Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии

Вечернина, Нина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии
ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии"

На правах рукописи

ВЕЧЕРНИНА Нина Александровна

СОХРАНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ РЕДКИХ, ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ, УНИКАЛЬНЫХ ФОРМ И СОРТОВ РАСТЕНИЙ МЕТОДАМИ БИОТЕХНОЛОГИИ

03.00.05 - «Ботаника»

03.00.12 - «Физиология и биохимия растений»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

НОВОСИБИРСК - 2006

Работа выполнена в Алтайском государственном университете

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Барахтенова Людмила Алексеевна; доктор сельскохозяйственных наук, профессор Высоцкий Валерий Александрович; доктор биологических наук, с.н.с. Новикова Татьяна Ивановна.

Ведущая организация - Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН.

Защита состоится » (¡Щ,1ц/!/иЧ 2006 г. в ¿С часов на заседании диссертационного совета Д 003.058.01 при Центральном сибирском ботаническом саде СО РАН по адресу: ул. Золотодолинская, 101, г.Новосибирск-90, 630090.

Факс: (383) 330-19-86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального сибирского ботанического сада СО РАН.

Автореферат разослан

«Ж»АЩ4Я

2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Ершова Э.А.

2.00

6 ВВ S ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сохранение биологического разнообразия -одна из важнейших задач в деле охраны природы, которой уделяют большое внимание во всем мире. Связано это с ограниченностью необходимых для существования человека биологических ресурсов и угрозой их истощения. С начала XX века исчезновение сортов, видов и даже родов происходит по экспоненте (Драгавцев, 1995; Коропачинский, 1997). Особую актуальность имеют исследования по разработке методов сохранения растений, ареалы и численность которых резко снижается, а также для уникальных форм, расширяющих и улучшающих сортимент возделываемых растений. Стратегия сохранения биологического разнообразия заключается в сохранении его in situ и ex situ. Наряду с традиционными способами сохранения растений ex situ все большее значение приобретает использование для этих целей культуры изолированных тканей и органов (Камелин, 1997).

Привлечение методов биотехнологии, базирующихся на культивировании изолированных органов, тканей и клеток растений для решения проблем сохранения биологического разнообразия имеет преимущества перед традиционно используемыми подходами. Методы биотехнологии позволяют получать оздоровленный материал от пораженных вирусными и грибными болезнями растений, а также материал, свободный от нематод; осуществлять быстрое размножение ценного экземпляра растения; получать в больших количествах вегетативное потомство трудно размножаемых в обычных условиях видов и форм растений; работать в лабораторных условиях круглый год и планировать выпуск растений к определенному сроку; размножать растения без вывода их из ювенильной фазы; длительно хранить пробирочные растения и создавать «банк» ценных форм (Высоцкий, 1986).

Однако широкому использованию биотехнологий для многих видов и даже сортов растений препятствует то, что морфогенетический потенциал и регенерационная способность культивируемых тканей часто строго зависят от генотипа и условий культивирования. Отсутствие надежных способов адаптации регенератов к условиям ex vitro приводит к значительной потере регенерантов и, в некоторых случаях, существенно снижает возможности использования биотехнологических методов, как для сохранения биологического разнообразия, так и для производства высококачественного посадочного материала ценных растений.

Следует отметить, что исследования в области культуры ткани для решения проблем сохранения генофонда растений имеют свои особенности. Довольно часто они связаны с отсутствием возможности свободного выбора объекта, а также дефицитом исходного материала нужного растения. Это, безусловно, оказывает влияние на постановку задач исследований, и, в некоторых случаях, позволяет решить их только эмпирическим путем.

Цель я задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в

разработке и совершенствовании методов культурно СШДЗДОЯМЛЫВДДОней

БИБЛИОТЕКА )

сп«—-— ~ - *

о® тСшЫ Л(1 1

растений для использования в системе сохранения и воспроизвЬдства растительных ресурсов.

В соответствии с поставленной целью в задачи исследования входило:

- изучить влияние регуляторов роста на регенерационные процессы на стадиях собственно размножения и укоренения;

- выявить роль типа экспланта и его видовой принадлежности в процессах регенерации растений в культуре in vitro;

- определить модель регенерации, обеспечивающую наиболее высокую эффективность микроразмножения для конкретных видов растений;

- установить влияние продолжительности культивирования изолированных тканей на их регенерационную способность;

- усовершенствовать технику и приемы адаптации растений-регенерантов к условиям выращивания ex -vitro;

- определить место методов биотехнологии в стратегии мероприятий сохранения биологического разнообразия растений ex situ.

Научная новизна. Впервые изучен морфогенетический потенциал и предложены способы сохранения генофонда для редких и исчезающих видов флоры Алтая. В результате детального изучения процессов регенерации впервые разработаны эффективные способы микроразмножения для ряда уникальных новых форм и сортов растений, полученных или интродуцированных во ВНПОЧСК и ЧП (Грузия), в НИИ садоводства Сибири им. М.А.Лисавенко, в Южно-сибирском ботаническом саду Алтайского государственного университета. Показана целесообразность подбора основных питательных сред и регуляторов роста на каждом этапе микроразмножения. Усовершенствованы конкретные приемы адаптации регенерантов к условиям ех vitro с использованием гидропонных установок и впервые продемонстрирована их высокая эффективность для многих видов растений.

Эффективность использования методов биотехнологии в стратегии мероприятий сохранения биологического разнообразия связана с сокращением сроков получения необходимого количества растений за счет высокого коэффициента размножения в культуре in vitro, с сокращением используемых площадей под коллекциями, а также с возможностью более ранней комплексной оценки новых форм по хозяйственно-полезным признакам за счет ускорения роста и развития регенерантов в условиях открытого грунта.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Сохранение биоразнообразия редких, исчезающих видов представителей родов Adonis, Brachanthemum, Dendranthema, Fritillaria, Rhododendron, а также уникальных форм и сортов растений представителей родов Actinidia, Allium, Begonia, Camellia, Cerasus, Clematis, Daucus, Iris, Fragaria, Grossularia, Hemerocallis, Malus, Primula, Stevia, характеризующихся низкой способностью к воспроизводству в естественных условиях произрастания и/или при традиционных способах их размножения, достигается путем использования биотехнологических методов.

2. Повышение эффективности регенерационных процессов в культуре изолированных клеток, тканей и органов достигается за счет подбора

(минеральный состав) и модификации (регуляторы роста) питательной среды для культивирования в зависимости от вида, формы или сорта растения. 3. Эффективность методов биотехнологии в системе сохранения биоразнообразия и воспроизводства растительных ресурсов обеспечивается двухэтапным приемом адаптации регенерантов к условиям выращивания ex vitro на гидропонных установках «Минивит».

Практическая значимость. Для конкретных видов растений разработаны и усовершенствованы следующие методы регенерации in vitro:

- для Iris hybrida - метод эмбриокулыуры;

- для сортов и форм Camellia sinensis, гибридов рода Malus - методы регенерации растений в культуре изолированных тканей семядолей;

- для Actinidia chinensis, гибрида №1 Primula х polyantha, Brachanthemum baranovii, Dendranthema sinuatum, Daucus sativus - методы регенерации в культуре каллуса от листьев, Allium сера - в культуре каллуса от завязей, а для трех видов рода Iris (I. ensata, I. sibirica, I. hybrida) - в культуре каллуса от лепестков венчика цветка;

- для Begonia rex - методы прямой регенерации в культуре изолированных эксплантов листьев и эксплантов чешуй луковиц для двух видов рода Fritillaria (F. meleagris и F. verticil lata);

- для Actinidia chinensis, двух форм рода Grossularia, гибридов рода Cerasus, гибридов и сортов рода Fragaria, двух видов рода Prímula (Р. polyantha и Р. prugonicenses), Rhododendron ledebourii, представителя рода Clematis (сорт Мефистофель), представителя рода Hemerocallis (сорт Алан), Brachanthemum baranovii, Dendranthema sinuatum, Adonis vemalis и Stevia rebaudiana - методы регенерации путем активации пролиферации существующих меристем.

На основе указанных моделей регенерации разработаны эффективные технологии микроразмножения для названных видов, форм и сортов растений, усовершенствована технология адаптации растений-регенерантов к условиям выращивания ex vitro. Результаты проведенных исследований являются основой для создания коллекций in vitro, сохранения биоразнообразия растений и их ускоренного воспроизводства.

Разработан способ регенерации in vitro, обеспечивающий ускоренное получение большого числа растений Camellia sinensis (A.c. № 1621825 от 23.01. 1991). С применением технологии микроразмножения получен сорт Р. polyantha - Весеня (A.c. № 35188 от 6.02.2001).

Результаты законченных исследований положены в основу методических указаний «Методы получения и ранняя диагностика гибридного потомства Allium сера L.» (2001) и «Регенерация, размножение in vitro и интродукция эндемиков флоры Алтая: Brachanthemum baranovii (Krasch. et Poljak) Krasch. и Dendranthema sinuatum (Ledeb.) Tzvel.» (2004), изложены в монографии «Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений» (2004).

В отделе биотехнологии растений ЮСБС АлтГУ создана живая коллекция различных видов растений, включающая представителей редких и исчезающих

видов, а также уникальных форм и ценных сортов хозяйственно-важных растений.

Культивируемые in vitro ткани некоторых видов растений активно используются в учебном процессе в качестве модельных систем для изучения физиологических процессов, протекающих в растительных клетках.

Апробация работы. Результаты исследований докладывались и обсуждались на ежегодных заседаниях ученого совета ВНПОЧСК и ЧП (Грузия) (1983 - 1994), Южно-сибирского ботанического сада АлтГУ (1995 - 2004 гг.) и НИИ им. М.А.Лисавенко (1997 - 2004 гг.), на Всесоюзной конференции молодых ученых и специалистов (Махарадзе-Анасеули, 1985), международных научных и научно-практических конференциях: «Биология культивируемых клеток и биотехнология» (Новосибирск, 1988), "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда" (Москва, 1997), «Современные проблемы научных исследований и развития садоводства, субтропического растениеводства и цветоводства» (Сочи, 1998), «Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в XXI веке» (Новосибирск, 1999), «Проблемы охраны растительного мира Сибири» (Новосибирск, 2001), «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001), «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), а также на региональной научно-практической конференции «Научно-экономические проблемы регионального садоводства» (Барнаул, 2002), на XI съезде Русского ботанического общества «Ботанические исследования в азиатской России» (Новосибирск - Барнаул, 2003) и на научной сессии СО РАСХН, посвященной 35-летию образования СО РАСХН «Сельскохозяйственная наука - агропромышленному комплексу Сибири» (Новосибирск, 2004).

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 37 печатных работах, в т.ч. в 2 методических рекомендациях, 2 авторских Свидетельствах и монографии.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 325 стр., состоит из введения, 6 глав, выводов, содержит 55 рисунков и 69 таблиц. Список литературы включает 583 наименования, в том числе 306 на иностранных языках.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

На основе литературных данных рассмотрены возможности использования биотехнологических методов для решения проблемы сохранения биоразнообразия растений. Критически проанализированы две группы методических приемов при сохранении генофонда, существующих в настоящее время: хранение без нарушения процессов роста растений и хранение при полной остановке роста, либо при его замедлении. Подчеркнуто, что эти

методы могут быть применимы только к таким видам растений, для которых разработаны надежные методы регенерации и микроразмножения in vitro.

В данной главе рассмотрены также основные факторы, влияющие на процессы морфогенеза и регенерации в культуре изолированных клеток, тканей и органов растений. Это первичный эксплант, компоненты питательной среды, в том числе, регуляторы роста и физические условия культивирования. Дана характеристика основных моделей регенерации растений в культуре изолированных тканей и способы микроразмножения, базирующиеся на них: регенерация растений в каллусных культурах, прямая регенерация растений из клеток ткани экспланта, активация развития пазушных меристем в культуре верхушек побегов. Каждая из этих моделей охарактеризована по степени надежности в отношении сохранения генетической стабильности размножаемых растений, универсальности для определенного круга растений, коэффициента размножения и воспроизводимости результатов. На примере большого числа видов растений охарактеризованы особенности каждой из четырех стадий микроразмножения растений (введение в культуру in vitro, собственно размножение, укоренение и адаптация регенерантов к условиям выращивания ex vitro). Проанализированы возможности повышения эффективности процесса микроразмножения путем оптимизации каждой стадии.

ГЛАВА 2 . МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для введения в культуру изолированных органов и тканей использовали различный первичный материал изучаемых растений, от которого изолировали соответствующие задачам исследования типы эксплантов (табл.1).

Таблица 1

Объекты исследования и типы культивируемых эксплантов

Объекты исследования Типы эксплантов

1 2

Редкие и исчезающие виды растений

Адонис (Adonis vernalis) почки*

Брахантемум (Brachanthemum baranovii) 1- семена; 2 - фрагменты листьев регенерантов; 3 - пазушуые почки регенерантов

Дендрантема (Dendranthema sinuatum) 1- семена; 2 - фрагменты листьев регенерантов; 3 - пазушные почки регенерантов; 4 — фрагменты побегов регенерантов

Рододендрон (Rhododendron ledebourií) 1 - меристемы*; 2 - пазушные почки регенерантов

1 2

Рябчик (Fritillaria): F.meleagris,. F. verticillata фрагменты чешуй луковиц*

Уникальные формы и сорта растений

Актинидия (Actinidia chinensis) 1- семена; 2 - фрагменты листьев регенератов; 3 - пазушные почки регенератов

Бегония (Begonia rex) фрагменты листьев*

Вишня (Cerasus): гибриды 1-86-260 и ВЧ №45 пазушные почки*

Земляника (Fragaria)', гибриды 5-9024, 5-90-38, 5-89-1, Фестивальная х ремонтантная; сорта Сельва и Московский деликатес меристемы*

Ирис (Iris): I.hybrida, I.sibirica, I. ensata 1 - изолированные зародыши; 2 - фрагменты лепестков

Клематис (Clematis): сорт Мефистофель пазушные почки*

Крыжовник (Grossularia): две бесшипые формы 1- меристемы*; 2- пазушные почки

Лилейник (Hemerocallis)'. сорт Алан почки*

Лук (Allium сера): сорт Ермак, ЦМС-линия 1-семяпочки; 2- завязь; 3- цветоложе*

MopmoBb(Daucus sativus): сорт Parmex фрагменты листьев*

Примула (Primula):P. pruhonicensis, Primula х polyantha (гибриды №1, №7, №14) 1 - меристемы*; 2 - фрагменты листьев регенерантов; 3 - пазушные почки регенератов

Стевия (Stevia rebaudiana) пазушные почки*

Чай (Camellia sinensis): сорта Грузинский №2, №3, Колхида, крупнолистная китайская форма 1- фрагменты семядолей семян от свободного опыления; 2- фрагменты листьев; 3- фрагменты побегов

Яблоня (Malus): гибриды Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам 1 - фрагменты семядолей гибридных семян; 2 - пазушные почки регенератов

Примечание. * - экспланты от взрослых растений; остальные - экспланты, являющиеся ювенильным и реювенилизированным растительным материалом.

В качестве основных питательных сред применены минеральные составы по прописям Мурасиге и Скуга (МС), Гамборга и Эвелега (В5) Андерсона (А), Стоуна и Смита (СС), Данстена и Шорта (ВОБ), Хильдебрандта, Райкера и Даггера (ХРД).

В работе использованы общепринятые приемы работы с культивируемыми изолированными тканями растений (Калинин и др., 1980), которые в процессе многолетней работы постоянно совершенствовались и модифицировались для конкретных видов растений.

Для индукции каллусогенеза экспланты культивировали в условиях темноты (в термостате) при 25±1°С. В экспериментах по индукции процессов регенерации в каллусах, культуры переносили в условия фотопериода: 16/8 часов свет/темнота. При культивировании семядолей применяли чередование условий фотопериода и темноты (на 0-пассаже). Все экспланты и пересадочные культуры, в которых индуцировались процессы роста за счет активации развития меристем, культивировали в условиях фотопериода.

Учет результатов экспериментов проводили через 15—30 суток, для каждого опыта ставили не менее 10 повторностей.

В экспериментах, связанных с изучением особенностей индукции, роста и развития каллуса, учитывали темпы его роста по 5-бальной системе ("-" -рост отсутствует, "+" - рост слабый, "++" - рост средний, "-ьи-" - рост хороший, "++++" - рост очень хороший). Описывали морфологические особенности полученного каллуса (цвет, консистенцию). Определяли увеличение веса каллуса (сырого и сухого), а также вычисляли относительный его прирост.

В экспериментах по изучению регенерации и органогенеза учитывали следующие показатели: интенсивность регенерации, регенерационный потенциал, частоту регенерации. У регенерантов измеряли длину побега, число и длину корней. Описывали их морфологические особенности, применяли фотосъемку.

Изучение белков семядолей семян и соматических эмбриоидов чайного растения проводили методом денатурирующего электрофореза (вертикальный электрофорез) по Лаемли (ЬаетН, 1970). Анализ белковых спектров осуществлен по методике, разработанной в ВИР (Тарлаковская и др., 1990). Регистрировали белковые спектры при помощи равномерной шкалы, а также денситометра.

При обработке полученных результатов использованы стандартные методы статистического анализа с использованием критериев Стьюдента и Фишера. В таблицах показаны средние арифметические величины и доверительный интервал или средние арифметические и наименьшая существенная разница. Достоверность оцениваемых показателей принималась на уровне значимости Р<0.05 (Лакин, 1990).

ГЛАВА 3. КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ

В данной главе представлены результаты исследований по изучению закономерностей морфогенетических процессов в культуре изолированных тканей ряда редких и исчезающих видов растений:

- редкого и исчезающего вида Сибири Adonis vernalis L. (Соболевская, 1984), занесенного в Красную книгу СССР (1975) и Красную книгу Алтайского края (1998);

- эндемиков Алтая Brachanthemum baranovii (Krasch. et Poljak) Krasch.w. Dendranthema sinuatwn (Ledeb.) Tzvel., занесенных в Красные книги (Красная книга РСФСР, 1988; Красная книга республики Алтай, 1996) и имеющих статус уязвимых видов, которым в ближайшем будущем грозит перемещение в категорию находящихся под угрозой исчезновения;

- редких и исчезающих видов Fritillaria meleagris L. и Fritillaria verticillata Will., внесенных в региональную Красную книгу для местной флоры (1980);

- эндемика Алтая и Саян Rhododendron ledebourii Pojark., занесенного в Красную книгу Алтайского края (1998).

Для A. vernalis, В. baranovii, D. sinuatum и Rh. ledebourii разработаны методы регенерации в культуре пазушных почек, а также проведены исследования по оптимизации процесса микроразмножения на стадии собственно размножения. В ходе поставленных экспериментов было установлено, что коэффициент размножения зависел как от генотипа, так и от концентрации используемого цитокинина. Регенерацию побегов в культуре пазушных почек A. vernalis и В. baranovii можно было индуцировать вводя в состав питательной среды один из трех цитокининов (БАЛ, Кн или ИЛА), тогда как для D. sinuatum использование ИЛА (1-20 мкМ) было неэффективно совсем. Напротив, у пазушных почек Rh. ledebourii только ИПА стимулировал регенерационные процессы, а в тех вариантах, где в качестве цитокининов применяли БАЛ или Кн почки не развивались, к концу пассажа все они погибали (табл.2).

Изучено действие различных ауксинов для стимуляции корнеобразования у побегов-регенерантов и определены их оптимальные концентрации для каждого вида. Это позволило получить растения-регенеранты с хорошо развитой корневой системой. В результате многочисленных экспериментов установлено, что лучшим индуктором ризогенеза являлась ИМК. Использование относительно невысоких концентраций в составе питательной среды этого ауксина не приводило к образованию каллуса на базальной части побегов, в противоположность использованию НУК, даже при относительно невысоких ее концентрациях (0.5 - 1мкМ). Определен диапазон оптимальных концентраций ИМК для каждого вида, при котором происходит 100% укоренение побегов: В. baranovii -1-5 мкМ, D sinuatum - 2 - 5 мкМ (табл. 3), Rh. ledebourii- 10 мкМ. Исключением явился A. vernalis, для которого не удалось стимулировать ризогенез.

Таблица 2

Концентрации цитокииинов, максимально индуцирующие регенерацию побегов в культуре пазушных почек редких и исчезающих видов растений

Максимальный

Вид Цитокинин мкМ коэффициент размножения

БАП 5 5.5

АсЬтй уегпаШ, п=10 Кн 10 4.2

ИПА 10 3.8

НСР05 0.8

ВгасИаМИетит Ьагстомп, п=12 БАП Кн ИПА 10 5-20 10 8.5 7.6-7.2 6.0

НСР05 1-2

ОепйгаМНета БАП 0.5-10 8.6-9.4

втиаНап, п=10 Кн 10 7.5

НСР05 0.9

Шюс1ос1еп<Лгоп 1ес1еЬоиги, п=10 ИПА 10-20 11.5-11.9

НСР05 0.7

Таблица 3

Характеристики регенерантов редких, исчезающих видов растений на средах для укоренения, п=10

ИМК, Частота Число Длина Высота

Вид мкМ ризогенеза, корней, корней, побега,

% шт./экспл. мм мм

В. Ьагапти 0 100 1 60±20 15.6±0.8

1 100 6.8±0.8 19±4 21.4±5

5 100 8.0±0.5 4.8±0.9 17.1±3

10 0 0 0 15.8±1

О. БтиаТит 0 100 1.3±0.4 111.6±2.5 11.3±1.5

0.5 100 1.4±0.3 83.5±3.5 14.6±2.2

1 100 2.01:0.6 68.5±3.8 17.3±2.5

2 100 3.5±0.6 32.0±1.7 18.7±2.3

5 100 4.6±0.5 11.9±1 24.7±3.2

10 70 2.5±0.3 6.5±0.5 12.0±1.5

Индуцированы каллусные культуры от листьев (В. Ьагапоуп и £>. зтиаЫт) и узлов побегов (£>. втиаЫт). Первичный каллус В.Ьагаптп, в

отличие от такового О. втиаГит, обладал высоким морфогенетическим потенциалом. На процессы формирования и регенерационную способность первичного каллуса оказывало влияние местоположение листа на побеге. Экспланты, возможно, различались по содержанию эндогенных ауксина и цитокинина, клеточной дифференциацией и поэтому по-разному реагировали на экзогенные регуляторы роста (табл.4).

Таблица 4

Влияние регуляторов роста на частоту регенерации почек в культуре каллуса листьев ВгасНапМетит ЬагапоуЦ, п=10

Среда инициации каллуса Геммогенез, %

Ауксин:

цитокинин мкМ 1 2 3

2 :0.5 0/0/0 20/100/40

5:0.5 80/70/50 50/30/60 40/30/0

НУК:БАП 2:5 70/70/70 80/40/100 10/0/10

5:5 60/70/80 60/70/50 80/80/50

20 : 5 10/10/0 30/20/10 40/20/10

2:0.5 10/10/10 0/0/0 30/80/60

5 :0.5 60/70/20 30/20/10 50/40/20

ИМК:БАП 2:5 70/50/50 70/40/80 20/30/30

5:5 50/50/80 60/70/50 80/80/50

20:5 10/10/0 30/20/20 30/20/20

Примечание. Каллус: 1 - верхних, 2 - средних и 3 - нижних листьев проростка; регенерация на среде с : *- 10 мкМ БАП, ** - 10 мкМ Кн, *** -10 мкМ ИПА.

При длительном культивировании с увеличением числа пассажей происходило снижение регенерационной способности каллуса: уменьшилась как частота регенерации, так и количество регенерантов на одном экспланте (табл.5).

Таблица 5

Регенерационная способность длительно пассируемого каллуса листьев ВгасИапЛетит Ьагапот, п=10

НУК:БАП, мкМ Пассаж

I П III IV V VI

2:0.5 10*/12** 10/5 0/0 0/0 0/0 о/о

5 :0.5 80/14±2 80/10±1 60/5±2 40/1 о/о о/о

5:5 60/15±2 50/12±2 50/3±1 10/1 10/1 о/о

Примечание. * - частота регенерации побегов (%); **- интенсивность регенерации побегов (шт./экспл.).

Регенерация адвентивных луковиц у двух видов ЕпНПсача осуществлена по следующей схеме:

Фрагменты чешуй луковиц (0-пассаж: В5 + 2, 4-Д 10 мкМ+ БАП 0.5 мкМ) -» каллус—» регенерация луковиц 1-порядка (1-пассаж: В5 + БАП 5 мкМ + НУК 2 мкМ; В5 + БАП 5 мкМ; В5 + БАП 5 мкМ + 2,4-Д 2 мкМ) -> регенерация луковиц п-порядка (п-пассаж: В5 + БАП 5 мкМ + НУК 5 мкМ)) —> рост и развитие луковиц (В5) —* укоренение луковиц (В5 + НУК 5 мкМ).

Все луковицы двух видов РгШПагш (Г. тека&и и К уегНсИШа) успешно укоренялись (100% частота укоренения).

ГЛАВА 4. КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ УНИКАЛЬНЫХ ФОРМ И СОРТОВ РАСТЕНИЙ

Ускоренное размножение АсНтсНа сМпепягя возможно осуществить как путем индукции развития адвентивных побегов (20 - 50 шт.) в культуре пазушных почек, так и путем непрямой регенерации в культуре изолированных листьев (рис.1).

Лист

Каллусогенез: В5 + 4 мкМ БАП + 20 мкМ ИМК

ж ;

Регенерация побегов: 5 + 20 мкМ БАП + 0.5 мкМ НУК

г —

Рост и развитие побегов: В5 + 0.25 мкМ БАП + 0.4 мкМ НУК +3.5-7 мкМ ГК

Укоренение побегов: Уг В5 + 4 мкМ ИМК

Рис.1. Схема культивирования Actinidia chinensis in vitro

Каллус, полученный от листьев, характеризовался высокой способностью к регенерации почек только в том случае, если он был индуцирован на среде, содержащей цитокинин БАП и ауксин ИМК. При переносе каллуса на среду с

Почка

Регенерация побегов: В5 +2.5-4.5 мкМ БАП + 0.2-0.4 мкМ НУК

В:

20 мкМ БАЛ и 0.5 мкМ НУК частота регенерации составила 100%, а интенсивность - от 5 до нескольких десятков побегов.

Опыление in vitro Allium сера может решить проблему дефицита исходного материала - ЦМС-форм при проведении гибридизации. Использование усовершенствованного приема опыления in vitro позволяет одновременно провести не менее 5 комбинаций скрещивания при использовании одного соцветия ЦМС-формы. Разработка метода микроразмножения ЦМС-форм является другим путем решения дефицита исходного материала. Для этого в культуру in vitro были введены цветоложа, завязи и неоплодотворенные семяпочки. Получены каллусы. Каллус от завязей обладал наибольшей регенерационной способностью. При продолжительном культивировании происходило снижение его регенерационной способности. На среде для регенерации, содержащей БАП и АТХП, регенерационная способность каллуса затухала несколько раньше, чем на среде с БАП и 2,4-Д (табл. 6).

Таблица 6

Влияние длительности культивирования на регенерацию почек в культуре плотного белого каллуса с зелеными очагами от завязей Allium сера, п=24

Пассаж Варианты сред Частота регенерации, % Интенсивность регенерации, шт./экспл.

1 БАП 8 мкМ + 8 1.25±0.4

2 АТХП 3 мкМ 60 3.7±0.7

3 0 0

4 0 0

1 БАП 8 мкМ + 30 5.0±0.1

2 2.4-Д 3 мкМ 92 6.7±0.8

3 88 5.4±0.4

4 25 3.0±0.9

Высокой регенерационной способностью характеризовались листья Begonia rex. Их регенерационный потенциал варьировал в зависимости от возраста и размеров листа. Достоверно установлено влияние экзогенных регуляторов роста на регенерационные процессы в культуре изолированных листьев этого вида растения (табл. 7).

На питательной среде, дополненной регуляторами роста, все типы листовых эксплантов В. rex проявили способность к регенерации адвентивных побегов. Основная регенерационная зона включала базальную часть листовой пластинки и черешок. Самая низкая способность к регенерации была характерна для средней части и кончика листовой пластинки. Для получения наиболее высокого коэффициента размножения целесообразно каждый эксплант культивировать на соответствующей питательной среде.

Таблица 7

Влияние регуляторов роста на интенсивность вегетативного геммогенеза (шт./экспл.) в культуре изолированных листьев Begonia rex, n - 15

Тип экспланта Варианты питательных сред НСР05

1 2 3 4 5 6 7 8

1. Листовая пластинка

(12 х 15 мм):

- базальная часть 6 13 7 30 7 6 6 0 2

- средняя часть 0 3 1 8 3 1 0 0 2

- кончик 1 9 3 3 2 1 1 0 2

2. Листовая пластинка

(7 х 10 мм):

- базальная часть 4 18 6 16 6 4 2 0 3

- средняя часть 0 2 2 6 3 0 0 3 2

- кончик 0 7 2 2 1 1 0 0 2

3. Листовая пластинка

(5x5 мм) 3 37 5 17 5 4 2 0 2

4. Черешок (10 мм) 3 19 4 11 6 81 3 0 2

НСР05 1 3 2 4 1 1 1

Примечание. Варианты питательных сред: 1 - МС; 2 - МС + БАП 2 мкМ + НУК 0.5 мкМ; 3 - МС + БАП 20мкМ + НУК 1 мкМ; 4 - МС + БАП 2 мкМ; 5 -МС + Ас 20 мг/л; 6 - МС + Ас 40 мг/л; 7 - МС + Ас 80 мг/л; 8 - МС + Кн 2 мкМ.

Изучен морфогенетический потенциал различных типов изолированных тканей Camellia sinensis. Культура изолированных тканей семядолей обладала наиболее высокой регенерационной способностью в сравнении с другими культивируемыми тканями. Причем в культуре тканей семядолей на протяжении более двух лет интенсивность регенерации оставалась на высоком уровне (табл.8).

Для получения длительно пассируемой культуры тканей с высоким регенерационным потенциалом использовано чередование физических условий культивирования и питательных сред: один пассаж осуществляли в условиях темноты на среде с 2 мкМ БАП и 10 мкМ НУК и три субкультуры - в условиях фотопериода (16/8 час свет/темнота) с уменьшенной вдвое концентрацией БАП и НУК. Это позволило увеличить интенсивность регенерационных процессов по сравнению с культивированием только в условиях фотопериода.

Прием чередования физических условий культивирования на 0-пассаже был применен и для изолированных семядолей гибридных семян представителей рода Malus. Изучено влияние регуляторов роста и генотипа на интенсивность регенерации и тип морфогенеза. В результате этих исследований нами выявлены различия в регенерационной способности пазушных почек у изучаемых гибридов (табл.9). Регенерационная способность каллусной

культуры листьев, изолированных от регенерантов гибридов Malus, в целом, характеризуется как очень низкая.

Таблица 8

In vitro морфогенез в длительно пассируемой культуре тканей Camellia sinensis

Форма Продолжитель- Частота встречаемости*

Тип морфогенеза регенерации ность регенера- Грузинский Крупнолист-

ции (пассажи) №2 ная китайс-

кая форма

Органогенез, СЭ-1 1-26 1 1 ++

связанный с СЭ-2 3-26 ++ +++

образованием побеги 4-12 + +

каллуса корни 3-26 + ++

Прямой СЭ-1 2-3 ++ ++

органогенез СЭ-2 2-3 + ++

корни 2-3 + +

Регенерация из

новообразован-

ных структур:

СЭ-1 СЭ-1, СЭ-2 5-26 +++ +++

СЭ-2 СЭ-2 8-26 ++ +++

корней СЭ-1, СЭ-2,

побеги 24-25 - + 1

Примечание. * + низкая (менее 10%); ++ высокая (около 50%); +++ массовая (более 90%); - не встречалась; СЭ-1- соматические эмбриоиды с сформировавшимися семядолями; СЭ-2 - соматические эмбриоиды без сформировавшихся семядолей.

Таблица 9

Влияние регуляторов роста на морфогенез и регенерационную способность культивируемых in vitro тканей семядолей гибридных семян Malus

Варианты сред Гибрид Экспл ан- Каллус, Ризогенез, Геммогенез,

ты, шт. ШТ.Л/о шт./% шт./%

1 2 3 4 5 6

БАП 1 мкМ А 20 12/60 2/10 4/20

В 12 8/67 0/0 0/0

С 15 10/67 0/0 0/0

БАП 2 мкМ + А 20 20/100 18/90 6/30

НУК 5 мкМ В 12 12/100 12/100 8/67

С 15 15/100 8/53 10/67 1

Продолжение таблицы 9

1 2 3 4 5 6

БАП 10 мкМ+ А 20 20/100 1/5 12/60

НУК 2 мкМ В 12 8/67 0/0 4/33

С 15 12/80 0/0 10/67

БАП 5 мкМ + А 20 18/90 1/5 8/40

НУК 0.5 мкМ + В 12 12/100 0/0 8/67

ГК 5 мкМ С 15 15/100 о/о 15/100

Примечание. А - Жебровское х Заветное; В - Подарок садоводам х Заветное; С - Заветное х Подарок садоводам.

Наши эксперименты продемонстрировали большую эффективность БАП в отношении снятия апикального доминирования по сравнению с другими использованными цитокининами в культуре пазушных почек уникальных форм растений родов Cerasus и Grossularia (табл.10).

Изучая влияние регуляторов роста с цитокининовой активностью (БАП, Кн, ИПА) и предшественника цитокининов (Ас) на регенерационную способность пазушных почек Clematis (сорт Мефистофель), мы установили, что только БАП индуцировал адвентивный геммогенез. Однако коэффициент размножения на средах с БАП был невысок. Кроме того, уже к концу первой недели культивирования отмечалась интоксикация питательной среды продуктами вторичного метаболизма, питательная среда становилась коричневой. Использование аскорбиновой кислоты в качестве антиоксиданта

Таблица 10

Влияние цитокининов на коэффициент размножения уникальных форм Сегаэш и СгоьяШапа в культуре пазушных почек

Форма Цитокинин мкМ Коэффициент

размножения

1 2 3 4

Cerasus: гибрид 1-86-260 / БАП 0.5 1.5±0.5/1

гибрид ВЧ №45, п = 7 -15. 1 2.4±0.4 /1.8±0.4

2 2.6±0.5 / 2.4±0.6

4 3.4±0.8/5.0±0.5

8 2.7±0.7/2.8±0.4

10 5.0±0.9/4.0±0.8

Кн 0.5 1/1

1 1/1

2 1/1

5 1/1

Продолжение таблицы 10

1 2 3 4

Grossularia: форма с зеленой БАП 1 2.0±0.6/4.1±1.4

окраской ягод / форма с 2 2.5±0.5/4.7±1.1

темно-коричневой окраской 5 6.3±0.4/7.6±1.7

ягод, п = 12. 10 1.3±0.3/1.8±0.4

20 0.8±0.3/1.3±0.3

Кн 1 0 / 0.4±0.3

2 0 / 0.5±0.2

5 0/0.б±0.3

10 0.5±0.3/2.3±0.6

20 1.0±0.5 /1.8±0.5

ИПА 5 0/0

10 0/0

20 0 / 0.6±0.4

было неэффективно, тогда как введение в состав питательной среды 100 - 200 мг/л L-глутамина совместно с 1 мкМ БАП и 100 мг/л Ас оказалось достаточным для предотвращения процессов интоксикации. Это положительно отразилось на регенерациониых процессах и, следовательно, на коэффициенте

размножения, который на среде с L-глутамином возрос до 9 - 11 побегов на один эксплант(табл.11).

Таблица 11

Влияние физиологически-активных веществ на адвентивный геммогенез в культуре пазушных почек Clematis (сорт Мефистофель), п = 12

Физиологически-активные Число Длина Каллус,

вещества побегов, шт. побегов, см

МС (без регуляторов роста) 0 0 -

БАП 0.5 мкМ 2 3.5±0.6 -

БАП 1 мкМ 2-3 4.0±0.5 -

БАП2 мкМ 4-5 2.5±0.7 +

БАП 5 мкМ 2-3 1.5±0.5 +

БАП 10 мкМ 2 0.5±0.2 +

БАП 1 мкМ + Ас 50 мг/л 3-4 4.1 ±0.6 +

БАП 1 мкМ + Ас 100 мг/л 6-8 3.2±0.4 +

БАП 1 мкМ + Ас 200 мг/л 4-5 1.8±0.5 +

БАП 1 мкМ + Ас 100 мг/л +

L-глутамин 100 мг/л 9-11 2.5±0.8 +

Имеется потенциальная возможность хранения моркови сорта Раппех, характеризующегося округлым корнеплодом, который селекционеры

используют для получения гибридов и новых форм с укороченным корнеплодом, в коллекции каллусной ткани, находящейся в состоянии активного роста. Каллус моркови, инициированный от листьев на среде МС с 2 мкМ 2,4-Д и 2 мкМ Кн, и в последующем субкультивированный на среде с 0.4 мкМ АТХП и 2 мкМ Кн имел высокий ростовой индекс (503.5%) и характеризовался высокой регенерационной способностью, которая в процессе длительного культивирования сохранялась (рис.2).

7 9 11 13 15 17

Пассаж

Рис.2. Интенсивность регенерации соматических эмбриоидов в длительно пассируемой каллусной ткани листьев Daucus sativus (сорт Parmex)

Полученные соматические эмбриоиды на семядольной стадии развития вначале пересаживали на среду по прописи СС и культивировали их в течение 7-10 суток, а затем пересаживали для последующего доращивания на среду МС. Такой прием позволил получить нормальные растения-регенеранты моркови и полностью остановил процессы вторичного соматического эмбриоидогенеза, препятствующие получению нормальных регенератов.

У гибридов рода Fragaria интенсивно и без витрификации регенерационные процессы происходили при использовании в среде 2-5 мкМ БАП, а у ремонтантных сортов - при использовании БАЛ в более высоких концентрациях (10 и 20 мкМ). Отмечено влияние генотипа на интенсивность регенерации почек (табл.12).

Изолированные зародыши Iris hybrida можно размножить in vitro как через промежуточный этап образования каллуса, так и прямым путем, индуцируя у них процессы адвентивного побегообразования. На частоту эмбриоидогенеза в каллусной культуре и последующее прорастание эмбриоидов оказало влияние наличие в питательной среде для инициации каллуса определенной

Таблица 12

Концентрации БАЛ, максимально индуцирующие регенерацию почек у гибридов и сортов Fragaria

Генотип БАП, мкМ Максимальный коэффициент размножения

Гибрид 5-90-24 2 12.3±0.8

Гибрид 5-90-38 5 12.0±1.5

Гибрид 5-89-1 2 10.6±1.1

Фестивальная X ремонтантная 2 7.5±1.5

Сельва 20 17.5±0.9

Московский деликатес 20 15.3±1.0

концентрации БАП (2 мкМ) и 2,4-Д (2 мкМ). Для индукции адвентивного побегообразования у зародышей в составе среды необходимо было совместное присутствие БАП (5 мкМ) с небольшими концентрациями НУК и ИМК (0.1 мкМ).

Удалось регенерировать растения трех видов рода Iris в культуре изолированных лепестков цветков. Отмечена видоспецифичность в потребностях к основному составу питательной среды и регуляторам роста. Лепестки I. sibirica и I. hybrida культивировали на среде МС с добавлением 5 мкМ БАП и 10-30 мкМ 2,4-Д. Полученный каллус переносили вначале на среду с БАП 5 мкМ и 2,4-Д 0.2 мкМ, где происходил флоральный геммогенез, а затем на среду с 20 мкМ БАП (вегетативный геммогенез). Лепестки I. ensata необходимо было культивировать на среде В5 с 10 мкМ БАП и 1 мкМ НУК, на которой прямым путем регенерировали почки.

В культуре пазушных почек Hemerocallis (сорт Алан) для получения высоких коэффициентов размножения требовались относительно высокие концентрации БАП, однако регенерационные процессы при этом сопровождались развитием каллуса и витрификацией некоторых побегов. Поэтому питательные среды с высокими концентрациями БАП (15-20 мкМ) применяли для увеличения коэффициента размножения, а с низкими (1-2 мкМ БАП) - для доращивания побегов. Интенсифицировать и нормализовать регенерационные процессы оказалось возможным путем введения в состав питательной среды трех групп регуляторов роста: 10 мкМ БАП, 5 мкМ НУК и 5 мкМГК.

Для представителей рода Primula также установлены эмпирическим путем концентрации трех групп регуляторов роста, необходимых для индуцирования нормального морфогенеза при культивировании почек (10 мкМ БАП, 0.5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК). К концу пассажа коэффициент размножения на этой питательной среде составил для P. pruhonicensis - 30 - 32, для гибридов Р. polyantha: №1 - 18-20, № 7 - 14-17, №14 - 12-14 розеток. Каллусы, инициированные от листьев гибрида №1 P. polyantha, характеризовались

медленными темпами роста, на питательных средах определенного состава около половины из них регенерировали почки (табл. 13) от 4 до 30 шт.

Таблица 13

Влияние регуляторов роста на морфогенез листового каллуса эксплаитов Primula хpolyantha (гибрид №1) in vitro

Варианты сред Число каллусов, шт. % морфогенных каллусов

всего с меристематичес-кими очагами

1.МС-контроль 15 3 20

2.БАП 2 мкМ 24 15 29.2

З.БАП 2мкМ+ГК 10 мкМ 12 3 25

4.БАП 20 мкМ 21 10 47.6

5 .БАП 20мкМ+ГК 10 мкМ

+НУК 0.5 мкМ 11 5 45.5

Считается, что среди основных факторов, оказывающих влияние на процессы ризогенеза in vitro, является использование ауксинов. Изучены концентрации различных ауксинов на ризогенез побегов всех изучаемых форм и сортов растений. Для большинства из них лучшим индуктором ризогенеза оказалась ИМК. Установлены ее оптимальные концентрации в питательной среде для конкретных растений. У некоторых растений только НУК стимулировала укоренение побегов: три вида рода Iris, В, rex и А. сера. Все розетки изучаемых видов Primula укоренялись при использовании в среде 1 мкМ любого из трех акусинов: ИМК, НУК или ИПК.

Для Stevia rebaudiana использован прием размножения, основанный на черенковании побегов in vitro. Фрагменты побега с парой пазушных почек помещали на питательную среду для стимуляции ризогенеза, а затем вновь развившиеся побеги делили на микрочеренки для рекультивирования. Лучшим стимулятором ризогенеза оказалась НУК (5мкМ). Показано стимулирующее влияние регуляторов роста 2,4-Д и АТХП на индукцию корнеобразования побегов у стевии. Этот эффект наблюдался только при использовании их в очень низкой концентрации (0.005 - 0.01 мкМ).

При получении растений-регенерантов в тех случаях, когда регенерация растений шла через соматический эмбриоидогенез, для проращивания эмбриоидов требовались различные условия. Так, соматические эмбриоиды D. sativus достаточно было перенести на безгормональные среды (сначала СС, а затем - МС), С. sinensis - на среду 1Л В5, содержащую 1 мкМ БАП и 5 мкМ ИМК, a I. hybrida - на среду МС, в составе которой присутствовали один из цитокининов (20 мкМ БАП или Кн) и ауксин 2,4-Д в невысоких концентрациях (0.1 - 0.5 мкМ).

ГЛАВА 5. АДАПТАЦИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ К УСЛОВИЯМ ВЫРАЩИВАНИЯ EX VITRO

Этап адаптации растений-регенерантов к выращиванию ex vitro является завершающим этапом микроразмножения. Существует необходимость совершенствования приемов адаптации регенерантов к условиям выращивания ex vitro, применение которых было бы одинаково успешно как для единичных ценных экземпляров растений, так и при крупномасштабном тиражировании.

Один из подходов к решению этой проблемы может стать использование гидропонных установок «МИНИВИТ», выпускаемых ООО «ДОКАДЖИН СИСТЕМС» (г. Зеленоград, Московская область), разработанных для выращивания зеленых овощных культур. В этих установках вместо субстрата используется жидкая среда, а семена или, как в нашем случае, растения-регенеранты фиксируются в кассетах с вкладышами.

Мы не использовали составы широко применяемых стандартных питательных смесей для гидропоники. Это объясняется тем, что в них не все элементы питания присутствуют в виде свободных ионов, некоторые из них образуют комплексы и осадки. Для того чтобы избежать указанные проблемы, во время адаптации к новым условиям выращивания (ex vitro), гидропонную установку заполняли раствором минеральных солей по прописи МС. Был использован полный, Уг и Va состав по прописи МС, а также изучено влияние модифицированных по содержанию КН2Р04 и NH4NO3 составов 1Л МС на рост и развитие регенератов в период их адаптации. Первые эксперименты по изучению влияния минеральной основы питательного раствора на рост и развитие растений-регенерантов были проведены с представителем рода Fragaria (сорт Сельва).

В одной гидропонной установке был применен раствор, включающий У* состава МС и более высокие концентрации фосфора (340, 510 или 680 мг/л КН2Р04). На этих растворах регенераты росли первые десять суток адаптации. В последующие 10 суток кассеты с регенератами переставляли на вторую установку, в которой концентрация фосфора была редуцирована и соответствовала У* МС, а концентрация азота была увеличена за счет добавления 1650 мг/л NH4NO3. Кроме того, был проверен состав раствора Ул МС, на котором регенераты росли на второй стадии адаптации, то есть в последующие 11-20-е сутки.

Лучшие результаты получены при использовании растворов У* МС+510 мг/л КН2Р04 на протяжении первых 10 суток и ХА МС + 1650 мг/л NH4NO3 в последующие 10 суток периода адаптации. Последовательное использование именно этих растворов позволило получить регенераты, у которых к концу периода адаптации вдвое увеличилось число корней, втрое - их длина, более чем в четыре раза возросла длина черешков листьев, а листовые пластинки у этих регенератов имели наибольшую площадь.

Помимо подбора минерального состава питательного раствора, необходимо было в течение первых 7 суток периода адаптации создать повышенную влажность. Это достигалось путем укрытия регенерантов легкой

полиэтиленовой пленкой, затем укрытие снимали, растения перемещали на вторую установку, где они продолжали расти в условиях 40-50% влажности

Пригодность двустадийного подхода к адаптации и использование для этого соответствующего минерального состава раствора была апробирована и для регенерантов других видов растений. Они успешно прошли адаптацию описанным выше способом, о чем свидетельствует ряд показателей, характеризующих их рост и развитие, в конце этого периода (табл.14).

Таблица 14

Сравнительная характеристика некоторых показателей (до/после адаптации) роста н развития растений-регенерантов, адаптированных на гидропонной установке «Минивит»

Растения- Число Средняя Высота Число

регенеранты корней, длина корня, побега, листьев,

шт. мм мм шт.

В, baranovii, п=20 5.8±2/5.8±2 19±4/75±5 23±2/42±3 9±2/15±3

В. rex, п =20 3±1/4±1 25±6/92±3 55±2/150±19 3.5±1/4±0.5

Ceras us, п=20 4±0.5/4±0.5 56±5/120±9 3.5±1/160±18 5±1/10±2

Clematis, n=10 3±1/3±1 60±3/150±15 22±2/52±6 4±1/9±2

D. sinuatum, n=20 6.5±2/6.5±2 25±3/85±11 32±3/91±5 9±2/18±3

Fragaria, n=10 6.2±2/12.6±3 37±9/118±12 23±3/105±18 5.8±1/7±2

Grossularia, n=20 3.6±l/29±5 32.5±8/91±16 16.4±2/91±19 4±1/12±2

Hemerocallis, n=15 5±2/12±3 40±5/110±22 35±3/180±16 5±1/5±1

Malus, n=10 5.1±1/5.1±1 12.5±2/120±12 25±4.5/120±15 8±2/15±2

После адаптации и доращивания растений на гидропонной установке растения-регенеранты высаживали в открытый грунт. Например, для растений рода Prímula было проверено три срока высадки. P. pruhonicensis была высажена в середине мая, а гибриды P. polyantha - в середине июня и конце июля. Лучшим сроком оказался самый ранний - середина мая, так как 97% растений-регенерантов прижились в условиях открытого грунта. Два других срока были менее благоприятен. Другие виды растений также лучше всего приживались (98 - 100%) при высадке в открытый грунт в мае. Второй срок высадки, способствующий высокой приживаемости регенерантов - конец августа. В этот период хорошо приживались и перезимовывали растения-регенеранты родов Grossularia, Fragaria, Malus, а также видов В. baranovii и D. sinuatum.

В целом, хорошо развившаяся за период адаптации корневая система и надземная часть у всех изученных нами растений, обеспечила им высокую приживаемость в условиях открытого грунта, равную или приближающуюся к 100%.

Использование гидропонных установок «МИНИВИТ» на этапе адаптации растений-регенерантов к условиям выращивания ex vitro позволяет повысить

эффективность микроразмножения и отличается от существующих способов по следующим показателям:

- компактностью установки в сочетании с возможностью одновременного выращивания до 1 ООО растений-регенерантов на площади 0,35 м2;

- уменьшением трудоемкости процесса;

- близкой к 100% адаптацией растений-регенерантов;

- высокой воспроизводимостью полученных результатов.

ГЛАВА 6. ВКЛЮЧЕНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ В СИСТЕМУ СОХРАНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДСТВА РАСТИТЕЛЬНЫХ

РЕСУРСОВ

При разработке методов регенерации и использования их для сохранения биоразнообразия растений важно оценить однородность или вариабельность полученных регенерантов. Эти знания необходимы для целенаправленного использования хранящихся в коллекции in vitro растений либо в селекционных программах, либо для массового воспроизводства ценных генотипов

При создании коллекций растений in vitro мы опирались на результаты экспериментов, полученных при изучении морфогенетического потенциала и регенерационной способности культивируемых тканей растений. Это позволило использовать ту модель регенерации, которая наиболее эффективна при разработке методов сохранения генофонда для каждого вида растений.

Методы микроразмножения растений, базирующиеся на различных моделях регенерации в культуре in vitro, позволяют получать большое количество регенерантов среди которых могут сразу или с течением времени возникать сомаклональные варианты.

Изучают регенеранты с использованием разных методов. В тех случаях, когда происходит изменение фенотипа, выявить сомаклоны не представляет сложности. Иногда такие изменения видны на стадии культивирования in vitro. Однако в большинстве случаев они проявляются на более поздних этапах развития регенеранта, чаще всего - в условиях ex vitro.

Для ранней диагностки сомаклональной изменчивости соматических эмбриоидов С. sinensis использован метод белковых маркеров, который продемонстрировал большую вариабельность спектра белков у них. Также установлено, что вариабельность белкового спектра возрастала с увеличением продолжительности культивирования.

В целом можно сказать, что фенотипическая и генетическая стабильность регенерантов зависит как от модели регенерации, так и от вида растения. Регенеранты представителей С. sinensis, полученные путем соматического эмбриоидогенеза, характеризовались значительной вариабельностью сомаклонов, тогда как относительная стабильность была характерна для регенерантов D. sativus, полученных таким же путем. Сомаклоны В. rex, полученные путем прямой регенерации из клеток листа по фенотипу не отличались от исходных растений, тогда как среди регенерантов одной из

форм представителя рода Grossularia, полученных путем активации развития меристем, обнаружены единичные уклоняющиеся формы.

С использованием методов биотехнологии возможно сохранение биологического разнообразия редких, исчезаю идах видов и ценных форм растений путем создания коллекций in vitro. В открытом грунте растения-регенеранты значительно быстрее растут и развиваются по сравнению с растениями этих же видов, воспроизводство которых было осуществлено традиционными способами (из семян или черенкованием). Методы биотехнологии обеспечивают сохранение уникальных генотипов даже в том случае, если они представлены единичными экземплярами. Они позволяют размножать растения без вывода их из ювенильного состояния. Высокие коэффициенты размножения существенно увеличивают выход растений-регенерантов, которые в подавляющем большинстве сохраняют генотип исходного растения.

Для большинства видов, форм и сортов растений созданы коллекции in vitro, поддерживающиеся в состоянии активного роста путем периодического субкультивирования пазушных почек:

- для В. baranovii и D. sinuatum путем их периодического субкультивирования на питательной среде с 0.5 мкМ БАП. В таком виде В. baranovii депонируется с 1997 г., a D. sinuatum - с 1999 г. На протяжении всего периода хранения интенсивность регенерационных процессов остается на высоком уровне.

- питательная среда с 5 мкМ ИПА и 100 мг/л L-глутамина использована для хранения Rh. ledebourii, регенерационный потенциал сохранялся в течение 5 лет наблюдения на высоком уровне;

- на протяжении 5 лет изучена возможность хранения in vitro двух видов растений рода Fritillaria способом, основанном на периодической смене питательной среды, содержащей по 5 мкМ БАП и НУК. В течение этого периода интенсивность регенерационных процессов оставалась примерно на одном уровне: на поздних пассажах (10 - 12) у одного экспланта F. meleagris регенерировало 15-20 адвентивных луковиц, а у F. verticillata - 8 - 12 шт.;

- A. chinensis более четырех лет без снижения регенерационной способности хранилась на средах с 2 - 5 мкМ БАП и 0.2 - 0.4 мкМ НУК.

- более 5 лет поддерживается коллекция активно растущих побегов А. vernalis на питательной среде с 5 мкМ БАП;

- с 1986 г. в состоянии активного роста хранятся растения S. rebaudiana методом микрочеренкования на питательной среде с 5 мкМ НУК. На протяжении всего этого срока не отмечено снижения регенерационной способности культуры;

- более трех лет на питательных средах с 5 мкМ БАП хранились активно пролиферирующие культуры бесшипых форм Grossularia без снижения их регенерационной способности;

- в течение двух лет культивирования хранилась коллекция гибридов рода Malus на питательных средах с 2 мкМ БАП. Однако после 14-пассажей происходило снижение темпов роста. Поэтому в течение 2-х пассажей

микрочеренки помещали на среды с пониженной концентраций БАЛ (0.2 мкМ). Такой подход позволил нормализовать процессы роста и развития побегов.

- с 1998 г. хранятся растения Clematis на питательных средах с 1 мкМ БАП, 100 мг/л Ас и 100 мг/л L-глутамина без снижения регенерационной способности;

- с 1997 г. в состоянии активного роста на питательных средах с 5 - 10 мкМ БАП поддерживается коллекция сортов и различных форм Fragaria. За весь этот период культивирования не отмечено снижения коэффициента размножения.

Для ряда растений при создании коллекций in vitro использованы другие подходы:

- на протяжении двух лет путем периодических пересадок в состоянии активного роста поддерживалась и хранилась культура изолированных тканей семядолей С. sinensis. За этот срок культивирования регенерационная способность изолированных тканей оставалась на высоком уровне, а за счет вторичных процессов регенерации расширился их морфогенетический потенциал;

- растения В. rex хранили в коллекции в течение 5 лет путем индукции прямой регенерации в культуре листьев, используя в качестве источника эксплантов листья регенерантов и культивируя их на соответствующих питательных средах;

- показана возможность хранить D. sativas сорта Parmex в виде каллусной ткани, периодически пересаживая ее на свежую питательную среду МС с 0.4 мкМ АТХП и 2 мкМ Кн. Регенерационная способность каллуса на протяжении 17 пассажей оставалась без существенных изменений;

Некоторые растения целесообразно хранить in vitro в состоянии замедленного роста при пониженной положительной температуре. Такой подход позволяет увеличить период субкультивирования. Без пересадки в течение 18 месяцев сохранили жизнеспособность два вида рода Primula (Р. pruhonicensis и P. polyantha), два вида рода Fritillaria (F. meleagris и F. verticillata), представители родов Hemerocallis и Iris. Максимальный период без пересадки продолжительностью 4 месяца были способны перенести только пазушные почки В. baranovii и D. sinuatum, изолированые с базальной части побегов. Причем жизнеспособными среди них оказались только 60%. К концу эксперимента у них регенерировало по 3 - 4 адвентивных побега.

Методы биотехнологии позволяют не только сохранить биологическое разнообразие растительного мира, но и эффективно использовать его для получения новых форм и сортов, быстрее внедрять те из них, которые более всего отвечают запросам производства и потребителя. В обобщенном виде использование методов биотехнологии в системе сохранения и воспроизводства растительных ресурсов представлено в виде схемы (рис.3).

Применение методов биотехнологии в системе сохранения и воспроизводства растительных ресурсов затрагивает и экономические аспекты. Снижение себестоимости растений, полученных методами биотехнологии

Рис. 3. Схема включения биотехнологических приемов в систему сохранения и воспроизводства растительных ресурсов

возможно за счет уменьшения затрат на стоимость реактивов, используемых для приготовления питательных сред, за счет увеличения выхода растений и двух-трехкратное увеличение этого показателя для ряда растительных культур, было бы экономически важным.

Интенсификация процесса микроразмножения может заключаться в повышении выхода регенерантов уже на начальных этапах культивирования. Обычно это достигается путем использования определенных регуляторов роста, выбора более эффективной модели регенерации. Повышение, эффективности микроразмножения может быть получено путем применения двух-моделей регенерации растений in vitro: индукции адвентивного побегообразования в культуре пазушных почек и регенерация растений в первичном каллусе. Так, от одного регенеранта В. baranovii, полученного в культуре пазушных почек, v

высотой 12 - 14 см можно использовать 10-12 листьев и получить от них 12 - 15 фрагментов. При интенсивности регенерации 12-15 побегов коэффициент размножения через регенерацию растений в каллусной культуре составит около 2000 за два месяца культивирования. Он значительно выше, чем при размножении В. baranovii в культуре пазушных почек, который в среднем составляет около 100 за один месяц культивирования.

В некоторых случаях только методом клонального микроразмножения можно довести до потребителя гибриды или перспективные формы плодовых и ягодных культур, характеризующиеся целым комплексом хозяйственно-важных признаков (вкусовые качества, морозостойкость, устойчивость к заболеваниям, высокая урожайность) (табл.15), а также высокодекоративные формы и сорта растений (табл.16).

Таблица 15

Показатели эффективности размножения in vitro растений

Растения-регенеранты Коэффициент размножения Частота укоренения,%

Род Grossularia (форма И) 7.8±1.2 90

Гибриды рода Cerasus:

№ 1-86-260 2.6±0.5 100

ВЧ № 45 5.0±0.5 100

Rhododendron ledebourii 14.8±1.1 100

Род Clemaris, сорт Мефистофель 10.5±0.5 90

Воспроизводство растений с использованием биотехнологических методов является высокорентабельным, позволяет в более короткие сроки получать посадочный материал высокого качества. Кроме того, это гибкая система, с помощью которой при использовании одного и того же оборудования, становится возможным круглый год хранить in vitro коллекции различных видов растений, а в случае необходимости осуществить их крупномасштабное

Таблица 16

Экономическая эффективность двух способов вегетативного размножения растений рода Primula (2000 г.)

Показатели Единица измерения Способ

in vitro in vivo

Площадь производства м* 10.0 10.0

Получено продукции за год тыс.шт. 30.0 0.4

Затраты труда тыс.чел-час 2.1 0.9

Затраты материально-денежных

средств тыс.руб. 50.0 0.8

Себестоимость 1 шт. руб. 1.7 2.0

Средняя цена реализации 1 шт. руб. 5.0 5.0

Прибыль с 1 шт. растения руб. +3.3 +3.0

Годовой экономический эффект тыс.руб. 99.0 1.2

Рентабельность 194.0 150.0

тиражирование. Создание коллекций in vitro является одним из перспективных направлений в сохранении биоразнообразия растений. Использование банка стерильных культур способствует сокращению площади под коллекциями ценных культур и дает возможность успешной реинтродукцин видов природной флоры. Разработка эффективных способов размножения редких и ценных растений позволяет обеспечить их расширенное устойчивое воспроизводство в условиях ex situ, способствуя сохранению генофонда.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально показана возможность управления процессами регенерации с помощью регуляторов роста. Лучшими индукторами регенерационных процессов на стадии собственно размножения является использование в составе основной питательной среды определенных концентраций:

- одного из цнтокининов - для Adonis vernalis 5 мкМ БАЛ в МС, Brachanthemum baranovii и Dendranthema sinuatum 0.5-1 мкМ БАЛ в В5, некоторых эксплантов листьев Begonia rex 2 мкМ БАП в МС, гибридов Cerasus (1-86-260 и ВЧ №45) 2 мкМ БАП и 4 мкМ БАП в МС соответственно, гибридов и ремонтантных сортов Fragaria 2-5 мкМ БАП и 10-20 мкМ БАП в МС соответственно, для двух бесшипых форм Grossularia 5 мкМ БАП в МС, для Rhododendron ledebourii 5 мкМ ИПА в А;

- цитокинина в сочетании с ауксинами - для Actinidia chinensis 2-5 мкМ БАП и 0.2-0.4 мкМ НУК в В3, Allium сера (сорт Ермак) 8 мкМ БАП и 3 мкМ 2,4-Д, некоторых эксплантов листьев Begonia rex 2 мкМ БАП и 0.5 мкМ НУК в МС, Camellia sinensis 1-2 мкМ БАП и 5-10 мкМ НУК в Bj, Daucus sativus (сорт Parmex) 2 мкМ Кн и 0.4 мкМ АТХП в МС, для Fritillaria (Fmeleagris, F.

verticillata) 5 мкМ БАЛ и 5 мкМ НУК в В5, для Iris: I. ensata - 10 мкМ БАЛ и 1 мкМ НУК, I. hybrida и I. sibirica - 5 мкМ БАЛ и 10 мкМ 2,4-Д в МС;

- цитокинина в сочетании с ауксинами и ПС - для Hemerocallis (сорт Алан) 10 мкМ БАЛ, 5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК в МС, для гибридов Malus (Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) 5 мкМ БАП, 0.5 мкМ НУК и 5 мкМ ПС в МС, для Primula (P.polyantha и Р. prugonicenses) 10 мкМ БАП, 0.5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК в В5.

2. Управлять процессами ризогенеза и повышать эффективность укоренения большинства изученных видов, форм и сортов растений возможно путем использования в составе основной питательной среды ауксинов:

- ИМК: для Actînidia chinensis - 4 мкМ в Bj, Brachanthemum. baranovii - 15 мкМ в В5, Dendranthema sinuatum - 2-5 мкМ в В5, двух гибридов Cerasus (186-260 и ВЧ №45) - 5 и 10 мкМ в V2 В5 соответственно, представителей Grossularia - 5 мкМ в МС, гибридов и ремонтантных сортов Fragaria - 0.5-1 мкМ и 2 мкМ в Уг МС соответственно, Clematis (сорт Мефистофель) и Rhododendron ledebourii - 10 мкМ в Уг МС и А соответственно, Hemerocallis (сорт Алан) - 3 мкМ в В5, гибридов Malus (Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) - 2 мкМ в МС;

- НУК: для Fritiïïaria (F. meleagris, F. verticillata) и Stevia rebaudiana - 5 мкМ в Bj, Iris (I. hybrida, I. sibirica, I. ensata) - 1 мкМ в B5, Bégonia rex и Allium сера (сорт Ермак) - 0.5 мкМ в МС и В3 соответственно;

- один из трех ауксинов (ИМК, НУК или ИПК) для Primula (Рpolyantha и P. prugonicenses) - 1 мкМ в Уг МС.

3. На регенерационную способность в культуре изолированных тканей растений и коэффициент размножения существенное влияние оказывает тип экспланта и его видовая принадлежность. У всех изученных видов растений высокой регенерационной способностью обладали изолированные апексы. Культуры изолированных листьев Actinidia chinensis, Bégonia rex, Brachanthemum baranovii, Daucus sativus (сорт Parmex), Primula polyantha характеризовались высокой способностью к регенерации, тогда как эти же типы эксплантов Dendranthema sinuatum, Camellia sinensis, гибридов Malus -очень низкой. Высокая регенерационная способность характерна для видоизмененных листьев: изолированных тканей семядолей всех изучаемых представителей Camellia sinensis и Malus, фрагментов чешуй луковиц представителей Fritillaria, фрагментов лепестков цветков представителей Iris.

4. Для конкретных видов растений изучен морфогенетический потенциал и определены модели регенерации, обеспечивающие наиболее высокую эффективность микроразмножения:

- прямая регенерация почек или соматических эмбриоидов из клеток экспланта: у сортов Camellia sinensis (Грузинский №2, №3, Колхида) и гибридов Malus ((Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) - ткани семядолей, Bégonia rex - ткани листа, Fritillaria (F. meleagris и F. verticillata) - ткани чешуй луковиц;

- регенерация путем активации развития существующих меристем (культура пазушных почек): у Actinidia chinensis, Brachanthemum baranovii, гибридов

Cerasus (1-86-260 и ВЧ №45), Clematis (сорт Мефистофель), Dendranthema sinuatum, гибридов и сортов Fragaria, бесшипых форм Grossularia, Hemerocallis (сорт Алан), Primula (P.polyantha и P. prugonicenses), Rhododendron ledebourii, Stevia rebaudiana;

- непрямая регенерация почек через каллусогенез: у Actinidia chinensis, Brachanthemum baranovii, Daucus sativus (сорт Раппех) (каллус от фрагментов листа), Allium сера (сорт Ермак) (каллус от завязей), Iris (/. ensata, I sibirica, I. hybridá) (каллус от лепестков венчика цветка).

5. Коллекции растений in vitro можно длительно хранить в состоянии активного или замедленного роста. Для Camellia sinensis и Daucus sativus (сорт Рагшех) можно рекультивировать каллусные культуры, а для остальных видов, форм и сортов растений - пазушные почки. Продолжительность беспересадочной культуры для Brachanthemum baranovii и Dendranthema sinuatum составляет 4 месяца, а для Fritillaria (F. meleagris и F. verticillata), Hemerocallis (сорт Алан), Iris sibirica, Primula (P.polyantha и P. prugonicenses) -18 месяцев, что позволяет хранить эти растения in vitro в состоянии замедленного роста.

6. С большой надежностью в отношении генетической стабильности и при высоком коэффициенте размножения можно получать регенераты в культуре пазушных почек путем активации развития меристем. Однако при продолжительном культивировании у некоторых растений существует риск появления с небольшой частотой уклоняющихся форм с новыми признаками: Fragaria - альбинизм (сорт Московский деликатес) и пестролистность (сорт Сельва); Grossularia - более продолжительный ювенильный период, а также изменение формы ягод; Malus (Подарок садоводам х Заветное) -низкорослость.

7. Усовершенствован и разработан двустадийный прием адаптации растений-регенератов к условиям выращивания ex vitro с использованием гидропонных установок, заполненных питательным раствором определенного состава на каждой стадии адаптации: Í4 МС+510 мг/л КН2РО4 в первые 10 суток и '/4 MC + 1650 мг/л NH4NO3 в последующие 10 суток. Такой подход к адаптации регенератов характеризуется высокой эффективностью, универсальностью и обеспечивает получение высокой частоты приживаемости регенератов различных видов растений в условиях открытого грунта (98 -100%).

8. Экономический эффект использования методов биотехнологии в системе сохранения биоразнообразия достигается за счет возможности получения высоких коэффициентов размножения в течение короткого времени даже при дефиците исходного материала, за счет сокращения площадей под коллекциями растений, а также за счет уменьшения сроков получения новых форм и сортов (A.c. №1621825, № 35188).

9. Разработанные приемы получения расгений-регенерантов в культуре изолированных тканей могут быть использованы для сохранения генофонда в коллекциях in vitro; адаптированные к условиям выращивания ex vitro регенераты редких и исчезающих видов флоры Алтая - для интродукции и

реинтродукции, уникальных форм и сортов растений - для селекции и получения высококачественного посадочного материала.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Соматический эмбриогенез в культуре изолированных семядолей чайного растения // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез.докл.. - Новосибирск, 1988.-4.2. - С.248-249.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Пролиферация и морфогенетический потенциал стеблевого каллуса чайного растения сорта Колхида // Субтропические культуры. - 1988. - №6. - С.50-57.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В., Кунах В.А. Использование методов культуры клеток, тканей и органов в селекции чайного растения «Вегетативное размножение высокопродуктивных сортов и клонов чая»: Сб. науч. тр. - Озургети-Анасеули, 1989. - С. 112-126.

Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A., Кутубидзе В.В. Биотехнологические методы в селекции и размножении актинидии китайской// Субтропические культуры - 1990. - №2. - С. 136-140.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Регенерация растений актинидии китайской из каллусных культур листьев //Субтропические культуры. - 1990. -№5. - С.133-139.

Вечернина H.A. Разработка метода индуцирования нормального морфогенеза в длительно поддерживаемой культуре тканей чайного растения // Доклады ВАСХНИЛ,- 1991,- №4.-С. 18-21.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В., Кунах В.А. Способ получения растений-регенерантов чая // А.с.№1621825, Бюл. №3, 1991.

Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A. Методы in vitro для размножения и сохранения Fritillaria meleagris L. и F.verticillata Wild. II Флора и растительность Алтая. - Барнаул: Изд-во АГУ, 1996. - С. 136-139.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Культура in vitro Stevia rebaundiana Bert. И Флора и растительность Алтая. - Барнаул: Изд-во АГУ, 1996. - С.140-142.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Пронькина Л.В. Регенерация и ускоренное размножение лилейника in vitro II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 1997.- №1.- С.125-127.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Шмаков А.И. К проблеме сохранения Brachanthemum baranovii (Krasch.et Poljak) Krasch: введение в культуру in vitroll Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 1998 -№1. - С.133-134.

Бородулина И.Д., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Каллусогенез и регенерационная способность листовых эксплантов Primula х polyantha Mill. II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 1998. - №4. - С. 145-147.Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Регенерация Dauern sativus (Hoff)Roehl сорта Parmex в культуре in vitroll Известия АГУ. Барнаул:Изд-во АГУ, 1999 - №3. - С.47-50.

Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A. Сохранение генофонда растений в коллекции культур in vitro!! Известия АГУ. - Барнаул: Изд-во АГУ, 1999. -Спец. выпуск - С. 13-15.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Жаркова C.B. Размножение in vitro ЦМС-линии лука репчатого// Междунар. конф. «Селекция и семеноводство овощных в XXI в.»: Тез. докл. - М.: Изд-во НИИСОК, 2000. - С.56-57.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Жаркова C.B. Каллусогенез и регенерационная способность тканей и органов Allium сера L. in vitro II Известия АГУ. - Барнаул: Изд-во АГУ, 2000. - №3. - С.47-50.

Бородулина И.Д., Вечернина H.A., Долганова З.В. Размножение двух гибридных ввдов рода Primula L. в культуре in vitro II Растительные ресурсы -2001. -Вып.4. — С. 114—122.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Адаптация растений-регенерантов к условиям выращивания in vivo как завершающий этап микроразмножения// Вестник алтайской науки. - Барнаул: Изд-во АГУ, 2001. - Вып. 1 ,Т. 1С.263-265.

Долганова З.В., Бородулина И.Д., Вечернина H.A. Примула многоцветковаяВесеня //A.c. №35188- 2001.

Соловьева В.В., Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A., Александрова О.В., Шмаков А.И. Интродукция Brachanthemum baranovii Krasch. (Krasch. et Poljak) в Южно-Сибирском ботаническом саду // Междунар. совещание «Проблемы охраны растительного мира Сибири»: Тез. докл. - Новосибирск, 2001. - С.83.

Сирота С.М., Жаркова C.B., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Методы получения и ранняя диагностика гибридного потомства Allium сера L. II Методические указания. - Барнаул: Изд-во АГУ, 2001. - 21 с.

Носырева М.В., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Изучение регенерационной способности изолированных почек Adonis vernalis L. в культуре in vitroll Известия АГУ. - Барнаул: Изд-во АГУ, 2002. - №3. - С.98-100.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Антонова И.И.. Размножение in vitro бесшипых форм крыжовника //Науч.-практ. конф. «Научно-экономические проблемы регионального садоводства»: Сб. материалов - Барнаул: Изд-во АГУ, 2003. - С. 199-207.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Васина М.А. Микрор.азмножение гибридов яблони путем регенерации в культуре in vitro семядолей // The Biology of Plant Cells In Vitro and Biotechnology: Тез. докл. VIII Междунар. конф. (9-13 сентября 2003 г.). - Саратов: Изд-во саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. - С.343-344.

Носырева М.В., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Соловьева В.В. Использование методов культуры in vitro для сохранения Adonis vernalis L. H XI съезд Русского ботан. общ-ва «Ботанические исследования в азиатской России»: Сб.материалов - Барнаул: Изд-во «АзБука», 2003. - Т.З. -С.341-342.

Соловьева В.В., Носырева М.В., Вечернина H.A. Использование методов культуры in vitro для сохранения Dendranthema sinuatum (Ledeb.)TZVEL. И XI съезд Русского ботанического Общества «Ботанические исследования в

азиатской России»: Сб. материалов - Барнаул: Изд-во «АзБука», 2003. - Т.З. -С.356-357.

Носырева М.В., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Регенерация и размножение растений бегонии in vitro // Известия АГУ. - Барнаул: Изд-во АГУ, 2004 - №3. - С.94-97.

Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Клементьева JT.A., Долганова З.В. Особенности регенерации и размножения растений рода Iris L. in vitro II Растительные ресурсы. - 2004. -Вып.4. - С. 56-65.

Вечернина H.A., Соловьева В.В., Таварткиладзе O.K., Шмаков А.И. Методические указания по регенерации, размножению in vitro и интродукции эндемиков флоры Алтая: Brachanthemum baranovii (Krasch. et Poljak) Krasch.и Dendranthema sinuatum (Ledeb.) Tzvel. - Барнаул: Изд-во «АзБука», 2004. - 48 с. i

Вечернина H.A. Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений. - Барнаул: Изд-во Алт.ун-та, 2004. - 205 с.

Вечернина H.A. Использование методов биотехнологии в селекции и размножении плодовых, ягодных и декоративных культур //: Материалы общ. собрания и научной сессии СО РАСХН к 35-летию образования СО РАСХН (16 -17 ноября 2004 г.) «Сельскохозяйственная наука - агропромышленному комплексу Сибири» - Новосибирск: ИПЦ «Юпитер», 2005. - С. 149-159.

Подписано в печать 14.02.2006 г. Формат 60*84/16

Бумага офсетная. Печать ризо. Усл. печ. л. 1,9. Тираж 100 экз. Бесплатно. Заказ № 59.

Отпечатано в типографии Алтайского государственного университета 656049, Барнаул, ул. Димитрова, 66

аоо&А esas

Р" б 9 8 g

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Вечернина, Нина Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Сохранение биологического разнообразия растений методами биотехнологии.

1.2. Факторы, влияющие на процессы регенерации в культуре изолированных клеток, тканей и органов растений.

1.3. Модели регенерации растений в культуре in vitro.

1.4. Основные этапы микроразмножения растений.

ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ.

3.1. Adonis vernalis.

3.2. Brachanthemum baranovii.

3.3. Dendranthema sinuatum.

3.4. Представители рода Fritillaria.

3.5. Rhododendron ledebourii.

ГЛАВА 4. КУЛЬТУРА ИЗОЛИРОВАННЫХ ТКАНЕЙ УНИКАЛЬНЫХ ФОРМ И СОРТОВ РАСТЕНИЙ.

4.1 .Actinidia chinensis.

4.2. Allium сера.

4.3. Begonia rex.

4.4. Camellia sinensis.

4.5. Представители рода Cerasus.

4.6. Представитель рода Clematis.

4.7. Daucus sativus.

4.8. Представители рода Fragaria.

4.9. Представители рода Grossularia.

4.10. Представитель рода Hemerocallis.

4.11. Представители рода Iris.

4.12. Представители рода Malus.

4.13. Представители рода Primula.

4.14. Stevia rebaudiana.

ГЛАВА 5. АДАПТАЦИЯ РАСТЕНИЙ-РЕГЕНЕРАНТОВ К УСЛОВИЯМ

ВЫРАЩИВАНИЯ EX VITRO.

ГЛАВА 6. ВКЛЮЧЕНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В СИСТЕМУ СОХРАНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДСТВА РАСТИТЕЛЬНЫХ РЕСУРСОВ.

6.1. Коллекции растений in vitro.

6.2. Изучение регенерантов.

6.3. Экономические аспекты применения методов биотехнологии.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии"

Привлечение методов биотехнологии, базирующихся на культивировании изолированных органов, тканей и клеток растений для решения проблем сохранения биологического разнообразия имеет преимущества пер^д традиционно используемыми подходами. Методы биотехнологии позволяют получать оздоровленный материал от пораженных вирусными и грибными болезнями растений, а также материал, свободный от нематод; осуществлять быстрое размножение ценного экземпляра растения; получать в больших количествах вегетативное потомство трудно размножаемых в обычных условиях видов и форм растений; работать в лабораторных условиях круглый год и планировать выпуск растений к определенному сроку; размножать растения без вывода их из ювенильной фазы; длительно хранить пробирочные растения и создавать «банк» ценных форм (Высоцкий, 1986).

Однако широкому использованию биотехнологий для многих видов и даже сортов растений препятствует то, что морфогенетический потенциал и регенерационная способность культивируемых тканей часто строго зависят от генотипа и условий культивирования. Отсутствие надежных способов адаптации регенерантов к условиям ex vitro приводит к значительной потере регенерантов и, в некоторых случаях, существенно снижает возможности использования биотехнологических методов, как для сохранения биологического разнообразия, так и для производства высококачественного посадочного материала ценных растений.

Цель и задачи исследований. Основная цель исследований заключалась в разработке и совершенствовании методов культуры изолированных тканей растений для использования в системе сохранения и воспроизводства растительных ресурсов.

В соответствии с поставленной целью в задачи исследования входило:

- выявить роль типа экспланта и его видовой принадлежности в процессах регенерации растений в культуре in vitro;

- усовершенствовать технику и приемы адаптации растений-регенерантов к условиям выращивания ex vitro;

На защиту выносятся следующие положения:

2. Повышение эффективности регенерационных процессов в культуре изолированных клеток, тканей и органов достигается за счет подбора минеральный состав) и модификации (регуляторы роста) питательной среды для культивирования в зависимости от вида, формы или сорта растения. 3. Эффективность методов биотехнологии в системе сохранения биоразнообразия и воспроизводства растительных ресурсов обеспечивается двухэтапным приемом адаптации регенерантов к условиям выращивания ex vitro на гидропонных установках «Минивит».

- для Iris hybrida - метод эмбриокультуры;

- для Actinidia chinensis, гибрида №1 Primula х polyantha, Brachanthemum baranovii, Dendranthema sinuatum, Daucus sativus - методы регенерации в культуре каллуса от листьев, Allium сера - в культуре каллуса от завязей, а для трех видов рода Iris (I ensata, I. sibirica, I. hybrida) - в культуре каллуса от лепестков венчика цветка;

- для Actinidia chinensis, двух форм рода Grossularia, гибридов рода Cerasus, гибридов и сортов рода Fragaria, двух видов рода Primula (P. polyantha и Р. prugonicenses), Rhododendron ledebourii, представителя рода Clematis (сорт Мефистофель), представителя рода Hemerocallis (сорт Алан), Brachanthemum baranovii, Dendranthema sinuatum, Adonis vernalis и Stevia rebaudiana - методы регенерации путем активации пролиферации существующих меристем.

Результаты законченных исследований положены в основу методических указаний «Методы получения и ранняя диагностика гибридного потомства / Allium сера L.» (2001) и «Регенерация, размножение in vitro и интродукция эндемиков флоры Алтая: Brachanthemum baranovii (Кгas ch. et Poljak) Krasch. и Dendranthema sinuatum (Ledeb.) Tzvel.» (2004), изложены в монографии . «Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений» (2004).

В отделе биотехнологии растений ЮСБС АлтГУ создана живая коллекция различных видов растений, включающая представителей редких и исчезающих видов, а также уникальных форм и ценных сортов хозяйственно-важных растений.

Апробация работы. Результаты исследований докладывались и обсуждались на ежегодных заседаниях ученого совета ВНПОЧСК и ЧП (Грузия) (1983 - 1994), Южно-сибирского ботанического сада АлтГУ (1995 - 2004 гг.) и v НИИ им. М.А.^1исавенко (1997 - 2004 гг.), на Всесоюзной конференции молодых ученых и специалистов (Махарадзе-Анасеули, 1985), международных научных и научно-практических конференциях: «Биология культивируемых клеток и биотехнология» (Новосибирск, 1988), "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда" (Москва, 1997), «Современные проблемы научных исследований и развития садоводства, субтропического растениеводства и цветоводства» (Сочи, 1998), «Проблемы стабилизации и развития сельскохозяйственного производства Сибири, Монголии и Казахстана в XXI веке» (Новосибирск, 1999), «Проблемы охраны растительного мира Сибири» (Новосибирск, 2001), «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001), «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), а также на региональной научно-практической конференции «Научно-экономические проблемы регионального садоводства» (Барнаул, 2002), на XI съезде Русского ботанического общества «Ботанические исследования в азиатской России» (Новосибирск - Барнаул, 2003) и на научной сессии СО РАСХН, посвященной 35-летию образования СО РАСХН «Сельскохозяйственная наука - агропромышленному комплексу Сибири» (Новосибирск, 2004).

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 37 печатных работах, в т.ч. в 2 методических рекомендациях, 2 авторских свидетельствах и монографии.

Заключение Диссертация по теме "Ботаника", Вечернина, Нина Александровна

выводы

- одного из цитокининов - для Adonis vernalis 5 мкМ БАП в МС, Brachanthemum baranovii и Dendranthema sinuatum 0.5—1 мкМ БАП в В5, некоторых эксплантов листьев Bégonia гех 2 мкМ БАП в МС, гибридов Cerasus (1-86-260 и ВЧ №45) 2 мкМ БАП и 4 мкМ БАП в МС соответственно, гибридов и ремонтантных сортов Fragaria 2-5 мкМ БАП и 10-20 мкМ БАП в МС соответственно, для двух бесшипых форм Grossularia 5 мкМ БАП в МС, для Rhododendron ledebourii 5 мкМ ИПА в А;

- цитокинина в сочетании с ауксинами - для Actinidia chinensis 2-5 мкМ БАП и 0.2-0.4 мкМ НУК в В5, Allium сера (сорт Ермак) 8 мкМ БАП и 3 мкМ 2,4-Д, некоторых эксплантов листьев Bégonia гех 2 мкМ БАП и 0.5 мкМ НУК в МС, Camellia sinensis 1-2 мкМ БАП и 5-10 мкМ НУК в В5, Daucus sativus (сорт Parmex) 2 мкМ Кн и 0.4 мкМ АТХП в МС, для Fritillaria (F. meleagris, F. verticillata) 5 мкМ БАП и 5 мкМ НУК в В5, для Iris: I. ensata - 10 мкМ БАП и 1 мкМ НУК, I. hybrida и I. sibirica - 5 мкМ БАП и 10 мкМ 2,4-Д в МС;

- цитокинина в сочетании с ауксинами и ГК - для Hemerocallis (сорт Алан) 10 мкМ БАП, 5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК в МС, для гибридов Malus (Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) 5 мкМ БАП, 0.5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК в МС, для Primula (P.polyantha и Р. prugonicenses) 10 мкМ БАП, 0.5 мкМ НУК и 5 мкМ ГК в В5.

- ИМК: для Actinidia chinensis — 4 мкМ в В5, Brachanthemum. baranovii - 1— 5 мкМ в В5, Dendranthema sinuatum — 2-5 мкМ в В5, двух гибридов Cerasus (1260

86-260 и ВЧ №45) - 5 и 10 мкМ в Уг В5 соответственно, представителей Grossularia - 5 мкМ в МС, гибридов и ремонтантных сортов Fragaria - 0.5-1 мкМ и 2 мкМ в Уг МС соответственно, Clematis (сорт Мефистофель) и Rhododendron ledebourii — 10 мкМ в Уг МС и А соответственно, Hemerocallis (сорт Алан) - 3 мкМ в В5, гибридов Malus (Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) - 2 мкМ в МС;

- НУК: для Fritillaria (F. meleagris, F. verticillata) и Stevia rebaudiana - 5 мкМ в B5, Iris (I. hybrida, I. sibirica, I. ensata) — 1 мкМ в B5, Bégonia rex и Allium сера (сорт Ермак) - 0.5 мкМ в МС и В5 соответственно;

- одного из трех ауксинов (ИМК, НУК или ИПК) для Primula (P.polyantha и P. prugonicenses) - 1 мкМ в Уг МС.

- прямая регенерация почек или соматических эмбриоидов из клеток экспланта: у сортов Camellia sinensis (Грузинский №2, №3, Колхида) и гибридов Malus ((Жебровское х Заветное, Подарок садоводам х Заветное, Заветное х Подарок садоводам) - ткани семядолей, Begonia rex - ткани листа, Fritillaria (F. meleagris и F. verticillata) - ткани чешуй луковиц;

- регенерация путем активации развития существующих меристем (культура пазушных почек): у Actinidia chinensis, Brachanthemum baranovii, гибридов Cerasus (1-86-260 и ВЧ №45), Clematis (сорт Мефистофель), Dendranthema sinuatum, гибридов и сортов Fragaria, бесшипых форм Grossularia, Hemerocallis (сорт Алан), Primula (P.polyantha и P. prugonicenses), Rhododendron ledebourii, Stevia rebaudiana;

- непрямая регенерация почек через каллусогенез: у Actinidia chinensis, Brachanthemum baranovii, Daucus sativus (сорт Parmex) (каллус от фрагментов листа), Allium сера (сорт Ермак) (каллус от завязей), Iris (/. ensata, I. sibirica, I. hybrida) (каллус от лепестков венчика цветка).

5. Коллекции. растений in vitro можно длительно хранить в состоянии активного или замедленного роста. Для Camellia sinensis и Daucus sativus (сорт Parmex) можно рекультивировать каллусные культуры, а для остальных видов, форм и сортов растений - пазушные почки. Продолжительность беспересадочной культуры для Brachanthemum baranovii и Dendranthema sinuatum составляет 4 месяца, а для Fritillaria (F. meleagris и F. 4verticillata), Hemerocallis (сорт Алан), Iris sibirica, Prímula (Ppolyantha и P. prugonicenses) — 18 месяцев, что позволяет хранить эти растения in vitro в состоянии замедленного роста.

6. С большой надежностью в отношении генетической стабильности и при высоком коэффициенте размножения можно получать регенеранты в культуре пазушных почек путем активации развития меристем. Однако при продолжительном культивировании у некоторых растений существует риск появления с небольшой частотой уклоняющихся форм с новыми признаками: Fragaria - альбинизм (сорт Московский деликатес) и пестролистность (сорт Сельва); Grossularia - более продолжительный ювенильный период, а также изменение формы ягод; Malus (Подарок садоводам х Заветное) -низкорослость.

7. Усовершенствован и разработан двустадийный прием адаптации растений-регенерантов к условиям выращивания ex vitro с использованием гидропонных установок, заполненных питательным раствором определенного состава на каждой стадии адаптации: !Л МС+510 мг/л КН2РО4 в первые 10 суток и lA МС + 1650 мг/л NH4NO3 в последующие 10 суток. Такой подход к адаптации регенерантов характеризуется высокой эффективностью, универсальностью и обеспечивает получение высокой частоты приживаемости регенерантов различных видов растений в условиях открытого грунта (98 - 100%).

9. Разработанные приемы получения растений-регенерантов в культуре изолированных тканей могут быть использованы для сохранения генофонда в коллекциях in vitro; адаптированные к условиям выращивания ex vitro регенеранты редких и исчезающих видов флоры Алтая - для интродукции и реинтродукции, уникальных форм и сортов растений - для селекции и получения высококачественного посадочного материала.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Вечернина, Нина Александровна, Барнаул

1. Азизходжаева А., Умаров З.М. Влияние фитогормонов и витаминов на рост недозрелых гибридных зародышей хлопчатника in vitro II Узбекский биологический журнал 1988. - №2. - С.17-19.

2. Александрова М.С., Стахеева Т.С., Василькова О.Г. Клональное микроразмножение интродуцированных сортов голубики щитковой {Vaccinium corymbosum L.) II Междунар. конф. «Проблемы дендрологии на рубеже XXI века»: Тез. докл. М. - 1999. - С.7-8.

3. Ахметова А.Ш., Байбурина P.K. Размножение Lespedeza bicolor Turcz. в культуре in vitro II Растительные ресурсы 2003. - вып. 1. - С. 115-124.

4. Байбурина Р.К. Микроклональное размножение взрослых гибридных деревьев Betula pendula Roth var. carelica Merckl. II Растительные ресурсы 1998. - 34, №2. - C.9-22.

5. Бартиш И.В., Короховой В.И. Состав культуральной среды и эффективность образования побегов in vitro из листовых эксплантов яблони // Физиология растений. 1997. - 44,№3. - с.440-444.

6. Бахтадзе К.Е. Биологические основы культуры чая. Тбилиси: Мецниереба. 1971. - 367 с.

7. Бахтадзе К.Е. Биология, селекция и семеноводство чайного растения. -М.:Пищепромиздат, 1948. -231 с.

8. Бахтадзе К.Е. Новая крупнолисная форма китайского чая // Агробиология. 1952. - №1. - С.97-100.

9. Башките Е.А., Александрушкина Н.И., Кирнос М.Д. Метилирование ДНК в суспензионной культуре клеток табака при обработке фитогормонами // Биологические науки. 1980. - №4. - С.103-110.

10. Близнюк Л.Г., Кондрацкая И.П. Биотехнологические методы селекции клевера лугового // VIII Междунар. конф. «The Biology of Plant Cells In

11. Vitro and Biotechnology»: Тез. докл.- Саратов: Изд-во Саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. С.49.

12. Болтинец B.C., Пивень Н.М. Индуцированный эмбриоидогенез в культуре ткани ореха грецкого // Физиология и биохимия культурных растений 1990. - 22, №4. - С.409-413.

13. Бондарев Н.И,, Носов A.M., Корниенко A.B. Влияние экзогенных регуляторов роста на каллусогенез и рост культивируемых клеток Stevia rebaudiana II Физиология растений. 1998. - 45, №6. - С.888-892.

14. Бородулина И.Д., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Каллусогенез и регенерационная способность листовых эксплантов Primula х polyantha Mill. II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУД998. №4. - С. 145-147.

15. Бородулина И.Д., Вечернина H.A., Долганова З.В. Размножение двух гибридных видов рода Primula L^ в культуре in vitro II Растительные ресурсы 2001. - Вып.4. - С. 114-122.

16. Бумагина С.И., Хачунова С.С., Шамова Н.М. Культура in vitro пазушных почек винограда /Биология культивируемых клеток и биотехнология.-Новосибирск, 1988.-Т.1.- С.147.

17. Бургутин A.B. Микроклональное размножение винограда, перевод растения в почвенную культуру // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез. докл. 4.2. -Новосибирск, 1988. - С.312.

18. Бурдасов В.М., Ильина Е.И., Коннова Н.В. Особенности микроклонального размножения яблони // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез докл. 4.2. -Новосибирск. - 1988. - С.360.

19. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.:Наука, 1971. - 342 с.

20. Верещагина И.В. Цветы в Сибири. Барнаул: Алт. книж. изд-во, 1972. - 298 с.

21. Вечернина H.A. Разработка метода индуцирования нормального морфогенеза в длительно поддерживаемой культуре тканей чайного растения // Доклады ВАСХНИЛ. 1991. - №4. - С. 18-21.

22. Вечернина H.A. Каллусогенез и регенерационная способность тканей чайного растения {Camellia sinensis L.) in vitro: Автореф дис. . канд. биол. наук / Институт биохимии растений АН Грузии Тбилиси, 1993. -26 с.

23. Вечернина H.A. Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений.- Барнаул: Изд-во Алт.ун-та, 2004. 205 с.

24. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Культивирование каллуса чайного растения на искусственной питательной среде // Всесоюз.конф. мол.ученых и специал. во ВНИИЧиСК: Тез. докл. -Махарадзе-Анасеули, 1985.-С. 185.

25. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Пролиферация и морфогенетический потенциал стеблевого каллуса чайного растения сорта Колхида // Субтропические культуры. 1988, №6. - С.50-57.

26. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Соматический эмбриогенез в культуре изолированных семядолей чайного растения // V Междунар. конф. « Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез.докл. Новосибирск, 1988.- 4.2. - С.248-249.

27. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В. Регенерация растений актинидии китайской из каллусных культур листьев //Субтропические культуры. 1990. - №5. - С. 133-139.

28. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Кутубидзе В.В., Кунах В.А. Способ получения растений-регенерантов чая // А.с.№1621825, Бюл. №3, 1991.

29. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Культура in vitro Stevia rebaundiana Bert. II Флора и растительность Алтая. Барнаул: Изд-во Алт.ун-та, 1996. - С.140-142.

30. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Пронькина JI.B. Регенерация и ускоренное размножение лилейника in vitro II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АТУ-1997. №1.- С.125-127.

31. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Полковникова J1.A. Морфогенез в7культуре соматических тканей \ridaceae ll Междунар. конф. мол. уч. во ВНИИЦиСК: Тез. докл., Сочи.- 1098. -С.9-10.

32. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Шмаков А.И. К проблеме сохранения Brachanthemum baranovii (Krasch.et Poljak) Krasch: введение в культуру in vitroll Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ 1998, №1. -С.133-134.

33. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Регенерация Daucus sativus (Hoff.)Roehl. сорта Parmex в культуре in vitro II Известия АГУ. Барнаул:Изд-во АГУ 1999, 3. - С.47-50.

34. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Жаркова С.В. Каллусогенез и регенерационная способность тканей и органов Allium сера L. in vitro II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 2000. - №3. - С.47-50.

35. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Жаркова C.B. Размножение in vitro ЦМС-линии лука репчатого // Междунар. конф. «Селекция и семеноводство овощных в XXI в.» М.: Изд-во НИИСОК. -2000. С.56-57.

36. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Адаптация растений-регенерантов к условиям выращивания in vivo как завершающий этап микроразмножения // Вестник алтайской науки. Барнаул: Изд-во АГУ. -2001.- Вып.1,Т.1.- С.263-265.

37. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Антонова И.И. Размножение in vitro бесшшшх форм крыжовника // Науч.-практ. конф. «Научно-экономические проблемы регионального садоводства»: Материалы конф.- Барнаул: Изд-во АГУ. 2003а. - C.199-2Q7.

38. Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K., Клементьева Л.А., Долганова З.В. Особенности регенерации и размножения растений рода Iris L. in vitroll Растительные ресурсы , 2004, вып.4, С. 56-65.

39. Внучкова В.А. Разработка метода получения растений-регенерантов томата в условиях культуры ткани // Физиология растений 1977. - 24, №5.-С. 1094-1099.

40. Внучкова В.А., Бирюкова Н.Ф., Гулиев М.И., Лобиков Л.Д. Микроразмножение сенполий: минимум затрат, максимум пользы // Цветоводство. 1991. - №2. - С.6.

41. Высоцкий В.А. Регенерационная способность изолированных меристематических верхушек черной смородины и вишни и методы получения из них целых растений: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Л., 1978.-28 с.

42. Высоцкий В.А. Морфогенез и клональное микроразмножение растений // Культура клеток растений и биотехнология. М.:Наука, 1986. - C.91-102.

43. Высоцкий В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений // Автореф. дис. на соиск. уч. ст. д с/х наук. М., 1998. - 44с.

44. Высоцкий В. А., Бартенева Л.В. Способ пересадки растений-регенерантов в почвенный субстрат: A.c. 1591887 СССР, МКИ5 А 01 Н 3/00; НИИ садоводства Нечерноземной полосы. №44442378/30-13; Бюл. №34, 1990.

45. Высоцкий В.А., Дьякова Т.М. Микроклональное размножение декоративных кустарников // IV Всесоюзная конференция «Культура клеток растений и биотехнология»: Тез докл.- Кишинев. 1983. - С. 134.

46. Высоцкая О.Н., Попов A.C., Бутенко Р.Г. Преимущество глюкозы перед сахарозой при криосохранении меристем земляники // Физиология растений 1999. - 46, №2. - С. 300-302.

47. Высоцкий В. А., Тарашвили З.Т. Микроразмножение здорового посадочного материала ягодных культур // Садоводство. 1982. - №2. -с.22-23.

48. Выхристова Г.И., Смирнова Н.С. Некоторые аспекты культуры ткани луковичных растений и ремонтантной гвоздики // Труды НИИ горного садоводства и цветоводства Сочи, 1981.- №28. - С.58-67.

49. Горбатенко JI.E. Задачи интродукции растений России // XI съезд Русского ботанического общества «Ботанические исследования в азиатской России»: Сб. материалов. Т.З. - Барнаул: Изд-во «АзБука», 20036. -С.162-163.

50. Гумерова Е.А., Галеева Е.И., Чуенкова С.А., Румянцева Н.И. Соматический эмбриогенез и геммогенез в культуре тканей гипокотилей Fagopyrum esculentum II Физиология растений 2003. - 50, №5. - С. 716-721.

51. Гутиева Н.М. Размножение in vitro персика // VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл. -М., 1997. С.415.

52. Денейко Е.В., Цевелева О.Н., Пельтек С.Е., Бабенко В.Н., Сидорчук Ю.В., Шумный В.К. Сомаклональная изменчивость морфологических и биохимических признаков у растений-регенерантов люцерны // Физиол. раст. 1997. - 44, №5. - С.775-781.

53. Дерфлинг Г.М. Гормоны растений. М.:Наука. - 1989. - 390 с.

54. Долганова З.В. Примула новая культура на Алтае // Методические рекомендации ВАСХНИЛ, Сиб.отд., НИИСС. - Новосибирск, 1991.-26 с.

55. Долганова З.В. Расширение и улучшение ассортимента примулы и методы ее размножения в лесостепной зоне Алтайского края: Автореф. дис. канд. с/хнаук. Новосибирск. - 1993. - 16 с.

56. Долганова З.В., Бородулина И.Д., Вечернина H.A. Примула многоцветковаяВесеня //A.c. №35188

57. Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Современные представления о причинах имеханизмах сомаклональной изменчивости // Молекулярные механизмы генетических процессов. М.: Наука, 1991. - С.123-127

58. Дорошенко Н.П. Испытание питательных сред при клональном микроразмножении винограда // Виноградство и виноделие СССР. -1990. №3. С.61-65.

59. Дорошенко Н.П., Лузгин Г.В., Карлов А.Ф. Способ регенерации меристем : Пат. 2120739 Россия, МПК6 А01Н 4/00; НПО «Виноград». -№95104589/13; Заявл. 29.03.95; Опубл.27.10.98. Бюл.№30.

60. Драгавцев В.А. Стратегически важный капитал // Природа. Чехов: Наука, 1995.- № 12.- С.59-63.

61. Евсеева Р.П., Осипова Л.В. Влияние состава питательной среды и когерентного излучения лазера на развитие мериклонов земляники invitro II Бюл. науч. инф. ВНИИ генет. и селекции плод. раст. 1998. -№53. - С. 19-22.

62. Ежова Т.А., Багрова A.M., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Изучение наследуемости сомаклональных изменений у регенерантов посевного гороха (Pisum sativum L.) II Генетика. 1989. - 25, №5. - C.878-885.

63. Ермаков Е.И., Кочетов A.A. Особенности роста и развития растений стевии при разных световых режимах в регулируемых условиях // Докл.ады РАСХН. 1996. -№1. - С.8-9.

64. Захленюк О.В. Изучение цитогенетических эффектов производных азотистых оснований и их аналогов в культуре тканей растений // Автореф. дис. . канд. биол. наук. Киев, 1987. - 15 с.

65. Захленюк О.В., Кунах В.А. Цитофизиологические и цитогенетические эффекты производных аденина в культуре тканей Haplopappus gracilis L. II Физиология растений 1987. - 34, №3. - С.584-593.

66. Зленко В.А., Котиков И.В., Трошин Л.П. Способ и устройство для автоматизированного размножения растений in vitro: Пат. 2141195 Россия, МПК6 А01Н 4/00-№95114040/13; Бюл. №32, 1999.

67. Зосимович В.П., Кунах В.А. Уровень, типы и происхождение аббераций хромосом в культуре изолированных тканей растений // Генетика. -1975. 11, №6. - С.37-46.

68. Зубенко В.Ф., Чудновский Б.Д. Рождение новой отрасли // Сахарная свекла. 1990. - №5. - С.49-50.

69. Иванина Л.И. Семейство геснериевых (Gesneriaceae) // Жизнь растений. М.: Просвещение, 1981. - С.436-439.

70. Иванова H.H. Микроразмножение Anthurium andreanum и Begonia riger elatior в условиях in vitro И Бюллетень Государственного Никитского ботанического сада. 2002. - №86. - С. 40-42.

71. Иванович A.A. Микроклональное размножение голубики высокой // Интенсиф. плодоовощевод./ Белорус, с/х акад. Горки, 1992. - С.47-50.

72. Исаева H.A., Годовикова В.А., Бородько A.B. Эмбриогенез в каллусной ткани и суспензионной культуре Hordeum geniculatum L. И Известия АН СССР. Серия биология 1991. - №2. - С.294-299.

73. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев:Наукова думка, 1980 - 320 с.

74. Камелин Р.В. Биологическое размножение и интродукция растений // Растительные ресурсы -1997. Т.ЗЗ, Вып.З. - С. 1-11.

75. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К. Культивируемые клетки пшеницы и кукурузы. Морфогенез и толерантность // Физиология растений 1994. -41, №6. — С.807-814.

76. Катаева Н.В. Особенности микроразмножения трудноукореняемых сортов яблони // Сельскохозяйственная биология 1988. - № 4. - С. 1822.

77. Катаева Н.В. Параметрическое регулирование морфогенеза и клональное микроразмножение растений на примере герберы и фреезии // Автореф. дис. . канд. биол. наук. М. - 1982. - 24 с.

78. Катаева Н.В., Аветисов В.А. Клональное размножение растений в культуре тканей // Культура клеток растений. М.:Наука, 1981. - С.137-149.

79. Кафтан В.Н., Шевцова Г.Г., Конов Г.В. Микроразмножение родиолы розовой в культуре in vitro II V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез. докл. Новосибирск. -1988.-С.364.

80. Кашин A.C., Блюднева Е.А., Силкин М.А. Активация мегагамет и регуляция эмбриогенеза у неоплодотворенных завязей проса in vitro II Физиология растений 2000. - 47, №2. - С.291-301.

81. Керкадзе И.Д., Джапаридзе З.Т. Генетический эффект эндосперма и зародыша на изменчивость чайного растения // Субтропические культуры. 1990. - №1. - С.47-50.

82. КефелиВ.И. Рост растений.-М.: Колос, 1984. С. 17-18.

83. Ким Ю.М., Талалова Е.Е. Интродукция стевии в Узбекистане // Сб.научных трудов по приклад, ботанике, генетике и селекции. Л., 1991. - т. 144. - С. 186-191.

84. Клюшин А.Г. Характеристика роста суспензионной культуры клеток V Polyscias filicifolia bailey при различных способах культивирования //

85. Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2000. - 24 с.

86. Коваленко П.В., Овсюк Т.Н., Игнатова С.А. Морфогенез в каллусных культурах ярового ячменя // VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл. -М., 1997.-С.111.

87. Ковальская B.C., Сидорова H.B. Характер метилирования генов рДНК в каллусной ткани озимой пшеницы // Респуб. конф. «Проблемы теоретической и прикладной генетики в Казахстане»: Сб. материалов. -Алма-ата, 1990. С.62-63.

88. Коев Г.В. Получение безвирусного посадочного материала хризантем методом культуры тканей //13 рабочее, совещ. руководителей служб защиты раст. в бот. садах и сохр. эколог, равновесия: Тез докл. -Саласпис, 1989-С. 110.

89. Конарев A.B., Хорева В.И. Биохимические исследования генетических ресурсов в ВИРе // Цитология и генетика. 2000. - 34, №2. - С.91-104.

90. Конарев В.Г. Проблемы генома растений // Сельскохозяйственная биология 1985, №5. - С.20-31.

91. Конарев В.Г., Гаврилюк И.П. Принцип белковых маркеров и его использование при анализе исходного и селекционного материала // Сельскохозяйственная биология 1977, №5. - С.677-684.

92. Кондратенко О.В., Митрофанова И.В. Особенности клонального микроразмножения двух сортов миниатюрных роз // Бюл. Госуд. Никитского ботанического сада. 2002. - №86. - С.38-40.

93. Концевая И.И., Яцына A.A. Морфогенетический потенциал листовых эксплантов голубики высокой в условиях in vitro II Вести АН Беларуси. -Серия: биологические науки. Минск, 1998. - №1. - С. 33-37.

94. Копертех Л.Г., Бутенко Р.Г. Нативные фитогормоны экспланта и морфогенез пшеницы in vitro II Физиология растений. 1995. - 42, № 4. - С.555-558.

95. Копертех Jl.Г., Стрибная Л.А. Регенерация растений из листовых эксплантов пшеницы // Физиология растений. 2003. - 50, №3. - С.410-414.

96. Коропачинский И.Ю. Древесные растения Сибири. Новосибирск: Наука, 1983.- 378 с.

97. Коропачинский И.Ю. Роль ботанических садов в охране биологического разнообразия России // Сибирский экологический журнал. -Новосибирск, 1997. 4, № 1. - С. 7-12.

98. Короховой В.И., .Бартиш И.В., Копань В.П. Адвентивный органогенез для некоторых сортов яблони домашней // Всероссийское совещ. «Молодые ученые садоводству России»: Тез докл. - М, 1995. - С. 122123.

99. Красная книга республики Алтай: Редкие и находящиеся под угрозой исчезновения виды растений //Отв. ред. И.М.Красноборов,

100. B.П.Седельников. Новосибирск. 1996. - 130 с.

101. Красная книга РСФСР: Растения // Отв. ред. А.Л.Тахтаджан. М.: Росагропромиздат. - 1988. - 591 с.

102. Крашенинников И.М. О роде Brachanthemum DC/ Ботанический материал Гербария БИН АН СССР М.; Л., 1949. - Т.ХГ. - с. 181 - 200.

103. Кузьмина H.A., Потапова O.A. Культивирование различных сортов роз in vitro II Естественные науки: Биология. 2000. - №5. - С.38-39.

104. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 1. Изменчивость в онтогенезе // Биополимеры и клетка. 1994. - 10, №11. C.5-35.

105. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 4. Изменчивость при дедифференцировке и каллусообразовании in vitro II Биополимеры и клетка. 1998. - 14, №4 - С.298-319.

106. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений. 5. Изменчивость роста и митотического режима в процессе адаптации кусловиям выращивания in vitro II Биополимеры и клетка. 1999. - 15, №5. - С.343-359.

107. Кунах В.А. Изменчивость растительного генома в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro II Физиология растений. 1999. - 46, №6. - С.919-929.

108. Кунах В.А., Алпатова Л.К. Роль фитогормонов в изменчивости числа хромосом в культуре тканей Haplopappus gracilis LII Доклады АН СССР. 1979. - 245, №4. - С.967-970.

109. Кунах В.А., Захленюк О.В. Диплоидизация культуры ткани растений с помощью 5-урацил-тиоуредоглюкозы (тиацила) // Доклады АН СССР. -1984. 279, №5. - С.1241-1244.

110. Кунах В.А., Зосимович В.П. Влияние кинетина на уровень и типы аберраций хромосом в культуре ткнаей Haplopappus gracilis L. II Генетика.-1977.-13, №8.-C.1355-1365.

111. Кунах В.А., Можилевская Л.П., Алпатова Л.К., Губарь С.И. Устойчивость к 5-метилтриптофану и накопление алкалоидов в каллусной культуре раувольфии змеиной Rauwolfia serpentina Benth. II Биотехнология. 2001. - №3. - C.3-10.

112. Кунах В.А., Сидоренко П.Г., Зосимович В.П. Влияние кинетина на репродукцию клеток различной плоидности // Успехи полиплоидии. -Киев: Наукова думка, 1977. С.208-215.

113. Кунах В.А., Шаламай A.C. Кифорак О.В. и др. 5-урацил-тиоуредоглюкоза, обладающая свойством регулировать число хромосом в культуре растительной ткани // A.c. №1074098. Бюл.№10, 1983.

114. Кутас E.H. Введение в стерильную культуру интродуцированных видов рододендронов // Междунар. конф. «Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия»: Сб. материалов-Минск, 2000. С.176-177.

115. Кучеренко Л.А. Биологические особенности риса в культуре in vitro и создание на их основе биотехнологии получения исходногоселекционного материала // Автореф. дис. . докт. биол. наук. М., 1991.-41 с.

116. Кучеренко JI.A. Условия получения растений-регенерантов в культуре тканёй риса // Сельскохозяйственная биология. 1984. - № 4. - С.70-72.ч

117. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

118. Ламанова Т.Г. Брахантемум Баранова Brachanthemum baranovii (Krasch. et Poljak) Krasch.ll Биологические основы охраны редких и исчезающих растений Сибири: Сб. науч. трудов. - Новосибирск, 1990,- С.4-14.

119. Лебедев В.Г., Деменко В.И., Долгов C.B. Регенерация адвентивных побегов из листовой ткани груши обыкновенной (Pyrus communis L.) in vitro // Науч. конф. молодых ученых и специалистов (Москва, 10-11 июня, 1997): Сб. трудов М., 1999. - с. 142-146.

120. Левенко Б.А., Скороход В.А., Беспалов Ç.H., Рубцова М.А. Промышленная технология микроклонального размножения сортов виноргада // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез докл.- Новосибирск. 1988. - С.311.

121. Леонтьев-Орлов O.A. Клональное микроразмножение яблони // IV Всесоюз. конф. «Культура клеток растений и биотехнология»: Тез докл.-Кишинев. 1983. - С. 113.

122. Лесникова Н.П., Сусский А.Н., Горина В.М. Микроразмножение in vitro алычи (Prunus cerasifera EHRH.) как возможность ускорения селекционного процесса // Бюл. Никитского бот. сада. 2002. - вып. 86. - С.57-58.

123. Логинов Ю.П. Полиморфизм белка глиадина как генетический маркер при отборе элитных растений пшеницы сорта Тюменская-80 //

124. Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 1997. - №3-4. -С.20-25.

125. Лубягина Н. П., Ершова Э. А. Рябчик шахматный на Алтае //В сб. науч. тр.» Исчезающие, редкие и слабо изученные растения и животные Алтайского края и проблемы их охраны» . Барнаул, 1987. - С. 14-15.

126. Лубягина Н. П., Ершова Э. А. Рябчик шахматный растение, нуждающееся в охране // Бюл. Главного Бот. сада. - 1990. - вып. 154. -С. 30-34.

127. Лучник З.И. Декоративные растения Горного Алтая. М., 1951. - 223 с.

128. Ляховкин А.Г., Николаев А.П., Учитель В.Б. Стевия медовая трава.-СПб: ЗАО «Весь». - 1999. - 94 с.

129. Майстренко Г.Г., Гордиенко Н.Я., Тищенко С.Ю. Морфогенез сенполий в культуре in vitro при экзогенном внесении гормонов //VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл. М., 1997. - С.125.

130. Матушкина О.В., Пронина И.Н. Регенерация груши in vitro I I VIII Междунар. конф. «The Biology of Plant Cells In Vitro and Biotechnology»: Тез. докл.- Саратов: Изд-во Саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. С.197.

131. Машкина О.С., Табацкая Т.М., Стародубцева Л.М. Длительное микрочеренкование для массового клонального размножения карельской березы и тополя // Физиология растений. 1999. - 46, №6. - С.950-952.

132. Мезенцева О.Ю. Использование тканевых и клеточных культур в селекции на устойчивость к фитопатогенам // Селекция и семеноводство. 1990. - №4. - С.59-62.

133. Мику В.Е., Кисничан Л.П., Багдасараев С.М. Стевия перспективная культура для производства низкокалорийных и диетических продуктов // Пищевая промышленность.-М., 1999. - №10.-С.32.

134. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. Новосибирск: Наука, 1991.-272 с.

135. Мусиенко М.М., Тагень М., Абу Д.М. Молекулярное маркирование генотипов Triticum aestivum L. на основе электрофоретических спектров запасных белков // Украинский ботанический журнал. 1994. - 51, №5. - С.21-23.

136. Мусияка В.К. Влияние эмистима и других регуляторов на рост и морфогенез изолированных тканей кукурузы // Физиология и биохимия культурных растений 1998. - 30, №4. - С. 258-263.

137. Мусияка В.К., Желтоножская Л.В., Каменчук О.П. Индукция морфогенеза в длительно культивируемых каллусных тканях люцерны // Междунар. конф. в Институте физиологии растений и генетики АН УССР: Тез. докл. Киев, 1988. - С.82.

138. Мухаметвафина A.A. Регенерация in vitro Lilium regale Wils.II Молодеж. науч. конф. «Актуальные проблемы биологии и экологии»: Тез. докл. -Сыктывкар, 2002. С. 102-103.

139. Мухитов А.Р., Румянцева Н.И. Индукция колхицином морфологической и генетической нестабильности каллусов Fagopirum tataricum II Цитология. 2002. - №7. - С.628-631.

140. Наумова Г.А. Культура киви //Садоводство и виноградарство. — 1988, №3. С.30-31.

141. Неделчева С. Влиянето на някои ауксини и цитокинини върху органогенезиса при калусни култури от кайсиеви кръстоски. II. Органогенезис // Растениеъдчески науки. 1998. - 35, №8. - С.626-628.

142. Носырева М.В., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Изучение регенерационной способности изолированных почек Adonis vernalis L. в культуре in vitro II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 2002. - №3. -С.98-100.

143. Носырева М.В., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Регенерация и размножение растений бегонии in vitro II Известия АГУ. Барнаул: Изд-во АГУ, 2004, №3. - С.94-97.

144. Носырева М.В.,Соловьева В.В., Вечернина Н.А Таварткиладзе O.K. Введение в культуру in vitro Adonis vernalis L. II Междунар. совещ. (2124 августа 2001 г.) «Проблемы охраны растительного мира Сибири»: Тез. докл. Новосибирск, 2001. — С.72.

145. Нурмуханбетова Г.А. Клональное микроразмножение касатиковых // Физиология роста и устойчивости интродуцированных растений в Казахстане: Сб. ст. Алма-ата, 1986. - С.139-148.

146. Олешко Е.В. Особенности размножения вишни in vitro II IV Всесоюз. конф. «Культура клеток растений и биотехнология»: Тез докл.-Кишинев. 1983. - С. 114.

147. Олешко E.B. Особенности размножения вишни in vitroll Культура клеток растений и биотехнология. -М.:Наука, 1986. С.117-120.

148. Перуанский Ю.В., Абугалиева А.И. Выделение биотипов риса по данным электрофореза запасных белков // Доклады РАСХН №1. -С.10-12.

149. Петрова Е.JI. Длительное хранение растений ежевики в условиях in vitro II VIII Междунар. конф. «The Biology of Plant Cells In Vitro and Biotechnology»: Тез. докл.- Саратов: Изд-во Саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. С.251.

150. Печеницын В.П., Ефимков В.А., Весманова О .Я., Крюкова О.З. Получение асептических эксплантов монстеры превлекательной и их морфогенетическая активность in vitro II Интродукция и акклиматизация растений (Ташкент). 1996. - №27. - С. 123-126.

151. Пиралов Г.Р., Абраимова O.E. Особенности роста и дифференциации длительно пассируемой каллусной культуры линии кукурузы ДК675 // Физиология и биохимия культурных растений — 2000. 32, №5. - С. 372376.

152. Полевой В.В. Физиология растений. М.: Высшая школа. - 1989. - 464 с.

153. Полевой В.В., Саламатова Т.С. Физиология роста и развития растений. -Л.: Изд-во Ленинградского ун-та, 1991. 240 с.

154. Полынцева H.A., Утемова JI.Д. Адонис весенний, горицвет, Adonis vernalis L. II Биоэкологические особенности растений Сибири, нуждающихся в охране. Новосибирск: Наука, 1988. - 220 с.

155. Поляков A.B. Комплексное использование биотехнологических методов в селекции растений // Достижения науки и техники АПК. 2002. - №10.- С.21-23.

156. Попович Е.А., Решетников В.Н. Адвентивный органогенез у клематиса гибридного // VIII Междунар. конф. «The Biology of Plant Cells In Vitro and Biotechnology»: Тез. докл. Саратов: Изд-во саратовской губернской торгово-промышленной палаты, 2003. - С.261.

157. Попович Е.А., Филипеня В.Л. Влияние экзогенного цитокинина на жизнеспособность эксплантов голубики высокой in vitro II Физиол. раст.- 1997. 44, №1. - С. 104-107.

158. Пугачев P.M. Подбор оптимального состава питательной среды для клонального размножения in vitro видов сливы (Prunus L.) II Регуляция роста, развития и продуктивности растений. Минск, 1999. - С. 152153.

159. Путенихин В.П. Культура изолированных почек лиственницы Сукачева // Биология культивируемых клеток и биотехнология. М.: Наука, 1991.- С. 224 -227.

160. Ракитин Ю.В. Химические вещества стимуляции и торможения физиологических процессов растений. М.: Изд-во АН СССР, 1959. -294 с.

161. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения сем. Asteraceae (Compositeae)/ Отв. ред. П.Д.Соколов. С-Пб.: Наука, 1993. - 352 с.

162. Редкие и исчезающие виды растений Тувинской АССР / Отв. ред. К.А.Соболевская, И.М. Красноборов. Новосибирск: Наука. - Сиб. отд., - 1989.-271 с.

163. Риекстиня В.Э., Риекстиныи И.Р. Клематисы. Л.:Агропромиздат. Ленингр. отд., 1990. - 287 с.

164. Родина Е.А., Катаева Н.В. Особенности образования каллуса и регенерация почек при культивировании зародышей Picea abies L. in vitro II V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез.докл. Новосибирск, 1988.-Ч. 1.-С. 133-134.

165. Румынии В.А. Массовое размножение in vitro луковичных и клубнелуковичных растений // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез докл.- Новосибирск. -1988.-С.368.

166. Сааков С.Г. Оранжерейные и комнатные растения и уход за ними. Л.: Наука, 1983.-621 с.

167. Сатарова Т.Н. Прямая регенерация растений в культуре пыльников кукурузы // Физиология и биохимия культурных растений 2002. - 34, №2. - С. 152-157.

168. Сафразбекян С.А., Катаева Н.В. Микроклональное размножение каперса in vitro: влияние условий культивирования на появление аномальных побегов // Второй съезд Всесоюз. общ-ва физиологов растений, Минск, 1990, Тез.докл. 4.2. - М.,1992. - С. 189.

169. Свитайло A.M., Бондаренко П.Е., Шевчук Н.С. Клональное микроразмножение подвоев и сортов плодовых культур // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез.докл. -Новосибирск, 1988 т.2, С.346.

170. Семенова Г.П. Интродукция и охрана редких и исчезающих видов флоры Сибири // Сибирский экологический журнал Новосибирск, 1997. - Т.4, №1. - С. 19-29.

171. Сенцова О.Ю., Максимов В.М. Действие тяжелых металлов на микроорганизмы // Успехи микробиологии. 1985. - 20, №2. - С.36-39.

172. Сидоров В.А. Биотехнология растений. Клеточная селекция. Киев: Наукова думка, 1990. - 280 с.

173. Сидорович Е.А., Кутас E.H. Клональное микроразмножение интродуцированных сортов голубики высокой и брусники обыкновенной в культуре in vitro в связи с генотипами // Вести АН Беларуси. Серия: биологические науки.-Минск, 1998.-№3.-С.5-9.

174. Сидорович Е.А., Кутас E.H. Клональное микроразмножение новых плодово-ягодных растений // Минск: Изд-во «Навука i тэхшка », 1996. -246 с.

175. Сидорович Е.А., Кутас E.H., Филипеня В.Л. Влияние осмотических ингибиторов на сохранение жизнеспособности интродуцированных сортов Vaccinium corymbosum L. и Vaccinium vitis-idea L. в культуре in vitro II Доклады АН Беларуси. 1995. - 39, №1. - С.63-66.

176. Сирота С.М., Жаркова C.B., Вечернина H.A., Таварткиладзе O.K. Методы получения и ранняя диагностика гибридного потомства Allium сера L. И Методические указания. 2001. - Барнаул:Изд-во АГУ. - 21 с.

177. Смирнов В.А., Латыпов С.А., Перчуляк Л.П. Оптимизация питательной среды для побегообразования в культуре клеток томатов // Культура клеток растений и биотехнология. М., 1986.-С. 128-132.

178. Смит М.В., Моисеева H.A. Капсулирование соматических эмбриоидов и регенерация растений моркови // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.:Наука, 1991. С. 186-189.

179. Смолин A.M. Получение оздоровленного посадочного материала хризантем в культуре ткани // Юбилейная конф. «75 лет сельскохозяйственному образованию на Урале»: Тез. докл.- Пермь, 1993.-С. 61-63.

180. Соболевская К.А. Исчезающие растения Сибири и интродукция. -Новосибирск: Наука, 1984.- 219 с.

181. Соловьев A.A. Лютиковые Алтайской горной страны и их охрана: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Алт. гос. ун-т. Барнаул, 1999. - 22 с.

182. Солодкая Л.А. Генетические особенности соматических клеток клевера лугового (Trifolium pratense L.) и их использование в селекции // Автореф. . дис. канд. биол. наук. -М., 1987. -22 с.

183. Спасеноски М., Колева Л. In vitro органогенеза на хипокотилии и котиледони од пиперка (Capsicum аппиит L. сорта Куртовска Kannja)// Год. зб. Биол./Прир.-мат. фак. Унив., CKonje. 1995. - 48. - С.21-32.

184. Станилова М. In vitro регенерация на блатно кокиче {Leucojum aestivum L) от листки експланти // Bulg. J. Plant Physiol. 1994. - 20, №1-4. - С. 89-94.

185. Станис В.А., Стане Г.В. Влияние фитогормонов на морфогенез семядолей яблони в культуре ткани // Физиология растений 1991. - 38, №2.- с.392-398.

186. Стахеева Т.С., Васильева О.Г. Размножение интродуцированных рододендронов методом in vitro II Междунар. конф., посвящ. 90-летию со дня рождения члена-корресп. РАН П.И.Лапина «Проблемы дендрологии на рубеже 21 века».: Тез. докл.-М., 1999. С.339-341.

187. Ступницкий В.А., Глеба Д.М. Индукция in vitro морфогенеза у банана карликового {Musa папа) II V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез. докл. Новосибирск, 1988,4 2. -С.325-326.

188. Стыцко С.А., Глотова Л.В., Теслюк Н.И. Применение кукурузного крахмала в культуре винограда in vitro II Виноград и вино России. -2000.- №3. С.48-49.

189. Субботин Г.И. Вишня в Южной Сибири. Барнаул: Изд-во Алт. госуниверситета, 2002. - 145 с.

190. Суриков И.М. Несовместимость и эмбриональная стерильность растений . М.: Агропромиздат, 1991. - 220 с.

191. Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A. Методы in vitro для размножения и сохранения Fritillaria meleagris L. и F.verticillata Wild. II Флора и растительность Алтая. Барнаул: Изд-во АГУ. - 1996. - С.136-139.

192. Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A. Сохранение генофонда растений в коллекции культур in vitro II Известия АГУ.- Барнаул: Изд-во АГУ.-1999, Спец. выпуск С. 13-15.

193. Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A. Ускоренное размножение in vitro и адаптация in vivo ремонтантных сортов земляники // Междунар. конф. «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий»: Тез. докл. Саранск: Изд-во МГУ.- 2001.-С.

194. Таварткиладзе O.K., Вечернина H.A., Кутубидзе В.В. Биотехнологические методы в селекции и размножении актинидии китайской// Субтропические культуры 1990. - №2. - С. 136-140.

195. Танклевский М.М., Голодрига П.Я., Зленко В.А., Танклевский A.M. Контейнер для микроразмножения растений. А.с.1341114, СССР. Б.И. 1987, №36.

196. Тарлаковская A.M., Эгги Э.Э., Гаврилюк И.П., Беляева Ж.И. Идентификация сортов гороха методом электрофореза белков семян/ Методические указания.- Д., 1990. 22 с.

197. Тиссера Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений // Биотехнология растений: культура клеток. М.:ВО «Агропромиздат», 1989. - С.97-127.

198. Третьяк С.А. Размножение хризантем методом культуры ткани // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез.докл.- Новосибирск, 1988.-4.2.-С.332.

199. Трускинов Э.В. Биотехнология и сохранение мирвого генофонда картофеля // VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл М., 1997. - с. 535.

200. Тукей Т. Регуляторы роста в сельском хозяйстве. М: Изд-во иностр. лит., 1959.-258 с.

201. Туровская Н.И., Стрыгина О.В. Микроклональное размножение малины // Садоводство и виноградарство. 1990. - №8. - С.26-29.

202. Тюкавин Г.Б. Стевия простой способ клонального микроразмножения in vitro и адаптации in vivo// VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл. -М., 1997.-С. 471.

203. Тюкавин Г.Б., Шмыкова H.A. Культура неопыленных семяпочек моркови // Междунар. науч.-практ. конф. «Селекция и семеноводство овощных культур в XXI веке». М., 2000, Т.2, - С.275-277.

204. Тюкавин Г.Б., Шмыкова H.A., Монахова М.А. Цитология эмбриогенеза в культуре пыльников моркови // 'Физиология растений 1999. - 46, №6. -С.876-883.

205. Умаров З.М. Влияние концентрации сахарозы на рост недозрелых гибридных зародышей хлопчатника // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез. докл. Новосибирск, 1988.-С.241.

206. Упадышев М.Т., Высоцкий В.А. Размножение ежевики и малины черной методом культуры тканей // Садоводство и виноградарство М.,1991. -№6. - С.24-27.

207. Упадышев М.Т., Гуськов A.B. Салициловая кислота как регулятор ризогенеза у плодовых и ягодных культур in vitro II Сельскохозяйственная биология. Серия: Биология растений 1998. -№5. - С.63-68.

208. Упадышев М.Т.Клональное микроразмножение садовых культур на безагаровой среде // Садоводство и виноградарство. 2000. - №5-6. -С.20-21.

209. Уразбахтина H.A., Мардамшин А.Г. Содержание таксола в каллусной ткани из однолетней хвои и побегов Taxus baccata L. II Растительные ресурсы. 2001.-37, №2. - C.96-100.

210. Флора Сибири: Asteraceae (Compositeae) / Сост. И.М.Красноборов, М.Н.Ломоносова, H.H. Тупицина и др.- Новосибирск: Наука, 1997.- Т. 13.-472 с.

211. Хавкин Э.Е., Забродина М.В. Наследуемые изменения в спектрах пероксидаз и эстераз у сомаклонов кукурузы // Физиология растений. -1994. 41, №6. - С.127-128.

212. Хадеева Н.В., Гордон Н.Ю. Некоторые закономерности столонообразования при культивировании стахиса in vitro II Физиология растений 1998. - 45, №2. - С.301-307.

213. Хапова С.А. Реакция изолированных побегов земляники на присутствие гербицидов в питательной среде // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез. докл.- Новосибирск. -1988.-С.382.

214. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro / Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.:Агропромиздат. -1987. — С.105-133.

215. Хеншоу Г.Г., О'Хара Дж.Ф. Методы in vitro для сохранения и использования мирового генофонда растений / Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.:Агропромиздат. - 1987. - С.205-224.

216. Цаценко H.H. Культура соматических тканей сорго // Междунар. науч.-практ. конф. «Селекция, семеноводство, технология возделывания и переработки сорго»: Тез. докл. Зерноград, 1999. - С.82-83.

217. Цветановска Л., Спасеноски М. Можности за регенеращуа на домати от котиледони на различии медиуми // Год. зб. биол. / Прир. мат. фак. Унив., CKonje. 1995. - 48. - С. 7-19.

218. Чайлахян М.Х. Химическая регуляция роста и цветения растений // Вестник АН СССР. 1969. - 35, №10. - С.21-26.

219. Чайлахян М.Х., Бутенко Р.Г., Кулаева О.Н. Терминология роста и развития высших растений. М.: Наука, 1982. - 96 с.

220. Чережанова JI.B., Мелик-Саркисова О.С., Овчинникова В.Н. Цитогенетический эффект Сахаров // Генетика. 1991. - Т.27. - С. 13721378.

221. Чуб В.В., Власова Т.А., Бутенко Р.Г. Каллусогенез и морфогенез в культуре генеративных органов весенне-цветущих видов Crocus L. II Физиология растений 1994. - Т.41, №6. - С.815-820.

222. Чулафич Д., Грубиш Д., Вуничич Р., Волкова Л.А., Попов A.C. Соматический эмбриогенез in vitro диоскореи кавказской и балканской и криосохранениеих органогенных каллусных тканей //Физиология растений 1994. - 41, №6. - С.929-934.

223. Шамина З.Б. Генетическая изменчивость в популяциях соматических клеток растений в культуре // Автореф. дис. . докт. биол. наук. Д., 1988. 34 с.

224. Шарикова Л.А., Солодкая Л.А., Лапотышкина Л.И. Флуоресценция хлорофилла как метод отбора устойчивых к кислым почвам формклевера лугового // V Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология»: Тез докл. Новосибирск. - 1988, 42. -С.386.

225. Шевелуха B.C. Проблемы, приоритеты и масштабы сельскохозяйственной биотехнологии в XXI веке // Вестник РАСХН. -2000, №4.-с.27-31.

226. Шипунова A.A. Клональное микроразмножение садовых растений: Автореф. дис. . канд. с/х наук. М., 2003. - 24 с.

227. Шмыкова H.A., Тюкавин Г.Б. Особенности морфогенетических изменений в культивируемых in vitro пыльниках моркови // Биотехнология 2002. - №5. - С.65-69.

228. Шривастова Д.К., Андрианов В.И.,Пирузян Э.С. Органогенез и регенерация в культуре тканей арбуза // Физиология растений 1988. -35, №6.-С. 911-920.

229. Шумный В.К. Генная и хромосомная инженерия для растений // Вестник РАН. 2001.- т.71, №8. - с.725-732.

230. Эльконин JI.A., Тырнов B.C., Папазян Н.Д., Ишин А.Г. Культура соматических ктаней сорго. Фитогормональная регуляция морфогенеза // Физиология растений 1986. - 33, №3. - С.504-512.

231. Яцына A.A., Концевая И.И. Клональное микроразмножение морошки приземистой (Rubus chamaemorus L.) II VII Междунар. конф. «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда»: Тез.докл. М., 1997. - С.393.

232. Яшина И.М. Перспективы использования методов культуры клеток и тканей в селекции картофеля /В сб. научн. трудов. «Исследования по клеточной селекции картофеля», М., 1984. С.5-13.

233. Aitken J., Horgan K., Thorpe T. Influence of explant selection on the shoot-forming capacity of juvenile tissue of Pinus radiata II Can. J. Forest Res. -1981.-11,№1.-P.112-118.

234. Ajithkumar D., Seeni S. Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (.L.) Corr., a medicinal tree I I Plant Cell Repts. 1998. - 17, №5. - P. 422-426.

235. Al-Maarri K., Arnaud Y. Microrpropagation of Pyrus communis cultivar "Passe Crassane" seedlinds and cultivar "Williams": Factors affecting root formation in vitro and ex vitro II Sei. hort. (Neth.). 1994. - 58, №3. - P.207-214.

236. Amo-Marco J.B., Picazo I. Effect of growth regulators on in vitro propagation of Ficus benjamina cv. Exotica // Biol, plant. 1994. - 36, №2. - P.167-173.

237. Anderson S., Lewis-Smith A.C., Smith S.M. Methylation of ribosomal RNA" genes in Petunia hybrids plants, callus cultures and regenerated shoots // Plant Cell Repts.- 1990.- 8, № 9. P.554-557.

238. Andersson W.S. Mass propagation by tissue culture: principls and techniques // Proceedings of confer. On nursery production of fruit plants through tissue culture-applications and feasibility Maryland - 1980. - P. 1-10.

239. Arapetyan E., Bilinska I. Antibiotics help plants in struggle with bacteria and fungi: Abstr. 11th Congress of the Federation of European societies of Plant Physiology, Varna, 7-11 Sept., 1998 // Bulg. J. Plant Physiol. 1998. - Spec, issue.-P.223.

240. Asokan M., O' Hair S., Litz R. In vitro plant development from bulbil explants of two Dioscorea species // Hort. Science 1983. - 18, №5. - P.702-703.

241. Auer A., Leonhardt W. Zertifiziertes Rebenvermehrungsgut in vitro-kultur von Reben.T.4 // Winzer. 2000. - jg.56, H.9. - S. 19-22.

242. Baburaj S., Ravichandrum P., Selvapandian M. In vitro adventitions shoot177formation fron leaf cultures of Clerodendrum inerme (L.) Gaertn. II Indian J. Exp.Biol. 2000. - 38, №12. - P.1274-1276.

243. Bach A., Warchot M., Gtogowska-Szwiec M. Indukcia kalusa hiacynta (Hyacinthus orientalis L.) // Rocz. AR poznaniu. Ogrod. 2000. - №29. -P.5-9.

244. Baenziger P.S., Kudirka D.T., Schaeffer G.W., Lazar M.D. The significance of doubled haploid variation // Gene manipulation in plant improvement. New York; London, 1984.- P.385-414.

245. Bais H.P., Walker T. S., McGrew J.J., Vivanco J. M. Factors affecting growth of cell suspension cultures of Hypericum perforatum L. (St. John's wort) and production of hypericin I I In Vitro Cell, and Dev. Biol. Plant. 2002. - 38, №1.-C. 58-65.

246. Bao-Hong Z., Fang L., Chang-Bing Y. Plant regeneration via somatic embryogenesis in cotton // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 2000. - 60, №2. - c.89-94.

247. Barabas Z., Kertess Z., Purnhauser L., Sagi F., Pauk J. Breeding on a cellular level and research on Fi hybrid development // Curr. Options Cereal Improv. -Dordrecht etc. 1989. - P. 11-18.

248. Barghchi M., Turgut K., Scott R., Draper J. High-frequency transformation from cultured cotyledons of Arabidopsis thaliana ecotypes "C24" and "Landsberg erecta" // Plant growth Regul. 1994. - 14, №1. - C.61-67.

249. Barker P., Fossard R., Bourne R. Progress toward clonal propagation of Eucaliptus species by tissue culture techniques I I Comb. Proc. / Internat. Plant Propagator's Soc. Milltown. - 1977. - vol. 27. - P.546-556.

250. Barwale U.B., Widholm J.M. Somaclonal variation in plants regenerated from cultures of soybean // Plant Cell Rep. 1987. - 6, №5. - P.365-368.

251. Bass A., Hughes W. Conditions for isolation and regeneration of viable protoplasts of oil palm (Elaeis guineensis) // Plant Cell Repts. 1984. - 3, №5. -P.169-171.

252. Berardi G. Indagine preliminare sulla rigeneration di plantule «in vitro» da rose petalidi // Colt. Prot. 1989. V.18, № 8-9. P.l 11-113.

253. Berthouly M., Guzman N., Chatelet P. Micropropagation in vitro dedifferentes ligness de Coffea arabica var. Camitor //12 Colloq. Sei. int. café, Montreux / Paris/ 1988. - P.462-467.

254. Besendorfer V., Zoldos V., Pescan Т., Krsnik-Rasol M., Littvay Т., Papes D. Identification proteinal cytogenetical and biochemical markers in bioindication of common oak forests // Phyton. 1996. - 36, №3. - P. 139146.

255. Bhalla P.L., Sweeney К. Direct in vitro regeneration of the Australian fan flower, Scaevola aemula R. Br. II Sei. hort. (Neth.). 1999. - 79, №1-2. -P.65-74.

256. Bhatt I.D., Dhar U. Micropropagation of Indian wild strawberry // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 2000. - 60, №2. - c. 83-88.

257. Bhattacharya K., Sengupta L., Sharma N. Effect of some growth regulators on callusing in Dalbergia sissoo II Bionature. 1990. - 10, №1-2. - P. 19-22.

258. Bhattacharya P., Dey S., Das N., Bhattacharyya В. C. Rapid mass propagation of Chrysanthemum morifoliumby callus derived from stem and leat explants // Plant Cell Repts. 1990. - 9, № 8. - P.439-442.

259. Bhojwani S., Millina K., Cohen D. In vitro propagation of Pyrus purifolia II Sei. Hort. (Neth.) 1984. - 23, №3. - P.247-254.

260. Bi C., Huo Y., Feng Q., Zhou C., Huang Z., Shen Y. Предварительные исследования по быстрому микроразмножению Cymbidium hybridum II J. Hebei. Norm. Univ. 2002. - 26, №2. - P.190-192.

261. Binsfeld P.C., Schnabl H. Analisis of somatic embryogenic-derived somaclones of perennial Helianthus sp. II J.Appl.Bot.- 2000. 74, №5-6. — P.224-228.

262. Binsfeld P.C., Wingender R., Wunder J., Schnabl H. Direct embruogenesis in the genus Helianthus and RAPD analysis of obtained clones // J. Appl. Bot. -1999.-73, №3-4.-P. 63-68.

263. Blakesley D., Kieman RJ. Cryopreservation of axillary buds of a Eucalyptus grandis X Eucalyptus camaldulensis hybrid // Cryo-Lett. 2001. - 22, №1. -P.13-18.

264. Bohanec B., Osvald J. Moznosti zlahtnjenja radica (Cichorium intybus L.) z vkljucevanjem biotehnoloskih postopkov // Zb. Biotehn. Fak. Univ. Ljubljani.- 1987. 47. - P.33-37.

265. Bohanes B., Jakse M., Ihan A., Javornik B. Studies of gynogenesis in onion (Allium cepa L.): Induction procedurus and genetic analysis of regenerants I I Plant Cell, Tissue and Organ Cult.-1995. -40, №3. -P.205-208.

266. Bojarczyk K. Regeneracja wybranych odmian rozaneznikow z pakow boczych I prybyszowych w kulturach in vitro II Arbor. Kor. 1996. - 4, №41. -P.109.

267. Bonga J.M. Applications of tissue culture in forestry // Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture, Ed. by Reinert J., Bajaj Y.P.S. 1977. - Part 5. - P.93-107.

268. Borad V.P., Barvt D.M., Macwan S.J., Mehta A.R. Regeneration of plantlets in Sapindus trifoliatus L. II Indian J. Exp. Biol. 2001. - 39, №12. - P. 12881292.

269. Borthakur M., Hazarica J., Singh R.S. A protocol for micropropagation of Alpinia galanga II Plant Cell, Tissue, Organ Cult. 1998. - 55, №3. - P.231-233.

270. Boudok A., El-Agamy S., Gabr M., El-Din L., Khalil F. In vitro micropropagation of «Wardi Red» pomegranate (Punica granatum L.) // Egypt. J. Hort. 1986. - 13, №2. - P. 103-108.

271. Branchard M. Application des vitromethodes a la mise en oeuvere de programmes de selection de plantes resistantes a des maladies // Agronomie. -1984.-4,№9.-P.905-911.

272. Brandle J.E., Rosa N. Heretability for yeld, leaf: stem ratio and stevioside content estimated from a Candrace Cultivar of Stevia rebaudiana II Can. J. Plant Sci. 1992. - 72, №6.-P.1263-1266.

273. Bransal R., Driver J.A., Durzan D.J. Adventitious embriogenesis and plant regeneration from rescued embryod of peach, Prunus persica L. II Indian. J. Exp. Biol. 1991. - 29, №4. - P.334-337.

274. Brother H., Naumann K., Griesbach E. Die Oflecken kranknelt der Begonien (Xanthomonas campestris pv. begonieae) in der DDR // Nachrbl. Pflzschutz in DDR- 1985.- 39,№1.- P.M.

275. Burns J.A., Schwarz O.J. Bacterial stimulation of adventitions rooting on in vitro cultured slash pine (Pinus elliottii Engelm.) seedling explants // Plant Cell Repts. 1996. - 15, №6. -P.405-408.

276. Cameiro M.F.N., Ribeiro T.M. In vitro culture of meristems and plant regeneration in cvs. Caturra, Catual and in two selections S.4 Agaro and DK 1/6 // Physiol. Plant. 1990. - 79, №2, Pt.2.- P.5.

277. Cane K., Bandyopadhyay S., Rasmussen G. Efficient plant regeneration from seedling explants of two commercially important temperature eucalypt species. Eucalyptus nitens and E. globules // Plant Sci. - 1999. - 140, №2. -P.189-198.

278. Cavallini A., Lupi M. Cytological study of callus and regenerated plants of sunflower {Helianthus annuus L.) // Plant Breed. 1987. - 99, №3. - P.203-208.

279. Chalupa V. Rust lesnich stromu vypestovan ych in vitro z organovych kultur a ze somatickych embryi // Les. Pr. 2000. - 79, №11. - P.498-501.

280. Chalupa V. Somatic embriogenesis and plant regeneration in Norway spruce СPicea abies L. (Karst.) II Acta Univ. Carol. Biol. 1997. - 41, №1-2. -P.13-22.

281. Chamhum S.L.C., Vieccelli J.C., Lopes S.D., Campos O.W., Sister C.E. Micropropaga de caquizeiro (Diospyros kaki L.) por meio de gemas laterais e apicais de plantas adultas I I Rev. ceres / Univ. fed. Vicosa.- 1999. 46, №265. - P.267-277.

282. Chand H., Pearson M.N., Lovell P.H. Rapid vegetative multiplication in Colocasia esculenta (L) Scott (taro) // Plant Cell, Tissue and Organ Cult.1998. 55, №3. - P.223-226.

283. Chaturvedi H., Misra P., Sharma M. In vitro multiplication of Rosmarinus officinalis L. II Z. Pflanzenphysiol. 1984. - 113, №4. - P.301-304.

284. Chen D., Xu C., Zhang S. Изучение системы непосредственной регенерации побегов Citrus sinensis in vitro с большим выходом II J. Zhejiang Univ. Agr. And Life Sei.- 2000. 26, №5. - S.493-499.

285. Chen H. Цито-гистологическое исследование на адвентивных почках дифференцирующихся из кончиков адвентивных корней Trichosanthes kirilowii II Acta bot. yunnanica. -2001.-23, №4. P.488-492.

286. Cheng Z.-M., Schurr J.P., Dai W. Micropropagation of Betula platyphylla "Fargo" via shoot tip culture and regeneration from leaf tissues// J. environm. Hortic. 2000. - 18, №2. -P.l 19-122.

287. Chirta V.D.S., Padmaja G. Clonal propagation of mulberry (Morus indica L. cultivar M-5) through in vitro culture of nodal explants II Sei. hort. (Neth.).1999. 80, №3-4. -P.289-298.

288. Chua В., Kunisaki J., Sagawa Y. In vitro propagation of Dracaena marginata L. //Hort. Sei. 1981.- 16,№4.-P.494-495.

289. Collins G.B., Vian W.E., Phillips G.C. Use of 4-amino-3,5,6-trichlorpicolinic acid as an auxin source in plant tissue cultures II Crop. Sei. 1978. - 18, №2. -P.286-288.

290. Corley R.H.V., Wong C. Y., Wooi K.C. Early results from the first oil palm clone trails // Oil Palm in agriculture in the Eighties. PORIM Confer., Kuala Lumpur. 1981.-P. 1-27.

291. Cossio F., Bossi L. Mikropropagazione delcrizanttemo//Colt. prot. 1982. -5, №45. -P. 49.

292. Cronauer S., Krikorian A.D. Rapid multiplication of bananas and plantains by in vitro shoot tip culture // Hort. Sei. 1984. - 19, №2. - P. 234-235.

293. Cuellar J. M. Propagación vegetative in vitro a partir de hojas jóvenes de cana de azúcar {Saccarum officinarum L.) // Agron mesoamer. 1997. - 8, №1. -P.74-80.

294. Carmen M.M., Garcia M.D. Analysis of genetic variability in long-term callus cultures and regenerated plants of maize // Cytologia. 1998. - 63, №2. -P.183-190.

295. Chirta V.D.S., Padmaja G. Clonal propagation of mulberry {Morus indica L. cultivar M-5) through in vitro culture of nodal explants // Sei. hort. (Neth.). -1999. 80, №3-4. - P.289-298.

296. Czechowiak C., Dubois J., Vasseur J. Culture in vitro du Stevia rebaudiana Bertoni //C.R.Acad. sei. 1984. - ser.3, 298, №6. - P. 173-176.

297. Dahleen L.S. Improved plant regeneration from barley callus cultures by increased cooper levels // Plant Cell, Tissue and organ Cult. 1995. - 43, №3. - P.267-269.

298. Dantu P., Bhojwani S. In vitro propagation and cort formation in gladiolus // Gartenbanbauwissenschaft. 1987. -52, №2. -P.90-93.

299. Daquinta M., Concepción O., Trujillo R., Cobo I., Escalona M., Borroto C. Callus formation from inflorescences in Rhapis excelsa II Principes. 1997. -41, №1. -P.50-51.

300. Das A., Paul., Chaudhuri S. Micropropagation of sweet organce, Citrus sinensis Osbeck. for the development of nucellar seedlings // Indian J. Exp. Biol. 2000. - 38,№3. - P.269-272.

301. Das D.K., Prakash N. S., Bahalla-Sarin N. An efficient regeneration system of black gram (Vigna mungo L.) through organogenesis // Plant Sei. 1998. -134, №2.-P. 199-206.

302. Datta S., Datta K. Auxin induced regeneration of forest tree Dalbergia sisso Roxb. through tissue culture // Curr. Sei. (India). - 1983. - 52, №9. - P.434-436.

303. Davies P.A., Morton S. A comparison of barley isolated microspore and anther culture and the influence of cell culture density // Plant Cell Repts. -1998. 17, №3. - P.206-210.

304. De Carlo A., Benelli C., Lambardi M. Development of a shoot-tip vitrification protocol and comparison with encapsulation-based procedures for plum {Prunus domestica L.) cryopreservation // Cryo-Lett. 2000. - 21, №4. -P.215-222.

305. De Klerk G.J., Ter Brugge J. Effectiveness of indoleacetic acid, indolebutyric acid and naphthaleneacetic acid during adventitions root formation in vitro in Malus "Jork 9" II Plant Cell, Tissue and Organ cult. 1997. - 49, №1. - P.39-44.

306. De Mello C.D., Pasqual M., Inshida J.S. Efeitos do acido indolbutirico e sais mineralis sobre o enraizamento in vitro de brotos do ponta-enxerto de macieira MI-793 // Rev. ceres. Univ. fed. Vicosa. 1994. - 41, №236. -P.379-385.

307. De Rijck G., Schrevens E. Comparison of the mineral composition of twelve standard nutrient solutions // J. Plant Nutr. 1998. - 21, №10. - P. 2115-2125.

308. Debergh P. Effects of agar brand and concentration on the tissue culture medium // Physiol.plant. 1983. - 59, №2. - P.270-276.

309. Demeke Т., Hughes H.G. Micropropagation of Phytolacca dodecandra through shoot-tip and nodal cultures // Plant Cell Repts. 1990. - 9, №7. -P.390-392.

310. Deshpande S.R., Josekutty P.C., Prathapasenen G. Plant regeneration from aillaiy buds of a mature tree of Ficus religiosa II Plant Cell Repts. 1998. -17, №6-7.-P.571-573.

311. Diaz Т., Mosquer M.V., San Rose m.C., Gonzales E. Effect of culture media and explant type on propagation of Vitis vinifera L. cv. Albarino // Vitis: viticulat and Enol Absir. 1999. - 38, №3. - P.6-7.

312. Ding L., Liu G., Tian W., Jing X., Zhang Y. Исследования по культуре ткани и клональному размножению Lilium congiflorum х L. formosanum II J. Northw. Norm. Univ. Natur. Sci. 2001. - 37, №1. - P. 80-82.

313. Dobrota C. Relations between growth, chlorophyll content and nitrate distribution in Zea mays /growing under nitrogen limitation // Stud. Univ. Babes-Bolyai. Biol. 1999. - 44, № 1-2. - P. 109-116.

314. Dolezel J., Lucretti S., Novak F. The influence of 2,4-D on cell cycle kinetics and sister-chromatid exchange frequency in garlic {Allium sativum L.) meristem cells // Biol, plant. 1987. - 29, №4. - P.253-257.

315. Dujnkova M., Mala J., Chalupa V. Vegetativni rozmnozovani breku {Sorbus torminalis L. Crantz) a oskeruse {Sorbus domestica L.) in vitro II Pr. VULHM. 1992. - №77. - P.27-48.

316. Durmishidze S.V., Gogoberidze M.K., Mamaladze M.N. Regeneration of plants from callus tissue of Yucca gloriosa buds // Z.Pf^lanzenphysiol. 1983.- Ill,№2.-P. 179-182.

317. Duron M. In vitro propagation of ornamental INRA Malus x Perpetu Evereste // Sci. hort.(Neth.) 1984. - 22, №1-2. - P. 133-137.

318. Echeverrigay S., Biaso S., Fracaro F. Clonal micropropagation of Roman chamomile (Anthémis nobilis L.) II J. Herbs, Spices and Med. Plants. 2000. -7, №2.-P. 35-41.

319. Fadel F., Wenzel G. Medium-genotype-interaction on androgenetic haploid production in wheat // Plant Breed. 1990. - 105, №4. - P.278-282.

320. Fantini M., Cortezzi G. A micropropagation system for Eucalyptus dunnii X Eucalyptus sp. II Ann. Sci. forest. 1989. - 46, Suppl. - P. 136-139.

321. Fartais L., Strajeru S., Avramiuc M. Conservarea explantelor de cartof pe mediu cu inhibitor osmotic (Monitol): Lucr. 19 Simp. nat. genet, veg. si anum., Suceava, 5 -7 sept., 1996 // Cere. Genet, veg. si anim. 1998a. - 5. -P.231-236.

322. Fartais L., Verdes C., Avramiuc M. The regeneration capacity of potato expiants stored on media with growth inhibitors // An. sti.Univ. Iasi. Sec. 2 a.- 1998b.-44.-P.69-73.

323. Fiore M.C., Trabace T., Sunseri F. High frequency of plant regeneration in^ sunflower from cotyledons via samatiy embryogenesis // Plant Cell Repts. -1997.- 16, №5. P.295-298.

324. Fisher M., Ziv M.,Vainstein A. An efficient method for adventitions shoot regeneration from cultured carnation petals // Sci. Hortic.Cult.1993. V.53, №1-2. P.231-237.

325. Founda R., Jambor-Benczuc E., Schmidt G. Preliminary results in the micropropagation of Persica x davidiopersica «Piroska» // Kertesz. es elelmiszerip. egy. kozl. 1994. - 54. - P.95-100.

326. Franck-Duchenne M., Wang Y., Tahar S. B., Beachy R. N. In vitro stem elongation of sweet pepper in media containing 24-epi-brassinolide // Plant, Cell, Tissue, Organ Cult. 1998. - 53, №2. - P.79-84.

327. Fuernkranz H.A., Nowak C.A., Maynard C.A. Light effects on in vitro adventitions rooti formation in axillary shoots of mature Prunus serotina II Physiol. Plant. 1990. - 80, №3. -P.337-341.

328. Furuya T.,Asada Y., Mizobata S., Matsuura Y., Hamada H. Biotransformation of p-aminobenzoic acid by cultured cells of Eucalyptus perriniana II

329. Phytochemistry. 1998. - 49, №1. - P. 109-111.i

330. Gamborg O.Z., Waller R.A., Gima K. Nitrient requirement of suspension cultures of Soybean root cells // Exp. Cell Res. 1968. - 50, №1. - 151-158.

331. Gautheret R.J. Introduction on problems des cultures in vitro de végétaux ligneux II Bull. Soc. Bot. Fr./ Actual. Bot. 1983. - №2. - P.5-10.

332. Genkov T., Novoselska P., Gemishev T., Ivanova I. Effect of benzyladenin, 4

333. George J., Hofer E., Leike H., Dautzenberg H., Loth F. The use of a novel stabilizing substrate for the in vitro cultivation of cauliflower (Brassica oleracea var. botrytis) II Plant Cell Repts. 1983. - 2, № 4 - P. 189-191.

334. Gerthere D., Kalnina J., Tomsone S. Rhododendron hybrid multiplication by micropropagation technique^// Exp. Biol. 1992. - №3^1. - P.67-68.

335. Ghosh P.K., Chaterjee A. An in vitro induction and maintenance of epicotyl derived callus culture of jute // Indian Biol. 1990. - 22, № 1. - P.38-39.

336. Goh C.J., Lakshmanan P., Lee C.L., Loh C.S., Tanaka M. a simple and efficient method for clonal propagation of Casuarina sumatrana (de Vriese) L. Johnson II Plant Growth Regul. 1995. - 17, №2. - P.l 15-120.

337. Goh C.J., Sim G.E., Morales C.L., Loh C.S. Plantlet regeneration through different morphogenic pathways in pomello tissue culture // Plant, Cell, Tissue, Organ Cult. 1995. - 43, №3. - P.301-303.

338. Gonzalez M.V., Lopez M., Valdes A.E., Ordas R.J. Micropropagation of three berry fruit species using nodal segments from field-grown plants // Ann. Appl. Biol. 2000. - 137, №1. - P.73-78.

339. Gorst J., De Fossard R. Riboflavin and root morphogenesis in Eucalyptus II Plant Cell cultures results and perspectives (Ed. By Sala F. et al.), 1980. -p.271-275.

340. Grafe C., Wricke G. Increase of in vitro regeneration in Malus domestica by the application of phosphatase inhibitors // Plant Breed. 1998. - 117, №6. -P.563-566.

341. Gupta P.K., Mascarenhas A.F., Lagannathan V. Tissue culture of forest trees -clonal propagation of mature trees of Eucalyptus citriodora Hook, by tissue culture // Plant Sci. Let^- 1981.-20, №2. P. 69-92.

342. Haoru T., Zhenglong R., Gabi K. Somatic embryogenesis and organogenesis from immature embryo cotyledons of three sour cherry cultivars {Prunus cerasus L.) II Sci. Hort. (Neth.).- 2000. 83, №2. - P. 109-126.

343. Hartmann H.T., Kester D.E. Plant propagation // Principles and Practices. -New Jersey: Prentice Hall, 1975. 450 p.

344. Hellman H., Schmidt R., Willmitzer L., Frommer W.B. Identification of mutants in metabolically regulated gene expression // Plant. J. 1997. - 11, №1. - P.53-62.

345. Hemphill J.K., Maier C.G.A., Chapman K.D. rapid in vitro plant regeneration of cotton (Gossypium hirsutum L.) II Plant Cell Repts. 1998. - 17, №4. -P.273-278.

346. Hicks G. Patterns of organ development in plant tissue culture and the problem of organ determination // Bot. Rev. 1980. - 46, №1. - P. 1-23.

347. Hildebrandt V., Harney P. In vitro propagation of Deutzia x lemoinei var. campacta И J. Hortic. Sei. 1984. - 59, №4. - P.545-548.

348. Hirimburegama K., Gamage N. In vitro callus and cell cultures of Gossypium hyrsutum L. (Cotton) II J. Nat. Sei. Counc. Sri Lanka.- 1994. 22, №4. -P.305-312.

349. Hirimburegama K., Gamage N. In vitro multiplication of local cultivars of banana (Musa spp.) through shoot-tip culture // J. Nat. Sei. Counc. Sri Lanka. 1996. - 24, №1. - P.9-20.

350. Hitmi A., Barthomeuf C., Sallanon H. Cryopreservation of Chrysanthemum cinerariaefolium shoot tips. Effects of pretreatment conditions and retention of biosynthetic capacity // Ciyo-Lett. 1999. - 20, №2. - P. 109-120.

351. Hong L., Xiaolong Y. Seed size is closely related to phosphorus use efficiency and photosynthetic phosphorus use efficiency in common bean // J. Plant Nutr. 1999. - 22, №6. - P. 877-888.

352. Hu K.L., Matsubara S., Murakami K. Haploid plant production by anther culture in carrot (Daucus carota L.) II J. Japan. Soc.Hort.Sci. 1993. - 62, №3-P.561-565.

353. Huang J., Ye K., Chen G., Li В. Изучение факторов, влияющих на соматический эмбриогенез Carica papaya II Acta sei. nature, univ. Sutyatseni. Natur. Sei. 1996. - 35, №4. - P.90-94.

354. Hwang S., Shen C., Lin H. Cultivation of banana using plantlets from meristem culture // Hort Sei. 1984. - 19, №2. - P. 231-233.

355. Jaiswal V.S., Amin M.N. In vitro propagation of guava from shoot cultures of mature trees // J. Plant Physiol. 1987. - 130, №1. - P.7-12.

356. Japichino G., McCulloch S., Chen Т.Н. Adventitions shoot formation from leaf explants of Rhododendron II Plant, Cell, Tissue, Organ Cult. 1992. - 30, №3. - P.237-241.

357. Jayasree N., Devi B.P., Reddy P.V. Production of synthetic seeds and plant regeneration in Rosa hybrida L. cv. King's Ransom // Indian J. Exp. Biol. -1997. 35, №3. -P.310-312.

358. Jones L.H., Scott T.R. Transfer nucleic acid modification and its relationship to tumorous and nontumorous plant growth // Plant Physiol. 1981. - 67, № 4. -P.535-538.

359. Jones T.C., Batchelor C.A., Harris P.J.C. In vitro culture and propagation of Acacia species (A. binenosa, A. holosericea, A. salicina, A. saligna and A. sclerosperma) // Int. Tree Crops J. 1990. - 6, №2-3. - P.183-192.

360. Joshi S.D., Dhawa R.D. In vitro embryogenesis in Brassica campestris var Sarson //Embryology and seed reproduction: XI Int. Symp., Leningrad, USSR, July 3-7, 1990-Leningrad, 1990.-P.68.

361. Kamenicka A. Sposob rozmnozovania Magnolie soulangeovej metodou in vitro: Пат. 278139 Словакия, МКИ6 A01H 4/00; Ustav ekologia lesa SAV, Zvolen, SK. №84493; Заявл. 06.08.93; Опубл. 07.02.96.

362. Kaminska A., Rypak M. Optimalizacia rastu kalusovej kultury pagastana konskeho {Aesculus hippocastanum L.) vo vztahu k pastovym regulatorom // Biologia. 1988. - 32, №1. - P.61-69.v ,

363. Kaneko K. -Kariological studies on callus cells of Haplopappus gracilis II Kromoso^a. 1974. - №95. - P.2943-2949.

364. Kantharajah A.S., Dewitz I., Jabbri S. Auswirkungen unteschiedlicher Naahrmedien, Wachstumsregulatoren und Explantatquellen auf die in-vitro-Vermhrung von Granatapfel (Punica granatum L.) // Erwerbs-Obstau. 1998. - 40, №2. - P.54-58.

365. Karhu S.T., The quality of applied carbohydrates affects the axillary branching of apple microshoots// Bull. rech, agron. Gembloux. 1995 - 30, №1-2. p. 21-27.

366. Kaushal R.P., Kaushal В., Rashmi N., Vaid A., Singh B.M. Induction of callus cultures and regeneration of somaclones from different explants of urdbean Vigna mungo (L.) hepper. and their evaluation for resistance to

367. Cercospora canescens// Proc. Indian Nat Sci. Acad. B. 1997. - 63, №4. -P.359-367.

368. Kawata S., Ushida C., Kawai F., Kanamori M., Kuriyama A. Micropropagation of passion fruit from subcultured multiple shoot primordial // J. Plant Physiol. 1995. - 147, №2. - C.281-284.

369. Keller W.A. In vitro production of haploids in crop plants from microspores // Can. J. Genet, and Cytol. 1980. - 22, №4. - P.667.

370. Keskitalo M., Rohto A., Savela M., Valkonen J. P.T., Simon J., Pehu E. Alterations in growth of tissue-cultured tansy (Tanacetum vulgare L.) treated with antibiotics // Ann. Appl. Biol. 1998. - 133, №2. - P.281-296.

371. Kim J., La Montte C., Hack E. Plant regeneration in vitro from primery leaf nodes of soybean (Glycine max) seedlings // J. Plant Physiol. 1990. - 136, №6. - P.664-669.

372. Komalavalli N., Rao M.V. In vitro micropropagATION of Gymnema elegans W and A a rare medicinal plant // Indian J. Exp. Biol. - 1997. - 35, №10. -P. 1088-1092.

373. Kornova K., Michailov J., Astadjov N. Application of in vitro techniques forpropagation of Rosa Kazanlika Top. (Rosa dameascena var. trigintipetala):

374. Kozai Т., Kubota C., Watanabe I. Рост растений гвоздики in vitro, культивируемой фотоавтотрофно и фотомиксотрофно на различных средах // Environ. Contr. Biol. 1990. - 28, №1. - Р.21-27.

375. Krikorian A.D. Cloning higher plants from aseptically cultured tissues and cells // Biol. Rev. 1982. - 52, №2. - P. 151-218.

376. Krishnan P.N., Sudha C.G., Seeni S. Rapid propagation through shoot tip culture of Trichopus zeylanicus Gaerthn., a rare ethnomedicinal plant // Plant Cell Repts. 1995. - 14, №11.-P.708-711.

377. Kubalakova M., Tejklova E., Griga M. Some factors affecting root formation on in vitro regenerated pea shoots // Biol, plant. 1988. -30, №3. - P.179-184.

378. Kulkami V.M., Ganapathi T.R., Suprasanna P., Bapat V.A., Rao P.S. In vitro propagation in Ensete superbum (Roxb.) Cheesman: A species closely related to Musa // Indian J. Exp. Biol. 1997. - 35, №1. - P.96-98.

379. Kumar A., Sood A., Palni U.T., Gupta A.K., Palni L.M.S. Micropropagation of Rosa damascena Mill from mature bushes using thidiazuron // J. Hort. Sei. and Biotechnol. 2001. - 76,№1. -P.30-34.

380. Laemli U.K. Cleavage of structural protein during assembly of the head of bacteriophage // Nature. 1970. -227, №6. - P.680 - 684.

381. Larkin P.J., Scowcroft W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell cultures for plant improvement // Theor. and Appl. Genet. - 1981.-60, №4. - P. 197-214.

382. Lazar M., Gachita-Cosma D. Procedee de multiplicare "in vitro''' la crizanteme // Contrib. Bot.Univ. Babes Bolyai. Cluj - Napoca. - 1982. - P. 231-242.

383. Le C.L. Culture in vitro du genes banc (Artemisia umbelliformis Lam.)/7 Rev. Suisse viticult., arboricult. et horticult. 1998. - 30, №3. - P.153-156.

384. Le C.L., Julmi C., Tschuy F. Regeneration et multiplication in vitro de Gerbera jamesonii Bolus. II Rev. suisse viticult., arboricult. et horticult. -1999. 31, №4. -P.207-211.

385. Le N. M., Ducommun C., Weber G., Dorion N., Bigot C. Observations sur la multiplication in vitro de la hampes florales prelevees chez des bulbes en cours de conservation II Agronomie. 1987. - 7, №5. - P.321-329.

386. Ledbetter C.A. In vitro cultures and the development of new fruit varieties // Comb. Proc. / Inter. Plant Propagators 's Soc. Seattle (Wash.), 2001. -vol.50.-P.574-576.

387. Lemoine M.C., Gianinazzi S., Gianinazzi-Pearson V. Application of endomycorrhizae to commercial production of Rhododendron microplants II Agronomie . 1992. - №12. - P.881-885.

388. Li H.-Z., Pang C.-M., Du Y.-J., An L.-M., Yang H.-Y. Изучение соматического эмбриогенеза Phlox drummondii II Yunnan zhiwu yanjiu = Acta bot. Yunnanica. 1996. 18, №3. - P.341-344.

389. Liang G.H., Xu A., Hoang T. Direct generation of haploids via anther culture // Crop Sci. 1987. - 27, №2. - P.336-339.

390. Liu T., Zhao H., Chen F., Cui В., Zhu J. Культивирование отрезками стеблей и размножение в пробирках хмеля обыкновенного {Humulús lupulus L.) II Acta Bot. Boreali-Occident. Sin. 2000.- 20, №5. - P.778-783.

391. Llamoca Z.R.M., Aguiar L.F., Landsmann J., Campos F.A.P. Whole plant regeneration from the shoot apical meristem of Opuntia ficus-indica Mill. (Cactaceae) // J. Appl. Bot. 1999. - 73, №3-4. - P.83-85.

392. Lloyd D., Roberts A.V., Short K.C. The induction in vitro of adventitions shoots in Rosa II Euphytica. 1988. - 37, №1. - P.31-36.

393. Lopez-Delgado H., Jimenez-Casas M., Scott I.M. Storage of potato microplants in vitro in the presence of acetylsalicylic acid // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1998. — 54, №3. - P.145-152.

394. Mackevicius J. Peculiarities of rape callus growth and differentiation: Pap 1st Conf. Young Biochemists and Mol. Biologists Lithuania, Vilnius, 18 Dec., 1996 // Biologija. 1997. - №1. - P.121-124.

395. Maity S.K., De K.K., Kundu A.K. In vitro propagation of Mussaenda erythrophylla Schum and Trom cv. Scarlet through multiple shoot regeneration // Indian J. Exp. Biol. 2001. - 39, №11. -p.l 188-1190.

396. Marsolairs A. The commercial application of cereal haploidy // Curr. Options Cereal. Improv. Dordrecht etc., 1989. - P.211-214.

397. Masaru N., Yoichiro H., Masahiro M. Adventitions shoot regeneration from cultured petal explants of carnation // Plant, Cell, Tissue, Organ Cult. 1994. - 36, №1. -P.15-19.

398. Matthys-Rochon E., Piola F., Deunff E., Mol R., Dumas C. In vitro development of maize immature embryos: a tool for embryogenesis analysis // J. Exp. Bot. 1998. - 49, №322. - P. 839-845.

399. Matsuoka M., Terauchi Т., Kobayashi M., Shoda M., Nakano H. Isolation of protoplasts from suspension culture and subsequent shoot regeneration in sugarcane // JARQ: Jap. Agr. Res. Quart. 1996. - 30, №1. - P.21-26.

400. Mekers O., Meiresonne L., Meneve I. Etylene production inhibitors can improve in vitro propagation of roses // Meded Fac. landbouwwetensch. Rijksuniv. Gent. 1984. - 49, №3в. - P.l 139-1144.

401. Meynet J., Duclos A. Culture in vitro de la renoncule des feuristes {Ranunculus asiaticus L.). II. Production de plantes par culture d'antheres in vitro // Agronomie. 1990. - 10, №3. -P.213-218.

402. Mitrofanova O.V., Yezhov V.N. Plant regeneration of Clematis L. through somatic embryogenesis in vitro // Бюл. Гос. Никит, ботан. Сада. 2002. -№86.-Р. 16-19.

403. Mitrofanova O.V., Yezhov V.N. The biotechnological investigation of plants in the south of Ukraine// «Biotechnology Approaches for Exploitation and preservation of Plant Resources» Abstracts - Yalta, Ukraine (26-31 May, 2002). - Yalta,2002. - P.22-23.

404. Mix-Wagner G., Evena T. Positive effect of cefataxime on plant regeneration from Cichorium intybus L. leaf material // Landbauforsch. Volkenrode. -1996. 46, №4. - P.166-168.

405. Modgil M., Sharma D.R., Bhadrwaj S.V. Micropropagation of apple cv.Tydeman's Early Worcester // Sci. hort.(Neth.). 1999. - 81, №2. - P. 179-188.

406. Mohan M.I., Krishnamurthy K.V. Somatic embrlogenesis and plantregeneration in pigionpea // Biol, plant. 2002. 45, №1. - P. 27-32.

407. Moreira M.F., Appezzato-Gloria B., Zaidan L.B.P. Anatomical aspects of IBA-treated microcuttings of Gamphrena macrocephala St.-Hil.il Braz. Arch.Biol. and Technol. 2000. - 43, №2. - P.221-227.

408. Morini S., Sciuti R. In vitro propagation of quince clonal rootstocks // Agriculture Mediterránea. 1991. - 121, №1. - P.656-659.

409. Morre J.L., Permingeat H.R., Romagnoli M.V., Heisterborg C.M., Vellejos R.H. Multiple shoot induction and plant regeneration from embryonic axes of cotton // Plant Cell, Tissue, Organ Cult. 1998. - 54, №3. - P. 131-136.

410. Morrison R., Whitaker R., Evans D. Somaclonal variation: its genetic basis and prospects for crop improvement // Opportunities Phytochem. Plant Biotechnol.- 1988.-P.1-18.

411. Murashige T. Clonal crops through tissue culture // Plant tissue culture and its bio-technological application. 1976. - P.392-403.

412. Murashige T. Plant propagation through tissue cultures // Ann. Rew. Plant Physiol. 1974. - 25, №2. - P.135-166.

413. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassaysowith tobacco tissue culture // Physiol. Plantar. 1962. - 15, №2. - P. 473497.

414. Mythili J.B., Thomas P. Influence of ammonium to nitrate nitrogen ratio in 4 different basal media on callusing response of capsicum (Capsicum annuum1. grossum Sendt.) anthers // Indian J. Exp. Biol. 1999. - 37, №3. - P.314-316.

415. Mythili P.K., Madhavi A., Reddy V.D., Seetharama N. Efficient regeneration of peart millet (Pennicetum glaucum (L.) R. Br) from shoot tip cultures // Indian J. Exp. Biol. 2001. - 39, №12. - P.1274-1279.

416. Nagari S., Wakhlu A.K., Sharma R.K. Cytological analysis of embryogenic callus and regenerated plants of Baniumpersicum Boiss II Chromosome Sci. -1997.- 1, №2-3.-P.69-71.

417. Nakamura K., Soda R. Method for mass proliferation of mahogany tress by tissue culture: Заявка 1062866 ЕПВ, МПК7 A01H 4/00, C12N 5/00/ Sumitomo Foresty Co., Ltd.- № 979441102; Заявлк) 14.10.97; Опубл. 27.12.00.-Бюл.№ 00/52.

418. Nayak S., Sen S. In vitro propagation of Ornithogalum umbellatum through direct organogenesis // Indian J. Exp. Biol. 1995. -33, №2. - P. 144-146.

419. Nehra N.S., Kartha K.K., Stushnoff C. Nuclear DNA content and isozyme variation in relation to morphogenic of ctrawberry (Fragaria ananassa) callus cultures // Can. J. Genet. Cytol. 1991. - 69, № 3. - P.239-244.

420. Neskovic M. Vegetativno razmnozavanje belosljive (Prunus domestica L.) u kulturi in vitro // Arh. poljopr. nauke. 1985. - 46, №164. - S.375-380.

421. Onisei T. Rapid clonal propagation of scented pelargonium // An. Sti. Univ. Iasi. Sec.2. 1993. - 39. - P.125-127.

422. Orton T.J. Genetic instability in celery tissue and cell cultures // Iowa State J. Res. 1987. - 61, №4. - P.481 -498.

423. Ownley B.H., Benson D.M. Evolution of Penicillum jantinellum as a biological control of Phytophtora root rot of azalea // J. of Amer. Soc. of Hortic. Sei. 1992. - №3. - P.407-410.

424. Paludan N. Inactivation of viroids in chrysanthemum by low-temperature treatment and meristem tip culture // Acta Horticulture treatment Technical communications of IAHS. Intern. Sok. for Hort. Sei. - 1985. - Vol. 164. - P. 181-186.

425. Pan L., Yang Т. Изучение индукции эмбриоидов из неопыленных семяпочек табака // Acta Bot. Booreali-Occident Sin. 2000. -20, №1. - 5963.

426. Pasqual M., Ishida J.S. Influentia de regulators de crescimento sorbe a proliferacao in vitro de brotos do porta-enxerto de macieira MI 793 // Rev. ceres. Univ. fed. Vicosa. 1992. - 39, №226. - P.584-590.

427. Patil V., Jayanthi M. Micropropagation of two species of Rauwolfia (Apocynaceae) // Curr. Sei. (India). 1997. - 72, №12. - P.961-965.

428. Pavengerova D., Briza J., Prenerova E. Odvozeni primarnich kultur z kvetnich pupenu rododendrounu // Rostl. Vyroba. 2000. - 46, №6. - P. 281-283.

429. Peck D., Coming B. In vitro vegetative propagation of cape primrose usingthe corolla of the flower // Hort Science 1984. - 19, №3. - P.399-400.

430. Peck D., Comming B. In vitro propagation of Begonia X tuberhybrida from leaf sections // Hort. Sei. 1984. - 19, №3. - P.395-397.

431. Perez-Molphe-Balch E., Silvia-Figueroa C.A. In vitro propagation of Pelecyphora aselliformis Ehrenberg and P. strobiliformis Werdermann (Cactaceae)// In vitro Cell, and Dev. Biol. 2000. - 38, №1. - P.73-78.

432. Phillips G.C., Luteyn K.J. Effects of picloram and other auxins on onion tissue cultures // J.Amer.Soc.Hort.Sci. 1983. - 108, №6. - P.948-953.

433. Pierik R. Vegetative propagation of horticultural crops in vitro with special attention to shrubs and trees // Acta Horticultural- 1975. 54, №1. - P.71-82.

434. Pijnacker L.P., Ferwerda M.A. Effect of sucrose on polyploidization in early callus cultures of Solanum tuberosum //Plant, Cell, Tissue,- Organ Cult. — 1990. 21, №3.- P. 153-157.

435. Poli F., Bonora A., Vannini G.L., Bruni A., Fasulo M.P. Callus formation< cell suspension culture and plant regeneration in Ranunculus serbicus Vis II J.Plant Physiol. 1990. - 135, №5. - P.637-639.

436. Pua E., Chong C. Requirement for sorbitol (D-glucitol) as carbon source for in vitro propagation of Malus robusta №5 // Can. J. Bot. 1984. - 62, №7. -1545-1549.

437. Purohit S.D., Dave A. Micropropagation of Sterculia urens Roxb. an endangered tree species // Plant Cell Repts. - 1996. - 15, №9. - P.704 - 706.

438. Purohit S.D., Dave A., Kukda G. Micropropagation of safed musli (Chlorophytum borivilianum), a rare Indian medicainal herb // Plant, Cell, Tissue, Organ Cult. 1994. - 39, №1. - P.93-96.

439. Qu L., Polashock J., Vorsa N. A highly efficient in vitro cranberry regeneration system using leaf explants// Hort Science. 2000. - 35, №5. - P. 948-952.

440. Quraishi A., Mishra S.K. Micropropagation of nodal explants from adult trees of Cleistanthus collinus II Plant Cell Repts. 1998. - 17, №5. - P. 430-433.

441. Radulovich M., Plamenak M. Ispitivanje mogucnostti oziljavanja zrelih I zelenih reznica aktinidije u prirodnim uslovima// Poljoprivreda i sumarstvo. -1987. 33, №4. - S.147-153.

442. Raghothama K.G. Phosphate asquisition // Annu. Rev. Plant Physiol, and Plant Mol. Biol. Vol. 50. Palo Alto (Calif.), 2000. - P. 665-693.

443. Ram R.L., Nag K.K. Comparative studies on shoot formation from endosperm, embrio and in vzYroformed leaf cultures on Dendrophtoe falcate L.//Bionature. 1988. - 8, №1. -P.47-55.

444. Rao P.S., Raghava R.N.V. Propagation of sandalwood (Santalum album Linn.) using tissue and organ culture technique // Plant cell cult. Crop. Improv. Int. Symp. (Calcutta)/New-York: London. 1983. -P.l 19-124.

445. Rao P.V., Lakshmana D., De Deepesh N. Tissue culture propagation of tree legume Albizia lebbek (L.) II Plant Sci. 1987. - 51, №2-3. - P.263-267.

446. Rao S., Naidu M.M. A tissue culture derived pesticide tolerant line of chickpea (Cicer arietinum L.) II Proc. Indian Acad. Scio. Plant Sci. 1989. -99, №6. - P.523-527.

447. Rech S.B., Batista C.V.F., Schripsema R., Henriques A.T. Cell cultures of Rauwolfa sellowii: Growth and alkaloid production // Plant, Cell, Tissue and Organ Cult. 1998. - 54, №1. - C. 61-63.

448. Reddy P. C., Patil V., Prasad T.G., Padma K., Udayakurmar M. In vitro axillary bud break and multiple shoot production in Acacia auriculiformis by tissue culture technique // Curr. Sci. (India). 1995. - 69, №6. - P.495-496.

449. Rina A., Gupta S.D., De Deepesh N. Somatic embriogenesis and plant regeneration from leaf derived callus of winged bean Psophocarpus tetragonolobus (L.). II Plant Cell Repts. 1996. - 15, №7. - P.531-535.

450. Roberts H. Problems of long-term storage of seed and pollen for genetic resources conservation // Grop Genetic Resouces for Today and Tomorrow, ed. O.H.Frankel, J.G. Hawkes. Cambridge: Cambridge University Press, 1975. -P.269-296.

451. Romano A., Martins-Loucao M.A. Coservasao in vitro de germeplasma de sobreiro (iQuercus suber L.) // Rev. biol. (Port.). 1994. - 15, №1-4. - P.29-42.

452. Ronchi V.N., Caligo M.A., Nozzolini M. Stimulation of carrot somatic embryogenesis 'proline and serine // Plant Cell Repts. 1984. - 3, № 5. -P.210-214.

453. Roule D. Why does the UK lag on Rieger begonias // Grower. 1983. - n 99, № 13. -P. 21-29.

454. Rout G.R. Direct regeneration from leaf explants of Plumbago species and its genetic fidelity through RAPD markers // Ann. Appl. Biol.- 2002. 140, №3. -P.305-313.

455. Rout G.R., Das P. Effect of AgNC>3 on high frequency plant regeneration of Simarouba glauca Linn. II J. Appl. Bot. 1999. - 73, №1-2. - P. 15-19.

456. Rout G.R., Palai S.K., Pandey P., Das P. Direct plant regeneration of Chrysanthemum m. Ramat cv Deep Pink: Influence of explant source, nutritional factors and hormone regime // Proc. Nat. Acad. Sci, India. B. -1997. 67, №1.-P. 57-66.

457. Rout G.R., Samantaray S., Das P. Somatic embryogenesis and plant regeneration from callus of Acacia catechu a multipurpose leguminous tree // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. - 1995. - 42, №3. - P.283-285.

458. Roy S.K., Islam M.S., Hadiuzzaman S. Micropropagation of Elaeocarpus robustus Roxb. II Plant Cell Repts. 1998. - 17, №10. - P.810-813.

459. Rubos A.C., Pryke J.A. Morphogenesis in embryonic tissue cultures of apple // J. Hort. Sci. 1984. - 59, №4. - P.469-475.

460. Ryynanen L. Effects of early spring birch bud type on postth^w regrowth after prolonged cryostorage // Can. J. Forest Res. 1999. - 29, №1. - P.47-52.

461. Saini R., Iaiwal P. K In vitro multiplication of Peganum harmala. An important mecinal plant // Indian I'. Exp. Biol. 2000. - 38, № 5. - P. 499503.

462. Salomao L. C. C., Vieccelli J. C., Siqueira D.L., Otori W.C., Sister C.E. Micropropaga de caquizeiro (Diospyros kaki L.) por meio de gemas laterals e apicais de plantas adultas // Rev. seres / Univ. fed. Vicosa. 1999. - 46, №265.-P. 267-277.

463. Samantaray S., Rout G.R., Das P. An in vitro study on organogenesis in , TREMA ORIENTALIS (Blume) Linn. II Plant Sei. 1995. - 105, №1. - P.8794.

464. Sanduhu J.S., Gosal S.S., Gill M. S., Dhaliwal H. S. Micropropagation of Indica rice through proliferation of axillary shoots // Euphytica. 1995. - 81, №2.-P. 139-142.

465. Sarvesh A., Reddy T.R., Kavi K.P.B. In vitro anther culture and flowering in Guizotia abyssinica Cass II Indian J.Exp.Biol. 1996. - 34, №6. - P.565-568.

466. Satheeshkumar K., Seeni S. In vitro multiplication of Nothapodites foetidi (Wigth.) Sleumer through seedling expiant cultures // Indian J. Exp. Biol. -2000. 38, № 3. - P. 273-277.

467. Sbay H., Guillot J., Danthu P., Prat D. In vitro propagation of interspecific hybrids in Alnus II Ann. Sei. forest. 1989. - 46, Suppl. - P. 155-157.

468. Sharma D.R., Yadav N.R., Chowdhury J.B. Somatic embryogenesis and plantlet regeneration from shoot tip calli of wild date palm Phoenix sylvestris Roxb. II Indian J. Exp. Biol. 1988. - 26, №10. - P.854-857.

469. Sharon M., Shankar P. C. Somatic embryogenesis and plant regeneration from leaf primordial of Phoenix dactylifera cv. yakubi II Indian J. Exp. Biol. -1998. 36, №5. - P.526-529.

470. Shibli R.A., Jaradat A.C.,Ajloni M.M.,Aijanabi S.In vitro multiplication of bitter almond {Prunus amygdalus) from North. Jordan // In vitro Cell, and Dev. Biol. Amin? -1996. 32, №3, Pt.2.- P.74.

471. Siebel J., Pauls K.P. A comparison of anther and microspore culture as a breeding tool in Brassica napus II Theor. and Appl. Genet. 1989. - 78, №4.- P.473-479.

472. Siria M.S., Wootton M., Cox J.M. Capillary electrophoresis of wheat varietal identification using pattern matching software // Austral. J. Agr. Res. 2001.- 52, №8. P.839-843.

473. Skoog F., Miller C. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissue culture in vitro II Biological action of Growth Substances (Ed. by Porter H.K.) / Cambridge: Cambridge Univer. Press 1957. - Vol.11. -P.118-131.

474. Slabbert M.M., Lindeque J.M., Ferreira D.I. Rapid in vitro multiplication of Asparagus // S. Afr. J. Bot. 1990. - 56, №3. - P.331-335.

475. Snir I. In vitro propagation of "Canino" apricot // HortScience. 1984. - 19, №2.-P. 229-230.

476. Snir I. Micropropagation of red raspberry // Sei. hort. (Neth.) 1981. - 14, №2.-P. 139-143.

477. Sommer H.E. Organogenesis in woody angiosperms: applications to vegetative propagation // Bull. Soc. Bot. Fr.( Actual. Bot.). 1983. - 130, №2.- P.79-85.

478. Sonneborn H. Möglichkeiten zur Herstellung bakteriosefreier pelargonien // "TASPO-Mag."- 1984.- №2.-P.15-17.

479. Sreedhar L., Bewley J.D. Nitrogen- and sulfur-containing compounds enhance the synthesis of storage reserves in developing somatic embryos of alfalfa (.Medicago sativa L.) // Plant Sci. 1998. - 134, №1. - P.31-44.

480. Steward F.S. Growth and organized development of cultured cells. III. Interpretations of the growth from free cell to carrot plant // Amer. J.Bot.-1958. Vol. 45. - P.120-125.

481. Sung Z.R. Development states of embryogenic culture // Somatic Embryo genesis Carrots.Proc.Workshop, San Maniato, May 28-31, 1985 / Roma. -1985.-P.l 17-120.

482. Suri S.S., Jain S., Ramawat K.G. Plantlet regeneration and bulbil formation in vitro from leaf and stem explants of Curculigo orchioides an endangered medicinal plant // Sci. hort. (Neth.). 1999. - 79, №1-2. - P. 127-134.

483. Tabei Y., yamada Т., Morishita Т., Osaki T. Plant regeneration via shoot organogenesis from cotyledons in two wild Cucumis spesies, C. figarei and C. metuliferus IIJARQ, Jap. Agr. Res. Quart. 1998. - 32, №4. - P.281-286.

484. Takahiro W. Регенеранты ремонтантной земляники (Fragaria ananassa),rполученные из каллуса листовых эксплантов // J. Rakuno Gakuen Univ. Natur. Sci. 2002. V.27. №1. P. 79-83.

485. Tang H., Ren Z., Krezal G. Somatic embriogenesis and organogenesis from immature embryo cotyledons of three sour cherry cultivars (Prunus cerasus L.) // Sci. hort. (Neth.). 2000. - 83, №2. - P.109-126.

486. Tavares F., Abreu I., Salema R. Regeneration of actinorhizal plant Myricaу' 'gale L. from epicotyl explants // Plant Sci. 1998. - 135, №2.-P.203-210.

487. Teng W.-L., Liu Y. J., Soong T.-S. Controling vitrification of plants using water absorbent polymer: Пат. 5389542 США, МКИ6 C12N 5/00, C12N 5/02; Development Center for Biotechnology. №970679; Заявл. 04.11.92; Опубл. 14.02.95; НКИ 435/240.45.

488. Tetsumura Т., Yukinaga H. Comparative rooting of shoot tips of four Japanese persimmon cultivars vs. shoots regenerated from roots cultured in vitro И Hort.Sci. 2000 - 35, №5. - P.940-944.

489. Thakur S., Handa A.K., Khurana D.K. A fast and simple technique for in vitro multiplication of Popular hybrids // Indian J. Exp. Biol. 1995. - 33, №10. -P.803-805.

490. Thinh N.T., Takagi H., Yashima S. Cryopreservation of in vitro grown shoot tips of banana (Musa ssp) by vitrification method // Cryo-Lett. - 1999. - 20, №3. - P.163-174.

491. Thompson W., Collin H., Isaoc S., Hardwick K. Isolation of protoplasts from cacao (Theobroma cacao L.) leaves // Café, cacao, the 1987. - 31, №2. -P.l 15-120.

492. Turner S.R., Tan B., Senaratna T., Bunn E., Dixon K.W., Touchell D.H. Cryopreservation of the Australian species Macropidia fuliginosa (Haemodoraceae) by vitrification // Cryo-Lett. 2000. - 21, №6. - P.379-388.

493. Valengelen F.A., Devries S.C. Extracellular proteins in plant embríogenesis // Trends in Genetics. 1992. - 8, №2. - P.66-69.

494. Vengadesan G., Ganapathi A., Anbazhagan V. R., Anand R. P. Somatic embriogenesis in cell suspension cultures of Acacia sinuate (Lour.) Merr. II In

495. Vitro Cell. And Dev. Biol. Plant. 2002. - 38, №1. - P.52 -57.

496. Venkatachalam P., Geetha N., Rao K. S., Jayabalan N., Saravanababu S. BAP-regulated direct shoot organogenesis from cultured seedling explants of groundnut (Arachis hypogaea L.) II Indian J. Exp. Biol. 1999. - 37, №8. -P.807-812.

497. Vesperinas E.S. In vitro root induction in hypocotyls and plumule explants of Helianthus annuus II Environ. And Exp. Bot. -1998. 39, №3. - P.271-277.

498. Vieitez A.M., Vieitez M.L. Culture of chestnut shoots from buds in vitro II J. Hort.Sci. 1980. - 55,№1. - P.83-84.

499. Vijayan K., Chakraborti S.P., Roy B.N. Plant regeneration from leaf explants of mulberry. Influence of sugar, genotype and 6-benzyladenine // Indian J. Exp. Biol. 2000. - 38, №5. - P.504-508.

500. Vyskor В., Gazdova В., Siroky J. Methylation patterns of two repetitive DNA sequences in tobacco tissue cultures and . their regenerants // Biol. Plant. -1993. 35, №3. -P.321-327.

501. Wakhlu A.K., Nagari S., Berna K.S. Somatic embriogenesis and plant regeneration from callus cultures of Bunium persicum Boiss II Plant. Cell Repts. 1990. - 9, №3. - P.301-307.

502. Wang L., Zhou C.L., Zhang Y. изучение применения дезинфицирующих веществ в культуре растительных тканей // J. Guizhou Norm. Univ. Natur. Sci. -2002. №1. -P.15-17.

503. Wang Y., Chen A., Xia X., Li X., Ni G. Действие антибиотиков на рост и дифференциацию эксплантов шелковицы // Acta sericol. sin. 1996. - 22, №2. -Р.72-76.

504. Wickremesinhe E.R.M., Holcomb E.J., Arteca R.N. A practical method for the production of flowering Easter lilies from callus cultures II Sci. hotK(Neth.). 1994. - 60, №1-2. -P.143-152.

505. Wingender R, Henn H.-J., Barth S., Voeste D., machlab H., Schnabl H. A regeneration protocol for sunflower {Helianthus annuus L.) protoplasts // Plant Cell Repts. 1996.- 15, №10. -P.742-745.

506. Winicov I. Salt tolerarance in alfalfa: gene activation in salt tolerant callus and plants regenerated from salt tolerant callus // J. Cell. Biochem. 1990, Suppl. 14 E. -P.312.

507. Witomska M. Effect of cytokinin concentration on multiplication in vitro с shoot from Limonium sinuatum cv."Cream" // Ann Warsaw Agr. Univ.1995.-№17.- P. 17-23.

508. Witomska M., Lukasczewska K. Effect of sucrose concentration on regeneration in vitro from different explants of Frittillaria imperialis L.ll Ann. Warsaw Agr. Univ. SGGW. Hort. - 2000. - №21. - P.21-28.

509. Wodske D. Setting up a small-scale micropropagation lab// Comb. Proc. / Inter.Plant Propagators's Soc. S.I., 2000. - vol. 49. - P.598-601.

510. Wu Y., Engelmann F., Zhao Y., Zhou M., Chen S. Cryopreservation of apple shoot tipe: Importance of cryopreservation technique and of conditioning of donor plants // Cryo-Lett. 1999. - 20, №2. - P. 121-130.

511. Xiao S., Bao W. Фотоаутотрофный рост растений в пробирке, полученных от индивидуальных растений гибридного потомства элитного аутотетраплоидного риса, выращиваемых в открытых условиях // Acta agron. sin.- 1987. 15, №4. - Р.328-334.

512. Xing Z., Zheng W. Культура ткани Hypericum hookerianum II Jangsu Agr. Res. 2000. - 21, №1. - P.45-47.

513. Yamada Y., Mino M. Instability of chromosomes and alkaloid content in cell lines derived from single protoplasts of cultured Coptis japónica cells // Current topic in developmental biol. 1986. - Vol.20. - P.409-417.

514. Yoneda K., Suzuki N., Hasehawa I. Effects of macroelement concentrations on growth, flowering, and nutrient absorption in an Odontoglossum hybrid // Sci. hort. (Neth.). 1999. - 80, № 3-4. - P. 259-265.

515. Yoon H.J., Kim H.K., Ma C.-J., Huh H. Induced accumulation of triterpenoids in Scutellaria baicalensis suspension cultures using a yeast elicitor // Biotechnol. Lett. 2000. - 22, №13. - P.1071-1075.

516. Yu T.A., Yeh S.D., Cheng Y.H., Yang J.S. Efficient rooting for establishment of papay plantlets by micropropagation // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. -2000. 61, №1. -P.29-35.

517. Yuging F. Культура побегов нескольких сортов азалии {Rhododendron simsii) II Acta hortic. sin.- -1996. 23, №1. - P.331-335.

518. Zdravkovic-Kotac S., Neskovic M. Induction and development of somatic embryos from spinach {Spinacia oleráceo) leaf segments // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1998. - 55, №2. - P.109-214.

519. Zhai J., Gu M., Chen R. Tissue culture and rapid propagation of Acacia dealbata //Acta hortic. Sinica. 2001. - vol.28, №2. - P. 149-152.

520. Zhang C.H., Mei X.G., Liu L., Yu L.J. Enhanced paclitaxel production induced by the combination of elicitiors in cell suspension cultures of Taxus chinensis // Biotechnol. Lett. 2000. - 22, №19. - P.1561-1564.

521. Zhang Q.M., Wang H., Mo H.K., Guo J.Y. Factors influencing the vitrification of canation (Dianthus caryophyllus) in vitro and the anatomy of abnormal plantlets // 15th Int. Bot. Congr., Yokogama, Aug. 28 Sept. 3, 1993: Abstr. Yokogama, 1993. - P.532.

522. Zhang Y.-J., Qian Y., Mu X.-J., Cai Q.-G., Zhou Y.-L., Wei X.-P. Plant regeneration from in vzYro-cultured seedling leaf protoplasts of Actinidia enantha Benth II Plant Cell Repts. 1998. - 17, №10. - P.819-821.

523. Zhang Z., Dai W., Cheng Z.-M., Walla J.A. A shoot-tip culture micropropagation system for chjkecherry //J. Environm. Hortic. 2000. -vol.18, №4.-P.234-237.i

524. Zhou J.H., Chen X.H., Ma Y.Z., Luo Z.J., liang H.M. Studies on the orgsnogenesis of excised cucumber (Cucumis sativus) cotyledons. I. Capabilities of organogenesis// 15th Int. Bot. Congr., Yokodama, Aug. 28-Sept. 3, 1993: Abstr. Yokodama, 1993.-P.431.

525. Zlenko V.A., Troshin L.P., Kotikov I.V. In vitro propagation of grapevine. Part I. Cultivation of shoot apexes and in vitro proliferation of axillary grapevine buds II Vitis: Viticulat. And Enol. Absir. 1999. - 38, №3. - P.l 1.

Информация о работе

Вечернина, Нина Александровна
доктора биологических наук
Барнаул, 2006
ВАК 03.00.05

Диссертация

Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Сохранение биологического разнообразия редких, исчезающих видов, уникальных форм и сортов растений методами биотехнологии - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы