Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Селективная система цитодукции с использованием рецессивных супрессоров у Saccharomyces cerevisiae

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Карпова, Татьяна Святославовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЕТЕР0КАРИ03 В ГЕНЕТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ У ГРИБОВ.

1. Гетерокариоз в жизненном цикле грибов.

§ I. Образование гетерокарионов у различных видов грибов.Л

1-1. Особенности строения и жизненного цикла грибов как предпосылка возникновения гетерокарионов.

1-2. Основные механизмы образования гетерокарионов.

1-3. Гетерокариоз у дрожжей.

§ 2. Основные особенности гетерокариоза у грибов.

2-1. Парасексуальный процесс.

2-2. Элементы парасексуального процесса у ЗассЬаготусеэ сегеу1в1ае

2-3. Сегрегация гетерокарионов.

2-4. Сегрегация гетерокарионов З.сегеу±в1ае

§ 3. Значение гетерокариоза в жизненном цикле грибов.

2. Использование явления гетерокариоза в генетическом анализе.

§ I. Взаимодействие генов в гетерокарионе.

1-1. Исследование характера доминантно-рецессивных отношений и межгенных взаимодействий в гетерокарионах в зависимости от соотношения различных типов геномов.

1-2. Сравнение характера взаимодействия генов у гетерозиготных диплоидов и гетерокарионов.

1-3. Взаимодействие генов в гетерокарионах З.сегеу±в1ае

§ 2. Генетическая рекомбинация в гетерокарионах.

2-1. Использование сегрегации геномов и плазмонов для локализации генетических детерминантов.

Тест с гетерокарионом.

2-2. Тест с гетерокарионом у 8.сегеу1в1ае

2-3. Использование сегрегации геномов и плазмонов для изучения взаимодействия ядерных и цитоплазматических генов.

2-4. Использование цитодукции у З.сегеу±в1ае Для изучения взаимодействия ядерных и цитоплазматических генов.

2-5. Парасексуальный процесс в генетическом анализе.

2-6. Генетический анализ у Б.сеге^вхае с использованием элементов парасексуального процесса.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Селективная система цитодукции с использованием рецессивных супрессоров у Saccharomyces cerevisiae"

Одним из наиболее популярных объектов современной генетики являются дрожжи ЗассЬаготусеБ сегет±Б1ае . Интерес к этому объекту обусловлен тем, что дрожжи - один из наиболее просто организованных эукариотических микроорганизмов, и исследования, проводимые с использованием сегет±в1ае » являются ступенькой на пути к изучению высших эукариот. Вместе с тем дрожжи имеют большое значение как продуценты микробиологической промышленности.

Исследование широкого круга проблем с применением 3,сегет1з1ае возможно благодаря тому, что у дрожжей хорошо разработана частная генетика и методы генетического анализа. Для наиболее успешного использования возможностей генетического анализа необходимо тщательное изучение биологических особенностей выбранного объекта. К числу специфических особенностей биологии дрожжей-сахаромицетов, использование которых расширяет возможности генетического анализа, относится явление цитодукции.

В 1957 г. Райт и Ледерберг продемонстрировали, что в результате копуляции у дрожжей могут образовываться ядерно-цитоплазматич-еские гибриды, содержащие ядро одного из родителей и цитоплазму обоих. В 1969 г. Захаров с соавторами также получили ядерно-цито-плазматические гибриды и предложили назвать их цитодуктантами, а процесс их образования цитодукцией.

Цитодуктанты образуются при сегрегации гетерокариотичных зигот, которые возникают с низкой частотой при копуляции дрожжевых клеток наряду с обычными диплоидными зиготами.

Показано, что при цитодукции может происходить перенос не только цитоплазматических факторов, но и хромосом, плазмид.

Цитодукция позволяет создавать штаммы с различными комбинациями геномов и плазмонов, может быть использована для локализации генетических детерминантов в ядре или цитоплазме, изучения ядер-но-цитоплазматических взаимодействий, рекомбинации митохондриаль-ных генов. Перенос хромосом при цитодукции может быть использован для изучения гомологии геномов, для картирования. Перенос при цитодукции химерных плазмид, маркированных дрожжевыми генами, может служить одним из методов изучения и конструирования рекомбинант-ных ДЕК. Изучение генетического контроля цитодукции связано с изучением многих жизненно-важных клеточных процессов (митотического цикла, кариогамии, сегрегации хромосом и митохондрий).

Низкая частота цитодукции (гетерокариотичные зиготы составляют менее 1% общего числа образующихся зигот) приводит к необходимости селекции цитодктантов. Разработаны системы селекции цитодукта-нтов по окраске колоний, по устойчивости к антибиотикам и аналогам аминокислот.

Целью нашей работы было создание селективной системы цитодукции на основе штаммов Петергофских генетических линий дрожжей.Система должна была предоставлять возможность переноса митохондрий, а так же хромосом и химерных плазмид, маркированных дрожжевыми генами, позволять проводить отбор мутантов, способных к цитодукции с повышенной частотой.

В работе впервые:

- Создана система цитодукции с использованием в качестве селективных маркеров рецессивных рибосомных супрессоров.

- Исследован перенос в селективной системе митохондрий, хромосом П и Ш, химерных плаз мид, содержащих центромер хромосомы Ш, репликатор рДНК и репликатор АНБ1 .

- С использованием метода отпечатков получены и охарактеризованы по частоте возникновения и частоте цитодукции мутанты, способные к цитодукции с повышенной частотой ( н*с+ ). Проведен генетический анализ одного из мутантов, показано моногенное наследование и доминирование признака Е£с+ .

- При изучении факторов, нарушающих селективность разработанной нами системы, получен и охарактеризован новый класс доминантных супрессоров у дрожжей - супрессоры эът , супрессирующие нонсенс-аллели (УАА) при пониженной температуре. Обнаружено явление повышения эффективности супрессии эьт у дыхательно некомпетентных мутантов и на среде с этанолом.

- Разработан экспресс-тест для различения гаплоидов и автополиплоидов у дрожжей.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Карпова, Татьяна Святославовна

4. Заключение

В заключение мы хотели бы рассмотреть ряд полученных нами в ходе разработки селективной системы результатов и перспективы их дальнейшего использования.

Разработанная наш селективная система является высоко эффективной при переносе митохондрий, эффективной при переносе хромосом и плазмид. Селективность повышается при использовании мутаций Hfe+.

Возможность переноса митохондрий и цитоплазматических факторов в селективной системе открывает перспективы для изучения сравнительной роли ядерного и цитоплазматического генома в генетическом контроле трансляции. Так, например, нам удалось выявить и передать при цитодукции цитоплазматический модификатор, влияющий на проявление strp2 в гетерозиготе.

Побочным результатом использования селективной системы является получение нового типа доминантных супрессоров, эффективных при пониженной температуре (SLT ). Для выяснения природы этих супрессоров и механизма повышения эффективности SIT у мутантов rho"" необходимы дальнейшие исследования. Объединение SLT с различными штохондриальными мутациями методом цитодукции позволит выявить митохондриальные гены, контролирующие трансляцию в цитоплазме.

В нашей работе впервые исследован перенос при цитодукции одно-копийных плазмид. Низкая частота переноса плазмид и высокая частота совместного переноса этих плазмид и хромосомы Ш свидетельствуют о ядерной локализации YECM3I и рТе(СЖЗ)41 . Частота

-Ч переноса плазмид на цитодуктант - менее 2,3-10 . Для сравнения частоты переноса однокопийных и многокопийных плазмид необходимо определить эту величину более точно, а также осуществить перенос в селективной системе многокопийных плазмид. Наблюдения, свидетельствующие о том, что в ряде случаев перенос плазмид не сопровождается переносом митохондрий, открывают перспективы для получения мутаций, которые повышают частоту переноса ядерных, но не цитоплазматических маркеров.

Мы разработали метод селекции, который позволяет отбирать мутанты Н£с+ методом отпечатков и оценивать частоту их возникновения. Метод технически прост и позволил нам отобрать в трех пов-торностях опыта, просмотрев 1,5*10^ колоний, 18 мутантов Hfc+ . Для сравнения укажем, что Полаина и Конде при неселективном отборе мутантов Еаг+ отобрали 23 мутанта в II повторностях опыта, проверив при этом в тесте на комплементацию 1150 цитодуктантов. ( Polaina, Conde , 1982).

Независимо от нас Степанова и Захаров (1983) также предложили селективную методику отбора мутантов Hfc+ . По этой методике колонии, выросшие из рассева обработанной мутагеном культуры донора перепечатывают на газон реципиента на селективной среде, и таким образом выявляют колонии, на отпечатках которых образуются с повышенной частотой цитодуктанты.

Поскольку система выявления цитодуктантов, использованная авторами, полуселективна, на отпечатках колоний доноров вырастают не только цитодуктанты, выявляемые по красной окраске колоний , но и гибриды. Это должно очевидно, затруднять выявление мутантов, в во-первьгх, потому, что трудно выявить мутанты с небольшим превышением частоты цитодукции, во-вторых потому, что окраска - признак вариабельный, его проявление зависит от состава среды.

Представляет интерес дальнейшее исследование полученных нами мутантов Hfc+ . Среди полученных мутантов есть подобные ранее изученным Каг+ , проявляющим ослабление комплементации при выделении гибридов. Для одного мутанта было показано моногенное наследование и доминирование признака Н£с+ . По ослаблению комплементации и доминантности HFCI сходен с EÄEJ ( Polaina , Conde, 1982), но не влияет, в отличие от EAR3 , на жизнеспособность штамма. Помимо мутаций, подобных Еаг+ , мы получили также новый класс мутаций, не приводящих к ослаблению комплементации. Дальнейшее изучение генетического контроля цитодукции предполагает получение мутантов Н£с+ (как у донора, так и у реципиента), определение доминантности, аллельности полученных мутаций.

Мы разработали также метод различения гаплоидов и штаммов более высокого уровня плоидности. Метод основан на сравнении частоты митотической гомозиготизации рецессивного маркера у гибридов, полученных при скрещивании гаплоидов и автополиплоидов с гаплоидными тестерными штаммами. Тестерный штамм может быть маркирован любыми мутациями, для которых существуют методы селекции, в нашем случае 1уа2 . Эта методика может быть применена во всех исследованиях с использованием полиплоидных штаммов.

1. y Saccharomyces cerevisiae разработана высоко селективная система цитодукции на основе использования рецессивных рибосом-ных супрессоров.

2. Исследован веренос в селективной системе хромосом П и Ш и однокопийных химерных плазмид, содержащих репликатор arsi , репликатор рДНК, центромер хромосомы Ш дрожжей. На основании корреляции переноса хромосомы Ш и химерных плазмид показана ядерная локализация этих плазмид.

3. Разработана методика отбора с применением метода отпечатков мутантов, способных к цитодукции с повышенной частотой ( Hfc+). Частота возникновения мутантов Hfc+ оценена как (1,13+0,27) 10"®

4. Полученная коллекция мутантов Hfc+ охарактеризована по способности к цитодукции. Частота цитодукции в скрещиваниях с мутантами Hfc+ составляет от I до 60%, что в 10-100 раз превышает частоту цитодукции штамма дикого типа.

5. Для мутантного признака Hfc+ у мутанта цит1-7А-П192 показано доминирование и моногенное наследование.

6. Охарактеризованы основные факторы, определяющие эффективность системы цитодукции. Среди мутантов, нарушающих эффективность селекции в системе, обнаружен и исследован новый тип доминантных нонсенс-супрессоров у дрожжей: супрессоры, эффективные при пониженной температуре ( sbt).

7. Разработан экспресс-тест для различения гаплоидов и авто-диплоидов у дрожжей-сахаромицетов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Карпова, Татьяна Святославовна, Ленинград

1. Глотов Н.В., Животовский Л.А., Хованов Н.В., Хромов-Бори-сов H.H. Биометрия. Л.: Из-во ЛГУ, 1982, 263с.

2. Жирова В.П., Квасникова Е.И., Степанюк В.В., Щелокова И.В.

3. Жизненный цикл углеродусваивающих дрожжей Pichia guil -lermondii Wickerham . Цитология и генетика, 1981, т.15, Р 2, с.74-78.

4. Захаров И.А., Кожин С.А., Кожина Т.Н., Федорова И.В. Сборникметодик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л.: Наука, 1976, 125с.

5. Захаров И.А., Кожина Т.Н., Пешехонов В.Т., Федорова И.В.,

6. Чепурная О.В., Рекомбинация химерных плазмид в дрожжевой клетке. Докл. АН СССР, т.263, Р I, 1982, с.201-204.

7. Захаров И.А., Юрченко Л.В., Яровой Б.Ф. Цитодукция автономный перенос цитоплазматических наследственных факторов при спаривании клеток дрожжей. Генетика, 1969, т.5, № 9, с.136-141.

8. Инге-Вечтомов С.Г. Дрожжи. В кн.: Итоги науки и техники.

9. ВИНИТИ. Общие проблемы биологии, М.: ВИНИТИ, 1982, т.1, с.148-192.

10. Инге-Вечтомов С.Г. Идентификация некоторых групп сцепления у

11. Петергофских генетических линий дрожжей. Генетика, 1971, т.7, Р 9, C.II3-I24.

12. Инге-Вечтомов С.Г. Новые генетические линии дрожжей S.cerevisiae . Вестн. ЛГУ, 1963, вып.4, № 21, с.117-125.

13. Инге-Вечтомов С.Г., Андрианова В.М. Рецессивные суперсупрессоры у дрожжей. Генетика, 1970, т.6, № II, с.ЮЗ-115.

14. Кальдма Я.А. Изучение рекомбинации митохондриальных маркеровров у дрожжей. Сообщ. Ш. Скрещивания изохромосомальных и анизомитохондриальных штаммов. Генетика, 1975, т.II,1. Р 8, с.88-95.

15. Ларионов В.Л., Куприна Н.Ю., Аверьянов А.В., Карпова Т.С.

16. Изучение репликатора плазмицной омикронной ДНК у дрожжей-сахаромицетов. Докл. Ш СССР, 1983, т.269, с.1240-1244.

17. Левитин М.М., Федорова И.В. Генетика фитопатогенных грибов.I1. Л.: Наука, 1972.

18. Савченко В.К. Расщепление генов у автополиплоидов. В сб.:

19. Вопросы генетики и селекции, Минск: Наука и техника, 1970 с.26

20. Сподина Т.К., Кожина Т.Н. Передача цитоплазматического детерминанта убийства у дрожжей при цитодукции. Цитология и генетика, 1977, т.II, Р 2, с. 99-104.

21. Степанова В.П., Захаров И.А. Изучение влияния облучения и генотипа по генам радиочувствительности на цитодукцию у дрожжей. Генетика, 1979, т.15, Р 7, с.1171-1185.

22. Степанова В.П., Захаров И.А. Радиочувствительность ядра и митохондриона: изучение методом цитодукции. Генетика, 1983, т.19, № 6, с.912-920.

23. Столбова А.В., Нестерова Г.®. Гетерогенность по ядерным маркерам митотического потомства зигот у дрожжей 3.сегечг1Б1ае-Генетика, 1979, т.15, Р 5, с.799-806.

24. Сургучев А.П. Рибосомная супрессия и функционирование аппарата белкового синтеза у эукариот. Автореферат докт. дисс., 1984, 44с.

25. Хромов-Борисов Н.Н. Метод упорядоченного посева для изученияроста и мутирования микроорганизмов. Конференция по генетике промышленных микроорганизмов (10-14 декабря 1973 г. Цахкадзор). Тезисы докладов, Цахкадзор, 1973, с.44.

26. Чепурная О.В., Кожина Т.Н., Захаров И.А. Гибридизация дрожжей-дебариомицетов методом слияния протопластов. Генетика,1981, т.17, № 4, с.618-621.

27. Юрченко JI.B. Гетерокариоз у дрожжей S.cerevisiae . Генетика, 1982, т.18, № 9, с.1412-1422.

28. Юрченко JI.B. Изучение локализации плазмид эписомного типа вклетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae при использовании теста с гетерокарионом. Генетика, 1984, т.20, Р 3, с.389-397.

29. Юрченко Л.В., Кожина Т.Н., Захаров И.А. Изучение локализациихимерных плазмид в трансформированной клетке дрожжей методом цитодукции. Генетика, 1983, т,19, № 6, с.927-932.'

30. Яровой Б.Ф. Цитодукция фактора устойчивости к эритромицину удрожжей. Докл. АН СССР, 1973, т.208, № 6, с.1461-1463.

31. Aigle И., lacroute Р. Genetical aspects of 1ШЕЗ, a nonmitochondrial cytoplasmically inherited mutation in yeast. Mol. Gen. Genet., 1975, v.136, p.327-335.

32. Anne J., Eyssen H., De Somer P., Somatic hybridisation of

33. Penicillum roquefortii with. P.chrysogenum after protoplast fusion. Hature, 1976, V.262, p.7I9-72I.

34. Anne J., Peberdy J.P. Conditions for induced fusion of fungalprotoplasts in polyethylene glycol solutions. Arch. Microbiol., 1975, V.I05, p.201-205.

35. Apirion D. Recessive mutants at unlinked loci which complementin diploids but not in heterocaryons of Aspergillus nidu-lans. Genetics, 1966, v.53, p.935-941.

36. Arima K., Takano A. Multiple fusion of protoplasts in Saccharomyces yeasts. Mol. Gen. Genet., 1979, v.173, P.271-277.

37. Arlett G.P., Grindle M., Jinks J.L. The "red" cytoplasmicvariant of Aspergillus nidulans. Heredity, 1962, v.I7, p.197-209.

38. Atwood K.C., Mukai P. Indispensable gene functions in Heurospora. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1953» v.39, p.I027-1035.

39. Aufderheide K.J. Cytoplasmic inheritance in Saccharomycescerevisiae: comparison of first zygotic budsite to mitochondrial inheritance patterns. Mol. Gen. Genet., 1975, v.140, p.231-238.

40. Barratt R.W. Neurospora crassa. In. Handbook of genetics

41. Ed. Kind R.C., N.Y., London: Plenum Press, 1974, p.511-529.

42. Barron G.L. The parasexual cycle and linkage relationshipsin the storage rot fungus Penicillum expansum. Can. J. Botany, 1962, v.40, p.1603-1613.

43. Becher D., Conrad., Böttcher P. Genetic transfer mediated byisolated nuclei in Saccharomyces cerevisiae. Curr. Genet. 1982, v.6, p.163-166.

44. Bernet J. Systèmes d'incompatibilité chez le Podospora anserina. C. R. Acad. Sei., 1967, Ser. D, v.265, p.1536-1539.

45. Bertrand H., Kohout J. Nuclear suppressor of the poky cytoplasmic mutant in Neurospora crassa. II Mitohondrial cytochrome systems. Can. J. Genet. Cytol., 1977, v.19, p.81-91.

46. Bertrand H., Collins R.A., Stohl L.L., Goewert R.R., Lambowitz M. Deletion mutants of Neurospora crassa mitochondrial DNA and their relationship to the stop-start growth phe-notype. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1980, v.77, p.6032-6036.

47. Bertrand H., Pittenger T.H. Cytoplasmic mutants selectedfrom continuously growing cultures of Neurospora crassa.- Genetics, I960, v.61, p.643-659.

48. Byers B., Goetsch 1. Behavior of spindles and spindle plaques in the cell cycle and conjugation of Saccharomyces cerevisiae. J. Bacteriol. 1975, v.124, p.511-523.

49. Mcking-Throm E., Duntze W., Hartwell I.H., Manney T.R. ReAversible arrest of haploid yeast cells at the initiation of EHA synthesis by a diffusible sex factor. Exp. Cell Res., 1983, v.76, p.99-110.

50. Burnett J.H. Mycogenetics. London, N.Y., Sydney, Toronto:

51. John Wiley and Sons, 1974, 375p.

52. Callan D.P. Segregation of mitochondrially inherited antibiotic resistance genes in zygote cell lineages of Saccharomyces cerevisiae. Mol. Gen. Genet», 1974, v.128, p.65-73

53. Campbell D.A., Fogel S., Lusnak K. Mitotic chromosome lossin a disomic haploid of Saccharomyces cerevisiae. Genetics, 1975, v.79, p.383-396.

54. Campbell D.B., Oprian C.A. On the Eolmogorov-Smirnov testfor the Poisson distribution with unknown mean. Biometrical J,, 1979, v.2I, p.I7-24.

55. Case M.E., Giles N.H. Evidence from tetrad analysis- for both.normal and aberrant recombination between allelic mutants in Heurospora crassa. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1958, v.44, p.378-390.

56. Catcheside D.G., Overton A. Complementation between allelesin heterocaryons. Cold. Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1958, v.23, p.137-140.

57. Caten C.E. Heterokarion incompatibility in imperfect speciesof Aspergillus. Heredity, I971, v.26, p.299-3I2.

58. Chattoo B.B., Sherman P., Azubalis D.A., PJellstedt T.A.,

59. Mehnert D., Ogur H. Selection of lys2 mutants of the yeast S.cerevisiae by the utilusation of -aminoadipate . Genetics, 1979, v.93, p.51-65.

60. Clark-Yialker G.D., Miklos G.L.G. Mitochondrial genetics,circular DUA and the mechanism of petite mutation in yeast. -Genet. Res., 1974a, v.24, p.43-52.

61. Clark-Walker G.D., Miklos G.L.G. Localyzation and quantification of circular DHA in yeast. Eur. J. Biochem., 1974b, v.4I, p.359-362.

62. Cox B.S. A cytoplasMc suppressor of super-suppressor inyeast. Heredity, 1965, v.20, p.505-521.

63. Cox B.S. A recessive lethal super-suppressor mutation inyeast and other V phenomena. Heredity, 1971, v.26,p. 211-232.

64. Cox B.S., Tuite K.F., Mundy C.J. Reversion from suppressionto non-suppression in SUQ5 psi+ strains of yeast: the classification of mutants. Genetics., 1980, v.95, p.589-609.

65. Culbertson M.R., Charmas I., Johnson M.T., Pink G.R. Prameshifts and frameshift suppressor in Saccharomyces cerevisiae. Genetics, 1977, v.86, p.745-754.

66. Culbertson R.M., Henry SJL. Genetic analysis of hybrid strains trisomic for the chrimosome containing a fatty acid synthetase gene complex (fasl) in yeast. Genetics, 1973, v.75, p.441-458.

67. Culbertson K., Henry S. Inositol requiring mutants of Saccharomyces cerevisiae. Genetics, 1975, v.80, p.23-32. 64* Delgado J.M., Herrera l.S. Protoplast fusion in the yeast

68. Candida utilis. Acta Microbiol. Acad. Sci. Hung., 1981, v.28, p.339-346.

69. Delgado M.A., Conde J. Benomyl prevents nuclear fusion in

70. Saccharomyces cerevisiae. Hoi. Gen. Genet., 1984, v.193, p.188-189.

71. Diacumakos E.G., Gamjobst 1«, latum E.L. A cytoplasmic character in ITeurospora crassa. Cell. Biol., 1965, v.26, p.427-443.

72. Dujardin G., Pa jot P., Groudinsky 0., Slonimski P.P. longrange control circuits within mitochondria and between nucleus and mitochondria. I. Metodology and phenomenology of suppressors. Mol. Gen. Genet., 1980, v.179, p.469-482.

73. Dutcher S.K. Internuclear transfer of genetic information inkarl-l/EARI heterocaryons in S.cerevisiae. Mol. Cell. Biol., I981, v.I, p.245-253.

74. Ellingboe A.H., Raper J.R. Somatic recombination in Schizo— pTiil 1 tittï: commune. Genetics, 1962, v.46, p.85-98.73* Emeis C.C. Haploidisierung von diploiden hefen durch p-fluo-rophenylalanine. Z. Naturforsch, 1966, v.21, p.816-821.

75. Ephrussi B., Gran&shamp S. Etudes sur la supressivité desmutants à déficience respiratoire de la levure. I Existence au niveau cellulaire de divers degrés de suppressivité. Heredity, 1965, v.20, p.1-9.

76. Ephrussi B., de Margerie-Hottinguer H., Roman H. Suppress!—veness: a new factor in the genetic determinism of the synthesis of respiratory enzymes in yeast. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1955, v.41, p.I065-I07I.

77. Esser K. Sur le déterminisme d'un nouveau type d,incompati—bilité chez Podospora. C. R. Acad. Sci., 1954, Ser. D,v.238, p.1731-1733.

78. Esser K. Breeding systems in fungi and their significancefor genetic recombination. Mol. Gen. Genet., I971, v.IIO p.86-100.

79. Eabre P., Roman H. Genetic evidence for indueibility of recombination competence in yeast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v.74, p.I667-I67I.

80. Ferenczy L.,, Kevei F., Szegedi K. High frequency fusion offungal protoplasts. Esperientia, 1975, v.31, p .1028-1030.

81. Ferenczy L.f Maraz A. (transfer of mitochondria "by protoplastfusion in Saccharomyces cerevxsiae. — Hature, 1977, v.268, p.524-526.

82. Finch am J.R.S., Pateman J .A. Formation of an enzyme throughcomplementary action of mutant alleles in separate nuclei in a heterocaryon. Nature, 1957, v.179, p.741-742.

83. Fogel S., Roth R. Hutation affecting meiotic gene conversionin yeast. Hoi. Gen. Genet., 1974, v.I30r p.189-201.

84. Fogel E., Weich J.W. Tandem gene amplification mediates copper resistance in yeast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, p.5342-5346.

85. Gaher R.F., Leonard T.J. Unilateral internuclear gene transfer and cell differentiation in Schizophillum commune. -Nature, I981, v.291, p.342-344.

86. Garnjohst L., Wilson J.F. Heterokaryosis and protoplasmic incompatibility in N.crassa. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1956, v.42, p.613-618.

87. Giles N.H., Partrige C.Y/.H., Nelson N.J. The genetic controlof adenylosuccinase in Neurospora crassa. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1957, v.43, p.305-317.

88. Goldring E.S., Grossman L.T., Erupnicte D., Cryet D.K., Marfflur J.I. The petite mutation in yeast. Loss of mitochondrial DM during induction of petites with, ethidium "bromide. J. Mol. Biol., 1970, ▼•52, p.323-325.

89. Goodey A.R., Bevan E.A. Production and genetic analysis ofyeast cybrids. Curr. Genet., 1983, v.7, p.69-72.

90. Gowdridge B. Heterocaryons between strains of Neurosporawith different cytoplasms. Genetics, 1956, v.41, p.780-789.

91. Grant P.G., Sanches 1., Jimenez A. Cryptopleurine resistance:genetic locus; for a 403 ribosomal component in Saccharomy— ees cerevisiae. J. Bacterid., 1974, v.120, p.I308-I3I4.

92. Grindle M. Heterokaryon compatibility of closely relatedwild isolation of Aspergillus nidulans. — Heredity, 1963, ▼.18, p.397-409.

93. Gunge N., ÍDamaru A. Genetic analysis of products of protoplast fusion in Saccharomyces cerevisiae. Japan. J. Genet., 1978, v.53, N£ I, p.41-49.

94. Guthrie C., Hashimoto H., Nomura M. Structure and function of

95. Escherichia coli ribosome. VIII Cold sensitive mutants defective in ribosomal assembly. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1969, v.63, p.384-391.

96. Hartwell L.H. Synchronisation of haploid yeast cell cycles,a prelude to conjugation. Exp. Cell. Res., 1973, v.76, p.III-117.

97. Hastie A.C, Genetic recombination in the hop-wilt fungus

98. Verticillium albo-atrum. J. Gen. Microbiol., 1962, v.27, №3, p.373-382.

99. Heggeness M.H., Simon M.T., Singer S.J. Association of mitochondria with microtubules in cultured cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1978, v.75, p.3863-3866.

100. Heisenberg M., Cerda-Olmedo E. Segregation of heterokaryonsin the asexual cycle of Phycomyces:. Hoi. Gen. Genet., 1968, v.I02, p.187-195•

101. Henry S., Atkinson E., Kotlat A., Culbertson M. Growth andmetabolism of inositol-starved cells, of Saccharomyces ce-revisiae. J. Bacterid., 1977, v. 140, p.472-476.

102. Hinnen A., Hicks G.R., link G.R. (Transformation of yeast.

103. Proc. ffatl. Acad. Sci. USA, 1978, v.75, p.I929-I933.

104. Hirsh D. Tryptophan transfer RNA as the UGA suppressor.

105. J. Hoi. Biol., I971, v.58, p.439-458.

106. Hirsh D., Gold I. Translation of a T lysozyme UGA triplet invitro by tryptophan transfer EITAs. J. Kol. Biol, v.58, p.459-456.

107. Holmberg S. Genetic differences between Saccharomyces carlsbergensis and S.cerevisiae II. Restriction endonuclease analysis of genes in chromosome III. Carlsberg. Res. Commun., 1982, v.47, p.233-244.

108. Holmberg S., Eilsson-Tillgren T., GJermansen C., Kielland

109. Brandt H.C., Petersen J.G.I. Recombination and nucleotide sequence homology. In: Ilth international conference of yeast genetics and molecular biology, Montpellier, France, 1982, p.168.

110. I to H., Fukuda Y. Hurata K., Kimura A. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations.- J. Bacteriol., 1983, v.153, p.163-168.

111. JayaramM., Li Y.Y., Broach J.R. The yeast plasmid 2jncircleencodes components required for its high copy propagation. Cell, 1983r v.34, p. 9 5-104

112. Jinks J.L. Heterokaryosis-a system for adaptation in wildfungi. Proc. Roy. Soc., 1952, Ser.B, v.140, p.80-100.

113. Jinks J.L. Cytoplasmic differentiation in fungi. Proc. Roy.

114. Soc., 1958, Ser.B, v.148, p.314-321.

115. Jinks J.L. Lethal suppressive cytoplasms in aged clones of

116. Aspergillus glaucus. J. Gen. Microbiol. 1959, v.21, p.397-409.

117. Jinks J.L., Grindle M. The genetical basis of heterokaryonincompatibility in Aspergillus nidulans. Heredity, 1963, v.I8, p.407-411.

118. Johnson R.G., Rao P.N. Induction of premature condensationin interphase nuclei. Uature, 1970, v.226, p.717-722.

119. KSfer E. The processes of spontaneous: recombination in vegeAtative nuclei of Aspergillus nidulans. Genetics, I961, v«46, p.I581—1609.

120. KSfer E., Upshall A. The phenotypes of the eight disomiesAand trisomies of Aspergillus nidulans. J. Heredity, 1973, v.64, p.35-38.

121. Eakar S.N., Magee P.T. Genetic analysis of Candida albicans:1.entification of different isoleucine-valine, methionine and arginine alleles by complementation. J. Bacterid., 1982, v.151, p.1247-1252.

122. Kielland-Brandt M.C., ITilsson-Tillgren T., Holmberg S., Petersen J.G.L., Svenningsen B.A. Transformation of yeast without the use of foreign BRA. Carlsbers. Res. Comrnun., 1979, v.44, p.77-87.

123. Kielland-Brandt K.C., Wilken B., Holmberg S., Petersen J.G.L.

124. Nilsson-Tillgren T. Genetic evidence for nuclear location of 2-micron DNA in yeast. Carlsberg. Res. Commuti« 1980, v.45, p.119-124.

125. Klar A.J.S. Ma ting-type function for meiosis and sporulationin yeast act through, cytoplasm. Genetics, 1980, v.94, p.597-605.

126. Klapholz S., Esposito R. A new mapping method employing ameiotic rec mutant of yeast. Genetics, 1982, v.100, p.387-412.

127. Lancashire W.E., Mattoon J.R. Cytoduction: a tool for mitochondrial genetic studies in yeast. Utilisation of the nuclear fusion mutation karl-I for transfer of drug and mit genomes in S.cerevisiae. Hoi. Gen. Genet., 1979, v.170, p.333-344.

128. Lazarus C.K., Earl A.J., Turner G., Kuentzel H. Amplification of a mitochondrial DNA sequence in the cytoplasm!cally inherited ragged mutant of Aspergillus; amstelodami. Eur. J. Biochem., 1980, v.106, p.633-642.

129. Lewis D., Vakeria D. Resistance to p-phluoro-phenylalaninein diploid/haploid dikaryons: dominance modifier gene explained as a controller of hybrid multimer formation. -Genet. Res., 1977, v.30, p.31-43.

130. Iiivingston D.M. Inheritance of the 2ju,DNA plasmid from Saccharomyces. Genetics, 1977, v.86, p.73-84.

131. Livingston D.M., Zupfer D.M. Control of Saccharomyces cerevisiae 2ju DNA replication "by cell division cycle genes that control nuclear DNA replication. J. Mol. Biol., 1977, v.II6, p.249-260.

132. Liras P., McCusker J., Mascioli S., Haber J.E. Characterization of a mutation in yeast causing nonrandom chromosome loss during mitosis. Genetics, 1978, v.88, p.651-667.

133. Matsuoka M., Ushida K., Aiba S. Cytoplasmic transfer of oligomycine resistance during protoplast fusion of Saccharomy-copsis lipolytica. J. Bacteriol., 1982, v.152, p.530-533.

134. Metzenberg R.L. Implications of some genetic control mechanisms in Neurospora. Microbiol., Revs., 1979, v.43, p.361-383.

135. Metzenberg R.L., Ahlgren S.K. Behavior of Neurospora tetrasperma mating type genes introgressed into N.crassa. -Can. J. Genet. Cytol., 1973, v.I5, p.571-576.

136. Mortimer U.K., Hawthorne D.C. Genetic mapping in Saccharomyces IV. Happing of temperature-sensitive genes and use of disomlc strains in localizing genes. Genetics, 1973, v.74, p.33-45.

137. Mortimer E.K., Schild D. Genetic map of Saccharomyces cerevi—siae. — Microbiol. Revs., 1980, v.44, p.519-571

138. Kagley P., Linnane A.W. Expression of mitochondrial DNA in S.cerevisiae: the construction of sets of isonuclear hap-loid strains, containing different specified mitochondrial genomes. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, v.85, p. 585-592.

139. Nakai S., Mortimer R.K. Studies of the genetic mechanism ofradiation induced mitotic segregation in yeast. — Mol. Gen. Genet. 1969, v.103, p.329-388.

140. Newmeyer D., Howe H.B., Galeazzi D.R. A search for complexityat the mating type locus of Neurospora crassa. Can. J. Genet. Cytol., 1973, v.15, p.577-585.

141. Filsson-Tillgren T., Gjermansen C., KLelland-Brandt M.C.,

142. Petersen J.G.I., Holmberg S. Genetic differences between S. carlsbergensis and S.cerevisiae. Analysis of chromosome III by single chromosome transfer. — Carlsberg. Res. Common., I981, v.46, p.65-76.

143. Nilss on-Tillgren T., Petersen J.G.I., Holmberg S., Kielland

144. Ono B.J., Stewart J.W., Sherman P. Teast "DAA suppressor effecfective in V strains. Serine inserting suppressors. J. Mol. Biol., 1979, v.128, p.81-100.

145. Peberdy J.P. Fungal protoplasts: isolation, reversion and fusion. Annu. Rev. Microbiol., 1979, v.33, p.21-39.

146. Picard M. Genetic evidence for a polycistronic unit of transcription in the complex locus 14 in Podospora anserina. II Genetic evidence of informational suppressors. Genet. Res., 1973, v. 21, p.I-I5.

147. Pittenger T.H. Synergism of two cytoplasmically inherited mutants in Neurospora crassa. — Proe. Natl. Acad. Sci. USA., 1956, v.42, p.747-752.

148. Pittenger T.H., Atwood Z.C. Stability of nuclear proportionduring growth of Neurospora heterokaryons. — Genetics, 1956, v.4I, p.227-241.

149. Pittenger T.H., Browner T.G. Genetic control of nuclear selection in Neurospora heterokaryons. Genetics, 1961, v.46; p.1645-1664.

150. Polaina J., Conde J. Genes involved in the control of nuclearfusion during the Sexual cycle of Saccharomyces cerevisiae.- Mol. Gen.Genet., 1982, v.186, p.253-258.

151. Pontecorvo G. Microbial genetics: retrospect and prospect.

152. Proc. Roy. Soc., 1963, Ser.B, v.158, p.1-23.

153. Pontecorvo G. The parasexual cycle. Annu. Rev. Microbiol.,1956, v.IO, p.393-400.

154. Pontecorvo G., Eafer E. Genetic analysis based on mitotic recombination. Adv. Genet. , 1958, v.9, p.71-104.

155. Pontecorvo G., Roper J .A. Diploids and mitotic recombination.-Adv. Genet., 1953, v.5. p.218-223.

156. Poulter R., Jeffery E., Hubbard M.J., Shepherd M.G., Sullivan P.A. Parasexual genetic analysis of Candida albicans

157. Ъу spheroplast fusion. J. Bacterid., 1981, v.146, p.833-840.

158. Prasad I. Partial complementation in Aspergillus niger hete—rocaryon. Experientia, 1969, v.15, p.428-435.

159. Puhalla J.E., Mayfield J.E. The mechanism of heterocaryoticgrowth in Verticillium dahliae. Genetics, 1974, v.76, p.411-422.

160. Quinlan R.A., Pogson C.J., Gull E. The influence of the microtubule inhibitor methylbenzimidazol-2-yl-carbamate (№0) on nuclear division and the cell cycle in Saccharomyces cerevisiae. J. Cell. Sci., 1980, v.46, p.341-352.

161. Raper СЛ., Raper J.R., Miller R.E. Genetic analysis of thesex cycle of Agarieus bisporus. Mycologia, 1972, v.64, p.1088-1117.

162. Rayner A.D.K., Turton И.N. Mycelial interactions and population structure in the genus Stereum: S. rugosum, S. sangui-nolentum, S. rameale. Trans. Br. Mycol. Soc., 1982, v.78, p.483-494.

163. Reipen G., Erhart E., Breunig K.D., Hollenberg C.P. Eon-selective transformation of Saccharomyces cerevisiae. Cur. Genet., 1982, v.6, p.189-195.

164. Rizet G. les phénomènes de barrage chez Podospora ansérina.

165. Rowlands R.T., Turner G. Nuclear-extranuclear interactionsaffecting oligomycin resistance in Aspergillus nidulans. -Mol. Gen. Genet.,1977, v.I54, p.3H-3I8.

166. SarachekA., Rhoads D.D., Schwarzhoff R.E., Hybridisation of

167. Candida albicans through fusion of protoplasts. Arch.Microbiol., 1981, v.129, p.1-8.

168. Shatkin A.J., Tatum E.L. Electron microscopy of Neurosporacrassa mycelia. J. Biophys. Biochem. Cytol., 1959, v.6, p.423-426.

169. Sherman P. Use of micromanipulators in yeast studies. In:

170. Methods in Cell Biology, v.II / Ed. Prescott D.M., N.Y: Acad. Press, 1975, p.189-199.

171. Sherman F. Genetic nomenclature. In: The molecular "biologyof the yeast Saccharomyces• / Eds. Strathern J.N. et al. IT .Y: Cold Spring Harbor Lab., 1981, p.639-640.

172. Sherman F. Suppression in the yeast Saccharomyces cerevisiae.- In: The molecular biology of yeast Saccharomyces. II. Ke-thabolism and gene egression. / Eds. Strathern J.IT. et al. N.Y: Cold Spring Harbor Lab., 1982, p.463-486.

173. Sigurdson D.C., Gaarder M.E., Livingston D.M. Characterisation of the transmission during cytoductant formation of the 2j^DNA plasmid from Saccharomyces. Mol. Gen. Genet., I981, v.183, p.59-65.

174. Slonimski P.P. La formation des enzymes respiratoires chezla levure. Paris: Mason, 1953»

175. Slonimski P.P., Perrodin G., Croft J.N. Ethidium bromide induced mutation of yeast mitochondria: complete transformation of cells respiratory deficient nonchromosomal petites.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1968, v.30, p.232-239.

176. Smith J.D., Burnett L., Brenner S., Russel R.L. More mutanttyrosine transfer ribonucleic apids. J. Mol. Biol., 1970, v.54, p.I-14.195. van Solingen P., van der Plaat. Fusion of yeast spheroplasts.- J. Bacteriol., 1977, v.130, p.946-947.

177. Strausberg R.L., Perlman P.S. The effect of zygotic bud position on the transmission of mitochondrial genes in Saccha-romyces cerevisiae. Mol. Gen. Genet., 1978, v.163, p.131-144.

178. Stromnaes 0. Genetic changes in Saccharomyces cerevisiaegrown in media containing DL-para-fluoro-phenylalaline. -Hereditas, 1967, v.59, p.197-213.

179. Subak-Sharpe H. Extra-nuclear inheritance in a homothalicfungus. Heredity, 1956, v.IO, p.270-294.

180. Surguchov A.P., Fominykch E.S., Smirnov V.N., Ter-Avanesyan

181. Svoboda A. Intergeneric fusion of yeast protoplasts Saccharomyces cerevisiae and Schzosaccharomyces pombe. In: Advances in protoplast research /Eds. Perenczy L., Parkas G. d1., Oxfor: Pergamon Press, 1980, p.119-124.

182. Takahashi T. Abnormal mitosis by some p-mutagens in Saccharomyces cerevisiae, Bull. Brew. Sci., 1972, v.18,p.37-41.

183. Ter-Avanesyan M.D., Zimmerman J., Inge-Vechtomov S.G., Sudaricov A.B., Smirnov M.U., Surguchov A.P. Ribosomal recessive suppressors cause a respiratory deficiency in yeast S.cerevisiae. Mol. Gen. Genet., 1982, v.185, p.319-325.

184. Toh-e A., Guerry P., Wichner R.B. Chromosomal superkillermutants of S.cerevisiae. J. Bacterid., 1978. v.I36, p.1002-1007»

185. Toh-e A., Wickner R.B. A mutant killer plasmid whose replication depends on a chromosomal "superkiller" mutation, -J. Bacterid., 1979, v.91, p.673-682.

186. Toh-e A., Wickner R.B. Curing of the 2^ DNA plasmid from S.cerevisiae. J. Bacterid., 1981, v.145, p.I42I-I424.

187. Toh-e A., Wickner R.B. "Superkiller* mutants suppress chromosomal mutation affecting double-stranded RNA killer plasmid replication in S.cerevisiae. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, p.527-530.

188. Tschumper G., Carbon J. Copy number control by a yeast centromere. Gene, 1983, v.23, p.221-232.

189. Vaughan P.R., Loewe H., Nagley P. Studies on the induction ofthe petite mutants in yeast by analogues of berenil. Mol. Gen. Genet., 1979, v.172, p.259-269.

190. Vierny C., Keller A.M., Begel 0., Belcour L. A sequence ofmitochondrial DNA is associated with the oneset of senescence in a fungus. Nature, 1982, v.297, p.157-159.

191. Villet R.H. Genetic curing of blindness in Phycomyces blakesleeanus: a quantitative assessment of dominance. Nature, 1970, v.225, p.453-454.

192. Wang E., Goldman R.D. Function of cytoplasmic fibers in intracellular movements in BHK-2I cells. J. Mol. Biol., 1978, v.79, p.708-726.

193. Wickner R.B. Plasmids Controlling exclusion of the Kg killerdouble-stranded RNA plasmid of yeast. Cell, 1980, v.21, p.217-226.

194. Wilkerson L.E., Pringle J.R. Transient GI arrest of S.cerevisiae cell of mating type @ by a factor produced by cells ofmating type a. Exp. Cell Res., 1974, v.89, p.175-187.

195. Wilson J.P. Transplantation of nuclei in Neurospora. Amer.

196. J.Bot., 1963, v.5I, p.780-786.

197. Wilson J.J., Khachatourians G.G., Ingiedew W.M. Protoplastfusion in the yeast Saccharomyces alluvius. Mol. Gen. Genet., 1982, v.186, p.95-100.

198. Wood J.S. Genetic effects of methyl benzimidazole-2-yl-carbamate on Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell. Biol., 1982, v.2, p.1064-1079.

199. Wright R.M., HorrumM.A., Cummings D.J. Are mitochondrialstructural genes selectively amplified during senescence in Podospora anserina ? Cell, 1982, v.29, p.505-515.

200. Wright R.E., Lederberg J. Extranuclear transmission in yeastheterocaryons. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1957, v.43t p.919-923.

201. Yarus M. Translation efficiency of transfer RNA's: uses ofan extended anticodon. Science, 1982, v.218, p.646-652.

202. Zakharov I.A., Stepanova V.P. Le transfert autonome des facteurs mitochondriaux (la cytoduction) lors de croisement des cellules de levure Saccharomyces cerevisiae. Biochimie, 1977, v.59, p.947-949.

203. Zakian V.A., Brewer B.J., Fangman W.L. Replication of eachcopy of yeast 2jjiDNA plasmid occurs during the S phase. -Cell, 1979, v.I7, p.923-934.

204. Zalokar M. Intracellular centrifugal separation of organellesin Phycomyces. J. Cell. Biol., 1969, v.41, p.494-509.

205. Zengel J.M., Lindahl L.«High efficiency temperature-sensitive suppression of amber mutations in E.coli. Bacterid. I981, v.I45, p.459-465.

206. Zimmermen F.K., Schwaier R., Laer U.V. Mitotie recombinationinduced in Saccharomyces cerevisiae with nitrous acid, di-ethylsulphate and carcinogenic alkylating nitrosamides. -Z. Vererbungsl., 1966, v.98, p.230-246.