Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Совершенствование методов выделения и идентификации патогенных для человека вибрионов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование методов выделения и идентификации патогенных для человека вибрионов"

р Г Б ОД 1 6 ОПТ 1935

На правах рукописи

ДАНИЛКИНА ЕЛЕНА БОРИСОВНА

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКА ЦРТи ПАТО!Ъ.ННЫл ЛЛЛ ЧЕЛОВЕКА ВИБРИОНОВ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саратов - 1995г.

Работа выполнена в Ростовском-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском противочумном институте.

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор Ю.М.Ломов

кандидат медицинских наук, ст.н.сотр. Л.М.Смоликова

Официальные оппоненты: член-корреспондент Российской

академии технологических наук, доктор медицинских наук, профессор А.К.Адамов

доктор медицинских наук, профессор Л.Ф.Зыкин

Ведущая организация - Волгоградский научно-

исследовательский противочумный институт

Защита состоится г. на заседании

диссертационного совета Д0743201 по защите диссертаций при Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб" (410071, г.Саратов, Университетская ул., 46)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке

института "Микроб". #

Автореферат разослан " О " 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Г.А.Корнеев

дуальность проблемы. В последнее десятилетие в >ной литературе появились многочисленные ия о заболеваниях, вызванных условно-патогенными ами.

[роизошли серьёзные изменения и в классификации ов. В род Vibrio были включены многие виды, в том шные в патологии человека. В настоящее время (ители 15-ти из 34-х известных видов вибрионов рированы как возбудители того или иного 1ния у человека. К их числу о тнесены: V.cholerae (01 групп), V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.mimicus, s, V.furnissii, V.hollisae, V.vulnificus, V.damsela, inikovii, V.carchariae, V.anquillarum, V.ordalii, laiicnsis, V.saimor.jci'j?!

'реди них наиболее изучены холерные и элитические вибрионы. Холерные вибрионы 01 i как возбудители холеры. С 1992 года стал известен урологический вариант "Бенгал", представители э, в отличие от вибрионов всех других серогрупп не ;обны вызвать заболевания, сходные по клинике и ологии с холерой.

[редставители остальных серогрупп (02-0138), условно-патогенными микроорганизмами, могут -ггь острые кишечные инфекции, не имеющие 1И к эпидемическому распространению, или шил с внекишечной локализацией возбудителя, ибрионы других патогенных видов могут быть й гастроэнтеритов разной степени тяжести, раневых !Й, пневмоний, септицсмий, менингита. Заболевания, генные этими микроорганизмами, регистрируют во странах мира, в основном, в прибрежных районах в зремя года, зачастую в момент массового отлова хей водоёмов. Инфицирование людей связано с м в морской воде, употреблением в пищу продуктов влей и разделкой рыбы.

В нашей стране зарегистрированы групповые и спорадические заболевания, вызванные У.рагаЬаето1у1дси5 и У.а^то^юш. Вибрионы других патогенных видов обнаружены у людей лишь в единичных случаях. Малочисленность подобных сообщений объясняется, в первую очередь, несовершенством методов их лабораторной диагностики и недостаточной осведомленностью специалистов о патогенных для человека вибрионах.

Существующие схемы исследования на патогенные вибрионы ориентированы на выделение холерных, парагемолитических, алгинолитических вибрионов и представителей некоторых других видов.

Имеющаяся в Центре патогенных вибрионов коллекция культур представлена, в основном, холерными, парагемолитическими и алгинолитическими вибрионами различного происхождения и типовыми штаммами отдельных видов, преимущественно из зарубежных коллекций.

Обнаружение новых видов патогенных вибрионов на территории нашей страны требует совершенствования методов их выделения и идентификации, а также пополнения коллекции этих микроорганизмов для научных целей.

Все это свидетельствует об актуальности проблемы бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых патогенными для человека вибрионами. В связи с этим необходимо углубленное изучение биологических свойств представителей различных видов патогенных вибрионов с целью уточнения их таксономического положения, выявления возможных внутривидовых различий и разработки дополнительных методов их выделения и идентификации.

Цель и задачи исследования. Совершенствование методов выделения и идентификации патогенных для человека вибрионов, а также пополнение музейной

коллекции этих микроорганизмов.

В соответствии с поставленной целью в задачи исследования входило:

1. Сравнительное изучение биологических свойств вибрионов разных видов, выделенных в нашей стране и за её пределами, и отбор штаммов для включения в коллекцию Центра патогенных вибрионов при Ростовском НИПЧИ.

2. Уточнение видовой принадлежности некоторых коллекционных и свежевыдсленных на территории СНГ штаммов методом ДНК-ДНК гибридизации.

3. Оценка перспективности использования коммерческих питательных сред и их модификаций для ньыслеиия Бпбриспсзз патогеннм* иидон.

4. Определение минимальною набора дифференциальных тестов, основанных на наиболее весомых таксономических признаках.

5. Изучение возможности использования агглютинирующих сывороток к вибрионам некоторых видов для межвидовой и внутривидовой дифференциации.

6. Анализ чувствительности патогенных вибрионов к антибактериальным препаратам.

7. Усовершенствование бактериологической диагностики заболеваний, вызываемых патогенными для человека вибрионами.

Научная новизна. Впервые предложен микробиологический ключ для идентификации патогенных вибрионов с использованием минимального набора тестов и разработана единая схема их бактериологической диагностики. Методом определения гомологии ДНК подтверждена видовая принадлежность некоторых штаммов патогенных вибрионов, выделенных в СНГ. Выявлена антигенная неоднородность патогенных вибрионов отдельных видов.

Установлена высокая чувствительность вибрионов патогенных видов к левомицетину, доксициклину, цефотак-симу, налидиксовой кислоте, ципрофлоксацину.

Практическая значимость. Разработанная единая схема бактериологического исследования на патогенные вибрионы различных видов с идентификационным ключом включена в "Методические рекомендации по лабораторной диагностике патогенных для человека вибрионов", а также в "Инструкцию по организации и проведению противохолерных мероприятий"(1995, ч.З - "Лабораторная диагностика холеры"). Материалы диссертации легли в основу лекций и практических занятий на курсах специализации и усовершенствования врачей-бактериологов по особо опасным инфекциям при Ростовском НИПЧИ. Существенно пополнена коллекция патогенных вибрионов 123-мя штаммами, охарактеризованными по фено- и генотипу.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1 .Разработанная единая схема бактериологического исследования на патогенные вибрионы позволяет выделять и идентифицировать все виды этих микроорганизмов, включая возбудителей холеры.

2.Предложенный бактериологический ключ упрощает идентификацию вибрионов патогенных видов.

3.Дополнение коллекции вибрионов охарактеризованными по фено - и генотипическим признакам штаммами 11-ти патогенных для человека видов расширяет возможности использования их для научных исследований, производства и контроля биологических диагностических препаратов.

4.Выявленная антигенная неоднородность вибрионов некоторых патогенных видов свидетельствует о перспективности разработки методов их серологической дифференциации.

5. Установленная высокая чувствительность вибрионов изученных видов к цефотаксиму, левомицетину, доксициклину, налидиксовой кислоте, ципрофлок-сацину позволяет считать их средствами выбора при

лечении заболеваний, обусловленных этими микроорганизмами.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на Российской конференции по проблеме "Холера" (г. Ростов-на-Дону, 1992 г.), на проблемной комиссии "Холера и патогенные для человека вибрионы" (г. Ростов-на-Дону, 1994 г.), на II Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (г. Москва, 1995 г.), на институтских научных коифсиСдШ;^:; НИПЧИ.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация представлена на 152 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 226 наименований работ, из них 70 отечественных и 156 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 рисунками и 15 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Штаммы патогенных вибрионов разных видов. В работе изучен 221 штамм вибрионов патогенных видов, из них 10 штаммов У.с1ю1егае 01, 22 штамма У.с1ю1егае 0139, 53 - У.сЬо1егае других серогрупп, 74 - У.ПтчаНз, 29 -У.рагаЬаешо1уисиз, 25 -У.а^икЯуЙсиэ, 20 - У.п^сЬпЦсоуп, 11 - У.уЫтПсив, 7 -УТигшзэп, 7 - У.пнгтсш, 5 - V.anqшllarum, 1 -У.сагсЬапае, 1 - У.стсптаИеш^з.

Кроме того, изучены свежевыделенные культуры 121 штамма вибрионов разных видов, поступивших из опорных баз Центра для подтверждения видовой принадлежности.

Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств проводили общепринятыми методами, изложенными в "Инструктивно-методических указаниях по лабораторной диагностике холеры" (1984) и руководстве по энтеробактериям (1985).

Оценку ростовых свойств питательных сред проводили согласно требованиям "Инструкции по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона" (1983)

Питательные потребности изучали у 149 штаммов патогенных вибрионов разных видов на минимальной синтетической среде Бхаскарана-Роули.

Агглютинирующие сыворотки получали путем иммунизации кроликов О- и ОН-антигенами вибрионов разных видов. О-антиген получали из взвеси суточной агаровой культуры кипячением в течение 2-х часов в 10% растворе хлорида натрия. Для получения ОН-антигена бактериальную взвесь обрабатывали 1% раствором формалина. Кроликам калифорнийской породы весом 2-2,5 кг внутривенно вводили антиген по 1, 2, 4 млрд м.к. с интервалом 5-6 дней. Серологическую активность сывороток оценивали в реакции объемной агглютинации с гомологичными штаммами.

Минимальную подавляющую концентрацию антибактериальных препаратов определяли методом двукратных серийных разведений в агаре согласно "Инструкции по определению чувствительности возбудителей опасных инфекционных заболеваний к антибиотикам и химиопрепаратам" (1990).

Хромосомную ДНК выделяли из клеток методом Marmur (1961).

Плазмидную ДНК получали методом Birnboim, Doly (1979).

Определение степени гомологии ДНК разных видов вибрионов проводили методом реассоциации в растворе (Методы общей бактериологии, 1984).

Молекулярное зондирование с целью обнаружения в геномах исследуемых штаммов нуклеотидных последовательностей, специфичных для вида V.cholerae (Монахова с соавт.,1993), генов vet (Гинцбург с соавт.,1984) и hly (Власов с соавт.,1992) проводили согласно методическим рекомендациям Гинцбурга с соавт.(1986).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

•Josqj'Mt-Ht.i nviiiol^ic ."^^ПаторнОЙ диагностики предусматривало pajpaoo¡,;у единой с^мы иылслс::::.'* v идентификации патогенных для человека вибрионов.подбор оптимальных элективных сред для выделения этих микроорганизмов, определение минимального набора дифференциальных тестов, коррекцию этапов исследования материала от больного и создание бактериологического ключа для дифференциальной диагностики вибрионов. Кроме того, был предпринят поиск дополнительных возможностей дифференциации вибрионов с помощью антибиотиков и агглютинирующих сывороток, полученных к вибрионам некоторых патогенных видов.

Для оценки коммерческих питательных сред и их модификаций предварительно по результатам изучения питательных потребностей вибрионов был составлен набор штаммов, в который вошли ауксотрофные и прототрофные представители 9-ти видов вибрионов.

Показано, что 1% пептонпая вода с 1.5% хлорида натрия обеспечивает накопление вибрионов всех изученных видов в течение 6-ти часов.

Результаты испытаний различных вариантов плотных питательных сред представлены в таблице 1.

Оптимальной средой для вибрионов патогенных

видов оказался щелочной агар МНИИВС им.Мечникова , обеспечивающий рост всех исследованных штаммов из посевной дозы 100 м.к. Добавление к этой среде 30-50 мг/мл теллуристокислого калия, не снижая ростовых качеств среды, ингибирует рост сопутствующих микроорганизмов.

Таблица 1.

Рост вибрионов патогенных видов на разных _элективных средах_

Виды вибрионов Средние арифметические КОЕ, выросших из 100 клеток на средах

ЩАМ ЩАМ+ теллурит калия (ЗОмг/л) СЭДХ

V.cholerae 01 54± 10.5 34±15.2 40± 12.5

V.cholerae non 01 38±2.8 41±23.3 32±9.0

V.cholerae 0139 33±15.8 34±10.5 21±5.4

V.mimicus 41±11.3 46±14.4 47±27.9

V.fluvialis 27+10.4 23±11.7 45±12.7

V.furnissii 33±13.7 28±9.4 18± 8.7

V.parahaemolyticus 52±21.0 48±26.1 30±16.1

V.alginolyticus 34± 13.6 24± 11.9 2б±11.8

V.vulnificus 33±26.6 37±30.7 36±31.0

V.metschnikovii 77±33.6 59±25.0 31 ±22.0

; V.anguillarum 51 ± 17.0 48±30.0 21±1б.О

сухой щелочной агар МНИИВС им. Мечникова среда элективно-дифференциальная сухая для выделения холерного вибриона колониеобразующие единицы

Примечание: ЩАМ -

сэдх -

КОЕ

Среда элективно-дифференциальная сухая для выделения холерного вибриона производства Ростовского НИПЧИ, несколько уступая щелочному агару МНИИВС им. Мечникова по чувствительности, обеспечивает рост колоний подавляющего большинства штаммов в количестве не менее 30% от посевной дозы и ингибирует рост микробов-ассоциантов.

На основании полученных результатов в качестве элективных сред нами рекомендованы щелочной агар МНИИВС им.Мечникова с теллуритом калия и среда элективно-дифференциальная сухая для выделения холерного вибриона .

Установлено, что на коммерческих средах Эндо и ÍIicicí'p^h »«■"«n'i'iin обнаружение вибрионов отдельных видов, по кптс специальные среды дин ньыслениа шшрпопов патогенных видов они не могут быть использованы.

Для определения минимального набора дифференциальных тестов было изучено 211 штаммов 11-ти видов рода Vibrio по 50-ти признакам, рекомендованным рядом авторов podin et al.,1992; Tison et al.,1984; West et al.,1984; Bergey's manual of systematic Bacteriology, 1984).

Оценка таксономической значимости признаков вибрионов разных видов позволила с целью упрощения первичной идентификации культур рекомендовать минимальный набор диагностических тестов. При составлении набора учитывалась значимость тестов для дифференциации вибрионов, однородность результатов тестирования для каждого вида и простота их выполнения. Рекомендуемый набор включает в себя тесты по оценке следующих признаков:

- подвижность;

- рост при 4°С и 45°С;

- рост в присутствии натрия хлорида в концентрациях 3%, 6%, 8%, 10% и без него;

- образование газа при ферментации глюкозы;

- наличие индофенолоксидазы, лизиндекарбокси-лазы, орнитиндекарбоксилазы, аргинидигидролазы, нитрат-редуктазы, Д-галактозидазы;

- ферментация арабинозы, маннозы, сахарозы, лактозы, целлобиозы, салицина;

- образование ацетилметилкарбинола, индола.

Разработанная и предлагаемая нами схема

исследования материала от больного в отличие от общепринятого исследования на холерные вибрионы, является единой для выделения всех видов патогенных вибрионов, включая возбудителей холеры. В ней предусмотрено двукратное обогащение в 1% пептонной воде с повышенным до 1.5% содержанием хлористого натрия и последующим высевом на щелочной агар и одну из рекомендованных нами элективных сред. Подозрительные на холерные вибрионы колонии изучают по общепринятой методике. Колонии, не агглютинирующиеся холерной 01- и 0139 сыворотеами, но с характерной для вибрионов морфологией отсевают не только в полиуглеводную среду, но и в 1% пептонную воду, не содержащую хлористый натрий, что позволяет предварительно дифференцировать культуры по галофильности.

Для дальнейшего исследования отбирают оксидазо-позитивные культуры, ферментирующие глюкозу не только до кислоты без газа, но и с образованием газа, а также оксидазонегативные культуры.

По результатам этого тестирования проводится межвидовая дифференциация культур, классифицированных как вибрионы, с привлечением разработанного нами микробиологического ключа, состоящего из трех частей (Рис.1)

В первой предусмотрена дифференциация негалофильных вибрионов: У.сЬо1егае и У.гшпнсиз. В этой группе могут оказаться и некоторые штаммы У.ЯтааНв и У.те15сЬткоуи.

Рис. 1 Дифференциация вибрионов, патогенных для человека (идентификационный ключ)

1)-Некоторые штаммы У.Пи\чаЦБ,У-П1е'5сЬ,111ко\<и и УХипи^и растут в пептонной воде без N80.

2)-Нехоторые штаммы У.Я1ма)13 растут в пептонной воде с 10%КаС1.

3)-АДГДДК,ОДК-аргининдигидролаза, лизин - орнитиндекарбоксилаза.

4)-ОИРО - тест на р - галактозндазу. (+) - положительный признак;

(-) • отрицательный признак.

Во второй части ключа дана схема дифференциации галофильных вибрионов, ферментирующих глюкозу без образования газа: У.рагайаето^исиБ, У.а^то1уЦсиз, У.уЫпШсиэ, У.ЬоШвае и галофильных штаммов У.АшгёаНз и У.П^ЗСЬПУсоуц.

Третья часть ключа полезна для дифференциации галофильных вибрионов, ферментирующих глюкозу с образованием газа: УЛигшвзН и У.ёатзеИа. Использование предложенной схемы способствовало выделению на территории СНГ 218 штаммов вибрионов 9-ти видов.

В результате изучения отношения к химиотерапев-тическим препаратам вибрионов различных видов установлена высокая чувствительность к левомицетину, доксициклину, цефотаксиму, налидиксовой кислоте, ципрофлоксацину. Полученные данные обосновывают перспективность использования этих антибактериальных препаратов для лечения заболеваний, вызываемых вибрионами патогенных видов.

Вместе с тем выявлены различия в чувствительности к полимиксину у вибрионов некоторых видов (Рис.2). Данные проведенных исследований показали, что к 20ЕД/мл полимиксина были устойчивы 98% всех изученных штаммов У.уиЬШсив, а парагемолитические вибрионы были чувствительны в 100% случаев. По-видимому различное отношение к 20ЕД/мл полимиксина в питательных средах можно использовать в качестве дополнительного диагностического признака для дифференциации У.уи1шПсш и У.рагаЬаето1уйсиз. Однако, малочисленность коллекционных штаммов У.уиМПсиБ не позволяет пока сделать окончательного заключения о возможности использования этого антибиотика в целях дифференциации этих видов.

В поисках дополнительных возможностей диагностики вибрионов патогенных видов были получены агглютинирующие О- и ОН-сыворотки к У.АтчаПз, У.гшгшсиз, У.уиЬлПсиБ и УЛиггшзи. С помощью этих препаратов показана антигенная неоднородность вибрионов

указанных видов как между собой, так и внутри каждого из этих видов.

100 3? 90

i

I 70

3

х 60 л а

? 50

О

5 40

о

с

и

5 20 с: о

к: 10

0----

10ED . ., „ 20ED 30ED 50ED

Рис.2. Чувствительность к полимиксину V.vulnificus и V.parahaemolyticus.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности разработки серологического метода дифференциации вибрионов некоторых видов.

Для обеспечения дальнейших научных исследований в области биологии патогенных вибрионов, а также производства и контроля диагностических препаратов существующая при Ростовском НИПЧИ коллекция патогенных вибрионов была дополнена 123 штаммами вибрионов П-ти патогенных видов рода Vibrio, охарактеризованных фено- и генотипически (Табл.2). Штаммы, предлагаемые для включения в коллекцию, отобраны из числа культур, поступивших в Центр патогенных вибрионов в 80-90-х годах, выделенных из

П

м

I

□ V.vulnificus б V.parahaemolyticus

внешней среды и от шодей в нашей стране и за ее пределами. Типовые штаммы получены из зарубежных коллекций.

В коллекцию также вошли холерные вибрионы новой 0139 серогруппы, выделенные от больных в Индии и России. Следует отметить, что вибрионы этих штаммов по изученным фенотипическим признакам представляют собой однородную группу микроорганизмов, содержащих в своем геноме структуры, ответственные за продукцию холерного токсина . Кроме того, в число коллекционных культур включены 23 штамма холерных вибрионов не Ol, также обладающие vct-геном, выделенные от больных ОКЗ на территории Узбекистана в 80-х годах. Различий по фенотипическим признакам у них не выявлено.

Видовая принадлежность штаммов V.cholerae 0139 и V.cholerae поп 01 подтверждена методом молекулярного зондирования с использованием видоспецифичного холерного и hly-зондов.

Вибрионы других патогенных видов в подавляющем большинстве не отличались по фенотипическим признакам от своих типовых представителей. Однако, отмечены некоторые штаммовые различия по ряду признаков в пределах некоторых видов. Видовая принадлежность таких штаммов была подтверждена нами методом гибридизации тотальных ДНК, процент гомологии которых с типовыми штаммами был в пределах 72-100% (Табл.2) .

Таким образом, в результате проведенных исследований разработана единая схема выделения и идентификации патогенных для человека вибрионов, предложены оптимальные элективные питательные среды и идентификационный микробиологический ключ на основе минимального набора дифференциальных тестов. Оформлены методические рекомендации по лабораторной диагностике заболеваний, вызываемых этими микроорганизмами. Коллекция патогенных вибрионов Ростовского НИПЧИ пополнена 123 штаммами 11 видов, охарактеризованными по фено- и генотипическим

признакам. Определены перспективы дальнейших исследований по разработке дополнительных методов дифференциации отдельных видов патогенных вибрионов.

Таблица 2.

Сведения о новых штаммах, включенных в коллекцию

__ патогенных вибрионов. _

Результаты Число Про-

Из них молекулярного штам- цент

Виды и Все-го зондирования мов, гомо-

изучен- логии

ных ДНК

серогруппы штам оте- за- видо- Ыу- сг- мето- типовых

......

Л---- тПЧ- — Т- --Ч ТТИгГ Л'"'" ............ )

пых 111,1.4 НЫМ ЗОНДОМ ДНК-гибридизации ных штаммов

У.сЬо1егас 22 4 18 + + + 0

0139

У.сЬо1егае 23 23 - + + + . 4 73,0-94,0

поп 01

У.а^то1уКси5 10 7 3 - - 0

У.ГитаПя 17 10 7 - 10 76,9-99,0

УТигтвЗИ 7 4 3 - - 0

У.те(5с11шко- 8 4 4 - - - 6 73,2-100

уп

У.гтггмс^ 6 2 4 2 75,9-83,5

У.рагаЬаето- 11 б 5 - - - 3 80,1-85,6

1у 110115

\г.уи1шПсиз 16 12 4 - - 1? 77,7-95,5

Примечание: В коллекцию включены полученные из зарубежных коллекций типовые штаммы У.сагсЬапа.У.стслппаиег^з, У.аг^шНагшп. (+) - положительный результат; (-) - отрицательный результат.

выводы

1. Создана единая схема выделения и идентификации вибрионов патогенных видов и разработаны методические рекомендации по лабораторной диагностике вызываемых ими заболеваний.

2. На основе расширенной фенотипической характеристики патогенных вибрионов различных видов определен минимальный набор дифференцирующих признаков и предложен идентификационный микробиологический ключ.

3. Подтверждена видовая принадлежность некоторых коллекционных и выделенных на территории России и других стран СНГ культур патогенных вибрионов методом ДНК-ДНК гибридизации.

4. Существенно пополнена коллекция вибрионов представителями 11-ти патогенных видов рода Vibrio для обеспечения научных исследований.

5. Показана возможность использования в качестве элективных питательных сред для выявления вибрионов патогенных видов среды сухой элективно-дифференциальной для выделения холерных вибрионов, сконструированной в Ростовском НИПЧИ и щелочного агара МНИИВС им.Мечникова с теллуритом калия и без него.

6. Установлена высокая чувствительность изученных видов к цефотаксиму, левомицетину, доксициклину, налидиксовой кислоте и ципрофлоксацину, что позволяет считать их средствами выбора при лечении заболеваний, обусловленных этими микроорганизмами.

7. Показана принципиальная возможность выявления антигенной неоднородности вибрионов некоторых патогенных видов, что свидетельствует о перспективности разработки метода их серологической дифференциации.

список

работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Власов В.П., Монахова Е.В., Ушакова И.Е., Данилкина Е.Б., Ломов Ю.М. Гемолизин Vibrio cholerae eltor: клонирование и экспрессия генов в E.coli // Мол.генетика, микробиол. и вирусол,- 1992.- N7-8.- С. 14-20.

2. Ломов 10.М., Данилкина Е.Б., Смоликова Л.М., Гурлева Г.Г. Лабораторная диагностика патогенных для человека вибрионов // Актуальн.вопр.профилактики чумы и других инфекционных заболеваний: матср.научн.-практ.конф. - Ставрополь, 1994.-С.144.

3. Данилкина Е.Б., Смоликова Л.М., Харабаджахян Г.Д., Богданова М.И. Сравнительная оценка роста

БИирИОПОБ níiiurCHHblX uíiAÜti На КОЫМС'рТССКПл -í.iCKiiIuIIblX

средах//Сб.науч.тр. Вып.1. - Новороссийск, i 994. - С. 189-191.

4. Смоликова Л.М., Лобанова Л.Н., Данилкина Е.Б., Миронова A.B. Антигенные различия вибрионов некоторых патогенных видов //Сб.науч.тр. Вып.1. - Новороссийск, 1994. - С.170-172.

5. Данилкина Е.Б., Смоликова Л.М., Гурлева Г.Г., Воронежская Л.Г., Харабаджахян Г.Д., Богданова М.И.

Подбор коммерческих элективных питательных сред для выделения патогенных вибрионов разных видов // Клин, и лаб.диагностика. - 1994.- N4.- С.24-26.

6. Данилкина Е.Б., Ломов Ю.М., Смоликова Л.М., Миронова A.B. Изучение чувствительности патогенных для человека вибрионов к антибактериальным препаратам // Человек и лекарство: матер.2.Рос.нац.конгресса - М.,1995. -С.181.

7. Смоликова Л.М., Ломов Ю.М., Данилкина Е.Б..

Гурлева Г.Г., Воронежская Л.Г. Патогенные для человека вибрионы и лабораторная диагностика вызываемых ими заболеваний // Клин, и лаб. диагностика. -1995.- № 3 . - С.7-8.