у хряков.
Потеря половыми клетками антиоксидантных ферментов происходит раньше, чем выход других изученных нами ферментов и компонентов клеточного метаболизма аминокислотно-белкового, углеводного, липидного и липопротеидного обмена. Достоверное увеличение активности ферментов ACT и AJIT в семенной плазме хряков выявлено через 72 часа хранения разбавленной спермы, у баранов через 48 и 72 часа, соответственно. Активность фермента ЛДГ в семенной плазме хряков достоверно повышалась через 48 часов хранения разбавленной спермы, у баранов через 24 часа (Р<0,05). Тогда как достоверное увеличение активности антиоксидантных ферментов в семенной плазме баранов установлено через 8 часов хранения разбавленной спермы, а у хряков через 24 часа (Р<0,05).
В свете современных представлений о роли и функции антиоксидантных ферментов (АОФ), полученные данные с достаточной определенностью показывают, что антиоксидантные ферменты сперматозоидов разных видов сельскохозяйственных животных, обладая видовыми особенностями, определяют их криорезистентность. Защитный эффект антиоксидантных ферментов, а также специфическое изменение их выхода из половых клеток хряков и баранов в процессе хранения указывает на значительную роль этих соединений в поддержании функционального гомеостаза сперматозоидов в экстремальных условиях внешней среды.
Наши исследования показали, что увеличение активности антиоксидантных ферментов в семенной плазме находится в прямой связи с накоплением продкутов ПОЛ при хранении разбавленной спермы.
У хряков активность СОД коррелирует с концентрацией ДК,КД (г = 0,65) и МДА (г = 0,73), у баранов с ДК,КД (г - 0,91) и МДА (г = 0,99).
Активность ГПО у хряков коррелирует с концентрацией ДК,КД (г = 0,69) и МДА (г = 0,77), у баранов ДК,КД (г = 0,83) и МДА (г = 0,99) соответственно.
Активность ГР у хряков коррелирует с концентрацией ДК, КД (г = 0,74) и МДА (г = 0,81), у баранов с ДК, КД (г = 0,99) и МДА (г=0,86) соответственно. Результаты исследований позволяют предположить, что потеря половыми клетками антиоксидантных ферментов влияет на их устойчивость к пероксидному окислению липидов, с чем может быть связана пониженная фертильность спермы хряков и баранов сохраняемой вне организма.
Таким образом, на основе биохимических исследований спермы хряков и баранов показана близость в закономерности изменения метаболизма и защитных свойств сперматозоидов животных разного вида, сохраняемых вне организма во времени, выражающееся в выходе окислительных и гидролитических ферментов и других компонентов клеточного метаболизма из сперматозоидов в семенную плазму, инициацией ПОЛ, и ингибированием ферментативной антиоксидантной активности (АОА).
В этой связи большой практический интерес представляет возможность стабилизировать пероксидацию липидов в сперме животных. При этом может быть применено несколько подходов: использование антиоксидантов и других криопротекторов при создании новых, более усовершенствованных синтетических сред; применение физических способов обработки спермы в частности обработка низкоинтенсивным лазерным излучением; улучшение технологии опаивания замороженной спермы и другое.
3.2 ИЗУЧЕНИЕ ЗАЩИТНОГО ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ В СОСТАВЕ
СИНТЕТИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ В ОХЛАЖДЕННОМ СОСТОЯНИИ
В последние годы проводятся интенсивные исследования по совершенствованию синтетических сред для краткосрочного и длительного хранения спермы хряков, охлаждённой до температуры 16-18°С, с целью повышения её биологической полноценности и оплодотворяющей способности.
В этой связи, в задачу наших исследований входило усовершенствование среды для хранения спермы хряков в охлаждённом состоянии с применением различных соединений, в том числе синтетических и натуральных антиоксидантов.
Нами было исследовано защитное влияние новых синтетических жирорастворимых антиоксидантов фенольного ряда, таких как: ИХФГАН-3 (бромид-КГЫ- диметил-Ы-гексадецил-4-окси-3,5 ди-трет-бутил-бензил-амина); ИХФГАН-4 (бромид-№\т- диметил-К- дидецил-
4-окси-3,5ди-трет-бутил-бензил-амина); ИХФГАН-5 (бромид-NN-диметил-К-децил-4-окси-3,5ди-трет-бутил-бензил-амина) синтезированных по нашей заявке в Институте химической физики (Москва).
В результате исследований было установлено, что введение антиоксидантов ИХФГАН-3 и ИХФГАН-5 в состав ГХЦС среды в концентрациях 0,002-0,015 мг/мл достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов. При концентрации ИХФГАН-3, равной 0,004 мг/мл и 0,008 мг/мл, живучесть сперматозоидов повышалась по сравнению с контролем на 23,2 и 20,0% соответственно при температуре инкубации 16°С, (Р< 0,01).
Однако искусственное осеменение свиней спермой, разбавленной ГХЦС средой с добавлением антиоксиданта ИХФГАН-3 в оптимальной концентрации 0,004 мг/мл, не оказало положительного влияния на оплодотворяемость свиноматок, поэтому данный препарат не может использоваться в составе среды, несмотря на определённое его положительное действие на живучесть сперматозоидов хряков in vitro.
Вероятно, это обусловлено функционально-структурными особенностями половых клеток хряков. Не исключено, что влияние данных антиоксидантов на сперматозоиды других видов животных может оказаться более успешным.
Известно, что этанол, химическая формула - С2Н3ОН, является водорастворимым антиоксидантом. Ранее этиловый спирт в составе сред для спермы животных не использовался. В этой связи, мы решили изучить криозащитное влияние данного препарата на сперму хряков, сохраняемую в охлажденном состоянии при температуре 16 С.
В проведенных исследованиях была установлена оптимальная концентрация этанола в составе ГХЦС среды, которая составляла 0,100,20%. Введение препарата в данной концентрации достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов на 3441% (Р<0,05) по сравнению с контролем. В дозах 0,15-0,20% в составе среды этанол препятствует увеличению концентрации МДА в разбавленной сперме хряков в течение трех суток при температуре хранения 16°С (Р<0,05), таблица 4.
Таблица 4 - Влияние этанола на изменение концентрации МДА в зависимости от сроков хранения сперм хряков при 16°С
Концентрация этилового спирта, % Содержание МДА
Сроки хранения спермы хряков при 16иС, часы (п=10)
1 24 48 72
0,10 4,09 ±0,15 4,18 ±0,41 4,30 ±0,20 5,14 ± 0,20х
0,15 4,06 ±0,26 4,18 ±0,40 4,24 ± 0,33 4,34 ±0,15
0,20 4,02 ±0,22 4,16 ±0,33 4,35 ± 0,20 4,48 ± 0,28
Контроль 4,20 ±0,18 4,49 ± 0,44 5,19 ±0,23" 5,65 ± 0,20х
х- Р<0,05
Научно - производственные испытания по искусственному осеменению свиноматок спермой хряков разбавленной ГХЦС средой с 0,15% этанола, сохраняемой при температуре 16°С показали, что предложенная среда достоверно повышает оплодотворяемость свиноматок на 5,8 % и их многоплодие на 0,3 поросенка по сравнению с контролем (ГХЦС средой без этанола).
В результате была разработана новая синтетическая среда для краткосрочного хранения спермы хряков при следующем соотношении ингредиентов, (мас.%): глюкоза -3,80- 3,90; двуводная динатриевая соль этилендиамин-ККЫЫ-тетрауксусной кислоты - 0,26-0,28; натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 0,36-0,38; аммоний сернокислый - 0,18-0,20; натрий двууглекислый - 0,05-0,06; этиловый спирт - 0,10-0,20; вода дистиллированная - остальное до 100.
Синтетическая среда для хранения спермы хряков с содержанием этанола признана изобретением и на нее выдан патент № 2370033.
Экспериментально установлено, что хитозан представляет собой 1чГ-диацетилированную форму хитина, обладает сорбционными, антибактериальными и антиоксидантными свойствами (Скрябин К.Г., и др., 2002; Оогсшу Ь., Коз]акоу V., 1997). В связи с тем, что защитное влияние сукцината хитозана на сперму хряков не изучалось, мы решили выяснить влияние данного препарата на подвижность и живучесть сперматозоидов хряков в составе ГХЦС и ГХЦ сред при температуре хранения 4 и 16°С с целью усовершенствования среды для долгосрочного хранения спермы хряков.
В результате проведенных исследований по изучению влияния сукцината хитозана на биологическую полноценность спермы хряков было установлено, что данный препарат не оказывает положительного влияния на живучесть сперматозоидов хряков, сохраняемых охлажденными до плюсовых температур.
В последние годы проведено большое количество исследований по изучению влияния селена на здоровье и репродуктивные качества сельскохозяйственных животных. Роль селена в организме животных определяется, в первую очередь, тем, что он входит в состав одного из важнейших антиоксидантных ферментов - селенозависимой глутатионпероксидазы, которая защищает клетки от накопления продуктов пероксидного окисления липидов, предупреждая тем самым их повреждение. На сперме хряков защитное влияние препаратов селена ранее не изучалось. В наших экспериментах было установлено, что добавление в состав ГХЦС среды различных дозировок селенита натрия (ЫагЗеОз) и селеноорганического препарата селекора не оказало положительного влияния на живучесть сперматозоидов хряков при температуре хранения 4 и 17°С.
Имеются данные о мембранотропном действии на сперматозоиды
животных такого полисахарида, как гиалуроновая кислота (Handrow R.P. е.а., 1982 Rodriguez-Martinez Н. е.а., 1992). Гиалуроновая кислота представляет собой полимер, состоящий из остатков D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, соединенных поочередно [3-1,4 и Р-1,3 - гликозидными связями (несульфированный гликозаминогликан). Установлено, что гиалуроновая кислота влияет на акросомную реакцию и капацитационные процессы сперматозоидов (Handrow R.P., et.al., 1982).
Результаты наших исследований по изучению влияния гиалуроновой кислоты на криоустойчивость спермы хряков, сохраняемой в охлажденном до плюсовых температур состоянии, свидетельствуют об отсутствии защитного действия данного препарата на подвижность и живучесть сперматозоидов.
В литературе имеются сообщения о положительном влиянии бычьего сывороточного альбумина (BSA) и тиоловых соединений на сохранение биологической полноценности сперматозоидов животных. Ряд исследователей полагают, что макромолекулы BSA оказывают протективное действие на ферменты сперматозоидов. (Норре Р.С. et al., 1977; Dalet С. et al., 1982; Upreti G.C. et al., 1991; 1995). Применение бычьего сывороточного альбумина в составе сред для спермы баранов, сохраняемой при температуре 16°С, способствовало повышению ее подвижности и живучести (Ерохин А.С. и др., 1997).
Введение тиоловых соединений в состав разбавителей спермы животных позволяет повысить биологическую полноценность и оплодотворяющую способность как охлаждённой, так и замороженной спермы (Корбан Н.В., и др., 1988; Шапиев И.Ш., 1998). По мнению авторов, это связано с тем, что тиоловые соединения предохраняют ферментативные системы сперматозоидов от инактивации, вызванной разрушением сульфгидрильных групп белков.
В связи с этим мы решили подробнее изучить влияние различных концентраций бычьего сывороточного альбумина (BSA) и восстановленного глутатиона (GSH) в составе ГХЦС среды на подвижность и оплодотворяющую способность охлажденной до температуры 17°С спермы хряков.
BSA - белок плазмы крови крупного рогатого скота, состоящий из 582 аминокислотных остатков (одноцепочечный). Формула восстановленного глутатиона (GSH) - (2-амино-5-{[2-[(карбоксиметил) амино]-1 -(меркаптометил)-2-оксоэтиламино) -5-оксопентаноевая кислота.
При изучении влияния различных концентраций бычьего сывороточного альбумина и восстановленного глутатиона на подвижность и переживаемость сперматозоидов хряков была установлена оптимальная их концентрация для BSA- она составляла от 0,1 до 0,3% , для восстановленного глутатиона - 0,002-0,008%. В исследованиях по определению оптимальной концентрации совместного применения BSA и восстановленного глутатиона в составе ГХЦС среды, было установлено,
что введение в состав ГХЦС среды восстановленного глутатиона в концентрации 0,002% и BSA в концентрации 0,2-0,3% достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов в среднем на 20% (Р<0,05) и препятствует развитию продуктов ПОЛ в разбавленной и сохраняемой при 16°С сперме хряков в течение 120 часов. Результаты оплодотворяющей способности спермы хряков разбавленной усовершенствованной ГХЦС средой с восстановленным глутатионом и BSA в концентрации 0,002% и 0,02% соответственно представлены в таблице 5.
Таблица 5 - Результаты искусственного осеменения свиней
Группа Время Осеменено Опоросилось Среднее
животных хранения маток, голов % многоплоди
спермы, ч голов е маток,
голов
Опытная 24 208 187 89,9 10,3 ± 1,08
Контрольная 24 200 166 83,0 10,0 ± 1,24
Опытная 72 197 170 86,3 10,5 ± 1,25
Контрольная 72 184 145 78,8 10,0 ±1,68
Опытная 120 125 85 68,0 10,2± 1,11
Контрольная 120 126 70 55,5 9,7 ±1,09
Из таблицы 5 видно, что введение восстановленного глутатиона и BSA в состав ГХЦС среды достоверно повышает оплодотворяемость свиноматок - при суточном хранении спермы на 6,9 %, при трехсуточном на 7,5%, при пятисуточном на 12,5% (Р<0,05), и их многоплодие соответственно на 0,3 поросенка при суточном хранении спермы, и на 0,5 при 3-х и 5-ти суточном хранении.
В результате была разработана новая синтетическая среда для долговременного хранения спермы хряков при следующем соотношении ингредиентов мас%: глюкоза - 3,8; двуводная динатриевая соль этилендиамин-М№ч[Ы-тетрауксусной кислоты - 0,26; натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 0,38; аммоний сернокислый - 0,18 г.; натрий двууглекислый - 0,05; восстановленный глутатион-0,002; В SA-0,2; вода дистиллированная - остальное до 100.
Таким образом, анализируя проведенные нами исследования, можно сделать вывод, что защита сперматозоидов хряков от свободнорадикального перокисления липидов зависит не только от особенностей молекулярной структуры антиоксидантов, но и от их противоокислительной активности. Из изученных нами антиоксидантов
и ряда других биологически активных веществ перспективными для сохранения сперматозоидов хряков in vitro при температуре 16-37 С | следует признать этанол, бычий сывороточный альбумин, восстановленный глутатион и совместное применение бычьего сывороточного альбумина с восстановленным глутатионом.
3.3 ИЗУЧЕНИЕ ЗАЩИТНОГО ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ В СОСТАВЕ
СИНТЕТИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ 1
БАРАНОВ
При создании новых синтетических сред для разбавления и хранения спермы баранов нами были изучены различные вещества.
Изучая защитное влияние синтетических жирорастворимых антиоксидантов фенольного ряда ИХФГАН, мы выявили положительное влияние препаратов ИХФГАН-3 в концентрации 0,008% и ИХФГАН-5 в концентрации 0,004% в составе ГЖУК-трис-буферной среды.
Использование препаратов в данной концентрации позволяет достоверно повысить абсолютный показатель живучести сперматозоидов после оттаивания и оплодотворяемость овцематок спермой замороженной с ИХФГАН-3 на 7,0% с ИХФГАН-5 на 5,0% по сравнению с контрольной группой маток (Р < 0,05).
С целью выяснения механизма защитного влияния антиоксиданта1 ИХФГАН-3 при глубоком замораживании спермы баранов, нами изучалась его антиокислительная активность в образцах замороженно-1 оттаянной спермы при индуцировании пероксидации липидов с помощью ионов двухвалентного железа (Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., 1989). Результаты экспериментов представлены на рисунке 11.
Интенсивность ХЛ (J 105 квант с/4П)
4,5 -
3 ~ $
т н =
1 |
1
1 5 ¡Г-. -
f f 1
_ ш i
О к 0,002 0,004 0,008 0,016 Концентрация антиоксиданта, %
Рисунок 11- Влияние антиоксиданта ИХФГАН-3 на хемилюминесценцию в образцах заморожено - оттаянной спермы баранов.
Из рисунка 11 видно, что введение ИХФГАН-3 в оптимальных дозах в состав криоконсервирующей среды для сперматозоидов баранов привело к ингибированию свободнорадикальной реакции пероксидации липидов, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды свечения медленной вспышки XJI в образцах с антиоксидантом по сравнению с контролем, где антиоксидант отсутствовал. Доза препарата, равная 0,016% снижала интенсивность XJI в образцах оттаянной спермы на 24% по сравнению с контролем (Р < 0,05). Оптимальные концентрации ИХФГАН-3, применяемые для криоконсервации спермы баранов, не ингибировали полностью процесс индуцированного ПОЛ, что необходимо для сохранения физиологического гомеостаза половых клеток, так как стационарная интенсивность ПОЛ в мембранах является немаловажным биологическим регулятором метаболизма клеток (Журавлев А.И., 1989; Aitken R.J., Clarkson J.S., 1978).
Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют об эффективности использования фенольных антиоксидантов ИХФГАН-3 и ИХФГАН-5 в качестве криопротекторов для спермы баранов. На синтетические разбавители для спермы баранов с содержанием фенольных антиоксидантов ИХФГАН-3 и ИХФГАН-5 выданы патенты №2048796 и №2083183.
Полученные нами данные свидетельствуют о необходимости дальнейшего поиска более эффективных препаратов антиоксидантного и мембранотропного действия с целью разработки более совершенных синтетических сред для криоконсервации спермы баранов.
Известно, что янтарная кислота обладает определенным антиоксидантным действием, предотвращая нарастание метаболических нарушений, приводящих к пероксидному окислению липидов (Кожевникова Л.К., Кондрашова М.Н. и др., 2002).
В связи с этим нами были проведены опыты по изучению действия солей янтарной кислоты (сукцината натрия, аммония, магния и кальция) в составе ГЖУК-трис-буферной среды на качественные показатели спермы баранов после её замораживания-оттаивания. Результаты экспериментов показали, что из всех изученных препаратов лишь сукцинат натрия (Na00CCH2CH2C00Na6H20 - натрий янтарнокислый 6-водный) в концентрации 0,03% оказал заметное криозащитное действие.
Использование сукцината натрия в концентрации 0,03% достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов в среднем - на 20,0% и препятствует увеличению продуктов пероксидации липидов при хранении оттаянной спермы. Научно-производственные опыты по искусственному осеменению овец спермой замороженной в ГЖУК-трис-буферной среде с сукцинатом натрия показали, что усовершенствованная среда достоверно повышает оплодотворяемость овцематок на 11,2%, и их многоплодие на 12 голов (на 100 маток), таб. 6.
Таблица 6 - Влияние сукцинита натрия на результативность осеменения овец криоконсервированной спермой
Группа животных Концентрация препарата, мас.% Число осемененных овцематок, гол Объягнилось Получено ягнят на 100 маток, голов
голов %
Опыт 0,03 192 109 59,8 142
Контроль _ 183 90 48,6 130
В результате была разработана новая синтетическая среда для глубокого замораживания спермы баранов при следующем соотношении ингредиентов, мас.% : лактоза - 6,00; декстрин - 3,60; ксилит - 0,18; трис-(оксиметил)- аминометан - 0,08; динатриевая двуводная соль ЭДТА -0,10, натрий янтарнокислый 6-ти водный - 0,03; глицерин - 4,3; желток куриного яйца - 14,3; вода дистиллированная - остальное до 100. На данную синтетическую среду Государственным институтом патентной экспертизы выдан патент № 2323702.
Далее нами изучалось влияние сукцината хитозана на качественные показатели спермы баранов, сохраняемой в охлажденном и глубокозамороженном состоянии. Экспериментальные данные по изучению влияния сукцината хитозана на абсолютный показатель живучести сперматозоидов баранов в ГЦЖ среде при 4 и 17°С показали, что сукцинат хитозана в дозах 0,08-0,62 мг/мл среды оказал некоторое защитное влияние на сохранение подвижности сперматозоидов (Р>0,05). При глубоком замораживании спермы баранов в ГЖУК-трис-буферной среде с добавлением сукцината хитозана, препарат не оказал положительного влияния на подвижность и переживаемость сперматозоидов.
В наших исследованиях по изучению защитного влияния гиалуроновой кислоты установлено, что данный препарат не оказал положительного влияния на подвижность и абсолютный показатель живучести охлажденных до температуры 16°С и оттаянных после глубокого замороживания сперматозоидов баранов.
В состав ГЖУК-трис-буферной среды для замораживания спермы баранов входит кукурузный декстрин, который получают путем гидролиза крахмала в присутствии катализаторов. В связи с тем, что декстрин в зависимости от сроков его хранения подвергается окислительным процессам (Епишина Т.М., 1995), возникла необходимость дальнейшего поиска более эффективных криопротекторов
в составе синтетической среды для разбавления и хранения спермы баранов в глубокозамороженном состоянии.
По нашему мнению на роль криопротекторов могут претендовать соединения, которые обладают свойствами поверхностно-активных сорбентов. Одним из таких сорбентов является костный клей, представляющий собой сложное белковое образование - коллаген, относящийся к группе фибриллярных белков (склеропротеидов).
Введение костного клея в состав среды для замораживания спермы баранов в концентрации 1,8% достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов на 18,7% и повышает оплодотворяемость овцематок на 10,5%. Увеличился срок хранения сухих компонентов синтетической среды более чем на 9 месяцев за счет снижения пероксидации липидов в процессе хранения сухих навесок разбавителя. Новая лактозо-желточно-хелато-коллагеновая среда признана Государственным институтом патентной экспертизы изобретением и на неё выдан патент № 2198622.
Известно, что в составе синтетических сред для замораживания спермы баранов основным криопротективным компонентом является глицерин. Однако наряду с положительным влиянием он может оказывать отрицательное действие на фертильность криоконсервиро-ванной спермы, так как способствует разрушению акросомной и плазматической мембраны сперматозоидов (Борончук Г.В., 1979, Милованов В.К., Соколовская И.И., 1984, 81ау1к Т. 1987).
Целью наших исследований являлось изучение возможности замены глицерина на другие криопротекторы. При исследовании криозащитного действия этиленгликоля на сперматозоиды баранов, была выявлена оптимальная его концентрация в составе ГЖУК-трис-буферной среды, она составляла - 2,5%. Однако подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов при этой дозе препарата была все же несколько ниже, по сравнению с контролем, где использовался глицерин. Комбинированное применение глицерина и этиленгликоля в различных пропорциях также не оказало заметного криозащитного действия.
В исследованиях по изучению криозащитного действия на сперму баранов полиэтиленгликолей (ПЭГ) с различной молекулярной массой было установлено, что более заметным криозащитным действием обладали ПЭГ с низким молекулярным весом, в частности ПЭГ-300. Но при использовании данного вещества, его криозащитное действие было ниже, чем у глицерина.
В последние годы внимание исследователей привлекло изучение криозащитных свойств на клетки и ткани животных некоторых алкиловых эфиров глицерина.
Так как при замораживании спермы баранов защитное действие эфиров глицерина не изучалось, мы поставили своей целью изучить криозащитное действие на сперму баранов таких эфиров глицерина, как монометиловый, моноэтиловый, глицедиметиловый и бутилбензиловый. Данные соединения были синтезированы по нашей заявке в Институте химической физики (Москва).
Результаты замораживания спермы баранов с различными концентрациями эфиров глицерина показали, что из всех испытанных препаратов наиболее криопротективным действием обладает монометиловый эфир глицерина. При замораживании спермы барана с 3,0% данного эфира абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов повысился на 45,0% по сравнению с контролем, где использовали глицерин (Р<0,05). Однако результаты научно-производственных опытов по искусственному осеменению овцематок спермой замороженной с оптимальной концентрацией препарата (3,0%) показали, что монометиловый эфир глицерина не превышает по фертильности действие глицерина. Результаты, полученные нами, на сперматозоидах барана, отличаются от данных, установленных ранее при замораживании спермы человека, где криопротективная эффективность монометилового эфира глицерина была сходной с глицерином, (Паращук Ю.С. и др., 1989). Возможно, это связано с различиями структурно-функционального состояния плазматических мембран у сперматозоидов баранов и человека и, следовательно, с различной скоростью интра- и экстрацелюлярной диффузии данного соединения в процессе замораживания-оттаивания клеток.
В своих исследованиях мы разработали способ повышения оплодотворяющей способности глубокозамороженной спермы баранов, за счет введения в состав криоконсервирующей среды, комплекса синтетических аналогов простагландинов, обладающих широким спектром физиологического воздействия не только на сперматозоиды, но и на воспроизводительные способности овцематок.
В работе использовали биологически активный препарат ФЛПГ, содержащий в своем составе несколько видов синтетических аналогов простагландинов: ПГР2с1 - динопрост; ПГЕ - динопростон; ПГЕ, -динопростин; ПГЕ2 - простин.
Введение препарата ФЛПГ в состав ГЖУК-трис-буферной среды в концентрации 125 мкг/мл достоверно повышает оплодотворяемость овцематок на 12,6%, их многоплодие - на 13,0%, при Р<0,05.
Применение препарата ФЛПГ, как способа повышения оплодотворяющей способности криоконсервированной спермы баранов признано изобретением и на него выдан патент № 2297197.
3.3 ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ ПОЛНОЦЕННОСТЬ И ФЕРТИЛЬНОСТЬ СПЕРМЫ БАРАНОВ И ХРЯКОВ
В последние годы появился интерес к изучению возможности применения в области биологии размножения животных, разнообразных физических способов обработки спермы с целью повышения ее биологической полноценности (Николов И., Нестерова 10., 1994; Ерохин A.C. и др., 1997; Добровольский Г.А., 2009; Masuda Н., 1995).
Мы изучали сравнительное действие гелий-неонового и арсенид-галлиевого лазеров на биологическую полноценность спермы баранов, сохраняемой при температуре 4 и 16°С, и спермы хряков, сохраняемой при 17 С. Обработку спермы проводили на лазерном приборе ALIT-3B.
В проведенных нами исследованиях было установлено, что наиболее эффективным оказалось действие арсенид-галлиевого лазера в режимах R8, R16, R32 с временем экспозиции 60-120 секунд и температурой хранения спермы при 4°С.
Обработка спермы баранов Ars-Ga лазером, достоверно увеличивает абсолютный показатель живучести сперматозоидов в среднем на 20-30% и более (Р<0,05) (таб. 7) и повышает результативность искусственного осеменения овец на 5,7% спермой, обработанной в режиме R-8 с временем излучения 120 секунд, сохраняемой при температуре 4°С.
Таблица 7 - Влияние излучения Агэ-йа лазера на живучесть охлажденной до 4 С спермы баранов (п= 12)
Время излучения, секунды Абсолютный показатель живучести сперматозоидов при 4°С, усл.ед., в режиме облучения (Я)
R2 R4 R8 R16 R32
Контроль, без обработки 674±21,3 674±21,3 674±21,3 674*21,3 674±21,3
30 663±23,2 600±18,5 800±22,6 х 796±42,9 683±22,9
60 749±49,4 757±29,8 782±21,7Х 929±16,8Х 827±16,9Х
90 691±18,1 782±44,5 921±14,8Х 906±22,1х 922±30,8 х
120 788±20,6Х 980±20,4Х 916±26,4Х 946±12,6Х 869±35,5Х
300 696±18,4 923±14,5Х 783±12,7 898±13, Iх 789±42,9
х-Р<0,05
Обработка спермы хряков низкоинтенсивным лазерным излучением
проводилась совместно с Пухтиновым О.Н. В результате исследований было установлено, что низкоинтенсивное лазерное излучение не оказало положительного влияния на подвижность и живучесть сперматозоидов хряков, сохраняемых при температуре 17°С.
Таким образом, обработка спермы сравниваемых видов животных АгБ-Са и Не-Ые лазерным излучением оказывает защитное действие на биологическую полноценность спермы баранов и не оказывает на сперму хряков, а действие арсенид-галлиевого лазера более эффективно по сравнению с гелий-неоновым лазером.
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ОТТАИВАНИЯ СПЕРМЫ БАРАНОВ В ЭЛЕКТРО-И ГИДРООТТАИВАТЕЛЯХ
Большое значение для биологической полноценности сперматозоидов играет режим оттаивания спермы. В производственных условиях для одновременного оттаивания нужны большие объемы спермы, поэтому применяются водяные или электрические оттаиватели, в которых можно оттаивать одновременно до 10 и более гранул спермы.
В задачу наших исследований входила разработка оптимальных температурных режимов оттаивания спермы баранов в электро - и гидрооттаивателе ОГСБ-2М и ОГСБВ с целью дальнейшего их серийного производства для реализации организациям по искусственному осеменению овец. В эксперименте было предусмотрено изучение влияния на качество оттаянной спермы таких факторов, как количество оттаиваемых гранул, температуры оттаивания и температуры оттаянной спермы, время затраченное на начало и окончание оттаивания гранул спермы, диаметр тубы, и толщины пластины, разделяющей тубу на две части. При этом оценивали подвижность, абсолютный показатель живучести и фертильность оттаянных сперматозоидов.
На основании проведенных исследований было установлено, что лучшие качественные показатели спермы баранов были в электрооттаивателе ОГСБ-2М с диаметром оттаивающей тубы 25 мм., толщиной разделительной пластины в тубе 3,4 мм для одновременно оттаиваемых гранул до 20 штук, при температуре оттаивания 85°С.
Лучшие качественные показатели оттаянной спермы в гидрооттаивателе ОГСБВ были зарегистрированы с диаметром внешней тубы 110 мм, внутренней тубы (в которую загружаются гранулы спермы) 20 мм, и температурой горячей воды между стенками туб, (85-90°С).
Результаты научно-производственных опытов по искусственному
осеменению овец спермой оттаянной в электро- и гидрооттаивателях при температурном режиме 85°С и с оптимальным диаметром туб представлены в таблице 8.
Таблица 8 - Влияние различных оттаивателей и температуры оттаивания на результативность искусственно осеменения овец
Вид оттаивания Осеменено овец, голов Объягнилось овец в среднем Учтено ягнят на матку, голов
голов %
Электрооттаиватель, оттаивание при 85°С 119 58 48,8 1,3 ±0,21
Гидрооттаиватель, оттаивание при 85°С 112 55 49,0 1,3 ±0,18
Контроль, при 40иС по одной грануле 86 38 44,0 1,2 ±0,22
Из таблицы 8 видно, что оттаивание спермы в оттаивателях при повышенной температуре 85°С не оказало отрицательно влияния на результативность осеменения овцематок по сравнению с контролем (оттаивание по одной грануле при 40°С). Результативность осеменения овцематок спермой оттаянной в электро- и гидрооттаивателях при температуре 85°С была достоверно выше, чем в контроле на 4,8% и 5,0% соответственно^ < 0,05). Полученные результаты согласуются с ранее проведенными нами исследованиями (Чернова И.Е., Епишина Т.М., 1991; Чернова И.Е., 1997) по изучению оплодотворяющей способности спермы баранов, оттаянной в электро- и гидрооттаивателях при температуре 80°С, когда результативность осеменения была на уровне контроля.
Наши исследования по температурным режимам оттаивания спермы баранов в модифицированных электро- и гидрооттаивателях показали, что оптимальной температурой оттаивания является 85°С.
При этом было установлено, что повышение температуры достоверно ускоряет начало и окончание процесса и не приводит к перегреванию порций оттаянной спермы, так как используемый в приборах принцип отделения жидкой фазы от твердой, позволяет оттаявшим порциям спермы сразу вытекать из тубы без дальнейшего нагрева.
Модифицированные электро- и гидрооттаиватели ОГСБ-2М и ОГСБВ конструкции ВНИИплем нашли свое практическое применение в овцеводческих хозяйствах Российской Федерации.
3.6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ФИЗИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СПОСОБОВ СТИМУЛЯЦИИ ЭСТРУСА У СВИНЕЙ
Для стимуляции эструса у свиней используют ряд биотехнологических приемов, в частности, с применением физических способов воздействия на точки акупунктуры (Ерохин А.С, Епишина Т.М., Пухтинов О.Н., 2004).
В нашей работе для электростимуляции биологически активных точек у свиней мы исследовали новый электростимулятор «ДЭНАС», воздействующий на биологически активные точки (БАТ) импульсным током с частотой 10 Гц и напряжением 9 вольт, длительность серий импульсов 4,5 сек., длительность паузы между сериями импульсов 2 сек.
Экспериментальные данные по изучению влияния электростимуляции двух биологически активных точек № 38 и № 41 (Hsia 1., Lee L., 1988) у основных свиноматок в послеотьемный период на их репродуктивные показатели приведены в таблице 9.
Таблица 9.- Влияние электростимуляции биологически активных точек на репродуктивную функцию свиноматок
Изучаемые показатели Группа свиноматок
Опытная Контрольная
Общая продолжительность электростимуляции двух точек, мин 10 -
Количество маток в группе, голов 158 160
Количество маток, проявивших признаки эструса в течение 7 суток после отъема поросят: голов % 150 94,9 ± 2,48х 127 79,3 ±2,24
Средний интервал времени от отъема до наступления эструса, суток 5,0 ± 0,41х 6,6±0,38
Опоросилось: голов 136 111
% 90,7 87,4
Среднее многоплодие маток, голов 10,3 ±0,2 10,2 ±0,1
Средняя живая масса поросенка при рождении, кг 1,42 ±0,07 1,37 ±0,08
Средняя живая масса поросенка при отъеме в 60 дней, кг 19,1 ±0,90 19,3 ±0,70
Сохранность поросят к отъему, % 90,8 89,3
х- Р <0,05
Результаты данных таблицы 9 свидетельствуют, что однократная последовательная электропунктурная стимуляция двух биологически
активных точек на протяжении 10-ти минут клинически здоровым свиноматкам на следующие сутки после отъема поросят способствует достоверному увеличению количества маток, проявивших признаки эструса в течение 7 суток после отъема поросят в среднем - на 15,6%, сокращению интервала от отъема до наступления эструса в среднем на 24,25% (Р <0,05), и повышению оплодотворяемости маток в среднем на 3,3%, по сравнению с их аналогами в контрольной группе.
Наступление эструса у ремонтных свинок происходит не всегда синхронно и в условиях промышленной технологии содержания у них довольно часто отмечается задержка полового созревания и нарушение половой цикличности.
В задачу наших исследований входило изучение возможности индуцирования эструса у ремонтных свинок с помощью электростимулятора «ДЭНАС», воздействующего на точки акупунктуры 38 и 41 импульсным током.
Не пришедшим в охоту клинически здоровым, нормально развитым ремонтным свинкам, в возрасте 8-9 месяцев и живой массой 120-130 кг проводили однократную последовательную электропунктуру двух биологически активных точек на протяжении 10-ти минут. Электростимуляция способствовала достоверному увеличению количества свинок, проявивших признаки эструса в течение 12 суток после стимуляции в среднем на 10,0%, сокращению среднего интервала времени от обработки до наступления эструса в среднем на 25,0% (Р < 0,05) и повышению многоплодия маток на 0,3 поросенка, по сравнению с их аналогами в контрольной группе.
Полученные результаты свидетельствуют об эффективности применения однократной электростимуляции биологически активных точек аппаратом «ДЭНАС» для улучшения репродуктивных качеств у свиней.
Одной из причин удлинения интервала от отъема до наступления эструса, обусловлено стрессовыми ситуациями свиноматок содержащихся в условиях промышленных технологий, что оказывает отрицательное влияние на ритмичность воспроизводства стада. Чаще данная проблема возникает в летние периоды при значительном повышении температуры воздуха, что способствует проявлению теплового стресса. При этом в организме животных может увеличиваться концентрация продуктов пероксидного окисления липидов, оказывающих отрицательное влияние на созревание и овуляцию яйцеклеток.
Мы решили изучить возможность улучшения репродуктивных
способностей свиноматок в летний период путем однократной внутримышечной инъекции им на следующие сутки после отъема поросят синтетического водорастворимого антиоксидакта амбиола (2-метил-4-диметил-аминометил- 5-гидроксибензимидазол- дигидрохлорид), синтезированного в Институте химической физики (Москва). Результаты исследований суммированы в таблице 10.
Таблица 10 - Влияние внутримышечного введения синтетического антиоксиданта амбиола на репродуктивные показатели свиноматок
Показатели Группа свиноматок
1 2 3 Контроль
Доза амбиола, мг/животное 2 4 8 -
Количество маток в группе 59 54 51 63
Количество маток, проявивших признаки эструса в течение 7 суток после отъема поросят: голов % 49 83,0 45 83,3 47 92,1 49 77,7
Средний интервал от отъема до наступления эструса, суток 6,0±0,8 5,8Х±0,9 5,2Х±1,0 6,4±0,9
Опоросилось: голов % 40 81,6 37 82,2 38 80,8 40 81,6
Среднее многоплодие, голов 10,0±0,7 10,2±0,9 10,4±0,6 10,1±0,8
Мертворожденных поросят, % 3,7 3,4 3,8 3,9
Сохранность поросят, % 89,0 88,3 90,4 89,2
Средняя живая масса поросенка при рождении, кг 1,2±0,06 1,3±0,05 1,2±0,07 1,3±0,04
х-Р < 0,05
Однократное внутримышечное введение антиоксиданта амбиола в дозе 4,0 или 8,0 мг на животное клинически здоровым свиноматкам через сутки после отъема поросят способствует достоверному увеличению количества маток проявивших признаки эструса в течение 7 суток после отъема поросят в среднем на 5,6 и 14,4% соответственно, и сокращению интервала от отъема до наступления эструса в среднем на 9,4 и 18,8 % соответственно, при Р <0,05.
Далее в задачу наших исследований входило изучение стимуляции эструса у ремонтных свинок в летний период с помощью однократной
внутримышечной инъекции синтетического антиоксиданта амбиола.
Однократная внутримышечная инъекция не пришедшим в охоту клинически здоровым, нормально развитым ремонтных свинкам в возрасте 8-9 месяцев, достигшим 120-130кг синтетического антиоксиданта амбиола в дозе 4,0 или 8,0 мг на животное способствовала достоверному увеличению количества маток проявивших признаки эструса в течение 10 суток после инъекции, в среднем на 13,4 и 18,5% соответственно. Интервал времени от обработки до прихода в охоту достоверно сократился в среднем на 35,6 и 33,4% соответственно по сравнению с контролем (Р<0,05).
Положительное действие амбиола на ускорение эструса у свиней в послеотъемный период может быть обусловлено не только его антиоксидантным влиянием, но и рядом других механизмов действия. В частности, имеются данные, что амбиол оказывает адаптогенное, антистрессовое и ганадотропное действие (Гуськов A.M. и др., 1993).
Полученные результаты свидетельствую об эффективности стимуляции половой доминанты у свиноматок и ремонтных свинок с применением однократной электропунктуры аппаратом «ДЭНАС» или однократной внутримышечной инъекции синтетического антиоксиданта амбиола.
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что каталитическая активность ферментов ACT, AJIT, ЩФ, СОД, ГПО, ГР и содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина в нативной семенной плазме баранов выше, чем хряков, активность ЛДГ выше в нативной семенной плазме хряков, чем баранов.
2. В процессе хранения разбавленной спермы увеличение активности ферментов и содержание других компонентов клеточного метаболизма в семенной плазме баранов происходит раньше, чем хряков, и быстрее достигается пороговый уровень данных показателей, что обусловлено более ранним нарушением метаболизма гамет баранов, сохраняемых вне организма во времени.
3. Потеря половыми клетками антиоксидантных ферментов, влияет на их устойчивость к образованию продуктов пероксидного окисления липидов, сперма хряков более устойчива к инициации пероксидного окисления липидов, по сравнению со спермой баранов.
4. Установлено, что фенольные антиоксиданты ИХФГАН не оказывают защитного влияния на сперму хряков, сохраняемую при 16°С, но проявляют криозащитное действие на сперму баранов при её глубоком
замораживании. Введение нового синтетического антиоксиданта сукцината натрия в состав ГЖУК-трис-буферной среды для замораживания спермы баранов увеличивает результативность искусственного осеменения овцематок на 11,2% и их многоплодие на 12 голов в расчете на 100 маток.
5. Усовершенствованная ГХЦС среда для краткосрочного хранения спермы хряков при 16°С с применением в качестве антиоксиданта этанола повышает оплодотворяемость свиноматок и их многоплодие.
Усовершенствованная ГХЦС среда с применением BSA и восстановленного глутатиона для долговременного хранения спермы хряков при 16-17°С повышает оплодотворяемость свиноматок на 12,5% через пять суток хранения.
6. Способ повышения оплодотворяющей способности спермы баранов с применением препарата ФЛПГ повышает оплодотворяемость овец на 12,6% и их многоплодие на 13%.
7. Обработка спермы низкоинтенсивным лазерным излучением оказывает защитное действие на биологическую полноценность и фертильность спермы баранов и не оказывает на сперму хряков, а действие арсенид-галлиевого лазера более эффективно по сравнению с гелий-неоновым лазером. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец охлажденной спермой.
8. Модифицированный электроотаиватель ОГСБ-2М с диаметром тубы 25 мм и разделительной пластиной в тубе 3,4 мм, с одновременным оттаиванием до 20 гранул замороженной спермы баранов при температуре 85°С, повышает качество оттаянной спермы и её фертильность. Применение электрооттаивателя позволяет стабилизировать режим оттаивания, сокращает время обслуживания прибора, повышает производительность и культуру производства.
9. Однократная электропунктурная стимуляция двух биологически активных точек на протяжении 10 минут у свиноматок через сутки после отъема поросят с применением аппарата «ДЭНАС», сокращает интервал времени от огьёма до наступления эструса в среднем на 24,25%, у ремонтных свинок от стимуляции до наступления эструса в среднем - на 25,0% (Р <0,05), и повышает репродуктивные качества свиней.
10. Однократное внутримышечное введение синтетического антиоксиданта амбиола свиноматкам через сутки после отъема поросят в дозе 4,0 или 8,0 мг на животное сокращает интервал от отъема до наступления эструса в среднем на 9,4 и 18,8% соответственно, у ремонтных свинок от стимуляции до наступления эструса в среднем на 34,5%.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. В целях повышения результативности искусственного осеменения свиней и овец рекомендуем хозяйствам и организациям по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных применять усовершенствованные синтетические среды:
- для хранения спермы хряков при температуре 1б-17°С: - при долговременном хранении с концентрацией восстановленного глутатиона 0,002% и бычьего сывороточного альбумина (BSA) 0,2-0,3% в составе ГХЦС среды; - при краткосрочном (24 часовом) хранении - ГХЦС-среду с концентрацией этанола 0,1 5-0,20% (патент № 2370033),
- для глубокого замораживания спермы баранов - ГЖУК-трис-буферную среду с концентрацией препаратов в составе среды ИХФГАН-3 - 0,004-0,016% (патент № 2048796); ИХФГАН-5 - 0,002-0,008% (патент № 2083183); ФЛПГ - 125 мкг/мл (патент № 2297197); костного клея -1,8% (патент № 2198622 ); сукцината натрия - 0,03% (патент № 2323702).
2. Для повышения эффективности искусственного осеменения овец криоконсервированной спермой, замороженной в виде гранул, предлагаем хозяйствам оттаивать сперму баранов в электро- или гидрооттаивателях конструкции ВНИИплем при температуре 85°С.
3. В целях стимуляции эструса у ремонтных свинок и у свиноматок после отъема поросят рекомендуем применять однократную электропунктуру биологически активных точек (38 и 41) продолжительностью 10 минут электростимулятором «ДЭНАС», или однократную внутримышечную инъекцию антиоксиданта амбиола в дозах 4,0 или 8,0 мг на животное.
4. Результаты полученных исследований предлагается включать в образовательные программы по дисциплинам «Акушерство, гинекология и искусственное осеменение», «Овцеводство» и «Свиноводство» при подготовке специалистов биологического и ветеринарного профиля, а также - бакалавров и магистров сельского хозяйства по специальности «Зоотехния».
СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Публикации в рецензируемых журналах ВАК РФ
1. Епишина Т.М. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на криорезистентность семени баранов / Епишина Т.М. // Ветеринарная патология .-2009.- № 2- С. 32-33
2. Епишина Т.М. Эффективность стимуляции эструса у свиней с
помощью физических фактооов / Епишина Т.М. // Зоотехния.- 2009.-№2-С. 29-30.
3.Епишина Т.М. Влияние синтетических простагландинов на оплодотворяющую способность криоконсервированной спермы баранов / Епишина Т.М. // Доклады РАСХН.-2009.- №3.- С.59-60.
4.Епишина Т.М. Влияние лазерного излучения на фертильность спермы баранов сохраняемой при 16°С / Епишина Т.М.// Овцы, козы, шерстяное дело. -2009 - №2. - С. 66.
5.Епишина Т.М. Влияние электроакупунктуры биологически активных точек на индуцирование эструса у ремонтных свинок / Епишина Т.М. //Ветеринария и кормление.- 2009.-№1.- С. 11-12
6.Епишина Т.М. Влияние препарата амбиола на результативность стимуляции эструса у ремонтных свинок /Епишина Т.М.// Свиноводство.-2009,-№3.-С. 27-28.
7.Епишина Т.М. Эффективность электроакупунктурной стимуляции эструса у свиноматок /Епишина Т.М.// Свиноводство.- 2008.- №6- С. 2224.
8.Епишина Т.М. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на биологическую полноценность сперматозоидов хряков /Епишина Т.М., Пухтинов О.Н. // Ветеринария и кормление.- 2008. - № 4,- С. 24-26.
9.Епишина Т.М. Репродуктивные способности ремонтных свинок при электростимуляции биологически активных точек / Епишина Т.М. // Ветеринарная патология,- 2008.- №3. - С.38-40.
Ю.Епишина Т.М. Стимуляция эструса у свиней с помощью электроакупунктуры / Епишина Т.М.// Зоотехния.- 2008.- №10. - С.32-33.
11 .Епишина Т.М. Новый криопротектор синтетической среды для разбавления и криоконсервации спермы баранов /Епишина Т.М., Деряженцев В.И.// Ветеринарная патология.- 2008,- №3,- С. 36-38.
12.Епишина Т.М. Электростимуляция эструса у свиней /ЕпишинаТ.М. //Ветеринария.- 2008.-№12.-С.36-38
13.Деряженцев В.И. Способ повышения оплодотворяющей способности криоконсервированной спермы баранов / Деряженцев В.И., Епишина Т.М.// Овцы, козы, шерстяное дело.- 2008.-№4,- С. 21-24.
14. Ерохин A.C. Влияние бычьего сывороточного альбумина на фертильность охлажденного семени хряков /Ерохин A.C., Епишина Т.М., Федина Н.И.// Свиноводство.-2007.- №4.- С.26-27.
15. Ерохин A.C. Действие эфиров глицерина на криоустойчивость спермы баранов / Ерохин A.C., Епишина Т.М., Чернова И.Е.// Доклады РАСХН.-1998.-№3,- С.39-41.
16. Ерохин A.C. Криозащитное действие синтетических
антиоксидантов при криоконсервации спермы баранов / Ерохин A.C., Никифоров Г.А., Епишина Т.М., Чернова И.Е.// Сельскохозяйственная биология,- 1996.- №6.- С.62-68.
Публикации в материалах конференций и других изданиях
17. Епишина Т.М. Повышение репродуктивных качеств свиней и овец / Епишина Т.М. // Под редакцией В.Д. Кабанова - Москва.- 2009.-168с.
18. Национальная технология искусственного осеменения овец /Дунин И.М. Деряженцев В.И., Ерохин A.C., Бортников A.M., Никонов В.В., Епишина Т.М., Григорян J1.H., Хататаев С.А., Шайдуллин И.Н., Айбазов A.M., Советкин C.B.// - Лесные Поляны,-2010,- 93 с.
19. Наставление по применению ГЖУК-трис-буферной среды для разбавления, замораживания, хранения и использования спермы баранов производителей /Деряженцев В.И., Ерохин A.C., Епишина Т.М., Советкин C.B., и др.//- М. -1992.- 25 с.
20. Патент на изобретение №2048796 Среда для разбавления и замораживания спермы баранов /Ерохин A.C., Никифоров Г.А., Деряженцев В.И., Чернова И.Е., Епишина Т.М.//- per. от 27.11.1995. -Бюлл. №33.-1с.
21. Патент на изобретение №2083183 Синтетическая среда для разбавления и замораживания спермы баранов /Ерохин A.C., Никифоров Г.А., Епишина Т.М. Чернова И.Е.//- per. от 10.07.1997. -Бюлл, № 9.-1 с.
22. Патент на изобретение №2198622 Синтетическая среда для разбавления и замораживания спермы баранов /Деряженцев В.И., Никонов В.В., Епишина Т.М.//- per. от 20.02.2003. - Бюлл. № 5.- 1с.
23. Патент на изобретение №2297197 Способ повышения оплодотворяющей способности спермы баранов /Деряженцев В.И., Дунин И.М., Епишина Т.М., Никонов B.B.//- per. от 20.04.2007. - Бюлл. №11.-1 с.
24. Патент на изобретение №2323702 Синтетическая среда для разбавления и криоконсервации спермы баранов /Деряженцев В.И., Дунин И.М., Епишина Т.М., Корниенко-Жиляева Л .В.//- per. от 10.05.2008.-Бюлл. № 13.-1 с.
25. Патент на изобретение №2370033 Синтетическая среда для хранения спермы хряков в охлажденном состоянии /Ерохин A.C., Епишина Т.М.// per. от 20.10.2009. - Бюлл. № 29.- 7 с.
26. Епишина Т.М. Индуцирование эструса у ремонтных свинок с применением электроаккупунктуры /Епишина Т.М.// Международная научно-практическая конференция «Инновационные технологии в свиноводстве» - Геленджик,- 2009,- С. 18
27. Erokhin A.S. Effect of some polyethylene glycols and glycerol esters on cryoresistence of ram spermatozoa. /Erokhin A.S., Epishina T.M. // 5th annual conference of the European society for domestic animal reproduction in collaboration with the European veterinary society for small animal reproduction.- Vienna.- 2001.- P.59-60.
28.Епишина Т.М. Криозащитное действие этиленгликоля на сперматозоиды барана /Епишина Т.М.// Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения с.-х. животных Сб. трудов- М. -1992,- С.25-28.
29.Епишина Т.М. Криозащитное влияние декстрина на сперматозоиды барана в зависимости от условий его хранения / Епишина Т.М. // НИИТЭИ,- Агропром.- 1995,- № 16344.- С. 22-24.
30.Епишина Т.М. Влияние конструкции водяного оттаивателя на биологические показатели спермы баранов /Епишина Т.М.// ВНИИТЭИ.-Агропром,- М-. 1995.- № 16346,- 5с.
31.Епишина Т.М. Криозащитное действие различных полиэтиленгликолей на сперму баранов /Епишина Т.М.// ВНИИТЭИ.-Агропром.- М,- 1998,- №17398.
32.Епишина Т.М. Новый антиоксидант криопротектор спермы баранов /Ерохин А.С., Епишина Т.М., Чернова И.Е.// Зоотехния,- М.-1994,-№10.- 24-26.
33.Епишина Т.М. Влияние гиалуроновой кислоты на криоустойчивость спермы хряков и баранов /Епишина Т.М // ВНИИТЭИ.-Агропром.- М-. 1998.- № 17660.
34. Епишина Т.М. Изучение влияния селена на устойчивость спермы хряков к хранению в охлажденном состоянии /Епишина Т.М., Волков В.М., Сейдахметов Б.С.// Сб.трудов ВНИИ плем. -М.-2002,-Вып.13. С.158-159.
35. Епишина Т.М. Влияние хитозана на живучесть сперматозоидов хряка при 4 и 17°С. /Епишина Т.М., Федина Н.И. // Сб. научных трудов ВНИИ плем,- 2004,- Вып. 17.- С.96-98.
36.Епишина Т.М. Защитное влияние антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к холодовому шоку/ Епишина Т.М., Можако В.Н. // Сб. трудов ВНИИ плем. - 2004,- вып. 19.-С. 20-22
37. Епишина Т.М. Совершенствование синтетической среды для разбавления и хранения спермы хряка при 16°С /Епишина Т.М., Можако В.Н. // Сб. трудов ВНИИ плем.- 2004.- вып. 19,- С.22-24
Подписано в печать:
25.04.2011
Заказ № 5411 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Епишина, Татьяна Михайловна
ВВЕДЕНИЕ.
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1.ОСНОВНЫЕ ФАКТОРЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ОХЛАЖДЕНИИ И ЗАМОРАЖИВАНИИ.
1.1.1. Механизмы криоповреждения сперматозоидов в процессе их охлождения до плюсовых температур и глубокого замораживания.
1.1.2. Современные методы хранения спермы животных в глубокозамороженном состоянии.
1.1.3. Хранение спермы хряков и баранов охлаждённой до плюсовых температур.
1.1.4. Физические способы обработки спермы.
1.1.5. Режимы замораживания и оттаивания спермы.
1.2. ЭФФЕКТИВНОСТЬ СТИМУЛЯЦИИ И СИНХРОНИЗАЦИИ ЭСТРУСА
У СВИНЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ*РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. ИЗУЧЕНИЕ ВИДОВЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ИЗМЕНЕНИЯ
МЕТАБОЛИЗМА ГАМЕТ ХРЯКОВ И БАРАНОВ
ПРИ ХРАНЕНИИ IN VITRO.
3.1.1. Сравнительные биохимические исследования семенной плазмы нативной и разбавленной спермы хряков и баранов сохраняемой в охлажденном состоянии.
3.1.2. Влияние температурных режимов хранения на уровень содержания продуктов пероксидного окисления липидов в сперме хряков и баранов.
3.1.3 Исследование активности антиоксидантных ферментов в семенной плазме нативной и разбавленной сперме хряков и баранов при хранении в охлажденном состоянии.
3.2. ИЗУЧЕНИЕ ЗАЩИТНОГО ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ
В СОСТАВЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ
СПЕРМЫ ХРЯКОВ В ОХЛАЖДЕННОМ СОСТОЯНИИ.
3.2.1. Выяснение защитного действия натуральных и синтетических антиоксидантов в составе разбавителей для спермы хряков.
3.2.1.1. Влияние новых синтетических жирорастворимых фенольных антиоксидантов ИХФГАН на хранение спермы хряков в охлаждённом состоянии.
3.2.1.2. Изучение влияния этилового спирта в составе ГХЦС среды на живучесть и фертильность сперматозоидов в охлажденной сперме хряков.
3.2.1.3. Изучение влияния сукцината хитозана на живучесть сперматозоидов в охлажденной сперме хряков.
3.2.1.4. Влияние препаратов селена на живучесть сперматозоидов хряков сохраняемых при температуре 4°С и 17°С.
3.2.1.5. Изучение влияния гиалуроновой кислоты на криоустойчивость спермы хряков.
3.2.1.6. Эффективность использования бычьего сывороточного альбумина и восстановленного глутатиона в составе ГХЦС среды для длительного хранения спермы хряков при температуре 17°С.
3.3. ИЗУЧЕНИЕ ЗАЩИТНОГО ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВЕЩЕСТВ
В СОСТАВЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ
СПЕРМЫ БАРАНОВ.
3.3.1. Действие синтетических и натуральных антиоксидантов на сперму баранов.
3.3.1.1. Влияние синтетических жирорастворимых фенольных антиоксидантов ИХФГАН на криорезистентность и фертильность спермы баранов.
3.3.1.2. Антиоксидантная активность препарата ИХФГАН-3.
3.3.1.3. Влияние солей янтарной кислоты на биологическую полноценность криоконсервированной спермы баранов.
3.3.1.4. Изучение защитного действия сукцинита хитозана на хранение спермы баранов в охлажденном и глубокозамороженном состоянии.
3.3.2. Исследование защитного действия на сперму баранов биологически активных веществ и других криопротекторов.
3.3.2.1 Влияние гиалуроновой кислоты на криоустойчивость спермы баранов.
3.3.2.2 Изучение криопротективного действия костного клея в составе среды для замораживания спермы баранов.
3.3.2.3 Влияние этиленгликоля на криоустойчивость спермы баранов.
3.3.2.4 Криопротективная активность полиэтиленгликолей с разной молекулярной массой.
3.3.2.5 Защитное действие различных эфиров глицерина при глубоком замораживании спермы баранов.
3.3.2.6 Способ повышения оплодотворяющей способности криоконсервированной спермы баранов с применением препарата ФЛПГ.
3.4 ВЛИЯНИЕ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ
НА БИОЛОГИЧЕСКУЮ ПОЛНОЦЕННОСТЬ И ФЕРТИЛЬНОСТЬ СПЕРМЫ
БАРАНОВ И ХРЯКОВ.
3.4.1. Влияние лазерного излучения на биологическую полноценность и фертильность спермы баранов сохраняемой при 4°С.
3.4.2. Влияние лазерного излучения на биологическую полноценность спермы баранов сохраняемой при температуре 16°С.
3.4.3. Изучение влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на абсолютный показатель живучести сперматозоидов в охлажденной до температуры 17°С сперме хряков.
3.5. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ОТТАИВАНИЯ СПЕРМЫ БАРАНОВ
В МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЭЛЕКТРО- И ГИДРООТТАИВАТЕЛЯХ.
3.5.1. Эффективность оттаивания спермы баранов в модифицированном электрооттаивателе ОГСБ-2М.
3.4.2. Результативность оттаивания спермы баранов в гидрооттаивателях ОГСБВ с различной модификации.
3.6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ФИЗИЧЕСКИХ И
БИОЛОГИЧЕСКИХ СПОСОБОВ СТИМУЛЯЦИИ ЭСТРУСА У СВИНЕЙ.
3.6.1. Эффективность электропунктурной стимуляции эструса у свиноматок с применением аппарата «ДЭНАС».
3.6.2. Влияние электростимуляции биологически активных точек аппаратом «ДЭНАС» на индуцирование эструса у ремонтных свинок.
3.6.3. Стимуляция эструса у свиноматок с применением однократной внутримышечной инъекции синтетического антиоксиданта амбиола.
3.6.4. Влияние однократной инъекции препарата амбиола на стимуляцию половой доминанты у ремонтных свинок.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование способов повышения воспроизводительных качеств свиней и овец"
Среди фундаментальных проблем зоотехнической науки одной из наиболее актуальных является повышение эффективности воспроизводства стада путем максимального использования высокоценных племенных производителей, что имеет большое значение для обеспечения дальнейшего прогресса в животноводстве. Важное направление улучшения репродукции -применение метода искусственного осеменения. Одним из определяющих факторов результативности искусственного осеменения является совершенствование методов хранения спермы животных в охлажденном или глубокозамороженном состоянии.
При технологической обработке спермы, разбавлении ее синтетическими средами и хранении в охлажденном или глубокозамороженном состоянии происходят значительные структурные и биологические повреждения сперматозоидов, которые приводят к нарушению проницаемости плазматических мембран и выхода из сперматозоидов ряда ферментов и других компонентов клеточного метаболизма, что значительно снижает фертильность спермы (Курбатов А.Д., Платов Е.М., и др., 1988; Ерохин A.C., 1995;1996; Шапиев И.Ш., 1998; Нарижный А.Г. и др. 1995; 2005). В качестве нашей рабочей гипотезы служило предположение, что степень выхода ферментов из сперматозоидов зависит от вида животных, локализации фермента и прочности связывания его со структурами сперматозоида, состава используемой среды, режимов хранения и др. Поэтому выяснение состояния аминокислотно-белкового, углеводного, липидного и липопротеидного обмена, системы ферментативной антиоксидантной защиты, развитие процессов пероксидного окисления липидов в процессе хранения разбавленной спермы, позволит наметить новые пути повышения биологической полноценности сперматозоидов при краткосрочном и долговременном хранении спермопродукции. Решению этой важной проблемы могут послужить сравнительные исследования межвидовых особенностей сперматозоидов хряков и баранов, по-разному реагирующих на термодинамические процессы, а, следовательно, на формирование защитных реакций и адаптационных свойств при хранении вне организма.
В этой связи представляется перспективным разработать по результатам биохимических исследований- более эффективные синтетические среды для краткосрочного и долговременного хранения спермы хряков и баранов с применением антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов.
Приобретает большое значение применение физических способов обработки спермы, в частности, с использованием низкоинтенсивного лазерного излучения, и улучшение технологии оттаивания спермы баранов.
Актуальной и важной задачей является совершенствование методов повышения1 воспроизводительной способности свиноматок. В условиях промышленных технологий нередко ^ отмечается замедление полового созревания свинок и задержка наступления эструса у свиноматок после очередного отъема поросят. Результативность осеменения и многоплодие маток в данных условиях тоже понижены.
Кроме того, в летнее время у большинства свиноматок наступает депрессия половой функции, что проявляется длительным анэструсом и снижением результативности осеменения животных. Это приводит к нарушению ритмичности циклов производства продукции в крупных свиноводческих комплексах. В этой связи, необходимы дальнейшие исследования по совершенствованию способов стимуляции эструса у основных свиноматок и ремонтных свинок.
Цель исследований: совершенствование методов краткосрочного и длительного хранения спермы хряков и баранов, повышение эффективности стимуляции эструса у свиноматок и разработка на этой основе результативных способов улучшения репродуктивных качеств свиней и овец.
Достижение поставленной цели осуществлялось путем решения следующих задач:
- изучить видовые особенности изменения активности ферментов аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы (АСТ, АЛТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержания общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина и системы ферментативной антиоксидантной защиты - супероксид-дисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГПО), глутатионредуктазы (ГР) и каталазы в семенной плазме нативной спермы хряков и баранов, а также влияние хранения разбавленной спермы на выход указанных высокомолекулярных биохимических соединений из сперматозоидов в семенную плазму;
- определить концентрацию продуктов пероксидного окисления липидов в нативной, а затем в разбавленной и сохраняемой при температуре 16°С сперме сравниваемых видов животных, и в оттаянной после глубокого замораживания до -196°С сперме баранов;
- осуществить поиск и изучить влияние на сперму хряков и баранов новых синтетических и натуральных антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов; разработать синтетические среды для долговременного и краткосрочного хранения спермы хряков, сохраняемой при температуре 1617°С; разработать более эффективные криозащитные среды для сперматозоидов баранов при глубоком замораживании спермы;
- провести сравнительное исследование криопротективного влияния низкоинтенсивного излучения гелий-неонового и арсенид-галлиевого лазеров на биологическую полноценность сперматозоидов хряков и баранов; разработать технологию оттаивания спермы баранов в модифицированных электрооттаивателе ОГСБ-2М и гидрооттаивателе ОГСБВ;
- выяснить эффективность стимуляции эструса у основных свиноматок и ремонтных свинок с помощью однократной электропунктуры биологически активных точек с применением аппарата «ДЭНАС», или однократной внутримышечной инъекции антиоксиданта амбиола.
Научная новизна исследований. В проведенных впервые сравнительных исследованиях спермы хряков и баранов выявлены видовые особенности изменения метаболизма и защитных свойств гамет, сохраняемых in vitro* при различных температурных режимах хранения, во времени, выражающиеся в выходе окислительных и гидролитических ферментов и других компонентов клеточного метаболизма из сперматозоидов в семенную плазму, инициацией ПОЛ, и ингибированием ферментативной антиоксидантной активности (АОА).
Выявлено, что активность ферментов ACT, АЛТ, ЩФ, СОД, ГПО, ГР и содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина в семенной плазме нативной спермы баранов выше, чем хряков, активность ЛДГ выше у хряков, чем у баранов. Хранение разбавленной спермы индуцирует выход из сперматозоидов в семенную плазму изученных ферментов и других компонентов клеточного метаболизма и усиливает пероксидное окисление липидов преимущественно в сперме баранов. Замораживание-оттаивание спермы баранов приводит к более глубоким изменениям метаболизма сперматозоидов.
На основе полученных результатов биохимических исследований разработаны новые синтетические среды для хранения спермы хряков, охлажденной до температуры 16-17°С, и спермы баранов, сохраняемой при температуре -196°С с применением антиоксидантов, биологически активных веществ и других криопротекторов.
В практику свиноводства внедрены новые синтетические среды для долговременного (до 5-ти суток) и краткосрочного хранения спермы хряков при температуре 16-17°С (патент № 2370033).
В практику овцеводства внедрены новые усовершенствованные синтетические среды для глубокого замораживания спермы баранов (патенты: 2048796, № 2083183, № 2323702, № 2198622) и на основании изучения оптимального; режима оттаивания спермы баранов внедрены модифицированные . электрооттаиватель . ОГСВ-2М и гидрооттаиватель ОГСБВ. ■'• ' ■ • : Разработан новый способ повышения оплодотворяющей способности спермы баранов после глубокого ее замораживания с применением; препарата ФЛГ1Г (патент № 2297197). . - ^
Выявлены видовые, различия воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на сперматозоиды хряков и баранов: При этом установлено; что обработка спермы сравниваемых видов' животных оказывает защитное действие на биологическую полноценность, спермы баранов и не оказывает влияния на сперму хряков, а действие арсенид-галлиевого лазера, более эффективно по сравнению с гелий-неоновым лазером. •
Разработан и внедрен в практику свиноводства способ стимуляции эструса у свиней, однократной электропунктурой биологически активных точек, с использованием нового электростимулятора «ДЭНАС» или однократной внутримышечной инъекции синтетического антиоксиданта амбиола.
Теоретическая и практическая значимость.
Полученные результаты на основе, биохимических исследований но изучению антиоксидантного статуса гамет с избыточным образованием свободных радикалов, и конечных метаболитов типа ТБК (тиобарбитуровая кислота) - реагирующих продуктов положены в основу разработки новых, более эффективных способов усовершенствования синтетических сред, повышающих криорезистентность,. биологическую полноценность и фертильность спермы, которые могут быть применены при совершенствовании методов разбавления и хранения спермы других видов животных. Экспериментальное использование полученных . научных разработок будет способствовать дальнейшему развитию теории биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных на молекулярном уровне с учетом новых достижений в биохимии и генетике.
Усовершенствованные синтетические среды для долговременного и краткосрочного хранения спермы хряков при температуре 16-17°С, и глубокого замораживания спермы баранов, сохраняемой при температуре -196°С, способствуют повышению биологической- полноценности и оплодотворяющей способности спермы.
Применение низкоинтенсивного лазерного излучения позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец охлажденной спермой.
Улучшенная технология оттаивания замороженной спермы баранов в электро- и гидрооттаивателе оказывает положительное влияние на качество и фертильность спермы.
Однократная стимуляция половых функций свиноматок и ремонтных свинок электропунктурным способом с применением аппарата «ДЭНАС» или внутримышечной инъекцией антиоксиданта амбиола ускоряет наступление эструса и повышает результативность искусственного осеменения.
Широкое использование в зоотехнической практике выполненных в диссертации научных разработок и предложений производству будет способствовать решению важной научно-хозяйственной проблемы повышения биологической полноценности и оплодотворяющей способности спермы хряков и баранов, улучшению воспроизводительных качеств свиней и овец, сохранения и рационального использования генофонда племенных животных, повышению эффективности свиноводства и овцеводства.
Реализация результатов исследований. Результаты, полученные в данной работе, использованы при разработке научно-методических документов:
1. Наставление по применению ГЖУК-трис-буферной среды для разбавления, замораживания, хранения и использования спермы баранов-производителей. — Разработано во ВНИИплем (1992) в соответствии с решением Госагропрома, одобрено и рекомендовано в практику
Ветеринарным фармакологическим советом ГУВ Госагропром.
2. Монография «Повышение репродуктивных качеств свиней и овец».-Москва 2009 г.
3. Национальная технология искусственного осеменения овец — Одобрена и рекомендована в практику Ученым Советом ВНИИплем (2010)
4. Новые синтетические среды для длительного и краткосрочного хранения спермы хряков в охлажденном состоянии внедрены в хозяйствах Владимирской области и республики Мордовия.
5. Новые синтетические среды для глубокого замораживания спермы баранов применяются в хозяйствах Саратовской области, республики Калмыкия, Ставропольского края и Горного Алтая.
6. Оттаиватель ОГСБ-2М для спермы баранов, замороженной в виде гранул, широко применяется в хозяйствах Саратовской области и республики Калмыкия.
7. Стимуляция эструса у свиней электропунктурным способом с применением нового электростимулятора «ДЭНАС» применяется в хозяйствах Владимирской области и республики Мордовия.
Результаты полученных разработок подтверждены актами производственных испытаний и внедрений.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: - координационных совещаниях по воспроизводству овец на ВДНХ СССР и ВВЦ (1990-1995 г.г.); - совещании зооветспециалистов Хакасского племобъединения (1994); - конференции «Научно-производственные аспекты развития отрасли свиноводства», Бугульма (2000); - 5-ой Европейской конференции по биологии размножения домашних животных, Вена (2001); - Международной научно-практической конференции « К 100-летию со дня рождения академика В.К.Милованова и профессора И.И.Соколовской», Дубровицы (2004); - Международной научно-практической конференции «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», Дубровицы (2004); Международной научно-практической конференции по биологии размножения животных, ВИЖ, Дубровицы (2007); - Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных», ВИЖ, Дубровицы (2008); Международной научно-практической конференции «Инновационные технологии в свиноводстве», Геленджик (2008); - межкафедральном заседании ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина» (2010).
Основные положения выносимые на защиту:
- результаты биохимических исследований видовых особенностей сперматозоидов хряков и баранов по активности ключевых ферментов и других компонентов клеточного метаболизма, изучение антиоксидантного статуса гамет при хранении спермопродукции;
- разработка и практическое применение усовершенствованных сред для краткосрочного и длительного хранения спермы хряков в охлажденном состоянии и при глубоком замораживании спермы баранов;
- физические способы повышения биологической полноценности спермы хряков и баранов, сохраняемой в охлажденном до плюсовых температур состоянии, с применением низкоинтенсивного излучения арсенид-галлиевого и галий-неонового лазеров, и установление оптимальной технологии оттаивания глубокозомороженной спермы баранов в электр о - и гидрооттаивателях ОГСБ-2М и ОГСБВ;
- новые способы стимуляции половой доминанты у свиноматок и ремонтных свинок с применением однократной электропунктуры аппаратом «ДЭНАС» или однократного внутримышечного введения синтетического водорастворимого антиоксиданта амбиола. ,
Публикации результатов исследований. По теме диссертации получено 6 патентов на изобретение; опубликованы: - монография «Повышение репродуктивных качеств свиней и овец» (2009); - статьи в журналах «Зоотехния», «Ветеринария», «Свиноводство», «Овцы, козы, шерстяное дело», «Сельскохозяйственная биология», «Доклады РАСХН»,
Ветеринарная патология», «Ветеринария и кормление», в тематических сборниках Международных научно-практических конференций. Рекомендации по технологии замораживания и использования спермы баранов включены в «Наставление по применению ГЖУК-трис-буферной среды для разбавления, замораживания, хранения и использования спермы баранов-производителей» (1992), и «Национальная технология искусственного осеменения овец» (2010). Всего по теме диссертации опубликовано 60 работ, из которых 16 в центральных рецензируемых журналах ВАК РФ.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 293 стр. машинописного текста и включает 78 таблиц и 30 иллюстраций. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Список литературы включает 467 источников, в том числе 166 на иностранных языках.
Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных", Епишина, Татьяна Михайловна
выводы
1. Установлено, что каталитическая активность ферментов ACT, AJIT, ЩФ, СОД, ГПО, ГР и содержание общего белка, альбумина, мочевины, триглицеридов, холестерина в нативной семенной плазме баранов выше, чем хряков, активность ЛДГ выше в нативной семенной плазме хряков, чем баранов.
2. В процессе хранения разбавленной спермы увеличение активности ферментов и содержание других компонентов клеточного метаболизма в семенной плазме баранов происходит раньше, чем хряков, и быстрее достигается пороговый уровень данных показателей, что обусловлено более ранним нарушением метоболизма гамет баранов, сохраняемых вне организма во времени.
3. Потеря половыми" клетками антиоксидантных ферментов, влияет на их устойчивость к образованию продуктов пероксидного окисления липидов, сперма хряков более устойчива к инициации пероксидного окисления липидов, по сравнению со спермой баранов.
4. Установлено, что синтетические антиоксиданты ИХФГАН не оказывают защитного влияния на сперму хряков, сохраняемую при 16°С, но проявляют криозащитное действие на сперму баранов при её глубоком замораживании. Введение синтетического антиоксиданта сукцината натрия в состав ГЖУК-трис-буферной среды для замораживания спермы баранов увеличивает результативность искусственного осеменения овцематок на 11,2%.
5. Усовершенствованная ГХЦС среда для краткосрочного хранения спермы хряков при 16°С с применением в качестве антиоксиданта этилового спирта повышает оплодотворяемость свиноматок и их многоплодие.
Усовершенствованная ГХЦС среда с применением BSA и восстановленного глутатиона для долговременного хранения спермы хряков при 1б-17°С повышает результативность искусственного осеменения свиноматок на 12,5% при пятисуточном хранении спермы.
6. Способ повышения оплодотворяющей* способности спермы баранов с применением препарата ФЛПГ повышает оплодотворяемость овец на 12,6% .
7. Обработка спермы низкоинтенсивным лазерным излучением оказывает защитное действие на биологическую полноценность и фертильность спермы баранов и не оказывает на сперму хряков, а действие арсенид-галлиевого лазера более эффективно по сравнению с гелий-неоновым лазером. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения позволяет повысить результативность искусственного осеменения овец охлажденной спермой.
8. Модифицированный электроотаиватель ОГСБ-2М с диаметром тубы 25 мм и разделительной пластиной в тубе 3,4 мм, с одновременным оттаиванием до 20 гранул замороженной спермы баранов при температуре 85°С, повышает качество оттаянной спермы и её фертильность. Применение электрооттаивателя позволяет стабилизировать режим оттаивания, сокращает время обслуживания прибора, повышает производительность и культуру производства.
9. Однократная электропунктурная стимуляция двух биологически активных точек на протяжении 10 минут у свиноматок через сутки после отъема поросят с применением аппарата «ДЭНАС», сокращает интервал времени от отъёма до наступления эструса в среднем на 24,25%, у ремонтных свинок от стимуляции до наступления эструса в среднем - на 25,0%) (Р <0,05), и повышает репродуктивные качества свиней.
10. Однократное внутримышечное введение синтетического антиоксиданта амбиола свиноматкам через сутки после отъема поросят в дозе 4,0 или 8,0 мг на животное сокращает интервал от отъема до наступления эструса в среднем на 9,4 и 18,8% соответственно, у ремонтных свинок от стимуляции до наступления эструса в среднем на 34,5%.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. В целях повышения результативности искусственного осеменения свиней и овец рекомендуем хозяйствам и организациям по искусственному осеменению^ сельскохозяйственных животных применять усовершенствованные синтетические среды:
- для хранения спермы хряков при1 температуре 16-17°С: - при долговременном хранении с концентрацией восстановленного глутатиона 0,002% и бычьего сывороточного альбумина (BSA) 0,2-0,3% в составе ГХЦС среды; - при краткосрочном (24 часовом) хранении - ГХЦС-среду с концентрацией этанола ОД 5-0,20% (патент № 2370033),
- для глубокого замораживания спермы баранов - ГЖУК-трис-буферную среду с концентрацией препаратов в составе среды ИХФГАН-3 - 0,0040,016% (патент № 2048796); ИХФГАН-5 - 0,002-0,008% (патент № 2083183); ФЛПГ - 125 мкг/мл (патент № 2297197); костного клея - 1,8% (патент № 2198622 ); сукцината натрия - 0,03% (патент № 2323702).
2. Для повышения эффективности искусственного осеменения овец криоконсервированной спермой, замороженной в виде гранул, предлагаем хозяйствам оттаивать сперму баранов в электро- или гидрооттаивателях конструкции ВНИИплем при температуре 85°С.
3. В целях стимуляции эструса у ремонтных свинок и у свиноматок после отъема поросят рекомендуем применять однократную электропунктуру биологически активных точек (38 и 41) продолжительностью 10 минут электростимулятором «ДЭНАС», или однократную внутримышечную инъекцию антиоксиданта амбиола в дозах 4,0 или 8,0 мг на животное.
4. Результаты полученных исследований предлагается включать в образовательные программы по дисциплинам «Акушерство, гинекология и искусственное осеменение», «Овцеводство» и «Свиноводство» при подготовке специалистов биологического и ветеринарного профиля, а также -бакалавров и магистров сельского хозяйства по специальности «Зоотехния».
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Епишина, Татьяна Михайловна, Москва
1. Абилов А.И. Обработка воды при приготовлении сред для разбавления семени быков /Абилов А.И., Соколовская И-И.// Зоотехния.-1993.-№8.- С25-27.
2. Абилов А.И. Действие левомизола на иммунный ответ и прирост поросят в период вакцинации /Абилов А.И., Багиров В.А.// ВНИИС.- 1990.-с.220-221.
3. Абилов А.И. Некоторые особенности криоконсервации семени кроликов. /Абилов А.И., Кононов В.П., Комбарова H.A.// Научная конференция сокращение генофонда исчезающих видов млекопитающих и перспектива его развития.- ВИЖ.- Быково.- 1997.- С. 103-104.
4. Абилов А.И. Рациональный метод оценки качества оттаянного семени различных видов животных. /Абилов А.И., Бронская А.З. и др.// Миловановские чтения ВИЖ.- Дубровицы,- 1997.- С.64-65.
5. Абилов А.И. Влияние левомизола на иммунный ответ свиней сохранность и прирост поросят в разные периоды развития / Абилов А.И., Ескин Т.Г., Афонасьев В.И и др.// Свиноводство.- 1998,- №5.- С.29-31.
6. Абилов А.И. Разработка систем повышения резистентности организма свиней при воспроизводстве. /Абилов А.И.// Свиноводство.- 1999.- №4.- С.27-30.
7. Авдеева Т.А. Электро-пунктурная терапия высокопродуктивных коров при гипофункции яичников / Авдеева Т.А., Жабин Н.П., Баталин Ю.Е. //Проблемы сельского хозяйства Сибири. Омск. - 1996. -Вып.2.- С. 31-40.
8. Антонюк B.C. Изменение содержания липидов в сперме хряка в процессе глубокого замораживания / Антонюк B.C.// Доклады ВАСХНИЛ.1982.-№4.- С31-34.
9. Антонюк B.C. Взаимосвязь физиологических функций и биохимических свойств спермы хряков / Антонюк B.C.// Автореферат дисс. докт.биол.наук.-Харьков.- 1984 .- 45 с.
10. Антонюк B.C. Биохимический состав спермы в зависимости от индивидуальных особенностей хряков-производителей / Антонюк B.C.// Зоотехническая наукаБелоруссии.- 1987.- Т 26.-С. 54-58'.
11. Антонюк B.C. Взаимосвязь между качеством эякулята и биохимическими показателями спермы хряков / Антонюк B.C.// Зоотехническая наука Белоруссии.- 1998,- Т 28.-С. 44-48.
12. Аскаров М.С. Регуляция воспроизводительной функции свиноматок на промышленных комплексах /Аскаров М.С. //автореферат, дисс. . канд. биол.наук.- Дубровицы. 1998.- 26 с.
13. Афонасьев В.И. Влияние акрозина на повышение результативности и сохранности поросят / Афанасьев В.И., Абилоа А.И., Михайленко В.М. и др.// Свиноводство.- 1998.- №4.- с.32-35.
14. Афонасьев В.И. Афрозин эффективное средство повышения резистентности огранизма животных /Афонасьев В.И., Абилов А.И., Афонасьев Г.В.// Научно-практическая конференция.- РАМЖ.- Быково.-2000.- С.-76-77.
15. Афонасьев В.И. Разработка систем повышения резистентности организма свиньи при воспроизводстве. / Афанасьев В.В., Абилов А.И., Михайленко А.И.// Свиноводство.- 2007.- №6.- С.-23-26.
16. Бажов Г. Повышение воспроизводительных функций свиней / Бажов Г., Хурум Н., Бахирева JI. // Свиноводство. 1993. - №6. - С. 15-19.
17. Безлюдников Л.Г. Влияние некоторых факторов на спермопродукцию хряков-производителей / Безлюдников Л.Г., Беззубов В.И., Постовалов А.П., и др.// Зоотехническая наука Белоруссии.- 2005,- Т 28.-С. 4850.
18. Балашов Н.Г. Новая среда для сохранения спермы хряков
19. Балашов Н.Г., Силаева, M.B1.// Труды Всесоюзного института экспериментальной ветеринарии.- 1970. -Т.37.- С.15-19.
20. Балашов Н.Г. Новая среда ГХЦС-Н РУ-1 / Балашов Н.Г., Смирнов В., Манько Ю^ // Свиноводство. 1987.-№6:- С.8-12.
21. Башкеев'Е.Д. .Эффективность* стимуляции и синхронизации охоты у маток после отъема поросят/ Башкеев Е.Д., Красикова- З.С. /Свиноводство.-1975.-№8.- С.37-38.
22. Башкеев Е.Д. Биотехнологические способы регулирования воспроизведения / Башкеев Е.Д. //Свиноводство.- 1987.- №6.- С.8-12.
23. Белоус A.M. Молекулярные механизмы криоповреждений мембран / Белоус A.M., Бондаренко В.А., БондаренкоТ.П. //Итоги науки и техники. ВИНИТИ, серия Биофизика.-1978.-Т.9.-С.80-113.
24. Белоус И.М. Замораживание и криопротекция./ Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф.// -М.: Высшая школа.- 1987.- С.27-30.
25. Белоус А.М: Структурные изменения биологических мембран* при охлаждении / Белоус A.M., Бондаренко В.А.// Киев.- 1982.- 256 с.
26. Белоус A.M. Молекулярно- клеточная концепция криоповреждения клетки: роль трансмембранных дефектов / Белоус A.M., Бондаренко В.А., Гулевский-А.К.// Криобиология.- 1987.- №2.- С.3-10.
27. Белоус A.M. Криоконсервация репродуктивных клеток/ Белоус A.M., Грищенко В.И., Паращук Ю.С.// Киев.-Наук. думка.-1996,- 208 с.
28. Бородин И.Ф. Использование когерентного электромагнитного излучения в производстве продукции растениеводства / Бородин И.Ф., Будаговский A.B., Будаговская О.Н. и др. // Доклады РАСХН. 1996.- №5. -С.41-44.
29. Борончук Г.В. Применение новых криопротекторов при длительном сохранении семени сельскохозяйственных животных при -196°С / Борончук Г.В.// Совершенствование методов воспроизводства сельскохозяйственных животных.-Кишинев,- г. Штинница.-1979.- С.37-47.
30. Борончук Г.В. Эффективность использования- различных криопротекторов при* замораживании семени быка и барана / Борончук Г.В. // Усовершенствование методов воспроизводства сельскохозяйственных животных.- Кишинев.- Штинца.-1979.- С.37-47.
31. Бугров А.Д. Сверхбыстрое оттаивание спермы быков производителей / Бугров А.Д., Осташко Ф.И., Олесенко Т.И. //Молочное и мясное скотоводство. -1978.- № 12.-С.24-25.
32. Бугров А.Д. Способ оттаивания замороженной спермы быков в различной упаковке / Бугров А.Д.// Животноводство. -1986.- № 12.-С.57-59:
33. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания и глицерина на подвижность и ультраструктуру живчиков / Варнавский А.Н. //Овцеводство.-1970.-№'8.- С.22-23.
34. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания на подвижность и ультраструктуру живчиков / Варнавский А.Н. //Доклады ВАСХНИЛ.-1970.-№ 10.- С.33-34.
35. Варнавский А.Н. Изучение акросомы спермиев барана с помощью фазово контрастной микроскопии / Варнавский А.Н. //Доклады ВАСХНИЛ. 1978.- №6.- С.33-34.
36. Варнавский А.Н. Возможная причина снижения оплодотворяющей способности замороженного семени / Варнавский А.Н. //Овцеводство.-1982.-№2.- С.28-30.
37. Варнавский А.Н. Новые среды для замораживания спермы баранов / Варнавский А.Н., Варнавская В.А., Зайцев В.В. //Зоотехния.-1989.-№9.- С.46-49.
38. Варламов Е.В. Апробация электроакупунктуры в гинекологии- и акушерстве на промышленном стаде коров. / Варламов Е.В., Горлов Е.П. //
39. Физиология и патофизиология размножения сельскохозяйственных животных.- М. 1989. - С.23-27.
40. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление в биологических мембранах./ Владимиров Ю.А'., Арчаков А.И.//- М.: Наука.- 1972.-252 с.
41. Владимиров Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов / Владимиров Ю.А. и др. // М.: Высшая школа. -1989.- 199 с.
42. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П. //Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика.-1989.-Т.24.-173 С.
43. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах. / Владимиров Ю.А., Азизова O.A., и др. // ВИНИТИ. Сер. Биофизика. — 1991. — Т.29.- С.28-32.
44. Володин В.А. Стимуляция половой охоты у свиноматок / Володин Ю.А. // Ветеринария.- 1987.- № 8. С. 50-53.
45. Володин В.А. Сокращение непроизводительного периода у свиноматок после сверхраннего отьема поросят. / Володин В.А. // Зоотехнические основы интенсификации животноводства. Горький.- 1988. -С. 66-68.
46. Володин В.А. Влияние ферментов на проявление охоты у свиноматок / Володин В.А. // Свиноводство.- 1987. № 4. — С. 31-32.
47. Володин В.А. Влияние физиологической стимуляции на половую функцию ремонтных свиноматок / Володин В.А. // Сельскохозяйственная биология. 1987. - №6. - С. 111-116.
48. Володин В.А. Влияние физиологической стимуляции на морфофункциональные изменения половых органов и желез внутренней секреции у хряков /Володин В.А., Шипилов B.C. // Вестник с.-х. науки. 1987. - № 5.- С. 118-122.
49. Вишневский В.И. Низкотемпературное криоконсервирование спермы сельскохозяйственных животных./ Вишневский В.И., Скорняков Б.А. // Актуальные проблемы криобиологии. Киев: Наукова
50. Думка. 1981. - С. 248 - 280.
51. Вишневский. В. И. Применение УЗ при криоконсервации; /Вишневский В.И: // УЗ в сельском-хозяйстве.- Межвуз: Сб. научн. тр.-Москва. 1988. - С. 52-54.
52. Вишневский В.И. Повышение качественных показателей спермы быков УЗ обработкой /Вишневскии5Ъ.И: //УЗвсельском-хозяйстве.- Мёжвуз? Сб; научн. тр.- Москва. 1988; - С. 55-57.
53. Вишневский В.И; Влияние УЗ колебаний на кристаллизацию-спермы быков-производителей / Вишневский В.И., Марющенко А.В.// Криобиология и криомедицина.- Киев: Наукова Думка. 1975.- №1.- С. 48-50.
54. Гаврилов В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. //Лабораторное дело.- 1983. № 3. -С. 33-35.
55. Голиков А.Г. и др. Физиология сельскохозяйственных, животных /Голиков А.Г. и др.//М;- 1991.-364с.58., Гордон А. Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных. / Гордон А. // Агропромиздат.-М: 1988. - 415 с.
56. Горин В. Ранний отъем поросят и воспроизводительные способности свиноматок / Горин В. // Животноводство. 1979. - № 4.- С. 7071.
57. Григошина М.В. Стимуляция функциональной активности яичников у коров с помощью электроакупунктуры / Григошина М.В., Ерохин А.С. //
58. Сборник трудов ВНИИплем. 1999. -Вып. 7. - С. 36-38.
59. Григорян C.B. Влияние моноэтанол амина на качество спермы при замораживании / Григорян C.B., Назарян В.К., Аракелян Г.А. //Зоотехния. -1990.-№ 4.- С.62-63.
60. Грэхам Е.Ф. Криоконсервация и биохимическая оценка спермы быков и баранов / Грэхам Е.Ф.// Физиология воспроизводства с.-х. животных, материалы советско-американского семинара.- Харьков,- 2002.- С.25-51.
61. Гуськов A.M. Повышение репродуктивной способности животных методом ингибирования перекисного окисления липидов / Гуськов A.M., Дарий Г.Е., Пузына Г.И. //Доклады ВАСХНИЛ- 1993.- №2.- С.71-73.
62. Гуськов A.M. Использование антиоксидантов в качестве ингредиентов криозащитных сред / Гуськов A.M., Дарий Г.Е., Пузына Г.И. // IV конференция «Биоантиоксидант». Москва. -1993.- Т.1 - С. 203-204.
63. Гуськов A.M. Физиолого-биохимические технологические аспекты повышения способности животных / Гуськов A.M.// Автореферат дисс.доктор биол.наук. Дубровицы.- 1993.- 38 с.
64. Гуськов A.M. Особенности криогенных изменений липидов плазматических мембран и функционального состояния гамет быка и хряка / Гуськов A.M., Дмитриенко Н.Г., Букарчук М.Г. //Доклады ВАСХНИЛ. -1998.-№2.- С. 26-28.
65. Дарий Г.Е. Действие неэлектролитов и электролитов на физиологическую полноценность семени быков при замораживании / Дарий Г.Е. //Автореферат дисс.канд.биол.наук. Дубровицы.- 1977.- 26с.
66. Дарий Г.Е. Адаптативный потенциал и воспроизводительная функция животных / Дарий Г.Е. //Автореферат дисс.доктора биол.наук.
67. Дубровицы.- 1993.- 49 с. *
68. Девятков Н.Д. Физико-химические механизмы биологического действия лазерного излучения / Девятков Н.Д., Зубкова С.М. и др. / Успехи совр. биол. 1987. -Вып. 1. -Т. 103. -С. 31-43.
69. Делеу В.Г. Влияние полиолов, антиоксидантов и режимовкриоконсервации на функциональную* полноценность, семени быков-производителей /Делеу В:Г.// Автореферат дисс.канд.биол.наук. Львов.-1984.- 20 с.
70. Деряженцев В .И. Влияние сорбита и лактозы, на криоустойчивость спермьь баранов; // Деряженцев В:И., Епишина' Т.М. //Биология! воспроизведения; и биотехнологические методы- разведения- Сб. трудов.-М.-1992.- С. 84-86.
71. Деряженцевк ВЫИ: Влияние конструкции' водяного? оттаивателя на биологические показатели спермы баранов / Деряженцев В.И., Епишина Т.М., Лехмус И.А. //НИИТЭИ' Агропром. -1995.- № 16346.- С. 18-20.
72. Деряженцев 5 В .И. Новый криопротектор синтетической среды для разбавления* и- криоконсервации спермы баранов. /Деряженцев В.И., Епишина Т.М://Ветеринарная патология,- 2008:- №3.- С. 36-38
73. Дунин И.М. Национальная технология искусственного? осеменения овец. /Дунин- И.М., Деряженцев В.Щ Ерохин А.С., Никонов В.В., Бортников А.М-, Епишина Т.М.// Лесные Поляны.- 2010;- 93 с.
74. Добровольский: Г.А. Повышение эффективности, искусственного осеменения коров« криоконсервированной спермой / Добровольский Г.А.// Автореферат дисс.канд.биол.наук. Лесные Поляны.- 2009;- 26с.
75. Дьяченко Н.Ф. О роли хряков в стимуляции половой функции свиноматок / Дьяченко Н.Ф // Науч.-техн. бюлл. НИИЖ Лесост. и Полесья УССР.-1987.-№27,- С. 101-103.
76. Епишина Т.М. Повышение репродуктивных качеств свиней; и овец. /Епишина Т.М.//Москва.-2009:- 163с.
77. Ермаков В.В. Биологическое значение селена; /Ермаков: В.В. Кавальскип В.В.//М,- Наука.- 1974.- 298 с.248
78. SO. Ерохин A.C. Использование яичного) порошка- в средах для замораживания спермы /Ерохин A.C., Петрова Т.И., Ткачева О.П.// Зоотехния;г1989;-№8:-С.65-67.
79. Ерохин A.C. Перекисное окисление липидов в сперме баранов /Ерохин A.C., Деряженцев В.И. // Овцеводство. 1991. - № 3. - С. 17-19.'
80. Ерохин А;С:, Физиологические: аспекты криорезистентности«спермы? баранов и- быков / Ерохин A.C. //Автореферат дисс, . докт. биол. наук. Дубровицы. 1994.-39 с.
81. Ерохин A.C. Криозащитное действие новых синтетических антиоксидантов при криоконсервации спермы баранов / Ерохин A.C., Епишина Т.М;, Никифоров А.Г. //Сельскохозяйственная биология.- М.- 1996.-№6,- С.19-21.
82. Ерохин A.C. Замораживание спермы баранов в комплексонатных средах. / Ерохин A.C., Епишина Т.М. / Зоотехния.- М.- 1996.- №1.- 23-25.
83. Ерохин A.C. Изменение активности- антиоксидантных ферментов в сперме баранов и быков при? криообработке / Ерохиы А.С., Сейдахметов B.C., Ланкин В.З.// Доклады Рос; академии с.-х. наук.- 1996.- №5:- С. 30-32.
84. Ерохин А:С. Проблемы криоконсервации семени баранов / Ерохин A.C., Епишина;Т.М., Чернова И.Е. //Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве.-М;-1997.-С.233-248.
85. Ерохин A.C. Влияние лазерного облучения на криоустойчивость спермы животных / Ерохин A.C. Жуковская Н.В;, Пырикова С.И. и др.// Международный симпозиум: «Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии». Киев.- 1997. — С. 171.
86. Ерохин A.C. Хранение спермы баранов при 16°С / Ерохин A.C., Сейдахметов Б.С.// Зоотехния.- 1998.- № б:- С. 29-31.
87. Ерохин A.C. Эффективность стимуляции эструса у свиней с помощью PG-600 /Ерохин A.C., Макаров, М.И. // Свиноводство.-2000.-№1.-С.30-32.
88. Ерохин A.C. Стимуляция эструса у свиней с помощью электроакупунктуры / Ерохиш A.C., Макаров М.И. // Зоотехния. 2002. -№ 12. - С. 24-25.
89. Ерохин A.C. Способ повышения воспроизводительных способностей свиноматок. /Ерохин A.C., Макаров М.И.// Описание изобретения к патенту № 2209545. 2003. Бюл. №22.- 6 с.
90. Ерохин A.C. Изучение защитного влияния хитозана при криоконсервации семени быков и баранов / Ерохин A.C., Фомичев^ Ю.П., Федина Н.И., Епишина Т.М. // Научно-производственный журнал. Аграрная Россия.- 2004.-№5.- С. 17-20.
91. Ерохин A.C. Влияние бычьего сывороточного альбумина на фертильность семени хряков /Ерохин A.C., Епишина Т.М.// Свмноводство.-2007.-№4.- С.26-27.
92. Ерохин A.C. Селен и репродуктивная функция животных / Ерохин A.C. // Москва.- 2008.- 141с.
93. Ескин Г.В. Показатели заморожено-оттаянной спермы при использовании различных антиоксидантов / Ескин Г.В., Нарижный А.Г. // Ветеринарная патология.- 2008i- №2.- С. 144-145.
94. ЕскинКВ. Влияние способа, разбавления спермы на ее качество и оплодотворяющую способность после замораживания-оттаивания / Ескин Г.В*. //Ветеринарнаяшатология.- 2008.- №2.- С.145-146.
95. Желтобрюх H.A. Замораживание спермы барана в средах с препаратами декстрана / Желтобрюх H.A., Ивахненко В.К., Айбазов М.М. // Разведение овец и коз. Шерстоведение. Сб.науч.трудов.-Ставрополь.-1981.- С.56-60.
96. Желтобрюх H.A. Повышение эффективности осеменения овец замороженной спермой / Желтобрюх H.A., Ивахненко В.К. //Научно-производственная конференция по овцеводству и козоводству.- Ставрополь.-1986.-С.139-140.
97. Жильцов Н.З. Действие глубокого замораживания семени на фосфолипидный состав живчиков быка и барана / Жильцов Н.З., Голубь B.C. // Вопросы воспроизведения с.-х.животных.-М.-1984.-С.23-28.
98. Жуковская* Н.В. Совершенствование методов криоконсервации и оценки качества спермы сельскохозяйственных животных / Жуковская Н.В.// Автореферат канд. биол. наук.- 1998.- 21с.
99. Журавлев А.И. Развитие идей Б.Н.Тарусова о роли цепных процессов в биологии / Журавлев А.И.// Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.-Наука.- 1982.- С.3-37.
100. Журавлев А.И. Свободно-радикальная патология и методы ее профилактики биоантиокислителями / Журавлев А.И., Пантюшенко В.Т. //
101. Сельскохозяйственная биология.Сер. Биология животных,- 1989.- № 2.- С.17-24.
102. Зайцев В.В'. Усовершенствование технологии глубокого замораживания спермы барана / Зайцев B.Bt //Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения с.-х. животных.-М:-1989-С.32-39.
103. Заславский Ю.А. Вклад убихинона в антирадикальные и антиокислительные свойства липидов / Заславский Ю.А., Храпова- Н.Г., Терехова С.Ф., и др.// Биофизика.- 1997.- Т.22.- С.359-361.
104. Зубкова С.М. Действие He-Ne лазера на окислительно-восстановительные процессы в митохондриях /Зубкова С.М., Крылов O.A. // Вопр. эксп. и клин, физиотерапии: Тр. центр. НИИ курортологии и физиотерапии. М. -1976. -Т. 32.-С. 18-19.
105. Зубкова С.М. Применение методов и средств лазерной техники в биологии и медицине / Зубкова СМ., Михайлова Л.Е., Сажина Т.В. // Киев: Наукова Думка.-1981.-150 с.
106. Зубова Т.В. Ветопунктура при искусственном осеменении коров / Зубова Т.В. //Ветеринария и кормление.-2008.-№3.- 18-19 С.
107. Зыкунов Н.П. Методические аспекты применения сурфагона при воспроизводстве свиней / Зыкунов Н.П., Черных В.Я. // Генетика, селекция и воспроизводство с/х животных. ВНИИСГИЖ. - 1994.- Вып. 1. - С. 144-149.
108. Иванников A.A. Электропунктурная рефлексотерапия при задержании последа у коров / Иванников А. А., Петров В.А. // Ветеринария. -1997.-№1.-С. 37-39.
109. Иванова И.И. Половые феромоны хряков и их использование для стимуляции репродуктивной функции у свиноматок / Иванова И.И. // Автореф. дис. канд. биол. наук. Курск - 2005.- 25 с.
110. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии /Илларионов В.Е. // М.: «Инотех-Прогресс». 1992.- 176 с.
111. Иноземцев В,П. Семинар-курсы по применению акупунктуры при незаразных болезнях сельскохозяйственных животных / Иноземцев В.П: //
112. Ветеринария. 1994. -№ 8. - С. 61-62.
113. Кабанов В.Д. Генетическме особенности по эритроцитарным антигенам и сывороточным белкам свиней крупной белой породы и их связь с некоторыми хозяйственно-ролезными признаками /Кабанов В.Д. и др./ Генетика.- T.IV.-№4.- С. 28-34.
114. Кабанов В.Д. Интенсивное производство свинины. /Кабанов В.Д.// Йошкар-Ола.- 2006.- 377 с.
115. Кабанов В.Д. Методика выведения новых пород свиней. /Кабанов В.Д.// Вестник РАСХН.- 2007.-№4.- С.4-6.
116. Кабанов В.Д. Практикум по свиноводству./ Кабанов В.Д./ М.-«Колос».-2008.-311с.
117. Казеев Г.В. Применение метода акупунктуры при акушерско-гинекологических заболеваниях коров / Казеев Г.В. //Науч. и учеб.-метод. конф. по акуш., гинек. и биотехн. размн. жив. Воронеж. -1994.- С. 68-69.
118. Казеев Г.В. Применение мила-акупунктуры и мил-терапии в ветеринарной практике / Казеев Г.В., Старченкова A.B., Чалая М.В. и др. // Мат. Ветер, науч.-практ. конф. по мил-терапии. М. - 1996. - С. 116-122.
119. Казеев Г.В. Ветеринарная акупунктура. / Казеев Г.В. // М. 2000398 с.
120. Казакова Ю.М. Влияние антиоксидантов на морфофункционаяльное состояние гамет баранов и быков, разработка синтетических сред и приемов их криоконсервации / Казакова Ю.М. //Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Кишинев.-1992.~ 26с.
121. Камышников B.C. Клинические лабораторные тесты от А до Я и их диагностические профили /Камышников B.C.//Минск,- 1999 415 с.
122. Касымов К.Т. Оплодотворяемость и. плодовитость овец, осемененных глубокозамороженной спермой / Касымов К.Т. //Доклады ВАСХНИЛ. 1978. - №7.- С. 37-39":
123. Клинский Ю.Д. Управление репродуктивной функцией / Клинский Ю:Д. // Свиноводство.- 1972.- №5.- С. 37-38.
124. Клинский Ю.Д., СЖК и половая охота лактирующих свиней. / Клинский Ю:Д., Башкеев Е., Головко Е. // Свиноводство. -1975. № З'.-С. 37 -38.
125. Клинский Ю:Д. Использование простагландинов для регуляции воспроизводительной функции у овец / Клинский Ю.Д., Павлов В.А., Булынин В.А. // Животноводство.- 1980. № 4.- С.30-33.
126. Клинский Ю.Д. Направления регуляции и интенсификации размножения животных в условиях промышленной технологии / Клинский Ю.Д. // Гормоны в животноводстве. Сб. науч. трудов ВИЖа. -1981.-С. 7-8.
127. Клинский Ю.Д. Структура, свойства, биологическая регуляция глутатионпероксидазы / Клинский Ю.Д., Колесниченко Л.С. //Успехи современной биологии:-1999.- Т.113.-Вып.1.-С.107-123.
128. Коваленко В.Ф. Хранение спермы хряков при плюсовых температурах / Коваленко В.Ф., Бурлаченко Л.В. // Свиноводство. 1983. -Вып. 39.- С. 50-52.• ' . . •• 254
129. Ковалев: М.Г. Способ: удлинения переживаемости и повышения оплодотворяющей способности спермы /Ковалев М.Г.// Описание* изобретения.к авт. свид.№402365'— 19.10. 1973гг.
130. Кожевникова Л'. К. Янтарная^ кислота; как: стимулятор! /Кожевникова* Л1:КС,. Кондрашова Mili., Тютюшшк H.H. и др. // Кролиководство и звероводство. -2002.- №4.- С.7-8.
131. Кондрашова М.Н. Антиоксидантные свойства; янтарной кислоты / Кондрашова М.Н. // Ветеринарная патология. 2000. -№4.- С. 22-26.
132. Козель А.И. К механизму действия низкоинтенсивного лазерного излучения на клетку / Козель А.И., Соловьева Л.И., Попов Г.К. // Бюлл. Эксперимент, биологии и медицины. 1999 - т. 128; - № 10. - С. 397-399.
133. Козыренко О.В. Биологическое действие ультразвука. Применение ультразвука в медицине и? ветеринарии / Козыренко О.В., Жиганов A.B., Чумасов A.B.// Проблемы современной ветеринарии.- Нижний Новгород.-2005.- С. 362-367.
134. Г42. Кондрахин И:П; Методы ветеринарной клинической лабораторной! диагностики / Кондрахин И.П., Архипов A.B., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э.// Изд. Колос.- 2004.- 520 е.
135. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика /КононовВ.П.//Автореф. дисс.докт. биол. наук. Дубровицы. - 1982,- 44 с.
136. Кононов В.П. Действие многовалентных металлов на воспроизводительную функцию животных / Кононов^ В.П., Ерохин A.C., Нарижный А.Г. //Доклады ВАСХНИЛ. 1983.- №5.- С. 28-30.
137. Кононов В.П. Защитное действие антиоксидантов при замораживании.семени хряка / Кононов В.П., Нарижный*А.Г. //Вестник с.-х. науки. 1985. -№5.- С. 128-129.
138. Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике / Кононов В.П. //Теория и практика воспроизведения животных. М. - Колос. - 1984. - С. 241-256.
139. Кононов В.П. Запахи-сигналы / Кононов В.П., Улиханова Т. // Свиноводство. -1990. -№ 2. -С. 34-35.
140. Кононов В.П. Трансмембранные перемещения ионов К, Na-, Ca, в сперматозоидах быков как показатель их биологической полноценности / Кононов В.П., Мамбеталиев М.С., Турбин* В.Ф.// Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №4.- С. 47-52.
141. Корбан Н.В. Криоконсервация спермы хряков / Корбан Н.В. // Криоконсервация спермы е.- х. животных.-Л.-Агропромиздат.-1988.-С. 130-147.
142. Корбан Н.В. Оценка криорезистентности семени хряков по устойчивости к холодовому удару / Корбан Н.В:, Мороз Л.Г., Шапиев М.Ш. // Животноводство.-1983 .-№ 3 .-С.44-45.
143. Королюк М.А. Метод определения активности каталазы / Королюк М.А., Иванова Л.И., Майоров И.Г.// Лабораторное дело.- 1988.-№1.- С.-16-18.
144. Коротков А.И. Новая среда для хранения семени баранов. / Коротков А.И.// Животноводство.- 1951.- №.3.- С. 27-29.
145. Косарев В.Е. Биотехническая регуляция воспроизводства свиней / Косарев В.Е. // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Дубровицы. 1993. - 45 с.
146. Кругляк А.П. Прогнозирование холодоустойчивости спермы быковпо биохимическим показателям / Кругляк А.П. //Научн. произв. конф. «Новые методы селекции и биотехнологии в животноводстве».- Киев.-1991.- С.29-30.
147. Крючковский А. Регулирование^ половой активности / Крючковский А., Данилюк Н% Филозопенко JI. // Свиноводство. 1989. - № Т. - С. 27-28.
148. Кузнецов М.П. Среда для- хранения* спермы баранов. /Кузнецов М.П.// Животноводство.- 1959.- №.7.- С. 32-34.
149. Курбатов А.Д. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных. / Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. и др. // Л.: Агропромиздат. -1988.-256 С.
150. Курило Ю.Г. Взаимосвязь активности ферментов и концентрации метаболитов углеводного обмена в сперме хряков с качеством спермы, переживаемостью и оплодотворяющей способностью спермиев / Курило Ю.Г.//Автореферат докт. дис., Хаоьков.- 1982.- 49 с.
151. Курило Ю.Г. Физиологические и биохимические аспекты искусственного осеменения и воспроизводства свиней / Курило Ю.Г., Иванищенко Г.Е. // Повышение эффективности свиноводства ВАСХНИЛ.-М.-1991.- С.161-167. ' .
152. Леднев A.B. Физиологические свойства и жирнокислотный состав спермы быков при использовании биологически активного препарата «Милайф» /Леднев A.B.// Автореферат кандидата биологических наук: Нижний Новгород.-2005.-28 с.
153. Левин К.Л. Искусственное осеменение свиней./ Левин К.Л. // М.: Россельхозиздат. -1986. -192 с.
154. Левин К.Л. Среда для разбавления спермы хряков / Левин К.Л., Бабенко Г., Поздняков А. и др. // Свиноводство. 1988. - № 2. - С. 33-34.
155. Ленинджер А. Биохимия. Молекулярные основы структуры и функции клеток./ Ленинджер А. //Издательство «Мир», Москва.- 1976.- 975 с.
156. Лозино-Лозинский А.К. Очерки по криобиологии: адаптация и устойчивость организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам.
157. Лозино-Лозинский A.K. // Л.- Наука.-1972.- 287 с.
158. Лозино-Лозинский А.К. Общие вопросы криобиологии / Лозино-Лозинский А.К. //Криобиология.- 1985.- С. 13-19.
159. Лопырин А.И. Биология размножения овец./ Лопырин А.И. // -М.-Мир.- 1971.- 186.C.
160. Лопатко М.И. разбавитель для хранения спермы баранов' /Лопатко М.И.// Животноводство.-1971.- №.12.- С. 44-46.
161. Луговой В.И. Влияние низких температур на растворимые ферменты / Луговой В.И., Моисеев В.А.// Итоги науки и техники. ВНИИТИ. Сер. Биофизика. 1987. -Т.9 - С. 53-79.
162. Малиновская В.А. Оптимальные режимы замораживания спермы быков в соломинках /Малиновская В.А.// Совершенствование методов воспроизводства и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. 1983. - С. 100 - 108.
163. Милованов В.К. Синтетические среды для семени хряка и методы её сохранения. /Милованов В.К., Соколовская И.И.// Животноводство.- 1957.-№2.- С.34-36.
164. Милованов В.К. Теория холодового удара живчиков млекопитающих / Милованов В.К., Соколовская И.И. //Доклады ВАСХНИЛ.-1959.- С.3-9.
165. Милованов В.К. О холодовом ударе живчиков сельскохозяйственных млекопитающих. /Милованов В.К., Соколовская И.И.// Животноводство.- 1960.-№1.- С.73-79.
166. Милованов В.К. Стимультантное введение окситоцина новый метод повышения эффективности искусственного осеменения свиней./ Милованов В.К., Сергеев Н.И.// Животноводство.- 1961.- №11.- С.26-28.
167. Госсельхозиздат УССР.- Киев.- 1962.- С. 24-26.
168. Миловаиов В.К. Биология воспроизведения и искусственного осеменения животных./ Милованов В.К. // -М.-1962.- 696 с.
169. Милованов В.К. Имплементоры для повышения оплодотворяемости коров и свиней. /Милованов В.К.// Доклады ВАСХНИЛ.-1963.-№4.- С.119.
170. Милованов В.К. О гипоталамической стимуляции воспроизводительных функций у с.-х. животных / Милованов В.К., Березнев А.П., Горохов Л.Н. //Животноводство.-1965.- №11.- С.56-60.
171. Милованов В.К. О природе криогенных повреждений живчиков барана / Милованов В.К., Варнавский А.Н., Наук В.А. //Вести, с.-х. науки.-1970.-№ Ю.- С.86-93.
172. Милованов В.К. Исследование криогенных повреждений живчиков с помощью электронно-парамагнитно-резонансной спектроскопии спиновых зондов в мембранах. / Милованов В.К., Кононов В.П., Азизова O.A., Максина AT Л Доклады ВАСХНИЛ.- 1981.- № Ю.- С. 27-29.
173. Милованов В.К. Химическая природа антиоксидантов и их действие при замораживании семени барана / Милованов В.К., Кольцова Е., Шайдуллин И.Н., и др.// Животноводство. 1981. - № 9. - С. 45 - 46.
174. Милованов В.К. Комплексонаты металлов в средах для семени сельскохозяйственных животных /Милованов В.К., Жильцова Л.С. //Вестник с.-х. науки.- 1982.- № 2.- С.58-66.
175. Милованов В.К. Среда для разбавления спермы сельскохозяйственных животных. /Милованов В.К., Соколовская И.И., Ойвайдис Р.Н., Абилов AM.// Авторское свидетельство №1080819.-1983,- 5 с.
176. Милованов В.К. Применение эхинохрома при искусственном осеменении овец / Милованов В.К., Максимов О.В., Кольцова Б.А. и др. // Животноводство. -1983.-№3.- С.42-43.
177. Милованов В.К. Теория и практика воспроизведения животных. / Милованов В.К., Соколовская И.И.// М.- 1984.- 186 с.
178. Милованов B.K. Использование каратиноидов при криоконсервации спермы / Милованов В:К., Парамонов Л.И., Лизунков А.Ф. //Доклады,ВАСХНИЛ.-1988.-№ 11.-C.33-35.
179. Милованов В.К. Приоритет Советского Союза в создании метода искусственного осеменения и современные проблемы долгосрочного хранения семени баранов^/ Милованов В.К. //Проблемы долгосрочного хранения семени баранов.- Дубровицы.-1989.- С.5-11.
180. Милованов В.К. Особенности живчиков барана и новые среды для семени / Милованов В.К., Варнавская В.А., Зайцев В.В. //Проблемы долгосрочного хранения семени баранов.-Дубровицы.-1989.- С.68-75.
181. Милованов В.К. Среда для разбавления спермы сельскохозяйственных животных /Милованов В.К., Соколовская И.И., Ойвайдес Р.Н., Абилов А.И.// Авторское свидетельство №1080819.- 1982.
182. Мороз Л.Г. Физиологические и биохимические изменения сперматозоидов хряка при замораживании / Мороз Л.Г., Шапиев И.Ш., Корбан Н:В.и др. // Сельскохозяйственная биология 1976.- T. 11.-N6.- С.850-853.
183. Мороз Л.Г. Устойчивость семени хряков при замораживании в присутствии тиоловых соединений / Мороз Л.Г., Корбан Н.В., Рустенова P.M. // Сельскохозяйственная биология.-1983.-Т.18.-№11.-С.88-91.
184. Мороз Л.Г. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию / Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. и др. // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- N 9.- С.51-56.
185. Морозов В.А. О защитной роли глицерина при замораживании семени сельскохозяйственных животных / Морозов В.А. // Труды
186. Дагестанского НИИ сельского хозяйства.- 1965.- № 2.- С.54-60.
187. Нарижный А.Г. Применение антиоксидантов при глубоком охлаждении семени хряка / Нарижный А.Г. //Сельскохозяйственная-биология . -1983.-№4.- С. 92-95.
188. Нарижный А.Г. Влияние антиоксидантов и способов криоконсервации на пероксидацию липидов в сперме хряка / Нарижный А.Г., Ерохин A.C., Рочев Н.Ф. // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. -1993.-№6. -С. 32-34.
189. Нарижный А.Г. Влияние способа криоконсервации спермы хряка на ПОЛ / Нарижный А.Г., Галич С.К., Ерохин A.C. // Генетика, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных. 1994. - Вып. 1.- С. 135140.
190. Нарижный А.Г. Синхронизация опоросов / Нарижный А.Г., Галич С.К., Походня Г.С. и др. // Генетика, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных. 1994. - Вып. 1.- С. 140-144.
191. Нарижный А.Г. Применение сурфагона при осеменении свиноматок замороженной спермой / Нарижный А.Г., Зыкунов Н.П., Галич С.К., и др. // Генетика, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных. 1994. - Вып. 1.- С. 150-155.
192. Нарижный А.Г. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков /Нарижный А.Г., Ерохин A.C. // Доклады Россельхозакадемии.- 1995.- № 6.- С.37-38.
193. Нарижный А.Г. Интенсификация воспроизведения в условиях промышленного свиноводства. Теория и практика / Нарижный А.Г. // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Дубровицы. - 1995.- 46 с.
194. Наук В. А. Криогенные изменения, живчиков »барана / Наук В. А., Лянсберг Э.С., Шейкин В.Н. //Овцеводство.-1970;-№ 10.- С.35-40:
195. Наук В:А. Опыты- замораживания семени4 барана' при- низких температурах/ Наук В.А. //Доклады-ВАСХНИЛ.-1972.-№1.- С.40-41.
196. Наук В.А. Опыты замораживания^семени барана при температуре -79°С и -196°С / Наук В.А. //Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения.- Дубровицы.- 1974.- 4.1.-С.30-32.
197. Наук В:А. Криоконсервация семени животных. Консервация генетических ресурсов./ Наук В.А. // -Пущино.-1982.- 48 с.
198. Наук В.А. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков / Наук В.А.,. Гуськов А.М; //Доклады ВАСХНИЛ.- 1983.- № 2.- С.27-29.
199. Наук В.А. Криогенные изменения жирных кислот плазматических, мембран^ гамет быка и хряка / Наук В.А., Ворончук Г.В., Дмитриенко Н.Г. // Доклады ВАСХНИЛ.-1986.-№1.-С.31-33.
200. Наук В.А. Структурно-биохимические й функциональные особенности гамет самцов сельскохозяйственных животных при криоконсервации /Наук В.А.// Известия АН МССР. Сер. Биол. и хим! наук.-1987.-№5.- С. 49-54.
201. Николов И. Влияние лазерного облучения низкой интенсивности на биологические свойства и оплодотворяющую способность сперматозоидовбаранов./ Николов И., Несторова Ю. // Животн. Науки. 1994 - Т. 31-С. 210212.
202. Новиков Г.П: Влияние визуального контакта с хряками на воспроизводительные функции- свиноматок- / Новиков Г.П. // Науч.-техн. бюлл. НИИЖ Лесост. и Полесья,УССР. 1982. - № 34. - С. 24-27.
203. Овайдис Р.Н. Морфология гамет самцов сельскохозяйственных животных как критерий их биологической полноценности- /Овайдис* Р.Н., Абилов А.И.// Морфологические исследования в здравоохранении- в животноводстве.- М.- 1984.- 144-147.
204. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток / Осташко Ф.И. //Международный-сельскохозяйственный журнал,- 1964'.-№ 3,-С.106-109.
205. Осташко Ф.И. Влияние В-глюкоронидазы на качественные показатели спермы ■ производителей / Осташко Ф.И., Строна В.И., Кузнецов Г.Н. // Животноводство.- 1974.- № 4.- С.53-54.
206. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Осташко Ф.И. //Киев.-Урожай.-1978.-254 с.
207. Осташко Ф.И. О применении метода пламенной фотометрии для количественного определения натрия и калия- в сперме производителей / Осташко Ф.И., Губин Н.М., Канцедаль В.И.// Харьков.- 1984.- С.110-114.
208. Осташко Ф.И. Замораживание спермы баранов в герметической упаковке / Осташко Ф.И., Канцедаль В.И. //Тезисы Всес. конф.: Применение биотехнологии в животноводстве, растениеводстве и Вет.мед.-М,~1988 -С.2-4.
209. Павлов В.А. О приоритете советских ученых в использовании глицерина при замораживании спермы с.-х. животных / Павлов» В.А., Смирнов Л.Н. //Животноводство.-1967.-№8.-С.86-89:
210. Пакенас П.И. Исследование сперматогенеза и усовершенствование технологии взятия и обработки семени / Пакенас ИМ: //Автореф.дисс. .докт.биол.наук. Таллин.-1972.- 63 с.
211. Панасенко О.М: Перекисное окисление липидов влияет на перенос холестерина- между • липопротеинами высокой плотности и биомембранами /Панасенко 0:М. //Биологические мембраны 1987.- Т. 12.- № 4.-С.1319-1324.
212. Паращук Ю:С. Сравнительная оценка цитотоксичности и. криозащитной эффективности глицерина- и его алкиловых эфиров при. замораживании-спермы человека / Паращук Ю.С., Шраго М.И., Калугин Ю.К. и др. //Криобиология.- 1989.- № 1.-С.40-43.
213. Паршутин Г.В. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных / Паршутин Г.В., Смирнов-Угрюмов Д.В., Михайлов H.H. // М.-Колос. -1970.- 23 С.
214. Перехожих В.П. Совершенствование метода регуляции половой функции у ремонтных свинок и основных свиноматок путем использования гормональных препаратов / Перехожих В.П. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Дубровины. - 1985. - 21 С.
215. Петров В.А. Опыт применения в производстве электропунктурной рефлексотерапии / Петров В.А. // Мат. Всерос. науч.-метод. конф. по акуш., гинек. и биотехн. размножения животных. Воронеж. 1994. - С. 116-117.
216. Платов Е.М. Замораживание семени быка в глицериновой компенсированной среде / Платов Е.М. //Животноводство.-1963 .-№ 8.-С.92-94.
217. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей сельскохозяйственных животных / Платов Е.М.// Автореф.дисс. докт.биол.наук. Дубровицы.-1973.- 45 с.
218. Платов Е.М. Оттаивание спермы, замороженной в соломинках
219. Платов Е.М., Ойвадис Р.Н., Сааб-Фарес A.C. //Молочное и мясное1 скотоводство. -1976.-№ 11.- С. 28-31.
220. Платов Е.М. Новое в искусственном осеменении овец замороженной спермой /Платов Е.М.// Совершенствование методов-воспроизводства и искусственного осеменения с.-х. животных.-М'.-1983.- С. 74-85.
221. Платов Е.М. Теоретическое № практическое обоснование технологии замораживания, оттаивания и использования- спермы баранов / Платов Е.М./ Биология воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных.-Лесные Поляны.-1986.- С. 7-17.
222. Платов Е.М. Защитные механизмы спермы баранов при экстремальных воздействиях / Платов Е.М. // Биология воспроизведения и технология искусственного осеменения с.-х. животных. Лесные Поляны. 1986.-С. 17-26.
223. Платов. Е.М. Методические рекомендации по технологии взятия, глубокого замораживания и использования спермы баранов-производителей при искусственном осеменении овец / Платов Е.М., Деряженцев В.И., Ерохин A.C.// М.-1986.- 24 с.
224. Плишко Е.М. Застоуванная глюкозо-хелато-цитратная середовища для збергания спермы при комнатной температуре /Плишко Е.М. // Тварннинцтво Украини.- 1965.- №2.- 30-33.
225. Плишко Н.Т. Среды для хранения спермы хряков / Плишко Н.Т. // Свиноводство. -1968. -№3. -С. 19-21.
226. Плященко С.И., Репродуктивные качества свинок при различных способах содержания / Плященко С.И., Хохлова И.И. // Повышение эффективности свиноводства. -ВАСХНИЛ. -М. 1991. С. 205-208.
227. Понд У.Д. Биология свиньи / Понд У.Д., Хаупт К.Д.// Mi: Колос. -1983. 334 с.
228. Портнов Ф.Г. Книга электропунктурной рефлексотерапии. / Портнов Ф.Г. // Рига.- Зинатне.-1982.- 311с.
229. Походня Г.С. Основные факторы интенсификации воспроизводства свиней в промышленных комплексах / Походня Г.С. //Автореф. дисс. . докт. с. х. наук. Дубровины. - 1987. - 53 с.
230. Прокопцев В.М. Технология искусственного осеменения свиней. / Прокопцев В.М.// М.- Колос.-1981.-160 с.
231. Прокопцев В.М. Действие унитиола на сперму хряков /Прокопцев В.М., Рустенов А., Мороз Л.Г. // Сельскохозяйственная биология. -1974.- Т.9. № 4.-С. 581-584.
232. Прокофьев М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных./ Прокофьев М.И. //- Л. Наука. - 1983. - 263 с.
233. Пушкарский В. Этологические резервы продуктивности свиноматок / Пушкарский В. // Сельскохозяйственная биология. 1983. - № 6. - С. 3032.
234. Пушкарь Н.С. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования./ Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Н.Д.// Киев Наукова Думка.-1984.- 120 с.
235. Пухтинов О.Н. Живучесть охлажденной спермы хряков при добавлении некоторых биологически активных веществ / Пухтинов О.Н., Епишина Т.М. //Сб.трудов ВНИИплем.- М.- 2004.- вып. 16.- Т.2.- С.78-81.
236. Пухтинов О.Н. Влияние различных разбавителей на уровень ПОЛ в охлажденной сперме хряков / Пухтинов О.Н.// Сб. научных трудов ВНИИ плем.- 2004.- Вып. 16.- С. 142-144.
237. Рахишев А.Р. Экспериментальные и клинические аспекты применения низкоэнергетического лазерного излучения / Рахишев А.Р. // На главных направлениях научных исследований: Сб. научных работ. Алма-Ата.-1981.-С. 57-64.
238. Рустенов А. Влияние тиоловых ингибиторов и активаторов на сперму хряков / Рустенов А.// Автореферат дисс. канд. биол. наук.- Л., 1972.-21с.
239. Самарцев В.Н. Участие SH- групп в регуляции окислительногофосфорилирования и разобщенного пальмиатом дыхания в митохондриях / Самарцев В.И., Зелди И.Ш/ Биохимия.- 1995.- Т.60.- В.4.- С.-635-643.
240. Сейдахметов Б.С. Изучение защитного действия буферных, тиоловых и антиоксидантных соединений при хранении спермы баранов в охлажденном состоянии. /Сейдахметов Б.С.// Автореф.дис.канд. биол. Наук.- Лесные Поляны.- 1997.- 19 с.
241. Селиванов И.М. Опыт применения лазерной терапии и акупунктуры / Селиванов ИМ. // Ветеринария. 1996. - № 10. - С. 9-11.
242. Селиверстов Ю.А. Влияние СЖК и ХГЧ на овуляторную функцию яичников свиней в послелактационный период / Селиверстов Ю.А. // Бюлл. ВНИИРГЖ. 1980. - вып. 50. - С. 14.
243. Семаков В.Г. Криоконсервация спермы быков и баранов / Семаков В.Г. //Обзорная информация ВНИИТЭИ агропром. М. -1991.- 2426 с.
244. Семенова В.А. Защитные свойства отдельных факторов желтка куриного яйца при замораживании семени животных / Семенова В.А. // Автореф, дисс. .канд.биол.наук.-Дубровицы.- 1987. -19 с.
245. Сердюк С.И. Среда для спермы хряков / Сердюк С.И. // Доклады Сов. ученых к 6 межд. конгр. по размн. и искус, осем. животных. М. - 1968. -С. 138-141.
246. Сердюк С.И. Искусственное осеменение в промышленном свиноводстве./ Сердюк С.И. // М.: Колос. 1977. - 160 с.
247. Сердюк С.И. Изучение воспроизводительных функций свинок, выращенных в условиях крупных промсвинокомплексах / Сердюк С.И., Новиков Г.П. // Науч.-техн. Бюлл. НИИЖ Лесост. и Полесья УССР. Харьков. -1980.-№27.-С. 85-89.
248. Сим Э. Биохимия мембран./ Сим Э. // М.- Мир.- 1985.- 110 с.
249. Сиратский И.З. Возрастная изменчивость морфологических и биохимических показателей крови и спермы быков производителей / Сиратский И.З.// Доклады Рос. Акад. с.-х. наук.- 1994.- №3.- С. 37-39.
250. Скрябин K.F. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение / Скрябин К.Г.// М.-2002.- 120 с.
251. Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения / Смирнов И.В. //Дисс. . канд.биол. наук.-М.-1949. 19 с.
252. Смирнов И.В. Действие осмотических факторов на.спермин^быков и хряков / Смирнов И.В. //Результаты увеличения продукции животноводства.-Киев. :- Урожай.- 1964.- С. 89-93.
253. Смирнов И.В. О режиме оттаивания замороженной спермы быков / Смирнов И.В. //Молочное и мясное скотоводство.-1971 .-№11 .-С.23-25.
254. Смирнов И.В. Осмотическое давление в сперме животных и его значение при замораживании / Смирнов И.В., Емец А.З. //Мат. 7-го Межд. конгр. по замораж. и искусств.осем.животных.-Мюнхен.-1972.-Т.2.-С.1391-1397.
255. Смирнов И.В. К теории глубокого охлаждения спермы / Смирнов И.В. //Животноводство.- 1974. -№11.- С. 65-70.
256. Советкин C.B. Эффективность применения комплексных препаратов для* санации спермы хряков. / Советкин C.B. Родина" В.Н., Смирнов В.Т. // Тез. науч.-практ. конф. РАМЖ. -Быково. 1998. - С. 132.
257. Соколов В.Е. Стимулирование половой активности свиней аналогом феромона хряка / Соколов В.Е., Зинкевич Э.П. // Тез. докл. 1-го Всес. совещ. по химич. коммун, животных. Москва. - 1979. - С. 193-194.
258. Соколов В.Е. Общение животных: запахи вместо слов / Соколов В.Е., Зинкевич Э.П. // Наука в СССР. 1983. - № 4. - С. 84-95.
259. Соколовская И.И. О значении акросомы в оценке семени самцов /Соколовская И.И., Ойвадис Р.Н., Абилов А.//Животноводство. 1981. - № 9. -С. 46-47.
260. Соколовская И.И. Экспресс метод определения оплодотворяющей способности живчиков. / Соколовская И.И., Ойвайис Р.Н., Абилов А.Н.// ВИЖ.- Дубровицы,- 1985.- С.40-45.
261. Стжежек. Е. Биохимические показатели семени хряка в процессе замораживания / Стшежек Е., Глековская Я., Мачерски Э., и др.// Симпоз. по теме: Криоконсервация семени барана и хряка.- Варна; София.-1984,- С.74-93.
262. Субботин А. Д. Оплодотворение у сельскохозяйственных млекопитающих и иммунобиологические свойства гамет /Субботин А.Д.// Сб.науч. трудов ВНПО, ВАСХНИЛ. Воспроизводство и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных.- М.- 1990.- С.24-28.
263. Субботин А.Д. Особенности оплодотворения у сельскохозяйственных животных в связи с иммунобиологическими свойствами гамет. /Субботин А.Д.// Сельсклхозяйственная-биология.- 1991.-№2.-С 61-66.
264. Субботин А.Д. Способ искусственного осеменения свиней. /Субботин А.Д.// Патент № 2203633.- 2001.- 4 с.
265. Табеева Д.М. Руководство по иглоукалыванию./ Табеева Д.М. // М. 1980.- 26 с.
266. Темир О.И. Стимуляция репродуктивных функций свиноматок и повышение эффективности искусственного осеменения в промышленном свиноводстве./ Темир О.И. //Автореф. дисс. . канд. вет. наук. Харьков.1989.-21 с.
267. Терентьева A.C. Повышение продуктивности свиноматок в современных условиях / Терентьева А.С.//М.- 2002.- 54 с.
268. Улиханова Т.Д. Половые феромоны и их значение в воспроизводительной,функции свиней:/ Улиханова1 Т.Л. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Дубровицы- 1990.- 20 с.
269. Успенский А.Н. Углеводно-белковые соединения и воспроизводительная функция животных / Успенский А.Н. // Автореф.дисс.докт, биол.наук. -Дубровицы.-1991.-44с.
270. Хомяк И.И. Взаимосвязь физиологических и биохимических показателей спермы хряка с биологической полноценностью спермиев. / Хомяк И.И. // Автореферат дисс. канд. биол. наук.- Харьков.- 1981,- 20с.
271. Хочачка П. Биохимическая адаптация / Хочачка П., Сомеро Дж.// М.-Мир.-1988.- 568 с.
272. Храпова Н.Г. О взаимосвязи природных и синтетических антиоксидантов /Храпова Н.Г.// Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии . М.- 1982.- С.59-73.
273. Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов и системы, регулирующие его интенсивность / Храпова Н.Г.// Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М.- Наука.- 1998.- С. 147-155.
274. Чернова И.Е. Влияние режима оттаивания спермы барана оттаивателем ОГСБ на её качественные показатели /Чернова И.Е., Епишина Т.М.// Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения,- Москва.-1991.- С.84-89.
275. Чернова И.Е. Влияние биотехнологических факторов на результативность осеменения овец криоконсервированной спермой. /Чернова И.Е. // Автореферат дисс. канд. биол. наук.- Лесные Поляны.-Московская область.- 1997.- 19с.
276. Чучин В.Н. Электроакупунктурное воздействие на биологически активные точки пояснично-крестцовой области у крупного рогатого скота
277. Чучин В.Н. //Автореф. дисс. канд. вет. наук. -Ленинград. 1985,- 19 с.
278. Шапиев И:Ш. Совершенствование методов- замораживания» и оценки спермьт хряков / Шапиев И.Ш.// Автореферат доктора биологических наук.- Санкт-Петербург.- Пушкин.- 1998.- 41 с.
279. Шайдуллин И:Н. Усовершенствование метода замораживания семени баранов путем1 применения антиоксидантов/ Шайдуллин И'.Н. // Автореф.дисс. .канд.биол.наук.-Дубровицы.-1980.-24 с.
280. Шайдуллин И.Н., Сахара для синтетических сред, применяемых при разбавлении семени / Шайдуллин И.Н., Варнавская В.А.// Животноводство.-1982.- № 7.- С.52-53.
281. Шергин Н.П. Биохимия сперматозоидов сельскохозяйственных животных / Шергин Н.П. // -М. .-Колос. 1967.- 246 с.
282. Шейко И. Влияние различной интенсивности- лазерного воздействия на спермопродукцию хряков крупной белой породы / Шейко И., Елисейкин Д. // Свиноводство -2003.- № 3. С.23-25.
283. Шипилов B.C. Значение хряков-пробников в профилактике бесплодия свиноматок / Шипилов B.C. // Ветеринария. 1974. - № 2. -с. 81-84.
284. Шумаев К.Б. Влияние антиоксидантов и продуктов перекисного окисления липидов- на образование радикала пробукола в липопротеинах низкой плотности / Шумаев К.Б., Рууге Э.К., Дмитровский Д.Д. и др. // Биохимия. 1997. - т. 62.,- Вып. 6. - С. 769-773.
285. Федина Н.И. Криозащитное влияние различных антиоксидантов и БАД при хранении спермы хряков в охлажденном и замороженном состоянии /Федина Н.И.// Автореф. дисс.канд. биол. наук. Лесные Поляны. - 2007. -20 с.
286. Abad М. Influence of administering prostaglandin F-2a at weaning time on different breeding parameters on sows / Abad M., Fernandez E., Diez C. e.a. // Proc 11 th IPVS Congress Lausanne. Switzerland.-1990.- P. 444- 448.
287. Arthur J.R. Effect of selenium deficiency on the thyroid gland and.on plasma and pituitary thyrotropin and growth hormone concentrations in- the rat
288. Arthur- J:R., Nicol F., RaeP.W. e.a. // Clin; Chem: Enzym. Gommun.- 1990:-V.3:-P. 209-214. >
289. Aitken R. J. Cellular, basis; of defective sperm- function and5 its: association with the genesis- of reactive oxygen species, by human spermatozoa / Aiticen Ri J:, GlarksomJ'Si// J; Reprod; Fert.- 1978i- №81.- Pi 459-469;
290. Almlid T. Does enhanced antigenicity of semen increase the litter :size in pigs / Almlid T. // Z. Tierzucht Zuchtgsbiol: -1981 .-V. 98.-P. 1-10.
291. Alvarez J; N. Role of superoxidedismutase in protecting rabbit spermatozoa for 02 toxicity due to lipid peroxidation / Alvarez J. N., Storey B. T.// Biol. Reprod.- 1983.-V/ 28.- P. 1129-1136.
292. Alvfres J.G. Role of glutatione perocsidase in protecting; mammalian spermatozoa from loss of motility caysed by spontaneons lipid peroxidatiom / Alvfres J.G., Storey B.T. // Gamete Research. 1989.- V.23. - N1. - P.77-90.
293. Asdell S.A. Patterns of mammalian reproduction / Asdell S.A. // Cornell. Univ. Press. Itaca N: Y. 1964. - 50 P:
294. Batnba K. Effects of treatment with butylated hydroxytoluene on the susceptibility of boar spermatozoa to ' cold stress and dilution / Batnba K., Cran D.G. // J. Reprod. Fert.- 1992.- V. 95.- P. 67-77.
295. Bamba K. Protective action of aromatic compounds against cold-shock injuries in boar spermatozoa / Bamba K., Mijagawa N. // Cryobiology.-1992.- V. 29.- P. 533-536.
296. Baker L.N. Inhibition of heat by progesterone and its effect on subsequent fertility in gilts / Baker L.N., Ulberg L.C., Grummer R.H:, e.a; // J. Anim. Sci.-1954.-V. 13.- P. 648-657.
297. Berg R.F. Artificial inseminftion with frosen semen in ewes at different times of the breeding season / Berg R.F., Aamdal J. // Repr. Domest. Anim. 1991. -V. 26.-P. 27-30.
298. Bidluck W.R. Damage of microsomal membrane by lipid peroxidation / Bidluck W.R., Tappel A.L.// Lipid.- 1973.- 8.-№3.- P.177-182.
299. Boitor L. Perspective le aplicarii acupuncture in medicina veterinara / Boitor L, Moise D., Munteran M. // Lucr. Inst. Agron. (Cluj-Nopoca) Fac. Cafedra Med. Vet-1989.-V. 15.-P. 165-171.
300. Bourchnell J.C. The constant ration on the content of spermatozoa at 4°C and room temperature / Bourchnell J.C.// J. Reporod. Fert.- 1977.-V49.- №2.- P.-327-332.
301. Bourchnell J.C. Effect of egg-yolk and other reagents upon the zinc of cold shocked boa spermatozoa / Bourchnell J.C.// J. Reporod. Fert.- 1978.-V52.-№2.-P.-337-340.
302. Britt J.H. Induction of fertile estrus in prepuberal gilts by treatement with a combination of pregnant mare's serum gonadotropin and human chorionic gonadotropin / Britt J.H., Day B.N., Webel S.K. e.a. // J. Anim. Sci.- 1987.- V. 67.-P. 1148-1153.
303. Brooks P.H. Studies in sow reproduction / Brooks P.H., Cole D.I., Rowlinson P.// Studies in sow-reproduction Anim. Prod-1995.- V. 20.- P. 407-412.
304. Brzezinska-Slebodzinska E. Antioxidant effect of vitamin E and glutathione on lipid peroxidation in boar semen plasma / Brzezinska-Slebodzinska E., Slebodzinski A.B., Pietras B. // Biological Trace Element Research.-1995.- V. 47.- Jfs 1-3.- P. 69-74.
305. Brass K. Die sonographic in der andrologishrn untersuchung bri verschiedenen Haussauaugetrierarten. / Brass K.// Inaug. Diss Hannover. - 1987.-S.102.
306. Burk R.F., A selenium-rich extracellular glycoprotein / Burk R.F., Hill K.E. // J.Nutr.-1994.-V. 124.- P. 1891-1897.
307. Crabo B.G. The effect of glucerol on bulland boar spermatjzoa in vitromtasured as loss of intracellular glumatic oxaloacetic transaminase (GOT) /Crabo B.G., Bower R.E., Graham E.F. // Abstr. XI th Norder Vet. Congr. Bergen. 1970.- P. 242 -245.
308. Crabo B.G. Effect of some hydrogen ion buffers on storage and freezing of spermatozoa / Crabo B.G., Bower R.E., Graham E.F. // J. Anim. Sci.-1984.- V. 35.- P. 377-382.
309. Chan R. Nature and' development of lactic dehydrogenases/ Chan R., Kaptan N.O., Levine L. et. al. //Scienct.- 1992.-V.136.- P.962- 965.
310. Cavin A.T. Effect of temperature on the fluidity of boar sperm membranes / Cavin A.T., Buhr M.M. //J.Repr. Fert.- 1989. V. 85.- P. 533-540.
311. Cerovsky J. Somatic acupuncture as a means of gilts oestrus induction / Cerovsky J., Hudecek V., Roskot M. e.a // Book of Abstracts 2nd Conf. Eur. Soc. Domest. Anim. Reprod., Keszthely, Hungary.- 1998.-P. 76-77.
312. Данов Д.Т. Изследования въерху ультраструктурните изменения на сперматозоидите на коча при криоконсервация / Данов Д.Т., Ковачев К.Д., Попов Д.В. // Криобиология на половите клетки. София. - 1983. - С. 155179.
313. Davis D.L., Control of estrus in gilts with a progestagen / Davis D.L., Knight J.W., Killian D.B. e.a. //J. Anim. Sci.-1979.- V. 49.- P. 1505-1509.
314. Darrin-Bennet A. Influense of the cholesterol conte tent of mammalian spermatozoa on succertibility to cold-shock / Darrin-Bennet A., White J.G.// Gryobiology.- 1977.- V.14.- №ю5.- P. 263-266.
315. Diehl I.R. Effect of prostaglandin F-2a on luteal function in swine / Diehl I.R., Day B.N. // J. Anim. Sci.-1974.- V. 39.- P. 392-396.
316. Du Mensil du Buisson F. Reproductive physiology and A.I. in pigs / Du Mensil du Buisson F.// Veter. Rec.- 1970.-V.87.-P.562-568.
317. Duverger O. Ultrazacion de diluyentes a lase de lactosa-yema de huevoglicerol porcino / Duverger O. // Cub. Reprod. Anim.-1976.- V. 2.- №1.-P.-14-20.
318. Einarsson S. Prostaglandin induced parturition in swine with some• • ' 274aspects on prevention of the MMA syndrome / Einarsson S., Gustafsson B., Larsson K.// Nord. Vet. Med-1975.- V. 27.- P. 429-436.
319. Fernandes A.D. Effecto del tipo de diluyente у metodo de congelacion sobre la fertilidad del semen ovino / Fernandes A.D., Pizzarrosa O., Villedas N. // Prod. Anim. 1998. -V. 88.- №3, - P. 191-196.
320. Foulkes J.A. Hyaluronidase activity in seminal plasma as a method of assessing bull sperm integrity / Foulkes J.A., Watson P.A. // J. Reprod; Fert. 1975. -V. 43. -№2.-P. 349-353.
321. Gerrits R.J. Effect of synchronisation of estrus on fertility in gilts / Gerrits R.J., Farming M.b., Meade R.J. e.a. // J. Anim. Sci.-1963.- V. 21.-P. 10221025.
322. Gil J. Treatment of vaginal discharges in the sows with PGF-2a in post-farrowing period / Gil J-., Pallas R.T., Noval R. e.a. // Proc. 11 th IP VS. Congress Lausann, Switzerland.-1990,-P: 477.
323. Gil J. Improving the reproductive parameters in sows using PGF-2a post-fan-owing / Gil J., Pallas R.I., Alonzo R.T. e.a. // Proc 12 th IPVS Congress.-V. 2. The Hague.-1992.-P. 495.
324. Gottardi b. Effettidi alcuni- attivatori potenziali della motilita / Gottardi L., Brunei L., Zanelli L. //Riv. Suinicolt-1980.-V. 21.-M 12.-P. 19-23.
325. Gorovoj L. Advances in Chitin Science / Gorovoj L., Kosjakov. V. // Proc. 7 th Int. Conf, on Chitin, Chitosan, Lyon, France.-1997.- V. 2.- P. 858-863.
326. Gowda H.C. Transaminase activity of bull semen: effect of buffers on the eztracellular enzyme release / Gowda H.C. e.a. // Zbl. Veterinarmedi- 1975,1. V.22.-4 .- P. 341-342.
327. Graham E.F. Some biochemical changes in spermatozoa due to freezing / Graham E.F., Pace M.M.// Cryobiology.- 1971.-№4.-P.75-84
328. Graham E.F. Current status of semen preservation in the ram, boar and stallion. XII Symp. Anim. Reprod./ Graham E.F., Crabo B.G. // J.Anim. Sci., 1978.-47.-P. 80-119.
329. Graham J.K. Effect of several lipids, fatty acyl chain length and degree of unsaturation of the motility of bull spermatozoa after cold shock and freezing / Graham J.K., Foote R.H. // Cryobiology. 1987. - V. 24. - p. 42-52.
330. Guidi G. The enzyme glutathione peroxidase in arachidonic acid metabolism of human plateles / Guidi G., Schiavon R, Biasioli A. e.a. // J. Lab. Gin. Med.-1984.-V. 104. -P. 574-582.
331. Hammerstedt R.H. Use of spin labele to evaluate effect of cold shock and osmolarity on sperm / Hammerstedt R.H. et al. // Biol. Reprod. 1978.- V.18. -P. 686-696.
332. Hansen P.J., Thatcher W., Ealy A.D. Heat stress effects on reproductive function. // Large Herd Dairy Management. 2 nd ed. Ed. Van Horn H.H. 1992. -P. 116.
333. Hanstein W.G. Lipid oxidation in biological membranes. Kinetics and mechanism of lipid oxidation in submitochondrial particles / Hanstein W.G., Hatefi Y., TejadaP. //Arch. Biochem. Biophys. 1970.- V. 138. - №1. -P. 87-95.
334. Harrison R.A. Vitamin E and selenium for reproduction of the dairy cows /Harrison R.A., Hancock D.D., Conrad H.R. // J. Dairy Sci. 1984. - V. 67. -P. 123-132.
335. Hao L.C. Electropuncture therapy trial for treating infertility in mares / Hao L.C. // Theriogenology.-1987.- V. 28.- № 3.- P. 215-220. 129.
336. Handrow R.R. Structural comparisons between-glucosaminoglycans to promote an acrosome reaction in bovine spermatozoa / Handrow R.R'., Lenz R.W., Ax R.L. //Biochem. Biophys. Res. Commun.-1982.-V. 107.-P. 1326-1332.
337. Hughes P. Reproduction in' the Pig. / Hughes P., Varley Ml //Butterworths. London. - 1984.- P/ 34-38:
338. Holt W.V. Determination of lipid composition and thermal phase transition temperature in an enriched plasma membrane fraction from ram spermatozoa/Holt W.V., Nort R.D. // J.Repr. Fert. 1994.- V.73.- N.I.- P.285-294.
339. Hsia L.C. Inducing oestrus by acupuncture / Hsia L.C., Lee J.H. // Pig. L- 1988.-April.-P. 24-27.
340. Hughes P. Reproduction in the Pig. / Hughes P., Varley M. // Butterworths. London. - 1984.- P: 124-129/
341. Hughes P. Stimulating gilts / Hughes P. // Pig International*. 1993 -V. 23 - № 9 - P. 8-9.
342. Jackson P.S. Slow release formulation of prostaglandin and luteolysis in the pig / Jackson P.S., Hutchinson F.G. // Vet. Rec-1980.- V. 106.- P. 33-34.
343. Jensen A.M. Effect of perinatal mortality of single selenium injection to sows and gilts / Jensen A.M., Jensen P.T., Winter K. e.a. // Acta Vet. Scand.- 1984.-V 25.-P. 436-444.
344. Jonson L. Fecundity of boar spermatozoa stored in Beltsville liqued and Kiev extenders for three days at 18°C / Jonson L. // J. Anim. Sei.- 1982.- V. 54.-N.l.-P. 132-136.
345. Jonson L. Deep freezing of boar semen / Jonson L., Larsson K.// Uppsala.- Sweden.- 1985.- P.326-329.
346. Jones R. Lipid peroxidation in spermatozoa / Jones R., Mann T. // Proc.
347. R. Soc. Lond. B. 1973. — V. 184.-P. 103-107.
348. Jones R. Lipid peroxidation in spermatozoa: formation, role of plasmologen and physiological significance / Jones R., Mann T. //Proc. R. Soc. Lond. B. — 1976. -V. 193.-P.317-333.
349. Jones R., The effect of cooling to 5°C*and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa / Jones R., Stewart D. // J. Repr. Fert. -1979. -V. 56. №1.- P. 233-238.
350. Julien W.E. Effect of selenium and selenium with vitamin E on motility of bovine spermatozoa. / Julien W.E., e.a. // J.Dairy Sci. 1977.- V.60.- P. 174.
351. Kato S. Effect of seminal plasma on motility and acrosome morpholog of boar spermatozoa stored at 4°C / Kato S., Yasui T., Miyano T. // Sci. Reprd. Fac. Agr. Kobe Univer.-1990.- V. 9- N.I.- P. 57-62.
352. Kessler J. Carence en selenium chez les ruminants: mesure prophylactiques / Kessler J. // Revue Suisse Agric-1993.- V. 25.- Jfe 1- P. 21-26.
353. Keiser H. Einfuhrung eines syntetischen zungssleistungen bei Sawen / KeiserH.,GuabierB//Tag. Ber. DDR.Berlin.-1981.-V. 192.-P. 197-203.
354. King G.J. Deformitis in piglets following administration of methallibure during specific stages of gestation / King G.J.// J. Reprod. Fert- 1969.- V. 20.- P. 551-553.
355. Kirkwood R. A note the influence of boar age on its ability to advance puberty in the gilts/ Kirkwood R., Hughes P: // Anim. Prod. 1981. - V. 32. - № 2. -P. 211-213.
356. Kirkwood R. Effect of lactation, food intake and gonadotropine-releasing hormone on sows / Kirkwood R., Lythgoe E., Aherne F. // Canad. J. Anim. Sci.- 1987.- V. 67:-N.3.-P. 715-719.
357. Knight S.A. Effect of selenium repletion on glutathione peroxidase protein levels in rat liver / Knight S.A., Sunde R.A. // J. Nutr.- 1988.- V. 118.- № 7.- P. 853-858.
358. Kocvin-Podsiadla. Ocena uszkodzen plemnikow metoda pozakomorkowego oznaczania aktywnosci enzymov w swietle wartosci nasieniaknizkow / Kocvin-Podsiadla., Wedjsza D., Polanska E. // Zesz. probl. post, nauk rol. -1990.-№384.-P. 71-76.
359. Konig R. Does acupuncture help to unduce estrus / Konig R. // Pigs.-1988.-V.2.-N.2.-P. 13-14.
360. Ladewog I. Umweltreize, Sozielverhalten und Reproduction bein / Ladewog I. // Zuchtung-Skunde. 1982. - V. 54. - P. 350-353.
361. Larsson R. The development of a practicable method for deep- freezing of boar spermatozoa. / Larsson R., Einarson S., Swensson T.// Nord. Vet. Med.-1977.- V.-29.- P.113-118.
362. Leo A. . Partition coefficients and their uses/ Leo A. et al.// Chem. Rev. 1971.-V. 71. -№6. - P. 529-616.
363. Levitt J. A sulphydryl disulfde hypothesis of frost injury and resistance in plants / Levitt J. // J. Theor. Biol. - 1962. - N.3. - P. 183.
364. Liptrap R.M. Prostaglandin F and progesterone in experimental hypogalactia in sows / Liptrap R.M. // Res. Vet Sei.-1980.- V. 29.- P. 240-247.
365. Longenechor D.E. Fertility level of sow superovulated at postweining estrus / Longenechor D.E., Dag R.N. // J. Anim. Sei.-1969.- V. 24.- №3.- P. 709711.
366. Luyet B J. Life and death at low temperatures /Luyet B.J., Gehenio P. // Biodynamica. 1940 - 34 lp.
367. Lovelock J.E. Preventation of fruziny damage to living cell by dimethyl sulphoxide /Lovelock J.E., Bishop M.W. // Nature. 1959. - V. 183. - P.1384 -1395.
368. Maryman H.T. Freezing injurey from "Solution effect" and its prevention by natural or artificial cryoprotection /Maryman H.T., Williams R.J., Douglas M.S. // Cryobyology. 1977. - V. 14. - № 3. - p. 287 - 302
369. Mahmond M.F. Comparative study of the phosphatases activity on fresh and frozen semen of bovine / Mahmond M.F. et al. // Ind/ Vet. J. -1986. V. 63. -N.5.-P. 393-396.
370. MapHHOB IT.H. KbnHTBaHe BJimiHHeTO Ha pa3pjmHTejiH, cBefltp^camHeантиоксиданти,,върху замразяемостта на овчи сперматозоиди / Маринов П.И., Гудова Ч.Н., Семков М.М. и др. // Криобиология на половите клетки. София,1983. -Р. 102-111.
371. Martin-Rill о S. Is progressing in-Spain / Martin-Rillo S., How A.I. // Pig Inter.- 1984.- №2.-P.24-28.
372. Martinat-Botte F. Estrus control-in gilts with norethandrolone injection, and-an analoge.of prostaglandins / Martinat-Botte F. // Ann. Biol. Anim. Biochem. Biophys.- 1975.-V.15.- P. 1021-1022.
373. Masuda H. Effect of magnetic firld on frozen-thawed boar spermatozoa. / Masuda H., Sonohara KM Japanrse J. of Swine Sci. 1995.-V.32.- №3.- P.203-205.
374. Mazur P. The role of intracellulare freezing in the death of cell cooled at supraoptimal rates / Mazur P. // Cryobiology. 1977.- V. 14: - P. 251-272.
375. Meese G. Ewbanic R. Exporatory behavior and* leadership in the domesticated pig / Meese G. Ewbanic R. // Brit. Vet. J.-1973.- V. 17.- P. 229-251.
376. Miskovic M. The effect of sportening lactation on fertility of sows / Miskovic M. // Acta Veter.-1974.- V.24.- №2.- P. 78-86.
377. Milin J. Elements dracupuncture traditionnelle equine / Milin J., Molinier F., Tranba M. // Pract Veter. Equine.-1988.- V. 20.- № 2.- P. 4-7.
378. Momkilo Ml, Growth and reproductive performance in pigs fed a diet low in selenium / Momkilo M., Velickovski S., Ilvic V. // 38 th Ann. Meet of the Europ. Assoc. Anim. Prod. Lissabon.-1987.- V. 2.-P. 1238-1239.
379. Moretti A. Artificial insemination of swine: fertility using several liquid semen diluents / Moretti A. // Proc 8 th Int. Pig. Vet. Soc. Cong.Ghent. Belgium.1984.-P. 293.
380. Morrow W.E. Effect of injecting sows with prostaglandin F-2a immediately postpartum on subsequent reproductive performance / Morrow W.E.,
381. Britt J. Belschner A. e.a. // Swine Health and Production. -1996.- V.2. №2.- P. 73»402'. Nath I. Correlative biochemical and ultrastructural studies on, the mehanism of freezing damage the ram semen / Nath I. // Cryobiology. — 1972. Y. 9.- P.240-246.
382. Nellor I.E. Control of estrus and ovulation in gilts by orally effective progestagens compounds / Nellor I.E. // J. Anim. Sci.-1960.- V. 19.- P. 412-420.'
383. Николов И. Влияние на лазерното излъчване върху семенна течност от бици- при технологията за криоконсервация. / Николов И., Георгиев С., Чизмаров К. // Животновъдни Наука. София. - 1986.- Е. 23.- №11.-С.З-7
384. Nishimura К. Effects of glutathione on the motility of frozen-thawed boar spermatozoa / Nishimura K., Morii H. // Anim. Sci. Technol.- 1993.- V. 64.-№5.- P. 433-439.
385. Nissen A.K. The influence of time of insemination relative to time of ovulation on farrowing frequency and litter size in sows as investigated by ultrasonography / Nissen A.K., Soede N.M., Hyttel P. e.a. // Theriogenology.-1997.-V. 47-P. 1571-1582.
386. Nguen Thi Hien. Results of research on pig sperm dilution in coconut milk medium / Nguen Thi Hien, Nguen Huw Thao, Pham Duy Khim. e.a. // Agr. and Food Ind.-1991.- № 7.- P. 321-323.
387. Pace M.M. Releese of GOT from bovine spermatoza as a test method of assessing semen qualita and fertility/ Pace M.M., Graham E.F// Biol. Reprod.-1972.-3 .-P.-140-146.
388. Passille A.M. Performance of young pigs: relationship with periparturient progesterone, prolactin and insulin of sows / Passille A.M., Rushen J., Foxcroft G.R. e.a. // J. Anim. Sci.-1993.-V. 71.-P. 179-184.
389. Pehrson B.O. Glutathione peroxidase activity in heifers fed diet supplemented with organic and inorganic selenium compounds / Pehrson B.O., Knutson M., Gyllensward M. // Swedish J. Agric. Res.-1989.- V. 19.- P: 53-56.
390. Polge C. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at -79°C / Polge C., Rowson L.E. // Nature. 1952.-V. 169.-N. 4307.-P. 626-627.
391. Folge: С. Revival of spermatozoa after vitrification and degidratation at low temperature /Polge C., Smith A.I., Parkers A.S.- // Nature: 1969. - V. 164. -№4172.- P. 666-667.
392. Pondzo M;, Komparativnaistrazivanjao~ pogodnosti? primjene. nekih ; razrjedi-vacaza sperm nerasta / Pondzo« M. // Veterinarian-1981.- V. 30,- № 3.-P.547-550.
393. Pctchey A.M. Supplementary, light and pig performance / Petkey A.M., English P.R. // Farm. Build. Progr.-l 987.-V. 88.-P. 17-19.
394. Prendergast E. Charged lipoprotein fractions of egg yolk in bovine semen diluents /Prendergast'E., Vishwanath R., Shannon P. e.a.). // Proc. 26 Ann. Conf. Austr. Soc. Reprod. Biol: Brisbane. - 1994. - v. 26. - p. 113.
395. Pratt: W.D. Effect of selenium supplementation on bull sperm metabolism in vitro. / Pratt W.D. e.a. // Theriogenology.-1980/-V.13;-N5.-P. 369379.
396. Pringle M: I. Biomembrane structure and effect: of temperature
397. Pringle M. L, Chapman D. // Effect of Low Temperatures on Biological
398. Membranes. —Acad. Press. London; -1981. — P. 21-27.
399. Rasbech N.O. A review of the causes of reproductive failure in swine /RasbechN.O.//Brit.Vet. -1962.-V. 12.-P.599-616.
400. Reed H.G., Androgen steroids as an aid to the detection of:oestrous in pig artificial insemination / Reed H.C., Merlose D.R., Patterson? R.L. // Brit. Vet. J.-1974.-V.30.-P. 61-67.
401. Revell S.G. A long-time: ambient temperature diluent for, boar semen / Revell S.G;, Glossep Є.Е. // Anim. Prod. 1989.- V. 48.- №3.- P. 579-584.
402. Revell S.G. Diluent for longer semen storage / Revell S.G. // Pig Int.-1990.-V. 20.- P. 30-34.
403. Rodriguez-Martinez H. Use of hyaluronic acid for selection of frozen-thawed bull spermatozoa / Rodriguez-Martinez H., Berrosteiguieta A., SoderquistL. //12 thlnt. Congr.Anim. Reprod.-1992.-V. 1.-P.520-522.
404. Rojanasthien S. Effect of. transportation and relocation in post-weaning ano-estrous primiparous sows / Rojanasthien S. // Acta Vet. Scand.-1989.- V. 30.-N.l.-P. 1-8.
405. Ruda M. Wplyw profilactyczego stosowania vitaminy A i mikroelementow Cu, Mn, Zn w cyklu rozplodowym loch / Ruda M. // Zesz. Nauk Arwkrakowic. Rozpr. Habilit.-1987.- N.8.-P. 1-80.
406. Saacke R.G. Acrosomal cap abnormalities of sperm from subfertile bulls / Saacke R.G., Amann R.R., Marshall C.T. //J. Anim. Sei. 1968. - V. 27. -N.5.-P. 1391.
407. Saton K. Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a new colorimetric method / Saton K. // Clinica Chimica Acta.- 1978,- V. 90.- № l.-P. 37-43.
408. Seren E. Effect of high Cortisol secrecion in ovariectomized sows / Seren E., Mattioli M., De Rensis F. //11 th Int. Congr. on Animal Reprod. and A.I. -Dublin 1988-v. 4-p. 417-419.
409. Schaap P. Verlängerung der Haltezeit von Frischsperma / Schaap P. // Zuchtwahl Besam.-1987.- V. 114.- P. 26-29.
410. Scilling E. Induction and synchronisation of oestrus in prepuberal gilts and anoestrous sows by a PMS/HGG-compound / Scilling E., Cerne F. // The Vet. Ree.- 1972.-V. 91.- № 20. -P. 471-474.
411. Signoret I.P. The reproductive behavior of pigs in relation to fertility / Signoret LP. // Vet. Rec-1971.-V. 88.-P. 34-35.
412. Sinha R. Significance selenium-labelled proteins for selenium's chemopreventive function / Sinha R., Bansal M.P., Ganther H.E. // Carcinogenesis.-1993.- V.14.-P. 1895-1900.
413. Soma' I.M. Effect of pregnant mare serum and chlortetracyline on the reproductive efficiency of sows / Soma I.M., Speer V.C. // J. Anim. Sci.- 1975.-V.41.-P. 100-105.
414. Stork M.G. Seasonal reproductive in efficiency in large pig'breeding units in Britain. / Stork M:G. // Vet. Rec. 1979 - V. 104 - P. 49-52
415. Skjerwold H. Evidence of immunological influence on the number of live embryos in. pig / Skjerwold H., Almlid T., Onstad O. e.a. // Z. Tierrucht. Zuchtgbiol.- 1979.-V. 96.- P. 235-236.
416. Stork M.G. Seasonal reproductive inefficiency in large pig breeding units / Stork M.G // Vet. Rec.- 1979.- V. 104.- P. 49-52.
417. Slavik T. Effect of glycerol on the penetration ability of fresh ram spermatozoa with zona-free hams ter eggs / Slavik T. //J. Repr. Fert. -1987.- V. 79. -N.l.-P. 99-103.
418. Strzezek J., Biochemiczne i morfologiczne smiany w nasieniu Knura podczas przechowywania w temperaturze 15°C do 18°C / Strzezek J., Slaweta R. // Med. Wet-1984.- V.40.- № 8.- P. 495-499.
419. Summermatter P. Possibilities for improving the preservability of boar semen / Summermatter P.// In: Verhandlungsberichte 4. Veterinar- Humanme.-Dizinische Gemein-schaftstagung, Hannover.-1984.- P. 72-75.
420. Tamuli M5.K., Innovation of boar semen diluters / Tamuli M.K., Rajkonwar C.K. // Indian Vet. J.-1987.- V. 64.- N.9.- P. 782-784.
421. Tervit H.R. The insemination of sheep with fresh or frozen semen / Tervit H.R., GooldP.G., James R.W. //Proc. N.Z.Soc. Anim. Prod.- 1984. -V. 44. -P. 11-13.
422. Thibier M. Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination. / Thibier M., Guerin B.// Anim/ Reprod. Sci.- 2000.-V. 62.- P. 233251.
423. Thomson J.G. The effect of washing and protein supplementation on the acrosome reaction of ram spermatozoa in vitro /Thomson J.G., Cummins J.M. // Anim. Reprod. Sci. 1985. -V. 9. - № 1. - P. 75-78.
424. Upreti G.C. Development of a chemically ram semen diluent (RSD-1) / Upreti G.C., Oliver D.M., Dyganzich D.M. e.a. // Anim. Reprod. Sei.-1995.-V. 37.-P. 143-157.
425. Urban F. Vliv laseroveno zareni na reprodukci skotu. / Urban F.,i
426. Zizlavsky J. //Acta Universitatis agriculturae. 1993. - R. 41. -№3. - P.-261-271.
427. Valpreda M. Prove comparative su alcuni mestreu diluitor nella fecondazi-one strumentale dei svini / Valpreda M. // Riv. Siimc-1983.- V. 24.- №6.-P. 45-47.
428. Vinter P. Vliv pridavku syntetickeho analogu PGF-2a oestro-phanu spofa do inseminacni davky na prodnost prasnic / Vinter P., Cerovsky J. // Zivocisna Vyroba. -1985.-V. 30.-№3.-P. 245-250.
429. Vishwanath R., Shannon P. Storage of bovine semen in liquid and frozen state. / Vishwanath R., Shannon P.// Animal. Reprod. Sei.- 2000.- V.-62.- P.-25-53.
430. Wagnen I.F. Synchronization of estrus in gilts with an orally active progestin / Wagnen I.F., Seerley R.W. // J. Anim. Sei.-1961.- V. 20.- P. 980-981.
431. Waberski D.' Wirking von bovinem scrumalbumin und Zwitterionen buffer auf flussigkonservierten Ebrsamen / Waberski D., Weitze K.F., Rath D. // Zuchthygiene.-1989.-V.24.- №3.-P. 128-133. 195.
432. Waberski D. The initial fertilizing capacity of long term stored liquidsemen following pre and postovulatory insemination / Waberski D., Weitze K.F.,1.itmann C. e.a. // Theriogenology.-1994.-V.41.-P. 1367-1377.
433. Watson P.F. Effect of egg-yolk, glycerol and acrosomal structures of frozen ram spermatozoa / Watson P.F., Martin J.C. // Aust. J.Biol. Sei. 1975. -V.28.- №2. - P. 153-159.
434. Watson P.F. The effect cold shock on sperm cell membrane / Watson P.F.// Effect of low temperatures on biological membrances.- 1981.- P. 189-218.
435. Watson P.F. Influence of butylated hydroxytoluence (BHT) on the viability of ram spermatozoa undergoing cold shock. / Watson P.F.,
436. Anderson W.J. // J. Repr.Fert. 1983. - V. 69. - P. 229-235. . .
437. Weitze K.P. The insemination of sheep with fresh or frozen semen / Weitze K.F;//Aust. J.Biol. Sei:.-1987.'-V.32.--№2.-P. 103-109. "
438. Welp C. Induction of parturition in; swine with a prostaglandin analog and oxytocin / Welp C. // Theriogenology.-1984.- V. 22.- N.5.- P. 509-520.
439. Welp C. Indüction;of parturition in pigs by intravaginal application of the prostaglandin analog cloprostenol / Welp C, Holtz W. // Theriogenology.-1988.- V.29.-№5.-P. 1037-1041.
440. White J. The lipids of sperm in relation to cold :schok / White J:, Darine-Bennet A. //Proc; 8? Int. Congr. Anim. Repr. A.I., Krakow. 1976.- V.4. - P. 951954. ,
441. Wolf D.E. Lipid domains in- the ram. sperm plasma membrane demonstrated by differential scanning calorimetry / Wolf D.E. et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1990.-V. 87.-№17.- P. 6893-6896.
442. Zamfirescu S. The initial fertilizing capacity of long term stored liquid semen following pre and postovulatoiy insemination / Zamfirescu S// Anim. Reprod. Sci.-1987.- V. 37.- P. 122-124.
443. Ziecik A.J. In hiduction of fertile estrus in prepu-bertal gilts and weanedsows / Ziecik A J., Dybalai J. Martin Rillo e.a. // Domestic Anim. Reprod.- 1996.-V. 31.- P. 469-472.
444. Zimmerman R. Why some gilts cycle sooner / Zimmerman R. // Hog Farm. 1984. - V. 21. - № 6. - P. 26-27.
-
Епишина, Татьяна Михайловна
-
доктора биологических наук
-
Москва, 2011
-
ВАК 06.02.07
- Способы повышения воспроизводительной функции свиней
- Использование ДНК-технологии для оценки воспроизводительных качеств свиней
- Влияние подбора родительских пар по группам крови на воспроизводительные качества свиней
- Романовская порода овец
- Совершенствование хозяйственно-биологических особенностей тонкорунных пород овец в условиях Зауралья Башкортостана
