Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Персистентпые характеристики микрофлорырепродуктивного тракта женщинв норме и при патологии

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Персистентпые характеристики микрофлорырепродуктивного тракта женщинв норме и при патологии"

он

На правах рукописи

ЧЕРКАСОВ Сергей Викторович

Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта женщин в норме и при патологии

03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 1998

Работа выполнена в Оренбургской государственной медицинской академии.

Научный руководитель член - корреспондент РАН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Бухарин О.В.

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Брудастов А.Н. Каган Ю.Д.

Ведущая организация

Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится «_» __1998 г. в_часов

на заседании диссертационного совета К 084.51.02 Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460014 г. Оренбург, ул. Советская, 6.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан « »____ 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Семченко Ю.П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Нормальная микрофлора репродуктивного тракта женщин является показателем здоровья этой экологической ниши и играет большую роль в поддержании нормального микроэкологического статуса, являясь бактериальной составляющей колонизационной резистентности (И.А. Бочков с соавт., 1995).

При изменении физиологического состояния женщины (пубертатный период, менструальный цикл, беременность, климактерический период), характеризующемся сдвигом баланса половых гормонов происходит качественное и количественное изменение микрофлоры родовых путей (Л.Г. Кейт с соавт., 1988; В.А. Голубев, 1993,).

Изменение микробиоценоза половой системы женщины увеличивает риск внутриутробного инфицирования плода, ведет к возникновению самопроизвольных выкидышей и преждевременных родов, возникновению воспалительных заболеваний гениталий (С.А. Анкир-ская с соавт., 1988; J.L. Thomason et al., 1989).

В связи с этим особое значение приобретают вопросы диагностики и коррекции генитального дисбиоза, которые до настоящего времени окончательно не решены и связаны с проблемой выбора критериев оценки состояния микробиоценоза репродуктивной системы женщин (H.A. Hammiii, 1989).

Микробиологический статус половых органов женщин чаще оценивают с учетом количественных показателей, т.е. определяют отдельные виды микроорганизмов и их количество в занимаемой экологической нише (К.Я. Соколова с соавт., 1988), при этом не принимаются во внимание биологические свойства бактерий, что не позволяет достаточно полно охарактеризовать микробиоценозы описываемых эпитопов при дисбиотических состояниях.

Между тем, важно оценивать качественную сторону микрофлоры, которая отражает возможность микроорганизмов длительно находиться в занимаемой экологической нише и противостоять защитным силам организма хозяина. Такая способность микроорганизмов реализуется через факторы персистенции ответственные за инактивацию механизмов защиты хозяина (лизоцима, комплемента) и названные как антшшзоцимная активность (АЛА) и антикомплементарная активность (АКА).

Было показано, что возможность хронизации и тяжесть течения воспалительных заболеваний внутренних половых органов зависит от АЛА возбудителей (Л.А.Первушина, 1990). С другой стороны, по

данным А.В.Валышева (1996), были обнаружены высокие по сравнению с фоновым уровнем значения AJIA и АКА у условно-патогенных энтер о бактерий при микроэкологических нарушениях в кишечнике, что подтвердило их этиологическую роль в развитии дисбиоза и явилось основой для разработки способа диагностики дисбиоза кишечника с учетом персистентных свойств микроорганизмов.

Однако факторы персистенции микрофлоры биотопов репродуктивного тракта женщин исследованы не были. Решение этого вопроса позволило бы расширить знания о роли факторов персистенции микрофлоры в формировании нормо- и патобиоценозов половой системы женщины, а также определить дополнительные диагностические критерии эффективности корригирующей терапии.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования явилось определение биологической роли факторов персистенции при дисбиотических состояниях женского репродуктивного тракта во время беременности и при воспалительных заболеваниях гениталий, а также регулирующего влияния половых гормонов на бактерии in vitro под контролем персистентных свойств.

Основные задачи исследования:

1. Определить видовой состав аэробного спектра микрофлоры репродуктивного тракта жетцин во время беременности и при воспалительных заболеваниях внутренних половых органов.

2. Определить и сравнить факторы персистенции микроорганизмов, выделенных у женщин обследуемых групп.

3. Определить влияние препаратов половых стероидных гормонов (прогестерона и эстриола) на факторы персистенции и ростовые характеристики микроорганизмов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые исследованы антилизоцим-ная и антикомплементарная активности микрофлоры эпитопов репродуктивной системы у женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов и у беременных женщин. Установлена высокая распространённость факторов персистенции у микроорганизмов, населяющих биотопы репродуктивной системы женщин. Выявлено наличие микроэкологических нарушений с увеличением выраженности АЛА и АКА микрофлоры репродуктивной системы у женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов по сравнению с группой здоровых.

Определено изменение массивности обсеменения микроорганизмами влагалища и факторов персистенции бактерий в зависимости от сроков гестации. Наблюдались дисбиотические явления на ранних сроках беременности, которые проявлялись дефицитом лактофлоры и

выделением стафилококков и кишечных палочек с выраженными факторами персистенции. Было выявлено снижение АЛА и АКА микроорганизмов в зависимости от увеличения сроков беременности.

Предложен фотометрическиий способ определения антшшзо-цимной активности бактерий, который позволил расширить диапазон микроорганизмов, тестируемых по этому признаку (Положительное решение формальной экспертизы ВНИИГПЭ по заявке на изобретение №97101325/13(001287) от 27. 01.97.

Нами было обнаружено регулирующее влияние препаратов половых стероидных гормонов на ростовые и персистеитные характеристики микроорганизмов. Прогестерон оказывал стимулирующее влияние на развитие популяции стафилококков и ингибировал рост кишечной палчки. Эстриол подавлял развитие популяций изученных микроорганизмов. При этом было определено подавляющее действие прогестерона и эстриола на факторы персистенции стафилококков и эшерихий.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Для тестирования антилизо-цимной активности микроорганизмов в исследовательской работе и для решения практических медицинских задач предложен фотометрический способ определения антилизоцимной активности, который позволил определять указанный признак у труднокультивируемых и антагонистически активных микроорганизмов.

На основе полученных данных о влиянии препаратов половых стероидных гормонов на персистентпые и ростовые показатели бактерий разработан способ коррекции дисбиотических состояний репродуктивной системы женщин препаратом «Овестином», позволяющий добиться нормализации микробиоценоза за счет снижения факторов персистенции микрофлоры влагалища и увеличения количества лак-тобактерий.

Материалы диссертации используются в учебной программе по микробиологии в Оренбургской государственной медицинской академии.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Факторы персистенции микрофлоры эпитопов репродуктивной системы женщин широко распространены и являются маркерами дисбиотических состояний при воспалительных заболеваниях внутренних половых органов.

2. Препараты половых стероидных гормонов оказывают регулирующее влияние на ростовые и персистеитные характеристики микроорганизмов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты проведенных исследований доложены на молодежном научном конгрессе «Проблемы региональной экологии» (1997), П Российской конференции «Персистенция микроорганизмов» (1997), Областной конференции акушеров-гинекологов (1997) . Диссертация была апробирована на совместном заседании кафедр микробиологии , акушерства и гинекологии ОГМА и Института клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (1998).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы, получено положительное решение формальной экспертизы по заявке на изобретение № 97101325/13(001287) от 27.01.97 «Способ определения антилизоцимной активности микроорганизмов».

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ.

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, магери&ты и методы, пять глав собственных исследований, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 95 отечественных и 75 иностранных научных источников.

Иллюстрации представлены 4 таблицами и 20 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. При проведении исследований было изучено 648 штаммов микроорганизмов, выделенных от 32 здоровых женщин, 28 женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов, и 62 беременных женщин.

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Адгезивную способность микроорганизмов определяли по методу В.И. Брилис с соавт. (1986), факторы перси-стешцш изучали по методам, разработанным О.В. Бухариным с со-авт.(1984, 1992, 1997). Определение степени микроэкологических нарушений проводили по К.Я. Соколовой с соавт. (1988). Ростовые характеристики бактериальных популяций изучали по Г. Шлегелю (1987). Изучение влияния препаратов прогестерона и эстриола на пер-систентные и ростовые характеристики микроорганизмов проводили при культивировании бактерий в жидкой питательной среде, содержащей препараты гормонов в концентрации 100 нг/мл. Полученные результаты обработаны с использованием статистических методов.

Результаты исследования и их обсуждение. При изучении микрофлоры биотопов репродуктивного тракта здоровых женщин было определено, что значения показателя микробной обсемененности (ПМО) наибольшими были у лактобацилл и стрептококков, выделенных из влагалища и цервикального канала и составили около 5,0 Ig КОЕ/мл. Интенсивность обсемененности биотопов репродуктивной системы другими видами микроорганизмов была меньше и ее значения колебались в пределах 3,0 - 4,0 lg КОЕ/мл. А частота выделения лактобацилл из влагалища и цервикального канала составила 100 % и 78,1 % соответственно. При изучении микрофлоры биотопов репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов была отмечена низкая частота выделения лактобацилл из влаг&таща (71,4%) и цервикального канала (21,4 %) у женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов, тогда как частота выделения условно-патогенных микроорганизмов (например, стафилококков) превалировала (89,3% и 75,0 % соответственно). При этом выявлялось небольшое количество лактобацилл в вагине (3,3 lg КОЕ/мл) и цервикальном канале (3,1 lg КОЕ/мл), хотя обсемененность других видов бактерий состовляла от 2,5 до 5,0 lg КОЕ/мл. Сравнительная оценка данных по видовому составу биотопов репродуктивного тракта здоровых женщин и женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов значительных различий не выявила.

Определение видового сходства эпитопов репродуктивного тракта здоровых женщин показало, что некоторые виды микроорганизмов выделялись только из влагалища, например, Е. coli, а коэффициент сходства Съеренсена составил 0,62 ± 0,07.

При сравнении видового сходства микрофлоры биотопов здоровых и больных женщин было определено уменьшение соответствия видов вагинальной и цервикальной флоры у женщин в группе больных, где показатель Съеренсена составил 0,29 ± 0,06.

Следует отметить, что условия обитания микроорганизмов во влагалище и цервикальном канале существенно различаются (Л.Г.Кейт и др., 1988), и связаны не только с морфологическими особенностями конкретного эпитопа, но и с особенностями факторов местного иммунитета, что может определять индивидуальные различия видового состава вагины и цервикса. Это подтверждает полученные результаты о различии видового состава микрофлоры влагалища и цервикального канала у индивидуумов, тогда как при обобщении данных были определены одни и те же виды микроорганизмов, выделенных из указанных биотопов.

Сравнение показателей микробной обсемененности в группах здоровых и больных выявило достоверное снижение ПМО лактоба-

шиш, выделенных из влагалища и цервикального канала больных женщин, что свидетельствовало о наличии микроэкологических нарушений в вагинальном микробиоценозе у женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов. Наши результаты подтверждаются данными В.М. Сидельниковой с соавт. (1988) о том, что воспалительные заболевания возникают на фоне .микроэкологических нарушений. Различий ПМО других видов микроорганизмов в группах сравнения выявлено не было. Данные о снижении частоты выделения и показателя микробной обсемененности лактобацилл могут свидетельствовать о низкой колошгзашюшюй резистентности эпи-топов репродуктивной системы женщины, связанной с количеством представителей нормальной микрофлоры (И.А. Бочков с соавт., 1995).

Антилизоцимный и антикомплементарный признаки были широко распространены у микроорганизмов, выделенных из влагалища и цервикального канала здоровых женщин. АЛА регистрировалась у 61,8-100 % штаммов микроорганизмов, а АКА была обнаружена у 47,0-82,3 % штаммов.

При определении выраженности маркеров персистенции было выявлено, что вагинальные и цервикальные штаммы коринебактерий, стафилококков и кишечных палочек имели невысокие значения анти-лизоцимной активности - от 1 до 2 мкг/мл и значительно не отличались в пределах изучаемых биотопов. А антилизоцимный признак стрептококков и энтерококков, выделенных из соответствующих биотопов, определенный фотометрическим методом, колебался в пределах 0,151 - 0,325 мкг/мл.СЮ (рис. 1).

Антикомплементарная активность исследованных микроорганизмов была невысокой и не превышала 3,7 антиСН5о.

Изучение распространенности и выраженности адгезивной способности показало, что большинство микроорганизмов, составляющих биоценозы эгаггопов репродуктивной системы здоровых женщин были средне- и высокоадгезивными. Среднее значение индекса адгезии было максимальным у вагинальных кишечных палочек и составило 4,7 ± 0,5 бакт/эр. У других микроорганизмов НА составлял в среднем от 2,51 до 3 бакт/эр.

Выявленная широкая распространенность маркеров персистенции и выраженная адгезия у микроорганизмов, выделенных из половых путей здоровых женщин, определяют высокую способность к колонизации указанных биотопов, что в известном смысле определяет устойчивость микробиоценозов. Полученные результаты согласуются с мнением О.В. Бухарина и Б.Я. Усвяцова (1996) о том, что уровень колонизации конкретной экологической ниши микроорганизмами определяется их возможностью противостоять факторам защиты макроорганизма и уровнем адгезивной способности.

Анализ данных распространённости факторов персистенции микрофлоры половых путей женщин достоверных различий не показал. И в группе здоровых и в группе больных женщин было характерно широкое распространение факторов персистенции у выделенных микроорганизмов. Однако выраженность персистентных свойств отличалась.

Было определено увеличение значений факторов персистенции (АЛА, АКА) микроорганизмов изолированных из биотопов репродуктивного тракта женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов (рис. 1). При этом была отмечена высокая адгезивная способность условнопатогенной флоры.

Изучение микрофлоры репродуктивной системы женщины выявило, что воспалительные заболевания внутренних половых органов протекают на фоне дисбиотических состояний, характеризующихся выделением микроорганизмов с выраженными персистент-ными свойствами. Аналогичные результаты были получены А.В. Ва-лышевым (1997). Автором было зарегистрировано увеличение значений факторов персистенции энтеробактерий, выделенных при дисбио-зе по сравнению с фоновым уровнем.

Указанные микроэкологические нарушения в исследуемых биотопах возникают в результате изменения баланса в системе "паразит-хозяин", следствием которого является селекция штаммов с перси-стентным потенциалом (О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, 1996).

Представленные результаты о наличии в микробиоценозе влагалища и цервикального канала персистирующей микрофлоры могут свидетельствовать о патогенетической роли последней при воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях репродуктивного тракта женщин.

Таким образом, воспалительные заболевания внутренних половых органов протекают на фоне дисбиотических состояний, характеризующихся дефицитом лактофлоры и наличием условно-патогенных микроорганизмов с персистентным потенциалом и высокой колонизирующей способностью.

Определение видового состава микрофлоры влагалища и частоты выделения микроорганизмов у беременных женщин показало, что частота выделения микрорганизмов в течение беременности значительных изменений не претерпевала.

Анализ показателя микробной обсемененности выявил следующие особенности. Было отмечено увеличение количества лактобацилл во влагалище в третьем триместре (4,3±0,26 КОЕ/мл) по сравнению с первым триместром (3,5±0,25 ^ КОЕ/мл, р < 0,05), тогда как частота выделения их не изменялась. Количество стафилококков и энтерококков в занимаемом ими эпитопе уменьшалось в течение беременности.

Рисунок 1. Сравнительная характеристика микроорганизмов по АЛА (А,Б) и по АКА (В), выделенных от здоровых и больных женщин.

В

т

1 2 5

Ось У: АЛА микроорганизмов(чашечный метод; мкг/мл)

з 4

Ось У: АЛА микроорганизмов (фотометрический метод; мкг/ мл ОД)

12 3 4

Ось У: АКА микроорганизмов (анти СН 50)

1 - коринебактерии

2 - стафилококки

3 - стрептококки

4 - энтерококки

5 - энтеробактерии ( Е. coli) * - р < 0,05

Биотопы: | | - вагина (здоровые) ЦЦ - цервикс (здоровые)

- вагина(больные)

- цервикс (больные)

ПМО стафилококков в I триместре составил 4,3+0,2 lg КОЕ/мл, против 3,5±0,3 lg КОЕ/мл в III триместре (р <0,05). Содержание энтерококков снизилось с 5,5±0,4 Ig КОЕ/мл до 3,8 lg KOE/'мл в П1 триместре беременности. Изменение ПМО других видов микроорганизмов отмечено не было. Сравнение видового состава вагинальной микрофлоры беременных женшин не выявило различий по сравненшо с небеременными. При этом было определено изменение количественных показателей с наступлением беременности. Было отмечено снижение частоты выделения лактобактерий у беременных женщин из влагалища в I триместре по сравнению с небеременными женщинами, которое сочеталось с уменьшением ПМО: у небеременных - 5,3±0,08 lgKOE/мл против 3,5±0,25 lgKOE/мл у беременных в I триместре.

Определение факторов персистенции у выделеных микроорганизмов выявило широкую распространенность антилизоцимной и антикомплементарной активностей, которые обнаруживались у подавляющего большинства микроорганизмов. Не наблюдалось достоверных различий в распространенности факторов персистенции микрофлоры с наступлением беременности и в процессе гестации. Однако, обращает на себя внимание факт увеличения степени выраженности АЛА и АКА у стафилококков и эшерихий в I триместре беременности. К концу беременности происходило снижение факторов перси-стенции у данных микроорганизмов до фонового уровня.

Анализ данных выраженности факторов персистенции микроорганизмов выявил следующие особенности изменения AJIA и АКА в течение беременности (рис. 2). Так, если в I триместре у стафилококков АЛА-признак составил 2,4 мкг/мл, то затем наблюдалось его снижение; во П триместре АЛА была равна 2,1+0,5 мкг/мл, а в третьем 0,7±0,6 мкг/мл (р< 0,05). Аналогично происходило изменение антили-зоцимного фактора у Е. coli. В начале беременности выраженность признака в популяции была на уровне 4,5±0,2 мкг/мл, во II триместре -3,7±0,6 мкг/мл, а к концу беременности 1,8±0,7 мкг/мл. Динамика АКА у стафилококков по триместрам происходила по убывающей и значения составили 4,5±1,1 антиСНзо, 4,1±0,9 airraCHso и 2,3+1,2 анти СН50, различия значений в I и III триместрах были достоверными (р < 0,05). Начальный уровень АКА у Е. Coli был несколько выше, чем у стафилококков (6,2 ±1,2 анти СН50), во II триместре было отмечено снижение до 4,6 ± 1,2 анти СН50, а в 1П триместре значения АКА составили 2,7 ±1,2 анти СН50, что достоверно ниже, чем в I триместре (Р<0,05).

На основании проведенных исследований микрофлоры влагалища беременных женщин можно заключить, что видовой состав микрофлоры беременных женщин стабилен, и в течение беременности

Рисунок 2. Выраженность антилизоцимной (А, Б) и антиксмплементарной (Б) активностей микроорганизмов, выделенных от беременных женщин

1 2 Ось У: АЛА микроорганизмов (чашечный метод; мкг/ мл ОД)

Ось У: АЛА микроорганизмов (фотометрический метод; мкг/ мл ОД)

iE

1

I

U

12 3 4

В Ось У: АКА микроорганизмов (анти СН 50)

1 -коринебактерии

2 - стафилококки

3 - стрептококки

4 - энтерококки

5 - энтеробактерии ( Е. coli) * - р < 0,05

| | -1 триместр беременности ^ - II триместр беременности - Ill триместр беременности

обнаруживаются одни и те же виды микроорганизмов. Однако изменяется обсемененность отдельными видами бактерий. Если ПМО лак-тобактерий возрастал, то ПМО стафилококков и энтерококков снижался. Анализ распространенности и выраженности факторов перси-стенции выявил, что АЛА и АКА достаточно широко распространены у микроорганизмов, выделенных из влагалища беременных, причем их распространенность в процессе гестации остается на одном и том же уровне. При этом было отмечено, что выраженность АЛА и АКА у стафилококков и Е. coli уменьшается. Определение адгезивной способности вагинальной микрофлоры показало, что большинство микроорганизмов относятся к средне- и высокоадгезивным. Вместе с этим адгезия была стабильным свойством и не изменялась в различные периоды гестации.

Следует отметить, что с наступлением беременности наблюдаются микроэкологические изменения в вагине, которые характеризуются снижением обсемененности лактобациллами влагалища и увеличением персистентного потенциала стафилококков и эшерихий

Таким образом, микробная обсемененность и факторы перси-стенции микрофлоры влагалища зависят от физиологического состояния женщины и изменяются в процессе гестации , что согласуется с данными A.B. Голубева (1993) об изменении биохимической активности микроорганизмов в течение беременности и P.Moberg (1978) отметившим динамику обсемененности микроорганизмами влагалища в процессе гестации.

Было изучено влияние препаратов половых стероидных гормонов (пргестерона и эстриола) на ростовые и персистенгные характеристики S. haemolyticus и Е. coli. При анализе регулирующего действия прогестерона на рост стафилококков отмечено увеличение скорости размножения микроорганизмов на 3 и 4 часах культивирования (рисЗ), когда этот показатель составил 0,4 ± 0,01 1/час и 0,28 ± 0,03 1/час и достоверно превысил скорость размножения в контроле, которая была равна 0,35 ± 0,01 1/час и 0,14 ± 0,02 1/час. Скорость размножения S. haemolyticus в последующие часы культивирования достоверно не отличалась от скорости размножения в контроле, а на 7 часу была достоверно ниже (0,24 ± 0,01 1/час, р<0,05) , тем не менее уровень биомассы начиная с 5 часа наблюдения достоверно превысил контрольный показатель.

Эстриол оказывал ингибирующее действие на рост S. haemolyticus, что выразилось постепенным нарастанием скорости размножения, и достигнув максимума в интервале между 5-6 часами культивирования (0,23 ± 0,02 1/час), к концу наблюдения этот показатель снизился.

Рисунок 3. Влияние препаратов половых стероидных гормонов на скорость размножения S. haemolyticus (А) и Е. coli (Б)

0,45 i 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 | 0,05 О

-0,05 0,3 0,25 ! 0,2 . 0,15 0,1 I 0,05 О

0-1 1-2 2-3 3-4 4-5 5-6 6-7

Ось X: время, (ч);

Ось У: скорость размножения, (1/ч);

| [ - контроль; * - р< 0,05

** -р<0,01 - прогестерон; *** - р < 0,001

-эстриол;

Таблица 1.

Характер влития препаратов половых стероидных гормонов на АЛА и АКА Б. ЬаепкЯуйсиБ (п=30)

Показатель S. haemolyticus

Контроль Прогестерон Эстриол

М+го 0,922 ±0,112 0,487+0,061 ** 0,26+0,03 **

АЛА мкг/мл.СЮ мкг/мл.СГО мкг/мл-OD

D 4,05 2.87 1,85

Е 0,81 0,72 0,62

М+т 13,6+0,8 5,6±1,5 ** 5,3±1,4 **

АКА анти СН50 анти СН50 анти СН50

D 2,46 2,39 2,08

Е 0,82 0,8 0,7

Таблица 2.

Характер влияния препаратов половых стероидных гормонов на АЛА и АКА Е. coli (п=30)

Показатель Е. coli

Контроль Прогестерон Эстриол

М±т 0,191±0,02 0,135±0,014 * 0,104±0,019 **

АЛА мкг/мл.СЮ мкг/мл-OD мкг/мл.СЮ

D 3,19 3,45 1,99

Е 0,8 0,7 0.66

М±т 10,06+1,4 5,3±1,1 * 6,9+0,8 *

АКА анти СН50 анти СН50 анти СН50

D 4,46 2,52 3,03

Е 0,89 0,63 0,76

Условные обозначения: D - индекс разнообразия Симпсона;

Е - индекс выровненности Симпсона; * - р<0,01 ** -р< 0,001

Культивирование Е. coli с препаратами прогестерона и эстриола в обоих случаях приводило к подавлению роста популяции микроорганизмов. Рост Е. coli в среде с прогестероном или эстриолом сопровождался более низкой скоростью размножения в интервалах 23 и 3-4 ч. по сравнению с контролем (рис. 3). Наблюдение за изменением оптической плотности выявило, что начиная с 3 ч. культивирования и в последующие часы она была достоверно ниже, чем в контроле. Изучение регулирующего действия препаратов на персистент-ные характеристики микроорганизмов выявило подавляющий эффекг (табл. 1,2), который проявлялся снижением среднепопуляциойных значений признаков за счет элиминации или уменьшения количества клонов с выраженными персистентными свойствами и увеличения удельного веса клонов с низкими значениями антикомплементарной и антилизоцимной активностей.

Полученные данные могут представлять интерес в связи со снижением колонизационного потенциала микроорганизмов по действием препаратов половых стероидных гормонов, поскольку известно, что бактерии с низким показателями AJIA и АКА не способны длительно переживать в условиях макроорганизма. Гетерогенность популяции по указанным признакам отражает адаптивные возможности популяции микроорганизмов в целом, что также влияет на колонизацию биотопа. Таким образом, данные по подавляющему действию половых стероидных гормонов на факторы персистенции микроорганизмов могут объяснять эффективность применения препаратов эстрогенов при лечении неспецифических кольпитов.

Оценивая материал в целом следует отметить, что:

Факторы персистенции микрофлоры эпитопов репродуктивного тракта женщин изменяются в зависимости от физиологического состояния женщины и являются маркерами дисбиотических состояний при воспалительных заболеваниях внутренних половых органов.

Препараты половых стероидных гормонов оказывают регулирующее влияние на ростовые и персистентные характеристики мик-роорганизов.

ВЫВОДЫ:

1. Широкая распространенность факторов персистенцни, выраженная адгезивная способность и постоянство видового состава микрофлоры биотопов репродуктивного тракта женщин при различных состояниях характеризуют её высокий колонизирующий потенциал.

2. У женщин с воспалительными заболеваниями внутренних половых органов наблюдаются дисбиотические изменения в вагинальном микробиоценозе, характеризующиеся уменьшением обсеменён-ности лактобактериями и повышением персистентного потенциала симбионтной микрофлоры.

3. Факторы персистенции микрофлоры репродуктивного тракта женщин являются маркерами дисбиотических состояний. Отмечена высокая частота выделения штаммов микроорганизмов с высокими значениями АЛА и АКА при микроэкологических нарушениях.

4. С наступлением беременности наблюдаются микроэкологические изменения в вагине, которые характеризуются снижением частоты выделения и показателя микробной обсемененности лактобакте-рий, а также увеличением персистентного потенциала стафилококков и эшерихий.

5. По мере увеличения сроков гестации происходит восстановление обсемененности микроорганизмами влагалища и снижение значений факторов персистенции стафилококков и эшерихий до фонового уровня.

6. Установлено, что препараты половых стероидных гормонов разнонаправленно действуют на ростовые характеристики S. haemo-lyticus и Е. coli. Прогестерон оказывал стимулирующее влияние на развитие популяции S. haemolyticus и ингибировал рост Е. coli. Эстри-ол подавлял развитие популяций изученных микроорганизмов. Выявлено ингибирующее действие препаратов половых стероидных гормонов на факторы персистенции бактерий.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Антилизошшная активность и видовой состав микрофлоры репродуктивного тракта женщин во время беременности // Журн. микробиол.- 1996,- № 3.- С.88-90. ( соавт. О.Д. Константинова).

2.Фотометрическое определение антилизоцимной активности микроорганизмов //Журн. микробиол.- 1997,- № 4.- С. 117-120 (соавт. О.В. Бухарин, A.B. Валышев, H.H. Елагина, Ю.Б. Иванов).

3.Влияние препаратов стероидных гормонов на персистентные и ростовые характеристики стафилококков//Журн. микробиол - 1997.-№ 4 - С.92-95 (соавт. Ю.Б. Иванов, М.Д. Кузьмин, О.Д. Константинова).

4.Микрофлора репродуктивной системы женщин при воспалительных заболеваниях внутренних половых органов //Тез. докл. Областной научно-практической конференции акушеров-гинекологов и педиатров «Актуальные проблемы репродуктивного здоровья подростков», г. Оренбург, 1997.-С.23-24. (соавт. О.Д. Константинова, Е.А. Кремлева, М.Д. Митрофанова)

5.«Способ определения антилизоцимной активности микроорганизмов». Положительное решение формальной экспертизы ВНИ-ИГПЭ по заявке на изобретение № 97101325/13(001287) от 27.01.97 г. (соавт. О.В. Бухарин, A.B. Валышев, H.H. Елагина, Ю.Б. Иванов).

ы