Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состояние углеводного метаболизма при экзогенном воздействии лактатдегидрогеназы и малатдегидрогеназы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Состояние углеводного метаболизма при экзогенном воздействии лактатдегидрогеназы и малатдегидрогеназы"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На прав ах рукописи МЕДНИКОВА Ольга Борисовна

УДК - 577.1545.0015.

СОСТОЯНИЕ УГЛЕВОДНОГО МЕТАБОЛИЗМА ПРИ ЭКЗОГЕННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ И МАЛАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

( 03.00.04 - Биохимия )

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата . медицинских наук

Уфа - 1993

Работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Ф.НГильмиярова

Официальные оппоненты: член-корреспонцет РАМН,

доктор медицинских наук, профессор В.И.Рубин

доктор медицинских наук, профессор П.Н.Шарзев

Ведущая организация - Российский государственный медицинский университет.

Защита диссертации состоится

в_часов на заседании специализированного совета

К 084.35.02 при Башкирском государственном медицинском институте по адресу: 450000, г. Уфа, Ленина 3.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Башкирского государственного медицинского института ( г. Уфа, Ленина 3 ).

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук,

профессор ЭХ.Давлетов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Дисфункции ферментативных процессов, в изучении которых достигнуты большие успехи, занимают ключевые позиции среди причин и механизмов развития различных патологических процессов ( Карелин A.A., Коротким Р.Н., 1984; Веремеенко К.Н., 1987; Zech R., 1977; Bisaechi U. и соавт., 1977; Вилкинсон Д., 1931).

Сохраняющаяся актуальность проблемы обусловлена как возможностями улучшения качества диагностики энзимо-патии, так и все возрастающей реальностью использования ферментов с лечебной целью. Наибольшее развитие и применение получила ферментативная диагностика возникновения и течения патологических процессов (Чазов Б.И. и соавт., 1980; Розенфельд ЕЛ., 1981; Шепотиновский В.И., Микашенович З.И., 1990; Tzvetanova Е.М., 1982; Lott I.A., 19S4; Wills RJ, Headrick J.P., 1990 ). Большие надежды возлагаются на выявление ферментативных маркеров, что даст возможность иметь надежные диагностические критерии, отражающие специфичность того, или иного процесса ( Коровник Е.Ф., 1983; Гембиц-кая Т.Е., 1989; Шмелев Е.И., 1992 ). Лечебное применение ферментов несмотря на достигнутые значительные успехи еще не получило должного развития ( Видершайн Г.Я., 1982).

Одним из важнейших направлений в энзимологии является изучение роли энзимопатий в генезе нарушений углеводного обмена при различных заболеваниях ( Панченко Л.Ф., Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М., 1987 ). При этом весьма актуальным остается изучение метаболического эффекта зк-зогегаю вводимых ферментов. С этих позиций представляют интерес дегидрогеназы, в частности лактат- и малатдегид-рогеназы, влияние,которых на метаболические процессы при экзогенном их введении не изучено.

Это определяет одно из направлений дальнейшего исследования данной проблемы.

Цель исследования: изучить состояние углеводного метаболизма при экзогенном введении ферментов: лактатдегидро-геназы и малатдегидрогеназы; уточнить механизмы взаимоотношения ферментов в условиях гидерферментемин в интересах выяснения природы и характера их изменений.

Задачи исследования.

1. Выделить из биологического материала млекопитающих в очищенном виде лактат- и малатдегидрогеназы, провести их стандартизацию.

2. Изучить активность лактатдегидрогеназы в крови и тканях экспериментальных животных при экзогенном введении данного фермента.

3. Выяснить влияние экзогенной лактатдегидрогеназы на состояние гликолитических процессов и активность альдола-зы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы.

4. Оценить характер изменений некоторых показателей углеводного обмена под воздействием экзогенной малатдегидрогеназы.

Научная новизна. Установлено влияние выделенных из биологического материала очищенных и высокоактивных лактат- и малатдегидрогеназ на гликолитнческие процессы у экспериментальных животных. Впервые исследована динамика изменений показателей обмена углеводов при лактат- и малатдегидрогеназпой пшерферментемии. Уточнены механизмы, обеспечивающие как повышенное содержание лактатдегидрогеназы в крови и тканях экспериментальных животных при экзогенном ее введении, так и влияние этого фермента на другие ферментативные системы, участвующие в гликолизе. Установлено влияние экзогенной малатдегидрогеназы на активность. альдолазы и содержание глюкозы. Отмечено отсутствие повреждающего воздействия на мембранные структуры в ответ на введение ферментов. Выявле-

ны ранее не известные факты избирательности внедрения экзогенного фермента в скелетную мышцу, сердце, печень при сохранении специфичности метаболизма исследуемых тканей. Полученная модель гиперферментемии открывает еще один механизм возможной птергликемин экстраинсулярно-го характера и активации гликолитических процессов.

Ни защиту выносятся следующие положения:

1. При экзогенном введении лактатдепщрогеназы происходят характерные изменения активности данного фермента в крови и тканях экспериментальных животных.

2. Экзогенная лактатдепщрогеназа активно включается з обменные процессы п оказывает преимущественное воздействие на анаэробные механизмы метаболизма углеводов.

3. Под влиянием экзогенной малатдегидрогеназы активируются гликолитическне процессы, при этом раскрываются возможные механизмы взаимодействия двух путей обмена углеводов при пшерфермептемпи.

Научно-практическая значимость. Используемый метод, разработанный на "кафедре биохимии Самарского государственного медицинского университета, дает возможность получать высокоактивные лактат- и малатдегидрогеназы. Результаты исследования существенно дополняют представление о механизме развития гиперферментемии, в том числе и в тканях при экзогенном введении ферментов и открывают перспективу возможного использования лактатдепщрогеназы с целенаправленным действием на систему окислительного метаболизма.

Основные положения работы доложены на Всероссийской студенческой конференции "Современные проблемы медицинской химии п клинической лабораторной диагностики" ( Хабаровск, 1989 ); 55-й молодежной научной конференции Башкирского государственного мединститута ( Уфа, 1990); 57-й, 60-й итоговых научных студенческих конференциях ( Самара, 1989, 1992 ); научно-технической конференции

молодых ученых и специалистов ( Самара, 1992 ); научно-технической конференции молодых ученых и специалистов ( Самара, 1992 ); научной конференции молодых ученых "Нервные и гуморальные механизмы регуляции сердечнососудистой системы" ( Пущино, 1993 ).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ и 1 принята к печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, указателя литературы. Текст иллюстрирован 14 рисунками 18 таблицами. Библиография содержит 110 отечественных и 139 работ иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Для решения поставленных в работе задач начальным этацом работы явилось получение высокоочищенных и высокоактивных препаратов дегндрогеназ. Эта задача стала разрешимой благодаря тому, что на кафедре биохимии Самарского государственного медицинского университета разработаны, апробированы и доведены до промышленного варианта методы получения целого ряда ферментов, в том числе лактатдегидрогеназы и мал атдепздрогеназы.

Источником получения лактатдегидрогеназы и малатде-гидрогеназы служили скелетные мышцы млекопитающих (норки, количеством 104). Скелетные мышцы норок подвергались замораживанию и хранились до процесса выделения ферментов при низкой температуре (-20 С ). В основе метода получения лактат-и малатдегидрогеназ лежало первоначальное высаливание сульфатом аммония, что дозволило получить ферментные препараты, обогащенные лактат- и малат-дегидрогеназами, лишенные большого количества балласт-

ных белков, небелковых компонентов, которые присутствуют в гомогенатах и влияют на активнсть ферментов. В последующем очистка достигалась с помощью изоэлектрического осаждения балластных белков и освобождением от них с помощью переосажденпя ферментов, центрифугирования, гель-фильтрацин и ионообменной хроматографии. Растворы полученных ферментов стабилизировали с помощью сульфата аммония. Удельная активность лактатдегидрогеназы составила 300 мкмоль НАДН/мг. мин, малатдепщрогеназы - 600 мкмоль НАДН/мг. мин.

Эксперименты проводились на 54 серых беспородных кроликах средней массой 3700 - 4100 г, которые содержались в условиях вивария на стандартном рационе. Опытную группу составили 27 кроликов, контрольную - 27. Расчет дозы дегндрогеназ для внутривенного введения осуществляли следующим образом. Вначале в условиях in vitro подбиралось оптимальное количество фермента. Для этого была произведена серия экспериментов, в основе которых - подбор дозы по специфическому критерию действия дегндрогеназ, для малатдепщрогеназы - утилизация известного количества оксалоацетата, для лактатдегидрогеназы - восстановление пирувата.

Эксперименты с введением экзогеной депщрогеназы, разведенной в физиологическом растворе, сопровождались общенлинической оценкой состояния животных. Проводился электрофизиологпческий контроль за деятельностью сердца п оценка функции внешнего дыхания. Полученные препараты лактат- и малатдегпдрогеназ вводили в ушную вену кролика в дозах по 5000 Е/кг. В контрольной группе вводили соответствующее количество физиологического раствора. Забор крови производили через 5,20 мин и 24 часа. Для определения исследуемый показателей в тканях через час после введения фермента часть животных опытной и кон-рольной групп забивали.

Экспериментальная работа включала в себя несколько этапов. Вначале оценивалось влияние малатдегидрогеназы на показатели углеводного обмена в сыворотке крови кроликов. На следующем этапе производилась оценка влияния экзогенной лактатдегидрогеназы на состояние углеводного метаболизма с определением параметров как в крови, так и тканях ( печени, сердце, скелетной мышце ) на клеточном и субклеточном уровнях ( в митохондриях ). Материал исследования обрабатывался по двум направлениям: 1) получение гомогената тканей, выделение митохондрий ( Hogebum G., Schneider W., 1953; Уильяме Б., УилсонК., 1978 ) и определение исследуемых показателей в надмитохондриальном суперна-танте, митохондриях, гомогенате скелетной мышцы; 2) получение экстрактов крови и тканей для определения в них метаболитов.

Проводилось определение активности следующих ферментов: альдолазы ( Гулой Н.И., 1976 ), лактатдегидрогеназы ( Kornberg F., 1955 ), малатдегидрогеназы ( Ochoa S., 1955 ), ппокозо-6-фосфатдегидрогеиазы ( Glock C.A., Lean P.M., 1953), а так же исследование метаболитов - пирувата и лактата по методу, разработанному ФЛГильмияровой и соавт. (1986). Исследование глюкозы в крови и тканях проводились с помощью ферментного биотеста ( Lacheraa ).

Результаты исследований обработаны методом вариационной статистики на ЭВМ ЕС - 1045.

Результаты исследований. Изучение содержания лактатдегидрогеназы в сыворотке крови млекопитающих при экзогенном ее введении показало ( таблица 1 ), что на 5 мин ее активность повышалась в 3,65 раза с последующим продолжающимся увеличением ( на 20 мин активность фермента превышала исходный уровень в 4,46 раза ). Через 24 часа ее активность уменьшалась, продолжая оставаться на 43% выше уровня до введения фермента.

Столь значительное увеличение активности фермента

должно было привести к изменению метаболизма. Прежде всего мы обратились к оценке количества интермедиантов -субстратов лактатдегпдрогеназы. Исследования показали, что содержание лактата и пирувата в крови уменьшается (таблица 1), более значительно снижается уровень пирувата. К 20 мин содержание метаболитов падает на 17% и 39% соответственно. То есть в первые минуты гиперферментемии не происходит ни пируват - ни лактатемии. Коэффициент отношения лактата к пирувату у контрольных животных составляет 28, в то время как при гиперферментемии - 38, что свидетельствует о склонности к анаэробизации.

Отмеченная гиперферментемия оказывает глюкозосбере-гающпй эффект. Основанием для данного заключения явились результаты исследования глюкозы. Установлено, что уровень глюкозы в первые 5 мин после введения фермента увеличивается на 20% по сравнению с контрольными животными ( таблица 1 ). Наиболее значительное повышение отмечается на 20 мин ( на 56% выше исходного уровня ) с последующим снижением в течение суток. По-видимому, гипергликемия играет компенсаторную роль в гомеостати-ческом поддержания осмотической концентрации крови в условиях активации метаболизма с повышенной утилизацией низкомолекулярных компонентов крови. Правомерность данного суждения подтверждается исследованиями, проведенными в тканях животных ( таблица 2 ).

Прежде всего изучена активность лактатдегпдрогеназы в сердечной, скелетной мышцах, печени. Наибольшее увеличение активности лактатдегидрогеназы отмечается в скелетной мышце, превышая исходный уровень в 1,8 раза. Этот факт можно объяснить рядом существенных моментов. Согласно K.W.Zeng и соавт. ( 1989 ), Р.О Carra, P-Mulcohy ( 1990 ) лактатдегадрогеназа пз скелетных мышц не отличается по аминокислотному составу у всех млекопитающих. Тем самым введенная пз вне лактатдегадрогеназа, полученная пз мышц

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДУЕМЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

N Показатели До введения фермента

N контроль опыт

При введении экзогенной лактатдегидрогеназы

1. Лактатдегидрогеназа 14 0,0166+0,0009 0,0163+0,0008

(мкмоль НАДН/мглшн) Р1>0,05

2 .Альдолаза 14 0,0017+0,00012 0,0019+0,00013

(мкмоль НАДН/мглшн) Р1>0,05

3. Пируват 14 0,15+0,008 0447+0,0071

(мкмоль НАДН/мл) Р1>0,05

4. Лактат 14 ' 4,091+0,176 4,086+0,18

(мкмоль НАДН/мл) - Р1>0,05

5. Глюкоза 14 4,1+0,2 4,024+0,188

(ммоль/л) Р1>0,05

При введении экзогенной малатдепщрогеназы

6. Альдолаза 14 ' 0,00141+ .0,00145+ (мкмоль НАДН/мглшн) 0,000132 0,000126

___Р1>0,05

7. Глюкоза (ммоль/л), 14 4,01+0,23 4Д2+0Д6

_Р1>0,05

N-количество наблюдений, Р1-достоверность различий в контрольной и опытной группах до введения фермента; Р2 после введения фермента

- И - Таблица N1

В КРОВИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ(М-Ип)

После введения фермента

через 5 мин через 20 мин через 24 часа

контроль опыт контроль опыт контроль опыт

0,0171+ 0,0595+ 0,0168+ 0,0728+ 0,016+ 0,0234+

0,0009 0,0038 Р2<0,001

0,00088 0.0047 Р2 <0,00:1

0,00086 0,0012 Р2 <0,001

0,0018+ 0,00335+ 0,0019+ 0,00494+ 0,0018+ 0,0023+

0,00013 0,000196 Р2 <0,001

0,00013 0,000179 0,00011 0,00017 Р2 <0,001 Р2<0,05

0,142+ 0,117+ 0,0069 0,0046 Р2 <0,001

0,149+ 0,09+ 0,008 0,0086 Р2 <0,001

4,095+ 3,5+ 0Д85 0,18

Р2<0,05

4,12+ 3,396+ 0,191 0,143 Р2<0,001

4,09+ 4,82+ 0,324 0,282 Р2<0,05

4,12+ 6Д8+ 0,362 0,394 Р2 <0,001

4,08+ 4,9+ 0,246 0,451 Р2<0,05

0,00148+ 0,00192+ 0,00147+ 0,00269+ 0,00143+ 0,00159+ 0,00011 0,000229 0,000151 0,000256 0,00029 0,000084 Р2<0,05 Р2 <0,001 Р2<0,05

4,14+0,29 6,0+0,29 Р2 <0,001

4,06+0,25 6^7+034 Р2<0,001

4,17+0,14 5,5+0,15 Р2<0,001

- 12 - Таблица N2

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДУЕМЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ЭКЗОГЕННОЙ

N Показатели Ткани (в -14)

печень сердце

контроль опыт контроль

1. Лактатдегидрогеназа 0,38+ 0,487+ 1,923+

(мкмоль НАДН/мг.мин) 0,0406 0,053 0,134

Р <0,001 Р<0,001

2. Альдолаза 0,0393+ 0,068+ 0,12+

(мкмоль НАДН/мг.мин) 0,0016 0,0038 0,004

Р<0,001 Р<0,001

3. Глюкозо-6-фосфатде- 0,0159+ 0,0153+ -

гидрогеназа 0,00045 0,00062

(мкмоль НАДН/мг.мин) Р>0,05

4. Пируват 0,875+ 0,149+ 0,129+

(мкмоль НАДН/мг) 0,048 0,012 0,01

Р <0,001 Р <0,001

5. Лактат 2,471+ 5,231+ 3,478+

(мкмоль НАДН/мг) 0,137 0,433 0,234

Р<0,001 Р<0,05

6. Глюкоза 4,53+ 5,876+ 3,04+

(ммоль/л) 0,3 0,338 0,182

Р<0,02 Р>0,05

п - количество наблюдений, Р - достоверность различий в контрольной и опытной группах.

ТКАНЯХ И МИТОХОНДРИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

Т канп ( п - 14), Митохондрии ( п - 14 )

скелетная мышца печень сердце

опыт контрол! опыт контроль опыт контроль опыт

3,26+ 1,807+ 3,252+ 0,0326+. 0,0819+ 0,0546+ 0,072+

0,167 0,164 0,245 0,0056 0,00743 0,00457 0,0055

Р<0,001 Р<0,001 Р<0,002

0,145+ 0,188+ 0,445+ 0,011+ 0,014+ 0,012+ 0,016+

0,0064 0,012 0,014 0,00064 0,00051 0,00076 0,0005

Р <0,001 Р<0,001 Р <0,001

0,177+ 0,053+ 0,076+

0,0095 0,004 0,006

Р<0,05

4,659+ 1,847+ 9,956+

0,29 0,124 0,857

Р <0,001

3,34+ 2,118+ 1,817+ -

0,217 0,04 0,085

Р<0,02

норок, не имея отличительных признаков к ферменту кролика, проникает в данную ткань, не вызывая эффекта чужеродного вещества. Вполне возможно, что именно в скелетной мышце лактатдепщрогеназа имеет более продолжительное существование, не подвергаясь действию катепсинов. Что касается сердечной мышцы, то активность изучаемого фермента в ней так же увеличивается (на 69%). Возрастает активность лактатдегпдрогеназы и в печени (таблица 2). Это увеличение наименее выражено и составляет 28%.

Избирательность проникновения и включения в метаболические процессы лактатдегпдрогеназы в различных тканях находит свое объяснение в ряде обстоятельств. Как известно, энергетическое обеспечение мышечной ткани осуществляется преимущественно за счет гликолиза. Сродство фермента и функциональная потребность ткани очевидно и способствует извлечению из крови наибольшего количества фермента скелетной мышцей. Сердечная мышца в своем энергетическом баллансе склонна к утилизации не только интермедиан-тов углеводного происхождения, но в зависимости от кислородного обеспечения и других условий - к утилизащш жирных кислот, кетоновых тел и др. Особенно четко проявляется обособленность печеночной -¿пани к проникновению в нее лактатдегидрогеназы из крови. Именно для печени характерно незначительное увеличение активности изучаемого фермента. Это согласуется с мнением L.AJFothergil-Gilmore (1987), Р.О Carra, PMulcohy (1990) о том, что различия лактатдегпдрогеназы из тканей печенп и скелетной мышцы так же велики, как и между ферментами высших и низших животных.

Избирательность поступления фермента пз кровяного русла в тканп позволяет прийти к выводу о наличии в организационной структуре мембран специализированных рецепторов. Возможно эти рецепторы выполняют многофакторную роль в отборе энзиматическях и^ не обладающих

энзим атической активностью белков. В пользу этого рассуж-дешш - результаты количественной характеристики метаболитов. В скелетной мышце увеличивается содержание лакта-та и в небольшой степепи пирувата (таблица 2), что свидетельствует об усилении окисления лактата в волокнах с окислительным и смешанным типами обмена. В условиях пшерферментемии не нарушается специфика энергоснабжения кардиомиоцитов. Об этом свидетельствует утилизация лактата. Его количество хоть и превышает норму, по увеличено в меньшей степени, чем в скелетной мышце. Содержание пирувата в сердце возрастает, а содержание глюкозы остается в пределах исходного уровня. В печени в контрольной группе животных соотношение между уровнем глюкозы и конечным продуктом гликолитического превращения углеводов - лак-татом составляет 1,8, а между лактатом и пируватом - 2,8. В условиях пшерферментемии соотношения этих показателей равны 1,1 и 35 соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что введение экзогенного фермента сопровождается активацией процессов в пределах специфичности их течения для отдельных органов и тканей.

Для определения глубины проникновения лактатдегид-рогеназы в клеточные структуры исследовалась ее активность и активность альдолазы в митохондриях печени и сердца. Лактатдегидрогеназа в митохондриях печени повышается п 2,5 раза и на 32% в митохондриях миокарда, а активность альдолазы соответственно на 27% и 33% (таблица 2). Эти изменения статистически достоверны и свидетельствуют, по-видимому, о щадящем режиме включения дегид-рогеназ в метаболические процессы, В цитозоле гликолитн-ческие процессы подвержены более значительным изменениям. Появившиеся в последенее время данные о мультифер-ментных комплексах и их интеграции во внутриклеточном обмене (Курганов Б.И.,1986), свидетельствующие о том, что функционирование метаболических систем в клетках обеспе-

чивается не рассеянными ферментами, позволяют исследовать возможность влияния лактатдегидрогеназы на каталитическую активность альдолазы. Так активность альдолазы скелетной мышцы увеличивается в условиях лактатдегидро-геназемии наиболее значительно (в 2,4 раза) по сравнению с изменениями в миокарде и печени (таблица 2). Данная тенденция соответствует наибольшему увеличению лактатдегидрогеназы в скелетной мышце. Активность альдолазы в крови увеличивается на всех этапах исследования после введения лактатдегидрогеназы. Наибольшая ее активность отмечена на 20 мин ( в 2,6 раза по сравнению с исходным уровнем). Спустя сутки активность альдолазы уменьшается, но не достигает нормы, превышая контроль на 21% (таблица

Таким образом, увеличение активности лактатдегидрогеназы не только в крови, но и в тканях, и даже в митохондриях в ответ на экзогенное ее введение открывало возможность изучать влияние данного фермента на другие показатели обмена. Так активность первоначального звена пентозофос-фатного пути катаболизма глюкозы в печени - глюкозо-б-фосфатдегидрогеназы не изменяется (таблица1), что позволяет судить о сохранности клеточных структур при введении -экзогенной лактатдегидрогеназы и отсутствии влияния вводимого препарата на данный метаболический путь.

Повышение активности лактатдегидрогеназы в тканях приводит к активации гликолитических процессов. Учитывая, что взаимодействие гликолитических ферментов с субклеточными структурами является дополнительным механизмом регуляции их активности, можно предположить, что вводимый фермент повышает долю свободных энзимов в клетке. В частности повышение уровня лактатдегидрогеназы снижает количество связаной альдолазы. Возможно, что данное влияние реализуется посредством фермент-ферментных взаимодействий, так как лактатдегидрогеназа способна

образовывать макромолекулярные комплексы, в частности с альдолазой (Тотра Р., Ва1ке I., 1990).

В поисках ответа на вопрос о специфичности действия действия дегадрогеназ проведены аналогичные эксперименты с внутривенным введением малатдепщрогеназы (таблица 1). Установлено,что экзогенная малатдепщрогеназа оказывает определенный аффект на метаболические процессы. Отмечено повышение содержания глюкозы в крови, а так же активности альдолазы. Вводимый фермент не оказывает влияния на пентозофосфатньш цикл, о чем свидетельствует отсутствие активности глкжозо-6-фосфатдегпдрогеназы в хровп кроликов.

Проведенные исследования открывают перспективу изучения взаимодействия ферментных систем при гиперфермен-темшт. Результаты работы могут служить фактическим материалом для дальнейшего исследования механизмов пгаер-фермептемии при различных патологических состояниях и путей их копр кшш.

ВЫВОДЫ.

1. Выявлен характер гнперферментемии лактатдегидрогеназы при экзогенном введении данного фермента экспериментальным животным; наибольший пик нзменеий отмечается через 20 мин после введения фермента с последующим снижением энзпматпческон активности в крови в течении суток.

2. Установлено, что введение лактатдегидрогеназы сопровождается сшпхеннсм уровня лактата и пирувата в крови наряду с увеличением активности альдолазы и содержания глюкозы крови.

3. Выявлено активное включение экзогенной лактатдегидрогеназы в метаболические процессы скелетной мышцы, миокарда, печени. Наибольшая активность фермента отмече-

на в скелетной мышце, наименьшая - в печени.

4. Введение лактатдегидрогеназы экспериментальный животным приводит к увеличению содержания лактата и пирувата в скелетной мышце и миокарде. Более значительное увеличение пирувата наблюдается в сердце. В печени содержание пирувата снижается при незначительном повышении лактата. Содержание глюкозы в скелетной мышце снижается, а в печени увеличивается. При этом активация метаболических процессов в результате введения фермента не меняет специфики обмена тканей.

5. Введение в кровь лактатдегидрогеназы кроликам сопровождается увеличением активности лактатдегидрогеназы, альдолазы в митохондриях печени и миокарда.

6. Введение экзогенной малатдегидрогеназы приводит к увеличению активности альдолазы и содержания глюкозы крови кролика. Нагрузка животных экзогенными лактатде-пщрогеназой п малатдепхдрогеназой не сопровождается повреждением клеточных структур, о чем свидетельствует отсутствие глюкозо-б-фосфатдегидрогеназной активности в

крови кролика.

7. Разработанная Модель гиперферментемии может быть использована для изучения патогенеза заболеваний, сопровождающихся отклонением в ферментативном статусе.