Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Система оздоровления земляники садовой от вирусов

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Система оздоровления земляники садовой от вирусов"

На правах рукописи

БЕЛОШАПКИНА ОЛЬГА ОЛЕГОВНА

СИСТЕМА ОЗДОРОВЛЕНИЯ ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ ОТ ВИРУСОВ

Специальность 06.01.11. - защита растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

МОСКВА 2006

Работа выполнена в Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К.А. Тимирязева

Официальные оппоненты:.

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Метлицкий Олег Зусьевич доктор биологических наук, профессор Доброе Евгений Николаевич доктор биологических наук Перевертин Кирилл Александрович

Ведущая организация - Государственное научное учреждение "Всероссийский институт защиты растений"

Защита диссертации состоится 1 2006 г. в 13 час

на заседании диссертационного совета Д 006.035.01 в ГНУ "Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства" по адресу: 115598, г. Москва, Загорье, ул. Загорьевская, 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВСТИСП.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. На долю земляники садовой приходится 2/3 общемирового производства ягод, а средние урожаи достигли 25-40 и более т/га [Метлицкий, 2003]. Одной из основных предпосылок резкого увеличения ее продуктивности за рубежом явилось производство сертифицированного, чистосортного, свободного от комплекса наиболее опасных вредителей и болезней посадочного материала только в строго контролируемых специализированных питомниках.

За последние полтора десятилетия в РФ подобное производство было практически свернуто. Это привело к снижению продуктивности земляники, потере сортовой чистоты и распространению опасных групп фитопатогенов. Среди них особое значение имеют вирусы, вызывающие хронические и латентные болезни земляники. Их крайне сложно выявлять на фоне острых микозов, тотального повреждения вредителями, стрессов абиотической природы и плохой агротехники. Вирусные болезни не излечимы в полевых условиях, вызывают потери урожая до 38-75%, а также вырождение хозяйственно ценных сортов [Fulton, 1977; Бутенко, 1982; Соколова, 1986].

К 80-м годам XX века отечественная наука и практика достигли заметных успехов в диагностике вирозов земляники и мер борьбы с ними. Но широкое внедрение для тестирования имму-ноферментного анализа ограничило круг выявляемых вирусов и почти полностью вытеснило универсальный метод прививки на растениях-индикаторах. Вследствие этого стали упускать из виду. специфичные для земляники ацидофильные вирусы, возбудители "вырождения" культуры в основных регионах ее возделывания. Впоследствии была нарушена целостность и последовательность процессов оздоровления и защиты безвирусных клонов от повторного заражения.

В связи с этим возникла необходимость мониторинга существующего видового состава вирусов земляники, совершенствования методов их диагностики с использованием современных молекулярно-генетических методов. Столь же актуальными стали оптимизация и внедрение в практику высокопроизводительных биотехнологических приемов получения оздоровленных от вирусов клонов, а также методов защиты от реинфекции вирусами, основанных на стимуляции естественной устойчивости растений.

Цель исследований. Теоретически обосновать и экспериментально усовершенствовать систему защиты земляники садовой от комплекса вирусных и фитоплазменных заболеваний на основе оптимизации производства оздоровленного посадочного материала.

Задачи: - определить распространенность и видовой состав вирусов земляники в Нечерноземном Центре РФ, их взаимоотношения с патогенами другой этиологии;

- усовершенствовать и стандартизировать методы диагностики вирусов земляники с помощью растений-индикаторов для практического тестирования, повысить их достоверность, снизить влияние факторов окружающей среды;

- апробировать и оптимизировать молекулярно-генетические методы для диагностики вирусов при производстве посадочного материала земляники;

- повысить эффективность оздоровления земляники от вирусов за счет применения экологически безопасных средств и способов, включая антивирусные препараты и активизацию защитных механизмов растений;

- оптимизировать режимы клонального микроразмножения современного сортимента и гибридного материала садовой земляники с использованием препаратов, различных по происхождению и механизмам действия;

- оценить значимость оздоровления земляники на разных этапах селекционного процесса;

- обосновать и разработать современную отечественную технологию получения оздоровленного посадочного материала земляники, отвечающую требованиям мировых стандартов.

Научная новизна результатов исследований. Предложена концепция оздоровления земляники от вирусов и разработана технология производства оздоровленного посадочного материала земляники в соответствии с современными условиями и принципами экологической безопасности. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность оздоровления от вирусов в селекционном процессе не только новых сортов земляники, но и исходных родительских, гибридных и элитных форм.

Установлен существующий видовой состав вирусов земляники в Нечерноземном Центре РФ, показаны его изменения за последние 20-25 лет. Выявлен характер взаимоотношений смешанных микозно-вирусных инфекций и их влияние на оценку устойчивости к болезням. Описано новое для региона фитоплазмен-

/

ное заболевание земляники, установлена его этиология и рекомендованы меры профилактики.

Предложена методология комплексной диагностики вирусных и фитоплазменных заболеваний земляники, повышающая достоверность их обнаружения. Выявлены и апробированы новые растения-индикаторы, предложен новый экономичный способ прививки с использованием в качестве привоев отдельных отрезков черешка листа, экспериментально обоснованы минимальный возраст тестируемых растений и сроки проведения вирусологического теста. Доказана целесообразность применения усовершенствованного молекулярно-генетического метода диагностики вирусов - полимеразной цепной реакции (ПЦР) для универсального тестирования земляники. Дана экономическая оценка разных методов диагностики вирусов.

Повышена экологическая безопасность оздоровления земляники от вирусов в питомниководстве при введении антивирусных препаратов и иммуномодуляторов в питательную среду in vitro. Впервые выявлен ряд эффективных химических и биологически активных препаратов для защиты от комплекса вирусов, а также для повышения адаптационной способности микрорастений земляники при переводе их из пробирочной культуры в почвенный субстрат.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методология комплексной диагностики вирусных и фитоплазменных заболеваний земляники, основанная на совершенствовании системы индикаторов и применении новейших методов тестирования (ДНК-зонды, ПЦР, электрофорез).

2. Современная система тестирования земляники и дифференцированный подход в зависимости от состава патогенов, их вредоносности и взаимоотношений в ценозе.

3. Система оздоровления и клонального микроразмножения земляники базируется на использовании новых направлений в оздоровлении от вирусов (сочетание культуры тканей с иммуно-модуляторами и антивирусными препаратами) и оптимизации параметров культивирования in vitro и в период адаптации in vivo.

4. Обоснована значимость оздоровления земляники от вирусов на всех этапах селекционного процесса.

Практическая значимость и реализация результатов. Разработана новая система оздоровления посадочного материала земляники на безвирусной основе для питомниководства и селекции.

Предложенная методология диагностики вирусов земляники позволяет повысить надежность выявления заболеваний и полу. чения безвирусных базисных клонов. Выделенные новые индикаторные растения F. vesca f. semperflorens, сортов Рюген и Роте Золемахер используются для тестирования растений земляники на зараженность вирусами в лаборатории плодоводства РГАУ-МСХА. Предложенный способ прививки отдельными отрезками черешка листа в качестве привоев позволяет в 3-4 раза снизить количество отбираемых листьев и избежать ослабления тестируемых растений. Установленные оптимальные возраст микрорастений и период индикаторного теста повышают достоверность вирусологической проверки. Выявлена высокая эффективность использования ПЦР в качестве основного метода вирусологического тестирования в системе оздоровления посадочного материала земляники.

Культивирование верхушечных меристем в сочетании с химическими (ААТ, ДГТ) и биологически активными препаратами (иммуноцитофит) in vitro, а также обработка растений-доноров меристем ретардантами (пиксом, культаром, хлорхолинхлори-дом), обеспечивают увеличение выхода здоровых клонов земляники. Показано улучшение адаптационных свойств микрорастений земляники при обработке их и почвенного субстрата биологически активными препаратами: никфаном, симбионтом, имму-ноцитофитом, триходермином, планризом, и путем введения в субстрат цеолитов и гидрогелей.

Для ускорения и интенсификации селекционного процесса доказана необходимость оздоровления и клонального микроразмножения не только новых сортов, но и исходных родительских, гибридных и элитных форм земляники.

Усовершенствованные и разработанные новые элементы технологии производства безвирусного посадочного материала земляники используются в лаборатории плодоводства, в курсе лекций, практических занятий и в учебных пособиях РГАУ-МСХА.

Личный вклад автора. Постановка проблемы, цели и задач исследований, разработка программы и методологии исследований, экспериментальные работы, а также анализ и обобщение полученных результатов выполнены автором. Некоторые разделы диссертации, учитывая ее многоплановый характер, выполнены в сотрудничестве (доля участия автора не менее 75%) с профессорами И.В. Поповой, В.А. Высоцким, г.н.с. Ю.Н. При-ходько (ВСТИСП); с.н.сТ.И. Волковой (ГБС); с.н.с. Н.В. Арша-

вой (ВНИИСБ); профессорами|В.А. Шмыглей!, В.В. Фаустовым, с.н.с. Г.П. Епишиной.|И.В. Жарковой!. м.н.сГЕ.Р. Батрак, аспирантом Н. Захави, студентами-дипломникамк РГАУ-МСХА.

Апробация результатов работы. Основные положения диссертации доложены на научных конференциях МСХА (декабрь 1981, 1984, 1985, 1987,1988, 1989,1996,1998,2003,2004 гг\), совещании по защите плодовых и ягодных культур (Чехия, Головоусы, 1991), Всесоюзной конференции ВАСХНИЛ по биотехнологии (Москва, 1986), Всесоюзной конференции по садоводству (Махачкала, ДГУ, 1991), Всероссийской конференции по защите плодовых и ягодных культур от вредных организмов (Москва, ВСТИСП, 1997), II Всероссийском съезде по защите растений (Санкт-Петербург, 2005), III международной конференции "Регуляторы роста и развития растений" (Москва, 1995), II международной конференции "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии" (Москва, 2000), IV международном симпозиуме по землянике (Финляндия, Тампере, 2000).

Публикации. Основные результаты исследований по диссертации опубликованы в 35 научных статьях, из них 13 - в ведущих рецензируемых научных журналах, монографии, а также в соответствующих разделах учебника "Защита растений от болезней" и учебного пособия "Практикум по сельскохозяйственной фитопатологии", в справочнике "Защита растений от болезней в теплицах".

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 370 страницах машинописного текста, содержат 54 таблицы, 35 рисунков; библиография включает 598 источников,. из которых 250 - зарубежной литературы.

Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав (23 разделов), включающих: обзор литературы, объекты и методы исследований, результаты и их обсуждение (4 главы), а также выводов, рекомендаций для практического использования, библиографического списка и приложения.

Глава 1. ВИРУСНЫЕ И ФИТОПЛАЗМЕННЫЕ БОЛЕЗНИ ЗЕМЛЯНИКИ, СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ДИАГНОСТИКИ И ЗАЩИТНЫХ МЕРОПРИЯТИЙ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

На основе литературных данных и материалов собственных исследований приведены сведения о распространенности и вредоносности вирусов, поражающих землянику в мире и в России. Приведена характеристика основных вирусов и фитоплазм, патогенных для земляники. Дан критический анализ основных методов исследований и выявления вирусов и фитоплазм земляники и факторов, ограничивающих чувствительность методов и достоверность их результатов. Отмечено, что методы тестирования для серийной диагностики в настоящее время неудовлетворительны, необходимо их совершенствование и внедрение новых, по возможности экспресс-методов, отвечающих современным требованиям вирусологической науки и практики.

Защита земляники от вирусных болезней базируется на получении исходного безвирусного посадочного материала и последующей защите посадок от повторных заражений. В этой связи проанализирован опыт мировой науки и практики по защите растений от вирусов (селекционные достижения, методы оздоровления от вирусных болезней с помощью термотерапии, культуры меристем, химиотерапии) для биологического и технологического обоснования и разработки современной системы оздоровления земляники.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектами исследований в зависимости от поставленных целей были верхушечные меристемы, боковые и верхушечные почки, конгломераты микропобегов, микрорастения, а также взрослые растения более 120 сортов и элитных сеянцев земляники с различной степенью зараженности вирусами. Инфицированные вирусами образцы земляники получены в процессе тестирования, а также в 1981 году - из Молдавского НИИ плодоводства (г. Кишинев), в 1991 году - из НИИ садоводства г. Головоусы (Чехия). Пробы для выявления распространенности вирусных и фи-топлазменных заболеваний земляники и идентификации патоге-

нов отбирали при маршрутных обследованиях посадок земляники различного назначения в Московской, Тульской, Калужской, Владимирской, Тверской, Ярославской областях, а также в сор-тообразцах, поступавших из селекционных центров, госсортоучастков, репродукционных и карантинных питомников разных регионов России.

Диагностику и идентификацию вирусов земляники проводили следующими методами: визуальной оценки; биологическим тестированием на растениях-индикаторах (инокуляцией соком и прививкой по Frazier, 1974, Белошапкина, 1986); иммунофермен-тным анализом (ИФА) - прямым сэндвич-вариантом [Clark, Adams, 1977; Гнутова, 1993] на базе лаборатории вирусологии ВСТИСП с использованием диагностических наборов, предоставленных ВСТИСП и Молдавским НИИ плодоводства; методом ПЦР на базе ВНИИСБ с использованием вырожденных прай-меров (Синтол, г. Москва) [Morozov et al, 1995; Maaron, Zavriev, 2002], выделение РНК проводили в основном методом Хомчинс-кого [Chomczynski, Mackey, 1995], реакцию обратной транскрипции (ОТ-ЦЦР) и полимеразную цепную реакцию [PCR Protocols, 1990] осуществляли на приборе "Терцик" фирмы "ДНК-Технологии" с последующим электрофорезом продуктов.

Растения земляники лесной и виргинской, предоставленные Т.И. Волковой (ГБС), были оценены в качестве новых растений-индикаторов на вирусы морщинистости и крапчатости земляники способом их искусственного заражения. Влияние температуры на результаты индикаторного тестирования исследовали в остекленной теплице, используя показания термографа.

Для выявления фитоплазм использовали растение-индикатор Catharanthus roseus, реакцию на антибиотик тетрациклинового ряда - окситетрациклин и метод ДНК-зонда, специфичного для класса Mollicutes (в лаборатории молекулярной генетики Казанского института биохимии и биофизики РАН) [Борхсениус и др., 1987].

В основу используемых методик оздоровления от вирусов подопытного материала земляники методом культуры верхушечных меристем in vitro, а также его клонального микроразмножения были положены стандартные технологии [Бутенко, 1964; Попов, 1976; Биотехнология растений..., 1989]. Для снижения зараженности микрофлорой питательной среды использовали антибиотик доксициклин гидрохлорид. Для повышения эффективности оздоровления испытывали препараты ААТ (анилино-

адамантил-тиадиазол), ДГТ (2,4-диоксигексагидро-1,3,5-триа-зин), нео-ДГТ (химический аналог ДГТ), L-333 (фенил-аллил-ти-омочевина), предоставленные проф. Г. Шустером (ГДР), а также иммуноцитофит (д.в. арахидоновая кислота) способом введения в питательную среду. Антивирусное действие ретардантов (хлор-холинхлорида, культара, пикса) оценивали, обрабатывая ими растения-доноры меристем. Фитотоксичность и мутагенные свойства препаратов проверяли на модельном растении Arabidopsis thaliana (L.) Heynh. [Усманов, Мюллер, 1970; Янушевич, 1977]. Определение содержания хлорофилла в листьях микрорастений земляники проводили по стандартной методике [Гроздинский, Гроздинский, 1973] на спектрофотометре "Specol".

Фертильность пыльцы определяли методом окрашивания ацетокармином и подсчетом пыльцевых зерен под микроскопом.

Для улучшения адаптации микрорастений земляники при пересадке их в почвенный субстрат были испытаны препараты: три-ходермин (на основе гриба Trichoderma lignorum), планриз (из бактерий Pseudomonasfluorescens), никфан, симбионт-3 (на основе эндофитных грибов-симбионтов).

Для оптимизации почвенного субстрата для микрорастений земляники использовали полимерные гидрогели, цеолит (с размером частиц 1 -2 мм) и перлит. Доращивание микрорастений и укоренение розеток в теплицах проводили в гончарных вазонах или торфяных кассетах, а затем пересаживали в пластиковые контейнеры в торфоперлитовый субстрат при стандартной агротехнике выращивания [Солнцева, 1984].

Целесообразность применения гамма-излучения (при распаде радиоактивного кобальта) оценивали на облученных конгломератах почек, полученных из верхушечных меристем in vitro и однолетних растениях-донорах эксплантов.

Статистическая оценка полученных результатов проведена с помощью дисперсионного анализа с оценкой достоверности различий между вариантами с помощью t-критерия Стьюдента, многократного критерия Дункана; использовали критерий согласия X1, метод кластерного анализа [Доспехов, 1985], критерий А, [Лакин, 1980], компьютерные программы Microsoft Excel и STRAZ.

Глава 3. АНАЛИЗ ОСОБЕННОСТЕЙ ПАТОГЕНЕЗА ПРИ ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЯХ ЗЕМЛЯНИКИ

3.1. Распространенность вирусных болезней земляники

Подавляющее большинство (90-95%) визуально обследуемых растений земляники в посадах различных типов Нечерноземного Центра России не имели вирусоподобных симптомов и в основном были заражены латентно. По результатам тестирования на растениях-индикаторах, ИФА и ПЦР от 7 до 100% сортов были носителями вирусов. Согласно ИФА 22% растений и 32% проверенных сортов содержали вирус черной кольцевой пятнистости томата tomato black ring virus (ВЧКТ). Распространенность вируса латентной кольцевой пятнистости земляники strawberry latent ringspot virus (ВЛКПЗ) составила 13%, при поражении 16% сортов, а 4% растений и 10% сортов были инфицированы вирусом мозаики резухи arabis mosaic virus (BMP). Выявлены закономерности зараженности растений вирусами в зависимости от возраста и состояния посадок, отмечены сорта, наиболее пораженные и не пораженные данными вирусами. Растения некоторых сортов были одновременно инфицированы двумя и даже всеми тремя вирусами (ВМР+ВЧКПТ, ВЛКЗП+ВЧКПТ, ВМР+ВЛКЗП+ +ВЧКПТ).

В результате индикаторного тестирования по симптомам с большой долей вероятности были выявлены вирусы крапчатос-ти strawberry mottle virus, морщинистости strawberry crinkle virus и слабого пожелтения краев листьев земляники strawberry mild yellow edge virus, распространенность которых составила от 14 до 60% в зависимости от сортимента и агроценоза. При проверке с использованием метода ПЦР был выявлен вирус ложного слабого пожелтения краев листьев strawberry pseudo mild yellow edge virus, и вирус слабого пожелтения краев листьев strawberry mild yellow edge virus.

Установлено, что видовой состав вирусов земляники претерпел за последние 20-25 лет [Помазков, 1969, 1975] некоторые изменения. В частности, увеличилась встречаемость полигосталь-ных вирусов (BMP, ВЧКПТ, ВЛКПЗ). Вирусы крапчатости земляники и мозаики резухи характеризуются как широко распространенные с середины прошлого века и по настоящее время. Вирус окаймления жилок земляники отсутствовал в основных хозяйствах Московской области и соседних с ней, начиная с 80-го-

о

дов XX в. Не было достоверных сообщений о наличии вирусов слабого пожелтения краев листьев и ложного слабого пожелтения краев листьев земляники. Вирус морщинистости земляники получил широкое распространение в последние годы, что связано с увеличением количества интродуцированных из разных стран сортов. Большую распространенность получила латентная форма вирусных заболеваний и смешанные инфекции, вызванные комплексом разных вирусов.

3.2. Изучение этиологии нового заболевания земляники

Постоянное обновление сортимента земляники из различных регионов, расширение ареалов возбудителей болезней, смена растений-хозяев и переносчиков приводит к изменению состава вирусных и подобных патогенов, появлению заболеваний, ранее не встречавшихся на землянике в определенных зонах.

В 1998 году была обнаружена новая для Московского региона болезнь земляники в условиях защищенного грунта лаборатории плодоводства МСХА, сходная по патогенезу с вирозами. Характерными симптомами были: ланцетовидность и редукция зубчатости долей листьев, межжилковый хлороз, деформация цветков и плодов, угнетение роста, отмирание точки роста побегов. Этиологией выявленного заболевания являлся комплекс "патоген - неблагоприятные факторы среды".

Данное заболевание земляники: - не передается прививкой на индикаторные клоны земляники, не выявляется методом ИФА на основные сокопереносимые вирусы;

- передается прививкой на стандартное растение-индикатор на фитоплазмы - барвинок розовый Сайшгсипкт гояешг,

- выявляется методом ДНК-зонда, специфичного дня класса МоШсмеБ;

- обратимо подавляется под влиянием антибиотиков группы тетрациклина;

- на интенсивность проявления его симптомов влияют условия окружающей среды (главным образом температура и интенсивность освещения) и агротехники;

- отмечены сортовые различия земляники по устойчивости к нему.

3.3. Особенности патогенеза при смешанных микозно-вирусных инфекциях на землянике

На естественном и искусственном инфекционном фоне сравнивали развитие грибных болезней: мучнистой росы, белой и бурой пятнистости листьев земляники, вертициллезного увядания на оздоровленных от вирусов и зараженных вирусным комплексом морщинистости и крапчатости растениях земляники ряда сортов. При таких смешанных инфекциях первичными фитопа-тогенами были вирусы, а грибы являлись вторичными патогенами, поражающими уже зараженные растения.

Выявлена тенденция, что зараженные вирусами растения сильнее поражались грибными патогенами, являющимися факультативными паразитами на примере возбудителей белой {Mycosphaerellafragariaë) и бурой (1)1р1осатроп еатИапа) пятнис-тостей листьев (рис.1) и возбудителя вертициллеза (УегНсИИит а1Ьо-Шгит). Имела место существенная зависимость степени поражения 43 сортов земляники белой пятнистостью и бурой пятнистостью листьев от наличия в растениях вирусной инфекции (А^ф = 35,72 > ¿Рт = 9, 21 при р = 0,01).

Патогенные грибы с облигатным типом паразитизма примерно в одинаковой степени поражали зараженные вирусами и здоровые растения земляники, что было показано на примере возбудителя мучнистой росы (БркаегоЛеса тасгйатЬ).

Ш Оздоровленные 1983 В Оздоровленные 1984 Ш Вирусные 1983 ■ Вирусные 1984

Рис. 1. Интенсивность поражения грибными заболеваниями оздоровленных и зараженных комплексом вирусов растений земляники

На интенсивность поражения облигатными паразитами и факультативными паразитами, близкими к некротрофам, повлияли в большей степени сортовые особенности растений, генетически предопределяющие устойчивость, а не зараженность вирусами. Грибы - факультативные паразиты с мало выраженными некротрофными свойствами, существенно сильнее зависели от зараженности растения вирусами, чем от сортовых особенностей. Смешанные микозно-вирусные инфекции могут влиять на оценку распространенности и интенсивности поражения сортов земляники грибными болезнями, искажая степень устойчивости, на селекционных участках и госсортоучастках, куда поступает посадочный материал с разной степенью оздоровления.

Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА, СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСОВ ЗЕМЛЯНИКИ

Одним из важнейших этапов технологии получения здорового посадочного материала является ранняя и точная диагностика, позволяющая оценить состояние растений, своевременно выявить и выбраковать пораженные вирусами и отобрать для дальнейшего размножения и селекции здоровые растения, в том числе исходных и гибридных форм.

4.1. Оптимизация диагностики вирусов земляники индикаторным методом

4.1.1. Влияние возраста тестируемых растений па достоверность результатов

Полученные клональным микроразмножением растения земляники разного возраста, инфицированные комплексом вирусов морщинистости и крапчатости, тестировали с помощью прививки на индикаторных клонах земляники лесной.

Установлено, что самым ранним возрастом тестирования растений земляники, прошедших оздоровление и размножение в культуре тканей in vitro, обеспечивающим достоверные результаты, можно считать срок более четырех месяцев вегетации в почвенном субстрате в условиях теплицы (табл.1). В процессе культивирования in vitro происходило подавление вирусов на каком-то этапе их жизнедеятельности.

Таблица 1 - Выявление комплекса вирусов морщинистости и крапчатости индикаторным методом в зависимости от возраста тестируемых растений, полученных in vitro от зараженных доноров

меристем

Тестируемые растения Количество Количество, % гибели % заражен-

дней после пересадки, сут. теет-расте-ний, шт. трансплантатов через 7 дней ности вирусами

ЕМС 1 18 50,0 44,4

клон F. vesca 30 12 27,7 50,0

90 12 20,8 66,7

120 12 9,2 100

Фестивальная 1 20 50,0 15,0

30 14 23,3 42,8

120 14 7,5 85,7

150 10 8,3 100

Пропорционально длительности вегетации концентрация вирусов в растительных тканях возрастала. Это позволяло выявить их на индикаторах. Кроме того, раннюю диагностику микрорастений затрудняла быстрая некротизация тканей черешков листьев. Она препятствовала транспортировке вирионов из тестируемых растений в индикаторные.

4.1.2. Влияние температуры на результаты тестирования в условиях теплиц

На эффективность диагностирования вирусов с помощью растений-индикаторов существенное влияние оказывают условия окружающей среды, в частности температуры воздуха. Летом в дневные часы температура в остекленной теплице поднималась до 38 - 40°С, создавая режим, близкий к суховоздушной термотерапии. При тестировании сортообразцов прививкой на индикаторах в период с апреля по III декаду ноября в течение трех месяцев отмечали действие завышенных естественных положительных температур, при этом выявили только 45,5% достоверных растений-носителей латентной вирусной инфекции и 22,7% растений, вирофорность которых требовала уточнения. Всего выбраковали 68,2 % растений, зараженных вирусами.

При повторном тестировании этих же растений, начатом в конце августа и законченном в марте (когда не было высоких тем-

□ Вирусы не обнаружены

I Вирусы обнаружены

□ Нестабильные результаты

45%

23%

Тест 2 - август-март 14%

В Вирусы не

обнаружены ■ Вирусы

обнаружены о Нестабильные результаты

63%

Рис. 2. Влияние высоких летних температур в теплице на результаты тестирования вирусов земляники

ператур в теплице), установили 86,4% растений, подлежащих выбраковке (рис.2). Кроме того, в результате 1-го тестирования 20% заведомо зараженных комплексом вирусов растений были приняты за свободные от инфекции. Вероятно, под влиянием естественных высоких температур в теплице происходило снижение концентрации и торможение синтеза термолабильных вирусов до величин, не выявляемых с помощью биотестов. Это и искажало результаты индикаторной диагностики. Поэтому тестирование следует проводить в теплице в условиях умеренных температур воздуха, как можно раньше до наступления высоких летних температур.

4.1.3. Совершенствование способа прививки для тестирования земляники на зараженность вирусами

Для сокращения количества листьев, отбираемых для тестов на зараженность вирусами (что особенно важно для проверки единичных экземпляров сортообразцов), нами предложен метод прививки отрезками черешка листа длиной 1,5-2,5 см. При этом из одного черешка тестируемого растения земляники в зависимости от его длины получали не менее трех-четырех привоев.

Результаты тестирования зараженных вирусами образцов земляники стандартной прививкой черешком листа с частью листовой пластинки и модифицированным способом полностью совпадали (табл.2). Первоначальное местоположение привоя на черешке не имело значение. При новом способе прививки в 3-4 раза сокращался расход используемых в качестве привоев листьев тестируемых растений.

Таблица 2 - Сравнение разных способов прививки на индикаторы для тестирования земляники на зараженность вирусами

Тестируемые растения (возраст), их количество, шт. Способ прививки Расход листьев для прививки, шт. Количество прививок, шт. Инкубационный период, дней Выявлено зараженных растений, шт. (%)•*

ЕМС вирусные, 5 А* 30 30 20 5(100)

Б 10 30 20 5(100)

Фестивальная А 30 30 24 5(100)

вирусные, 5 Б 10 30 24 5(100)

Фестивальная А 72 72 32 5(41,6)

микрорастения ви-

русные (1 мес), 12 Б 24 72 32 5(41,6)

Фестивальная А 72 72 29 10(83,3)

микрорастения ви-

русные (3 мес), 12 Б 24 72 29 10(83,3)

Редгонтлит мик- А 84 84 32 6(42,9)

рорастения вирус-

ные (1 мес), 14 Б 28 84 32 6(42,9)

Редгонтлит мик- А 84 84 30 12(85,7)

рорастения вирус-

ные (3 мес), 14 Б 28 84 30 12(85,7)

Фестивальная, 20 А 120 120 30 8(40,0)

Б 40 120 30 8(40,0)

Продолжение табл. 2

Редгонтлит,20 Зенит, 20

А 120 120 32 4(20,0)

Б 40 120 32 4(20,0)

А 120 120 30 3(15,0)

Б 40 120 30 3(15,0)

Примечание. * А - стандартная прививка черешком с листовой пластинкой, Б - прививка отрезками черешка; *" % выявленных зараженных растений от общего количества тестируемых растений.

4.1.4. Выявление новых растений-индикаторов

Целесообразно выявление новых индикаторов на смену старым, теряющим со временем свою чувствительность. В связи с этим была поставлена задача выделить растения F. vesca и F. virginiana из имеющейся в Главном ботаническом саду АН коллекции, которые можно использовать в качестве индикаторов на вирусы земляники.

Таблица 3 - Оценка растений рода Fragaria для диагностики вирусов крапчатости и морщинистости

Испытываемые растения

Проявление симптомов

F. virginiana spp. platypetala (Rydb.) Staudt.

F. virginiana spp. glauca, N4

F. virginiana spp. glauca, N5

F. virginiana spp. glauca, N6

F. virginiana spp. glauca, N7

F. vesca spp. vesca f. alba Duch.

F. vesca spp. vesca f. rosaiflora Boulay

F. vesca f. semperflorens сорт Рюген

F. vesca f. semperflorens сорт Роте Золемахер

F. vesca f. semperflorens Duch.

F. vesca clon UC - 5

F. vesca clon EMK

F. vesca clon. Alpina_

+ -+ -

+ + + + + + + + + + + + + +

Примечание. Знак - обозначает отсутствие симптомов, + - нечеткие симптомы, проявляются не на всех растениях, + симптомы достаточно четкие, + + симптомы четкие, проявляются на всех растениях.

Испытываемые растения по-разному реагировали на заражение комплексом вирусов морщинистости и крапчатости земляники (табл.3). Наиболее четкие вирусные симптомы были обнаружены на растениях F. vesca разновидности semperflorens сортов Роте Золемахер и Рюген. Их можно рекомендовать в качестве системно-восприимчивых растений-индикаторов для тестирования земляники на зараженность вирусами крапчатости и морщинистости.

4.2. Сравнение эффективности методов индикаторного и серологического (ИФА) для выявления вирусов земляники

Распространенность вирусных болезней, выявленная с помощью индикаторного метода, заметно выше, чем в случае выявления ее методом ИФА. Так, в ЗАО "Ильинское Усово" распространенность вирусных болезней земляники (только из непогруп-пы), выявленная методом ИФА, составила 19%, а индикаторным, обнаруживающим весь комплекс вирусных болезней, - 26%. Такая же закономерность отмечена в НПО "Фитогенетика" и в "Совхозе им. Ленина": с помощью ИФА широко распространенные BMP, ВЛКПЗ и ВЧКТ не были обнаружены, а посредством метода прививки на индикаторные клоны земляники вирусная инфекция была выявлена в 22% обследованных растений. На индикаторах кроме сокопереносимых вирусов были обнаружены и соконепереносимые, такие как вирус морщинистости, слабого пожелтения краев листьев и крапчатости земляники.

Высокая чувствительность ИФА общепризнанна, но позволяет диагностировать только вирусы с хорошими антигенными свойствами и сохраняющими инфекционные свойства в соке. Индикаторный метод, являясь универсальным, в отличие от серологического, позволяет диагностировать практически все вирусы земляники. Достоверность результатов и чувствительность метода соизмеримы с модификацией серологического метода (ИФА) при диагностике сокопереносимых вирусов с хорошими иммуногенными свойствами.

4.3. Выявление зараженности земляники вирусами методом ПЦР

При производстве оздоровленного безвирусного посадочного материала особый практический интерес представляет тестирование растений на отсутствие не отдельных вирусов, а по воз-

можности всех. Поэтому исследовали возможность диагностики методом ПЦР групп вирусов земляники. Достоверность метода оценивали сравнением его результатов с полученными при индикаторном тестировании и ИФА.

Трудности возникали при выделении тотальной РНК из-за большого количества ингибиторов реакции обратной транскрипции ОТ ПЦР и (или) ПЦР, что объясняется биохимическими особенностями тканей земляники. В результате отобрали методику П. Хомчинского (1995) и после модификации (выделенную РНК переосаждали повторно) использовали ее в работе.

На этапах ОТ ПЦР и амплификации для каждого рода вирусов при использовании конкретных реактивов и праймеров оптимизировали режимы температуры, так как расчетные режимы оказались неподходящими. При тестировании образцов земляники на зараженность карлавирусами оптимальными были следующие условия проведения ПЦР: предварительная денатурация при 94°С - 3 мин, 35 циклов, состоящих из денатурации при 94° С - 1 мин, отжига праймеров при 50°С - 4 мин и синтеза фланкируемого праймерами участка кДНК при 72°С - 3 мин. Повышение температуры на 5°С на этапе отжига праймеров дало лучшие результаты. Был выявлен вирус, относящийся к роду карла-вирусов, вероятно, вирус ложного слабого пожелтения краев листьев в образцах земляники зарубежных сортов Брайтон и Дукат (рис. 3).

Рис. 3. Результаты ОТПЦР-анализа сортообразцов земляники с использованием вырожденных праймеров для детекции группы карлавирусов:

1 - Редгонтлит №7, 2 - Надежда №1, 3 - Найдена №3, 4 -Троицкая №15, 5 - Брайтон № 7,6 - Дукат №11,7- Богота №8,8 - Эстафета №6, -К - отрицательный контроль (здоровое растение), +К - положительный контроль (картофель, инфицированный М вирусом). Размер амплифицируемого продукта 240 п.н.

* А

1 2 34 56 78 -К+КМ

Экспериментально были определены условия постановки ПЦР для диагностики рода потексвирусов, позволившие в ряде образцов земляники сортов Богота и Эстафета выявить вирус этой группы, вероятно, слабого пожелтения краев листьев земляники (рис. 4).

.... ,

123 4 56 7 8 -К+КМ

Рис. 4. Результаты ОТ-ПЦР-анализа сортообразцов земляник» с использованием вырожденных праймеров для детекции группы потексвирусов:

1 - Редгонтлит №7, 2 - Надежда №1, 3 - Найдена №3, 4 - Троицкая №15, 5 -Брайтон № 7,6 - Дукат №11,7- Богота №8, 8 - Эстафета №6, -К - отрицательный контроль (здоровое растение), +К - положительный контороль (картофель, инфицированный X вирусом). Размер амплифицируемого продукта 1350 п.н.

Была подтверждена методом ПЦР установленная ранее зараженность сортообразцов земляники вирусом кольцевой пятнистости малины из непогруппы.

Сортообразцы земляники, представленные для выявления в них вирусов карла- и потекс-группы методом ПЦР, были параллельно протестированы прививкой на индикаторных клонах земляники лесной (табл. 4). Индикаторный метод выявил большее количество образцов, зараженных вирусной инфекцией. Но ПЦР оказался более чувствительным методом. Так, в образце Дукат №11 индикаторным методом наличие вирусов ставилось под сомнение, но анализ ПЦР достоверно выявил в нем наличие карла-вирусов.

Таблица 4 - Сравнение результатов диагностики комплекса вирусов

крапчатости и морщинистости земляники методами ПЦР __и индикаторным___

Сортообразец

ПЦР

карлавирусы

потексвирусы

Индикаторный

Редгонтлит №7 - + - ++

Надежда №1 - - +

Найдена №3 - - +

Троицкая №15 + - + - +

Брайтон № 7 ++ + - +

Дукат №11 ++ - + -

Богота №8 - ++ ++

Эстафета №6 - ++ +

Примечание. ++ достоверное наличие вирусов, + - недостоверное наличие вирусов, - отсутствие вирусов.

Метод ПЦР является перспективным, позволяющим выявлять отдельные вирусы и их роды; его можно считать эталонным методом тестирования в системе производства оздоровленного посадочного материала. Сдерживающим моментом для широкого распространения метода ПЦР может быть его относительно высокая стоимость - по нашим расчетам примерно 220 рублей за тестирование одного образца. Диагностика методом ИФА дешевле в 13 раз, но, как отмечалось, многие вирусы, поражающие землянику не являются иммуногенами, и проверка на основной спектр вирусов невозможна. Стоимость вирусологического тестирования индикаторным методом дешевле ПЦР лишь в 1,3 раза и составляет 175 рублей за один образец, но длится не менее шести месяцев и требует значительной площади в обогреваемых теплицах, что приводит к большим затратам электроэнергии, расходам на отопление и водоснабжение, предполагает работу с пестицидами. При массовом тестировании растений земляники на зараженность вирусами остается востребованной система диагностики вирусов с обязательным использованием разных методов, сочетание которых определяется видовым разнообразием, инфекционным состоянием патогенов, механизмами устойчивости растений-хозяев, условиями окружающей среды и экономики.

Глава 5. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В СИСТЕМЕ ОЗДОРОВЛЕНИЯ ЗЕМЛЯНИКИ ОТ ВИРУСОВ

Надежным методом, достоверно позволяющим снизить концентрацию большинства вирусов в растении до неощутимого уровня вредоносности, является культивирование верхушечных меристем in vitro и последующее их клональное микроразмножение, которое и само по себе может обеспечить частичное освобождение от вирусов.

5.1. Анализ технологичности и эффективности оздоровления сортов земляники методом культуры меристем

5.1.1. Сортовая реакция земляники на культивирование верхушечных меристем in vitro

Приживаемость у различных сортов и элитных форм колебалась в широких пределах - от 17 до 65%, принтом обнаруживались некоторые закономерности, определяемые их генотипом. Так, межвидовые гибридные формы, полученные с участием третьего поколения чилийской земляники и северо-американских сортов, имели меньшую приживаемость и коэффициент размножения по сравнению с внутривидовыми гибридами, выведенными с участием комплексного донора сорта Маковка и отечественного сорта Самарянка. Они имели приживаемость эксплан-тов в среднем 54%, укореняемость на уровне 76%.

5.1.2. Изучение длительного клонирования земляники в культуре in vitro

Вопрос об оптимальной кратности пассажей при клональном микроразмножении и, как следствие, количестве полученного однородного материала представляет большой интерес для практики.

Полученные из апикальных меристем 0,3-0,5 мм, выделенных из пазушных почек двулетних растений земляники сорта Зенит, экспланты подвергали 12-кратным пассажам на среде с цитоки-нином. При этом боковые и пазушные почки адаптировались к развитию на питательной среде. После 7-го пассажа снижалось число образующих конгломерат почек, но сохранялся высокий уровень их приживаемости (рис. 5). Морфологических изменений у растений выявлено не было.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Количество пассажей

■ Коэффициент размножения - Приживаемость

Рис. 5. Приживаемость и коэффициент размножения эксплантов земляники сорта Зенит при длительном клонировании in vitro (МСХА,

1989-1999 гг.)

При клональном микроразмножении земляники целесообразно практиковать 8-9 пассажей на питательных средах, но избегать превышения предельно допустимых концентраций фитогор-монов. Это позволяет получать не менее 60-70 качественно однородных растений. Можно предполагать, что при многократных пассажах эксплантов происходит их частичное освобождение от наиболее лабильных вирусов.

5.1.3. Эффективность оздоровления различных сортов земляники методом культуры меристем

В результате тестирования прививкой на индикаторы растений 24 сортов земляники, полученных при культивировании апикальных меристем in vitro, констатировано оздоровление 80-85% из них от комплекса вирусов.

Установлен существенный коэффициент корреляции между регенерационной способностью апексов исследуемых сортов и выходом безвирусных растений при оздоровлении их методом культивирования верхушечной меристемы in vitro, г = 0,931. Сорта земляники можно разделять методом кластерного анализа на группы, различающиеся по эффективности оздоровления, выделяя наиболее и наименее пригодные для оздоровления от комплекса вирусов. Наибольший процент (выше 81%) безвирусных

растений после оздоровления был выявлен у таких сортов, как Зефир, Марышка, Спасская, Талка, Царскосельская, Эстафета (I группа оздоровления). Сорта Боровицкая, Женева, Зенит, Чен-длер, Фестивальная, Холидей, имели среднюю эффективность оздоровления и отнесены к II группе (61-80%). К III группе (менее 60% оздоровления) относили сорта Пурпуровая, Талисман.

5.2. Улучшение адаптации микрорастений земляники к нестерильным условиям

Уязвимым звеном при оздоровлении in vitro и клональном микроразмножении земляники является пересадка микрорастений из стерильной питательной среды в почвенный субстрат. При этом из-за возникающей стрессовой ситуации может погибать до 90% растений отдельных сортов.

5.2.1. Оптимизация почвенного субстрата для микрорастений земляники

С целью подбора субстрата, обеспечивающего оптимальное развитие микрорастений земляники, к верховому торфу добавляли цеолит и перлит, а также влагонабухающий агрогель на основе полиакриламида. Значительно лучшееразвитиерасгенийбыло в субстратах с цеолитом, особенно в присутствии агрогеля (табл.5).

Таблица 5 - Биометрические показатели микрорастений земляники сорта Зенит на различных почвенных субстратах перед посадкой (I) _и через 40 дней (II)_

Показатель

Вариант количество корней, шт. общая длина количество диаметр

I 11 активных корней, мм листьев, рожка, мм

всего активных шт.

Г 1 II I | II 1 1 II

Торф+ 4,0 6,0 4,06 86,0а 35,56 4,0 5,0 2,0 2,1

перлит (контроль) Торф 4,0 4,0 0а 98,Ов 0а 4,0 5,0 2,0 Расте-

+перлит+ агрогель Торф + 4,0 5,0 5,0бв 137,2г 151,Ов 4,0 7,0 ния погибли 1,9 13

цеолит Торф + 4,0 6,0 6,0в 95,26 278,4г 4,5 9,0 2,0 2,1

цеолит +

агоогель

Примечание. Одинаковые буквенные литеры указывают на отсутствие существенных различий между вариантами при р=0,05.

Цеолиты и влагонабухающий гель полиакриламида при добавлении к торфу улучшают физические свойства субстрата, в том числе его плотность и полевую влагоемкость. Такой субстрат оптимизирует рост микрорастений и позволяет длительные сроки обходиться без их полива.

5.2.2. Использование биопрепаратов и антибиотиков при клональном микроразмножении земляники

Для улучшения адаптации при пересадке в почвенный субстрат использовали кратковременное замачивание, а затем 1-2 полива микрорастений земляники сортов Надежда, Трубадур и элитного сеянца 515-14-7 грибным (триходермин) и бактериальным (планриз) препаратами, соответственно в концентрациях 0,5% и 0,1%. По сравнению с контролем существенно снизилась гибель микрорастений после обработки их триходермином и еще больше - планризом (на 30-40%), увеличилась приживаемость. Планриз увеличивал высоту растений и количество листьев. Оба препарата интенсифицировали зеленую окраску листьев растений, способствовали увеличению в 2 раза и более количества всасывающих придаточных корней второго порядка и их длину по сравнению с контрольными.

В культуре in vitro имеют место ухудшение развития и гибель значительной части эксплантов из-за загрязнения питательной среды бактериальной, реже грибной микрофлорой. Добавление в питательную среду антибиотика широкого спектра действия -доксициклина гидрохлорида - в концентрации 40-80 мг/л существенно снижало инфицированность эксплантов земляники сап-ротрофной микробиотой; при этом следовало учитывать его фи-тотоксичность для отдельных сортов.

5.2.3. Эффективность применения биорегуляторов-

симбионтов для повышения адаптационной способности

микрорастений земляники

По той же схеме, что и в случае планриза и симбионта при переводе в нестерильные условия были использованы препараты никфан (10~5%) и симбионт-3 (10~7%) на основе продуктов эн-дофитных грибов-симбионтов. Они существенно повысили приживаемость микрорастений двух сортов, длину их корней II и III порядков, ускорили начало роста, сократили период адаптации (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние препаратов-симбионтов на развитие микрорастений земляники (через 30 дней после посадки)

Вариант Приживаемость, % Количество листьев, шт./раст. Длина корней общая, см/раст.

Дукат

Никфан 71,6* 3,8 2,7

Симбионт 80,0* 3,5 2,1

Контроль 68,3 3,0 1,7

Зенга Зенгаиа

Никфан 56,6* 3,4 3,3*

Симбионт 56,6* 3,3 2,3*

Контроль 48,3 3,0 1,5

Примечание. *отличия от контроля существенны при р=0,05. После обработки препаратами общее содержание хлорофил ла возрастало в 1,2-1,7 раза (табл.7). Все это способствовало вы сокой жизнеспособности микрорастений в нестерильных почвен

ных субстратах.

Таблица 7 - Влияние препаратов-симбионтов на содержание хлорофилла (мг/г/%) 1 в листьях микрорастений земляники (МСХА, _1994 г.) _

Вариант

Содержание хлорофилла

В

общее, А+В

Дукат

Симбионт 3,22/ 106 1,10/ 143 4,32/ 114 Никфан 3,33/110 1,15/ 150 4,48*/ 119 Контроль 3,01 /100 0,77 /100 3,78 / 100

Зенга Зепгана Симбионт 3,42/158 1,21 / 172 4,63*/ 160 Никфан 3,28/ 152 1,15 "'/ 164 4,43* / 153 Контроль 2,16/ 100 0,70/ 100 2,86/ 100

Примечание.1 Сырое вещество в числителе дано в мг/г, а в знаменателе - в %; * отличия.от контроля существенны при р=0,05.

5.3. Использование ингибиторов вирусов при оздоровлении земляники методом культуры верхушечных меристем

Учитывая опыт успешного применения химиотерапии в культуре меристем табака и картофеля in vitro [Hildebrandt, 1958; Жук идр., 1970;Борисенкоидр., 1984], мы впервые использовали этот подход для освобождения растений земляники от вирусов. В питательную среду для выращивания меристематических верхушек размером 1,0-2,0 мм и 0,3-0,5 мм добавляли аналоги нуклеиновых и пиримидиновых оснований.

Таблица 8 - Влияние ингибиторов вирусов на регенерационную способность эксплантов (1,"0-2,0 мм) земляники сорта Фестивальная

__in vitro_

Вариант | Высажено эксплантов, шт. Выход растений-регенераитов, %

L-333 400 3,0 в

ДГТ 500 23,6 б

нео-ДГТ 480 22,9 б

ААТ 300 34,7 а

Контроль! 160 36,2 а

Примечание. Одинаковые буквенные литеры указывают "на отсутствие существенных различий между вариантами при р=0,05.

Все испытанные препараты, за исключением ААТ снижали выход растений-регенерантов в сравнении с необработанным контролем (табл. 8). Однако ДГТ и нео-ДГТ стимулировали мно-горожковость.

Наличие в растениях земляники смешанной инфекции вирусами морщинистости и крапчатости определяли методом прививки на индикаторных клонах. Увеличение размера эксплантов до 1,0-2,0 мм ускоряло в среднем на 25-30 дней процесс образования здоровых растений-регенерантов, готовых к пересадке в субстрат. При этом ДГТ, нео-ДГТ и ААТ вызывали инактивацию или значительное снижение концентрации вирусов, сравнимое с культивированием эксплантов размером 0,3-0,5 мм (контроль II) (табл.9).

Добавление в питательную среду препаратов ДГТ и ААТ в концентрации 100 мг/д до и после выделения эксплантов (0,30,5 мм) существенно повышало выход свободных от вирусов ра-стений-регенерантов земляники по сравнению с оздоровлением только методом культуры меристем (табл. 10).

Таблица 9 - Эффективность оздоровления от вирусов морщинистости и крапчатости земляники сорта Фестивальная при добавлении ингибиторов вирусов в среду для культивирования меристем (экспланты 1,0-2,0 мм)

Вариант Протестировано растений, шт. Формирование мнкрорастений % оздоровления

период регенерации, дней количество

листьев корней рожков

Ь-ЗЗЗ 10 55 3,5 3,0 1,0 15а

ДГТ 28 50 5,5 5,5 . 2,5 64,3 в

нео-ДГТ 27 50 3,5 4,0 1,5 55,6 6

ААТ 32 45 3,5 4,0 1,5 59,4 в

Контроль I 20 45 3,5 4,5 1,5 15а

Контроль II 20 75 3,5 3,5 1,0 50

Примечание. Одинаковые буквенные литеры указывают на отсутствие существенных различий между вариантами при р=0,05.

При оздоровлении земляники многих других сортов было отмечено, что даже при однократном введении в питательные среды препаратов ААТ и ДГТ повышался выход безвирусных растений, так как они действуют на уже синтезированные вирусные частицы в клетках растений.

Таблица 10 - Эффективность оздоровления от вирусов морщинистости и крапчатости земляники сорта Фестивальная при добавлении ингибиторов вирусов в среду для культивирования меристем (экспланты 0,3-0,5 мм)

Вариант Протестировано растений, шт. Формирование мнкрорастений % оздоровления

период регенерации, дней количество

листьев корней рожков

ААТ 14 75 3,5 3,5 1,0 78,46

ДГТ 14 78 5,5 5,0 2.0 71,46

Контроль II 20 75 3,5 3,5 1,0 50а

Примечание. Одинаковые буквенные литеры указывают на отсутствие существенных различий между вариантами при р=0,05.

Сочетание культуры меристем с антивирусными препаратами повышает выход оздоровленных регенерантов при обычном размере эксплантов (0,3-0,5 мм), а при увеличении их размера до

1,0-2,0 мм сокращает сроки регенерации. Опрыскивание исходных растений-доноров меристем препаратами ААТ и ДГТ не было эффективным против вирусных патогенов земляники.

Хотя антивирусные препараты и не вызывают полного удаления вирусов, они замедляют процесс репликации вирусных частиц и тем самым увеличивают безвирусную зону в активно делящихся верхушечных меристемах. Выход безвирусных растений зависит от генотипа сортов, а также от типов комбинаций вирусов при смешанной инфекции.

5.4. Результаты изучения антивирусных свойств ретардантов

на землянике

Проведено изучение антивирусных свойств некоторых ретардантов, применяемых на землянике, и их последействие в культуре in vitro после опрыскивания растений-доноров меристем. Предварительная обработка хлорхолинхлоридом (хлормекватхлорит), культаром (паклобутразол) и пиксом (мепикватхлорид) растений-доноров сорта Редгонтлит и, в меньшей степени, Зенита увеличила выход безвирусного материала.

Ретарданты, изменяя габитус растений, благоприятствуют общему повышению жизнеспособности растений, снижению чувствительности к неблагоприятным воздействиям биотических и абиотических стрессов.

Таблица 11 - Выход (%) оздоровленных растений земляники, полученных в культуре in vitro с предварительной обработкой _ретардантами растений-доноров эксплантов_

Вариант Сорт

Зенит Редгонтлит

Контроль 20,0 а 20,0 6

Хлорхолинхлорид 60,0 аб 80,0 а

Культар 60,0 аб 60,0 аб

Пике 40,0 аб 80,0 а

Примечание. Одинаковые буквенные литеры указывают на отсутствие существенных различий между вариантами при р=0,05.

Действие их было более интенсивным на сортах с комплексной устойчивостью.

5.5. Результаты изучения антивирусных свойств иммуноцитофита

Добавление иммуноцитофита в питательную среду для культивирования апикальных меристем, выделенных из растений здоровых или зараженных вирусами морщинистости и крапчатос-ти, практически не повлияло на рост и развитие эксплантов, а также на приживаемость, рост и развитие микрорастений в нестерильных условиях.

Таблица 12 - Влияние иммуноцитофита на выход (%) растений _земляники оздоровленных от вируса крапчатости_

Вариант, концентрация Зенга Зенгана FV-72

имуноцитофита, % Клон F. vesca

Контроль 35,7 12,5

Введение в питательную среду

10"5 42,9* 31,25*

10^ 35,7 25,0

Ю-7 35,7 - 18,8

5x10-7 35,7 18,8 Сочетание введения в питательную среду и обработки микрорастений

Ю-5 50,0* 43,8*

Ю-7 42,9* 37,5*

Примечание. * отличия от контроля существенны при р=0,05.

При добавлении иммуноцитофита в питательную среду для эксплантов в сочетании с последующей обработкой им микрорастений земляники лесной и садовой отмечено ингибирующее влияние на вирус крапчатости земляники (табл. 12), обычно локализующийся в цитоплазме пораженных клеток. На выход оздоровленных от вируса морщинистости растений земляники лесной и сорта Зенга Зенгана иммуноцитофит не повлиял, что связано с локализацией этого вируса в перинуклеарном пространстве, куда арахидоновая кислота, по-видимому, не способна проникать.

Противовирусное защитное действие иммуноцитофита связано, вероятно, с его механизмом действия, а также со строением и местонахождением вирусных частиц в клетке растения-хозяина.

5.6. Выявление мутагенных свойств'у антивирусных препаратов

Одновременно с изучением антифитовирусной активности испытываемых препаратов оценивали уровни фитотоксичности и возможные мутагенные свойства некоторых из них для стандартных модельных растений Arabidopsis thaliana, а также в ходе развития растений земляники в культуре in vitro и in vivo. Препарат L-333 был высоко токсичным, из-за чего не был использован в испытаниях мутагенных свойств.

Установлено, что частота мутаций, возникающих под влиянием препаратов, была выше таковой при спонтанных мутациях.

Регулярные визуальные обследования (в культуре in vitro, при высадке на маточник, через месяц после посадки, в период появления усов, перед выборкой усов) растений земляники, выращенной с применением ААТ, ДГТ и нео-ДГТ не выявили никаких фенотипических отклонений на протяжении трех вегетативных поколений.

Учитывая высокую технологичность метода оздоровления от вирусов культивированием меристематических верхушек в сочетании с антивирусными препаратами, его можно широко использовать на практике, но необходим контроль чистосортности и продуктивности полученных растений-регенерантов и их потомства.

5.7. Оценка перспективы использования ионизирующего излучения в производстве посадочного материала земляники

Применение облучения гамма-лучами исходных растений-доноров и выделенных из них эксплантов в целях получения мутаций, повышающих эффективность клонального микроразмножения освобожденных от вирусов растений земляники, а также устойчивость селекционного материала к болезням и абиотическим стрессам, не дало положительных результатов.

Глава 6. РАЗРАБОТКА НОВЫХ ЭЛЕМЕНТОВ

И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ

ПРОЦЕССОВ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ОЗДОРОВЛЕННОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА В СЕЛЕКЦИИ И ПИТОМНИКОВОДСТВЕ

6.1. Необходимость и преимущества оздоровления земляники

для селекции

Все испытываемые приемы оздоровления, размножения и диагностики вирусов земляники апробировали на многообразном селекционном материале - не только на сортах, но и гибридном фонде, элитных и родительских формах. Применение биотехнологических методов оздоровления в сочетании с клональным микроразмножением обеспечивало получение растений, свободных не только от вирусов и фитоплазм, но и от подавляющего большинства видов нематод, клещей, грибных и бактериальных патогенов. Здоровые растения в полной мере раскрывали свой биологический потенциал урожайности, что повышало объективность и эффективность селекции. Реализация вновь созданных сортов земляники в освобожденном от вирусов состоянии является одним из ключевых требований мировой практики [Метлиц-кий и др., 2005].

Микроклональное размножение оздоровленного селекционного материала широко используется за рубежом [Graham, 1997] для ускорения селекционного процесса и обеспечения необходимого объема материала для массовой и достоверной оценки биологических и хозяйственных признаков. Нами впервые использован этот прием в отечественной практике. Это способствовало сокращению длительности селекционного процесса с 12 до 7 лет, расширяло возможности скрещиваний и отборов. Завязываемость и всхожесть гибридных семян увеличивались на 70-80% по сравнению с неоздоровленными клонами, количество крупных, наиболее пригодных для опыления цветков возрастало на 20%. Лучше развивались пестики и особенно пыльники, увеличивался выход фертильной пыльцы.

Оздоровление обеспечивало объективность иммунологической оценки сортообразцов и соблюдение требований евростан-дартов, благодаря устранению смешанной инфекции вирусами, грибами и других регламентируемых вредных организмов.

В результате проведенной совместно с селекционерами ВСТИСП работы выведена группа скороплодных элитных форм (в т.ч. 515-14-7,515-16-3,514-16-3), доноров с комплексной устойчивостью (Маковка, Веснянка, Торос, 188-16-25 и др.), сортов земляники, включенных в программу селекционных исследований, а также районированных в Северо-Западном, Волго-Вятском, Северном, Центральном, Восточно-Сибирском, Дальневосточном регионах (Зенит, Золушка, Надежда, Найдена добрая, Эстафета, Коррадо, Боровицкая, Троицкая).

6.2. Совершенствование технологии производства

оздоровленного посадочного материала земляники

В итоге проведенных исследований обоснована, детально разработана, внедрена и много лет используется лабораторией плодоводства РГАУ-МСХА принципиально новая технология производства оздоровленного посадочного материала земляники, адаптированная к условиям НЧЗ РФ (рис.6). Ее основными звеньями являются 1) подавление вирусов и при необходимости других вредных организмов с помощью культуры апикальных меристем в сочетании с химиотерапией с использованием конкретных экологически безопасных препаратов (различающихся по активному веществу, механизму и спектру действия) после предварительной обработки растений-доноров эксплантов ретардантами; 2) клоналыюе микроразмножение in vitro (3-7 пассажей на протяжении 3-6 месяцев) на среде с добавкой антибиотика, подавляющего загрязнение грибами и бактериями; 3) адаптацию микрорастений к переводу в нестерильные условия путем обработки различными биопрепаратами и высадке в специальный торфяной субстрат с добавкой цеолитов и гидрогелей; 4) дора-щивание полученных клонов в гончарных вазонах в боксах стеллажной отапливаемой теплицы с последующей закладкой весной базисного маточника в другой стеллажной теплице; 5) прочистки и выбраковка клонов по результатам вирусологического тестирования, общего фитосанитарного мониторинга и отбора на продуктивность при обеспечении изоляции от резерваторов и переносчиков вирусной инфекции.

Ход технологического процесса контролируется регулярным вирусологическим тестированием растений (как минимум предварительное - до проведения терапии и основное - после дора-щивания исходных растений). Оно осуществляется с помощью оптимизированного и стандартизированного нами (с учетом воз-

-- --»- Для питомниководства Для селекции

Растения традиционных сортов, выращиваемые в маточниках в изоляторах Продуктивные, чистосортные растения из коллекций и с плодоносящих участков Интродуцированные новые сорта Гибридные формы Родительские формы

Оздоровление от вирусов методом культуры апикальных меристем in vitro с добавлением в питательную среду антивирусных препаратов и иммуномодуляторов_

Клональное микроразмножение (в течение 3-7 пассажей - 3-6 мес)

Адаптация микрорасгений к пересадке из пробирочной культуры в _почвенный субстрат - 0.5-1 мес (лаборатория, теплила')_'

«Генбанк» - хранение конгломератов почек, микрорастений при

2-5 X (до 4-х лет)

Доращивание полученных клонов в гончарных вазонах в боксах теплицы -3-4 мес_

Вирусологическое тестирование прививкой индикаторных клонов земляники лесной и виргинской в сочетании с ИФА и/или ПЦР. Окончательный результат через 6-7 мес (к I декаде августа) ¥ ~ ~

Закладка маточника в контейнерах на стеллажах теплицы -1 декада марта

Поэтапная выбраковка зараженных растений

Высадка оздоровленных растений на коллекционный участок для контроля сорточистоты и продуктивности

Клональное микроразмножение безвирусных базисных клонов

Вегетативное размножение отобранных безвирусных базисных клонов в контейнерном маточнике (2 срезки с июля; укоренение розеток)

Реализация оздоровленного посадочного материала питомникам, селекционерам, частникам

Рис. 6. Технологическая схема производства оздоровленного от вирусов посадочного материала

земляники

раста проверяемых растений и условий окружающей среды, совершенствования способа прививки, подбора новых эффективных индикаторных клонов) метода прививки на индикаторные клоны Fragaria vesca в сочетании с ИФА или, в крайнем случае, с недостаточно эффективным тестом на травянистых растениях-индикаторах. В перспективе эти методы тестирования будут вытеснены экспресс-методами на основе ПЦР, обладающими наивысшей чувствительностью и пригодными для идентификации самых различных вирусов и фитоплазм.

Наш многолетний опыт доказывает экономическую нецелесообразность и фитосанитарную опасность занятия тепличной площади растениями с неустановленной зараженностью патогенами и заселенностью вредителями.

Разработанная технологическая схема обладает рядом преимуществ в сравнении с традиционной, использующей термотерапию, культуру меристем, неоптимизированное тестирование на индикаторах в сочетании с ИФА. Культивирование меристем in vitro с использованием химиотерапевтантов и посадкой эксплан-тов размером 1-2 мм увеличивает выход здоровых растений на 40-45%, снижает трудоемкость выделения апексов и сокращает сроки их регенерации на 20-30 дней.

Включение в микроклональное размножение обработок микробиопрепаратами и антибиотиками, использование при переводе в нестерильные условия субстратов на основе торфа, цеолитов и гидрогелей обеспечивает снижение загрязнения сапротроф-ными микроорганизмами культуральной среды на 20-40%, сокращение периода адаптации на 15-20 дней при существенном улучшении приживаемости, роста и развития микрорастений.

Оптимизированная методика индикаторной диагностики сокращает на 20-40% ошибочные оценки вирусологического тестирования и на 15 дней сроки адаптации проверяемых растений (после удаления листьев). Использование ПЦР обеспечивает универсальную высокочувствительную диагностику вирусов всего лишь за 1-2 дня.

Предложенная технология снижает затраты труда (на 1,6 чел./ дн.) и средств (на 322 руб) на получение 1 безвирусного базисного клона земляники в сравнении с традиционной системой. За период работы произведено более 7000 оздоровленных клонов различных сортообразцов земляники.

выводы

1. Разработана и научно обоснована современная система оздоровления земляники для питомниководства и селекции, базирующаяся на комплексной диагностике, новых экологически безопасных, энергосберегающих приемах защиты от вирусных патогенов с учетом их видового состава и вредоносности.

2. Подтверждено широкое распространение в Нечерноземном Центре РФ садвавирусов крапчатости и латентной кольцевой пятнистости земляники, циторабдовируса морщинистости земляники, неповирусов черной кольцевой пятнистости томата и мозаики резухи. Впервые достоверно установлена массовая встречаемость потексвируса слабого пожелтения краев листьев земляники. Выявлен ранее не известный в России карлавирус ложного слабого пожелтения краев листьев земляники. Подавляющее большинство сортов является скрытыми носителями вирусов. Преобладала смешанная инфекция двумя и более вирусами (ВЧКТ+ВМР+ВЛКПЗ, ВЧКТ+ВМР, ВЧКТ+ВЛКПЗ). Видовой состав вирозов земляники измененился за последние 2025 лет.

3. Выявлено новое для обследованного региона заболевание земляники фитоплазменной этиологии, доказана его связь с комплексом абиотических факторов, описана симптоматика, рекомендованы меры профилактики.

4. Изучены разные типы взаимодействия патогенов при смешанной микозно-вирусной инфекции в зависимости от особенностей облигатных и факультативных паразитов, генотипа растения-хозяина, условий внешней среды. Возбудитель мучнистой росы земляники практически с равной интенсивностью поражал свободные от вирусов и инфицированные растения земляники; степень поражения вирозных растений 43 сортов земляники белой и бурой пятнистостями листьев была существенно выше, чем у оздоровленных растений (Л^ф=35,72 > А^т=9,21 при р=0,01).

5. Методологически обоснована и усовершенствована комплексная диагностики вирусов земляники за счет применения для индикаторной диагностики прививки отрезками черешка листа, новых клонов растений-индикаторов, учета температуры окружающей среды и возраста тестируемых растений, а также использования метода полимеразной цепной реакции. Впервые в России отработана методика пробоподготовки и ОТ ПЦР для диагностики карла-, потеке- и неповирусов в растениях земляни-

ки. Проведены сравнения технической и экономической эффективности методов диагностики (индикаторного, ИФА, ПЦР).

6. Для оптимизации биотехнологических приемов производства безвирусного посадочного материала земляники следует сочетать культивирование меристем in vitro с введением в питательную среду антивирусных препаратов (ААТ, ДГТ, нео-ДГТ) и иммуномодуляторов (иммуноцитофит), обработкой растений-доноров эксплантов ретардантами (культар, пике, хлорхолинх-лорид) с учетом установленных комбинаций вирусов, механизма действия препаратов и генотипов растений.

7. Оптимизацию микроклонального размножения сортов и гибридов садовой земляники и адаптации полученных микрорастений при пересадке их в почвенный субстрат обеспечивают добавление в питательную среду антибиотика доксициклина, снижающего загрязнение микрофлорой эксплантов при их культивировании in vitro, обработки микрорастений регуляторами роста (никфан, симбионт-3), микробиопрепаратами (трихо-дермин, планриз) и добавление к торфяному субстрату цеолитов и агрогелей.

8. Подтверждены целесообразность и эффективность рекомендуемых в мировой практике обязательного оздоровления и кло-нального микроразмножения не только сортов, но и исходных и гибридных форм земляники для селекционной работы.

9. Установлена зависимость эффективности оздоровления от генотипа растений земляники, оценен регенерационный потенциал (составляющий от 17 до 80%) более 120 образцов сортов и элитных сеянцев, полученных в результате внутривидовых и межвидовых скрещиваний; оценена пригодность сортов и гибридов для клонального микроразмножения и оздоровления методом культуры меристематических верхушек in vitro.

10. Доказана целесообразность иммунологической оценки сортов и гибридного материала земляники, предварительно освобожденных от вирусов и других регламентируемых вредных организмов.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Специализированным научно-исследовательским учреждениям предлагается оптимизированная система производства посадочного материала земляники высших категорий качества для питомниководства и селекционной работы, основанная на использовании экологически безопасных и энергосберегающих

средств и способов оздоровления земляники от вирусных и других патогенов.

Первоначально следует проводить комплексное оздоровление с последующим клональным микроразмножением отобранных растений-кандидатов в базисные клоны и селекционного материала, а затем - их вирусологическую проверку. Применять комплексное тестирование на вирусы с использованием ПЦР и оптимизированного индикаторного метода с использованием прививки отрезками черешка листа, новых растений-индикаторов Fragaria vesca f. semperflorens (сорта Роте Золемахер и Рю-ген); проводить тестирование растений, полученных in vitro, после 4-5 месяцев выращивания их в почвенном субстрате, при умеренных температурах воздуха.

Для повышения эффективности оздоровления от вирусов следует сочетать культуру меристем in vitro с использованием препаратов с антивирусной активностью (ААТ, ДГТ, нео-ДГТ), им-муномодулятора иммуноцитофит, предварительно опрыскивать растения-доноры меристем ретардантами (пиксом, культаром, хлорхолинхлоридом), учитывая виды вирусов и сортовую реакцию земляники. Для улучшения адаптации микрорастений на этапе пересадки в почвенный субстрат использовать обработки биологически активными микробиопрепаратами (планриз, три-ходермпп, никфан, симбионт), добавлять в торфяной субстрат цеолиты и полиакриламидные гидрогели.

Оценку устойчивости сортов и гибридов земляиики к грибным болезням необходимо проводить на растениях с одинаковой степенью оздоровления от вирусов, во избежании искажающего влияния смешанных микозно-вирусных инфекций, а также других вредных организмов.

Список основных публикаций по теме диссертации

1. Белошапкина, О.О. Использование ингибиторов вирусов при оздоровлении земляники методом культуры верхушечных меристем / О.О. Белошапкина, В.А. Шмыгля // Известия ТСХА. - 1986. -N5.-C. 116-118.

2. Белошапкина, О. О. Влияние температуры на результаты тестирования земляники в условиях теплицы / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. - 1990. - N3. - С. 176-179.

3. Белошапкина, О. О. Результаты изучения антивирусных свойств ретардантов на землянике / О.О. Белошапкина, В.В. Фаустов, Н. Захави // Известия ТСХА. - 1991. - N 4. - С. 171-175.

4. Фаустов В. В. Анатомо-морфологические особенности развития микрочеренков земляники в культуре in vitro / В.В. Фаустов, О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. - 1995. - N 1. - С. 127-138.

5. Белошапкина, О.О. Особенности поражения грибными заболеваниями оздоровленных от вирусов растений земляники / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. - 1997. - Вып. 2. - С. 113-120.

6. Белошапкина, О.О. Реакция земляники на обработку гамма-лучами / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. - 1998. - Вып. 3. -С.156-161.

7. Белошапкина, О.О. Использование биопрепаратов и регуляторов роста при защите земляники от вертициллеза / О.О. Белошапкина, Д.Н. Говоров // Известия ТСХА.- 2000. - Вып. 1. -С. 116-128.

8. Белошапкина, О.О. Здоровый посадочный материал земляники - основа успеха / О.О. Белошапкина, И.И. Ханжиян, Е.Р. Батрак II Защита и карантин растений. - 2001. - N 8. - С. 23-24.

9. Белошапкина, О.О. Защита земляники в питомнике высших репродукций / О.О. Белошапкина, Л.В. Безобразнова // Защита и карантин растений. - 2001. - N 9. - С.42-43.

10. Белошапкина, О.О. Вредители и болезни земляники / О.О. Белошапкина, Е.Р. Батрак // Защита и карантин растений. - 2002. -N5. - С. 54-55; N 6. - С. 42-44.

11. Белошапкина, О. О. Использование метода полимеразной цепной реакции для диагностики некоторых групп вирусов земляники / О.О. Белошапкина, Н.В. Аршава // Известия ТСХА. - 2004. - Вып. 2.-С. 60-67.

12. Белошапкина О. О. Обзор методов диагностики вирусных заболеваний земляники / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА.- 2002,-Вып.2,- С. 177-183.

13. Белошапкина О.О. Совершенствование технологических процессов производства оздоровленного посадочного материала земляники / О.О. Белошапкина, И.И. Ханжиян // Известия ТСХА. -2004,- Вып. 4.-С. 126-130.

14. Белошапкина О.О. Биологические и технологические основы оздоровления посадочного материала земляники от вирусов / О.О. Белошапкина / М.: МСХА. - 2005. - 162 с.

15. Белошапкина, О.О. Влияние ингибиторов вирусов на частоту появления эмбриональных леталей у Arabidopsis thaliana / О.О. Белошапкина, В.А. Высоцкий, Л.М. Хайбулина // Сб. науч. трудов ТСХА. Проблемы интенсификации плодоводства. М. - 1987. - С. 48-52.

16. Белошапкина, О.О. Тестирование земляники методом прививки отрезками черешка / О.О. Белошапкина // Сб. науч. трудов.

Интенсификация возделывания ягодных культур. - Л.: ЛСХИ. -1989.-С. 45-49.

17. Белошапкина, О.О. Возможные растения-индикаторы на вирусы земляники / О.О. Белошапкина, Т.И. Волкова // Сб. науч. трудов ТСХА. Проблемы интенсификации садоводства в НЧ зоне РСФСР. - М. - 1989. - С. 77-80.

18. Артюшин, A.M. Цеолиты и гидрогели при микроклональ-ном размножении земляники / A.M. Артюшин, О.О. Белошапкина, Г.П. Епишина, Л.К., Пржевальская, Т.М. Бычкова И Достижения науки и техники АПК. - М.: Агропромизд. - 1991. - N 9. - С. 19-20.

19. Белошапкина О.О. Изучение длительного клонирования земляники в культуре in vitro / О.О. Белошапкина, Н. Захави / Сб. докл. всесоюз. конф. - Махачкала: ДГУ. - 1991. - С. 47-48.

20. Белошапкина О.О. Эффективность применения природных биорегуляторов-симбионтов для повышения адаптационной способности микрорастений земляники / О.О.Белошапкина / Сб. докл. 3 Международ, конф. Регуляторы роста и развития растений. - М.: МСХА. - 1995. - С. 139-140.

21. Попова И.В. Особенности третьего и четвертого поколений межвидовых гибридов и новых исходных форм в селекции земляники на высокую адаптационную способность / И.В. Попова, С.М. Резник, Е.Д. Шаталова, А.Ф. Константинова, О.О. Белошапкина // Плодоводство и ягодоводство России.-М.: РАСХН- 1995.-С. 70-84.

22. Попова И.В. Исходные формы в селекции земляники на пригодность к замораживанию / И.В. Попова, А.Ф. Макарова, Е.Д. Шаталова, А.Ф. Константинова, О.О. Белошапкина // Плодоводство и ягодоводство России. - М: РАСХН. - 1996. - С. 41-51.

23. Белошапкина, О. О. Вирусологическое тестирование в системе производства посадочного материала земляники / О.О. Белошапкина / Актуал. вопр. теории и практики защиты плодовых и ягодных культур от вредных организмов в условиях многоукладности сельского хоз-ва. - М.: ТСХА - 1998. -С. 284-286. •

24. Белошапкина, О.О. Распространенность вирусных болезней земляники в Московской области / О.О. Белошапкина И Сб. науч. трудов ТСХА. - 1999. - Вып. 271. - С.41-49.

25. Белошапкина О.О. Определение фитоплазм в растениях земляники с использованием ДНК-зондов / О.О. Белошапкина, В.М. Чернов, А.А. Ванькова, Е.Р. Батрак / Материалы II международ, конф. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. - М. - 2000. - С. 134-135.

26. Белошапкина, О.О. Применение культуры изолированных меристем в селекции земляники на высокую адаптивность и продуктивность / О.О. Белошапкина, И.В. Попова / Материалы II меж-

дународ. конф. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. - М. - 2000. - С. 166.

27. Белошапкина, О.О. Генетические источники позднецветущей земляники садовой и подготовка их для селекционной работы с применением культуры изолированных меристем / О.О. Белошапкина, И.В. Попова // Плодоводство и ягодоводство России. - 2001. -Т. 8.-С. 71-78.

28. Белошапкина, О. О. Использование биопрепаратов при кло-нальном микроразмножении земляники / О.О. Белошапкина, И.В. Жаркова// Сб. науч. трудов ТСХА. - 2001. - Вып. 273, Ч. 2. -С. 284-289.

29. Шкаликов В.А. Практикум по сельскохозяйственной фитопатологии. Учебное пособие/В.А. Шкаликов, Ю.М. Стройков, Ф.С. Джалилов, О.О. Белошапкина и др. Ред. В.А. Шкаликов / М.: КолосС. - 2002. - 206 с.

30. Ахатов А.К. Защита растений от болезней в теплицах. Справочник / А.К. Ахатов, Ф.С. Джалилов, О.О. Белошапкина и др. Ред. А.К. Ахатов / М.:Товарищество науч. изд. КМК,- 2002. - 464 с.

31. Шкаликов В.А. Защита растений от болезней. Учебник, 2-е изд., исправ. и дополн. / В.А. Шкаликов, О.О. Белошапкина, Д.Д. Букреев и др. Ред. В.А. Шкаликов / М.: КолосС. - 2003. - 255 с.

32. Белошапкина О.О. Распространенность вирусных .болезней земляники в Нечерноземной зоне / О.О. Белошапкина / Фитосани-тарное оздоровление экосистем. Материалы II Всероссийского съезда по защите растений. - СПб. - 2005. - T.I. - С. 14-16.

33. Белошапкина О. О. Сравнение экономической эффективности вирусологического тестирования земляники разными методами / О.О. Белошапкина / Фитосанитарное оздоровление экосистем. Материалы II Всероссийского съезда по защите растений. - СПб. -2005. -TH.- С.463-465.

Объем 2,5 печ. л. Зак. 493. Тир. 100 экз.

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им. К.А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Белошапкина, Ольга Олеговна

Введение.

Глава I. Вирусные и фитоплазменные болезни земляники, состояние и перспективы их диагностики и защитных мероприятий. Обзор литературы.

1.1. Биологические особенности земляники, как растения-хозяина вирусов.

1.2. Систематика и биологическая характеристика вирусов-патогенов земляники.

1.3. Распространенность и вредоносность вирусов, поражающих землянику.

1.4. Характеристика и систематика возбудителей фитоплазмозов земляники.

1.5. Методы диагностики и исследований вирусов земляники.

1.5.1. Визуальная диагностика.

1.5.2. Индикаторная диагностика.

1.5.3. Индексирование вирусов земляники с помощью переносчиков.

1.5.4. Иммуноферментный анализ.

1.5.5. Полимеразная цепная реакция.

1.5.6. Электрофорез.

1.5.7. Электронно-микроскопическая диагностика.

1.6. Методы диагностики фитоплазмозов.

1.7. Современные направления защиты земляники от вирусных болезней.

1.7.1. Методы оздоровления растений земляники от вирусов.

1.7.1.1. Термотерапия, как метод оздоровления.

1.7.1.2. Оздоровление от вирусов методом культуры меристем.

1.7.1.3. Химиотерапия в системе защиты от вирусных болезней.

1.7.2. Селекция на вирусоустойчивость.

1.7.3. Защита посадок земляники от перезаражений вирусами.

Глава II. Материалы, условия и методы исследований.

Глава III. Анализ особенностей патогенеза при вирусных болезнях земляники.

3.1. Распространенность вирусных болезней земляники.

3.2. Изучение этиологии нового заболевания земляники.

3.3. Особенности патогенеза при смешанных микозно-вирусных инфекциях на землянике.

Глава IV. Сравнительная оценка современных методов диагностики вирусов земляники.

4.1. Оптимизация диагностики вирусов земляники индикаторным методом.

4.1.1. Влияние возраста тестируемых растений на достоверность результатов

4.1.2. Влияние температуры на результаты тестирования в условиях теплиц.

4.1.3. Совершенствование способа прививки для тестирования земляники на зараженность вирусами.

4.1.4. Выявление новых растений-индикаторов.

4.2. Сравнение эффективности методов индикаторного и серологического (ИФА) для выявления вирусов земляники.

4.3. Выявление зараженности земляники вирусами методом ПЦР.

4.4. Сравнение экономической эффективности вирусологического тестирования земляники разными методами.

Глава V. Использование биотехнологических методов в системе оздоровления земляники от вирусов.

5.1. Анализ технологичности и эффективности оздоровления сортов земляники методом культуры меристем.

5.1.1. Сортовая реакция земляники на культивирование верхушечных меристем in vitro.

5.1.2. Изучение длительного клонирования земляники в культуре in vitro.

5.1.3. Эффективность оздоровления различных сортов земляники методом культуры меристем.

5.1.4. Влияние исходной зараженности вирусами на регенерационную способность растений и оздоровление in vitro.

5.2. Улучшение адаптации микрорастений земляники к нестерильным условиям.

5.2.1. Оптимизация почвенного субстрата для микрорастений земляники.

5.2.2. Использование биопрепаратов и антибиотиков при клональном микроразмножении земляники.

5.2.3. Эффективность применения биорегуляторов-симбионтов для повышения адаптационной способности микрорастений земляники.

5.3. Использование ингибиторов вирусов при оздоровлении земляники методом культуры верхушечных меристем.

5.4. Результаты изучения антивирусных свойств ретардантов на землянике.

5.5. Результаты изучения антивирусных свойств иммуноцитофита.

5.6. Выявление мутагенных свойств у антивирусных препаратов.

5.7. Оценка перспективы использования ионизирующего излучения для оздоровления и размножения земляники.

Глава VI. Разработка новых элементов и совершенствование технологических процессов при производстве оздоровленного посадочного материала земляники в селекции и питомниководстве

6.1 .Необходимость и преимущества оздоровления земляники для селекции.262 6.2. Совершенствование технологии производства оздоровленного посадочного материала земляники.

Выводы.

Рекомендации производству.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Система оздоровления земляники садовой от вирусов"

Актуальность проблемы. Земляника садовая во всем мире является доходной и популярной ягодной культурой, урожайность которой может достигать 90-100 т/га. Ее плоды являются уникальным диетическим продуктом для человека, способствующим профилактике комплекса важнейших заболеваний. Поэтому земляника должна быть доступна для широких кругов населения России в свежем или замороженном виде круглый год, желательно за счет собственного производства.

Специфика современного состояния плодоводства России состоит в том, что большинство площадей под земляникой находится в личных подсобных, мелких фермерских хозяйствах, а также питомниках, преобразованных в фирмы и акционерные организации, и находятся вне сферы государственного контроля. Массовая неконтролируемая торговля посадочным материалом способствует расширению видового состава патогенов и вредителей. Это привело к тому, что распространение грибных, бактериальных, вирусных инфекций в России носит комплексный характер и принимает угрожающие размеры, сопоставимые с уровнем паразитарного загрязнения, наблюдаемого в слаборазвитых странах Африки, Азии, Латинской Америки, способствует снижению продуктивности земляники, а нередко ее полной деградации.

Вирусы являются хроническими патогенами, ущерб от которых трудно наблюдать на фоне острых, нередко летальных микозных заболеваний, тотального уничтожения или деформации органов вредителями, стрессов абиотической природы и из-за плохой агротехники. Суммарные потери урожайности от вирусных болезней значительно труднее поддаются оценке, чем от других болезней. Поэтому многими плодоводами высказываются сомнения в наличии существенного ущерба землянике от вирусов и как следствие, об экономической целесообразности ее оздоровления. Для вегетативно размножаемых культур, к которым относится земляника, проблема вирусных заболеваний усугубляется накоплением смешанных инфекций и передачей их последующим поколениям.

Из-за того, что вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами, и цикл развития их теснейшим образом связан с обменом веществ клеток растений-хозяев, терапия заболевших растений практически невозможна [К. Смит, 1960; Ю.Н. Журавлев, 1979; Ю.Т. Дьяков, 1984; Г.П. Сиссонс и др., 1989]. Эффективное снижение вредоносности вирусов в условиях сложившейся системы садоводства возможно посредством комплексного оздоровления от них посадочного материала и последующей защиты его от перезаражений [С.М. Соколова, 1986; Ю.И. Осипов, М.И. Джигадло, 1987; Отраслевые стандарты., 1988; В.И. Кашин и др., 1993; Н.А. Паскеев, 2001]. Созданная в России в 70-х годах XX века система производства оздоровленного от вирусов посадочного материала земляники в настоящее время фактически разрушена, что может привести к вырождению этой ценной культуры.

Для эффективного контроля вирусных заболеваний земляники необходимо всестороннее изучение и уточнение вирусного патогенеза, информация о современном видовом составе вирусов, их взаимоотношениях с другими патогенами и вредоносности, а также наличие быстрой и достоверной диагностики.

Важнейшим требованием при производстве посадочного материала земляники является проверка исходных, а также полученных в процессе оздоровления растений на отсутствие в них вирусных патогенов. Выявление вирозов и фитоплазмозов земляники отличается большой сложностью. Практически все сорта являются бессимптомными носителями, и их визуальная диагностика невозможна. Основные специфические вирусы, поражающие эту культуру, нестойки вне клетки растения, частицы их необратимо разрушаются в экстрактах сока или в процессе очистки [С.М. Соколова, 1988; R.H. Converse, A.N. Adams et al., 1988]. Получение антисывороток к таким вирусам для проведения серодиагностики затруднено, хотя ряд вирусов, поражающих землянику обладают хорошими иммуногенными свойствами. Широкое внедрение для тестирования иммуноферментного анализа ограничило круг выявляемых вирусов и почти полностью вытеснило универсальный метод прививки на растениях-индикаторах, требующий длительного времени и использования больших площадей в защищенном грунте. Вследствие этого стали упускать из виду специфичные для земляники ацидофильные вирусы, возбудители «вырождения» культуры в основных регионах ее возделывания.

В связи с этим в настоящее время возникла необходимость мониторинга существующего видового состава вирусов земляники, совершенствования используемых методов диагностики вирусов земляники для повышения их достоверности, снижения продолжительности и трудоемкости, а также разработки и внедрения новых современных молекулярно-генетических методов.

К 80-м годам XX века отечественная наука и практика достигли заметных успехов в диагностике вирозов земляники и мерах борьбы с ними, но за последние полтора десятилетия в РФ производство сертифицированного, чистосортного, свободного от комплекса наиболее опасных вредителей и болезней посадочного материала было практически свернуто. Была нарушена целостность и последовательность процессов оздоровления и защиты безвирусных клонов от повторного заражения. Многие используемые ранее способы и средства борьбы с вирусными инфекциями и особенно с их переносчиками, другими наиболее опасными патогенами и вредителями, были основаны на применении высокотоксичных химических препаратов для их уничтожения, что наносило серьезный ущерб окружающей среде, неблагоприятно воздействовало на биоценологические связи различных компонентов этой среды.

Поэтому актуальными направлениями борьбы с фитопатогенами являются те, которые позволяют влиять на экспрессию защитных механизмов растений, сочетая высокую эффективность и экологическую безопасность. Необходимо совершенствование и внедрение в практику высокопроизводительных биотехнологических приемов, позволяющих получать достаточное количество оздоровленных от вирусов растений земляники, разрабатывать методы защиты растений от вирусов, основанные на стимуляции их естественной устойчивости с помощью экологически безопасных биологически активных веществ, способных благотворно влиять на рост и развитие растений.

Достаточно подробно вирусные и фитоплазменные заболевания ягодных культур, в том числе земляники, изучались в 60-80 гг. XX века Ю.И. Помазковым, М.А. Келдыш, А.П. Мишиной, JI.B. Наумовой, Э.А. Власовой, JI.H. Самсоновой, Э.И. Лариной. Много внимания уделялось распространенности, идентификации, а также способам их распространения, в частности, векторному тлями. Исследования Н.Д. Романенко, А.А. Томилина были посвящены неповирусам и их переносчикам - нематодам. Широкое распространение получил метод оздоровления растений земляники от вирусов с помощью культуры меристем [Ю.Г. Попов, А.П. Мишина, 1972; Н.М. Абраменко, 1973; Т.Д. Вердеревская, 1977; И.В. Жаркова, О.О. Белошапкина, Л.И. Чефранова, 1982; В.А. Высоцкий и др., 1984] и термотерапии [И.Г. Цуркан, 1971; В. Басак, 1977].

Настоящая диссертация, учитывая историческое развитие проблемы и ее современное состояние, посвящена теоретическому и практическому обоснованию и созданию системы производства оздоровленного посадочного материала земляники с использованием различных методов диагностики и терапии на основе анализа вирусного патогенеза с учетом видового разнообразия вирусных и фитоплазменных патогенов, их взаимоотношений и вредоносности.

Цель исследований. Теоретически обосновать и экспериментально усовершенствовать систему защиты земляники садовой от комплекса вирусных и фитоплазменных заболеваний на основе оптимизации производства оздоровленного посадочного материала.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить распространенность и видовой состав вирусов земляники в Нечерноземном Центре РФ, их взаимоотношения с патогенами другой этиологии;

- усовершенствовать и стандартизировать методы диагностики вирусов земляники с помощью растений-индикаторов для практического тестирования, повысить их достоверность, снизить влияние факторов окружающей среды;

- апробировать и оптимизировать молекулярно-генетические методы для диагностики вирусов при производстве посадочного материала земляники;

- повысить эффективность оздоровления земляники от вирусов за счет применения экологически безопасных средств и способов, включая антивирусные препараты и активизацию защитных механизмов растений;

- оптимизировать режимы клонального микроразмножения современного сортимента и гибридного материала садовой земляники с использованием препаратов, различных по происхождению и механизмам действия;

- оценить значимость оздоровления земляники на разных этапах селекционного процесса;

- обосновать и разработать современную отечественную технологию получения оздоровленного посадочного материала земляники, отвечающую требованиям мировых стандартов.

Научная новизна результатов исследований

Предложена концепция оздоровления земляники от вирусов и разработана технология производства оздоровленного посадочного материала земляники в соответствии с современными условиями и принципами экологической безопасности. Научно обоснована и экспериментально доказана целесообразность оздоровления от вирусов в селекционном процессе не только новых сортов земляники, но и исходных родительских, гибридных и элитных форм.

Установлен существующий видовой состав вирусов земляники в Нечерноземном Центре РФ, показаны его изменения за последние 20-25 лет. Выявлен характер взаимоотношений смешанных микозно-вирусных инфекций и их влияние на оценку устойчивости к болезням. Описано новое для региона фитоплазменное заболевание земляники, установлена его этиология и рекомендованы меры профилактики.

Предложена методология комплексной диагностики вирусных и фитоплазменных заболеваний земляники, повышающая достоверность их обнаружения. Выявлены и апробированы новые растения-индикаторы, предложен новый экономичный способ прививки с использованием в качестве привоев отдельных отрезков черешка листа, экспериментально обоснованы минимальный возраст тестируемых растений и сроки проведения вирусологического теста. Доказана целесообразность применения усовершенствованного молекулярно-генетического метода диагностики вирусов - полимеразной цепной реакции (ПЦР) для универсального тестирования земляники. Дана экономическая оценка разных методов диагностики вирусов.

Повышена экологическая безопасность оздоровления земляники от вирусов в питомниководстве при введении антивирусных препаратов и иммуномодуляторов в питательную среду in vitro. Впервые выявлен ряд эффективных химических и биологически активных препаратов для защиты от комплекса вирусов, а также для повышения адаптационной способности микрорастений земляники при переводе их из пробирочной культуры в почвенный субстрат.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методология комплексной диагностики вирусных и фитоплазменных заболеваний земляники, основанная на совершенствовании системы индикаторов и применении новейших методов тестирования (ДНК-зонды, ПЦР, электрофорез).

2. Современная система тестирования земляники и дифференцированный подход в зависимости от состава патогенов, их вредоносности и взаимоотношений в ценозе.

3. Система оздоровления и клонального микроразмножения земляники базируется на использовании новых направлений в оздоровлении от вирусов (сочетание культуры тканей с иммуномодуляторами и антивирусными препаратами) и оптимизации параметров культивирования in vitro и в период адаптации in vivo.

4. Обоснована значимость оздоровления земляники от вирусов на всех этапах селекционного процесса.

Практическая значимость и реализация результатов исследований.

Разработана новая система оздоровления посадочного материала земляники на безвирусной основе для питомниководства и селекции.

Предложенная методология диагностики вирусов земляники позволяет повысить надежность выявления заболеваний и получения безвирусных базисных клонов. Выделенные новые индикаторные растения F. vesca f. semperjlorens, сортов Рюген и Роте Золемахер используются для тестирования растений земляники на зараженность вирусами в лаборатории плодоводства РГАУ-МСХА. Предложенный способ прививки отдельными отрезками черешка листа в качестве привоев позволяет в 3-4 раза снизить количество отбираемых листьев и избежать ослабления тестируемых растений. Установленные оптимальные возраст микрорастений и период индикаторного теста повышают достоверность вирусологической проверки. Выявлена высокая эффективность использования ПЦР в качестве основного метода вирусологического тестирования в системе оздоровления посадочного материала земляники.

Культивирование верхушечных меристем в сочетании с химическими (ААТ, ДГТ) и биологически активными препаратами (иммуноцитофит) in vitro, а также обработка растений-доноров меристем ретардантами (пиксом, культаром, хлорхолинхлоридом), обеспечивают увеличение выхода здоровых клонов земляники. Показано улучшение адаптационных свойств микрорастений земляники при обработке их и почвенного субстрата биологически активными препаратами: никфаном, симбионтом, иммуноцитофитом, триходермином, планризом, и путем введения в субстрат цеолитов и гидрогелей.

Для ускорения и интенсификации селекционного процесса доказана необходимость оздоровления и клонального микроразмножения не только новых сортов, но и исходных родительских, гибридных и элитных форм земляники.

Усовершенствованные и разработанные новые элементы технологии производства безвирусного посадочного материала земляники используются в лаборатории плодоводства, в курсе лекций, практических занятий и в учебных пособиях РГАУ-МСХА.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Белошапкина, Ольга Олеговна

ВЫВОДЫ

1. Разработана и научно обоснована современная система оздоровления земляники для питомниководства и селекции, базирующаяся на комплексной диагностике, новых экологически безопасных, энергосберегающих приемах защиты от вирусных патогенов с учетом их видового состава и вредоносности.

2. Подтверждено широкое распространение в Нечерноземном Центре РФ садвавирусов крапчатости и латентной кольцевой пятнистости земляники, циторабдовируса морщинистости земляники, неповирусов черной кольцевой пятнистости томата и мозаики резухи. Впервые достоверно установлена массовая встречаемость потексвируса слабого пожелтения краев листьев земляники. Выявлен ранее не известный в России карлавирус ложного слабого пожелтения краев листьев земляники. Подавляющее большинство сортов является скрытыми носителями вирусов. Преобладала смешанная инфекция двумя и более вирусами (ВЧКТ+ВМР+ВЛКПЗ, ВЧКТ+ВМР, ВЧКТ+ВЛКПЗ). Видовой состав вирозов земляники измененился за последние 20-25 лет.

3. Выявлено новое для обследованного региона заболевание земляники фитоплазменной этиологии, доказана его связь с комплексом абиотических факторов, описана симптоматика, рекомендованы меры профилактики.

4. Изучены разные типы взаимодействия патогенов при смешанной микозно-вирусной инфекции в зависимости от особенностей облигатных и факультативных паразитов, генотипа растения-хозяина, условий внешней среды. Возбудитель мучнистой росы земляники практически с равной интенсивностью поражал свободные от вирусов и инфицированные растения земляники; степень поражения вирозных растений 43 сортов земляники белой и бурой пятнистостями листьев была существенно выше, чем у оздоровленных растений (^ф=35,72 > Х2т=9,2\ при р=0,01).

5. Методологически обоснована и усовершенствована комплексная диагностики вирусов земляники за счет применения для индикаторной диагностики прививки отрезками черешка листа, новых клонов растений-индикаторов, учета температуры окружающей среды и возраста тестируемых растений, а также использования метода полимеразной цепной реакции. Впервые в России отработана методика пробоподготовки и ОТ ПЦР для диагностики карла-, потеке- и неповирусов в растениях земляники. Проведены сравнения технической и экономической эффективности методов диагностики (индикаторного, ИФА, ПЦР).

6. Для оптимизации биотехнологических приемов производства безвирусного посадочного материала земляники следует сочетать культивирование меристем in vitro с введением в питательную среду антивирусных препаратов (ААТ, ДГТ, нео-ДГТ) и иммуномодуляторов (иммуноцитофит), обработкой растений-доноров эксплантов ретардантами (культар, пике, хлорхолинхлорид) с учетом установленных комбинаций вирусов, механизма действия препаратов и генотипов растений.

7. Оптимизацию микроклонального размножения сортов и гибридов садовой земляники и адаптации полученных микрорастений при пересадке их в почвенный субстрат обеспечивают добавление в питательную среду антибиотика доксициклина, снижающего загрязнение микрофлорой эксплантов при их культивировании in vitro, обработки микрорастений регуляторами роста (никфан, симбионт-3), микробиопрепаратами (триходермин, планриз) и добавление к торфяному субстрату цеолитов и агрогелей.

8. Подтверждены целесообразность и эффективность рекомендуемых в мировой практике обязательного оздоровления и клонального микроразмножения не только сортов, но и исходных и гибридных форм земляники для селекционной работы.

9. Установлена зависимость эффективности оздоровления от генотипа растений земляники, оценен регенерационный потенциал (составляющий от 17 до 80%) более 120 образцов сортов и элитных сеянцев, полученных в результате внутривидовых и межвидовых скрещиваний; оценена пригодность сортов и гибридов для клонального микроразмножения и оздоровления методом культуры меристематических верхушек in vitro.

10. Доказана целесообразность иммунологической оценки сортов и гибридного материала земляники, предварительно освобожденных от вирусов и других регламентируемых вредных организмов.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Специализированным научно-исследовательским учреждениям предлагается оптимизированная система производства посадочного материала земляники высших категорий качества для питомниководства и селекционной работы, основанная на использовании экологически безопасных и энергосберегающих средств и способов оздоровления земляники от вирусных и других патогенов.

Первоначально следует проводить комплексное оздоровление с последующим клональным микроразмножением отобранных растений-кандидатов в базисные клоны и селекционного материала, а затем - их вирусологическую проверку. Применять комплексное тестирование на вирусы с использованием ПЦР и оптимизированного индикаторного метода с использованием прививки отрезками черешка листа, новых растений-индикаторов Fragaria vesca f. semperflorens (сорта Роте Золемахер и Рюген); проводить тестирование растений, полученных in vitro, после 4-5 месяцев выращивания их в почвенном субстрате, при умеренных температурах воздуха.

Для повышения эффективности оздоровления от вирусов следует сочетать культуру меристем in vitro с использованием препаратов с антивирусной активностью (ААТ, ДГТ, нео-ДГТ), иммуномодулятора иммуноцитофит, предварительно опрыскивать растения-доноры меристем ретардантами (пиксом, культаром, хлорхолинхлоридом), учитывая виды вирусов и сортовую реакцию земляники.

Для улучшения адаптации микрорастений на этапе пересадки в почвенный субстрат использовать обработки биологически активными микробиопрепаратами (планриз, триходермин, никфан, симбионт), добавлять в торфяной субстрат цеолиты и полиакриламидные гидрогели.

Оценку устойчивости сортов и гибридов земляники к грибным болезням необходимо проводить на растениях с одинаковой степенью оздоровления от вирусов, во избежании искажающего влияния смешанных микозно-вирусных инфекций, а также других вредных организмов.

Заключение

Вирусные болезни значительно снижают продуктивность земляники а России, особенно в питомниководстве, во многом затрудняют селекционный процесс и внедрение в производство новых сортов. Причинами широкого распространения этих патогенов на землянике в первую очередь следует считать несертифицированное, бесконтрольное выращивание и реализацию посадочного материала. Многие теоретические, практические, а самое главное, организационные и законодательные вопросы, связанные с оздоровлением и размножением посадочного материала требуют скорейшего решения.

Необходимо внедрение в практику питомниководства, садоводства и селекционной работы результатов по совершенствованию имеющихся методов выявления вирусов (индикаторного, серологического) и использованию новых (молекулярно-генетических) экспресс-методов диагностики, отвечающих современным требованиям вирусологической науки. Достоверная диагностика и идентификация вирусных и фитоплазменных патогенов в свою очередь способствует оптимальному выбору эффективных защитных мероприятий.

Следует признать, что пока не существует прямых действенных мер защиты от фитовирусов. Успехи селекции в получении устойчивых к важнейшим распространенным вирусам сортов практически отсутствуют.

Культивирование меристем in vitro является эффективным методом оздоровления земляники от вирусов, но не всегда обеспечивает полного освобождения от них. Поэтому имеющийся относительно большой выбор препаратов с антивирусным действием и способов их применения открывает новые возможности для усиления ингибирования вирусов и индуцирования защитных механизмов самих растений.

Только использование комплексной системы производства безвирусного посадочного материала земляники и его государственная сертификация на основе действенной законодательной базы создают реальные возможности для эффективной защиты этой культуры от вирусов.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Белошапкина, Ольга Олеговна, Москва

1. Абраменко, Н.М. Получение безвирусной суперэлиты земляники методом культуры верхушечных меристем / Н.М. Абраменко / Вирусные болезни плодовых, ягодных культур и винограда в Молдавии. Кишинев: Картя Молд. - 1973. - Вып. 2. - С. 25-50.

2. Абраменко, Н.М. Вирусные болезни земляники и метод получения здорового посадочного материала / Н.М. Абраменко, Н.В. Леманова, И.Г. Цуркан // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. 1973. -N4.-С. 39-40.

3. Абраменко, Н.М. Разработка методов получения исходного безвирусного материала земляники / Н.М. Абраменко, И.Г. Цуркан / Культура земляники в СССР. М.: Колос. - 1972. - С. 382-384.

4. Адомайтис, Е.А. Вариабельность некоторых морфологических признаков сортов земляники при оздоровлении и хранении in vitro / Е.А. Адомайтис / Информ. бюлл. ВИР. СПб. - 2000. - Вып. 239. - С. 24-26.

5. Александрова, Г.Д. Сорта земляники селекции Ленинградской плодоовощной опытной станции. Каталог мировой коллекции ВИР / Г.Д. Александрова, Е.В. Мажоров, Г.А. Копыл / 1994. СПб. - Вып. 651. - 25 с.

6. Алехно, Г.Д. Клональное микроразмножение роз / Г.Д. Алехно, В.А. Высоцкий // Физиология и биохимия культурных растений. М. - 1986. -Вып. 18, N5.-С.489-493.

7. Амосова, Н.В. Особенности системы удобрения маточных растений земляники в условиях интенсивного размножения / Н.В. Амосова / Дис.канд. с.-х. наук: 06.01.04. -М.: МСХА. -2003. 248 с.

8. Айтжанова, С.Д. Селекция земляники на высокий и стабильный уровень продуктивности / С.Д. Айтжанова, В.И. Андронов // Плодоводство и ягодоводство России. 1995. - Т.2. - С. 85-89.

9. Артюшин, A.M. Цеолиты и гидрогели при микроклональном размножении земляники / A.M. Артюшин, О.О. Белошапкина, Г.П. Епишина, JI.K., Пржевальская, Т.М. Бычкова // Достижения науки и техники АПК. М.: Агропромизд. - 1991. - N 9. - С. 19-20.

10. Аршава, Н.В. Идентификация компонентов вирусного комплекса, персистирующих в культурных растениях рода Allium / Н.В. Аршава, В.К. Вишниченко, Е.В. Рябов //С.х. биология.- 1996.-N 5.-С. 105-111.

11. Атабеков, И.Г. Биотехнологические методы в создании безвирусного растениеводства в СССР / И.Г. Атабеков // Вестник АН СССР. 1988. - N 6.-С. 19-25.

12. Атабеков, И.Г. Вирус-специфическая транспортная функция и конструирование устойчивых к вирусам трансгенных растений / И.Г. Атабеков, М.Э. Тальянский, С.И. Малышенко // Новые методы биотехнологии растений. Пущино. - 1993. - С. 6.

13. Атрощенко, Г.П. Оздоровление посадочного материала земляники / Г.П. Атрощенко, Н.Г. Соколова, Е.В. Михайлова / Защита с.-х. культур от вредителей, болезней и сорняков. -JI. 1991. - С. 75-78.

14. Бабоша, Л.В. Олигоаденилаты и олигоаденилат синтетаза растений картофеля в защитных реакциях против вирусного патогена / Л.В. Бабоша, Л.Н. Трофимец, М.Е. Ладыгина // Доклады АН СССР. 1990. - Т. 313, N 1. -С. 12-17.

15. Бакун, Т.В. Особенности микроклонального метода размножения земляники / Т.В. Бакун // Проблемы вегетативного размножения в садоводстве. М.: ТСХА . - 1985. - С. 122-128.

16. Балашова, И.Т. Антивирусная активность стероидных гликозидов и практическое использование их в целях химиопрофилактики вирусныхболезней растений / И.Т. Балашова / Автореф. дис.канд. биол. наук. -Тбилиси. 1984.- 13с.

17. Басак, В. Термотерапия пораженных вирусами растений земляники и малины / В. Басак / Технология выращивания безвирусного посадочного материала плодовых культур и винограда. Кишинев: Штиинца. - 1977. -С. 49-54.

18. Беликов, С.И. Молекулярно-генетические подходы к изучению РНК-содержащих вирусов / С.И. Беликов/ Автореф. дис.докт.биол. наук. -Иркутск.-2000.-41с.

19. Белошапкина, О.О. Биологическая продуктивность и урожайность земляники при вирусной инфекции / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. 1985а.-N5.- С. 139-145.

20. Белошапкина, О.О. Сортовая реакция земляники на оздоровление методом культуры меристем / О.О. Белошапкина // Сб. науч. трудов. Проблемы вегетативного размножения в садоводстве. М.:ТСХА.- 1985в. -С.119-122.

21. Белошапкина, О.О. Тестирование земляники методом прививки отрезками черешка / О.О. Белошапкина // Сб. науч. трудов. Интенсификация возделывания ягодных культур. JI.: ЛСХИ. - 1989. - С. 45-49.

22. Белошапкина, О.О. Влияние температуры на результаты тестирования земляники в условиях теплицы / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. -1990.-N3.-C. 176-179.

23. Белошапкина, О.О. Особенности поражения грибными заболеваниями оздоровленных от вирусов растений земляники / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. 1997. - Вып. 2. - С. 113-120.

24. Белошапкина, О.О. Реакция земляники на обработку гамма-лучами / О.О. Белошапкина // Известия ТСХА. 1998. - Вып. 3. - С. 156-161.

25. Белошапкина, О.О. Распространенность вирусных болезней земляники в Московской области / О.О. Белошапкина // Сб. научных трудов ТСХА. -1999.-Вып. 271.-С.41-49.

26. Белошапкина, О.О. Использование метода полимеразной цепной реакции для диагностики некоторых групп вирусов земляники / О.О. Белошапкина, Н.В. Аршава // Известия ТСХА. 2004. - Вып. 2. - С. 60-67.

27. Белошапкина, О.О. Вредители и болезни земляники / О.О. Белошапкина, Е.Р. Батрак // Защита и карантин растений. 2002. - N 5. -С. 54-55; N6. -С. 42-44.

28. Белошапкина, О.О. Защита земляники в питомнике высших репродукций / О.О. Белошапкина, JI.B. Безобразнова // Защита и карантин растений. 2001. - N 9. - С.42-43.

29. Белошапкина, О.О. Возможные растения-индикаторы на вирусы земляники / О.О. Белошапкина, Т.И. Волкова // Сб. научных трудов ТСХА. Проблемы интенсификации садоводства в НЧ зоне РСФСР. М. - 1989. -С. 77-80.

30. Белошапкина, О.О. Влияние ингибиторов вирусов на частоту появления эмбриональных леталей у Arabidopsis thaliana / О.О. Белошапкина, В.А. Высоцкий, JI.M. Хайбулина // Сб. научных трудов ТСХА. Проблемы интенсификации плодоводства. М. 1987. - С. 48-52.

31. Белошапкина, О.О. Использование биопрепаратов и регуляторов роста при защите земляники от вертициллеза / О.О. Белошапкина, Д.Н. Говоров // Известия ТСХА.- 2000. Вып. 1. - С. 116-128.

32. Белошапкина, О.О. Использование биопрепаратов при клональном микроразмножении земляники / О.О.Белошапкина, И.В. Жаркова // Сб. научных трудов ТСХА. 2001. - Вып. 273, Ч. 2. - С. 284-289.

33. Белошапкина, О.О. Генетические источники позднецветущей земляники садовой и подготовка их для селекционной работы с применением культуры изолированных меристем / О.О. Белошапкина, И.В. Попова//Плодоводство и ягодоводство России.-200l.-T. 8.-С.71-78.

34. Белошапкина, О.О. Результаты изучения антивирусных свойств ретардантов на землянике / О.О. Белошапкина, В.В. Фаустов, Н. Захави // Известия ТСХА. N 4. - 1991. - С. 171 -175.

35. Белошапкина, О.О. Использование ингибиторов вирусов при оздоровлении земляники методом культуры верхушечных меристем / О.О. Белошапкина, В.А. Шмыгля // Известия ТСХА. 1986. -N 5. - С. 116-118.

36. Белошапкина, О.О. Здоровый посадочный материал земляники основа успеха / О.О. Белошапкина, И.И. Ханжиян, Е.Р. Батрак // Защита и карантин растений. - 2001. - N 8. - С. 23-24.

37. Бешнов, Г.В. Магнитно-импульсная обработка посадочного материала садовых растений / Г.В. Бешнов, М.Т. Упадышев, В.И. Донецких и др. // Садоводство и виноградарство. 2002. - N 1. - С. 15-18.

38. Бивол, Т.Ф. Диагностика вирусных заболеваний плодовых культур на травянистых индикаторах / Т.Ф. Бивол, Г.В. Лысикова // Тр. Молд. НИИ садоводства, виноградарства и виноделия. 1970. - Вып. 17. - С. 338-342.

39. Биотехнология растений: культура клеток / Пер. с англ. В.И. Негрука, с предисл. Р.Г. Бутенко. М.: Агропромиздат. - 1989. - 280 с.

40. Биотехнология сельскохозяйственных растений / Пер. с англ. В.И. Негрука. М.: Агропромиздат. - 1987. - 301 с.

41. Бирюзова, В.П. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов / В.П. Бирюзова / М. 1963. - 92 с.

42. Блоцкая, Ж.В. Биологические основы устойчивости картофеля к вирусным болезням / Ж.В. Блоцкая / Автореф. дис. докт. биол. наук. J1. - 1984.- 40 с.

43. Бобырь, А.Д. Комбинированное применение иманина совместно с другими ингибиторами фитопатогенных вирусов. Фитонциды / А.Д. Бобырь / Киев: Наукова думка. 1972. - С. 143-144.

44. Бобырь, А.Д. Химиопрофилактика и терапия вирусных болезней растений / А.Д. Бобырь / Киев: Наукова думка. 1976. - 255 с.

45. Богуш, Л.Ю. Влияние некоторых веществ на инактивацию вируса некротической кольцевой пятнистости в сеянцах черешни / Л.Ю. Богуш // Вирусные заболевания культурных растений в Молдавии. Кишинев: Штиинца. - 1984. - С. 20-25.

46. Болезни и вредители растений-интродуцентов / Ю.В. Синадский, Э.Ф. Козаржевская, Л.Н. Мухина и др. М.: Наука. - 1990. - 272 с.

47. Бондарь, И.С. Влияние никфана на продуктивность овощных растений / И.С. Бондарь. // Тезисы док. 4-й междунар. конф. Регуляторы роста и развития растений. М. - 1997. - С. 156.

48. Борисенко, С.И. Антивирусное действие экстракта зверобоя на картофеле «in vitro» / С.И. Борисенко, П.И. Лодочкин, В.А. Шмыгля // Тезисы докл. всесоюз. совещания по вирусным болезням растений. -Вильнюс. 1984. - С. 46-47.

49. Борисенко, С.И. Применение природных и синтетических ингибиторов вирусов в оздоровлении картофеля методом культуры апексов / С.И. Борисенко, В.А. Шмыгля, Г. Шустер // Интегрированная защита растений. -М.- 1985 а.-С. 41-44.

50. Борисенко, С.И. Эффективность оздоровления картофеля методом культуры апексов с помощью ингибиторов вирусов / С.И. Борисенко, В.А. Шмыгля, Г. Шустер//Доклады В АСХНИЛ.- 1985 в.-N 10.-С. 10-12.

51. Борисова, А.А. Ускоренное размножение плодовых культур в средней полосе России / А.А. Борисова / Дис. докт. с.-х. наук, в форме научного доклада : 06.01.07. М. - 1999. - 51 с.

52. Борхсениус, С.Н. Рекомбинантная плазмидная ДНК pMgl6 для обнаружения микоплазменных заражений / С.Н. Борхсениус, Н.А. Меркулова, О.А. Чернова / Авторское свидетельство 1413960. 1988.

53. Борхсениус, С.Н. Обнаружение и идентификация микоплазменных инфекций с помощью ДНК-ДНК-гибридизации / С.Н. Борхсениус, О.А. Чернова, Н.А. Меркулова, А.Ф. Аре // Цитология. 1987. - Т. 29, N 8. - С. 934-941.

54. Борхсениус, С.Н. Микоплазмы / С.Н. Борхсениус, О.А. Чернова, В.М. Чернов, М.С. Вонский / СПб.: Наука. 2002. - 320 с.

55. Борьба с вирусными болезнями растений / Пер. с нем. Г.И. Лойдиной. Ред. И.Г. Атабеков и В.А. Шмыгля. М.: Агропромиздат. 1986. - 480 с.

56. Булухто, Н.П. Энтомофауна агроценозов земляники в Тульской области / Н.П. Булухто, А.А. Короткова, О.В. Ципиринг / Тульский госпедуниверситет имени Л.Н. Толстого. Тула. - 1999. - Рукопись деп. в ВИНИТИ АН СССР, N 3437- В99. - 20 с.

57. Бутенко, Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р.Г. Бутенко / М.: Наука. 1964. - 272 с.

58. Бутенко, Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений / Р.Г. Бутенко / М.: Наука. 1975.

59. Бутенко, Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике / Р.Г. Бутенко // С.-х. биология. -1979. N 3. - С. 306-315.

60. Бутенко, Р.Г. Культура тканей и клеток растений в сельскохозяйственной науке и практике / Р.Г. Бутенко // Результаты научных исследований в практике сел. хозяйства. М. - 1982. - С. 13-23.

61. Вайшер, Б. Знакомство с нематодами. Общая нематология. Учебник для студентов / Б. Вайшер, Д.Д.Ф. Браун / Pensoft and Scientific Press Ltd. -София Москва. - 2001. - 206 с.

62. Вартапетян, А.Б. Полимеразная цепная реакция / А.Б. Вартапетян // Молекулярная биология. М.: Наука. 1991. - Т. 25, Вып. 4. - С. 926-936.

63. Вердеревская, Т.Д. Вирусные, микоплазменные заболевания плодовых культур / Т.Д. Вердеревская / Кишинев: Штиинца. 1985. - 175 с.

64. Вердеревская, Т.Д. Получение и ускоренное размножение безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных культур / Т.Д. Вердеревская, Н.М. Абраменко // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. -1984.-N6.-С. 26-28.

65. Вердеревская, Т.Д., Маринеску, В.Г. Вирусные и микоплазменные заболевания плодовых культур и винограда / Т.Д. Вердеревская, В.Г. Маринеску / Кишинев: Штиница. 1985. - 311 с.

66. Веретенникова, Н.П. Получение оздоровленных клонов земляники / Н.П. Веретенникова // Плодоводство и ягодоводство России. 1998. - Т. V.-С. 91-97.

67. Винницкая, О.П. Эффективность оздоровления посадочного материала земляники / О.П. Виницкая, П.М. Малыхин, В.А. Шмыгля // Плодоовощное хозяйство. 1987. -N 3. - С. 42-43.

68. Вирусные болезни ягодных культур и винограда / Ред. К.С. Сухов. Пер. с англ. Н.А. Емельянова, В.Г. Трушечкин М.: Колос. - 1975. - 383 с.

69. Власов, Ю.И. Стратегия и тактика защиты растений от вирусных заболеваний / Ю.И. Власов // Защита растений. 1988. N 9. - С. 26-27.

70. Власов, Ю.И. Вирусные и микоплазменные болезни растений / Ю.И. Власов / М.: Колос. 1992. - 207 с.

71. Власов, Ю.И., Геворкян, З.Г. Микоплазмы как патогены растений / Ю.И. Власов, З.Г. Геворкян / Труды ВНИИЗР. Л.: ВИЗР. - 1979. - С. 313.

72. Власов, Ю.И. Ахолеплазмы патогены растений / Ю.И. Власов, Л.П. Гените, Л.Н. Самсонова. / Вильнюс. - 1985. - 76 с.

73. Власов, Ю.И. Фитомикоплазмы: классификация, диагностика и меры борьбы / Ю.И. Власов, Л.Н. Самсонова, Г.Д. Каверзнева / М. 1987.- 48 с.

74. Власова, Э.А. Защита ягодных культур от болезней / Э.А. Власова, Э.И. Ларина / Л.: Ленизд. 1972. - С. 72.

75. Волкова, Т.И. Земляника / Т.И. Волкова / Культурные растения. М.: Наука.-1981.-С. 142-161.

76. Волосов, Ю.А. Методы оценки качества плодов и овощей / Ю.А. Волосов/ Учебное пособие по курсу хранения и переработки плодов и овощей. М.: ТСХА. - 1971. - 61 с.

77. Высоцкий, В.А. Клональное микроразмножение растений. / Культура клеток растений и биотехнология / В.А. Высоцкий / М.: Наука. 1986. - С. 91-102.

78. Высоцкий, В.А. О генетической стабильности при клональном размножении плодовых и ягодных культур / В.А. Высоцкий // С.-х. биология. 1995. - Т. 5. - С. 57-63.

79. Высоцкий, В.А. Биотехнологические методы в системе производства посадочного материала и селекции плодовых и ягодных растений / В.А. Высоцкий / Автореф. дис .докт. с.-х. наук: 06.01.07. М. - 1998. - 44 с.

80. Высоцкий, В.А. Возможности создания коллекций ценных форм плодовых и ягодных растений in vitro / В.А. Высоцкий // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т. VII. - С. 56-61.

81. Высоцкий, В.А. Регенерационнная способность верхушек черной смородины под влиянием различных ростовых веществ и условий культивирования / В.А. Высоцкий, В.Г. Трушечкин, Ю.Г. Попов // С.-х. биология. 1979. - Т. 11, N 6. - С. 879-884.

82. Высоцкий, В.А. Производство безвирусного посадочного материала земляники / В.А. Высоцкий, А.П. Походенко, И.Г. Трушечкин // Садоводство. 1984.-N 11.-С. 19-21.

83. Гайдук, П.П. Изучение антивирусного действия некоторых химических соединений с целью защиты семенного картофеля от вирусных болезней / П.П. Гайдук/ Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11: М 1982. - 12 с.

84. Гельцер, Ф.Ю. Микробиологическая теория иммунитета / Ф.Ю. Гельцер // Защита растений. 1981. - N 9. - С. 22-24.

85. Гельцер, Ф.Ю. Симбиоз с микроорганизмами основа жизни растений / Ф.Ю. Гельцер. / М.: МСХА. - 1990. - 133 с.

86. Гиббс, А. Основы вирусологии растений / А. Гиббс, Б. Харисон / М.: Мир.- 1978.-429с.

87. Гиоргадзе, Р.Д. Вирусные и микоплазменные болезни лекарственного растения Catharanthus roseus и обоснование мер борьбы с ним / Р.Д. Гиоргадзе / Автореф. дис.канд. биол. наук:06.01.11. Тбилиси. - 1985. -20 с.

88. Гнутова, Р.В. Серология и иммунохимия вирусов растений / Р.В. Гнутова / М.: Наука. 1993. - 301 с.

89. Говорова, Г.Ф. Селекция земляники на устойчивость к болезням в условиях Северного Кавказа / Г.Ф. Говорова / Автореф. дис.докт. с.-х. наук в форме научного доклада. СПб. - 1992. - 45 с.

90. Говорова, Г.Ф. Земляника и клубника / Г.Ф. Говорова, Д.Н. Говоров / М.: ЭКСМО-Пресс. 2001. - 192 с.

91. Горшкова, И.О. Вирусные болезни земляники в Белоруссии / И.О. Горшкова // Плодоводство. 1986. - Т. 6. - С. 59-62.

92. Гроздинский, A.M. Краткий справочник по физиологии растений / A.M. Гроздинский, Д.М. Гроздинский / Киев: Наукова думка. 1973. - С. 433434.

93. Деменко, В.И. Размножение супер-суперэлитного материала земляники / В.И. Деменко / Автореф. дис.канд. с.-х. наук: 06.01.07. М. - 1978.- 25 с.

94. Демчинская, А.В. Модульный подход к изучению механизма ПЦР в реальном времени / А.В. Демчинская // Сб. научных трудов конф. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. М.: ВНИИСБ.-2004.-С. 11-13.

95. Долгих, В.А. Продуктивность земляники, выращенной из апексов // Садоводство и виноградарство Молдавии / В.А. Долгих / Кишинев: Картя Молдав. 1988. - N 7. - С. 24-25.

96. Долгих, В.А. Оздоровление посадочного материала от вирусных болезней как резерв повышения урожая в плодоводстве / В.А. Долгих / Оценка и использование ресурсов в плодоводстве и виноградарстве Казахстана. Алма-Ата. - 1989. - С. 89-95.

97. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов / М.:Агропромиздат. 1985. - 429 с.

98. Дрягина, И.В. Радиация в селекции плодовых и цветочно-декоративных культур / И.В. Дрягина / М.: Россельхозиздат. 1974. - 136 с.

99. Дрягина, И.В. Экспериментальный мутагенез садовых растений / И.В. Дрягина, А.В. Мурин, В.Н. Лысиков / Кишинев:Штиинца. -1981. С.31-32.

100. Дьяков, Ю.Т. Фитопатогенные вирусы / Ю.Т. Дьяков / М.: МГУ. -1984.- 128 с.

101. Дьяков, Ю.Т. Общая и молекулярная фитопатология / Ю.Т. Дьяков, О.Л. Озерецковская, В.Г. Джавахия и др. / М.: Общество фитопатологов. -2001.-301 с.

102. Евсеева, Р.П. Эффективность ионизирующего излучения в культуре тканей плодовых растений / Р.П. Евсеева / Тезисы докл. IV съезда по радиационным исследованиям. Радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность. М. - 2001. - T.III. - С.832

103. Егоров, A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров, А.Н. Дзантиев и др. / М.: Высшая школа. 1991. - 228 с.

104. Елякова, Л.А. Защитное действие антивира, полученного ферментативной трансформацией ламинарина, на растениях табака против табачной мозаики / Л.А.Елякова, Л.А. Лапшина// Докл. PAH.-l 994.-С. 711.

105. Ефименко, Д.И. Совершенствование технологии выращивания здорового посадочного материала земляники высших категорий качества в условиях защищенного грунта / Д.И. Ефименко / Автореф. дис.,канд. сх. наук: 06.01.07. М. - 1988. - 23 с.

106. Жаркова, И.В. Оздоровление новых сортов земляники от вирусной инфекции методом верхушечных меристем / И.В. Жаркова, О.О. Белошапкина, Л.И. Чефранова // Сб. научных трудов ТСХА. Защита растений в условиях химизации с.х. 1982. - С. 79-83.

107. Жаркова, И.В. Влияние некоторых факторов на микроразмножение земляники / И.В. Жаркова, Л.И. Чефранова // Сб. научных трудов ТСХА. Интенсивные способы выращивания посадочного материала садовых культур.- 1984.-С. 133-138.

108. Жеребчук, Л.К. Влияние гибберелина на РНК-азную активность в листьях здоровых и пораженных Х-вирусом картофеля / Л.К. Жеребчук, З.М. Олевинская / Вирусные болезни с.-х. растений и меры борьбы с ними. -Л. 1978. - С. 166-167.

109. Жеребчук, Л.К. Изменение активности рибонуклеазы листьев растений картофеля под воздействием вируса X и гиббереллина / Л.К. Жеребчук, З.М. Олевинская / Вирусные болезни растений и меры борьбы с ними. -Владивосток : ДВНЦ АН СССР. 1980. - С. 21 -25.

110. Жук, И.М. Действие пуриновых оснований и их аналогов на репродукцию У-вируса картофеля в культуре тканей Datura stromonium / И.М. Жук, А.Ф. Диденко, Н.И. Горбаренко //Биол. науки. 1970. - N 7. -С. 108-110.

111. Журавлев, Ю.Н. Фитовирусы в целом растении и в модельных системах / Ю.Н. Журавлев / М.: Наука. 1979. - 247 с.

112. Закотин, B.C. Промышленное производство земляники / B.C. Закотин / М.: Агропромиздат. 1988. - 156 с.

113. Зарипова, В.М. Фитосанитарное состояние насаждений земляники садовой в Башкорстане и пути его улучшения / В.М. Зарипова / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.07.11. М. - 2002. - 21 с.

114. Захави, Н. Разработка технологии содержания маточных растений земляники при выращивании оздоровленного посадочного материала на основе применения ретардантов / Н. Захави / Автореф. дис. . канд. биол. наук: 06.01.07. М. - 1992. - 21 с.

115. Зиновьева, С.В. Иммунобиологические механизмы коадаптации и эволюция паразито-хозяинных отношений растений и нематод / С.В. Зиновьева / Автореф. дис. докт. биол. наук: 03.00.19.-М. 1999.-58 с.

116. Зиновьева, С.В. Молекулярные механизмы взаимодействия растений и паразитических нематод: теоретические и прикладные аспекты // Паразитические нематоды растений и насекомых / С.В. Зиновьева / М.: Наука. 2004. - С. 50-85.

117. Зубов, А.А. О систематике рода Fragaria / А.А. Зубов // Бюллетень научной информации ЦГЛ. Мичуринск. - 1990. - Вып. 48. - С. 30-33.

118. Зубов, А.А. Перспективы улучшения садовой земляники / А.А. Зубов / Состояние и проблемы садоводства России. НИИСС, Новосибирск.1997.-Ч. 1.-С. 295-300.

119. Игнатьева, И.П. Земляника / И.П. Игнатьева / Плодоводство и овощные культуры СССР. М.: Агропромиздат. - 1990. - 81 с.

120. Ильинская, Л.И. Продукты липоксигеназного окисления жирных кислот как сигнальные молекулы в индуцировании устойчивости растений / Л.И. Ильинская, О.Л. Озерецковская // Прикл. биохимия и микробиология.1998.-Т. 34, N5.-С. 467-479.

121. Исаев, С.И. Современные методы селекции плодовых и ягодных культур / С.И. Исаев / М.: Знание. 1979. - С. 45-54.

122. Калашян, Ю.А. Изучение вирусов шарки сливы и хлоротической пятнистости листьев яблони / Ю.А. Калашян / Автореф. дис. . канд. с.-х. наук: 06.01.11.- Кишинев. 1977. - 19 с.

123. Кандыба, Д.Н. Изучение возможности использования электрофореза белков и нуклеиновых кислот для диагностики вирусных и вирусоподобных болезней ягодных культур / Д.Н. Кандыба /Автореф. дис. . канд. с.-х. наук: 06.01.11. М. - 1999. - 22 с.

124. Каплан, И.Б. Индукция PR-белков и приобретенной противовирусной устойчивости под влиянием кинетина в растениях табака / И.Б. Каплан, С.И. Малышенко, Э.Р. Шакулова и др. // Физиология растений. 1988. - Т. 35, Вып. 5. - С. 848-856.

125. Карпов, А.В. Электрофорез белков, как средство таксономического анализа фитопатогенных микоплазм / А.В. Карпов, И.Г. Скрипаль, Л.П. Малиновская // Вирусные болезни с.-х. культур. Труды ВАСХНИЛ. М. -1980.-С. 50-56.

126. Карпова, О.В. Адаптация пробирочных растений ягодных культур и последействие криосохранения / О.В. Карпова / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.01.07. М. - 2001. - 21 с.

127. Карпова, О.В. Повышение укореняемости и адаптации пробирочных растений ягодных культур с помощью элиситоров / О.В. Карпова / Тезисы докл. Всерос. научно-практической конф. Брянск. - 1999. - С. 11.

128. Карпова, О.В. Возможность использования элиситоров при клональном микроразмножении ежевики / О.В. Карпова, В.А. Высоцкий // Плодоводство и ягодоводство России. 1999. - Т.VI. - С.84-87.

129. Катинская, Ю.К. Земляника / Ю.К. Катинская / Л.-М.: Сельхозиздат. -1961.- 166 с.

130. Кашин, В.И. Земляника высокорентабельная культура / В.И. Кашин, И.М. Куликов, А.С. Косякин // Садоводство и виноградарство. - 1993. - N 4.-С. 2-5.

131. Кашин, В.И. Новые направления в развитии питомниководства / В.И. Кашин, А.А. Борисова // Плодоводство и ягодоводство России. Сб. научных работ ВСТИСП. М. - 1996. - Т. 3. - С.73-83.

132. Квитко, К.В. Асептическая культура Arabidopsis thaliana, перспективы ее использования в ботанических исследованиях / К.В. Квитко // Вестник ЛГУ.-1960.-С. 47-56.

133. Кеглер, X. О многосторонности устойчивости плодовых культур к вирусам и фитоплазмам / X. Кеглер // Сб. научных трудов международ, конф. Приоритетные направления в селекции и семеноводстве с/х растений в XXI веке. М. - 2003. - С. 381 -388.

134. Келдыш, М.А. Методические указания по оценке устойчивости плодовых и ягодных культур к вирусным и микоплазменным заболеваниям. НИЗИСНП / М.А. Келдыш / М. 1979. - 16 с.

135. Келдыш, М.А. Методические указания по выявлению и идентификации вирусов и микоплазм, поражающих плодовые и ягодные культуры / М.А. Келдыш, Ю.И. Помазков / НИЗИСНП. М. - 1980. - 25 с.

136. Келдыш, М.А. Формирование и развитие комплекса вирус-переносчик-растение в искусственных экосистемах / М.А. Келдыш / Автореф. дис. д-ра биол. наук: 06.01.11. -JI., Пушкин. 1989.-37 с.

137. Киртбая, Е.К. Биологические основы селекции ягодных культур в условиях Северного Кавказа / Е.К. Киртбая / Автореф. дис. д-ра с.-х. наук: 06.01.07. М. - 1989. - 40 с.

138. Кичина, В.В. Современные направления селекции земляники / В.В. Кичина, И.В. Попова // Культура земляники в СССР. Доклады симпозиума. М. - 1972. - С. 190-194

139. Кокорев, Н.В. Клонирование гена белка оболочки вируса шарки сливы в экспрессирующий вектор / Н.В. Кокорев, Т.Е. Кошкина / Сб. науч. тр. конф. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. -М.: ВНИИСБ.-2004.-С. 16-17.

140. Конарева, Т.Н. Применение рекомбинантных антигенов для диагностики фитовирусов / Конарева Т.Н., Аршава Н.В., Рябов Е.В. и др. /

141. Современные методы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. Методич. рекомендации. М.:МСХА. -1998. - С.27-41.

142. Корнацкий, С.А. Культура тканей как модель для изучения адаптационных процессов в онтогенезе плодовых и ягодных растений / С.А. Корнацкий // Плодоводство и ягодоводство России. 1996. - С. 84-89.

143. Коровкин, О.А. К вопросу о разнокачественности пазушных почек побега / О.А. Коровкин / Докл. науч. конф. молодых ученых ТСХА: Депонир. в ВНИИТЭСХ. 1986. - N. 17-86 деп. - 4 с.

144. Коровкин, О.А. О закономерностях онтогенеза клона на примере столонообразующих травянистых поликарпиков / О.А. Коровкин / Автореф. дис. д-ра биол. наук: 03.00.05. -М. 1999.-36 с.

145. Коровкин, О.А. Основные термины и понятия морфологии высших растений / О.А. Коровкин / М.: МСХА. 2003. - 100 с.

146. Коровкин, О.А. Морфогенез Fragaria ovalis (Rydb.) при выращивании из семян / О.А. Коровкин, Н.В. Ухов // Известия ТСХА. 1994. - Вып. 2. -С. 50-62.

147. Королев, М.Б. Электронно-микроскопические методы выявления вирусов / М.Б. Королев / Электронная микроскопия вирусов и вирусных инфекций. Итоги науки и техники. Сер. Вирусология. М.: ВИНИТИ. -1980.-С. 114-157.

148. Косаковская, О.И. Серологический метод изучения непо-вирусов плодовых культур и винограда / О.И. Косаковская / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.01.11.- Самохваловичи, Минская обл. 1981. - 22 с.

149. Кошельник, И.И. Изучение действия гамма-лучей на некоторые сорта винограда / И.И. Кошельник, A.JI. Пильчук // Мутагенез с.-х. растений. -Кишинев: Штиинца. 1958. - С. 213-219.

150. Крылов, А.В. Об ингибирующем действии фенольных соединений и их роль в иммунитете растений к вирусам / А.В. Крылов, J1.B. Усольцева // Тр. Биолого-почвенного института ДВ отделения АН СССР. -Владивосток. 1986. - Т. 40 (143). - С. 5-20.

151. Крылова, Н.В. Проникают ли вирусы в апикальную меристему растений? / Н.В. Крылова, В.В. Степаненко / Труды Биолого-почвенного Института. М. - 1971. - С. 4.

152. Крылова, Р.В. Методы культуры апикальной меристемы и культуры ткани в вирусологии / Р.В. Крылова / Вирусные болезни растений Дальнего Востока. Владивосток: ДВНЦ АН СССР. - 1974. - С. 5-9.

153. Кузнецова, А.А. Способы распространения вирусов, поражающих плодово-ягодные культуры / А.А. Кузнецова // С.-х. за рубежом. 1983. -N9.-С. 25-29.

154. Кузнецова, А.А. Вирусные и микоплазменные болезни ягодных культур / А.А. Кузнецова // Садоводство. 1985. - N 6. - С. 23-24.

155. Кузнецова, А.А. Нематоды как переносчики вирусов растений / А.А. Кузнецова//Защита растений. 1988.- N1. -С. 54-55.

156. Кульнев, А.И. Многоцелевые стимуляторы защитных реакций, роста и развития растений / А.И. Кульнев, Е.А. Соколова/ Пущино. 1997, - 97 с.

157. Кульков, О.П. Использование культуры in vitro в садоводстве / О.П. Кульков, Н.П. Климкина / Труды НИИ садоводства, виноградарства и виноделия имени Шредера. 1988. - Т. 50. - С. 57-67.

158. Кутсаманова, И.Н. Совершенствование приемов защиты картофеля от вирусных болезней / И.Н. Кутсаманова / Автореф. дис.канд. биол. наук: 06.01.11.-М.- 1999.-16с.

159. Кухарчик, Н.В. Роль экспланта при инициации культуры in vitro некоторых плодовых и ягодных растений / Н.В. Кухарчик, С.Э. Семенас, М.С. Чиковани и др. //Плодоводство.- Мичуринск-1999. Т. 12. - С. 25-28.

160. Ладыгина, М.Е. Физиолого-биохимические механизмы вирусного патогенеза у растений / М.Е. Ладыгина, Б.А. Рубин, Э.А. Таймла / Штаммы вирусов растений. Владивосток. - 1977. - С. 20-30.

161. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин / М.: Высшая школа. 1980.- 294 с.

162. Лахматова, И.Т. Индукция устойчивости растений к вирусам биологически активными веществами (иммунизация) / И.Т. Лахматова // С.-х. биология. 1992. - N 3. - С. 13-22.

163. Лахматова, И.Т. Устойчивость сливы к вирусу шарки / И.Т. Лахматова / Автореф. дис. докт. биол. наук: 06.01.11. -М. 1997.-48 с.

164. Лебедев, В.Г. Генно-инженерные методы в селекции груши обыкновенной (Pyrus communis L.) на устойчивость к биотическим и абиотическим факторам / В.Г. Лебедев / Автореф. дис. канд. биол. наук. -Пущино. 2000. - 23 с.

165. Лейке, Г. Использование культуры тканей и органов в селекции растений и производстве посадочного материала / Г. Лейке, Р. Лабес, К. Эртель и др. / М.: Колос. 1980. - 78 с.

166. Лукьянова, Е.А. Изучение возможности использования бактериальных рибонуклеаз для хемотерапии в культуре in vitro / Е.А. Лукьянова / Молодые ученые садоводству России. Тезисы докл. Всеросс. совещания. -М.- 1995.-С. 117-119.

167. Лукьянова, Е.А. Особенности производства безвирусного посадочного материала земляники и малины в ЦЧР / Е.А. Лукьянова / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.01.07. Мичуринск. - 1998 а. - 26 с.

168. Лукьянова, Е.А. Эффективность моноклональных антител и поликлональных сывороток при диагностике вирусов AM и ОМ на землянике и малине / Е.А. Лукьянова / Пути повышения устойчивости садоводства. Мичуринск. - 1998 б. - С. 203-204.

169. Лукьянова, Е.А. Эффективность моно- и поликлональных антител в ELISA тесте / Е.А. Лукьянова // Аграрная наука. 1998 в. - N 7. - С. 36.

170. Малыхин, П.М. Диагностика вирусов земляники и усовершенствование методов ее оздоровления / П.М. Малыхин / Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.07. М. - 1987. - 18 с.

171. Малыхин, П.М. Эффективность синтетических препаратов отечественного производства в защите земляники от вирусных болезней /

172. П.М. Малыхин, В.А. Шкаликов, П.С. Хохлов // Известия ТСХА. 1988. -N2.-С. 110-111.

173. Магницкий, К.П. Диагностика потребности растений в удобрениях / К.П. Магницкий / М.: Московский рабочий. 1972. - 272 с.

174. Маниатис, Т. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Д. Сэмбрук/М.: Мир.- 1984.-432 с.

175. Маркиетон, И. Экономические преимущества применения регулятора роста «Пике» / И. Маркиетон // Защита растений. 1989. - N 4. - С. 24.

176. Мартынова, Г.П. Влияние триходермина на поражение растений корневыми гнилями и урожайность ячменя на северо-востоке РФ / Г.П. Мартынова / Автореф. дис. к. б. н. 06.07.11. М. - 1998. - 24 с.

177. Мартынова, Р.В. Использование рибонуклеазы для ингибирования вирусных инфекций в растении / Р.В. Мартынова, В.Г. Рейфман, В.Р. Руцкова / Вирусные растения Дальнего Востока. Владивосток. - 1974. -Вып. 5, Т. 21.-С. 79-83.

178. Мелешко, Н.И. Основные болезни земляники садовой в Беларуси. (Грибные болезни) / Н.И. Мелешко / Актуал. пробл. фитовирусологии и защиты растений.- Минск.- 1997.-С. 124-125.

179. Метлицкий, О.З. Нематоды в питомниках земляники / О.З. Метлицкий, П.Г. Радченко, Н.А. Холод // Защита растений. 1986. - N 2. - С. 30-31.

180. Метлицкий, О.З. Современное мировое производство плодов и ягод / О.З. Метлицкий // Плодоводство и ягодоводство России. 1998. - Т. 5. -С.20-26.

181. Метлицкий, О.З. Основы защиты растений в ягодоводстве от вредителей и болезней / О.З. Метлицкий, К.В. Метлицкая, А.С. Зейналов и др./ М.: ВСТИСП. 2005. - 381 с.

182. Метлицкая, К.В. Диагностика вирозов земляники в средней полосе России / К.В. Метлицкая // Плодоводство и ягодоводство России. 2003. -Т.Х.-С. 275-280.

183. Метлицкая, К.В. О встречаемости тлей на землянике / К.В. Метлицкая, 0.3. Метлицкий // Плодоводство и ягодоводство России. 2004. - Т. II. -С. 442-446.

184. Методические указания по технологии производства здорового посадочного материала земляники / Ф.Я. Поликарпова, Н.Д. Романенко, А.П. Мишина и др. / М.: НИЗИСНП. 1978.- 96 с.

185. Методические указания по векторной передаче вирусов, поражающих сельскохозяйственные культуры / Ю.И. Власов, Т.Н. Теплоухова, Ларина Э.И. и др. / Л.: ВИЗР. 1990. - 97 с.

186. Методические указания по комплексному изучению микоплазмозов растений (на примере столбура томатов) / Л.Н. Самсонова, Ю.И. Власов, Д.Ю. Богоутдинов / СПб.: ВИЗР. 1991. - 40 с.

187. Методические указания по диагностике и учету болезней корней и стеблей земляники и малины, передающихся через почву / С.И. Головин / М.: ВСТИСП. 2001.-41 с.

188. Методические указания по мониторингу вредителей и болезней и системе мер борьбы с ними в маточных и промышленных насаждениях земляники садовой / О.З. Метлицкий, А.С. Зейналов, И.А. Ундрицова и др./ М.: ВСТИСП. 2005. - 111 с.

189. Мидянник, Г.А. Пути инфицирования микоплазмами растений люцерны и их влияние на образование и эффективность бобово-ризобиального симбиоза / Г.А. Мидянник / Дисс. канд. биол. наук. М., 1995.-235 с.

190. Минаев, В.Ю. Химиотерапия в системе защиты земляники от вирусных болезней / В.Ю. Минаев // Защита растений от вредителей и болезней на Юго-Востоке. Саратов. - 1987. - С. 56-64.

191. Минаев, В.Ю. Вирусные болезни земляники в Нижнем Поволжье / В.Ю. Минаев //Известия ТСХА.- 1984.-Вып. 4.-С. 116-123.

192. Мишина, А.П. Устойчивость земляники к вирусным болезням / А.П. Мишина // Садоводство. 1982. - N 9. - С. 30.

193. Можаева, К.А. Поиск новых средств защиты растений от вирусных и вироидных инфекций / К.А. Можаева, Т.Я. Васильева // Биол. науки. -1992.-N 1.-С. 29-32.

194. Моисеева, Н.А. Молекулярные и клеточные механизмы морфогенеза в культуре клеток растений. / Н.А. Моисеева / Биология культивирования клеток и биотехнология растений.-М.: Наука. 1991.-С. 166-185.

195. Мушеген, А.Р. Изучение регуляции системного распространения вирусной инфекции в зараженном растении / А.Р. Мушеген / Автореф. дис. канд. биол. наук. М. - 1989. - 22 с.

196. Мэтьюз, Р. Вирусы растений. / Р. Мэтьюз / М.: Мир. 1973. - 600 с.

197. Нагорская, В.П. Ультраструктурные аспекты вирусного патогенеза и индуцированной 1,3; 1,6-b-D глюканом устойчивости растений / В.П. Нагорская / Автореф. дис. канд. биол. наук. Владивосток. - 2000. - 21 с.

198. Насонова, Д.С. Разработка тест-системы для экспресс диагностики изменений в растительном геноме / Д.С. Насонова / Сб. науч. тр. конф. Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеренарии. М.: ВНИИСБ.-2004.-С. 25-27.

199. Наср, Д.А. Разработка условий ускоренного получения безвирусных растений картофеля из изолированных меристем / Д.А. Наср / Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11. -М. 1973. - 19 с.

200. Насроллахнеджад, С. Вирусные и нематодные инфекции и совершенствование мер борьбы с ними на картофеле/ С. Насроллахнеджад /Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11. -М. 2003. - 24 с.

201. Наумова, Л.В. Распространение и период лета тлей-переносчиков вирусов смородины и земляники в Нечерноземной полосе / Л.В. Наумова / Труды Латвийской с.-х. академии. 1977. - Вып. 153. - С. 105-108.

202. Наумова, Л.В. Кормовые связи некоторых тлей-переносчиков вирусных заболеваний ягодных культур / Л.В. Наумова Ю.И. Помазков // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. 1976. - Т. 9. - С. 163-166.

203. Ницше, В. Гаплоиды в селекции растений / В. Ницше, Г. Венцель / М.: Колос.- 1980.

204. Никиточкина, Т.Д. Особенности роста и плодоношения земляники за период использования плантации / Т.Д. Никиточкина / Сб. научных трудов ТСХА. -1976. Вып.216. - С.57-62.

205. Огарков, В.И. Влияние интерферона человека на репродукцию фито- и микровирусов / В.И. Огарков, И.Г. Атабеков, И.Б. Каплан и др. // Известия АН СССР.- 1987.-N3.-С. 341-345.

206. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом культуры меристематических верхушек. Методические указания ВАСХНИЛ / Ю.Г. Попов / М.: ВАСХНИЛ. 1979. - 29 с.

207. Озерецковская, О.Л. Индуцирование устойчивости растений биогенными элиситорами фитопатогенов / О.Л. Озерецковская // Прикл. биохимия и микробиология. 1994. - Т. 30, N 3. - С. 325-339.

208. Осипов, Ю.И. Производство оздоровленного посадочного материала земляники / Ю.И. Осипов, М.И. Джигадло // Плодоовощное хозяйство. -1987.-N5.-C. 20-21.

209. Отраслевые стандарты. Посадочный материал плодовых и ягодных культур, подвои плодовых культур, черенки плодовых и ягодных культур. -М.- 1996.-81 с.

210. Пакина, Е.Н. Карликовость («ведьмина метла») люцерны в условиях Нижнего Поволжья / Е.Н. Пакина / Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11.-М.- 1994.- 16 с.

211. Паскеев, Н.А. Совершенствование системы производства оздоровленного посадочного материала земляники в условиях Северного Кавказа / Н.А. Паскеев / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.01.07. Краснодар. -2001.-22 с.

212. Перевертин, К.А. Моделирование распространения вирусной эпифитотии нематодо-векторным путем / К.А. Перевертин, А.О Сагитов // Вестник с.-х. науки Казахстана. Алма-Ата. - 1988. - N3. - С. 27-34.

213. Петров, Р.В. Радиационная иммунология и трансплантация / Р.В. Петров, Ю.М. Зарецкая / М.: Атомиздат. 1969. - 134 с.

214. Петрова, А.Д. Хемотерапия и размножение садовых культур на питательных средах с фенолкарбоновыми кислотами / А.Д. Петрова, М.Т. Упадышев// Плодоводство и ягодоводство России 2000. -Т.VII. - С.67-72.

215. Плодоводство / ред. В.А. Потапов, Ф.Н. Пильщиков. М.: Колос. -2000.- 418с.

216. Полякова, A.M. Ультраструктурный анализ инфицированных вирусами (ВТМ, ХВК, ВМС) растительных клеток и его использование при оценке поражаемости растений / A.M. Полякова / Автореф. дис. канд. биол. наук. -Владивосток.-2000.-21 с.

217. Помазков, Ю.И. Вирусные болезни ягодных культур / Ю.И. Помазков / М.: Колос.-1969.-104 с.

218. Помазков, Ю.И. Вирусные болезни плодовых и ягодных культур в Нечерноземной зоне / Помазков Ю.И / Автореф. дис . докт. с.-х. наук: 06.01.11.-М.- 1975.- 34 с.

219. Помазков, Ю.И. Методические указания по защите плодовых и ягодных культур в питомниках от повторного заражения вирусными и микоплазменными заболеваниями / Ю.И. Помазков, М.А. Келдыш / М.:Колос. 1979. - 16 с.

220. Помазков, Ю.И. Термическое обеззараживание плодовых и ягодных растений от вирусов / Ю.И. Помазков, И.С. Литвиненко, И.Л. Зленко // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. 1972. - Т. 4. - С. 363-371.

221. Помазков, Ю.И. Вирусные болезни земляники в Нечерноземной зоне / Ю.И. Помазков, А.П. Мишина / Культура земляники в СССР. М.: Колос. - 1972.-34 с.

222. Попов, Ю.Г. Культура in vitro меристематических верхушек как метод оздоровления и размножения растений / Ю.Г. Попов // Биол. науки. 1976. -N6.-C. 13-24.

223. Попов, Ю.Г. Культура стеблевых верхушек in vitro как метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений / Ю.Г. Попов, В.А. Высоцкий // Вестник с.-х. науки. 1978. - N 4. - С. 124-127.

224. Попов, Ю.Г. Получение безвирусных растений земляники методом культивирования изолированных верхушек стебля / Ю.Г. Попов, А.П. Мишина / Культура земляники в СССР. М.: Колос. - 1972. - С. 390-394.

225. Попов, Ю.Г. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекции земляники / Ю.Г. Попов, И.В. Попова, А.П. Мишина // С.-х. биология. 1978. - T.XIII, N 6. - С. 916-919.

226. Попов, Ю.Г. Получение рассады земляники методом культуры изолированных верхушек побега / Ю.Г. Попов, В.Г. Трушечкин // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. 1972. - С. 4.

227. Попов, Ю.Г. Применение метода культуры меристематических верхушек в селекционной работе с земляникой / Ю.Г. Попов, А.С. Равкин / Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.:Колос. - 1979. -С.115-123.

228. Попова, И.В. Пестролистность сеянцев земляники / И.В. Попова, В.К. Пелевина // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. 1975. -Т.VIII. - С. 218-224.

229. Попова, И.В. Особенности выведения земляники и новые сорта для экологически чистых технологий / И.В. Попова, А.У. Зекалашвили, С.М. Резник и др. / Совершенствование технологии выращивания ягодных культур в Нечерноземье. М.: РАСХН. - 1992. - С. 26-34.

230. Попова, И.В. Особенности третьего и четвертого поколений межвидовых гибридов и новых исходных форм в селекции земляники на высокую адаптационную способность / И.В. Попова, С.М. Резник, Е.Д.

231. Шаталова, А.Ф. Константинова, О.О. Белошапкина // Плодоводство и ягодоводство России. 1995. - С. 70-84.

232. Попова, И.В. Исходные формы в селекции земляники на пригодность к замораживанию / И.В. Попова, А.Ф. Макарова, Е.Д. Шаталова, А.Ф. Константинова, О.О. Белошапкина // Плодоводство и ягодоводство России. 1996.-С.41-51.

233. Попова, И.В. Комплексные доноры в селекции земляники и крыжовника / И.В. Попова, С.М. Резник, А.У. Зекалашвили / Сб. научных трудов ТСХА. М.: МСХА. - 1996. - Вып. 267. - С. 127-132.

234. Попова, И.В. Новые сорта ягодных культур для экологически безопасных технологий / И.В. Попова, А.А. Сергиенко, О.М. Киселев и др. // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т.VII - С. 29-42.

235. Постников, Д.А. Применение кампозана-М и ингибиторов вирусов ДГТ в семеноводческих посадках меристемного исходного материала картофеля / Д.А. Постников, Н.Ф. Кинякин, В.А. Шмыгля и др. // Известия ТСХА. 1993. - Вып. 1. - С. 94-97.

236. Потапов, С.П. Методические указания по использованию мутагенных факторов в селекции плодово-ягодных растений / С.П. Потапов, А.С. Равкин / М.: ТСХА. 1974. - 35 с.

237. Приходько, Ю.Н. Производство оздоровленного посадочного материала плодовых и ягодных культур во ВСТИСП / Ю.Н. Приходько / Актуальные проблемы развития питомниководства и научное обеспечение отрасли. Тезисы докл. Всеросс. совещ. -М. 1993. - С. 9-11.

238. Приходько, Ю.Н. Диагностика вирозов и микоплазмозов ягодных культур / Ю.Н. Приходько, Н.П. Веретенникова, М.П. Лапинская // Защита растений. 1995. -N 8. - С. 36-37.

239. Приходько, Ю.Н. Совершенствование технологии оздоровления яблони от латентных вирусов / Ю.Н. Приходько, Д.Н. Редин, В.И. Кашин // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т.VII - С. 89-101.

240. Приходько, Ю.Н. Разработка метода хемотерапии вирусов в процессе микроклональиого размножения плодовых и ягодных культур / Ю.Н. Приходько, JT.B. Цубера // Плодоводство и ягодоводство России. 1996. -Т.З.-С. 96-101.

241. Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур. Мичуринск: ВНИИС. - 1980. - 529 с.

242. Программа и методика селекции плодовых, ягодных и орехоплодных культур. Орел. - 1995. - 499 с.

243. Производство и сертификация посадочного материала ягодных культур и винограда в России. Контроль качества. Ягодные культуры. Ч. 1 / Под ред. И.М. Куликова / М.: ВСТИСП. - 2005. - 156с.

244. Протокол ДНК-технология. FLASH система флуоресцентной детекции результатов ПЦР. 2003. - www.dna-technology.ru.

245. Прохорова, Т.Б. Выращивание оздоровленного посадочного материала земляники / Т.Б. Прохорова//Защита растений. 1981.-N 1.-С. 16-17.

246. Равкин, А.С. Некоторые особенности модификационной изменчивости земляники под влиянием гамма-излучения / А.С. Равкин / Культура земляники в СССР. М.: Колос. - 1972. - С. 263-270.

247. Развязкина, Г.М. Вирусное позеленение лепестков земляники и его распространение / Г.М. Развязкина // Вестник с.-х. науки. 1960. - N 2. -С. 139-140.

248. Рассел, Е.Э. Селекция растений на устойчивость к вредителям и болезням / Е.С. Рассел / М.: Колос. 1982. - 267 с.

249. Рейфман, В.Г. Некоторые приемы повышения приобретенной устойчивости растений к вирусам / В.Г. Рейфман, С.А. Романова / Индуцированная устойчивость с.-х. культур к фитопатогенам. Ростов-на-Дону.- 1989.-С. 7-8.

250. Реунов, А.В. Ингибирование размножения вируса табачной мозаики и Х-вируса картофеля кинетином в листьях локально поражаемых растенийхозяев / А.В. Реунов, Г.Д. Реунова, Т.Т. Жилина // Известия АН СССР. -Биология.- 1977. -N 4. С. 621-623.

251. Реунов, А.В. Вирусный патогенез и защитные механизмы растений. / А.В. Реунов / Владивосток: Дальнаука. 1999. - 175 с.

252. Рогозина, Е.В. Хемотерапия в сочетании с культурой ткани, как способ оздоровления образцов картофеля от вирусной инфекции / Е.В. Рогозина / Науч. тех. Бюлл. ВНИИ растениеводства. — Л. — 1990. N 197. - С. 66-67.

253. Романенко, Н.Д. Распространение нематод семейства Longidoridae в плодовых и ягодных насаждениях СССР / Н.Д. Романенко / Прогрессивные способы возделывания и сортоизучение ягодных культур. -М- 1985. -С. 112-120.

254. Романенко, Н.Д. Фитогельминты-вирусоносители семейства Longidoridae / Н.Д. Романенко / М.: Наука. - 1993. - 284 с.

255. Романенко, Н.Д. Паразито-хозяинные взаимоотношения микробных консорбентов агроценоза как основа стратегии его защиты / Н.Д. Романенко / Паразитические нематоды растений и насекомых. М.: Наука. -2004.-С. 152-170.

256. Романенко, Н.Д. Разработка научных основ экологически безопасного производства посадочного материала земляники садовой / Н.Д. Романенко, Б.В. Буров / Тезисы совещ. Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы. -1994.-С. 37-38.

257. Романенко, Н.Д. Изучение динамики формирования фузариозной эпифитотии на различных сортах земляники садовой в условиях вегетационного опыта / Н.Д. Романенко, И.В. Попова // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т. VII. - С.216-227.

258. Самсонова, Л.Н. Научно-методические основы применения антибиотиков для терапии микоплазмозов растений / Л.Н. Самсонова / Биологические методы защиты растений от вирусных и бактериальных заболеваний. Л. - 1986. - С. 56-62.

259. Самсонова, Л.Н. Диагностика вирусных и фитоплазменных болезней овощных культур и картофеля / Л.Н. Самсонова, А.Е. Цыпленков, Т.А. Якуткина / СПб., ВИЗР. 2001. - 48 с.

260. Саркисова, М.М. О некоторых физиолого-биологических изменениях в побегах и листьях яблони в связи с обработкой ретардантами / М.М. Саркисова, Р.С. Оганесян // Биол. журнал Армении. Ереван. - 1985. - С. 8, Рук. деп. в ВИНИТИ 16.12.85. - N 8667-В.

261. Семакин, В.П. О положительных мутационных изменениях сортов яблони, индуцированных гамма-лучами / В.П. Семакин / Селекция, сортоизучение и агротехника плодово-ягодных культур. Орел. - 1971. -Т. 5.-С. 3-8.

262. Сиссонс, Г.П. Вирусология в 3-х т. / Ред. Б. Филдс, Д. Найл и др. / Г.П. Сиссонс, М.Б. Олдстоун, В.К. Иоклик и др. / М.: Мир. 1989.

263. Смит, К. Вирусные болезни растений / К. Смит / М.: ИЛ. 1960. - С. 186-197.

264. Смирнов, В.В. Бактерии рода Pseudomonas продуценты новых антибиотиков. Механизмы биосинтеза антибиотиков / В.В. Смирнов, Е.А. Киприанова/М.: Наука. - 1986.-С. 149-160.

265. Снедкор, Дж. У. Статистические методы в применении к исследованиям в сельском хозяйстве и биологии / Дж. У. Снедкор / М.: Изд. с.-х. литературы, журналов и плакатов. 1961. - С. 123-124

266. Современные методы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. Методические, указания РАСХН (ВНИИСБ). М.: МСХА. - 1998. - 95 с.

267. Соколова, С.М. Выращивание оздоровленной рассады земляники / С.М. Соколова // Садовод, и виноградарство Молдовии. 1986. - N 7. - С. 31-33.

268. Соколова, С.М. Диагностика вирусных заболеваний земляники / С.М. Соколова // Садовод, и виноградарство Молдавии. 1988. - N11. - С. 40-42.

269. Солнцева, И.И. Особенности размножения земляники высших категорий в контейнерах в связи с факторами питания / И.И. Солнцева / Автореф. дис.канд с.-х. наук: 06.01.07.-М.- 1984.-22 с.

270. Соловьева, А.Е. Технологические основы производства посадочного материала земляники в Новосибирской области / А.Е. Соловьева / Автореф. дис. канд. с.-х. наук: 06.01.07. Бердск. - 1999. - 21 с.

271. Стан, С. Влияние опрыскивания деревьев ретардантом культар на урожай, качество и лежкость яблок сорта Джонатан при хранении / С. Стан, С. Кирнак, Э. Негруце и др. / Применение регуляторов роста в сельском хозяйстве. М.: ТСХА. - 1987. - С. 95-98.

272. Суркова, О.Ю. Вирусные болезни красной и черной смородины / О.Ю. Суркова / Труды научной конф. молодых ученых. М.: ТСХА. - 1992. - С. 544-552.

273. Суркова, О.Ю. Эффективность различных методов охдоровления смородины от вирозов / О.Ю. Суркова, Ю.Н. Приходько // Плодоводство и ягодоводство России. 1995. - Т. 1. - С. 193-198.

274. Сухов, К.С. Общая вирусология / К.С. Сухов / М.: Высшая школа. -1965.-299 с.

275. Тальянский, М.Э. Молекулярно-биологические основы взаимодействия между вирусами растений / М.Э. Тальянский / Автореф. дис.канд. биол. наук.-М,- 1984.-35с.

276. Тальянский, М.Э. Биотехнология и безвирусное растениеводство / М.Э. Тальянский / М.: Знание. 1987. - Вып. 2. - С. 77-96.

277. Тарчевский Н.А. Катаболизм и стресс у растений / Н.А. Тарчевский / М.: Наука. 1993.-7с.

278. Тарчевский, И.А. Сигнальные системы клеток растений / И.А. Тарчевский / М.: Наука. 2002. - 293 с.

279. Тарчевский, И.А. Молекулярные аспекты фитоиммунитета / И.А. Тарчевский, В.М. Чернов//Микол. и фитопатол.- 2000-Т.34, N3-С. 1-10.

280. Тертяк, Д.Д. Иммуноэлектронная микроскопия как быстрый метод диагностики вирусов растений / Д.Д. Тертяк / Вирусные заболевания культурных растений Молдавии. Кишинев. - 1984. - С. 130-142.

281. Технологии возделывания земляники на промышленных плантациях и в репродукционных питомниках Нечерноземной зоны РСФСР. (Рекомендации BACXHHJ1) М.: Россельхозиздат. - 1981. - 16 с.

282. Технология выращивания и заготовки посадочного материала земляники / В.Г. Трушечкин, И.И. Чухляев, Ю.А. Утков и др. / Сб. научных работ НИЗИСНП. 1972/1973.-Т.5.-С. 168-173.

283. Технологический процесс получения безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных культур. Методические указания. М.: ВСТИСП.-2001.- 108 с.

284. Толстогузова, В.Г. Подбор адаптивных сортов земляники на Ставрополье / В.Г. Толстогузова // Плодоводство и ягодоводство России. -ВСТИСП, М. 1995. - Т. 2. - С. 90-92.

285. Томилин, А.А. Непо-вирусы и их переносчики нематоды-лонгидориды на ягодных культурах в Европейской части СССР и меры борьбы с ними / А.А. Томилин / Автореф. дис. канд. с.-х. 06.01.11. М. - 1991. -23 с.

286. Трофимец, J1.H. Классификация фитопатогенных вирусов / J1.H. Трофимец//Защита растений, 1988.-N3.-С. 22-24.

287. Трушечкин, В.Г. Производство безвирусного посадочного материала земляники / В.Г. Трушечкин, В.А. Высоцкий, А.П. Походенко // Садоводство. 1984. - N 11. - С. 19-21.

288. Трушечкин, В.Г. Пути обеззараживания земляники от нематод / В.Г. Трушечкин, О.З. Метлицкий, В.А. Высоцкий, Н.И. Аникин // Садоводство 1984. - N7. - С. 20-21.

289. Трушечкин, В.Г. Особенности производства безвирусного посадочного материала ягодных культур в Нечерноземной зоне / В.Г. Трушечкин, Ю.И. Помазков // Плодоводство и ягодоводство Нечерноземной полосы. 1972. -Т.4.-С. 199-208.

290. Тутунова, Ш.М. Размножение суперэлитного материала земляники с помощью метода культуры меристем / Ш.М. Тутунова / Автореф. дис. канд.с.-х. наук. М. - 1980. - 23 с.

291. Тютерев, СЛ. Научные основы использования химических активаторов болезнеустойчивости в защите растений от патогенов / C.JI. Тютерев / Автореф. дис. докт. биол. наук. 06.01.11. СПб. - 1999.-38 с.

292. Упадышев, М.Т. Магнитно-импульсная обработка посадочного материала при разных способах размножения садовых культур / М.Т. Упадышев, В.И. Донецких, Г.В. Бешнов и др. // Плодоводство и ягодоводство России. 2000. - Т. VII. - С. 119-127.

293. Урманцева, В.В. Культивирование каллусных тканей на твердых питательных средах / В.В. Урманцева / Методы культивир. клеток. — Л. — 1988.-С. 232-241.

294. Усовершенствованная система фитосанитарии в питомниководстве / О.З. Метлицкий, А.Н. Аристов, С.Е. Головин и др./ Методические указания. М.: ВСТИСП. - 2001. - 154 с.

295. Усманов П.Д. Применение эмбрион-теста для анализа эмбриональных леталей индуцированных облучением пыльцевых зерен / П.Д. Усманов, А. Мюллер / Генетика. 1970. - С. 50-60.

296. Фадеева, Т.С. Генетика земляники / Т.С. Фадеева / JI.: Изд. ЛГУ. -1975.- 184 с.

297. Фадеева, Т.С. Сравнительная генетика растений / Т.С. Фадеева, С.П. Соснихина, Н.М. Иркаева / Л.: Изд. ЛГУ. 1980. - 248 с.

298. Фаустов, В.В. Микроклональное размножение вишни /В.В.Фаустов,Е.В. Олешко, И.В. Жаркова и др. // Известия ТСХА.- 1988.- Вып.5. С. 131-138.

299. Фаустов В.В. Анатомо-морфологические особенности развития микрочеренков земляники в культуре in vitro / В.В. Фаустов, О.О. Белошапкина//Известия ТСХА. 1995.-N 1.-С. 127-138.

300. Фахми Фикри, Г. М. Ускоренное размножение меристемного картофеля // Совершенствование интегрированной и биологической защиты растений от вредителей и болезней / Г. М. Фахми Фикри / JL: ЛСХИ. 1982. - N 1. -С. 61-63.

301. Федорова, В.Я. Влияние полисахаридов на устойчивость сельскохозяйственных культур / В.Я. Федорова, С.А. Романова, Л.А. Елякова и др. / Индуцир. устойчивость с.-х. культур к фитопатогенам. -Ростов-на-Дону. 1989. - С. 23-24.

302. Фрадкина, Д.Л. Вирусная желтуха и грибные болезни сахарной свеклы / Д.Л. Фрадкина, Н.В. Хельман // Защита растений. 1975. - N 10. - С. 54.

303. Хапова, С.А. Условия культивирования in vitro и последующая продуктивность растений земляники / С.А. Хапова / Автореф. дис. канд. с.-х. наук. 06.01.07. М. - 1997. - 23 с.

304. Цубера, Л.В. Хемотерапия вирусов плодовых и ягодных растений в комбинации с культурой изолированных апексов / Л.В. Цубера / Автореф. дис. канд. с.-х. наук. 06.01.11. М. - 1998. - 22 с.

305. Цуркан, И.Г. Термотерапия плодовых культур и винограда, пораженных вирусными заболеваниями / И.Г. Цуркан / Тезисы докл. Всесоюзн. совещания. М. - 1971. - С. - 208-209.

306. Чернов, В.М. Генетическая изменчивость микоплазм (Acholeplasma laidlawii) при взаимодействии их с эукариотами (Pisum sativum) / В.М. Чернов, Ю.В. Гоголев, Н.В. Попова и др./ДАН. -1999. Т.369. - С.275-277.

307. Чернова, О.А. Рибосомные гены единственные гомологичные участки ДНК некоторых микоплазм. / О.А. Чернова, Н.А. Меркулова, С.Н. Борхсенииус // Молекулярная генетика, микробиология, вирусология -1986.-N 9.-С. 16-21.

308. Чернов, О.А. Проблемы и способы диагностики микоплазменных инфекций / О.А. Чернова, В.М. Чернов / Сенсорные системы. 1998. -Т. 12, N 1. -С.22-28.

309. Чирков, С.Н. Сравнительная эффективность производных хитозана при подавлении вирусной инфекции растений / С.Н. Чирков, Н.А. Сургучева, А.И. Гамзазаде и др. / Биохимия, биофизика, молекулярная биология. Докл. РАН. 1998. - Т. 360, N 2. - С. 271-273.

310. Чирков, С.Н Стимуляция синтеза клеточных белков и ингибирование вирусной инфекции хитозаном в изолированных протопластах табака / С.Н. Чирков, Н.А. Сургучева, И.Г. Атабеков / Докл РАН. 1995. - Т. 341, N6.-С. 836-838.

311. Чирков, С.Н. Очистка и иммуноферментный анализ вируса черной кольцевой пятнистости томатов и латентного вируса кольцевой пятнистости земляники / С.Н. Чирков, Н.А. Сургучева, B.JT. Федотина и др. // Биол. науки. 1991. - Т. 4. - С. 22-29.

312. Чухляев, И.И. Разработка системы производства здорового посадочного материала земляники в Нечерноземной полосе / И.И. Чухляев / Автореф. дис. канд. с.-х. наук. М. - 1969. - 22 с.

313. Шапиро, Я.С. Эффективность применения бактериального препарата агрофила в условиях супер-суперэлитного маточника земляники / Я.С. Шапиро, В.Ф. Павлова, Т.И. Романченко / Интегрированная защита с.-х. растений. Л. - 1990. - С. 543-548.

314. Шаумян, К.В. Элементы ступенчатого выращивания здорового посадочного материала земляники / К.В. Шаумян, Л.И. Чефранова, И.В. Жаркова / Сб. научных трудов ТСХА. 1980. - Вып. 261. - С. 37-40.

315. Шахова, Л.Н. Применение химических регуляторов роста на землянике // Все новое в агротехнике ягодных культур / Л.Н. Шахова / М.: Колос. -1972.-50 с.

316. Шевелуха, B.C. Методические указания к лабораторно-практическим занятиям по с.-х. биотехнологии / B.C. Шевелуха / М.: ТСХА 1987.- 83 с.

317. Шевелуха, B.C. Сельскохозяйственная биотехнология / B.C. Шевелуха / М. -1998.-416 с.

318. Шипунова, А.А. Клональное микроразмножение садовых растений / А.А. Шипунова / Автореф. дис.канд.с.-х. наук. 06.01.07.- М 2003. - 24 с.

319. Шкаликов, В.А. Приемы оздоровления картофеля от мозаичных вирусов и способы ускоренного размножения безвирусного посадочного материала / В.А. Шкаликов / Автореф. дис. канд. биол. наук: 06.01.11. -М.-1974.-19 с.

320. Школьник, М.Я. Общая концепция физиологической роли бора у растений / М.Я. Школьник // Физиология растений. 1974. - Т. 21, Вып. 1. -С. 174-186.

321. Шлык, А.А. Метаболизм хлорофилла в зеленых растениях / А.А. Шлык / Минск: Наука и техника. 1965. - 395 с.

322. Шмыгля, В.А. Вирусные и микоплазменные болезни растений. Метод, указания по диагностике и изучению /В.А. Шмыгля / М.:ТСХА.-1978.-52 с.

323. Шмыгля, В.А. Методы диагностики вирусов в селекции и семеноводстве картофеля / В.А. Шмыгля / Методические указания для АПК.-М,- 1987.-27 с.

324. Шмыгля, В.А. Биологическое обоснование, разработка и усовершенствование методов диагностики вирусов в селекции и семеноводстве картофеля и томата / В.А. Шмыгля / Автореф. дис. док.биол. наук. 06.01.11. Л. - 1989. - 42 с.

325. Шмыгля, В.А. Эффективность оздоровления земляники от вирусов методом культуры апикальных меристем / В.А. Шмыгля, В.Ю. Минаев / Интегрир. защита растений. М. - 1985. - С. 49-53.

326. Шпаар, Д. Борьба с вирусными и вироидными болезнями в Германии / Д. Шпаар, П. Шуманн // Защита растений. -2001. -N 5. С. 15-17.

327. Эглите, Г.К. Влияние двухспиральной РНК на течение инфекции, вызванной вирусом табачной мозаики / Г.К. Эглите / Теория и практикаиспользования иммунитета с.-х. культур к вирусным болезням. Вильнюс. - 1984.-С. 131-132.

328. Щербаков, В.К. Проблема специфичности мутагенеза и направленного получения мутаций / В.К. Щербаков // С.-х. биология. 1982. - Т. 17, N 2. -С. 61-63.

329. Эль-Фахим, Я.М. О патогенезе и диагностике микоплазмозов растений / Я.М. Эль-Фахим / Автореф. дис. канд.биол. наук. 06.01.11. М. - 1976. -20 с.

330. Якуткина, Т.А. Роль антибиотиков в изучении микоплазмозов растений / Т.А. Якуткина, М.Т. Петрухова, Т.Н. Богатыренко и др. // Труды ВНИИЗР. Л.: ВИЗР. - 1979. - С. 19-27.

331. Якушкина, Н.И. Физиология растений / Н.И. Якушкина / М.: Просвещение. 1980. - 303 с.

332. Янушевич, С.И. Химический мутагенез у арабидопсис / С.И. Янушевич / Большой практикум по генетике животных и растений. М.: МГУ. -1977.-С. 43-64.

333. Adams, A.N. Transmission of a virus from Fragaria vesca infected with strawberry mottle virus to Chenopodium quinoa / A.N. Adams, D.J. Barbara // Acta Hortic. 1986. - N 186. - P. 74-76.

334. Aerts, J. Einfluss Virusinfectionen auf Ertrag bei Erdbeeren / J. Aerts // Der Erwerb sobstbau. 1972. - Jg. 14, H. 5. - P. 65-67.

335. Aerts, J. Survey of viruses and mycoplasmas in strawberry / J. Aerts // Netherl. J. Plant Pathol. 1974. - Vol. 80, N 6. - P. 215-227.

336. Agrios, G. Differentiated growth of certain pathogenic fungi on extracts from virus infected and virus free apple and pear tissues / G. Agrios // Phytopath. 1964. - Vol. 55, N 2. - P. 127.

337. Agrios, G. Plant pathology. Fourth edition / G. Agrios / Acad. Press. San Diego, London, Boston, NY, Toronto, Sydney, Tokyo. - 1997. - 581 p.

338. Akius, M. Chemical suppression of apple chlorotic leaf spot virus by ribavirin / M. Akius // Vaxtskyddsnotiser. 1983. - Vol. 47. - P. 39-45.

339. Andersen, М.Т. Phormium yellow leaf phytoplasma is associated with strawberry lethal yellows disease in New Zealand / M.T. Andersen, J. Longmore, L.W. Liefting et al. // Plant Dis. 1998. - Vol. 82, N 6. - P. 606-609.

340. Angelov, B. Influence of the strawberry virus complex on the content of free aminoacids in the fruits of cultivar Red Gauntlet / B. Angelov, T. Gemishev, K. Tsolova et al. // Plant Sci. 1995. - Vol. 32, N 4. - P. 58-59.

341. Ангелов, Б. Физиологични и цитологични особености на вирусноболни растения от Fragaria sp. / Б. Ангелов, Н. Ковачева, Ц. Цонев // Физиол. растен. София. - 1990. - Т. 16, N 2. - С. 50-55.

342. Atabekov, J.G. Plant virus-specific transport function and resistance of plants to viruses / J.G. Atabekov, Y.L. Dorokhov // Adv. Virus Res. 1984. - V. 29. -P. 313-364.

343. Atabekov, J.G. Expression of a plant virus-coded transport function by different viral genome / J.G. Atabekov, M.E. Taliansky // Adv.Virus Res. -1990.-Vol. 38.-P. 201-248.

344. Atkinson, D. Paclobutrazol on the growth and performance of strawberry plants: some initial results / D. Atkinson, C.V. Griap // Acta Hortic., Wageninger. 1986. - Vol. 179, N 2. - P. 593-596.

345. Babini, A.R. Occurrence and identification of strawberry viruses in five European countries / A.R., Babini, M.,Cieslinska, R., Karesova / Acta Hortic. -2004.-N656.-P. 39-43.

346. Badovic, M.V. Changes in the yield and quality of strawberry fruits infected by strawberry crinkle virus / M.V. Badovic // Acta Hortic. 1976. - N 66. - P. 25-28.

347. Baglioni, C. Interferon-induced enzymatic activities and their role in the antiviral state / C. Baglioni // Ceii. 1979. - Vol. 17. - P. 255-267.

348. Barritt, B.H. Effects of mottle, crinkle and mild yellow edge viruses of Hood and Nortwest strawberries / B.H. Barritt, H.I.S. Loo. // Canad. J. Plant. Sci. -1973. Vol. 53, N 3. - P. 605-607.

349. Baumann, G. Elimination of a heat-stable raspberry virus by combining heat treatment and meristem culture. / G. Baumann // Acta Hortic. 1972. - Vol. 129.-P. 11-12.

350. Bawden, F.C. Protein precipitation and virus inactivation by strawberry extracts of strawberry plants / F.C. Bawden, A. Kleczkowski // J. Pomol. -1945.-Vol. 21, N 1.-P.2-7.

351. Belkengren, R.O. Culture of apical meristems of Fragaria vesca strawberry plants a method of excluding latent A virus / R.O. Belkengren, R.W. Miller // Plant. Dis. Reptr. 1962. - Vol. 46, N 2. - P. 119-121.

352. Benati, R. Effetti della concimazione azotata su piante di fragola di diversa origine moltiplicativa / R. Benati, V. Landini // Frutticoltura. 1982. - Vol. 44, N5.-P. 91-94.

353. Bertaccini, A. Leek proliferation a new phytoplasma disease in the Czech republic and Italy / A. Bertaccini, J. Franova, S. Paltrnieri et al./ Europ. J. Plant Pathol. -1999. Vol. 105, N5. - P/487-493.

354. Bertioli, D.J. Arabic mosaic nepoirus coat protein in transgenic tobacco lessens disease severity and virus replication / D.J. Bertioli, J.I. Cooper, M.L. Edwards et al. / Annals of applied biology. 1992. - Vol. 120. - P. 47-54.

355. Beute, M.K. Mechanism of increased root rot in virus infected peas / M.K. Beute, J.L. Lockwood//Phytopath. 1968. -Vol.58, N 12. -P. 1643-1651.

356. Bittner, H., Schenk, G. Chemotherapie zur Viruseliminierung aus Pflanzkatoffeln / H. Bittner, G. Schenk // Saat und Pflanzengut. - 1990. - H. 32, B. l.-S. 5-6.

357. Bogush, L.J. Freening Sweet and sour cherry trees from Prunus necrotic ringspot virus by injection of 2,4-Dioxohexahydro-l, 3, 5-triazine (DHT) / L.J. Bogush, T.D. Verderevskaja, G. Schuster // Phytopath. 1985. - Vol. 114, N 2. -P. 189-191.

358. Bolton, A.T. Effect of three virus diseases and their combination on fruit yield of strawberries / A.T. Bolton // Canad. J. Plant. Sci. 1974. - Vol. 54, N 2. -P. 271-277.

359. Bolton, A.T. The inactivation of vein banding and latent С viruses in strawberry by heat treatment / A.T. Bolton // Canad. J. Plant. Sci. 1967. - Vol. 47.-P. 375-380.

360. Boxus, P. Assainissement des arbres fruitiers et du fraisier par culture de meristemes / P. Boxus / Parasitica. 1984. - Vol. 40, N 2-3. - P. 139-155.

361. Boxus, P. Rapid production of virus-free strawberry by in vitro culture / P. Boxus // Acta Hortic. 1976. - Vol. 66. - P. 35-38.

362. Bringhurst, R.S. Strawberry virus transmission by grafting excised leaves / R.S. Bringhurst, V. Voth // Plant. Dis. Reptr. 1956. - Vol. 40, N 5-6. - P. 596600.

363. Brown, D.C.W. Plant regeneration by organogenesis / IK.Vasil (Ed.). / D.C.W. Brown, T.A. Thorpe / Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. Acad. Press. - N.Y., 1986. - Vol. 3. - P. 49-65.

364. Brown, D.J.F. The transmission of two strains of strawberry latent ringspot virus by populations of Xiphinema diversicaudatum (Nematoda : Dorylaimoidae) / D.J.F. Brown // Nematol. Medit. 1985 -Vol. 13. - P.217-223.

365. Bustin, S.A. Absolute quantification of mRNA using real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays / S.A. Bustin // J. Mol. Endocrinol. 2000. - Vol. 25 (2). - P. 169-193.

366. Cameron, J.S. Enhanced vigor in vegetative progeny of micropropagated strawberry plants / J.S. Cameron, J.F. Hancock // Hortic. Sci. 1986. - Vol. 21, N5.-P. 1225-1226.

367. Canova, A. Virusi e virosi di fragola, di piante arbustive da frutto e di drupacee: situazione italiana e problemi di quarantena / A. Canova / Inf. Fitopatologico. 1983. - Vol. 33. - P. 26-33.

368. Cassels, A.C. Problems in tissue culture: Culture contamination. / A.C. Cassels // Micropropagation Technology and Application / P.S. Debergh and R.H. Zimmerman, eds. 1991. - Kluwer Acad. Publ. - Dordrecht, Netherlands-P.31-44.

369. Cassels, A.C. The elimination of X, Y, and S potato viruses in meristem culture of potato by virazole / A.C. Cassels, R.D. Long // Potato Research. -1982.-Vol. 25, N2.-P. 165-173.

370. Certification scheme N 11. Pathogen-tested strawberry. Bulletin OEPP\ EPPO. 1994. - Vol. 24, N 4. - P. 875-889.

371. Cheplick, S. Effect of injected antiviral compounds on apple mosaic, scar skin and dapple apple diseases of apple trees / S. Cheplick, G. Agrios // Plant Dis. 1983. - Vol. 67. - P. 1130-1133.

372. Chomczynski, P.A. Reagent procedure for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples / P.A. Chomczynski//BioTechniques.- 1993.- Vol. 15.-P. 532-537.

373. Chomczynski, P. Modification of the TRI Reagent Procedure for Isolation of RNA from Polysaccharide- and Proteoglycan-Rich Sources / P. Chomczynski, K. Mackey // BioTechniques. 1995. - Vol. 19, N 6. - P. 942-945.

374. Cieslinska, M. Choroby wirusowe i wirusopodobne truskawki / M. Cieslinska // Owoce Warzywa Kwiaty. 1998. - R. 37, N 1. - S. 8-9.

375. Cieslinska, M. Virus and phytoplasma disease on strawberry plantations in Poland / M. Cieslinska // Progress in plant protection. 2002. - Vol. 42, N 2. -P. 815-817.

376. Cieslinska, M. Occurrence of virus diseases on strawberries in Poland / M. Cieslinska, B. Zawadzka // J. Phytopath. Polon. Warsawa. - 1992. - N 12. -P. 19-22.

377. Cieslinska, M. The spread of strawberry mottle virus and its effect on the yield of three strawberry cultivars / M. Cieslinska, B. Zawadzka // J. Fruit Ornamental Plant Res. 1996. - Vol. 4, N 3. - P. 131-139.

378. Clark, M.F. Characteristics of the microplate method of enzime-linked immunosorbent assay for detection of plate viruses / M.F. Clark, A.N. Adams // J.Gen. Virol. 1977. - Vol. 34, N 3. - P. 475-483.

379. Compendium of strawberry diseases / Ed. by J.L. Maas. / Amer. Phytopathol. Soc. St. Paul. Minn. 1984. - 138 p.

380. Converse, R.H. (ed.) Virus diseases of small fruits. Agr. Hdbk. U.S. Dept. of Agriculturae. - 1987. - 631 p.

381. Converse, R.H. Susceptibility of some strawberry cultivars to Tomato ring-spot virus as determined by ELISA / R.H. Converse // Plant Dis. 1986. - Vol. 70.-P. 369-371.

382. Converse, R.H. The occurrence of a virus in some indexed strawberry clones / R.H. Converse // Oregon Hortic. Sci. Ann. Rep. - Portland. - 1983. - Vol. 74.-P. 148-150.

383. Converse, R.H. Virus and virus-like diseases of strawberry / R.H. Converse // Hortic. Sci. 1990. - Vol. 25, N 8. - P. 882-884.

384. Converse, R.H. Laboratory detection of viruses and mycoplasmalike organisms in strawberry / R.H. Converse, A.N. Adams, D.J. Barbara et al. // Plant Dis. 1988. - Vol. 72, N 9. - P. 744-749.

385. Converse, R.H. Irregular occurrence of rhabdoviruslike particles in tissues of Fragaria vesca plants infected with strawberry crinkle virus / R.H. Converse, U. Schaper // Phytopath. 1988. - Vol. 121. - P. 206-209.

386. Converse, R.H. Some effects of pallidosis disease on strawberry growth under greenhouse conditions / R.H. Converse, E. Volk // Plant Dis. 1990. - T. 74,N 10.-P. 814-816.

387. Converse, R.Y. Infection of cultivated strawberries by tomato ringspot virus / R.Y. Converse // Phytopath. -1981.- Vol. 71. P. 1149-1152.

388. Corte, A. Preliminary report on the influence of virus infection on the development of certain fungous and bacterial diseases on peach and apple trees / A. Corte, M.Corte // Zastita Bilija. 1965. - Vol.16, N85-88. - P. 329-333.

389. Darrow, G.M. Leaf variegation in strawberry. A review / G.M. Darrow.// Plant Dis. Reptr. 1955. - Vol. 39. - P. 363-370.

390. Darrow, G.M. The importanse of virus diseases in the cultivation of strawberries in the United States / G.M. Darrow, A.C. Goheen, P.W. Miller / Proc. Amer. Soc. 1954. - Vol. 63. - P. 547-552.

391. Daubeny, H.A. Nanaimo strawberry cultivar / H.A. Daubeny, C. Kempler // Hortic. Sci. 1997. - Vol. 32, N 7. - P. 1293-1294.

392. Dawson, W.O. Modifications of nucleic acid precursors that inhibit plant virus multiplication / W.O. Dawson, C. Boyd // Phytopath. 1987. - Vol. 77, N 3. p. 477-480.

393. De Fasio, G. Viralosole: antiviral de comportamento hormonal em fumo / G. De Fasio, M. Kudamatsu, M. Vicente // Agr. Inst. Biol. S. Paulo. - 1984. -Vol. 51, N 1-4.-P. 27-34.

394. Deogratias, J.M. Eradication of prune dwarf virus, prunus necrotic ringspot virus, and apple chlorotic leaf spot virus in sweet / J.M. Deogratias, F. Dosba, A.B. Lutz // Can. J. Plant Pathol. 1989. - Vol. 11, N 4. - P. 337-342.

395. Dobrov, E.N. Comparative stady of antigenic propertes of potato virus X and its coat protein in solution and after adsorbtion to solid supports / E.N. Dobrov, A.F. Popkova, M.I. Goldstein / J. Virolog. Methods. 1991. - Vol. 32, N2-3. -P. 317-326.

396. Dong, J.-Z. Transformation of melon (Cucumis melo L.) and expression from cauliflower mosaic virus 35 S promoter in transgenic melon plants / J.-Z. Dong, M.-Z. Yang, S.-R. Jia et al. // Bio Technology. -1991. Vol. 9. - P.858-863.

397. Dorst, H. A whitefly-transmitted disease of glasshouse vegetables, a novelty for Europe / H. Dorst, B.N. Huijbert, L.A. Bos // Neth. Plant. Pathol. 1980. -Vol. 86, N6.-P. 311-313.

398. Dreibrodt, L. Meristemkultur von Erdbeern / L. Dreibrodt // Arch. Gartenbau. 1984. -Bd. 32, N 4. - S. 161-166.

399. Du Plesis, H.J. Efficient genetic transformation of strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) cultivar Selecta / H.J. Du Plesis, R.J. Brand // Acta Hortic. -1997.-Vol. 447. P. 289-293.

400. Erlich, H.A. PCR technology / H.A. Erlich. / N.Y. Snjecton Press - 1989.

401. Francki, R.I.B. Classification and nomenclature of viruses. 5-th report of the Int. Committee on Taxonomy of Viruses / R.I.B. Francki, C.M. Fauquet, D.L. Knudson et al. / Arch. Viral. 1991. - Supple 2.

402. Frazier, N.W. Differential transmission of nineteen variations of strawberry mottle virus by Aphis gossipii Glover / N.W. Frazier // Plant Dis. Reprt. 1960. -Vol. 44, N 1. - P. 12-13.

403. Frazier, N.W. Inactivation of two strawberry viruses in plant crown in a natural high-temperature environment / N.W. Frazier, V.Voth, R.S. Bringhurst // Phytopath. 1965. - Vol. 55, N 11. - P. 1203.

404. Frazier, N.W. Virus disease of small fruit and grapevines (A Handbook) / N.W. Frazier, F.C. Mellor, J.P. Fulton et al. / Berkley, California. 1970. -481 p.

405. Frazier, N.W. Detection of graft-transmissible diseases in strawberry by a modified leaf grafting technique / N.W. Frazier // Plant. Dis. Reprt. 1974a. -Vol. 58, N3,-P. 203-207.

406. Frazier, N.W. Six new strawberry indicator clones evaluated for the detection and diagnosis of twelve graft-transmissible diseases / N.W. Frazier // Plant Dis. Report. 1974 b. -Vol. 58, N 1. - P. 28-31.

407. Frazier, N.W. A procedure for detection of graft-transmissible diseases in strawberry by leaf grafting technique / N.W. Frazier / Advances in Strawberry Research. 1989. - Vol. 5, P. 9-12.

408. Fraser, R.S.S. Plant growth regulators and virus infection: A critical review / R.S.S. Fraser, R.J. Whenham / Plant Growth Regulation. 1982. - Vol. 1, N 1. -P. 37-59.

409. Freeman, J.A. Influence of latent virus on vigor, yield and quality of British Royal Sovereing Strawberries / J.A. Freeman, F.C. Meller// Can. J. Plant Sci. -1962.-Vol. 42.-P. 602-610.

410. Fulton, J.P. Strawberry viruses / J.P. Fulton // Hortic Sci. 1977. - V. 12, N 5.-P. 470-471.

411. Galetta, G.I. The U.S. Department of Agriculturel strawberry breeding program / G.I. Galetta, A.D. Draper, H.D. Scott // Hort. Science. 1981. - Vol. 16, N6.-P. 743-746.

412. Ghena, N. Folosirea termoterapiei pentru obtinerea materialului saditor liber de visor la capsun / N. Ghena // Revista de horticultura si viticultura. 1972. -An. 21,N 10.-P. 72-76.

413. Graham, J. Geneticalli modified food / J. Graham / Scottish Crop Research Institute Annual Report for 1996. 1997. - P. 58-63.

414. Graichen, K. Nachweis und Diagnose von Erdbeervirosen im Rahmen der Erzeugung virusfreien Pflanzenausgangsmaterials / K. Graichen // Arch. Gartenbau. 1982 a. - H. 30, N 3. - S. 133-138.

415. Graichen, K. Viruskrankheiten des Beerenobstes / K.Graichen // Nachrichtebl Pflanzenschurtz DDR. 1982 6. - H. 36. - S. 224-226.

416. Graichen, K. Prufiing von Erdbeersorten und Klonen auf Virusresistenz und Schlussfolgerung fur die Erdbeerzuchtung / K. Graichen, M. Ulrich, U. Meyer / Tag. Ber. Akad. Landwirtsch. Wiss. DDR, Berlin. - 1990. - T. 292. - S. 109114.

417. Hadidi, A. Detection of potato leafroll and strawberry mild yellow-edge luteoviruses by reverse transcription-polymerase chain reaction amplification / A. Hadidi, M.S. Montasser, L. Levy et al. // Plant Dis 1993. - Vol. 77, N 6. -P. 595-601.

418. Hansen, A.J. Effect of ribavirin on green ring mottle causal agent and necrotic ringspot virus in Prunus species / A.J. Hansen // Plant Dis. 1984. -Vol. 14, N3.-P. 216-218.

419. Harris, R.V. Grafting as a method for investigating a possible virus disease of the strawberry/R.V. Harris//Hortic. Sci.- 1932.-Vol. 10, N 1. P. 35-41.

420. Henson, J.M. The polymerase chain reaction and plant disease diagnosis / J.M. Henson, R. French // Ann. Rev. of Phytopathology. 1993. - Vol. 31. - P. 81-109.

421. Hepp, R.F. Aphid transission of strawberry mottle virus from Chenopodium quinoa to Fragaria vesca / R.F. Hepp, R.H. Converse // Plant. Dis. 1990. - T. 74, N4.-P. 320-321.

422. Hibino, H. Mycoplasma-like bodies in the pear psylla vector of pear decline. / H. Hibino, G.H. Kaloostian, H. Schneider // Virology. 1971. - Vol. 43. - P. 34-40.

423. Hildebrandt, A.S. Stimulation or inhibition of virus infected and insect-gall tissues and single-cell clones / A.S. Hildebrandt // Proc. Nat. Acad. Sci. 1958.- Vol. 44. P.354-363.

424. Hilton, R.E. Elimination of mild yellow edge virus from six Strawberry varieties by a combination of heat treatment and meristem-tip culture / R.E. Hilton, S.H. Smith, N. Frazier et al. / Strawberry News Bull. 1970. - Vol. 16.- P. 1-2.

425. Hunter, B.G. Purification and characterization of strawberry crinkle virus / B.G. Hunter, J. Richardson, R.G. Dietzgen // Phytopath. 1990. - Vol. 80, N 3. -P. 282-287.

426. Iha, A. Transmission of arabis mosaic virus to strawberry plants by a nematode (Xiphinema sp.) / A. Iha, A.F. Posnette // Nature. London. - 1959. -Vol. 184.-P. 962-963.

427. Jackson, A.O. Biology, structure and replication of plant rhabdoviruses / A.O. Jackson, R.B. Francri, D. Zuidema // The rhabdoviruses. New York. -Plenum Press. - 1987. - P. 427.

428. James, С. Global status of transgenetic crops in 1997 / C. James / IS AAA Briefs IS AAA, Ithaca, NY. - 1997. - N 5.

429. Janse, J.D. New methods of diagnosis in plant pathology perspectives and pitfalls / J.D. Janse // Bui. OEPN. - 1995. - N 1 -2. - P. 5-17.

430. Jelkman, W. Rhabdoviruslike particles in crinkle-diseased strawberries in Germany / W. Jelkman, D.E. Lessemann, R. Casper // Phytopath. 1988. -Vol. 121,N2. -P. 143-149.

431. Jelkman, W. New potex virus associated with strawberry mild yellow adge disease / W. Jelkman, R.R. Martin, D.E. Lessemann et al. // J. Gen. Virology. -1990. Vol. 71, N6. - P. 1251-1258.

432. Johanson, F.D. Nutrient deficiencies and foliar composition of strawberries / F.D. Johanson, R.B. Walker // Proc. Am. Soc. Hortic. Sci. 1963. - Vol. 83. -P. 431-439.

433. Johnson, H.A. Seed transmission of tobacco streak virus in strawberry / H.A., Johnson, R.H., Converse, A., Amorao et al. // Plant Dis. 1984. - Vol. 68.-P. 390.

434. Jomantiene, R.R. Strawberry: an exceptional host plant for phytoplasma infection / R.R., Jomantiene, J.L., Maas, E.L., Davis et al. // Plant. Virology. -2002.-Vol. 8.-P. 85-89.

435. Jomantiene, R.R. Molecular identification and classification of strawberry phylloid fruit phytoplasma in group 16SrI, new subgroup / R.R., Jomantiene, J.L., Maas, F., Takeda, E.L., Davis // Plant Dis. 2002. -Vol. 86, N 8. - P. 920.

436. Jomantiene, R.R. Phytoplasma in strawberry with fruit phyllody / R.R., Jomantiene, E.L., Dally, R.E., Davis et al. // Acta Hortic. 2002. - Vol. 2, N 567.-P. 635-638.

437. Kaitasowa, P. Immunelektronen-mikroskopischer Nachweis des Tomatenzwergbusch Virus (tomato bushy stunt virus) in Erdbeeren / P. Kaitasowa, V. Kondakowa // Arch. Phytopath. Pflzschutz. 1989. - T. 25, N 5. -S. 515-516.

438. Качармазов, В. Производство на тестиран ягодов разсад / В. Качармазов, С., Иванов // Овощарство. 1972. - Ч. 51, Бр. 3. - С. 19-22.

439. Kavanagh, Т.А. Strategies for engineering virus resistance in transgenic plants / T.A. Kavanagh, C. Spilane//Euphytica. 1995.- Vol. 85. - P. 149-158.

440. Keen, N.T. The molecular biology of disease resistance / N.T. Keen // Plant Mol. Biol. 1992. - V. 19, N 1. - P. 109-122.

441. Kegler, H. Zum Programm der Produktion virusfreier Obstgeholze, Erdbeerjungpflanzen und Unterlagen in der DDR / H. Kegler / Gartenbau (Berlin). 1988. - T. 35, N 1. - S. 19-20.

442. Keplinger, J.A. Transmission of tomato ringspot virus to straw-berry by Xiphinema americanum / J.A. Keplinger, A.J. Broun // Phytopath. 1973. -Vol.63,N2.-P. 202-203.

443. Klein, R.E. Eradication of potato virus X from potato by ribavirin treatment of culture potato shoot tips / R.E. Klein, C.H. Livingstone // Ann. Potato J. -1982. Vol. 59, N 8. - P. 359-365.

444. Kroll, J. Vergleichende Untersuchungen zur Wirkung von 6-Azauracil und 8-Azaadenin auf virusinfizierte Pflanzen / J. Kroll // Zbl. Microbiol. 1988. —1. H.143, B. 2. -S.l 11-120.

445. Kudell, A.R. Elimination of raspberry bushy dwarf virus from axilary bud cultures of red raspberry cv. Lloyd George by antiviral compounds / A.R. Kudell, H. Buchenauer // Phytopath. 1989. - Vol. 124. - P. 332-336.

446. Kuinik, N. Transgenic tomato plants expressing the tomato yellow leaf curl virus capsid protein are resistant to the virus / N. Kuinik, R. Salomon, D. Zamiz // Bio Technol. 1994. - Vol. 12. - P. 500-504.

447. Kunz, R. Bekampfung der Ubertragernematoden des Arabis-Mosaik-Virus an Erdbeeren / R. Kunz, J. Klingler / Schweiz. Z. Obst-Weinbau. 1990. - T. 126, N 14.- S. 366-372.

448. Kurtzman, R.H. Inhibition and atimulation of tobacco mosaic virus by purines / R.H. Kurtzman, A.S. Hildebrandt, R.N. Burries // Virology. 1960. -Vol. 10.-P. 432-448.

449. Labanowska, B. Szkodniki krzewow owocowych / B. Labanowska, D. Gajek // Plantress: Krakow. 2001. - 172 p.

450. La fragola in protetta // Inform. Ortoflorofruttic. 1979. - Vol. 20, N 9. - P. 13-16.

451. Lekic, M. Prilog prouchovanju raxvojnog cicluse male jagodini eisne vasi -Aphis (Cerosipha) forbesi Weed / M. Lekic // Zastita Bilja. 1967. - R. 28, N 96-97.- S. 385-398.

452. Liebert, A. Persistenz des antiphytoviralen Praparates 2,4-Dioxohexyhydro1.3,5-triazin (DHT) in vershiedenen Boden / A. Liebert, G. Schuster // Zbl. Bact. II Abt. 1980. - Bd. 135, H. 8. - S. 691-695.

453. Lin, N.-S. Chronology of appearance of barley stripe mosaic virus protein in infected wheat cells / N.-S. Lin, W.C. Langenberg // J. Ultrastruct. Res. 1984. - Vol. 89, N 3. - P. 309-323.

454. Lopez, М.М. Innovative tools for detection of plant pathogenic viruses and bacteria. Review / M.M. Lopez, E. Bertolini, A. Olmos et al. // Int. Microbiol. -2003.-Vol. 6(4).-P. 233-243.

455. Maaron, C.J.M. PCR-based tests for detection of tobamo-viruses and carlaviruses / C.J.M. Maaron, S.K. Zavriev // Acta Hortic. 2002. - Vol. 598. -P. 117-122.

456. Maia, I.G. Gene expression from viral RNA genomes / I.G. Maia, K. Seron, A.L. Haenni et al. // Plant Mol. Biol. 1996. - Vol. 32, N 1 -2. - P. 367-391.

457. Makosz, E. Stan i perspektivy polskiego sadovnictwa / E. Makosz / Sadovnictwo w krajach srodkowowschodnej Europy. (Mater, konf.). Lublin. -1998.-S. 3-57.

458. Maliarcikova, V. Porovnavanie urodnosti jahod vyprodukovanych v in vitro a v pol nych podmienkach / V. Maliarcikova, M. Okossyova // Pol. nochspodarstvo. 1994. - R. 40, C. 10. - S. 768-770.

459. Marcone, C. Chromosome sizes of phytoplasmas composing major phylogenetic groups and subgroups / C. Marcone, H. Netmark, A. Ragossino et al. // Phytopath. 1999. - Vol. 89, N 9. - P. 805-810.

460. Martin, J. Influence of recent and chronic virus infection on strawberry growth and yield / J. Martin, R. Converse // Phytopath. 1977. - Vol. 67, N 5. -P. 573-575.

461. Matsumoto, T. Elimination of viruses by meristem culture. 1. Production of virus-free potato and strawberry / T. Matsumoto, I. Namba, Y. Watanabe / Res. Bull. Plant Protect. Serv. Japan. 1989. - Vol. 25. - P. 31-34.

462. Matthews, R.E.F. Plant virology. Third edition / R.E.F. Matthews / Acad. Press. NY, London, Toronto, Sydney, San Francisco. - 1991. - 835 p.

463. Mayo, M.A. Changes to virus taxonomy 2004 / M.A. Mayo / Scottish Crop Research Institute, U.K. - Puplished online. - 2004. - N 10, Springer-Verlag.

464. Mc Arthur, D.A. Effect of fertilizer, paclobutrazol, and chlormiqust on strawberry / D.A. Mc Arthur, G.W. Eaton // Sc. Hortic. 1988. - V. 34, N 1-2, - P. 33-45.

465. Mc Grew, J.R. A sensitive strawberry virus indicator clone of Fragaria vesca from the USSR / J.R. Mc Grew / PI. Dis. Report. 1967. - Vol. 51, N 4. - P. 288-291.

466. Mc Grew, J.R. Eradication of latent С virus in the Fuwannee variety of strawberry / J.R. Mc Grew // Phytopath. 1965. - Vol. 55. - P. 480-481.

467. Mc Grew, J.R. Meristem culture for production of virus-free strawberries. Proc. Conf. Nurs. Prod. / J.R. Mc Grew // Plants through tissue culture. -Beltsvill, Maryland. 1980. - P. 180.

468. Mc Namara, D. The spread of arabis mosaic virus through noncultivated vegetation / D. Mc Namara // Plant. Patol. 1980. - Vol. 29, N 4. - P. 173-176.

469. Miller, P.W. Indexing strawberries infected with nonpersistent viruses by use of detached leaves and aphids / P.W. Miller // Plant Dis. Reptr. 1954. - Vol. 37.-P. 568-571.

470. Minoiu, N. Chemotherapy of some fruit tree viruses / N. Minoiu // Acta Hortic. 1976. - Vol. 67. - P. 103-108.

471. Morris, T.J. Isolation of a caulimovirus from strawberry tissue infected with strawberry vein banding virus / T.J. Morris, R.H. Mullin, D.E. Schlegel et al. // Phytopath. 1980. - Vol. 70, N 2. - P. 1560.

472. Mraz, I. Variability in coat protein sequence homology among American and European sources of strawberry vein banding virus /1. Mraz, K. Petrzik, M. Sip et al. // Plant Dis. 1998. - Vol. 82, N 5. - P. 544-546.

473. Muniyappa, V. Whiteflies / V. Muniyappa / Vectors of plant pathogens. -New York e.a. 1980. - P. 6-86.

474. Murashige, T. Plant propagation thorough tissue cultures / T. Murashige // Am. Rev. Plant Physiol. 1974.-N 25. - P. 135-166.

475. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissue cultures / T. Murashige, F.A. Skoog // Physiol. Plant. 1962. -Vol. 27, N 15.-P.473-497.

476. Naumann, W.D. Vergleich von Erdbeerpflanzgut: Grunpflanzen, Frigopflanzen, microvermehrte Pflanzen und deren Nachbau / W.D. Naumann // Erwerbsobstbau. 1987. - Jg. 29, H. 6. - S. 180-190.

477. Navatel, J.C. La production de plants de fraisiers certifies dans quelques pays europeens. / J.C. Navatel, B. Fournier / Bulletin OEPP/EPPO. 1986. - Vol.16. - P. 369-373.

478. NCBI taxonomy database. 2003. - info@ncbi.nlm.nih.Rov.

479. Nehra, N.S. Genetic transformation of strawberry by Agrobacterium tumefaciens using a leaf disk regeneration system / N.S. Nehra, R.N. Chibbar, K.K. Kartha et al. // Plant Cell Rept. 1990. - Vol. 9. - P. 293-298.

480. OECD Bio Track Database. 1999 - http:// www.olis.oesd.org / biotrack.nsf.

481. Oertel, C. Zur Effektivitat der Warmebehandlung bei der Virusfreimachung von Zierpflanzen und Erdbeeren / C. Oertel // Arch. Gartenbau. 1981. - H. 5. -S. 217-231.

482. Oertel, C. Erzeugung pathogen- und virusfreier Erdbeerjungpflanzen / C. Oertel // Gartenbau Mag. 1992. - Jg. 1, N 10. - S. 51 -53.

483. Ohashi, Y. Synthesis of stress proteins in tobacco leaves / Y. Ohashi, M. Matsuoka / Plant Cell Physiol. 1985. - Vol. 26, N 3. - P.47.

484. Orchansky, P. Human interferons protect plants from virus infection / P. Orchansky, M. Rubinshein, I. Sela / Proc. Nath. Acad. Sci. USA. 1982. -Vol. 79. - P. 2278-2284.

485. Padovan, A. Association of Candidatus Phytoplasma australiense with green petal and lethal yellows diseases in strawberry / A. Padovan, K. Gibb, D. Persley // Plant Pathol. 2000. - Vol 49, N 3. - P. 362-369.

486. Pastore, M. Phytoplasma infection in strawberry cultivation in Southern Italy / M., Pastore, G., Cubicciotti, A., Bertaccini et al. // Acta Hortic. 2002. -Vol. 3,N567.-P. 639-642.

487. Patogen-tested strawberry. Certification scheme N 11 OEPP. Bulletin ОЕРР/ EPPO. - 1994. - V. 24. - P. 875-889.

488. PCR Protocol : A Guide to Methods and Applications / M.A. Innius, D.H. Gelfand, J.J. Sninsky et al. / San Diego. Acad. Press. - 1990. - 482 p.

489. Pennazio, S. Potato virus X aggregates in ultrathin section of Datura meristematic dome / S. Pennazio, A. Appiano // Phytopathol. Mediter. 1975. -V. 14.-P. 12-15.

490. Peters, D. Plant rhabdovirus group / D. Peters // GMJI AAB, Description of plant viruses. 1981. - N 244. - P. 6.

491. Pieczarka, D.J. Effect of interaction between two viruses and Rhizoctonia on pepper / D.J. Pieczarka, T. A. Zitter // Plant Dis. 1981. - Vol. 65, N 5. - P. 404-406.

492. Pisi, A. Leaf graft: metodo diagnostico per le virosi / A. Pisi / Inf. Orn. Fitopatol. - 1982. - Vol. 32, N 4. - P. 23-26.

493. Pisi, A. Malattie da virus e virus-simili della fragola / A. Pisi / Inf. Fitopatologo. 1984. - Vol. 10, N 5. - P. 54-58.

494. Pisi, A. Epidemiology of virus infections in Central California strawberry fruting fields / A. Pisi, A. Gold, B. Rogers // Acta. Hortic. 1982. - Vol. 129. -P. 89-90.

495. Plakidas, A. G. Strawberry yellows, a degeneration disease of the strawberry / A. G. Plakidas / Phytopath. 1926. - N 16. - P.423-426.

496. Plakidas, A. G. Strawberry xanthosis (yellows), a new insect-borne disease / A. G. Plakidas / J. Agr. Res. 1927. - N 35. - P. 1057-1090.

497. Plakidas, A. G. The June yellows of the strawberries / A. G. Plakidas / Phytopath. 1932. - N 22. - P.22.

498. Plakidas, A. G. Strawberry diseases / A. G. Plakidas / Louisiana State Univ. Studies Biol. Sci. Series. 1964. - N 5. - P. 195.

499. Polak, J. Detekce dvou a dvou nepoviru ve chmelu (Humulus lupulus L.) imunoenzymatickou metodou (ELISA) / J. Polak, J. Kristek, P. Svoboda // Ochr. Rostl. 1989. - T. 25, N 2. - S. 81 -87.

500. Polak, J. Attempts at multiplication, purification, electron microscopy, and characterization of three isolates of the strawberry mottle agent / J. Polak, F.A. Meer, H. Huttinga // Biol. Plantarum. 1991. - Vol. 33, N 5. - P. 377-385.

501. Pospieszny, H. Induction of antiviral resistance by chitosan / H. Pospieszny, S.Chircov, J. Atabekov // Plant. Science. 1991. - Vol. 79. - P. 63-68.

502. Powel Abel, P. Delay of symptom development in transgenic plant that express the tobacco mosaic virus coat protein gene / P. Powel Abel, R.S. Nelson, N. Hoffmann et al. // Science. 1986. - Vol. 232. - P. 738-743.

503. Prince, J.P. Molecular detection of diverse mycoplasmalike organisms (MLOs) associated with grapevine yellows and their classification with aster yellows, X-disease, and elm yellows MLOs / Prince J.P. // Phytopath. 1993. -Vol. 83.-P. 1130-1137.

504. Putnam, M. L. Evolution and selected methods of plant disease diagnosis / M. L. Putnam / Crop protection. 1995. - Vol. 14, N 6. - P. 517-525.

505. Ralph, R.K. Effect of 2-thiouracil on the formation of double-stranded plant viral ribonucleic acid / R.K. Ralph, R.E.F. Mattheews, A.J. Matus // Biochem. Biophys. Acta. 1965. - Vol. 108. - P. 53.

506. Ravelonandro, M. Virable resistance to plum pox virus and potato virus Y infection in transgenic Nicotiana plants expressing plum pox virus coat protein / M. Ravelonandro, M. Monsion, R. Delbos et al. // Plant Science. 1993. - Vol. 91.-P. 157-169.

507. Razin, S. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas / S. Razin, D. Yogev, Y. Naot // Microbiol, and Molecular. Biol. Rev. 1998. - Vol. 62, N 4.-P. 1094-1156.

508. Reed, B.M. Molecular breeding for color, flavor and fragrance / B.M. Reed, N.C. Gutterson // Scientia Hort. 1993. - Vol. 55. - P. 141-160.

509. Reed, B.M. Detection and control of bacterial contaminants of plant tissue culture. A review of recent literature / B.M. Reed, P. Tanprasert // Plant Tissue Culture and Biotechnology. 1995. - Vol. 1, N 3. - P. 137-142.

510. Richardson, J. Successful juice inoculation of the aphid-vectored strawberry crinkle virus / J. Richardson, E. Sylvester // Calif. Agr. 1988. - Vol. 42. - P. 6-7.

511. Robbins, J. Selection for virus tolerance in strawberry seedlings in relation to virus source and plant age / J. Robbins, T.M. Sjulin // J. Am. Soc. Hortic. Sc. 1988. - Т. 113, N 6. - P. 924-927.

512. Roberts, D.A. Infection of apical initials in tobacco shoot meristems by tobacco ringspot virus / D.A. Roberts, R.G. Christie, M.C. Arsher // Virology. -1970. Vol. 42, N 1. - P. 217-220.

513. Romanenko, N.D. Studies of regularity of the Nepoviruses epiphytoties forming in natural ecosystem and agrocenoses / N.D. Romanenko / Second english language inter, nematology symp. 1997. - Moscow. - P. 26.

514. Romanenko, N.D. Associations between longidorids (Nematoda : Longidoridae) and NEPO-viruses in different ecosystems / N.D. Romanenko, M.A. Keldich, O.N. Chervyakova / Second english language inter, nematology symp. 1997. - Moscow. - P. 27.

515. Ryan, С.А. Oligosaccaharides as recognition signals for the expression of defensive genes in plants / C.A. Ryan // Biochemistry. 1988. - Vol. 27. - P. 8879-8883.

516. Schuster, G. Antiphytovirale Verbindungen mit Guanidinstrukturer / G. Schuster // J. Phytopath. 1982. - Bd. 103, H. 1. - S. 77-86.

517. Schuster, G. Die Wirkung fon Camposan (Ethephon) auf Pflanzenviren / G. Schuster / Tag. Ber. Acad. Landw.Wiss. DDR. Berlin. - 1980. - H. 179. - S. 347-353.

518. Schuster, G. Further progress in the development of antiviral substances / G. Schuster // Plant Virology. Proc. of 9-th conf. of Czechoslovak plant Virologist. Brno.- 1988.-S. 117-121.

519. Schuster, G. Outline of the current status of the development of fully synthetic antiphytoviral substance and their prospective practical application / G. Schuster// Zecz. Probl. Post. Nauk.rol. 1983. - N 291. - P. 275-285.

520. Schuster, G. Virusbekampflung durch Antimetaboliten des Nucleinsaurestoffwechsels / G. Schuster, O. Byhan // Tagungsber. der Add. d. DDR. 1980. - N 184. - S. 125-136.

521. Schuster, G. Antiphytoviral Granylate mit OHT als Wirkstoff / G. Schuster, W. Kramer// Arch. Phytopath. u. Pflanzensechutz. Berlin. - 1982. - Bd. 18, N 2.-S. 77-87.

522. Schuster, G. Investigations into correlations between cytocinin activities and antiviral activities / G. Schuster, G. Vassilev, C. Hohne // Plant Growth Regulators Proc. Fourth Int. Symp. Pamporovo, Sofia. - 1986. - Pt. 2. - P.419-426.

523. Scorza, R. Transgenetic plums (Prunus domestica L.) express the plum pox virus coat protein gene / R. Scorza, M. Ravelonandro, A.M. Callahan et al. // Plant Cell Rep. 1994.-Vol. 14.-P. 18-22.

524. Sinha, R.C. Relative concentration of mycoplasmalike organisms in plants at various times after infection with aster yellows / R.C. Sinha // Can. J. Plant Pathol. 1983. - Vol. 5. - P. 7-10.

525. Sinha, R.C. Purification and serological detection of mycoplasmalike organisms from plants affected by pear eastern X-desiase / R.C. Sinha, L.N. Chiykowski // Can. J. Plant Pathol. 1984. - Vol. 6. - P. 200-205.

526. Skirvin, R.M. Somaclonal variation: has it prove useful for plant improvement ? / R.M. Skirvin, M. Norton, Mc. Phetlers // Acta Hortic. 1993. -Vol. 336.-P.333-340.

527. Slack, D.A. Summer Dwarf of strawberry / D.A. Slack, C. Seymour, H. Fields, et al. // Plant Dis. Reptr. 1957. - Vol. 41. - P. 398-401.

528. Smart, C.M. Phytoplasma-Specific PCR primers based on sequences of the 16S-23S r RNA spaser region / C.M. Smart, B. Schneider, C.L. Blomquist et al. // App.and Environm. Microbiol. 1996. - Vol. 62, N 8. - P. 2988-2993.

529. Smeets, L. Problem of heat spot in Fragaria vesca L. when indexing strawberry selection for virus / L. Smeets, L.M. Wassenaar // Euphytica. 1975. - Vol. 5, N1,-P. 51-54.

530. Spiegel, S. Characterization and geographical distribution of a new ilarvirus from Fragaria chiloensis / S. Spiegel, R.R. Martin, F. Leggett et al. // Phytopath. 1993. - Vol. 83, N 9. - P. 991-995.

531. Staudt, G. Taxonomic studies in the genus Fragaria Typification of Fragaria species known at the time of Linnaeus / G. Staudt // Can.J. Botany. 1962. -Vol. 40. - P. 869-886.

532. Stenger, D.C. Isolation, molecular cloning and detection of strawberry vein banding virus DNA / D.C. Stenger, R.H. Mullin, T.J. Morris // Phytopath. -1988.-Vol. 72, N2.-P. 154-159.

533. Stoimenova, E. Antiphytoviral effect of strawberry leaf extract on tomato mosaic virus and cucumber mosaic virus in tomato / E. Stoimenova, B. Angelov // Растен. науки. 1995. - Г. 32, N 4. - С. 154-155.

534. Стоянов, С. Новото при производството на ягодов посадъчен материал / С. Стоянов, В. Волчев // Овощарство, градинарство и консервна промишленост. 1988. - Т. 69, N 5. - С. 6-8.

535. Strittmatter, G. Inhibition of fungal disease development in plants by engineering controlled cell death / G. Strittmatter, J. Janssens, C. Opsomer et al. //Bio. Technology.- 1995.-Vol. 13.-P. 1085-1089.

536. Sylvester, E.S. Consecutive serial passage of Strawberry Crinkle Virus in Myzus ornatus by Injectional Transmission to Fragaria vesca / E.S. Sylvester, J. Richardson // J. Phytopath.- 1986.-Vol. 76.-N6.-P. 1161-1164.

537. Sylvester, E.S. Inoculation of the aphids Hyperomyzus lactucae and Chaetosiphon jacobi with isolated of sowthistle yellow vein virus and strawberry crinkle virus / E.S. Sylvester, J. Richardson // J. Phytopath. 1981. -Vol. 71.-Nil.-P. 598-609.

538. Tanprasert, P. Detection and identification of bacterial contaminants from strawberry runner explants / P. Tanprasert, B.M. Reed // In Vitro Cell Dev. Biol. -1997.-N33.-P. 221-226.

539. Thomas, H. Fragaria virginiana, an indicator host for vein banding virus of strawberry / H. Thomas, H. Stingl // Plant. Dis.Reportes. 1963 a. - Vol. 47. -N 11.-P. 998-999.

540. Thomas, H. Strawberry mottle virus latent in Fragaria virginiana (Ml clone) / H. Thomas, H. Stingl // Plant. Dis. Reporter. 1963 6. - Vol. 47. - N 11. - P. 995-997.

541. Thompson, P.A. Evidence for a factor which prevents the development of parthenocarpic fruits in the strawberry / P.A. Thompson // J. Exptl. Bot. (London). 1961. - Vol. 12. - P. 199-206.

542. Thompson, P.A. Reversal of photoperiodic induction of strawberries with maleic hydrazide / P.A. Thompson // J. Nature (London). 1963. - Vol. 200. -P. 146-148.

543. Thompson, J.R. Reversal of photoperiodic induction of strawberries with maleic hydrazide / J.R.Thompson, S. Wetzel, W. Jelkmann // Acta Hortic. -2004.-N656.-P. 51-56.

544. Trudgill, D.L. The occurrence importance and control of Longidorus elongatus (Nematoda : Dorylaimida) in Scottish strawberry plantations / D.L. Trudgill //J.Hort. Sci. 1982. - Vol. 37, N 4. - P. 449-456.

545. Tu, G.C. Maize dwarf mosaic virus predisposes corn to root rot infection / G.C.Tu, R.E. Ford //Phytopath. 1971. - Vol. 61, N 7. - P. 800-803.

546. Tzanetakis, I.E. First report of beet pseudo yellows virus in strawberry in the United States: a second crinivirus able to cause pallidosis disease / I.E. Tzanetakis, W.M. Wintermantel, R.R. Martin // Plant. Dis. 2003. - Vol. 87, N 11.-P. 1398.

547. Tzanetakis, I.E. Complete nucleotide sequence of a strawberry isolate of beet pseudo yellows virus / I.E. Tzanetakis, R.R. Martin // Virus Genes. 2004. -Vol. 28, N3.-P. 239-246.

548. Tzanetakis, I.E. Two criniviruses are associated with strawberry pallidosis disease / I.E. Tzanetakis, A.B. Halgren, W.M. Wintermantel et al. // Acta Hortic. -2004.-N656.-P. 21-26.

549. Tzanetakis, I.E. Identification and detection of a virus associated with strawberry pallidosis disease / I.E. Tzanetakis, A.B. Halgren, K.E. Keller et al. // PI. Disease. 2004. - Vol. 88, N 4. - P. 383-390.

550. Tzanetakis, I.E. Strawberry necrotic shock virus: a new virus previously thought to be Tobacco streak virus / I.E. Tzanetakis, I.C. Mackey, R.R. Martin // Acta Hortic. 2004. - N 656. - P. 27-31.

551. Ulrich, A. Strawberry deficiency symptoms. A visual and plant analysis guide to fertilization / A. Ulrich, M.A.E. Mostafa, W.W. Allen // Agric. Sci. Publ., Division of Agric. Sci., Univ. of California. 1980. - N. 4098. - 58 p.

552. Vallotton, R. Nematodes des petit fruits et principale methodes du lutte contre ces ravageurs / R. Vallotton // Rev. suisse Vitic. Arboric. Hortic. 1989. -T. 21, N 2. - P. 121-122.

553. Van Loon, L.C. The induction of pathogenesis-related proteins by pathogens and specific chemicals / L.C. Van Loon // Neth. J. Plant. Pathol. 1983. - Vol. 89, N6.-P. 265-273.

554. Virus Taxonomy. Classification and Nomenclature of Viruses / Eds. M.N.V. Van Regenmortel, C.M. Fauquet, D.H.L. Bishop et al. / Seventh report of the international committee on taxonomy of viruses. Academic Press. - San Diego. - 2000.- 1167 p.

555. Walkey, D.G.A. Virus in plant apical meristems / D.G.A. Walkey, M.J.W. Webb // J. Gen. Virol. 1968. - Vol. 3. - P. 311 -313.

556. Watkins, C.A. Double-stranded RNA analysis of strawberry plants affected by June yellows / C.A. Watkins, A.T. Jones, M.A. Mayo et al. // Advances in Plant Pathology. 1993. - Vol. 10. - P. 65-126.

557. Watkins, C.A. The effect of heat treatment and meristem-tip culture on June Yellows in strawberry / C.A. Watkins, R.J. Mc Nicol, K. Young et al. // Ann. appl. Biol. 1990. - Т. 116, N 3. - P. 489-492.

558. Wei Shiquan. The identification on strawberry mottle virus in China / Wei Shiquan, Wu Yuanhua // Acta Phytopath. Sinica. 1994. - Vol. 24, N 4. - P. 293-298.

559. Wu Yuanhua. The identification on strawberry pseudo mild yellow edge virus (SPMYEV) / Wei Shiquan, Wu Yuanhua // Acta Phytopath. Sinica. -1995. Vol. 25, N 4. - P. 367-372.

560. Xie Cheungson. Comparison of salicylic acid and tobacco mosaic virus as inducers of defense compounds and resistance in tobacco to TMV and Peronospora tabacina / Xie Cheungson, J. Kuc // Phytopath. 1995. - Vol. 85, N 10.-P. 1160.

561. Yoshikawa, N. Strawberry pallidosis disease: distinctive dsRNA species associated with latent infections in indicators and in diseased strawberry cultivars / N. Yoshikawa, R.H. Converse // Phytopath. 1990 6. - T. 80, N 6. -P. 543-548.

562. Yoshikawa, N. Double-stranded RNA in pallidosis-diseases strawberry and Fragaria species / N. Yoshikawa, R.H. Converse // Phytopath. 1990 a. - Vol. 79.-P. 912.

563. Yoshikawa, N. Purification, characterization and serology of strawberry pseudo mild yellow-edge virus / N. Yoshikawa, T. Inouye // Ann. Phytopath. Soc. Jpn. 1986. - Vol. 52. - P. 643-652.

564. Yoshikawa, N. Luteovirus-like particles in phloem tissue of strawberry mild yellow edge virus infected plants / N. Yoshikawa, S. Ohki, H. Kobatake et al. // Ann. Phytopath. Soc. Jpn. 1984. - Vol. 52. - P. 658-663.

565. Yoshikawa, N. Use of dot immunobinding assay for rapid detection of strawberry pseudo mild yellow-edge virus / N. Yoshikawa, P. Poolpol, T. Inouye // Ann. Phytopath. Soc. Jpn. 1986. - Vol. 52. - P. 728-731.

566. Yoshikawa, N. Purification and some properties of strawberry mottle virus / N. Yoshikawa, R.H. Converse // Ann. Appl. Biol. 1991. - Vol. 118, N 3. - P. 565-576.