Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
СКРИНИНГ ГЕНА ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ АДГЕЗИИ (BLAD-СИНДРОМ) У ЖИВОТНЫХ ЧЕРНО-ПЕСТРОГО КОРНЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "СКРИНИНГ ГЕНА ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ АДГЕЗИИ (BLAD-СИНДРОМ) У ЖИВОТНЫХ ЧЕРНО-ПЕСТРОГО КОРНЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА"

А-

ш мролях рукллщи

ИГНАТЬЕВ ВЛАДИМИР МИХАИЛОВИЧ

СКРИНИНГ ГЕНА ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ АДГЕЗИИ V. ,, (ВЫШ-СИНДРОМ) V ЖИВОТНЫХ ЧЕРНО-ПЕСТРОГО КОРНЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.

<0.0024-

АВТОРКФЕРАТ

яДуврошцу, Моаююш овпвц'1' 1Мв ,

Работа выполнена м Всероссийском *ауч*о -исследоытмьсхом икппум

Научны! рукоеодктвяа: доктор биологических мук, профессор Н-С. Марааио»

Официальные оппоненты:

доктор биологических щук, профессор И Я Шккм ; кандидат биологически* наук,дацитЛ4. Новикова

Ведучах ортаимацм: Всероссийский иауч«о-мсомдомт«ямшй

яжтитут пяммниого дма ■

Защит« диссертации состоит« 19 «шара 1999 г » 10 часо* иа има>ми1 диссертационного смет* Д 0Ct0.16.02. ■ при Всероссийском каучмо» исследовательскоминститут«жииотноаодстаа. .

Адрес института: 142012, Мое коле кад обдаст», Подольской , , район, нос. Дубредгпцы.

С диссертацией м^жно оэиакоинтьсх »

Автореферат разослан /У декабря, 1955 г, .г"

Учепий секретарь диссертационного совета-

.кандидатбиологическихМху^^* вп.Губалова

з

1.Общая характеристика работы -

Актуальность темы, У рпзпичаых видов я пород хрупкого рогатого скота описано бояее. 200 наследственных заболеваний (Udauor.1992). Точность диагностики мл or л* из ипх значительно повысилась бдагодарк достн*вншы молекулярной генетики, развитию мояежул армо-гміетичос»их методов ■ регистрация полиморфных докусов ДНК « мутационных изменений, созданию аффективных ДНК-дкпгиостячвских процедур (Евграфов О.В., 1992: Горбунова D.H., Баранов B.C., 199?)

D литератур« отраве па большая группа мол «куя клеточной в л* гезин, вызывающих морфологические изменения а . раннем эы* бриогенеэе її я органе * к гистогенезе < Б оце невский В.А., Карыш* вико» А.Ю., 1994). И* принято делить ма 4 суперсемейства: селек-тяны, иммуноглобулины, кедхеркны к питегрины. Особую рояь играют мптегрины • поверхностные клеточные белек, запускающие адгезию клеток путбм взаимодействия о различными белками мат* рикса. Оки обеспечивают интеграцию между внутрикяеточнмм ци» тоскелетопом я экстрацедлюларнии метрик с ом. Ингегршш дейкс* цитсв,'кахи другие молекулы адгезии, играют видушую ропь в осуществлении важнейших фуигций лейкоцитов. Прежде всего, это миграция лейкоцитов на крови в тханя, эгрегаци« тромбоцитов,, иммунологические процессы, восстановлении тканей при ранениях,; раде процессов, диффе ре яцироаки.

Дефицит лейкоцитарной адгезял (Bovine Leucocyte Adhetion . Deficiency), млн QLAD-синдрим крупного - рогатого «скота - -я а еле дет вен над аутосомлая болезнь- рецессивного тнпа обусдовденнаяточксвой мутацией п гене, кодирующем CD IB (бета-, еубъедиппца.. бете-да а интегряно), что приводит х замене .*' всперагиновой кислоты на гпнцин в 128 положении (D128Q аллель).

' Данное заболевание ранее было установлено как синдром гранулоиитолвтми крупного рогатого скота и получило название болезнь'Токахаши - Хатемозера <Hagemo«er et а).. 193Л; Takaharhi et- ! al.. 1987). •.. Y....

Мутация агомозиготном состоанмп обуславливает резкое снижение устойчивости- телят! к бактериальным инфекциям. Впервые это заболевание обнаружил и у прямых потомков знаме*

■ мятых американских быков • родоначальников голштнкской породы (Kehrti et я!,, 1990; Oiobet et al., 1992). В США'носителям л данного

- капеле явлжютеж . 16ыкоо-прои1вояитвлей и 6% маточного

■ поголовья скота. Ежегодный- экономический: ущерб от этого

. заболЬжаиия в США определяют а. пределах 5 мял. долларов . (Shutter et al , 1992) , v /■ : .. ;■*.Л

.- В. большинстве развитых стран Европы я Америки созданы

.' 'специальные программы' по енпкепшо частоты встречаемости'" алпеля OLAD-c(iitApo>Ja в популяциях скота черно*пестрой породы ' y,(Kehrli et.; а).. ,1990;. afranta^"et^А&З*

■ •-■:V -■, ІАУЧ' :« 0 г: .ЗЛИОТЕКА,-Цоск.. (- . - ^ «:адемии им. К. М.;.'імми(

Ина. №-

Ä rholmУ et: аД., 1993г

Tammen, 1994). Выдающихся Сыков я ремонтний молодняк проверят на носнтельства мутантного гена, а' результати регулярно публнкумт » каталогах по племенным быкам. .

Цмь к задачи ' исследований. Целью данной работы является определение гена DLAD-снндроиа у чбрио-пестрого кори« крупного рогатого «кота, установление частоти' его встречаемости, оценка: .генеалогия различии* бы ков-п роязводителeft нсектелей данного гена, определение- продуктивности дочерей Сыгов-носятелей В LAD. . . -

Діі» рушимн* постепенных; 'дідич бы.чо необх«лмм«і

1, Разработать оптимальний .режим выделения- ДНК для..

. последующего вшіолпеяия.ПЦР На BLAD.

-2,Про>еетн харакк-ркїтнху чірно-пісгрого хори*. крупного рогатого скота по частотам встречаемости мутантного аллезя D128Q и генотипов в аохусе Рг ннтегрняа.

3.Дать характеристику родословных быхог,производителей, носителей рецессивного геяа BLAD.

4,Выполнить статистические расчет» « целью оценки быкев-производителей носителей в LAD по молочной продуктивности

. , дочерей, связи с индексом плеыенной ценности. ' ,

• ' Научная вмішлі . я . практическая значимость, работы. -Впервые- : я -условиях-- Российской Федерации выявлено, коснтеяьство - мутантного-: гена DLAD-синдрома, Носителями* оказались быкн-производлтедя. поступившие з нашу страну ' нз.

*- , Германии, Канады; я США, а также одно животное отечественной

селекции, Носителями гена В LAD оказались быки-производители, ■ * прямые потомки одного из лидеров голттинской породы, быка ОсборНДЭЙЛ айвенго 1189879.'

Положения, '»ыпоснмме > на-защиту«: Разработка-режима- ПЦР-яле выявления гена D LAD-синдром е. :' Анализ родословных выдающихся быкоа-проязводнтедей носителей / гена^' ВЬАО : я . продуктивности их дочерей.

Публикация материалов. По , материалам диссертации опубликовано Z научные работы, .

Апробация* работы. Основные> результати .диссертационной? . работы обсуждались при- рассмотренного до вых отчетов . я а ■ заседаниях . отдела сертификации . н .эколого-генетнческях* исследований. Ученого .Совета ВИИ И животноводства в 1РР6-1998гг., а такые на конференции аспирантов к молодых учейых ВНИИЖ, 1998г. Часть полученных материалов диссертации были • '^представлены на; иаучио-практической/ юбилейной/конференции, посвященной 40-летию ., образования ' Молдавского НИИ. животноводства я ветеринарии. Кишинев. 1997. У- *

Объем работы*^ Диссертационная работа, состоит из введення, трех глав, обсуждения, выводов, практических предложений.

"списке литературы. Материал нэложен иа страницах

■ машинописного текста, содержит 7 таблиц, 14 рисуяков, 3 анаграммы. Список ■ литературы включает 155 источников, ; в тох числе.131 на иностранных языках.

.2, М*т*риап и методы исеп*до*аний

Исследовали* проводили в лаборатории гепетпкя мнвотпых, отдел» биотехнологии Всероссийского НИИ животноводства, « тихо в Института ра»аедеип* в генетики животных (Ганновер, ФРГ) совместно о к.б.п. Л.К. Поповым, к.б.и. П.Л.Зиновьевой, доктором аетерияариых паук Е. Хардяцнус (ФРГ), по сдедуюшей схеме (рис.1).

Dïkthb образцов кровя » спермы

| Выделение ДНК ' t __*_■

| • Проведения ПЦР "I

-•V .V i

Подбор специфических on н гокук ае от и дн м х лрайиеров я оптяыяюцн* режима -ампдпфнкяпии Переэсажданне Л"К РестрнктяыА анализ' Taq-1 и ПаеШ длк ' ратреэаинк участка ДНК, содержащий нужный фрагмент

. * .

Электрофорез и агчрозном геле, да* выкааеиня определенного фрагмента, соответствующего участку ДНК- а норме к ори наличии мутантного Гена BLAO

Аттестация животных черно-пвстрого корн*'крупного рогатого скота на носктелъство гена . BLAD-сжядромя - ((**17б). Установление частоты встречаемости апледеЛ и геяотипов с BLAD. Анализ родословных Сиков-проитводктолей носителей BLAD. Выполнение статистических расчетов с целью оцепки бы кое-пронэводителей ' носителей BL/VD по молочной продуктивности. дочерей (п-4 86). святя с индексом плеыоняо* ценности . ■. ■ .■'■.""■ •• '..1 -V- '■■ *

Рисунок !. Ç>6u/at ех*маиесл*дотний->-*у>' "Г/ Î■•: ■'•>. \ ч>,'

•Т Согласно схеы»посивдовапк<((рис.1) отбор образцовкрови к влирмк ocyuttCTusiH- и j материалов^. поступавших я'лабораторию

«

генетики животных ВНИИ животноводстве, на Центральной станции искусственного'осеменения (п.Быково Подольского района Москов--ской области). Исследованы образцы крови, свежеполучеииой н гдубокозаморожеииой спермы, взятых от 176 животных черно* пестрого скота. Кровь к сперму хранили при температуре -.20 С I стеклянных к пластмассовых флаконах. ■'

Для выявления- носителей мутантного гена ОЬАО-еккдроы* использовали 2 типа праймероо ( І іг-ІГ ) по методу 5Н(Шег еї аіі (1992) с некоторыми модификациями. Оба типа прайм еро» подбирали к фрагменту ДНК, включающему » себя позицию Э83; изменения в которой приводят к замене адеиила ив гуанин (рис 2). что к является генетической основой ВЬАО ( Юш»иг е( аі.,1992),

нормальний алл*пъ (D 12$):

361. 366 . .. 379 383 387 t I I'll

5\ « • • AÜO Q*CC -..//-- . ЛТ'С РАС СТО - //- 3і

Лір'*4

мутантный аяяляь (D J3SO):

361 ' 366 . 379 383 387

І І - І І і з* - // - • AOG о*сс — //.. .Атс aarc сто . - // - у

_____Оіу'"

Рисунок 2, - Участок ДИК крупного рогатого скота в норм*- «> при наличии мутантного г*на В LAD.

ПраЯыеры тнпв, І имели, -следующую последовательности З'-ОАО OTC АТС САС CAT COA ОТ-Э; S'-OTC АОО CAO ТТО СОТ ТСА А-3' (соответственно Ivan 2 и Ivan3) (Tamnitn, 1994). Прайм еры типа- I синтезировали' на ДНК/РНК синтезаторе • Модель. 392 (Applied Biosystems, Вайтерштадг, ФРГ ) в отделе разведенижя гснетлкк^жнаотныхВвтерипр.рного'института (зав, отделом, д.в.н. Б.Харлндяус) (Ганновер, ФРГ). ПраЙмеры тнпа II были изготовлены Н.А.Зиновьевой: в отделе биотехнологии животных НИИ' аграрной биотехнология (завотделом; профессор Т- Брем) (Австрия) и имели последовательность: "12.4" 5 -ОСС AAO GGC ТЛС ССС АТС -3'; "12.5" 5' -COA OTA GCT ОСТ ТСС ТСА CCA ATO -С- 3\ Смесь дляПЦР-анализ а содержала 100 нг ■ препарата " ДНК,' 0,4 мкМ каждого типа праймера, їх ПЦР- буфера, по 200 мкМ/мл> дезокен-нуклеотнятрифосфатов, в также по 0,3...0,5 U -TaqJ, 1,3 мМ MgCh. ПЦР-аналнзпро»одялн- ъ~ объеме' 25' мл » термоцикле ре фирмы rCycloTemp" (Москва). Число циклов - 35 при.режиме: 5мин94® С, -

J • \ * ' ' ' ' "

двявтурвокх : 10 ОКШ> fl» ЗО СІК 94* с (6D cur С) эо с«к 72* С; 25 «нвдов по 30 се* 99* С («0 сек 36* С) 30 се* 72* С - отжиг лраЛмеров я 5 мня 72* С - элонгация,. По 5 м*А скссп Орали на реетрккпвокішйояализ, Для виявленні яоеятелеК мутецня BLAD Смай пспояьэовянм рестрпктази Haeltl к Teq 1, При *споаио»аини праймеров типе II, состав реахцнонноИ смеся- остааадсд стандартним, Электрофорез проводили в 4%-м вгарозном геяе. При атом ПЦР-продукш Оыдм р&щелепи на трк частя перед -рестрякииояяим. анализом; I- не обработанный ферментам«; 2-оброботвшшй ферментом Taq I; 3. обработанный ферментом Нее III. D качестве контроля ислод>5оеади образцы ДНК от двух хиаотямх соответственно гомозиготных и гетерозиготних яо даняо>іу . рецессивному гену И1 ОТД«Л* резведенн« К гепеткхи кявотнмх (Ганновер, Герман на), яюбеэно предоставленные доктором Барбарой Харлнииус. Оценку результатов электрофореза провоняли после ог-ракшьанж гелей бромистим этнонемпоаультрафкоиетовим клпучс-пкем яв трвксяллюмннаюре.

Цяфровме материалы обрабатывал* по формул «к, описанным Плохннскяы H.A.(1978). Марзановны Н^С. (1991) с применением общепринятых прогреми персонального коми мот ера IBM ГС,

3, Результаты еовстванній* мселадовамиД

. Исследовали образ пи кровя, с»ежеподученнук> к тауСожоэаморо-«екну» сперму, Вїлту» ОТ 176 »НВОТЛМХ черно-пестрого хоряж крупкого рогатого скоте. Для экстракода ДНК яслолиовалк лробм крови, защищенные от свертывания путем добавление копсертапті широко испоямуемого яд* изучения Групп КрОВЯ различных ВИДОВ кявотних. с це а но выделе як« ДИК , к* крови к спермы были апробированы 4 метода: феколщо-хдороформовый (ВНк, Staffel . (1976).* молкфккацнн- Aeeubel et aJ. (J 987), солсвоЛ зкотрахіїяя (MÜter et al.,lP83) я /Кавасакк, tl?P0). а из сперми модифицированный mctoäU et al. (І98В).

3.1, Применение ПЦР'*н«лміз для выявления гена ВІАО-; синдром» с иеполысмнивм пряймврок iv*ri2 и tvvns

Материалом дя* ПЦР служили «pobv я сперм* крупного ротатого с хот ».Забор исследуемого материала, производили а стериямша пробирки, Для прореденя« peatnnft использовали препкзкокниИ . программируемы» термостат "Cyclo Ttmp 106*.

Лосле лроведеямл, ПЦР; дл* докажетелісіва ндднчн* мутация, «клдякони обрабатывали рссгрнктмамя Taq 1 нНаеШ, которые разрешают ПЦР-проаукт в разапчяых местах в зависимости от иугапии (ряс 3). .

1,пцр- 'УЙД2,

• ' • 101 пи

. 2,0&рвботкв р«бтрккта>псн; ■" ■■ вормальвыН «лдаль ■

НаеШ

! , Л2ия 1 /32 ля , 17пя ■ 63тг 3« П1

мутяяшыв алдмь.

. :Т»ч1 ' НввШ"»

• 84 мтн 1?ля 4«пн.'. '1»вв 36 пя .

| * I ... Г . А |

Рисунок..!, Аюрозный за*юпрофор»з вмм«4 СХМв (ОШ' М И! С) кос я* амплификации яря См*рам и . }уап-3 и ¡уап-5 и ' сбрабэтки Тац/*- « Нащ Щ - р* ¿юршапазами; нн-пар нук.ч*оти<)о]г

Примечаем«! *-в этом участке прн иутапяя разрушаете* саАт рестрикция дл4 Та$|;

**- » »том участке при иутаднн во»ппкает дополнительный сайт рестрикции ля* НаеШ. . V

Прн использовании пр&ймероа 1уш 2 н 1у«лЗ итянфкцвруется 101 пар* оснований ПЦР-продукта. Посла, обработки рсстрнжтазой Мае Ш, ам11ян*он эдоро»ых яи»отны* расщ1:пджое* на 2 фрагмента 36 дер оснований, и сосгветь'твснно 52, 32 Я -17, пар оснований после обработки I (рно.З).

У гоноэнготного по ОЬАО-геиу, после воздействия На« Ш, ДНК расщеплялась уже ка 3 фрагмента - 19, 36 я 46 пар оснований. Как показав проводимый анализ » результате замени яухяеотядной лослгяо*ат*я>яос?н г кодирующей части гена вденнна па гувннк а 383 положении* возникнет последовательность нуклеотндов гуаннн-гувинп-цлтознн-шгтознн, яъяяюшнйел сайтом 'даоэдейстия* рестриктазы НаеШ, что проявляется в пожалев и н1дополнитеяьного фрагмента, выявляемого прнэдектрофорезе. Участок амллнкона вермалнюго аллеля размером в 65 яп, у мутантного аллеля расщепляете*рестрнктвзой я» 2 фрагмента а4« к пи. : >

' После никубацик о Тед І, мутантний алледь расщеплялся только па 2 фрагмента, содержавших 84 к 17 пир кугдеотвдоа в каждом, тогдах&к нормальный аллель- не 3 фрагмента. Следовательно в результате мутации . : исчезает . сайт рестрякпян Тац 1, У нормального аллея* последовательность пуклеотидов выглядят следующим обраэо«;тиипн-цнтоэлн-гуанпн-одбикн С» поргахе ЭТО-383 включительно), являющийся сайтом рестрикции лд* Та^ I.

На электрофореграмме наглядно представлены*'результаты проведенного электрофореза (рис. 4). ;

БМда^Т^и »^ичш. ■ -V; V ,

К^^іу^і"1"'.^^1 .Ші .'V- . " "л .'.

рТЧпИ г іііі М ^ ^^ тУЗД ■ ;;

Рисунок 4. Результаты эл*ктрофор*за « 4Н а га розном г* л» при ■ . мри,м#н#нхм прайм«ро*. /уем 2 иІ*ап 3 ■

- г*тФрс*игоммял оссбь; ГІ - Здорово* гомозиготно* животно*; ■ •*

V -Контрольна*.: полоса, амлликон « 10} пн н* обработанный рггтриктозами ' ■ " ■

РВЯ стандарт молекулярной маечы (плазмидъ РВЛ327

. обработаны»» Н«*Ш ).

О случае носнтедьств* ВСАО, мутацнл в гене сводка е заменой •ненина^ на -гуании. Возникает нова* последовательность, в' результате которой,естественный сайт рестрикции при мутаинн исчезает и Т»Яг I яе способен ■■■ распознать-»тот;участок, ДНК у ноентёяей . гетерозиготного гена ; содержала »ее фрагменты, выявляемые как у здоровых огобей, так н у больных,, гомозиготных по ВЬА1> животных в результате обработки Та«) 1- м Нае Ш-фермеятеми.

. 3.2. Применение ПЦР-анализа для выявления гена В1-А0*,: *' синдрома с использованием прайм еро а 12.4 и 12.5

Пря использовании праймеров 12.4 н 12.5, дл» доказательства мутаинн, мы применяли также рестрнктянй анализ с помощью Та<] 1 я Нее Ш (рис. 5). V ; - ^ .

- 10 . ... І.ПЦР JLLi 12,3

' 'і і І і И і' "

152 лн

2; Обработки р*«трвкта*ямяі норйяльиыв тляфяь

Taql* H a« 111

^ 134 ПК J8"11!

мутиитныВ ад л* ль ■

Taqi , Haeltr»

152 пн . 25лн 83ПН 20пя 24пн

I — I. 4——' ■ , , 1 .

Tnql Нее III Т/СОА ОО/СС Tnql ■ - Нио 111 T/COA GO/CC

IS2 пц '- ■.-'■■■

134 пи -

103 пн

S3 пи : ' - ■.. ■ -

23 па і 1 • " ■ ■ - ■ ""

24 пи

20 ПК

18 пн : - ■,

н вносят ель (TL) D12SD128 носитель (BIO ' D128 P1280 . - .

Риеунок S . Агарозыый адёктрофсреэ аялелвв CD 18 (D128 и D128Q) поелл амплификации нраймерами'Ч 2.4'\ "12.5" и обработки Xaq I - " На* 1JJ -рестршапазами; иуклеотидо*

Примечание; * - ф атом участку яри мутации разрушается сайт рестрикции для TaqJ; ' * »том у части» при мутации ео*нш«зен* дополнительный vaüm. рестрикции ön* На till. .,■■."-

Прп использования праймеров 12.4 к 12,1 (ряо 3) продукт ПЦР состоял я» 152 пар нухлеотндов. В случае рестрикция ДИК Нае Ш у здоровых животных (неносителей) выявлены фрагменты длиной . 103, 25 н 24 пер куклеотняоь, у гетерозиготних осоОей {поентелей він ВЬ) появлялись дополнительные полосы соответствующие фрагментам длиной с 83 и 20 пар нухлеотидов. Что указывает на появление нового сайта рестрикции. В мутированном аяледе 2 фрагмента 83 и 20 пи соответствуют исходному фрагменту нормальной аллели размером 103 пн, .

При обработке Та^ 1 у здоровых животных отмечено наличие 2- , х фрагментов длиной 134 и 18 пар нухлеотидов, тогда как у носителей дайной мутации появляется дополнительный фрагмент размер которою соответствовал 132 парам оснований. При наличии ВІ.АО-мутапнн у животных сайты рестрикции, по Тад I отсутствовали. Оба подхода свидетельствуют о возникновении-, нового сайта рестрикция Нае Ш н элиминацией точки рестрикция Та^ I.

Проведенный сравнительный анализ двух типов прайме ров (тип 1,11) показал, что применение праймеров 12.4 и 12.3 давали лучшие результаты » двух случаях. Во-первых, получаемые фрагменты быяя боле* крупные, а следовательно, более четкие и хорошо видяы на реакционном поде. Во-вторых, большая велнчнпа фрагментов способствовала более ускоренному завершению проводимого электрофореза.

. 3.3. Анализ родословных быков-производителей

носителей гена BLAD-синдром ■ . '

Быка голштииской породы Осборндэйя . Айвонго 1185870, голландского происхождения, родившегося в 1952 году, считали видающимся производителем. Спустя 40 лет, когда стало известно, что он является носителем гена BLAD-синдрома, его наследственный материал . оказался ■ широко раслростран енним ервдо черно-пестрых и ярасяо-п-отрых пород крупного рогатого скота.' ■

В настоящее время ran BLAD диагностировал во мпогих странах миря, где широко нспопьзуются черно» и крас но-пестрые популяции высокомолочного скота. В - таблице 1 приведены частоты встречаемости гена BLAD в некоторых странах мира в сравнении с собственными данными.

-. . ■ -"."'W ■ .'„■' "- ; ". Таблица h

, Честот» встречаемости rtii BLAD « поп/лядеях ч»рио-аестрого; . л;: скот» » некоторых развитых стран и мирй .

Страна V.' Пол овозраети *я группа животных Частота встречав мости (Н) . Число исследованных «квотных (ГОЛ.)

Дания (Anon, 199Э> - телята ' \ 4 ' ' г" t ■■■ ■■■ ■ 22.6 ■ ' " 1991

Германия . (Due snuui it ■' •1.; 1994): . быки- производителя » 6 '••' ; ' 663 -

Zuchtwertichat iun&. 1998 . .- - ■ .. '1 , ' " быкп чгряо- -. Построй V • * ПОРОДЫ ' ..М , 3076

быки кряспо-ntcTpoft породи ■ * !"■ . 484 ■

США (Shutter et «1., 1992) ' s - - s племенныеV бнкя " 14,1 . . . 2023 ,

100 лучших . быков США 17,1 ., . / ■ -J - . ■ \ ... * 100

популяция коров • 7 17 -' ' у 1539

Чехия (Hmdil. t994) - быки коровы : 1 ." ' . 4 ■■ > 377л, . ; 61

Польша; . (LuVienieekl«t •I.. 1997) быки • ' • • » • , • '''•'« ;•• '■>': 5' \v\ 1680

Украина ': . (ГввЗжо,51997) быки , ■ ■ *-:>.v з . ■'■•■■■ v.- 190; :: -

Россия .. (Собственные данные) - быки . коровы '; ■ общее - ■ - 5.6 - - .'■■>v «л .• '. 5.7 • • •. • 161 '.■'-"" 15 ■-" 176

- ■ . В США 14,племенных быков ( п-2025 ). ттакшо!7.т m l00 .' самих. лучших выков я- исследованной популяция* коров -

(гг*(359) оцеиепы хвх готермиготы. Проявхвлпг BLAD' у -родившихся т«лят находится в пределахг0,2И. В л год в 1993 сред* Г 100 лучших- биков'свыша 16ft галжппсъ гетерошготаыи ( Funk. ',1994).-,pnefmanret.al.' (71994 ) в Гериалия при обследовании 663 '' биков-прокиводжтеяеА обнаружил среди, лих 614 тетеразпгот., И » ' >том слу^ве'г»те^з^готине:пяемвпяые выки продолжали сяврл»

г . < ...

и

ваться е высокопродуктивными коровами в не контролируемых популяциях (Твпипеа, 199-1).

; ' 1 Наибольшая частота встречаемости ВЬА£>-мутацнн лаблюдается в Дания (22,6%). Следует учесть, что в этой стране нееяедоввлноь только телята среди которых, как известно, большая вероятности проявления дефектного гена. Согласно последним данным нз Германии ( ЕиеЫч'еПвсЬаШкпв, 1998), встречаемость таяв 01. АО составляет 6,4%, »о Франции (6%). » Польше (5%), в Чехии (4*4). на Украина л в России этн цифры состава 1к>т 3% и 5.7 У«. При этом яужко учитывать, что как в Россия, так я на Украине в настоящее время обследовало незначительное количество животных, что па . . позволяет достоверно судить о распространении гена ВЬЛО в России, ■ -.

После г ров еде ни* анализа родословных быков*пронзаоднтелей, основным распространителем В1<ЛО > .мире, а также в Россия и Украине оказался американский голштияекий бык-производитель хз родственней группы Осборндейл-АЙвенго 1189870 - бик Карлнк М. Айвенго Белл 1667366. Использование его сыновей в нашей ■ стране, параляелшо с повышением генетического потенциала ^ отечественных.стад, способствовало распростралению гена пьах). По-результатам 1989 года Селя находился на 12.месте среди 100 .■ лучших быков США н имел кнлеко племенной* ценности (ТРО. равный 4860. Несмотря па евой высокие племенные качества, оя оказался носителем гена В1*АО-сяндрома, унаследованным '\о; отца

'V ' ". • Рисунок б.'

Сх*м* рв*оеяо§ной $ико$-прри1*Р*нтех*й> ноентеяей инь Б САР • . 4 РасемйскоЛ Федерации

Пеистейт Карлик М. .'■'*- . ' ,

Айвенго Стар Айвенго Белл Билл 187 * 1441440 1667366

' " • Диез 1843*

Билл ТроЙ Жордан . * 1882797 48* '

. . Джесси

- ■■■■■■; 1842389 * Сад .

■ * ; ,'.■-.■ 11» •' ' ■

НО-НА-МБ Ю.М.Георг Фонд Мот * 338« 1 . «► * Шейк 1Э92838 .15632"

щ~6ыки-произа од и/шли носители В1АО - '

ОсборНДеЙВ Айвенго И89870

Непосредственным» его лотоыкаых. оказались 2 его сына(Бядп Ï&7 н Дне» 1843) я 2 внука (Жордак 48 и Сад<И). Шейк 15632 не 1ВДЛМСД его : потомком,. муТйКТНЫЯч ген он унаследовал от Осборндейл Лйвеяго 1189870 чере> отда Ю.М. Георга 338561, , . Носителем, гея«; BLAD также оказался пр«дста»Я7Ьл> ялния Снлккг.ТрайджунРоккят» Оик-лрок»водлтелк Жест 750 (рио.7), ="".£> , ■ • ■ .'■■. . . ■ . ,'*'■; .'.■...: ; .„>,

\v -.С • ■ . ••' . : ■ . - - ;

• • - \ . . . Рисунок Л

CxtM* pt>i*tAO*n9Ü tuK0*~npem)*«»um*A*Ü, насштелт ttH* S LAD .'.. ■ « FfiCtHáCHóA *>г*грй*ин ■. ^

Скдкнг -' " Сидкнг Райбрук.. . '¡

Трайджуч -Рокыэн Ф Стардайт , Жест '*> Жест : 730

Рохит 252803 275932- • . 308691-241211 502259 МЧП-2538 .

-. V- 24075* _ = , . - - ;. \ .

Жест 756 относятся к. немеахой ■ черяо-Шстро* породе, родился 1 августа 1983 roj» в ЭоРГ. Имеет 7/$ гокттнно'фрнмой. кроен. Относит«« к классу э»пта-р«корд. Живай мисс* в 2 года 1 мео.' соста»д*да 710 хг, Его отцом. лвляею;* бмк Жест 502259, * матерью Никоа 3263711 1981 года рождения « удоем 9518 хг а» 305 дней л&ктапях при жиряоыолочлостя 4,19 %. Нлкод 3263711: превосходила но удою сво» ыать Нннн 534969 у которой, удов , составляя ,7891 кг жиряостио молода 4,47 V., Обе коровы отпосяяксь х классу элита -рекорд. Эта анннл свлз&ха с линией Монтаик Чифтсйн 4*pej orna матер к ' ПенстеЙт Айвенго Стар* 1441440, который оляетсд прямым яотомхом Ос Сори лей л Айаелго » носителем TíHft В LAD, ; -,

В линии Уес Идеал обнаружен носитель гена BLAD, ям оказался Код UUpHtf 8). :...;. • .¿V Г/--;'. .,■.■.:.:''

. - •■"''■"■■л."- ^ ' ' " . ■ PveyHo* в.

• В LAD, ш rocti'ücKoA&titpmuu

Vec Скуй Эстам ; Скуй Веяли Пекяамар

ИдшФ С«и. Фсста »> Бутмагер«» Л.Коауыб «* Код

933Ï22 >1344345 Дубль 1450228 17Í4657 ,18»

•• ■ . 1396383 • -

Ход i89 родился 11 нюня 1984 в Капало, В возрасте-2 года 4 месяца его жпва* масса была относительно невысока - 650 кг. Его отцом ,хвляется лучший бык Лктфнльд Кодумбус.ЕТ 1724657 (}ti(tte*ç племенной ценности.Солее +50О хг) я» линия Бутмайкера, входаптй к список 1Р0 лучших Оыков. Мат> Кода ^39, эдек Дейри Гламорас Айви 869606S имела продуктивность. 11399-кг молока о

содержанием жира 4,1 % за 305 дней лактации. Она являете* дочерью быка Осбернденл Айвенго 118970. Как н Жест 750. Код 18> унаследовал: ген BLAO .через материнскою сторону родословной, полому проверять на иоснтельство гена-ВЬАБ нужно не только быков, но н коров быкопроизводящей группы

3.4. Миграция и поток гена В1АО

Ген В1,АО являясь «шлейфом» высокой: молочности распространился ■ ло всему миру. На рисунке 10 представлены; основные пути-поступления в Россию зтого г*»а.

Рисунок 10, Поступление * Россию < г*на SlAD-cundpoua .

; Все быки, являющиеся носителями' reHa.D128Q,'поступнлп<из-зя рубежа. Наибольшее количество племенного материала, а том числе я гена BLAD, поступило из Канады (быки Билл 187, Код 189. Жордэн 48: Шенк 13632.),, из СЩА (быкн-Диез 1843 и Сед 11), из Германия (Жест 750). ; • . '

Проведенный; якал на свидетельствует,, что имеющийся ■ в черно-пестрой- популяции мутантный- ген В LAD связан^ с зявозом бмков* производителей-носителей, - являющихся прямыми потомками, Осборндейл. Айвенго. Животные-носителиBLAD поступили в. Российскую ' Федерацию' в : середине 80-х годов; т.е. до реэработки метода ДНК-диагностики; ■ '.

Миграция^ гена1 BJ.AD в популяциях отечественного скота; осуществляется. в процессе приобретения племенного м*териала■ (закупка животных, замороженного семеми или »мбрнонов),'" • ■

■ .■■■ ; ■ " ;'." " • . -

.-•-Поэтому при покупке животных нэ этих стран сседует особое I внимание удеясть диагностике носктеяьства генов'наследственных ?..заболеваний и"» частности ВЬАО. •

• V ■ 3.5.Характеристика продуктивности дочерей быков-'„/; ' • > производителей, носителей геи» В!.АО

Ь В табл.2 представлена характеристика продуктивности дочерей '_-: быков гетерозиготных по ВЬАО. нспсдьзуемых на Центральной. ^ стякшш искусственного осеменения (ЦСИО).

* „¡..лН , , -. Таблица 3. ..

-/Д;. Молочвая продуктивность дочерей бь*ков-п рои> водителе В, .-..',' носителей гева ВЬАО

'Показатели признака

Клички Кол-во Удой ± по ± no i по Кате» Дата

быков доче-pcf жяра удою жиру мол. *ИРУ. горн* завоза ЕТ

Жест , 30 3421 4,04 +395 -0.02 +13,2 AV 12.01.» -

; Жордая 206 3461 3.73 +203 +0.01 +8.0 . Ai 12.09.89 БТ

Диез ■ 110 3333 3i73 +214 +0,03 +9,8 А, 14.08.90 ВТ

Сад ■ 18 3252 3.69 +276 -0.07 +7.6 Ai 14,08.90 ЕТ

Шейк 32 3398 3,97 +111 -0.02 +3,4 А, 28.04.87

t Бил* - 70 4477 3.83 +163 -0,01 +6,0 А, 24.05.86 ЕТ

Код 20 . 4614 4.04 +32 -♦0,10 +6,7 : Б. 24.05.86 -

' 1 Лрим*ч*лм*.~ ВТ' бык получен ЭмбриОП*р*СПдтС>й

• V • • . ■■■',.. - ■ ¿-

—.: 'Наибольший уаой имеют дочери Диеза <3535 кг). Жораана <2461 V* кг). Жеста (5421 кг). Шейка (5398 кг) к Сада {5252 кг). а уаой : •^дочерей Билла (447.7 кг) и Кода (4614 кг) значительно ниже. Вместе -•сим потомки Кода отличаются высоким содержанием жира, в V молоке'(4.04ЗД) н он является улучтатедем по жирномолочности ' (+0,10%), имея' категорию Б) Высокая племенная'ценность Жесте • 750 по удою (+395 кг) обеспечивала высокую племенную ценность г по продукции молочного жнра (+15.2 кг), в его ухудшающий зффект-упо содержанию жира »молоке (-0.02 был минимален. Поэтому t;OR ': имел самый длительный; период использования.: Последние "^поступления- быков, носителей' гена - BLAD, были, в' августе 1990 . t'ífoaa (Диез и Сад). По племепкой ценности удоя они уступаютяншь ' '-■Жесту (соответственно +214 кг и +276 jcr). Сад. явллсь

t-.it. - . . j'I i'i' -'-^ .»V ' г ;i . "» - : „■; i" . 7 .,-: i.-,- . ■-„,*■'

удучттелем по удою, одновременно снижает жирномолочность дочерей, «в -0,07%.,

Бы к л- производители, имеющие я теноме мутвнтпый ген DLAD, зачастую являются . удучхавтвяями по признакам.. молочной продуктивности. Это способствует распространению теня OLAD в популхпкях крупного рогатого скота черно-пестрого корня, что, » свою очередь, требует четкой организация работ по диагностике наследственных заболеваний. .

ВЫВОДЫ

/.Впервые в условиях Российской; Федерация выявлено : косктельство мутантного гена BLAD-снклрома. Носителями ■■'."оказали с 1 быкн-пронзводнтедн. прямые потомки быха-яидера .... . ГОЛШТКНСКОЙ. породы ОсбормдэйдГ Айвенго 1189870, • роднвшегосл в Голландии 26 апреля.1952 года, к поступившие - : в нашу страну из Германии, Канады и США. - 1

2. Аттестация 176 голов ;черно-пестрого хорнл. методом ПЦР-аяализа на носительство гена BLAD-снкдрома показала его . - наличие у 9 быков- производителей и одной коровы нля у 3.7 */• от числа животных в исследованной группе. '.'*'■ ' Результаты проведенных исследований выглядели следующим образом; 1бб животных оказались гомозиготами по D12S гепу (11еносителя), в.)0.осоЬ'«й -гетерозиготами (носителями) л ,, ;*- имели генотип D123/D1280. Частота встречаемости• гепа - В LAD „ по исследованной полуягакн составила 0,0284. Гомозиготные - .особи , по- гену ■ D1280/»'■исследованной - популяции отсутствовали, что, возможно связало с анализом только -взрослых■ животных, а гомозиготмпо. рецессивному '.' гену .погибают как известно почти полностью а молодом, возрасте. ' • '■-..-■ .'*■■.■

4.Распространенна гена BLAD происходит » равной степени как по материнской таг и по отповской .линия,-/Бык Код ,18» получил этот ген через свою мать, Элен Дейрн Гламорас Айви

' 8696069/ которая- была дочерью Осборндейд, Айвенго. Бык. Жест 730 унаследовал этот ген. также через мать Никоя 3265711, которая являлась дочерью Пепстейт Айвенго Стар " 144)440. ,7

5. Анализ трех методов .выделения ДНК и» крови показал, что метод солевой экстракции 'ДНК. не требует использования вредного для здоровья реактива фенола. Применение метода солевой экстракции позволяет"": добиться выделения высокомолекулярной ДНК - (20-50кЪ) и высокой отепенн ее очистки; Недостатком метода Кавасаки'является то, что им невозможно выделение фрагментов ДНК длиной более 20 ПК./

6. Сравнительный анализ использования двух; типов прайме ров поколол,. что применение прайм еров, типа II дает лучшие результаты в двух случаях. Во-первых, получаемые фрагменты: более крупные, а следовательно; более четкие н хорошо видны:

к» реакционном пояс. Ео-вгорых, боаыим величина фрагментов ' СПОСОбСТ»у«Т ускоренному завершению электрофореза.

- 7.D исследованиях установлено, что из »сех быков-производителей носителей ыутвнтнсго гене в LAD по индексу племенной пенмостп 4 били категория Alt два других . соотмтственяо А) Н А) т.е. у лучших ел «мя по молочной продуктивности, тогда как 7-й -улучшателем по жиру(Б,).

„Vi.1. . ... .." .-. .

(У:.:'-;';'/''';./.- Практические предложения

На основаянк ствтмс 19 Федерального зегона «О племенном животноводстве» от' 1995 годи рекомендуем проводить «ертификапию элитккх быгов-проязвохоттелей, быкопронэводжтях . коров к племенного мол о ан ягя крупного рогатого- скот» черно-пестрого корня на носнтельство гена В LAD-синдроме с помощью ' ПЦР, во . избежание широкого распростралениж дефектного алделл. ' ■'-' '/л-Л ^ -.=;"-■.■'■'■ ■ ■■ '

■ И*".^ . Саисои опубликованных работ

ЬМарганов Н.С., Полов А.Н., Полежаева В,А.. Нгяепев В.М.. . Брем Г. Скрининг BLAD-синдроыа у животных ч«рно-пгстрого корил// Вестник Российской академик сельскохозяйственных наук. т1»97,-JM.-C.39-6I.

З.Попов А.К., Мйрзано» Н.С., Зиновьева H.A., Брем Г.» Полежаева В.А„ Игнатьев В.М. Диагностика носнтеяьствя гена В LAD-. ] синдрома у быков черно-пестрого корил // Труди паучно-практической- юбилейной конференции, посвкшенной 40-летик> образован« Молдавского НИИ животноводства и ветеринария. Кишинев. ♦ 1997. -С.40. ' 1

.•'!;•.:<'' - у- -1 "■. ■' V' '' ' '

Злк *УТ74 тир 90 8KB. І.О у.'р.л, j. Тип. ІЇШИ НПО*Лучч.г;Подольек M.0¡