Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сорбционные методы выделения и очистки панкреатических ферментов: рибонуклеазы, дезоксирибонуклеазы, трипсина и химотрипсина

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Сорбционные методы выделения и очистки панкреатических ферментов: рибонуклеазы, дезоксирибонуклеазы, трипсина и химотрипсина"

и 8 АВГ

Санкт-Петербургский Государственный Технологический институт ( Технический Университет )

СОРБЦИОНННЕ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ : РИБОНУКЛЕАЗН, ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕАЗН, ТРИПСИНА И ХИМОТРИПСИНА

03.00.23. - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

На правах рукописи

РУДОМЕТОВА Наталья Викторовна

Санкт-Петербург 1994

Работа выполнена на кафедре биотехнологии Санкт-Петербургского химико-фармацевтического института

Научные руководители:

доктор химических наук, ДМИТРЕНКО ЛЕОНИД ВАСИЛЬЕВИЧ профессор

кандидат химических наук, ГЛАЗОВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА доцент

Официальные оппоненты: доктор химических наук. КОКОТОВ ЮРИИ АБРАМОВИЧ

доктор технических наук, КОЛИКОВ ВСЕВОЛОД МИХАИЛОВИЧ профессор

Ведущее предприятие: АО Научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов г.Санкт-Петербург

Защита состоится 994г. в____часов

в аудитории ------ на заседании Специализированного Совета

\ Д 063.25.09 при Санкт - Петербургском Технологическом институте.

С диссертацией мовно ознакомиться в библиотеке института

Замечания и отзывы по работе, заверенные гербовой печатью, в одном экземпляре, просим направлять по адресу : 198013, г.Санкт-Петербург, Загородный пр.,49, Санкт-Петербургский Технологический институт, Иченый Совет. Автореферат разослан_______ 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат технических наук Т.Б.Лисицкая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Ферментные органопрепараты являются перспективными лекарственными средствами, в том числе для лечения и профилактики вирусных инфекций. Значительную долю в общем выпуске ферментов медицинского назначения составляют панкреатические ферменты (рибонуклеаза, дезокси-рибонуклеаза, трипсин и химотрипсин). Действующая технология их комплексного получения, основанная на многократном фракционировании сернокислым аммонием, имеет ряд существенных недостатков: низкий выход конечного продукта, мно-гостадийность, большая длительность процесса, значительные затраты ручного труда. Получаемые при этом готовые ферментные препараты часто не удовлетворяют требованиям Государственной Фармакопеи по качеству.

Необходимость разработки более эффективной технологии выделения и очистки панкреатических ферментов, повышение их качества обусловливает актуальность темы настоящей работы.

Целью работы является изучение закономерностей молекулярной и ионообменной сорбции панкреатических ферментов и разработка на их основе технологии сорбционного хромато-графического процесса выделения и очистки.

Основные задачи работы: определение оптимальных параметров экстракции и условий предсорбционной обработки экстракта поджелудочной аелезы; изучение закономерностей сорбции панкреатических ферментов на молекулярных и ионоген-ных макропористых сорбентах; определение оптимальных условий сорбции и десорбции комплекса панкреатических белков: масштабирование процесса выделения и очистки ферментов.

Научная новизна работы. Впервые изучены равновесные характеристики и термодинамические параметры сорбции панкреатических ферментов макропористым катионитом КУ-23. Установлена взаимосвязь структуры матрицы молекулярных сорбентов на основе стирола (Поролас-Т) и глицидилметакрилата (Б и ББ) с избирательностью сорбции, определяемой ионным и неионным взаимодействием. Сформулированы факторы, опреде-

ляющие взаимодействие молекулы белка с ионогенными и неио-ногенными сорбентами. Показана целесообразность использования структур обеспечивающих дополнительные связи с сорбируемыми молекулами при наличии ион-ионного взаимодействия. Впервые предложен способ предсорбционной обработки экстракта поджелудочной железы,заключающийся в его сепарировании и приводящий к получению обезжиренного экстракта, пригодного для сорбции в ионообменных колоннах. Показана возможность одновременной избирательной сорбции 4-х панкреатических ферментов, обладающих различными физико-химическими свойствами из модельных растворов и экстрактов макропористыми катионитами. Впервые осуществлено выделение и очистка комплекса панкреатических нуклеаз и протеаз из непрозрачных коллоидных растворов на сульфокатионите НУ-23 в ионообменных колоннах. Показано, что выявленные закономерности полностью масштабируются и оптимизируются с помощью критериального параметра Л , что позволило осуществить крупномасштабный процесс ионообменного выделения и очистки панкреатических ферментов.

Практическое значение. На основании данной работы был предложен способ получения гидролитических ферментов ( положительное решение по заявке N4942523/13).Спроектирована, смонтирована и запущена в производство промышленная установка ионообменного выделения и очистки на заводе медпре-паратов А0"Самсон" в г.С-Петербурге. Полученные партии ферментных препаратов удовлетворяют требованиям ФС. Предлагаемый способ позволил сократить время процесса в 5 раз. При этом съем продукции со 100 кг сырья увеличился на 302, улучшилось качество готовых препаратов и условия труда.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на: Всесоюзной конференции "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации",г.Ленинград, 1989г.'; Зональной конференции "Молекулярная сорбция биологически активных веществ", г.Пенза, 1990г.; Всесоюзной конференции "Технология ключевых соединений, используемых в синтезе' биологически активных веществ", г.Пенза, 1991г.;

Uli Всесоюзной конференции "Применение ионообменных материалов в промышленности и аналитической химии", г.Воронен, 1991г.: Семинаре "Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные методы" г.Ленинград, 1991г.: UI Всероссийском симпозиуме по молекулярной мидкостной хроматографии, г.Москва, 1993г.; Семинаре "Теория и практика ионного обмена, ионообменная хроматография" Всероссийского химического общества им. Д.И. Менделеева, г.С-Петербург, 1993г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, списка использованных литературных источников, включающего 163 наименования и приловения.

Работа изловена на 136 страницах машинописного текста, включая 37 рисунков,10 таблиц и приложения на 14 страницах, в которое вынесены программы для расчетов на ЗВМ, акты испытаний, апробации и внедрения результатов работы.

В первой главе ( обзоре литературы ) содернится обзор работ по получению неочищенных растворов белков, выделению белков из растворов и их дальнейшей очистке. Рассмотрены различные методы выделения и очистки белков, включая мембранные, хроматографические и сорбционные. Дана оценка основных методов, используемых как в лабораторных , так и в промышленных масштабах. В этой ве главе описаны теоретические решения кинетических и динамических задач сорбции макромолекул белков, критериальные параметры регулярности хроматографических процессов.

Во второй главе описаны объекты и методы исследования, использованные в работе.

В третьей главе приведены результаты по изучению кинетики экстракции панкреатических ферментов из подвелудоч-ной велезы, влиянию различных факторов на процесс экстракции и каталитическую активность нуклеаз.

В четвертой главе приведены данные по изучению закономерностей сорбции панкреатических ферментов неионогенны-

ми и ионогенными сорбентами. Выбран сорбент, позволяющий избирательно и обратимо сорбировать комплекс панкреатических ферментов.

В'пятой главе приведены результаты исследования динамического ионообменного процесса сорбции, злюции ферментов, кинетико-динамического анализа ионообменного выделения ферментов и его масштабирования по критериальному параметру Л . Предложен способ выделения и очистки комплекса ферментов.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИИ.

Особенности физико-химических свойств белковых макромолекул, а именно: большая молекулярная масса, лабильность молекул, способность к ассоциации, с одной стороны, и мно-гокомпонентность растворов, содержащих большое количество примесных соединений, с другой стороны, свидетельствуют о том, что выделение и очистка ферментов представляет определенные трудности. Многообразие ферментов и разнообразие их свойств определяют и мно&ество способов их выделения и очистки.

В настоящее время, при получении ферментных препаратов, наряду с традиционными, значительную роль играют сор-бционные методы, которые, однако, недостаточно широко используются в промышленности.

Экстрагирование и выделение панкреатических ферментов из экстракта поджелудочной железы.

Поджелудочная железа крупного рогатого скота содержит большое количество ферментов, гормонов, жиров, липопроте-инов, нуклеиновых кислот и других веществ. Экстракт поджелудочной железы представляет собой многокомпонентную систему (Рис.1а), содержащую кроме целевых ферментов высоко и низкомолекулярные белковые примеси, которые присутствуют и в готовых препаратах.С целью получения экстракта,пригодного для сорбции на ионообменных колоннах, было изучено влияние различных параметров (рН, времени экстракции, органических растворителей) на качественный и количественный

Рис.1. Гельхроматограммы экстрактов подяелудочной железы без предварительного обезжиривания (а); предварительно обезжиренной ацетоном (б). Время экстракции - 16 час.

состав экстракта. Результаты экспериментов показали, что максимум экстрагирования белка и нуклеаз достигается за 33,5 часа. При увеличении рН экстракта более 2,5 происходит снижение активности нуклеаз, по-видимому , вследствие их протеолиза при автокаталитическом активировании зимоге-нов протеаз. Компонентный состав 3-часового экстракта аналогичен 16-ти часовому экстракту, что позволило сократить время экстрагирования до 3-х часов. Изучение влияния растворителей ( ацетона и спирта ) на экстракт показало возможность их использования для обезжиривания, однако, помимо обезжиривания , удаления высокомолекулярных примесей (Рис.1, б) и, как следствие, улучшения фильтруемости, происходит значительная инактивация нуклеаз, особенно ДНКазы (Рис.2). Отрицательное воздействие органических растворителей и активных протеаз на активность нуклеаз подтверждено также экспериментами на модельных растворах.

Экспериментально установлено, что применение высокоэффективных сепараторов позволяет получать обезжиренный экстракт с минимальными потерями (5-10 '/.) активных ферментов. Экстракт после сепарирования представляет собой непрозрачный коллоидный раствор, сохраняющий стабильность

А, Е/ш1

1-7 С

10К 6К 6К 4К

гк о

■ >• ^а-л—г----*--- —6-----

4 1

1

г/ О О о 2

^ ■ ... 0 3

А, Е/т1

1-7 *Ь

в в 10 12 14 16 1В 20 ¿.1С

а

1.000 600 600 400 200 О

i

__________ д д

А

¥ -0--- г

1 п П- —0

5

1 --о---//*6 ---а

£

О 2 4 6

10 12 14 16 16 20

Рис.2. Кинетика экстракции РНКазы (а) и ДНКазы (б) из поджелудочной железы при 1=7°С.

1 - без предварительного обезжиривания;

2 - железа обезжирена ацетоном

3 - железа обезжирена спиртом А - активность фермента, Е/мл.

(нерасслаивакщийся) в течение длительного времени, что делает его пригодным для выделения панкреатических ферментов на сорбционных колоннах.

Изучение сорбционных свойств панкреатических ферментов.

С целью изучения механизма сорбции и выбора оптимального сорбента в соответствии со свойствами экстракта поджелудочной железы исследовано взаимодействие панкреатических ферментов с неионогенными и ионогенными сорбентами. Строение элементарных звеньев сорбента:

СИз

- СН.- С -

2 I

СО

I

0

1

СНг I

СН4

I

0

1

СО

-СНг- С -I

СН5

Диметакрилат-зтиленгликоля (ЭДМе)

СНз

СНг,- С -I

со

I

0

1

СНг

I

.сн

°<гн

Глицидил-метакрилат С БМе)

снг- сн

Ч/

Стирол ($1)

В качестве неионогенных сорбентов были выбраны высокопористый сополимер стирола с дивинилбензолом Поролас-Т и ряд сорбентов Е и БЯ на основе глицидилметакрилата с различным содержанием сшивающего агента и стирола в полимерной матрице, предоставленных ИБС АН РФ. Изучение изотермического процесса сорбции РННазы на этих сорбентах (Рис.3)

5° С (1).

3 5° С (2)

Рис.3.Изотермы сорбции РНКазы макропористыми молекулярными сорбентами. ( ш - емкость сорбента в ыг белка на г воздушно-сухого сорбента )

а) Поролас-Т при 1=5°С (1) и Ъ=35°С (2).

б) Б и ББ с различным содерваниеы стирола 1 - Б -60 ( 0% г - Ё5-50 (10% $1)', 3 - £Б—30 (30%, 4 - СБ-М (50% БП.

и

показало, что изотермы имеют вид кривых с максимумами. Такой ход изотерм хорошо согласуется с моделями многослойной сорбции, переориентации молекул в сорбционном слое,энергетической неоднородностью поверхности и ассоциацией макромолекул в растворе.

Экспериментальные данные и, рассчитанные для начальных участков изотерм ( подчиняющихся уравнению Лэнгмюра ), термодинамические функции процесса сорбции показали, что включение гидрофобных стирольных групп в матрицу сорбента увеличивает избирательность и емкость сорбции ферментов сорбентами СБ, особенно на начальном этапе процесса сорбции .Это совпадает с экспериментальными данными по изотермической сорбции РНКазы полистирольным макропористым сорбентом Поролас-Т, емкость сорбции которого в несколько раз больше по сравнению с сорбентами Однако, наличие кооперативного взаимодействия, ассоциация белковых молекул в растворе, взаимодействие их друг с другом на сорбенте, и температура процесса также оказывают сильное влияние на сорбцию белков молекулярными сорбентами.

Проведенные исследования, таким образом, показали целесообразность использования сорбционных структур именно на основе полистирола как матриц, обеспечивающих образование дополнительных связей для увеличения избирательности сорбции, при наличии ион-ионного взаимодействия.

Закономерности ионообменной сорбции панкреатических ферментов были изучены на карбоксильном катионите СГ-1М и сульфокатионите КН-23 выпускаемых промышленностью. По результатам кинетических экспериментов било определено время установления равновесия в сорбционной системе и рассчитаны коэффициенты эффективной диффузии по уравнению (1),используя модель "оболочка-ядро",учитывающую конечное неравномерное распределение сорбтива.

где £ -толщина оболочки,см; р=1-1/г - относительный радиус непоглощающего ядра; Ь- среднее время диффузии.

Для выбора оптимальных условий сорбции ферментов на сорбентах СГ-1М и КУ-23 был определен рН-оптимум сорбции.

Исследование изотермического процесса сорбции показало, что ферменты сорбирутся на катионитах с высокой избирательностью, а изотермы имеют вид кривых с максимумами.На Рис.4 представлены изотермы сорбции ДНКазы сульфокатиони-том КУ-23. а в Табл.1 - термодинамические функции сорбции нуклеаз. Очевидно, что разница термодинамических функций обусловлена различием их молекулярных масс и природы поверхности адсорбционных участков макромолекул. Относительно меньшая макромолекула РНКазы (Мол.масса 13700 Д) взаимодействует с катионитом с преобладанием полярных сил, давая энтальпийрый эффект. При "взаимодействии большей молекулы ДНКазы (Мол.масса 31000 Д), очевидно, доминируют гидрофобные взаимодействия, приводя к энтропийному эффекту.

Одним из основных факторов, определяющих возможность препаративного сорбционного выделения вещества , является его избирательная и обратимая десорбция с носителя. Было изучено влияние рН десорбирующей системы на степень десорбции панкреатических ферментов. Показано, что обратимость сорбции на СГ-1М составляет не более 60 тогда как для КУ-23 она достигает 80-100 '/., Учитывая недостаточную степень десорбции, а также то, что из-за возможного протеоли-за нуклеаз, сорбцию необходимо вести при рН< 2,5,когда емкость карбоксильного катионита мала, представляется целесообразным осуществить выбор оптимального сорбента в пользу макропористого сульфокатионита КУ-23.

Моделирование колоночных сорбционных процессов.

Исследование динамического процесса сорбции панкреатических ферментов было проведено на модельных растворах, содержащих все ферменты в активном состоянии и экстрактах поджелудочной железы, в которых трипсин и химотрипсин присутствуют в виде каталитически неактивных форм -зимогенов. Экспериментальные выходные кривые сорбции -представлены на Рис.5. С целью определения оптимальных условий десорбции панкреатических ферментов с катионита КУ-23 было изучено

ПЗ , I

- +35°С.

Рис.4. Изотермы сорбции ДНКазы сульфокатионитом КУ-23

при 1=5 С (1) . Ъ=25 С (2)

Ъ=35 С (3

Таблица 1,

Термодинамические функции сорбции панкреатических нуклеаз

макропористым сульфокатионитом КУ-23

Фермент Темпера- К. йС, йН. Т аИ .

тура, К мл/моль кДв/моль кДв/моль кДв/моль

РНКаза 278 6 (150±2ОЫО -43+3

в -69+2 -26+3

298 ( 26 ±9)-10 -41±2

£ -120+10 -82+8

308 ( 4 ±1 )• 10 -38+1

ДНКаза 278 ( 13 +4)-10< -38+3

е 10+2 48+3

298 ( 17 ±5)• 10 -41±1

с 65+9 110+10

308 ( 39 ±8)-10 -45+2

и

Рис.5. Выходные кривые сорбции панкреатических ферментов сульфокатионитом КЫ-23 из модельного раствора при рН=2,5 С I- РНКаза, 2- ДНКаза, 3- ТС и ХТС ). А. йо - активности ферментов в пробах и модельном растворе соответственно.

С, мг/мл

Рис.6. Гельхроматограмма элиата, полученного при десорбции с сульфокатионита КУ-23. Сорбция ферментов велась' из экстракта при рН=2.0.

влияние рН десорбирующей системы на обострение границ зон при десорбции. Сорбцию проводили из модельных растворов. Десорбцию ферментов вели 1н аммиачной буферной системой с рН= 8,0-11,0.Экспериментами показано,что обострение границ зон и концентрирование происходит при увеличении рН до 1011. Выход ферментов составляет 73-80 '/..

Известно, что сульфокатиониты из-за отрицательного воздействия жесткой гидрофобной структуры матрицы, высокой концентрации ионов водорода и необходимости использования сильнощелочных элюирующих систем практически не используются для сорбции ферментов. Однако проведенные эксперименты показали, что, в данном случае, при элюции ферменты не только сохраняют свою каталитическую активность, но и освобождаются от балластных примесей в процессе сорбции -десорбции (Рис.В).

Для масштабирования ионообменного выделения комплекса панкреатических белков из экстракта был использован критериальный параметр (2):

л- л)

где £0- порозность неподвижного слоя сорбента; £=0,4 ; И - коэффициент распределения: В - эффективный коэффициент диффузии,мг/с; II -скорость протекания раствора,м/с; Я - радиус зерна сорбента,м; Н - высота слоя сорбента.м.

Условием регулярности хроматографических режимов для резковыпуклых изотерм сорбции (высокая избирательность) и внутридиффузионного механизма кинетики ионного обмена является А > 0,35.

Используя в качестве критерия эффективности сорбционного процесса параметр Л были выбраны оптимальные режимы работы трех различных ионообменных колонн. В условиях заданных габаритов колонн и размера зерен сорбента, определяемых производственой необходимостью, основным изменяемым параметром, влияющим на величину критерия у? является скорость сорбционного процесса. Однако, она долина быть достаточно высокой для того чтобы не допустить инактивации ферментов.

1В

Рис.7. Гельхроматограммы препаратов ДНИазы(а) и РНКазы(б), полученные по регламентной технологии.

Рис.8. Гельхроматограммы препаратов ДНКазы(а) и РНКазы(б), полученные по ионообменной технологии.

Таблица 2.

Кинетико-динамические параметры сорбции панкреатических ферментов сульфокатионитом КУ-23

Характеристика Фермент

и/о колонны

Рибонуклеаза Трипсин. химотрипсин Дезоксирибонуклеаза

й. Нсорб Ы б. и. Л К(1 0. и. Л Кс1 0. и. А

М ' м м2/с м/с мг/с м/с м2/с м/с

0,6'Ю"2 0.12 аз -/1 8,9-10 2.65-Ю"* 1,77-10"* 0,24 0,36 38 2,3-10 1,77-ю"* 2.16-Ю"3" 0,04 0,35 26 1,0-10 1.77-10"* 6,42 10"6 0,02 0,35

0,21 1.5 2,65-10^ 1,77-10"' з.о 4,5 2,65-ю"' 1,77-10"* 2,16-10-5" 0,36 0.53 4,4 1,77-Ю"* 2.18-10"* 6,42-10"" 0,2 1.3 4.4

0.6 1.6 2.65-10"4 1,77-Ю"' 3.2 4,8 2,65-10** 1,77-10** 2.16-10*^ 0.38 0,57 4.7 1.77-ю"* 2,16-10^ 6.4М0"" 0.3 1.4 4.66

Результаты расчетов приведенные в Табл.2 , показали, что при соблюдении приемлемой для практики скорости сорбции и = 1,77•10м/с условие регулярности соблюдается для РНКазы - на всех трех колоннах, для протеаз - на колонне с высотой слоя сорбента Н >1,5 м, для ДНКазы - с Н >1,6 м, Произведенные расчеты и выявленные закономерности взаимодействия панкреатических ферментов с различными сорбентами легли в основу способа выделения и очистки,который был запатентован и внедрен на заводе медицинских препаратов АО "Самсон" в г.С.- Петербурге. Полученые по новой технологии ферментные препараты обладают лучшим качеством по сравнению с регламентными (Рис.7,8).

ВЫВОДЫ.

1.Изучена кинетика экстракции панкреатических белков, найдены оптимальные условия экстракции комплекса ферментов из поджелудочной железы и получения стабильного, непрозрачного, нерасслаивающегося экстракта, пригодного для процессов сорбции. Это позволило сократить время экстракции с 16 до 3 часов.

2.Установлено инактивирующее влияние органических растворителей и активных протеаз на панкреатические нуклеазы в модельных растворах и экстрактах.

3.Изучены равновесные и кинетические закономерности сорбции панкреатических ферментов из модельных растворов молекулярными и ионообменными сорбентами различной структуры. Подобраны структуры, обладающие максимальной сорб-ционной способностью.

4.Определены основные параметры процесса сорбции-десорбции панкреатических ферментов макропористыми карбоксильными и сульфокатионитами. 5.Осуществлен выбор сорбента - макропористого сульфокатио-нита КУ-23, позволяющего избирательно и обратимо сорбировать панкреатические ферменты из мутных, коллоидных растворов.

6.Исследован хроматографический процесс выделения и очистки панкреатических ферментов на сульфокатионите КУ-23 из

модельных растворов и экстрактов. Проведены кинетико-ди-намический анализ по критериальному параметру , оптимизация и масштабирование колоночных сорбционных процессов

7.Разработан, запатентован, внедрен в производство способ выделения и очистки комплекса панкреатических ферментов, позволяющий сократить время технологических операций в 5 раз, увеличить выход готовой продукции на 30Z и улучшить качество готовых ферментных препаратов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1.Глазова Н.В.,Елькин Г.З..Рудометова Н.В..Трушникова М.К., Иустов Д.А..Дмитренко Л.В. Концепция кинетико-динамичес-кого анализа в расчетных занятиях и деловой игре//Всесо-шзн.научн.конф. "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации": Тез.докл.-Л.,1989. -С.7-8.

2.Рудометова Н.В.,Глазова Н.В..Дмитренко Л.В. Исследование сорбции панкреатической рибонуклеазы на молекулярных сорбентах марки СКН//Всесошзн.науч.конф."Молекулярная сорбция биологически активных веществ": Тез.докл.- г.Пенза,

1990.-С.56-57.

3.Ефимова Т.Б..Рудометова Н.В.,Глазова Н.В..Дмитренко Л.В. Постадийный аналитический контроль технологических процессов получения белковых препаратов // Всесоюзн.научн. конф."Технология ключевых соединений,используемых в синтезе биологически активных веществ":Тез.докл.- г.Пенза,

1991.-С.45-47.

4.Рудометова Н.В.,Ефимова Т.Б.,Глазова Н.В., Азанова В.В., Сторожук Т.А..Дмитренко Л.В. Исследование процесса сорбции панкреатической рибонуклеазы на макропористых сорбентах // Uli Всесоюзн.конф."Применение ионообменных материалов в промышленности и аналитической химии" : Тез. докл.-г.Воронеж, 1991.-С.202-203.

5.Рудометова Н.В.,Глазова Н.В.,Елькин Г.З., Дмитренко Л.В. Использование препаративной хроматографии для выделения и очистки БАВ на молекулярных и ионогенных сорбентах//

Семинар "Препаративная масштабируемая хроматография биологически активных веществ и альтернативные методы":Тез. докл.-Л.,1991.-С,27.

6.Рудометов Е.А..Рудометова Н.В. Быстродействие аппаратно-программных средств ДЕС- и IBM- совместимых ПЭВМ на языках Бейсик // Вопросы радиоэлектроники.-1991.- сер.ОВР, вып.2.-С.79-82. •

7.Рудометова Н.В.,Ефимова Т.Б.,Глазова Н.В..Дыитренко Л.В. Сорбция ферментов на ионитах различной структуры // Прикладная биохимия и микробиология.-1992.-т.28, вып.5,-С.694-697.