Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка генодиагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и иммунодефицита [BLAD] у животных черно-пестрого голштинизированного скота

ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Разработка генодиагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и иммунодефицита [BLAD] у животных черно-пестрого голштинизированного скота"

на правах рукописи

МАРЗАНОВА Сайда Нурбиевна

Разработка генодиагностики комплекса аномалий позвоночника [СУМ] и иммунодефицита [ВЬАБ] у животных черно-пестрого голштинизированного

скота

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 4 ОКТ 2012

Москва-2012

005052808

005052808

Работа выполнена в ФГБОУ «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии Девришов Давудай Абдулсемедович

Официальные оппоненты: Букова Наталья Константиновна - доктор биологических наук, ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», ученый секретарь;

Иолчиев Байлар Садрадднн Оглы - доктор биологических наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства» РАСХН, ведущий научный сотрудник отдела биотехнологии, лаборатории репродуктивной криобиологии.

Ведущая организация: ФГБОУ «Российская академия менеджмента в животноводстве».

Защита диссертации состоится "30" /О 2012 г. в ча-

сов на заседании диссертационного совета Д.220.042.01 при ФГБОУ ВПО «Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина», по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Телефон: 8 (495) - 377 - 93 - 83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».

Автореферат разослан 2012 года и размещен на сайте

11й:/Лу\у\у.vak.ed.gov.ru

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В настоящее время у крупного рогатого скота описано около 60 наследственных заболеваний, которые выявляются на уровне ДНК [ICAR Guidelines, 2011]. Они вызывают морфологические и функциональные аномалии, негативно влияют на здоровье и продуктивность животного. Точность диагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и дефицита лейкоцитарной адгезии [BLAD] значительно повысилась благодаря установлению генетической природы данных молекулярных болезней [Ager-holm et al., 2001; Яковлев А.Ф. и др., 2004; Eggen A. et al., 2004; Oguni Т. et al., 2004; Марзанов H.C. и др., 2006; Ruse A., Kaminski S., 2007; Калашникова JI.А., 2010]. В развитых странах Европы и Северной Америки созданы специальные программы по элиминации мутантных CV и BL аллелей в популяциях черно-пестрой породы [Czarnik U. et al., 2007; Schutz E. et al., 2008]. В России выдающихся производителей и ремонтный молодняк также проверяют на носительство мутантных аллелей, а результаты регулярно публикуют в каталогах по племенным быкам [Попов Н.А. и др., 2004; Савенко Н.А. и др., 2007; Ескин Г.В., 2010].

Для формирования здорового племенного и высокопродуктивного поголовья животных важной задачей ветеринарных врачей и специалистов по племенному делу является своевременная диагностика и искоренение источника, вызывающего генетически обусловленных заболеваний. Знание молекулярной структуры, определение гетерозиготного носителя и мутанта, является основой для эффективной борьбы с наследственным заболеванием в связи с чем данная работа имеет важное научное и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка комплексной диагностики CV и BL мутаций у крупного рогатого скота чёрно-пёстрого генеалогического корня и генетическая оценка родословных быков-производителей-носителей по данным аллелям.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ и определить оптимальный режим выделения ДНК для проведения ПЦР на СУМ и ВЬАГ).

2. Дать характеристику голнггинизированной чёрно-пёстрой популяции крупного рогатого скота по частотам встречаемости мутантных СУ и ВЬ аллелей.

3. Дать характеристику генетической генеалогии быков-производителей носителей СУ и ВЬ аллелей.

4. Изучить геногео1рафию СУ и ВЬ мутаций у животных из различных регионов Российской Федерации и за рубежом.

Научная новизна. Впервые методом ПЦР-РВ разработана одновременная генодиагностика комплексной аномалии позвоночника [СУМ] и дефицита лейкоцитарной адгезии [ВЬАЕ>] у черно-пестрого скота с кровностью гол-штинской породы. Проведен анализ генограммы родословных линий черно-пестрого голпггинизированного скота по СУ и ВЬ аллелям. Геногеографиче-ский анализ показал степень распространения миссенс-мутаций в мире и России. Носителями СУ и ВЬ аллелей в России явились быки-производители и семя, полученное от импортированного из Германии, Канады и США скота. Они являются прямыми потомками лидеров голштинской породы Ос-борндейл Айвенго 1189879, П. Айвенго Стар 1441440 и Карлин М. Айвенго Белла 1667366. Все три элитных быка принадлежат к знаменитой линии Монтвик Чифтейн 95679.

В стадах черно-пестрого голпггинизированного скота установлены четыре группы животных: первая, носители только ВЬ, вторая - СУ, третья - обеих мутаций, четвертая - неносители. Больше всего мутантных аллелей выявлено у племенных коров, чем у быков, это указывает на то, что коровы являются своеобразным резерватом, т.е. хранителями мутантных аллелей в стаде. Мутации СУ и ВЬ аллелей выявлены в 6 из 9 регионов России, (Московская, Кировская, Ленинградская, Смоленская области, Кабардино-Балкарская Республика). Носительство СУ/ВЬ редко встречается, оно было установлено только у одного быка.

Практическая значимость работы. Предложены рекомендации по купированию распространения мутаций, вызывающих ВЬАЛ и СУМ в Российской Федерации. В основу зоотехнического и ветеринарного консультирования специалистов хозяйств положено проведение аттестации быков-производителей, ремонтных бычков, быковоспроизводящих групп коров, закупаемого семя и эмбрионов. Наличие генетического паспорта на закупаемую племенную продукцию позволит эффективно вести селекционную работу в стадах.

Личный вклад соискателя. Автор принимала непосредственное участие в разработке генной технологии по выявлению мутантных аллелей, вызывающих СУМ и ВЬАЕ>. Ей принадлежит осуществление исследований по разработке одновременной генодиагностики СУ и ВЬ мутаций, а также анализ и интерпретация полученных результатов.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы обсуждались на заседаниях кафедры иммунологии и Ученого совета ФГБОУ ВПО МГАВМиБ [Москва, 2009-2012]. Часть полученных материалов диссертации была представлена в трудах VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика -2010» под редакцией академика РАМН В.И. Покровского [Москва, 2010], научно-практической конференции, прошедшей под эгидой ОАО «ГЦВ СЖ» МСХ РФ и ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии [Быково, 2011] и в материалах международной научно-практической конференции на тему: «От теории к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» [Саратов, 2011].

Публикации. По результатам исследований опубликовано 5 научных работ, в т.ч. 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практического использования полученных научных результатов, рекомендаций по использованию

научных выводов, библиографии. Материал изложен на 142 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц и 22 рисунка. Библиография включает 234 источника, в том числе 163 на иностранных языках.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

- Результаты разработки метода комплексного выявления мутантных CV и BL аллелей.

- Генетико-генеалогический анализ выдающихся быков-производителей-носителей мутантных CV и BL аллелей.

- Распространение миссенс-мутаций CV и BL среди высокопродуктивных коров.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводили с 2009 по 2012 годы на кафедре иммунологии ФГБОУ ВПО МГАВМиБ и ЗАО «Синтол» по схеме, представленной на рис.1. ДНК выделяли из семени быков и крови коров с помощью фенольно-хлороформного и сорбентного (ДНК-сорб-В, ООО «ИнтерЛабСервис») методов. Выделенную ДНК исследовали по аллелям двух наследственных заболеваний: комплекса аномалий позвоночника [CVM] и дефицита лейкоцитарной адгезии [BLAD], Диагностику мутантного BL аллеля, вызывающую дефицит лейкоцитарной адгезии или BLAD осуществляли по методике, изложенной в работах Shuster D.E. et al. [1992] и Тахшпеп I. [1994]. В качестве праймеров для диагностики мутантного BL аллеля использовали следующие последовательности:

BLAD forward: 5 ' - GTC AGG CAG TTG GGT TCA - 3 '

BLAD reverse: 5' - GAG GTC АТС CAC CAT CGA GT - 3'.

Что касается диагностики мутантного CV аллеля комплекса аномалий позвоночника [CVM], то она осуществлялась по методу, описанному Ruse А., Kaminski S. [2007]. В качестве праймеров использовали следующие последовательности:

CVM forward: 5' - TCA GTG GCC CTC AGA TTC ТС - 3'

CVM reverse: 5' - CCA AGT TGA ATG TTT CTT АТС CA- 3'.

Рис. 1. Общая схема исследований

Разработку методики ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) для одновременной диагностики CV и BL проводили на приборе Rotor Gene Q (Corbett Research, Австралия). Изучали генетические параметры: частоты встречаемости аллелей, генотипов, наличие генетического равновесия в изучаемых ло-кусах методом

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Сравнительный анализ методов выделения ДНК из различных материалов. Проведённый сравнительный анализ различных методов выделения ДНК показал, что каждый метод имеет как свои преимущества, так и свои недостатки. Фенольно-хлороформовый метод позволяет выделять высоко очищенную ДНК хорошего качества, однако требует больших затрат времени, а также использования вредного для здоровья реагента фенола. Тем не менее, получаемая таким способом ДНК высокого качества и она может храниться длительное время. Данный метод хорош при создании Банков ДНК, требующих их длительного хранения.

Оптимальным для нашей работы является сорбентный метод выделения ДНК (ДНК-сорб-В, ООО «ИнтерЛабСервис»), Он обладает технической простотой и позволяет экономить время, не прибегая к трудоемкой процедуре фенольной экстракции. Однако качество и стабильность препаратов в целом заметно ниже, чем фенольно-хлороформных экстрактов. Сорбентный метод удобен в том случае, если препарат выделенной ДНК не нужно хранить долгие годы. Очищенную ДНК можно хранить в течение одной недели при температуре от 2 до 8°С в обычном бытовом холодильнике, в течение года при температуре не выше минус 16°С. Поэтому для дальнейшей работы был выбран сорбентный метод для выделения ДНК.

Диагностика миссенс-мутаций CV и BL у крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ. Исследованиями на CV и BL мутаций был охвачен 601 образец семени и крови, из них 474 - от быков и 127 от коров. ПЦР-РВ проводили на приборе Rotor Gene Q [Corbett Research, Австралия]. Использовали программу термоциклирования, приведенную в табл. 1. В табл.1 представлены стадии проведения ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Удержание дает команду прибору оставаться при определенной температуре в течение заданного времени (180 сек., повтор 1).

Табл. 1. Характеристика параметров термоциклирования для диагностики мутантных аллелей, вызывающих комплексную аномалию позвоночника (СУМ) и дефицит лейкоцитарной адгезии (ВЬАБ)

Шаги Температура, °С Время, сек Детекции Повторы

Удерживание 94 180 Нет 1

температуры

Циклирование 1 94 20 Нет 10

61 20 Нет

64 30 Нет

Циклирование 2 94 20 Нет 30

61 20 Нет

64 30 по каналам: Green, Yellow, Orange, Red

В процессе циклирования происходит денатурация, отжиг праймеров и синтез новой цепи ДЕК. При циклировании 1 повторов 10, они не детектируются, так как данные не репрезентативны. При циклировании 2 - повторов 30, в результате получаемые данные стабильные и являются окончательными в плане диагностики. Реакционная смесь имела следующий состав: 50 мМ KCl, 50 мМ TRIS-HC1, 250 нМ dNTP, 2,5 мМ MgCl2, 2,5 ед. ДНК-полимеразы Syntaq. Праймеры использовали в концентрации 200 нМ, флуоресцентные зонды - в концентрации ЮОнМ.

Следующим этапом являлась разработка системы для выявления мутант-ных аллелей методом ПЦР-РВ. Мы применили аллельспецифические зонды для детекции BL и CV мутаций. Для локуса с мутацией подбирали пару зондов, так чтобы один из них специфически гибридизовался при температуре проведения синтеза цепей с аллелем нормального типа, а второй зонд - с ал-лелем мутантного типа. Эти зонды метили разными флуорофорами, а результаты реакции с ними регистрировали на двух различных каналах детекции прибора для ПЦР-РВ. Для определения CT и CV аллелей мы использовали 2 канала - Green и Yellow. Нормальный CT аллель дает рост сигнала по каналу Green, детектируемый флуорофором FAM, а мутантный аллель CV - по каналу Yellow, меченный флуорофором R6G. Что касается TL и BL аллелей, то

для их определения использовали тоже 2 канала, только Orange и Red. Нормальный TL аллель дает рост сигнала по каналу Orange, детектируемый флуорофором FAM, а мутантный аллель BL - по каналу Red, меченый флуо-рофором Су5.

Результаты интерпретируются на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линии. Переход порога, это характеристика количества копий ДНК отдельного гена. При оптимальном количестве копий ДНК, кривая располагается между двумя пороговыми значениями 10 и 15 циклами амплификации. При перемещении кривой влево по оси абсцисс, это говорит о высокой концентрации ДНК, если вправо, то недостатке ее концентрации в реакции. Все образцы, графики флуоресценции которых, превышают или пересекают эту линию порога, будут считаться положительными по определенному каналу, т.е. содержащими соответствующий каналу флуоресценции аллель. Эффективность ПЦР-РВ была выше в 2 раза, чем классические методы ПЦР, которые использовались ранее в работе.

Генетическая генеалогия у быков-производителей, носителей CV и BL аллелей. Под генетической генеалогией понимается характеристика родословных на основе использования результатов ДНК-тестов совместно с традиционными методами исследования животных. Вначале был проведен анализ семени быка Пломбира 998. Пломбир 998 принадлежал ОАО «Смоленское» по племенной работе. Он был широко использован среди черно-пестрого скота Смоленской области, а в последующем Кабардино-Балкарии и Ингушетии. Несмотря на его известную родословную и отсутствие анализа на BLAD и CVM, семя быка интенсивно использовалось в 3-х регионах России. Его отцом был Пионер 188. Пионер 188 являлся сыном Карлин М. Айвенго Белла 1667366, который передал своему потомку оба наследственных заболевания, а он в свою очередь Пломбиру 998. Это редкий случай, когда бык передавал своему потомству сразу два мутантных CV и BL аллеля.

На рис. 2 приводим генетическую генеалогию быков, потомков Карлин М. Айвенго Белла 1667366, которые получили от своего предка CV аллель.

Проведенный анализ показал, что отечественные быки Голливуд 64, Бэт-ман 8694, Спектр 1729, Кубок 1459, Кодек 1452 оказались носителями му-тантного CV аллеля. Голливуд 64 получил мутацию от отца-носителя Горацио 78987165, который в свою очередь мутантный аллель получил от матери, поскольку отец Темтор 504924 был неносителем. Что касается Кубока 1459 и Кодека 1452, то они получили CV аллель от отца-носителя Конвинкера 2249055.

Племенные быки Бэтман 8694 и Спектр 1729 оказавшиеся носителями CV мутации, получили ее от своих матерей, поскольку их отцы Баклан 6352 и Сапфир 6985 оказались неносителями. Исходя из анализа полученных материалов, следует, что эти животные были правнуками и прапраправнуками Карлин М. Айвенго Белла 1667366.

Анализ 601 образца крови и семени от элитных быков и быковоспроизво-дящих групп коров черно-пестрого голштинизированного скота из различных регионов Российской Федерации на наличие CV аллеля показал, что носителями данной мутации в гетерозиготной форме являются 23 животных или 3,8%, а число особей с нормальным генотипом соответственно оказалось равным 578 или 96,2%. Причем, число носителей CV аллеля у быковоспроиз-водящих групп коров (п=17) было почти в 3 раза больше, чем у быков-производителей (п=6).

Гетерозиготными по BL аллелю оказалось 39 животных, что составило по частоте встречаемости 6,5%, с нормальным генотипом 562 головы или 93,5%.

Монтвик Чифтейн 95679

I

Р.А. Сексесар 15346 \

М.Р.Э. Гладиатор 827071

I

О. ту Фик 848777

Осборн- —► Пенстейн

дейл Айвенго

Айвенго Стар

1189870 1441440

Кодек 1452

В. Белл Жене 1887096

X. Боудевене 7787

Баклан 6352

Бэтман 8694

Спектр 1729

Сапфир 6985

Примечание: красным цветом представлены зарубежные быки, носители СУ аллеля, от которых получены российские быки, они обведены, синим цветом

Рис. 2. Генетическая генеалогия носителей СУ аллеля в линии Монтвик Чифтейн 95679 из ОАО «ГЦВ СЖ»

Как и с СУ носителями, аналогичная ситуация складывается и по ВЬ ал-лелю, только число быковоспроизводящих групп коров-носителей (п=25) было почти в 2 раза больше, чем быков-производителей с данной мутацией (п=14). Тем не менее, встречаемость ВЬ аллеля у племенных быков и коров была выше, чем число животных с СУ мутацией [табл. 2].

У всей исследованной группы животных (п=601), встречаемость СУ аллеля составила 0,0191 или 1,91%, а ВЬ - 0,0324 или 3,24%. У быков эти данные составили соответственно 0,0063 (0,63%) и 0,0148 (1,48%). Относительно коров, эти данные выглядели следующим образом: СУ - 0,0669 или 6,69%, а ВЬ - 0,0984 или 9,84%.

Как видно из табл. 2, встречаемость СУ и ВЬ аллелей у племенных коров выше, чем у быков. Это связано с тем, что племенные коровы, находящиеся в стаде становятся своеобразным резерватом по сохранению мутантных СУ и ВЬ аллелей.

Относительно быков-носителей мутаций и созданного от них спермобан-ка, то они удаляются из племенных станций. Наличие в отечественных популяциях мутантных ВЬ и СУ аллелей связано как с завозом быков - носителей, так и с получением отечественного племенного материала. Карлин М. Айвенго Белл 1617366 оказался основным распространителем источника СУМ и ВЬАБ в мире, России и других странах СНГ.

Проведенный анализ показал, что животные-носители ВЬ и СУ оказались в России в середине 80-х годов, т.е. до разработки метода ДНК-диагностики. В настоящее время главные формы распространения мутантных СУ и ВЬ аллелей это быковоспроизводящие группы коров, продажа или покупка животных-носителей, эмбрионов, через искусственное осеменение не аттестованным семенем.

Табл. 2. Частота встречаемости геиотипов и аллелей в локусах БЬСЗбАЗ и СО 18 у животных черно-пестрой породы

Локус вЬСЗБАЗ

Исследуемая порода Исследуемые группы животных п Распре деление Генотипы х2' Встречаемость аллелей

СТ/СТ СТ/СУ СУ/СУ

СТ СУ

Черно-пестрая Всего исследовано 601 Н 578 23 0 0 0,9809 0,0191

О 578 23 0

Быки- производители 474 н 468 6 0 0 0,9937 0,0063

о 468 6 0

Племенные Коровы 127 н 110 17 0 1 0,9331 0,0669

о 110 16 1

Локус СБ 18

Исследуемая порода Исследуемые группы животных п Распре деление Т1Л1 ТЬ/ВЬ вь/вь Встречаемость аллелей

ТЬ ВЬ

Черно-пестрая Всего исследовано 601 Н 562 39 0 1 0,9676 0,0324

О 562 38 1

Быки- производители 474 н 460 14 0 0 0,9852 0,0148

О 460 14 0

Племенные коровы 127 н 102 25 0 0,2 0,9016 0,0984

О 102 23 1

Примечание: СТ - нормальный аллель, СУ - мутанпшй аллель. Н - наблюдаемое число животных;

О — ожидаемое число животных; в локусе 8ЬС35АЗ - ЕхЧ, при <1Ы, Р > 0,05; в локусе СБ 18 - 2^=1,2, при (УЧ, Р > 0,05

Поток генов и гсногеография ВЬ и СУ в Российской Федерации и за рубежом. Мутаитиые гены, вызывающие ослабление или гибель животного мигрируют из одного стада в другое и даже из одной страны в другую. Так, быка голштинской породы Осборндейл Айвенго 1189870, голландского происхождения, родившегося в 1952 году, считали выдающимся производителем в США. От него была получена масса элитного поголовья быков-производителей и коров, от которых как племенной материал потомки распространились по всему миру. Спустя 40 лет, когда стало известно, что он является носителем ВЬ аллеля, его наследственный материал оказался широко распространенным среди черно-пестрых и красно-пестрых пород крупного рогатого скота во всем мире. Аналогичная ситуация сложилась и с другими знаменитыми американскими быками, отцом и сыном: Пенстейт Айвенго Старом 1441440 и Карлин М. Айвенго Беллом 1667366. Пенстейт Айвенго Стар 1441440 получил от своего отца Осборндейл Айвенго 1189870 мутант-ный аллель, вызывающий дефицит лейкоцитарной адгезии, а от матери -комплексную аномалию позвоночника (СУМ). Оба эти аллеля он передал своему знаменитому сыну, от которого по всему миру распространились ВЬ и СУ мутации.

В настоящее время геногеография ВЬ аллеля наиболее изучена. Он диагностирован в 6 республиках бывшего СССР, по СНГ в трех республиках [Россия, Белоруссия и Украина], а также в странах Балтии (Эстония, Латвия, Литва), не установлен в Казахстане и Молдове. В развитых и развивающихся странах мира, где широко используются для скрещивания черно-пестрые и красно-пестрые популяции высокомолочного голштинского скота, данная ситуация выглядит следующим образом. Аллель ВЬ выявлен в 7 частях света, включающих 27 стран мира: Северная Америка [США и Канада], Латинская Америка и Карибия: [Аргентина, Бразилия], Европа [Австрия, Бельгия, Великобритания, Венгрия, Голландия, Дания, Италия, Испания, Польша, Румыния, Франция, ФРГ, Швейцария, Чехия], Юго-Восточная Азия и бассейн Тихого океана [Китай, Япония, Новая Зеландия и Австралия], Ближний Восток

[Иран, Турция], Южная Азия [Индия, Пакистан], Африка [ЮАР]. Животноводческими обществами этих стран решено обязательное тестирование на носительство мутантных аллелей.

Что касается CV аллеля, то его распространение в России менее изучено. Исходя из проведенных исследований, он выявлен в следующих областях: Московская, Брянская, Кировская, Ленинградская, Смоленская, Кабардино-Балкарская Республика. Не выявлен в Рязанской и Тамбовской областях. После аттестации на CV и BL аллелей, вызывающих BLAD и CVM, полученные данные заносятся в периодически издаваемые каталоги по племенным быкам.

ВЫВОДЫ

1. Впервые в Российской Федерации предложен ПЦР-РВ метод для одновременной диагностики двух мутантных аллелей, вызывающих наследственные болезни: комплексную аномалию позвоночника (СУМ) и дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD) у черно-пестрого голштинизированного скота. Принцип основан на использовании технологии аллельспецифических TaqMan или флуоресцентных зондов.

2. Для выявления CT и CV аллелей использовали 2 канала - Green и Yellow. Нормальный CT аллель определялся по росту сигнала по каналу Green, детектируемый флуорофором FAM, а мутантный аллель CV - по каналу Yellow, детектируемый флуорофором R6G.

3. Для определения TL и BL аллелей использовали также 2 канала - Orange и Red. Нормальный TL аллель дает рост сигнала по каналу Orange, детектируемый флуорофором ROX, а мутантный аллель BL - по каналу Red, детектируемый флуорофором Су5.

4. Сравнительный анализ выделения ДНК показал, что лучшим является фенольно-хлороформный метод, поскольку он давал высокоочищенную ДНК, в то же время он требовал больших затрат времени. Оптимальным для работы представляется сорбентный метод выделения ДНК. Он обладает технической простотой и экономит время, не прибегая к трудоемкой процедуре

фенольной экстракции. Сорбентиый метод удобен в том случае, если препарат выделенной ДНК не нужно хранить долгие годы. Очищенную ДНК при сорбентном методе можно хранить в течение одной недели при температуре от 2 до 8°С в бытовом холодильнике, в течение года при температуре не выше минус16°С.

5. Проведен анализ и дана характеристика по 2-м наследственным болезням (ВЬАБ, СУМ) у быков-производителей и быковоспроизводящих групп коров разной кровности по голштинской породе, принадлежащих ведущим племенным предприятиям Российской Федерации. Носителями СУ и ВЬ аллелей оказались быки-производители, поступившие в нашу страну из Германии, Канады и США и являются прямыми потомками лидеров голштинской породы Осборндейл Айвенго 1189879, П. Айвенго Стар 1441440 и Карлин М. Айвенго Белл 1667366.

6. Из 601 аттестованного животного, носителями рецессивного аллеля комплексной аномалии позвоночника (СУМ) оказалось 1,91% животных. Из 474 быков носительство СУ мутации было выявлено у 0,63%, в отношении племенных коров - встречаемость данного аллеля составила 6,69%. Что касается дефицита лейкоцитарной адгезии (ВЬАЕ)), то его встречаемость у всей исследованной популяции составила 3,24%, у быков - 1,48%, племенных коров - 9,84%. Генеалогический анализ показал, что животные, у которых выявлены генетические аномалии являются прямыми потомками быка Карлин М. Айвенго Белл 1667366.

7. СУ и ВЬ аллели диагностированы в Брянской, Московской, Кировской, Ленинградской, Смоленской областях и Кабардино-Балкарской Республике. ВЬ аллель у племенных коров встречается чаще, это свидетельствует о том, что они являются своеобразным резерватом мутантных аллелей в стаде. Носительство СУ/ВЬ редко встречается, оно было установлено только у одного быка.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Одновременная аттестация элитных животных черно-пестрой голшти-низированной породы по двум миссенс-мутациям (ВЬ и СУ) на основе ПЦР-РВ позволит направленно формировать аллелофонд быков-производителей, быковоспроизводящих групп коров, ремонтный молодняк, а также накапливать племенной материал (банк семени и эмбрионов) от здоровых животных.

2. Наличие генетического паспорта на СУ и ВЬ мутаций у элитных животных позволит эффективно вести селекционно-племенную работу в племенных стадах черно-пестрого генеалогического корня.

3. Полученные результаты исследований используются при чтении лекций и проведении практических занятий по курсу «Иммунология», «Ветеринарная генетика», «Разведение сельскохозяйственных животных» в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ им. К. И. Скрябина, для слушателей системы аграрного дополнительного профессионального образования в ФГБОУ РАМЖ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Полученные материалы рекомендуется использовать в отраслевых генетических лабораториях для одновременной диагностики мутантных СУ и ВЬ аллелей.

2. На племенных предприятиях для оценки завозимых элитных быков, ремонтных бычков, быковоспроизводящих групп коров, семя и эмбрионов.

ПЕРЕЧЕНЬ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

*1. Распространение миссенс-мутаций у голштинизированного черно-пестрого скота /Марзанов Н.С., Марзанова С.Н., Турбина И.С., Девришов Д.А. // Сборник трудов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010», под

редакцией академика РАМН В.И. Покровского.- М.: Изд-во «Киселева Н.В.». -2010. - Т. II. - С. 147-149.

*2. Генетическое маркирование, сохранение биоразнообразия и проблемы разведения животных /Марзанов Н.С., Девришов Д.А., Марзанова С.Н. и др. //Сельскохозяйственная биология. - 2011. - № 2. - С. 3-14.

*3. Генетические особенности молочного скота, разводимого в Кабардино-Балкарской Республике /Марзанов Н.С., Попов H.A., Марзанова JI.K., Попов А.Н., Петров С.Н., Тохов М.Х., Утижев А.З., Саморуков Ю.В., Марзанова С.Н. и др. //Доклады РАСХН. - 2011. -№ 3. - С. 37-41.

*4. Разработка метода диагностики комплексной аномалии позвоночника (СУМ) методом ПЦР в реальном времени у черно-пестрого скота /Марзанова С.Н., Алексеев Я.И., Коновалова Н.В. и др. // Проблемы биологии продуктивных животных. -2011.-№ 4.- Спецвыпуск (научно-практическая конференция: «Практическое использование современных научных разработок в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота».). - С. 79-82.

5. Диагностика аллелей каппа-казеина и BLAD с помощью ПЦР-анализа у пород крупного рогатого скота Республики Казахстан /Канатбаев С.Г., Марзанов Н.С., Марзанова С.Н. и др. //От теории к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины: матер, междунар. научно-практич. конф. - Саратов: СГАУ- 2011. - С. 115-119.

* - публикации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ

Отпечатано в ООО «Издательство Спутник+» ПД № 1-00007 от 26.09.2000 г. Подписано в печать 26.09.2012 г. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Марзанова, Саида Нурбиевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Краткая характеристика 4-х генеалогических корней молочного скота: черно-пестрого, палево-пестрого, бурого и красного.

1.2. Морфогенетические особенности черно-пестрой породы.

1.3. Генетический груз мутаций в породах крупного рогатого скота.

1.4. Краткая история описания комплекса аномалий позвоночника (СУМ - Complex Vertebral Malformation).

1.5. Этиология комплекса аномалий позвоночника.

1.6. Клинические признаки при комплексе аномалий позвоночника.

1.7. Встречаемость СУМ у черно-пестрого генеалогического корня.

1.8. Исторические аспекты по изучению дефицита лейкоцитарной адгезии (BLAD) у крупного рогатого скота.

1.9. Этиология дефицита лейкоцитарной адгезии у крупного рогатого скота.

1.10. Патогенез и клинические признаки дефицита лейкоцитарной адгезии у крупного рогатого скота.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. История становления исследований молекулярно-генетических болезней: дефицита лейкоцитарной адгезии (BLAD) и комплекса аномалий позвоночника (СУМ) у крупного рогатого скота в Российской Федерации.

3.2. Отбор образцов для исследований.

3.3. Оборудование для проведения ПЦР-анализа.

3.4. Комплекты реагентов для выделения ДНК из различных биологических материалов.

3.5. Методы выделения ДНК из различных биологических материалов.

3.5.1. Фенольно-хлороформовый метод выделения ДНК.

3.5.2. Сорбентный метод выделения ДНК.

3.5.3. Перхлоратный метод выделения ДНК.

3.5.4. Метод солевой экстракции ДНК из крови.

3.5.5. Метод Кавасаки по выделению ДНК из крови.

3.5.6. Сравнительный анализ методов выделения ДНК из различных материалов.

3.5.7. Определение концентрации ДНК, выделенной из исследуемых образцов.

3.6. Характеристика качества пробирок Эппендорфа.

3.7. ПЦР-анализ для диагностики мутантных BL и CV аллелей с использованием различных типов праймеров.

3.8. Диагностика миссенс-мутаций CV и BL у крупного рогатого скота методом ПЦР-РВ.

3.9. Генетическая генеалогия у быков-производителей, носителей

CV и BL аллелей.

3.10. Поток генов и характеристика популяций голштинизирован-ного скота в Российской Федерации по СУМ и BLAD

3.11. Геногеография BL и CV в Российской Федерации и за рубежом.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка генодиагностики комплекса аномалий позвоночника [CVM] и иммунодефицита [BLAD] у животных черно-пестрого голштинизированного скота"

Актуальность темы. В настоящее время у крупного рогатого скота описано около 60 наследственных заболеваний, которые выявляются на уровне ДНК [136]. Они вызывают морфологические и функциональные аномалии, негативно влияют на здоровье и продуктивность животного. Точность диагностики комплекса аномалий позвоночника [СУМ] и дефицита лейкоцитарной адгезии [ВЬАБ] значительно повысилась благодаря установлению генетической природы данных молекулярных болезней [145; 217; 92; 41; 74; 71; 110; 184; 43; 198; 30]. В развитых странах Европы и Северной Америки созданы специальные программы по элиминации мутантных СУ и ВЬ аллелей в популяциях черно-пестрой породы [208; 209; 103; 2007; 210]. В России выдающихся производителей и ремонтный молодняк также проверяют на носительство мутантных аллелей, а результаты регулярно публику^ ют в каталогах по племенным быкам [66; 54; 59; 31].

Для формирования здорового племенного и высокопродуктивного поголовья животных важной задачей ветеринарных врачей и специалистов по племенному делу является своевременная диагностика и искоренение источника, вызывающего генетически обусловленных заболеваний. Знание молекулярной структуры, определение гетерозиготного носителя и мутанта, является основой для эффективной борьбы с наследственным заболеванием в связи, с чем данная работа имеет важное научное и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы явилась разработка комплексной диагностики СУ и ВЬ мутаций у крупного рогатого скота чёрно-пёстрого генеалогического корня и генетическая оценка родословных быков-производителей-носителей по данным аллелям.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ и определить оптимальный режим выделения ДНК для проведения ПЦР на СУМ и ВЬАО.

2. Дать характеристику голштинизированной чёрно-пёстрой популяции крупного рогатого скота по частотам встречаемости мутантных СУ и ВЬ аллелей.

3. Дать характеристику генетической генеалогии быков-производителей носителей СУ и ВЬ аллелей.

4. Изучить геногеографию СУ и ВЬ мутаций у животных из различных регионов Российской Федерации и за рубежом.

Научная новизна. Впервые методом ПЦР-РВ разработана одновременная генодиагностика комплекса аномалий позвоночника [СУМ] и дефицита лейкоцитарной адгезии [ВЬАБ] у черно-пестрого скота с кровностью гол-штинской породы. Проведен анализ генограммы родословных линий черно-пестрого голштинизированного скота по СУ и ВЬ аллелям. Геногеографиче-ский анализ показал степень распространения миссенс-мутаций в мире и России. Носителями СУ и ВЬ аллелей в России явились быки-производители и семя, полученное от импортированного из Германии, Канады и США скота. Они являются прямыми потомками лидеров голштинской породы Ос-борндейл Айвенго 1189879, П. Айвенго Стар 1441440 и Карлин М. Айвенго Белла 1667366. Все три элитных быка принадлежат к знаменитой линии Монтвик Чифтейн 95679.

В стадах черно-пестрого голштинизированного скота установлены четыре группы животных: первая, носители только ВЬ, вторая - СУ, третья -обеих мутаций, четвертая - неносители. Больше всего мутантных аллелей выявлено у племенных коров, чем у быков, это указывает на то, что коровы являются своеобразным резерватом, т.е. хранителями мутантных аллелей в стаде. Мутации СУ и ВЬ аллелей выявлены в 6 из 9 регионов России, (Московская, Кировская, Ленинградская, Смоленская области, Кабардино

Балкарская Республика). Носительство СУ/ВЬ редко встречается, оно было установлено только у одного быка.

Практическая значимость работы. Предложены рекомендации по купированию распространения мутаций, вызывающих ВЬАБ и СУМ в Российской Федерации. В основу зоотехнического и ветеринарного консультирования специалистов хозяйств положено проведение аттестации быков-производителей, ремонтных бычков, быковоспроизводящих групп коров, закупаемого семя и эмбрионов. Наличие генетического паспорта на закупаемую племенную продукцию позволит эффективно вести селекционную работу в стадах.

Личный вклад соискателя. Автор принимала непосредственное участие в разработке генной технологии по выявлению мутантных аллелей, вызывающих СУМ и ВЬАБ. Ей принадлежит осуществление исследований по разработке одновременной генодиагностики СУ и ВЬ мутаций, а также анализ и интерпретация полученных результатов.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы обсуждались на заседаниях кафедры иммунологии и Ученого совета ФГБОУ ВПО МГАВМиБ [Москва, 2009-2012]. Часть полученных материалов диссертации была представлена в трудах VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» под редакцией академика РАМН В.И. Покровского [Москва, 2010], научно-практической конференции, прошедшей под эгидой ОАО «ГЦВ СЖ» МСХ РФ и ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии [Быково, 2011] и в материалах международной научно-практической конференции на тему: «От теории к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» [Саратов, 2011].

Публикации. По результатам исследований опубликовано 5 научных работ, в т.ч. 4 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практического использования полученных научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, списка использованной литературы. Материал изложен на 142 страницах машинописного текста, содержит 11 таблиц и 22 рисунка. Список использованной литературы включает 234 источника, в том числе 163 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Марзанова, Саида Нурбиевна

5.ВЫВОДЫ

1. Впервые в Российской Федерации предложен ПЦР-РВ метод для одновременной диагностики двух мутантных аллелей, вызывающих наследственные болезни: комплексную аномалию позвоночника (СУМ) и дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD) у черно-пестрого голштинизи-рованного скота. Принцип основан на использовании технологии ал-лельспецифических TaqMan или флуоресцентных зондов.

2. Для выявления CT и СУ аллелей использовали 2 канала - Green и Yellow. Нормальный CT аллель определялся по росту сигнала по каналу Green, детектируемый флуорофором FAM, а мутантный аллель CV - по каналу Yellow, детектируемый флуо рофором R6G.

3. Для определения TL и BL аллелей использовали также 2 канала -Orange и Red. Нормальный TL аллель дает рост сигнала по каналу Orange, детектируемый флуорофором ROX, а мутантный аллель BL - по каналу Red, детектируемый флуорофором Су5.

4. Сравнительный анализ выделения ДНК показал, что лучшим является фенольно-хлороформный метод, поскольку он давал высокоочи-щенную ДНК, в то же время он требовал больших затрат времени. Оптимальным для работы представляется сорбентный метод выделения ДНК. Он обладает технической простотой и экономит время, не прибегая к трудоемкой процедуре фенольной экстракции. Сорбентный метод удобен в том случае, если препарат выделенной ДНК не нужно хранить долгие годы. Очищенную ДНК при сорбентном методе можно хранить в течение одной недели при температуре от 2 до 8°С в бытовом холодильнике, в течение года при температуре не выше минус 16°С.

5. Проведен анализ и дана характеристика по 2-м наследственным болезням (BLAD, СУМ) у быков-производителей и быковоспроизводящих групп коров разной кровности по голштинской породе, принадлежащих ведущим племенным предприятиям Российской Федерации. Носителями СУ и ВЬ аллелей оказались быки-производители, поступившие в нашу страну из Германии, Канады и США и являются прямыми потомками лидеров голштинской породы Осборндейл Айвенго 1189879, П. Айвенго Стар 1441440 и Карлин М. Айвенго Белл 1667366.

6. Из 601 аттестованного животного, носителями рецессивного ал-леля комплексной аномалии позвоночника (СУМ) оказалось 1,91% животных. Из 474 быков носительство СУ мутации было выявлено у 0,63%, в отношении племенных коров - встречаемость данного аллеля составила 6,69%. Что касается дефицита лейкоцитарной адгезии (ВЬАЭ), то его встречаемость у всей исследованной популяции составила 3,24%, у быков - 1,48%, племенных коров - 9,84%. Генеалогический анализ показал, что животные, у которых выявлены генетические аномалии являются прямыми потомками быка Карлин М. Айвенго Белл 1667366.

7. СУ и ВЬ аллели диагностированы в Брянской, Московской, Кировской, Ленинградской, Смоленской областях и Кабардино-Балкарской Республике. ВЬ аллель у племенных коров встречается чаще, это свидетельствует о том, что они являются своеобразным резерватом мутантных аллелей в стаде. Носительство СУ/ВЬ редко встречается, оно было установлено только у одного быка.

6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Одновременная аттестация элитных животных черно-пестрой голштинизированной породы по двум миссенс-мутациям (ВЬ и СУ) на основе ПЦР-РВ позволит направленно формировать аллелофонд быков-производителей, быковоспроизводящих групп коров, ремонтный молодняк, а также накапливать племенной материал (банк семени и эмбрионов) от здоровых животных.

2. Наличие генетического паспорта на СУ и ВЬ мутаций у элитных животных позволит эффективно вести селекционно-племенную работу в племенных стадах черно-пестрого генеалогического корня.

3. Полученные результаты исследований используются при чтении лекций и проведении практических занятий по курсу «Иммунология», «Ветеринарная генетика», «Разведение сельскохозяйственных животных» в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ им. К. И. Скрябина, для слушателей системы аграрного дополнительного профессионального образования в ФГБОУ РАМЖ.

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Полученные материалы рекомендуется использовать в отраслевых генетических лабораториях для одновременной диагностики му-тантных СУ и ВЬ аллелей.

2. На племенных предприятиях для оценки завозимых элитных быков, ремонтных бычков, быковоспроизводящих групп коров, семя и эмбрионов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Марзанова, Саида Нурбиевна, Москва

1. Амерханов Х.А., Марзанов Н.С. Генетики смотрят в будущее // Племенное дело. 1999. - № 1. - С. 7-9.

2. Бенедиктус Г. О чем расскажет ДНК коров? Революция в селекции крупного рогатого скота // Молоко and Корма. Менеджмент. -2008,-№3(20).-С.2-4.

3. Боголюбский С.Н. Происхождение и преобразование домашних животных / С.Н. Боголюбский. М.: Советская наука, 1959.

4. Боценовский В.А., Барышников А.Ю. Молекулы клеточной адгезии человека // Успехи современной биологии. 1994. -Т. 114. -Вып.6. - С.741-753.

5. Вартапетян А.Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология. 1991. - Том 25. - №4. - С.926-936.

6. Визнер Э., Виллер 3. Ветеринарная патогенетика. М., 1979.

7. Винничук Д.Т., Созинов A.A. Ген «BLAD» в наследственности голштинского скота // Вюник аграрной науки. 1994. - №6. - С.44-46.

8. Волынцев A.A., Прудов А.И., Исаев В.А., Дунин И.М., Аджи-беков К.К., Прохоренко Д.Г. Генеалогические схемы быков-производителей голштинской породы (Каталог). Москва, 1989. - 382с.

9. Глазко В.И. ДНК-технологии животных. Киев, 1997. - 173с.

10. Глазко В.И., Лавровский В.В., Филенко А.Н., Мариуца А.Э. Внутрипородная генетическая дифференциация и наличие мутации

11. BLAD у крупного рогатого скота голштинской породы // Сельскохозяйственная биология. 2000. - №4. - С.45-47.

12. Глазко В.И., Дунин И.М., Глазко Г.В., Калашникова JI.A. Введение в ДНК-технологию. Москва: ФГНУ «Росинформагротех», 2001.-434с.

13. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. Санкт-Петербург: «Специальная литература», 1997. - 286с.

14. Грант В. Эволюционный процесс: критический обзор эволюционной теории. Москва: Мир, 1991. - 277с.

15. Данкверт А.Г., Данкверт С.А. История племенного животноводства России. Изд-во ВНИИплем. Лесные Поляны, 2002. - 333 с.

16. Дмитриев Н.Г. Породы скота по странам мира. Л.: Колос, 1978. - 288 с. (Справочная книга).

17. Дунин И.М. Материалы Всероссийской научно-практической конференции на тему: «Научное обеспечение АПК Евро-Северо-Востока России». Саранск: САРАНСК, 2010. - С.29-32.

18. Жигачев А.И. Генетический груз и мониторинг вредных мутаций в популяциях крупного рогатого скота: автореф. дис. докт. биол. наук. Л.-Пушкин, 1986.

19. Жигачев А.И. Проблемы мутагенеза в современных популяциях сельскохозяйственных животных. Тез. докл. V съезда ВОГиС. М., 1987.-Т. V. С.67-69.

20. Жигачев А.И. Оценка производителей на скрытые генетические дефекты // Зоотехния. 2001. - №3. - С. 10-12.

21. Жигачев А.И. Заболевания скота XXI века откуда они? Наше племенное дело. - 2004. - №3. - С. 9-11.

22. Жигачёв А., Богачёва Т., Фогель С. Система контроля за вредными мутациями // Молочное и мясное скотоводство. 1998. - N6-7. - С.18-21.

23. Жигачев А.И., Суллер И.Л. Наследственные аномалии и их контроль у КРС // Практик. 2002. - №3-4. - С.46-53.

24. Жигачёв А.И., Эрнст Л.К., Богачёва Т.С. О накоплении груза мутаций в породах крупного рогатого скота при интенсивных технологиях воспроизводства и улучшения по целевым признакам // Сельскохозяйственная биология. 2008. - №6. - С.25-32.

25. Ежегодник по племенной работе в молочном скотоводстве в хозяйствах Российской Федерации / под ред. И.М. Дунина. Москва: Изд-во ВНИИплем., 2007. - 222с.

26. Ежегодник по племенной работе в молочном скотоводстве в хозяйствах Российской Федерации. ВНИИплем, 2011. - 251с.

27. Игнатьев В.М. Скрининг гена лейкоцитарной адгезии (BLAD-синдром) у животных черно-пестрого корня крупного рогатого скота // Дисс. канд. биол. наук. Дубровицы, 1998. - 96с.

28. Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И., Глазко Г.В., Рыжова Н.В., Голубина Е.П. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных. Москва, 1999. - 148с.

29. Калашникова Л.А. Геномная оценка молочного скота / JI.A. Калашникова//Молочное и мясное скотоводство-2010. -N1. С.10-12.

30. Каталог быков-производителей ОАО «Головной центр по воспроизводству сельскохозяйственных животных» / под ред. Ескина Г.В. Быково, 2010. 36с.

31. Костомахин Н.М. Скотоводство. Санкт-Петербург-Москва-Краснодар: Лань, 2007. - 431с.

32. Костомахин Н.М. Породы крупного рогатого скота. Москва: КолосС, 2011.- 119с.

33. Кузнецов В.М. Статистический анализ родословных // Зоотехния. 1998. - N2. - С.5-8.

34. Кузнецов В.М. Инбридинг в животноводстве: методы оценки и прогноза. Зональный НИИСХ Северо-Востока. Киров, 2000. - 66с.

35. Кузнецов В.М. Современные методы анализа и планирования селекции в молочном стаде. Зональный НИИСХ Северо-Востока. Киров, 2001.- 116с.

36. Кузнецов И.М. Молочное скотоводство Голландии // Животноводство. 1957. - № 7. - С. 75-82.

37. Лебедев М.М., Бим А.И. Состояние чёрно-пёстрой породы и мероприятия по её улучшению // Животноводство. 1973. -№ 7.-С.51-57.

38. Логинов Ж.Г. Быки-лидеры голштинской породы в США и Канаде // Зоотехния. 1989. - N4. - С.75-78.

39. Макаров В.Ю. Генетические и селекционные признаки молочного скота в популяциях региона: дис. канд. биол. наук. Дубровицы, 2008,- 157с.

40. Марзанов Н.С., Попов А.Н., Зиновьева H.A., Полежаева В.А., Игнатьев В.М., Брем Г. Скрининг BLAD-синдрома у животных чёрно-пёстрого корня // Вестник РАСХН. 1997. -№4. - С.59-61.

41. Марзанов Н.С., Турбина И.С., Ескин Г.В., Турбина Г.С., Попов А.Н., Игнатьев В.М., Харлициус Б. Скрининг гена дефицита лейкоцитарной адгезии у черно-пестрого голштинизированного скота // Сельскохозяйственная биология. 2003. - №6. - С.23-30.

42. Марзанов Н.С. Отчет по Разделу 2: «Изучить приемлемость полиморфизма ДНК для оценки биоразнообразия и хозяйственно-биологических качеств сельскохозяйственных животных». Дубровицы, 2006.-27с.

43. Марзанов Н.С., Апишева Ф.К., Марзанова Л.К., Самору-ков Ю.В., Кертиев P.M. Современная характеристика понятия порода. Сельскохозяйственная биология. 2007. - № 6. - С. 16-23.

44. Машуров A.M. Генетические маркеры в селекции животных. -М.: Наука, 1980.-315с.

45. Машуров A.M., Сухова Н.О., Царев P.O., Тхань Х.Х. Алгоритмы иммунобиохимичеекой генетики. Новосибирск: Редакционно-полиграфическое объединение СО РАСХН, 1998. - 112с.

46. Меркурьева Е.К., Абрамова З.В., Бакай A.B., Кочиш И.И.

47. Генетика. М: ВО «Агропромиздат», 1991. - 446с.

48. Новиков Е.А. Чистопородное разведение молочного скота. -М.: Сельхозгиз, 1962.

49. Новикова Л.Ф., Карликов Д.В. СУМ комплексное уродство позвоночника крупного рогатого скота. - Быково, 2002. - 28с.

50. Погребняк В.А. Селекционные аспекты повышения потенциала молочной продуктивности черно-пестрой породы: дис. докт. с.-х. наук. Дубровицы, 1998. 353с.

51. Попов H.A., Ескин Г.В. Аллелофонд пород крупного рогатого скота по ЕАВ локусу. - Москва, 2000. - 299с.

52. Попов H.A., Червяков H.A., Белявин H.A. и др. Каталог быков-производителей ОАО «Кировское». Киров, 2004. - 73с.

53. Прохоренко П.Н., Логинов Ж.Г. Голштино-фризская порода скота. Ленинград: Агропромиздат, 1985. - 238с.

54. Прохоренко П.Н. Методы создания высокопродуктивных молочных стад // Зоотехния. 2001. - № 11. - С. 2-7.

55. Прудов А.И. Оценка генетических и селекционных признаков импортного немецкого черно-пестрого скота // Методы повышения продуктивности сельскохозяйственного скота. Саранск, 1992. С. 17-23.

56. Прудов А.И., Дунин И.М. Использование голштинской породы для интенсификации молочного скота. Москва: Нива России, 1992. -191с.

57. Савенко H.A., Бошляков В.Н., Жуков В.Ф. и др. Каталог быков-производителей ОАО «Московское» по племенной работе. Москва: МСХиП МО, 2007. - 104с.

58. Смарагдов М.Г. Методы молекулярных маркеров в селекции хозяйственно ценных признаков у крупного рогатого скота // Сельскохозяйственная биология. 2005. - № 6. - С. 3-7.

59. Турбина И.С. Характеристика быков-производителей по различным генетическим маркерам: автореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 2006. 24с.

60. Усенбеков Е.С. Генотипирование крупного рогатого скота по локусам каппа-казеина, бета-лактоглобулина и мутации BLAD // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Санкт-Петербург-Пушкин, 1995 - 16с.

61. Фролкин Д.А. Скрининг гена злокачественного гипертермического синдрома (MHS-гена) у свиней // Дисс. канд. биол. наук. Дубро-вицы, 2000. 103с.

62. Шапочкин В.В., Ескин Г.В. Каталог быков-производителей ФГУП «ЦСИО». Подольск, 2002. 51с.

63. Щинов М.Ю. Использование биотехнологических методов в генетическом мониторинге разведения крупного рогатого скота // Авто-реф. дисс. канд. биол. наук. Дубровицы, 2001. 22с.

64. Эрнст JI.K., Жигачев А.И. Профилактика генетических аномалий крупного рогатого скота. Л., 1990.

65. Эрнст Л.К., Жигачев А.И. Мониторинг генетических болезней животных в системе крупномасштабной селекции. М., 2006.

66. Эрнст Л.К., Жигачев А.И., Кудрявцев В.А. Мониторинг генетического груза в черно-пестрой, голштинской, айрширской породах крупного рогатого скота // Зоотехния. 2007. - №3. - С.3-6.

67. Яковлев А., Терлецкий В., Митрофанова О., Дементьева Н. Определение носителей генетических дефектов среди быков-производителей // Молочное и мясное скотоводство. 2004. - № 7.-С. 31-32.

68. Ackermann M.R., Kehrli M.E.Jr., Morfitt D.C. Ventral dermatitis and vasculitis in a calf with bovine leukocyte adhesion deficiency // J. Am. Vet. Med. Ass. 1993. - Vol. 202. -P.413-415.

69. Agerholm J.S., Houe H., Jorgensen C.B., Basse A. Bovine leukocyte adhesion deficiency in Danish holstein-friesian cattle. II. Patho-anatomical description of affected calves // Acta Vet. Scand. 1993. -Vol.34.-P. 237-243.

70. Agerholm J.S., Hafner A., Olsen S., Dahme E. Spinal dysmyeli-nation in cross bred brown Swiss calves // J. Vet. Med. 1994. - Vol. 41. -N3. - P.180-188.

71. Agerholm J.S., Bendixen C., Arnbjerg J., Anderson O. Complex vertebral malformation in Holstein calves // J. Vet. Diagn. Invest. 2001. -Vol.13. -P.283-289.

72. Agerholm J.S., Anderson O., Almskou M.B., Bendixen C., Arnbjerg J., Aamand G.P. Evaluation of the inheritance of the complex vertebral malformation syndrome by breeding studies // Acta Vet Scand. -2004.-Vol.45. P.133-137.

73. Anderson D.C., Springer T.A. Leukocyte adhesion deficiency: an inherited defect in ine Mac-1, LFA-1 and pl50,95 glycoproteins // Ann. Rev. Med. 1987.- Vol.38.-P.175-194.

74. Andresen E., Basse A., Brummerstedt E., Flagstad T. Lethal trait A 46 in cattle. Additional genetic investigations. Nord. Vet. Med. 1974. -Vol. 26. - P.275-278.

75. Andrews A.H., Fishwick J., Waters R.J. Bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) in a one year old Holstein Friesian bull the first report in the United Kingdom // British Veterinary Journal. - 1996. -Vol.152. - P.347-351.

76. Anon. Erbfehler Was ist Blad? // Hann. Land. Forstwirtsch. Ztg. -1991. - Vol.11.-N5.-P.91.

77. Anon. VDS-BeschluP zu BLAD. Ostfr. Landvolk. 1992. -Vol.107.-P.28.

78. Arnaout M.A. Leukocyte adhesion molecules deficiency: its structural basis, pathophysiology and implications for modulating the inflammatory response // Immunol. Rev. 1990a. - Vol. 114. - P. 145-180.

79. Arnaout M.A. Structure and function of the leukocyte adhesion molecules CD11/CD 18 //Blood. 1990b.-Vol. 75. - P.1037-1050.

80. Arnaout M.A., Pitt J., Cohen H.J., Melamed J., Rosen F.S., Colten H.R. Deficiency of a granulocyte membrane glycoprotein (gp 150) in a boy with recurrent bacterial infections // N. Engl. J. Med. - 1982. - Vol.306. - P.693-699.

81. Arnaout M.A. Structure and function of the leukocyte adhesion molecules CD 11/CD 18//Blood. 1990. - Vol.75. - P.1037-1050.

82. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E., Moore D.D., Seidman J.G., Smith J.A., Struhl K. Current protocols in molecular biology. New York: John Wiley and Sons, 1987.

83. Awgulewitsch A., Utset M.F., Hart C.P., McGinnis W., Ruddle F.H. Spatial restriction in expression of a mouse homeo box locus within the central nervous system // Nature. 1986. - Vol.320. - P.328-335.

84. Back A.L., Kwok W.W., Hickstein D.D. Identification of two molecular defects in a child with leukocyte adherence deficiency // J. Biol. Chiem. 1992. - Vol. 267. - P.5482-5487.

85. Batt C.A., Wagner P., Wiedmann M., Luo J., Gilbert R.O. Detection of bovine leukocyte adhesion deficiency by nonisotopic ligase chain reaction // Anim.Genet. 1994. - Vol.25. - P.95-98.

86. Benedixen С., Horn P., Panitz F. et al. Mapping and identification of the CVM-gene in cattle // 29th International Conference on Animal Genetics. Tokyo. Japan, 2004. P.36.

87. Bierma J. BLAD-Bulls in Europe // Euroworld. 1992. -Vol.807. - S.lll.

88. Бфюкова О.Д. Популяцшно-генетичний мониторинг форму-вання генофонду украшсько1 чорно-рябо! молочно1 породк автореф. дис. канд. сшьськогоспод. наук. с. Чубинське Кшвсько1 облает!,2005. 13с.

89. ВНп N., Stafford D.W. A general method for isolation of high molecular weight DNA from eucaryotes // Nucl. Asids Res. 1976. - Vol.3. -P.2303-2308.

90. Boichard D., Amigue Y. Investigation on possible linkage between the BLAD gene and a QTL for production or type traits in Holstein cattle // 46th Annual Meeting of the European Association for Animal Production. Prague, 1995.-P.4-7.

91. Butcher E.C. Cellular and molecular mechanism that direct leukocyte traffic // Am. J. Pathol. 1990. - Vol.136. - P. 3-11.

92. Cabanas C., Hogg N. Lymphocyte-fibroblast adhesion: a useful model for analysis of the interaction of the leukocyte integrin LFA-1 with ICAM-1 // Fed. Eur. Bioch. Societ. 1991. - Vol.292. - P.284-288.

93. Citek J., Rehout V., Hajkova J., Pavkova J. Monitoring of the genetic health of cattle in the Chech Republic // Veterinarni Medicina.2006. Vol.51. - N6. - P.333 -339.

94. Cox E., Kuczka A., Tammen I., Schwenger B. Leukocyten adhesien deficientie bij rund en hond: een erfelijke stoornis van het immuunstelsel // Viaams. Diergeneeskd. Tijdschr-1993. -Vol.62. P.71-79.

95. Crowley C.A., Curnutte J.T., Rosin R.E. et al. An inherited abnormality of neutrophil adhesion: its genetic transmission and its associations with a missing protein // N. Eng. J. Med. 1980. - Vol.302. -P.1163-1168.

96. Czarnik U., Grzybovski G., Kaminski S., Prusak B, Zabolewicz

97. T. Effectiveness of a program aimed at the elimination of BLAD-carrier bulls from Polish Holstein-Friesian cattle // J. Appl. Genet. 2007. - Vol.48. -P.375-377.

98. Dana N., Clayton L.K., Tennen D.G., Pierce M.W., Lachmann

99. P.J. Leukocytes from four patients, with complete or partial Leu-CAM deficiency contain the common ß-subunit procursor and ß-subunit messenger RNA//J. Clin. Invest. 1987.- Vol.79. -P.1010-1015.

100. Denholm L.J. Bovine osteogenesis imperfecta (Australia type): morphological characterization of an animal mode of osteogenesis imperfect in man. Dis. Abstr. Intern. B, 1986. Vol. 46(7). - P. 2227.

101. Distl O. The use of molecular genetics in eliminating of inherited anomalies in cattle // Arch. Tierz. Dummerstorf. 2005. -Vol.48. - N3. -P.209-218.

102. Dwyer D.E., Saksena N. Failure of ultra-violet irradiation and autociacing to eliminate PCR contamination // Mol. Cell. Probes. 1992. -Vol.6. -P.87-88.

103. Eggen A., Duchesne A., Laurent P., Grohs C., Denis C., Gautier M., Boichard D., Ducos A. Controlling genetic disorders in the french dairy cattle population // 29th International Conference on Animal Genetics. Tokyo. Japan, 2004. P.35.

104. Ehrmann S. Milchproteine: Mit dem Muster auch die Leistung verbessern?//Der Tierzuchter. 1993. - N3. - S.44-47.

105. Engelhardt I. Inzucht, bedeutende Ahnen und Warscheinlichkeit fur BLAD-Merkmalstrager in der Deutschen Schwarzbuntzucht. Dissertation. Hannover. FRG. 1996. - 155s.

106. Fesus L., Zsolnai A., Anton I., Bäräny I., Bozö S. BLAD genotypes and cow production traits in Hungarian Holstein // J. Anim. Breed, and Genet. 1999. - Vol. 116. - P. 169.

107. Funk D. BLAD, three years later // Holstein World. -1994. -Marz. -Vol.96. -P.96-106.

108. Gehring W.J. Homeoboxes in the study of development // Science. 1987. - Vol.236. - P.1245-1252.

109. Gilbert R.O., Rebhun W.C., Kim C.A., Kehrli M.E.Jr., Shuster D.E., Ackerman M.R. Clinical manifestations of leukocyte adhesion in cattle: 14 cases (1977-1991) // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1993. - Vol. 202. -N3. - P.445-449.

110. Gilbert R.O., Rebhun W.C., Kim C.A., Kehrli M.E.Jr., Shuster D.E., Ackerman M.R. Clinical manifestations of leukocyte adhesion in cattle: 14 cases (1977-1991) // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1993. - Vol.202. -N3. - P.445-449.

111. Gough N.R. Cell Biology Blocking Integrin Activation at the a Subunit // Sei. Signal. 2011. - Vol. 4. - Issue 198. - P. 309.

112. Greene H.J., Leipold H.W., Huston K., Noordsy J.L., Dennis S.M. Congenital defects in cattle // Ir. Vet. J. 1973. - Vol.27. - P.37-45.

113. Greene H.J., Leipold H.W., Dennis S.M. Perosomus elumbis in Hereford calves // Vet Med Small Anim Clin. 1973. - Vol.68. - P. 167-168.

114. Grobet L., Charlier C., Hanset R. Diagnostic genomigue de la BLAD (Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency) // Ann. Med.Vet. 1993. -Vol.137.-P.27-31.

115. Gurlt E.F. Lehrbuch der pathogischen Anatomie der Haus-Saugethiere, 2. Teil, Atlas, G. Reimer, Berlin, Germany, 1832. N1. - P. 8891.

116. Gurlt E.F. Uber thierische Missgeburten. August Hirschwald, Berlin, Germany, 1877. P.8-9.

117. Habermehl K.H. Zur Genese und Variationsbreite des Perosomus elumbis // Monatsh Tierheilkd. 1954. - Vol. 6. - P.276-284.

118. Hagemoser W.A., Roth J.A., Lofstedt J., Fagerland J.A. Granu-locytopathy in a Holstein heifer // J. A. Vet. Med. Assoc. 1983. - Vol. 183. - P.1093-1094.

119. Haidane J.B.S. "The cost of natural selection" // J. of Genetics. -1937.-Vol.55.-P.511-524.

120. Healy P.J. Bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) another genetic defect of Holstein/Friesians // Aust.Vet. J. - 1992. - Vol.69. - N8. - P.190.

121. Hemler M.E. VLA proteins in the integrin family: structures, functions and their role on leukocytes // Annu. Rev. Immunol. 1990. -Vol.8. -P.365-400.

122. Herzog A., Adam R. Zur Neuromyodysplasia congenita (kongenitale Arthrogrypose) der Hintergliedmassen beim Kalb. Dtsch Tieraerztl Wo-chenschr. 1968. - Vol.75. - P.237-243.

123. Holland P.W.H., Hogan B.L.M. Spatially restricted patterns of expression of the homeobox-containing gene Hox 2.1 during mouse embryogenesis. Development. 1988. - Vol. 102. - P. 159-174.

124. Hynes R.O. Integrins: a family of cell surface receptors // Cell. -1987.-Vol.48.-P.549-554.

125. ICAR Guidelines approved by the General Assembly held in Riga, Latvia on June 2010. Copyright ICAR, 2011. 485p.

126. Jones C.J. Perosomus elumbis (vertebral agenesis and arthrogryposis) in a stillborn Holstein calf // Veterinary Pathology. 1999. - Vol.36. - Nl.-P. 64-70.

127. Joest E. Drei Falle von Perosomus elumbis beim Kalbe. Bericht über die Königliche tierarztliche Hochschule zu Dressden fur das Jahr 1908, pp. 144-147 and plate V. Buchhandlung Zahn & Jaensch, Dresden, Germany, 1909.

128. Joest E. Zwei Falle von Perosomus elumbis beim Rind. Bericht über die Königliche tierarztliche Hochschule zu Dresden fur das Jahr 1911, pp. 270-273. Buchhandlung Zahn & Jaensch, Dresden, Germany, 1912.

129. Jorgensen C.B., Agerholm J.S., Pedersen J., Thomsen P.D. Bovine leukocyte adhesion deficiency in danish holstein-friesian cattle // Acta Vet. Scand.- 1993.-Vol.34.-P.231-236.

130. Kahle M. Kennzeichung des BLAD-Status weiblicher Tiere // Rind in Bild. 1994.-N2.-P.20.

131. Kanae Y., Endoh D., Nagahata H., Hayashi M. A method for detecting complex vertebral malformation in Holstein calves using polymerase chain reaction-primer introduced restriction analysis // J. Vet. Diagn. Invest. 2005. - Vol.17. - P.258-262.

132. Kantanen J. Genetic diversity of domestic cattle (B. taurus) in North Europe. Joensuu. 1999. - 100p.

133. Kawasaki E.S. Sample preparation from blood, cell and other fluids. PCR protocols, a guide to methods and applications // Academic Press. San Diego. N.Y. USA, 1990. P. 146-152.

134. Kehrli M.E., Schmalstieg C., Anderson D.C., Van Der Maaten M.J., Hughes B.J., Akermann M.R., Wilhemsen C.L., Brown G.B., Stevens M.G., Whetstone C.A. Molecular identification of deficiency of the

135. Mac-1 (CD1 lb/CD 18) glycoprotein // Am. J. Vet. Res. 1990. - Vol.51. -P.1826-1836.

136. Kehrli M.E.Jr., Shuster D.E., Ackermann M.R. Leukocyte adhesion deficiency among Holstein cattle // Cornell Vet. 1992. - Vol.82. -P.103-109.

137. Keizer G.D., Tevelde A.A., Schwarting R., Figdor G., De Vries

138. J.E. Role of pi 50,50 in adhesion, migration, Chemotaxis and phagocytosis of human monocytes // Eur. J. Immunol. 1987. - Vol.17. - P. 1317-1322.

139. Kiiman H., Kaart T., Saveli O. Somatic cell count as item of milk quality and udder health. XI Baltic animal breeding and genetics conference, 2005. P.54-57.

140. Kishimoto T.K., Larson R.S., Corbi A.L., Dustin N.L., Staunton D.E., Springer T.A. The leukocyte integrins // Adv. Immunol. 1989. -Vol.46.-P.149-182.

141. Koch P., Fischer H., Schumann F. Erbpathologie der landwirtschaftlichen Haustiere. Berlin Hamburg, 1957.

142. Kornfeld R., Kornfeld S. Assembly of asparagine-linked oligo-saccarides//Annu. Rev. Biochem. 1985. - Vol.54. - P.631-664.

143. Koumans J.T.M., Van Haeringen H. A simple and rapid method for the isolation of DNA for genotyping purposes from milk samples. XXV Intern. Conf. on Anim. Genet. Tours. France, 1996. P. 147.

144. Krauss J.C., Mayo-Bond L.A., Rogers C.E., Weber K.L., Todd R.F. An in vivo animal model of gene therapy for leukocyte adhesion deficiency // J. Clin. Invest. 1991. - Vol.88. - P. 1415-1417.

145. Kuczka A., Kuhlmann E., Schwenger B. und and. BLAD im Griff// Der Tierzuchter. 1993. - N1. - S. 32-3 5.

146. Lee J.K., Schook L.B., Rutherford M.S. Cloning and expression• thof the porcine CD 18 adhesion molecule // 4 International Veterinary Immunology Symposium. Davis. California. USA, 1995. P. 150.

147. Li Yan-hua, Han Guang-wen, Zhang Sheng-li, Li Ning, Sun Feng-jun. Detection of Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency (BLAD) and Haplotype Analysis // Acta veter. zootechn. Sinica. 2008. - Vol.39. - N 9. - P.1285-1288.

148. Li H., Gyllensten U.B., Cui X.F., Saiki R.K., Erlich H.A., Arnheim N. Amplification and analysis of DNA sequences in single human sperm and diploid cells // Nature (London). 1988. -Vol.335. -P.414-417.

149. Lidauer M. Bedeutung der Erbfehler fur die österreichische Braunviehzucht // Österreichisches Braunvieh. 1992. - N69. - S. 16-18.

150. Lindemann M. Untersuchungen zur Syndromatologie, Ätiologie und Vorkommen der Hypotrichie, Hypertrichie und Epitheliogenesis imperfecta in der hessischen Rinderpopulation. Diss. Giessen, 1978.

151. Lopez Rodrigues C., Nueda A., Grospierre B., Sanchez-Madrid F., Fischer A., Springer T.A., Corbí A.L. Characteriziation of two new CD 18 alleles causing severe leukocyte adhesion deficiency // Eur. J. Immunol. 1993. - Vol.23. - P.2792-2798.

152. Lubieniecki К., Grzybowski G. Diagnostyka molekularna wrod-zenego niedoboru leukocytarna czasteczek adhezyjnych (BLAD) u bydla // Med. Wet.- 1997,- Vol.53.-N3. P. 214-217.

153. Mahon K.A., Westphal H., Gruss P. Expression of homeobox gene hox 1.1 during mouse embryogenesis. Development. 1988. -Vol.l04.(Suppl.). - P.187-195.

154. Мариуца A.E. Популящйно-генетичний мехашзми адаптацп i розповсюдження натвлетальних рецесивних мутацш на приклад! BLAD у велико! poraToi худоби: автореф. дис. канд. сшьськогоспод. наук. Кшв, 2005. - 10с.

155. Marron В.М., Robinson J.L., Gentry P.A., Beever J.E. Identification of a mutation associated with factor XI deficiency in Holstein cattle. Animal Genetics, 2004. V.35. - P.454-456.

156. Mc Vey D.S., Tizard I. Primary immunodeficiencies of food animals. Vet. Clinics North Am., Food Animal Practice. 1993. - Vol. 9. -N1. - P.65-75.

157. Meylan M., Abegg R., Sager H., Jungi T.W., Martig J. Fallvorstellung: Bovine Leukozyten-Adhäsions-Defizienz (BLAD) in der Schweiz. Schweiz. Arch. Tierheilk. 1997. - Vol.139. - P. 277-281.

158. Millar P., Lauvergne J. J., Dolling C. Mendelian inheritance in cattle. Wageningen. EAAP Publication n° 101. COGOVICA-COGNOSAG,Wageningen pers/Rome, Clamart,Wageningen, 2000. 590p.

159. Miller L.E., Sainton D.F., Borregaard N., Springer T.A. Stimulated mobilization of monozyte Mac-1 and pi50,95 adhesion proteins from an intracellular vesicular compartment to the cell surface // J. Clin. Invest.1987.- Vol.80. -P.535-544.

160. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells // Nucl. Asids Res.1988. Vol.16. - N3. - P. 1215.

161. Mirck M.H., Von Bannisseht-Wijsmller T., Timmermans-Besselink W.J. et al. Optimization of the PCR test for the mutation causing bovine leukocyte adhesion deficiency // Cell. Moll. Biol. 1995. - Vol. 41. -P.695-698.

162. Muller K., Bernadina W.E., Kalsbeek H.C., Wensing T., Elving L., Verbeek B. BLAD: bovine leukocyte adhesion deficiency // Tijdschr. Diergeneeskd, 1993.-Vol. 118. P. 183-184.

163. Muller K.E., Hoek A. Antigen-specific immune responses in cattle with inherited integrin deficiency // Veter. Immunol. Immunopathol. -1997. - Vol.58. - N1. - P.39-53.

164. Mullis K., Faloona F., Scharf S., Saiki R., Horn G., Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: The polymerase chain reaction. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. Cold Spring Harbor. USA. 1986. - Vol.51. - P.263-273.

165. Nagahata H. Bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD): A Review//J. of Vet. Med. Sci. 2004. - Vol. 66. - N12. - P.1475-1482.

166. Nasreen F., Altai Malik N., Naeem Riaz M., Anver Qureshi J. Detection and screening of bovine leukocyte adhesion deficiency in Pakistan using molecular methods // Hereditas. 2009. - Vol.146. - N2. - P.74-78.

167. Nelson C., Rabb H., Arnaout M.A. Genetic cause of the leukocyte adhesion molecule deficiency // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.265. - N5. - P.3351-3357.

168. Norman H.D., Miller R.H., Wright R., Wiggans G.R. Herd and state means for somatic cell count trom dairy herd improvement // J. Dairy Sci. 2000. - Vol. 83. - P.2782-2788.

169. Oguni Т., Takeda Ray M., Tsuji Т., Sugimoto Y., Moritomo Y., Matsumoto M., Mishina Y., Kunieda T. Identification and control of a dwarfism gene in Japanese brown cattle // 29th International Conference on Animal Genetics. Tokyo. Japan, 2004. P.35.

170. Oner Y., Keskin A., Elmaci C. Identification of BLAD, DUMPS, Citrullinamia and Factor XI Deficiency in Holstein Cattle in Turkey // Asian Journal of Animal and Veterinary Advaces. -2010. Vol.5. -Nl. - P.60-65.

171. Petersen A.H., Thomsen Bo, Nielsen V.H., Nissen P.H. Molecular genetic dissection of inherited diseases in farm animals // DIAS Report Animal Production. Tjele, 2002. -P.43-57.

172. Pfeiffer I., Brennig B. Frequency of the canine leukocyte adhesion deficiency (CLAD) mutation among Irish red setters in Germany. J. Anim. Breed. Genet. 2005. - Vol.122. -P.140-142.

173. Pigott R., Power C. The adhesion molecule fastbook // Harcourt Brace & Company (Hrsg.). Academic Press. London UK, 1993.

174. Qin Chu, Dongxiao Sun, Ying Yu, Yi Zhang and Yuan Zhang.1.entification of complex vertebral malformation carriers in Chinese Holstein // J. Vet. Diagn. Invest. 2008. - Vol.20. - P. 228-230.

175. Renshaw H.W., Chatburn C., Brayn G.M., Bartsch R.C., Davis W.C. Canine granulocytopathy syndrome: neutrophil dysfunction in a dog with recurrant infections // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1975. - Vol.166. -P.443-447.

176. Renshaw H.W., Davies W.C. Canine granulocytopathy syndrome: an inherited disorder of leukocyte function // Am. J. Pathol. 1979. -Vol.95.-P.731-744.

177. Rezaee A.R., Nassiry M.R., Valizadeh R., Tahmoorepour M., Javadmanesh A., Zarei A., Janati H. Study of complex vertebral malformation disorder in Iranian Holstein bulls // World J. of Zoology. 2008. -Vol.3. - N2. - P.36-39.

178. Ribeiro L.A., Baron E.E., Martinez M.L., Coutinho L.L. PCR screening and allele frequency estimation of bovine leukocyte adhesion deficiency in Holstein and Gir cattle in Brazil // Genet. Mol. Biol. 2000. -Vol.23.-P.1415-1457.

179. Robinson J.L., Burns J.L., Magura C.E., Shanks R.D. Low incidence of citrullinemia carriers among daily cattle of the United States // J. Dairy Sei. 1993. - Vol.76. - N3. - P. 853-858.

180. Ruse A., Kaminski S. Prevalence of complex vertebral malformation carriers among Polish Holstein-Friesian bull // J. Appl. Genet. 2007. -Vol.48. -P.247-252.

181. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.J., Higuchi R., Horn G.T., Mullis K.B., Erlich H.A. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostabile DNA-polymerase // Science. 1988. -Vol.239.-P.487-491.

182. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual // Cold Spring Harbour Laboratory Press. New York, 1989.

183. Sanchez-Madrid F., Nagy J.A., Robbins E., Simon P., Springer T.A. A human leukocyte differentiation antigen family with distinct a-subunits and a common ß-subunit // J. Exp. Med. 1983. - Vol.158. -P.1785-1803.

184. Sargeant J.M., Schukken Y.H., Leslie K.E. Ontario bulk milk somatic cell count reduction programm: progress and outlook // J. Dairy Sei. 1998.-Vol. 81. - P.1545-1554.

185. Sastre L., Kishimoto T. K., Gee C., Roberts T. Springer T. A.

186. The mouse leukocyte adhesion proteins Mac-1 and LFA-I: Studios on mRNAtranslation an protein glycosylation with emphasis on Mac-1 // Immunol.- 1986. -Vol.137.-P.1060-1065.

187. Schellander K., Peki J., Taka T. A., Kopp E. Diagnosis of bovine freemartinism by the polymerase chain reaction method // Animal Genetics. 1992. - Vol.23. -P.549-551.

188. Scott M.P., Carroll S.B. The segmentation and homeotic gene network in early drosophila development. Cell-1987. Vol.51. - P.689-698.

189. Schilcher F., Hotter H., Tammen I., Schuh M. Occurrence of bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) of Holstein Friesian in Austria German. // Wiener Tierarztliche Monatsschrift.-1995,- Vol.82. P.207-212.

190. Shanks R.D., Popp R.G., Mccoy G.C., Nelson D.R. Robinson J.L. Identification of the homozygous recessive genotype for the deficiency of uridine monophosphate synthase in 35-day bovine embryos // J. Re-prod. Fertil. 1992. -Vol.94. - P.5-10.

191. Shuster D.E., Kehrli M.E.Jr., Ackermann M.R., Gilbert R.O. Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adhesion deficiency in holstein cattle // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1992a. -Vol.89.-P.9225-9229.

192. Shuster D.E., Bosworth B.T., Kehrli M.E.Jr. Siguence of the bovine CD18-encoding cDNA: comparison with the human and murine glycoproteins // Gene. 1992b. - Vol.114. - P.267-271.

193. Schutz E., Scharfenstein M., Brenig B. Implication of complex vertebral malformation and bovine leukocyte adhesion deficiency DNA-based Testing on disease frequency in the Holstein population // J. Dairy Sei.- 2008. Vol.91. - P.4854-4859.

194. Sligh J.E., Hurwitz M.Y., Zhu C., Anderson D.C., Beaudet A.L. An initiation codon mutation in CD 18 in association with the moderate phe-notype of leukocyte adhesion deficiency // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267.-S. 714-718.

195. Springer T.A. Adhesion receptors of the immune system // Nature. 1990. - Vol.346. - P.425-434.

196. Tajama M., Irie M., Kirisawa R., Hagiwara K., Kurosawa T., Takahashi K. The detection of a mutation of CD 18 gene in bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) // J.Vet. Med. Sei. 1993. - Vol.55. - N1.- P.145-146.

197. Takahashi M., Miyagawa K., Abe S., Kurosawa T., Sonoda M., Nakade T., Nagahata H., Nöda H., Chihaya Y., Isogai E. Bovine granulocytopathy syndrome of Holstein-Friesian calves and heifers // Jpn. J. Vet. Sei. 1987. - Vol.49.-Nl. - P.733-736.

198. Tammen I. Weiterentwicklung des DNA-Tests auf BLAD(Bovine Leukozyten Adhasions defizienz) fur den Einsatz in Rinderzucht und klinischer Diagnostik. Hannover, 1994. 128s.

199. Treviranus A. Klinische Befunde und Abstammung von Jungrindern mit Boviner Leukozyten-Adhásions-Defizienz (BLAD). Hannover. Tierarzt. Hochsch., 1994. 152s.

200. Trowald-Wigh G., Hakansson L., Johannisson A., Norrgran L. Leukocyte adhesion protein deficiency in Irish setter dogs // Vet. Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol.3. - P.261-280.

201. Turbina I.S., Eskin G.V., Turbina G.S., Marzanov N.S. The characteristic of bull- sires for gene BLAD-syndrome Book of abstracts of the 54th annual meeting of the European Association for Animal Production. Roma. Italy, 2003. -P.60.

202. Viana J.L., Fernandez A., Iglesias A., Santamarina G. Diagnóstico y control de las principales enfermedades genéticas(citrulinemia, DUMPS y BLAD) descritas en ganado Holstein-Frisón // Med. Vet. 1998. - Vol.15. -P.538-544.

203. Wardlaw A.J., Hibbs M.L., Stacker S.A., Springer T.A. Distinct mutations in two patients with leukocyte adhesion deficiency and their functional correlates. J. Exp. Med. 1990. - Vol.172. - P.335-345.

204. Weisman J.S., Berkow R.L., Plaut G., Torres M., Mcguire W.A., Coates T.D., Haak R.A., Floyd A., Jersild R., Baehner R.L. Glycoprotein-180 deficieney: genetics and abnormal neutrophil activation // Blood.- 1985. Vol.65. - P.696-704.

205. Weitzmann J.B., Wells C.E., Wright A.H., Clark P.A. Law S.K. The gene organisation of the human B2-integrin subunit (CD18) // FEBS Lett.- 1991.-Vol. 294,-P.97-103.

206. Williams D.A., Orkin S.H. Somatic gene therapy. Current Statusand future prospects // Clin. Invest. 1986. - Vol.72. - P. 1053-1056.

207. Williams W.L. Studies in teratology. Cornell Vet. 1931. - Vol. 21. -P.25-53.

208. Wilson J.M., Ping A.J., Krauss J.C., Mayo-Bond L. Correction of CD18-Deficient Lymphocytes by retrovirus-mediated gene transfer // Science (Waschington). 1990. - Vol.248. - P. 1413-1416.

209. Wilson R.W., Ballantyne C.M., Smith C.W., Montgomery C., Bradley A., O'Brien W.E., Beaudet A.L. Gene targeting yields a CD 18-mutant mouse for study of inflammation // J. Inmunol. 1993a. - Vol.151. -P.1571-1578.

210. Womack J.E. Molecular genetics arrives on the farm // Nature. 1992. - Vol.360. - P.108-109.

211. Zietschmann H. Perosomus elumbis beim Kalb. Bericht über d. Veterinarwesen im Königreiche Sachsen fur das Jahr 1911, pp. 73-74. Buchhandlung Zahn & Jaensch, Dresden, Germany, 1912.

212. Zsolnai A., Fesus L. Simultaneous analysis of bovine k-casein and BLAD alleles by multiplex PCR followed by parallel digestion with two restriction enzymes. Animal Genetics. 1996. - Vol.27. - N3. - P.207-209.