Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Скрининг и изучение новых экстремофильных микроорганизмов, устойчивых к повышенным концентрациям солей натрия с биоцидными свойствами

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гильванова, Елена Альбертовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Определение биологических границ жизни

1.2. Группа микроорганизмов, устойчивых к экстремальным отклонениям физических параметров окружающей среды

1.3. Группа микроорганизмов, устойчивых к экстремальным отклонениям химических параметров окружающей среды

1.4. О влиянии некоторых анионов на микробный рост

1.5. Биотехнологический потенциал экстремофильных микроорганизмов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Скрининг и изучение новых экстремофильных микроорганизмов, устойчивых к повышенным концентрациям солей натрия с биоцидными свойствами"

Микробная жизнь в экстремальных (выходящих в человеческом понимании за пределы «нормы») природных и антропогенных условиях, может быть удивительно разнообразна. Понятие «экстремофилы», «любящие экстремальность», введенное в практику Macelroy (1974), указало на возможность поиска новых микроорганизмов в нишах, ранее даже в принципе не представлявшимися возможными для жизни. Микробиология экстремофилов стала активно развиваться в последнее десятилетие, начавшись с нескольких больших обзоров (Madigan & Marrs, 1997; Horikoshi & Grant, 1998), обозначившись все большим количеством симпозиумов, секвенированных геномов, зарегистрированных патентов, с запуска и согласованного финансирования программ, таких, как национальный научный фонд США и программа NASA о жизни в экстремальных условиях, появлению таких наук, как экзо- и астробиология, а также европейских программ Union's Biotechnology of Extremo-philes и Extremophiles as Cell Factories (Aguilar, 1996; Aguilar et al., 1998).

Факторы экстремальности условно могут быть разделены на физические и химические отклонения окружающей среды от «нормальности» (Rothschild & Mancinelli, 2001). Физические простираются в область высоких и низких температур, давлений, влажности, ультрафиолетового и радиоактивного излучения. К химическим отклонениям относят вариации рН в кислую и щелочную сторону, наличие в среде высоких концентраций соли (NaCl), ионов токсичных металлов например, меди и ртути. В силу того, что наличие ядовитых катионов двухвалентных металлов, вероятно, не может способствовать какой либо известной форме жизни, и греческий термин «рЫ1ео»-«любить» здесь неуместен, для обозначения последней группы «микроорганизмов», используется название «толерантные к высоким концентрациям ионов тяжелых металлов». Часто встречаются экстремофилы со смешанным типом устойчивости, когда, например, гипертермофильность сочетается с пьезофильностью, галофильностью и алкалотолерантостью, что свойственно, в частности для многих представителей Archaea.

Одной из наиболее изученных групп химических экстремофилов являются галофильные бактерии, уже длительное время привлекающие внимание исследователей. В классическом понимании, это микроорганизмы, растущие при высоких концентрациях соли, под которой подразумевается хлорид натрия. Имеется лишь ряд общих упоминаний, о том, что NaCl может быть заменен на бромид или сульфат (Vreeland, 1984). Между тем, среди натриевых солей есть одно- и много- замещенные производные, практически инертные, и химически активные, обладающие окислительными и восстановительными свойствами, гидролизующиеся и стабильные в водных растворах. Очевидно, что та или иная реакция микроорганизмов в ответ на введение отличной от хлорида натриевой соли в питательную среду может также являться ответом на появление соответствующих анионов в их жизненном пространстве.

Если исключить из обсуждаемого ряда соединения, такие, например, как гипохлорит, перманганат, феррицианид натрия (и т.д.), биоцидная активность которых проявляется в результате окислительных или восстановительных реакций с белками, полисахаридами и другими компонентами клетки, то можно обнаружить немало химически нейтральных, но, вместе с тем, достаточно токсичных для представителей микробного мира соединений. К таковым, относятся, например, бензоат, сорбат, салицилат, азид, и вероятно, многие другие натриевые соли. Очевидно, что способность к подавлению жизненных функций микроорганизмов в ряде случаев не может быть объяснена лишь с позиций химической агрессивности аниона или каких-то других, чисто химических процессов. Для нас главным являлся вопрос: возможно ли существование явления «анионтолерантности», как проявления экстремо-фильности, выраженного в том, что разные микроорганизмы будут существенно отличаться по своему отношению к какому-либо «аномально» токсичному аниону в силу своих генетических особенностей.

В связи с выше сказанным, целью настоящей работы являлась демонстрация существования явления анионтолерантности как одной из форм экс-тремофильности. При этом также предполагалось получить количественные данные о токсичности солей натрия различной химической природы, осуществить необходимый скрининг, показать на найденных штаммах наличие вариаций чувствительности различных групп микроорганизмов к избранным химическим факторам. При наличии устойчивости планировалось подробно охарактеризовать отдельные штаммы и молекулярно генетическими методами (по 16S рРНК), показать родственность (или филогенетическую удаленность) внутри исследуемой выборки микроорганизмов.

Для достижения поставленной цели обнаружения явления анион-резистентности у бактерий, как одной из разновидностей экстремофиль-ности необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать метод количественной оценки токсических свойств химических веществ (натриевых солей различных кислот) по отношению к широким группам бактерий.

2. Исследовать в сравнимых условиях их токсичность и построить ряд активности по L90.

3. Выделить из природных мест обитания, а также из техногенных ниш бактерии, устойчивые к высоким концентрациям токсичных солей и предположительно относящиеся к анионтолерантным разновидностям экстре-мофилов.

4. Получить чистые культуры ряда выделенных штаммов и определить последовательность генов кодирующих их 16S рРНК.

5. Провести филогенетический и морфолого-биохимический анализ выделенных штаммов и сделать вывод о наличии филогенетического родства или отсутствия такового в выборках толерантных (анионтолерантных) культур, выделенных из географически удаленных мест обитания.

Научная новизна. Впервые установлен ряд микробной токсичности натриевых солей. В группе алкалофильных бактерий обнаружены широкие вариации устойчивости бактерий по отношению к бензоату, нитриту, азиду, селениту, фториду, а также некоторым другим токсичным солям натрия. Выделены культуры, проявляющие толерантность к 10% нитрита, 2% азида и 10% бензоата натрия. Продемонстрирована высокая денитрифицирующая активность нитрит-толерантных изолятов, относящихся к роду Halomonas. Определены полные последовательности 16S рРНК у 7 культур, для 2 культур -фрагменты данного гена. Показано филогенетическое сродство некоторых нитрит- и бензоат-толерантных изолятов, нитрит- и азидустойчивых культур. Для обозначения предположительно новой группы экстремофильных микроорганизмов введен термин анионтолерантные культуры.

Практическое значение. Разработан метод количественной оценки токсичности новых соединений с использованием в качестве тест-объекта интегральных микробных ассоциаций почвы. Создана коллекция штаммов, включающая нитрит-, азид- и бензоат- (и некоторые др.) толерантные бактерии. Полные последовательности генов 16S рРНК 7 культур депонированы в банке данных EMBL. Разработана схема аноксического (бескислородного) окисления органических субстратов с применением азотной кислоты в качестве акцептора электронов. Показан высокий денитрифицирующий потенциал некоторых штаммов рода Halomonas в процессах удаления связанного азота в форме солевых смесей содержащих анионы N03" и NO2", из растворов, имеющих высокую ионную силу, являющихся характерными отходами процессах обогащения некоторых тяжелых металлов и очистке газовых выбросов от NOx (Гильванова и Усанов, 2001, 2003).

Апробация работы. Основные результаты исследования были представлены на следующих конференциях: Конференция, посвященная 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова, (Уфа, 1999); III Съезд Доку-чаевского общества почвоведов (Суздаль, 2000), Международная конференция «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, изложения результатов, выводов, приложений и списка цитируемой литературы, содержащего 211 ссылок. Работа изложена на 117 страницах машинописного текста, содержит 26 рисунков и 8 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Гильванова, Елена Альбертовна

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод интегральных почвенных образцов для количественной оценки бактерицидной активности химических соединений, основанный на использовании микробных ассоциаций почвы.

2. Обнаружен новый тип экстремофильности у бактерий - анионтоле-рантность. Анионтолерантные микроорганизмы - представители микробного сообщества, проявляющие жизненную активность в растворах, содержащих повышенные концентрации токсичных солей натрия. Биологическая зона устойчивости к солям натрия с высокой биоциднои активностью в подавляющем большинстве случаев находится в алка-лофильной части микробного сообщества.

4. Денитрифицирующие бактерии, растущие на средах с высоким содержанием нитрита натрия (до 8-10% в среде), локализованы в третьей подгруппе Halomonas (грамотрицательные изоляты), а также в кластере аэробных спорообразующих бактерий, объединяющих новые родовые группы: Lentibacillus, Salibacillus и Virgibacillus (грамположительные изоляты).

5. Аэробные спорообразующие бактерии, способные к развитию в присутствии 10% бензоата натрия, по строению 16S рРНК (при степени гомологии 95-96%) филогенетически близки к недавно обозначенному роду Oceanobacillus.

6. Культуры, способные к росту в средах с 1,5-2,0%) азида натрия относятся к родам Enterococcus и Halomonas.

7. Обнаружено близкое филогенетическое родство в отдельных группах нитрит- и бензоатустойчивых культур (IB-256, IB-B4 и IB-B8), нитрит-и азидустойчивых культур (IB-I6 и IB-A6).

1.6. Заключение

В настоящее время не существует четких определений нормы и экстре-мофильности, как и разграничения между ними. По-видимому, универсальных определений этих терминов не может быть в принципе, и существует лишь условное ранжирование внутри групп экстремофилов. Особенно это характерно для микроорганизмов, устойчивых к высоким температурам, поскольку до 1990 года существовало разделение на термотолерантных и термофильных микроорганизмов, нормально развивающихся при соответствующих температурах (см раздел 1.2.). Недавно в эту группу были включены гипертермофиллы, развивающиеся в диапазоне 90-121°С (Madigan & Oren, 1999). На этом примере четко видно, как границы наших представлений изменяются, в зависимости от их глубины. Наука об экстремофилах, весьма динамично развивающаяся область микробиологии. Об этом свидетельствует хотя бы тот факт, что из 80 полностью секвенированных геномов порядка 30 были прочитаны для экстремофилов и архебактерий, в подавляющем большинстве случаев также относящихся к различным группам микроорганизмов с этими удивительными возможностями.

Помимо фундаментального, изучение экстремофилов коренным образом меняет биотехнологические решения, приближая их к химической технологии. Совершенно очевидно, что любые новые микробные объекты с экстремальными возможностями будут служить источником новых ферментов, биологически активных веществ или являться основой для создания качественно иных технологических решений. В этом связи, попытка найти новый ареал экстремофиль-ности в микробном мире, представленная в настоящей диссертации, кажется нам уместной и логичной в контексте тех работ, которые выполнялись в этой области микробиологии в последние 10-20 лет.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объекты исследований

В работе использовали лабораторную коллекцию анионтолерантных культур микроорганизмов, выделенных из разнообразных природных мест обитания (культуры, обозначенные аббревиатурой IB), а также типовые штаммы Российской (ВКМ), Немецкой (DSZM) коллекций микроорганизмов.

В процессе работы, чистые культуры хранили при +4-г5°С на чашках Петри, содержащих агаризованные среды BS, XBz и ВТ, пересевая с периодичностью один раз в три месяца. Для более длительного хранения использовали замораживание бактериальной суспензии, содержавшей 12-16% глицерина при -18ч--20°С. Для физиолого-биохимических тестов, в экспериментах по обнаружению денитрифицирующей способности, использовали 2-3-х суточные колонии чистых культур, полученные путем высева бактериальной суспензии, разведенной в стерильном растворе 0,9% хлористого натрия, на базовую агаризо-ванную среду.

В экспериментах, связанных с изучением денитрификации, использовали анаэробную накопительную культуру, полученную в течение суток на среде MGF при 40°С.

2.2. Материалы и реагенты

В работе использовали соли и реактивы квалификации Ч.Д.А. и Х.Ч., а также агар фирмы "Difco", пептон (Семипалатинск), дрожжевой экстракт фирмы "Gibco", Казаминовые кислоты "Difco", неорганические и органические натриевые соли фирмы "Sigma". В работе применяли ферменты, олигонуклеотид-ные праймеры, смесь дНТФ "Fermentas", "Promega", агарозу разного типа фирм "Sigma" и "Promega", а также набор Gel Purification Kit (Germany).

2.3. Микробиологические методы 2.3.1. Питательные среды

Для хранения и поддержания выделенных культур на чашках Петри, и в экспериментах по определению токсичности неорганических и органических натриевых солей, использовали среду ВТ следующего состава, в граммах:

Питательный бульон "Nutrient broth" 8

Дрожжевой экстракт 2

КН2Р04 2

Агар 16

Вода дистиллированная 1000 мл рН после стерилизации 6,8

Перед стерилизацией, кислотность среды доводили до значения 6,8, используя 20% раствор КОН, и контролируя рН с помощью рН метра ОР-211/1 ("Radelkis", Венгрия). Стерилизацию сред осуществляли автоклавированием при 1 ати в течение 40 минут. Вариант питательной среды с высоким значением рН (9,2-9,4) получали путем смешения стерильных растворов 10% Ыа2С0з и собственно питательной среды, непосредственно перед разливом ее в чашки Петри. Во всех остальных средах, рН корректировали теми же методами.

Для хранения нитритустойчивых культур готовили агаризованную базовую среду BS следующего состава, в граммах:

Дрожжевой экстракт 10

NaN02 10

NaCl 40

KH2P04 2

Агар 16

Вода дистиллированная 1000 мл рН среды 9,2-9,4 рН среды доводили до 9,2-9,4 как описано ранее.

Денитрифицирующую активность нитрит-толерантных культур определяли при выращивании на жидкой среде MGF, содержащей следующие компоненты, в граммах:

Дрожжевой экстракт 50

NaN02 20

КН2Р04 4

Na2C03 6

Вода дистиллированная 1 ООО мл рН среды после стерилизации 9,2-9,4

Питательная среда SM2 с нитратом для проведения экспериментов по анаэробному культивированию штамма Halomonas sp. J1 имела следующий состав:

Дрожжевой экстракт 20

NaN03 20

NaCl 10

КН2РО4 4

Na2C03 6

Вода дистиллированная 1000 мл рН среды после стерилизации 9,2-9,4

Облигатную потребность нитритустойчивых культур в ионах натрия определяли по наличию или отсутствию бактериального роста на безнатриевой среде МК, аналогичной по составу среде ВТ, за исключением того, что вместо №гСОз был использован К2СО3. Общее содержание натрия, вносимого в тестовую среду МК вместе с другими компонентами среды, составляло 90-100 мг/мл.

2.3.2. Селективные среды для скрининга на основе токсичных солей натрия

Для выделения нитритустойчивых бактерий использовали жидкую накопительную среду SM, состав которой в (г) приведен ниже: Дрожжевой экстракт 10

NaN02

KH2P04

Na2C03 2 5

Вода дистиллированная рН среды после стерилизации

1000 мл 9,2-9,4

Для скрининга нитритустойчивых бактерий использовали варианты среды SM, в состав которых вместо дрожжевого экстракта входили такие энергетические субстраты, как глюкоза, этанол, ацетат, бутират, глицерин, пируват. Среды с этими компонентами имели аббревиатуру G1M, ЕМ, AM, ВМ, GM, и РМ соответственно.

Для выделения бензоатустойчивых бактерий готовили жидкую накопительную среду XBz, содержащую в граммах: Питательный бульон Nutrient broth 5 Дрожжевой экстракт 2

Бензоат натрия 80 рН до нужного значения доводили как описано выше. Чистые культуры бензоат-толерантных бактерий поддерживали на агари-зованных средах ВТ и XBz, содержащих бензоат натрия в количестве 3% (w/v).

Азидтолерантные бактерии выделяли, используя жидкую, а поддерживали на твердой того же состава питательной среде XAz, в граммах: Nutrient broth 5

Дрожжевой экстракт 2

Азид натрия 10

КН2Р04 Агар

Дистиллированная вода рН среды 2

1000 мл 9,2-9,4

16

КН2Р04 Агар

Дистиллированная вода 2

16

1000 мл рН среды 9,2-9,4 рН до нужного значения доводили как описано выше.

2.3.3. Условия культивирования и инокуляции

Инкубирование на чашках Петри и в пробирках осуществляли в биологических воздушных термостатах типа ТС-80-М2 при рабочей температуре 35-37°С, за исключением экспериментов, связанных с определением температурного диапазона роста культур. Для инкубации в анаэробных условиях, накопительную и чистую культуру микроорганизмов получали, выращивая в специальных стеклянных пробирках с завинчивающимися крышками и заполненных до верха питательной средой. Культивирование на воздушно-термостатируемых качалках типа УВМТ-12-250 проводили в 250 мл колбах, содержащих 50 мл соответствующей среды. Выращивание осуществляли при температуре 36-37°С и скорости перемешивания 180-200 об/мин.

2.3.4. Почвенные образцы, отбор и их хранение

В качестве природных источников новых бактериальных изолятов использовали отдельные пробы почв и осадков, отобранные в период времени 1998-2000 гг. в географически удаленных местах: Россия (Башкирия, Бурятия, Сибирь), Украина (Крым), Израиль (побережье Мертвого, Красного и Средиземного морей) и США (Аризона и Флорида). В экспериментах использовали также и модельные смеси (интегральные почвенные образцы). В таблице 2 приведены места и время отбора почвенных проб, использованных для составления интегрального образца №2, который служил источником бактериальных ассоциаций во всех экспериментах по определению микробной токсичности солей натрия.

2.3.5. Приготовление и хранение интегральных почвенных образцов

Для приготовления модельных (интегральных) смесей пользовались следующей методикой. Подсушенные в течение суток на открытом воздухе почвенные образцы освобождали от крупных частиц и инородных включений, из каждой пробы отбирали равные навески, которые затем объединяли и тщательно размалывали в фарфоровой ступке пестиком до однородного состояния. Полученную смесь расфасовали в мешочки из полиэтилентерефталатной пленки, запаивали, и далее хранили в герметичном стеклянном или металлическом сосуде при температуре -5 4- -10°С (Гильванова, Усанов, 2003).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гильванова, Елена Альбертовна, Уфа

1. A new chemolithoautotrophic arsenite-oxidizing bacterium isolated from a gold mine: phylogenetic, physiological, and preliminary biochemical studies / J.M. Santini, L.I. Sly, R.D. Schnagl et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 66.-P. 92-97.

2. Abdul-Raouf U.M. Comparison of combinations of diluents and media for enumerating of xerotolerant yeasts Zygosaccharomyces rouxii / U.M. Abdul-Raouf, C.A. Hwang, L.R. Beuchat // Lett. Appl. Microbiol. 1994. - V. 19. - P. 28-31.

3. Abe F. Pressure-regulated metabolism in microorganisms / F. Abe, C. Kato, K. Horikoshi // Trends Microbiol. 1999. - V. 7. - P. 447-53.

4. Abe F. The biotechnological potential of piezophiles / F. Abe, K. Horikoshi // Trends Biotechnol. 2001. - V. 19. - P. 102-108.

5. Acquisition of azide-resistance by elevated SecA ATPase activity confers azide-resistance upon cell growth and protein translocation in Bacillus subtilis / A. Nakane, H. Takamatsu, A. Oguro et al. // Microbiology. 1995. - V. 141. - P. 113-121.

6. Adams M.W. Extremozymes: expanding the limits of biocatalysis / M.W. Adams, F.B. Perler, R.M. Kelly // Biotechnology. 1995. - V. 13. - P.662-668.

7. Adams M.W. Finding and using hyperthermophilic enzymes / M.W. Adams, R.M. Kelly // Trends Biotechnol. 1998. - V. 16. - P. 329-332.

8. Adaptation of Bacillus FTU and Escherichia coli to alkaline conditions / A.V. Avetisyan, P.A. Dibrov, A.L. Semeykina et al. // Biochimica et Biophysica Acta. 1991.-V. 1098.-P. 95-104.

9. Aguilar A. Extremophile microorganisms as cell factories: support from the European Union / A. Aguilar, T. Ingemansson, E. Magnien // Extremophiles. -1998.-V. 2.-P. 367-373.

10. Aguilar A. Extremophile research in the European Union: from fundamental aspects to industrial expectations / A. Aguilar // FEMS Microbiol. Rev. 1996. -V. 18.-P. 89-92.

11. Alkaline detergent enzymes from alkaliphiles: enzymatic properties, genetics and structures / S. Ito, T. Kobayashi, K. Ara et al. // Extremophiles. 1998. - V. 2.-P. 185-190.

12. An Escherichia coli chromosomal ars operon homology is functional in arsenic detoxification and is conserved in gram-negative bacteria / C. Diorio, J. Cai, J. Marmor et al. //J. Bacteriol. 1995. -V. 177. -P.2050-2056.

13. Anaerobic respiration and energy conservation in Paracoccus denitrificans. Functioning of iron-sulfur centers and uncoupling effect if nitrite / E.M. Meijer, J.W. van de Zwaan, R. Wever et al. // Eur. J. Biochem. -1979. V. 96. - P. 6976.

14. Andrews S. Optimisation of methodology for enumeration of xerophilic yeasts from foods / S. Andrews, H. De-Graaf, H. Stamation // Int. J. Food Microbiol.1997.-V. 35.-P. 109-116.

15. Arahal D.R. Phylogeny of the family Halomonadaceae based on 23 S and 16S rDNA sequence analyses / D.R. Arahal, W. Ludwig, K.H. Schleifar // Inter. J. Syst. Evol. Microbiol. 2002. - V. 52. - P.241-249.

16. Bacillus marismortui sp. nov., a new moderately halophilic species from the Dead Sea / D.R. Arahal, M.C. Marquez, B.E. Volcani et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1999. - V. 49. - P. 521-530.

17. Bacillus salexigens sp. nov., a new moderately halophilic Bacillus specie / M.J. Garabito, D.R. Arahal, E. Mellado et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1997. - V. 47.-P. 735-741.

18. Barkay T. Metal and radionuclide bioremediation: issues, considerations and potentials / T. Barkay, J. Schaefer // Curr. Opin. Chem. Biol. 2001. - V. 4. -P.318-323.

19. Battista J.R. Why is Deinococcus radiodurans so resistant to ionizing radiation? / J.R. Battista, A.M. Earl, Mie-Jung Park // Trends Biotechnol. 1999. - V.7. -P. 362-365.

20. Bergey's manual of bacteriology // Baltimore: Williams and Wilkins Co. 8th ed.- 1974.- 1258 pp.

21. Binkerd E.F. The history and use of nitrate and nitrite on in the curing of meat / E.F. Binkerd, E. Kolari // Food Cosmet. Toxicol. 1975. - V. 13. - P. 655-661.

22. Brabban A.D. Characterization of growth and product formation by a thermophilic strain of Streptomyces thermoviolaceus / A.D. Brabban, C. Edwards // J. Appl. Bacteriol. 1996.-V. 80.-P. 651-658.

23. Casella S. Potential of denitrifiers for soil environment protection / S. Casella, W.J. Payne // FEMS Microbiol. Lett. 1996. - V. 140. - P. 1-8.

24. Characterization of a haloalkalophilic strictly aerobic bacterium, isolated from Pantelleria island /1. Romano, B. Nicolaus, L. Lama et al. // Syst. Appl. Microbiol. 1996. -V. 19. - P. 326-333.

25. Characterization of the reduction of selenate and tellurite by nitrate reductases / M. Sabaty, C. Avazeri, D. Pignol et al. // Appl. Environ. Microbiol. 2001. - V. 67.-P.5122-5126.

26. Classification of thermophilic streptomycetes / B. Kim, N. Sahin, D.E. Minnikin et al. // Int. J. System. Bacteriol. 1999. - V. 49. - P. 7-17.

27. Clifford D. Biological denitrifcation of spent regenerant brine using a sequencing batch reactor / D. Clifford, X. Liu // Wat. Res. 1993a. - V. 27. - P. 1477-1484.

28. Clifford D. Ion exchange for nitrate removal / D. Clifford, X. Liu // J. Am. Water Works Assoc. 1993b. - P. 135-143.

29. Cold-adapted enzymes: from fundamentals to biotechnology / C. Gerday, M. Aittaleb, M. Bentahir et al. // Trends Biotechnol. 2000. - V. 18. - P. 103-107.

30. Comparative sequence analyses on the 16S rRNA (rDNA) of Bacillus species / J.D. Wisotzkey, P.J. Jurtshuk, G.E. Fox et al. // Int. J. System. Bacteriol. 1992. -V. 42.-P. 263-269.

31. Concentration and transport of nitrate by the mat-forming sulfur bacterium Thioploca / H. Fossing, V.A. Gallardo, B.B. Jorgensen et al // Nature. 1996. -V.374. -P.713-715.

32. Conversion of cyanide to formate and ammonia by a pseudomonad obtained from industrial wastewater / J.M. White, D.D. Jones, D. Huang et al. // J. Industrial Microbiol. 1988. - V. 3. - P.263-272.

33. Daly M.J. Engineering radiation-resistant bacteria for environmental biotechnology / M.J. Daly // Curr. Opin. Biotechnol. 2000. - V. 11. - P. 280-285.

34. Demirjian D.C. Enzymes from extremophiles / D.C. Demirjian, F. Moris-Varas, C.S. Sassidy // Curr. Opin. Chem. Biol. 2001. - V.5. - P. 144-151.

35. Denariaz G. A Halophilic Denitrifier, Bacillus halodenitrificans sp.nov / G. Denariaz, W.J. Payne, J. Le Gall // Int. J. Syst. Bacteriol. 1989. - V. 39. - P. 145151.

36. Denariaz G. Denitrification of concentrated sodium nitrate solutions by the moderate halophilic denitrifier Bacillus halodenitrificans / G. Denariaz, W.J.

37. Payne, J. Le Gall // Proc. FEMS Symp. Microbiology of extreme environments and its potential for biotechnology, Troia, Portugal, 18-23 sept., 1988. Elsevier Appl. Science, London. - P. 328-345.

38. Description of Gracibacillus halotolerans, gen. nov., sp. nov., and a taxonomic rearrangement of related organisms // M. Wainoe, B. Tindall, P. Schumann et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1999. - V. 49. - P. 821 -831.

39. Donson S.J. Phylogenetic relationships between some members of the Genera Deleya, Halomonas and Halovibrio / S.J. Donson, T.A. McMeekin, P.D. Franzmann // Int. J. Syst. Bacteriol. 1993. - V. 43. - P.665-673.

40. Dubey S.K. Biological cyanide destruction by microorganisms / S.K. Dubey, D.S. Holmes // World J. Microbiol. Biotechnol. 1995. - V. 11. - P.257-265.

41. Duffy S. Modeling the survival of Escherichia coli 0157:H7 in apple cider using probability distribution functions for quantitative risk assessment / S. Duffy, D.W. Schaffner // J. Food Prot. 2001. - V. 64. - P.599-605.

42. Duschl A. Primary and secondary chloride transport in Halobacterium halobium / A. Duschl, G. Wagner // J. Bacteriol. 1986. - V. 168. - P. 548-552.

43. Duxbury T. Metal tolerance / T. Duxbury // Advances in Microbial Ecology, Marshall K.C. (ed.). Plenum Press, New York. - 1986. - pp. 185-236.

44. Edwards C. Isolation properties and potential applications of thermophilic Ac-tinomycetes / C. Edwards // Appl. Biochem. Biotechnol. 1993. - V. 42. - P. 161-179.

45. Edwards C. Thermophiles / C. Edwards // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. - P. 1-32.

46. Energetics of Alkalophilic Bacillus species: Physiology and Molecules / T.A. Krulwich, M. Ito, R. Gilmour et al. // Advances in microbial physiology. 1998. -V. 40.-P. 401-432.

47. Engineering Deinococcus radiodurans for metal remediation in radioactive mixed waste environments / H. Brim, S.C. McFarlan, J.K. Fredrickson et al. // Nat. Biotechnol. 2000. - V. 18. - P. 85-90.

48. Extremely barophilic bacteria isolated from the Mariana Trench Challenger Deep at a depth of 11,000 / C. Kato, L. Li, Y. Nogi et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64.-P. 1510-1515.

49. Fallon R. D. Evidence of hydrolytic route for anaerobic cyanide degradation / R.D. Fallon // Appl. Environ. Microbiol. 1992. - V. 58. - P. 3163-3164.

50. Felsenstein J. Confidence limits on phylogenetics: An approach using the bootstrap / J. Felsenstein // Evolution. 1985. - V. 39. - P. 783-791.

51. Fontana J. Biochemistry, genetics and technology of extremophiles microorganisms / J. Fontana. Univ.press, Radua. - 1986. - 261 pp.

52. Francis C.W. High nitrate denitrification in continuous flow-stirred reactors / C.W. Francis, J.B. Makin // Water Res. 1991. - V. 11. - P. 289-294.

53. Fransis C.W. Biological denitrification of high concentration nitrate waste / C.W. Fransis, F.S. Brinkley // US Patent 4, 043, 936. 1977. - US Cl.252/301.1 W.

54. Fry J.C. Oligotrophs / J.C. Fry // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. - P. 93-116.

55. Gadd G.M. Metal tolerance / G.M. Gadd // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. - P. 178-210.

56. Gilmour D. Halotolerant and halophilic microorganisms / D. Gilmour // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990.-P. 147-177.

57. Gordon R. The genus Bacillus II Handb. Microbiol. Cleveland, Ohio. - 1973. -V. l.-P. 71-88.

58. Groleau D. Production of polyols and ethanol by the osmophilic yeast Zygosac-charomyces / D. Groleau, P. Chevalier, T.-L.S.T.H. Yuen // Biotech. Lett. V. 17.-P. 315-320.

59. Gross M. Proteins under pressure The influence of high hydrostatic pressure on structure, function and assembly of proteins and protein complexes / M. Gross, R. Jaenicke //Eur. J. Biochem. - 1994. -V. 221. - P. 617-630.

60. Guffanti A.A. Alkalophilic bacteria / A.A. Guffanti, T.A. Krulwich // Annu. Rev. Microbiol. 1989. - V. 43. - P. 435-463.

61. Gutell R.R. Lessons from an evolving rRNA: 16S and 23S rRNA structures from a comparative perspective / R.R. Gutell, N. Larsen, C.R. Woese // Microbiol. Rev. 1994. - V. 58. - P. 10-26.

62. Hall T.A. BioEdit, Sequence Alignment Editor, version 5.0.6. 1999. North Carolina State University, Calolina, USA.

63. Hallberg K.B. Biodiversity of acidophilic prokaryotes / K.B. Hallberg, D.B. Johnson // Adv. Appl. Microbiol. 2001. - V. 49. - P. 37-84.

64. Halomonas alimentaria sp. nov., isolated from jeotgal, a traditional Korean fermented seafood // J.H. Yoon, K.C. Lee, Y.H. Kho et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2002. - V. 52.-P. 123-130.

65. Halomonas campisalis sp.nov., a denitrifying, moderately haloalkaliphilic bacterium / M.R. Mormile, M.F. Romine, M.T. Garcia et al. // System. Appl. Microbiol. 1999. - V. 22. -P.551-558.

66. Halomonas desiderata sp. nov., a new alkalophilic, halotolerant and denitrifying bacterium isolated from a municipal sewage works / F, Berendes, G. Gottschalk, E. Heine-Dobbernack et al. // Syst. Appl. Microbiol. 1996. - V. 19. - P. 158167.

67. Halomonas elongata, a New Genus and species of extremely salt-tolerant bacteria / R.H. Vreeland, C.D. Litchfield, E.L. Martin et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. -1980.-V. 30.-P. 485-495.

68. Halomonas magadii sp. nov., a new member of the genus Halomonas, isolated from a soda lake of the East African Rift Valley // A.W. Duckworth, W.D. Grant B.E. Jones et al. // Extremophiles. 2000. - V. 4. - P. 53-60.

69. Halomonas marisflavae sp. nov., a halophilic bacterium isolated from the Yellow Sea in Korea / J.H. Yoon, S.H. Choi, K.C. Lee et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.-V. 51.-P. 1171-1177.

70. Halomonas maura sp. nov., a novel moderately halophilic, exopolysaccharide-producing bacterium / S. Bouchotroch, E. Quesada, A. del Moral et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol.-2001.-V. 51.-P. 1625-1632.

71. Halomonas muralis sp. nov., isolated from microbial biofilms colonizing the walls and murals of the Saint-Catherine chapel / C. Gurtner, J. Heyrman, G. Pi-nar et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2002. - V.52. - P. 2049-2054.

72. Hei D.J. Pressure stabilization of proteins from extreme thermophiles / D.J. Hei, D.S. Clark // Appl. Envrion. Microbiol. 1994. - V. 60. - P. 932-939.

73. Hemida S.K. Thermophilic and thermotolerant fungi isolated from cultivated and desert soils / S.K. Hemida // Zentralblatt fuer Mikrobiologie. 1992. - V. 147.-P. 277-281.

74. Herbert R.A. A perspective on the biotechnological potential of extremophiles / R.A. Herbert // Trends Biotechnol. 1992. - V. 10. P. 395-402.

75. Herbert R.A. Microbes in extreme environments / R.A. Herbert, G.A. Godd. -Academic Press, London. 1986. - 298 pp.

76. Higgins D.G. CLUSTAL / D.G. Higgins, J.D. Thompson, T.J. Gibson // Methods Enzymol. 1996. - V. 266. - P. 383-402.

77. High incidence of selenite-resistant bacteria from a site polluted with selenium / G.A.Jr. Burton, Т.Н. Giddings, P. DeBrine et al. // Appl. Environ. Microbiol. -1987. V.53. - P. 185-188.

78. Hirose S. In vitro characterization of the fibrio gene promoter by the use of single-base substitution mutants / S. Hirose, K. Takeuchi, Y. Suzuki // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. - V. 79. - P. 7258-7262.

79. Horikoshi K. Alkaliphiles: some applications of their products for biotechnology / K. Horikoshi // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1999. - V. 63. - P. 735-750.

80. Horikoshi K. Alkalophiles from an industrial point of view / K. Horikoshi // FEMS Microbiol. Rev. 1996. -V. 18. - P. 259-270.

81. Horikoshi K. Barophiles: deep-sea microorganisms adapted to an extreme Environment / K. Horikoshi // Curr. Opin. Microbiol. 1998. - V. 1. - 291-295.

82. Horikoshi K. Extremophiles. Microbial Life in Extreme Environments / K. Horikoshi, W.D. Grant. Wiley-Liss, New York. - 1998. - 252 pp.

83. Hough D.W. Extremozymes / D.W. Hough, M.J. Danson // Curr. Opin. Chem. Biol. 1998.-V.3.-P. 39-46.

84. Huber R.H. Towards the ecology of hyperthermophiles: biotopes, new isolation strategies and novel metabolic properties / R.H. Huber, K.O. Huber, K.O. Stetter //FEMS Microbiol. Rev. -2000. V. 24.-P. 615-623.

85. Hunter K.A. Biological roles of trace metals in natural waters / K.A. Hunter, J.P. Kim, P.L. Croot // Environmental Monitoring and Assessment. 1997. - V. 44. -P. 103-147.

86. Hydrological cycle and interannual variability of the aquatic community in Fuente de Piedra / C.M. Garcia, R.R. Garcia, M. Rendon et al. // Hydrobiologia. 1997.-V. 345.-P. 131-141.

87. Iizuka H. Microorganisms in plankton-ice of the Antarctic Ocean / H. Iizuka, I. Ianabe, H. Meguro // J. Gen. Appl. Microbiol. 1966. - V. 12. - P. 101-102.

88. Ingledew W.J. Acidophiles / W.J. Ingledew // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. -P. 32-54.

89. Ishida M. Highly efficient production of enzymes of an extreme thermophile, Thermus thermophilics: A practical method to overexpress GC-rich genes in Escherichia coli / M. Ishida, M. Yoshida, T. Oshima // Extremophiles. 1997. - V. l.-P. 157-162.

90. Isolation and characterization of new facultatively alkalophilic strains of Bacillus species / A.A. Guffanti, O. Finkelthal, D.B. Hicks et al. // J. Bacteriol. -1986.-V. 167.-P. 766-773.

91. Isolation of novel alkalophilic Bacillus alcalophilus subsp. YB380 / H.Y. Ik, S.K. Han, J.H. Yu J.H. et al. // J. Microbiol. Biotech. 1998. - V. 8. - P. 501508.

92. Isolation of Thermus strains from hot composts (60 to 80 degrees С) / T. Beffa, M. Blanc, P.F. Lyon et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V. 62. - P. 1723-1727.

93. Jaenicke R. Protein stability and molecular adaptation to extreme conditions / R. Jaenicke // Eur. J. Biochem. 1991. - V. 202. - P. 715-728.

94. Jain S. Development of a transformation system for the thermophilic fungus / S. Jain, H. Durand, G. Tiraby // Molecular and General Genetics. 1992. - V. 234. -P. 489-493.

95. Jennings D.H. Osmophiles / D.H. Jennings // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. - P. 117-146.

96. Jukes Т.Н. Evolution of protein molecules / Т.Н. Jukes, C.R. Cantor // Mammalian Protein Metabolism. 1969. - Academic.Press, New York.

97. Kato C. Isolating and characterizing deep-sea marine microorganisms / C. Kato, A. Inoue, K. Horikoshi // Trends. Biotechnol. 1996. - V. 14. - P. 6-12.

98. Kato C. The molecular biology of barophilic bacteria / C. Kato, D.H. Bartlett // Extremophiles. 1997. - V. 1. - P. 111 -116.

99. Kinetics of enzymatic degradation of cyanide / S. Basheer, O.M. Kut, J.E. Prenosil et al. // Biotechnol. Bioeng. 1992. - V.39. - P. 629-634.

100. Knowles R. Denitrification / R. Knowles // Microbiological Reviews. 1982. -V.46. - P. 43-70.

101. Korkeala H. Effect of sodium nitrite and sodium chloride on growth of lactic acid bacteria / H. Korkeala, T. Alanko, T. Tiusanen // Acta Vet. Scand. 1992. -V. 33.-P. 27-32.

102. Koyama N. Effect of the pH of culture medium on the alkalophilicity of a species of Bacillus / N. Koyama, Y. Nosoh // Arch. Microbiol. 1976. - V. 109. -P. 105-108.

103. Kroll R.G. Alkalophiles / R.G. Kroll // Microbiology of extreme environments, Edwards C. (ed.). Open University Press, Milton Keynes. - 1990. - P. 55-92.

104. Ledin M. Zn, Cd and Hg accumulation by microorganisms, organic and inorganic soil constituents / M. Ledin, R.C. Krantz, B. Allard // Soil Biology and Biochemistry. 1996. - V. 28. - P. 791-799.

105. Lettinga G. Challenge of psychrophilic anaerobic wastewater treatment / G. Let-tinga, S. Rebac, G. Zeeman // Trends in Biotechnology. 2001. - V. 19. - P. 363-370.

106. Lewanowski G.A. Analysis of sequencing batch bioreactors in large scale denitrifying applications / G.A. Lewanowski, B.C. Baltzis // Chem. Eng. Sci. 1992. -V.47.-P. 2389-2394.

107. Lloyd J.R. Microbial detoxication of metals and radionuclides / J.R. Lloyd, D.R. Lovley // Curr. Opin. Chem. Biol. 2001. - V. 12. - P.248-253.

108. Lovley D.R. Dissimilatory metal reduction / D.R. Lovley // Annu. Rev. Microbiol. 1993. - V. 47. - P. 263-290.

109. Lu J. Oceanobacillus iheyensis gen. nov., sp. nov., a deep-sea extremely halotolerant and alkaliphilic species isolated from a depth of 1050 m on the Iheya Ridge / J. Lu, Y. Nogi, H. Takami // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - V. 205.-P. 291-297.

110. Macelroy R.D. Some comments on the evolution of extremophiles / R.D. Macelroy // Biosystems. 1974. - V. 6. - P. 74-7.

111. Madigan M.T. Extremophiles / M.T. Madigan, B.L. Marrs // Sci. Am. 1997. -V. 276.-P. 82-87.

112. Madigan M.T. Thermophilic and halophilic extremophiles / M.T. Madigan, Ahoron Oren // Curr. Opin. Biotechnol. 1999. - V. 2. - P. 265-269.

113. McLean J.S. Isolation and characterization of a chromium-reducing bacterium from a chromated copper arsenate-contaminated site / J.S. McLean, T.J. Beveridge, D. Phipps // Appl. Environ. Microbiol. 2000. - V. 2. - P. 611-619.

114. Mechanisms of cytoplasmic pH regulation in alkaliphilic strains of Bacillus / T.A. Krulwich, M. Ito, R. Gilmour et al. // Extremophiles. 1997. - V. 1. - P. 163-169.

115. Microbiology of extreme environment // Edwards C. (ed.). Oxford, Alden Press. - 1990.-218 pp.

116. Microorganisms isolated from the deepest sea mud of Mariana Trench / H. Takami, A. Inoue, F. Fujii et al. // FEMS Microbiol. Lett. 1997. - V. 152. - P. 279-285.

117. Moreira L.M. Comparative genomic analysis of isolates belonging to the six species of the genus Thermus using pulsed-field gel-electrophoresis and ribotyp-ing / L.M. Moreira, M.S. Da-Costa, I. Sa-Correia // Arch. Microbiol. 1997. -V. 168.-P. 92-101.

118. New insights into the photocycle of Ectothiorhodospira halophila / S. Devana-than., U.K. Genick, I.L. Canestrelli et al. // Biochemistry. 1998. - V. 37. - P. 11563-11568.

119. Nies D.H. Microbial heavy-metal resistance / D.H. Nies // Appl. Microbiol. Bio-technol.- 1999.-V.51.-P. 730-750.

120. Norris P.R. Acidophiles in bioreactor mineral processing / P.R. Norris, N.P. Burton, N.A. Foulis // Extremophiles. 2000. - V. 4. - P. 71-76.

121. Norris P.R. Acidophilic microorganisms / P.R. Norris, D.B. Johnson // Extremophiles: Microbial Life in Extreme Environments, Horikoshi K. and Grant W.D. (eds.). New York, Wiley. - 1998. - P. 133-154.

122. Novel ionizing radiation-sensitive mutants of Deinococcus radioduran II K.S. Udupa, P.A. O'cain, V. Mattimore et al. // J. Bacteriol. 1994. - V. 176. -P.7439-7446.

123. Oren A. Dynamics of a bloom of halophilic archeae in the Dead Sea / A. Oren, P. Gurevich // Hydrobiologia. 1995. - V. 315. - P. 149-158.

124. Osmoprotectants in Halomonas elongata: High-affinity betaine transport / D. Canovas, C. Vargas, L.N. Csonka et al. // J. Bacteriol. 1996. - V. 178. - P. 7221-7226.

125. Park Y.I. Choline derivatives involved in osmotolerance of Penicillium felluta-num / Y.I. Park, J.E. Gander // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64. - P. 273-278.

126. Persidi A. Extremophiles / A. Persidi // Nat. Biotechnol. 1998. - V. 16. - P. 593-594.

127. Peyton B.M. Nitrate reduction with Halomonas campisalis: kinetics of denitrification at pH 9 and 12,5% NaCl / B.M. Peyton, M.R. Mormile, J.N. Petersen // Wat. Res. 2001. - V. 35. - P. 4237-4242.

128. Phylogenetic diversity of soda lake alkaliphiles / A.W. Duckworth, W.D. Grant, B.E. Jones et al. // FEMS Microbiol. Ecol. 1996. - V. 19. - P. 181-191.

129. Phylogenetic heterogeneity of the genus Bacillus revealed by comparative analyses of small-subunit-ribosomal RNA sequences / C. Ash, J.A.E. Farrow, S. Wallbans et al. // Lett. Appl. Microbiol. 1991. - V. 13. - P. 202-206.

130. Physiological mechanisms regulating the conversion of selenite to elemental selenium by Bacillus subtilis / C. Garbisu, S. Gonzalez, W.H. Yang et al. // Bio-factors. 1995. - V. 5. - P.29-37.

131. Pick U. Dunaliella: A model extremophilic alga / U. Pick // J. Plant Sciences. -1998. V. 46. - P. 131-139.

132. Praphailong W. The effect of pH, sodium chloride, sucrose, sorbate and benzo-ate on the growth of food spoilage yeasts / W. Praphailong, G.H. Fleet // Food Microbiol. 1997. - V. 14. - P. 459-468.

133. Pressure-induced thermostabilization of glutamate dehydrogenase from the hy-perthermophile Pyrococcus furiosus / M.M. Sun, N. Tolliday, C. Vetriani et al. // Protein Sci. 1999. - V. 8. - P. 1056-1063.

134. Pretorius W.A. The selective cultivation of the thermotolerant Aspergillus sp. on spent sulphite liquor / W.A. Pretorius, G.G. Lempert // Water Supply. 1993. -V. 19.-P. 69-72.

135. Prithivirajsingh S. Detection and analysis of chromosomal arsenic resistance in Pseudomonas fluorescens strain MSP3 / S. Prithiviraj singh, S.K. Mishra, A. Mahadevan // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V. 280. - P. 13931401.

136. Production of extracellular proteases and amylases by some acidophilic and al-kalophilic bacteria / A. Sharma, B. Ball, R. Gill et al. // Indian J. Experimental Biology. 1996. - V. 34. - P. 232-234.

137. Proposal of Virgibacillus proomii sp. nov. and emended description of Virgiba-cillus pantothenticus (Proom and Knight 1950) Heyndrickx et al. 1998 / M. Heyndrickx, L. Lebbe, K. Kersters et al. // Int. J. Syst. Bacteriol. 1999. - V. 49.-P. 1083-1090.

138. Psychrophilic enzymes: a thermodynamic challenge / C. Gerday, M. Aittaleb, J.L. Arpigny et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1997. - V. 1342. - P. 119-131.

139. Pyrolobus fumarii, gen. and sp. nov. represents a novel group of Archeae extending the upper temperature limit for life to 113°C / E. Blochl, R. Rachel, S. Burggraf et al. // Extremophiles. 1997. - V.l. - P. 14-21.

140. Reevaluating the classification of Halobacteroides and Haloanaerobacter / B.-K.C Patel, K.T. Andrews, B. Ollivier et al. // FEMS Microbiol. Lett. 1995. -V. 134. - P. 115-119.

141. Regulation of cation transport in Saccharomyces cerevisiae by the salt tolerance gene HAL3 // A. Ferrando, S.J. Kron, G. Rios et al. // Mol. Cell. Biol. 1995. -V. 15.-P. 5470-5481.

142. Reichelt J. Industrial enzymology / J.N. Reichelt and T. Godfrey (eds). Nature press, N. Y. - 1983. - pp. 375.

143. Removal of selenium using a novel algal bacterial process / M.B. Gerhardt, F.B. Green, R.D. Newman et al. // J. Water Pollut. Control. 1991. - V. 63. - P. 799-805.

144. Review: Ethanol production at elevated temperatures and alcohol production / I.M. Banat, P. Nigam, D. Singh et al // World J. Microbiol. Biotechnol. 1998. -V. 14.-P. 809-821.

145. Rhodococcus sp.RBl grows in the presence of high nitrate and nitrite concentrations and assimilates nitrate in moderately saline environments / R. Blasco, M. Martinez-Luque, M.P. Madrid et al. // Arch. Microbial. 2001. - V. 175. - P. 435-440.

146. Robinson C.R. Hydrostatic and osmotic pressure as tools to study macromolecu-lar recognition / C.R. Robinson, S.G. Sligar // Methods Enzymol. 1995. - V. 259.-P. 395-427.

147. Rothschild L.J. Life in extreme environments / L.J. Rothschild, R.L. Mancinelli // Nature. 2001. - V. 409. - P. 1092-1101.

148. Saitou N. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phy-logenetic trees / N. Saitou, M. Nei // Mol. Biol. Evol. 1987. -V. 4. - P. 406477.

149. Sato K. Differential susceptibilities of Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellular to sodium nitrite / K. Sato, H. Tomioka, H. Saito // J. Clin. Microbiol. 1992. - V.30. - P.2994-2995.

150. Schafer G. Extremophiles: fascinating organisms with surprising capabilities / G. Schafer // J. Bioenerg. Biomembr. 1992. - V. 24. - P. 525-527.

151. Secretion of Aspergillus oryzae alkaline protease in an osmophilic yeast Zygo-saccharomyces rouxii / Y. Ogawa, H. Tatsumi, S. Murakami et al. // Agricultural And Biological Chemistry. 1990. - V. 54. - P. 2521-2530.

152. Sellek G. Biocatalysis in organic media using enzymes from extremophiles / G. Sellek, J. Chaudhuri // Enzyme and Microbial Technology. 1999. - V. 25. - P. 471-482.

153. Shakoori A.R. Hexavalent chromium reduction by a dichromate-resistant gram-positive bacterium isolated from effluents of tanneries / A.R. Shakoori, M. Makhdoom, R.U. Haq // Appl. Microbiol. Biotech. 2000. - V.53. - P.348-351.

154. Shen, H. Characterization of enzymatic reduction of hexavalent chromium by Escherichia coli ATCC 33456 / H. Shen, Y.-T Wang // Appl. Environ. Microbiol. 1993. - V. 59. - 3771-3777.

155. Simultaneous reduction of nitrate and selenate by cell suspensions of selenium-respiring bacteria / R.S. Oremland, J.S. Blum, A.B. Bindi et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - V. 65. P. 4385-4392.

156. Sodeko O.O. Effect of different preservative treatments on the microbial population of Nigerian orange juice / O.O. Sodeko, Y.S. Izuagbe, M.E. Ukhun // Mi-crobios.- 1987.-V. 51.-P.133-143.

157. Sorokin Yu.I. Production and decomposition of organic matter in a bay of the Japan Sea during the winter diatom blooms / Yu.I. Sorokin, I.V. Konovalova // Limnol. Oceangr. 1973. - V.18. -P.962-967.

158. Stroes-Gascoyne S. Microbial studies in the Canadian nuclear fuel waste management program / S. Stroes-Gascoyne, J.M. West // FEMS Microbiol. Rev. -1997.-V. 20.-P. 573-590.

159. Studies on the distribution of alkalophilic and alkali-tolerant soil fungi / K. Na-gai, T. Sakai, R.M. Rantiatmodjo et al. // Mycoscience. 1995. - V. 36. - P. 247-256.

160. Sunda W.G. Processes regulating cellular metal accumulation and physiological effects / W.G. Sunda, S.A. Huntsman // Sci. Total Environ. 1998. - V. 219. -P. 165-181.

161. Tanford C. The hydrophobic effect: Formation of micelles and biological membranes / C. Tanford. Wiley, N.Y. - 1980. - 310 pp.

162. The pha gene cluster of Rhizobium meliloti involved in pH adaptation and symbiosis encodes a novel type of K+ efflux system / P. Putnoky, A. Kereszt, T. Nakamura et al. // Mol. Microbiol. 1998. - V. 28. - P. 1091-1101.

163. Thiemann B. Occurrence and purification of the photoactive yellow protein of Ectothiohodospira halophila (PYP) / B. Thiemann, J.F. Imhoff // Biochimica et Biophysica Acta.- 1995.-V. 1253.-P. 181-188.

164. Thiocyanate removal from saline CIP process water by a rotating biological contactor, with reuse of the water for bioleaching / M.B. Stott, P.D. Franzmanna, L.R. Zappiaa et al. // Hydrometallurgy. 2001. - V. 62. - P.93-105.

165. Thomas K.N.G. Industrial application of thermostable enzymes / K.N.G. Thomas, R. William, J. Kenely // Wilmington (Del). 1987. - P. 197-213.

166. Transformation of Escherichia coli with a large plasmid of Acidiphilium mul-tivorum AIU 301 encoding arsenic resistance / K. Suzuki, N. Wakao, Y. Sakurai et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1997. -V. 63. - P. 2089-2091.

167. Uncoupling effect of nitrite during denitrification by Pseudomonas fluorescens: an in vivo 31P-NMR study / W.F.H. Sijbesma, J.S. Almeida, M.A.M. Reis et al. //Biotech. Bioeng.- 1996.-V. 52.-P.176-182.

168. Utilization of cyanide as nitrogenous substrate by Pseudomonas fluorescens NCIMB 11764: evidence for multiple pathways of metabolic conversion / D.A. Kunz, O. Nagappan, J. Silva-Avalos et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1992. -V.58.-P. 2022-2029.

169. Van de Peer Y. TREECON: a software package for the construction and drawing of evolutionary trees for the Microsoft Windows Environment / Y. Van de Peer, R. Wachter // Comput. Appl. Biosci. 1994. - V. 10. - P. 569-570.

170. Ventosa A. Biology of moderately halophilic aerobic bacteria / A. Ventosa, J.J. Nieto, A. Oren // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - V. 62. - P. 504-544.

171. Ventosa A. Biotechnological applications and potentialities of halophilic microorganisms / A. Ventosa, J.J. Nieto // World J. Microbiol. Biotechnol. 1995. -V. 11. - P.85-94.

172. Vreeland R.H. Genus Halomonas / R.H. Vreeland // Bergey's manual of systematic bacteriology, Krieg N.R. and Holt J.G. (eds.). The Williams & Wil-kins, Baltimore. - 1984. - V. 1. - P. 340 -343.

173. Vreeland R.H. Isolation of a 250 million-year-old halotolerant bacterium from a primary salt crystal / R.H. Vreeland, W.D. Rosenzweig, D.W. Powers // Nature. 2000. - V. 407. - P. 897-900.

174. Walker J.F. Biodenitrification of uranium refinery wastewaters / J.F. Walker, Jr M.V. Helfrich, T. Donaldson // Environ. Prog. 1981. - V. 8. - P.97-101.

175. Wang L. A study on classification of actinomycetes from saline-alkali soils / L. Wang, S. Song, J. Ruan // Acta Microbiologica Sinica. 1993. - V. 33. - P. 393-399.

176. Wiegel J. Anaerobic alkalithermophiles, a novel group of extremophiles / J. Wiegel // Extremophiles. 1998. - V. 2. - P. 257-267.

177. Woese C.R. Bacterial evolution / C.R. Woese // Microbiol. Rev. 1987. - V. 51.-P. 221-71.

178. Wong K.K.Y. Applications of hemicellulases in the food, feed, and pulp and paper industries / K.K.Y. Wong, J.N. Saddler // Hemicellulose and hemicellulases, Coughlan M.P., Hazlewood G.P. (eds). Portland Press, London. - 1993. - 152 pp.

179. Yoon J.H. Lentibacillus salicampi gen. nov., sp. nov., a moderately halophilic bacterium isolated from a salt field in Korea / J.H. Yoon, K.H. Kang, Y.H. Park // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2002. - V. 52. - P. 2043-2048.

180. Артамонова О.И. Труды Советской антарктической экспедиции / О.И. Артамонова, Н.А. Красильников. Д.: Гидрометеоиздат, 1972. - Т.60. -С.302.

181. Влияние микробиологических процессов на свойства бурового раствора / Б.А. Андресон, Н.Г. Усанов, Е.А. Гильванова и др. // Бурение&Нефть. -2002. август. - С. 21-25.

182. Гильванова Е.А. Количественная оценка биоцидной активности химических соединений с помощью микробных ассоциаций почвы / Е.А. Гильванова, Н.Г. Усанов // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. -Т. 40.-С.

183. Гильванова Е.А. Микробная денитрификация стоков, содержащих высокие концентрации нитрата и нитрита / Е.А. Гильванова // Тез. докл. междунар. конф. "Биотехнология на рубеже двух тысячелетий". 2001. Саранск, Россия. - С. 222-224.

184. Готтшалк. Г. Метаболизм бактерий / Г. Готтшалк. М.: Мир. - 1982. - 310 с.

185. Гусев М.В. Микробиология: Учебник, 3-е изд. / М.В. Гусев, J1.A. Минеева. М.: Изд-во МГУ. - 1992. - 448 с.

186. Деградация цианидов культурой Pseudomonas fluorescens ВКМ-5040 // З.Р. Ульберг, В.И. Подольская, К.С. Санакулов и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т. 30. - С. 260-264.

187. Жданова Н.Н. Развитие исследований области экспериментальной микологии / Н.Н. Жданова // Микробиологический журнал. 1998. - Т. 60. - С. 48-59.

188. Заварзин Г.А. Алкалофильное микробное сообщество и его функциональное разнообразие / Г.А. Заварзин, Т.Н. Жилина, В.В. Кевбрин // Микробиология. 1999. - Т. 68. - С. 579-599.

189. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы / Д.Г. Звягинцев. М.: Изд-во МГУ. - 1987.-256 с.

190. Кашнер Д. Жизнь микробов в экстремальных условиях / Д. Кашнер. М.: Мир. - 1981.-519 с.

191. Квеситадзе Г.И. Ферменты микроорганизмов, живущих в экстремальных условиях / Г.И. Квеситадзе. 42-е Баховское чтение. - М.: Наука, 1990. -54 с.

192. Клесов А.А. Ферменты целлюлазного комплекса / А.А. Клесов // Проблемы биоконверсии растительного сырья. М.: Наука. - 1986. - 295 с.

193. Кострикина Н.А. Ультраструктурная организация экстремальных галоал-калофильных архебактерий / Н.А. Кострикина, И.С. Звягинцев, В.И. Дуда // Микробиология. 1990. - Т. 59. - С. 1019-1023.

194. Краткий определитель бактерий Берги // Под ред. Дж.Хоулта. М.: Мир. -1980.-495 с.

195. Лях С.П. Адаптация микроорганизмов к низким температурам / С.П Лях. -М.: Наука.- 1976.- 132 с.

196. Методы общей бактериологии // Под ред.Герхарда Ф. и др. М.: Мир. -1983. - т. I-III.

197. Методы почвенной микробиологии и биохимии // Учеб. Пособие. Под ред. Звягинцева Д.Г. М.: Изд-во МГУ. 1991. - 304 с.

198. Мишустин Е.Н. Круговорот азота и его соединений в природе / Е.Н. Мишустин // Роль микроорганизмов в круговороте газов в природе, под ред. Заварзин Г.А. М.: Наука. - 1979. - 288 с.

199. Носкова Г.И. Микробиология мяса при холодильном хранении / Г.И. Нос-кова. М.: Пищ. пром-сть. - 1972. - 212 с.

200. Питрюк А.В. Различие в ионной специфичности синтеза АТФ у экстремально алкалофильных сульфатредуцирующих и ацетогенных бактерий / А.В. Питрюк, М.А. Пушева // Микробиология. 2001. - Т.70. №4. С. 459 - 464.

201. Свойства нового облигатного оксалотрофа Bacillus oxalophilus II Г.М. Зайцева, Н.И. Говорухина, О.В. Ласконева и др. // Микробиология. 1993. -Т. 62.-С. 616-624.

202. Скворцова И.Н. Идентификация почвенных бактерий рода Bacillus / И.Н. Скворцова. М.: Изд-во МГУ. - 1984. - 26 с.

203. Скрининг и изучение микроорганизмов, деструктирующих цианиды и тиоционаты // Н.В. Григорьева, З.А. Авакян, Т.П. Турова и др. // Микробиология. 1999. - Т. 68. - С. 453-460.

204. Смирнов В.В. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. - Киев. Наук, думка. - 1982. - 280 с.

205. Турова Т.П. Филогенетическое разнообразие алкалофильных анаэробных сахаролитических бактерий, выделенных из содовых озер / Т.П. Турова, Е.С. Гарнова, Т.Н. Жилина // Микробиология. 1999. - Т. 68. - С. 701-709.

206. Чукуров П.М. Натрия нитрит // Химическая Энциклопедия. 1992. - М.: «Большая Российская Энциклопедия». - Т. 3. - С. 183.

207. Шульц Г. Принципы структурной организации белков / Г. Шульц, Р. Ширмер. М.: Мир. - 1982. - 354 с.

208. Список культур, использованных для филогенетического анализа нитритустойчивых бактерий и соответствующие регистрационные номера последовательностей, кодирующие гены 16S рРНК по базе данных EMBL:1. С. izraelensis AJ295144

209. C.marismortui AJ306872 Crater Lake isolate 12C1 X92135 Crater Lake isolate 29C1 X92148 Crater Lake isolate 75C4 X921461. D. venusta L42618

210. Список культур, использованных для филогенетического анализа нитрит- и бензоатустойчивых бактерий и соответствующие регистрационные номера последовательностей, кодирующие гены 16S рРНК по базе данных EMBL:

211. Список культур, использованных для филогенетического анализа азидтолерантного штамма IB-A3 5:

212. Е. durans СЕСТ 41 IT AJ420801

213. Е. durans DSM 20633 AJ276354

214. Е. faecalis UK873 AJ2718561. Е. faecium AY172570

215. Е. faecium СЕСТ 4 ЮТ AJ420800

216. Е. faecium DSM 20477 AJ276355

217. Е. faecium ID 9201 AY057055

218. Е. hirae СЕСТ 279Т AJ420799

219. Е. hirae DSM 20160 AJ276356

220. Е. mundii АТСС43186 AF061013

221. Е. villorum ATCC 700913 AF335596

222. E. villorum LMG 12287 AJ271329

223. Enterococcus mundii NFRI7393 AB066266

224. Enterococcus sp. A35 AJ309563

225. Melissococcusplutonius LTH 3442 AJ301842

226. Матрица сходства последовательностей 16S рРНК штаммов IB-256, IB-B4, IB-B8 и представителей рода Bacillus

227. Культуры 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 151 16 17 18 19

228. B.subtilis 100 94,2 93,2 93,9 91,1 87,3 91,0 88,1 91,1 90,2 91,0 91,8 90,2 91,0 92,4 92,2 0,893 85,0 90,7

229. B.pseudofirmus 100 95,8 96,0 0,915 88,1 90,5 86,9 91,1 90,2 90,4 91,1 89,6 91,3 92,2 91,7 89,2 84,8 90,5

230. B.pseudoalcaliphilus 100 95,5 90,1 86,4 89,9 86,3 89,6 89,4 89,4 90,3 88,8 89,7 90,8 89,9 87,2 83,7 88,9

231. B.halodurans 100 90,7 87,1 89,9 86,7 89,6 89,2 89,7 90,7 89,5 90,1 91,3 91,3 88,5 84,7 90,0

232. H.litoralis 100 94,7 93,9 89,6 92,2 91,6 91,7 93,3 91,8 93,0 94,5 94,3 90,4 87,7 92,5

233. H.halophilus 100 90,2 91,0 88,6 88,1 88,2 89,9 88,4 90,0 90,9 90,6 86,9 89,9 89,5

234. G.halotolerans 100 91,9 92,4 92,0 92,6 93,4 92,3 92,7 93,7 93,2 90,1 87,1 92,6

235. G.dipsosauri 100 88,4 88,2 88,6 89,2 88,3 89,2 90,0 89,2 86,5 88,4 89,7

236. O.iheyensis 100 95,7 95,6 95,0 92,2 93,3 94,3 94,1 90,5 87,5 92,7

237. B.litoralis IB-B8 100 96,4 94,2 91,2 92,5 93,3 92,8 89,6 86,7 91,3

238. B. li/oralis IB-B4 100 94,7 92,4 92,8 93,2 93,9 90,2 87,4 92,0

239. V.picturae 100 93,1 93,8 96,3 96,1 91,8 88,5 0,941

240. L.salicampi 100 93,2 94,0 94,3 90,6 87,2 93,0

241. B.nhritopliilus IB256 100 95,1 95,3 91,7 88,9 93,9

242. B. halodenitrificans 100 97,3 93,3 89,7 95,0

243. S.marismortui 100 94,2 90,3 96,0

244. S.salexigens 100 86,5 92,4

245. V.pantothenticus 100 89,7

246. V.proomi 100

247. Матрица сходства последовательностей 16S рРНК штамма IB-A35 и представителей рода Enterococcus

248. Виды 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

249. M.plutonium 100 94,3 94,3 94,2 94,1 94,0 94,6 93,8 94,5 93,1 93,9 94,2 94,2 93,4 92,3

250. E.mundii NFRI7393 100 99,8 98,8 98,6 98,6 99,1 98,2 99,1 97,6 98,4 98,9 99,0 98,2 96,9

251. E.mundii АТСС43186 100 98,8 98,6 98,6 99,1 98,2 99,1 97,6 98,4 98,9 99,0 98,2 96,9

252. E.villorum LMG 12287 100 99,6 98,6 99,1 98,2 99,0 97,5 98,3 99,0 99,0 98,2 97,0

253. E.villorum ATCC 700913 100 98,4 99,0 98,1 98,8 97,4 98,2 98,9 98,8 98,0 96,9

254. Enterococcus sp. IB-A35 100 99,4 99,4 99,2 98,4 98,5 99,0 99,0 98,8 97,7

255. E.hirae DSM 20160 100 99,1 99,7 98,2 99,0 99,5 99,6 98,6 97,5

256. E.hirae CECT 279T 100 98,8 98,6 98,2 98,6 98,7 99,0 97,9

257. E.durans DSM 20633 100 98,5 99,2 99,5 99,6 98,6 97,5

258. E.durcms CECT 41 IT 100 97,8 98,0 981, 98,5 98,7

259. E.faecalis UK873 100 98,9 99,0 98,0 96,9

260. E.faecium AY 172570 100 99,9 99,1 98,0

261. E.faecium DSM 20477 100 99,0 97,9

262. E.faecium ID 9201 100 98,4

263. Виды и культуры 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22

264. Z.palmae 100 88,5 89,5 86,2 91,3 91,4 90,4 91,0 88,5 92,1 87,0 84,7 87,6 88,2 87,9 91,2 90,9 91,0 90,4 91,5 89,7 92,2

265. H.elongata 100 96,3 90,1 94,2 94,6 91,5 91,9 93,4 92,7 90,3 86,5 90,2 90,1 89,5 91,8 91,6 91,5 91,3 92,2 91,5 92,7

266. H.eunihalina 100 90,1 94,5 94,5 93,8 93,3 96,0 94,2 90,4 86,5 90,4 91,1 90,7 92,9 92,5 92,7 92,4 93,2 92,7 93,7

267. H.halophila 100 90,0 90,4 87.7 88,1 88,1 89,3 87,2 83,5 86,5 86,0 85,3 87,8 87,7 87,8 87,5 88,3 87,2 88,6

268. H.salina 100 96,8 93,5 93,9 93,1 95,2 92,0 88,5 92,2 92,4 91,8 95,4 95,2 95,2 94,8 95,8 94,6 96,8

269. H.pacifica 100 93,1 93,5 92,8 96,8 91,3 88,4 92,4 92,3 91,8 94,5 94,3 94,2 94,00 95,0 93,6 95,4

270. C.marismortui 100 99,3 92,5 93,2 89,9 86,8 90,6 91,3 90,9 91,8 91,3 91,6 91,3 93,3 92,4 93,4

271. C.izraelensis 100 92,0 93,8 90,3 87,4 91,0 91,8 91,3 92,1 91,7 92,0 91,6 93,7 92,7 93,6

272. H.halmophila 100 92,7 89,3 85,4 89,2 89,9 89,5 92,1 91,7 91,9 91,5 92,4 91,9 92,710 65B4 100 90,7 88,3 92,2 93,00 92,7 95,0 94,6 94,8 94,5 95,0 93,9 94,6

273. H.halodurans 100 89,2 92,3 91,8 91,2 91,5 91,3 91,3 91,1 92,1 91,5 91,8

274. H.venusta 100 90,9 91,1 90,5 88,2 88,1 87,9 87.7 89,6 88,6 89,113 19N1 100 97,6 96,8 92,3 92,1 92,0 91,6 93,5 93,00 92,6

275. H.magadiensis 100 98,00 93,00 92,4 93,1 92,9 94,3 94,00 93,415 24B1 100 92,6 91,8 92,4 92,2 93,7 93,4 93,0016 25B1 100 98,04 98,01 97,8 96,4 95,6 96,617 8B1 100 97,6 97,5 96,1 95,2 96,2

276. WB2 100 97,9 96,2 95,4 96,5

277. WB5 100 95,9 94,09 96,1

278. Halomonas sp.EF43 100 96,4 98,0221 29C1 100 95,8

279. Полные и частично секвенированные последовательности гена 16S рРНК штаммов, подвергнутых филогенетическому анализу1.-I6