Синтез и биологические свойства низкомолекулярных тимусных пептидов и их биокоординационных соединений

Бобиев, Гуломкодир Муккамолович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Синтез и биологические свойства низкомолекулярных тимусных пептидов и их биокоординационных соединений
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Синтез и биологические свойства низкомолекулярных тимусных пептидов и их биокоординационных соединений"

Не правах рукописи

БОБИЕВ ГУЛОМКОДИР МУККАМОЛОВИ^ ^ О Л

2 4 ИЮП 2000

СИНТЕЗ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ТИМУСНЫХ ПЕПТИДОВ И ИХ БИОКООРДИНАЦИОННЫХ СОЕДИЕНИЙ

03.00.04 - биохимия, 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Душанбе - 2000

Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте, Институте экспериментальной кардиологии ВК1Щ Российской Федерации, МП "Заид", Институте химии им. В.И.Никитина АН Республики Таджикистан, Таджикском государственном медицинском университете им. Абуали ибн Сино.

Шучный консультант: академик АН Республики

Таджикистан, Доктор медицинских наук, профессор К.Х.ХАЙДАРОВ.

Официальные оппоненты:

-доктор биологических наук Абдуллоев А.А.

-доктор биологических наук Мансурова Ф.М.

-доктор медицинских наук, профессор Ишоикуловя Б.А.

Ведущая организация - Казахский государственный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова.

Защита состоится 12 июля 2000 г. в 9.00 ч. на заседании диссертационного совета Д 065.01.06 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук в Таджикском государственном национальном университете (734025, Республика Таджикистан, г.Душанбе, пр.Рудаки, 17.)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Таджикского государственного национального университета.

Автореферат разослан ^ и^ЮН*^ 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Х.Юлдашев

к&М.^-УЛ/О

£ /4,. Л

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Иммунная система организма играет ключевую роль в поддержании его стабильного стационарного состояния и нарушение ее функционирования приводит к нарушению и изменению отдельных звеньев метаболизма, которые в большинстве случаев являются причиной различных патологических изменений, происходящих в организме. Поэтому проблема коррекции нарушенной деятельности иммунной системы является одной из актуальнейших проблем современной медицины (Векслер, 1985) и биологии. Решение данной проблемы в значительной мере зависит от успехов биоорганической химии и фармакологии в изыскании и изучении веществ, способных влиять на состояние иммунитета (Ахрем и др., 1985) и регулировать метаболические процессы.

В процессах формирования и регуляции иммунного ответа главную роль играет тимус, осуществляющий свои функции посредством выделяемых им гормонов - тимозинов, тимопоэтинов, сывороточного тимусного фактора (Low T.L.K., 1979; Dardenne М. etal., 1977; Goldstein A.L. et al., 1971), выполняющих при введении в организм роль иммуностимуляторов и иммуномодуляторов (Low T.L.K. et al ., 1979), позволяющих повысить эффективность и сократить срок лечения различных заболеваний (Low T.L.K., Goldstein A. L., 1984). В связи с незначительным содержанием их в животных организмах, сложностью выделения и химического синтеза проводятся интенсивные исследования по поиску низкомолекулярных пептидов, обладающих активностью тимусных гормонов. Уже выяснено, что активным центром молекулы тимопоэтина является фрагмент 32-36 представляющий собой пентапептид с последовательностью H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH, называемый тимопентином (Goldstein G. et al., 1979). Выделен дипептид с последовательностью H-Glu-Trp-OH, обладающий активностью тимозина а | (Дейгин В.И. и др., 1987). Получен и охарактеризован амид трипептида H-Lys-His-Gly-NH2, участвующий в дифференциации В-клеток ( Brand A. et al., 1976). В связи с чем актуальным является проведение исследований по выявлению различных структурно-функциональных взаимоотношений в ряду тимусных гормонов и их пептидных аналогов, определению местоположения активных участков в их молекулах и разработке оптимальных путей их химического синтеза для целенаправленного создания лекарственных препаратов.

Одним из способов повышения специфической активности лекарственных препаратов является получение координационных сое-

динений их с ионами железа, цинка и др. Эти металлы имеют большое значение для живого организма. Они активируют ферменты, участвующие в реакциях как синтеза, так и распада нуклеиновых кислот, нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований, участвуют в метаболизме белков, углеводов и липидов (Мозгов И.Е., 1979; Смоляр В.И., 1989). Установлено участие цинка в иммунологических процессах (Смоляр В.И., 1989), цинк входит в состав биологически активной формы сывороточного тимусного фактора (Dardenne М. et al ., 1982; Gastlnei L. et al., 1984). В связи с этим поиск методов получения и изучение биологической активности координационных соединений низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с ионами железа и цинка является весьма актуальным.

Несмотря на имеющиеся успехи, в области профилактики и эффективного лечения многих заболеваний человека и животных имеются проблемы, которые требуют своего решения; В связи с чем особую актуальность приобретает поиск путей применения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами биологически важных металлов в медицинской и ветеринарной практике.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение методов получения и . исследование биохимических свойств низкомолекулярных иммуноактивных пептидов ряда тимопоэтина, тимозина и бурсина и их биокоординационных соединений для дальнейшего применения в медицинской и ветеринарной практике.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить ' следующие задачи:

- изучить структурные особенности тимопоэтина и аналогов активного центра его молекулы;

- разработать оптимальные пути синтеза и синтезировать низкомолекулярные пептиды, обладающие активностью тимозина а i, тимопоэтина и бурсина;

исследовать иммуностимулирующую активность синтезированных пептидов как in-vitró, так и in vivo;

- выявить биохимические закономерности, объясняющие наличие или отсутствие иммуностимулирующей активности у синтезированных пептидов;

разработать методы получения . координационных соединений синтезированных низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с биологически важными металлами (железом, цинком);

- изучить иммуностимулирующую активность полученных

биокоординационных соединений;

разработать лекарственные препараты на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с металлами, изучить их фармакологические и биологические свойства и внедрить их в медицинской и ветеринарной практике.

Научная новизна. Впервые получен ряд новых триптофансодержаицих дипептидов, аналогов активного центра молекулы тимопоэтина, бурсина и их биокоординационных соединений с ионами цинка, железа (II), меди (И). Установлена взаимосвязь между иммунологической

активностью аналогов тимопентина и изменениями вторичной структуры участка активного центра молекулы тимопоэтина при аминокислотных заменах, приводящих к получению данного аналога тимопентина. Показано, что в результате координации с ионами металлов происходит увеличение иммуностимулирующей. активности исходных триптофансодержащих дипептидов. Установлено, что применение препаратов, разработанных на основе синтезированных пептидов и их биокоординационных соединений совместно с- вакцинами увеличивает уровень гуморального иммунного ответа у вакцинированных животных и птицы, совместно с химиотерапевтическими препаратами - сокращает срок и увеличивает эффективность лечения различных заболеваний сельскохозяйственных животных. Показано, что применение препарата, разработанного на основе синтезированного низкомолекулярного иммуноактивного пептида, при лечении больных с нефрологическими, ревматологическими и кожными заболеваниями значительно сокращает срок лечения, нормализует показатели иммунологического статуса организма, повышает эффективность лечения. Предложен возможный механизм участия разработанных препаратов в процессах регуляции иммунного ответа, стартовой стадией которого является активация метаболических процессов на уровне функционирования каталитических белков, что приводит к усилению образования структурных элементов антител.

Практическая значимость. Усовершенствованы способы получения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов, обладающих ' активностью тимусных гормонов и их биокоординационных соединений с ионами цинка, железа (И), меди (II). Разработаны иммуностимулирующие препараты тимогар, ферунол, тимофер, тимоцин, нормативно-техническая документация на которые утверждена Главным управлением ветеринарии

Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан. Указанные препараты применяются в ветеринарии для профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных, сокращения срока и повышения эффективности лечения бронхопневмонии телят и тейлериоза крупного рогатого скота, повышения уровня антител при вакцинацни животных против рота-, коронавирусных энтеритов, колибактериоза, тейлериоза и иммунизации цыплят против колибактериоза и стафилокохкоза. Препарат тимогар может быть использован при лечении нефрологнчесхих, ревматологических и кожных заболеваний человека.

Положения, выносимые на защиту.

1. Результаты теоретического расчета изменений вторичной структуры участка активного центра молекулы тимопоэтина при аминокислотных заменах в положениях 34,35, 36 и 37.

2. Усовершенствование методик синтеза пептидов методом активированных эфиров.

3. Выявленние взаимосвязи между вторичной структурой участка активного центра молекулы тимопоэтина и иммунологической активностью аналогов тимопентина, полученных при аминокислотных заменах на данном участке.

4. Повышение иммуностимулирующей активности триптофансодержащих дипептидов посЛе образования биокоординационных соединенй с ионами цинка и железа.

5. Биологические свойства и способ применения разработанных иммуностимулирующих препаратов в медицине и ветеринарии.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на I Всесоюзной конференции по биорегуляторам (Ленинград, 1987), VII Всесоюзном симпозиуме по химии белков и пептидов (Таллин, 1987), республиканских научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов (Душанбе, 1987, 1989), научной конференции "Теоретические и прикладные проблемы химии" (Душанбе, 1995), научной конференции, посвященной 50-летию Института химии им. В.И.Никитина АН Республики Таджикистан (Душанбе, 1996), 1 конгрессе медицинских работников Республики Таджикистан (Душанбе, 1997), научной конференции "Морфологические и физиологические основы адаптации организма" (Душанбе, 1997), научной конференции, посвященной 95-летию со дня рождения академика АН Республики Таджикистан В.И.Никитина (Душанбе, 1997), IV научно-практической конференции "Проблемы патологии человека и последипломного

образования" (Душанбе, 1998), конференции, посвященной 90-летию со дня рождения член-корр. АН Республики Таджикистан Шукурова О.Ш. (Душанбе, 1998), международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня рождения одного из основателей Таджикского технического университета Сулеймаиова A.C. (Душанбе,199S), юбилейной научно-практической конференции, посвященной 50-летию ТГНУ (Душанбе, 1998), республиканской конференции "Вклад ученых биологов в развитие биологической науки в Таджикистане" (Душанбе. 1998). II международной конференции молодых химиков "Проблемы биоорганической химии" (Наманган,1998), конференции "Проблемы изыскания, синтеза и производства препаратов для ветеринарии (Самарканд, 1999), конференции "Биология ва эколопшшнг хозирги замой муаммолари" (Самарканд, 1999), V научно-практической конференции "Теоретические и практические исследования в медицине» (Душанбе,1999), юбилейной научно-практической. конференции, посвященной 40-летию химического факультета и 65-летию д.х.н., профессора Якубова Х.М. "Проблемы современной химической науки" (Душанбе. 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 44 работы, получено 2 патента Республики Таджикистан и 7 положительных решений по заявкам на патент Республики Таджикистан.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов, "списка литературы, включающего 598 источников, из них 215 иностранных авторов и приложения. Диссертация изложена на 324 страницах машинописного текста, содержит 35 таблиц и 27 рисунков.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

В работе использовались аминокислоты L -ряда и их производные. При необходимости защищенные аминокислоты и их активированные эфиры были получены по стандартным методикам (Гершкович A.A., Кибирев В.К.,1987). Органические растворители были очищены и высушены по стандартным методикам.

Ход реакций конденсации, индивидуальность и чистоту полученных соединений контролировали методом тонкослойной хроматографии. Полноту удаления защитных групп контролировали методом электрофореза на бумаге в 2%-ной уксусной кислоте, растворы веществ упаривали в вакууме при температуре не выше 40 ° С.

Для защиты а - и £ - аминогрупп использовали карбобензокси- (2-) и трет-бутилоксикарбонильную (Вое-) группы. Карбоксильные группы были защищены путем превращения их в метиловые (-ОМе), этиловые (-ОЕ1 ), трет-бутиловые (-ОВи' ) и беизиловые (-ОВг1 ) эфиры. При синтезе дилептидных аналогов дипептида 11-С1и-Тгр-ОН карбоксильные группы аминокомпонентов были защищены путем солеобразования с помощью триэтиламина. При синтезе дипеотида Н-С1и(Тгр-ОН)-ОН а -СООН группу */ -трег-бутилового эфира карбобензоксиглутаминовой кислоты защищали в помощью 9-флуоренилкарбо11ильной группы.

Карбобензокси- и бензильную группы удаляли каталитическим гидрированием над 10%-ным Рс1/С. Вое- и -ОВи' группы снимали действием НС1 в этилацетате, смесью трифторуксусная кислота-анизол-метилэтилсульфид (425:50:25) или действием сухого бромистого водорода в растворе трифторуксусной кислоты. Метиловые и этиловые эфиры омыляли щелочцым гидролизом действием 1 и. раствора ЫаОН в течение суток на холоду или 10%-ным раствором ЫагСОз в течение часа (для пептидов, содержащих С-концевой остаток триптофана.

Пептиды были синтезированы методами классической пептидной химии в расгворе (Гершкович А.А., Кибирев В.К., 1987). Свободные пептиды были очищены с помощью колоночной и высокоэффективной жидкостной хроматографии (Дарбре А., 1989).

Изучение биологических свойств полученных соединений и раз-работанных препаратов проводили на 201 белой мыши, 68 кроликах, 88 поросятах 3-5-дневного возраста, 48 овцах, 436 телятах 2-6-месячного возраста и 186 головах крупного рогатого окота.

Препараты тимоген, тимогар вводили в влде 0,01%-л ого, тимоцнн - 0,04%-ного, тимофер - 0,0426%-ного, ферунол - 0,07%-ного водных растворов внутримышечно или подкожно в зависимости от поставленного опыта.

В опытах использовали ассоциированную вакцину против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят, изготовленную Всероссийским НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко (ВИЭВ), которую вводили крупному рогатому скоту в дозе 5 мл на голову, живую культуральную противотейлериозную вакцину ВИЭВ, которую вводили в дозе 1 мл (0,1 млн живых клеток).

Иммунологическую активность синтезированных пептидов в тесте Е-розеткообразовашм клетки определяли согласно АЫко Т е1 а1.,(1980).

Стерильность препаратов проверяли путем высева на

питательные среды (МПА, МПБ, МПГТБ, среда Сабуро) по отсутствию роста микрофлоры после выдерживания посевов в течение 10 суток в термостате при температуре 37-38°С и 20-22°С.

Острую и хроническую токсичность препаратов изучали на белых мышах, кроликах, овцах и телятах оогласно методическим указаниям по определению токсических саойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве, утвержденным Министерством здравоохранения СССР, ВАСХНИЛ и ГУВ Госагропрома СССР в 1987 г.

Для обнаружения специфических антител к рота-, коронавирусу и эшерихии коли в сыворотке крови животных применяли, соответственно, иммуноферментный анализ (ИФА), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и агглютинации (РА), проводимые согласно ( Соколова Н.Л. и др., 1987). Наличие и уровень противотейлерийных антител в сыворотке крови определяли реакцией длительного связывания комплемента (РДСК) и ИФА (Георгиу Х..1997).

Факторы неспецифической резистентности организма (бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки кропи) животных определяли согласно методическим рекомендациям "Определение естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных" (Минск.1986).

Количество общего белка и белковых фракций сыворотки крови определяли в соответствии с методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследований крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях (Москва, 1991).

При лечении кожных заболеваний изучение состояния клеточного звена иммунитета проводилось методом розеткообразования: Т-лимфоцитов (Е-РОК) (Фримель Г., 1987), В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) (Крузе X., Эггерс Г'., 1987). Определение сывороточных иммуноглобулинов А , М , G , Е проводилось методом радиальной иммунодиффузии в геле (Бем Э,. 1987) с использованием сывороток производства Российской Федерации. Комплементарную активность кровн изучали согласно методических указаний МЗ СССР под ред. В.В.Меньшикова (1973). Определение количества ЦИК проводилось пб методу, основанному на селективной преципитации комплекса антиген-антитело. Определение фагоцитарной активности лейкоцитов проводилось согласно методическим рекомендациям Института иммунологии МЗ СССР (1984). В качестве тест-системы использовали инертные частицы латекса размером 1,3-15 мю , с концентрацией 100-200000/1

мкл. Проводился подсчет количества нейтрофилов (ФАН%), определяли суммарный эффект фагоцитоза (СЭФ), который включал в себя информацию об абсолютном количестве фагоцитов и активности отдельного фагоцита.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Результаты структурных исследований тимопоэтина и аналогов тимопентина.

Важнейшая роль тимусных гормонов в процессах становления и регуляции иммунного ответа обусловила то огромное внимание, которое уделяется изучению биологических свойств самих гормонов, их синтетических аналогов и фрагментов. Важное значение для определения механизма их действия имеет знание различных структурно-функциональных зависимостей в ряду этих гормонов.

В связи с этим необходимо проведение структурных исследований в ряду аналогов тимопентина - фрагмента 32-36 молекулы тимопоэтина, являющегося ее активным центром.

С целью поиска структурных закономерностей, объясняющих наличие или отсутствие у аналогов тимопентина иммунологической активности, был проведен теоретический анализ вторичной структуры молекулы тимопоэтина, активного центра этой молекулы и участка 32-37 тимопоэтина при аминокислотных заменах в положениях 34,35,36 и 37.

Анализ вторичной структуры тимопоэтина, проведенный по методу Чоу и Фасмана (Choy Р.Y., Fasman G. D ., 1978) показал, что в молекуле тимопоэтина могут находиться участки с высокой степенью спирализации (1-6 и 10-18), с высокой потенциальной ß -складчатостью (21-25 и 31-38), с высокой вероятностью образования ß -изгибов (6-9 и 26-29), а также с беспорядочной структурой (рис.1). Результаты этого анализа позволяют предположить, что участок 32-36, являющийся активным центром тимопоэтина с большой степенью вероятности принимает ß -складчатую структуру.

Согласно классификации Чоу и Фасмана (Choy Р.Y., Fasman P.D. ,1978) все аминокислотные остатки можно разделить на а - и ß -образующие и а - и ß -разрушающие. Причем аминокислот с одинаковыми структурообразующими свойствами не имеется. Поэтому при расчете с использованием метода Чоу и Фасмана

участков и Р -изгибов (в).

возможной вторичной структуры участка 32-36 молекулы

тимопоэтина при различных аминокислотных заменах можно проследить происходящие при этом структурные изменения.

Так, при замене аспарагиновой кислоты в положении 34 на глу-таминовую уменьшается вероятность образования на участке 32-36 Р -структуры и увеличивается вероятность образования а -спирали (рис.2А).

Если тирозин в положении 36 заменить на другую ароматическую аминокислоту фенилаланин, то одновременно увеличивается вероятность образования как а-спирали, так и p-структуры. При этой замене значение потенциала образования на участке 32-36 Р-структуры (Рр) выше, чем значение потенциала образования а -спирали (Р а ). Поэтому был сделан вывод о том, что участок 32-36 в этом случае принимает р-складчатую конформацию (рис.2Б).

Замена валина в положении 35 на аланин приводит к снижению вероятности образования на участке 32-36 Р-структурной конформации и увеличению а-спиральной (рис.2В). Вследствие этого данный участок с большой степенью вероятности принимает а -спиральную конформацию.

При замене валина в положении 35 на серии вероятность образования как а-спнрали, так и p-структуры становится ниже порогового значения, но при этом на участке 32-36 становится вероятным образование р-изгнба (рис.2Г).

Эти данные подтверждают предположение (Audhua T., Heavner G .A. et al ,1984; Audhua Г. et al., 1984; Sunchine G .H. et el., 1978) о том, что аминокислоты в положениях 33 и 35 играют структурообразующую роль в молекуле тимопоэтина на участке ее актив- . ного центра, так как в нашем случае аминокислотные замены в положении 35 приводят к более значительному изменению вторичной структуры участка 32-36.

Изменение р -структуры участка 32-36 на а -спиральную происходит при одновременной замене валина в положении. 35 на аланин и тирозина в положении 36 на фенилаланин (рис.ЗА).

При одновременной замене валина в положении. 35 на серии и тирозина в положении 36 на фенилаланин участок 32-36 образует беспорядочную структуру. В этом случае в N-концевой половине данного участка увеличивается вероятность образования а -спирали, а в С-концевой - P-структуры (рис.ЗБ).

Рис.2. Вероятные изменения вторичной структуры участка 32-36

при замене: Л - аспарапшовой кислоты-34 иа глутамкновую, Б - тирозина-36 на фенилалаиин, В - валнна-35 на алаиин, Г - ва.тнна-35 на серии.

Обозначения на рисунках: изменение расположения: а - а -спирали, б -{1 -складок, в - р -изгибов •

& ^

и 10

% *•

I II г I

ЗГ

4» О? О,Г

г I

50 '35 Ю

Рис, 3. Вероятные изменения вторичной структуры участка 32-37 при замене:А - валина-35 на аланин и тирозина-Зб на фенилаланин, Б - валина-35 на серии и тирозина-36 на фенилаланин, В -тирознна-36 на триптофан, Г - аспарагиновой кислоты-34 на глутаминовую и тирозина-36 на триптофан. Обозначения аналогичны рис.2.

Замена тирозина в положении 36 на триптофан приводит к сильному увеличению вероятности образования на участке 32-36 а-спиралн и уменьшению - Р-структуры (рис.ЗВ), Выбор остатка триптофана для той замены был обусловлен тем, что он в составе

индольной группы содержит ароматическое кольцо и, кроме того, триптофан входит в состав многих, биологически активных пептидов.

При одновременной замене аспарагиновой кислоты в положении 34 на глутаминовую и тирозина в положении 36 на триптофан происходит" еще большее увеличение вероятности образования а -спирали и уменьшение вероятности образования (3 -структуры (рис.ЗГ). Согласно теории кпазициклизации молекулы биологически активных низкомолекулярных пептидов при взаимодействии с рецептором образуют квазиццклическне структуры за счет взаимодействия акцепторных группировок (обычно (¿»-карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот или а -карбоксильная группа любой С-концепой аминокислоты пептида) с функциональными группами аминокислот общих фрагментов (аргинин, лизин, аспарагин, глутамин) (Чипенс Г.И., 1985; Чипенс Г.И. н др„ 1981).

. Вследствие того, что в состав тимопентнна входят некоторые из указанных аминокислот, в пей можно выделить два возможных квазицнкла - Arg33-Tyr36 и Arg32-Asp34. Подтверждением этому предположению может служить тот факт, что фрагменты 32-34 и 32-35 тимопоэтниа обладают свойственной ему биологической активностью (Rajnavolgui Е. et al., 1986; Denes L. et al,. 1986).

Исходя из этого было предположено образование новых кпмипнк-лов Asp34-Arg37 и Asp3<-Lys37 при замене валина в положении 37 на аргинин или лнзпн, соответственно.

Расчет вероятных изменений вторичной структуры участка 3237 молекулы тнмопоэтина при этих заменах показал, что при замене валина-37 на аргинин происходит одновременное увеличение вероятности образования на этом участке р -структуры и уменьшение а-спирали (рис.4А). Замена валина в положении 37 на лизин приводит к противоположным результатам (рис.4Б).

Л 5

Рис. 4. Вероятные изменения вторичной структуры участка 32-37лри замене: А - валина-37 на аргинин, Б - валина-37 на лизин. Обозначения на рисунках: изменение расположения: а - а -спирали, б-р -складок, в-р -изгибов.

С учетом того, что участок 32-36 молекулы тимопоэтина принимает Р -складчатую конформацню было предположено, что аналоги тнмопентина, полученные при аминокислотных заменах, сохраняющих с большой степенью вероятности Р-структурную конформацню участка 3236 будут обладать биологической активностью, сравнимой с активностью тнмопентина, а те аналога, у которых вероятность образования на участке 32-36 а -спирали выше, чем вероятность образования ^-структуры, будут обладать меньшей, чем тнмопентин биологической активностью или будут неактивными.

3.2. Синтез пептидов

Для проверки вышеизложенного предположения были синтезированы тиыопентшз ка его аналош:Н-Аг£-Ьу5-С1и-Уа1-Туг-ОН, Н-А^-Ьув-

Азр-Уа1-Тф-0Н, Н-Лг§-1.уя-С1и-Уа1-Тф-0Н, H-Arg-Lys-Asp-Seг-Tyr-OH> Н-Аге-Ьу5-А5р-А1а-Туг-ОН, Н-Агв-Ьуз-Авр-УаЬРЬе-ОН, Н-Агв-Ьуз-Авр-А1а-РЬе-ОН, Н-А^уз-Азр-Бег-РЬе-ОН, H-Aгg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-OH, Н-А^-Ьуз-Азр-Уа^Туг-Ьуэ-ОН. С целью разработки оптимального способа получения тимопентина был проведен новый его синтез методом активированных эфиров по схеме, изображенной на рис.5.Для синтеза были использованы Ы-окснсукцинмидные эфиры.

Выход защищенных пептидсв 1-1У в реакции конденсации достигал 80-90%, за исключением стадии получения защищенного пентапептида IV на которой выход конечного продукта составил 55%. После деблокирования и очистки в помощью ВЭЖХ общий выход свободного пентапептида составил 25,27%.

Затем аналогичным путем были синтезированы аналоги тимопентина Н-А^-Ьу5-01и-Уа1-Туг-0Н, Н-Аг&-Ьу5-Азр-Уа1-Тф-ОН, Н-А^-ЬуБ-С 1и-Уа1-Тф-ОН, Н-Аге-Ьуз-Азр-УЫ-Туг-А^-ОН.

Данный выбор защитных групп позволил вводить пептиды в реакцию конденсации без выделения и дополнительной очистки пептидов со свободной аминофуппой сразу после реакции гидрирования и удаления катализатора, что значительно упростило синтез.

Общий выход свободных пептидов, полученных по этой схеме, представлен в таблице 1

С целью увеличения общего выхода конечного продукта V по аналогичной схеме был проведен новый синтез тимопентина с использованием пентафторфениэтовых эфиров, получаемых с помощью дипента-фторфенилкарбоната. Аминокомпонент в реакцию конденсации вводили без выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки карбоксильного компонента. Образующиеся защищенные ди-, три-, и тетрапептиды сразу после обычной обработки кислыми и основными реагентами подвергали каталитическому гидрированию для удаления карбобензоксифуппы и после упаривания растворителя вводили в реакцию конденсации с пенгафторфениловым эфиром соответствующей N -защищенной аминокислоты. Контроль всех стадий проведения синтеза осуществляли тонкослойной хроматофафией. После окончательного деблокирования свободный пептид очищали па колонке с сефадексом й-25 в градиенте концентрации 0,05-1 М пиридин-ацетатного буфера. Общий выход тимопентина составил 39,8%.

Аге

Iуа

и-

в.

I ^

я. ц.

Еоо

V«!

г, -4-

«у*

В.

Ж.

ОШа

Ж.

Ш*

I || м —"

.ж.

Еэ»

• 02$ .оке .от

.от •он •оя •он ■он •

Рис.5 Схема синтеза тимопентина

Таким образом, на примере синтеза тимопентина была показана возможность применения пентафторфеииловых эфиров, получаемых с помощью дипентафторфенилкарбоната, для синтеза пептидов без выделения и дополнительной очистки промежуточных активированных эфиров и защищенных пептидов.

После этого по разработанной методике были синтезированы остальные аналога тимопентина. Однако, в этом случае выбор защитных групп был иным. Для примера на рис. 6 приведена схема синтеза пелтапептида Н-А^-Ьуз-Авр-Бег-РЬе-ОН. Подобный выбор защитных групп позволил окончательную стадию деблокирования проводить в один прием каталитическим гидрированием.

При синтезе гексапептидного аналога тимопентина С-концевой остаток аргинина был использован без защиты гуанидиновой и карбоксильной групп, что упростило процесс синтеза. При этом как оксисукцинимидные, так и пентафторфениловые эфиры М-защншенных аминокислот и промежуточные защищенные пептиды выделялись в свободном виде.

Также был получен ряд аналогов тимопентина у которых отсутствует N -концевой остаток аргинина.

Таблица 1.

Общий выход тимопентииа и его аналогов

ПЕПТИД Активированные эфиры

N-оксисукиин-имялные Пентафторфеии-ловые

H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH 25,27 39,8

H-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH 23,7 41,1

H-Arg-Lys-Asp-Val-Тф-ОН 20,94 42,13

H-Arg-Lys-Glu-Val-Ttp-OH 24,2 41,9

H-Arg-Lys-Asp-Val-Pfce-OH - 40,3

H-Arg-Lys-Asp-A la-Tyr-OH - 39,7

H-Arg-Lys-Asp-Ser-Tjx-OH - 38,9

H-Arg-Lys-Asp-Ser-Phe-OH 1 - 38,9

H-Arg-Lys-Asp-Ala-Phe-OH - 40,7

H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-OH 28.13 31,43

H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Lys-OH - 29,3

ATS

Xgra

h' И.

Ляр

-ЛЫ.

Coo-fC

Еоа- ^OPiJp Doe "Vs-JT

Sot

Тэо - rOPft? OBsl

Еоо*

0Ез1

ОГзХ

02al

ока

oral

Tal

Eel

Га1

Йз1

ХзХ

2з1

ГЬэ

П--ОЙ1А

"Ойа

Рис. 6. Схема синтеза Н-А^-Ьуз-Азр-8ег-РЬе-ОН Следовательно, можно считать, что оптимальным способом

синтеза тимопентина и его аналогов является ступенчатое наращивание пептидной цепи начиная с С-конца методом активированных (пентафторфениловых) эфиров, получаемых с помощью дипентафторфенилкарбоната, без выделения и дополнительной очистки промежуточных активированных эфиров и защищенных пептидов.

При синтезе дипепгидных аналогов дипептида Н-С1и-Тгр-ОН для . защиты а-амино- и боковых функциональных групп использовали карбобензокси- и бензильную группы. а-Карбоксильные группы аминокомпонентов защищали солеобразованием с помощью триэтиламина. Дипелтиды получали взаимодействием свободных аминокислот с 1-гидроксибензотриазоловыми эфирами Ы-защнще^ных аминокислот, которые получали в диметилформамидном растворе взаимодействием К*-карбобензокснаминокислот с 1-

гидроксибензотриазолом карбодиимидным методом с использованием в качестве конденсирующего агента дициклогексилкарбодиимида и в реакцию конденсации с аминокомпонентом вводили без выделения" из реакционной смеси путем добавления аминокомпонента к реакционной смеси, образующейся при получении 1-гидроксибензотриазоловых эфиров.

При синтезе дипептида Н-С1и(Тгр-ОН)-ОН, содержащего у-пептидную связь, а-карбоксильную группу у Z-Glu(OBu,)-OH защищали 9-флуореиилкарбонилыюй группой с последующим удалением -ОВи1 защиты с у -СООН группы глутаминовой кислоты и образованием пептидной связи по у-СООН группе. Выход свободных дипептидов достигал 75-90%.

Таким образом, подобный выбор защитных групп и использование солеобразования для защиты а -СООН групп аминокомпонента позволили использовать активированные эфиры М-защшценных аминокислот в реакции конденсации без выделения из реакционной смеси и до предела упростить синтез.

Свободные пептиды были очищены с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Синтез бурсина осуществляли наращиванием пептидной цепи от Ы-конца к С-концу методами смешанных ангидридов и активированных эфиров. Защищенный дипептид 2-Ьуз(2)-Н!з-ОН был получен методом М-оксисукцинимидных эфиров с выходом 88%. Амид трипептида 2-Ьуз-Н|з-01у-МН;2 был получен методом смешанных ангидридов в пиридиновом растворе с выходом 79,6%.

Гибридный аналог бурсина и дипептида Н-С1и-Тгр-ОН получали методом смешанных ангидридов с использованием в качестве карбоксильного компонента дипептида Z-Glu(OBu')-Tф-OH, > в качестве аминокомпонента - гидразида трипептида г-Ьуз^-Ню-Оу-МН-ЫН;! .

Выход защищенного конечного продукта составил 27,2%. Попытки добиться увеличения выхода целевого продукта методом активированных эфиров и карбодиимидным методом не привели к улучшению результата.

При изучении биологической активности синтезированного бурсина in vitro было показано, что он обладает активностью природного гормона. Синтезированный гибрид бурсина и дипептида H-Glu-Trp-OH не проявил биологической активности при исследовании in vitro. Вероятно, это связано с тем, что со стороны дипептида H-Glu-Trp-OH у остатка триптофана отсутствует свободная карбоксильная группа, а со стороны бурсина - свободная амидная группа у остатка глицина.

3.3. Изучение биологической активности синтезированных

пептидов н структурно-функциональные исследования

Изучение иммунологической активности синтезированных пептидов проводили как in vitro в тесте Е-розеткообразования, так и in vivo при совместном применении с «ротииотейлериозной вакциной.

Крупный рогатый скот иммунизировали вакциной в дозе 2 мл (0, i млн живых клеток) на голову. Через 3 т 5 дней после начала поствакциналыюй реакции на введение вакцины (через 15-17 дней после вакцинации) иммунизированным животным вводили пептиды в свободном виде в виде водных растворов. Контролем служили аналогичные вакцинированные животные, которым пептиды не вводили. У опытных и контрольных животных через 35 дней после вакцинации определяли титр противотейлерийных знтител (таблица 2).

Как видно из таблицы 2, отмечается корреляция между активностью синтезированных пептидов in vitro в тесте Е-розсткообразовання и

активностью in vivo при совместном применении с противотейлериозиой вакциной.

Результаты изучения . иммуностимулирующей активности тимопснткна и его аналогов показали, что при отсутствии у пептида N-концевого остатка аргинина он не проявляет активности как in vitro , так и in vivo, что согласуется с установленной Абико и др. (Abiko Т. et al ,1979) необходимостью присутствия остатка аргинина в положении 32. Для проявления аналогами тамопентина иммунологической активности.

Аминокислотные замены, приводящие к увеличению вероятности образования на участке 32-36 а -спирали, и снижению вероятности образования 0 -структуры приводили к получению аналогов тимопентина с меньшей иммунологической активностью. Пентапептнд Z-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH, полученный при замене

Таблица 2.

Иммунологическая активность синтезированных пептидов

ПкИТИЛ Доза Иммунологическая активность

Мкг/ 100 кг

Е-ро- Титр противотейлерийных зегкооб антител**

живого веса разова- ■ ние РДСК ИФА

Н-Агд-Ьу5-Азр-Уа1-Туг-0Н 200 100,0 1: 5-1 40 1 100-1 : 1600

Н-Ьуз-Азр-Уа1-Туг-0Н 200 0,0 1 5-1 20 1 50-1 : 800

Н-Агд-Ьуз-С1и-Уа1-Туг-0Н 200 92,3 1 5-1 36 1 80-1 : 1400

Н-Агд-1уз-Аэр-Уа1-Тгр-0Н 200 64,0 | 5-1 30 1 70-1: 1200,

Н-Агд-1уз-С1и-Уа1-Тгр-0Н 200 44,2 1 5-1 24 1 60-1: 1000

Н-1ув-С1и-Уа1-Тгр-ОН 200 0,0 1 5-1 20 1 50-1: 800

Н-Агд-Ьуз-Азр-Зег-РЬе~0Н 200 1 5-1 36 1 70-1: 1200

Н-Ьуз-Азр-Зег-РЬе-ОН 200 1 5-1 20 1 50-1 : 800

Н-Агд-Ьуз-Азр-А1а-РЬе-0Н 200 1 5-1 20 1 50-1 : 800

Н-Ьуз-Азр-А1а-РЬе-ОН 200 1 5-1 20 1 50-1 800

Н-Агд~Ьуз-Азр-А1а-Туг-0Н 200 1 5-1 20 1 50-1 800

Н-Агд-Ьуз-Азр-Бег-Туг-ОН 200 1 5-1 30 1 80-1 1280

Н-Агд-Ьуз-Азр-УаХ-РЬе-ОН 200 1 5-1 40 1 100-1 : 1400

Н-Агд-Ьуз-Азр-Уа1-7уг-Агд-0Н 200 100,0 | 5-1 40 1 100-1 : 1600

Н-Ьуз-Азр-Уа1-Туг-Агд-0Н 200 1 5-1 20 1 50- 1 800

Н-Агд-Ьуз-Азр-Уа1-Туг-Ьуз-0Н 200 1 5-1 20 1 50-1 800

Н-11е-Тгр-0Н 100 100,0 1 5-1 40 1 100-1 : 1600

Н-С1и-Тгр-ОН 100 100,0 1 5-1 40 1 100-1 : 160&

Н-Азр-Тгр-ОН 100 30,0 1 5- 1 30 1 60-1 1200

-С1и-Тгр-ОН 100 40,0 1 5-1 30 1 70-1 1280

Н-С1и-(1гр-ОН)-Н 100 ■50,0 1 5-1 30 1 80-1 1200

Н-Уа1-Тгр-ОН 100 0,0 1 5-1 20 1 50-1 800

- 1 5-1 20 1 50-1 800

'Исследования проводились в Военно-медицинской академии (г.Санкт-Петербург), Институте иммунологии Минздрава Российской Федерации

(г.Москва)

"Исследования проводились в лаборатории по изучению ш1р«н!дал!.шдо>ек Таджикского научно-исследовательского ветеринарного

ихстшуга (г. Душанбе)

аспарагиновой кислоты в положении 34 на глутаминовую, проявлял 92,3% активности тимопентина in vitro а тесте Е-розеткообразования и 80-87,6% - in vivo при совместном применении с противотейлериозиой вакциной. Еще меньшую активность проявлял пентапептид H-Arg-Lys-Asp-Val-Tip-OII - 64% активности тимопентина in vitro и 60-76% - in vivo. Обе эти замены, проведенные одновременно, привели к получению пентапептида H-Arg-Lys-Glu-Val-Trp-OH, проявившего 44,2% активности тимопентина in vitro и 20-62,5% - in vivo. '

Введение животным совместно с противотейлериозиой вакциной пентапептида H-Arg-Lys-Asp-Ala-Tyr-OH, полученного при замене валина в положении 36 на аланин, не приводило к увеличению титра противотейлерийных антител. Было показано ( Denes L. et al., 1986), что . фрагмент 32-35 тимопоэтина проявлял почти одинаковую активность с тимопентином. а его аналог, у которого в нолох<ении 35 находился аланин, оказался полностью неактивным в тесте Е-розеткообразования. Из этого можно заключить, что синтезированный аналог тимопентина в данном тесте также будет неактивным. Этот факт можно объяснить тем, что при этой замене участок 32-36 молекулы тимопоэтина меняет р -структурную конформацию на а -спиральную.

Участок 32-36 молекулы тимопоэтина сохраняет Р-складчатуго конформацию при замене тирозина в положении 36 на феннлаланин и иммунологическая активность полученного при этом пентапептида H-Arg-Lys-Asp-Val-Phe-OH составляет 87,5-100% активности тимопентина.

Аналог тимопентина, полученный при одновременной замене валина в положении 35 на аланин и тирозина в положении 36 на фенилаланин in vivo при, совместном применении с противотейлериозиой вакциной является неактивным. Одновременные замены валина в положении 34 на серии я тирозина в положении 36 на феннлаланин приводят к получению неактивного in vivo аналога тимопентина.

Предположение о том, что гексапептид H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-ОН полученный при замене валина в положении 37 на аргинин, должен обладать иммунологической активностью, было подтверждено при изучении его иммунологических свойств. Этот пептид как in vitro, так и in vivo проявлял такую же активность, как и тимопентин. Другой гексапептид, полученный при замене валина в положении 37 на лизин, иммунологической активностью не обладал.

Таким образом, для проявления аналогами тимопентина иммунологической активности должны соблюдаться два условия: N-концевым остатком в положении 32 обязательно должен быть аргинин и участок 3236 молекулы тимопоэтина при аминокислотных заменах, приводящих к

получению данного аналога, должен сохранять р -структурную конформацию.

При изучении иммунологической активности аналогов дипептида Н-Ои-Тф-ОН было показано, что днпептиды Н-С1и-Тф-ОН, Н-Ие-Тф-ОН, Н-С1и(Тгр-ОН)-ОН, пиро-С1и-'Гф-ОН, Н-Лвр-Тф-он в тесте Е-розеткообразования проявляют 100, 100, 60, 40 и 30% активности тимозина а соответственно. Остальные аналоги в этом тесте иммунологической активности не проявили.

Из полученных результатов можно видеть, что у всех дипептидов, проявивших иммунологическую активность, вторым аминокислотным остатком является триптофан. Следовательно, на биологическую активность дипептидов оказывает влияние природа Ы-концевой аминокислоты.

Если расположить М-концевые аминокислоты в порядке уменьшения их гидрофильносги согласно данным (Неккег II.Р. ,1977), то можно заметить, что при переходе от более гидрофильной аминокислоты (глутаминовой) к менее гидрофильной (аспарагиноаой) уменьшается иммунологическая активность синтезированных пептидов. Также можно заметить, что глутаминовая кислота обладает более сильными кислотными свойствами (рК т-соон = 3,22) по сравнению с аспарагиновой (рК р соон = 3,66) и иммунологическая активность дипептида Н-СЛи-Тгр-ОН в 3,3 раза выше активности дипептида Н-Аэр-Тф-ОН Исход» из этого можно предположить, что . на иммунологическую активность триитофансодержащих дипептидов оказывают влияние гидрофильность Ы-концевой аминокислоты и рК ее боковой карбоксильной группы.

Неожиданный с этой точки зрения факт, что дипептид Н-Ие-Тф-ОН проявил активность, равную таковой дипептида Н-С1и-Тф-ОН говорит о том, что больший вклад в проявляемую пептидом активность вносит остаток триптофана. '

Таким образом, для проявления триптофансодержащими дипептндами иммунологической активности необходимо, чтобы остаток триптофана был вторым, а первый аминокислотный остаток - содержал боковую карбоксильную фуппу.

Полученные результаты еще раз говорят о том, что для проявления функциональной активности препаратов необходима четко определенная последовательность аминокислотных остатков и их биохимическая скоординирован ность в образуемой цепи.

3.4, Ш":(учеп(1С^<)орд1^||йШ10М|Тмх"соедн"и"ё1111Й низкомолекулярных нммуноакпшных пептидов с йенами Zn2* и Ре2+ н их иммунологическая активность

Известно, что при образовании координационных соединений лекарственных препаратов с железом, цинком и платиной происходит увеличение специфической активности и появление новых биологических свойств (Крисс Е. и др., 1990). Для расширения спектра биологической активности и получения соединений с большей иммунологической активностью были получены координационные соединения триптофансодержащих дипептидов с ионами цинка и железа (II). Выбор этих металлов был основан на огромном их значении для живого организма (Мозгов И.В., 1979).

Для исследования были выбраны дипептнды Н-Пе-Тгр-ОН. проявлявший иммунологическую активность тимозина а- и дипептид Н-Уа!-Тгр-ОН, иммунологической активностью не обладающий.

Координационные соединения металлов с аминокислотами в основном получали взаимодействием разбавленных водных растворов аминокислот и солей металлов при нагревании, то реакцию пептидов с ионами цинка и железа (II) проводили при рН 6,0, 110-120°С при отсутствии света и без доступа воздуха для предотвращения окисления нидолыюй группы триптофана и иона 1;е2+ в нон Ре В качестве солей металлов были использованы ацетат цинка и сульфат железа (II). Были получены координационные соединения дипептнда И-1!е-Тгр-ОН с ионами Ре^ и Ztl5+ иди-пептида Н-Уа1-Тгр-ОН с ионом Г с2*.

Была сделана попытка определения состава образующихся координационных соединений методом изомолярных серий. Исследования были проведены в водных растворах при концентрации изомолярпой серии С = 0,0003133 М. Необходимо отметить, что при определении иммунологической активности соединении дипептидов с нонами металлов были использованы аналогичные водные растворы. Для изучения были выбраны соединения дипептида Н-Не-Тгр-ОН с ионом Хп2* и для сравнения - триптофана с ионом Ъс\* (С = 0,0002272 М).

График зависимости а О от состава изомолярного раствора при взаимодействии Тп'* и триптофана приведен на рнс. 7. Из этого рисунка видно, что в растворе одновременно присутствуют координационные

0,1

0,05.

ьЭ-10'

0.5

Рнс.7. Графическое определение состава образующихся Рис.8 Графическое определение состава координационных координационных соединений цинка с триптофаном соединений цинка и дипептида Н-11е-Тгр-ОН (Ь) методом

методом изомоляриых серий: изомолярных серий

[2п(Н-Тгр-ОН)2(Н2б)4]:!+)Х = 234 нм. 1. [гпЬШгОМ2*, X = 318 нм

2. \ZnUY-*, X. = ЗЮнм

соединения с соотношением цинка и триптофана 1:2 и возможным составом комплексного нона [Zn(H-Trp-0H)2(H20)4]2+. Результаты аналогичных исследований, проведенных при взаимодействии Zn2*. и дипептида Н-11е-Тгр-ОН приведены на рис. 8. Как видно из рисунка 8, в растворе одновременно присутствуют координационные соединения с соотношением цинка и дипептида, равным 1:2 и 1:6 и возможным составом комплексных ионов [ZnL2(H20)4]2+ и [ZnL6]2",соответственно.

В водных растворах ионы 3(3-переходных элементов находятся в виде аква-комплексов. Исследование методом электронной спектрофотометрии подтвердило факт координации триптофана и дипептида Н-Пе-Тгр-ОН в координационной сфере иона Zn2+. Методом рН-метрнческого титрования было показано, что изолейцин в области рН от 4,0 до 9,0, триптофан - от 3,0 до 10,0 и Н-Пе-Тгр-ОН - от 6,0 до 10,0 находятся в виде цвнттер-ионов (HL1), т.е. в этих областях именно форма HLr образует координационные соединения. Наличие точки эквивалентности на кривой рН-метрического титрования дополнительно подтверждает факт координации триптофана и дипептида в водных растворах ацетата цинка. Экспериментально получены следующие . значения констант диссоциации для изолейцина К| = 7,41 10"4 (рК = 3,13) и К2 = 2,45 10"'° (рК = 9,61), триптофана - К, = 1,12 10"2 (рК = 1,95) и К2 = 3,63 10-" (рК = 10,44), дипептида Н-1!е-Тгр-ОН - К, = 7,4 10"6 (рК = 5,13) и К2 = 1,45 Ю'" (рК = 10,84).

Из полученных результатов можно заключить, что при взаимодействии триптофана и триптофансодержащих дипептидов с ионом цинка происходит образование координационных соединений различного состава, причем состав координационных соединений триптофана и дипептида различен.

Иммунологическую активность полученных координационных соединений изучали in vivo по увеличению титра антител у животных, иммунизированных противотейлериозной вакциной (таблица 3),

Из таблицы 3 видно, что после координации с нонами металлов происходит увеличение иммунологической активности по сравнению с исходным дипептидом. Координация с ионом Zn2< приводит к большему увеличению иммунологической активности.

Необходимо отмстить тот факт, что после координации с ионом железа отмечается появление иммунологической активности in vivo у дипептида H-Val-Trp-OH , неактивного в тесте Е-розеткообразования. Это можно объяснить тем, что координационные соединения обладают определенными свойствами стимуляции каталитической активности белковых молекул. По-видимому, они включаются в апоферментную часть, что приводит к усилению синтеза структурных белков, которые

Таблица 3.

Иммунологическая активность исходных дипептидов и их координационных соединений с ионами 2.п2* и _

СОЕДИНЕНИЕ Титр противотейлерийных антител Увеличение титра антител, раз

РДСК ИФА

Н-Уа1-Тгр-ОН 1:5-1:20 1:50-1:800 0

Н-Уа1-Тгр-ОН +Ре3* 1:5-1:40 1:100-1:1600 2

Н-Не-Тгр-ОН 1:5-1:40 1:100-1:1600 2

Н-Ие-Тф-ОН + Ъп* 1:10-1:40 1:400-1:1600 2-8

Н-Не-Тгр-ОН + Ре2* 1:5-1:20 1:200-1:1600 2-4

Контроль 1:50-1:800 -

выполняют в организме защитные функции, то есть синтезируются антитела.

3.6. Фармакологические свойства пшкомолекулпрных нммуноактнвных пептидов и их бнокоордннационных соединений

Результаты, полученные при изучении иммунологической активности полученных соединений, послужили основанием для разработки на их основе иммуностимулирующих препаратов.

При разработке лекарственных форм низкомолекулярных имму-ноактивных пептидов был разработан иммуностимулирующий препарат тимогар, представляющий собой 0,01%-ный водный раствор иммуноак-тивного пептида. На основе бнокоордннационных соединений были разработаны иммуностимулирующие препараты: ферунол и тимофер, представляющие собой, соответственно, 0,07 и 0,0426%-ные водные растворы биокоординационных соединений низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с ионом железа (II); тимоцин, представляющий собой 0,04%-ный водный раствор биокоординационного соединения низкомолекулярного иммуноактивного пептида с ионом цинка; водный раствор биокоординацио иного соединения низкомолекулярного иммуноактивного пептида с ионом меди (II).

Проверка стерильности разработанных препаратов показала, что они являются стерильными по отношению к аэробным и анаэробным

бактериям и контамннации грибами.

Перед изучением токсических свойств разработанных препаратов было необходимо установить их разовую дозу. При этом за основу был выбран тимоген - ближайший аналог разработанных препаратов. Его разовая доза равна 1 мл 0,01%-ного раствора (100 мкг по пептиду) на 100 кг живого веса животного. Поэтому для разработанных препаратов была установлена такая же разовая доза - 1 мл препарата на 100 кг живого веса животного.

Результаты изучения токсических свойств разработанных препаратов приведены в таблице 4,

Из полученных данных видно, что разработанные препараты можно отнести к практически нетоксичным. При одно- и многократном (10 дней) введении они не вызывали признаков интоксикации у лабораторных и сельскохозяйственных животных. Токсическими свойствами обладало только биокоордннацнонное соединение иммуноактивного пептида с ионом меди (II). В связи с этим дальнейшие исследования его биологических свойств не проводили.

Таблица 4.

Токсические свойства разработанных препаратов

Препарат Вид животных Определение токсичности

Остра» Хронически

Количество разовых доз Признаки интоксикации Количество разовых доз Признаки интоксикации

Тимогар Белые мыши II000 Отсутствуют ■

Ферунол Кролики 1000 Отсутствуют

Тимофер Белые мыши 7000 Отсутствуют 1785 Отсутствуют

Кролики 1428 Отсутствуют 714 Отсутствуют

Овцы 1071 Отсутствуют -

Телята 1071 Отсутствуют -

Тимоцин Белые мыши 7000 Отсутствуют 1785 Отсутствуют

Кролики 1428 Отсутствуют 714 Отсутствуют

Овцы 1071 Отсутствуют -

Телята 1071 Отсутствуют

Биокоорди - е соединение пептид» с медью Белые мыши 500 Отек, некроз

Белые мыши 2500 Отек, некрот -

Белые мыши 5000 Гибель жн»-х -

При изучении стабильности препаратов в процессе длительного хранения было показано, что такие показатели качества препарата, как внешний вид и цвет, наличие механических примесей, рН водного раствора, стерильность, пирогенность, токсичность, содержание действующего вещества находятся в пределах, допускаемых Государственной Фармакопеей, в течение 2 лет. Данные, полученные для

тимоцина и тимогара, позволили установить срок годности препаратов равным 2 годам.

3.6. Общее влияние препаратов на организм животных

В ряде исследований (Ата-Курбанов Э.А.,Шалимов А.Ю., 1994; Кахаров Б.А. и др., 1994; Придыбайло Н.,Иванов А., 1992; Тыщенко И.П. и др., 1992) сообщалось о положительном влиянии препаратов • тимуса на организм сельскохозяйственных животных и птицы.

В связи с этим было изучено влияние разработанных препаратов на организм лабораторных и сельскохозяйственных животных, которое оценивали по увеличению их привеса.

Первоначально было изучено влияние тимогара на привес белых мышей. В качестве препарата сравнения использовали известный иммуностимулятор тимоген. Результаты исследований показали, что в группе мышей, когорым вводили тимоген в дозе 0,025 мл 0,01%-ного раствора на животное (разовая доза препарата увеличена в 8,1-11,6 раза) средний привес составил 0,86 г (3,2%); в группе мышей, которым вводили тимогар в дозе 0,025 мл 1%-ного раствора на животное (разовая доза препарата увеличена в 776-1250 раз) этот показатель составил 2,35 г (8,8%), у животных, которым вводили тимогар в виде 0,01%-ного раствора в'дозе 0,025 мл на животное (разовая доза препарата увеличена в 10,6-11,1 раза) средний привес составил 2,6 г (9.9%); в контрольной группе - 0,9 г (2,1%). Наименьшее влияние на привес животных оказало применение тимогена, наибольшее - тимогара в виде 0.01%-ного раствора. Эти результаты свидетельствуют о том, что оптимальной концентрацией для тимогара является 0,01%-ная и тимогар оказывает более сильное положительное влияние на организм животных по сравнению с тимогеном.

Также было изучено влияние железосодержащего препарата ферунола на привес и сохранность поросят 3-5-дневного возраста. Поросятам опытной группы (61 гол.) ферунол вводили внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг 0,07%-ного раствора (70 мкг препарата), контрольным животным (37 гол.) ферунол не вводили. За период проведения опыта (30 дней) среднесуточный прирост массы тела опытных животных по сравнению с контрольными был выше на 7-10%, сохранность поросят опытной группы к концу исследования составила 92,2%, что на 12% выше, чем в контрольной группе.

Можно, по-видимому, объяснить действие исследованных препаратов тем, что они активируют те ветви метаболических процессов, которые ответственны за биосинтез структурных элементов клетки, что способствует повышению привеса животных.

3.7. Влияние препаратов на основе ннзкомолекуляриых иммуноактниных пептидов и их бнокоординационных соединений на некоторые показатели иммунной системы организма.

Одними из показателей нормальной деятельности иммунной системы организма являются уровень гуморального и клеточного иммунного ответа, а также факторы неспецифической антиинфекционной резистентности организма. Показателем гуморального иммунитета является количество вырабатываемых организмом на введение антигена антител, а факторов неспецифической резистентности - лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови (Караулов А.В.,1999; Петров Р.В.,1987). Поэтому иммунологическую активность разработанных препаратов изучали при их совместном применении с различными вакцинами.

При изучении влияния тимогара на уровень антител и биохимические показатели крови у цыплят при совместном применении с ассоциированной вакциной против колибактериоза и стафилококкоза для сравнения использовали тимогеи. В опыте находилось 30 цыплят, разделенных на 3 аналогичные группы. Первую группу цыплят иммунизировали только вакциной, вторую - вакциной в сочетании с тимогеном, третью - в сочетании с тимогаром. Вакцину применяли двукратно в суточном и месячном возрасте аэрозольным методом в дозе 1,5 мл/м5 в общем объеме помещения 40 м1 и времени экспозиции 40 мин. Тимоген и тимогар вводили внутримышечно в дозе 20 мг/кг. У цыплят всех групп в сыворотке крови определяли содержание общего белка, белковых фракций и титр специфических антител. Полученные результаты представлены в таблице 5. До вакцинации почти все изученные биохимические показатели крови у цыплят были отличными от нормы. После вакцинации и ревакцинации происходила нормализация биохимических показателей крови и увеличение тнзра специфических антител. Лучшая степень нормализации биохимических показателей крови и наибольшее увеличение титра специфических антител отмечались в группе цыплят, иммунизированных вакциной совместно с тимогаром.

Пммуностимулирущую активность ферунола, тимофера и тимоцина определяли по увеличению титра антител у телят, иммунизированных проги.'отейлериошой вакциной аналогично определеник-иммунологической активности синтезированных пептидов. Полученные результаты представлены в таблице 6. Применение разработанных препаратов совместно с противотейлериозной вакциной способствует увеличению титра антител у иммунизированных животных. Наибольшее увеличение титра антител наблюдается при 2-3-кратном введении

Таблица 5.

Биохимические показатели крови и титр специфических антител при совместном применении тимогена, тнмогара и ассоциированной вакцины против стафилококкоза и колибактериоза цыплят

Показатели До вакцинации После вакцинации После ревакцинации Норма

1 2 3 1 2 3 1 2 3

Общий белок, г/л 32,0 35,0 30,0 55,0 54,0 60,0 38,0 36,0 43,0 43-59

Альбумины, % 25,0 22,8 40,0 50,6 55,1 46,7 34,5 34,5 31,2 31-35

а-глобулины, % 15,0 33,3 30,0 25,3 22,5 19,7 18,7 26,5 18,0 17-19

Р-глобулины, % 30.0 30,0 12,0 5,0 5,7 4,7 7,1 5,5 8,5 11-13

у -глобулины, % 20,0 13,9 18,0 18,1 16,7 28,9 39,7 30,0 42,3 35-37

Тигр антител против возбудителей: - стафилококкоза - колибактериоза 1:32 1:16 1:32 1:16 1:32 1:16 1:64 1:16 1:64 1:32 1:256 1:64 1:64 1:16 1:128 1:32 1:512 1:128 . -

Таблица 6.

Влияние препаратов на титр антител при совместном применении с противотейлернозной вакциной

Препарат Доза препара- Длительность Титр противотейлерийных

та, мл на 100 применения. Антител

кг живого ЛИИ

веса РДСК ИФА

Ферунол 1 3-5 1:5-1:40 1 100-1:1600

Контроль - 1:5-1:20 1 50-1:800

Тимофер 1 1:5-1:40 1 100-1:200

Тимофер 2 3 1:10-1:40 1 200-1:1600

Тимофер 3 3 1:10-1:40 1 200-1:800

Контроль - 1:5-1:10 1 50-1:200

Тимоцин 1 - 1 50-1:200

Тимоцин 2 3 - 1 100-1:800

Тимоцин 3 3 1 400-1:1600

Тимоцин 4 3 1 200-1:1600

Контроль - - - 1 50-1:800

Таблица 7.

Результаты определения оптимальной схемы совместного применения тнмофера, тимоцина и ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактерноза

Груп- Доза Срок Титр антител к:

па препара та. прнме нения

живот Ротавирусу, Коронавирусу Эшерихии коли

ных мл \ кг (дни) Разведение сыворотки Разведение сыворотки 1о&1 Разведение сыворотин

Т И МО Ф Е Р

1 0,01 1 3.0 ±0.4 (!:«) 3.6 ±0.2 (1 12) 7.7 ±0.1 (1 200)

2 0,02 1 3.010.4 (1:8) 3.6 ± 0 2 (1: 12) 7.7 ±0.1 (1 200)

3 0,03 1 3.2 ± 0.4 (1: Ю) 3.8 ± 0.2 (1 14) 7.7 ±0.1 (1:200)

4 0,03 3 3.8 ± 0.2 (1: 14) 4.6±0.4 (1 24) 8.2 1 0.2 (1: 300)

5 0.02 5 4.0 ± 0.4 (1: 16) 4.6 ± 0.4 (1 24) 8.2 ± 0.2 (1:300)

6 Вакцнка - 3.2 ± 0.4 (1: Ю) 3.4 ± 0.4 (1 10) 7.7 ±0.1 (1 200)

7 0,02 3 - - - - . -

т и мои И н

1 0.01 1 3 .0 ±0.4 (1:8) 3.5 ±0.2 (1 12) 7.7 ±0.1 (1 200)

2. 0.02 1 3.0 ±0.4 (1:8) 3.5 ±0.2 (1 12) 7.7 ±0.1 (1 200)

3. 0.03 1 3.2 ± 0.4 (1: Ю) 3 .8 ±0.2 (1 14) 7.7 ±0.1 (1 200)

4 0.03 3 4.« 1 0.2 (1:28) 5.0 ±0.4 (1 32) 8.65±0.05 (" 400)

5 0,02 5 4.6 ± 0 4 (1:24) 5.2 ±0.3 (1 36) 8.65±0.05 (1 400)

6 Вакцина - 3.2 ±0.4 <1:Ю) 3.4 ± 0.4 (1 Ю) 7.7 ±0.1 (1 200)

7 0,02 3 - - - .

Примечание: препараты вводили I раз в супси;в таблице приведено среднее значение разведения сыворотки

препаратов.Большой урон животноводству наносят рота-, коронавирусные штериты и колибактериоз молодняка крупного рогатого скота (Сатторов И.Т.,1995; Сатторов И.Т. и др.,1995). Основной мерой профилактики данных заболеваний является вакцинация крупного рогатого скота ассоциированной вакциной против данных заболеваний. Потому было щучено влияние тимофера и тимоцина на титр антител у животных, иммунизированных данной вакциной.

Первоначальный опыт был проведен на 12 стельных коровах, которых разделили на 3 равноценные группы. Животным первой группы вводили вакцину совместно с тимоцином, второй - только вакцину, животных третьей группы оставили в качестве контроля и не иммунизировали.

Проведенные исследования показали, что до иммунизации в сыворотке кропи коров антитела к ротавирусу содержались в титре 2,5± 0,1 51<>й2, (среднее разведение сыворотки 1: б), коронавирусу -3,0±0,2 ^2 (1:8), эшерихии коли - 1:60±25, После иммунизации титр антител к ротавирусу у животных первой и второй групп достигал 8.4±0.25 1о£2 (1:300) и 6,5±0,2 ^ (1:100). коронавирусу - 9,8±0,3 ^ (1:1 ООО) и 7,5±0,2 1о^2 (1:200), эшерихии коли - 1:1800±200 и 1:800±100, соответственно. Бактерицидная и лизоцимная активность сывороткя крови до применения препарата составляла 65,0±0,5 и 3,1±0,25%, соответственно. Через 21 день после ревакцинации бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови составляла, соответственно, у животных первой группы - 80.2±0,8 и 4.9±0,2, второй - 69.0±0.75 и 3,3±ОМ5%.

Таким образом, применение тимоцина совместно с ассоциированной вакциной способствует усилению гуморального иммунного ответа и факторов неспецифической антиинфекционной резистентности организма.

После этого были определены оптимальные схемы применения тимофера, тимоцина и ассоциированной вакцины против рота-, коро-навирусных энтеритов и колибактериоза телят. Опыты по каждому препарату проводили на 28 головах крупного рогатого скота, разделенных на 7 аналогичных групп. Животным 1-5 групп вакцину вводили совместно с препаратами, шестой - только вакцину, седьмой -только препараты. Полученные результаты приведены в таблице 7..

Наибольшее увеличение количества специфических антител к каждому вакцинному антигену отмечалось при применении препаратов в

дозах 0,02 и 0,03 мл/кг в течение 3-5 дней. Применение тимофера способствовало увеличению титра антител к рота-, коронавирусу н эшерихии коли в 1,5 1,7 и 1,5 раза, соответственно, тимоцина -2,8, 3,6 и 2' раза соответственно.

3.8. Влияние разработанных препаратов на эффектнпность лечення некоторых заболеваний сельскохозяйственных животных

К заболеваниям сельскохозяйственных животных, сопровождающихся нарушениями иммунологического гомеостаза организма, относится тейлериоз крупного рогатого скота (Ананьев 0.П.,Зуев В,В., 1983; Бурба Г.Л.; 1983. Hall F.R., 1988; Morrison W.J., Goddeeris В. М. ,1989). В связи в тем, что разработанные препараты обладают иммуностимулирующей активностью, их совместное применение с традиционными препаратами при лечении заболеваний, сопровождающихся нарушениями иммунологического гомеостаза организма может оказать положительное влияние па эффективность лечения.

Поэтому было изучено влияние известного иммуностимулятора тимогена и разработанного препарата тимогар на эффективность лечення тейлериоза крупного рогатого скота при совместном применении со специфическим препаратом примахином. Результаты исследований показали, что более полная нормализация биохимических показателей крови в процессе лечення отмечалась в группе животных, которых лечили с применением тимогара. Срок лечения в группе животных, которых лечили только примахином, составлял 5-6 дней, примахином и тимоге-ном - 4-5 дней, примахином и тимогаром - 3-4 дня,

Пневмонии и бронхиты относятся к неспецифическнм воспалительным заболеваниям легких (Караулов А.В.,1999). В связи с этим было изучено влияние тимогена и тимогара на эффективность лечения бронхопневмонии молодняка крупного рогатого скота. При этом было показано, что применение иммуностимулирующих препаратов совместно с химиотерапевтическими способствовало повышению эффективности лечения по данным рентгенофлюорографических исследований до 90%, увеличению среднесуточного привеса животных на 12-40% и более полной нормализации биохимических показателей крови по сравнению с животными, которых лечили только химиотерапевтическими препаратами. Лучшие результаты были получены в тех группах, где применяли тимогар.

Поскольку применение тимофера совместно с противотейлериозной вакциной способствовало усилению гуморального иммунного ответа у вакцинированных животных, было изучено его влияние на титр антител у животных, больных тейлернозом. При этом было показано, что применение тимофера способствовало увеличению титра проти-вотейлернйных антител.

При изучении влияния тимофера и тимоцина на эффективность лечения пневмоэнтерита телят при совместном применении с химиотерапевтическими препаратами и определении оптимальной схемы их применения было обнаружено, что наибольшая эффективность лечения

была достигнута при применении препаратов в дозах 0,02-0.05 мл/кг в течение 6 дней. Применение тнмофера увеличивало эффективность лечения на 10%, тимоцина - на 20%, срок лечения животных сокращался в 10-14 до 6-7 дней.

Таким образом, применение препаратов, разработанных на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами цинка и железа (II) в комплексе с хи-миотерапевтическими препаратами повышает эффективность лечения различных заболеваний сельскохозяйственных животных.

3.9. Результаты производственных испытаний разработанных

препаратов

Результаты экспериментальных исследований по изучению фармакологических свойств и биологической активности разработанных препаратов послужили основанием для проведения испытаний их в производственных условиях.

Эффективность применения тимогара совместно с ассоциированной вакциной. против колибактериоза и стафилококкоза в производственных условиях изучали на 120 цыплятах, разделенных на 3 группы по 40 голов в каждой аналогично проведению экспериментальных исследований. Результаты испытаний показали, что применение тимогара вызывало увеличение титра специфических антител в 16 раз, тимогена - 8 раз.

При проведении производственных испытаний совместного применения ферунола, тимофера и тимоцина с противотейлериозной вакциной животным опытных групп вводили вакцину совместно с препаратом, контрольных - только вакцину. Результаты производственных испытаний показали, что применение совместно с вакциной разработанных препаратов способствует усилению гуморального иммунного ответа у вакцинированных животных. Наибольшей иммуностимулирующей активностью обладал тимоцин (увеличение титра антител в 4-8 раз), наименьшей - ферунол (увеличение титра антител в 2 раза).

Результаты производственных испытаний совместного применения тимофера, тимоцина и ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят показали, что в тех группах животных, где применяли разработанные препараты, титр специфических антител значительно выше, чем в группах животных, которым вводили только вакцину. Применение тимофера способствовало увеличению титра специфических антител к рота-, коронавирусу и эшерихни коли в 3,2,2,8 и 2 раза, соответственно, тимоцина - в 3,2,3,0 и 2 раза.

Также в производственных условиях было изучено влияние тимофера и тимоцнна на эффективность лечения пнэвмоэнтернтов телят при их совместном применении с П13ЭНТИ и регидропектатом. Животных контрольной группы лечили с применением такгивина, иодинола и регидрата. Применение совместно с химиотерапевтическими препаратами тимофера и тимоцина способствовало увеличению эффективности лечения до 90 и 94,2%, соответственно, и сокращало срок лечения с 12 до 7 дней.

На основании экспериментальных опытов и производственных испытаний на препараты тимогар, ферунол, тимофер и тимоцин была разработана нормативно-техническая документация, которая утверждена Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан.

ЗЛО. Результаты применения лекарственного препарата на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов при лечении некоторых нммунозавпенмых заболеваний человека.

С разрешения Министерства здравоохранения Республики Таджикистан были проведены клинические испытания тимогара при лечении некоторых нммунозависимых кожных (псориаз и нейродермит)*, ревматологических (ревматоидный артрит, болезнь Бехтерева и др.) заболеваний.

В группе больных псориазом находилось 34 человека в возрасте от 20 до 60 лет с давностью заболевания от 1 года до 10 лет. Результаты анализов показателей иммунологического статуса подтвердили имеющиеся в литературе (Рубине А.Я.,1987;Шарапова Г.Я. и др.,1989) данные об увеличении содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) при псориазе. В нашем случае отмечалось более чем двукратное поаышение содержания ЦИК (Р < 0,001). Полученные нами данные о более чем двукратном увеличении суммарного фагоцитарного эффекта (СЭФ) (Р < 0,02) согласуются с полученными ранее данными (Шарапова Г.Я. и др., 1989; Кешилева З.Б. и др., 1990) об увеличении фагоцитарного индекса при различных формах псориаза. Остальные показатели иммунной системы находились в пределах физиологической нормы.

В той группе больных, которых лечили комбинированным способом с применением тимогара на 1-2 дня раньше исчезал зуд, прекращалось

•Исследования проводились под руководством член-корреспондента АН РТ, доктора медицинских наук, профессора Зоирова П.Т.

появление новых псориатических элементов, чем в группе больных, которых лечили традиционным способом. В этой же группе больных гораздо выше была эффективность лечения.

Измененные иммунологические показатели в обеих группах больных, хотя и имели тенденцию к нормализации, но после лечения оставались завышенными. Однако более ярко выраженная положительная динамика этих показателей отмечалась в группе больных, которых подвергали комбинированному лечению. Содержание ЦИК в этой группе снизилось со 127,3±31,0 до 65,2±17,4 г/л, СЭФ ~12,7±2,1 до 8,6±1,8%. У больных, которых лечили традиционным способом, содержание ЦИК снизилось со 117,3±32,6 до 86,9±23,6 г/л , СЭФ - с 10,3±3,2 до 9.6±2.1%. Значение этих показателей в контроле составляло, соответственно, 50,0±2,5 г/л и 5,5±1,94%.

В группе больных нейродермитом, подвергнутых традиционному лечению, было 20 человек в возрасте 18-29 лет с давностью заболевания до 15 лет. После лечения клиническое выздоровление было достигнуто у 20% значительное улучшение - у 35%, улучшение - у 25%, терапия не оказала эффекта - у 20% больных. В этой группе больных из 13 показателей иммунной системы измененными было 7, а после курса лечения нормализовались два - содержание 1£А и С 3 фракции комплемента. Остальные показатели, хотя и имели тенденцию к нормализации, оставались отличными от нормы.

В группу больных нейродермитом, которых лечили традиционными средствами совместно с тимогаром, входили 20 больных. В этой группе клиническое выздоровление было достигнуто в 35% случаев, значительное улучшение - 50%, улучшение - 15%. Больных, которым комбинированное лечение не помогло, в этой группе не было. Из 13 изученных показателей иммунного статуса измененными было 9: отмечено снижение содержания Т-лимфоцитов (54,2±5,7, в норме 63,4±2,7%), Т-супрессоров (14,7±1,6, в норме 21,9±1,4, С 4 фракции комплемента (0,22±0,02, в норме 0,29±,03 г/л); повышение содержания В-лимфоцитов (23,7±2,6, в норме 19,2±1,2%), (3,06±0.36, в норме 2,И±0.18 г/л). ^М (2.01±0,29. в норме 1,73±0,15 г/л), ДО (18,0±2,7, в норме 12,9 ±1.2 г/л). ^Е (348,6±2,2, в норме 82,4±9,3 кЕ/л), С 3 фракции комплемента (0,99±0,12, в норме 0,69±0.06 г/л). После проведения комбинированного лечения оставался повышенным только уровень ^Е , хотя он снизился до 181,2±21,4 кЕ/л, Остальные 8 измененных параметров нормализовались.

Таким образом, тимогар не только повышает эффективность лечения таких иммунозависимых дерматозов, как псориаз и нейродермит, но и оказывает ярко выраженное положительное влияние на иммунную систему организма.

Иммуностимулирующий препарат тимогар применяли в комплексе с традиционными препаратами при лечении нефрологических (гломе-рулонефриты), ревматологических (ревматоидный артрит, болезнь Бехтерева, ДОА коленных суставов, системная склеродермия) заболеваний. Результаты предварительных исследований показали, что во всех случаях при применении тимогара сокращался срок и увеличивалась эффективность лечения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из актуальных задач, решаемых биохимией и иммунофар-макологией является создание высокоэффективных и специфичных иммуномодулирущих препаратов. Целенаправленное создание таких препаратов возможно на основе структурных закономерностей, объясняющих наличие иммунологической активности у низкомолекулярных иммуноактивных пептидов, обладающих активностью тимусных гормонов, в частности, аналогов тимопентина - активного центра молекулы тимопоэтина (фрагмент 32-36) и аналогов дипептида H-Glu-Trp-OH, проявляющего активность тимусного гормона тимознна a i.

С целью выявления таких закономерностей нами были изучены изменения вероятной вторичной структуры участка 32-37 молекулы тимопоэтина при аминокислотных заменах в положениях 34, 35, 36 и 37. При этом было установлено, что проводимые замены приводят к изменению Р-структурной конформации участка активного центра молекулы тимопоэтина.

При синтезе аналогов тимопентина было показано, что наиболее оптимальным является ступенчатое наращивание пептидной цепи начиная с С-конца методом активированных (пентафторфениловых) эфиров, получаемых с помощью дипентафторфенилкарбоната, которое позволяет получать пептиды без выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки промежуточных активированных эфиров и защищенных пептидов. Применение данного подхода при синтезе аналогов дипептида H-Glu-Trp-OH позволяет исключить использование ВЭЖХ для очистки свободных пептидов как метода, требующего специального оборудования.

При изучении иммуностимулирующей активности синтезированных пептидов, установлено наличие положительной корреляции между активностью пептидов in vitro в тесте Е-розеткообразования и in vivo no увеличению титра антител при совместном применении с ' противотейлериозной вакциной.

При структурно-функциональных исследованиях в ряду аналогов тимопентина установлено, что для проявления этими пептидами им-

мунологической активности необходимо, чтобы N-концевым остатком в положении 32 обязательно был аргинин и аминокислотные замены, приводящие к получению данного аналога, способствовали сохранению Р -структурной конформации участка 32-37 молекулы тимопоэтина. Активность гексапептида H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-OH, предложенного на основе теории квазициклизации и расчетов вторичной структуры участка 32-37 молекулы тимопоэтина, как in vitro , так и in vivo была равна активности тимопентина. Это подтверждает предположение о том, что данный гексапептид образует при взаимодействии с рецептором квазициклическую структуру.

При сопоставлении иммунологической активности триптофансо-держащих дипептидов и их последовательности было показано, что для проявления ими иммуностимулирующей активности необходимо, чтобы остаток триптофана был вторым, а первый аминокислотный остаток содержал боковую карбоксильную группу.

Применение комплексообразования для увеличения специфической активности триптофансодержащих дипептидов позволило значительно повысить их иммуностимулирующую активность.

Иммуностимулирующие препараты тимогар, ферунол, тимофер и тимоцин, разработанные на основе триптофансодержащих дипептидов и их биокоррдинационных соединений с ионами цинка и железа (II) являются практически нетоксичными для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

На основании результатов изучения биологических свойств разработанных препаратов и имеющихся литературных данных о других иммуностимулирующих препаратах можно предложить обобщающую схему механизма их участия в стимуляции и регуляции иммунного ответа (рис. 9).

При совместном применении противотейлериозной вакцины, ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят, ассоциированной вакцины против сгафилококкоза и колибактериоза птицы и разработанных препаратов происходит увеличение уровня антител у иммунизированных животных и цыплят,, что свидетельствует об усилении метаболических процессов с синтезом структурных элементов путем увеличения активности ферментов, участвующих в этих процессах (усиление гуморального иммунного ответа) и, соответственно, увеличении количества клеток, развивающихся по

ТИМОГАР

2 й

5 н и

■о >»

г---. а

о а; н

я к о

К ЕГ СИ

О СО а о

О (Я гзк

V X__ х К-- -> о> ч н аЗ

£н К У ЯУЭ

в К) К

а) X

к ж -0) о

стволовая кроветворная клетка

предшественник Т- и В-лимфоцитов

предшественник Т-лиифоцитов

кортикальный тимоцит

медуллярный тимоцит

Тх1)

НЕСПЕЦИФИ-

ЧЕСКИЯ

ЦИТОЛИЗ

ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

РЕАКЦИИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА

стииулирующее влияние

иодулирупцее влияние

РЕАКЦИИ

ГУМОРАЛЬНОГО

ИММУНИТЕТА

Рио, 9. ВоемояныП механизм участия разработанных препаратов в иымунологическях процессах (г-, примере тимогара)

линии Т-хелперные клетки (ТхО) -----Т-хелперные клетки 2 типа (Тх2) -

— В-лимфоцит ----- антителообразующая клетка -----антитело.

Следовательно, препараты оказывают стимулирующее влияние и воздействуют на медуллярные тимоциты.

При лечении воспалительных заболеваний применение разработанных препаратов повышает эффективность лечения. В этом случае препарат воздействует на медуллярные тимоциты, способствуя увеличению количества ТхО-клеток, дифференцирующих на Т-хелперные клетки 1 и 2 типов (Тх1 и Тх2), выделяющие интерлейкины-2, -4, интерферон- у (Инф-у), факторы некроза опухолей-а, -Р (ФНО-а , -Р). способствующие активации макрофагов, нормальных киллерных клеток (НК), Т-киллерных клеток (Тк), участвующих в воспалительных процессах, следствием чего является увеличение их бактерицидности и цитотоксичности.

В случае лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями деятельности иммунной системы (нейродермит), применение препарата способствует нормализации показателей иммунного статуса организма и, следовательно, оказывает модулирующее действие. При этом, возможно, клетками-мишенями для препарата оказываются предшественники Т- и В-лимфоцитов (увеличивается количество клеток, развивающихся по Т-пути) и медуллярные тимоциты (увеличивается количество и активность Т-супрессорных клеток).

Итак, вышесказанное позволяет сформулировать новое представление о том, что синтезированные пептиды и их биокоординационные соединения с ионами железа (II) и цинка оказывают . влияние на процессы созревания и дифференциации Т-лимфоцитов, обеспечивающих развитие Т-зависимого гуморального и клеточного иммунного ответа и применяются в качестве иммуностимулирующих и иммуномодулирующих препаратов б ветеринарии и могут быть использованы для этой цели в медицине при лечении иммунозависимых заболеваний человека

ВЫВОДЫ

1.Усовершенствованы некоторые способы получения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами железа (II) и цинка.

2.Структурно-функциональные исследования особенностей синтезированных аналогов тимопентина показали, что пептиды, полученные при аминокислотных заменах, сохраняющих при теоретическом анализе р-структуру участка активного центра молекулы тимопоэтина,

обладают иммуностимулирующей активностью in vitro в тесте I:-розеткообразования и in vivo усиливают антителообразование у животных, иммунизированных противотейлериозной вакциной.

3. Синтезировано 26 триптофансодержащих пептидов - ди-, три-, тетра- и пентапептидных аналогов дипептида H-Glu-Trp-OH проявляющего активность тимусного гормона тимозина а |. Установлено, что для проявления иммуностимулирующей активности дипептидами необходимо, чтобы вторым аминокислотным остатком был триптофан и первый аминокислотный остаток содержал боковую карбоксильную группу.

4. Выявлено, что иммуностимулирующая активность биокоординационных соединений дипептидов H-Val-Trp-OH и Н-Не-Тгр-ОН с ионами железа (II) и цинка, а также дипептида Н-Ие-Тгр-ОН с ионом цинка в 2-8 раз превышает активность исходных дипептидов.

5. Установлено, что лекарственные препараты тимогар, ферунол, тимофер и тимоцин, разработанные на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами железа (II) и цинка, являются практически нетоксичными для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

6. Показано, что применение препарата ферунол с профилактической целью способствует повышению привеса 3-5-дневных поросят на 7-10% и сохранности - на 12%, применение с противотейлериозной вакциной способствует повышению уровня противотейлерийных антител в 2 раза.

7. Выявлено, что препарат тимогар при использовании в ветеринарии в 2-8 раз увеличивает титр специфических антител у цыплят, иммунизированных ассоциированной вакциной против стафилококкоза и колибактериоза, а также повышает эффективность и сокращает срок лечения тейлериоза крупного рогатого скота и бронхопневмонии телят. Препарат тимогар повышает эффективность лечения псориаза и нейродермита, оказывает корригирующее влияние на измененные показатели иммунологического статуса организма.

8. Установлено, что препараты тимофер и тимоцин повышают эффективность лечения пневмоэнтеритов телят до 90 и 92,3%, соответственно и сокращают срок лечения с 12 до 7 дней. Показано, что применение тимофера и тимоцина совместно с ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят, способствует увеличению уровня специфических антител в 2-3 раза, совместно с противотейлериозной вакциной - в 2-8 раз.

9. Предложен возможный механизм участия разработанных препаратов в процессах регуляции иммунного ответа, одной из стадий

которого является активация образования структурных элементов антител, что приводит к сохранению стабильности стационарного состояния живого организма, повышению эффективности действия препаратов, сокращению сроков лечения заболеваний, улучшению общего физиологического состояния живого организма.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Инструкция по приготовлению и контролю железосодержащего препарата ферунол. Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 23.02.98 г.

2. Железосодержащий препарат "Ферунол". Технические условия. Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 23.02.98 г.

3. Наставление по применению железосодержащего препарата "Ферунол". Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 23.02.98 г.

4. Инструкция по изготовлению и контролю препарата"Тимоцин". Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 17.03.98 г.

5. Препарат "Тимоцин". Технические условия. Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 17.03.98 г.

6. Наставление по применению препарата Тимоцин". Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 17.03.98 г.

7. Инструкция по изготовлению и контролю препарата 'Тимофер". Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 4.06.99 г.

8. Препарат «Тимофер». Технические условия. Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 4.06.99 г.

9. Наставление по применению препарата «Тимофер». Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 4.06.99 г.

10. Инструкция по изготовлению и контролю препарата «Тимогар» (Thymogarum). Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 6.07.99 г.

11. Препарат "Тимогар" ( Thymogarum ). Технические условия. Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 6.07.99 г.

12.Наставление по применению препарата "Тимогар" (Thymogarum ). Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 6.07.99 г.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Дейгин В.И., Короткое A.M., Помогайбо C.B., Бобиев Г.М., Гречанинова Л.А., Халиков Ш.Х., Михальцов А.Н., Титов М.И. Синтез и исследование биологической активности иммуноактивных пептидов// VII Всес. Симп. по химии белков и пептидов.-Таллин,1987.-С. 173.

2. Бобиев Г.М. Синтез низкомолекулярных иммуноактивных пептидов// Респ. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Тез, докл.-Душанбе, 1987.-С,49.

3. Бобиев Г.М. Синтез трипептида H-Lys-His-Gly-NH2 бурсина -

гормона бурсы Фабрициуса//Респ. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Тез. докл.-Душанбе, 1989.-С.65-66.

4. Бобиев Г.М. Синтез аналога бурсина//Мат. науч. конф. "Теоретические и прикладные проблемы химии".-Душанбе,1995.-С.59.

5. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А„ Тагоймуродов М., Хайдаров К.Х. Изучение различных методов удаления карбобензоксигруппы при синтезе нового аналога бурсина//Докл. АН Республики Таджикистан,-1996.-Т.ХХХ1Х.-№ 11-12.-С.34-36.

6. Бобиев Г.М. Биологические свойства низкомолекулярных иммуно-активных пептидов//Мат. науч. конф., поев. 50-летию Института химии им.

B.И.Никитина АН Республики Таджикистан. Тез. докл.-Душанбе, 1996.-

C.22.

7. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х, Синтез и иммуногенные свойства комплекса низкомолекулярного иммуноактивного пептида с железом//Докл. АН Республики Таджикистан,-1997.-.Т. XL.-№ 1-2.-С.45-48.

8. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т. Иммуностимулирующая активность пептидов, содержащих С-концевой остаток аргинина, полученных синтетическим путем//Мат. 1 конгр. мед. работников Республики Таджикистан "Медицина и здоровье".-Душанбе,1997.-Т.1.-С.246-249.

9. Бобиев Г.М. Синтез аналогов днпептидов, обладающих активностью тимозина а | и их биологическая активность/ЛЗестник педагогического университета.-Душанбе,1997.-№ 6.-С.7-11.

10. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Влияние аминокислотных замен на биологическую активность иммуноактивных пептидов//Там же.-№ 6.-С. 18-26.

11. Бобиев Г.М. Синтез бурсина и его гибридного аналога с дипеп-тидом H-Glu-Тгр-ОШ/Там же.-№ 8.-С.66-69.

12. Бобиев Г.М. Связь между аминокислотным составом и биологической активностью дипептидов//Мат. науч. конф. «Морфологические и физиологические основы адаптации организма».-Душанбе,1997.-С.42-43.

13. Бобиев Г.М.. Сатторов И.Т., Хайдаров К.Х. Синтез и биологическая активность новых аналогов дипептнда H-GIu-Trp-OH и его полимеров//Мат. науч. конф., поев. 95-летию со дня рожд. академика АН Республики Таджикистан В.И.Никитина. Тез. докл.-Душанбе, 1997.-С.89-60.

14. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т., Хусайнов А.А. Эффективность нового иммуностимулирующего препарата тимогар при лечении псориаза и нейродермитаУ/Центральноазиатский журнал "Новости дерматологии и венерологии ".-Ташкент, 1998.-№ 2.-С.57-59.

15. Бобиев Г.М., Сатгоров И.Т., Хайдаров К.Х. Эффективность нового иммупостимулирущего препарата тимоцина при вакцинации телят против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза//Докл. Российской академии сельскохозяйственных наук,-1998.6.-С.37-39.

16. Бобиев Г.М., Бобиев Х.Л. Модификация метода активированных •»фиров для синтеза дипептида валил-триптофан//Докл. АН Республики Таджикистан.-1998.-Т XU.-№ 1-2.-С.30-33.

17. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Синтез новых аналогов тимопентина//Там же.-С.34-37.

18. Бобиев Г.М., Сатгоров И.Т., Нораев Р.Х. Усиление антителообразования при использовании металлосодержащих иммуиоактивных. пептидов для профилактики и лечения животных//Рук, деп. в ВИНИГИ.-№ 1868-В98.-14 с.

19. Бобиев Г.М. Влияние синтетических аналогов тимусных гормонов на организм животных при бронхопневмонии и тейлериозе//Там же.-№ 1867-В98.-15 с.

20. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т., Расулов У.Р., Хусайнов A.A. Применение нового иммуномодулирущего препарата тимогара при лечении некоторых иммунозависимых заболеваний//Там же.-№ 1866-В98.-19 с.

21. Бобиев Г.М., Расулов У.Р. Повышение эффективности лечения некоторых суставных заболеваний в помощью пептидного аналога тимусных гормонов//1У науч.-практ. конф. «Проблемы патологии человека и последипломного образования». Сб. статей:-Душанбе, 1998.-С.99-103.

22. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т., Хусайиов A.A., Бадалов Э.Т. Клинико-экспериментальнос изучение нового биостимулируюшего и имму-номодулирующего препарата тимогара//3дравоохранение Таджикистана.-1998 —№ 2.-С.29-33.

23. Бобиев Г.М.. Расулов У.Р., Хайдаров К.Х. Эффективность применения тимогара при лечении некоторых нефрологичеоких и ревматических заболеваний/ЛГам же.-С,33-36.

24. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х. Синтез и биологическая активность пептидов, содержащих у -пептидную связь//Диапюстика, лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-Душанбе. 199.8.-С. 57-63.

25. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Структурно-функциональные взаимоотношения в ряду аналогов тимопентина//Там же.-С.63-68.

26. Бобиев Г.М., Хайдаров К.Х. Применение комплексов иммуноактивных пептидов при лечении кровепаразитарных ■заболеваний//Мат. конф., поев. 90-летию со дня рожд. член-корр, АН Республики Таджикистан Шукурова О.Ш.-Вестник педагогического университета.-Душаибе,1998.-С.31.

27. Бобиев Г.М., Бо6ns8 Х.А., Хайдаров К.Х. Биологические свойства раствора координационного соединения иммуноактивного пептида с ионами металлов//Мат. Межд. науч.-практ. конф., поев. 80-летию со дня рожд. Одного из основателей Таджикского технического университета Сулейманова A.C. Тез.докл.-Душанбе,1998.-С.31.

28.Бобиев Г.М., Хакимов Ф.Х., Вафоев 11.3. Синтез новых аналогов тимопентина//Мат. Межд. Конф. Молодых химиков «Проблемы биоорганической химии».-Наманган,1998.-С.65-69.

29. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Саидов С.С. Биологическая активность железо и цинксодержащих низкомолекулярных иммуноактивных пептидон'/Маг. Юбилейной науч.-теор. Конф., посв.50-летню ТГНУ.-Душанбе,1998.-С.76.

30.Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х. Влияние иммуномодулирующего препарата тимогар на биохимические показатели крови при бронхопневмонии крупного рогатого скота//Тр. Респ. Конф., поев. 50-летию ТГНУ «Вклад ученых биологов в развитие биологической науки в Таджикистане».-Душанбе,1998.-С.10-11.

31. Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Новый синтез тимопентина//Рук. Деп. В НПИЦентре Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№73(1217).12с.

32. Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Синтез гексапептидных аналогов тимоп6нтина//Там же.-№72( 121 б).- 12 с.

33. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д. Биологические свойства нового иммуностимулирующего препарата тимоцин/УПроблемы изыскания, синтеза и производства препаратов для ветеринарии. Мат. Докл. Науч. конф.-Самарканд, 1999.-С.42-44.

34. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Бобиев Х.А., Исупов С.Д. Разработка и применение нового иммуностимулирующего препарата ферунол в ветерииарин//Там же.-С.44-47.

35. Бобиев Г.М., Хакимов Ф.Х., Шахматов А.Н., Вафоев Н.З. Зависимость между структурой и биологической активностью в ряду аналогов тимопентина/УБиология ва экологиянинг хознрги замом муаммоларию. Халкаро илмии конференция матерналлари (1999 инл, 2324 ноябр, Самарканд).-Самарканд, 1999.-Сю113-115.

36. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д,, Хайдаров К.Х. Синтез аналогов фрагмента активного центра тимопоэтина//Изв. АН Республики Таджикистан, Отд. Физ.-мат., хим. и геол. Наук.-1999.-№ 1.-С.39-42.

37. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Чориева С.А., Бандаев С.Г. Синтез фрагмента 32-36 тимопоэтина и его аналога//Докл. АН Республики Таджикистан.-1999.-Т.Х1Л1.-№ 2.-С.51-54.

38. Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш., Шахматов А.Н. Синтез и биологическая активность новых низкомолекулярных пептидов ряда тимозина и тимопоэтинаУ/Рук. Деп. • В НПИЦентре Республики Таджикистан.-1999.- 18(1271).-Вып.2.

39. Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Изучение стабильности иммуностимулирующего препарата тимогара//Сб. статей V науч.-практ. Конф. «Теоретические и практические исследования в медицине».-Душанбе, 1999.-С.98-100.

40. Бобиев Г.М., Исупов С.Д., Гиесов А.Ш., Шахматов А.Н. Влияние ионов металлов на иммуностимулирующую активность дипептидов//Мат. Юбилейной науч.-практ. Конф., поев. 40-летию химического факультета и 65-летию д.х.н., профессора Якубова Х.М. «Проблемы современной химической науки».-Душанбе, 1999.-С.26-27.

.41. Бобиев Г.М., Нораев Р.Х., Хайдаров К.Х. Повышение эффективности профилактики и лечения тейлериоза крупного рогатого скота с помощью иммуномодулирующих препарагов//Ветерииария.-1999.-№ Ю.-С.ЗО-ЗЗ.

42. Бобиев Г.М., Хайдаров К.Х., Бадалов Э.Т. Повышение эффективности лечения тейлериоза крупного рогатого скота с помощью иммуномодулирующих препаратов//Докл. Российской Академии сельскохозяйственных наук.-1999.-№ 5.-С.40-42.

43. Бобиев Г.М. Изучение биологической активности природного и синтетических иммуностимуляторов//Изв. АН Республики Таджикистан. Отд. Биол. И мед. Наук.-1999.-№ 1-2 (140).-С.72-77.

44. Бобиев Г.М. Фармакологические свойства цинксодержащего координационного соединения пептида ряда тимусных гормонов//Изв. АН Республики Таджикистан. Отд. Биол. И мед, Наук-1999.-№ 3-4(141).-С.80-85.

Изобретения по теме диссертации

1. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Бобиев Х.А., Исупов С.Д. Способ получения иммуностимулирующего препарата ферунол. Патент Республики Таджикистан № 227 Т1. Опубл. Навиди патента. Патентный вестник.-1998.-№ 10.-С.19.

2. Бобиев Г.М. Способ получения иммуностимулирующего препарата тимофер. Патент Республики Таджикистан № 255 ТХ Опубл. Навиди патенти. Патентный вестник.-!998.-№ 10.-С. 19-20.

3. Бобиев Г.М. Способ получения иммуностимулирующего препарата тимоцин. Заявка на патент Республики Таджикистан № 98000618 от. 08.05.98 г. Опубл. Навиди Патенти. Патентный вестник.-1998.-№ 10.-С.20. Положительное решение.

4. Бобиев Г.М. Иммуностимулирующий препарат тимогар и способ

его получения.- Заявка на патент Республики Таджикистан № 98000530 от

23.10.98 г. Проложительное решение.

5. Бобиев Г.М., Нораев Р.Х., Норов Ш.Х., Бобиев Х.А., Гулов А.Х. Способ стимуляции поствакцинального противотейлериозного иммунитета у крупного рогатого скота. Заявка на патент Республики Таджикистан № 98000540 от 28.12.98 г. Положительное решение. >

6. Бобиев Г.М., Салимов Т.М., Мурватуллоев С.А. Способ повышения эффективности вакцинации птицы против колибактериоза й стафилококкоза. Заявка на патент Республики Таджикистан № 99000552 от

16.01.99 г. Положительное решение.

7. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т., Хусейнов A.A. Способ лечения псориаза. Заявка на патент Республики Таджикистан № 99000555 от 27.01.99 г. Положительное решение.

8. Бобиев Г.М.; Зоиров П.Т., Хусейнов A.A. Способ лечения нейродермита. Заявка на патент Республики Таджикистан № 99000556 от 27.01.99 г. Положительное решение.

9. Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Нораев Р.Х., Норов Ш.Х. Способ стимуляции иммунитета у крупного рогатого скота при иммунизации против тейлериоза. Заявка на патент Республики Таджикистан № 99000576 от 25.06.99 г. Положительное решение.

Особая благодарность выражается член-корреспонденту Академии Наук Республики Таджикистан, доктору медицинских наук, профессору Зоироеу Подабон Тошматовичу за неоценимую помощь, которую он оказал при проведении клинических испытаний препарата тимогар. Без его содействия данная работа не приобрела бы ту завершенность, которую она имеет сегодня.

Также особая благодарность выражается член-корреспонденту МАВШ, доктору химических наук, профессору Халикову Ширинбеку Халиковичу за помощь, оказанную при обсуждении результатов, полученных при проведении синтеза пептидов.

Подписано к печати 05.06.2000 г. Формат 60 х 84 / 16. Усл. ГТ/л 3,0 Заказ № 135. Тираж 120 экз. Типография Минпроса

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Бобиев, Гуломкодир Муккамолович

Список использованных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.6

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.13

1.1. Выделение и биологические функции тимусных гормонов 13

1.2. Синтез и применение в качестве лекарственных препаратов пептидных аналогов тимусных гормонов.18

1.3. Иммуноактивные соединения, не относящиеся к тимусным гормонам, пептидной и непептидной природы.25

1.4. Изучение строения и биологических свойств координационных соединений аминокислот, пептидов и лекарственных препаратов с металлами.32

1.5. Состояние иммунологической реактивности организма в норме и при некоторых заболеваниях человека и животных.41

2. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ.56

2.1. Объекты и методы исследования.56

2.1.1. Объекты исследования.

2.1.2. Методы исследования.56

2.1.2.1. Общие методы.56

2.1.2.2. Частные методы.67

2.2. Результаты исследований и обсуждение.76

2.2.1. Получение и изучение иммуностимулирующий активности низкомолекулярных тимусных пептидов и биокоординационных

У А- "74соединений их с ионами Бе и2п .76

2.2.1.1. Результаты структурных исследований тимопоэтина и аналогов тимопентина.;.76

2.2.1.2. Синтез тимопентина и его аналогов.86

2.2.1.3. Синтез аналогов дипептида Н-01и-Тгр-0Н.106

2.2.1.4. Синтез бурсина и его аналогов.122

2.2.1.5. Изучение биологической активности синтезированных пептидов.131

2.2.1.6. Структурно-функциональные исследования.132

2.2.1.6. Получение координационных соединений низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с ионами Ре2+ и Zn2+ . 139

2.2.1.7. Изучение иммуностимулирующей активности полученных координационных соединений.148

2.2.2. Разработка и применение лекарственных форм низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений.150

2.2.2.1. Фармакологические свойства низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений.150

2.2.2.2. Изучение общего влияния препаратов на организм животных.161

2.2.2.3. Результаты изучения влияния низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений на некоторые показатели иммунитета.167

2.2.2.4. Влияние разработанных препаратов на эффективность лечения некоторых заболеваний сельскохозяйственных животных.177

2.2.2.5. Результаты производственных испытаний разработанных препаратов.192

2.2.2.6. Результаты применения лекарственного препарата на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов при лечении хронических рецидивирующих дерматозов.201

2.2.2.7. Результаты применения лекарственного препарата на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов в терапии.214

Введение Диссертация по биологии, на тему "Синтез и биологические свойства низкомолекулярных тимусных пептидов и их биокоординационных соединений"

Решение проблемы иммунитета, являющегося мощным оружием организма против опухолевых клеток, микробов и вирусов, также как и решение задач практической медицины, связанных с лечением иммунных нарушений в значительной мере зависит от успехов биоорганической химии и фармакологии в изыскании и изучении веществ, способных влиять на состояние иммунитета - регуляторов и корректоров иммунной системы организма (Ахрем и др., 1965). Актуальность их поиска особенно очевидна, если учесть, что до последнего времени иммунокоррекция ограничивалась лишь применением иммунодепрессантов (Ахрем и др., 1985). В настоящее время все большее внимание исследователей и врачей привлекают иммуностимуляторы, действие которых направлено на повышение заложенных природой защитных сил организма.

В процессах формирования и регуляции иммунного ответа главную роль играет тимус, который осуществляет свои функции посредством выделяемых им гормонов. К настоящему времени выделены и охарактеризованы такие тимусные гормоны, как тимозины, тимопоэтины, сывороточный тимусный фактор (Low T.L.K. etal. 1979; Dardenne М. et al., 1977; Goldstein A.L. et al., 1971). Было установлено, что эти пептиды, при введении в организм, выполняют роль иммуностимуляторов и иммуномодуляторов ( Low T.L.K. et al., 1979). Применение их при лечении различных заболеваний совместно с традиционными лекарственными препаратами позволяет значительно сократить срок лечения, а в случае иммунодефицитов - даже заменить традиционные препараты (Low T.L.K., Goldstein A.L., 1984).

Однако, незначительное содержание их в животных организмах, сложность выделения и химического синтеза ограничивают их широкое применение в медицинской и ветеринарной практике. Поэтому проводятся интенсивные исследования по поиску низкомолекулярных пептидов, обладающих активностью тимусных гормонов. К настоящему времени уже выяснено, что активным центром молекулы тимопоэтина является фрагмент 32-36, представляющий собой пентапептид с последовательностью H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH , называемый тимопентином (Goldstein G. et al., 1979). Выделен дипептид с последовательностью H-Glu-Trp-OH , обладающий активностью тимозина а! (Дейгин В.И. и др., 1987). Выделен и охарактеризован амид трипептида H-Lys-His-Gly-NH2 , участвующий в дифференциации В-клеток ( Brand A. et al., 1976).

Несмотря на большое количество синтезированных аналогов активных центров тимусных гормонов до сих пор до конца не выявлены общие последовательности аминокислот или обобщены какие-либо структурные особенности, необходимые для обеспечения их специфической активности. Поэтому проведение исследований по выявлению различных структурно-функциональных взаимоотношений в ряду тимусных гормонов и их пептидных аналогов, определению местоположения активных участков в их молекулах и разработке оптимальных путей химического синтеза с целью создания новых лекарственных препаратов является весьма актуальным.

Одним из способов повышения специфической активности лекарственных препаратов является получение их координационных соединений с ионами металлов (Крисс Е. и др., 1990). Большое значение для живого организма имеют такие металлы, как железо, цинк, медь, кобальт, активирующие ферменты, участвующие в реакциях как синтеза, так и распада нуклеиновых кислот, нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований. Эти металлы принимают участие в метаболизме белков, углеводов и липидов (Мозгов И.Е., 1979; Смоляр В.И., 1989). Например, железо активирует каталазу, пероксидазу, ксантиноксидазу, пептидгидролазы, ангидразы, без железа невозможно превращение фенилаланина в тирозин; медь участвует в активации полифенолоксидазы, аскорбиноксидазы, лакказы и альдолазы; цинк активирует карбоангидразу, щелочную фосфатазу, лецитиназу и др.; кобальт - фосфатазу, лецитиназу, альдолазу и др. (Мозгов И.В., 1979). Установлено участие цинка в иммунологических реакциях организма (Смоляр В.И., 1989), цинк входит в состав биологически активной формы сывороточного тимусного фактора (Багёеппе е1 а1., 1982; Оаз1;те1 е1 а1., 1984). Поэтому получение координационных соединений этих металлов с низкомолекулярными иммуноактивными пептидами позволит повысить иммунологическую активность пептидов и расширить спектр их биологической активности. В связи с этим поиск методов получения и изучение биологической активности подобных координационных соединений является весьма актуальным.

Несмотря на успехи, достигнутые ветеринарией и медициной, проблема профилактики и эффективного лечения многих заболеваний человека и животных до конца не решена. Применение иммуномодулирующих препаратов совместно с профилактическими и лечебными препаратами может значительно повысить эффективность лечебных и профилактических мероприятий. Поэтому особую актуальность приобретает поиск путей применения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и биокоординационных соединений их с ионами биологически важных металлов в медицинской и ветеринарной практике.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение методов получения и исследование биологических свойств низкомолекулярных иммуноактивных пептидов ряда тимопоэтина, тимозина и бурсина и их биокоординационных соединений для дальнейшего применения в медицинской и ветеринарной практике.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- изучить структурные особенности тимопоэтина и аналогов активного центра его молекулы;

- разработать оптимальные пути синтеза и синтезировать низкомолекулярные пептиды, обладающие активностью тимозина аь тимопоэтина и бурсина;

- изучить иммуностимулирующую активность синтезированных пептидов как in vitro , так и in vivo;

- разработать методы получения координационных соединений синтезированных низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с биологически важными металлами (железом, цинком);

- изучить иммуностимулирующую активность полученных биокоординационных соединений; разработать лекарственные препараты на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с металлами, изучить их фармакологические и биологические свойства и внедрить их в практику в медицине и ветеринарии.

Научная новизна. Впервые получен ряд новых триптофансодержащих дипептидов, аналогов активного центра молекулы тимопоэтина, бурсина и их биокоординационных соединений с ионами цинка, железа (II), меди (II). Установлена взаимосвязь между иммунологической активностью аналогов тимопентина и изменениями вторичной структуры участка активного центра молекулы тимопоэтина при аминокислотных заменах, приводящих к получению данного аналога тимопентина. Показано, что в результате координации с ионами металлов происходит увеличение иммуностимулирующей активности исходных триптофансодержащих дипептидов. Установлено, что применение препаратов, разработанных на основе синтезированных пептидов и их биокоординационных соединений совместно с вакцинами увеличивает уровень гуморального иммунного ответа у вакцинированных животных и птицы, совместно с химиотерапевтическими препаратами - сокращает срок и увеличивает эффективность лечения различных заболеваний сельскохозяйственных животных. Показано, что применение препарата, разработанного на основе синтезированного низкомолекулярного иммуноактивного пептида, при лечении больных с нефрологическими, ревматологическими и кожными заболеваниями значительно сокращает срок лечения, нормализует показатели иммунологического статуса организма, повышает эффективность лечения. Предложен возможный механизм участия разработанных препаратов в процессах регуляции иммунного ответа, стартовой стадией которого является активация метаболических процессов на уровне функционирования каталитических белков, что приводит к усилению образования структурных элементов антител.

Практическая значимость. Усовершенствованы способы получения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов, обладающих активностью тимусных гормонов и их биокоординационных соединений с ионами цинка, железа (II), меди (II). Разработаны иммуностимулирующие препараты тимогар, ферунол, тимофер, тимоцин, нормативно-техническая документация на которые утверждена Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан. Указанные препараты применяются в ветеринарии для профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных, сокращения срока и повышения эффективности лечения бронхопневмонии телят и тейлериоза крупного рогатого скота, повышения уровня антител при вакцинации животных против рота-, коронавирусных энтеритов, колибактериоза, тейлериоза и иммунизации цыплят против колибактериоза и стафилококкоза. Препарат тимогар может быть использован при лечении нефрологических, ревматологических и кожных заболеваний человека.

Положения, выносимые на защиту.

2. Усовершенствование методик синтеза пептидов методом активированных эфиров.

3. Выявление взаимосвязи между вторичной структурой участка активного центра молекулы тимопоэтина и иммунологической активностью аналогов тимопентина, полученных при аминокислотных заменах на этом участке.

4. Повышение иммуностимулирующей активности триптофансодержащих дипептидов после образования биокоординационных соединений с ионами цинка и железа.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Бобиев, Гуломкодир Муккамолович

Выводы

1 .Усовершенствованы некоторые способы получения низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами железа (II) и цинка.

2. Структурно-функциональные исследования синтезированных аналогов тимопентина показали, что пептиды, полученные при аминокислотных заменах, сохраняющих при теоретическом анализе (3-структуру участка активного центра молекулы тимопоэтина, обладают иммуностимулирующей активностью in vitro в тесте Е-розеткообразования и in vivo усиливают антителообразование у животных, иммунизированных противотейлериозной вакциной.

3. Синтезировано 26 триптофансодержащих пептидов - ди-, три-, тетра- и пентапептидкых аналогов дипептида H-Glu-Trp-OH, проявляющего активность тимусного гормона тимоэина Установлено, что для проявления иммуностимулирующей активности дипептидами необходимо, чтобы вторым аминокислотным остатком был триптофан и первый аминокислотный остаток - содержал боковую карбоксильную группу.

4. Выявлено, что иммуностимулирующая активность биокоординационных соединений дипептидов H-Val-Trp-OH и Н-11е-Тгр-ОН с ионами железа (II) и цинка, а также дипептида Н-Ие-Тгр-ОН с ионом цинка в 2-8 раз превышает активность исходных дипептидов.

5. Установлено, что лекарственные препараты тимогар, ферунол, тимофер и тимоцин, разработанные на основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений с ионами железа (Н)и цинка, являются практически нетоксичными для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

8. Установлено, что препараты тимофер и тимоцин повышают эффективность лечения пневмоэнтеритов телят до 90 и 93,2%, соответственно и сокращают срок лечения с 12 до 7 дней. Показано, что применение тимофера и тимоцина совместно с ассоциированной вакциной против рота-, корона-вирусных энтеритов и колибактериоза телят способствует увеличению уровня специфических антител в 2-3 раза, совместно с противотейлериозной вакциной - в 2-8 раз.

9. Предложен возможный механизм участия разработанных препаратов в процессах регуляции иммунного ответа, одной из стадий которого является активация образования структурных элементов антител, что приводит к сохранению стабильности стационарного состояния живого организма, повышению эффективности действия препаратов, сокращению сроков лечения заболеваний, улучшению общего физиологического состояния живого организма.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Тот факт, что многие заболевания сопровождаются нарушениями нормального функционирования иммунной системы или возникают вследствие их обусловило бурное развитие иммунофармакологии (Земсков В.М., Земсков А.М, 1996; Земсков A.M. и др., 1996; Петров Р.В., 1991). В настоящее время исследования в этой области характеризуются поиском соединений с относительно селективным действием на популяции и субпопуляции иммунокомпетентных клеток (Петров Р.В., 1991; Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1996). Перспективными в этой области являются препараты, созданные на основе медиаторов межклеточного взаимодействия, в частности органных медиаторов иммунной системы (препараты тимуса, костного мозга и селезенки) (Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1983; Ляшенко В.А. и др., 1988). Недостатком таких препаратов, выделенных из органов иммунной системы, является гетерогенность состава (Арион В.Я. и др., 1985; Белевская Р.Г. и др., 1998; Лазарева Д.Н., Алехин Е,К., 1986; Рябчук В,А. 1993). В последние годы появились сообщения о недостаточной эффективности имеющихся иммуномодулирующих препаратов (Барбинов В.Г., 1990; Скрипкин С.К. и др., 1993), в связи с чем необходим поиск новых, более эффективных препаратов.

Для создания специфичных препаратов на основе низкомолекулярных пептидов необходимо установить структурные особенности, обеспечивающие их специфическую активность. К настоящему времени среди разных по своему происхождению и биологическому действию пептидов пока не удалось ни выявить общие последовательности аминокислот, ни обобщить какие-либо структурные особенности, которые были бы необходимы для обеспечения их специфической активности (Чипенс Г.И, и др., 1980). Из этого возникает необходимость в проведении структурно-функциональных исследований в ряду пептидов, проявляющих сходные биологические функции.

Среди низкомолекулярных иммуноактивных пептидов особого внимания заслуживают аналоги тимопентина - фрагмента 32-36 молекулы тимопоэтина, являющегося ее активным центром. В ряде работ (Audhua T., Heavner G.A. et al ., 1984; Audhua T., Talle M., Goldstein G.; 1984, Sunshine G.H. et al ., 1978) с помощью синтетических пептидов было изучено связывание тимопоэтина с клеточными рецепторами. При этом было выдвинуто предположение о том, что связывание тимопоэтина с рецептором более активно идет по положениям 32, 34 и 36, тогда как аминокислоты в положениях 33 и 35, возможно, включаются в создание присущих молекуле изгибов, модельно совмещаемых с предварительно теоретически вычисленными конформациями. Однако, никаких структурных закономерностей при этом обнаружено не было.

В связи с этим возникает необходимость в проведении структурно-функциональных исследований в ряду аналогов тимопентина. На первом этапе работы было необходимо определить вероятную вторичную структуру участка 32-36 молекулы тимопоэтина. Из многих методов предсказания вторичной структуры белков по их аминокислотной последовательности для расчета вероятной вторичной структуры молекулы тимопоэтина был выбран метод Чоу и Фасмана ( Chou P.Y., Fasman G.D., 1978). Основанием для выбора этого метода послужили, во-первых, относительная простота расчетов, во-вторых, относительно высокая точность предсказания, которая по оценкам самих авторов составляет 87% для а-спиральных участков и 88% - для ß -структурных (Chou P.Y, Fasmsn G.D, 1978).

При анализе возможной вторичной структуры молекулы тимопоэтина было обнаружено, что участок 32-36, отвечающий ее активному центру, с большой степенью вероятности принимает ß-структурную конформацию (Бобиев Г.М. и др.; 1997, Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., 1997), Для того, чтобы выявить какие-либо структурные закономерности, объясняющие наличие или отсутствие биологической активности у аналогов тимопентина, было изучено влияние аминокислотных замен в положениях 34, 35, 36 и 37 на вторичную структуру участка активного центра (Бобиев Г.М., Шахматов А.Н.,1998), причем замены проводились на структурно подобные аминокислоты. При этом было предположено, что пептидный аналог тимопентина, обладающий сравнимой с ним биологической активностью, должен иметь конформацию, максимально приближенную к конформации активного центра в нативном тимопоэтине.

Со структурных позиций наличие у низкомолекулярных пептидов биологической активности объясняет теория квазициклизации, предложенная Г.И.Чипенсом и его группой (Чипенс Г.И. и др., 1981; Чипенс Г.И., 1985). Согласно этой теории молекулы низкомолекулярных пептидов при взаимодействии с клеточными рецепторами образуют квазициклические структуры за счет взаимодействия электроноакцепторных и электронодонорных групп, входящих в состав пептида,

Исходя из этого было предположено образование в молекуле тимопентина двух квазициклов Arg32-Tyr36 и Arg32-Asp34. Подтверждением этому предположению является тот факт, что синтетические пептиды, соответствующие фрагментам 32-34 и 32-35 молекулы тимопоэтина, обладают такой же иммунологической активностью, как тимопентин (Denes L. et al 1986; Rajnavolgui E. et al., 1986). В молекулу тимопентина в основном входят аминокислоты, имеющие электроноакцепторные боковые группы (аргинин, лизин), находящиеся на N-конце молекулы тимопентина, донором электронной плотности является аспарагиновая кислота, находящаяся в центре молекулы тимопентина. Исходя из этого было выдвинуто предположение о том, что введение злектроноакцепторных группировок на С-конец молекулы тимопентина будет способствовать образованию новых квазициклов, например, при замене валина в положении 37 на лизин или аргинин. Расчеты изменений вторичной структуры участка 32-37 молекулы тимопоэтина, проведенные по методу Чоу и Фасмана, показали, что при замене валина в положении 37 на аргинин, происходит увеличение вероятности образования на втом участке (3 -структурной конформации, при замене на лизин - этот участок меняет Р -структурную конформацию на а -спиральную.

Исходя из того, что участок 32-36 в молекуле тимопоэтина принимает Р -структурную конформацию было предположено, что замены, при которых сохраняется р -структура участка активного центра, будут приводить к получению аналогов тимопентина, обладающих такой же активностью как тимопентин. Замены, при которых происходит увеличение вероятности образования а -спирали на участке активного центра тимопоэтина будут приводить к получению аналогов тимопентина, обладающих меньшей, чем тимопентин биологической активностью или неактивных аналогов тимопентина.

Для проверки этих предположений было необходимо синтезировать тимопентин и его аналоги, полученные при аминокислотных заменах в положениях 34, 35, 36 и 37. Использованные ранее для синтеза тимопентина твердофазный метод ( КатроШ в. еХ а1 ., 1980), ступенчатое наращивание пептидной цепи карбодиимидным методом (АЫко Т. еХ а1., 1980), блочная конденсация (Мартынов В.Ф. и др., 1986; М1ас1епоуа-ОгНпоуа Ь.У. е1 а1 ., 1992) наряду с преимуществами имели и некоторые недостатки. При твердофазном методе синтеза для избежания образования ошибочных последовательностей реакцию конденсацию проводили дважды с использованием 2,5 экв. М-защищенной аминокислоты (Rampold G. et al., 1980). При использовании карбодиимидного метода трудоемким является удаление дициклогексилмочевины и возникает необходимость в использовании ВЭЖХ (Abiko Т., et al., 1980). При блочной конденсации недостатком является невысокий выход конечного защищенного пентапептида (Мартынов В.Ф. и др., 1986).

В связи с этим было решено использовать метод активированных эфиров и ступенчатое наращивание пептидной цепи начиная с С-конца. Первоначально в качестве активированных эфиров были использованы N-оксисукцинимидные и п-нитрофениловые. Этим способом были синтезированы тимопентин и его аналоги: H-Arg-Lys-Glu-Val-Tyr-OH , Н-Arg-Lys-Asp-Val-Trp-OH , H-Arg-Lys-Glu-Val-Trp-OH , H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-OH (Бобиев Г\М., 1995. 1997; Бобиев Г.М. Хакимов Ф.Х., Вафоев Н.З. 1998). Общий выход пептидов, полученных этим способом составлял 21-28%. Однако, свободные пептиды были очищены с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Для того, чтобы исключить использование ВЭЖХ, как метода, требующего специального оборудования, была разработана новая методика синтеза тимопентина и его аналогов. В этом случае также использовали ступенчатое наращивание пептидной цепи методом активированных эфиров, но в качестве последних были использованы пентафторфениловые эфиры, получаемые с помощью дипентафторфенилкарбоната (Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш. и др., 1999; Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. и др., 1999; Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., 1998). При этом промежуточные активированные эфиры и защищенные пептиды использовались без выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки. Очистку свободных пентапептидов осуществляли фракционированием на колонке с сефадексом G-25. Общий выход свободных пептидов составлял 30-40%. Этим способом были синтезированы тимопентин, указанные выше и новые аналоги тимопентина: Н-А^-ЬуБ-Азр-УаГРЬе-ОН, Н-А^-ЬуБ-Азр-Ак-Туг-ОН, Н-А^-Ьуз-Азр-Бег-Туг-ОН, H-Arg-Lys-Asp-Ser-Phe-OH, Н-А^-Ьу8-Азр-А1а-РЬе-ОН и Н-Ащ-Ьуз-Азр-УаГТуг-Ьуз-ОН.

Таким образом, получанные результаты показывают, что оптимальным способом синтеза тимопентина и его аналогов является ступенчатое наращивание пептидной цепи начиная с С-конца с использованием активированных пентафторфениловых эфиров, получаемых с помощью дипентафторфенилкарбоната, без выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки промежуточных активированных эфиров и защищенных пептидов.

После выделения из тимолиновой фракции экстракта тимуса дипептида Н-01и-Тгр-0Н , обладающего активностью тимозина а! (Дейгин В.И. и др., 1987) стало необходимым разработать оптимальный способ его синтеза и получения пептида с большей иммунологической активностью. Для этого был синтезирован дипептид Н-01и-Тгр-0Н и ряд его ди-, три-, тетра- и пентапептидных аналогов. Первоначально дипептиды были синтезированы карбодиимидным методом с использованием в качестве конденсирующего реагента дициклогексилкарбодиимида и нуклеофильной добавки - 1-гидроксибензотриазола (Бобиев Г.М., 1987,1989,1995, 1996; Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х., 1998). Для синтеза три-, тетра- и пентапептидных аналогов был использован метод активированных эфиров и ступенчатое наращивание пептидной цепи начиная с С-конца (Бобиев Г.М., 1997; Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Хайдаров К.Х., 1997). При этом очистку свободных пептидов осуществляли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (Бобиев Г.М., 1997). Для того, чтобы исключить использование ВЭЖХ для очистки свободных пептидов, синтез дипептидов был проведен с использованием пентафторфениловых эфиров, получаемых с помошью дипентафторфенилкарбоната (Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., 1998). В этом случае очистку защищенных дипептидов осуществляли колоночной хроматографией на силикагеле, а свободных -переосаждением из метанола эфиром или ацетоном. Применение этого подхода позволило синтезировать пептиды без выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки промежуточных активированных эфиров N-защищенных аминокислот, использовать остаток триптофана со свободными индольной и карбоксильной группами и очищать свободные дипептиды без применения ВЭЖХ.

После того, как из бурсы Фабрициуса был выделен амид трипептида H-Lys-His-Gly-NH2, участвующий в дифференциации В-клеток и названный буренном (Brand. A. et al., 1976) он был синтезирован твердофазным методом и показано, что синтетический гормон обладает такой же активностью, как и природный.

С целью разработки оптимального метода синтеза этого пептида и получения пептида, одновременно обладающего и Т- и В- активностью, был предпринят синтез бурсина (Бобиев Г.М., 1989), ряда его аналогов (Бобиев Г.М. и др., 1996; Бобиев Х.А. и др., 1998) и гибридного аналога бурсина и дипептида H-Glu-Trp-OH с последовательностью H-Lys-His-Gly-NH-NH-Trp-Glu-H (Бобиев Г,М, 1995. 1997; Бобиев Г.М. и др., 1998). Необходимо отметить, что синтез бурсина, в отличие от аналогов тимопентина, осуществляли от N-конца к С-концу и стадией, определяющей успех синтеза, была конденсация дипептида Z-Lys(Z)-His-ОН с амидом глицина. Оптимальным в этом случае оказалось использование метода смешанных ангидридов. Для конденсации блоков Z-Lys(Z)-His-Gly-NH-NH2 и Z-Gli^OBu^-Trp-OH при синтезе гибридного аналога бурсина и дипептида H-Glu-Trp-OH также наибольший выход конечного продукта был достигнут при использовании метода смешанных ангидридов.

Иммуностимулирующую активность синтезированных пептидов определяли как in vitro в тесте Е-розеткообразования клетки, так и in vivo при совместном примении с противотейлериозной вакциной. При этом для аналогов тимопентина и дипептида H-Glu-Trp-OH обнаружено наличие корреляции между активностью пептидов in vitro и in vivo . Пептиды, проявишие активность in vitro, вызывали у иммунизированных животных увеличение титра противотейлерийных антител по сравнению с животными, которых иммунизировали только вакциной. Чем большую активность in vitro проявляли пептиды, тем большее увеличение титра антител они вызывали.

При изучении биологической активности синтезированного бурсина in vitro было показано, что он обладает активностью природного гормона (Бобиев Г.М, 1989). Гибридный аналог бурсина и дипептида H-Glu-Trp-ОН биологической активностью не обладал (Бобиев Г.М. 1995, 1997; Бобиев Г.М. и др„ 1998), что, вероятно, связано с тем, что со стороны дипептида H-Glu-Trp-OH у остатка триптофана отсутствует свободная карбоксильная группа, а со стороны бурсина - свободная амидная группа у остатка глицина.

При проведении структурно-функциональных исследований в ряду аналогов тимопентина было установлено, что для проявления этими пептидами биологической активности необходимо, чтобы N-концевым остатком в положении 32 был аргинин и аминокислотные замены, приводящие к получению данного аналога, способствовали сохранению на участке 32-37 молекулы тимопоэтииа Р-структурной конформации (Бобиев Г.М. и др., 1997, 1999; Бобиев Г.М,, Шахматов А.Н, 1997, 1998). Иммунологическая активность гексапептида H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-Arg-ОН , предложенного на основе теории квазициклизации и расчетов вторичной структуры участка 32-37 молекулы тимопоэтина как in vitro в тесте Е-розеткообразования клетки, так и in vivo при совместном применении с противотейлериозной вакциной, была равна активности тимопентина (Шахматов А.Н. и др., 1999). Это подтверждает предположение о том, что данный гексапептид образует при взаимодействии с рецептором квазициклическую структуру.

При сопоставлении иммунологической активности, проявляемой триптофансодержацими дипептидами с их последовательностью было показано, что для проявления ими иммунологической активности необходимо, чтобы остаток триптофана был вторым, а первый аминокислотный остаток содержал боковую карбоксильную группу (Бобиев Г.М., 1997; Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Шахматов А.Н., 1998). О важности наличия у С-концевого остатка триптофана свободной карбоксильной группы говорит тот факт, что синтезированный гибридный аналог дипептида Н-01и-Тгр-0Н и бурсина, в котором карбоксильная группа триптофана вовлечена в образование связи с буренном, иммунологической активностью не обладает.

В связи с тем, что такие металлы, как железо, цинк и медь играют важную роль в живом организме (Мозгов В.И., 1978, Смоляр В.И., 1989) и при образовании координационных соединений лекарств с железом, цинком и платиной происходит увеличение специфической активности лекарственного препарата (Крисс Е. и др., 1990), для повышения иммуностимулирующей активности триптофансодержащих дипептидов были получены координационные соединения их с ионами цинка и железа (II), а также меди (II) (Бобиев Г.М., 1998; Бобиев Г.М. и др., 1997, 1999). При исследовании состава образующихся координационных соединений было обнаружено, что в растворе одновременно присутствуют координационные соединения различного состава (Бобиев Г.М. и др., 1999).

При изучении иммунологической активности полученных биокоординационных соединений было обнаружено, что за счет координации с ионами металлов происходит увеличение биологической активности полученных соединений по сравнению с исходными дипептидами (Бобиев Г.М., 1998; Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., 1998; Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х., 1998; Бобиев Г.М. и др. 1999).

На основе низкомолекулярных иммуноактивных пептидов и их биокоординационных соединений были разработаны следующие иммуностимулирующие препараты: тимогар, представляющий собой водный раствор низкомолекулярного иммуноактивного пептида, обладающего активностью тимозина а 1 (Бобиев Г.М., 1998) и препараты, представляющие собой водные растворы координационных соединений низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с железом: ферунол (Бобиев Г.М. и др., 1998, 1999) и тимофер (Бобиев Г.М., 1998); цинком -тимоцин (Бобиев Г.М., 1998); водный раствор координационного соединения иммуноактивного пептида с медью.

Исследование токсических свойств разработанных препаратов, проведенное на белых мышах, кроликах, овцах и телятах, показало отсутствие у разработанных препаратов токсичности в количестве нескольких тысяч терапевтических доз (Бобиев Г.М. и др., 1998; Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х., 1998; Бобиев Г. М., Бобиев Х.А., Саидов С.С., 1998). Только введение белым мышам координационного соединения низкомолекулярного иммуноактивного пептида с медью вызвало у белых мышей отрицательные явления местного и общего характера и даже приводило к смерти животных, в связи с чем дальнейшее изучение его биологических свойств было прекращено.

Изучение стабильности тимогара и тимоцина в процессе длительного хранения позволило установить срок годности данных препаратов равный двум годам (Бобиев Г.М. и др., 1999; Исупов С.Д., Гиесов АШ., 1999).

На основании литературных данных и полученных результатов изучения биологических свойств разработанных препаратов можно предложить возможный механизм их участия в процессах стимуляции и регуляции иммунного ответа. Для этого необходимо рассмотреть как эти процессы проходят в живом организме.

В соответствии с последними взглядами на факторы, обеспечивающие развитие иммунной реактивности организма, естественная резистентность не является иммунологической реакцией и включает два механизма - естественную устойчивость и тахифилаксию (Караулов А.В„ 1999).

Тахифилаксия или состояние устойчивости к различным инфекциям, вызванным патогенными бактериями, вирусами, экзо- и эндотоксинами бактерий обусловливается введением гомологичных и гетерологичных антигенов или других веществ. Ключевым компонентом тахифилаксии являются макрофаги. Попадая в организм, антиген взаимодействует с макрофагами, которые перерабатывают его и представляют в антигенраспознаваемой форме на своей поверхности (Галактионов В.Г., 1986; Караулов A.B., 1999; Кульберг А.Я., 1986; Петров Р.В., 1987). Причем деятельность макрофагов направлена не столько на элиминацию патогена, сколько на выявление его антигенных детерминант и последующей передачи информации об этом в иммунокомпетентную систему (Wilson-Jones Е. et al., 1988). Макрофаг при этом взаимодействует с Т-хелперной клеткой (ТхО) и выделяет медиаторы интерлейкины-1 и -6, (ИЛ), фактор некроза опухолей- а (ФНО- а ), активирующие Т-хелперные клетки (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998; Кульберг А.Я., 1986). После этого происходит дифференцировка Т-хелперных клеток на две субпопуляции - Тх1 и Тх2 (Караулов A.B., 1999; Мартынова Е.А., 1998). Клетки субпопуляции Тх1 обусловливают развитие иммунного ответа по типу гиперчувствительности замедленного типа, обладают цитотоксичностью, синтезируют интерферон-у, (Инф- у ), факторы некроза опухолей- а и -ß (ФНО- а , - ß ) и интерлейкины-2 и -12, активирующие макрофаги и фактически являются хелперами клеточного ответа; Тх2 клетки участвуют в реакциях гиперчувствительности немедленного типа, стимулируют образование мастоцитов и эозинофилов, синтез IgE и других классов иммуноглобулинов, продуцируют интерлейкины-3,-4,-5,-6, -10,-13,-14 и являются фактически хелперами гуморального ответа (Караулов А,В., 1999).

Обе субпопуляции Т-хелперных клеток выделяют медиаторы, активирующие B-лимфоциты (ИЛ-2,-4,-5) (Караулов A.B., 1999; Мартынова Е.А., 1998). Таким образом макрофаг, вступивший в контакт с Т-хелпером (ТхО), взаимодействует с B-лимфоцитом, который получает от Т-хелперной клетки, активированной макрофагом, два сигнала: специфический и неспецифический (Караулов A.B., 1999), в результате чего B-лимфоцит дифференцируется до плазмоцита (антителообразующей клетки), синтезирующего иммуноглобулины (Галактионов В.Г., 1966; Караулов A.B., 1999;Кульберг А.Я„ 1986). Все три вида клеток находятся под контролем Т-супрессоров, которые способны тормозить слишком сильные и слишком затянувшиеся иммунологические реакции.

При применении совместно с ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят (Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Хайдаров К.Х., 1998), противотейлериозной вакциной (Бобиев Г.М., Нораев Р.Х., Хайдаров К.Х., 1999), а также ассоциированной вакциной против колибактериоза и стафилококкоза цыплят (Бобиев Г.М., Салимов Т.М., Чориева С.А., 1998) тимогар, ферунол, тимофер, тимоцин способствуют увеличению количества специфических антител. Это свидетельствует о том, что применение разработанных препаратов способствует увеличению количества антителообразующих клеток, являющихся конечной стадией развития Влимфоцитов. Из этого можно заключить, что разработанные препараты при введении в организм способствуют увеличению количества клеток, развивающихся по линии ТхО —> Тх2 —> В-лимфоцит —> Антителообразующая клетка —* Антитело.

Естественная устойчивость обусловлена механическими и биологическими барьерами, нормальной микрофлорой, ферментными системами клеток, обусловливающими разрушение и обезвреживание чужеродных агентов специальными белками крови, принимающими участие в защитных реакциях (комплемент, лизоцим, интерферон и др.), макрофагами, естественными киллерами и др. (Караулов A.B., 1999).

Применение тимоцина совместно с ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят способствовало увеличению как бактерицидной, так и лизоцимной активности сыворотки крови (Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Хайдаров К.Х., 1998). Увеличение этих показателей неспецифической антиинфекционной резистентности было отмечено также при лечении бронхопневмонии телят химиотерапевтическими препаратами совместно с иммуностимулирующими препаратами - известным тимогеном и разработанным тимогаром (Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х., 1998). Заболевания бронхов и пневмонии относятся к неспецифическим воспалительным заболеваниям легких (Караулов A.B., 1999), Кроме того, по данным (Стоссел Т.П., 1983; Струков А.И. и др., 1990) макрофаги являются полифункциональными клетками и принимают участие не только в физиологическом, но и во многих патологических процессах, в частности, остром, хроническом, гранулематозном и иммунном воспалениях. Так как бактерицидную активность сыворотки крови оценивают по степени элиминации ею чужеродных антигенов (Методические рекомендации, 1986), а эту функцию выполняют макрофаги (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998), то о степени цитотоксической функциональной активности макрофагов можно судить по бактерицидной активности сыворотки крови. Такие свойства макрофагов, как бактерицидность и цитотоксичность, активируют Т-хелперные клетки 1 типа (Txl) посредством выделяемых ими интерлейкииа-2, интерферона- у и фактора некроза опухоли- а , -ß (Караулов A.B., 1999; Кетлинский С. А, Калинина Н.М, 1998). Увеличение бактерицидной активности сыворотки крови под влиянием тимогара при лечении бронхопневмонии крупного рогатого скота свидетельствует о том, что тимогар способствует увеличению бактерицидной активности макрофагов и при этом он может воздействовать на медуллярные тимоциты, увеличивая количество ТхО-клеток, дифференцирующих на клетки Txl и Тх2, выделяющие факторы, активирующие макрофаги (ИЛ-2,-4, Инф-у, ФНО- а , - ß ), участвующие в воспалительных процессах,

О том, что при лечении заболеваний с применением иммуностимуляторов и, в частности, разработанных препаратов, происходит усиление гуморального звена иммунитета, говорят результаты, полученные при изучении уровня антител у крупного рогатого скота, больного тейлериозом и подвергавшегося комбинированному лечению традиционными препаратами совместно с разработанными (Бобиев Г.М, Сатторов И.Т, Нораев Р.Х, 1998).

Наиболее подробно влияние разработанных препаратов на иммунную систему изучено при лечении псориаза и нейродермита традиционными средствами совместно с разработанным тимогаром, У больных с этими заболеваниями отмечались отклонения от нормальных значений показателей иммунологического статуса организма, причем наибольшее количество измененных показателей отмечалось у больных нейродермитом (Бобиев Г.М, Зоиров П.Т„ Хусайнов A.A., 1998): снижение содержания Т-лимфоцитов (54,2±5,7, в норме 63.4±2.7%). Тсупрессоров (14,7±1,6, в норме 21,9±1,4%, С 4 фракции комплемента (0,22±0.02, в норме 0,29±0,03 г/л); повышение содержания В-лимфоцитов (23,7±2,6, в норме 19,2±1,2%), 1§А (3,06±0.34, в норме 2ДЫ=0,18 г/л). ^М (2,01±0,29. в норме 1,73±0.15 г/л). ^ (18,0±2,7. в норме 12,9±1.2 г/л), ^Е (348,6±2,2, в норме 82,4±9,3 г/л), С 3 фракции комплемента (0,99±0,12, в норме 0,69±0,06 г/л). Снижение содержания Т-клеток и увеличение содержания В-лимфоцитов говорит о том, что снижено количество клеток, развивающихся по Т-пути. Повышенное содержание иммуноглобулинов наряду с пониженным содержанием Т-лимфоцитов и Т-супрессоров, может являться следствием снижения как количества Т-супрессорных клеток, так и их активности.

После проведения традиционного лечения содержание Т- и В-лимфоцитов оставалось отличным от нормального. После комбинированного лечения традиционными средствами и тимогаром нормализовались почти все измененные показатели кроме содержания ^Е, которое, хотя и оставалось завышенным, имело ярко выраженную тенденцию к нормализации.

Нормализация количества Т- и В-лимфоцитов свидетельствует о том, что тимогар способствует увеличению количества клеток, развивающихся по Т-пути и уменьшению - развивающихся по В-пути, что может являться следствием воздействия препарата на общий предшественник Т- и В-лимфоцитов. Нормализация содержания иммуноглобулинов может быть следствием действия препарата на медуллярные тимоциты, увеличивая количество клеток, превращающихся в Т-супрессорные клетки,

Исходя на того, что при совместном применении вакцин и разработанных препаратов происходит увеличение количества клеток, развивающихся по линии ТхО —Тх2 —> В-лимфоцит —> Антителообразующая клетка —у Антитело. При этом препараты воздействуют на медуллярные тимоциты (рис.25 ).

При лечении воспалительных заболеваний препарат также воздействует на медуллярные тимоциты, способствуя увеличению количества ТхО-клеток, дифференцирующих на Тх1- и Тх2-клетки, выделяющие факторы, активирующие макрофаги (ИЛ-2,-4, Инф-у, ФНО-а , -Р ), участвующие в воспалительных процессах, способствуя повышению их бактерицидности и цитотоксичности (рис. 25).

В случае лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями функционирования иммунной системы (нейродермит), препарат оказывает модулирующее действие, и в этом случае, возможно, клетками-мишенями для препарата являются предшественники Т- и В-лимфоцитов (увеличивается количество клеток, развивающихся по Т-пути) и медуллярные тимоциты (увеличивается количество и активность Т-супрессорных клеток) (рис. 25).

Таким образом, разработанные препараты могут участвовать в качестве стимуляторов и регуляторов в большинстве иммунологических процессов, происходящих в живом организме, о чем свидетельствует их положительное влияние на эффективность лечения различных по своей этиологии заболеваний - бактериальных и вирусных инфекций (энтериты, колибактериоз), протозойных заболеваний (тейлериоз), иммунозависимых заболеваний (псориаз, нейродермит), а также на уровень гуморального иммунного ответа у животных при иммунизации различными вакцинами.

Исходя из этого, на препараты тимогар, ферунол, тимофер и тимоцин разработана нормативно-техническая документация, регламентирующая их применение в ветеринарии, которая утверждена ГУВ МСХ Республики Таджикистан (см. Приложение).

Препарат тимогар был внедрен в медицинскую практику при лечении кожных (псориаз, нейродермит), суставных (ревматоидный артрит и др.) и нефрологических (гломерулонефриты) заболеваний и может быть газ

ТИМОГАР к к и сь

1=3 >=

0) X

--ч ф « СЬ я к

X Д" о

О сб

--=> Ф т .->Сб ю & к- —»со о

3 ^ ф X

Ен « ^ ч

5 03 X Ф ей о

Н сб ф а

ГС ф ч s о стволовая кроветворная клетка предшественник Т- и В-лимфоцитов предшественник Т~лимфоцитов кортикальный тимоцит медуллярный тимоцит

НЕСГЕШФИ

ЧЕСКИИ

ЩТОЛИЗ

РЕАКЦИИ

КЛЕТОЧНОГО

ИММУНИТЕТА

ИММУННЫЕ РЕАКЦИИ

АТ

РЕАКЦИИ

ГУМОРАЛЬНОГО

ИММУНИТЕТА стимулирующее влияние модулирующее влияние

Рис. 25. Возможный механизм участия разработанных препаратов в иммунологических процессах (на примере тимогара)

234 рекомендован для широкого применения в качестве иммуномодулятора при лечении указанных заболеваний.

Итак, вышесказанное позволяет сформулировать новое представление о том, что синтезированные пептиды и их биокоординационные соединения с ионами железа (II) и цинка оказывают влияние на процессы созревания и дифференциации Т-лимфоцитов, обеспечивающих развитие Т-зависимого гуморального и клеточного иммунного ответа и применяются в качестве иммуностимулирующих и иммуномодулирующих препаратов в ветеринарии и могут быть использованы для этой цели в медицине при лечении иммунозависимых заболеваний человека.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Бобиев, Гуломкодир Муккамолович, Душанбе

1. Абазбеков O.K., Туманян М.А. Влияние бактериального поли-сахарида на количество розеткообразующих клеток у мышей со сниженной иммунологической реактивностью//Бюлл. эксперим. биол. имед.-1977—т.83.-№ 1.-С.58-59.

2. Абуева Г.А, Жуматова Г.Г., Цой И.Г. Характер иммунологических нарушений при нейродермите у детей//Тез, докл. V съезда дерм.-венерологов УССР.-Харьков, 1986.-С.74-75.

3. Акира А, Акира К, Юсаку И, Сокуро Я, Ясуоки Н. Препарат для предупреждения старения, активации клеток и предотвращения и лечения старческих заболеваний. Заявка 1-316328 Япония// Кокай токке кохо, сер. 3(2).-I989.-C.22I-23I.

4. Алиева П.М. Тимоген при аллергическом дерматите//Возможности и перспективы диагностики и лечения в клинической практике.-М. 1992.-С.321-322.

5. Алиева C.B. Изучение влияния некоторых защитных группировок на процесс комплексообразования пептидов с медью: Автореф. дис.канд. хим. наук.-М, 1970.-14 с.

6. Ализаде М.А. Электрофоретическое исследование белков сыворотки крови при тейлериозе крупного рогатого скота//Тр. АзНИВИ—1963 .-Т.8.-С. 199-204.

7. Альбини Б, Брентьенс Я.Р, Андрее Д. А. Иммунопатология почки.-М, 1982.-262 с.

8. Ананьев О.П, Зуев В.В. Гуморальные факторы иммунитета при тейлериозе крупного рогатого скота//Паразиты сельскохозяйственных животных Казахстана и меры их предупреждения.-Алма-Ата. 1983—С.112-117.

9. Анфалова Т.В., Хромых JL М. CD34"8" -Тимоциты продуцируют хемотаксический фактор для стволовых элементов костного мозга//Докл. АН Российской Федерации,-1998.-Т.362.-№ 2.-С.274-276.

10. Априкян B.C., Михайлова A.A., Петров Р.В. Изменение фагоцитарной активности макрофагов под действием различных доз антибиотиков//Журн. микробиол. эпидемиол. иммунобиол.-1992.-№ 9-10.-С.71,

11. Арион В.Я. Иммунологически активные факторы тимуса//Итоги науки и техники, сер. Иммунология.- 1981.-Т.9.-С. 10-50.

12. Арион В.Я, Коррекция Т-системы иммунитета. Теоретические и практические аспекты//Проблемы клинической и экспериментальной фармакологии побочных действий лекарственных средств.-Тбилиси, 1981.-С.88-90,

13. Арион В.Я, Т-активин: физико-химическая характеристика и биологическая активность//Сорбционные методы детоксикации в медицине. Тез. Докл. I Всес. Конф.-Харьков, 1982.-С.216-217.

14. Арион В.Я., Санина И.В., Бреусов Ю.Н., Кротова С.Б., Катков Е.Г., Портнова А.П. Молекулярная и функциональная гетерогенность иммунологически активного фактора тимуса Т-активина//Химия и биология иммунорегуляторов.-Рига; Зинатне, 1985.-С.39-52.

15. Арипов У.А., Хаитов Р.М„ Галактионов В.Г. Очерки современной иммунологии.-Ташкент: Медицина, 1981.-255 С.

16. Ата-Курбанов Э.А., Шалимов А.Ю. Использование гомогенатов тимуса для повышения резистентности и продуктивности каракульских овец//Проблемы изыскания, синтеза и производства новых препаратов для ветеринарии. Тез. докл. науч. конф.-Самарканд, 1994.-С.17.

17. Ахрем A.A., Кузьмицкий Б.Б., Лахвич Ф.А„ Хрипач В.А., Журавков Ю.Л. Изыскание избирательных иммунотропных веществ класса гетеростероидов//Химия и биология иммунорегуляторов.-Рига: Зинатне, 1985.-С.265-278.

18. Ахрем A.A., Лахвич Ф.А., Лис Л.Г., Кузьмицкий Б.Б. Полный Синтез, структура и функция 8-азостероидов нового класса биологически активных соединений//Весц. АН БССР, сер. хим.-1982—№ 6.-С.81-90.

19. Бабаяну P.C., Белокриницкий Д.В., Владимиров Б.В. Иммунологические показатели у больных псориазом в процессе лечения методом фотохимиотерапии/./Вестн. дерматол.-1983.-№ 6.-С.4-7.

20. Бадалов Э.Т. Научные основы оздоровления хозяйств от пиро-плазмидозов крупного рогатого скота в Таджикистане: Автореф. дис. докт. вет, наук.-Самарканд-Тайляк, 1996.-39 с.

21. Балицкий К.П., Векслер И.Г. Реактивность организма и химиотерапия опухолей.-Киев: Наукова думка, 1975.-254 с.

22. Балкунова Л.П. Исследование взаимодействия глицина с хлоридами Mg, Ca, Zn, Cd методом растворимости и характеристика новых твердых фаз: Автореф. дис.канд. хим. наук.-Фрунзе, 1977.-22 с.

23. Барбинов В,В- Терапия хронической пиодермии с коррекцией антибиотикчувствительности стафилококка тимогеном: Автореф. дис.канд. мед. наук.-М„ 1990.-22 с,

24. Барбинов В.В., Королькова Т.Н. Применение синтетического пептида тимуса (тимогена) в комбинированной терапии хронической пиодермии//Мат. XVI науч.-практ. конф. врачей ЗабВО. Сб. науч. работ.-Чита. I990.-C.214-215.

25. Басс-Шадхан К.Ф. Зимозан.-Рига: Зинатне, 1970.-314 с.

26. Безвершенко И.А. Способ получения вещества, стимулирующего созревание Т-лимфоцитов. A.c. СССР № 706089.

27. Беклемишев Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция.-М.: Медицина, 1986.-256 с.

28. Белевская P.P., Михайлова A.A., Фомина Л.А., Ефремов М.А., Петров Р.В. Миелопептид-3 костномозговой медиатор, стимулирующий фагоцитарную активность макрофагов//Докл. АН Российской Федерации.-1998.-Т.З68.-№ 6.-С.847-849.

29. Белова А. А, Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов//Биохимия.-1997.-Т.62.-Вып. 6.-С.659-668.

30. Беловеждов Н., Алтынкова Н. Изучение некоторых показателей гуморального и клеточного иммунитета у больных хроническим гломерулонефритом//Терапевт. Арх.-1981.-Т.53.-№ 12.-С.78-82.

31. Бем Э. Иммунодиффузия//Иммунологические методы/Под ред. Г.Фримеля.-М.: Медицина, 1987.-С.73-.88.

32. Беренбейн В.А. Зудящие дерматозы.-М., 1971.

33. Биологические аспекты координационной химии/Под ред. К. Б. Яцимирского.-Киев: Наукова думка, 1977.-248 с.

34. Бобиев Г.М.Биологические свойства низкомолекулярных иммуноактивных пептидов//Мат. науч. конф., поев. 50-летию Института химии им. В.И.Никитина АН Республики Таджикистан. Тез. докл.-Душанбе, 1996.-С.22.

35. Бобиев Г.М. Влияние синтетических аналогов тимусных гормонов на организм животных при бронхопневмонии и тейлериозе//Рук. деп. в ВИНИТИ 19.06.98 г.-№ 1867-В98.-14 с.

36. Бобиев Г.М. Иммуностимулирующий препарат тимогар и способ его получения. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 98000530 от 23.10.98 г.

37. Бобиев Г.М. Пептиды, обладающие активностью тимозина а^/Диагностика, лечение и профилактика инфекционных, инвазионных и незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ.-Душанбе, 1995.-С.86-89.

38. Бобиев Г.М. Применение ВЭЖХ для очистки иммуноактивных пептидов//Мат. науч. конф., поев. 95-летию со дня рожд. академика АН Республики Таджикистан В.И.Никитина. Тез. докл,-Душанбе, 1997.-С.61-62.

39. Бобиев Г.М. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для очистки низкомолекулярных иммуноактивных пептидов//Мат. I конгресса медицинских работников Республики Таджикистан "Медицина и здоровье ".-Душанбе, 1997.-Т.2.-С.31-33.

40. Бобиев Г.М. Применение низкомолекулярных иммуноактивных пептидов при лечении различных заболеваний//Мат. науч. конф. "Морфологические и физиологические основы адаптации организма"—Душанбе. 1997.-С.41-42.

41. Бобиев Г.М. Связь между аминокислотным составом и биологической активностью дипептидов//Там же.-С.42-43.

42. Бобиев Г.М. Синтез аналога бурсина//Мат. науч. конф. "Теоретические и прикладные проблемы химии".-Душанбе, 1995.-С.59.

43. Бобиев Г.М. Синтез аналогов дипептидов, обладающих активностью тимозина а! и их биологическая активность//Вестник педагогического университета.-Душанбе, 1997.-№ 6.-С.7-11.

44. Бобиев Г.М. Синтез бурсина и его гибридного аналога с дипептидом Н-С1и-Тгр-ОН //Вестник педагогического университета.-Душанбе. 1997.-№ 8.-С.65-69.

45. Бобиев Г.М. Синтез дипептидов, выделенных из тимолиновых фракций экстракта тимуса//Респ. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Тез. докл.-Душанбе, 1989.-С.63-64.

46. Бобиев Г.М. Синтез и биологическая активность тимопентина и его аналогов//Диагностика, лечение и профилактика инфекционных, инвазионных и незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ.-Душанбе, 1995 .-С.82—86.

47. Бобиев Г.М. Синтез низкомолекулярных иммуноактивных пептидов//Респ. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Тез. докл.-Душанбе, 1987.-С.49.

48. Бобиев Г.М. Синтез низкомолекулярных иммуноактивных пептидов//Мат. науч. конф., поев. 50-летию Института химии им. В.И.Никитина АН Республики Таджикистан. Тез. докл.-Душанбе, 1996.-С.21.

49. Синтез новых аналогов дипептида Н-01и-Тгр-0Н// Вестник педагогического университета.-Душанбе.- 1997.-№ 8.-С.57-60.

50. Бобиев Г.М, Синтез пептидов, обладающих активностью тимопоэтина//Вестник педагогического университета.-Душанбе, 1997 .-№ 8.-С.60-.65.

51. Бобиев Г.М. Синтез тимопентина и его аналогов методом активированных эфиров//Вестник педагогического университета,-Душанбе, 1997.-№ 6.-С. 12-17.

52. Бобиев Г.М, Синтез трипептида Н-Ьу8-Н18-01у-МН2 бурсина гормона Бурсы Фабрициуса//Респ. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. Тез. докл.-Душанбе, 1989.-С.65-66.

53. Бобиев Г.М. Синтез триптофансодержащих пептидов со свободной индольной группировкой, содержащих у-пептиднуюсвязь// Мат. науч. конф., поев. 95-летию со дня рожд. академика АН Республики Таджикистан В.И.Никитина. Тез. докл.-Душанбе, 1997.-С.60.-61.

54. Бобиев Г.М. Способ получения иммуностимулирующего препарата тимофер. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 98000512 от 28.04.98 г. Опубл. Навиди патента. Патентный вестник.-Душанбе, 1998.- № 2(10).-С.20.

55. Бобиев Г.М. Способ получения иммуностимулирующего препарата тимоцин. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 98000518 от 08.05.98 г. Опубл. Навиди патента. Патентный вестник.-Душанбе, 1998,-№ 2(10).-С.20-21.

56. Бобиев Г,М, Структура и иммунная активность низкомолекулярных пептидов, содержащих остаток триптофана//Мат. I конгресса медицинских работников Республики Таджикистан "Медицина и здоровье".-Душанбе, 1997.-Т.2.-С.33-35.

57. Бобиев Г.М. Фармакологические свойства цинксодержащего координационного соединения пептида рядатимусных гормонов// Известия АН Республики Таджикистан. Отд. биол. и мед. наук.-1999.-№ 3-4(141).-С.80-85.

58. Бобиев Г.М., Алиева C.B. Использование метода активированных эфиров для синтеза тимопентина и его аналогов//Мат, науч. конф., поев. 50-летию Института химии им.

59. B.И.Никитина АН Республики Таджикистан.-Душанбе, 1996.1. C.23.

60. Бобиев Г.М., Бадалов Э.Т. Способ лечения тейлериоза крупного рогатого скота. Заявка на патент Республики Таджикистан № 98000520 от 23.10.98 г.у,

61. Бобиев Г.М„ Бобиев Х.А. Влияние иона Fe на биологическую активность триптофансодержащих дипептидов/Тр. респ. конф., поев. 50-летию ТГНУ "Физиолого-биохимические основы продуктивности растений".-Душанбе, 1998.-С.12.

62. Бобиев Г.М„ Бобиев Х.А. Лечение бронхопневмонии телят с помощью иммуностимулирующих препаратов//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан. -Душанбе, 1998.-№ 39-98.-4 с.

63. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А. Модификация метода активированных эфиров для синтеза дипептида валил-триптофан//Докл. АН Республики Таджикистан.-1998.-T.XL.-№ 1-2.-С.30-33.

64. Бобиев Г.М., Расулов У.Р. Влияние иммуностимулирующего препарата тимогар при лечении некоторых нефрологических заболеваний/ЛУ науч.-практ. конф. "Проблемы патологии человека и последипломного образования". Сб. статей.-Душанбе, 1998.-С.103-107.

65. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Взаимосвязь между биологической активностью и вторичной структурой аналогов тимопентина// Тр. респ. конф., поев. 50-летию ТГНУ "Вкладученых биологов в развитие биологической науки в Таджикистане".-Душанбе, 1998.-С.33-34.

66. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Влияние аминокислотных замен на биологическую активность иммуноактивных пептидов//Вестник педагогического университета.-Душанбе, 1997.-№6.-С. 18-26.

67. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Синтез новых аналогов тимопентина//Докл. АН Республики Таджикистан.-1998.-Т, XL .-№ 1-2.-С.34-37.

68. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н. Структурно-функциональные взаимоотношения в ряду аналогов тимопентина//Диагностика, лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-Душанбе. 1998.-С.63-68.

69. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Саидов С.С. Биологическая активность железо- и цинксодержащих низкомолекулярных иммуноактивных пептидов//Мат. юбилейной науч.-теор. конф., поев. 50-летию ТГНУ.-Душанбе, 1998.-С.76.

70. Бобиев Г.М, Бобиев Х.А, Хайдаров К.Х. Синтез и биологическая активность пептидов, содержащих у-пептидную связь// Диагностика, лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-Душанбе. 1998.-С.57-63.

71. Бобиев Г.М, Зоиров П.Т, Хусайнов A.A. Применение нового иммуностимулятора тимогара при лечении больных псориазом//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 33-98.-3 с.

72. Бобиев P.M., Зоиров П.Т, Хусайнов A.A. Способ лечения нейродермита. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан -№ 99000556 от 27.01.99 г.

73. Бобиев Г.М, Зоиров П.Т, Хусайнов A.A. Способ лечения псориаза. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 99000555 от 27.01.99 г.

74. Бобиев Г.М, Нораев Р.Х„ Норов Ш.Х. Производственные испытания иммуномодулятора тимофера при вакцинации крупного рогатого скота против тейлериоза//Информ.листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 80-98.-3 с.

75. Бобиев Г.М., Расулов У.Р., Хайдаров К.Х. Эффективность применения тимогара при лечении некоторых нефрологических и ревматических заболеваний//Здравоохранение Таджикистана,-1998.-№ 2.-С.ЗЗ-36.

76. Бобиев Г.М., Салимов Т.М., Мурватуллоев С.А. Способ повышения эффективности вакцинации птицы против колибактериоза и стафилококкоэа. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 99000552 от 16.01.99 г.

77. Бобиев Г.М„ Зоиров П.Т„ Хусайнов А.А. Эффективность нового иммуностимулирующего препарата тимогар при лечении псориаза и нейродермита/ЯДентральноазиатский журнал "Новости дерматологии и венерологии".-Ташкент, 1998.-№ 2.-С.57-59.

78. Бобиев P.M., Салимов Т.М., Чориева С.А. Повышение эффективности вакцинации цыплят против колибактериоза и стафилококкоэа с помощью иммуностимулирующих препаратов//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 81-96.-4 с.

79. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Бобиев Х.А. Применение иммуноактивных пептидов в ветеринарии//Диагностика, лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-Душанбе, 1998.-С. 48-53.

80. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х. Усиление антителообразования при использовании металлосодержащих иммуноактивных пептидов для профилактики и лечения животных//Рук. деп. в ВИНИТИ 19.06.98 г.-№> 1868-В98.-14 с.

81. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Хайдаров К.Х. Синтез и биологическая активность новых аналогов дипептида и его полимеров//Мат. науч. конф., поев, 95-летию со дня рожд. академика АН Республики Таджикистан В.И.Никитина. Тез. докл.-Душанбе, 1997.-С.59-60.

82. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Шахматов А.Н. Влияние аминокислотных замен на биологическую активность дипептидов//Диагностика, лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-Душанбе, 1998.-С.53-57.

83. Бобиев Г.М., Хайдаров К.Х., Бадалов Э.Т. Повышение эффективности лечения тейлериоза крупного рогатого окота с помощью иммуномодулирущих препаратов//Докл. Российской академии сельскохозяйственных наук.-1999.-№ 5.-С.40-42.

84. Бобиев Г.М., Хайдаров К.Х., Нораев Р.Х. Повышение эффективности профилактики и лечения тейлериоза крупного рогатого скота с помощью иммуномодулирующих препаратов//Ветеринария,-1999.-№ 10.-С.30-32.

85. Бобиев Г.М., Хакимов Ф.Х., Вафоев Н.Э. Синтез новых аналогов тимопентина//Мат. II межд. Конф. молодых химиков "Проблемы биоорганической химии".-Наманган, 1998.-С.65-69.

86. Бобиев Г.М., Чориева С.А., Бандаев С.Г. Использование активированных эфиров для синтеза триптофансодержащих пептидов// Вестник педагогического университета.-1998.-№ 1.-С.3-11.

87. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Гиесов А.Ш. Применение пентафторфениловых эфиров для синтеза новых аналогов тимопентина//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе. 1998.-№ 72-98.-4 с.

88. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Гиесов А.Ш. Синтез новых гексапептидных аналогов тимопентина методом активированных эфиров//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 71-98.-3 с.

89. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Сатторов И.Т. Влияние аминокислотного состава на биологическую активность аналогов тимопентина//Мат. науч. конф. "Морфологические и физиологические основы адаптации организма".-Душанбе, 1997,-С.40-41.

90. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Тагоймуродов М., Хайдаров К.Х. Изучение различных методов удалениякарбобензоксигруппы при синтезе нового аналога бурсина//Докл. АН Республики Таджикистан.-1996.-Т.ХХХ1Х.-№ 11-12—С. 3436.

91. Бобиев Х.А., Бобиев Г.М. Тагоймуродов М., Шахматов А.Н. Применение никелевого катализатора и УФ-облучения в пептидной химии//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 32-98.-3 с.

92. Бобиев Х.А., Гиесов А.Ш., Бобиев Г.М., Чориева С.А. Новый подход к синтезу иммуноактивных триптофансодержащих пептидов//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 69-98.-4 с.

93. Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Шахматов А.Н. Синтез и биологическая активность новых низкомолекулярных пептидов ряда тимозина и тимопоэтина//Рук. деп. в НПИЦентре Республики Таджикистан.-1999,-Вып.2. -№ 10(1217).-20 с.

94. Бобиев Г.М., Зоиров П.Т., Расулов У.Р., Хусайнов A.A. Применение нового иммуномодулирующего препарата тимогара при лечении некоторых иммунозависимых эаболеваний//Рук. Деп. в ВИНИТИ 19.06.98 г.-№ 1866-В98.-19 с,

95. Бобиев Г.М. Зоиров П.Т., Расулов У.Р., Шукурова С.М. Применение нового иммуностимулирующего препарата тимогарпри лечении суставных заболеваний//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 59-98.3 с.

96. Бобиев Г.М, Зоиров П.Т, Хусайнов A.A., Бадалов Э.Т. Клинико-экспериментальное изучение нового биостимулирующего и иммуномодулирующего препарата тимогар//Здравоохранение Таджикистана.-1998,-№ 2.-С.29-33.

97. Бобиев Г.М, Расулов У.Р, Юлдашева Р.Д, Бобиев Х.А. Терапевтическая эффективность тимогара при нефрологических заболеваниях//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 65-98.-3 с.

98. Бобиев Г.М, Сатторов И.Т, Гиесов А.Ш, Исупов С.Д. Биологические свойства нового иммуностимулирущего препарата тимоцин/ЯТроблемы изыскания, синтеза ипроизводства препаратов для ветеринарии. Мат. докл. науч. конф.-Самарканд, I999.-C.42-44.

99. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Махмудов К., Гиесов А.Ш. Токсические свойства нового иммуностимулирующего препарата тимоцин//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе. 1998.-№ 67-98.-3 с.

100. Бобиев P.M., Чориева С.А., Бобиев Х.А., Бандаев С.Г. Синтез бурсина и его аналогов с дипептидом H-Glu-Trp-OH // Вестник педагогического университета.-Душанбе, 1998.-№ 3.-С.101-108.

101. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Чориева С.А., Бандаев С.Г. Синтез фрагмента 32-35 тимопоэтина и его аналога//Докл. АН Республики Таджикистан.-1999.-Т. XLII .-№ 2.-С.51-54,

102. Бобиев Г.М., Бобиев Х.А., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Исупов С.Д. Способ получения иммуностимулирующего препарата ферунол. Патент Республики Таджикистан № 227 TJ . Опубл. Навиди патента. Патентный вестник.-Душанбе» 1998.-№ 2(10).-С.19.

103. Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Нораев Р.Х., Норов Ш.Х. Способ стимуляции иммунитета у крупного рогатого скота при иммунизации против тейлериоза. Положительноерешение по заявке на патент Республики Таджикистан № 99000576 от 25.06.99 г.

104. Бобиев Г.М., Гиесов А.Ш. Исупов С.Д., Юсупов З.Н. Шахматов А.Н. Получение новых цинксодержащих биологически активных соединений/УКоординационные соединения и аспекты их применения.-Душанбе, 1999.-С. 147-150.

105. Бобиев Г.М., Нораев Р.Х., Норов Ш.Х., Бобиев Х.А., Гулов А.Х. Способ стимуляции поствакцинального противотейлериозного иммунитета у крупного рогатого скота. Положительное решение по заявке на патент Республики Таджикистан № 98000540 от 28.12.98 г.

106. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Гиесов А.Ш., Махмудов К., Исупов С.Д. Влияние нового иммуномодулирующего препарата тимоцина на эффективность лечения пневмоэнтерита телят// Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе. 1998.-№ 68-98.-3 с.

107. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Гиесов А.Ш., Махмудов К., Исупов С.Д. Влияние нового иммуномодулятора тимоцина на эффективность вакцинопрофилактики энтеритов и колибактериоза//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе. 1998.-№ 70-98.-4 с.

108. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Бобиев Х.А.,

109. Исупов С,Д. Разработка и применение новогоиммуностимулирующего препарата ферунол вветеринарии//Проблемы изыскания, синтеза и производства препаратов для ветеринарии. Мат. докл. науч. конф.-Самарканд, 1999.-С.44-47.

110. Бобиев Г.М., Сатторов И.Т., Нораев Р.Х., Бобиев Х.А., Хайдаров К.Х. Синтез и иммуногенные свойства комплекса низкомолекулярного иммуноактивного пептида с железом//Докл. АН Республики Таджикистан.-1997.-Т. XL .-№ 1-2.-С.45-48.

111. Бобиев Г.М., Шахматов А.Н., Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Хайдаров К.Х. Синтез аналогов фрагмента активного центра тимопоэтина//Известия АН Республики Таджикистан. Отд. физико-математических, химических и геологических наук.-1999.-№ 1.-С.39-42.

112. Болен П., Бразо П.Э., Эш Ф.С„ Линг Н.Ч.-В., Веренберг

113. B.Б, Гуйллемин Р.Ч.Л. Способ получения пептидов. A.c. СССР № 1423000.

114. Бурба Г.Л. Количественная характеристика Т- и В-лимфоцитов перифрической крови при экспериментальном тейлериозе крупного рогатого скота//Тр. ВИЭВ. -1983. -Т. 57.1. C. 26-28.

115. Быстрицкая Т.Ф., Петрова И.В. Использование отечественных иммунокорригирующих средств в комплексном лечении хронической пиодермии у детей//Тез. докл. IX Всес, съезда дерматовенерол.-Алма-Ата, 1991.-С. 160-161.

116. Вайсов А.Ш., Рахматов А.Б., Рахматов Т.П. Значение феномена Кебнера в оценке тяжести псориаза//Ш съезд дерматовенерологов Узбекистана. Сб. науч. тр.-Ташкент,1997.- С.114-115.

117. Васильева Я.Л., Яширова И.А. Использование системы in vitro для прогнозирования назначения имуунокорригирующих средств у больных распространенным псориазом//Вестн. дерматол. и венерол.-1984.-№ 10.-С.6-8.

118. Векслер И.Г. Биологически активные полисахариды как неспецифические стимуляторы противоопухолевой резистентности организма//Эксперимент. онкология.-1983.-Т.З.-С.10-15.

119. Векслер И.Г. Сравнительное изучение влияния некоторых неспецифических стимуляторов на иммунный ответ организма//Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1980.-Т.29.-С.664-667.

120. Векслер И.Г. Сравнительная оценка влияния некоторых биологически активных полисахаридов на иммунную систему организма//Химия и биология иммунорегуляторов.-Рига: Зинатне, 1985.-С.167-187.

121. Векслер И.Г., Балицкий К.П. Новые экспериментальные данные о биологической активности зимозана/ЛСлиническое применение зимозана и изучение механизма его действия.-Рига:РМИ., 1982.-С.43-53.

122. Векслер И.Г., Самунджан Е.М. Влияние зимозана на систему гипофизкора надпочечников при химиотерапии экспериментальных опухолей//Зимозан в эксперименте и клинике.-Рига: Зинатне, 1971.-С. 105-114.

123. Вершигора А.Е, Общая иммунология.Киев:Вища школа, 1989.-736с.

124. Веселкин П.В. 0 механизме лечебного действия пирогенала// Пирогенал/Под ред. Х.Х.Планельса.-М.: Медицина, 1965. -С.7-16.

125. Виниченко Г.М. Полиядерные координационные соединения железа в водных растворах аминокислот и пептидов иих роль в процессе жидкофазного окисления цистеина молекулярным кислородом: Автореф. дис.канд. хим. наук.-Душанбе, 1987.-24 с.

126. Вишневская Г.П. Спектры ЭПР и парамагнитная релаксация в водных растворах Си (П)//Журн. теор. эксп. химии.-1970.-Т.6.-№ 5.-С.698-701.

127. Воробьев В.М. Применение антибиотиков, аутовакцины и тималина в терапии больных вульгарными угрями и состояние реактивности организма: Автореф. дис. канд. мед. наук.- JL-1990.

128. Высокрэффективная жидкостная хроматография,

129. Галактионов В.Г. Графические модели в иммунологии.-М.: Медицина, 1986.-238 с.

130. Галанкин В.Н„ Токмаков A.M., Боцманов К.К. О структурных основах снижения неспецифической антибактериальной резистентности организма, связанной с функционированием системы нейтрофильных лейкоцитов/Архив, пат.-1989.-Т.51 ,-№ 5.-С.49-54.

131. Гвоздева И.Н. Комбинированное лечение хронической пиодермии с применением иммуномодулятора рузама и лазерного облучения крови (клинико-иммунологическоеисследование): Автореф. дис.канд. мед. наук.-М., 1998.-18 с.

132. Георгиу X. Сравнительная оценка серологических тестов (РДСК, РИГА и ИФА) для диагностики анаплазмоза рогатого скота и нутталиоза лошадей: Автореф. дис.докт. вет. наук.-М., 1997.

133. Гершкович A.A., Кибирев В.К. Методы образования пептидной связи. Реагенты и методы.-Киев: Наукова думка, 1987.-264 с.

134. Гиесов А.Ш., Исупов С.Д., Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Изучение стабильности иммуностимулирующего препарата тимогара//Сб. статей V науч.-практ. конф. "Теоретические и практические исследования в медицине".-Душанбе, 1999.-С.98-100.

135. Главинская Т. А., Куралков Г.В., Павлова Л.Г. Иммунотерапия красной волчанки//Вестн. дерматол. и венерол.-1982.-№ 7.-С.4-8.

136. Глухенький Б.Т., Амалян В.А„ Карпенко В.В. Сорбционная иммунокоррекция и реологические свойства крови у больных распространенным псориазом//Вестн. дерматол.-1984.-№ 11.-С.16-17.

137. Гордон А., Форд Д. Спутник химика.-М.: Мир, 1976.541 с.

138. Горланов И. А. Активность Т-лимфоцитов супрессоров у детей, больных нейродермитом//Вестн. дерматол. и венерол.-1985.-№ 8.-С.40-42.

139. Горланов И. А. Значение иммунологической реактивности в оценке клинического течения нейродермита удетей//Вопросы детской дерматологии.-Jl, 1985.-С.6-9,

140. Горланов И.А. Использование факторного анализа в оценке некоторых иммунологических показателей у детей, страдающих нейродермитом//Вестн. дерматол. и венерол.-1985.-№ 8.-С.40-42.

141. Григорьева A.C., Конахович Н.Ф, Крисс Е, Милетин Ю.А. Взаимодействие между трифенилвердазильным радикалом и комплексами меди, железа, алюминия и цинка с N -3-три-фторметилфенилантраниловой кислотой//Коорд. химия.-1985.-Т.11.-№ 12—С. 1620.

142. Гринштейн Д, Виниц М. Химия аминокислот и пептидов.-М.: Мир, 1967.-821 с.

143. Гулый М.Ф, Комиссаренко С.В, Журавский Н.И. Торможение иммунного ответа метил ендифосфоновой кислотой//Иммунология.-Киев. 1974.-Вып.7.-С.23-26.

144. Дейгин В.И, Бобиев Г.М, Коротков A.M. и др. Синтез и исследование биологической активности иммуноактивных пептидов//Роль пептидных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза.-Л. 1987.-С.34.

145. Дейгин В.И, Коротков A.M., Бобиев Г.М, Михальцов А.Н, Титов М.И. Выделение и структурно-функциональное исследование иммуноактивных пептидов//Цитомедамат. Тез. I

146. Всес. конф. по биорегуляторам.-Д., 1987.

147. Добрынина Н,А. Биокоординационная химия. Метод рН-метрического титрования в изучении комплексообразования биометаллов с биолигандами//Коорд. химия.-1992.-Т.18.-Вып.7.-С.760-767.

148. Довжанский O.K., Мышкина А.К., Оркин В.Ф. Иммунологические сдвиги при псориазе//Вестн. дерматол.-1985.-№ 9.-С.36-38.

149. Довжанский С.И., Уту С.Р., Оркин В.Ф. О возможном механизме развития вторичного иммунодефицитного состояния при псориазе//Тез. докл. I Всес. иммунол. съезда.-Сочи, 1989.-Ч.Н.-С.1986.

150. Дранник Г.Н., Глухенькая А.Б., Сенюк О.Ф., Бровенко Л.Я. Элиминация ЦИК-ов при лечении больных нейродермитом//Тез. докл. VII Всес. съезда дерматовенерол.-М., 1985.-С.74.

151. Евсеев Н.Г., Короткий Н.Г., Крымкина Т.Н. Показателиклеточного и гуморального иммунитета при гемосорбции у больных распространенным псориазом//Вестн. дерматол.-1980.-№ 8.-С.9-12.

152. Ермольева З.В., Вайсберг Г.Е. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды.-М., Медицина. 1976.-184 с.

153. Жуматова P.P. Лечение торнидных и тяжелых форм экземы и нейродермита у детей//Венерические и кожные заболевания.-Алма-Ата, 1983 .-С.92-94.

154. Заверькова Ф.А. К патогенезу экземы и нейродермита у детей// Мат. IV Всерос. съезда дермато-венерол.-Краснодар, 1976.-С.183-184.

155. Заверькова Ф.А., Горланов И.А. Функциональная активность периферической крови при стимуляции фитогемагглютинином и конканавалином А у детей, страдающих нейродермитом// Вестн. дерматол. и венерол.-1984.-С. 13-16.

156. Закенфельд Г.К. Сдвиги картины белков сыворотки крови у больных со злокачественными новообразованиями при химиотерапии в комплексе с зимозаном//Клиника и лечение злокачественных новообразований.-Рига, 1968.-Вып.П.-С.207-213.

157. Земсков В.М., Земсков A.M. Принципыдифференцированной иммунокоррекции//Иммунология.-1996.-№ 3.-С.4-6.

158. Земсков A.M., Земсков В.М., Золоедов В.И., Полякова С.Д., Бжозовский В. Некоторые проблемы комбинированной и альтернативной иммунокоррекции//Успехи совр. биол.-199б.-Т.116.-№ 5.-С.694-606.

159. Зотиков Е.А. Антигенные системы человека и гомеостаз,-М. 1982.-323 с.

160. Иванова И.П., Мареева Т.Е. Лечение псориаза с применением липотропных и антиоксидантных средств//Тез. докл. V съезда дерм.-венерологов УССР.-Харьков, 1986.-С.74-75.

161. Иванова В.И., Сорочинская Е.М. Иммуноактивные пептидыЛУ. Иммуноактивный фрагмент гистона Н2А//Хим.-фарм. журн.-1992.-Т.26.-.№ 9-10.-С.34-37.

162. Игошин Ю.М. Ранние нарушения липидного обмена и энергетических процессов при псориазе и новые методы его лечения: Автореф. дис.,.докт. мед. наук.-М., 1980.-26 с.

163. Игошин Ю.М., Кузнецов В.Ц., Харитонов A.B. Результаты изучения комплексного лечения больных псориазом с применением инголяций человеческого лейкоцитарного интерферона//Вестн. дерматол.-1987.-№ 3,-С.36-39.

164. Иегер Л. Клиническая иммунология и аллергология.-М., 1986.-С. 16-302.

165. Исаева М.П., Будажабон Г. Б., Кузник Б.И. Влияние тималина на показатели иммунитета и гомеостаза у больных распространенными формами псориаза//Вестн. дерматол.-1989.-№ 10.-С.42-43.

166. Итару Я„ Акира М., Кандзи Т., Осаму М. Новые производные 1,2-дитиол-З-тиона и содержащие их в качестве активного ингредиента иммуностимуляторы. Заявка 1-319477 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.-Т.103.-С.595-600.

167. Йосикава М. Сасаки Р., Тиба X. Новый пептид. Заявка 1-249800 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.-Т.82.-С.953-956.

168. Калашкарян A.A., Нурмухамбетов Ж.Н., Самсонов В.А. Изучение субпопуляций Т-лимфоцитов у больных нейродермитом в процессе специфической иммунотерапии//УШ Всес. съезд дерматовенерол. Ставрополь, 1985.-С.94-95.

169. Кассиль Г.Н. Наука о боли.-М.: Наука, 1975.-398 с.

170. Касымов О.И. Нейродерматозы у взрослых больных жителей разных высот Таджикистана (распространенность, особенности клиники, этиология, патогенез, совершенствование терапии): Автореф. дис. докт. мед. наук.-Санкт-Петербург,1996.-34 с.

171. Касымов О.И., Хусейнов A.A. Иммунные и аллергические нарушения у больных нейродермитом жителей разных высот в динамике иммунокорригирующей терапии//Ш съезд дерматовенерологов Узбекистана. Сб. науч. тр.-Ташкент,1997.-С.136-137.

172. Кашкина М.А., Фрейдлин И.С, Активация макрофагов полисахаридами из дрожжеподобных грибов//Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1980.-Т.89.-№ 4.-С.439-441.

173. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врача.-Санкт-Петербург: Гиппократ, 1988.-156 с.

174. Кешилева З.В., Кемайкина В.Н. Тимофеева J1.H. Особенности фагоцитоза при псориазе//Современные методы диагностики и терапии в дермато-венерологии: Сб. науч. тр.-Алма-Ата, 1990.-С.39-50.

175. Киреева А.Ю., Бихман Б.И., Дятлова М.Н. О применении комплексонатов железа//Тез. докл. I Всес. совещ. по химии и применению комплексонатов металлов.-М., 1978.-С.130.

176. Клесов A.A. Химическая металлоэнзимология//Биологические аспекты координационной химии.-Киев: Наукова думка, 1977.-С.66-.86.

177. Клесов A.A., Вэлли B.JI. Арсенилазотирозин-248-карбоксипептидаза А: изучение топографии активного центра фермента методом кругового дихроизма//Биоорган.химия.-1977.-Т.З.-С.964-980.

178. Клесов A.A., Вэлли Б.Л. Магнитный круговой дихроизм2+

179. Со -карбоксипептидазы: множественный характервзаимодействия эффекторов с активным центром фермента//Биоорган. химия.-1977.-Т.З .-958-963.

180. Клесов A.A., Вэлли Б.Л. Субстратная специфичность и кинетика действия карбоксипептидазы А: роль металла активного центра в специфичности связывания и катализа//Биоорган.химия.-1977.-Т.З.-С.806-815,

181. Клиническая иммунология/Под ред. А.В.Караулова.-М.: Медицинское информационное агентство, 1999.-604 с.

182. Ковальчук J1.B., Чередеев А.К. Актуальные проблемы оценки иммунной системы на современном этапе/Иммунология.-1990,-№ 5- С.4-7.

183. Ковальчук JI.B., Чередеев А.К. Иммунодефицитные заболевания человека//ВНИИМИ.-М. 1984.-80 с.

184. Комиссаренко C.B., Карлова Н.П. Использование реакции трансплантант против хозяина для исследования иммунодепрессивного влияния метилендифосфоновой кислоты//Физиолог, журн.-1977.-Т.23.-№ 6.-С.786-788.

185. Комиссаренко C.B., Журавский Н.И., Карлова Н.П., Гулый М.Ф. Угнетение метилендифосфоновой кислотой гиперчувствительности замедленного и немедленного типов//Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1977.-Т.86.-№ 9.-С.339-340.

186. Комиссаренко C.B., Карлова Н.П., Колесникова И.Н., Гайворонская Г.Г., Попова Г.Н., Борисович А.Н., Лозинский М.О. Применение дифосфонатов в качестве иммуномодуляторов// Химия и биология иммунорегуляторов,-Рига: Зинатне, 1985.-С.237-252.

187. Корякин Ю.В., Ангелов И.И. Чистые химические реактивы.-М.,Химия. 1974.-405 с.

188. Костанян И.А., Нуриева Р.И., Наволоцкая Е.Б., Астапова М.В., Драницина С.М., Завьялов .В.П., Липкин В.М. Изучение механизма дифференцирующего действия Lглутаминовой кислоты на клетки НЬ-60//Мол. биол.-1998.-Т.32.-№ 1.-С.148-153.

189. Кочергин И.Г, Бабаяну P.C., Лебедев К. А. Функциональная и количественная характеристика Т- и В-лимфоцитов и других лейкоцитов у больных атопическим дерматитом//Вестн. дерматол. и терапевтические агенты//Коорд. химия,-1990.-Т. 1 б.-Вып. 1 .-С. 11 -21.

190. Крузе X, Эггерс Г. Метод ЕАС-розеток//Иммунологические методы/Под ред. Г.Фримеля.-М.: Медицина, 1987.-С.272-278.

191. Крылова Л.Ф, Диканская Л.Д, Федотов М.А. Моноциклические комплексы платины (II) и палладия (И) с аминокислотами ряда глицина//Коорд. химия.-1994.-Т.20.-№ 1.-С. 57-59.

192. Кубанова A.A., Васильева A.A. Влияние диуцифона на иммунологические показатели и динамику кожного процесса у больных дерматозом//Вестн. дерматол, и венерол.-1987.-№ 5.-С.13-15.

193. Кузьмицкий Б.Б. Журавков Ю.Л. Экспериментальное изучение возможности коррекции адаптивного иммунитета синтетическими гетеростероидами//Вопросы иммунологии. Тез. докл. I Белорусской иммунологической конференции.-Витебск, 1982.-С.24-25.

194. Кузьмицкий Б.Б, Ахрем A.A., Журавков Ю.Л, Лахвич Ф.А. Иммунотропная активность соединений гетеростероидной структуры//Физиологически активные вещества медицине. Тез.докл. V Всес. съезда фармакологов.-Ереван, 1982.-С. 161-162.

195. Кузьмицкий Б.Б., Ахрем A.A., Горбачева И.А. Кевра М.К., Лахвич Ф.А., Пшеничный В.Н. Синтетические гетеростероиды новый класс биологически активных веществ//Фармакология -здравоохранению. Тез. IV Всес. съезда фармакологов.-Л., 1976.-С. 115-116.

196. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа.-М.: Медицина, 1986.-224 с.

197. Лазарева Д,Н„ Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. -М,: Медицина, 1985.-256 с.

198. Лапса Р.Х, Влияние зимозана на функции печеночных и костномозговых элементов РЭС у больных хроническими заболеваниями желудка//Зимозан в эксперименте и клинике.-Рига: Зинатне. 1971.-С. 179-186.

199. Левченко Ф.Ф. Изучение белкового состава сыворотки крупного рогатого скота, больного тейлериозом, подвергавшегося лечению//Тр. ТаджНИВИ. -Душанбе. 1978.-Т.8.-С.114-117.

200. Левченко Ф.Ф. Сравнительное изучение различных химиотерапевтических препаратов при спонтанном тейлериозе крупного рогатого скота//Тр. ТаджНИВИ.-1978.-Т.8.-С. 117-119.

201. Лефрансье И., Паран М., Одибер Ф., Шедид Л., Шоай Ж., Ледере Э. Способ получения N-ацетилмурамилдипептидов. A.c. СССР № 1326197.

202. Лефрансье И., Паран М., Одибер Ф., Шедид Л., Шоай К., Ледере Э. Способ получения н-бутиловых эфиров производных N-ацетилмурамилпептидов. A.c. СССР№ 1346046.

203. Линдер Д.П., Стеценко О.Н., Таланова Л.В. Общее и особенное в действии Т-активина и миелопида на иммунную систему интактных мышей (морфологический анализ)//Иммунология.-1988.-№ 4.-С.44-48.

204. Лозовский В.П., Шергин С.М. Структурно-функциональная организация иммунной системы.-Новосибирск; Наука, 1981.-225 с.

205. Лопухин Ю.М., Петров Р.В., Арион В.Я., Бреусов Ю.Н., Гладышева Т.В., Савина И.В., Лебедев В.В., Кирзон С.С., Иванушкин Е.Ф. Способ получения полипептидов. A.c. СССР № 997298.

206. Ляпон А. О. Клинико-иммунологические параллели при различных формах псориаза: Автореф. дис.канд. мед. наук.-М., 1982.-17 с.

207. Ляшенко В.А., Дроженников В.А., Молотковская И.М. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток.-М.: Медицина, 1988.- 240 с.

208. Манилова Е.А. Динамика М- и G-классов глобулинов и их роль в иммунитете при тейлериозе крупного рогатого скота ( Theileria annulata )//Респ, науч.-теор. конф. молодых ученых испециалистов. Тез. докл. секции "Биология".-Душанбе, 1986.-С.28.

209. Мансуров М.М., Юсупов З.Н., Якубов Х.М. Новое железосодержащее микроудобрение "Хосиловар'У/Информ. листок ТаджНИИНТИ. Душанбе, 1988.-3 с.

210. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов//Биохимия.-1998 .-Т. 63 .-Вып. 1 .-С. 122-132.

211. Масааки Н., Масадзи И., Мамору С., Масаеси И., Томоя О. Сиалосилглицеролипиды с амидной связью. Заявка 2209885 Япония//Кокай токке кохо. сер, 3 (2).-1990.-Т. 73—С. 979-986.

212. Масааки Т., Ютаро С., Каууиати С. Способ получения производных глюкопиранозы и лекарственные препараты на их основе. Заявка 64-52793 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.-Т.20.-С. 1331-1363.

213. Масюкова С. А. Хроническая пиодермия: патогенетическое значение структурно-функциональных изменений иммунокомпетентных клеток, иммунного статуса и новые методы корригирующей терапии: Автореф. дис.докт. мед. наук.-М., 1993.-182 с,

214. Машкиллейсон А.Л., Рубине А.Я., Векслер Х.М.

215. Иммунологические аспекты патогенеза псориаза//Вестн. дерматол.-1987.-№ 2.-С. 17-22.

216. Маянский Д.Н., Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.-Новосибирск: Наука, 1989, .-344 с.

217. Маянский Д.Н., Щербаков В.И. Особенности регенерации гематоцитов при стимуляции купферовских клеток продигиозаном//Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1978.-Т.86.-№ 7.-С.69-71.

218. Медведкин В.Н. Способ получеия пентафторфениловых эфиров аминокислот. A.c. № 724501 СССР//Открытия. Изобретения,-1980.-№ 12.-С.85.

219. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве, утв. Министерством здравоохранения СССР, ВАСХНИЛ и ГУВ Госагропрома СССР. 1987.

220. Милевская С.Г. Карпов P.O., Баженова О.Б. Иммунокорригирующая терапия псориатического артрита//Тез. докл. VI Всерос. съезда дермат. и венерол.-Челябинск. 1989.-4.IL-С.456-457.

221. Мищенко В. П., Подзоров С. С., Силенко Ю.И. Влияниегелий-неонового лазера на свертывание крови и перекисное окисление липидов/УПрименение лазеров в хирургии и медицине. Тез. межд. симп.-Самарканд-Москва, 1989.-4.1.-С.534-536.

222. Мозгов В.И. Фармакология.-М. 1976.

223. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины//Успехи совр. биол.-1983—Т.93.-№ 3(16).-С.339-362.

224. Мотевич В.А. Особенности клинического течения, диагностики, лечения, функционального состояния иммунной системы, диспансеризации больных лимфомами кожи в Республике Беларусь:Автореф. дис.канд. мед. наук.-Минск, 1994.-21 с.

225. Насимова М.А., Исамухамедова Л.Б. Состояние липиднсго обмена при псориазе//Ш съезд дерматовенерологов Узбекистана. Сб. науч. тр.-Ташкент, 1997.-С.157-158.

226. Наставление по применению Т-активина (Т-асЙутит ) в ветеринарии, утв. ГУВ Госагропрома СССР 19.05.89 г.

227. Наставление по применению раствора тимогена 0,01% для ветеринарии, утв. ГУВ МСХ СССР 13.09.91 г.

228. Небиеридзе Ш.К. Патоморфология, пато- и иммуноморфогенез у телят, экспериментально зараженных

229. Theileria annulata и вакцинированных противотейлериозной вакциной: Автореф. дис.канд. вет. наук.-М, 1991.-25 с.

230. Нестеренко Г.В, Коган Г.Х, Башмаков Г.В. Состояние неспецифических средств защиты и иммунной реактивности у больных экземой, красной волчанкой, псориазом и лекарственной болезнью//Вестн. дерматол.-1981.-№ 3.-С.21-24.

231. Никольский И.С, Замотаева Г.А, Мартыненко C.B. и др. К механизму действия гормонов тимуса//Иммунология.-1980.-№6.- С.81-82.

232. Никулин Н.Г. Циркулирующие иммунные комплексы, их иммунохимический состав и некоторые биологические свойства у больных псориатической артропатией//Тез. докл. III симп. соц. стран по псориазу.-М, 1987.-С.167-160.

233. Никулин Н.Г, Старостина З.Д, Комарова В.Д.

234. Клинико-иммунологические корреляции у больных псориатическим артритом по данным определения клеточных (Ти В-лимфоцитов) и гуморальных ( IgG, М, А ) факторов иммунитета//Вестн. дерматол.-1981.-№ 9.-С.10-14.

235. Новиков B.C., Смирнов B.C. Иммунофизиология экстремальных состояний.-Санкт-Петербург: Наука, 1995.-172 с.

236. Нораев Р.Х. Усовершенствование способа иммунизации коров противотейлериозной вакциной//Диагностика, лечение профилактика инфекционных, инвазионных и незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Сб.науч.тр. ТаджНИВИ (1997-1998).-С.42-45.

237. Нурматов Т.М., Юсупов З.Н., Рахимова М.М., Николаева Т.Б. Синтез биологически активных координационных соединений железа и цинка из отходов производства//Тез. докл. XVIII Всес. Чугаевского совещ. по химии комплексных соединений-Минск. 1990.-С.145.

238. Определение естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных. Методические рекомендации.-Минск, 1986.

239. Осипов С.Г., Титов В.Н. Содержание комплемента и основные факторы его регуляции//Иммунология.-1984.-№ 6.1. С.35-38.

240. Павлющик A.B. Влияние зимозана на содержание сульфгидрильных и дисульфидных групп в сыворотке крови и ткани печени у больных раком желудка и прямой кишки//Зимозан в эксперименте и клинике.-Рига: Зинатне, 1971.-С.171-178.

241. Паладе Д.М.,Ожерельев И.Д. Беляева И.В. Комплексообразование кобальта (II) с гистидином в инертной атмосфере// Коорд. химия,- 1994.-Т.20.-№ 6.-С.462-465.

242. Пауков B.C., Кауфман О.Н. Структурно-функциональная характеристика нейтрофильных лейкоцитов и их роль в формировании воспалительных и иммунных процессов//Архив. пат,-1988.-Т.50.-С.З-13.

243. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей/ Под ред. Э.Гросса, Н.Майенхофера.-М., Мир, 1983.-421 с.

244. Перельдин Н.Ш., Ящунский В.Г. Применение комплексонатов железа для предупреждения анемии пушных зверей//Тез. докл. I Всес. совещ. по химии и применению комплексонатов металлов.-М. 1978.-С.144.

245. Петров Р.В. Иммунология.-М.: Медицина, 1987.-416 с.

246. Петров Р.В. Теоретические основы, состояние и перспективы клинической иммунологии//Вестник АМН СССР.-1979.-№ 1.-С.55-57.

247. Петров Р.В., Захарова JI.A. Т- и B-лимфоциты: генез и специфические рецепторы//Итоги науки и техники, сер. Общие вопросы патологии.-М., 1976.-№ 4.-С.7-15.

248. Петрова И.В., Кубанова А. А. Принципыиммунокоррекции в дерматологии//Вестн. дерматол. и венерол.-1990.-№ 11.-С.20-22.

249. Петрова И.В., Трофимова Л.Я., Буданова Н.П. Показатели иммунологического обследования больных псориазом//Тез. докл. V Всерос. съезда дерматол. и венерол.-Владимир, 1983.-С.175.

250. Покровский В.И., Авербах М.Н., Литвинов В.И. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс.-М., Медицина, 1979.

251. Полканов B.C., Мергеева Л.Н., Бочкарев Ю.М. Характеристика нарушений иммунного статуса при псориатической болезни и методы их коррекции//Тез. докл. VI Всерос. съезда дерматол. и венерол.-Челябинск, 1989.-4.IL-C.462-463.

252. Поляков В.Ф. Белки, аминокислоты и другие показатели крови при экспериментальных тейлериозах крупного рогатого скота: Автореф. дис.канд. вет. наук.-М., 1964.

253. Порошин К.Т., Салахутдинов У.И., Турсунов Н.М., Шукуров С.Ш. Изучение комплексных соединений меди с некоторыми дипептидами//Докл. АН ТаджССР.-1971.-Т.14.-№ 1.1. С. 37-40.

254. Практическая химия белка/Под ред. А.Дарбре.-М., Мир, 1989.-621 с.

255. Придыбайло Н., Иванов А. Тималин повышает сохранность цыплят//Птицеводство.-1992.-№ 9.-С.20-22.

256. Раджабов У., Юсупов З.Н„ Оффенгенден Е.Я. Координационные соединения железа с гистидином в водно-перхлоратных растворах//Координационные соединения и аспекты их применения. Сб. науч. тр.-Душанбе, 1991.-С.140-145.

257. Ракитянская И.А. Динамика клинико-иммунологических показателей в процессе терапии у больных мембранозно-пролиферативным и мембранозным гломерулонефритом: Автореф. дис. канд. мед. наук.-М.- 1983.16 с.

258. Рассказов Н.И. Гуморальные и клеточные факторы естественной резистентности при псориазе и новая схема лечения больных этим дерматозом: Автореф. дис.докт. мед, наук.-М., 1978.-23 с.

259. Ратникова Л.И. Эффективность бемитила прирецидивирующей роже//Клин. мед.-1991.-№ 7.-С.89-91.

260. Рахматов А.Б. Основные концепции патогенеза и лечения псориаза//Новости дерматологии и венерологии.-1998.-№ 1.- С.16-18.

261. Ривье Ж.Э.Ф. Вейл В.У. Способ получения пептидов. A.c. СССР № 1435157.

262. Ривье Ж.Э.Ф., Шпис И., Вейл В.У. Способ получения пептидов. A.c. СССР № 1426455.

263. Родин Ю.А. О роли иммунных комплексов в патогенезе псориаза//Вестн. дерматол.-1983.-.№ 9.-С. 12-13.

264. Родионов A.M., Хавинсон В.Х., Барбинов В.В. Иммунокорригирующая терапия пиодермий, обусловленных стафилококками, полирезистентными к антибиотикам//Вестн. дерматол. и венерол.-1990.-№ 1.-С.42.

265. Родионов А.Н., Хавинсон В.Х., Барбинов В.В. Комплексная терапия хронической пиодермии с учетом иммунологической реактивности организма и антибиотикорезистентности стафило-кокков//Воен.-мед. журнал.-1992.-№ 8.-С.28-30.

266. Романенко Э.Д, Бударин Л.И, Яцимирский К.Б. рН-потенциометрическое определение констант устойчивости комплексов Си (И), Мп (II), Бе (II) с изадрином//Теор. и эксперим. химии.-1978.-Т. 14.-№ 1.-С.76.

267. Рубине А.Я. Иммунные механизмы патогенеза и обоснование иммунокорригирущей терапии больных псориазом: Автореф. дис.докт. мед. наук.-М, 1987.-28 с.

268. Рубине А.Я, Бранта Д,К, Гутмане Р. А. Ключевая роль регулирующих и эффекторных лимфоцитов в патогенезе псориаза// Тез. докл. I Всес. Иммунол. съезда.-Сочи, 1989,-Т.П.-С.109.

269. Рубине А.Я, Мерсон А.Г, Гипш Н.М. Соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов и эффекторных лимфоцитов в периферической крови у больных псориазом//Вестн. дерматол.-1984.-№ 10.-С.11-12.

270. Рубине А.Я, Гусева Л.Н, Рожкалнс В.В, Тихонова М.С. Спектор И.М. Циркулирующие имцунные комплексы и иммуноглобулины как показатель иммунологических сдвигов при разных формах псориаза//Вестн. дерматол.-198б.-№ 8.-С.13-15.

271. Рябинина М.Е. Особенности изменений Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов в крови больных псориазом и их терапевтическая коррекция: Автореф. дис.канд. мед. наук.-М, 1987.-16 с,

272. Рябов С.И. Болезни почек.-М, 1982.-420 с.

273. Рябчук В.А. Исследование аминокислотного состава препаратов, полученных из вилочковой железы//Фармация.-1993.-Т.12.-№ 1.-С.36-39.

274. Сабиров В.Х., Кебец Н.М., Порай-Кошиц М.А., Стручков Ю.Г. Кристаллическая структура биядерного комплекса хлорида меди (II) с у-аминомасляной кислотой//Коорд. химия.-1994.-Т.20.-№ 6.-С.466-470.

275. Салахутдинов У.И., Борисова А.П., Савич И.А. Исследование устойчивости и каталитической активности медных комплексов некоторых дипептидов//Докл.АН ТаджССР.-1968.-Т.11.-№ 11.-С.34-36.

276. Сатторов И.Т. Эпизоотология коронавирусного энтерита у телят//Диагностика, лечение и профилактика инфекционных, инвазионных и незаразных болезней сельскохозяйственных животных . Сб. науч. тр. ТаджНИВИ.-Душанбе, 1995.-С.57-61.

277. Сатторов И.Т., Турдиев Ш.А., Жумаев Н.С. Колибактериоз телят (диагностика и лечение)// Диагностика, лечение и профилактика инфекционных, инвазионных и незаразных болезней сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. ТаджНИВИ.-Душанбе, 1995.-С.57-61.

278. Сатторов И.Т., Хамдамов А., Бобиев Г.М., Махмудов К. Пути повышения сохранности молодняка сельскохозяйственныхживотных//Информ. листок НПИЦентра Республики Таджикистан.-Душанбе, 1997.-№ 124-97.-2 с.

279. Севашевич A.B., Шенеровская Т.Г. Иммунные комплексы в крови детей, больных экземой и нейродермитом//Вопр. детской дерматологии.-1980.-С.12-15.

280. Северин С.Е. Филиппов П.П., Кочетов Г. А. Металлоэнзимы// Успехи совр. биол.-1970.-Т.69.-С.241-260.

281. Севрюгина Ю.Ю., Добрынина H.A., Николаева J1.C. Евсеев A.M. Глутаминаты цинка//Коорд. химия.-1994.-№ 3.-С.175-177.

282. Сергеев A.B., Денисова С.И. Иммуномодулирующая активность полисахаридов растительного происхождения// Химия и биология иммунорегуляторов.-Рига: Зинатне, 1985.-С.152-166.

283. Серикова З.Д. Терапия псориаза и субпопуляции нейтрофилов (клинико-лабораторное исследование): Автореф. дис.канд. мед.наук.-Алматы, 1998.-32 с.

284. Серов В.В. Морфологические основы иммунопатологии почек.- М. 1968.-328 с.

285. Синтетические иммуномодуляторы/Под. ред. Р.В.Петрова.-М.: Наука. 1991.-199 с.

286. Скрипкин С.К., Акимов В.Г., Цагарейшвили К.А. Роль алкоголя в возникновении и течении кожных заболеваний//Вестн. д ермато л. -1986. -№ 11.-С.66-69.

287. Скрипкин Ю.К., Короткий Н.Г., Елецкий В.Ю.

288. Перспективы применения иммунокорригирующеголечения активным фактором тимуса (Т-активином) в дерматологии/ЛВестн. дерматол. и венерол.-1986.-№ 4.-С.4-7.

289. Скрипкин Ю.К., Шарапова Г.Я. Вопросы иммунологии в клинике кожных болезней//Вестн. дерматол, и венерол.-1980.-№ 10.-С.13-16.

290. Скрипкин Ю.К., Шарапова Г'.Я., Резайкина A.B. и др. Иммунология в дерматологии//Вестн. дерматол. и венерол.-1993.-№ 4.-С.4-13.

291. Слюдкин О.П., Желонкина А.Г., Иваненко В.А. О различном взаимодействии хиральных L-фенилаланиновых комплексов Pt (II) и Pt (IV) с фенилаланин-транспортной РНК-синтетазой//Коорд. химия.- 1996.-Т. 22.-№ 6.-С.497-498.

292. Смирнов A.B. Бемитил: механизм действия и связанные с ним эффекты//Физиологически активные вещества.-1993.-Вып.25.-С.5-9.

293. Смирнов A.B., Виноградов В.М. Актопротекторы за четверть века//Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы. Санкт-Петербург, 1-3 марта, 1994,-Санкт-Петербург, 1994.-Вып.З.-С.165.

294. Смирнов B.C., Хавинсон В.Х., Яковлев Г.М., Новиков B.C. Коррекция радиационных иммунодефицитов.-Санкт-Петербург: Наука, 1992.-32 с.

295. Смоляр В.И. Гипо- и гипермикроэлементозы.-Киев: Здоровья, 1989.-152 с.

296. Соколова Н.Д., Сатторов И.Т., Мникова JI.A. Коронавирус возбудитель диареи новорожденных телят//Ветеринария.-1982.-№ 11.-С.26-27.

297. Стоссел Т.П. Механизмы иммунопатологии.-М., 1983.-С.306-324.

298. Страйер JI. Биохимия.-М., 1985.-Т.2.-С.74.

299. Струков А.И., Пауков B.C., Кауфман О .Я. Общая патология человека. Руководство для врачей/Под ред. А.И.Струкова, В.Серова, Д.С.Саркисова.-М., 1990.-Т.2.-С.373.

300. Студницын A.A., Шатилова И.В., Жуматова Г.Г. Роль специфической иммунологической реактивности в патогенезе экземы и нейродермита у детей//Вестн. дерматол. и венерол.-1977.-№ 1.-С.З-8.

301. Сура В.В., Аднорал С. А., Белокрицкий Д.В. Иммунологические нарушения при нефротическом синдроме//Актуальные вопросы нефрологии. Сб. науч. тр. I МОЛМИ.-М., 1977.-С. 20-23.

302. Тазулахова Э.Б., Мезенцева М.В., Ершов Ф.И. Роль макрофагов в продукции интерферонов//Антибиотики и химиотерапия.-1990.-Т.З 5.-№ 11.-С.40-43.

303. Тайлынов Т„ Мамедхонов А. Действие микроудобрений цинка на продуктивность хплопчатника//Хлопководство.-1980.-№ 2.-С.27-28.

304. Тарасенко Г.Н., Изучение актопротектора бемитила вкачестве средства активации иммунитета и регенеративных процессов в коже у больных пиодермиями: Автореф. дис.канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 1998.-19 с. ,

305. Тихонова С.Н. Вендт В,П., Трикаш И.О. Способ получения тимостерина А. А. с. СССР № 1001939.

306. Тлиш М.М. Комплексная терапия больных хроническими стафилодермиями, стафилопротектином и дифференцированная иммунокоррекция: Автореф. дис.канд. мед. наук.-М., 1992.

307. Томио Т., Такааки А., Хироюки С. Способ получения нового химического медиатора нагстатина. Заявка 1290675 Япония// Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.-Т.94.-С.467-476.

308. Томоо К., Миюки А., Ацуси X., Синьити К., Мицую Н. Препарат, ускоряющий пролиферацию клеток костного мозга. Заявка 1-287026 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.- Т.93.-С.175-178.

309. Турсунов М.М., Салахутдинов У.И., Шукуров С.Ш., Порошин К.Т. Некоторые свойства комплексов, образованных медью с трипептидами//Докл. АН ТаджССР.-1971.-Т.Х1У.-№ 2.-С.40-43.

310. Тыщенко И.П., Горбунов А.И., Быков А. Д. Использование тимогена для коррекции иммунодефицитного состояния кур при болезни Марека//Информ. листок Орловского ЦНТИ.-Орел., 1992.-№ 89-92.-2 с.

311. Узлова Т.В. Иммунофармакологические аспектытерапии обострения хронического сальпингоофорита: Автореф. дис.канд. мед. наук.-Челябинск, 1990.-21 с.

312. Уильяме Д. Металлы жизни.-М, Мир, 1974.-236 с.

313. Учитель И.Я. Макрофаги и иммунитет.-М, Медицина, 1978.-200 с.

314. Учитель И.Я, Хасман Э.Д. О механизме адьювантного действия пирогенала//Пирогеиал/Под ред. Х.Х.Планельса.-М, Медицина, 1965.-С.69-76.

315. Федоров Ю.Н. Иммунопрофилактика болезней новорожденных животных//Сельскохозяйственная биология. -1988. -№ 2.-С.133-136.

316. Федоров Н.И, Титов Л.П. Состояние некоторых факторов гуморального иммунитета у больных псориазом//Патогенез и терапия кожных и венерических заболеваний. Сб. науч. тр.-Минск, 1981,-Вып.25.-С.74-76.

317. Федоровская Т.Д. Иммунологическая реактивность у больных псориазом и ее изменение под влиянием лечения//Вестн. дерматол.-1978.-№ 2.-С.6-10.

318. Федотов В.П, Лесницкий А.И, Мануйлова Л.А. Количественные соотношения Т- и В-лимфоцитов у больных Т-риЬгиш инфекцией, пиодермитами, сифилисом и псориазом//Вестн. дерматол.-1982.-№ З.-С. 16-21.

319. Фелькер А.Я. Заболеваемость псориазом в Актюбинской области Казахской ССР//Вестн. дерматол.-1988.-№ 6.-С.31-35.

320. Фонталин Л.Н., Певницкий Д.А. Иммунологическая толерантность.-М.- 1978.-310 с,

321. Фримель Г. Метод Е-розеток//Иммунологические методы/Под ред. Г.Фримеля.-М.: Медицина. 1987.-С.269-272.

322. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах//Иммунология.-1996.-№ 6.-С.4-9.

323. Халиков Ш.Х. Синтез и структурно-функциональное исследование пептидов и полипептидов регулярного строения: Дис. докт. хим. наук в форме научного доклада.-М. 1991.-49 с.

324. Хамидов М.А, Роль нарушений клеточного, гуморального иммунитета и эндокринных механизмов его регуляции в течении нейродермита, почесухи и их терапевтическая коррекция: Автореф. дис.докт. мед. наук.-М., 1990.

325. Хван М., Ананьев О.П. Динамика IgG и IgM антител при тейлериозе крупного рогатого скота//Иммунопрофилактика, патогенез и эпизоотология паразитов сельскохозяйственных животных .-Алма-Ата, 1981.-С. 142-144.

326. Хиротомо 0. Способ выделения иммунологически активного вещества. Заявка 3227939 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1991 .-Т.74.-С.267-276.

327. Хохлов Д.Н., Брусов Р.В., Гроховский С.Д., Жузе А., Суровая А.Н., Гурский Г.В, Взаимодействие с ДНК синтетического цинкевязывающего пептида//Мол. биол.-1994.1. Т.28.-Вып. 1 .-С.87-95.

328. Худыйбердыев Э.Х., Алявия М.К. Координационные соединения железа (II), (III), меди (II) с пиродоксином, аспарагиновой и п-аминосалициловой кислотами//Коорд. химия.-1984.-Т.10.-№ 8.-С.1072-1075.

329. Хьюз М. Неорганическая химия биологических процессов.-М., Мир. 1983.

330. Чипенс Г.И. Дизайн иммунорегуляторов на базе пептидно-белковых веществ//Химия и биология иммунорегуляторов.Рига: Зинатне, 1985.-С.3-20.

331. Чипенс Г.И., Полевая Л.К., Веретенникова Н.И„ Крикис А.Ю. Структура и функции низкомолекулярных пептидов.-Рига: Зинатне, 1981.-328 с.

332. Чучалин А.Г. Иммунокоррекция в пульманологии.-М., 1989.-247 с.

333. Шапошников И.Я., Писаренко М.Р., Алексеева A.B. Исследования показателей иммунологического статуса у больных нейродермитом и их коррекция методом ПУВА//Вестн. дерматол. и венерол.-1982.-№ 8.-С. 12-15.

334. Шарапова Г.Я., Короткий Н.Г., Молоденков М.Н. Псориаз (иммуномеханизмы патогенеза и методы лечения).-М., Медицина, I989.-224 с.

335. Шахматов Г.Н. Электрофоретическое изучение белков крови при экспериментальном тейлериозе крупного рогатого скота// Тр. VI конф. по природной очаговости болезней и вопросам паразитологиив республиках Средней Азии и Казахстана.-Душанбе, 1965.-С.138.

336. Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Новый синтез тимопентина//Рук. деп. в НПИЦентре Республики Таджикистан.-Душанбе, 1998.-№ 73(1217)—14 с.

337. Шахматов А.Н., Бобиев Г.М. Синтез гексапептидных аналогов тимопентина//Рук. деп. в НПИЦентре Республики Таджикистан.-Душанбе. 1998.-№ 72(1216).-15 с.

338. Шемякина Е.В. Исследование взаимодействия смешанных аммиачных комплексов меди с аргинином или лизином в растворе и коллагена нативных фибрилл//Коорд. химия.-1991.-Т. 17.-Вып.6.-С.836-839.

339. Шемякина Е.В. Образование в растворах смешанных аминокомплексов меди с глутамииовой и аспарагиновой кислотами и их взаимодействие с фибриллярным коллагеном//Коорд. химия.-1991.-Т17.-Вып.З.-С.344-349.

340. Шубин Л.Л. Комплексная терапия военнослужащих, больных хронической язвенной пиодермией, с учетом этиологических особенностей: Автореф. дис.канд. мед. наук.

341. Нижний Новгород, 1997.-19 с.

342. Щербакова В.И., Панкратова О.Б. Комплексные соединения железа (III) в водных растворах ди- и трипептидов с донорными атомами в боковых цепях//Коорд. химия.-1991.-Т. 17.-Вып.З.-С.344-349.

343. Эйхрорн Г. Неорганическая биохимия.

344. Юнусходжаев А.Н., Муккарамова У.А., Хакимов Х.Х. Смешанные комплексы Со (II), Ni (II), Си (II) с пиридоксином, глутаминовой, аспарагиновой кислотами//Коорд. химия.-1993.-Т. 19.-№4.-С.319-321.

345. Юсупов З.Н., Виниченко Г.М. Состояние комплексных частиц образующихся в системе Fe(II)-Fe(III) -глицин-вода// Вопросы физико-химических свойств веществ.-Душанбе, Шамъ, 1995.-Вып. 2.-С.75-90.

346. Юсупов З.Н., Виниченко Г.М. Состояние комплексных частиц, образующихся в системе Fe (II)-Fe (III) -DL-норвалин-вода//Межчастичные взаимодействия в растворах.-Душанбе, 1997.-С.

347. Юсупов З.Н., Нурматов Т.М., Рахимова М.М. Цинксодержащие координационные соединения и аспекты их применения//Координационные соединения и аспекты их применения.-Душанбе, ТГНУ. 1991.-Ч.1.-С.73-78.

348. Яковлев ГЛ., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х, Роль цитомединов в регуляции гомеостаза//Роль пептидных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза.-Л., 1987.-С.3-4.

349. Якубов Х.М., Алехина JI.A., Юсупов З.Н. Способ борьбы с хлорозом виноградника, A.c. СССР № 728228.

350. Якубов Х.М., Виниченко Г.М., Оффенгенден Е.Я., Астанина А.Н. Координационные соединения железа с глицином в процессе жидкофазного окисления цистеина молекулярным кислородом//Журн. неорган. хим.-1985.-Т.30.-Вып.8.-С.2018-2022.

351. Якубов Х.М., Виниченко Г.М., Юсупов З.Н., Нурматов Т.М. Координационные соединения железа с норвалином//Докл. АН ТаджССР.-1984.-Т.27.-№ 7.-С.391-394.

352. Якубов Х.М., Нурматов Т.М., Рахимова М.М. Стимуляторы прорастания семян хлопчатника//Информ. листок ТаджНИИНТИ.-1986—№ 154.-4 с.

353. Якубов Х.М., Оффенгенден Е.Я., Виниченко Г.М., Астанина А.Н. Координационные соединения железа с аминокислотами как переносчики электронов в модельных каталитических системах//Межд. симп. по гомогенному катализу. Тез. докл. в 4 т.-Л., 1964.-С.308-309.

354. Якубов Х.М., Щербакова В.И., Пальчевский В.В., Бухаризода P.A. Глицинатные комплексы железа//Докл. АН ТаджССР,-1975.-Т. 18.-№ 4.-С.36-39.

355. Якубов Х.М, Юсупов З.Н, Рахимова М.М, Нурматов Т.М. Биологически активные координационные соединения//Проспект.-Душанбе, 1986.-2 с.

356. Ямамути С„ Акира А, Тэру К, Юсаку Исидзука, Хаяо А. Профилактика и лекарственные средства при панкреатите и подобных ему болезнях. Заявка 1-250325 Япония//Кокай токке кохо, сер. 3(2).-1989.-Т.83.-С. 187-196.

357. Яцимирский К.Б. Введение в бионеорганическую химию.-Киев: Наукова думка, 1976.-143 с.

358. Яцимирский К.Б. Моделирование в бионеорганической химии// ЖВХО им.Д.И.Менделеева.-1976.-Т.21 .-С.605-611.

359. Яцимирский К. Б, Волченскова И.И, Майданевич Н.Я. Исследование методом ЭПР влияния цис-дихлордиаминоплатины (II) на активность железосерных центров мембран митохондрий// Докл. АН СССР.-1985.-Т.283.-№ 2.-С.391.

360. Abiko Т, Sekino Н. Effects of synthetic thymopoietin fragments on low E-rosette forming cells in patients with lupus nephritis//Chem. Pharm. Bull.-1981.-v.29.-N ll.-p.3320-3325.

361. Aboko T, Sekino H. Effects of two synthetic serum thymic factor analogues and four thymic factor fragments on the low E-rosette forming cells in patients with chronic renal failure//Chem. Pharm. Bull.-1982.-v.30.-p.4448-4456.

362. Abiko T, Sekino H. Synthesis of calf thymosin P 4 fragments 16-38 and its effect on the impaired blastogenic response of T-lymphocyte of a uremic patient with pneumonia//Chem. Pharm.

363. Bull.-1987.-v.35.-N 9.-p.3757-3765.

364. Abiko T., Sekino H.Synthesis of desacetyl-thymosin (3 10 and examination of its immunological effects on T-cell subpopulation of uremic patient with tuberculosis//Chem. Pharm. Bull.-1986.-v.34.-p.4708-4717.

365. Abiko T., Sekino H. Synthesis of human thymopoietin (LTP) and examination of its immunological effect on the impaired blastogenic response of T-lymphocyte of uremic patients//Chem. Pharm. Bull.-1988.-v.36.-N 7.-p.2506-2516.

366. Abiko T., Sekino H. Synthesis of nonatriacontapeptide corresponding to the entire amino acid cequence of calf thymosin (3 8 and effect on the impaired subsets in patients with lupus nephritis//Chem. Pharm. Bull.-1983.-v.31.-p. 1320-1329.

367. Abiko T., Sekino H. Synthesis of nonatetracontapeptide corresponding to the entire amino acid sequence of thymopoietin I and its effect on the low E-rosette forming cells of a uremic patient//Chem. Pharm. Bull.-1985.-v.33.-p. 1583-1591.

368. Abiko T., Sekino H. Synthesis of the octadecapeptide corresponding to position 32 to 49 of the revised amino acid sequence of thymopoietin II and its effect failure//Chem. Pharm. Bull.-1982.-v.30.-p.3276-3277.

369. Abiko T., Kumikawa M., Sekino H. Synthesis and effects of two peptide fragments of thymopoietin II on E-rosette forming cells in the uremic state//Chem. Pharm. Bull.-1979.-v.27.-N 9.-p.2233-2237.

370. Abiko T., Onodera I., Sekino H. Effect of thymopoietin II fragments and their analogs on E-rosette forming cells in the uremic state//Chem. Pharm. Bull.-1980.-v.28.-N 8.-p.2507-2511.

371. Abiko T., Onodera I., Sekino H. Synthesis and immunological effect of thymosin a i and its fragments on inhibitory factor in minimal changes nephrotic syndrome//Chem. Pharm. Bull.-1980.-v.28.-p.3542.

372. Abiko T., Kumikawa M., Dazai S., Sekino H., Higushi H. The effect of STF and its analogs on T-cell with cellular immunodeficiency//Chem. Pharm. Bull.-1979.-v.27.-p.2207-2211.

373. Allison A.C. Mechanisms of tolerance and autoimmunity//Ann. Pheum. Dis.-1973.-v.32.-p.283-292.

374. Amgiuli P., Vicaric G.P. Carbon-14 labelling of FCE 24578 an immunomodulating agent//J. Labell. Compounds and Radiopharm.-1990.-v.28.-N lO.-p.1213-1219.

375. Andrews B.S., Penny R. The role of immune complexes in the pathogenesis of disease//Aust. N.L.J. Med.-1976.-v.6.-N 6.-p.591-602.

376. Anolersen E., Hjorth N. T-lymphocytes and phytohaemagglutinia responsiveness in atopic dermatits//Acta Dermato-Vener.-l 975.-v.55.-p.345-439.

377. Audhua T., Schlesinger H., Goldstein G. Complete amino acid sequence of bovine thymopoietin I, II and III closely homologous polypeptides//Biochemistry.-1981.-v.20.-N 21.-p.6195-6200.

378. Audhua T., Talle M.A., Goldstein G. Thymopoietin radioreceptor assay utilising lectin-purified glycoprotein from a biologically responsive T-cell line//Arch. Biochem. Biophys.-1984.-v.234.-p.167-177.

379. Audhua T., Heavner G.A., Kroon D.J., Goldstein G. Cooperativity of the thymopoietin 32-36 (the active site) and thymopoietin 38-45 in receptor binding//Regul. Pept.-1984.-v.9.-p.155-164.

380. Audhua T., Kroon D., Heaner G., Viamonts G., Goldstein G. Tripeptide structure of bursin, a selective B-cell gifferentiating hormone of the bursa of Fabricius//Science.-1986.-v.231.-p.997-999.

381. Auger G., Monier J.C., Dardenne M., Pleau J.M., Bach J.-F. Identification of FTS (facteur thymique serique) on thymus ultrathin sections using monoclonal antibodies//Immunol. Lett.-1982.-v.5.-p.213-216.

382. Auger G., Blanot D., Magnin M., Gastinel L.-N., Pleau J.M., Dardenne M., Bach J.-F. Synthesis and biological activity of eight thymulin analogues//Biol. Chem. Hoppe-Seyler.-1987.-v.368.-№ 5.-p.463-470.

383. Auid D.S., Holmquist B. Carboxypeptidase A. Differences in the mechanisms of ester and peptide hydrolysis//Biochemistry.-1974.-v.7.-p.4355-4361.

384. Bach J.-F. The multi-faceted zinc dependency of immune system//Immunol. Today.-1981 .-v.2.-p.225.

385. Bach J.-F. Thymic hormones//J. Pharmacol.-1977.-v.L-p.277-310.

386. Bach J.-F. Thymic hormones: Biochemistry and biological and clinical activities//Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.-1977.-v. 17.-p.281-291.

387. Bach M.A. Lymphocyte-mediated cytotoxicity effects of ageng adult thymectomy and thymic factor//J. Immunol.-1977.-v. 119.-p.641.

388. Bach J.-F., Dardenne M., Pleau J.M. Biochemicalcharacterisation of a serum thymic fsctor//Nature.-1977.-v.266.-p.55-56.

389. Bach J.-F., Bach M.A., Blanot D., Bricas E., Charriere J., Dardenne M., Fournier G., Pleau J.M. Thymic serum factor (FTSy/Bull. Inst. Pasteur.-1978.-v.76.-p.325-398.

390. Baker S.B., Shain A.F., Waldimarsson H. T-cell subpopulation in the blood and skin patients with psoriasis//Brit. J. Derm.-1984,-v. 110.-N l.-p.37-44.

391. Bardos R., Bach J.-F. Modulation of miuse natural killer cell activity by the serum thymic factor (FTS)//Scand. J. Immunol.-1982.-v.l6.-p.321-325.

392. Bardos R., Carnaud C., Bach J.-F. Augmentation de l'active des cellules tueuses (cellules NK) par le facteur thymique serique//C.R. hebd. Seanc. Acad. Sei. Paris.-1979.-v.289.-p. 12511254.

393. Bartfai T. Ny peptid och immunologiskt aktiva foreningar. Заявка 468716, Швеция, Trion Forskning och UfVecklings AB-N 8605513-4, Заявл. 22.12.86. Опубл. 08.03.93.

394. Bäsch R.S., Goldstein G. Induction of T-cell differentiation in vitro by thymin. A purified polypeptide hormone of the thymus//Proc. Nat. Acad. Sei. USA.-1974.-v.71.-p.l474-1478.

395. Benacerraf В., Sebestyen M. Effect of bacterial endotoxins on the reticuloendothelial system//Med. Proc.-1957.-v.16.-N 3.-p.860-867.

396. Birr C., Stollenwerk U. Synthesis of thymosin а ьa polypeptide of the thymus//Angew. Chem. Engl.-1979.-v.18.-p.394.

397. Birr C, Stollemwerk U, Brodner O, Manke H. Alternative routes in the synthesis of thymosin a i and some of its biological activities//Peptides: Structure-Biology-Function/E, Gross and J. Meienhofer, eds.-Rockford, Pierce Chemical Co, 1979.-p.397-407.

398. Birr C, Stollenwerk U, Werner Y, Manke H.G, Brodner O. Synthesis and properties if immunostimulating peptides//Peptides/K.Brunfeldt, ed.-Copenhagen: Seriptor, 1981.-p.420-427.

399. Blanot D, Martinez J, Auger G, Bricas E. Synthesis of analogs of the serum thymic nonapeptide «facteur thymique serique» (FTS)//Int. J. Pept. Protein Res.-1979.-v.14,-p.41-56.

400. Blassek I, Lenfant M. The stimulatory effect of serum thymic factor (FTS) on spontanous NDA synthesis of mouse thymocytes//Cell Tissue Kinet.-1983.-v.l6.-p.247-257.

401. Berthoux F.C, Laurent B, Genin C, Sabater J.C. The abnormalities of complement system in humanglomerulonephritis//Adv. Neproul. Proc. 3-rd Int. Nephrourol. Congr. New York, London, 1981.-p.25-34.

402. Bliznakov E.G., Wan Y., Chang D., Folkers A. Partial reactivation of impaired immune competence in agged mice by synthetic thymus factors//Biochem. Biophys. Res. Commun.-1978.-v.80.-p.631.

403. Bottci S.R., Schneggenburger R.G. Thermogravimetric study of some divalent transition metal chelates of several amino acids//J. Therm. Anal.-1970.-v.2.-p.l 1.

404. Brand A., Gilmour D.G., Goldstein G. Lymphocyte differentiating hormone of Bursa of Fabricius//Science.-1976.-v.l93.-p.319.

405. Braun-Falko O., Mannel C., Scherer R., Nachweisvon zirkulieren den loslichen immunikomplexen in serum1von psoriasis patienten mit dem I-C,Q-test//Hautarzt.-1977.-v.28.-p.658-660.

406. Bricas E., Martinez J., Blanot D., Auger G., Dardenne M., Pleau J.M., Bach J.-F. The serum thymic factor and its synthesis//Peptides: Proc. Of the 5-th Amer. Pept. Symp./Goodman M. and Meienhofer J., eds.-New York: J.Wileu and Sons., 1977.-p.564-567.

407. Cairns S.A., Anson R., London A., Mallick N.P. Circulating immune complexes in idiopathic glomerular disease//Kidney Int.-1982.-v.21/

408. Camazine S.H., Ryan G.B., Unanue E.R., Karnovsky M.J.1.olation of phagocytis cells from the rat renal glomerulus//Lab. Invest.-1976.-v.35.-N 4.-p.315-321.

409. Cerny M., Kasaffriek E., Rowensky J., Pekarek J. Synthesis of C-extended analogs of serum thymic factor//Collect. Chechosl. Chem. Commun.-1987.-v.52.-p. 1857.-1866.

410. Chatenaud L.M., Di Padova F., Bianchi G. Critical review on the methods employed for circulated immune complexes detection//Haematologica.-1979.-v.64.-p.494-504.

411. Chen J., Low T.L.K., Goldstein A.L. Isolation and characterisation of thymosin a i-like polypeptides from human blood//Fed. Proc.-1983 .-v.42.-p.447.

412. Choy P.Y., Fasman G.D. Prediction of secondary structure of proteins from their amino acid sequence//Adv. Enzymol.-1978.-v.47.-p.45-l 15.

413. Christophers E., Schubert C., Schroder J.-M. Psiriasis//Triangle.-1987.-v.26.-№ 34.-p. 167-175.

414. Ciardelli T.L., Incefy G.S., Birr C., Brodner O. Synthesis and properties of immunostimulating peptides//Peptides: Synthesis-Structure-Function/D.Rich and E.Gross, eds.-Rockford III. Pierce Chemical Co., 198l.-p.541-544.

415. Ciardelly T.L., Incefy G.S., Birr C. Activity of synthetic thymosin oti C-terminal peptides in the azathioprine E-rosette inhibition assay//Biochemistry.-1982.-v.21.-p.4233-4237.

416. Clot J., Dardenne M. Evaluation of lymphocytesubpopulation and T-cell functions in psoriasis//Clin. Immunol.1978.-v.9.-N 4.-p.389-397.

417. Cochrane C.G., Koffler D. Immune complex disease in experimental animals and man//Adv. Immunol.-1973.-v.86.-p. 185264.

418. Constantopoulos A., Najjar V.A. Tuftsin deficiency syndrome. A report of two new causes//Acta paediatr. Scand.-1973.-v.62.-p.645-648.

419. Coombs T.L., Omote Y., Vallee B.L. The zinc-binding groups of carboxypeptidase A//Biochemistry.-1964.-v.3.-p.633-662.

420. Cooper M.D. Mechanisms of autoimmune phenomena and immune deficiency//Immunology: 4-th Comgr. Immunol. Paris. Etc., 1980.-p.996-998.

421. Couser W.G. What are circulating immune complexes doing in glomerulonephritis//N. Engl. J. Med.-1981.-v.304.-N 20.-p.1230-1232.

422. Crecu J., Sandulescu R., Neamtu M. Comhpecsi musti ai Mn(II), Cu(II), si Sn(II) Cu aminoacizi//Rev. Chim. (RSR).-1986.v.37.-№ 7.-p.589-595.

423. Dardenne M, Pleau J.M, Bach J.-F. Characterisation of facteur thymique serique (FTS) in the thymus. II. Direct demonstration of the presence of FTS in thymosin fraction V//Clin. Exp. Immunol.-1980.-v.42.-p.477-482.

424. Dardenne M., Pleau J.M, Man N.K, Bach J.-F. Structural study of circulating thymic factor: A peptide isolated from pig serum. I. Isolation and purification//J. Biol. Chem.-1977.-v.252.-p.8040-8044.

425. Dardenne M, Pleau J.M, Savino W, Bach J.-F. Monoclonal antibody against the serum thymic factor (FTS)//Immunol. Lett.-1981 .-v.4.-p.61 -69.

426. Dardenne M, Pleau J.M, Savino W, Bach J.-F. Monoclonal antibody against the serum thymic factor (FTS)//Immunol. Lett.-1982.-v.5 .-p.79-83.

427. Dardenne M, Pleau J.M, Nabarra B, Lefrancier P, Derrien M, Choay J. Contribution of zinc and other metalls to the biological activity of the serum thymic factor (FTS)//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1982.-v.79.-p.5370-5375.

428. Davis C.A, Marder H, West C.D. Circulating immune complexes in membranoprolipherative glomerulonephritis//Kidney1.t.-1981.-v.20.-N 6.p.728-732.

429. Dearman R.J, Basketter D.A, Kimber I. Variable affects of chemical allergens on cerrum IgE concentration in mice. Preliminary evaluation of novel approach to theidentification of respiratory sensitives//! Appl. Toxicol.-1992.-0ct.-p.l06-109.

430. Denes L., Szende В., Ember J., Hajos G., Szporny L., Rill

431. A., Nyeki O., Schon I., Kisfaludy L. Иммуномодулирующие эффекты фрагментов тимопоэтина//Иммунология.-1986.-№ 3.-С.13-19.

432. Deshaux Р. Le thymus organ endocrinien//J. Physiol.-1980.-v.298.-p.357-371.

433. Dixon F.J., Feldman J.D., Vasquer J.J. Experimental glomerulonephritis: the patogénesis of a laboratory model resembling the spectrum of human glomerulonephritis//J. Exp. Med.-1961 .-v. 113.-N 2.-p.899-920.

434. Dokhelar M.C., Tursz Т., Dardenne M., Bach J.-F. Effect of a synthetic thymic factor (facteur thymique serique) on natural killer cell activity in humans//Int. J. Immunopharmac.-1983.-v.5.-p.277-282.

435. Erikson-Viitanen S., Ruggieri S., Natalini P., Horecker

436. B.L. Thymosin (3 ю, a new analog of thymosin (3 4 in mammalian tissues//Arch. Biochem. Biophys.-1983.-v.225.-p.407.

437. Faure M., Trivolet J. Use of monoclonal antobodies specific in cutaneous disorders. 1. Quantitative analysis of peripheral blood lymphocytes//J. Clin. Immunol.- 1982.-v.2.-№ З.-р.ЮЗ-llO.

438. Felix A. M., Heimer E.P., Wang C.-T., Lambros T.-J., Swistok J., Ahmed M., Rozskowski M., Trzeciak A., Gillesen D.,

439. Toome V., Wegrzynski B., Pitcher K., Meienhofer J. The synthesis and physical properties of thymosin a i and its analogs prepared by fragment condensation//Tnymic hormones andlymphokines/A.L.Goldstein ed.-Plenum Publishing Corporation, 1984.-p.127-134.

440. Felix A.M., Yen E.T.H., Reiser H., Benacerraf B., Rock K. Expression of T-cell activating protein in peripheral lymphocyte subsets//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1983.-v.80.-p.7424.

441. Ford P.M., Kosatka J. A mechanism enhancement of immune complexes deposition following in situ immunocomplex formation in the mouse glomerulus//Immunology.-1981.-v.43.-№ 3.-p.433-439.

442. Friere M., Crivellaro O., Isaacs C., Horecker B.L.

443. Translations of mRNA from calf thymus in the wheat germ system: evidence for a precursor of thymosin a i//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1978.-v.75.-p.6007-6011.

444. Fujino m., Shanagawa S., Fukuda T., Takaoki M., Kawaji M., Sugino Y. Synthesis of the nonatetracontapeptide corresponding to the sequence proposed for thymopoietin II//Chem. Pharm. Bull.-1977.-v.25.-p.1486.

445. Gastinel L.N., Pleau J.M., Dardenne M., Bach J.-F. Characterisation of zinc binding sites on the nonapeptide thymulin//Biochim. Biophys. Acta.-1984.-v.797.-p. 147-155.

446. Gilman S.C., Rosenberg J.S., Feldman J.D. Inhibition of interleikin synthesis and T-cell proliferation by monoclonal anti-la antibody//J. Immunol.-1983.-v. 180.-p. 1236-1240.

447. Goh C.L. An epidemiological comparison between naudeczema and non-hand eczema//Brit. J. Dermatol.-1988.-v. 118.-№ 6.-p.797-801.

448. Goldstein G. The isolation of thymopoietin (thymin)//Ann. N.Y. Acad. Sci.-1975.-v.249.-p.l77-185.

449. Goldstein G., Scheid M.P., Boyse E.A., Schlesinger D.H., Waume J.V. A synthetic pentapeptide with biological activitycharacteristic of the thymic hormone thymopoietin//Science.-1979.-v.204.-p.l309-1310.

450. Gyotoky J., Imaizumi A., terada S., Kimoto E. Biological activity of synthetic analogs of serum thymic factor//Int. J. Pept. Protein Res.-1983 .-v.21 .-p. 135-144.

451. Habib R., Kleinknacht C. The primary nephrotic syndrome of childood: classification and clinico-pathologic study of 406 causes//Pathology annual/Ed. S.C. Commers, 1971.-v.6.-p.417-474.

452. Hall F.R. Antigens and immunity in Theileria annulata// Parasitol. Today.-1988.-v.4.-№ 2.-p.36-40.

453. Hamuro J., Wagner H., Rollinghoff M. (3-(l-3)glucans as a probe for T-cell specific immune adjuvants. Enhanced in vitro generation of cytotoxic T-lymphocytes//Cell. Immunol.-1978.-v.38.-p.328-335.

454. Hamuro J., Wagner H., Rollinghoff M. |3-(l-3)-Glucan mediated augmentation of alloreactive murine cytotoxic T-lymphocytes in vivo//Cancer. Res.-1978.-v.38.-p.3080-3085.

455. Hannapel E., Davoust S., Horecker B.L. Thymosins |3 gand (3 9: two new peptides isolated from calf homologous to thymosin (34//Proc. Nat. Acad. Sci. USA.-1982.-v.79.-p.1708.

456. Harotos A.A., Goodal G.J., Horecker B.L. Study of facteur thymique serique/ZProc. Nat. Acad. Sci. USA.-1984.-v.81.-p.121.

457. Heavner G.A., Audhua T., Kroon D., Goldstein G. Structural requirements for the biological activity of thymopentin analogs//Arch. Biochem. Biophys.-1985.-v.242.-p.248-255.

458. Hoedelmaeker P.J., Flueren G.J., Bakker W.W., Weening J.J. In situ formation of immune complexes in renal disease//Neth. J. Med.-1984.-v.27.-N 9.-p.380-384.

459. Huang K.Y., Kind P.D., Jagoda E.M., Goldstein A.L. Thymosin treatment modulates production of nterferon//J. Interferon Res.-1981 .-v. 1 .p.411.

460. Imaizumi A., Gyotoky J., Terada S., Kimoto E. Structural requirements for the biological activity of serum thymic factor//FEBS Lett.-1981.-v.l29.-p.l08-l 10.

461. Incefy G.S., Ishimura K., Wang J.G., Unson G., Erikson

462. B.W.A. A radioimmunoassay for thymosin alpha-1//J. Immunol. Methods.-1985.-v.89.-p. 17.

463. Inflammatory diseases and copper. The metabolic and therapeutic roles of copper and other essential metalloelements in humans//Ed. Sorvenson J.R.J.-Clifton (New Jersey):Human Press.-1982.-622 p.

464. Jablonska S, Glinski W. Overview of Imminology//Psoriasis/Ed. H.H.Roenigk, H.I.Maibach.-New York, 1985.-p. 189-202.

465. Jambon B, Montage P, Bene M.C, Brayer M.P, Faure G, Bach J.-F. Immunologic localisation of «facteur thymique serique» (FTS) in human thymic epithelium//J. Immunol.-1981.-v.l27.-p.2055-2059.

466. Johansen J.T, Klyosov A.A, Vallee B.L. Circular dichroism inhibitor titrations of arsanylazotyrosine-248 carboxypeptidase A//Biochemistry.-1976.-v. 15.-p.296-303.

467. Kandewitz P, Braun-Falko O, Kind P. Distribution of T-cell subsets defined by monoclonal antobodies in skin lesions of psoriasis vulgars//Arsh. Derm. Res.-1984.-v.276.-№ 1.-p.33-35.

468. Kaneko F, Gushikin H, Kawagishi I. Analysis of immunological responses in psoriatic lesions//J. Invest. Dermatol.-1979.-v.5.-p.436-439.

469. Kapp A, Wekefen H, Schopf E. Involment of complement in psoriasis and at dermmeasurement of C3a and C5a, C3, Ch and CI inactivator//Arch. Dermatol. Res.-1985.-v.7.-p.277.

470. Kapp A., Wokalek H., Schoph E. Measurements of C3a, C5a, C3, C4 and CI inactivator//Arch. Derm. Res.-1985.-v.7.-p.359-361.

471. Kim J., Schmidt F. Zur frage der absorption von kolostralen immunoglobulunen durch das Kalb.//Dt. Tierarzti. Wschrift.-1983.-Bd.90.-N 7.-S.283-286.

472. Kirbi J., Blsck M., McGillon D. Levamisole induced Ii chenoid erupti ous//Roual Soc. Med.-1980.-v.73.-N 3.-p.208-212.

473. Kisfaludy L., Roberts E.J., Johnson R.H. Synthesis of N-carbobenzoxyamino acid and peptide pentafluorphenyl esters as intermediates in peptide synthesis//J. Org. Chem.-1970.-v.35.-№ 10.-p.3563-3564.

474. Kittl W.S., Rode B.M. Complex formation of nickel ion with aliphatic dipeptides//Inorg. Chim. Acta.-1982.-v.66.-N 3.-p.105-112.

475. Knopf B., Vagelsang H., storz H. Analyse von T-lymphozyten-subpopulationen mit hiffe monoklonalen antikorper bei psoriasis//Dermatol. Mschr.-1985.-v.l71.-№ 4.-p.217-221.

476. Kristensen M., Ilium D., Sogaard H. Mycosis fungoides. A review of the clinical picture, treatment and course in 107 patients//Ugeskr. Laeger.-1990.-v.l52.-№ 9.-p. 1371-1375.

477. Lacovara I., Utermohlen V. Isolation and assay of a human plasma factor affecting human thymus-derived lymphocytes//Clin. Immunol. Immunopathol.-1993.-v.27.-p.428

478. Lagrande P.H., Machaness G.B., Miller T.E. Influence of dose and route of antigen injection of the immunological induction of T-cell//J. Exp. Med.-1974.-v.139.-N 3.-p.528-542.

479. Laurent M.R., Panayi G.G., Sheoherd P. Circulating immune complexes, serum immunoglobulins and acute phase proteins in psoriasis and psoriatic arthritis//Ann. Rheum. Dis.-1987.-v.40.-p.66-69.

480. Le Borgne F., Beacourt J.P. Cobalt-carbonyl complexes of some peptides as infrared markers//Tetrahedron Lett.-1988.-v.29.- № 44.-p.5649-5652.

481. Legiec C., Moszczynski P. Niektore cechy kliniczne luszczycy pos politej a sleznic immunoglobulin w surwecy kzwi//Pol. TYg. Lek.-1985.v.40.-№ 33.-p.936-938.

482. Lerner R.A., Glassek P.J., Dixon F.J. The role of autoglomerular basement membranes antibody in the pathogenesis of human glomerulonephritis//J. Exp. Med.-1967.-v.26.-№ 6.-p.989-1004.

483. Ligresti D.J., Neff J.C., Lowney E.D. Increased helper-supressor T-cell ratio in psoriasis//Arch, of Dermatol.-1982.-v.l 18.-№ 12.-p.966-970.

484. Lindholm L., Mobacken H., Magnusson B.L. Circulating immune complexes in untrated psoriasis. A comparison of Raj icell radioimmunoassay and polymorphonuclear leukocyte phagocytosis//Arch. Derm. Res.-1987.-v.279.-№ 7.-p.435-438.

485. Lisby G., Reitx M.S.J., Vejlsaard G.L. No detection of HLA-1 DNA in punch skin biopsies from patient with cutaneous T-cell lymphoma by the polymerase chain reaction//J. Invest. Dermatol.-1992. v.98 .- № 4.-p.417-420.

486. Low T.L.K., Goldstein A.L. Chemical characterisation of thymosin p4//J. Biol. Chem.-1982.-v.257.-p.1000.

487. Low T.L.K., Goldstein A.L. The chemistry and biology of thymosin. II. Amino acid sequence analysis of thymosin a i and polypeptide |3 j//J. Biol. Chem.-1979.-v.254.-p.987.

488. Low T.L.K., Goldstein A.L. Thymosins: structure, function and therapeutic applications//Thymus.-1984.-v.6.-№ 1-2.-p.27-42.

489. Low T.L.K., McClure J.F., Naylor P.H. et al. Isolation of thymisin a i from thymosin fractions of different species by high performance liquid chromatography//.!. Chromatogr.-1983.-v.266.-p.533.

490. Low T.L.K., Thurman G,B., McAdoo et al. The chemistry and biology of thymosin. I. Isolation, characterisation and biological activities of thymosin and polypeptide from calf thymus//J. Biol. Chem.-1979.-v.254.-p.981

491. MacDouald H., Wabhosr M. T-cell activation//Ann. Rev. Cell. Biol.-1986.-v.2.-p.231-253.

492. Maeda Y., Chihara G. The effect of neonatal thymectomy on the antitumour activity of lentinan, carboxymethyl-pachymaran and zymozan and their effects on various immune responces//Int. J. Cancer.-1973.-v.l 1.-p.153-161.

493. Martinez J., Blanot D., Auger G., Sasaki A.m, Bricas E. Synthesis of analogs of serum thymic nonapeptide "facteur thymique serique» (FTS)//Int. J. Pept. Protein Res.-1980.-v.l6.-№ 4.-p.267-279.

494. Mayerhofer S., Seeber A., Pleyer R. Cutaneous higrade, immunoblastic non-Hodgkin lymphoma of B-cell origin in an HLA-1 infected patient//Dermatology 2000 Vienna. Programme and book of Ab stracts. -London, 1993 .-p.203.

495. Mayr A., Muttertier-Schutzimpfung//Berl. Munch. Tierarstl. Wschr.-1982.-Bd.95.-№ 18.-S.340-350.

496. McClure J.E., Lameris N., Wara D.W. Immunochemical Studies of thymosin: Radioimmuneassay of thymosin//J. Immunol.-1982.-v.128.-p.368.

497. Mebus C.A. Pathogenesis of coronaviral infection in calves//J.A.V.M.A.-1978.-v. 173.-№ 5(2).-p.631 -632.

498. Mecori T, Segal R, Bartal A, Robinson E. Lymphocyte transformation in complement and immunodepressed individuals. 3 ways of results presentation//Acta. Haematol.-198l.-v.66.-№ 2.-p.73-80.

499. Miller J.F.A.P. Endocrine function of the thymus//New Engl. J. Med.-1974.-v.290.-N 22.-p. 1255-1256.

500. Mladenova-Orlinova L.V, Alargov D.K, Antcheva M.N. New schemes of thymopentin synthesis//,ZI,okji. Btnr. AH.-1992.-v.45.-№ 7.-p.41-44.

501. Mokotoff M, Patchornic A. Synthesis of C-terminal half of thymosin a i by the polymeric reagent method//Int. J. Pept. Protein Res.-1983 .-v.21 .-p. 145-154.

502. Monier J.C, Dardenne M, Pleau J.M, Deshaux P, Bach J.F. Characterisation of facteur thymique serique (FTS) in the thymus. I. Fixation of anti-FTS antibodies on thymic reticuloepithelial cells//Clin. Exp. Immunol.-1980.-v.42.-p.470-476.

503. Morrison W.J, Goddeeris B.M. The role of the MHC in immunity of cattle to the protozoan theileria parva//Ann. Rech. Veter.-1989.-v.20.- № 3.-p.385-388.

504. Moseley L.H, Whaley K. Control of complement activation in membranous and membranoprolipherativeglomerulonephritis//Kidney Int.-1980.-v.l7.-№ 4.-p.535-544.

505. Mrabet B., Jouini M., Huet J., Lapluye G. Potentiometric, colorimetric and spectroscopic study of copper (II) complexes of leucine-enkephalin and tripeptides, containing tyrosine//! Clin. Et phys.-chim. Biol.-1992.-v.89.-№ 11-12.-p.2187-2205.

506. Murtiashaw C.W. Crystalline N-(S-3-methylheptanoil)-D-gamma-glutamil-glycyl-D-alanin and process and intermediates. Pat. USA 5136020.

507. Najjar V.A. Therapeutically useful polypeptides. USA Patent Office 3.778.426. 11 Dec. 1973. Int. ClC07c; C07g/00; C08h 1/00. Appl. 16. dec. 1970.

508. Najjar V.A., Nishioka K. Tuftsin, a natural phagocytosis stimulating peptide//Nature.-1970.-v.228.-p.672-673.

509. Nao N.-T., Heinzel W., Birr C. DDz a highly efficient protecting group in large scale synthesis of thymosin alpha-1 related peptides//Peptides: 1986: Proc. 19th Eur. Peptide Symp., Porto Carras, Aug. 31-Sept.5, 1986.-New York, 1987.-p.227-230.

510. Negosanti M., Fanti P.A., Gaspont A. IgE serum levels in psoriasis//Dermatologica.-1981 .-v. 163 .-№ 6.-p.474-475.

511. Ohno M., Taukamoto S., Makisumi S., Izumiya N. Improved solid-phase synthesis of tryptophan-containing peptides//Bull. Chem. Soc. Jap.-1972.-v.5.-№ 6.-p.2852-2855.

512. Ool J.M., Wallota E.H., Qwest C.D. Cossial complement pathway activation in MPGN//Kidney Int.-1976.-v.9.-№ 4.-p.46-53.

513. Pastoret P.P., Schoenaers F. Les Diarrhees neonatales d'origine virole ehez le veau//Ann. Med. Vet.-1977.-v.21.-№ 2.-p.81-90.

514. Pearlstein K.T., Palladino M.A., Welte K., Volcek J. Purified human interleukine-2 enhances induction of immune interferon//Cell. Immunol.-1983.-v.80.-p. 1-9

515. Perrin D.D. Complex formation between ferri ion and glycine//! Chem. Soc.-1958.-№ 9.-p.3120-3124.

516. Peters D.K., Williams D.G. Complement mesangioca pillary glomerulonephritis: Role of complement deficiencyin the pathogenesis of nephritis//Nephron.-1974.-v.l3.-№ 3.-p.l89-193.

517. Pichler E., Zangerle R., Pnelacher W. AIDS transduction of c-myc gene in naturally occuring feline leukaemias// Nature (London).- 1984.-v.308.-№5962.-p.856-858.

518. Prochazka Z., Veretennikova N.I. Amino acid and peptides. CCXVI. Synthesis of three analogues of tuftsin with 1-aminocyclopropene-l-carboxylic acid//Collect. Czechosl. Chem. Commun.-1990.-v.55.-№ 7.-p. 1883-1887.

519. Rajnavolgui E., Kulich J., Szilagyvari M., Nyeki O., Schon J., Gergely J. The influence of new thymopoietin derivativeson the immune response of inbred mice//Int. J. ImmunopharmacoL-1986.-v.8.-p.l67-177.

520. Rampold G., Lundanes E., Folkers K., Voelter W., Kalbacher H., Bliznakov E. Solind-phase synthesis of thymopoietin (32-36) using Adpoc amino acids and its biological activity//Z. Naturforsch.-1980.-v.3 5b.-p. 1476-1478.

521. Rekker R.F. The hydrophobic fragmental constant.-Amsterdam: Elsevier.-p.300-305.

522. Ritz E. Immunomechanismen bei der glomerulonephritis//Therapiewoche.-1980.-Bd.30.-S.7320-7334.

523. Rubins A.Ya., Merson A.G. Subpopulation of T-lymphocytes in psoriasis patients and their changes during immunotherapy//Amer. Acad. Dermatol.-1987.-v. 17.-N 6.-p.972-977.

524. Ruggieri S.,Erikson-Viitanen S.,Horesker B.L.Thymosin Pio-Arg a major variant of thymosin P .0 in rabbit tissues//Arch. Biochem. Biphys.-1983.-v.226.-p.388.

525. Savino W., Dardenne M., Papiernik M., Bach J.-F. Thymic hormone containing cells: Characterisation ang localisation of serum thymic factor in young mouse thymus studied by monoclonal antibodies//J. Exp. Med.-1982.-v.l56.-p.628-634.

526. Scheid M.F., Goldstein G., Bouse E.A. Induction of T-helper cells by synthetic thymic hormones//J. Exp. Med.-1978.-v.l47.-p.l727.

527. Schiller P.W. Conformational analysis of enkephalin andconformation-activity relationships//The peptides/S.Udenfrierd., J. Meienhofer, eds.-Academic Press Inc.: 1984.-v.6.-p.219-268.

528. Schlesinger D.M., Goldstein G. The amino acid sequence of thymopoietin II//Cell.-1975.-v.5.-№ 4.-p.361-365.

529. Schmidt F., Kin J., Derenbach J., Landholz H. Kolostral immunitat und aufzuchtleistung von Kalbern in der Mutterkuchhal-tung//Tierarztl. Unshau.-1982.-Bd37.-№ 5.-S.485-488.

530. Schneider I., Telepdy E., Liszt F. Study of circulating immune complexes in atopic dermatotitis//Acta Derm.-Venerol.(Stochn), 1972.-v.71 (Supple 17b).-p.65-67.

531. Schopf E. Störung zellvermitteler immunreactionen bei neurodermitis atopica. Verninoderis spontanprozettundung vin T-lymphocyten//Dermatologica.-1974.-v. 149.-N 4.-S.210-219.

532. Schreiber R.D., Gotre O., Miller-Eberhard H.U. Nephritic factor//Scand. J. Immonol.-1976.-v.5.-№ 6-7.-p.705-713.

533. Schulof R.S., Low T.L.K., Thurman G.B., Goldstein A.L. Thymosins and other hormones of the thymus gland//Ann. N. Y. Acad. Sei.-1980.-v.274.-p. 183-190.

534. Singh D.K., Jagdish S., Gautam D.P. Cell-mediated immunity in tropical theileriosis (Theileria annulata)// Res. Vet. Sci.-1977.-v.23.-№ 3.-p.391-392.

535. Sobel A., Gillan A., Belghiti D., Mannoni R., Lagrue G. Glomerulonephritis a complexes immuns: Les nouvelles methodesd'ecploracin et les nouveaux moyene therapeitiques//Rev. Mediter. Sei. Med.-1980.-v.5.-№ 3.-p.58-59.

536. Solling J., Olsen S. Circulating immune complexes in glomerulonephritis//Clyn. Nephrol.-1981.-v. 16.-№ 2.-p.63-74.

537. Spirer Z., Zakuth V., Bogair N., Fridkin M. Radioimminoassay of the phagocytosis-stimulating peptide tuftsin in normal and splenectomized subjects//Eur. J. Immunol.-1977.-v.7.-p.69-74.

538. Strachan R.G., Paleveda W.J., Bergstrand S.J., Nutt R.F., Holly F. W., Veber D. Synthesis of a proposed thymic factor//J.

539. Med. Chem.-1979.-v.22.-p.586-588.

540. Sunshine G.H., Bäsch R.S., Coffey R.G., Cohen K.W., Goldstein G., Hadden J.W. Thymopoietin enhances the allogenic response and cyclic GMP levels of mouse peripheral thymus-derived lymphocytes//! Immunol.-1978.-v.l20.-p.l594-1599.

541. Suzuki K., Sasaki Y. Studies on enkephalitogenic fragments of myelin protein. 2. Solid-phase synthesis of tryptophan-containing decapeptide// Chem. Pharm. Bull.-1973.-v.21.-№ 12.-p.2634-2638.

542. Svidersky L.P., Hui A., May L., McKay P., Stebbihg N. Induction and augmentation of mitogen-induced immune interferon in human peripheral lymphocytes by Na-desacetylthymosin a 1//Eur. J. Immunol.-1982.-v.l2.-p.244-247.

543. Swainson J.A. Evidence for circulating complexes containing IgE in patients with at derm//Int. Arch. Allergy.-1986.-№ 7.-p.666-670.

544. Thomaidis Th. S, Fidalgo B.V, Harshman S, Najjar V.A. The physiological role of the lymphoid system. IV. The separation of y -globulin into physiologically active components bycellelose phosphate chromatography//Biochemistry.-1967.-v.7.-p.3369-3377.

545. Thustrum-Pederson K, Filegaard I, Lacharial H. Mitogen and PPD responsiveness in severe atopic dermatitis//J. Invest. Dermatol.-1975.-v.64.-p.296-301.

546. Torun B. Wskazniki odpowiedzi immunologiczhej istanu zapalnego w luszczycy//Prezegl. Dermatol.-1987.-v.74.-№ 1.-p.78-82.

547. Vaisius A.C., Horgen P.A. The effects of several divalent cations on the activation of inhibition of RNA polymerase II//Arch. Biochem. Biophys.-1980.-v.203.-p.553-564.

548. Vallee B.L. Active center of carboxypeptidase A//Fed. Proc.-1964.-v.23.-p.8-17.

549. Vallee B.L., Williams R.J.P. Enzyme action: views derived from metalloenzyme studies//Chem. In Britain.-1968.-v.4.-p.397-402.

550. Veretennikova N.I., Chipens G.I., Nikifirivich G.V., Betinsh Y.R. Rigin, another phagocytosis stimulating peptide isolated from IgG. Conformations of hypothesis//Int. J. Peptp Protein Res.-1981.-v.l7.-p.430-435.

551. Verroust P.J., Wilsin C.B., Cooper N.R., Edgington T.S., Dixon F.J. Glomerular complement component in human glomerulonephritis//J. Clin. Invest.-1974.-v.53.-№ l.-p.77-84.

552. Wang S.S., Kulesha I.D., Winter D.P. Synthesis of thymosin a xllJ. Am. Chem. Soc.-1978.-v.101.-p.253.

553. Wang S.S., Makofske A., Merrifield R.B. Automated solid-phase synthesis of thymosin a ¡//Int. J. Pept. Prptein Res.-1980.-v.l5.-p.l

554. Wang S.S., Wang B.S.H, Chang J.K., Low T.L.K., Goldstein A.L. Synthesis of thymosin (3 4//Int. J. Pept. Protein Res.-1981.-v.18.-p.413.

555. Wekerle H., Born W., Kyewski B., Prester M. Cellular basis of immunological self tolerance:

556. Cellular and humoral regulation//Behring Inst. Mitt.-1981.-№ 65.-p.71-86.

557. Wellemans G., Antoine H., Botton G., Van Opdenbesch E. La frequence du virus corona les treubles degestifs du jenne veau Belgique//Annales de medicine veterinaire.-1977.-v.l21.-№ 6.-p.411-420.

558. Wellman K.M., Mecca T.G., Mundall W., Hare C.R. The detection of apical interaction in copper (II) complexes of potential tridentate amino acids by optical rotatiry dispersion//J. Amer. Chem. Soc.-1968.-v.90.-№ 3.-p.805-807.

559. Wells J.V. Immunocomplexes and disease//Austral. And. N. Z. J. Med.-1979.-v.9.-№ 2.-p. 122-124.

560. Westberg N.G., Noff G.B., Boyer J.T., Michael A.F. Glomerular deposition of properdine and chronic glomerulonephritis with complementimia//J. Clin. Invest.-1971.-v.50.-n 3.-p.642-648.

561. Wilde J.K.H. East coast fever//Adv. Vet. Sci.-1967.-v.l 1.-p.207-259.

562. Williams D.G. CsNeF, hypocomplimentimia in mesangioproliferative glomerulonephriris//6-th Congr. Nephrology. Abstr. Fitenze, 1979.-p.85-86.

563. Winkelhake J.L. Immunoglobulin structure and effector functions//Immunochemistry.-1978.-v.l5.-p.695-714.

564. Wollina U., Schaarschmidt H., Koch H.-J. Direkte immunfluoreszenzum tersuchung aktiver psoriasisherde//Dermatol. Mschr.-1989.-v. 175 .-№> 5,-S.282-285.

565. Wong T.W.,Merrifield R.B.Solid-phase synthesis of thymosin oti using tert-butiloxycarbonylaminoacyl-1-4(oxymethyl)phenyl-acetamido-methyl resin//Biochemistry.-1980.-v.19.-p.3233.

566. Yakubov Kh.M., Vinnichenko G.M., Offengenden E.Ya., Astanina A.N. Iron coordination compounds with glycine, glycylglycine and diglycylglycine//Inorg. Chim. Acta.-1983.-v.29.-№ 7.-p.273-274.

567. Yakubov Kh.M., Yusupov Z.N., Nurmatov T.M., Rakhimova M.M. Iron and zinc coordination compounds as the323

568. Также особая благодарность выражается член-корреспонденту МАВШ, доктору химических наук, профессору Халикову Ширинбеку Халиковичу за помощь, оказанную при обсуждении результатов, полученных при проведении синтеза пептидов.

569. МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ " ЗАНД " ИНСТИТУТ ХИМИИ им. В.И. НИКИТИНА АН РЕСПУБЛИКИ ТАДЖИКИСТАН ТАДЖИКСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ1. УТВЕРЖДАЮ:

570. ДаЧальт^к Главного Управления ^■^б^еркнарйи МСХ Республикитът*а7 — И-4.V,' ч-у,1. И II С Т Р У к ц и япо приготовлению и контролю железосодержащего препарата "Ф ЕРУНОЛ "1. СОГЛАСОВАНО:

571. Директор Института химии им. В.И.Никитина АН Республйки Таджикистан, ака.си-£-" Г/1. СОГЛАСОВАНО:1. Мирсаи, 1997 г

572. ДирёЙ0р-тТ01тр011зв0дству МП "Занд" ./••л1. W ШдуловХ.Ш. .1997 г.1. СОГЛАСОВАЙО:

573. Замдиректора Тадж.НИ'ВИ ^ЦЙ^работе, к.в.н.1. Хабибов А.1997 г.1. РАЗРАБОТЧИКИ:

574. Кандидат химических наук Бобиев Г.М.3 г.1. Доктор ветеринарных наука

575. Сатторов И.Т. "3" /{1 1997 г.р ветеринарных наук1. Нораев Р.Х. 1997 Г.1.

576. Научный сотрудник -1. Пу-у Бобиев Х.А.3 " /W.l/fiÄ 1997г.1. ДУШ А Н Б Е — 1997

577. МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ " ЗАНД " ИНСТИТУТ ХИМИИ им В.И.НИКИТИНА АН РЕСПУБЛИКИ ТАДЖИКИСТАН ТАДЖИКСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ1. УТВЕРЖДАЮ:/ НачаЛьникТлавдого Управленияветеринарии МСХ РТ1. Н.Б.Болтаев.I199.fr.

578. ЖЕЛЕЗОСОДЕРЖА ЩИЙ ПРЕПАРА Т " ФЕРУНОЛ " ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ1. СОГЛАСОВАНО:

579. Директор Института химщ; им.В.И.Никитина АН Респ Таджикистан, академик AI 'г1. СОГЛАСОВАНО:ь--; .л1. СОГЛА СОВАНСЩ^^//

580. Тадж.НИВИ ^^yMif^H^sooTe, к.х.н.1. Хабибов А. 1997 г.гГТИ^'

581. РАЗРАБОТЧИКИ: Кандидат химических наук Бобиев Г.М. "-3 "/CC^k frAjy 1997 г. "окто^ветеринарных наук Сатторов И.Т.1997г.

582. Доктор ветеринарных наук jdfaftty-C^ Нораев Р.Х.1997 Г.

583. Научный сотрудник <7! 'rtlrffó Бобиев Х.А. " J " Uflí/h J 1997 г.1. ДУШАНБЕ —19971. НАСТАВЛЕНИЕпо применен ию желе; о с о дер жащег о преп а р а та "ФЕРУНОЛ"1.

584. Препарат " Ферунол " представляет собой комплексное соединение низкомолекулярного иммуноактивного пептида с ионом двухвалентного железа.

585. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА.21. "Ферунол" повышает иммунологическую реактивность и резистентность организма, способствует синтезу специфических антител при вакцинации.

586. С лечебной целю препарат применяют в комплексе с другими лечебными средствами ( антибиотиками, витаминами, сульфаниламидными препаратами и др.).

587. Флаконы с Ферунолом предохраняют от действия прямых солнечных лучей и нагревания. Во время применения флаконы с препаратом постоянно легко встряхивают ( не допу ская образования пены), чтобы предотвратить осаждение частиц на дно флакона.

588. Для стимуляции выработки антител Ферунол вводят подкожно в область средней трети шеи или внутримышечно в область крупа в дозе 1 мл на 100 кг живой массы тела в течение 3-5 дней ( при вакцинации, например, тейлериоза с начала поствакщшальной реакции).

589. Для повышения резистентности молодняка к заболеваниям препарат применяют в дозе 1 мл на 100 кг живой массы животного в течении 7 дней один раз в сутки начиная с 2-3 дневного возраста.

590. Во избежание осложнений, связанных с неправильной транспортировкой, хранением или изготовлением препарата, каждую сершо " Ферунола " предварительно испытывают на 3-5 головах скота.

591. УЧЕТ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА И КОНТРОЛЬ ЗА СОСТОЯНИЕМ ЖИВОТНЫХ.t

592. При введении Ферунола следует иметь в виду, что на месте введения препарата образуется незначительная припухлость, которая самопроизвольно быстро исчезает.

593. Ветеринарный врач, под руководством которого применяется препарат, обязан вести наблюдение за состоянием животных, получнвщих Ферунол, в течение 30-60 мин. с момента введения препарата.

594. Побочных явлений и осложнений от применения препарата " Ферунол " не обнаружено.

595. Наставление по примененшо " Ферунола " разработано МП " Занд " и ТаджНИВИ.1. УТВЕРЖДАЮ:

596. РАЗРАБОТЧИКИ: Кандидат химических наук

597. Бобиев Г.М. »,^^2^^.1997г.-Доктор ветеринарных наук

598. Сатторов И.Т. « АЛ » ^ 1997 г.1. Махмудов К. 1997 г.

599. МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ « ЗАНД » И Т

600. ТАДЖИКСКИЙ НА УЧИО-ИССЛЕДОВА ТЕЛЬ СКИЙ ВЕТЕРИНА РНЫЙ ИНСТИТУТ1. ВЕРЖДАЮ:равного Управления инсельхоза .жикистан1. Н.Б.Болтаев.1995г.1. ПРЕПАРАТ «ТИМОЦИН»1. ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

601. СОГЛАСОВАНО: Щ щьртптщрц?вр детву МП «Занд»удмАбдулов Х.Ш.1997 г.м-'СЮГЛА СОВАНО: ^тшшф^Ь Тадж.НИВИ1. РАЗРАБОТЧИКИ:1. Кандидат химических наук

602. Бобиев Г.М. » /и^г^^Л 1997 г. Доктор ветеринарных наук1. Сатторов И.Т.1997 г. Махмудов К. 1997 г.1. НАСТАВЛЕНИЕпо применению препарата "ТИМОЦИН"1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

603. Препарат " Тимоцин " является комплексным соединением низкомолекулярного иммуноактивного пептида и иона цинка.12. " Тимоцин " представляет собой стерильный раствор светло серого цвета.

604. Препарат выпускают в виде 0,04 % -го раствора во флаконах по 10 мл., 50 мл. и 100 мл. Хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от 4 до 25°С. Срок хранения 2 года.

605. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

606. При комплексном применении препарата с вакцинами " Тимоцин " используют однократно в дозе 0,02 мл/кг ( 2 мл./ 100 кг) живой массы тела в день вакцинации и на 2 и 3 дни после иммунизации.

607. Лечение "Тимоцином " не исключает использование симптоматических и антибактериальныхсредств.

608. Животных, подвергшихся обработке "Тимоцином" , допускается вакцинировать инактивированными и живыми вакцинами без ограничения.

609. Побочных явлений и осложнений от применения препарата не обнаружено. Противопоказаний для его применения нет.

610. Наставление по применению " Тимоцина " разработано к.х.н. Бобиевым Г.М.(МП " Занд "), д.вет.н. Сатторовым И.Т.,Махмудовым К. и Хамдамовым А.(Тадж.НИВИ).1. ЕРЖДАЮ:вного Управления X Республики1. Н.Б.Болтаев 3.199 Sr.

611. У 199£г. Доктор ветеринарных наук 1.Т .Сатаров М» ¿И 1999 г. Доктор ветеринарных наук Р.Х.Нораев»1. Зе »199 г.-1. К.Махмудов

612. МП" «Занд» по науке .Н. Шахматов 199 £ г. аджНИВИ по науке ^ А.Хабибов 199^. г.1. РАЗРАБОТЧИКИ:

613. Кандидат химических наук йй^Й^ Г.М.Бобиев.199^г.1. О/1. Доктор ветеринарных наук

614. Л% " ¿У 199^. г. Доктор ветеринарных наук Р.Х.Нораев 1г.1. К.Махмудов1. В>С» &/ 199$г.1. НАСТАВЛЕНИЕпо применению препарата1. ТИМ О Ф ЕР »1. общие положения

615. Препарат "Тимофер" представляет собой водный раствор координационного соединения низкомолекулярного иммуноактивного пептида с железом.

616. Флаконы с препаратом предохраняют от действия прямых солнечных лучей и нагревания.

617. Во время применения флаконы с препаратом легко встряхивают (не допуская образования пены), чтобы предотвратить рсаждение частиц на дне флакона.

618. При лечении пневмоэнтеритов телят "Тимофер" применяют подкожно в дозе 0,02 — 0,03мл\кг живого веса животного один раз в сутки в течение 5 дней в комплексе с химиотерапевтическими препаратами.

619. Во избежание осложнений, связанных с неправильной транспортировкой и хранением препарата, каждую серию "Тимофера" предварительно проверяют на не менее 4 головах скота.4. учет эффективности препарата и контроль за состоянием животных.

620. Побочных явлений и осложнений при применении препарата "Тимофер" не установлено.

621. При введении "Тимофера" следует иметь в виду, что на месте введения препарата образуется очень незначительная припухлость, которая самопроизвольно исчезает.

622. Ветеринарный врач, под руководством которого применяется препарат . обязан вести наблюдение за состоянием животных, получивших "Тимофер" в течение 30-60 мин . с момента введения препарата.

623. Наставление по применению препарата "Тимофер" разработали:

624. Главного управления инистерства сельского публики Таджикистан1. Болтаев Н.Б. 199—^г.

625. МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ « 3 АНД » ТАДЖИКСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ1. УТВЕРЖДА Ю:

626. Начальник Главного управленияюгерства сельского хоз Е&СШййВ&и Таджикистанев Н.Б.

627. ИНСТРУКЦИЯ по изготовлению и контролю препарата1. ТИМ О Г АР»1. ОВАНО:

628. П" «Занд» по науке Шахматов 1992Г. Директор Тадж.НИВИ, д.вет.н.1. И.Сатгоров1. РАЗРАБОТЧИКИ:1. Кандидат химических наук-'Г.М.Бобиев.£у> \99S г.1. Доктор ветеринарных наук1. Бадалов199^ г.

629. И.О. завлабораторией Таджикского НИВИ1. Т М.Салимов1. Г» .ауа£ 1995 г.

630. Кандидат химических наук /^¿^^-Г.М.Бобиев. « В » 1993 г.

631. Доктор ветеринарных наук Бадалов

632. И.О. завлабораторией Таджикского НИВИ1. Т ф М.Салимов 199 г.1. НАСТАВЛЕНИЕдо применению препарата %ТИМ О Г АР»

633. УТВЕРЖДАЮ: Начальник Главного управления1. ТШМОШШГОМ)1. общие положения

634. Препарат "Тимогар" представляет собой 0,01 %-ный водный раствор синтетического иммуноактивного пептида, обладающего свойствами (активностью) тимусного гормона тимозина а.

635. ЗЛ. "Тимогар" применяют животным и птицам в качестве биостимулятора, иммуномодулятора,для стимуляции выработки специфических антител при применении вакцин и повышения эффективностидругих лекарственных препаратов

636. Для стимуляции выработки антител у птиц, иммунизированных против стафилококкоза и колибактериоза, "Тимогар" вводят совместно с вакциной в дозе 20 мкг\кг массы птицы.

637. В остальных случаях "Тимогар" применяют внутримышечно крупным животным в дозе 5-6 мкг\кг, мелким -10-12 мкг\кг массы тела один раз в сутки в течение 5 дней с лечебной целю и в течение 3 дней. с профилактической.

638. В связи с тем, что "Тимогар" является практически нетоксичным препаратом, мясо и молоко животных, подвергнутых обработке "Тимогаром", используются без ограничений.

639. Противопоказаний для применения препарата не установлено. :4. учет эффективности препарата и контроль за состоянием животных.

640. Побочных явлений и осложнений при применении препарата "Тимогар" не установлено.

641. При применении "Тимогара" следует иметь в виду, что на месте введения препарата образуется незначительная припухлость, которая быстро исчезает.

642. При убое животных после введения препарата санитарную оценку мяса и мясопродуктов проводят в соответствии с п. 3.2.1. и 3.6.1. действующих Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

643. При возникновении вопросбв по применению "Тимогара" обращаться в М П «Занд» по адресу: г.Душанбе, ул. А.Кахарова, 111.

644. Наименование предложения для внедрения ( метод профилактики, лечения, диагностики.)

645. Метод лечения больных псориазом с применением препарата Тимогар .

646. Кем и когда предложен ? (Наименование учреждения, кафедры, Ф.И.О. автора ) Метод предложен ген. директором М П «ЗАНД» Бобиевым Г.М. в феврале 1996 г.

647. Источники информации (методические рекомендации, диссертации, монографии, ;>.-. рацпредложения.)ч1. Докторская диссертация

648. Где и когда внедрена?(наименование лечебного учреждения, дата начала внедрения) Метод внедрен в Городской клинической больнице № 1 г. Душанбе в марте 1996 г.5. Общее число наблюдений 28

649. Результаты применения за период с апреля 1996 г. по июль 1997 г.положительное количество наблюдений 27 .неопределенное количество наблюдений 1отрицательное количество наблюдений нет

650. Экономическая эффективность; сокращение сроков пребывания больных в стационаре.8. Замечания, предложения:нет

651. Ответственный за внедрение:

652. БобиевГ.М. Хусайнов А.А. Шакирова

653. Ген.директор МП «Занд» Ст.преподаватель, к.м.н. Зав. Отделением1. УТВЕРЖДАЮ:

654. Гла^дав^д^'Еесд^бликанского кожно-вансера г.Душанбе1. Касымов А.М. 199.1 г.---/1. АКТ ВНЕДРЕНМ,^^

655. Наименование предложения для внедрения ( метод профилактики, лечения, диагностики.)

656. Метод лечения больных псориазом с применением препарата Тимогар

657. Кем и когда предложен ? ( Наименование учреждения, кафедры, Ф.И.О. автора )

658. Метод предложен ген. директором М П «ЗАНД» Бобиевым Г.М. в феврале 1996 г.

659. Источники информации ( методические рекомендации, диссертации, монографии, рацпредложения.)1. Докторская диссертация

660. Где и когда внедрена?(наименование лечебного учреждения, дата начала внедрения)

661. Метод внедрен в Республиканском кожно-венерологическом диспансере г. Душанбе в марте 1996 г.5. Общее число наблюдений 25

662. Результаты применения за период с апреля 1996 г. по июль 1997 г.положительное количество наблюдений 24неопределенное количество наблюдений; 1отрицательное количество наблюдений нет

663. Экономическая эффективность : сокращение сроков пребывания больных в стационаре.8. Замечания, предложения:нет

664. Ответственный за внедрение: Бобиев Г.М.1. Хусайнов А. А. Саидов Б.1. Гендиректор МП «Занд»1. Ст.преподаватель, к.м.н.1. Врач1. УТВЕРЖДАЮ:1. ЗавРач Городского кожно-зго диспансера г.Душанбе Рахимов С.Р. 199 ¿5 г.1. АКТ ВНЕДРЕНИЯ

665. Наименование предложения для внедрения (метод профилактики, лечения, диагностики.)

666. Метод лечения больных псориазом с применением препарата Тимогар

667. Кем и когда предложен ? ( Наименование учреждения, кафедры, Ф.И.О. автора )

668. Метод предложен ген.директором М П «ЗАНД» Бобиевым Г.М. в феврале 1996 г.

669. Источники информации ( методические рекомендации, диссертации, монографии, рацпредложения.)1. Докторская диссертация

670. Где и когда внедрена?(наименование лечебного учреждения, дата'начала внедрения)

671. Метод внедрен в Городском кожно-венерологическом диспансерег. Душанбе в марте 1996 г.5. Общее число наблюдений 23

672. Результаты применения за период с апреля 1996 г. по июль 1997 г.положительное количество наблюдений 22неопределенное количество наблюдений 1отрицательное количество наблюдений нет

673. Экономическая эффективность: сокращение сроков пребывания больных в стационаре.8. Замечания, предложения:нет :' ■ •• '

674. Ответственный за внедрение: Бобиев Г.М.1. Хусайнов А. А.1. Мирзоев Б.

675. Ген.директор МП «Занд» Ст.преподаватель, к.м.н. Врач-дерматолог

676. Проректор по научной работе TIW им. Абуали ибн Сино член-^ogp. АН Республики1. Д.Зоиров199?г.о кяяническом внедрении препарата "Тимогар"

Информация о работе

Бобиев, Гуломкодир Муккамолович
доктора биологических наук
Душанбе, 2000
ВАК 03.00.04

Диссертация

Синтез и биологические свойства низкомолекулярных тимусных пептидов и их биокоординационных соединений - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы