Скрининг и разработка новых антимикробных препаратов

Могильный, Николай Геннадьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Скрининг и разработка новых антимикробных препаратов
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Скрининг и разработка новых антимикробных препаратов"

На правах рукописи

МОГИЛЬНЫЙ НИКОЛАЙ ГЕННАДЬЕВИЧ

Скрининг н разработка новых антимикробных препаратов

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

О 4 ОКТ 2012

Краснодар — 2012

005052765

Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии.

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор Антипов Валерий Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

заведующая лабораторией фармакологии Краснодарского НИВИ Семененко Марина Петровна

кандидат ветеринарных наук, старший преподаватель кафедры терапии и фармакологии Кубанского ГАУ Шантыз Азамат Хазретович

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО Ставропольский государственный

аграрный университет

Защита состоится «12» октября 2012 г. в 1200 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университета по алресу: 350044, г Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознаиамиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://www.kubsau.ru «11» сентября 2012 г. и официальном сайте ВАК РФ http://www.vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «11» сентября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Родин И. А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из наиболее проблемных направлений фармакологической нгуки является целенаправленный поиск новых высокоэффективных и безопасных лекарственных веществ.

Современные антибиотики и синтетические антимикробные средства занимают ведущее место в лечении бактериальных инфекций. Их применение при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях достигает 70-100% больных в хирургии, гинекологии и других заболеваний, до 50-60% при болезнях молодняка.

Трудности лечения я профилактики инфекционных заболеваний, обусловленные разнообразием биологических форм возбудителей, постоянным возникновением мультирезистентных форм, появлением новых видов опасных патогенов, определяют актуальность проблемы создания новых противомикробных средств.

Необходимость в новых препаратах обусловлена разнообразными причинами: расширение антимикробного спектра, повышение активности, активность в отношении устойчивых возбудителей, улучшение фармакокинетических свойств, снижение токсичности и др.

При проведении микробиологического мониторинга за 5 лет был отмечен возросший удельный вес полирезистентных метицилинрезистентных штаммов Staphilacoccus aureus (10,2-66,7%); Pseudomonas aeruginosa (5,2-18,8%); множественная лекарственная устойчивость Staphilacoccus epidermidis (14,1-55,6%) к трем и более препаратам антимикробного действия (П.В. Горшенин, Р.Н. Мамлев, М.Е. Марусина 2002).

В этих условиях появление в клинической практике новых антибактериальных препаратов, активных в отношении полирезистентных штаммов, представляют огромный интерес.

Представленная работа посвящена скринингу вновь синтезированных соединений на предмет их антимикробной активности, атак же разработке и изучению перспективы использования нового дезинфицирующего средства на основе четвертичных аммонийных соединений.

Цель работы. Основной целью работы явился поиск новых высокоэффективных соединений с противомикробной активностью среди продуктов органического синтеза и изучение биологической активности перспективных соединений с целью внедрения в ветеринарную практику и установление зависимости биологической активности от химической структуры. А так же разработка и экспериментальное обоснование применению нового высокоэффективного дезинфектанта на основе четвертичных аммонийных соединений (ЧАС).

Задачи исследований:

• Провести скрининг противомикробной активности среди новых продуктов

органического синтеза и выявить высокоактивные соединения по отношению к тест - культурам микроорганизмов;

• Провести углублённые исследований, выявленных при скрининге веществ с высокой биологической активностью, на специфическую активность по отношению тест-штаммам бактерий: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Staphylococcus epidermidis. Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa и грибов рода Candida albicans;

• Выявить взаимосвязь между химической структурой соединений и

биологической активностью исследуемых веществ.

• Разработать новый дезинфицирующий препарат на основе ЧАС.

• Изучить фармакологические и токсикологические свойства нового препарата

Научная новизна. В результате проведенных исследований изучена противомикробная активность 270 вновь синтезированных соединений по отношению к скрининговым штаммам - S taphilacoccus aureus, Esherichia coli и Candida albicans. Проведённые опыты позволили выявить 7 соединений принадлежащих двум классам химических веществ, обладающих высокой противомикробной активностью и значительно превосходящие эффект эталонных препаратов. Проведены углублённые исследования двух вновь синтезированных веществ. Выявлена зависимость противомикробной и фунгицидной активности в зависимости от химической структуры соединений. Показана перспективность целенаправленного синтеза и поиска соединений с противомикробной активностью среди конкретных химических классов. Разработан новый дезинфицирующий препарат на основе четвертичных солей аммония (ЧАС), и проведена его фармако -токсикологическая оценка.

Практическая значимость работы. Полученные данные дают базу об биологической активности вновь синтезированных соединений, разных химических групп. В проведенных экспериментах на основе скрининга выявлено 53 соединений, обладающих противомикробной активностью к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам, из них 11 соединений - рекомендованы для углублённого исследования.

На основании микробиологических и фармакологических исследований доказана эффективность нового дезинфицирующего препарата на основе четвертичных солей аммония с названием албиоцид.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты скрининшвых исследований вновьсинтезированных соединений по отношению к тест - культурам микроорганизмов Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans.

2. Результаты исследований выявленных в ходе скрининга биологически активных соединений, по отношению, к основном патогенным микроорганизмам, ц том числе проявляющих высокую резистентность к противомикробным препаратам.

3. Установлена взаимосвязь галогенового радикала в составе 2-галогенпиридин-З-карбонитриловых соединений.

4. Результаты исследований разработанного препарата, на основе четвертичных аммонийных соединений, для дезинфекции объектов ветеринарного надзора.

5. Результаты фармакологической и токсикологической оценки разработанного дезинфицирующего препарата

Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на внутри вузовских научно-практических конференциях КубГАУ (2009-2011гг); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 65 -летию Краснодарского НИВИ (2011 г).

Публикация материалов исследовании. По материалам исследования опубликовано 7 научных работ, в том числе 6 в рецензируемом издании, рекомендуемом ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 180 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, собственных исследований, заключения, выводов. Библиография включает 162 литературных источника, в том числе 126 отечественных и 36 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 3 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в период с 2009 по 2012 годы в лаборатории паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института (Краснодарского НИВИ) и сельскохозяйственных предприятиях Краснодарского края.

Исследованию были подвергнуты 270 вновь синтезированных соединений и 30 препаратов на предмет их биологической активности. Исследования проводились совместно с ООО «Поливит» г. Уфа и НИИ ПАВ г. Волгодонск.

Производственные опыты проводили на животноводческих фермах Краснодарского края: ЗАО «Воронцовское» Ейского района и ООО «Мария» Белореченского района.

Алгоритм исследований:

• Изучение биологической активности вновь синтезированных соединений.

• Проведение углублённые исследования биологически активных соединений

к расширенному числу микробиологических штаммов, и дать

токсикологическую оценку наиболее эффективным из них.

• Установить взаимосвязи химической природы соединений и их активность в

отношении исследуемых штаммов микроорганизмов.

• Изучение биологических свойств препарата албиоцид — на основании оценки

антибактериальной и фунгицидной активности.

• Исследование токсикологических свойств препарата албиоцид - путём

определения острой и хронической токсичности, общего влияния на

организм, кумуляции и раздражающего действий

• Определение экономической эффективности применения соединений ЧАС в

ветеринарии - путём проведения экономических расчётов.

Изучение биологической активности соединений in vitro проводили методом серийных разведений по стандартной методике разведений дезинфекгантов и антисептиков в питательном агаре на 2 тест-культурах бактерий (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) и культуре грибов (Candida albicans).

Опыт по определению ангамидагичесюй активности соединений проявляющих высокую активность в отношении тесг-кулиур проводили в трех повтормостях с использованием контрольного посева без препарата. В качестве объектов исследования использовали бакгерипльные культуры: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Candida albicans, Staphylococcus epidermidis. Streptococcus, Pseudomonas aeruginosa, а также грибы Candida albikans и Trichophyton mentagrophytes.

В ходе экспериментального исследования применялись клинические, фармакологические, токсикологические, микробиологические и другие методы исследований.

Острая и хроническая токсичность препаратов определялась согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств (Е.В. Арзамасцев, 1997).

Исследуемый препарат албиоцид относится к группе веществ четвертичных аммониевых соединений. В качестве действующих веществ содержащий: алкилбензилдиметиламмоний хлорид, дидецилдиметиламмоний хлорид, этандиал, диформиль, щавелевый альдегид и глутаровый альдегид. Представляет собой

прозрачную маслянистую жидкость желтого цвета, со специфическим запахом.

Изучение антимикробной активности препарата албиоцнд, проводили методом серийных разведений in vitro по стандартной методике разведений дезинфектантов и антисептиков в питательном агаре на 8 культурах бактерий.

Изучение острой токсичности препаргта проводили на 30 белых крысах. Препарат вводился в нативном виде в желудок, бельм крысам-самцам живой массой тела 120-160 г, с помощью металлического зонда Было испытано 4 дозы: I, 2, 3 и 5 г/кг массы тела. За'животными вели наблюдение в течение 2-х недель после введения, отмечая сроки гибели и клиническую картину интоксикации. Учитывали общее состояние животных, сохранение двигательных функций, аппетита, состояние шерстного покрова, дыхания, реакцию на внешние раздражители.

Расчёт средне-смертельных дозы (ЛД50) проводился методом пробит- анализа в модификации Прозоровского В.Б. Этот метод позволял определить угол наклона зависимости «доза - летальный эффект» и соответственно получить параметры ЛД84и ЛД16. Приближённое значение стандартной ошибки ЛД50 вычисляли по эмпирической формуле Гаддама.

Субхроническая токсичность изучалась в течение 28 дней на 30 белых крысах с массой тела 100 - 120 г, подобранных по методу пар-аналогов

Дозу препарата вводили через зонд внутрижелудочно. За животными велось ежедневное наблюдение, учитывая аппетит и общее состояние. Также проводились морфологические исследования крови перед каждым повышением дозы препарата Гибель животных регистрировали на 16, 18, 19, 20, 22, 24, 26, 27 сутки от начала опыта

Изучение аллергизирующего действия препарата албиоцид проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скарификационного теста).

Для воспроизведена феномена Артюса-Сахарова было подобрано 2 группы кроликов по три кролика в каждой массой тела 1,8-2 кг. Всем кроликам в области спины выстригали небольшие участки шерсти.

В первой группе в подкожную клетчотку выстриженных участков вводили раствор албиоцид в концентрации 600 мг/л в дозе 1 мл/кг, во второй (контрольной) группе - сыворотку крови лошади в той же дозе.

Препараты вводили шестикратно с интервалом шесть дней. Наблюдение за животными вели ежедневно, в течение всего срока назначения препаратов и 6 дней после его окончания, учитывая воспалительную реакцию в местах инъекции.

Антибактериальную активность препарата албиоцид изучали in vitro по стандартной методике, в соответствии с методическим указанием о порядке первичной апробации новых дезинфицирующих средств, для ветеринарной практики

Дезинфицирующие свойства препарата албиоцид определяли на контаминированных тест-культурами (Escherichia coli и Staphylococcus aureus) тест-объектах. В качестве тест-объектов использовались деревянные, кирпичные и металлические поверхности. Контаминированный тест-обьект подсушивали в течении одного часа при комнатной температуре, а затем обрабатывали средством албиоцид из опрыскивателя. Температура рабочего раствора дезинфицирующего средства и воздуха во время проведения опытов была в пределах 18-20°С, относительная влажность 65-75%. Все опыты были поставлены в пятикратной повторности.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1 Изучение биологической активности вновь синтезированных соединений

Были проведены скрининговые исследования по изучению противомикробной активности 270 вновь синтезированных соединений, принадлежащих к разным химическим группам, по отношению к тест-культурам - St. aureus, Е. coli и Candida albicans.

По результатам исследования было выявлено, что 74 соединений проявляют активность по отношению к St. aureus, что составляет 24,9%. Не оказывали существенного влияния на данный микроорганизм 223 изученных соединений (75,1%). По отношению к грамотрицательным микроорганизмам, в частности, к кишечной палочке эти показатели составляют: 54 (18,2%) и 243 (80,4%), соответственно (таблица 1).

Таблица 1 — Результаты первичного скрининга антимикробных соединений (п=297)

Производные соединений Активность в отношении:

Escherichia coli. Staphylococcus aureus Candida albicans

Оксиранов (134) 21 30 8

Пиридинов (98) 8 15 3

Изатина (27) 1 8 0

ЧАС (38) 24 21 15

Всего (297) 54 74 26

Низкую ИрОтИвомикробную активность (МПК 125-1000 мкг/мл) по отношению к Изучаемым штаммам показали 85,6% к Staphylococcus aureus и соединений 9l,5% k Escherichia coli. Наименьшую активность показата соединения изатина.

По результатам скрининговых исследований выявлено 74 соединения проявивших высокую ПМА по отношению к Staphylococcus aureus и 54 к Escherichia coli. В отношении Staphylococcus aureus производные изатина проявляют ПМА в диапазоне 0,6-4,8 мкг/мл. При этом высокую активность к St. aureus имеют 3 соединения.

Наиболее активное соединение обладает МПК=0,3 мкг/мл и проявляет высокую активность к стафилококку: МПК по отношению к St. aureus составляет 25-62 мкг/мл.

В группе производных оксиранов получены следующие результаты: активность к Escherichia coli проявили 6 соединений, МПК которых находится в диапазоне 53-98 мкг/мл, что свидетельствует об умеренной активности. Так же высокую активность показали соединения четвертичных солей аммония (ЧАС), соединения этой группы проявляли активность в отношении широкого спектра возбудителей, в том числе резистентных к антимикробным препаратам, и были отобраны для дальнейших исследований по разработки нового препарата.

Среди веществ, проявивших наиболее высокую активность, 7 соединений были исследованы по активности к 10 тест - культурам для определения биологической активности к штаммам: Citrobacter frendii, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes.

Соединения, проявляющие противомикробную активность в отношении данных штаммов, имеют перспективность к дальнейшим исследованиям. При анализе противомикробной активности по отношению к отдельным штаммам получены следующие данные (табл. 2). Наибольшую активность в отношении кокковой микрофлоры проявляют соединения пиридинов, в отношении же бактерий кишечной группы и патогенных грибов большую активность показали производные оксиранов.

При анализе противомикробной активности по отношению к отдельным штаммам получены следующие данные (табл. 2). Наибольшую активность в отношении кокковой микрофлоры проявляют соединения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-метилфенил)-2-цианооксиран-2-л] метилен }малононитрил, в отношении же бактерий кишечной группы (грамм -) 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил.

Наибольшую активность в отношении всех изучаемым штаммов микроорганизмов показало соединение 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил. Максимальная активность соединения проявилась в отношении Candida albicans (МПК составляет 19мкг/кг). Соединение 2-амино-6-(3-бромфенил)-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3,1,0] гекс-2-ен-1,5дикарбо-нитрил угнетает рост Candida albicans в 21 мкг/мл. При этом соединение 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитркл проявляет максимальное

бактериостатичесоте действие в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов: St. aureus, Е. coli, St. epidermidis, Ps. aeruginosa с МПК 30 мкг/мл. Соединение 2-амино-6-(3-бромфенил)-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3,1,0]гекс-2-ен-1,5дикарбо-нитрил угнетает рост штаммов грибов рода кандида и трихофитон в концентрации 31 мкг/мл, так же оказывает выраженную активность в отношении грамм положительной микрофлоры.

Таблица 2. Активность вновь синтезированных соединений в отношении широкого спектра микроорганизмов

Виды бактерий § S3 H

Исследуемые соединения § •Q С С 5 § 1Н 5. ¿г ас-$ у <о о Klebsiella pneumom Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris а "у а 1 1 £ iO Candida, albicans 3 I s: Si ........

N° Синтезированные соединения Минимальная подавляющая концентрация МП К, мкг/мл

Производные оксирпнов

jVsl 2-амино-6-(3-бромфенил)-4-(дщш.тометилен)-3-ам0ицикяа[3.1.0]гекс-2<.'н-1.5оикар6о-нитрил* 250 44 i6 230 230 ¡72 250 250 21 31

ЛЫ 2-/а.иино(3-фенил-2-цианооксиран-2-ия)метияен]лшононитриа* 98 115 44 98 98 24 IIS 98 44 61

т 2-{чмино[3-(4-фтщхЫн и.%)-2- иианооксиран-2-ш ]метилеи)малононитрил * 98 j Oy 32 44 60 26 по УО 62 ? t ./ /

N°4 2-/а.мино13-(4-метилфенил)-2-цианооксира11~2-ш ¡метилвн/малононитрш * 51 53 37 62 62 98 116 96 6! 62

Производи пиридиыов

№5 2-Хлор-5,6.1. 8-тетрагидрохонололин-З,4-дикарбонытрил * 44 59 41 44 66 39 36 62 62 66

Ш 2-Бром-5,6,?,8' тетрагидрохонолопии-3,4-дикарбонитрш * 55 62 44 51 62 29 44 58 33 58

Ms 7 2-шк)-5,6. Z &-тетрагидрохонО!юлин-3,4-Оикарботиприл * 29 24 53 32 24 26 28 31 19 24

контроль Фуратшдон 62 ИЗ 29 66 68 61 250 66 32 44

* Р<0.05

Таблица 3. Активность соединений ЧАС в отношении широкого спектра микроорганизмов

Виды бактерий Исследуемые "" ... соединения с •о 8 -V) Зггер'ососсиз ру- ; 5 И С а. й а 8 3 1 ^ 1 "1 «о с. ¿Р •Й-О о ВасШи* тЬШк I | I Е .5 1 чЗ "з ,5 о ; Т. теп1а%горку/ех )

Л'» 1 Синтезированные соединения Минимальная подавляющая концентрация МПК, мкг/мл

Алкклбепзилдиметилзммоний хлориды

Х«1 Катана» Ш4С50 (аикнл 12-14 изонропаиол) 416 416 111 277 416 277 4! б 1277 416 416

Кетяпав 1214 С80 124 124 82 124 82 82 124 124 124

№3 Кагалав 1214С80сВг 185 185 124 124 124 124 185 188 ¡24 188

№•1 Катапаи 1214 С80 с .1' 82 124 82 82 82 .....82 98 124 82 124

№5 Катана» 181Л >¡000 625 >1000 >1000 Г 938 >1000 •-1000 >1000 >¡000 >1000

Алкилт ■гаме гидам мои ий х лориды

№6 Алкоиав 1816 416 416 416 02 3 1416 625 625 277 410

№7 Алкола»1618 277 277 416 416 4)6 416 625 416 277 416

М>8 Аякопав 1618 с Вг 416 416 416 625 416 625 625 416 416 416

№9 Алкопаа 1618 с 1 277 277 4 ¡6 277 416 416 416 416 277 416

Дидецияшшепшаммоякй хлориды

№10 Сегопав С70 124 124 124 82 124 124 185 124 185 185

№11 Сегопав СЗО >1000 625 938 >К>00 >1000 938 >1000 >1000 >1000 >1000

контроль Фуразолидон 62 83 29 66 68 61 , 250 66 32 44

Контроль (ДЛЯ ЧАС) Бромонил 625 277 350 __________ 625 625 625 625 416 625 625

* - соединения проявляющие активность более чем 1000 мгк/мл далее не исследовались

♦* - разведения использовались для определения концентрации концентрация >125 мкг/мл считается эффективной для ЧАС

Соединения ЧАС выбранные для исследования в отношении широкого спектра микроорганизмов исследовались на тех же культурах. Что и вновьсинтезированные соединения. Результаты исследования представлены в таблице 3.

Как видно из таблицы 3 наиболее эффективными являются соединения алкилбекзилдиметиламмоний хлорид (кагапав С80) и дидецилдиметиламмоний хлорид (сетопав С70). Высокоэффективными противомикробными средствами на основе ЧАС являются соединения с МПК менее 125мкг/мл. Активность данных соединений обусловлена углеродными показателями соединений, так как установлено, что наибольшую активность проявляют ЧАС с углеродным показателем С|2-1б-

Введение в состав соединений галогенового радикала приводило к существенному изменению свойств соединений, как химических, так и бактерицидных. Так введение брома (Вг) приводило к уменьшению биологической активности соединений, в отношении бактериальных и грибковых патогенов Введение же йодного (I) радикала увеличивает бактерицидную и фунгицидную активность соединений, при этом работа с соединениями осложняется низкой стабильностью соединений, а так же высокой окислительной способностью галогена.

Остальные соединения, отобранные для углублённого исследования, проявили среднее бактериостатическое действие по отношению к грибам и спорообразующим бактериям.

3.1 Противомикробная активность синтетических соединений

1. Производные оксиранов - содержат напряжённый трёхчленный цикл и карбонильную группу, что создаёт предпосылки к каскадным процессам циклизации, приводящим к образованию гетероциклических соединений сложного функционального окружения.

Наибольшую активность среди скрининговых соединений оксиранов показали 2-амино-б-фенил-4-(дицианометилен)-3-азабицикло[3.1.0]гекс-2-ен-1,5-дикарбонитрш и 2-{амино[3-(4метилфенил-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил.

Производные данных соединений имеющие в молекуле — малонитрил оказывают существенно большую активность по отношению к бактериям кишечной группы, при этом активность в отношении кокковой микрофлоры и грибов остаются на достаточно низком уровне.

Соединение 2-амино-6-фенил-4-(дицианометилен)-3-азабщикло-[3.1.0]-гекс-2-ен-1,5-дикарбонитрил оказывает выраженную фунгицидную активность, а так же высокую МПК по отношению к кокковой микрофлоре. При этом для дальнейших исследований было выбрано соединение 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малоконитрил так как это соединение проявляем активность к наибольшему числу возбудителей.

2. Производные пиридинов - гетероциклические соединения, содержащие в своём составе никотиновую кислоту или её амид, что обуславливает широкую биологическую активность.

Наибольшую активность среди изученных производных пиридинов проявили 2-галоген-5,6,7,8-тетраги0рохинолин-3,4-дикарбонитрилы. Активность

соединений существенно изменяется в зависимости от галогена входящего в состав молекулы, что подтверждается данными лабораторных исследований. Производные данного соединения показали результаты показавшие их перспективность для дальнейших исследований. Особый интерес представляет 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-ди1сарбонитрил, имеющий в составе йодный радикал, что позволяет предположить высокую активность и низкую скорость развития резистентность у патогенов.

3. Производные изатина — показали высокую активность в отношении грамм положительной микрофлоры, однако, их активность в отношении бактерий кишечной группы была незначительной.

Наибольшую активность среди производных изатина проявил 1-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензил)-1Н-индол-2,Здион, МПК которого составил 24мкг/мл для St. aureus.

4. Соединения ЧАС показали достаточно высокую активность в отношении широкого спектра микроорганизмов. При этом соединения с МПК>125мкг/мл считали перспективными.

К основным элементам структуры, которые обуславливают противомикробные свойства ЧАС, относятся гидрофильные г.олярныо. четвертичные аммониевые группы и гидрофобные углеводородные радикалы. ПМА в гомологических рядах моно- и бис- четвертичных аммониевых солей зависит от типа заместителей у атома азота, длины углеродной цепи радикала, степени его насыщенности и разветвлгнности, наличия гидроксильных, эфирных групп и т.п. Соединения, содержащие коротдацепочечные углеводородные радикалы (С<8) у атома четвертичного азотг, лишены или проявляют умеренные противомикробные свойства Увеличение количества атомов углерода в радикале приводит к появлению поверхностной: активности и вместе с ней противомикробных свойств. Активность повышается при введении в структуру ЧАС ненасыщенных углеводородных радикалов, ассиметричного атома азота, простых эфирных связей.

Как видно из таблицы 3, наибольшую активность показали: апкилбензилдиметиламмоний хлорид (С[2-[4) и децилдиметиламмоний хлорид обладающие поверхностно активным действием, за счет достаточно длинной углеродной цепи. Механизм их антимикробного действия связан с нарушением проницаемости мембран клеток, позволяя проникать в них низкомолекулярным соединениям, а также наличием в составе молекулы заряженного пятивалентного азота.

Таким образом, на основании углублённых и доклинических исследований соединений 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил выявлено, что соединения проявляют высокую противомикробную активность по отношению к штаммам грамположительных и грамотрицагельных микроорганизмов, выделенных от больных животных (в том числе полирезистентным штаммам): Ps. aeruginosa, Kl. pneumonia, St. aureus, St. epidermidis, Sal. haemolyticus, E. faecalis, Str. pneumonia, S. pyogenes и С. albicans.

При изучении противостафилококковой активности соединений установлены минимальные бактериостагические и бактерицидные концентрации, равные 1,5-6,2 мкг/мл.

Установлена зависимость активности соединений в группе 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилов установлена зависимость биологической активности от галогенового радикала. Достоверно установлена наибольшая активность йод содержащих соединений.

Для увеличения эффективности, а также времени возникновения резистентности было решено использовать сочетание алкилбензилдиметиламмоний хлорида и децилдиметиламмоний хлорида показавших высокую эффективность в ходе скрининговых исследований.

3.2 Токсические свойства соединений.

Для проведения опыта использовали крысятях с живой массой 99,6 -110,8г, отобранных по методу аналогов. Животным внутрижелудочно вводили определённую дозу препарата: 550, 800, 1200, 1600, 2000, 2500, 3000, 4000, 5000 и 6000 мг/кг, после чего за ними велось постоянное клиническое наблюдение в течение 24 часов.

За 4 часа до начала опыта кормление и поение опытных животных прекращалось. Выбранные дозы препарата вводились крысятам внутрь в виде водного раствора при температуре 37°С, после чего они помещались в клетки. Через два часа после введения препарата животным предоставляли свободный доступ к воде и пище.

В процессе проведения опыта было установлено, что после введения соединений животным в дозах 4000, 5000, 6000 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15 — 30 минут, которое затем пеэеходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрила у животных, которым ввели соединение, в дозе 6000 мг/кг наблюдали клонические судороги и непроизвольное мочеиспускание. Животные не отвечали на внешние раздражители и, через несколько mhhjt, констатировали гибель.

Исходя из факта гибели опытных животных, не перенёсших дозу 6000 мг/кг живой массы, и оставшихся в живых животных с введённой дозой - ЗОООмг/кг живой массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами 4500мг/кг.

В процессе проведения опыта было установлено, что после введения препарата животным в дозах 3000, 4000, 5000 мг/кг, у крыс проявлялось сильное беспокойство в течение 15-30 минут, которое затем переходило в угнетение. Через три часа после введения препарата отмечалась диарея. Спустя пять часов с момента введения 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксираи-2-ил]метилен}малононитрил у животных которым ввели 5000мг/кг наблюдали клонические судороги, непроизвольное мочеиспускание. Животное не отвечало на внешние раздражители и через несколько минут погибало.

Исходя из факта гибели животных, не перенесших дозу 5000 мг/кг живой массы, и оставшегося в живых животного получившего дозу - 2500мг/кг живой

массы, по условию методики была выбрана средняя между двумя крайними дозами 3750мг/кг.

После предварительного нахождения LD50, у 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрила доза составила 4500 мг/кг живой массы, а у 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]мегилен} малононитрил 3750 мг/кг, дозы были введены двум группам животных по 10 крыс в каждой, подобранных по принципу пар-аналогов по полу и живой массе. С соблюдением всех условий, как в опыте по предварительному нахождению смертельной дозы. По результатам опыта установл ена гибель 50% животных.

Доза 3000 мг/кг живой массы тела, не вызвавшая гибель животных, является максимально переносимой дозой препарата при его однократном пероральном введении для 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитркла (LD0). Доза 4500 мг/ кг живой массы является средней смертельной дозой при однократном введении (LD50). Доза 5000 мг/кг массы тела является - абсолютно смертельной (LD100).

Следовательно, вещество 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил по классификации химических веществ, при однократном оральном пути введения относится к III классу токсичности - умеренно токсические вещества. Данный опыт был также проведён по отношению 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрила.

Исследование острой токсичности данных соединений на мышах показало ш: принадлежность к классу низко токсичных соединений (3-й класс опасности). Величина ЛД50 соединений 2-Йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбснитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил равна 4500,0 и 3750,0 мг/кг т.е. они в 14,5-17,4 раза менее токсичны, чем эталонный препарат (натриевая соль мефенамовой кислота).

3.3 Биологическое действие препарата албиоцид.

При концентрации препарата албиоцид то 2% до 0,125% включительно рост всех микроорганизмов отсутствовал. Данные изучения бактериальной активности препарата приведены в таблице 4.

Тест-культура Концентрация препарата, % при экспозиции 30 мин. и расходе препарата ЗбОмл/м2

3% 1% 0,5% 0,05% 0,005%

Результаты обезвреживания

Escherichia coli - - - - +

Staphylococcus aureus - - - - +

Приведённые в таблице 4 данные свидетельствуют, о высоком бактерицидном действии препарата. Из данных таблицы видно, что инактивация кишечной палочки (Escherichia coli) произошла при обработке тест-обьектоз рабочим раствором препарата албиоцид при концентрации 0,05% экспозиции 30 мин. Инактивация золотистого стафилококка произошла при концентрации

рабочего раствора препарата албиоцид 0,05%, экспозиции 30 мин. Опыт проводился на тест-объектах без использования органической защиты тест-культур.

3.4 Фармако — токсикологические свойства препарата албиоцид.

Острая токсичность. Данные смертельного эффекта использовались для определения параметров - 1ЛЭ16, Ь05о и ЬЭм- По результатам токсикологических исследований установлено, что ЛД50 препарата албиоцид составило - 4,6±1г/кг, что свидетельствует о его принадлежности к 3-ему классу умеренно токсичных соединений (ГОСТ 12.1.007-76).

Изучение аллергизирующеш действия препарата албиоцид проводили путем воспроизведения местных аллергических реакций (феномена Артюса-Сахарова, скаркфикационного теста).

Установлено, что албиоцид не вызывает феномен Артюса-Сахарова У всех опытных животных после шестикратного введения препарата на месте инъекций не отмечалось характерных для геморрагического воспаления признаков (отеки, уплотнения). Сразу после инъецирования в местах укола образовывались небольшие инфильтраты, размером с маленькую горошину и отек, вызванные травматическим повреждением кожи, которые рассасывались в течение 3-24 часов.

Субхроническая токсичность. Препарат задавали ежедневно в различных дозах от 1Л}5о (4600 мг/кг) по схеме представленной в таолице 5.

В IV период погибло 3,3 % животных - одна крыса, на 16-е сутки. В V период погибло 20 % животных — две крысы на 18-е сутки, три крысы на 19-е сутки, одна крыса на 20-е сутки. В VI период погибло 10 % животных от общего числа крыс до начала опыта. Одна крыса погибла на 22-е сутеи, две крысы на 24-е сутки. В VII период погибло 10 % животных. Две крысы на 26-е сутки и одна крыса на 27-е сутки.

Таблица 5. Субхроническая токсичность препарата албиоцид.

Номер периода I II | III IV V VI VII

Сутки от нгнала опыта 1-4 5-8 9-12 13-16 17-20 21-24 25-28

Цоли ОТ Ш50 0,1 0,15 0,22 0,34 0,5 0,75 1,12

Доза от иЭ5о 200 300 440 680 1000 1500 2240

Гибель (%) 0 0 0 3,3 20 10 10

Суммарная доза за период (на 1 кг массы тела) 800 1200 1760 2720 4000 6000 8960

Суммарная доза (на 1 кг массы тела) 800 2000 3760 6030 10030 16030 24990

ЬБ50 при многократном скармливании препарата, суммарная доза препарата за I — V периоды опыта - 10480 мг/кг массы тела животного (800+1200+1760+2720+4000).

Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном применении препарата албиоцид рассчитываем по формуле Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича (1964): Кк = 1Л)50 хроническая^ ЬО50 остра, , Кк = 10480 :4600 = 2,28.

Коэффициент кумуляции равен 2,28 что относит препарат ко второй группе -вещества с выраженной кумуляцией (по Л. И. Медведю, 1964).

Влиян ие албиоцид на показатели крови крыс

В ходе эксперимента по изучению субхронической токсичности препарата албиоцид были проведены гематологические исследования крови от шести животных из каждой группы. Результаты представлены в таблице 6.

Из полученных данных определённый интерес представляет изменение количества лейкоцитов, СОЭ, а также изменения в лейкоцитарной формуле опытных животных.

На 9—12 сутки от начала опыта при суммарной дозе препарата албиоцид 1760 мг/кг, происходило прогрессивное возрастание лейкоцитов на 7,8 % по сравнению с начальным периодом (суммарная доза - 800 мг/кг), на 8,1 % по сравнению с контролем и на 26,2 % - на 17-20 сутки. Это говорит о нарастающей воспалительной реакции в организме. На 13-16 сутки повысилась скорость оседания эритроцитов на 29,8 % по сравнению с началом опыта и на 49 % - по сравнению с контролем. На 13-16 сутки повысилась скорость оседания эритроцитов на 29,8 % по сравнению с началом опыта и на 49 % - по сравнению с контролем.

Высокие концентрации албиоцид (800—1760 мг/кг) влияют на эригропэз: происходит снижение количества эритроцитов (с 7,61 до 6,95 1012/л) в опытных группах на 9 %, к концу опыта возросло количество ¡слеток на 14 % по отношению к контролю.

Изменения в лейкоцитарной формуле также указывают на происходящие перемены в организме животных опытных групп. Количество лимфоцитов возрастало с увеличением суммарной дозы препарата с 63,7 до 77,5 % и в дозе 4000 мг/кг уже превышгло верхнюю границу нормы. На фоне лимфоцитоза происходило снижение кол ичества сегментоядерных нейтрофилов с 31,6 до 18,4 % , что ниже уровня нормы на 7 %. У животных опытных групп выявляли моноцитопению и низкий процент эозинофилов.

Раздражающее действие препарата албиоцид определяли методом коНъюнктивальных проб. Реакцию учитывали дважды. После нанесения албиоцид спустя 5 минут наблюдали; гиперемию слёзного протока и склеры в Направлении к роговицы.

Указанные изменения постепенно не исчезали через 2-5 часов, полное исчезновение в течение 48 часов, видимых признаков раздражения конъюнктивы и осложнений не отмечали.

Таблица 2. Активность вновь синтезированных соединений в отношении широкого спектра микроорганизмов

"'•••• Виды бактерий Исследуемые с ■ к.* '.л а 6 й «У с са * а? г* У В у £ о ■ \;Ш%ат •С С- 5 | В, $5 ,<о а I 1

соединения р 3" ^ О & ■у ....."5 § 1 1 1 С? '3 5

№ Синтезированные соединения Минимальная подавляющая концентрация МПК. мкг/мл

....................................................................Пр оизводн м окенраноа

2~л.\1то-6-(3-оромф1'>шл)-4-<дицианол<стиячн)-3-азабиинкяо/З, 1,01?скс-2-ен-1 .¡¡дикирбо-нитрш* 250 44 16 230 230 172 250 250 21 31

*>'°2 2-(амчно(3-фсиш-2-циаиооксирин-2-и 1 Умети ма юпоиитриа * 98 115 ■14 98 98 24 115 98 44 61

\ №3 \ 2-)'амгмо[3-(4-фторфенил)'2-ци(шооксиран-2~ ш]метияен}маяонон«трия* 98 109 32 44 60 26 98 62 з: 44

¿64 2-{амино[3-(4-метиифении)-2-цианоокснрап-2-ил/метиаенЬиалонопитрил* 5) 53 V 62 62 98 116 96 61 62

Производные пиридтню

№5 2-Хлор-5.6,7Я-тетр(*гидрохоно:юлин-3.4-дикарбонитрич * 44 59 41 44 ,, 39 36 62 62 66

Ш 2-Вром-5,6. '78- тетрагидрахонолоят-3,4-дикароокитрш " << 62 ■44 51 62 29 44 58 33 58

Ж 2гюд-5. б.8-тетрагидрохонололин-З,4 дикарбонитрил * 29 24 53 32 24 26 28 31 19 24

кошпропь Фуразолидон ИЗ 29 66 68 61 250 66 32 44

* Р<0,05

Таким образом, препарат албиоцид проявляет умеренное аллергизирующее и раздражающего действия

3.5 Клинические испытания препарата албиоцид.

Используя «Методические указания о порядке испытания новых дезинфекционных, средств для ветеринарной практики», от 06.05.1987г. Аг°739-768-М, и согласно «Правилам, проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора» МСХ от 15.07.2002. и положительных результатов лабораторных испытаний были проведены производственные испытания эффективное™ препарата албиоцид. Дезинфекцию проводили препаратом албиоцид на Животноводческой ферме ЗАО «Воронцовское» Ейского района Краснодарского кргя.

Из таблицы 7 видно, что общее количество микробных клеток не превышает 30000 тыс. микробных клеток, подсчитанных на пяти чашках Петри, на которые производились смывы-раззедения 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000. Коли -титр равен 1,0 или более из этих результатов по Рекомендации по санитарно-бактериологическому исследованию смывов с поверхностей объектов подлежащих ветеринарному надзору, качество проведённой дезинфекции расценивается как удовлетворительное.

Таблица 7. Результаты бактериологических исследований после дезинфекции препаратом албиоцид на животноводческой ферме

Объект Показатели

Escherichia coli Staphylococcus Анаэробные бактерии Общее число микробных клеток в 1 мл Коли-титр.

Стены Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 30000 микр/клегок -

Кормушки Не выявлены Не выявлены Не выявдены до 10000 микр/клеток -

Поилки Не выявлены Не выяатены Не выявлены от 1000020000 микр/клеток -

Станок Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 10000 микр/клеток Более 1,0

ворота Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 30000 микр/клеток 1,0

Молоко-провед Не выявлены Не выявлены Не выявлены до 10000 микр/клеток 1,0

скребок Не выявлены Не выявлены Не выявлены От 1000020000 микр/клеток 1,0

Расчёт себестоимости дезинфекции объектов ветеринарного надзора производили в сравнительном аспекте, по сравнению с используемыми, для этих

целей дезинфектантами, при одинаковых затратах на проведение профилактической дезинфекции. При проведении дезинфекции использовали 1 %-ный рабочий раствор препарата албиоцид из расчета 350 мл/м2 обрабатываемой поверхности с использованием аэрозольного генератора ДУК - 2 на животноводческой ферме. За аналоги препарата албиоцид использовали препараты на основе четвертично аммониевого соединения мегадез, вироцид и дезолайн. Сравнительная себестоимость обработки 1000м" препаратом албиоцид с указанными препаратами представлена в таблице 8.

Таблица 8 Сравнительная стоимость препаратов и себестоимость обработки из расчёта на 100м2

Препарат Стоимость препарата фу б/литр) Расход препарата т/100м2 методом орошения Стоимость обработки на 1000^ (руб) Концентрация рабочего раствора

Вироцид 479 3,0 1437 1%

Дезолайн 203 4,0 812 1%

Мегадез 770 3,0 2310 1%

албиоцид 350 3,0 1050 1%

Приведённые в таблице 8 данные показывают, что при всех прочих равных затратах на проведение дезинфекции из расчёта на 100 м2 поверхности, дезсредство албиоцид выгодно отличается от выше приведённых препаратов, так как цена обработки указанной площади составляет 1050 руб., что значительно ниже стоимости этой же обработки препаратами: вироцид - 1437 руб. и мегедез - 2310 руб. при качестве обработки не только не уступающем аналогам, но по ряду показателей даже превосходя их.

Стоит отметить возможность полного цикла производства данного препарата из отечественного сырья, так как все высокоэффективные аналоги дезинфицирующих средств на основе ЧАС производятся в странах ЕС и не имеют производственных мощностей на территории России.

ВЫВОДЫ

1.Проведены скрининговые исследования биологической активности 270 новых химических соединений, из которых 7 были подвержены углублённым исследованиям, по результатом которых два соединения рекомендованы к дальнейшему изучению. По результатам доклинических исследований 2 соединения, 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил, показали высокую

противомикробную активность. Соединения проявляют высокую противомикробную активность по отношению к штаммам грамположительных и грамотрицагельных микроорганизмов, выделенных от больных животных, в том числе: Е. coli, St. aureus, Ps. aeruginosa, Kl. pneumonia, St. epidermidis, Salm. haemolyticus, E. faecalis, St. pneumonia, C. albicans.

2. Установлена зависимость активности соединений в группе 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилов установлена зависимость биологической активности от галогенового радикала. Достоверно установлена наибольшая активность йод содержащих соединений. Соединения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-днкарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил принадлежат к классу малотоксичных веществ (III класс опасности).

3. Разработан новый препарат на основе комбинации ЧАС: алкилбензилдиметиламмоний хлорида и дидецилдимет ил аммоний хлорида и глутарового альдегида, для дезинфекции объектов ветеринарного надзора, обладающий высокой активностью к наиболее часто встречающимся патогенным микроорганизмам.

4. Установлена биологическая активность препарата албиоцид в отношении следующих ми<роорганизмов: Е. coli, St. aureus, Citrobacter frendii. Staphylococcus epidermidis,Streptococcus pyogenes, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, и грибов Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes

5. Установлено, что применение 1% раствора препарата при норме расхода 350мл/м2 и экспозиции 30 минут, эффективно при инфицировании бактериями и грибами относящимися к устойчивым (2-я группа), при которых контроль качества обеззараживания, оценивается по выделению бактерий группы кишечной палочки и стафилококков.

6. Препарат албиоцид по степени воздействия на организм относится к 3-ему классу, умеренно опасных веществ, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. Токсичность препарата ЛД,0 составляет 4,6+0,5 г/кг при введении в желудок. Обладает слабо выраженными кумулятивными свойствами и сенсибилизующим действием

7. Отработаны оптимальные режимы и технологии дезинфекция объектов ветеринарного надзора (животноводческие фермы) раствором препарата албиоцид способом протирания, промывания, погружения, орошения и в виде полидисперсного аэрозоля, которые рекомендуется применять в отсутствие животных.

Экономический эффект составляет 1050 руб. при расходе 3,5 литра концентрата препарата албиоцид на 1000м обрабатываемой поверхности (в ценах 2012 г.).

Препарат албиоцид не представляет экологической и санитарно-гигиенической опасности, так как, обладая свойствами четвертично-аммониевых соединений, не оказывает коррозионного действия и по токсичности относится к умеренно опасным соединениям, что существенно улучшает экологическую обстановку на объектах его применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Практической ветеринарии предлагаются новый дезинфицирующий препарат -албиоцид. Препарат эффективен при бактериальном загрязнении объектов ветеринарного контроля, для текущей и заключительной дезинфекции.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Термохимия гетероагомных соединений. Расчет энгопии сгорания образования функционализированных производных изатина. Гуревич П.А., Саттарова Л.Ф., Могильный Н.Г., Писцов М.Ф., Босяков В.И., Сидельникова В.А., Овчинников В.В. Вестник Казанского технологического университета. 2011. № 20. С. 7-10.

2. Синтез полигексаметиленгуанидин гидрохлорида линейного сгорания. Гуревич П.А., Струнина КБ., Сапожников Ю.Е., Прохницкий A.B., Могильный Н.Г., Струнин Б.П. Вестник Казанского технологического университета. 2012. № 1. С 85-89.

3. Синтез и биологическая активность 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилов. Гуревич П.А., Максимова В.Н., Липин К.В., Ершов О.В., Насакин O.E., Саттарова Л.Ф., Могильный Н.Г., Струнин Б.П. Вестник Казанского технологического университета. 2012. № 1. С. 90-93.

4. Синтез оксиранов и циклопропанов на основе арилиденпроизводных димера малонитрила и изучение влияния заместителей в бензольном кольце на биологическую активность. Гуревич П.А., Бардасов И.Н., Михайлов Д.Л., Лыщиков А.Н., Саттарова Л. Ф„ Могильный Н.Г., Струнин Б.П. Вестник Казанского технологического университета. 2012. № 6. С. 133-136.

5. Синтез и асследование антимикробной активности 4- ароил-6-хлорпиридин-3,5-дикарбонитрилов. Гуревич П.А., Карпов C.B., Григорьев A.A., Насакин O.E., Саттарова Л.Ф., Могильный Н.Г., Струнин Б.П. Вестник Казанского технологического университета. 2012. № 10. С. 195-197.

Подписано в печать 10.09.2812 г. Формат 60x84 1

Бумага офсетная Офсетная печать

Печ. Л. 1 Заказ № 664 Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Могильный, Николай Геннадьевич

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные подходы к созданию новых противомикробных 11 средств

1.2 Биологическая активность химиотерапевтических средств и 16 антисептических препаратов

1.2.1 Обзор химических соединений и их производных по 17 противомикробной активности

1.2.2 Биологическая активность антисептиков и дезинфектантов

1.3 Резистентность микроорганизмов к противомикробным 24 средствам и её значение

1.4 ' Современные средства для дезинфекции, общие требования к 32 дезинфицирующим средствам

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 51 3.1 Анализ противомикробной активности изученных синтетических 51 соединений

3.1.1 Углублённые исследования противомикробной активности 96 высокоактивных соединений

3.1.2 Анализ противомикробной активности изученных синтетических 102 соединений

3.1.3 Результаты скрининговых исследований

3.1.4 Определение противовоспалительного действия изучаемых 115 соединений и влияния их на регенеративные процессы.

3.1.5 Изучение токсичности изучаемых соединений.

3.2 Разработки препарата албиоцид, в качестве дезинфектанта

3.2.1 Физико-химические свойства препарата албиоцид

3.2.2 Изучение бактерицидной активности препарата в лабораторных 124 условиях

3.3.3 Изучение токсичности препарата

3.3.4 Определение дезинфицирующих свойств

3.3.5 Производственные испытания

3.3.6 Экономическая эффективность

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Скрининг и разработка новых антимикробных препаратов"

Одним из наиболее проблемных направлений фармакологической науки является целенаправленный поиск новых высокоэффективных и безопасных лекарственных веществ.

Ежегодно от инфекционной патологии в мире погибают более 17 млн. человек. Трудности лечения и профилактики инфекционных заболеваний, обусловленные разнообразием биологических форм возбудителей, постоянным возникновением мультирезистентных форм, появлением новых видов опасных патогенов, определяют актуальность проблемы создания новых противомикробных средств. При этом, важным фактором возникновения резистентных к антимикробным средствам штаммов является их повсеместное бесконтрольное, не всегда обоснованное применение, как в ветеринарии, так и в гуманной медицине.

Номенклатура средств антимикробной терапии огромна (более 200 антибиотиков) и постоянно увеличивается за счёт внедрения в клиническую практику новых поколений антибиотиков, новейших антибактериальных препаратов, полученных путём химического синтеза [86].

Одним из основных современных направлений в разработке противомикробных средств является синтез аналогов и производных известных препаратов. Из, более чем 15 млн. индивидуальных химических 5 соединений, выделенных из природных источников и искусственно синтезированных, удовлетворяют требованиям науки всего несколько десятков [5].

Большое значение имеет эффективность дезинфекционных мероприятий, которая для практических ветеринарных врачей должна быть эффективной как с биологической и экологической, так и с экономической точки зрения [82,83].

В системе ветеринарно-санитарных мероприятий, обеспечивающих санитарное благополучие объектов ветеринарного надзора, повышения санитарного качества продуктов, сырья и кормов животного происхождения дезинфекция занимает одно из важных мест. Основное назначение дезинфекции - разорвать эпизоотическую цепь путём воздействия на её важнейшее звено - фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму. Дезинфекцию объектов ветеринарного надзора включают в план противоэпизоотических мероприятий по каждой ферме, хозяйству, перерабатывающему сырью животного происхождения предприятия [33,78,80].

Представленная работа посвящена скринингу вновь синтезированных соединений на предмет их антимикробной активности, а так же разработке и изучению перспективы использования нового дезинфицирующего средства на основе ЧАС.

Целыо настоящего исследования является:

Основной целыо работы явился поиск новых высокоэффективных соединений с противомикробной активностью среди продуктов органического синтеза, с последующим изучением их биологической активности для внедрения в ветеринарную практику и установления зависимости биологической активности от химической структуры. А так же разработка и экспериментальное обоснование применению нового высокоэффективного антимикробного средства на основе четвертичных аммонийных соединений, для использования в качестве дезинфектанта.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести скрининг противомикробной активности среди новых продуктов органического синтеза и выявить высокоактивные соединения по отношению к тест - культурам микроорганизмов Staphylococcus aureus и Escherichia coli, а также грибам Candida albicans.

2. Провести углублённые исследований, выявленных при скрининге веществ с высокой биологической активностью, на специфическую активность по отношению тест-штаммам бактерий: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Candida albicans, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pneumonia метицилинрезистентным (MR), Streptococcus pyogenes эритромицинрезистентным (ER), ванкомицинрезистентным (УЩ, Pseudomonas aeruginosa.

3. Выявить взаимосвязь между химической структурой соединений и биологической активностью исследуемых веществ.

4. Разработка нового дезинфицирующий препарат на основе ЧАС.

5. Изучить фармакологические и токсикологические свойства нового препарата.

Научная новизна исследования

•В результате проведенных исследований изучена противомикробная активность 270 синтезированных соединений по отношению к скрининговым штаммам - Staphylococcus aureus АТСС-6538Р, Escherichia coli АТСС-25922 и Candida albicans АТСС-885653. Проведённые опыты позволили выявить 7 соединений принадлежащих двум классам химических веществ, обладающих высокой противомикробной активностью и значительно превосходящие эффект эталонных препаратов.

•Проведены углублённые исследования двух вновь синтезированных веществ. Выявлена зависимость противомикробной и фунгицидной активности в зависимости от химической структуры соединений. Показана перспективность целенаправленного синтеза и поиска соединений с противомикробной активностью среди конкретных химических классов. Разработан новый дезинфицирующий препарат на основе четвертичных солей аммония, и проведена его фармако - токсикологическая оценка.

Практическая значимость работы

В практическом отношении значимость работы определяется тем, что на" основе скрининга выявлено 53 соединений, обладающих противомикробной активностью к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам, из них 11 соединений - рекомендованы для углублённого исследования.

Дезинфицирующий препарат албиоцид с положительным результатом апробирован на МТФ №1 ЗАО «Воронцовское» Ейского района Краснодарского края и животноводческой ферме ООО «Мария» Белореченского района, в качестве дезинфектанта для текущей дезинфекции и получено заключение о его эффективности.

Апробация работы и публикации

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на внутри вузовских научно-практических конференциях КубГАУ (20092011гг); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 65 -летию Краснодарского НИВИ (2011 г), на X научно-практической конференции молодух ученых и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (2012г), на международном молодежном конвенте Ростовской области (2012г).

По материалам исследования опубликовано 9 научных работ, в том числе 7 в рецензируемых изданиях рекомендуемых ВАК РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты скрининговых исследований вновь синтезированных соединений по отношению к тест-культурам микроорганизмов Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans.

2. Результаты исследований выявленных в ходе скрининга биологически активных соединений, по отношению к основным микробиологическим патогенам, в том числе проявляющих высокую резистентность к противомикробным препаратам.

3. Установлена взаимосвязь галогенового радикала в составе 2-галогенпиридин-3-карбонитриловых соединений.

4. Результаты исследований по разработке нового антимикробного препарата, на основе четвертичных аммонийных соединений, а так же результаты фармакологической и токсикологической оценки разработанного препарата

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, собственных исследований, заключения, выводов. Библиография включает 162 литературных источника, в том числе 126 отечественных и 36 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 2 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Могильный, Николай Геннадьевич

5 ВЫВОДЫ

1. Проведены скрннннговые исследования биологической активности 270 новых химических соединений, из которых 7 были подвержены углублённым исследованиям, по результатом которых два соединения рекомендованы к дальнейшему изучению. По результатам доклинических исследований 2 соединения, 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен}малононитрил, показали высокую противомикробную активность. Соединения проявляют высокую противомикробную активность по отношению к штаммам грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, выделенных от больных животных, в том числе: Е. coli, St. aureus, Ps. aeruginosa, Kl. pneumonia, St. epidermidis, Salm. haemolyticus, E. faecalis, St. pneumonia, C. albicans.

2. Установлена зависимость активности соединений в группе 2-галоген-5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3,4-дикарбонитрилов установлена зависимость биологической активности от галогенового радикала. Достоверно установлена наибольшая активность йод содержащих соединений. Соединения 2-йод-5,6,7,8-тетрагидрохонололин-3,4-дикарбонитрил и 2-{амино[3-(4-фторфенил)-2-цианооксиран-2-ил]метилен} малононитрил принадлежат к классу малотоксичных веществ (III класс опасности).

3. Разработан новый препарат на основе комбинации ЧАС: алкилбензилдиметиламмоний хлорида и дидецилдиметиламмоний хлорида и глутарового альдегида, для дезинфекции объектов ветеринарного надзора, обладающий высокой активностью к наиболее часто встречающимся патогенным микроорганизмам.

4. Установлена биологическая активность препарата албиоцид в отношении следующих микроорганизмов: Escherichia coli, Staphilococcus aureus, Citrobacter frendii, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Klebsiella pneumonia, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis, Salmonella typhimurium, и грибов Candida albicans, Trichophyton mentagrophytes

5. Установлено, что применение 1% раствора препарата при норме расхода 350мл/м и экспозиции 30 минут, эффективно при инфицировании бактериями и грибами относящимися к устойчивым (2-я группа), при которых контроль качества обеззараживания, оценивается по выделению бактерий группы кишечной палочки и стафилококков.

6. Препарат албиоцид по степени воздействия на организм относится к 3-ему классу, умеренно опасных веществ, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. Токсичность препарата ЛД50 составляет 4,6+0,5 г/кг при введении в желудок. Обладает слабо выраженными кумулятивными свойствами и сенсибилизующим действием

7. Отработаны оптимальные режимы и технологии дезинфекции объектов ветеринарного надзора (животноводческие фермы) раствором препарата албиоцид способом протирания, промывания, погружения, орошения и в виде полидисперсного аэрозоля, которые рекомендуется применять в отсутствие животных.

6 Предложения производству.

Для внедрения в ветеринарную практику предлагается новое дезинфицирующее средство албиоцид.

Албиоцид - обладает высокой бактерицидной активностью и широким спектром антимикробного действия, как к грамположительным, так и к грамотрицательным микроорганизмам.

Учитывая высокую активность к полирезистентным штаммам, достаточно низкую токсичность (ЛД50 - 4600 мг/кг), представляет интерес для внедрения в ветеринарную практику в качестве дезинфектанта.

Изучение сравнительной устойчивости большого числа штаммов стафилококков (S. aureus, S. epidermidis), синегнойной палочки, протея, грибов рода кандида и трихофитон к препарату албиоцид и сравнение его активности с известными антимикробными препаратами (хлоргексидином биглюконатом, хлорамином, вироцидом) показали, что он в 2-15 раз эффективнее.

4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы наблюдается значительное увеличение заболеваемости животных в связи со снижением эффективности традиционных методов терапии, а так же ростом устойчивости патогенных микроорганизмов к лекарственным средствам.

Появление сульфаниламидов, первых системных препаратов антимикробного действия, положило начало химиотерапии инфекционных заболеваний человека и животных. Последующее открытие антибиотиков, казалось бы, навсегда решило проблему многих из них. Однако с течением времени при использовании антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов и других антимикробных препаратов выявлялось все больше негативных сторон их применения, из которых главными являются: высокая токсичность, побочные действия, отдаленные последствия, а также резистентность к ним микроорганизмов, являющаяся следствием высокой способности последних к мутациям. Отсутствие теории, позволяющей предсказать биологические свойства соединений с оригинальной структурой, приводит к дальнейшему быстрому росту затрат на поиск новых лекарственных средств [Антипов В.А. 1997].

Известно более 15 млн. химических соединений, выделенных из природных источников или искусственно синтезированных, большинство из которых — биологически активны, однако количество веществ удовлетворяющих предъявляемым к противомикробным средствам, ограниченно несколькими сотнями [10].

Ассортимент лекарственных средств, применяемых для лечения инфекционных патологий животных, насчитывает более ста антибактериальных препаратов. Но даже при таком многообразии выбрать эффективное средство для лечения достаточно сложно. Это связанно с изменчивостью микроорганизмов и постоянно возникающими мутациями, обуславливающими устойчивость к конкретным препаратам или даже полную нейтрализацию их действия [44].

149

Необходимость в новых препаратах обусловлена разнообразными причинами: расширение антимикробного спектра, повышение активности в отношении устойчивых возбудителей, улучшение фармакокинетических свойств, снижение токсичности и др.

Одним из основных направлений в разработке противомикробных средств является синтез аналогов из производных известных препаратов [110].

На основании анализа литературных данных нами были исследованы производные 4 групп химических соединений, производные: оксиранов, пиридинов, изатина и четвертичные аммонийные соединения. Вновь синтезированные вещества были получены в ООО «Поливит» (г. Уфа).

Изучение соединений было начато с установления МПК по отношению к 2 тест-культурам бактерий Escherichia coli АТСС-25922 и Staphylococcus aureus АТСС-6538Р и культуре грибов Staphylococcus aureus АТСС-6538Р. Соединения с МПК менее 125мкг/мл считали эффективными в отношении данных культур и подвергали более глубоким исследованиям. Всего за время исследования высокую эффективность проявили 53 соединения, но лишь 11 из них были активны в отношении двух и более тест-культур.

Из 297 исследованных веществ высокую биологическую активность, по отношению к тест-культурам бактерий проявили 3,7% соединений, которые были подвергнуты испытаниям в отношении широкого числа бактериальных патогенов. Два из них показали высокую бактерицидную эффективность по отношению к 10 культурам.

Оба соединения относятся к 3 классу - умеренно токсичных соединений, что позволяет предположить перспективность их дальнейших исследований.

В ходе исследований показана актуальность создания йод содержащих полимерных соединений, их активность выгодно отличается от соединений на основе других катионов, за счет активности атомарного йода вступающего в реакции со структурами клетки баетерий.

150

Важным аспектом в профилактике инфекционных патологий имеет эффективность дезинфекционных мероприятий, которая для практических ветеринарных врачей должна быть эффективной как с биологической и экологической, так и с экономической точки зрения [82].

Основное назначение дезинфекции состоит в разрыве эпизоотической цепи путём воздействия на её важнейшее звено - фактор передачи возбудителя болезни от источника инфекции к восприимчивому организму. Дезинфекцию объектов ветеринарного надзора включают в план противоэпизоотических мероприятий по каждой ферме, хозяйству, перерабатывающему сырыо животного происхождения предприятия [78].

В результате исследований изучения противомикробной активности четвертичных аммонийных соединений и анализа литературных данных, был разработан новый антимикробный препарат албиоцид, для применения в качестве дезинфектанта.

Препарат является комбинацией алкилбензилдиметиламмонияй хлорида и дидецилдиметиламмония хлорида, с добавлением в качестве действующего вещества глутарового альдегида. Он проявляет высокую эффективность по отношению к большинству бактериальных патогенов, относится достаточно быстро разлагается на воздухе не представляя экологической и санитарно-гигиенической опасности, так как, обладая свойствами четвертичнох-аммониевых соединений, не оказывает коррозионного действия и по токсичности относится к умеренно опасным соединениям, что существенно улучшает экологическую обстановку на объектах его применения

В результате проведенных исследований установлено, что албиоцид эффективен в отношении Е. coli в концентрации 0,03%, a St. aureus 0,06% при экспозиции 30 минут. Результаты клинических испытаний препарата албиоцид показали его эффективность в отношении санитарно показательной микрофлоры. При этом препарат не обладает раздражающим и аллергизирующим действием на слизистые оболочки и кожу животных.

151

Использование антибактериальных препаратов на основе ЧАС и препарата албиоцид в частности, позволяет проводить эффективную обработку объектов ветеринарного контроля даже при наличии сильного загрязнения обрабатываемого объекта и в присутствии животных.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Могильный, Николай Геннадьевич, Краснодар

1. Адарченко A.A. Сравнительное исследование активности антибиотиков и антисептиков / A.A. Адарченко, А.П. Красильников, О.П. Собещук //Антибиотики и химиотерапия.-1991.-Т.36, №2.-С.21-23.

2. Альберт, A.B. Избирательная токсичность. Физико-химические основы терапии. В 2-х т / A.B. Альберт // -М.гМедицина, 1989.-300с.

3. Амиды и гидразиды ацилпировиноградных кислот. 4. Синтез и биологическая активность некоторых арилиденгидразидов ароилпировиноградных кислот / В.О. Козьминых, Н.В. Сафонова, A.B. Милютин и др. // Хим.- фармац. журн. 1994. - Т.28, № 3. - С. 42-45.

4. Антибактериальная терапия. Практическое руководство. / Ред. Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. и др. // М.,2000.- 190с.

5. Антибактериальная терапия. Практическое руководство. / Ред. Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. и др. // М.,2003,- 191с.

6. Атлас лекарственных средств. М.: Мир, ОНИКС 21 век, 2001. - 944с.

7. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии иммунологии. — М.: МИА, 2003.-287с.

8. Арзамасцев, Е.В. Современные требования к доклиническому изучению безопасности новых лекарственных препаратов / Е.В. Арзамасцев, Б.И. Любимов//Эксперим. и клин, фармакология,- 1995.-№3.-С.7-12.

9. Ахмеджанов, P.P. Фермент-субстратные комплексы производных дифенила с микросомальным цитохромом Р-450. Электронные спектры иконстанты диссоциации / P.P. Ахмеджанов, А.Н. Хлебнтков // Хим.- фармац. журн. 1999. -Т.26, № 3. - С.51-54.

10. Ахметова, JI. И. Сравнительная характеристика антибиотикочувстви-тельности стафилококков / Л.И. Ахметова, Е.Ю. Перевалова, С.М. Розанова // Человек и лекарство: Тез. докл. III Рос. науч. конф М., 1996. — С.71.

11. Баданов М.И., Лоскутова H.H., Шриро С.И. Оценка эффективности влажной дезинфекции // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1952. №3 — С.79

12. Бекбергенов, Б.М. Чувствительность к цефалоспориновым антибиотикам возбудителей инфекций в хирургии / Б.М. Бекбергенов, О.Н. Спранская, П.С. Навашин // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т. 33, № 8 - С.597-601.

13. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М. Л .Бел енький //Рига, 1971.-151 с.

14. Беспамятнов A.A., Кротов Ю.Д. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде. М.: Химия, 1985.

15. Беталактамные соединения. Взаимосвязь структуры и биологической активности / П.С. Ныс, В.Б. Курочкина, А.В.Скляренко и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45, № 11.- С. 36-47.

16. Бецин Н.П. Ветеринарная обработка животных накомплексах Ростов, 1977.-c.5-20.

17. Богданов, М.Б. Микробиологическая оценка антибактериальных препаратов, используемых для эмпирической терапии внебольничных инфекций нижних дыхательных путей / М.Б. Богданов, Т.В. Черненькая // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45, № 10 - С. 15-18.

18. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов // М.: «МИА», 2002. - 734с.

19. Булеко C.B. Биологическое разрушение четвертичноаммониевых соединений МСХ Украина 1989г . К.: Здорове, 1989. -127,132 с.

20. Бухтиарова, Т.А. Структура противовоспалительная активность арил-амидов изоникотиновой и никотиновой кислот / Т.А. Бухтиарова, Ф.П. Тринус, В.Ф. Даниленко//Хим.- фармац. журн.-1997.-Т.31,№11.-С.30-32.

21. Володин, H.H. Гнойные менингиты у новорожденных (этиология, патогенез, клиника, диагностика, лечение) / H.H. Володин, C.B. Сидоренко, Н.В. Белобородова // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45, №7 -С.22-36.

22. Волянский, IO.JI. Противомикробная активность новых азот- и фосфорсодержащих органических соединений, фенолов и ферроценов: Автореф. дис. д-ра мед. наук / ЮЛ. Волянский //- Москва, 1981.-32с.

23. Восстановительное алкилирование гликопептидного антибиотика эремомицина и его производных / А.Ю. Павлов, Т.Ф. Бердникова, E.H. Олсуфьева и др. // Хим.- фармац. журн 1995 - Т.29, №1.- С.46-48.

24. Вредные химические вещества. Неорганические соединения элементов 1 -4 групп: Химия, 1983.

25. Гайдукевич, А.Н. Исследование количественных соотношений структура-активность в ряду тиосемикарбазидных производных фенилантра-ниловых кислот / А.Н. Гайдукевич, E.H. Свечников, И.А. Зупанец // Хим.-фармац. журн. 1996. -Т.30, № 12.-С.43-45.

26. Галынкин, В.А. Фармацевтическая микробиология / В.А. Галынкин; под ред. Кочерцова В.И.-М.: АРНЕБИЯ, 2003.-350с.

27. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура // М.: Медицина, 1994.-144с.

28. Гигиенические нормы ГН 2.2.5.686 98 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей ЗОНЫ.М., Минздрав РФ, 1998, С.81.

29. Гоик, В.Г. Оценка антибиотикорезистентности стафилококков воздушной экосистемы шести стационаров Санкт-Петербурга / В.Г. Гоик, С.Н. Козлова, К.О. Гранстрем // Антимикробная терапия: Тез. докл. V Междунар. конф. МАКМАХ. М.,2002. - С. 16.

30. Горжковская С.И. Дезинфекция в условиях ветеринарной пракитики. М., 1963. - С. 85-152.

31. Горшенин, П.В Антибиотикорезистентность S. aureus в ДРКБ МЗ РТ / П.В. Горшенин, Р.Н. Мамлев, М.Е. Марусина // Антимикробная терапия: Тез. докл. V Междунар. конф. МАКМАХ. М., 2002. - С. 17.

32. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.-11-е изд., доп.-М.: Медицина, 1989.-400 с.

33. Грибковая инфекция в онкологической клинике / А.З. Смолянская, Н.В. Дмитриева, Е.В. Кулага и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 44, № 4 - С. 25-30.

34. Гущин, И.С. Кардиотоксическое действие антагонистов H 1-гистаминовых рецепторов / И.С. Гущин // Клин, фармакология и терапия -1998. -Т7, №3. С. 82-86.

35. Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном введении / Н.Ф. Измеров // М.: Медицина, 1977. - 197с.

36. Информация о лекарственных средствах для специалистов здравоохранения. Вып. 3 Противомикробные и противовирусные средства, рус. изд. / гл. ред. Навашин С. С // М., - 1998. - С 257-276.

37. Исаева, Г.А. Анализ количественных соотношений структура-анестезирующая активность ацетанилидов с применением регрессионных и квантовохимических методов / Г.А. Исавева, A.B. Дмитриев, П.П. Исаев // Хим.- фармац. журн. 2001. - Т. 24, № 6. - С. 54.

38. Казанов, А.Д. Сравнительная нейротропная активность некоторых производных никотиновой кислоты / А.Д. Казанов // Фармакология и токсикология-1981.-Т. 16,№4.-С. 13-15.

39. Казаченко, A.C. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений золота с гистидином и триптофаном / A.C. Казаченко, Е.В. Леглер, О.В. Перьянова // Хим.- фармац. журн. 2000. - Т.34, №5. - С.34-35.

40. Казаченко, A.C. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений золота с глицином, гистидином и триптофаном / A.C. Казаченко, Е.В. Леглер, О.В. Перьянова // Хим.- фармац. журн. 1999.-Т.ЗЗ, №9. -С.11-13.

41. Карабак, В.И. Микробиологический мониторинг за возбудителями нозокомиальных инфекций (на примере отделения реанимации и интенсивной терапии) / В.И. Карабак // Антибиотики и химиотерапия. 2000. -Т. 45, №3-С. 20-23.

42. К вопросу о безопасности офлоксацина. / С.С. Постников, С.Ю. Семыкин, О.В. Ефремкова и др. // Антибиотики и химитерапия. 1999. - Т. 44, № 10.-С. 20-21.

43. Кожухов, А.Н. О некоторых аспектах дальнейшего развития биологических испытаний / А.Н. Кожухов // Научно- методологические аспекты биологических исследований новых лекарственных препаратов.-Рига: Знание, 1987.-С.9-20.

44. Количественные соотношения структура-активность отро-амииометилфенолов и их производных / Л.А. Кудрявцева, А.Б. Миргородская, Ж.В. Молодых и др. // Хим.- фармац. жури. 1993. - Т.27, № 8. - С. 27-30.

45. Красильников, А.П. Справочник по антисептике / А.П. Красильников //-Мн.: Высш. шк, 1995.-С.367.

46. Кудрявцева, A.A. Соотношение взаимосвязи "структура-активность" (бактериологическая) для 2-аминометилфенолов и их аммониевых соцей / A.A. Кудрявцева, Ж.В. Молодых, PJL Пыткина // Хим.-фармац. журн. 1997. -Т. 13, № 8.-С. 33-38.

47. Кучма, И. Стартегия и тактика применения антисептиков в медицине / И. Кучма // Провизор. 2000. - №22. - С. 48-54.

48. Лекарства, вызывающие удлинение QT-интервала // Безопасность лекарств. Экспресс-информац.- 2000; Бюлл. № 1: 48 (по матер, из Current Problems in Pharmacovigilance, 1998; 22).

49. Лиманов M.O., Иванов С.Б., Крученок Т.Б. Синтез и бактерицидная активность катионных поверхностно-активных веществ, содержащих ассиметричный атом азота. // Хим.-фарм.журн. 1984, №6. -С.703-706.

50. Лярский П.П., Цетлин В.М. Дезинфекция аэрозолями. М. 1981. - С. 49-32.

51. Маршев П.М., Блинов В.А. Действие поверхностно-активных веществ на поверхностное натяжение растворов Международный с-х журнал 1967. -№5.

52. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. В 2 т. / М.Д. Машков-ский. //Москва: ООО "Изд-во Новая Волна",2000.-Т.1.-540с.

53. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Практ. пособие. В 2 т. / М.Д. Машковский // 14 изд., испр. и доп. - М.: Медицина, 2002 - Т. 2.-608с.

54. Методические указания о порядке первичной апробации новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики М. 1986.(63)

55. Методы экспериментальной химиотерапии / Под ред. Г.Н. Першина //М.: Медицина, 1971.-540с.

56. Миргородская, Ж.В. Количественно соотношения структуры-активность ортоаминометилфенолов и их призводных / Ж.В. Мирогородская, С.Н. Молодых, Л.А. Кудрявцева // Хим.- фармац. журн. 1993. - № 8. - С. 2730.

57. Михалев, А.И. Взаимосвязь структура биологическая активность в рядах производных никотиновой кислоты / А.И. Михалев, М.Е. Конынин, Э. Колла // Научн. конф. Перм. гос. фармац. акад.: Тез. докл. — Пермь, 1997. -С. 102.

58. Михалев, А.И. Синтез и биологическая активность гидразида 2-ариламиноникотиновых кислот / А.И. Михалев, Л.Б. Фалалеева, Н.И. Шрам // Хим.- фармац. журн. 1981. - Т. 15, № 1. с. 36-39.

59. Мониторинг уропатогенов и их чувствительность к антибиотикам / К.И. Савицкая, М.Ф. Трапезникова, М.В. Нестерова и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т.46, № 6. - С. 12-20.

60. Навашин, С.М. Рациональная антибиотикотерапия / С.М. Навашин, И.П. Фомина // Рациональная антибиотикотерапия.-М. : Медицина, 1982.-272с.

61. Омельяновский, В.В. Фармакоэкономика антибактериальных препаратов / В.В. Омельяновский, Ю.Н. Попова // Проблемы стандартизации в здравоохранении. -2001. № 4. - С. 14-22.

62. Опыт лечения гнойных ран с использованием с использованием стабилизированного в димекиде нитрата серебра / П.Н. Пульняшенко, Н.П. Безлюдина, Г.М. Ларионов и др. /Клинич. хирургия.-1990. -№1.- С. 35-36.

63. Основные лекарственные средства: Большой справ. -М.: ACT, 1999. -728 с.

64. Оспанова, К.Б. Микробиологические особенности гнойных ран в хирургическом стационаре на современном этапе / К.Б. Оспанова // Мед. картотека. 2001. - № 3. - С. 38-40.

65. Падейская, E.H. Фторхинолоны: значение, развитие исследований, новые препараты, дискуссионные вопросы. 1998. Т. 43, № 11. С. 38-42.163

66. Поляков A.A. Ветеринарная дезинфекция. 4-е изд. М.:Колос, 1975.

67. Поляков A.A., Куликовский A.B. Механизм действия дезинфицирующих средств на микроорганизмы. М., 1971.

68. Поляков A.A. Дезинфекция животноводческих помещений. // Международный с-х журнал 1963. - №4.

69. Поляков A.A. Руководство по ветеринарной санитарии. М.: Агропромиздат, 1986.

70. Попов Н.И., Симецкий М.А. Бактерицидные пены длядезинфекции.// Аэрозоли и их применение в народном хозяйстве. Тезисы 5-ой Всесоюзной конференции, Юрмала, 1987, т.2

71. Попов Н.И., Симецкий М.А. Удавлиев Д.И. Бактерицидные пены от разработки до внедрения.// Ветеринария, 1987,№8.

72. Поройков, В.В. Оптимизация синтеза и фармакологическое исследование их спектров биологической активности / В.В. Поройков, Д.А. Филимонов, A.B. Степанчикова //Хим.- фармац. журн. 1996. - Т. 25, № 9. -С. 20-23.

73. Потёмкин, В.А. Исследование количественной взаимосвязи структура -антибактериальная активность хинолона / В.А. Потёмкин, М.А. Гришина, A.B. Велик // Хим.- фармац. журн. Т. 36, № 6. - С. 22-25.

74. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Под ред. J1.C. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова // М.: Боргес, 2002.384 с.

75. Применение ципрофлоксацина у детей при лечении тяжелых инфекций

76. Н.В. Белобородова, E.H. Падейская, A.B. Бирюков и др., М., 1999.- 79 с.164

77. Продукты взаимодействия гетереноа.2,3-дигидро-2,3-пирролдионов с арил- и гетериламинами и их фармакологическая активность / И.В. Машевская, P.P. Махмудов, Г.А. Александрова [и др.] // Хим.- фармац. журн. -2000.-Т.34, № 12.-С. 13-16.

78. Прозоровский, В.В. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки / В.В. Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко // Фармакология и токсикология. 1978. - № 4. - С. 497-502.

79. Разработка банка данных контроля за антибиотикорезистентностыо возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений / Б.М. Бекбергенов, В.М. Фишман, О.Н. Сперанская и др. // Антибиотики и химиотерапия.- 1988.-Т.ЗЗ,№ Ю С. 782-785.

80. Рафальский, В.В. Гепатотоксичность тровофлоксацина: какое будущее у нового перспективного фторхинолона. / В.В. Рафальский // Клин, микробиология и антимикроб, химиотерапия. 1999. Т. 1, № 1, С. 16-17.

81. Регистр лекарственных средств России. 8-е изд., перераб. и доп. — М.-.РЛС, 2001.-1504 с.

82. Регуляторы ферментативных систем детоксикации среди азотсодержащих соединений / A.C. Саратиков, P.P. Ахмеджанов, A.A. Бакибаев, и др. Томск.: Сибирский издательский дом, 2002. - 264 с.

83. Розенблит А.Б., Голендер В.Е. Логико-комбинаторные методы в конструировании лекарств.- Рига: Зинатне, 1984. 352с.

84. Рудакова, А.В. Цефалоспорины IV поколения в терапии тяжелых госпитальных инфекций: фармакоэкономические аспекты / А.В. Рудакова // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т. 46, № 9. - С. 33-39.

85. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ -М., 2000. С. 264-273.

86. Рябкова, Е.Л. Антибиотикорезистентность нозокомиальных штаммов Е. coli в России / Е.Л. Рябкова, Г.К. Решедько, Л.С. Страчунский // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Рос. науч. конф. -М., 2001. С. 244.

87. Сидоренко, С.В. Антибиотикорезистентность в клинической практике / С.В. Сидоренко // Человек и лекарство: Тез. докл. II Рос. науч. конф. М., 1995.- С. 183.

88. Сидоренко, С.В. Бета-лактамазы расширенного спектра. Клиническое значение и методы детекции / С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т.46, № 12. - С. 27-34.

89. Сидоренко, С.В. Клиническое значение антибиотикорезистентности грамположительных микроорганизмов / С.В.Сидоренко // Инфекции и антимикробная терапия. 2003. — Т. 5, № 2. - С.- 74-82.

90. Синтез и антибактериальное действие поверхностноактивнныхчетвертичных солей аммония, содержащих оксиэтильные радикалы / В.Е.166

91. Лиманов, А.Е. Эпштейн, E.H. Скворцова и др. // Хим.- фармац. журн. -1976.-Т. 10, № 1-е. 63-66.

92. Синтез и бактерицидная активность четвертичных солей N-ациламинопропиламмония / В.Е. Лиманов, А.Е. Эпштейн, М.И. Якушкин и др. // Хим.- фармац. журн. 1981. - Т. 15, № 2 - С. 24-28.

93. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера // — 3-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1982.-464 с.

94. Сравнительный анализ чувствительности возбудителей инфекций в отделении реанимации / А.И. Ханкоева, И.Г. Мултых, Н.П. Шевченко и др. // Антимикробная химиотерапия: Тез. докл. V Междунар. конф. МАКМАХ. -М, 2002.-С. 46.

95. Страчунский Л. С. Проблемы антибактериальной терапии у детей / JI.C. Страчунский // Антибактериальная терапия в педиатрической практике: Материалы Междунар. конф., 25-26 мая 1999 г. М., 1999. - С. 3-8.

96. Структура и чувствительность к антибиотикам возбудителей внеболышчных инфекционных заболеваний бактериальной природы у детей / Г.А. Самсыгина, Т.А. Дудина, М.А. Корнюшин и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45, № 3. - С. 15-19.

97. Учайкин, В.Ф. Значение антибиотиков в лечении инфекционных заболеваний у детей / В.Ф. Учайкин // Антибактериальная терапия в педиатрической практике: Матер. Междунар. конф., 25-26 мая 1999 г. -М., 1999.-С. 9-14.

98. Фаязова, М.П. Микробиологический мониторинг инфекций мочевыхпутей в детском многопрофильном стационаре / М.П. Фаязова //167

99. Антимикробная химиотерапия: Тез. докл. IV Междунар. конф. МАКМАХ. Т.З. М., 2001. - Прил. 1.-С.37.

100. Чувствительность к антибиотикам возбудителей инфекций мочевыводящих путей у детей / В.Г. Асеева, С.Н. Зоркин, К.С. Абрамов и др. // Антимикробная терапия: Тез. докл. V Междунар. конф. МАКМАХ.-М., 2002.-С. 10.

101. Чувствительность метициллинрезистентных штаммов S. aureus, выделенных от больных, к левофлоксацину / Л.А. Габбасова, АЛ. Бурмистрова, Л.И. Бахарева и др. // Антимикробная терапия: Тез. докл. V Междунар. конф. МАКМАХ. М., 2002. - С. 15.

102. Экономические потери, связанные с инфекциями, вызванными S. aureus / Р. Дж. Рубин, К.А. Харрингтон, А. Пун и др. // Клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. — Т. 2, № 2. — С. 4756.

103. Этиология и микробиологическая диагностика нозокомиальных пневмоний у новорожденных / Т.Б. Фадеева, Г.В. Стерхова, С.В. Сидоренко и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2001. -Т. 46, № 3. - С. 17-22.

104. Эффективность меропенема в лечении тяжелых осложненных инфекций мочевыводящих путей / Н.А. Лопаткин, И.Н. Деревянко, Л.А. Ходырева и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 44, № 3 - С. 1921.

105. Эффективность цефепима в лечении абдоминального сепсиса у хирургических больных / Е.Б. Гельфанд, Б.З. Белоцерковский, Е.А. Алексеева и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т. 44, № 11 - С. 17-22.

106. Юрков Г.Г. Дезинфекция, дезинсекция, дератизация // Эпизоотология с микробиологией. СМ., 1981. С.99.

107. Яковлев, С.В. Критический анализ антибактериальных препаратов для лечения инфекций в стационаре / С.В. Яковлев // Consilium Medicum . — 2002.-Т. 4, № 1. С. 22-30.

108. Яковлев, С.В. Линезолид первый препарат нового класса антимикробных средств оксазолидинонрв: перспективы лечения грамположительных инфекций / С.В. Яковлев // Инфекции и антимикроб, терапия. - 2001. -Т.З, № 6. - С. 169-174.

109. Ball P. Quinolone-induced QT interval prolongation: a not-so-unexpected class effect. J Antimicrob Chemother 2000; 45: 557-9.

110. Ballow C, Jones R, Biedenbach D, Boimston A. Clin Microbiol Infect 2001; 7(Suppl. 1): 394.

111. Borek AP, Peterson LR, Noskin GA. abstr. 2299. In: Abstracts of the130. 40 Interscience Conference on Antimicrobial Agents and chemotherapy, Toronto, ON. Washington, DC: American Society for Microbiology, 2000; p. 185.

112. Bradley, S. Staphylococcus aureus infections and antibiotic resistance in older adults / S. Bradley // Clinic. Infect. Diseas. 2002. - V.34, № 2. - P. 211216.169

113. Comparison of agar dilution, microdilution and disk elution methods for measuring the synergy of cefotaxime and its metabolite against anaerobs / J. Smith, D. Henry, J. Ngui-Yen et all // J. Clin. Microbiol. 1986. - V.23, № 6. - P. 11041108.

114. D'Agata, E.M.C. Antimicrobial-resistant, gram-positiv bacteria among patient undergoing chronic hemodialysis / E.M.C. D'Agata // Clinic. Infect. Diseas. 2002. -Y.35, № 10. - P. 1212-1218.

115. Diagn Microbiol Infect Dis / M.A. Pfaller, R.N. Jones, S.A. Messer, et all. -1998 -№30.-P. 121-129.

116. Domagk G. Eine neve Klasse von Desinfektionsmitteln. // Dtsch. Med. Wschr. 1935, № 32. - P. 829-832.

117. Efficacies of selected disinfectants against Mycobacterium tuberculosis / M. Best, S.A. Sattar, V.S. Springthorpe, M.E. Kennedy // J. Clin. Microbiol. 1990.-№ 10.-P. 2234-2239.

118. First International Moxifloxacin Symposium Berlin 1999, Ed. Mandell L., -"Springer", Berlin, New York, London, 2000; 190 pp.

119. Hachem R, Afif C, Gokaslan Z, Raad I. Linezolid. Data on File Pharmacia & Upjohn Company, 2000. Desinfektionsmittel-Liste der DGHM. Wiesbaden,-4>1997.

120. Halkin H. Adverse effects of the fluoroquinolones. — Rev Inf Dis 1988; 10 (Suppl.l): 258-61.

121. Hendershot PE, Jungbluth GL, Cammarata SK et al. abstract. J Antimicrob Chemother 1999; 44: (Suppl. A): 55.

122. Hoeffken G., Meyer H.P., Winter J. et al. Efficacy and safety of moxifloxacin (MFX) vs claritromycin (CLR) for the treatment of community-acquired pneumonia (CAP)/ 21th Intern. Congr. Chemother., Birminghem, UK, 1999; Moxifloxacin Posters.

123. Hooper D.C., Wolfson J.S. Adverse effects of the quinolones. -— In . #. "Quinolone antimicrobial agents", 2nd ed, Eds Hooper D.C., Wolfson J.S., Washington, 1993; 473-80

124. Increasing resistance to fluoroquinolones in E. coli from urinary tract infections in the Netherlands / W. Goettsch, W. Vanpelt, N. Nagelkerke et all //J. of Antimicrob. Chemother. -2000. -V.46, № 2. -P. 223-228.(329)

125. Isenberg H.D. Essential procedures for clinical microbiology., 1998; 232234.

126. J.R. Bruke and Frly, J. Org. Chem, 61,530-533 (1996)

127. Lasher Sisson T, Jungbluth GL, Stalker DJ et al. In: Proceedings of the 39th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and chemotherapy, 1999; San Francisco (CA): 1194.

128. Mouton JW, Jansz AR. Clin Microbiol Infect 2001; 7: 486-91.

129. Nani, E. Confronto delhefficacia in vitro di alcuni antibiotici aminoglicosidi / E. Nani, G. Bersando // Gazz. Med. Ital. -1987. -V.146, № 1/2. P. 53-56; Mea. pe^epaTHB. ^ypH. -1988. - № 6.- C.989.

130. Nicaido, H. Outer membrane permeability in P. aeruginosa. In: The bacteria / H. Nicaido, R.E.W. Hancock// Sokatch J. ed Orlando. 1986. - № 10. - P. 145193.

131. Presterl E., Diem E., Graninger Antibiotikatherapie von Infektionen bei Verbrennunqspatienten. Acta Chir. Austriaca. 1997. - S. 325-330.

132. Ramphai R, Hoban DJ, Pfaller MA, Jones RN, Comparison of the activity of two broad-spectrum cephalosporins tested against 2,299 strains of Pseudomonas aeruginosa isolated at 38.

133. Reliability of a disk diffusion method using semiconfluent growth in the determination of aminoglycoside resistance / P. Huovinen, E. Herva, M. Katila et all // Microbiol. 1986. - V.94, № 3. - P. 153-157.

134. Smith PF, Birmingham MC, Zimmer GS et al. abstract. Clin Infect Dis 1999; 29: 960.

135. Stalker DJ, Kearns GL, James L et al. Clin Infect Dis 1998; 27: 1061.

136. Stoppe J, Ruther F. Zentralnevrose Nebenwirkungen verschildener antibakterieler substanzen//Infection.-1991, 19 Suppl. 1.-S.29-32.

137. Swenson J.M., e.a. Special tests for detecting antibacterial resistance. In Murray PR, e.a. eds.

138. Vandepitte J., Engbaek., Piot P., Heuck C.C. Основные методы лабораторных исследований в клинической бактериологии // ВОЗ. Женева. -1994.-С. 132.

139. Von Eiff С, Peters G. J Antimicrob Chemother 1996; 43: 569-73.

140. Wexler HM, Molitoris D, Veisanen ML, Finegold SM. abstr. 2304. In: Abstracts of the 40lh Interscience Conference on Antimicrobial Agents and chemotherapy, Toronto, ON. Washington, DC: American Society for Microbiology, 2000.

141. Wilson A P.R., Gruneberg R.N. Ciprofloxacin. 10 years of clinical experiencz. "Maxim Medical", Oxford, 1997; 275 pp.

142. Young, L. Aminoglicoside resistance: a word perspective / L. Young, I. Hindler // Amer. J. Med. 1986. - V.80, № 6. - P. 15-21.

Информация о работе

Могильный, Николай Геннадьевич
кандидата ветеринарных наук
Краснодар, 2012
ВАК 06.02.03

Диссертация

Скрининг и разработка новых антимикробных препаратов - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы