Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Состояние мукозального барьера репродуктивного тракта и уровень адипокинов у женщин при физиологической беременности

ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Состояние мукозального барьера репродуктивного тракта и уровень адипокинов у женщин при физиологической беременности"

МИРОШНИЧЕНКО Юлия Александровна

СОСТОЯНИЕ МУКОЗАЛЬНОГО БАРЬЕРА РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА И УРОВЕНЬ АДИПОКИНОВ У ЖЕНЩИН ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

31 ИЮЛ 2014

005551601

Краснодар-2014

005551601

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России).

Официальные оппоненты:

Никулина Дина Максимовна, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России), кафедра биологической химии с курсом клинической лабораторной диагностики, заведующий кафедрой.

Бородулин Владимир Борисович, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России), кафедра биохимии, заведующий кафедрой.

Ведущая организация - Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт питания» РАМН (ФГБУ «НИИ питания» РАМН).

Защита состоится 2 октября 2014 года в 1300 час на заседании диссертационного совета Д208.038.02 на базе государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России) (350063, Краснодар, ул. Седина, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России и в сети «Интернет» на официальном сайте университета http://www.ksma.ru

Автореферат разослан «_» августа 2014 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета Д208.038.02 доктор медицинских наук,

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Шестопалов Александр Вячеславович

доцент

Лапина Наталья Викторовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. На современном этапе приоритетным направлением демографической политики является повышение рождаемости, снижение заболеваемости и материнской смертности [Спирин A.B., Гринберг Л.М., 2008]. Достижение данных целей возможно путем более детального изучения и осмысления этиопатогенетических факторов акушерско-гинекологической патологии. Нормальное осуществление репродуктивной функции у женщин возможно благодаря наличию ряда иммунологических, гормональных, метаболических механизмов. Данные механизмы контролируют скоординированное функционирование клеток и тканей, обеспечивающих физиологическое течение беременности [Т.Н. Погорелова с соавт., 2012]. Но наряду со значительными успехами в изучении молекулярных и клеточных процессов физиологической беременности, многие механизмы остаются до сих пор не изученными.

Во время беременности происходят значительные изменения в метаболических процессах, что обуславливает актуальность изучения данного вопроса. Установлено, что эндокринная активность жировой ткани при беременности возрастает, что выражается в изменении концентраций адипокинов в материнской крови [А. В. Шестопалов с соавт., 2011]. Беременность является уникальным состоянием, при котором происходит физиологическое увеличение резистентности к инсулину. Таким образом, даже нормальная беременность является «диабетогенным состоянием». При беременности развивается состояние относительного гиперинсулинизма с периферической инсулиновой резистентностью за счет увеличения концентрации контринсулярных гормонов, а также действия адипокинов жировой ткани.

Стоит обратить внимание, что дифференцировка адипоцитов, фибробластов и остеобластов следует от единой клетки-предшественницы — мезенхимальной стволовой клетки [Bianco Р. et al., 2008]. Во время беременности изменяется функциональная активность клеток, продуцирующих коллаген, что сопровождается изменениями в процессах синтеза и деградации коллагена. Метаболизм коллагена - и синтез, и деградация, наиболее активен в период роста, при этом образуется большое количество промежуточных метаболитов, используемых в качестве оценки активности обменных процессов в соединительной ткани. Считается, что дефект метаболизма коллагена может приводить к осложнениям беременности [Sheldon I.M. 2011].

Для нормального течения беременности особое значение имеют системные и локальные иммунные факторы. Важными компонентами защиты репродуктивного тракта являются механизмы врожденной или неспецифической резистентности [Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько 2003]. Особое место среди таких врожденных компонентов иммунной системы занимают малоизученные муцины и тре-фоиловые пептиды, которые участвуют не только в защите от распространения патогенов, но и в восстановлении целостности ткани. Вероятно, что оперативное родоразрешение первой беременности приводит не только к нарушению целостности ткани эндометрия и миометрия, но и к изменению микробного

пейзажа репродуктивного тракта, что влияет на изменение продукции муцинов и трефоиловых пептидов. Взаимодействие эпителиальных и иммунных клеток, а также различных белков, гликопротеинов и других биологически активных веществ обеспечивает тканевую интегральность, что является непременным условием для развития нормальной беременности.

Стоит учитывать, что ранее перенесенная беременность сопровождается изменением микрофлоры репродуктивного тракта, а также метаболизма. В свою очередь, это может привести к изменению системы мукозального барьера репродуктивного тракта и метаболизма мезенхимальных тканей при повторной беременности. Достаточно широко изучен вопрос о влиянии микроорганизмов ЖКТ на метаболизм жировой ткани, клеточный и гуморальный иммунитет, эндокринную систему [Michael А. Мс Guckin, 2011]. Напротив, в литературе отсутствуют данные о влиянии микрофлоры репродуктивного тракта на метаболизм мезенхимальных тканей. В связи с этим, в данном исследовании проводится оценка влияния синан-тропной флоры репродуктивного тракта на продукцию мукозальных факторов защиты, цитокинов и адипокинов.

Актуальность изучения регуляторных процессов гестации и родовой деятельности имеет не только теоретическое значение, но и практическую значимость, которая заключается в понимании причин нарушения физиологических процессов при патологиях беременности [С.А.Сельков, Павлов, 2007; Т.Н. По-горелова с соавт., 2012]. Особого внимания заслуживает цитокиновая регуляция. Основная часть иммунных функций опосредуется растворимыми факторами, то есть цитокинами. Многочисленные цитокины создают специфические условия, в которых происходит взаимодействие между матерью и плодом [Т.Н. Погорелова с соавт., 2012].

Учитывая, что метаболизм мезенхимальных тканей претерпевает существенные изменения, следует предположить, что при повторной беременности они могут проявляться с другой степенью выраженности. Очевидно, что нормы клинико-лабораторных показателей для повторнородящих женщин должны формироваться в самостоятельную группу, учитывая изменения, происходящие при повторной беременности.

Таким образом, целью исследования явилась оценка факторов мукозальной защиты репродуктивного тракта, определение инсулинорезистентности, уровня адипокинов и цитокинов, а также продуктов метаболизма коллагена I типа у женщин с первой и повторной физиологической беременностью.

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи исследования:

1. Исследовать уровни муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и трефоилового факто-ра-3 (TFF-3) в цервико-вагинальном секрете и эндометрии у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.

2. Определить уровни провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в плазме крови и ткани эндометрия у женщин спервой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.

3. Определить показатели инсулинорезистентности, уровни адипонектина и резистина в плазме крови у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.

4. Определить уровень пропептида проколлагена I типа (CiCP), телопептида коллагена I типа (CrossLaps) в плазме крови у женщин с первой и повторной физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения.

5. Провести оценку роли изучаемых биорегуляторных факторов физиологической беременности, установить корреляционные связи между ними с целью выявления новых биохимических показателей, характеризующих первую и повторную физиологическую беременность.

Научная новизна. Впервые определено содержание муцинов 5 АС и 6, а также трефоилового пептида -3 в цервико-вагинальном секрете и эндометрии. Выявлено влияние микрофлоры репродуктивного тракта беременной на концентрацию факторов мукозального барьера. Впервые показано, что при повторной беременности в ткани эндометрия происходит увеличение содержания MUC 5АС и TFF-3 на фоне снижения MUC 6, а в цервико-вагинальном секрете снижение концентрации MUC 5АС, MUC 6, TFF-3. Впервые установлено, что у первородящих женщин, микрофлора которых характеризуется отсутствием роста лактобацилл, снижается концентрация MUC б в ткани эндометрия. У повторнородящих женщин, в микрофлоре которых отсутствует рост лактобацилл, происходит снижение содержания MUC 5АС в ткани эндометрия. У повторнородящих женщин наблюдается сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем муцина б в цервико-вагинальном секрете.

Впервые исследовано влияние микрофлоры репродуктивного тракта на метаболизм мезенхимальных тканей. Установлены корреляционные связи между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем муцина б, ин-терлейкинов, CiCP.

Определены концентрации провоспалительных (ИЛ-lß, ИЛ-б, ИЛ-8, ФНОа) и противовоспалительных (ТФРР, ИЛ-1РА) цитокинов в плазме крови и ткани эндометрия при первой и повторной беременности. Впервые установлено, что у повторнородящих женщин, которые в анамнезе имели оперативное родоразре-шение, в ткани эндометрия происходило снижение концентрации ИЛ-Iß и ФНОа на фоне увеличения ИЛ-6. Тогда как в плазме крови у этих женщин увеличивалась концентрация ИЛ-8 и снижалась ИЛ-6. Вместе с этим выявлена взаимосвязь между микрофлорой и уровнем провоспалительных цитокинов. Установлено, что отсутствие роста лактобацилл в репродуктивном тракте беременных приводит к снижению содержания ФНОа в ткани эндометрия у первородящих женщин и ИЛ-8 в плазме крови у повторнородящих. У повторнородящих женщин наблюдается сильная положительная корреляция концентрации лактобацилл репродуктивного тракта с плазменным уровнем ИЛ-8 и ТФРр.

Исследован уровень адипокинов (адипонектина, резистина) у беременных, родоразрешенных путем кесарева сечения. Впервые показан рост степени выраженности инсулинорезистентности при повторной беременности. Выявлено,

что отсутствие роста лактобацилл в репродуктивном тракте у повторнородящих женщин, приводит к повышению концентрации резистина.

Впервые изучен уровень продуктов метаболизма коллагена I типа в плазме крови у перво- и повторнородящих женщин, родоразрешенных оперативным путем. Установлено, что уровень CrossLaps одинаково повышается при первой и повторной беременности, а уровень CiCP достоверно повышается у повторнородящих женщин. У первородящих женщин отмечена сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и плазменным уровнем CiCP

Теоретическая и практическая значимость. Полученные в ходе исследования данные расширяют представления о роли факторов мукозальной защиты, цитокинов, адипокинов, а также продуктов метаболизма коллагена I типа в развитии и поддержании физиологической беременности.

Расширены представления о роли TFF и муцинов в защите репродуктивного тракта. Установлена взаимосвязь между микробным пейзажем репродуктивного тракта и концентрацией таких компонентов мукозального барьера, как муцины и TFF-3.

Исследован вклад жировой ткани в механизмы формирования инсулиноре-зистентности при первой и повторной физиологической беременности.

Материалы исследования внедрены в работу клинико-диагностической лаборатории МБУЗ «ГБСМП г.Ростова-на-Дону», клинико-диагностической лаборатории ЗАО «Наука», г. Ростов-на-Дону, а также в курс лекций на кафедре общей и клинической биохимии №2 РостГМУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Предыдущая беременность в анамнезе и микробиологический пейзаж репродуктивного тракта беременной влияют на продукцию муцинов и трефоило-вого фактора-3 в репродуктивном тракте, а также цитокинов как в ткани эндометрия, так и в плазме крови.

2. При первой и повторной физиологической беременности формируется различной степени выраженности инсулинорезистентность, обусловленная продукцией адипокинов, на концентрацию которых оказывает влияние микрофлора репродуктивного тракта.

Апробация работы. Результаты работы представлены на Международной научно-технической конференции «Европейский инновационный конвент» (г.Вена, Австрия 20-21 декабря 2013г.) («EastWest» Association for Advanced Studies and Higher Education GmbH, Wien, Österreich); на Международной заочной научно-практической конференции «Актуальные вопросы образования и науки» (г. Тамбов, Россия, 30 декабря 2013г); на XII Международной научно-практической конференции «Тенденции и инновации современной науки» (г. Краснодар, 26 февраля 2014г.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертационного исследования опубликовано 9 работ, в том числе 4 из них в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых журналов, рекомендованных для пуб-

ликации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени, 1 статья в зарубежном издании.

Работа выполнена при поддержке гранта Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «У.М.Н.И.К.» и конкурса уникальных молодежных инновационных проектов «КУМИР».

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах и содержит — общую характеристику работы, главы - обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, заключение, выводы, список литературы, включающий 16 отечественных и 128 зарубежных источников. Работа содержит 1 схему, 22 таблицы, иллюстрирована 36 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

С целью реализации поставленных задач в ходе выполнения исследовательской работы было обследовано 50 беременных женщин в сроке 38-40 недель ге-стации, рекомендованные на плановое кесарево сечение, находившиеся в МБУЗ «ГБ №1 им. Семашко H.A. г. Ростова-на-Дону» роддоме №1, а также 12 небеременных женщин, которые являлись группой контроля при исследовании уровня адипокинов и продуктов метаболизма коллагена I типа.

Забор биологического материала осуществлялся в стационаре с информированного согласия беременных. Лабораторные исследования выполнены на базе НИИ биологии Южного Федерального Университета и кафедры общей и клинической биохимии №2 ГБОУ ВПО «РостГМУ» Минздрава России по согласованию с локальным этическим комитетом.

Беременные были поделены на группы. Первую группу составили 25 беременных с первыми родами в анамнезе (п=25) с оперативным родоразрешением. Вторую группу составили 25 беременных с повторными родами (п=25), так же с оперативным родоразрешением и третью группу - 12 небеременных женщин (п=12).

Помимо стандартных исследований выполнялось определение содержания трефоилового фактора-3, муцинов 5 АС и 6, ФНОа, ИЛ-Iß, ИЛ-6, ИЛ-8, ТРФр-1, ИЛ-1РА (рецепторный антогонист), адипонектина, резистина, CiCP, CrossLaps и инсулина методом иммуноферментного анализа.

Объектом исследования служили: цервико-вагинальный секрет, эндометрий и плазма крови.

Уровни исследуемых показателей определяли с применением тест-систем следующих производителей: «BioVendor» (Чехия); «CUSABIO» (Китай); Вектор Бест (Россия); «DRG» (США); «Quidel corp.» (Германия). Индекс инсули-норезистентности рассчитывался по формуле HOMA-IR: (инсулин, мкЕД/мл х глюкоза, ммоль/л / 22,5) [D.Matthews, 1985]. Значение больше, чем 2,27 рассматривается как наличие инсулинорезистентности [R.H.Ungeret. al, 2001]. Полученные результаты обработаны с применением пакета статистических программ «Statistica 6».

Микробиологическое исследование было выполнено 50 беременным жешцннам совместно с аспирантом кафедры акушерства и гинекологии .\21 РостГМУ Потаповой М.В. Из 50 женщин 40 беременных, включены в данное исследование.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При повторной физиологической беременности у женщин, имеющих в анамнезе оперативное родоразрешение, происходит смещение акцентов в продукции мукозальных факторов защиты репродуктивного тракта. Повторная беременность характеризуется увеличением содержания MUC 5АС и TFF-3 на фоне снижения MUC 6 относительно первородящих женщин. У повторнородящих женщин в ткани эндометрия увеличивается уровень MUC 5АС на 43,4% (р=0,04) и TFF-3 на 16,8% (р=0,03) в сравнении с первородящими женщинами. При этом уровень MUC 6 снижается на 18,2 % (р=0,05). Напротив, в цервико-вагинальном секрете у повторнородящих женщин снижается концентрация MUC 5AC,MUC 6, TFF-3 на 71,6 % (р=0,07); 50,8 % (р=0,001); 31,9 % (р=0,008), соответственно, в сравнении с первородящими. Данные полученные в ходе исследования, наглядно показывают, что в группе первородящих женщин, которые в анамнезе не имели беременностей, факторы неспецифической защиты локализуются преимущественно в нижнем отделе репродуктивного тракта (влагалище, эктоцервикс). Тогда как у повторнородящих женщин, имеющих в анамнезе оперативное родоразрещение, эти факторы преобладают в матке (табл. 1,2).

Таблица 1

Содержание муцинов (MUC 5АС и MUC 6) и трефоилового пептнда-3(TFF-3) в ткани эндометрия

1 руипы MUC 5АС,ш/мл MUC 6.MI/M1 IfF-3.i4.Mi

Mini Мс [25-75] перистили Mini Мс [25-75] перистили Mim Мс [25-75] пс^иекгшш

1 (п-25) 2Ш.15±23,78 16«,61 119,62-308.72 (¡3,(0*3,14 «,63 62.24-6S.2I 1,90±0,08 1,82 1.68-2,17

II (п-25) 288.58±ЗОЛ4' 257.60 187.90 - 374,14 51.62±4.76* 64.9S 3S.0S - 67.99 2,22±0,|* 2,11 1,92-2,70

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с первородящими.

Таблица 2

Содержание муцинов (MUC 5АС и MUC 6) и трефоилового пептида -3 (TFF-3) в цервико-вагннальном секрете

Группы MUC 5АС.нг/мл MUC б.нг.мл TFF-3 лг/мл

Mim Мс [25-75] нерне!пн:ш М±т Me (25-75] псрпстили М-т Мс 125-75] перценгил»

1 (п-25) 51,03±) 1.67 52.62 14,85- 76,46 23,77±4,97 14,32 12,01-32.73 2.42i0,18 2,22 1,86-3,09

II (п=25) 14.54±7,8- 10,17 2.88- 13.0 11,71*29.18* 6,89 4.68-7.99 1,65=0.19* 1,80 1,04-2.19

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с первородящими.

160 140 120 100 80 60 40 20 0

143,4

|81,8*

■ I

И ............. _

it . i§ sJil *f|l

пШ

ж

ы 1-е роды и 2-е роды

MUC 6

Рис. 1. Содержание муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и TFF-3 в эндометрии, % 120

100

I

1-е роды а 2-е роды

MUC 6

Рис. 2. Содержание муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и TFF-3 в цервико-вагинальном секрете, %.

Вместе с тем непосредственное влияние на концентрацию мукозальных факторов оказывает состав микрофлоры репродуктивного тракта беременных, о чем свидетельствуют полученные данные. В общей группе женщин, микрофлора которых характеризуется отсутствием роста лактобацилл, уровень MUC 5АС в эндометрии на 29,9 % (р=0,05) ниже, чем у женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте. Отмечается снижение содержания MUC 6 на 25,9 % (р=0,02) у первородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл относительно женщин с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте. У повторнородящих женщин, у которых отсутствует рост лактобацилл происходит снижение MUC 5АС в эндометрии на 40% (р=0,02) в сравнении с женщинами, у которых отмечен рост лактобацилл в репродуктивном тракте. При этом у повторнородящих женщин отмечена сильная отрицательная корреляция между концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем MUC 6 в цер-

вико-вагинальном секрете (г= -0,97; р<0,004), а также сильная положительная корреляция с уровнем ТФР (3 (г= 0,81; р<0,02) и ИЛ-8 (г= ,070; р<0,07) плазмы крови. Таким образом, у повторнородящих женщин наличие лактобацилл в репродуктивном тракте влияет на содержание MUC 5АС, не влияя на уровень MUC 6 и TFF-3. Муцины имеют центры связывания с микроорганизмами, что обеспечивает их взаимодействие с синантропной флорой. Учитывая, что MUC 5АС секретируется клетками непосредственно в слизистый слой, a MUC 6 находится ближе к базальной мембране[11епеК. Gipson et al., 2001], можно предположить, что именно MUC 5АС взаимодействуют с микрофлорой. У трефоиловых пептидов отсутствуют такие центры связывания. Вероятнее всего, это и обуславливает влияние лактобацилл на уровень только MUC 5АС (табл.3).

Таблица 3

Содержание муцинов (MUC 5АС и MUC 6) и трефоилового пептида -3 (TFF-3) в ткани эндометрия в зависимости от микробиологического пейзажа

Группы MUC 5 AC, HI/M., MUC 6, иг/мл TFF-3, иг/мл

М±ш Мс [25-75] „ерцентали М±т Мс [25-75] перце»™.™ М±п, Мс [25-751 тсрцентили

Общая (п-401 (п=17) 609.4.1-79,6» 526,8 418,4-853 562,1,60.9 6663 509,5-689,2 21.2.U.4 19,3 17,9-25.3

Ваяитоб-л (п-23) 427,5±58,1 3183 206,8-637,7 561 ¿±47,5 653,7 330.7-673.8 20,7*1.04 20,3 16,9-22.9

Первород. (п«20) С лак,об-*,, (п=9> 498,9*114.1 498,2 265,3-672,9 678.8*15.08» 692,8 675,4-694.5 20,5*2.07 18,4 18,1-19,6

Ье, яаюоб-л <п=П> 421*92,9 287,5 1983-676 5033*65,5 6383 .107,2-669,4 19*1,5 17,7 15,5-223

Повторно рол. (п=20) С лактоб-ми (п=81 688,4*106.04- 538.5 461-956.1 478,8*93,7 6403 146,7-679,9 21,7=2.1 21.1 16-28,7

Без лактоб-л (п=12) 413,6а», 6 405,3 206,8-637,7 609,5*67,2 665,1 486.7-697 22,2*1,3 20,7 19,3-25,5

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с женщинами без лактобацилл (р<0,05).

Рис.3. Содержание MUC 5АС в эндометрии в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта, %. 11

140 120 100 80 60 40 20 0

.127,2

100 99,8

ill

у # У

*

Рис. 4. Содержание MUC 6в эндометрии в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта, %.

Таблица 4

Содержание муцинов (MUC 5АС и MUC 6) и трефоилового пептида -3 (TFF-3) в цервико-вагинальном секрете в зависимости от микробиологического пейзажа

Группы ШС5АСЯГМЛ MUC бнг/ш TFF-Зиг/ш

М±ш Me [25-75] перцашии M±ni Me [25-75] перцентизи М±ш Me [25-75] перцентюш

Общая (и=40) С лашб-мн (11=17) 180,4±101.7 89.3 43.4-199,7 Ш±17.09 16,6 14.8-25 22.9±3,5 19,7 18-31.4

Б« яаноб-л ii=23i Ш±40,05 56,6 15,9-119 32.6±7,8 21,1 9,3-54.7 22Д±3.9 23.1 11.9-23.8

Первор ад. iu=20) "лашб-ми п=<>) 269.&Ш.7 199.7 +3.4-565.6 "8,04±31,1 J8.2 24-132 31,9±4 33,4 26,1-37,7

5« лапоб-л 11=11) '2,1*23,7 69,3 15,9.119 34,7+8.8 25.9 16.4-54,7 28,9±7.2 23.3 20.9-31.3

Повтор пород. :и=20) лактоб-im п=8) 46.Ш1А 16.6 4.06- 89.3 13,3il,7 14.8 12-15.9 15.8±2,7 18 17.8-18,8

Безяапоб-л ii=12i 118.2±НЮ.9 23.1 13-223,4 30,6±13.5 13.7 7,2-64.8 16,313,1 12,5 8.3-25,5

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с женщинами с ростом лакто-бацилл в репродуктивном тракте (р<0,05).

Вероятно, лактобациллы оказывают влияние на продукцию муцинов и трефоилового пептида-3.

Изменения, происходящие в мукозальном барьере при физиологической беременности, влияют на цитокиновую продукцию. В ткани эндометрия у повторнородящих женщин отмечено снижение таких провоспалительных цитоки-нов как ИЛ-1Р и ФНОа на 40,9% (р=0,04), 44% (р=0,03), соответственно, в сравнении с первородящими женщинами. При этом концентрация ИЛ-6 повышалась на 78% (рис.5). Тогда как в плазме этих женщин концентрация ИЛ-8 увеличивалась на 123,9% (р=0,05), а ИЛ-6 снижалась на 38,5% (р=0,03) в сравнении с первородящими женщинами (рис.6).

12

Статистически значимых изменений концентрации противовоспалительных цитокинов как в ткани эндометрия, так и в плазме крови не было отмечено.Началу родовой деятельности предшествует инфильтрация плаценты, мио-метрия, эндометрия лейкоцитами, что сопровождается активацией синтеза про-воспалительных цитокинов [С.А. Сельков, О.В. Павлов, 2007; Т.Н. Погорелова с соавт., 2012]. Как мы видим у повторнородящих женщин, перенесших ранее оперативное родоразрешение, происходит снижение продукции провоспали-тельных цитокинов в сравнении с первородящими женщинами. Вероятно, оперативное родоразрешениеи последующий формирующийся грубый дефект как миометрия, так и эндометрия приводит к уменьшению концентрации провоспа-лительных цитокинов в данных тканях.

Рис. 5. Содержание провоспалительных цитокинов в эндометрии беременных женщин, %.

Рис.6. Содержание провоспалительных цитокинов в плазме крови беременных женщин, %.

Наряду с этим, у женщин с отсутствием роста лактобацилл в репродуктивном тракте как в общей группе, так и у первородящих отмечалось снижение ФНОа в эндометрии на 45,5% (р=0,05), 65,3% (р=0,01), соответственно (рис.7). Так же было зафиксировано снижение концентрации ИЛ-8 в плазме крови у женщин с отсутствием роста лактобацилл в общей группе на 31,3% (р=0,002) и у повторнородящих с отсутствием роста лактобацилл на 38,8% (р=0,05) (рис.8). При этом в общей группе отмечена положительная корреляционная связь меж-

13

ду концентрацией лактобацилл репродуктивного тракта и уровнем ФНОа эндометрия (г= 0,54; р<0,08) и отрицательная корреляция с уровнем ТФРр эндометрия (г= - 0,52; р<0,09).

120 ......................................................................................................................................................................................................................

100 100 100

100................................._..............-................................................в...............................................................™................................

) 1 ! 80,9

80 ................................рр||.......................................... Я ......................................111111 ШШ.......

60 ............... I .....5-4'5*.....................................................................' , У

: ] 1 34 7» и

1............ I I........... - I т |г

2° ]_Н Щ ш 1и~ и в

Рис.7. Содержание ФНОа в эндометрии в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта беременных, %

54,5*

34,7*

Рис.8. Содержание ИЛ-8 в плазме крови в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного тракта беременных, %.

Таким образом, в ходе исследования было установлено, что отсутствие роста лактобацилл приводит к снижению продукции провоспалительных цитоки-нов как в эндометрии (ФНОа), так и в плазме крови (ИЛ-8). Известно, что на эпителиальных клетках репродуктивного тракта экспрессируются То11-подобные рецепторы, которые в ответ на различные стимулы индуцируют выработку цитокинов [К.А. Лебедев, И.Д. Понякина, 2013]. Ранее считалось, что То11-подобные рецепторы не реагируют на лиганды комменсальной микрофлоры. Но сравнительно недавно было установлено, что в физиологических условиях также происходит распознавание сигнальных молекул представителей

14

нормальной микрофлоры, которые формируют биопленку [Бондаренко В.М., Лиходед В.Г., 2010]. Таким образом, главным стимулирующим фактором экспрессии То11-подобные рецепторы является синантропная микрофлора влагалища. В работе Лебедевой О.П. с соавт., показано, что пониженное содержание бифидо- и лактобактерий приводит к снижению экспрессии ТЬЯ у родильниц и, соответственно, к снижению продукции цитокинов [Лебедева О.П. и соав., 2012]. Вероятно, что наиболее важной функцией молочнокислых бактерий является модуляция иммунного ответа через продукцию цитокинов.

В свою очередь, цитокины в силу своей плейотропности, оказывают влияние на организм беременной женщины на системном уровне, что выражается в изменении адипокинового профиля. Формирование физиологической инсули-норезистентности оказывает положительную биологическую роль, приводящее к гипергликемии и обусловливающее градиент концентрации глюкозы между матерью и плодом, что позволяет проникать глюкозе через плаценту посредством облегченной диффузии. Мы видим, что с наступлением последующей беременности происходит нарастание инсулинорезистентности. У первородящих женщин уровень инсулина, НОМА-Ш и ИМТ увеличивается в 2,8; 4,2 и 1,2 раза соответственно, в сравнении с небеременными женщинами (рис. 9-12). Однако, уровень глюкозы при этом остается практически одинаков в сравнении с небеременными. Тогда как у повторнородящих уровень инсулина, глюкозы, НОМА-1Я и ИМТ увеличивается в 5; 1,2; 7,8; 1,3 раза соответственно в сравнении с небеременными женщинами и в 1,7; 1,1; 1,8 в сравнении с первородящими, но ИМТ достоверных отличий не имеет в сравнении с первородящими (табл.5).

Таблица 5

Соматометрия и показатели инсулинорезистентности беременных

Показатели Первородящие (л—20) Повторнородящие (п-20) Контрольная груша (небеременные) (11=12)

М1т Мс (25-75] нериеншлн М±га Ме [25-75] иерцет или М±т Ме [25-75] перцен гили

Вес, кг 76,2±2,3 /6 68-83,5 78,312,6 75 70,5-82 5813,9" 51 49,5-62

Рост, м 1,66±0,01 1,67 1,64-1,7 1,65*0,01 1,66 1,63-1,7 1,64 ±0,01 1.64 1,63-1,67

ИМТ, кг/ 27,910,8 27,4 24,9-30,3 29±0,8 27,4 26,1-31,6 22,311 3** 20.4 19.2-23.2

Инсулин, мкМЕ'ш 30,6±Ю,5 15,2 11,7-25,1 53,5115,1' 22,5 17,5-50,1 10,710,7" 9,9 9,3-12,6

Глюкоза, ммолыл 5,М±0,2 4,7 4,5-5 5,6510,3» 5,2 4,8-6,4 4,6±0,1'- 4,8 4,3-5

НОМА-Ш 8,9814,4 V 2,4-5.3 16,515,6« 5 3,6-13.4 2,110,1** 2 1,8-2,3

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с первородящими женщинами; ** -различия статистически значимы в сравнении и с первородящими, и с повторнородящими женщинами; л - различия статистически значимы в сравнении с повторнородящими женщинами.

Рис. 9. Концентрация инсулина, % Рис. 10. Концентрация глюкозы, %

900 5 785,7* 110 125,1

Рис. 11. НОМА-Ж, % Рис. 12. ИМТ, %

Примечание: * - различия статистически значимы в сравнении с первородящими женщинами; ** -различия статистически значимы в сравнении и с первородящими, и с повторнородящими женщинами; Л - различия статистически значимы в сравнении с повторнородящими женщинами.

При исследовании концентрации глюкозы, инсулина, НОN4А-1К и со-матометрических показателей у женщин с различным микробиологическим фоном статистически значимых отличий не было выявлено. Можно предположить, что на данные показатели микробиологический пейзаж не оказывает явного влияния.

Непосредственное участие в формировании инсулинорезистентности принимают адипокины жировой ткани (адипонектин, резистин). Согласно результатам нашего исследования уровень адипонектинаплазмы крови между группами перво - и повторнородящих женщин не имел значимых отличий. При этом, концентрация адипонектина в группе первородящих женщин снижалась в 1,5 раза (р<0,008), а повторнородящих - в 1,6 раза в сравнении с контрольной группой (небеременные) женщин(р<0,001).Вместе с тем, отношение адипонек-

тина к резистину в группе первородящих снижалось в 7,8 раз, а у повторнородящих в 8,8 раз.

Напротив, показатели резистина у беременных увеличивались. В группе первородящих уровень резистина увеличивался в 6,2 раза (р<0,000006), а у повторнородящих в 5,3 раза (р<0,000002) по сравнению с контрольной группой (табл. 6).

Таблица 6

Уровень аднпокинов в крови небеременных, перво- и повторнородящих женщин

Показатели Первородящие (п=20) Повторнородящие (п=20) Контрольная группа (небеременные) (п=12)

М±т Ме [25-751 периятши М±ш Мс [25-75] М±га Ме [25-751

Адигюнектин, мкг/мл 9,8±0.9 9,2 7.5-10,7 9,2±0,7 8,5 6.8-10,2 15,5±2,07» 17,8 8,1-20.8

Резистин, нг/мя №±1,5 7,6 6,2-10,4 8,5±0,8 7,2 6,4-8,7 1,6±0,08» 1.6 1,4-1,8

Адипсшектин/ резистин 1,26±0,1 1.2 0,5-1,7 1,1 ¡¡±0,1 1,2 0,7-1,5 9,47±1,19* 9,3 5,9-12,4

Примечание: *- различия статистически значимы в сравнении и с первородящими, и с повторнородящими женщинами;

При сравнительной оценке концентрации адипокинов у женщин по микробиологическому признаку, было установлено, что уровень адипонектина не имел достоверных отличий, тогда как концентрация резистина в группе повторнородящих женщин с отсутствием роста лактобацилл была выше на 15,1% в сравнении с повторнородящими женщинами с ростом лактобацилл в репродуктивном тракте (р<(),()5) (рис. 13).

Рис. 13. Уровень резистина в плазме крови у беременных в зависимости от микробиологического пейзажа репродуктивного 'факта, %.

При беременности большие изменения происходят в метаболизме коллагена 1 типа. При исследовании концентрации продуктов метаболизма I типа у бере-

менных не было выявлено статистически значимых отличий между группами перво- и повторнородящих женщин. При этом уровень СгоЗБЬарБ первородящих женщин увеличивался в 2,8 раза (р<0,00005), в сравнении с контрольной группой, а у повторнородящих - в 2,7 раза (р<0,00003). Вместе с тем, в отношении уровня ОСР у первородящих была отмечена тенденция к увеличению (р<0,07), а у повторнородящих статистически значимо увеличивалась концентрация ОСР в 1,3 раза (р<0,05) относительно контрольной группы (табл.7). Влияние микрофлоры на уровни продуктов метаболизма коллагена не было выявлено, но вместе с тем, отмечена сильная отрицательная связь между концентрацией лактобацилл и плазменным уровнем ОСР (г= -0,87; р<0,05) у первородящих женщин (рис. 14, 15).

Таблица 7

Концентрация продуетов метаболизма коллагена I типа у беременных

Показатели Первородящие (11-20) Повторнородящие (п—20) Контрольная группа (небеременные) 1п=12)

М±ш Ме [25-75] перцеитили М±П1 Ме [25-75] перцеитили М±П1 Ме (25-75) перцеитили

СгоБаЬарз, нг/мл 0,86±0,07 0,85 0,5-1.06 0,81 ±0,06 0.84 0,5-1,02 0,3±0,04* 0.3 0,2-0.4

СЮР, яг/мл 115,6*8,8 117,5 82,7-15.4,5 122,7±11,01 120,8 82,8-154.1 93,1**48,4 103,9 76,5-111.8

Примечание: * - значения статистически значимы в сравнении с перво- и повторнородящими женщинами;

** - значения статистически значимы в сравнении с повторнородящими женщинами

Рис.14. Уровень Сгоз5Ьарз,% Рис.15. Уровень ОСР, %

Таким образом, микрофлора репродуктивного тракта влияет на уровень факторов мукозального барьера, цитокинов, а также адипокинов. При этом наблюдается взаимное влияние между факторами мукозального барьера и ци-

токинами. Вместе с тем цитокины и микрофлора влияют на уровень адипоки-нов, что приводит к изменению сенсетивности тканей к инсулину.

Взаимосвязь всех компонентов можно представить следующим образом:

¡.Повторная беременность характеризуется увеличением содержания в ткани эндометрия факторов мукозальной защиты MUC 5АС и TFF-3 на фоне снижения содержания MUC 6 в эндометрии и уровней MUC 5АС, MUC 6, TFF-3 в цервико-вагинальном секрете. На уровень мукозальных факторов влияет микрофлора репродуктивного тракта, о чем свидетельствует снижение концентрации MUC 5АС в эндометрии повторнородящих женщин при отсутствии роста лактобацилл.

2. При повторной беременности отмечается снижение концентрации ИЛ-ip и ФНОа в эндометрии, и ИЛ-6 в плазме крови на фоне увеличения ИЛ-б в эндометрии и ИЛ-8 в плазме. Отсутствие роста лактобацилл в репродуктивном тракте сопровождается снижением содержания ФНОа в эндометрии у первородящих женщин и ИЛ-8 в плазме крови у повторнородящих женщин.

3. У повторнородящих женщин развивается более выраженная инсулиноре-зистентность, характеризующаяся увеличением уровней инсулина, глюкозы, HOMA-IR в сравнении с первородящими.

4. Физиологическая беременность характеризуется изменением эндокринной активности жировой ткани, выражающимся в снижении уровня адипонек-тина и повышении концентрации резистина. Отсутствие роста лактобацилл в

репродуктивном тракте у повторнородящих женщин приводит к увеличению концентрации резистина.

5. Физиологическая беременность сопровождается изменением активности метаболизма соединительной ткани. У перво- и повторнородящих женщин активируются процессы деградации коллагена I типа с менее выраженной активацией синтеза коллагена I типа у повторнородящих женщин.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.* Шестопалов, A.B. Содержание муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и трефоилово-го пептида-3 (TFF-3) в эндометрии и цервико-вагинальном секрете у женщин с физиологической беременностью / A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский // Фундаментальные исследования. -2013- Ч. 1,№12.-С. 104-106.

2.Shestopalov, A.V. Levels of proinflammatory cytokines (IL-lß, IL-6, IL-8) in women with physiological pregnancy, who were delivered by cesarean section / A.V. Shestopalov, Y.A. Miroshnichenko, A.N. Rymashevskiy et al. // Austrian Journal of Technical and Natural Sciences. - 2014. -№1. - P. 73-78.

3. * Шестопалов, A.B. Уровень провоспалительных цитокинов (ИЛ-1р,ИЛ-6, ИЛ-8) у женщин с физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения / A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 2; URL: http://www.science-education.rU/l 16-12324.

4.* Шестопалов, A.B. Уровень провоспалительных (ИЛ-1, ФНОа) и противовоспалительных (ИЛ-1РА, ТФРР) цитокинов у женщин с физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения / A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский [и др.] // Фундаментальные исследования. - 2014. - 4.2, № 4. - С. 402-406.

5. *Шестопалов, A.B. Показатели инсулинорезистентности и уровень адипоки-нов у женщин при физиологической беременности, родоразрешенных оперативным путем // A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский // Кубанский научный медицинский вестник. — 2014.-№ 5.

6. Мирошничено, Ю.А. Роль факторов врожденного иммунитета слизистой оболочки репродуктивного тракта / Ю.А. Мирошниченко, A.B. Шестопалов, Л.П. Смольянинова // Фундаментальная медицина и биология. - 2013. - № 1С. 11-17.

7. Шестопалов, A.B. / Содержание муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и трефоило-вого пептида-3 (TFF-3) в эндометрии и цервико-вагинальном секрете у женщин с физиологической беременностью // A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский // Тез. докл. Международная научно-техническая конференция «Европейский инновационный конвент», г.Вена, Австрия. - 2013г. -С. 125-128.

8.Шестопалов, A.B. / Содержание муцинов (MUC 5АС, MUC 6) и трефоилово-го пептида-3 (TFF-3) в эндометрии и цервико-вагинальном секрете у женщин с

физиологической беременностью // A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский // Тез. докл. Международная заочная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы образования и науки. - Тамбов - 2013». — С. 143-144.

9. Шестопалов, А.В / Уровень провоспалительных (ИЛ-1, ФНОа) и противовоспалительных (ИЛ-1РА, ТФРР) цитокинов у женщин с физиологической беременностью, родоразрешенных путем кесарева сечения // A.B. Шестопалов, Ю.А. Мирошниченко, А.Н. Рымашевский и [др.] // Тез. докл. XII Международная научно-практическая конференция «Тенденции и инновации современной науки. - Краснодар - 2014». - С. 52.

* - журнал включен в перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертации на соискание ученой степени доктора и кандидата наук.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:

АТФ — аденозинтрифосфат АФК — активные формы кислорода ЖКТ — желудочно-кишечный тракт ИЛ - интерлейкин

ИЛ-1 РА-интерлейкина-1 рецепторный антогонист

ИМТ — индекс массы тела

ИФА — иммуноферментный анализ

ЛПС — липополисахарид

РТ - репродуктивный тракт

ТФР (TGFP) - трансформирующий фактор роста

ФНОа (TNF) - фактор некроза опухоли

шЭПР — шероховатый эндоплазматический ретикулум

AdipoR -адипонектиновый рецептор

CiCP - пропептид проколлагена I типа

CrossLaps - телопептид коллагена I типа

GLUT — глюкозный транспортер

HOMA-IR — (homeostasis model of assessment — insulin resistance) гомеостатиче-ская модель исследования инсулинорезистентности

MUC - муцин

NF-kB - нуклеарный фактор кВ

TFF (trefoil factor) - трефоиловый фактор

ТМВ — тетраметилбензидиновый (стабилизирующий) субстрат

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0 уч.-изд.-л. Заказ N2 3459. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88