Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Система интерферона низших обезьян в норме и при некоторых видах инфекционной патологии

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Система интерферона низших обезьян в норме и при некоторых видах инфекционной патологии"

На правах рукописи

КАРАЛ-ОГЛЫ ДЖИНА ДЖИНАРОВНА

СИСТЕМА ИНТЕРФЕРОНА НИЗШИХ ОБЕЗЬЯН В НОРМЕ И ПРИ НЕКОТОРЫХ ВИДАХ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ

03 .ОО.Об.-Вирусология 14.00.36.-Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2007

003060771

Работа выполнена в Государственном Учреждении Научно-исследовательском институте медицинской приматологии РАМН, г. Сочи.

Научный руководитель: Доктор медицинских наук Научный руководитель: Доктор биологических наук

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук Кандидат медицинских наук

Агрба Виолета Засимовна Мезенцева Марина Владимировна

Славина Елена Григорьевна Деева Элла Германовна

Ведущая организация: Государственное учреждение научно-

исследовательский институт вирусологии им. Д И Ивановского, г. Москва.

Защита состоится «$» 2007 г. в часов на

заседании диссертационного совета при ГУ НИИ ГРИППА РАМН по адресу. 197376 Санкт-Петербург, ул профессора Попова ,15/17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения научно-исследовательского института гриппа РАМН.

Автореферат разослан » ¿М^иЯ- 2007 года Ученый секретарь диссертационного совета:

кандидат медицинских наук Т.Г.Лобова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы ИФН - созданный природой универсальный фактор неспецифической резистентности с многообразием физиологических функций - представляет чрезвычайный интерес, которым объясняется расширение исследований, связанных с изучением функций и значений интерферонов Неблагоприятная демографическая ситуация в современной России с наблюдающимся увеличением заболеваемости и смертности населения, требует тщательного изучения патологии человека В этой связи особенно актуально адекватное моделирование различных патологических состояний человека, для чего обезьяны являются незаменимыми в силу анатомо-физиологической и эволюционной близости к человеку Для правильной оценки данных, получаемых при моделировании патологических состояний человека на обезьянах, необходимы точные знания о функционировании их физиологических систем Фундаментальные представления об интерфероно-вом статусе существенны при моделировании различных патологических состояний человека, в том числе вирусной этиологии Результаты исследований, полученные на обезьянах, с минимальной коррекцией можно экстраполировать на людей [Лапин Б А , Джикидзе Э К , Крылова Р И ,2001]

Определение интерферонового статуса у людей находится в центре внимания клинических иммунологов Его изучение необходимо для понимания процессов активации, трансформации, малигнизации и противоопухолевого иммунитета, природы возникающих иммунодефи-цитных состояний при различных патологических процессах, в том числе вирусных и инфекционных заболеваниях, а также разработки путей иммунотерапии и иммунокоррекции

Охарактеризованы пищеварительная, кроветворная и др физиологические системы приматов [Лапин Б А , Джикидзе Э К, Фридман ЭП, 1987, Куксова МИ, 1972,Гончарова НД, Лапин Б А, Хавинсон В X , 2002, Гончаров Н П , Воронцов В И , Кация Г В и др , 1977], а совокупные сведения о функционировании всех звеньев системы ИФН, как ведущего фактора естественной резистентности, в литературе отсутствуют Есть лишь упоминание об определении отдельных звеньев ИФН-статуса, например, ИФН -у в связи с изучением действия некоторых интерфероногенов и экспрессии генов ИФН -а и ИФН -ß при SIV-инфекции у макаков резус [Abel К , Alegria-Hartman М J , Rothaeusler К et al ,2002] В соответствии с этим является актуальным определение интерферонового статуса клинически здоровых обезьян для установления нормативных показателей функционирования этой системы

Эксперименты на обезьянах в широком плане в настоящее время по многим причинам недоступны для большинства исследователей (исчезновение многих видов из мест естественного обитания, запреты законодательствами многих стран на экспорт обезьян, дороговизна, запреты по использованию животных для экспериментальных

целей обществом защиты животных и т д) Вместе с тем, потребность в обезьянах, специально разводимых в питомниках и заказниках для широкого спектра медико-биологических исследований и моделирования различных патологических состояний человека огромна Поэтому использование обезьян в медико-биологических исследованиях должно быть регламентировано и строго обосновано

Первые попытки клинического использования интерферонов были сделаны вскоре после их открытия Параллельно с изучением и применением интерферонов велась работа по поискам индукторов ИФН, которые, принципиально отличаясь от интерферона, вместе с тем имеют спектр близких биологических эффектов на организменном уровне Индукторы интерферона были открыты одновременно с интерфероном, так как выработка интерферона является естественным ответом на вирусное инфицирование Вирусы в дальнейшем стали использоваться для получения ИФН первого поколения из лейкоцитов человека Медицинская наука в настоящее время обладает рядом индукторов эндогенного интерферона невирусного происхождения, разрешенных для медицинского использования Важным является создание адекватной модели, которой могут служить обезьяны, используемые для пред-клинического испытания новых иммуномодуляторов и других медикаментозных средств, наполняющих рынок фармакопрепаратов

В связи с вышесказанным, нами были предприняты попытки изучения на обезьянах некоторых иммуномодуляторов отечественного производства

В качестве экспериментальной модели были выбраны группы обезьян павианы гамадрилы (Рарю hamadryas), макаки резус (Macaca mulatta), макаки яванские (Macaca fascicularis), макаки лапундер (Macaca nemestrina), мартышки зеленые (Cercopithecus aethiops), наиболее часто используемые в экспериментальной медицине и наиболее широко представленные в Адлерском питомнике

Из наблюдений, проведенных в нашем институте (ГУ НИИ МП РАМН) [Агрба В 3 , Лапин Б А и др ,2005], а также исходя из опытов других приматологических центров в разных странах, установлено широкое инфицирование обезьян латентными вирусами приматов (SIV, STLV, CMV, HB) [Abel et al ,2002, Вышемирский О И и др , 2006] При инфицировании этими вирусами обезьяны остаются клинически здоровыми и не наблюдается сколько-нибудь существенных изменений в лабораторных показателях их биологических систем Явилось актуальным выявление влияния латентных вирусов приматов (SIV, STLV, CMV, HB) на интерфероновую систему обезьян, исследование действия отечественных иммуномодуляторов на обезьянах, инфицированных данными вирусами

Также интерес представляло изучение показателей системы ИФН у клинически здоровых обезьян разного вида, а также обезьян, страдающих патологией ЖКТ, занимающей ведущее место среди патологий у обезьян Адлерского питомника

В результате проведенных исследований установлены показатели нормы функционирования системы ИФН у клинически здоровых обезьян разного вида, пола и возраста и показано, что эти показатели максимально приближены к таковым у людей Что касается ответа на введение иммуномодуляторов, то у обезьян они усиливали продукцию ИФН -а Установлено подавление продукции индуцибельных ИФН у обезьян с патологией ЖКТ Наличие латентных вирусов приматов у обезьян не оказывало существенного влияния на ИФН-генез

Полученные результаты свидетельствуют, что обезьяны могут служить также адекватной моделью для изучения некоторых параметров физиологических систем, определяющих естественную резистентность

Целью исследования явилось выяснение показателей системы интерферона у разных видов приматов в норме и при патологии для создания адекватной модели воспроизведения иммунопатологических состояний человека

Задачи исследования

1 Исследование интерферонового статуса клинически здоровых обезьян разных видов в зависимости от возраста и установление показателей нормы

2 Изучение показателей интерферонового статуса у обезьян, инфицированных одним и/или несколькими латентными вирусами приматов

3 Изучение показателей системы интерферона у обезьян с кишечной патологией, как одной из моделей бактериальной инфекции

4 Изучение возможности коррекции нарушений системы ИФН с помощью иммуномодуляторов на примере обезьян с наличием АТ к цитоме-галовирусу

Научная новизна

1 Впервые показаны особенности ИФН статуса у обезьян в зависимости от вида и возраста

2 Впервые у 5 видов клинически здоровых обезьян Адлерского питомника установлены нормы интерферонового статуса - одного из ключевых параметров, определяющих эффективность иммунного ответа

3 Впервые у 3-х видов обезьян, инфицированных латентными вирусами приматов, показаны особенности изменения продукции ИФН, которые определяют последующий запуск иммунологических реакций

4 Впервые определены изменения продукции ИФН, отражающие особенности иммунного ответа, у обезьян с кишечными инфекциями бактериальной этиологии (колиты, энтероколиты)

5 Впервые в лечении обезьян использовались 3 отечественных лечебных препарата - иммуномодулятора и определено их влияние на интерфероно-генез на примере обезьян с наличием АТ к цитомегаловирусу

Практическая значимость Обезьяны, вследствие уникального биологического сходства с человеком и подчас абсолютной незаменимости, особенно для изучения различных патологических состояний человека, являются наиболее адекватными экспериментальными объектами для решения многочисленных задач в экспериментальной биологии и медицине

Установление показателей нормы интерферонового статуса обезьян открывает перспективы их использования для моделирования иммунопатологических состояний людей, а также возможность апробации методов их иммунокоррекции и иммунотерапии Низкие показатели продукции ИФН-ов у обезьян с патологией ЖКТ бактериальной этиологии позволяют предложить комплексные схемы терапии желудочно-кишечных заболеваний у обезьян, включая иммунокоррегирующие средства Установление параметров ИФН-статуса у обезьян может быть рекомендовано в зооветеринарные лаборатории для выбора и определения стратегии и тактики эффективности проводимой терапии

Апробация работы Результаты исследования доложены на конференции молодых ученых, посвященной 60-летию Российской Академии Медицинских Наук (г Сочи, 26 мая 2004г), материалы исследования представлены на международной конференции «Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях» (Сочи-Адлер,8-10 августа 2006 г)

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 101 листе компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы Работа иллюстрирована 27 таблицами и 8 рисунками Библиографический указатель включает 115 источников

Положения, выносимые на защиту

1 Показатели интерферонового статуса (ИФН-а, ИФН-у, циркулирующий интерферон и спонтанная продукция ИФН) у обезьян максимально приближены к таковым у людей

2 Латентные вирусные инфекции приматов (5Т1-\/,31\/,СМ\/, НВ) не оказывают существенного влияния на продукцию интерферонов у инфицированных обезьян

3 Иммуномодуляторы отечественного производства повышают продукцию ИФН-а у обезьян с наличием АТ к цитомегаловирусу

4 При некоторых заболеваниях ЖКТ бактериальной этиологии у обезьян происходят изменения в показателях интерферонового статуса

5 Обезьяны могут служить адекватной моделью для изучения на них иммунопатологических состояний людей

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для изучения ИФН-статуса были отобраны группы из больных и здоровых обезьян в количестве 250 голов.

Таблица 1

Общее количество обезьян, взятых в эксперимент

| КОЛИЧ Ёрт1з|| )(ШВ"отНЫХ7П=250)" ' ¡¡¿,

Зеленые мартышки (С,ае(Ьюрз) Макаки резус (М.ти1аНа) Макаки яванские (М. fascicu-!апв) Макаки ла-пундер (М.петез^па) Павианы гамадрилы (Р.Ьзтзбгуэз)

72 91 15 27 45

Таблица 2

Количество клинически здоровых обезьян, исследованных на ИФН-статус

Вид Кол-во Возраст, лет

молодые старые

Зеленые мартышки 25 1,6-7 -

Макаки резус 35 3-8 21-22

Павианы гамадрилы 24 1-14 -

Макаки яванские 15 4-18 24-25

Макаки лапундер 10 4-10 -

Таблица 3

Количество животных, инфицированных латентными вирусными инфекциями и с кишечной патологией бактериальной этиологии, обследованных на ИФН-статус

Кол-во обезьян, инфицированных латентными вирусами

Зеленые мартышки 45

Макаки резус 42

Павианы гамадрилы 21

Кол-во обезьян с кишечной патологией

Макаки лапундер 16

Макаки резус 9

Для изучения действия иммуномодуляторов нами было отобрано 8 макаков резус с наличием антител к цитомегаловирусу(СМ\/) возрастом от 4 до 8 лет

Источником экспериментального материала служила кровь, взятая из локтевой вены обезьян в гепарин (20 ЕД/мл, пр-во ФГУП «НПО «Микро-ген» МЗ РФ)

Методы

Получение ВБН (вируса болезни Ньюкасла) - вируса-индуктора ИФН-а

Вирус ВБН был получен из музея вирусов Института вирусологии им Д И Ивановского РАМН Восстановление вируса осуществлялась на 10 дневных куриных эмбрионах (КЭ)

Куриные эмбрионы помещали в термостат (40°С) на 48 часов Через 48 часов температуру в термостате опускали до 38°С и в таком режиме инкубировали 8 дней Затем куриные эмбрионы заражали ВБН на хорион-аллантоисную оболочку

Через 48 часов после заражения КЭ вскрывали и отбирали ал-лантоисную жидкость в пробирки, находящиеся на льду При вскрытии зараженных куриных эмбрионов обращали внимание на состояние эмбриона жизнеспособность, геморрагии на тушке и др После центрифугирования при 2000 об/мин в течение 20 мин, отбирали надосадочную вируссодержащую жидкость

Титровании вируса проводили на первичной культуре куриных фибробластов (КФ)

Изучение интерферонового статуса

В интерфероновый статус включали определение способности лимфоцитов обезьян отвечать на адекватное воздействие

а) ВБН (ИФН- а),

б) Соп А (ИФН-у),

в) циркулирующий ИФН (физиологический) - непосредственно в сыворотке крови,

г) способность лимфоцитов к спонтанной продукции интерферона

В качестве индуктора ИФН - а был использован классический интерфе-роноген ВБН в титре 109-Ю10 ЦПД 50/мл, предварительно оттитрованный на первичной культуре куриных фибробластов (КФ) В лунки добавляли по 160 мкл среды ДМЕМ (фирма «ПанЭко»), 20 мкл вируса ВБН и 20 мкл цельной гепаринизированной крови Для получения ИФН - у использовали Т-клеточный митоген Соп-А (20 мкг/мл, фирма «ПанЭко») Циркулирующий ИФН определяли непосредственно в сыворотке крови Спонтанная продукция изучалась без добавления в кровь^ каких-либо индукторов Планшет с кровью ставили в термостат при 37°С с газово-воздушной смесью, содержащей 5 % СОг и 95 % воздуха Через 24 часа отбирали надосадочную жидкость из лунок с ВБН (ИФН - а) и из лунок без индуктора (спонтанный) Через 48 часов из трех лунок с Соп-А отбирали надосадок - ИФН - у Надосадочную жидкость из лунок с ВБН 1Н раствором НС1 доводили до рН 2 0 для инактивации ВБН Через 48 часов нейтрализовали до рН 7 0 1 Н раствором ЫаОН Надосадочную жидкость из лунок с Соп-А (ИФН -у) отбирали через 48 часов

Титрование цитокинов проводили в 96-луночных планшетах на 24 часовой монослойной культуре клеток-мишеней СПЭВ Каждое четырехкратное разведение тестируемого ИФН вносили в 2 параллельные лунки, титровали до разведения 1 128-1 256-ИФН -а, до разведения 1 64-1 128 -ИФН- у , спонтанный и циркулирующий ИФН титровали до разведений 1 16-1 32 На планшетах осуществляли контроль клеток-мишеней, контроль рабочей дозы вируса и контроль Ке^ИФН с известной противовирусной активностью Через 24 часа^ после титрования (экспозиция осуществлялась в термостате при 37 С 24 часа) клетки-мишени отмывали, добавляли среду йМЕМ, содержащую 2 % РСЭ и вносили 100 ЦПД индикаторного вируса ВЭМ

Опыт учитывали через 24 часа после внесения вируса при следующих реакциях в контроле

а) в лунках с клетками СПЭВ наблюдался чистый, гладкий монослой растущих клеток,

б) в лунках с контролем рабочей дозы индикаторного вируса ВЭМ -полная деструкция монослоя (ЦПД),

в) в лунках, содержащих Ре^ИФН - чистый, гладкий неповрежденный монослой (как в контроле СПЭВ)

За титр цитокинов принимали величину, обратную максимальному разведению препарата, при котором наблюдалось 50%-ное снижение специфической деструкции монослоя клеток-мишеней

Культивирование клеток клеток монослойных культур СПЭВ, Vero и куриных фибробластов (КФ) осуществляли на ростовой среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, инактивированной прогреванием при 56° С в течение 30 мин , L-глутамина (300 мкг/мл), антибиотиков ( пенициллина 100 Ед/мл и стрептомицина 100 мкг/мл) в термостате при 37° С в газово-воздушной смеси, содержащей 5% СО2 и 95% воздуха Концентрацию живых клеток поддерживали на уровне 0,3-0,5x10 6 кп /мл Число мертвых клеток подсчитывали после окраски препарата 0,2% р - ром трипанового синего в камере Горяева

Иммуноферментный анализ для обнаружения специфических антител к латентным вирусам приматов ставили по стандартной методике производителей наборов («Вектор-Бест» , «Биосервис») Для оп-редления специфических антител к SIV, STLV, CMV использовали ре-комбинантные антигены фирм производителей «Вектор-Бест» и «Биосервис», которые входят в состав коммерческих наборов Для поиска специфических антител к HB (герпес В) обезьян использовали вирусные антигены вируса простого герпеса I и II типа человека производства фирмы «Meridian Diagnostics, Inc », USA

Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм Измерения проводили не позднее 10-15 мин после остановки реакции Результаты анализа считали положительными, если значение ОП в соответствующей лунке было равно или превышало критическое значение (ОПкрит), которое вычисляли по формуле ОП Крит = ОП срК'+0,1

Статистическую обработку результатов экспериментов проводили общепринятыми статистическими методами с использованием t-критерия Стьюдента

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе исследований были определены клетки-мишени наиболее чувствительные и пригодные для определения биологической активности интерферонов В качестве тест-объектов для титрования цитокинов были использованы две клеточные культуры- СПЭВ (почка эмбриона свиньи) и VERO (почка африканской зеленой мартышки)

Результаты сравнения титров лимфокинов, полученных на двух разных культурах, представлены в таблице 4

Таблица 4

Результаты титрования ИФН-а и ИФН-у на клетках-мишенях культур СПЭВ И VERO у макаков резус (Macaca mulatta)

No обезьян ИФН- а, ЕД/мл ИФН- у, ЕД/мл

СПЭВ VERO СПЭВ VERO

32794 128 128 128 16

32344 256 128 128 64

32411 256 128 128 32

32798 128 128 32 32

32913 64 32 - -

Титрование ИФН-а и ИФН-у 5 обезьян показало, что результаты, полученные на индикаторной культуре СПЭВ, были несколько выше, чем на культуре VERO В связи с этим, клетки культуры СПЭВ были использованы в дальнейших исследованиях в качестве клеток-мишеней, поскольку они отличались неприхотливостью, высоким индексом пролиферации и устойчивостью к криоконсервации

В основу оценки интерферонового статуса было положено определение следующих параметров

• циркулирующего в крови интерферона (сывороточного интерферона),

• уровня продукции ИФН - а в ответ на стимуляцию лейкоцитов крови вирусными индукторами (ВБН),

• уровня продукции ИФН -у в ответ на стимуляцию лимфоцитов митогенами (Con А),

• спонтанной продукции цитокинов без добавления каких-либо индукторов

В таблице 5 приведены результаты обследования на ИФН-статус 25 клинически здоровых зеленых мартышек Были подобраны группы осо-

бей мужского и женского пола для определения зависимости показателей интерферонового статуса от пола Как показали проведенные исследования, способность к продукции интерферонов в ответ на адекватные индукторы у самцов и самок одинакова Титры интерферонов для обезьян юве-нильного возраста (1,6-3 года) составляли 128-256 ЕД/мл - ИФН-а и 64 ЕД/мл- ИФН-у , что превышало титры ИФН- а у половозрелых молодых особей (5-7 лет), у которых ИФН а составлял 64 ЕД/мл

Таблица 5

Кол-во обезьян Возраст, лет Пол Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

■а* -у** Сп.-*** ИФН ИФН

7 1,6-3 с? 128-256 64 4 4

8 4-6 с? 64-128 32-64 4 4

5 2-3 9 128-256 64 4 4

5 5-7 5 64 64-128 4 4

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 128±14,3 64±7 4 4

-а*-интерферон -а -у**-интерферон-у

Сп -***спонтанная продукция интерферона 3****-циркулирующий в крови интерферон (физиологический)

Для определения показателей интерферонового статуса макаков резус была отобрана 31 клинически здоровая обезьяна в возрасте от 3 до 8 лет мужского и женского пола Из результатов, приведенных в таблице 6, следует, что наиболее высокая продукция ИФН а и ИФН- у отмечалась у 4 особей в возрасте 4 года (а -256-512 ЕД/мл, у-128 ЕД/мл) У этих животных пол не влияет на способность к продукции интерферонов

Таблица 6

Показатели интерферонового статуса макаков резус (п=31)

Кол-во обезь ян Возраст, пол Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а "У Сп в

13 4-8лет,с? 64-128 32-64 4 4-8

10 4-8лет,£ 128 32-64 4-8 4

4 3- 3,5лет,<? 128 64 4 4

4 4г,<? 256-512 128 4-16 4-16

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 146,58 ±19,27 60,8 ±5,11 5,42 ±0,57 5,55 ±0,57

Был изучен интерфероновый статус 24 клинически здоровых павианов гамадрилов в возрасте от 1 до 14 лет (табл 7) Наиболее высокая продукция ИФН-а - 256 ЕД/мл и ИФН-у -128 ЕД/мл наблюдалась у 5 обезьян возраста 3,6-8 лет

Таблица 7

Показатели интерферонового статуса павианов гамадрилов (п=24)

Кол-во животных Возраст, лет Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а -У Сп. Б

9 1 128 64 4 4

5 3,6-8 256 128 4 4

10 9-14 32-64 16-32-64 <4-8 <4

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 120±18 48,6+3,6 4 4

Для определения интерферонового статуса клинически здоровых обезьян также было обследовано 11 макаков яванских в возрасте от 4 до 18 лет (табл 8) и 10 макаков лапундер от 4 до 10 лет (табл 9)

Таблица 8

Показатели интерферонового статуса макаков яванских (п=11)

Кол-во животных Возраст, лет Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а -у Сп. Б

7 4-7 256 64 4 4

4 10-18 128 32 8 4

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 209,45±19,4 7 52,36±4,86 5,45+0,6 4

Таблица 9

Показатели интерферонового статуса макаков лапундер (п=10)

Кол-во животных Возраст, лет Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а -у Сп в

5 4,4-6 64-128 32-64 4 4

5 8-10 32 16 4 4

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 67,2±13,8 33,6±7 4 4

У макаков яванских, так же, как и у макаков лапундер, наиболее высокая способность к продукции ИФН- а и ИФН- у наблюдается у молодых особей в возрасте от 4 до 7 и от 4,4 до 6 лет соответственно

Из проведенных опытов по определению показателей интерферонового статуса клинически здоровых обезьян можно сделать вывод, что наиболее высокая способность к продукции интерферонов а и у наблюдается у группы клинически здоровых макаков резус и макаков яванских Что касается способности к продукции интерферонов у других видов низших обезьян, то особых отличий у них не наблюдалось

В таблице 10 приведены данные ИФН-статуса старых обезьян двух видов (макаки резус, макаки яванские) У этих животных прослеживается угнетение продукции индуцибельных ИФН-ИФН-а и ИФН- у

Таблица 10

Показатели ИФН-статуса старых обезьян (п=9)

Вид Возраст Кол -во Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а -У Сп в

Макаки резус 21-22лет 5 32 16-32 4 4-8

Макаки яванские 24-25 4 32-64 16-32 8 4

Средние значения показателей ИФН-статуса, М±т 39,11 ±4,7 23,11 ±2,8 5,77 ±0,7 5,77 ±0,7

Исследование и нтерфероково го статуса у обезьян старого возраста (21-25 лет) показало угнетение продукции ИФН-а ( 32-64 ЕД/мл) и ИФН>у (16-32 ЕД|мл). Эти данные согласуются с приведенными в литературе данными о томг что наиболее низкая продукция интерферонов а выявлена у лиц старше 60 лет [Ершов Ф.И.,1996].Полученные результаты позволили сделать вывод, что показатели ИФН-статуса клинически здоровых обезьян максимально приближены к таковым у людей (рис 1).

□ человек Шобезьяна

I

X S

100

150

Рис.1. И нтсрф вр о н о в ы й статус клинически здоровых обезьян (п=101) и люден (п=100) в сравнительном аспекте

Учитывая инфицированность обезьян Адлерского питомника латентными вирусами приматов (SSV, STLV, CMV.HB) [Агрба В.З., Лапин Б.А., Медведева Н.М. и др.,2005г, Вышемирский О.И. и др.,2006г.], представлялось важным изучение влияния этих вирусов на интерферо-ногенеэ у обезьян. Впервые был изучен интерфероновый статус обезьян разного вида с наличием латентных вирусов приматов (SIV, STLV, CW1V, HB). Вирусные инфекции в большинстве случаев сопровождаются значительным повышением уровня циркулирующего интерферона с первых часов заболевания. Параллельно происходит активация ИФН -зависимых внутриклеточных антивирусных механизмов и иммунных реакций [Abel К., Alegria-Hartman M.J.. Rothaeusler К. et al, 2002].

Для обследования ИФН-статуса обезьян с патентными вирусными инфекциями было отобрано 45 зеленых мартышек, 42 макака резус, 21 павиан гамадрил.

Антитела к ретро вирусам (SIV.STLV) и герпесвирусам (CMV.HB) определяли методом ИФА по стандартной методике производителя.

Охарактеризован интерфероновый статус зеленых мартышек с наличием специфических антител к латентным вирусам приматов (табл 12) УЗ особей с моно (5Т1_\/)-инфекцией и у 1 особи со смешанной (SIV, НВ) инфекцией наблюдалось повышение титров циркулирующего (16-32 ЕД/мл) и спонтанного (16 ЕД/мл) интерферонов, а уровни ИФН- а и ИФН- у приближены к показателям нормы Повышенные титры циркулирующего ИФН можно объяснить индивидуальным ответом на стресс, поскольку данная группа животных находилась в открытых вольерах и при отлавливании максимально стрессировалась

Из приведенных в таблице 11 данных следует, что высокий ответ на адекватную индукцию наблюдается у зеленых мартышек с наличием антител к вирусам STLV и смешанными инфекциями-SIV-STLV и SIV-STLV-HB Низкие титры индуцибельного ИФН (-а ,- у ) у 4 обезьян со смешанной инфекцией-31\/,8Т1_\/,СМ\/ можно объяснить индивидуальным ответом на адекватную индукцию

Таблица 11

Данные интерферонового статуса зеленых мартышек с наличием антител к латентным вирусам приматов(п=45, М±т)

Кол -во об-ян Вирус Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл)

-а -Y СП. S

9 SIV 128±26,1 60±13,5 8±1,6 4

6 HB 96±14 48±7,1 4 4

3 STLV 256 90,6±37,3 16 13,3±2,6

6 CMV 128 56+8 6±2 8,6±1,2

2 STLV, SIV 128 64 4 4

3 SIV, STLV, HB 128 64 4 4

4 SIV,STLV, CMV 56±24 16 7±3 7±3

1 SIV, HB, CMV 128 32 4 4

4 STLV, HB 64 32 4 4

6 SIV, STLV, HB, CMV 80±21,4 40±10,7 8 4

1 SIV, HB 64 16 16 32

В таблице 12 приведены данные интерферонового статуса 42 ма-каков резус с наличием антител к латентным вирусам приматов Угнетение продукции ИФН- а (59,4±12,9 ЕД/мл) и ИФН-у (25,14±3,23 ЕД/мл) наблюдается у 7 макаков резус с цитомегаловирусной инфекцией Повышение титров ИФН- а и ИФН- у (184,8±22,4 ЕД/мл и 92,4±11,24 ЕД/мл) прослеживается

у 9 особей со смешанной ретро- и герпесвирусной инфекцией (Э1\/-НВ) В остальных случаях показатели ИФН- а и ИФН-у соответствуют пределам нормы Вместе с тем, повышение титров циркулирующего интерферона (20,8±4,8 ЕД/мл, 24±4,6ЕД/мл) также можно объяснить наличием стресса у животных, поскольку эта группа животных находилась в вольерах и при отлавливании подвергалась наибольшему стрессу

Таблица 12

Интерфероновый статус макаков резус с наличием специфических антител к латентным вирусам приматов (п=42, М ±т)

Кол -во об-ян Вирус Интерфероновый статус (ИФН, Е Ц/мл).

-а ■у Сп. Б

5 89,6±15,7 22,4±3,9 4 4

5 НВ, СМУ 166±38,4 57,6±б,4 6,4±0,97 20,8±4,8

11 НВ 87,2±14,36 49,4±5 5,8±0,6 13,8±1,1

7 СШ 59,4±12,9 25,14±3,23 5,11 ±0,73 17,7±4

9 Э1\/, НВ 184,8±22,4 92,4±11,24 4 4

1 ЭТЬЛ/, НВ 128 32 16 4

4 БМ, СМУ 128 64 6±2 24±4,6

Также был изучен интерфероновый статус 21 павиана гамадрила (табл 13) с наличием АТ к латентным вирусам приматов

Таблица 13

Интерфероновый статус павианов гамадрилов с наличием специфических антител к латентным вирусам приматов (п=21, М ±т)

Кол-во об-ян Вирус Интерфероновый статус (ИФН, ЕД/мл).

-а -У Сп

14 НВ 176±17,1 64 4,57±0,4 3 4

4 СМУ, НВ 128 64 4±4 4

2 БЛ-Л/, НВ 128 64 4 4

1 ЭТ^, нв, ст 64 32 8 8

Как следует из данных таблицы 13, незначительное повышение титров ИФН- а определялось у 14 обезьян, инфицированных НВ Несколько ниже продукция ИФН- а определялась у 6 павианов со смешанной инфекцией-НВ и СМ\/ (4 обезьяны) и НВ и БИЛ/ (2 обезьяны) Показатели ИФН- у У всех обезьян были в пределах нормы Снижение титров цитокинов у 1 животного со смешанной инфекцией (31У,8Т1_\/,НВ,СМ\/) на одно разведение не имеет существенного значения Таким образом, проведенное исследование по определению показателей ИФН-статуса обезьян с наличием латентных вирусов приматов позволили сделать вывод, что латентные вирусные инфекции существенно не влияют на интерфероногенез животных, что совпадает с известными в литературе данными [Хаитов Р М ,2006]

На 8 макаках резус молодого возраста, имеющих антитела к цитомегаловирусу (СМ\/) изучалось действие коммерческих иммуномо-дуляторов отечественного производства, успешно применяемых в последние 8-10 лет В качестве иммуномодуляторов использовались препараты-индукторы интерферонов - фоспренил (неспецифичесий имму-номодулятор при вирусных инфекциях), гамавит (биогенный стимулятор и адаптоген) и Циклоферон (низкомолекулярный индуктор ИФН-а) производства ЗАО «Микро-Плюс» при ГУ НИИЭМ им Н Ф Гамалеи Препарат вводили обезьянам по определенному графику (табл 14)

Таблица 14

Схема введения иммуномодуляторов (циклоферон, гамавит, фоспренил) макакам резус молодого возраста

№ обезьяны Дни введения препарата Вводимый препарат Объем вводимого препарата

32411 (контроль) 1-4, 8-13 июня Физ р-р 5мл в/в

33969(контроль)

32344 1-4, 8-10 июня циклоферон 0,5мл в/в

32794

33999

32913 I,2, 3, 4, 8, II, 14, 15 июня гамавит + фоспренил 2,5мл в/м 2,5мл в/м

33970

32798

Животные, взятые в эксперимент, были разбиты на 3 группы

1 Контроль-2 обезьяны, которым вводили физиологический раствор в течение 10 дней в объеме 5 мл в/в

2 Животные, которым вводили 0,15 % раствор циклоферона в объеме 0,5 мл в/в в течение 7 дней (3 обезьяны) Т

3 Животные, которым проводили комплексное введение 0,4% раствора фоспренила и гамавита по схеме 2,5 мл гамавита внутримышечно (в/м) и 2,5 мл фоспренила в/м в течение 8 дней (3 обезьяны) Данная терапия была выбрана вследствие того, что сочетание с фос-пренилом усиливает эффект гамавита

Обезьяны, взятые в опыт по исследованию действия иммуно-модуляторов, находились в условиях клеточного содержания, изоляции и привыкания к манипуляциям экспериментатора, что исключало воздействие стрессового фактора, влияющего на показатели циркулирующего ИФН

Результаты обследования обезьян до начала введения имму-номодуляторов и после окончания курса их введения приведены в таблице 15 У части обезьян до начала введения иммуномодуляторов наблюдалась низкая продукция ИФН- а (32-64 Ед/мл) и ИФН-у (8-32 Ед/мл) и повышение спонтанной продукции интерферона (8-32 Ед/мл) У трех обезьян продукция цитокинов была высокой

Таблица 15

Интерфероновый статус обезьян до- и после введения иммуномодуляторов (циклоферон, гамавит, фоспренил)

№ обезьяны Возраст, лет До/после введения препаратов Интерфероновый статус( ИФН, ЕД/мл).

-а -У Сп

32411 (к) 8 До/после 64/64 16/32 8/4 <4/16

33969 (к) 4 До/после 256/32-64 32/16-32 <4/4 <4/4-8

33999 4 До/после 32/128-256 32/64 8-16/4 4/8

32794 7 До/после 128-256/256 64-128/64128 16-32/32 4/16

32344 8 До/после 64/128-256 64/64 32/<4 8/8

32913 8 До/после 256/128 64/64-128 32/4 16/8

32798 7 До/после 32/ 128-256 128/128 <4/32 <4/32

33970 4 До/после 32-64/128 8/64 <4/4 <4/8

По окончании введения иммуномодуляторов забор крови проводился дважды с интервалом в месяц. Следует отметить, что животные, получавшие указанные иммуномодуляторы, на всем протяжении наблюдения оставались в хорошем состоянии. Поведение их было адекватным, реакции живыми, аппетит хорошим, патологии со стороны ЖКТ и других систем не наблюдалось. Практически во всех случаях отмечалось значительное улучшение ИФН-статуса (особенно его а-звена). Что касается контрольных животных, то у них ИФН-статус изменялся в пределах индивидуальных колебаний, но повышения продукции цитокинов у них не наблюдалось. Из проведенных исследований можно сделать вывод, что данные препараты повышали продукцию ИФН-а, обладающего антивирусным эффектом. Вместе с тем, использованные иммуномодуляторы не влияли на СМ\/-вирусную инфекцию обезьян, так как титры антител к данному вирусу практически не изменялись (рис.2).

32411 33969 33999 32794 32344 32913 32798 33970 № обезьяны

□ до Шпосле

"-величина, обратная разведению сывороток

Рис. 2. Титры специфических антител к СМ\/ до- и после введения иммуномодуляторов

Определение показателей интерферонового статуса при кишечной патологии было проведено на 25 обезьянах двух видов (макаки лапундер, макаки резус). К ним относятся, в первую очередь, острые кишечные инфекции, этиологически связанные с условно-патогенными возбудителями - энтеро- и микроаэрофильными бактериями. В общей

структуре заболеваемости кишечные инфекции по данным клинико-ветеринарной и патологоанатомической службы Адлерского питомника занимают более 40% от общего числа заболеваний [ Dzhikidze Е К , Sta-silevich Z К , Krilova R 1, 2001 ]

В таблице 16 приведены данные интерферонового статуса 16 макаков лапундер, 9 макаков резус, больных колитом и энтероколитом бактериальной этиологии Колиты, энтероколиты были преимущественно этиологически связаны с условно-патогенными представителями семейства Enterobacteriacae (Klebsiella spp, Proteus spp, Citrobacter, Enterobacter spp), а также с микроаэрофильными бактериями рода Campilobacter Лишь в одном случае выделен S flexaeri 2а Данные животные перед забором крови были транквилизированы (по 100 мкл калипсола на 1 кг веса животного в/м), что полностью исключало у них стресс У макаков лапундер, так же, как и у макаков резус, были снижены титры ИФН-а, ИФН-у и повышены титры циркулирующего ИНФ Что касается спонтанной продукции ИФН, то у макаков лапундер этот показатель был в пределах нормы, в то время как у макаков резус он был приближен к верхней границе нормы

Таблица 16

ИФН-статус макаков лапундер и макаков резус, больных кишечными инфекциями

ИФН-статус макаков лапундер, больных кишечными ин-

фекциями (n=16, М±т, ИФН, ЕД/мл)

-а -Y Сп. S

53,3±4,7 38±5,6 4 12,7±1,9

ИФН-статус макаков резус, больных кишечными инфек-

циями (n=9, М±т, ЕД/мл).

32±5,2 16±2,62 7,1±0,12 9±2,1

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что данные животные нуждаются в иммунокоррекции, что предполагает использование иммунокоррегирующих препаратов в общей схеме комплексной терапии

ВЫВОДЫ

Охарактеризован ИФН статус клинически здоровых обезьян и установлены показатели нормы для низших обезьян разного возраста африканского и азиатского происхождения (мака-ков резус, макаков лапундер, макаков яванских, павианов гамадрилов, зеленых мартышек) Доказано, что показатели ин-терферонового статуса (способность к продукции ИФН-а и ИФН-у, спонтанная продукция, циркулирующий в крови интерферон) у клинически здоровых низших обезьян максимально приближены к таковым у людей На модели обезьян, инфицированных латентными вирусами приматов (Э1\/, БИЛ/, НВ, СМ\/), показано, что хроническая инфекция не оказывает существенного влияния на продукцию интерферонов и другие показатели ИФН статуса На модели обезьян с клинически выраженной кишечной патологией установлено изменение показателей ИФН статуса (снижение в среднем в 2 раза способности к продукции ИФН-а и ИФН-у и повышение продукции циркулирующего и/или спонтанно вырабатываемого ИФН), что, как и у человека, свидетельствует об остром течении инфекционного процесса

На модели обезьян с наличием антител к цитомегаловирусу (СМ\/) коррекция ИФН статуса с использованием препаратов гамавит, циклоферон и фоспренил приводила к повышению уровня продукции ИНФ-а - одного из показателей состояния противовирусного иммунитета

Полученные результаты свидетельствуют о том, что обезьяны могут служить адекватной моделью для воспроизведения иммунопатологических состояний людей, разработки возможных подходов к коррекции выявленных нарушений, а также для доклинического испытания новых иммунопрепара-тов, наполняющих рынок лекарственных средств

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Агрба В 3 , Лапин Б А , Мезенцева M В , Ершов Ф И , Медведева H M , Карал-оглы Д Д Перспективы изучения интерфе-ронового статуса приматов для оценки адекватности его при моделировании патологических состояний человека на обезьянах// Сборник материалов научно-практической конференции "Медицина будущего" Краснодар-Сочи,2002 -С 121

2 Агрба В 3 , Лапин Б А , Мезенцева M В , Ершов Ф И , Медведева H M , Косухина H В , Карал-оглы Д Д Интерфероновый статус и содержание В - и Т-лимфоцитов у клинически здоровых макаков резус // Baltic J/ Anim/ Sei/ 2003,13 - С 19-25

3 Агрба В 3 , Лапин Б А , Медведева H M , Чикобава M Г , Яковлева Л А , Карал-оглы Д Д Вирогенный статус клеток обезьяньих стабильных лимфоидных культур и их иммуно-фенотипическая характеристика //Вопросы вирусологии 2005, №5 -С 44-49

4 Карал-оглы Д Д , Агрба В 3 , Медведева H M , Лапин Б А , Мезенцева M В и др Иммунный и интерфероновый статус приматов //Вестник РАМН, 2005, №9 -С 17-20

5 Карал-оглы Д Д , Агрба В 3 , Игнатова И Е Установление нормативных показателей интерферонового статуса у обезьян // Материалы всероссийской научной конференции «Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических исследованиях»//Сочи,2006 г -С 125

6 Агрба В 3 , Карал-оглы Д Д , Яковлева Л А , Лапин Б А Исследование возрастных изменений иммунитета приматов на модели иммунной системы обезьян Старого Света // Тезисы докладов всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии»//С-Петербург,25-26 ноября 2006г -С 25

7 Агрба В 3 , Лапин Б А , Медведева H M , Игнатова И Е , Карал-оглы Д Д Сравнительная иммунофенотипическая характеристика клеток постоянных лимфоидных культур людей и обезьян //Вестник РАМН, 2007, №3 -С 47

8 Карал-оглы Д Д Изучение показателей ИФН-статуса обезьян Адлерского питомника, инфицированных латентными ретро-вирусами //Медицинская наука и здравоохранение Материалы V научно- практической конференции молодых ученых и студентов юга России, Анапа, 23-26 апреля 2007 -С 21-24

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Con А - конканавалин А

Сп -ИФН- спонтанная продукция интерферона

DMEM - среда Дальбекко

FCS (fetum covine зегит)-бычья эмбриональная сыворотка

S-ИФН (сывороточный)-циркулирующий в крови, физиологический

SIV - вирус иммунодефицита обезьян

STLV - Т -лимфотропный ретровирус обезьян

ВБН - вирус болезни Ньюкасла

ВЭМ - вирус энцефаломиокардита мышей

ИФН - интерферон

ИФН а - альфа интерферон

ИФН (3 - бетта интерферон

ИФН у - гамма-интерферон

КФ - куриные фибробласты

КЭ - куриные эмбрионы

СПЭВ -почка эмбриона свиньи

ЦПД -цитопатическое действие

CMV - цитомегаловирус

НВ-вирус простого герпеса

Подписано в печать 12 05 07 г Формат 60x84/16 Тираж 100 экз Заказ 99

Отпечатано в службе множительной техники ГУ НИИ МП РАМН 354376, Сочи-Адлер, Веселое-1

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Карал-оглы, Джина Джинаровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Система ИФН в норме и при патологии у людей

1.2. Регуляция продукции ИФН

1.3. Взаимосвязь между системами ИФН и иммунитета

1.4. Взаимодействие между ИФН и другими цитокинами

1.5. Значение показателей интерферонового статуса для оценки некоторых заболеваний

1.6. ИФН а/(3 при SIV-инфекции у макаков резус

1.7. Система интерферона при герпесвирусных инфекциях

1.8. Индукторы интерферона при герпесвирусных инфекциях

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Материалы

2.1.1. Животные

2.1.2. Источник экспериментального материала

2.2. Методы

2.2.1. Получение и титрование интерферона

2.2.2. Получение и титрование вируса-индуктора ИФН-а ВБН

2.2.3. Культура куриных фибробластов (КФ)

2.2.4. Иммуноферментный анализ (ИФА)

2.2.5. Культивирование монослойных индикаторных культур СПЭВ и Vero

2.2.6. Криоконсервация и деконсервация культуры СПЭВ

2.2.7. Статистическая обработка

ГЛАВА 3. Результаты исследования

3.1. Интерфероновый статус клинически здоровых обезьян разного

3.2. Интерфероновый статус обезьян разного вида с наличием антител к латентным вирусам приматов (81У,8ТЪУ, СМУ, НВ)

3.3. Определение эффективности действия иммуномодуляторов на макаках резус, инфицированных цитомегаловирусом

3.4. Определение интерферонового статуса обезьян разного вида с кишечной патологией

Обсуждение

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Система интерферона низших обезьян в норме и при некоторых видах инфекционной патологии"

Актуальность проблемы.

Возрастание экологического неблагополучия оборачивает популяци-онное снижение иммунитета населения, что приводит к росту инфекционных и неинфекционных заболеваний, хронизации болезней, генетическим нарушениям, высокой смертности [44]. В связи с этим, отмечены и значительные отклонения от нормы в иммунной системе людей. Растет число вирусных и бактериальных инфекций не поддающихся общепринятой терапии, хронические инфекции приводят к развитию вторичных иммуноде-фицитов. При этом в первую очередь страдают система иммунитета и система, интерферона [54]. Все вышесказанное обуславливает актуальность исследования этих систем и поиска объективных методов их коррекции.

Для решения этой задачи изучение механизмов возникновения; и течения заболеваний приобретает важное значение, и в конечном счете, является первым шагом для выбора необходимого лечения при острьк и хронических заболеваниях.

В этой связи особенно актуально адекватное моделирование различных патологических состояний человека. Для правильной оценки данных, получаемых при моделировании патологических состояний человека на обезьянах, необходимо точное описание их физиологических систем. Хорошо изучены пищеварительная, кроветворная, эндокринная и др. системы приматов [38,36,8,9].Вместе с тем, совокупных сведений о функционировании системы ИФН, как ведущего фактора естественной резистентности, нет ни одного.

Открытие интерферона (ИФН) в середине XX века было одним из великих открытий в биологии. Первооткрыватели ИФН А.Айзеке и Б.Линденман (1957г) через 6 лет после открытия ИФН предложили следующее его определение: "Антивирусное вещество, образующееся в клетках многих позвоночных в ответ на вирусную инфекцию. По-видимому, оно имеет белковую или полипептидную природу, отличается по антигенным свойствам от вируса и сообщает клетке резистентноть, препятствующую размножению в ней различных вирусов" [21]. Это представление, узкое по сути, но правильное, представляет сегодня лишь историческую ценность.

В нашей стране много внимания проблеме изучения интерферона уделяли ученые школы профессора В.Д.Соловьева (Соловьев В.Д., Бекти-миров Т.А.,1970., Ершов Ф.И., Новохатский А.С.,1980) [50], которые находились также и у истоков клинического использования интерферона и его индукторов в нашей стране.

В настоящее время академик Ершов Ф.И. с соавторами развивают это направление в медицине. Они предлагают следующее определение ин-терферонов: "ИФН относятся к цитокинам (медиаторам иммунитета) и представлены семейством белков, обладающих антивирусной, иммуномо-дулирующей и противоопухолевой активностью, что позволяет отнести их к полифункциональным биорегуляторам широкого спектра действия и го-меостатическим агентам." Данное определение было представлено после того, как были проведены обширные клинические испытания интерферо-нов, доказывающие их лидирующие позиции при таких массовых и плохо контролируемых инфекциях, как острые респираторные вирусные инфекции, герпес и особенно гепатиты В и С. [40,43,50].

Доказано, что система ИФН, являясь важнейшим механизмом естественного иммунитета, представлена практически в каждой клетке организма и направлена на распознавание и элиминацию чужеродной генетической информации.

Определение интерферонового статуса у людей находится в центре внимания клинических иммунологов. Его изучение необходимо для понимания процессов активации, трансформации, малигнизации и противоопухолевого иммунитета, природы возникающих иммунодефицитных состояний при различных патологических процессах, а также разработки путей иммунотерапии и иммунокоррекции [20].

Фундаментальные представления об интерфероновом статусе существенны при исследовании различных патологических состояний человека. Моделирование человеческих патологических состояний на обезьянах создает адекватную модель, т.к. в силу анатомо-физиологической и эволюционной близости обезьяны и человека, результаты исследований, полученные на обезьянах, с минимальной коррекцией можно экстраполировать на людей (Лапин и др.,2004) [38].

Данные об интерфероновом статусе обезьян (способность к продукции ИФН а/(3, у, спонтанная продукция и циркулирующий в сыворотке крови интерферон) в комплексе в литературе отсутствуют. Есть лишь упоминание об определении ИФН-у в связи изучением действия некоторых интерфероногенов и экспрессии генов ИФН- а и ИФН-р при БГУ-инфекции у макаков резус [56]. В соответствии с этим является актуальным определение интерферонового статуса клинически здоровых обезьян для установления нормативных показателей функционирования этой системы.

Сведения о показателях системы интерферона при моделирование иммунопатологических и иммунодефицитных состояний обезьян могут, внести неоценимый вклад при испытании иммунопрепаратов и других препаратов. Так как в настоящее время существует целый ряд препаратов, которые обладают противоинфекционной, антитуморогенной и иммуно-модулирующей активностями, способные индуцировать интерферон в различных иммунокомпетентных клетках человека и животных [33,55]. Поиск малотоксичных, безвредных препаратов обладающих подобными эффектами продолжается.

Эксперименты на обезьянах в широком плане в. настоящее время по многим причинам недоступны для большинства исследователей (исчезновение многих видов из мест естественного обитания, запреты законодательствами многих стран на экспорт обезьян, дороговизна, запреты по использованию животных для экспериментальных целей обществом защиты животных и т.д.). Вместе с тем, потребность в обезьянах, специально разводимых в питомниках и заказниках для широкого спектра медико-биологических исследований. Поэтому использование обезьян в медико-биологических исследованиях должно быть строго обосновано.

Из наблюдений, проведенных в нашем институте (ГУ НИИ МП РАМН), а также исходя из опытов других приматологических центров в разных странах, установлено широкое инфицирование обезьян латентными вирусами приматов (SIV, STLV, CMV, HB) (Abel et al.,2002, Вышемирский О.И. и др. 2006). При инфицировании этими вирусами обезьяны остаются клинически здоровыми и не наблюдается сколько-нибудь существенных изменений в лабораторных показателях их биологических систем. Однако, до сих пор не изучено влияния латентных вирусов приматов (SIV, STLV, CMV, HB) на иммунную и интерфероновую систему обезьян.

Исходя из вышеизложенного, изучение механизмов возникновения и течения заболеваний, нарушающих функционирование иммунной системы, приобретает все большую актуальность.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящей работы явилось изучение показателей системы иммунитета и интерферонов у разных видов приматов в норме и при патологии для создания адекватной модели воспроизведения иммунопатологических состояний человека.

В задачи исследования входило:

1. Исследовать интерфероновый статус клинически здоровых обезьян разных видов в зависимости от возраста и установить показатели нормы.

2. Изучить показатели иммунного и интерферонового статусов у обезьян, инфицированных одним и/или несколькими латентными вирусами приматов, как модели хронической вирусной инфекции.

3. Провести оценку показателей системы интерферона у обезьян с кишечной патологией, как одной из моделей бактериальной инфекции.

4. Изучить возможности коррекции нарушений системы ИФН с помощью иммуномодуляторов на примере обезьян с наличием АТ к цитоме-галовирусу.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

1. Впервые показаны особенности ИФН статуса у обезьян в зависимости от вида и возраста.

2. Впервые у 5 видов клинически здоровых обезьян Адлерского питомника установлены нормы интерферонового статуса - одного из ключевых параметров, определяющих эффективность иммунного ответа.

3: Впервые у 3-х видов обезьян, инфицированных латентными вирусами приматов, показаны особенности изменения продукции ИФН, которые определяют последующий запуск иммунологических реакций.

4. Впервые определены изменения продукции ИФН, отражающие особенности иммунного ответа, у обезьян с кишечными инфекциями (колиты, энтероколиты);

5. Впервые в лечении обезьян использовались отечественные лечебные препараты - иммуномодуляторы и определено их влияние на интерфе-роногенез на примере обезьян с наличием АТ к цитомегаловирусу

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Обезьяны, вследствие уникального биологического сходства с человеком и подчас абсолютной незаменимости, особенно для изучения различных патологических состояний человека, являются наиболее адекватными экспериментальными объектами для решения многочисленных задач в экспериментальной биологии и медицине.

Установление нормативных показателей интерферонового статуса обезьян открывает перспективы их использования для моделирования иммунопатологических состояний людей, а также возможность для апробации методов их иммунокоррекции и иммунотерапии. Низкие показатели продукции ИФН-ов у обезьян с патологией ЖКТ позволяют предложить новые схемы терапии желудочно-кишечных заболеваний у обезьян. Установление параметров ИФН-статуса у обезьян может быть рекомендовано в зооветеринарные лаборатории для выбора и определения стратегии и тактики эффективности проводимой терапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Показатели ИФН-статуса (ИФН-а, ИФН-у, спонтанная продукция и циркулирующий ИФН) приближены к таковым у людей.

2. Латентные вирусные инфекции приматов (8ТЬУ,8ГУ,СМУ,НВ) не оказывают существенного влияния на интерфероногенез у обезьян.

3. Спонтанно подобранные иммуномодуляторы отечественного производства повышают продукцию ИФН- а у обезьян с наличием АТ к цитомега-ловирусу (СМУ).

4. При некоторых инфекционных заболеваниях (заболевания ЖКТ) у обезьян происходят изменения в показателях интерферонового статуса.

5. Интерфероногенез у обезьян с возрастом снижается.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Карал-оглы, Джина Джинаровна

ВЫВОДЫ

1. Изучен ИФН статус клинически здоровых обезьян и установлены показатели нормы, характерные для низших обезьян разного возраста африканского и азиатского происхождения (макаков резус, макаков лапундер, макаков яванских, павианов гамадрилов, зеленых мартышек). Доказано, что показатели интерферонового статуса (способность к продукции ИФН-а и ИФН-у, спонтанная продукция, циркулирующий в крови интерферон) у клинически здоровых низших обезьян максимально приближены к таковым у людей.

2. На модели обезьян, инфицированных латентными вирусами приматов (8ГУ, ЭТЪУ, НВ, СМУ), показано, что хроническая инфекция не оказывает существенного влияния на продукцию интерферонов и другие показатели ИФН статуса.

3. На модели обезьян с клинически выраженной кишечной патологией установлено изменение показателей ИФН статуса (снижение в среднем в 2 раза способности к продукции ИФН-а и ИФН-у и повышение продукции циркулирующего и/или спонтанно вырабатываемого ИФН), что, как и у человека, свидетельствует об остром течении инфекционного процесса.

4. На модели обезьян с наличием антител к цитомегаловирусу (СМУ) коррекция ИФН статуса с использованием препаратов циклоферон, гамавит и фоспренил приводила к повышению уровня продукции ИНФ -а - одного из показателей состояния противовирусного иммунитета.

5. Полученные результаты свидетельствуют о том, что обезьяны могут служить адекватной моделью для воспроизведения иммунопатологических состояний людей, разработки возможных подходов к коррекции выявленных нарушений, а также для доклинического испытания новых иммунопрепаратов, наполняющих рынок лекарственных средств.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Карал-оглы, Джина Джинаровна, Сочи

1. Агрба В.З., Лапин Б.А., Медведева Н.М., Чикобава М.Г., Яковлева Л.А., Карал-оглы Д.Д. Вирогенный статус клеток обезьяньих стабильных лимфоидных культур и их иммунофеноти-пическая характеристика.//Вопросы вирусологии.2005, №5, с.44-49.

2. Агрба В.З., Лапин Б.А., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И., Медведева Н.М., Косухина Н.В., Карал-оглы Д.Д. Интерфероновый сатус и содержание В и Т-лимфоцитов у клинически здоровых макаков резус.// Baltic J/ Anim/ Sei/ 2003, № 13, c.19-25.

3. Баринский И.Ф., Ершов Ф.И., Попова О.М. и др. Сочетанное применение специфических вакцин и индукторов интерферона для профилактики и лечения экспериментального клещевого энцефалита.//Вопр. вирусологии.-1984, №2, с.214-217.

4. Бектемиров Т.А. Влияние определенных факторов на продукцию интерферона в монослойных культурах клеток эмбрионов цыплят.//Вопр. вирусол., 1965, №6, с.689.

5. Галабов A.C., Мастикова М. Дипиридамол как индуктор интерферона //Acta virologica, 1982, v. 26, p. 137-147.

6. Галабов A.C., Мастикова M. Дипиридамол как индуктор инте-реферона у мужчин.// Biomed. And Pharmacother 1984, v. 38, p. 412-413.

7. Гончарова H.Д., Лапин Б.А., Хавинсон В.Х. Возрастные нарушения эндокринных функций и возможные пути их коррек-ции.//Бюл. Экспериментальной Биологии и медици-ны.2002,1134,№11,с.484-489.

8. Гончаров Н.П., Воронцов В.И., Кация Г.В., Антоничев A.B., Бутиев В.Ю. Изучение гормональной функции надпочечников и половых желез в опытах на обезьянах.//Вестник Академии Мед. наук СССР-1977,с. 13-20.

9. Горячева Л.Г., Романцов М.Г., Ботвиньева В.В. Циклоферон-эффективное средство для педиатрии.//СПб.,2002.

10. Григорян С.С., Демченко Е.В., Иванченко Г.Ф.//Патент РФ 2144333, 1999 г.

11. Григорян С.С., Демченко Е.В., Иванченко Г.Ф.// Патент РФ 2214249,2000 г.

12. Григорян С.С., Иванова A.M. и др. Интерферон-индуцированная способность амиксина и его влияние на ин-терфероновый статус.//Вопр. вирусол. 1990,№1,с.61-64.

13. Григорян С.С., Майоров И.А. и др. Оценка интерферонового статуса в образцах цельной человеческой крови.//Вопр. виру-сол.1988,№4,с.433-436.

14. Григорян С.С., Оспельникова Т.П., Ершов Ф.И. Методические рекомендации.//М., 2000, 101 с.

15. Григорян С.С., Поверенный A.M., Ершов Ф.И. Вазодилататоры как индукторы интерферона.// Вопр. вирусол. 1987, №. 2, с. 204-208.

16. Дейл М.М., Формен Дж. К. Руководство по иммунофармаколо-гии.//М., Медицина, 1998, 65 с.

17. Дементьева Г.М., Кешишян Е. С., Козлова А.Е. и др. Тезисы докладов X регионального симпозиума соц. стран по интерферону .//М.-Рига, 1988, с.41.

18. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и при патоло-гии.//М., Медицина ,1996, 240 с.

19. Ершов Ф.И., Антонова JI.В., Григорян С.С. и др. Нарушения в интерфероновом статусе у пациентов с вирус-ассоциированными и хламидийными инфекциями.// Вопр. вирусол. 1996, № 4, с. 172-174.

20. Ершов Ф.И., Готовцева E.JL, Носик H.H. Интерфероновый статус в норме.// Иммунология ,1986, №3, с.52-54.

21. Ершов Ф.И., Киселев О.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств).//М., ГЭОТАР, Медиа, 2005, 356 с.

22. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты. Справочник.// М., Медицина.//1996, 240с.

23. Ершов Ф.И., Оспельникова Т.П., Инфекции и антимикробная терапия.// 2001, № 4,с. 100-104.

24. Ершов Ф.И., Тазулахова Э.Б., Сайиткулов A.M. Интерфероно-генная активность низкомолекулярных соединений растительного происхождения.// Вопр. вирусол.-1988, №6, с. 750- 752.

25. Ершов Ф.И., Чижов Н.П., Тазулахова Э.Б.//Противовирусные средства.//СПб,2002, 102 с.

26. Жданов В.М., Ершов Ф.И. Роль интерферонов в гомеостазе. //Вопросы вирусол. 1983 .Т.28,№6,с.757-761.

27. Инджия JI.B., Чикобава М.Г., Лазарева И.Я., Цатурян Т.Н. Вопросы медицинской приматологии. Наиболее перспективное использование обезьян в медицине и биологии.// Материалы Всесоюзной конференции. Сухуми, 1987,с. 167-170.

28. Интерферон-92: Сборник научных трудов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи.

29. Исаков В.А., Коваленко AJL, Алексеева Л.Е., Ермоленко Д.К., Руденко В.И., Ермоленко Е.И. Циклоферон: применение в терапии урогенитального хламидиоза и герпетической инфек-ции.//Руководство для врачей, СПб, 1997,75 с.

30. Карал-оглы Д.Д., Агрба В.З., Медведева Н.М., Лапин Б.А., Мезенцева М.В. и др. Особенности интерферонового и иммунного статуса приматов в норме.//Вестник РАМН, 2005, №9,с. 17-20.

31. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные иммуномодуляторы.//СПб, Гиппократ, 1992.

32. Киселев О .И., Деева Э.Г., Слита A.B., Платонов В.Г. Антивирусные препараты для лечения гриппа и ОРЗ.Дизайн препаратов на основе полимерных носителей.//СПб, Время, 2000, 125с.

33. Ковальчук Л.В., Ганковская JI.B., Чекнев С.Б. и др. Регулятор-ное действие пептидов иммунной системы на функциональную активность моноцитов и естественных киллеров in vitro. // Иммунология, 1987,№4,с.57-61.

34. Кузьмов К.А., Галабов A.C., Радова X. и соавт. Эпидемиологические испытания профилактической эффективности индуктора интерферона дипиридамола при гриппе и острых респираторных заболеваниях.//ЖМЭИ. 1985, №. 6, с. 26-30.

35. Куксова М.И.Кроветворная система обезьян в норме и патоло-ГИИ.//М., Медицина,1972,128с.

36. Лапин Б.А., Джикидзе Э.К., Крылова Р.И. и др. Проблемы инфекционной патологии обезьян.// М., Медицина, 2004, 140с.

37. Лапин Б.А.,. Джикидзе Э.К., Фридман Э.П. Руководство по медицинской приматологии.//М., Медицина, 1987, 188с.

38. Мешкова E.H., Кешишян Е.С., Малиновская B.C. Сборник «Интерфеон-92».// Ассоциация исследователей интерферона. М.,1992, с.239-246.

39. Моделирование патологических состояний человека. Т.2.// Под редакцией Б.А.Лапина. М.,1977,344с.

40. Наровлянский А.Н., Амченкова A.M., Хесин Я.Е. Интерферон-89.//М.,1989, с.58-64 .

41. Носик Н.Н, Паршина О.В. Сухих Г.Т. Восстановление тимози-ном интерферон-синтезируемой способности спленоцитов умышей, подвергшихся радиоактивному облучению.// Вопросы вирусологии. 1985, №6,с.729-732.

42. Онищенко Г.Г. Доклад на конференции «Лекарственная профилактика» в МЗ РФ.//М.,2002.

43. Оспельникова Т.П., Григорян С.С., Евсеев A.A. Бесаева Т.П. Денисова E.H. Коваленко А.Л. Ершов Ф.И. Эффективность циклоферона при лечении вирус-ассоциированных воспалительных гинекологических заболеваний.//Вопр. вирусол. 1999, №3,с. 130-135.

44. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии.// Иммунология ,1994, №6,с.6-10.

45. Романцов М.Г. Циклоферон: применение в клинике.//, М-СПб,1997,с.9-11.

46. Слепушкин А.Н., Федорова Г.И., Кучеренко Т.П., Бирюкова И.Г. О тактике применения иммуномодуляторов для неспецифической профилактики острых респираторных заболеваний (ОРЗ) на промышленных предпиятиях.//Клинич. фармакол. и терапия. 1993,с.62-66.

47. Соколова Н.В., Кузнецов В.П., Каганова Б.С., Гусева Л.Н. В кн.: Матер, конф. Современные методы иммунотерапии.// Ташкент, 1984,с.225-226.

48. Соловьев В.Д., Бектемиров Т.А. Интерфероны в теории и практике медицины.2-е издание.//М., Медицина, 1981, 272с.

49. СПЭВ почка эмбриона свиньи. Номер по каталогу 497.Институт цитологии РАН. Каталог клеточных куль-тур.//Л.Д990,с.30.

50. Тазулахова Э.Б., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И. Роль макрофагов в продукции интерферонов. //Антибиотики и химиотерапия. 1991,№ 11 ,с.40-44.

51. Тазулахова Э.Б., Мезенцева М.В., Паршина О.В., Гусева Т.П. Новые подходы к оптимизации схем применения индукторов интерферона.// Материалы конференции «Человек и лекарство»,! 995,с.313.

52. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты.// СПб, 1998, 112с.

53. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения.// Иммунология, 2000, №5, с.4-7.

54. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология.// М.3 Медицина, 2000, 432 с.

55. Argov S., Cantell K., Klein E., Klein G. Immune interferon (IFN-gamma) production in autologous mixed cultures.//Cell. Immunol. 1983, v. 76, №1, p. 196-199.

56. Alcami A., Koszinowski U. Viral mechanisms of immune evasion.//Immunol. Today. 2000, v.9, p. 447-455.

57. Bernstein D.I., Harrison C.J., Tomai M.A., Miller R.L. Daily or weekly therapy with resiquimod (R-848) reduces genital recurrences in herpes simplex virus-infected guinea pigs during and after treatment.// J.Infect. Dis. 2001, v. 6, p. 844-849.

58. Bernstein D.I. Potential for immunotherapy in the treatment of herpesvirus infections.//Herpes. 2001, v.8, №1, p.8-11. Review.

59. Biron C.A. Interferons a and p as immune regulators-a new look.//Immunity, 2001, v. 14, p. 661-664 .

60. Bishop G.A., Hsing Y., Hostager B.S., Jalukar S.V., Ramirez L.M., Tomai M.A. Molecular mechanisms of B lymphocyte activation by the immune response modifier R-848.// J.Immunol. 2000, v. 10, p. 5552-5557.

61. Bishop G.A., Ramirez L.M., Baccam M., Busch L.K.,. Pederson L.K., Tomai M.A. The immune response modifier resiquimod mimics CD40-induced B cell activation.// Cell Immunol. 2001, v. 208, p. 9-17.

62. Demmler G.J. Infectious disease society for America and centers for disease control. Summary of workshop on surveillance for congenital cytomegalovirus disease.// Rev.Infect.Dis.-1991,v. 13,p. 1985-1989

63. Deshpande S.P., Kumaraguru U., Rouse B.T. Dual role of B cells in mediating innate and acquired immunity to herpes simplex virus infections.//Cell Immunol. 2000, v. 202, p. 79-87.

64. Dzhikidze E.K.,Stasilevich Z.K.,Krilova R.I. The results of bacterial intestinal infection study on monkey.// Baltic JXab.Anim.Sci.2001, v.ll, p. 123-134.

65. Fellous M., Nir U., Wallach D., Merlin G., Rubinstein M., Revel M. Interferon-dependent induction of mRNA for the major histocompatibility antigens in human fibroblasts and lymphoblastoid cells.// Proc Natl Acad Sci U S A. 1982 ,v.79, №10,p.3082-3086.

66. Froberg M.K., Review: CMV escapes!//Ann Clin Lab Sci.,2004, v. 34, p.123-130.

67. Fujisawa H,, Shivji G.M., Kondo S., Wang B., Tomai M.A., Miller R.L., Sauder D.N. Effect of a novel topical immunomodulator, S-28463, on keratinocyte cytokine gene expression and production.// J. Interferon Cytok.Res.// 1996, v. 7, p. 555-559.

68. Gaytant M.A., Steegers E.A., Semmekrot B.A. et al. Congenital cytomegalovirus infection: review of epidemiology and outcome.// Obstet. Gynecol. Surv.-2002,v.57, p.245-256

69. Geiger K.D., Nash T.C., Sawyer S., Krahl T.,Patstone G., Reed J.C., Krajewski S., Dalton D., Buchmeier M.J., Sarvetnick N. Inter-feron-gamma protects against herpes simplex virus type 1-mediated neuronal death.//Virology. 1997, v. 238, p. 189-197.

70. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: cell signalling, immune modulation, antiviral response and virus countermea-sures.//J. Gen. Virol. 2000, v. 81, p. 2341-2364.

71. Halford W., Gebhardt B., Carr D. J. Persistent cytokine expression in trigeminal ganglion latently infected with herpes simplex virus type 1.//Immunol. 1996, v. 157, p. 3542-3549.

72. Halford W.P., Veress L.A., Gebhardt B.M., Carr D.J. Innate and acquired immunity to herpes simplex virus type 1.//Virology 1997, v. 236, p. 328-337.

73. Harrison G., McNicol K.A.,Deane E.M. Type 1 interferon genes from the egg-laying mammal, Tachyglossus aculeantus ( shot-beaked echidna).// Immunology and Cell Biol., 2004, v.82, p.112-118.

74. Heise M.T., Virgin I.V. The T cell independent role of gamma interferon and tumor necrosis factor alpha in macrophage activation during murine cytomegalovirus and herpes simplex infections.// J. Virol., 1995, v.69, p. 904-909.

75. Hertzog P.J., Alexander W.S., Starr R., Fenner J.E., Scott C.L., Handman E., Sprigg N.S., Corbin J.E., Cornish A.L., Darwiche R., Owczarek C.M., Kay T.W., Nicola N.A., Metcalf D., Hilton D.J.

76. S0CS1 is a critical inhibitor of interferon gamma signaling and prevents the potentially fatal neonatal actions of this cytokine.//Cell. 1999, v.98,№5, p.597-608.

77. Iannello D., Taylor M.W., Fife K.H., Ghen L. Spontaneous and induced interferon production by peripheral blood leucocytes from control population and patients with herpes genitalis.//J.Med.Virol., 1987,v.22,№ 1 ,p.25-34.

78. Karpusas M., Nolte M., Benton C.B., Meier W., Lipscomb W.N., Goelz S. The crystal structure of human interferon (3 at 2.2 A resolution. //Proc.Natl. Acad. Gf Sci.,USA, 1997,v.94, p.l 1813-11818.

79. Khatissian E., Monceaux V., Cumont M.G., Montagnier L., Hurtrel

80. B., Chakrabarti L. Interferon-gamma expression in macaque lymph nodes during primary infection with simian immunodeficiency vi-rus.//Cytokine,v.8,№ 11, p. 844-852,1996.

81. Klucher K.M., Sheppard P., Kindsvogel W., Xu W., Henderson K., Schlutsmeyer S., Whitmore T.E., Kuestner R., Garrigues U., Birks

82. Koelle DM, Chen HB, Gavin MA, Wald A, Kwok WW, Corey L. CD8 CTL from genital herpes simplex lesions: recognition of viral tegument and immediate early proteins and lysis of infected cutaneous cells.// J. Immunol. 2001, v. 166, p. 4049-4058.

83. Kontsek P., Kontsekova E. Forty years of interferon.//Acta vi-rol.,1997,v.41, p.349-353.

84. Levy D.E., Garcia-Sastre A. The virus battles: IFN induction of the antiviral state and mechanisms of viral evasion.// Cytokine. Growth Factor Rev. 2001, v. 12, p. 143-156.

85. Levy D.E.,Kessler D.S.,Pine R.,Darnell JE Jr. Cytoplasmic activation of ISGF3. The positive regulator of interferon-alpha-stimulated transcription, reconstituted in vitro.// Genes Dev. 1989,v.9,p. 13621371.

86. Miller RL, Gerster JF, Owens ML, Slade HB, Tomai MA.Imiquimod applied topically: a novel immune response modifier and new class of drug.//Int. J. Immunopharmacol., 1999, v. 21, p. 1-14.

87. Miller RL, Tomai MA, Harrison CJ, Bernstein DL Immunomodulation as a treatment strategy for genital herpes: review of the evi-dence.//Int. J. Immunopharmacol. 2002, v. 2, p. 443 451.

88. Mogensen TH, Melchjorsen J, Malmgaard L, Casola A, Paludan SR. Suppression of proinflammatory cytokine expression by herpes simplex virus type 1.//J Virol., 2004 ,v.l 1, p.5883-5890.

89. Mossman K.L. Activation and inhibition of virus and interferon: the herpesvirus story.// Viral. Immunol., 2002, v. 1 p. 3-15.

90. Murrphy P.M., Virus exploiting and subversion of the immune system throughchemokine mimicry.//Nat. Immunol., 2001,v. 2, p.l 16122.

91. Owerbach D., Rutter W. J., Shows T. B., Gray P., Goeddel D. V., Lawn R. M. Leukocyte and fibroblast interferon genes are located on human chromosome 9.// Proc. Nat. Acad. Sci., 1981,v. 78, p. 3123-3127.

92. Renis H.E , Wierenga W , Skulnick H.I., Stringfellow D.A., Weed S.D., Eidson E.E. 5-substituted 2-amino-6-phenyl-4(3H)-pyrimidinones. Antiviral- and interferon-inducing agents.//J Med Chem. 1980, v.23, №3, p. 237-239.

93. Schober I, Braun R, Reiser H, Munk K, Leroux M, Kirchner H. T -lymphocytes are the producer cells of interferon -gamma.//Exp.Cell Res., 1984, v.152, №2, p.348-356.

94. Sen G.C. Viruses and interferons.// Annu.Rev. of Microbiol., 2001,v.55, p.255-281.

95. Senda T., Shimasu T.,Matsuda S., Kawano G., Shimasu H., Naka-mura K.T., Mitsui Y. Three dimentional crystal structure of recombinant murine interferon -beta./ZEMBO J., 1992, v.ll, p.3193-3201.

96. Sidky YA, Borden EC, Weeks CE, Reiter MJ, Hatcher JF, Bryan GT. Inhibition of murine tumor growth by an interferon-inducing imidazoquinolinamine.//Cancer Res., 1992, v. 52, p. 3528-3533.

97. Smith G.L.jSymons A.J. Alcami A. Poxviruses: interfering with in-terferon.//Semin. Virol., 1998, v. 8, p.409-418.

98. Spruance SL, Tyring SK, Smith MH, Meng TC. Application of a topical immune response modifier, resiquimod gel, to modify the recurrence rate of recurrent genital herpes: a pilot study.// J. Infect. Dis, 2001, v. 84, p. 196-200.

99. Tan, Y. H.; Creagan, R. P.; Ruddle, F. H.: Assignment of the genes of the human interferon system to chromosomes 2 and 5.11 Cytogenet. Cell Genet., 1974, v. 13, p. 155-157.

100. Tazulakhova E.B., Amitina N.N., Ignat'ev G.M., Ershov F.I., Maurin'sh Iu.B. Interferon-stimulating properties of immunomodu-lators.//Vopr. Virusol. 1989, v.34, p.717-720.

101. Testerman TL, Gerster JF, Imbertson LM, Reiter MJ, Miller RL, Gibson SJ, Wagner TL, Tomai MA. Cytokine induction by the immunomodulators imiquimod and S-27609.// J Leukos. Biol., 1995, v. 58, p. 365-372.

102. Thomas J., Kanangat S., Rouse B. Herpes simplex virus replication-induced expression of chemokines and proinflammatory cytokines in the eye: implications in herpetic stromal keratitis.// J. Interferon Cytokine. Res., 1998, v. 18, p. 681-690;

103. Tishon A., Lewicki H., Rail G., Von Herrath M., Oldstone M.B.

104. An essential role for type 1 interferon-gamma in terminating persistent viral infections/Virology. 1995, v. 212, p. 244-250.

105. Vakhromeeva N.S., Bagaeva L.V., Kuznetsov V.P., Medunitsyn N;V., Bobkova E.V. Leukocyte migration inhibiting factorinpreparations of alpha and gamma interferons.//Vopr Virusol. 1986, v.31, p. 617-619.