Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря

Леонова, Зоя Алексеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря"

На правах рукописи

ЛЕОНОВА Зоя Алексеевна

Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря

03.00.04 - биологическая химия 14 00 16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

НОВОСИБИРСК - 2005

Работа выполнена в Иркутском государственном медицинском университете

Научные руководители - доктор медицинских наук, завкафедрой биохимии ИГМУ профессор В.И. Кулинский.

доктор медицинских наук, зав.кафедрой инфекционных болезней ИГМУ профессор И.В. Малов

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник

Научного центра клинической и экспериментальной медицины ГУ СО РАМН Меньшикова Е Б

кандидат химических наук, зав лаборатории молекулярной биологии НИИ биохимии ГУ СО РАМН Гимаутдинова О И

Ведущая организация университет дружбы народов (г Москва)

Защита диссертации состоится «_» «_____»2005 г

в___часов на заседании Диссертационного Совета Д 001.034 01

в НИИ биохимии СО РАМН (630117, г Новосибирск, ул.академика Тимакова. 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского НИИ биохимии СО РАМН.

Автореферат разослан « £0 » 2005 r ,

Ученый секретарь

Диссертационного Совета к.б н Русских Г.С

1. ВВЕДЕНИЕ j

Актуальность

Система глутатиона выполняет в организме ряд фундаментальных функций: защищает от окислительного стресса (ОС) и ксенобиотиков, регулирует активность многих белков, участвует в стабилизации клеточных мембран, бинтезе эйкозаноидов, синтезе ДНК, пролиферации, редокс-регуляции экспрессии генов и в других процессах. Восстановленный глутатион снижает образование воспалительных цитокинов, ингибирует апоптоз, может вьшолнять функции иммуно- и нейромодулятора, участвует в трансмембранном переносе органических веществ [Meister A., Ansderson М.Е., 1983; Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., 1990; Ballatori N., Truong А.Т., 1992; Lu S.C., 1999; Oja S.S. et al., 2000; Dickinson D.A., Forman HJ., 2002; Santangelo R., 2003]. 1

Острое или хроническое воспаление, развивающееся' при вирусных гепатитах (ВГ) и хронических заболеваниях желчного пузыря (ЖП), является серьезной угрозой для здоровья и жизни больного. Биохимические аспекты патогенеза этих массовых заболеваний во многом известны [Соринсон С.Р., 1998; Ющук Н.Д., Климова Е.А., 2000; Галкин В.А, 2003; Stehbens W.E., 2004], но система глутатиона изучена недостаточно. В печени глутатион и ферменты его метаболизма синтезируются и содержатся в больших количествах, чем в других органах, к тому же глутатион поступает в кровь в основном из печени [Кулинский В.И., Колесниченко JI.C., 1990; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999; Lu S.C., 1999]. Поэтому можно предположить, что система глутатиона оказывает существенное влияние на патологические процессы в этом органе. ¡

Развитие воспалительного процесса в организме, в том числе и в печени, связывают с ОС - состоянием, при котором избыток активных форм кислорода (АФК) и их производных начинает оказывать на организм неблагоприятное действие. Ферменты метаболизма глутатиона снижают действие ОС и его последствий [Скулачев В.П., 1998; Lu S.C., 1999; Mates J.M., Perez-Gomes С, 1999; Par A. et al., 2000; Jain S.K. et al., 2002; Loguercio С., FedéricoA., 2003; Wu G.A. et al., 2004]. В печени эта ферменты высоко активны [Логинов A.C. и соавт., 1997; Vaubourdolle М. et al., 1995; Wernerman J., Hammarqvist F., 1999].

Сокращения: АлАТ - аланиламинотрансфераза1, АсАТ -аспартатаминотрансфераза; АФК - активные формы кислорода; ВГ А -вирусный гепатит А, ГГТ - гамма-глутамилтрансфераза, ГПО -глутатионпероксидаза, ГР - глутатионредуктаза, ГТ - глутатионтрансфераза, ДЖП - дискинезия желчного пузыря гипомоторного типа, ЖП -желчный пузырь, ОВГ - острый вирусный гепатит, ОС - окислительный стресс, ПХЭ - после холецистэктомии, ХВГ - хронический вирусный гепатит, ХНХ -хронический некалькулезный холецистит. Х^КХ - хронический калькулезный

холецистит, GSH - восстановленный фрвСИВВДИвНАЛЬНАЯ ,

БИБЛИОТЕКА } Cffmrtwr /Л/5 О»

В печени ОС развивается не только под действием гепатотропных вирусов, но и при холестазе, являющимся следствием нарушения экскреции гепатоцитами желчи или нарушения работы ЖП [Ljubuncic P. et al., 2000; Orellana М. et al., 2000; Huang Y.T. et al., 2003]. АФК из печени попадают в кровь и влияют на систему глутатиоиа в эритроцитах и плазме. Поэтому представляется целесообразным провести сравнение изменений в системе глутатиоиа крови у больных с острым и хроническим течением гепатита, а также между гепатитами, вызывающими выраженный цитолитический синдром, и хроническими заболеваниями ЖП. В патогенезе последних участвуют такие ¡факторы, как застой желчи на фоне дискинезии желчного пузыря, повышение ее вязкости и литогенности, ишемия желчного пузыря [Шерлок Ш., Дули Дж., 1999]. Массовый некроз воспаленных клеток, развивающийся в результате ОС, может привести к резкому утяжелению болезни. При \ слабом воспалительном процессе гибель клеток осуществляется путем апоптоза, недостаточность которого может привести к хронизации процесса [Соринсон С.Р., 1998; Кулинский В.И., 1999]. Представляется возможным снижать тяжесть заболевания и степень хронизации с помощью системы глутатиоиа, так как она влияет как на цитолиз, так и на апоптоз. Но еще не решены и более простые задачи - нет полной и точной картины изменений, происходящих в системе глутатиоиа при конкретных заболеваниях. Выяснение этого может иметь патогенетическое и/или диагностическое значение. Определение редокс-параметров может помочь клиницистам в выборе оптимального лечения заболеваний, связанных с ОС [Kocsis I. et al., 2004].

Исследование системы глутатиоиа при ВГ началось в конце 70-х - начале 80-х годов, когда при острых и хронических гепатитах были обнаружены неспецифическое1 увеличение активности глутатионредуктазы (ГР) в сыворотке крови [Wakui К. et al., 1976] и в эритроцитах [Блюгер А.Ф., Крупникова Э.З., 1984] и активности глутатионтрансферазы (ГТ) в сыворотке при острых гепатитах [Adachi I., Horii К., 1980]. Исследование системы глутатиоиа при хронических заболеваниях ЖП началось в 80-90 годах (работы Adachi I., Horii К. (1980), Андрейчина М.А. и др. (1991) и Помелова B.C. и др. (1991)), где приведены данные об изменении активности ферментов метаболизма глутатиоиа в эритроцитах при хроническом калькулезном холецистите (ХКХ) (снижение активностей ГТ и ГР и неизменяемость глутатионпероксидазы (ГПО)) и увеличении активности гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) в сыворотке крови при хроническом некалькулезном холецистите (ХНХ).

В результате поиска литературы, описывающей результаты изучения системы глутатиОна при ВГ и хронических заболеваниях ЖП за последние 40 лет, мы нашли и Проанализировали 32 работы с отмеченными изменениями в эритроцитах и/или плазме у больных, которым поставлен точный диагноз, и 2 работы с данными по системе глутатиоиа в стенке желчного пузыря больных ХКХ. Больше всего изучался хронический вирусный гепатит С (ХВГ С) - 19. публикаций* мевмнё работ по острому и хроническому i ! • iW. » I

1 »»» тч ю "

вирусному гепатиту В (ОВГ В и ХВГ В) и ХНХ (4-6), только одна публикация - по дискинезии желчного пузыря (ДЖП) и совсем нет данных по изменению системы глутатиона крови при состоянии после холецистэктомии (ПХЭ). Такова же ситуация с публикациями по отдельным компонентам системы глутатиона: больше по концентрации восстановленного глутатиона (GSH) и активности ГПО эритроцитов и ГТ плазмы (по 8-10 ссылок) и только 1 работа по активности JTP плазмы. Из 81 возможного варианта (9 компонентов системы глутатиона при 9 заболеваниях) в литературе обнаружены только 32, то| есть 40%, Это означает, что для большинства вариантов данных рет. Результаты, совпадающие минимум в 2 работах, получены только для 6 вариантов, то есть 7%. В эритроцитах показано снижение концентрации глутатиона при ХВГ В и С [Swietek К., Juszczyk J., 1997; Czuczejko J[ et al., 2003], и увеличение активности ГР при ХНХ [Иванов Д.И., Кострнко М.В., 1996; Воевидка О.С., 1997]; в плазме крови - увеличение активности ГТ при ХВГ С [Nelson D.R. et al., 1995; Loguercio С. et al., 1998; Mazur'W. et al., 2003; и др.] и ГГТ при ОВГ В [Андрейчин М.А., 1991; Кожевникова Г.М., 1999] и ХВГ С [Van Thiel. et al., 1995; Kiso S. et al., 1996; Giannini. et al., 2001]. По 10% вариантов получены противоречивые данные, по 17% имеются единственные неподтвержденные публикации. В результате нет полного представления о влиянии указанных заболеваний на систему глутатиона крови. Ни при одном заболевании не проводилось комплексное исследование всех 9 показателей системы глутатиона параллельно в эритроцитах и плазме/сыворотке. В ряде работ полученные данные рассмотрены в основном с позиций клинициста и не приведена биохимическая интерпретация описанных сдвигов.

Целью работы являлось выявление изменений обмена глутатиона в эритроцитах и плазме крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря и оценка их значения для организма. Для достижения цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Комплексно и сравнительно исследовать обмен глутатиона при различных вирусных гепатитах (А, острые и хронические гепатиты В и С) и заболеваниях желчного пузыря (его дисфункция, некалькулезный и калысулезный холециститы, состояние после холецистэктомии).

2. Изучить влияние лечения хронического некалькулезного холецистита и состояния после Холецистэктомии на систему глутатиона.

3. Исследовать систему глутатиона в стенке оперативно удаленных желчных пузырей.

4. Провести анализ патогенетического и возможного Диагностического значения выявленных сдвигов в обмене глутатиона. 1

при дискинезии желчного пузыря, при состоянии после холецистэктомии и влияние воспаления, склероза и метаплазии на систему глутатиона в стенке желчных пузырей, удаленных у больных с хроническим калькулезным холециститом. При хроническом некалькулезном холецистите и состоянии после холецистэктомии показано благоприятное влияние терапии на часть показателей систбмы глутатиона. Впервые при всех изученных заболеваниях проведен корреляционный анализ взаимосвязей, показавший независимость систем глутатиона в эритроцитах и плазме крови.

Научно-практическая значимость. Комплексное изучение системы глутатиона позволило выявить общие закономерности ее реакций и углубило понимание патогенеза воспалительных заболеваний печени и хронических заболеваний желчного пузыря. Обнаружены значимые отличия между вирусными гепатитами и заболеваниями желчного пузыря, острыми и хроническими вирусными гепатитами, разными степенями тяжести острого вирусного гепатита В. Полученные результаты могут послужить основой для разработки новых подходов к антиоксидантной терапии заболеваний гепатобилиарной системы.

Внедрение результатов. По полученным результатам оформлены 3 рационализаторских предложения, где сдвиги в системе глутатиона апробированы как дополнение к комплексной диагностике. Материалы диссертации испЬльзуются при чтении лекций по курсу «биохимия» для студентов ИГМУ.

Апробация работы. Основные положения диссертации и результаты исследований доложены и обсуждены на 1-м (Улан-Батор, 2000) и 2-м (Иркутск, 2001) монголо-русских международных медицинских симпозиумах, на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной клинической медицины» (Иркутск, 2000), на Четвертом Российском научном форуме с международным участием (Санкт-Петербург - Гастроэнтерология - 2002), на Восьмой (2002), Девятой (2003) и Десятой (2004) Российских Гастроэнтерологических Неделях (Москва), на юбилейной конференции, посвященной 80-летию кафедры инфекционных болезней ИГМУ (2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 6 в рекомендованных ВАК журналах, 3 в международной печати, остальные - в других столичных и иркутских журналах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований, общего обсуждения, выводов. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 9 рисунками. Список литературы содержит 55 отечественных и 172 зарубежных источника.

Положения, выносимые на защиту:

1. Изученные заболевания гепатобилиарной системы вызывают ряд выраженных изменений в концентрации глутатиона и активности ферментов его метаболизма (глутатионтрансферазы, глутатионпероксидазы и

глутатионредуктазы) в эритроцитах, плазме крови и стенке желчного пузыря (в плазме - и гамма-глутамилтрансферазы).

2. Выявлены различия ь обмене глутатиона между вирусными гепатитами и хроническими заболеваниями желчного пузыря, а при вирусных гепатитах

- зависимость обнаруженных сдвигов от острого или хронического течения, от степени тяжести острого вирусного гепатита В.

3. Показатели системы глутатиона могут использоваться как дополнение к комплексной диагностике.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Система глутатиона изучена отдельно в эритроцитах и плазме крови 207 больных: 90 человек с вирусными гепатитами (ВГ А - 14, ОВГ В - 39, ХВГ В

- 15, ОВГ С - 5, ХВГ С - 17); 117 больных с заболеваниями ЖП (ХНХ - 33, ХКХ - 16, ДЖП - 14, ПХЭ - 17, больные после лечения ХНХ - 21 и состояния ПХЭ - 16). В качестве контрольной группы использованы показатели системы глутатиона крови 23 добровольцев, которые определяли параллельно исследованию материала клинических групп. Кроме того, система глутатиона была изучена в слизистой и серозной оболочках желчных пузырей, удаленных у 27 больных ХКХ. Всего обследовано 257 человек.

Диагностику и лечение больных проводили сотрудники кафедр инфекционных болезней и факультетской терапии, гистологическое исследование - морфологи. Больные ВГ не имели сопутствующей патологии ЖП. Больные ВГ А, ОВГ В и ОВГ С исследовались в разгар заболевания, больные ХВГ В и ХВГ С при поступлении в стационар с обострением процесса. В клинические группы вошли только те больные, у которых заболевание протекало по цитолитическому типу, больные со смешанным или атипичным течением исключались. Диагнозы верифицировались определением маркеров методом иммуноферментного анализа: HA-Ag, HBsAg, HBeAg, anti-HBc Ig M, anti-HCV, а для части больных - ПЦР (полимеразной цепной реакцией) реактивами «Биокон» (Москва). Из группы больных с заболеваниями ЖП исключали больных с ВГ, диагноз подтверждался данными биохимического, ультразвукового и рентгенологического исследования.

В образцах крови систему глутатиона исследовали раздельно - в эритроцитах и плазме, а в желчном пузыре - в слизистой и серозной оболочках. Концентрацию GSH и активность ферментов ГТ, ГПО, ГР и ГГТ определяли спектрофотометрическими методами.

Для определения концентрации восстановленного глутатиона был использован стандартный метод Ellman в модификации Anderson М.Е. (1989). ГТ определяли по Habig N.H. (1974), ГПО - по Stults F.H. (1977), ГР - по Racker Е. (1955). Концентрацию общего белка определяли по методу Lowry (1951) в модификации Ohnishi, Barr. Активность ГГТ определяли с помощью реактивов тест-системы LACHEMA с субстратом у-глутамил-п-нитроанилидом (Brno).

Для оценки состояния больных определяли концентрацию билирубина, активность аминотрансфераз, тимоловую пробу, протромбиновый индекс. Билирубин определяли методом Ендрашика, аминотрансферазы - Райтмана-Френкеля. I

Все результаты анализировали статистическими методами, описанными в руководствах Закса Л. (1976) и Гланца С. (1999). Для каждой серии опытов рассчитывали срёднюю х, дисперсию стандартную ошибку средней ($г). Дисперсии 'сравнивали по критерию Р, средние по критерию I - при различии диспепсий, а при их равенстве - па критерию Велча. Корреляционный| анализ проводили с расчетом рангового коэффициента Спирмена (г,). Описаны только статистически значимые явления (Р < 0,05/ (

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. СИСТЕМА ГЛУТАТИОНА КРОВИ ПРИ ВИРУСНЫХ ГЕДАТИТАХ '

При ВГ резко возрастала активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и меньше - аспартатаминотрансферазы (АсАТ). Резко повышалась и концентрация билирубина, больше связанного. Тимоловая проба увеличивалась, протромбиновый индекс снижался. Это свидетельствует об обычном течении ВГ.

При исследовании системы глутатиона в эритроцитах больных вирусными гепатитами получены следующие результаты (табл.1). По сравнению с группой контроля концентрация СБН эритроцитов примерно одинаково снижалась в среднем на 23-39 %, а активности ГПО и ГР значимо увеличивались (соответственно, на 56-89 и 38-68 %) при всех изученных гепатитах, активность ГТ увеличивалась только при ХВГ С на 21% (в остальных группах не изменялась). Для показателей эритроцитов не обнаружено значимых отличий как между отдельными группами, так и группами, полученными при объединении больных с острым и хроническим течением.

В плазме , относительно группы контроля концентрация вБН увеличивалась только при ВГ А и острых гепатитах В и С (в среднем на 4274 %) (табл.2). При хронических гепатитах уровень БШ в плазме не ^ менялся. АкгивнЬсть ГТ плазмы резко возрастала (в 9-10 раз) при остром течении гепатитор В и С, при остальных гепатитах увеличение составило 2-3 раза. Выявлены Ьтличня по ГТ плазмы между отдельными группами ВГ: между ВГ А и ОВГ В, ОВГ В и ХВГ В, ОВГ С и ХВГ С (р<0,001) (при ОВГ В и ОВГ С активность фермента была выше), а также между объединенными группами ВГ (р<0,01) (выше при острых ВГ). Активность ГПО плазмы при разных ВГ повышалась в среднем на 72-151 %, отличий между группами по данному показателю не выявлено. Активность ГР плазмы увеличивалась только при ВГ А и острых формах гепатитов В и С (на 38-57 %). Таким образом, направленность сдвигов показателей как в эритроцитах, так и в плазме (за исключением одного показателя ГТ эритроцитов при ХВГ С) оказалась однотипной для всех ВГ, независимо от этиологии гепатита и

Таблица 1

Состояние системы глутатиона в эритроцитах при вирусных гепатитах

Форма гепатита ОЭН, мкмоль/мл гт, нмоль/мин на 1 мгбелка ГПО, нмоль/мин на 1 мг белка ГР, нмоль/мин на 1 мг белка

Контроль (здоровые добровольцы) п«23 1,57±0,12 6,0810,59 I I 7,51 ±0,68 1 3,16*0,16

ВГА п =14 б 1,21±0,094 6,24±0.56 В I 14,2±1,71 1 8 5,28±0,71

ОВГВ п =39 г 1,04*0,055 6,66±0,86 б ' 12,9±2,27 ! г 5,00±0,34

ХВГВ п =15 г 0,96±0,070 6,25±0,58 б ! 11,73±1,67 г 5,29±0,61

ОВГС п=5 в 1,12±0,071 7,61±2,4в в 12,6±1,47 в 4,3е±0,43

ХВГС п =17 г 1,05±0,070 7,35±1,50 б 12,3±2,00 б 5,21 ±0,80

Примечания ко всем таблицам: представлены средние арифметические (х) и стандартные ошибки средней Значимость различий с группой

сравнения: б -Р<0,05, в -Р<0,01, г- Р<0,001.

Таблица 2

Состояние система глутатиона в плазме крови при вирусных гепатитах

Форма Гепатита овн, нмоль/мл гт, нмоль/мин на 1 мг белка ГПО, нмоль/мин на 1 мг белка ГР, нмоль/мин на 1 мг белка ГГТ, мкмоль/мин на 1 л

Контроль (здоровые добровольцы) п=23 19±2,0 0,2510,021 0,97±0,042 0,40*0,021 I 75*6,0

ВГА П=14 б 27*2,1 г 0,76±0,093 б 2,43±0,37 1 6 0,60*0,088 в 161*19

О0ГВ п=39 в 30±2,7 б 2,26±0,91 б 2,04±0,38 . б 0,56*0,063 в 186±34

ХВГВ п=15 23±4,8 г 0,56±0,053 г 1,77*0,13 0,43*0,017 г 145*13

ОВГС п=5 б 33±2,1 г 2,53*0,46 в ,99*0,26 б 0,55*0,063 г 211*34

ХВГС п=17 21*4,7 г 0,78*0,063 в ,67*0,18 0,46*0,058 в 192*25

течения заболевания. Общая характеристика изменений обмена глутатиона представлена на рис. 1.

Увеличение в эритроцитах активности ферментов ГПО и ГР может являться компенсаторной реакцией на воздействие окислительного стресса. Наличие подобного механизма активации доказано, например, для гамма-

глутамилцистеинилсинтазы - лимитирующего фермента синтеза глутатиона [Ьи Э.С., 1999]. Снижение уровня ввН в эритроцитах - это, вероятно, результат увеличения его метаболизма ферментами в связи с развитием окислительного стресса. Главная роль в устранении окислительного стресса принадлежит ГПО. Ее работа сопряжена с ГР в глутатионовом редокс-цикле, осуществляемым этими ферментами [Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., 1993]. Повышение активностей ГПО и ГР увеличивает антиоксидантные возможности системы глутатиона. Увеличение активности ферментов в эритроцитах может происходить как в результате активации уже имеющихся ферментов, так и в результате индукции ферментов, синтезирующихся в клетках-предшественниках эритроцитов.

Увеличение концентрации ввН и активности ферментов его метаболизма, в том числе и I IТ, в плазме при воспалительных заболеваниях - это результат увеличения проницаемости и/или повреждения плазматический мембран гепатоцитов. Но резко выраженную гиперферментемию для ГТ, вероятно, нельзя объяснить только повышением проницаемости \ плазматических мембран или цитолизом. Скорее всего происходит и индукция данного фермента. Повышение активности ГТ (так же, как и ГПО и ГР) имеет положительное значение, увеличивая не только антиоксидантную функцию, но и обезвреживающую. Этот фермент может инактивировать огромное количество как эндогенных, так и экзогенных веществ (при ВГ доказано наличие эндогенной интоксикации). Повышение активности ГР в плазме только при острых гепатитах В, С и ВГ А объясняется, вероятно, большим объемом некроза гепатоцитов при остром течении по сравнению с хроническими, т.к содержание данного фермента в цитоплазме гепатоцитов не столь велико, по сравнению с ГПО и, особенно, ГТ.

Различия между острыми и хроническими формами гепатитов могут иметь диагностическое значение. Особенно это важно для больных гепатитом С, для которых даже применение методов иммуноферментного анализа не всегда уточняет диагноз при разном течении заболевания [Ющук Н.Д., Климова Е.А., 2000]. Для уточнения диагноза острого или хронического гепатита, поставленного на основе анамнеза, клинических и биохимических данных, можно использовать концентрацию С8Н и активность ГР плазмы, которые увеличиваются только при острых гепатитах.

При ОВГ В у 24 больных наблюдалось среднетяжелое, а у 10 больных -тяжелое течение. Сравнение этих групп показало, что в первой - из девяти изучаемых показателей состояния системы глутатиона крови значимо изменялись восемь (кроме активности ГТ эритроцитов), во второй - только три (концентрария ОЭН и активность ГПО в эритроцитах, активность ГТ в плазме). У больных со среднетяжелым течением в эритроцитах по сравнению

Рис. 1. Сдвиги в системе глутатиона крови при ВГ ВГ А

100% и изображены в виде радиуса окружности. Изменения у больных (выражены в % к контролю) нарушают симметричность диаграммы - увеличение показателей выражается в виде «лучей», выступающих за пределы окружности, снижение показателей - в виде впадин. Черные кружочки - р<0,05, пустые

- р>0,05. 1-4 - эритроциты, 5-8 - плазма, 1,5 - ОБН, 2,6 - ГТ, 3,7

- ГПО, 4,8 - ГР.

с группой контроля снижалась концентрация ввН (на 31 %,) и увеличивались активности ГР и ГПО, соответственно, на 81% и 80%; в плазме наблюдался прирост всех изученных показателей - вЯН на 63%, ГТ в 13 раз, ГПО - на 132%, ГР - на 58% и ГГТ - на 131%. Сдвиги у больных с тяжелым течением были следующие: в эритроцитах количество ввН снижалось на 37 %, а активность ГПО увеличивалась на 68%, в плазме - ГТ и ГГТ возрастали соответственно на 264 и 156%, Только 5 показателей не зависели от степени тяжести - это ОБН, ГТ и ГПО эритроцитов, ГР и ГГТ плазмы. Статистически подтверждены отличия между группами с разной степенью тяжести по ГР эритроцитов и ввН, ГПО и ГТ плазмы (соответственно, р<0,05, 0,05, 0,001, 0,05). Таким образом, активность ГТ плазмы больных со среднетяжелым течением была в 3,6 раза выше, чем у больных с тяжелым течением. Концентрация билирубина, напротив, была выше у больных с тяжелым течением (при среднетяжелом течении - 159±14, при тяжелом - 297±4,4 мкмоль/л, р<0,05). Менее выраженные изменения ряда показателей системы глутатиона у больных с тяжелым течением болезни - явное проявление характерной для декомпенсации печени билирубин-ферментной диссоциации (сохранение высокого уровня билирубина при снижении активности печеночных ферментов в плазме). Классическое объяснение этого феномена - уменьшение синтеза печеночных ферментов при сильном повреждении гепатоцитов [Дж.Ф. Зилва, П.Р. Пэннелл, 1988]. Для описанной нами реакции системы глутатиона при ОВГ В с тяжелым течением целесообразно использовать конкретный термин -«билирубин-глутатионовая диссоциация».

Возможно, развитие более тяжелого состояния обусловлено сниженным содержанием концентрации ввН и сниженной активностью ферментов его метаболизма. Согласно полученным данным представляется полезным использовать повышение концентрации вЭН в печени (через введение его предшественников, например, эфиров) для облегчения состояния больных при вирусных гепатитах, особенно при фульминантных формах.

Комплекс сдвигов при ОВГ В, а именно повышение активности ГР эритроцитов, а также повышение уровня ОБН и активностей ГПО и ГР плазмы (вероятно, даже часть этого комплекса) можно использовать для уточнения диагноза ОВГ В средней тяжести.

2. СИСТЕМА ГЛУТАТИОНА ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЖЕЛЧНОГО ПУЗЫРЯ

При ХНХ и ХКХ отмечались нормальные показатели билирубина и аминотрансфераз. Активность АлАТ повышалась у больных с ДЖП и с состоянием ПХЭ (р<0,05), а АсАТ только при состоянии ПХЭ (р<0,05). У больных с состоянием ПХЭ, в отличие от больных с ВГ, повышение свободного билирубина было более выраженным по сравнению со связанным.

Относительно группы контроля при всех изученных заболеваниях ЖП в эритроцитах концентрация ввН не менялась, активность ГТ эритроцитов

снижалась (в среднем на 28-54 %), а активность ГР повышалась (на 84-154%) во всех группах, ГПО не изменялась (табл. 3). При ХКХ активность ГТ была ниже, а активность ГР выше, чем при ХНХ (р<0,05).

6 плазме по сравнению с группой контроля наблюдалось повышение концентрации бвН (на 53-74%), активностей ГТ (на 88-164%), ГПО (на 4480%) (кроме ПХЭ) и ГГТ (на 28-52%) (табл. 4). ГР плазмы не изменялась. У больных с состоянием ПХЭ выявлены отличия по ГПО плазмы от больных ХНХ, ДЖП и ХКХ и по ГР эритроцитов от больных ХНХ Р<0,05 - 0,001). Общая характеристика изменений обмена глутатиона представлена на рис.2.

Несмотря на то, что одновременное повышение активности ГР и снижение активности ГТ в эритроцитах должно было бы привести к * увеличению в них концентрации бвН, этого не происходит. Существуют,

вероятно, две возможные причины: либо уменьшение его синтеза ^ эритроцитами при хронических заболеваниях ЖП, либо более интенсивный

метаболизм, вызванный инактивацией активных форм кислорода и вторичных пероксидантов - липопероксидов, пероксидов белка и других веществ, которые образуются при заболеваниях с ОС.

Принимая во внимание, что прямая связь между ХКХ и предшествующим ему ХНХ является достаточно доказанной [Галкин В.А., 2003], можно предположить, что снижение активности ГТ эритроцитов при ХКХ происходит под действием веществ желчи, накапливающихся по мере увеличения ее литогенности.

Концентрация ввН гепатоцитов увеличивается при экспериментальном нарушении оттока желчи [ЦаЬипис Р. е1 а1., 2000; ОгеИапа М. е! а1., 2000]. Возможно, одной из причин повышения ввН в плазме при заболеваниях ЖП является повышение вЯН в печени. Концентрации вБН и активности ферментов его метаболизма при ДЖП не отличались от соответствующих показателей при холециститах. Согласно Шерлок Ш., Дули Дж. (1999), дискинезии желчного пузыря гипомоторного типа часто является промежуточным и/или дополнительным звеном в динамике перехода от ХНХ к ХКХ. В нашей выборке больные ДЖП не имели камней в желчных (Г* пузырях.

Увеличение активности ИТ наблюдалось при всех изученных заболеваниях, но больше она возрастала при ВГ. Но и при ВГ активность * » ГГТ оказалась не столь высокой, как была бы при обтурации желчных путей.

Для ГГТ, которая чаще характеризуется как холестатический фермент, доказана активация и более того индукция окислительным стрессом. Очевидно, что при ВГ окислительный стресс более выражен, чем при заболеваниях ЖП, и поэтому активность ГГТ выше при ВГ.

Для лечения ХНХ и состояния ПХЭ использовали противовоспалительные препараты, урсодезоксихолевую кислоту (Урсосан), для больных с состоянием ПХЭ - дополнительно аденозилметионин (Гептрал). Урсодезоксихолевая кислота - это гидрофильная желчная кислота, гепатопротектор, стабилизирующий мембраны и снижающий холестерин. Оба препарата оказывают влияние на обмен глутатиона. Так,

урсодезоксихолевая кислота приводит к задержке ОвН в гепатоцитах [Сшей й-., 1997]. Аденозилметионин способствует поддерживанию концентрации вБН и рассматривается как его предшественник.

Таблица 3

Состояние системы глутатиона в эритроцитах при хронических заболеваниях желчного пузыря (ЖП)

Вид заболеваний ЖП ввН, мкмоль/мл ГТ, нмоль/мин на 1 мг белка ГПО, нмоль/мин на 1 мг белка ГР. нмоль/мин на 1 мг белка

Контроль (здоровые добровольцы) п=23 1,57±0,12 6,08±0,55 7,51±0,68 3,15±0,16

ХНХ п=33 1,51 ±0,62 б 4,38±0,53 8,31 ±0,59 г 5,81 ±0,65

ХКХ п=16 1,58±0,061 г 2,78±0,34 10,2±0,65 г 7,99±0,71

II ^ 1,69±0,098 в 4,10±0,77 10,6±0,97 в 6,28±1,02

пхэ п=17 1,47±0,12 б 3,98±0,49 9,32±0,77 г 7,84±0,62

Таблица 4

Состояние системы глутатиона в плазме крови при хронических заболеваниях желчного пузыря (ЖП)

Форма Гепатита ввн, нмоль/мл ГТ, нмоль/мин на 1 мг белка ГПО, нмоль/мин на 1 мг белка ГР, нмоль/мин на 1 мг белка ГГТ, мкмоль/мин на 1 л

Контроль (здоровые добровольцы) п=23 19±2,0 ,25±0,021 0,97±0,042 ,40±0,021 75±6,0

ХНХ п=33 г 29±1,2 г 0,58±0,012 в 1,43±0,12 0,48±0,042 г 115±9,0

ХКХ п—16 г 33±3,3 б 0,47±0,086 г 1,61 ±0,96 0,45±0,066 б 96±6,0

джп п=14 г 30±4,7 б 0,54±0,011 г 1,75±0,13 0,44±0,077 в 105±9,0

ПХЭ п=17 б 33±0,60 в 0,66*0,16 0,88±0,14 0,47±0,026 г 109±5,0

Рис. 2. Сдвиги в системе глутатиона крови при хронических заболеваниях желчного пузыря

ХНХ

ДЖП ПХЭ

1 8 1

Обозначения те же, что и на рисунке 1.

После лечения ХНХ уровень ввН эритроцитов не менялся. Активность ГТ эритроцитов увеличилась на 23% и уже не отличалась от группы контроля. Активность ГПО эритроцитов значимо увеличилась на 79% и отличалась от группы контроля и соответствующего показателя до лечения (р<0,01). Снижение уровня ОБН в плазме после лечения на 41% было значимо по сравнению с больными до лечения и показатель уже не отличался от контроля.

Изменения в системе глутатиона крови, полученные в результате лечения состояния ПХЭ, в основном, подобны таковым, полученным при лечении ХНХ, но развивались несколько позднее (при ХНХ - через 1 месяц, при состоянии ПХЭ - через 1,5-2 месяца). В результате лечения больных с состоянием ПХЭ концентрация ОБН в эритроцитах не менялась. Активность ГТ эритроцитов умеренно увеличилась (на 28%) и перестала отличаться от группы контроля. Активность ГПО возрасла на 36% и отличалась от группы до лечения (р<0,05). Уровень ОБН плазмы снизился на 33% и перестал отличаться от группы контроля. При лечении обоих заболеваний значимых изменений активностей ГР эритроцитов и ферментов плазмы не наблюдалось.

Таким образом, в результате лечения ХНХ и состояния ПХЭ происходило увеличение активности ГТ эритроцитов и снижение концентрации ОБН

плазмы до уровня контроля. Активность ГПО эритроцитов возрастала. Вероятно, снижение ввН плазмы до уровня контроля при обоих заболеваниях означает стабилизацию клеточных мембран под действием гепатопротектора. В результате снижается или прекращается вымывание цитоплазматических компонентов системы глутатиона в кровоток. Увеличение активностей ферментов, очевидно, результат снижения холестаза и активация их лекарственными препаратами.

Кроме крови, система глутатиона была исследована в стенке оперативно удаленных желчных пузырей. Концентрация глутатиона в желчных пузырях была близка к таковой в эритроцитах, а активность ферментов метаболизма глутатиона (ГТ, ГПО и ГР) - на 0,5-2 порядка выше. Обострение воспаления понижает, а метаплазия повышает уровень глутатиона в слизистой оболочке, воспаление и усиление склероза снижают активность ГТ в серозной оболочке; все три патологических явления (воспаление, склероз и метаплазия) снижают активность ГПО в обеих оболочках желчного пузыря.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Впервые проведено комплексное и сравнительное исследование системы глутатиона в эритроцитах и плазме при ВГ и хронической патологии ЖП. Наиболее общими сдвигами, характерными для всех 9 изученных заболеваний, были: в эритроцитах - увеличение активности ГР, в плазме -накопление ГТ и ГТТ, а при 8 заболеваниях (но не ПХЭ) - и ГПО. Активация в эритроцитах ГР, а при всех ВГ - и ГПО свидетельствует о стимуляции антиоксидантной системы глутатиона, больше при ВГ.

Статистически значимые различия между пятью заболеваниями ВГ и четырьмя заболеваниями ЖП подтверждены при сравнении двух объединенных групп, которые значимо отличались по ГТ эритроцитов и ГТ и ГГТ плазмы - только при патологии ЖП снижалась активность ГТ в эритроцитах, а при ВГ были сильнее увеличены активность ГТТ и особенно ГТ в плазме крови.

Обнаружены противоположные изменения при различных заболеваниях печени - небольшое увеличение активности ГТ в эритроцитах при ХВГ С и снижение активности фермента при всех заболеваниях ЖП. Общий и неспецифичный характер многих сдвигов свидетельствует о вовлечении системы глутатиона в течение и, скорее - в ингибирование воспалительных процессов (и/или их последствия) в печени, т.к. противовоспалительные эффекты глутатиона доказаны.

Повышение активности ферментов метаболизма глутатиона в плазме крови - результат поражения не эритроцитов, а клеток печени. Это доказывается преимущественным накоплением печеночного а-изофермента ГТ, а не эритроцитарного - ж [Маппепмк В., 1997]. Вымывание в плазму ряда печеночных ферментов отражает воспалительное повреждение плазматических мембран и особенно цитолиз. Последний определяет намного большую выраженность изменений при ВГ. Общность

патогенетических механизмов (ОС, воспаление и цитолиз) объясняет отсутствие разнонаправленных сдвигов.

Корреляционный анализ показал, что значимые взаимосвязи различных показателей системы глутатиона между собой очень редко встречаются во всех сериях (в группе контроля отсутствуют), в том числе и между однотипными показателями в эритроцитах и плазме. Последнее вместе с различиями изменений в эритроцитах и плазме показывает, что в крови функционируют не одна, а две независимые системы глутатиона - в эритроцитах и в плазме. Поэтому определение показателей обмена глутатиона в цельной крови нецелесообразно. Редкость взаимосвязей свидетельствует о возможности независимого регулирования их компонентов, о высокой пластичности систем глутатиона.

Выявлено диагностическое значение некоторых показателей системы глутатиона крови. В эритроцитах это снижение концентрации ОБН и увеличение активности ГПО только при ВГ; снижение активности ГТ в эритроцитах только при заболеваниях ЖП; увеличение в плазме крови концентрации вБИ и активности ГР только при острых, но не хронических гепатитах; более выраженные изменения ряда показателей системы глутатиона у больных со среднетяжелым течением ОВГ В по сравнению со среднетяжелым.

В удаленных ЖП обострение воспаления понижает, а метаплазия повышает уровень глутатиона в слизистой оболочке, воспаление и усиление склероза снижают активность ГТ в серозной оболочке; все три патологических явления (воспаление, склероз и метаплазия) снижают активность ГПО в обеих оболочках желчного пузыря.

ВЫВОДЫ

1. При всех вирусных гепатитах независимо от этиологии и течения заболевания в эритроцитах происходит увеличение активности глутатионперокси-дазы, глутатионредуктазы и снижение концентрации восстановленного глутатиона, а в плазме крови - возрастание активностей глутатионтрансферазы, глутатионпероксидазы и гамма-глутамилтрансферазы. При острых, но не хронических вирусных гепатитах в плазме увеличивается активность глутатионредуктазы и концентрация глутатиона, намного резчее возрастает активность глутатионтрансферазы. При хроническом вирусном гепатите С повышается активность глутатионтрансферазы эритроцитов.

2. Острый вирусный гепатит В с тяжелым течением сопровождается изменениями меньшего количества параметров системы глутатиона, чем гепатит со среднетяжелым течением (особенно в плазме крови), и эти изменения менее выражены (развивается «билирубин-глутатионовая диссоциация»),

хроническом калькулезном холецистите и дискинезии желчного пузыря), но не у больных хроническим калькулезным холециститом после холецистэкто-мии. Эти изменения отличаются от сдвигов при вирусных гепатитах.

4. Корреляция между параметрами системы глутатиона в группе контроля и при исследуемых патологических состояниях отсутствует. Вместе с различиями изменений в эритроцитах и в плазме это показывает, что в крови функционирует не одна, а две независимые системы глутатиона.

5. У больных хроническим некалькулезным холециститом и с состоянием после холецистэктомиии противовоспалительное лечение с добавлением ур-содезоксихолевой кислоты, а после холецистэктомии - и S-аденозилметионина вызывает повышение активности глутатионпероксидазы и нормализацию активности глутатионтрансферазы в эритроцитах и концентрации восстановленного глутатиона в плазме.

6. В стенке оперативно удаленных желчных пузырей при хроническом калькулезном холецистите концентрация глутатиона близка к таковой в эритроцитах, а активность ферментов метаболизма глутатиона на 0,5-2 порядка выше. Обострение воспаления понижает, а метаплазия повышает концентрацию глутатиона в слизистой оболочке, воспаление и усиление склероза снижают активность глутатионтрансферазы в серозной оболочке. Все три нарушения снижают глутатионпероксидазу в обеих оболочках пузыря.

7. Показатели обмена глутатиона крови при гепатобилиарных заболеваниях имеют патогенетическое и определенное диагностическое значение.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Леонова З.А., Данилов Ю.А., Колесниченко Л.С. Концентрация глутатиона и активность глутатионтрансферазы в крови больных острым и хроническим вирусным гепатитом В //Актуальные вопросы современной клинической медицины (с международным участием): сб. науч. тр. Иркутск, 2000.Вып 3, С.171-172.

2. Kulinsky V.I., Malov I.V., Kolesnichenko L.S., Leonova Z.A., Danilov Y.A. Blood glutathione system in viral hepatitis В // Abstr. of the l" Mongolian-Russian International Medical Symposium. Ulaanbaatar, Mongolia, 2000, p.59.

3. Леонова 3.A., Козлова H.M., Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., Тю-рюмин Я.Л. Система глутатиона в крови при заболеваниях желчевыводящей системы // Сиб. мед. ж. Иркутск. 2002. №2. С. 14-15.

4. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., Малов И.В., Леонова З.А., Данилов Ю.А., Козлова Н.М., Тюрюмин Я.Л. Исследование системы глутатиона при заболеваниях печени и желчевыводящих путей // Паллиативная медицина и реабилитация. 2002. № 2-3, С.25.

5. Козлова Н.М., Кулинский В.И., Леонова З.А., Колесниченоко Л.С., Тюрюмин Я.Л. Изменения в системе глутатиона в крови при заболеваниях желчевыводящих путей // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2002. № 2-3, С.64.

6. Козлова Н.М., Леонова З.А.. Кулинский В.П.. Колесннчепко Л.С., Аксаментов Г.В., Тюрюмин Я.Л. Система глутатиона в крови у больных с заболеваниями желчевыводящих путей старше 50 лет /' Росс, ж гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. М.. 2002 Т 12. Л» 5, прилож № 17. С" 100.

7. Колесниченко Л С., Кулинский В.И , Малов И В , Леонова 3 А, Данилов Ю.А. Сдвиги концентрации глутатиона и активности ферментов его метаболизма в крови при вирусных гепатитах /' Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2002. Т. 2, №6, С.173-176.

8. Леонова З.А , Козлова Н.М , Данилов Ю А., Кулинский В И., Колесниченко Л.С., Малов И В., Тюрюмин Я Л Комплексное исследование системы глутатиона при заболеваниях гепатобилиарной системы <7 Паллиат. медицина и реабилитация 2003. №2, С.31

9 Леонова З.А., Данилов Ю.А Система глутатиона в крови при вирусных гепатитах А, В, С // Ж. инфекц. патологии Иркутск, 2003. Т 10, Лг 3, С. 62-63.

Ю.Козлова Н М.. Кулинский В.И.. Леонова З.А Влиянне лечения на систему глутатиона в крови при заболеваниях желчевыводящих путей Росс.ж гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. М.. 2003 №2-З.С 76

11. Козлова Н.М., Леонова З.А.. Кулинский В.И., Аксаментов Г.В . Потапова В.Д., Тюрюмин Я.Л. Изменения в системе глутатиона в крови у больных с заболеваниями старше 55 лет под влиянием лечения /' Росс. ж. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии М., 2003. Т 13. № 5 С 10

12. Леонова З.А., Колесниченко Л.С., Чикотеев С П . Каня О В.. Зайцева Л В Влияние воспаления, склероза и метаплазии на систем} глутатиона стенки желчного пузыря при хроническом холецистите <7 Паллиат медицина и реабилитация. 2004. № 2, С 22.

13. N.M. Kozlova. J.L. Turumin, V.I. Kulinsky. Z.A. Leonova, Yu.A.Jacobson. The influense of Essliver fortae on the lipid spectrum and the glutathione system in blood in the patients with biliary pathology / The Eleventh International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange. 2004. V 11. №8 P.368.

14. N.M. Kozlova, V.I. Kulinsky, Z.A. Leonova. J.I. Turumin. The changcs in the blood glutathione system in patients with biliary diseases after pathogenetic treatment. // The Eleventh International Symposium of the Japan-Russia Medical Exchange. 2004. V. 11, №8. P 369.

15. Козлова H.M., Тюрюмин Я.Л., Кулинский В.И., Леонова З.А., Куликова Г.А., Кузнецова Н.В., Якобсон Ю.А. Динамика биохимических показателей крови на фоне лечения препаратом эссливер форте у больных с по-стхолецистэктомическим синдромом // Росс. ж. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. М., 2004. № 5, С. 377.

»15339

РНБ Русский фонд

2006-4 15467

Подписано в печать 24.08.05. Формат 60x90 1/16 Бумага офсетная. Печать трафаретная. Усл. псч. л 3,33 Уч.- изд.л. 1,11. Тираж 100 экз. Заказ 5380.

Изготовлено в ООО «Репроцентр А1» г Иркутск, ул. Лапина, 1, оф. 101 тел. 203-144, 999-003, 99-26-27

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Леонова, Зоя Алексеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1 .ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Синтез, межорганный обмен и биологическая роль глутатиона.

2.2. Функции и значение глутатионтрансферазы (КФ 2. 5. 1. 18).

2.3. Функции и значение глутатионпероксидазы (КФ 1. 11. 1.19).

2.4. Функции и значение глутатионредуктазы (КФ 1. 6. 4. 2).

2.5. Функции и значение гамма-глутамилтрансферазы (КФ 2.3.2.2).

2.6. Воспаление, окислительный стресс и значение системы глутатиона

2.7. Сдвиги в системе глутатиона при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря"

Актуальность

Система глутатиона выполняет в организме ряд фундаментальных функций: защищает от окислительного стресса (ОС) и ксенобиотиков, регулирует активность многих белков, участвует в стабилизации клеточных мембран, синтезе эйкозаноидов, синтезе ДНК, пролиферации, редокс-регуляции экспрессии генов и в других процессах. Восстанавленный глутатион (GSH) снижает выработку воспалительных цитокинов, ингибирует апоптоз, может выполнять функции иммуно- и нейромодулятора, участвует в трансмембранном переносе органических веществ [Meister A., Ansderson М.Е., 1983; Ку-линский В.И., Колесниченко JI.C., 1990; Ballatori N., Truong А.Т., 1992; Lu S.C., 1999; Oja S.S. et al., 2000; Dickinson D.A., Forman H.J., 2002; Santangelo R., 2003].

Острое или хроническое воспаление, развивающееся при вирусных гепатитах (ВГ) и хронических заболеваниях желчного пузыря (ЖП), является серьезной угрозой для здоровья и жизни больного. Многие биохимические аспекты патогенеза этих массовых заболеваний известны [Соринсон С.Р., 1998; Ющук Н.Д., Климова Е.А., 2000; Галкин В.А, 2003; Stehbens W.E., 2004], но система глутатиона изучена недостаточно. В печени глутатион и ферменты его метаболизма синтезируются и содержатся в больших количествах, чем в других органах, к тому же они поступают в кровь в основном из печени [Кулинский В.И., Колесниченко Л.С., 1990; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999; Lu S.C., 1999]. Поэтому можно предположить, что система глутатиона оказывает существенное влияние на патологические процессы в этом органе.

Gomes С., 1999; Par A. et al., 2000; Jain S.K. et al., 2002; Loguercio C., Federico

A., 2003; Wu G.A. et al., 2004]. В печени эти ферменты высоко активны [Логинов А.С. и др., 1997; Vaubourdolle М. et al., 1995; Wernerman J., Ham-marqvist F., 1999].

В печени ОС развивается не только под действием гепатотропных вирусов, но и при холестазе, являющимся следствием нарушения экскреции ге-патоцитами желчи или нарушения работы ЖП [Логинов А.С. и др., 1993; Ljubuncic P. et al., 2000; Orellana М. et al., 2000; Huang Y.T. et al., 2003]. АФК из печени попадают в кровь и влияют на систему глутатиона в эритроцитах и плазме. Поэтому представляется целесообразным провести сравнение изменений в системе глутатиона крови у больных с острым и хроническим течением гепатита, а также между гепатитами, вызывающими выраженный цито-литический синдром, и хроническими заболеваниями ЖП. В патогенезе последних участвуют такие факторы, как застой желчи на фоне дискинезии желчного пузыря, повышение ее вязкости и литогенности, ишемия желчного пузыря [Шерлок LLL, Дули Дж.,1999]. Массовый некроз воспаленных клеток, развивающийся в результате ОС при сильном воспалении, может привести к резкому утяжелению болезни. При слабом воспалительном процессе гибель клеток осуществляется путем апоптоза, недостаточность развития которого может привести к хронизации процесса [Соринсон С.Р., 1998; Кулинский

B.И., 1999]. Представляется возможным снижать тяжесть заболевания и степень хронизации с помощью системы глутатиона, так как она влияет как на цитолиз, так и на апоптоз. Но еще не решены и более простые задачи - нет полной и точной картины изменений, происходящих в системе глутатиона при конкретных заболеваниях. Выяснение этого может иметь патогенетическое и/или диагностическое значение. Определение редокс-параметров может помочь клиницистам в выборе оптимального лечения заболеваний, связанных с ОС [Kocsis I. et al., 2004].

В результате поиска литературы, описывающей результаты изучения системы глутатиона при ВГ и хронических заболеваниях ЖП за последние 40 лет, мы нашли и проанализировали 32 работы с отмеченными изменениями системы в эритроцитах и/или плазме у больных, которым поставлен точный диагноз и 2 работы с данными по системе глутатиона в стенке желчного пузыря больных ХКХ. В эритроцитах показано снижение концентрации GSH при хронических гепатитах В, С (ХВГ В, ХВГ С) [Swietek К., Juszczyk J., 1997; Czuczejko J. et al., 2003] и увеличение активности глутатионредуктазы (ГР) при хроническом некалькулезном холецистите (ХНХ) [Иванов Д.И., Костенко М.В., 1996; Воевидка О.С., 1997], в плазме крови обнаружено увеличение активностей глутатионтрансферазы (ГТ) при ХВГ С [Nelson D.R. et al., 1995; Loguercio С. et al., 1998; Mazur W. et al., 2003; и др.] и гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) при остром вирусном гепатите В (ОВГ В) [Анд-рейчин М.А. и др., 1991; Кожевникова Г.М. и др. (а), 1999] и ХВГ С [Van Thiel. et al., 1995; Kiso S. et al., 1996; Giannini E. et al., 2001]; эти данные составляли лишь 7% информации запланированного и проведенного нами изучения системы глутатиона. В ряде работ полученные данные были рассмотрены в основном с позиций клинициста и не приведена биохимическая интерпретация описанных сдвигов.

Мы изучали 9 показателей системы глутатиона крови, которые считаем достаточными для оценивания состояния ферментативной антиоксидант-ной защиты и мониторинга осуществления антиоксидантной функции в организме. В эритроцитах определяли концентрацию GSH и активность трех ферментов его метаболизма: ГТ, глутатионпероксидазы (ГПО) и ГР. В плазме определяли концентрацию GSH, активность ГТ, ГПО, ГР и ГТТ. Эти ферменты изменяют концентрацию GSH, который используется на устранение АФК и их производных.

1. Комплексно и сравнительно исследовать обмен глутатиона при различных вирусных гепатитах (А, острые и хронические гепатиты В и С) и заболеваниях желчного пузыря (его дисфункция, некалькулезный и калькулезный холециститы, состояние после холецистэктомии).

2. Изучить влияние лечения хронического некалькулезного холецистита и состояния после холецистэктомии на систему глутатиона.

3. Исследовать систему глутатиона в стенке оперативно удаленных желчных пузырей.

4. Провести анализ патогенетического и возможного диагностического значения выявленных сдвигов в обмене глутатиона.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование систем глутатиона в эритроцитах и плазме крови при различных острых и хронических вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря, дана их сравнительная характеристика и выявлено патогенетическое значение. Впервые продемонстрированы изменения в системе глутатиона при дискинезии желчного пузыря, при состоянии после холецистэктомии и влияние воспаления, склероза и метаплазии на систему глутатиона в стенке желчных пузырей, удаленных у больных с хроническим калькулезным холециститом. При хроническом некалькулезном холецистите и состоянии после холецистэктомии показано благоприятное влияние терапии на часть показателей системы глутатиона. Впервые при всех изученных заболеваниях проведен корреляционный анализ взаимосвязей, показавший независимость систем глутатиона в эритроцитах и плазме крови.

Внедрение результатов. По полученным результатам оформлены 3 рационализаторских предложения, где сдвиги в системе глутатиона апробированы как дополнение к комплексной диагностике. Материалы диссертации используются при чтении лекций по курсу «биохимия» для студентов ИГМУ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Леонова, Зоя Алексеевна

6. ВЫВОДЫ

1. При всех вирусных гепатитах независимо от этиологии и течения заболевания в эритроцитах происходит увеличение активности глутатионпе-роксидазы, глутатионредуктазы и снижение концентрации восстановленного глутатиона, а в плазме крови - возрастание активностей глутатионтрансферазы, глутатионпероксидазы и гамма-глутамилтрансферазы. При острых, но не хронических вирусных гепатитах в плазме увеличивается активность глутатионредуктазы и концентрация глутатиона, намного резче возрастает активность глутатионтрансферазы. При хроническом вирусном гепатите С повышается активность глутатионтрансферазы эритроцитов.

3. При заболеваниях желчного пузыря в эритроцитах увеличивается активность глутатионредуктазы и понижается активность глутатионтрансферазы, в плазме возрастают концентрация глутатиона и активности глутатионтрансферазы и гамма-глутамилтрансферазы. Глутатионпероксидаза плазмы увеличивается при трех заболеваниях (хроническом некалькулезном холецистите, хроническом калькулезном холецистите и дискинезии желчного пузыря), но не у больных хроническим калькулезным холециститом после холецистэктомии. Эти изменения отличаются от сдвигов при вирусных гепатитах.

5. У больных хроническим некалькулезным холециститом и с состоянием после холецистэктомиии противовоспалительное лечение с добавлением урсодезоксихолевой кислоты, а после холецистэктомии - и S-аденозилметионина вызывает повышение активности глутатионпероксидазы и нормализацию активности глутатионтрансферазы в эритроцитах, нормализацию концентрации восстановленного глутатиона в плазме.

6. В стенке оперативно удаленных желчных пузырей при хроническом калькулезном холецистите концентрация глутатиона близка к таковой в эритроцитах, а активность ферментов метаболизма глутатиона на 0,5-2 порядка выше, чем в эритроцитах. Обострение воспаления понижает, а метаплазия повышает концентрацию глутатиона в слизистой оболочке, воспаление и усиление склероза снижают активность глутатионтрансферазы в серозной оболочке. Все три нарушения снижают глутатионпероксидазу в обеих оболочках пузыря.

4.2.6. Заключение

В результате комплексного исследования системы глутатиона в крови при всех четырех заболеваниях ЖП по сравнению с группой контроля выявлено снижение активности ГТ и повышение активности ГР в эритроцитах, а также повышение концентрации GSH и активностей ГТ, ГТТ в плазме. У больных ХНХ, ХКХ и ДЖП, но не у больных с состоянием ПХЭ в плазме повышалась и активность ГПО; в эритроцитах активность ГПО не менялась ни в одной клинической группе. Активность ГТТ при хронических заболеваниях ЖП была чаще ниже, чем при ВГ. Например, всегда наблюдались значимые отличия по данному показателю между ВГ С и заболеваниями ЖП. После лечения больных ХНХ и больных с состоянием ПХЭ противовоспалительными препаратами с добавлением урсодезоксихолевой кислотой, а при состоянии ПХЭ и S-аденозилметионина в норму пришли два показателя - активность ГТ эритроцитов и концентрация GSH плазмы, повысилась активность ГПО эритроцитов.

Таким образом, большинство сдвигов в крови при всех изученных заболеваниях ЖП подобны, за исключением активности ГПО плазмы, которая не менялась у больных с состоянием ПХЭ и увеличивалась при остальных заболеваниях. ХНХ и ХКХ отличались по активностям ГТ и ГР эритроцитов (р<0,05): активность ГТ была ниже при ХКХ, активность ГР - при ХНХ. Больные ХНХ и с состоянием ПХЭ отличались по активности ГР эритроцитов (при ХНХ активность фермента была ниже). Наличие подобных сдвигов свидетельствует о наличии общих механизмов в патогенезе этих заболеваний. Прямая связь между некалькулезным и калькулезным холециститами является достаточно доказанной [Галкин В.А. и соавт., 2003]. Дискинезии могут возникать не только как самостоятельные заболевания, но и являться дополнительным и/или промежуточным звеном, связуюшим некалькулезный и калькулезный холециститы [Шерлок Ш., Дули Дж., 1999]. Симптомы состояния ПХЭ наблюдаются у 20-40% больных ХКХ, перенесших холецистэк-томию, но причины их появления недостаточно изучены.

В желчных пузырях усиление воспаления снижает концентрацию GSH в слизистой и активность ГПО в обеих оболочках пузыря. Увеличение концентрации GSH в слизистой сочетается с метаплазией по желудочному типу. Склероз и метаплазия также снижают активность ГПО в обеих оболочках пузыря.

Повышение активности ГР эритроцитов, вероятно, результат ее активации и/или индукции в эритроцитах и их предшественниках. Увеличение концентрации GSH и активности ферментов его метаболизма в плазме — следствие их выхода из гепатоцитов, холангиоцитов, клеток эпителия внут-рипеченочных протоков и других клеток в результате увеличения проницаемости или цитолиза. Снижение концентрации GSH плазмы после лечения происходит, очевидно, из-за стабилизации мембран при действии на них ге-патопротекторов, и вероятно, в результате снижения концентрации GSH в гепатоцитах при устранении в них задержки в них желчи, и следовательно, задержки GSH.

Корреляции между показателями системы глутатиона при хронических заболеваниях ЖП оказались редки (5 пар из 69). Эти корреляции, вероятно, являются следствием влияния одних и тех же факторов (фактора) на ферменты в эритроцитах или в печени.

Таким образом, при исследовании системы глутатиона у больных с заболеваниями ЖП установлены следующие общие сдвиги: в эритроцитах увеличивается активность ГР и понижается активность ГТ, в плазме увеличиваются концентрация GSH, активности ГТ и ГГТ. Ни при одном заболевании не изменялись концентрация GSH и активности ГПО в эритроцитах и ГР в плазме, а ГПО в плазме - у больных с состоянием ПХЭ. После лечения больных ХНХ и с состоянием ПХЭ противовоспалительными препаратами в сочетании с урсодезоксихолевой кислотой (с состоянием ПХЭ, также S-аденозилметионином) активности ГТ и ГПО эритроцитов повышаются, а концентрация GSH плазмы снижается до нормы. В обеих оболочках желчного пузыря при обострении воспалительного процесса снижается активность ГПО, в слизистой - концентрация GSH, в серозной - активность ГТ. Сильный склероз вызывает снижение активностей ГТ в серозной оболочке и ГПО в обеих оболочках. При желудочной (но не кишечной) метаплазии слизистой в ней увеличивалась концентрация GSH, в обеих оболочках снижается активность ГТ и ГПО.

5. ОБЩЕЕ ОБСУЖДЕНИЕ

В работе изложены результаты исследования системы глутатиона в крови у больных 9 клинических групп: 5 ВГ (ВГ А, ОВГ В, ХВГ В, ОВГ С, ХВГ С) и 4 заболеваний ЖП (ХНХ, ХКХ, ДЖП, ПХЭ). У всех больных ВГ был выраженный цитолитический синдром, патология со стороны ЖП отсутствовала. Из группы пациентов с заболеваниями ЖП исключали больных ВГ. Дана характеристика сдвигов в системе глутатиона для каждой клинической группы и все они сравнены с группой контроля (здоровые добровольцы) и между собой. При ОВГ В изучено влияние на систему глутатиона тяжести заболевания. Объединенные группы (острые гепатиты В и С и гепатит А, хронические гепатиты В и С) сравнивали с группой контроля и между собой. Все группы гепатитов, в том числе и объединенные, сравнивали с объединенной группой заболеваний ЖП. У части больных ХНХ и с состоянием ПХЭ кровь исследовали после лечения противовоспалительными препаратами и урсодезоксихолевой кислотой (лекарство Урсосан), для лечения больных с состоянием ПХЭ - дополнительно применяли S-аденозилметионин (лекарство Гептрал). Изучена зависимость системы глутатиона в слизистой и серозной оболочках желчного пузыря от обострения воспалительного процесса, выраженности склероза и наличия или отсутствия метаплазии.

Показатели системы глутатиона - концентрация GSH, активности ГТ, ГПО и ГР были исследованы отдельно в эритроцитах и плазме. В плазме определяли и активность ГГТ. В желчных пузырях концентрация GSH, активности ГТ, ГПО и ГР были исследованы отдельно в слизистой и серозной оболочках.

При различных заболеваниях печени развиваются закономерные изменения обмена глутатиона в эритроцитах и плазме крови. Наиболее общие из них, характерные для всех 9 изученных заболеваний, а также для объединенных групп ВГ и заболеваний ЖП - это увеличение активности ГР эритроцитов, активностей ГТ и ГГТ плазмы, а при 8 заболеваниях, но не при состоянии ПХЭ - и увеличение активности ГПО плазмы (рис.4, 5, 6 и 7).

Только при всех пяти вирусных гепатитах происходит снижение концентрации GSH и увеличение активности ГПО в эритроцитах, только при острых ВГ увеличиваются уровень GSH и активность ГР в плазме. Эти сдвиги естественно объяснить большей тяжестью процесса, более выраженным поражением гепатоцитов. Выявлены отличия по активности ГТ плазмы между отдельными группами ВГ: между ВГ А и ОВГ В, ОВГ В и ХВГ В, ВГ А и ОВГ С (р<0,001) (при ОВГ В и ОВГ С активность фермента была выше), а также между объединенными группами ВГ (р<0,01) (выше при острых ВГ).

Только при всех четырех хронических заболеваниях ЖП снижается активность ГТ эритроцитов, что может быть опосредовано длительным влиянием на организм застоя желчи, повышением ее литогенности. При этих же заболеваниях и ОВГ увеличивается концентрация GSH в плазме. При заболеваниях ЖП не менялись концентрация GSH и активности ГПО эритроцитов и ГР плазмы. Таким образом, большинство сдвигов в крови при всех изученных заболеваниях ЖП подобны, за исключением активности ГПО плазмы, которая не менялась у больных с состоянием ПХЭ и увеличивалась при остальных заболеваниях. ХНХ и ХКХ отличались по активностям ГТ и ГР эритроцитов (р<0,05): ГТ была ниже при ХКХ, а ГР - при ХНХ. ХНХ и состояние ПХЭ отличались по ГР эритроцитов (при ХНХ активность фермента была ниже).

Статистически значимые различия между пятью заболеваниями ВГ и четырьмя заболеваниями ЖП подтверждены при сравнении двух объединенных групп, которые значимо отличались по активностям ГТ эритроцитов, ГТ и ГГТ плазмы, только при патологии ЖП снижалась активность ГТ в эритроцитах, а при ВГ сильнее увеличены ГГТ и особенно ГТ в плазме крови (рис. 4,5,6).

Обнаружены противоположные изменения при различных заболеваниях печени - небольшая активация ГТ в эритроцитах при ХВГ С и снижение активности фермента при всех заболеваниях ЖП. Общий и неспецифичный характер многих сдвигов свидетельствует о вовлечении системы глутатиона в течение и, скорее - в ингибирование воспалительных процессов (и/или их последствия) в печени, т.к. противовоспалительные эффекты глутатиона доказаны (см. раздел 2.1.).

Общепризнано, что основной причиной выраженной гиперферменте-мии при воспалительных заболеваниях и повреждении клеток является увеличение проницаемости клеточных мембран вследствие повышения генерации АФК и окислительной модификации молекул липидов и белков. Важную роль этих процессов при вирусных инфекциях проанализировал В.П. Скулачев (1998). Это еще более выражено при цитолизе, происходящим при некрозе (но не апоптозе, при котором содержимое клеток остается внутри фрагментов мембран) [Baron V., Muriel P., 1999]. Все эти патобиохимические механизмы активированы при изученных нами заболеваниях печени, что закономерно приводит к диффузии из гепатоцитов и аккумуляции в крови ферментов — аланин- и в меньшей степени аспартатаминотрансферазы [Со-ринсон С.Р., 1998; Лобзин Ю.В. и соавт., 1999.]. Именно такие сдвиги - ги-перферментемия со стороны всех четырех энзимов метаболизма глутатиона и накопление в плазме самого трипептида обнаружены нами. Выход в плазму молекул ГР и GSH только при острых, но не хронических ВГ явно связан с тем, что при первых намного больше интенсивность воспаления и цитолиза. Изменения системы глутатиона в плазме при гепатитах, а именно, максимальная аккумуляция в плазме молекул ГТ, средняя выраженность сдвигов в активности ГПО и ГГТ и минимальное увеличение активности ГР соответствуют ряду активности этих ферментов в печени [Кулинский В.И., Колесниченко JI.C., 1990а]. Вероятно, при хронических гепатитах этим сдвигам способствует увеличение активности ГР, ГПО и ГТ в гепатоцитах при хронических заболеваниях печени, описанное А. С. Логиновым и соавторами [1997] . Наибольшая выраженность аккумуляции в плазме ГТ при острых ВГ В и С соответствует максимальному развитию при них некроза [Соринсон, 1998].

Рис. 4. Сдвиги в системе глутатиона крови при вирусных гепатитах

Обозначения: Значения всех показателей в группе контроля (здоровые добровольцы) приняты за 100% и изображены в виде радиуса окружности. Изменения у больных (выражены в % к группе контроля) нарушают симметричность диаграммы - увеличение показателей выражается в виде «лучей», выступающих за пределы окружности, снижение показателей — в виде впадин. Черные кружочки - р<0,05, пустые - р>0,05. 1-4 - эритроциты, 58 - плазма, 1,5 - GSH, 2,6 - ГТ, 3,7 - ГПО, 4,8 - ГР.

Рис. 5. Сдвиги в системе глутатиона крови при хронических заболеваниях желчного пузыря

Обозначения те же, что и на рисунке 4

Рис. 6. Изменение активности гамма-глутамилтрансферазы в плазме при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря 200

12345 6789

Обозначения: 1 - ВГ А, 2 - ОВГ В, 3 - ХВГ В, 4 - ОВГ С,

5 - ХВГ С, 6 - ХНХ, 7 - ХКХ, 8 - ДЖП, 9 - ПХЭ. Все сдвиги значимы (р < 0,05).

Рис. 7. Сдвиги в системе глутатиона крови в объединенных группах вирусных гепатитов и хронических заболеваний желчного пузыря заболевания ЖП (все 4)

Обозначения те же, что на рисунке 4.

Печеночное происхождение ГТ плазмы доказывается тем, что в плазме аккумулируется максимально содержащийся в гепатоцитах а-изофермент ГТ, a не характерный для эритроцитов я-изофермент [Mannervik В., 1997]

Увеличение в плазме крови активности мембрансвязанного фермента ГГТ можно объяснить описанной Liu R.M. et al., (1998) индукцией ГГТ в печени при окислительном стрессе и повреждением мембран. Очевидно, при изученных нами заболеваниях повреждаются не только гепатоциты, но и желчные протоки, в которых активность ГТТ намного выше. Свой вклад может вносить и умеренный внутрипеченочный холестаз. Высокие показатели ГГТ обнаружены нами при ОВГ С и В и ХВГ С - в 2,5-2,8 раза, умеренные

- при ХВГ В и гепатите А - примерно в 2 раза, значимые, но невысокие — при заболеваниях ЖП - в 1,3-1,5 раза. Активность ГГТ при хронических заболеваниях ЖП была чаще значимо ниже, чем при ВГ. Например, всегда наблюдались значимые отличия между ВГ С и всеми заболеваниями ЖП. Последнее означает, что закупорка желчных протоков отсутствовала, так как при ее наличии ГТТ увеличивается не менее чем в 10 раз [Маршалл В.Дж, 1999]. Следовательно, мнение, что аккумуляция молекул ГГТ в плазме является в основном или даже только холестатическим симптомом, явно упрощает ситуацию. Мы подтвердили как накопление ГГТ в плазме крови и при гепатитах без обструкции ЖП, что не дает возможности разграничить холеста-тический и гепатоцеллюлярный типы патологии [В.Дж. Маршалл, 1999; Цы-ганенко А.Я. и соавт., 2002], так и более высокую активность ГГТ при ВГ, чем при хронических заболеваниях ЖП [Андрейчин М.А. и соавт., 1991].

Однако изменения метаболизма глутатиона происходят не только в плазме крови. Увеличение в эритроцитах активностей ГР при всех заболеваниях и ГПО при ВГ естественно связать с активацией этих ферментов в эритроцитах или их индукцией в клетках-предшественниках (индукция в самих эритроцитах невозможна из-за отсутствия ядра и матричных синтезов), а снижение активности ГТ при заболеваниях ЖП - с ингибированием или репрессией фермента. Это может быть реакцией на окислительный стресс и на увеличение литогенности желчи. Эти ферменты функционируют как антиок-сидантные: ГПО восстанавливает все виды перекисей, ГТ - только органические, а ГР восстанавливает окисленный глутатион в GSH; кроме того, ГТ конъюгирует с GSH цитотоксичные альдегиды, включая наиболее активный

- 2-гидроксиноненаль (см. раздел 2.2). Снижение концентрации GSH в эритроцитах при ВГ скорее всего результат использования молекул GSH для обезвреживания активных форм кислорода. Очевидно, отсутствие уменьшения трипептида при заболеваниях ЖП может объясняться меньшей интенсивностью окислительного стресса и, соответственно, воспалительно-некротических явлений. Другая возможная причина снижения концентрации GSH в эритроцитах при ВГ - снижение биосинтеза GSH. Приведенная биохимическая интерпретация обнаруженных нами сдвигов, естественно, нуждается в прямой проверке.

В работе А.С. Логинова и соавторов (1997) увеличение в печени активностей ГТ, ГПО и ГР при ее хронических поражениях развивалось параллельно снижению концентрации GSH, то есть изменения уровня GSH и активности ферментов его метаболизма противоположны. Эта же закономерность, но для двух ферментов - ГПО и ГР характерна и для эритроцитов при ВГ. Это может объясняться тем, что более активные ферменты ГТ и/или ГПО расходуют молекулы GSH на обезвреживание активных форм кислорода и ксенобиотиков в большей степени, чем они успевают восстанавливаться ГР из окисленной формы глутатиона.

Сравнение групп больных ОВГ В со среднетяжелым и тяжелым течением (рис. 1) показало, что в первой из них из девяти изучаемых показателей состояния системы глутатиона крови значимо изменялись восемь (кроме активности ГТ эритроцитов), во второй - только три (концентрация GSH и активность ГПО в эритроцитах, активность ГТ в плазме). Активность ГТ плазмы больных со среднетяжелым течением была в 3,6 раза выше, чем у больных с тяжелым течением. Концентрация билирубина, напротив, была выше у больных с тяжелым течением. Менее выраженные изменения ряда показателей системы глутатиона у больных с тяжелым течением болезни - явное проявление характерной для декомпенсации печени билирубин-ферментной диссоциации (сохранение высокого уровня билирубина при снижении активности печеночных ферментов в плазме). Классическое объяснение этого феномена - уменьшение синтеза печеночных ферментов при сильном повреждении гепатоцитов [Дж.Ф. Зилва, П.Р. Пэннелл, 1988]. Для описанной нами реакции системы глутатиона при ОВГ В с тяжелым течением целесообразно использовать конкретный термин - «билирубин-глутатионовая диссоциация».

Корреляционный анализ показал, что значимые взаимосвязи различных показателей между собой редко встречаются при заболеваниях ЖП (суммарно в 5 парах из 69) и крайне редко при ВГ (всего в 2 парах из 96), что соответствует 7 и Z% сравниваемых пар. Совпадение коррелирующих показателей при разных заболеваниях встретилось только в 1 случае (концентрация GSH и активность ГТ эритроцитов у больных ХНХ и с состоянием ПХЭ). При объединении всех четырех заболеваний ЖП значимая корреляция встречалась в 2 парах из 16, при объединении всех пяти ВГ - в 2 парах из 20. Из этих 4 корреляций совпадала только одна - ГР с ГТ плазмы. Таким образом, наличие корреляций - это исключение из правила. Столь редкие корреляции имели место как между одинаковыми показателями в эритроцитах и плазме (только в 1 случае из 36), так и между разными показателями и в эритроцитах, и в плазме. Первое вместе с различиями изменений в эритроцитах и плазме показывает, что в крови по сути функционируют не одна, а две независимые системы глутатиона - в эритроцитах и в плазме. Это аргументируется тем, что изменения в плазме отражают сдвиги не в эритроцитах, а в поврежденных клетках и органах. Из этого следует, что определение показателей обмена глутатиона в цельной крови нецелесообразно, их надо исследовать раздельно в эритроцитах и плазме. Ранее это в некоторых работах нарушалось. Редкость взаимосвязей свидетельствует об отсутствии тесных корреляций между показателями в каждой из двух систем, о возможности независимого регулирования их компонентов и, следовательно, о высокой пластичности систем глутатиона.

Больные ХНХ и с состоянием ПХЭ получили противовоспалительное лечение с добавлением урсодезоксихолевой кислоты (УДХ, лекарство Урсо-сан), а больные с состоянием ПХЭ - также и S-аденозилметионина (SAM, лекарство Гептрал). УДХ — гепатопротектор, стабилизатор мембран и активатор SAM-синтазы [Cincu R., 1997], a SAM может использоваться для синтеза GSH [Lu S.C., 1999]. Под влиянием лечения при обоих заболеваниях произошли нормализация активности ГТ эритроцитов и концентрации GSH плазмы и значительное увеличение активности ГПО эритроцитов (рис.8). Увеличение в эритроцитах активности важных антиоксидантных ферментов ГТ и ГПО и сохранение повышенной активности ГР способствуют защите от окислительного стресса. Нормализация в плазме крови уровня GSH может говорить о снижении или устранении цитолиза воспаленных клеток в результате лечения, а увеличение активности ГТ в эритроцитах и ГГТ в плазме (при ХНХ — и ГПО) — об активации ферментов лекарствами.

В оперативно удаленных желчных пузырях больных ХКХ при гистологически установленной ремиссии концентрация GSH и активность ГТ в серозной оболочке были примерно в 2 раза ниже, чем в слизистой, а ГПО и ГР не отличались. Концентрация GSH в стенке желчного пузыря близка к таковой в эритроцитах, но активность трех ферментов метаболизма глутатиона ГТ, ГПО и ГР была на 0,5-2 порядка выше, чем в эритроцитах. При гистологически подтвержденном обострении воспаления концентрация GSH выражено снижалась в слизистой, резко уменьшались активности ГТ в серозной оболочке и ГПО в обеих оболочках (рис.9). Сильный склероз вызывал снижение активности ГТ в серозной оболочке и ГПО в обеих оболочках. При желудочной (но не кишечной) метаплазии слизистой в ней увеличивалась концентрация GSH, в обеих оболочках снижалась активность ГТ и ГПО. Выраженное влияние воспаления, усиления склероза и желудочной метаплазии клеток свидетельствует об участии системы глутатиона в патогенезе ХКХ и, очевидно, других заболеваний желчного пузыря. Эти результаты дополняют и расширяют данные Geetha А. (2002), прежде всего наличием гистологического контроля по сдвигам компонентов системы глутатиона в стенке желчных пузырей под влиянием воспаления, склероза и метаплазии.

Рис. 8. Влияние лечения на систему глутатиона крови при хроническом некалькулезном холецистите и состоянии после холецистэктомии

ХНХ

3 X

ПХЭ

3 х

Обозначения те же, что на рисунке 1 и х - значимые изменения ноказателя после лечения (р < 0,05); рисунок слева - до, справа - после лечения.

Таким образом, при различных заболеваниях печени и ЖП развиваются закономерные сдвиги, показывающие значение системы глутатиона в патогенезе этих болезней и углубляющих понимание происходящих процессов. Однотипность некоторых изменений при разных печеночных заболеваниях показывает наличие в их патогенезе общих механизмов, скорее всего связанных с защитными реакциями на окислительный стресс, воспалительные процессы и цитолиз.

Рис. 9. Сдвиги в системе глутатиона в оболочках желчного пузыря при обострении воспаления

Слизистая оболочка

GSH

ГПО

Серозная оболочка

GSH

ГПО

Обозначения приведены на рис. 4, но за 100% приняты значения всех показателей при ремиссии.

Мы выявили различия в изменениях обмена глутатиона, которые представляют интерес для диагностики. В эритроцитах это снижение концентрации GSH и увеличение активности ГПО только при ВГ; снижение активности ГТ в эритроцитах только при заболеваниях ЖП; увеличение в плазме крови концентрации GSH и активности ГР только при острых, но не хронических гепатитах; большая выраженность сдвигов в системе глутатиона при среднетяжелом течении ОВГ В по сравнению с тяжелым. Эти данные могут быть использованы как дополнение к комплексной диагностике заболеваний печени и ЖП и, возможно, при оценке тяжести ОВГ. Увеличение в плазме крови активности ГТ не специфично для определенного заболевания печени, но зато высоко чувствительно и связано с тяжестью заболевания. Ряд авторов рекомендовал использование а-ГТ в диагностике (см. раздел 2.7). Мы показали, что информативно определение и суммарной активности ГТ, которое технически намного проще, доступнее и дешевле. Обнаруженные нами изменения обмена глутатиона в эритроцитах и плазме расширяют представления о патогенезе изученных заболеваний и могут быть использованы в их комплексной диагностике.

Результаты комплексного исследования системы глутатиона при девяти изученных заболеваниях гепатобилиарной системы представлены в таблице 17. Ее сравнение с таблицей 1 в обзоре литературы показывает полноту и комплексность проведенных нами исследований. Она содержит важный материал для исследователей в этой области.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Леонова, Зоя Алексеевна, Новосибирск

1. Абакумов Г.З. Роль липидной пероксидации в патогенезе вирусных гепатитов / Абакумов Г.З., Новицкий Г.К., Легонькова Л.Ф. // Вопр.мед.химии. 1988. - Т.34. - № 6. - С. 30-32.

2. Андрейчин М.А. Диагностическое значение определения активности ГГТП и ЩФ в сыворотке крови и желчи при вирусном гепатите В и воспалении желчных путей / Андрейчин М.А., Погорила М.А., Васильева

3. H.А., Шенкман Б.З. // Вопр. мед. химии. 1991. - № 1. С.33-35.

4. Аксенова Э.М., Вахрушев Л.М. О патогенезе нарушений функций печени после холецистэктомии при ЖКБ // Тер.архив 1998. - № 2. - С.48-52.

5. Березов Т.Т., Чернов Н.Н. Регуляция активности и синтеза гамма-глутамилтрансферазы тканей животных // Вестник АМН СССР 1986. — № 8. - С.68-76.

6. Болдырев А.А. Роль активных форм кислорода в жизнедеятельности нейрона // Успехи физиол. Наук. 2003. - №3. - С.21-34.

7. Блюгер А.Ф., Крупникова Э.З. Функциональная характеристика эритроцитов при острых и хронических поражениях печени // Успехи гепато-логии. Рига. - 1984. - С.53-66.

8. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии // Биохимия. 2004. - Т.69. - вып.1.-С.5-7.

9. Воевидка О.С. Особенности липопероксидных процессов у больных хроническим холециститом // Российский ж. гастроэнтерологии, гепато-логии, колопроктологии. 1997. - № 5. - С. 170.

10. Върбанов Г. Изменение активности гамма-глутатионтрансферазы при заболеваниях печени и желчевыводящих путей / Върбанов Г., Михова В., Ганчева Д., Атанасова А. // Тер.архив 1993. - № 2. - С.82-85.

11. Галкин В.А. Современные представления о патогенезе холелитиаза как основа принципов профилактики билиарной патологии // Тер. архив -2003. -№ 1.-С.6-9.

12. Гланц С. Медико-биологическая статистика / Пер.с англ. Ю.А. Дамило-ва,. Под ред. Н.Е. Бузикашвили, Д.В. Самойлова. М.: Практика. 1999. -459 с.

13. Давыдов В.В., Божков А.И. Метаболизм эндогенных альдегидов: участие в реализации повреждающего действия оксидативного стресса и его возрастные аспекты // Биомед.химия. 2003. - Т 49. - № 4. - С.374-387.

14. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса // Вопр. мед. химии.-2001.- Т.47. -№ 6. С.561-581.

15. Закс JI. Статистика оценивания / М.: Статистика. — 1976. 600 с.

16. Зилва Дж. Ф., Пэннелл П.Р. Клиническая химия в диагностике и лечении / М.: Медицина. 1988. - 528 с.

17. Иванов В.Г. Роль тиоловых соединений в патогенезе клещевого энцефалита / Иванов В.Г., Иванов Г.Г., Барсуков А.Н., Гаврилов А.А. // Тезисы науч.конф. «Современные технологии динамики и терапии инфекционных болезней» С-Пб. - 1999. - С. 154-155.

18. Иванов Д.И. Баланс системы « Пол-АРЗ, АОЗ» у больных хроническим некалькулезным холециститом / Иванов Д.И., Костенко М.Б., Ливзан М.А., Калинина Е.В. // Российский ж. гастроэнтнерологии, гепатологии, колопроктологии. 1996. - № 4. - С.220.

19. Ивашкина Н.Ю., Шульпекова Ю.О. Все ли мы знаем о лечебных возможностях антиоксидантов // Рус.мед.ж. 2000. - Т. 8. - № 4. - С. 182184.

20. Клиническая биохимия: Под ред. ТкачукаВ.А.-М.: 2004.-С. 361-371.

21. Кожевникова Г.М. Клинико-лабораторная характеристика острого вирусного гепатита С у потребителей парентеральных наркотических веществ / Кожевникова Г.М., Рослый И.М., Чуйкова К.И., Бобкова М.Р. // Тер. архив.- 1999а.- № 11.-С. 10-14.

22. Кожевникова Г.М. Клинические проявления острого вирусного гепатита В у потребителей наркотических препаратов / Кожевникова Г.М., Али-кеева И.М., Рослый И.М., Ющук Н.Д. // Ж. инф. патол. Иркутск. -19996. - Т.6. - № 4. - С.21 -26.

23. Колесниченко Л.С. Изменения активности ферментов метаболизма глутатиона при иммобилизационном стрессе и их возможное значение /

24. Колесниченко Л.С., Манторова JI.A., Шапиро Л.А., Кулинский В .А.// Ж. пат.физиол. и эксп. тер. 1990. - № 4. - С.9-11.

25. Колесниченко JI.C., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы // Успехи соврем, биологии. 1989.-Т. 107.-вып. 2. - С.179-194.

26. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Система глутатиона эритроцитов и плазмы в патологии // 3 съезд биохим. Общества. Тезисы. — С-Пб. — 2002.-С.178.

27. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Сорос.образоват.журн. Т. 1999.-№ 1.-С.2-7.

28. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Обмен глутатиона // Успехи биологической химии. 1990а. - Т.31. - С. 157-179.

29. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи соврем, биологии. 19906. - Т.110. -№ 1(4). - С. 20-33.

30. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы // Успехи соврем, биологии. — 1993. Т. 113. - вып. 1. - С. 107-122.

31. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Молекулярые механизмы действия гормонов. Рецепторы. Нейромедиаторы. Системы со вторыми посредниками // Биохимия. 2005 - Т.70. - № 1. - С.33-50.

32. Лобзин Ю.В. Вирусные гепатиты / Лобзин Ю.В., Жданов К.В., Волжанин В.М. С-Пб. - 1999 - 105 с.

33. Логинов А.С. Новый подход к диагностике холестаза по активности медьсодержащих ферментов / Логинов А.С., Матюшин Б.Н., Ткачев В.Д., Якимчук Т.Н. // Тер. архив 1993. - № 2. - С.85-89.

34. Логинов А.С. Клиническое значение системы глутатиона печени при её хронических поражениях /Логинов А.С., Матюшин Б.Н., Ткачев В.Д. //

35. Тер. архив 1997. - № 2. - С. 25-27.

36. Лузина Е.В. Возможные механизмы развития заболеваний желчевыво-дящих путей в условиях Забайкалья / Лузина Е.В., Иванов В.Н., Пархоменко Ю.В. // Клин, медицина 2000 - Т.78 - № 4 - С.34-36.

37. Мартынов В.А., Колобаев В.И. Активность лактатдегидрогеназы, глю-козо-6-фосфатдегидрогеназы, глутатионредуктазы и аденозинтрифосфатазы в эритроцитах больных острыми вирусными гепатитами // Те-рап.архив 1987 - Т.59 - № 2 - С.94-97

38. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия (пер. с англ.) // Bionom, М., Невский диалект, С-Пб. 1999. - С. 265-266.

39. Масевич Ц.Г., Ермолаева Л.Г. Показатели активности процесса при хроническом гепатите // Тер.архив 2000. - № 2. - С. 17-18.

40. Масевич Ц.Г. Ермолаева Л.Г. Клинические биохимические и морфологические особенности хронических гепатитов различной этиологии // Тер. архив-2002.-№2.-С. 35-37.

41. Масюк А.И. Молекулярная физиология образования желчи // Вестник РАМН- 1996.-№ 1.-С. 17-21.

42. Никитин Е.В., Пак С.Г. Функциональная система глутатиона у пациентов с ОВГ В / Тер.архив 1990 - Т.62 - № 2 - С.76-79.

43. Помелов B.C. Динамика уровня глутатиона и активности ферментов обмена глутатиона в эритроцитах больных острым холециститом / Помелов B.C., Жумадилов Ж.Ш., Короткина Р.Н., Карелин А.А. // Сов. мед. — 1991.-№8.-С. 27-30.

44. Сафонов А.Д. Коррекция рибоксином нарушений процессов перекисно-го окисления липидов и системы антипероксидной защиты у больных вирусными гепатитами // Журн.инфекц.патологии. — Иркутск — 1998 — №2-3-С. 41-44.

45. Сафонов А.Д., Конвай В.Д. Сопряженность процессов перекисного окисления липидов, реакций пентозного цикла и острого нарушения метаболизма пуринов в патогенезе острых вирусных гепатитов // Ж. ин-фекц. патол. Иркутск - 1999. - Т. 6. - № 4. - С. 32-35.

46. Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций // Биохимия. 1998. - Т.63. - Вып. 12. - С. 16911694.

47. Соринсон С.Р. Вирусные гепатиты // С. Пб. Теза - 1998. - 331 с.

48. Ставровская А.В. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Биохимия. — 2000. — Т.65. — №1. — С. 112-126.

49. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов // Биохимия 2002. - Т. 67. - Вып 3. - С.339-352.

50. Цыганенко А .Я. Клиническая биохимия / Цыганенко А .Я., Жуков В.И., Мясоедов В.В., Завгородний И.В. // М. Триада-Х. - 2002. - 498с.

51. Чернов Н.Н. у-Глутамилтрансфераза фермент, расщепляющий глутатион // Успехи биол. химии. 1998. - Т.38. - С. 225-237.

52. Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей // ГЭОТАР Медицина - 1999. - 859 с.

53. Шифрин М.А. Изменения активности глютатионпероксидазы и глюта-тионредуктазы в крови при неспецифических заболеваниях легких / Шифрин М.А., Заикин В.Н., Гармаш В.А. //Тер.архив. 1977. - № 12. -С. 50-55.

54. Шувалова Е.П. Значение систем антиоксидантной защиты крови в адаптации к инфекционному процессу при вирусном гепатите В / Шувалова Е.П., Антонова Т.В., Барановская В.Б. // Тер.архив. — 1991. — №11.— С. 47-49.

55. Энциклопедия клинических тестов под ред. Тица Н. Лабинформ. - М., 1997,-942 с.

56. Ющук Н.Д., Климова Е.А. Острые вирусные гепатиты // Рус. Мед. Ж. -2000.-Т.8.-№ 17.-С. 672-679.

57. Adachi I., Horii К. Serum glutathione S-transferase activity in liver dis-ases//Clin.Chim.Acta. 1980. - Vol.106. - P. 243-255.

58. Alaoui Y.A. Etude de plusierus biomarquers du stress oxidatif chez des liqui-dateurs de Tchernobyl /Alaoui Y.A., Zubina A., Katashkova G., Nikiforov N., Emerit I. // C.r. seances Soc. biol. 1998. - Vol.192. - № 6. - P.l 199.

59. Anderson M.E. Enzymatic and chemical methods for the determination of glutathione // Glutathione. 1989. - P. 339-365.

60. Armstrong R.N. Structure, Catalytic Mechanism and Evolution of the glutathione Trasferases // Chem.Res.Toxicol. 1997, Vol.10, № 1. P. 2-18.

61. Ballatori N., Truong A.T. Glutathione as a primary osmotic driving force in hepatic bile formation // Am. J. Physiology. 1992. Vol.263. - № 5. - P. 617-624.

62. Bao Y., Williamson G. Selenium dependent glutathione peroxidases. A highlight of the role of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase in protection against oxidative damage // Progr. Nat. Sci. - 2000. - Vol.10.1. P. 321-330.

63. Baron V., Muriel P. Role of glutathione lipid peroxidation and antioxidants on acute bile-duct obstruction in the rat // Biochim. Biophys. Acta. 1999. — V.1-2.-P. 173-180.

64. Beck M.A. Glutathione peroxidase protects mice from viralinduced myocarditis / Beck M.A., Esworthy R.S., Ho Y. 8., Chu F.-F. // FASEB. J. -1998.- 12.-№ 12.-P. 1143-1149.

65. Beck M.A. Selenium deficiency and viral infection / Beck M.A., Levander O.A., Handy J. // J. Nutr. 2003. - V. 1. - № 133.-P. 1463-1467.

66. Behne D., Kyriakopoulos A. Mammalian selenium-containing proteins // Annu Rev. Nutr. 2001. - № 21. - P.453-73.

67. Bounous G. Whey protein concentrate (WPC) and glutathione modulation in cancer treatment // Anticancer Res. 2000. - V.6C. -№ 20. - P.4785-4792.

68. Brigelius-Floke R. Tissue — specific functions of individual glutathione peroxidases / Free. Radic. Med. 1999. - V.27. -№ 9-10. -P.951-965.

69. Brown K.M., Arthur J.R. Selenium, selenoproteins and human health: a revive // Public Heallth. Nutr. 2001. - V.2B. - № 4. - P. 593-599.

70. Choi J. Reactive oxygen species suppress hepatitis С virus RNA replication in human hepatoma cells / Choi J., Lee K.J., Zheng Y., Yamaga A.K., Lai M.M., Ou J.H. // J. Hepatology. 2004. - Vol.1. - № 39. — P. 81-89.

71. Chrobot A.M. Antioxidant defense in children with chronic viral hepatitis В and С / Chrobot A.M., Szaflarska Szczepanik A., Drewa G. // Med.Sci.Monit. - 2000. - Vol.6. - № 4. - P. 713-718.

72. Chu F.F. Role of Se-dependent glutathione peroxidases in gastrointestinal inflammation and cancer / Chu F.F., Esworthy R.S., Doroshow J.H. .// Free. Radic. Biol. Med. 2004. - V.12. - № 36. - P. 1481-1495.

73. Chung K.C. Novel biphasic effect of pyrrolidine dithiocarbamate on neuronal cell viability is mediated by the differential regulation of intracellular zinc and copper ion levels, NF-kappaB, and MAP kinases / Chung K.C., Park J.H.,

74. Kim C.H., Lee H.W., Sato N., Uchiyama Y., Ahn Y.S. // J. Neurosci Res. -2000.- V.l. -№ 59. P.l 17-125.

75. Cincu R. Influence of bile salts on hepatic glutathione metabolism: a mechanism for the hepatoprotective effect of ursodeoxycholic acid / Cincu R., Rod-rigues Ortigosa C.M., Ouiroga J., Prieto J. // J. Hepatology. - 1997. -Vol.26.-№ 1.-P.9-12.

76. Cordero R. Hepatic and erythrocytic glutathione peroxidase activiti in liver diseases / Cordero R., Ortiz A., Hernandez R., Lopez V., Gomez M.M., Mena P. // Rev. Esp. Fisiol. 1996. - Vol.52. - № 3. - P. 167-172.

77. Czuczejko J. Selenium, glutathione and glutathione peroxidases in blood of patients with chronic liver diseases / Czuezejko J., Zachara B.A., Staubach-Topczewska E., Halota W., Kedziora J. // Acta.Biochim.Pob. 2003. - V.50. -P.l 147-1154.

78. Daniel D.S. Human erythrocyte gamma-glutamyltrasferase in liver diseases / Daniel D.S., Ramakrishna B.S., Balasubramanian K.A. // Clin.Chim. Acta. -1987. V.3. - № 162. - P.319-327.

79. Demirdag K. Levels of plasma malondialdehyde and erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients with chronic hepatitis В / Demirdag K., Yilmaz

80. S., Ozdarendeli A., Ozden M., Kalkan A., Kilic S.S. // Hepatogastroenterol-ogy. 2003. - V.51. - № 50. - P.766-770.

81. Diamond A.M. Glutathione peroxidase and viral replication : implication for viral evolution and chemoprevention / Diamond A.M., Hu Y.J., Mansur D.B.// Biofactors. 2001. - V.l-4. - № 14. - P. 205-210.

82. Dickinson D.A., Forman H.J. Cellular glutathione and thiols metabolism // Biochem. Pharmacol. 2002. - V.5-6. - № 64. - P. 1019-1026.

83. Droge W., Breitkreutz R. N-acetyl-cystein in the therapy of HIV-positive patients // Curr.Opin.Clin.Nutr.Metab Care. 1999. - V.6. - № 2. - P/493-498.

84. Elton R.C., Garie M.J. Glutathione depletion in a liver microsomal assay as an in vitro biomarker for reactive metabolite formation // Biomarkers. 2000. — V.5. - № 4. - P.285-294.

85. Farinati F. Zinc treatment prevents lipid peroxidation and increases glutathione availability in Wilson's disease / Farinati F., Cardin R., D inca R.,Naccarato R., Sturniolo GC. // J. Lab. Clin. Med. 2003. - V.6. - P. 372377.

86. Fernandez Checa J.C. Mitochondrial glutathione: importance and transport / Fernandez - Checa J.C., Kaplowitz N., Garcia-Ruiz C., Colell A. // Semin. Liver. Dis. - 1998. - V.18. -№ 4. - P.389-401.

87. Giblin F.J. Glutathione: a vital lens antioxidant // 2000. V.16. - № 2. -P.121-135.

88. Geetha A. Evidence for oxidative stress in the gall bladder mucosa of gall stone patients / J. Biochem.Mol.Biol.Biophys. 2002. - V.6. - № 6. - P.427-432.

89. Gregus Z. Effect of lipoic acid on biliary excretion of glutathione and metals / Gregus Z., Stein A.F., Varga F., Klaassen C.D. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1992. -V. 114. -№ l.-P. 88-96.

90. Griffith O.W. Biologic and pharmacologic regulation of mammalian glutathione synthesis // Free.Radic.Biol.Med. 1999. - V.27. - № 9-10. - P.922-935.

91. Gumpricht E. Glutathione status of isolated rat hepatocytes affects bile acid-induced cellular necrosis but not apoptosis / Gumpricht E., Devereaux M.N., Dahl R.H., Sokol R J. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2000. - V.l, № 7. -P.23-28.

92. Habig W.H. Glutathione S-transferases. The first enzymatic step in mercap-turic acid formation Glutathione S-transferases / Habig W.H., Pobst M.J., Ja-koby W.B. // J. Biol. Chem. 1974. - V.249. - № 22. - P. 7130-7139.

93. Hadi Yasa M. Antioxidant status of erythrocytes from patients with cirrhosis / Hadi Yasa M., Kacmaz M., Ser de Ozturk H., Durah I. // Hepatogastroen-terology. 1999. - V.46. -№ 28. -P.2460-2463.

94. Hagymasi K., Blazovics A. Antioxidants in liver protection. // Orv. Hetil. -2004. V.27. - № 45. - P. 1421-1425.

95. Harding C.O. Mice with genetic y-glutamyl transpeptidase deficiency exhibit glutathionuric, sever growth failure reduced life spane and infertility / Wolff J.A. // J. Biol. Chem. 1997. - V.272. - № 19. P.12560-12567.

96. Hassan A.M. Glutathione peroxidase activity in blood cells from aspirine-induced asthma patients // Ann. Clin. Biochem. 2003. - V.4. - № 40. -P.369-373.

97. Hayes J.D. Glutathione transferases / Hayes J.D., Flanagan J.U., Jowsey I.R.//Annu.Rev.Pharmacol. Toxicol. 2005. - Vol.45. -P.51-88.

98. Hayes P.C. Cytosolic and microsomal glutathiones-transferase isoenzymes in normal human liver and intestinal epithelium / Hayes P.C., Harrison D.J., Bouchier L.A., Mc Lellan L.I., Hayes J.D. // Gut. 1989. - V.30. - № 6. - P. 854-859.

99. Henrion-Caude A. Liver disease in pediatric patients with cystic fibrosis is associated with glutathione S-transferase PI polymorphism / Henrion-Caude

100. A., Flamant C., Roussey M., Housset C., Flahault A., Fryer A.A., Chadelat K., Strange R.S., Clement A. // Hepatology. 2002. - V.4. - № 36. - P.913-917.

101. Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress // Biochem. Pharmacol. 2003. - V.8. - № 66. -P.1527-1535.

102. Hirota M. Dinamic aspects of glutathione metabolism in obstructive jaundice / Hirota M., Sugi K., Inoue M. // J. Gastroenterol. 1994. - V.5. - № 29. -P.588-592.

103. Huang Y.T. Oxidative-stress-related changes in the liver of bile-duct-ligated rats / Huang Y.T., Hsu Y.C., Chen C.J., Liu C.T., Wei Y.H.// J.Biomed. Sci. -2003.- V.2. № 10. -P.170-178.

104. Huseby N. Evaluation of two biological markers combined as a parameter of alcohol dependency / Huseby N., Nilssen O., Kanitz R. // Alcohol and Alcohol. 1997. - V.32. - № 6. - P.731-737.

105. Imai H., Nakagawa Y. Biological significance of phospholipids hydroperoxide glutathione peroxidase.// Free. Radic. Biol. Med. 2003. - V.34. - № 2. -P.145-169.

106. Irshad M., Chaudhuri P.S. Oxidant-antioxidant system: role and significance in human body. // Indian. J.Exp. Biol. 2002. - V.ll. - № 40. - P.1233-1239.

107. Jacobson M.D. Reactive oxygen species and programmed cell death // Elsevier Science. L td. V.21. - № 3. - 1996. - P.83-86.

108. Jain S.K., Ma V.R. Glutathione and glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency can increase protein glycosylation // Free Radic. Biol and Med.1998. V.24. -№ 1.-P. 197-201.

109. Jain S.K. Oxidative stress in chronic hepatitis C: not just a feature of late stage disease / Jain S.K., Pemberton P.W.,Smith A., Mc Mahon R.F., Bur-rowa P.C., Aboutuerat A., Warnes T.W. // J.Hepatol. 2002. -V.36. - № 6. -P. 805-811.

110. Jefferies H. Glutathione / Jefferies H.} Coster J., Khalil A.,Bot J., McCauley R.D., Hall J.C. // ANZ. J. Surg. 2003. - V.7. - № 73. - P.517-522.

111. Kidd P. Thl/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implication for health and disease // Altern. Med. Rev. 2003. - V.3. - № 8. - P.223-246.

112. Killoran P.L., Walleczek J. Inhibition of store-operated calcium entry in human lymphocytes by radiation: Protection by glutathione // Radiat. Res.1999.-V. 152. -№ 6. P.611-621.

113. Kim S.H. Selenium attenuates lipopolysaccharide-induced oxidative stress responses through modulation of p38 МАРК and NF-kappa В signaling pathways / Kim S.H., Johnson V.J., Shin T.Y., Sharma R.P. // Exp. Biol. Med. -2004. V.2. - № 229. - P.203-313.

114. Kiso S. Efficacy of ursodeoxycholic acid therapy inchronic viral hepatitis С with high serum gamma-glutamyltranspeptidase levels / Kiso S., Kowata S., Imai Y., Tamura S., Inui Y., Ito N., Matsuzawa Y. // J. Gastroenterol. 1996. - V.31. -№ 1. -P.75-80.

115. Kleinman W.A., Richie J.P. Status of Glutathione and Other Thiols and Disulfides in Human Plasma // Biochem. Pharmacol. 2000. - V.60. - № 1. -P. 19-29.

116. Knodell R.G. / Knodell R.G., Ishak K.G., Black W.C. // Hepatology 1981. -№ 1. -P.431-435.

117. Kocsis I. Methods of monitoring oxidation-reduction balance and its potential role in diagnostics / Kocsis I., Blazovics A., Pallai Z., Feher J. // Orv. Hetil. -2004. V.14. -№ 145. -P.761-767.

118. Lam B.K. Leukotriene С (4) synthase // J. Prostaglandins Leukot Esent Fatty Acids. 2003. - V.69. - № 2-3. - P. 111-116.

119. Lee D.H. Is serum gamma glutamyltrasferase a marker of oxidative stress? / Lee D.H., Blomhoff R., Jacobs D.R Jr. // Free. Radic Res. 2004. - V.6. - № 38.- P.535-539.

120. Lei X.G. Glutathione peroxidase-1 gene knockout on body antioxidant defense in mice. // Biofactors. 2001. - V.l-4. - № 14. - P.93-99.

121. Lieber CS. S-adenosyl-L-methionine: its role in the treatment of liver disorders // Am. J. Clin. Nutr. 2002. - V.5. - № 76. - P.l 183-1187.

122. Lim J.Y. Plasma glutathione concentration in patients with chronic hepatitis С virus infection / Lim J.Y., Myers B.M., Hamilton B.A., Davis G., Lau J.Y. // J. Viral. Hepat. 1995. - V.2. - № 4. - P. 211-214.

123. Liu H. Glutathione metabolism during aging and in Alzheimer disease / Liu H., Wang H., Shenvi S., Hagen T.M., Liu R.M. // Ann. N. Y. Acad. Ski. -2004.- V.1019. P.346-349.

124. Liu R.M. Quinones increase gamma-glutamyl transpeptidase expression by multiple mechanisms in rat lung epithelial cells / Liu R.M., Shi M.M., Giulivi C., Forman H.J. // Am. J. Physiol. 1998. - V.2 Pt. - № 274. -P.330-336.

125. Ljubuncic P. Evidence of a systemic phenomenon for oxidative stress in cholestatic liver disease / Ljubuncic P., Tanna Z., Bomzon A. // Crut. 2000. — V.5.-№42.- P.710-716.

126. Loguercio C., Federico A. Oxidative stress in viral and alcoholic hepatitis // Free Radic. Biol. Med. 2003. - V.l. -№ 34. - P. 1-10.

127. Lou M.F. Redox regulation in the lens. // Prog. Retin. Eye. Res. 2003. -V.5. - № 22. - P.657-682.

128. Lowry O.H. Protein measurement with the Folin phenal reagent / Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. // J. Biol. Chem. 1951. -V.193. -№ l.-P. 265-275.

129. Lu S.C. Regulation of hepatic glutathione syntesis: currents and controversies // Faseb. J. 1999. - V. 13. - P. 1169-1181.

130. Mannervik B. Evolution of glutathione trasferases and related enzames for the protection of cells against electrophiles / Biochemical. Society. Transactions. 1997. -V. 3. - P. 2-4.

131. Massafra C. Gender — related differences in erythrocyte glutathione peroxidase activity in healthy subjects / Massafra C., Gioia D., De Felice C., Mus-cettola M., Longini M., Buonocore G. // Clin. Endocrinol. 2002. - V.57. -№5.-P.663-667.

132. Mates J.M. Nunez de Castro I. Antioxidant enzymes and human diseases / Mates J.M., Perez-Gomes C. // Clin. Biochem. 1999. - V.32. - № 8. -P.595-603.

133. May S.W. Selenium-based pharmacological agents: an update // Expert. Opin. Investig. Drugs. 2002. - V.9. - № 11. - P. 1261 -1269.

134. Meister A. Selective modification of glutathione metabolism // Science. — 1983. V.220. - № 4596. - P.472-477.

135. Meister A., Anderson M.E. Glutathione // Annual. Rev. Biochem. 1983. -V.52.-P. 711-760. *

136. Montagna G. Impairment of cellular redox status and membrane protein activities in kidneys from rats with ischemic acute renal failure / Montagna G., Hofer C.G., Torres A.M. // Biochim.tn.biophys.Acta.Mol.Disease. 1998. -V.1407. -№ 2. - P.98-108.

137. Moran L.K. Thiols in cellular redox signalling control / Moran L.K., Gut-teridge J.M., Quinlan G.J.// Curr. Med. Chem. 2001. - V.7. - № 8. - P.763-772.

138. Moslen M.T Billiary glutathione and some aminoacids are markedly diminished when biliary pressure is elevated / Moslen M.T., Kanz M.F., Bratia J., Smith C.V., Rassin D.K. // Exp. Mol. Pathol. 1994. - V.61. - № 1. - p. l-15.

139. Moummi C. Neutrophil- derived oxidants modify CCK-OP-stimulated guinea pig gallbladder contraction in vitro / Moummi C., Gullikson G.W., Grisham M.B., Caginella T.S. // Am. J. Phisiol. 1991. - V.260. - № 4. - P. 571-576.

140. Mulder T.P. Plasma glutathione S-transferase alpha 1-1 levels in patients with chronic liver disorders / Mulder T.P., Janssens A.R., de Bruin W.C.,Peters W.H., Cooreman M.P., Jansen J.B. // Clin. Chim. Acta. 1997. - V.258. - № 1. -P.69-77.

141. Myara A. Role of biology in the follow up of viral hepatitis / Myara A., Im-bert-Bismut F., Piton A., Schilliger O., Antoniotti G. // Ann. Biol. Clin. — 1998. V. 56. - № 5. p.527-537.

142. Nakamura H. Experimental and clinical aspects of oxistress and redox regulation // Rinsho. Byory. 2003. - V.51. - № 2. - P. 109-114.

143. Nelson D.R. alpha-Glutathione S-transferase as a marker of hepatocellular damage in chronic hepatitis С virus infection / Nelson D.R., Lim H.L., Oliver D., Qian K.P., Davis G.L., Lau J.Y. // Am. J. Clin. Patol. 1995. - Vol.104. -№2.-P. 193-198.

144. Neri S. Association of alpha interferon and acetyl cysteine in patients with chronic С hepatitis / Neri S., Ierna D.,Antoci S., Campanile F., Amico R.A., Noto R.//Panminerva Med. 2000. - V.42. - № 3. - P. 187-192.

145. Nuccetelli M. Shifting substrate specificity of human glutathione transferase (from class Pj to class Alpha) by a single point mutation / Nuccetelli M., Mazzetti A.P., Rossjohn J., Parker M.W., Board P., Caccuri A.M., Federici

146. G., Ricci G., Lo Bello M. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1998. -Vol.252.-№ 1. - P. 184-189.

147. Ohata M., Toda G. Gamma-glutamyltranspeptidase // Rinsho. Byori. 2001. -№ 116. -P.67-71.

148. Oja S.S. Modulation of glutamate receptor functions by glutathione / Oja S.S., Janaky R., Varga V., Saransaari P. // Neurochem. Int. 2000. - V.37. -№2-3.- P.299-306.

149. Orellana M. Bile duct ligation and oxidative stress in the rat effects in liver and kidney / Orellana M., Rodrigo R., Thielemann L., Guajardo V. // Сотр. Biochem. Physiol. Toxicol. Pharmacol. 2000. - V.126. - № 2. - P. 105-111.

150. Par A. Oxidative stress and antioxidant defense in alcoholic liver disease and chronic hepatitis С / Par A., Roth E.,Rumi G.Jr., Kovaes Z., Nemes J., Mozsik G. // Ovr. Hetil. -2000. Vol.141. -№ 30. - P. 1555-1659.

151. Pastor A. Analysis of glutathione: implication in redox and detoxification / Pastor A., Federici G., Bertini E., Piemonte F.// Clin. Chim. Acta. 2003. -V.333. -№ 1.-P.19-39.

152. Pena L.R. Treatment with glutathione precursor decreases cytokine activity /Репа L.R., Hill D.B., Mc Clain C.J. // JPEN J. Parenter. Enterol. Nutr. -1999.-V.23.- № 1.-P.1-6.

153. Perl A. Metabolic switches of T-cell activation and apoptosis / Perl A., Ger-gely P. Jr., Puskar F., Banki K. // Antioxid. Redox. Signal. 2002. - V.4. -№ 3. -P.427-443.

154. Pompella A. The changing faces of glutathione, a cellular protagonist / Pom-pella A., Visvikis a., Paolicchi A., De Tata V., Casini A.F. // Biochem Pharmacol. 2003. - V.66. - № 8. - P. 1499-503.

155. Racker E. Glutathione reductase from bakers yeast and beef liver // J. Biol. Chem. 1955. - Vol.217. - № 2. - P. 855-866.

156. Rahman I. Redox modulation of chromatin remodeling: impact on histone acetylation and deacetylation, NF-kappaB and pro-inflammatory gene expression / Rahman I., Marwick J., Kirkham P. // Biochem. Pharmacol. 2004. -V.68. -№ 6. -P.1255-1267.

157. Rana S.W. Inevitable glutathione, then and now / Rana S.W., Allen Т., Singh R. // Indian J.Exp. Biol. 2002. - V.6. - № 40. - P.706-716.

158. Richard M.J. Glutathione peroxidases: value of their determination in clinical biology / Richard M.J., Belleville F., Chalas J., Ceballos Picot I., Vitouse

159. D., Boyor M.J., Chaudiere J., Favier A. // Ann. Biol. Clin. 1997. - V.55. -№3.- P.l95-207.

160. Rinaldi R. Reactive intermediates and the dynamics of glutathione transferases / Rinaldi R, Eliasson E., Sedmark S., Morgenstern R. // Drag. Metab. Dispos. 2002. - V.10. - № 30. - P. 1053-1058.

161. Roeb E. Effect of glutathione depletion and hydrophilic bile acids on hepatic acute phase reaction in rats with extrahepatic cholestasis / Roeb E., Purucker

162. E., Gartung C., Geier A., Jansen В., Winograd R., Matern S. // Scand. J, Gastroenterol. 2003. - V.38. - № 8. - P.878-885.

163. Santangelo F. The regulation of sulphurated amino acid junction: fact or fiction in the field of inflammation // Amino Acids. 2002. - V.4. - № 23. -P.359-365.

164. Santangelo F. Intracellular thiol concentration modulating inflammatory response: influense on the regulation of cell functions through cysteine prodrug approach // J. Curr. Med. Chem. 2003. - V.23. - № 10. - P. 2599-2610.

165. Schweizer U. Selenium and brain function: a poorly recognized liaison / Schweizer U., Brauer A.U., Kohrle J., Nitsch R., Savaskan N.E. // Brain. Res. Rev. 2004. - V.45. - № 3. - P. 164-178.

166. Sheehan D. Structure, function and evolution of glutathione transferases: implication for classification of non-mammalian members of an ancient enzymesuperfamily / Sheehan D., Meade G., Foley V.M., Dowd C.A. // Biochem. J.- 2001. V.360.-№ 1.-P.1-16.

167. Stehbens W.E. Oxidative stress in viral hepatitis and AIDS // Exp. Mol. Patol.- 2004.-V.2.-JVb 77-P. 121-132.

168. Strange R.C. Glutathione S-transferase: gene ties and role in toxicology / Strange R.C., Jones P.W., Fryer A.A. // Toxicol. Lett. 2000. - V. 15. - № 3. -P. 112-113.

169. Stults F.N. Rot liver glutathione peroxidase: purification and study of multiple forms / Stults F.N., Forstrom J.W., Chiu D.T.Y. // Arch. Biochem. Bio-phys. 1977. - V. 183. - № 2. - P.490-497.

170. Svartz J. Leukotriene C4 synthase homo-oligomers detected in living cells by bioluminescence resonance energy transfer / Svartz J., Blomgran R., Ham-marstrom S., Soderstrom M. // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - V.2. - № 1633. -P.90-95.

171. Swietek K., Juszczyk J. Reduced glutathione concentration in erythrocytes of patients with acute and chronic viral hepatithis // Viral. Hepat. 1997. - V.4.- №2.-P. 139-141.

172. Takikava H. Effects of organic anions on biliary glutathione excretion in rats / Takikava H., Fujioshi M., Sano N., Yamanaka M. // Pharmacology 1996. -V.53.-№ 2.-P.l 14-122.

173. Tanyalcin T. The effects of chronic hepatitis С and В virus infections on liver reduced and oxidized glutathione concentration / Tanyalcin Т., Taskiran D., Topalak O., Batur Y., Kutay F. // Hepatol. Res. 2000. - V.18. - № 2. -P. 104-109.

174. Thorburn D. alpha-Glutathione S-transferase levels in chronic hepatitis С infection and the effect of alpha-interferon therapy / Thorburn D., Bird G.L., Spence E., MacSween R.N., Mills P.R. // Clin. Chim. Acta. 1996. - V.253. -№ 1-2. -P.171-180.

175. Tiainen P. Hepatocellular integrity in liver donors and recipients indicated by glutathione transferase alpha / Tiainen P., Hockerstedt K., Rosenberg P.H. // Transplantation 1996. - V.61. - № 6. - P.904-908.

176. Townsend D.M., Tew K.D. The role of glutathione-S-transferase in anticancer drug resistance // Oncogene 2003. - V.47. - №22. - P.7369-7375.

177. Tsuboi S. Elevation of glutathione level in rat hepatocytes by hepatocyte grouth factor via induction of y-glutamylcysteine synthetase // J. Biochem. -1999.- V.126. -№ 5. -P.815-820.

178. Van Der Jagt D.L. Inactivation of glutathione reductase by 4- hydroxynone-nal and after endogenous aldehydes / Van Der Jagt D.L., Hunsaker L.A., Vander Jagt T.J. // Biochem. Pharmacol. 1997. - V.53. - № 8. - P.1133-1140.

179. Van Haaften R.L. Effect of vitamin E on glutathione-dependent enzymes / Van Haaften R.L., Haenen G.R., Evelo C.T., Bast A.// Drug. Metab. Rev. -2003. V.2-3. - № 35. - P.215-253.

180. Vendemiale G. An update on the role of free radicals and antioxidant defense in human disease / Vendemiale G., Grattagliano I., Altomore E. // Int. J. Clin. Lab. Res. 1999. - V.29. - № 2. - P.49-55.

181. Venkatesan N. Curcumin prevents adriamycin nephrotoxicity in rats / Venkatesan N., Punithavathi D., Arumugam V. // Brit. J. Pharmacol. 2000. - V.129. -№ 2. - P. 231-234.

182. Voehringer D.W. Bcl-2 expression causes redistribution of glutathione to the nucleus / Voehringer D.W., Mc Conhey D.J., Mc Donnell T.J., Brisbay S., Meyn R.E. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1998. - V.95. - № 6. - P.2956-2960.

183. Wakui К. Clinical significance of serum glutathione reductase in various clinical conditions, especially in liver diseases / Wakui K., Kumata H., Ta-daki H., Yamogata S.,Tohoku J. // J. Exp. Med. 1976. - V. 118. - № 1. -P. 17-23.

184. Wang W., Ballatori N. Endogenous Glutathione Conjugates: Occurrence and Biolodgical Functions // Pharmacol. Rev. 1998. - V.50. - № 3. - P.335-356.

185. Waris G., Siddiqui A. Regulatory mechanisms of viral hepatitis В and С.// J. Biosci. 2003. - V.3. - № 28. - P.311-321.

186. Weber E. Glioma cells induce y-glutamyltranspeptidase activity in cultured blood but not lymphatic endothelial cells / Weber E., Lorenzoni P., Raffaelli N., Cavina N., Sacchi G. // Biochem and Biophys. Res. Commun. 1996. -V.225. - №3.-P. 1040-1044.

187. Wernerman J., Hammarqvist F. Modulation of endogenous glutathione availability // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 1999. - V.2. - № 6. - P.487-492.

188. Wingler K., Brigelius-Flohe R. Gastrointestinal glutathione peroxidase // Bio-factors. 1999. - V. 10. - № 2-3. - P.245-249.

189. Yamauchi A. Liver immunity and glutathione / Yamauchi A., Tsuyuki S, In-amoto Т., Yamaoka Y // Antioxid. Redox. Signal. 1999. - V.l. - P. 245253.

190. Wu A.J. Relationship between cholecystolithiasis and polypoid gallbladder Relationship between cholecystolithiasis and polypoid gallbladder / Wu A.J., Li Y.Q., Du L.A. // J. Zhejiand. Univ.Sci. 2003. - V.4. - № 5. - P. 620-622.

191. Wu G. Glutathione metabolism and its implications for health / Wu G., Fang Y.Z., Yang S., Lupton J.R., Turner N.D. // J. Nutr. 2004. - V.3. - № 134. -P.489-492.

192. Yosepovich A. Chronic cholecystitis with bone metaplasia / Yosepovich A., Nass D., Zagatsky M., Kopolovic J. A case report // Pathol. Res. Pract. -2002.-V. 198.-№ 11.-P. 765-766.

193. Zhang W. Selenium-dependent glutathione peroxidase modules encoded RNA viruses / Zhang W., Ramanathan C.S., Nadimpalli R.G., Bhat A.A., Cox A.G., Taylor E.W. // Biol. Trace. Elem. Res. 1999. - V.70. - № 2. -P.97-116.

194. Zhou T. Glutathione S-transferase expression in hepatitis В virus-associated human hepatocellular carcinogenesis / Zhou Т., Evans A.A., London W.T., Xia X., Zou H., Shen F., Clapper M.L. // Cancer. Rev. 1997. - V.57. - № 13. - P.2749-2753.

195. Zhou J.F. Oxidative stress befor and after opetation in patients with chronic cholecystitis containing gallstone / Zhou J.F., Chen P., Yang J.L., Zhu Y.G., Peng C.H., Wu Y.L. // Biomed Environ., Sci. 2000. - V.l3. - № 4. - P. 254-262.

Информация о работе

Леонова, Зоя Алексеевна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2005
ВАК 03.00.04

Диссертация

Система глутатиона крови при вирусных гепатитах и хронических заболеваниях желчного пузыря - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы