Роль Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе

Анисимова, Ирина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе"

Анисимова Ирина Николаевна

РОЛЬ Р2У-РЕЦЕПТОРОВ В РЕГУЛЯЦИИ СОКРАТИМОСТИ МИОКАРДА КРЫС В ПОСТНАТАЛЬПОМ ОНТОГЕНЕЗЕ

03.03.01-фнзнология

Автореферат диссертации на соискшше учёной степени кандидата биологических наук

- 3 МПЯ 2011

Казань-2011

4858991

Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и охраны здоровья человека государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Татарский государственный гуманитарно-педагогический университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Аникина Татьяна Андреевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Гайнутдинов Халил Латыпович

доктор биологических наук, профессор Ситдикова Гузель Фаритовна

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение высшего

Защита состоится «15» ноября 2011г. в часов на заседании Диссертационного совета Д 212.078.02. при ФГАОУВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» по адресу: 420008, г. Казань, ул. Левобулачная, д. 44

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И. Лобачевского при ФГАОУВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 35.

Электронная версия автореферата размещена на официальном сайте ФГАОУВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» wvw.ksu.ru.

профессионального образования «Ульяновский государственный университет»

Ученый секретарь

диссертационного совета д.м.н., профессор

Зефиров Т.Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Внутриклеточные пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды (АТФ и УТФ) выполняют роль источника энергии, участвуют в биосинтезе рибонуклеиновых кислот, обеспечивая жизнедеятельность клетки. Установлено, что АТФ и уридин 5'-трифосфорная кислота (УТФ) находятся в везикулах вместе с основным медиатором и участвуют в передаче нервных импульсов, выполняя функции котрансмитгера (Burnstock and Kennedy, 1986; Burnstock, 1989,1990, 2006, 2008,2009; Kugelgen, 1991).

Свое влияние АТФ и УТФ реализуют через Р2Х и Р2У-рецепторы, разнообразие которых превышает все известные подтипы рецепторов для «классических» нейромедиаторов и гормонов (Зиганшин и др., 1999, 2007; Гиниатуллин, 1998; Гшшатуллин и др., 2005; Аникина, Ситдиков, 2011. Yang et al., 1994; Ralevic and Burnstock, 1998; Ralevic, 2008; Domingo et al., 2010). Пуриновые и пиридиновые нуклеотиды как сигнальные молекулы при взаимодействии с рецепторами осуществляют пролиферацию, дифференциацию, развитие, регенерацию и апоптоз клеток (Burnstock., 2009).

Присутствие внеклеточной УТФ в сердце считается доказанным, и несколько подтипов Р2У- рецепторов активируются пуриновыми и гшримцдиновыми нуклеотцдами (Vassort, 2001). Метаболизм пиримидиновых нуклеотидов в сердце, к которым относится УТФ, изучен мало. Известно, что содержание пиримидиновых нуклеотидов в сердце ниже по сравнению с пуриновыми нуклеотидами и соотношение АТФ и УТФ составляет 1:10 (Vassort, 2001) или 1:16 (Lazarowski, 2003). Показано, что уровень АТФ и УТФ в плазме значительно коррелирует между собой, что указывает на совместное освобождение этих нуклеотидов (Wihlborg et al., 2006).

В литературе показано разнонаправленное влияние УТФ на деятельность сердца. Отмечено снижение и увеличение силы сокращения, появление двойного эффекта сократимости миокарда при добавлении УТФ (Рычков, 2007; Froldi et al., 1995; Vassort, 2001; Kugelgen, 2006; Talasila, 2009).

мускулатуре, периферической и центральной нервной системе, легких, печени, когда большинство органов еще не сформированы и функционально не активны (Cheung and Bumstock, 2003). Показано, что у крыс УТФ вызывает рост неонзтальных кардиомиоцитов (Fham et al., 2003).

Многие аспекты функционирования Р2У-рецегггоров на важнейших этапах раннего постнатального онтогенеза остаются малоизученными, а эффекты УТФ отличаются в различных тканях и на разных этапах онтогенеза (Vassort, 2001). Методами иммуногистохимии и ПЦР показано присутствие Р2У,д<611(З М - подтипов рецепторов в целом сердце, на отдельных кардиомиоцитах (Webb et al., 1996; Vassort, 2001; Bumstock, 2009), сердечных миофибробластах (Zheng et al., 1998; Talasila et al., 2009), эндотелии и гладкомышечных стенках сосудов (Wang et al., 2002). Экспрессия Р2У-рецепторов в миокарде меняется в онтогенезе и усиливается для Р2Уи б- подтипа рецепторов (Webb et al., 1996).

Однако, нет данных, подтверждающих участие Р2У - рецепторов в регуляции сокралимости миокарда крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза в условиях незрелости регуляторных влияний на сердце и разных этапов биологического созревания организма.

Актуальность проблемы возрастает и в связи с установленным кардиопротекгерным влиянием АТФ и УТФ при гипоксии, инфаркте миокарда, аритмии, ишемии сердца, сопровождающихся гибелью клеток и выходом АТФ и УТФ во внеклеточную среду с последующей активацией Р2- пуршюрецепторов. (Ninomiya et al., 2002b; Wee et al., 2007). АТФ и УТФ оказывают влияние на миофибробласты, которые играют важную роль в процессах восстановления миокарда при сердечно-сосудистых заболеваниях (Yitzhaki et al., 2005,2006; Talasila et al., 2009).

Цель и задачи исследования

Цель: исследовать роль УТФ и разных подтипов Р2У - рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе.

В соответствии с этой целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить влияние УТФ разной концентрации на сократительную активность миокарда предсердий и желудочков у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

2. Определить влияние неселекгивного блокатора Р2У - рецепторов PPADS на сократимость миокарда предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста

3. Изучить влияние неселективной блокады Р2У - рецепторов РРАШ на эффект действия УТФ у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

4. Определить влияние селективного блокатора реактива голубого-2 на сократимость миокарда у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

5. Изучить влияние селективной блокады Р2У* подтипа рецепторов реактивом голубым-2 на эффект действия УТФ у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. УТФ оказывает отрицательный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста. В наибольшей степени ингибирующий эффект УТФ на сократимость миокарда наблюдается у 21-суточных крысят.

2. Ингибирующий инотропный эффект УТФ у 7-, 21-суточных животных реализуется через Р2У4 рецепторы, а у 100-суточных животных через Р2У4 и Р2У2 рецепторы.

Научная новизна

В диссертационной работе впервые проведено изучение влияния УТФ на сократимость миокарда крыс в ршшем постнаталыюм онтогенезе. В работе впервые было установлено, что агонист Р2У2,4,б подтипов рецепторов УТФ вызывает уменьшение силы, скорости сокращения и расслабления миокарда предсердий и желудочков крыс 7-100-суточного возраста. Внеклеточная УТФ оказывает модулирующее влияние на сократимость миокарда в микро- и наномолярных концентрациях.

Получены новые данные о возрастных особенностях инотропии миокарда на действие УТФ. У 21-суточных крысят реакция силы, скорости сокращения и расслабления на влияние агониста больше по сравнешпо с новорожденными животными.

Впервые выявлено наличие собственного действия блокаторов Р2У-рецепторов РРАБЭ и реактива голубого-2 на амплитудно-временные характеристики сократимости миокарда крыс разного возраста. РРАЛБ оказывает разнонаправленное действие на исследуемые параметры сократимости миокарда крыс 7-, 21 и 100-суточного возраста. У 21-суточных крысят в миокарде желудочков РРАОЭ вызывает положительный инотропный и люзигропный эффекты в сократимости миокарда.

Реактив голубой-2 увеличивает амплитудно-временные характеристики сократимости миокарда всех возрастных групп, в большей степени у 21-суточных крысят.

Проведенные исследования с использованием разнообразных блокагоров Р2У-рецегггоров позволили установить подтипы рецепторов, участвующих в ингибирующем действии УТФ. У 100- суточных животных инотропная реакция миокарда на добавление УТФ реализуется при участии Р2У2 подтипа рецепторов.

Доказано, что Р2У4 подтип рецепторов участвует в реализации отрицательного инотропного эффекта УТФ во всех возрастных группах и имеет более выраженное модулирующее влияние на сократимость миокарда крыс 100-суточного возраста.

Научно - практическая ценность

Полученные экспериментальные данные значительно расширяют и дополняют наши представления о пуринергической регуляции иногропной функции сердца, возрастных особенностях функциональной активности разных подтипов Р2У-рецепторов в различные периоды постнаталыюго онтогенеза.

Полученные данные можно использовать при трактовке результатов исследований по физиологии сердца в зависимости от возраста животных. Результаты работы можно использовать при чтении лекций и факультативных курсов по физиологии. Материал исследований представляет интерес для специалистов по физиологии и кардиологии.

Личный вклад диссертанта

Приведенные в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы, включая составление плана исследования, проведение экспериментов, обработку экспериментальных данных и оформление публикаций.

Достоверность полученных данных

Достоверность полученных данных подтверждалась использованием достаточного объема экспериментальных исследований, конкретной постановкой и решением поставленных задач и статистической обработкой полученных результатов.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и форумах: VII Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2009); Международной конференции «Физиология развития человека» Института возрастной физиологии РАО (Москва, 2009); научных конференциях молодых ученых и

специалистов ТГТПУ (Казань, 2009-2011); XXI Съезде Физиологического Общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010); X Всероссийской научно-теоретической конференции «Физиологические механизмы адаптации растущего организма» (Казань, 2008, 2010); Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы регуляции физиологических систем организма в процессе адаптации к условиям среды» (Санкт-Петербург, 2010); конференции молодых ученых «Механизмы адаптации физиологических систем организма к факторам среды» (Санкт-Петербург, 2010); XVIII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов 2011» (Москва, 2011), на заседаниях кафедры анатомии, физиологии и охраны здоровья человека ТГГПУ (Казань, 2008-2011).

Реализация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 18 научных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация объемом 114 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания методики исследования, полученных результатов, их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация содержит 16 таблиц и 27 рисунков. Список цитируемой литературы включает 231 источников, из них 42 отечественных и 189 иностранных авторов.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены на 270 разнополых лабораторных беспородных белых крысах стадного разведения. Исследовали 3 возрастные группы животных: 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Сократительную активность миокарда в эксперименте in vitro изучали на полосках предсердий и желудочков. Определение реакции сократительной функции миокарда на действие агонистов проводили на установке "PowerLab" ("ADInstruments") с датчиком силы "MLT 050/D" ("ADInstruments"). Запись кривой регистрировали на персональном компьютере при помощи программного обеспечения "Chart 5.0". Рассчитывали абсолютные значения силы сокращения в граммах и общую длительность изометрического сокращения полосок миокарда в секундах, а также оценивали процент изменения на действие агониста в процентах от исходных показателей, которые принимали за 100%.

Из правого желудочка и предсердия при помощи специальных ножниц и пинцетов препарировали полоски. Длина полосок составляла 1,5-2 мм, ширина не превышала 1мм. Препарат фиксировали вертикально одним концом к датчику силы, другим — к точке опоры, затем каждый препарат погружали в отдельный резервуар объемом 5 мл, в который подавался рабочий раствор. Состав раствора Кребса (в моль/л): NaCl- 8г; КС1-0,3г; СаС12- - 3 мл; MgS04 -0,5 мл; NaH2P04- 0,04г; глюкоза - 2г; Trizma HCl- 2.4-3.9 моль/л; Trizma base- 0.25 моль/л (Sigma). Раствор постоянно аэрировали карбогеном 95% 02 и 5% С02, pH поддерживали в пределах 7.3-7.4.

После погружения препаратов в резервуары следовал "период приработки" в течение 40-60 мин, в ходе которой мышечным полоскам постепенно продавалось оптимальное натяжение. По окончании приработки 10 мин регистрировали исходные параметры сокращения. Затем в течение 30 мин. Регистрировали сократимость миокарда при добавлении в рабочий раствор агонисга одной из концентраций. Агонист Р2У-рецепгоров УТФ добавляли в различных концентрациях и оценивали изменения сокращений полосок миокарда крыс. По окончании стимуляции агонистами препараты трехкратно отмывали рабочим раствором в течение 10 мин, затем регистрировали исходные показатели для каждой последующей дозы. Для изучения влияния блокаторов Р2У - рецепторов PPADS и реактива голубого-2 оценивали изменения сокращений полосок миокарда в течении 1 часа. Влияние УТФ на амплитуду сокращения при блокаде Р2У - рецепторов записывали в присутствии PPADS или реактива голубого-2, затем добавляли на 20 минуте УТФ и записывали 30 минут.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Влияние УТФ на сократимость миокарда крыс в постнаталышм онтогенезе.

У каждого подтипа Р2-рецепторов существуют наиболее и наименее чувствительные к нему агонисты. Известно, что УТФ является агонистом Р2У24Г, подтипов пуринорецепторов.

Определение концентрации внеклеточной УТФ показало, что в сердце содержание УТФ в 10-16 раз меньше, чем АТФ (Vassort, 2001; Lazarowski et al., 2003). Известно, что концентрация внеклеточной АТФ соответствует микромолярной, следовательно, содержание внеклеточной УТФ составляет ЮцМ. Поэтому для изучения дозозависимого эффекта мы выбрали диапазон концентраций УТФ от 10"6 до 10"'°М.

Экзогенная УТФ в концентрации 10"1Н-10ЙМ вызывает отрицательный инотропный эффект у 7-, 21- и 100- суточных животных, как в предсердиях, так и в желудочках (рис. 2).

У 7 -суточных крыс УТФ в концентрации Ю^М уменьшает силу сокращения миокарда на 5,9±1,4% в предсердиях и на 8,4±2,4% в желудочках, что является достоверным по отношению к контролю (р<0,05). В концентрации 10'7М при действии агониста сила сокращения миокарда уменьшается на 7,6±2,3% в предсердиях и на 6,9±1,3% в желудочках (р<0,05). УТФ в концентрации 10"8М в этом же возрасте снижает силу сокращения миокарда на 2,6±1,1% в предсердиях и на 6,0±1,1% в желудочках (р<0,05). УТФ в концентрации Ю'!0М снижает силу сокращения миокарда на 5,2±0,8% в предсердиях и на 6,3±1,3% в желудочках (р<0,05) (табл. 1А, 1Б).

У 21-суточных крысят УТФ в концентрации 10"ЮМ уменьшает силу сокращения препарата на 19,4±2,3% (р<0,05) в предсердиях и на 22±3,4% в желудочках по сравнению с исходной (р<0,05). Агонист в концентрации 10"8М, 10"7М и 10"6М в предсердиях снижает силу сокращения миокарда на 17,3±2,2%, 20,0±1,7% (р<0,05) и 15,0±2,7% соответственно (р<0,05). УТФ в конце1гграции 10"8М и 10"7М в желудочках уменьшает сократительную активность миокарда на 17,7±2,7% и 13,4±2,1% соответствешю (р<0,05). А концешрация 10"6М вызывает незначительные изменения силы сокращения (рис. 1) (табл. 1А, 1Б).

У 100- суточных крыс УТФ выше названных концентраций также приводит к развитию отрицательной инотрошш. Максимальный сократительный эффект УТФ у взрослых крыс возникает при концентрациях 10~ШМ и 10"6М в предсердиях на 20,6±5,4% и 19,3±4,5% соответственно (р<0,05). В желудочках 10-6М снижает силу сокращения на 15,7±1,4 (р<0,05), а концентрация УТФ Ю'10М в желудочках не изменяет силу сокращения. Агонист в концентрации 10"8М снижает силу сокращешш в предсердиях на 13,0±1,4%, а в желудочках на 12,8±1,9% (р<0,05). УТФ в концентрации 10'7М уменьшает сократительную активность миокарда предсердий на 11 ±2,9%, а в желудочках на 15,4±1,5% (р<0,05) (табл. 1А, 1Б).

Таким образом, физиологические концентрации внеклеточной УТФ (10 и вызывают достоверно больший ингибирующий эффект в сократительной активности миокарда предсердий и желудочков крыс 21 - и 100- суточных животных, по сравнению с 7-суточными (р<0,001).

-10 -8 -7 -6

С -5 ■10

-15 -20 -25 -30

□ предсердия ■ желудочки

Рис.1. Влияние УТФ на силу сокращения миокарда предсердий и желудочков крыс 21-суточного возраста.

Примечание:* - достоверность по сравнению с исходным значением *р<0,05

ШЩР

Рис. 2. Влияние УТФ на силу сокращения миокарда крыс 21-суточного возраста

Таблица 1А

Влияние УТФ на амплитудно-временные показатели сократимости миокарда 7-, 21- и 100- суточных крыс

Возраст Концентрация Сила Сила Длительность Длительность Время Время

агониста, М сокращения, сокращения, сокращения, сокращения, сокращения, сокращения,

исх. (г) ыах. (г) нсх. (с) мах. (с) исх. (с) мах. (с)

7 дней УТФ 10'' предсердие 0,181±0,063 0,169±0,060* 1,41310,106 1,39810,101 0,479±0,015 0,467±0,014

желудочек 0,204±0,023 0,191±0,022* 1,30510,031 1,294±0,026 0,480±0,006 0,4831 0,003

УТФ 10" предсердие 0,16210,032 0,15610,031* 1,146±0,107 1,128 ±0,108 0,454±0,009 0,447±0,009

желудочек 0_242±0,031 0,22&Ю,032* 1,277±0,020 1,294±0,027 0,402±0,062 0,392±0,060

21 день УТФ Ю-' предсердие 0,077±0,021 0,06310,018* 0,68310,113 0,685±0,118 0,322±0,034 0,348±0,053

желудочек 0,091±0,023 0,07910,021* 0,90910,106 0,89610,104 0,39710,012 0,38810,009

УТФ 10'" предсердие 0,172±0,067 0,14710,060* 0,696±0,084 0,703±0,088 0,335±0,028 0,343±0,028

желудочек 0,13010,042 0,10910,036* 0,922±0,105 0,90210,103 0,41610,024 0,339±0,021

100 дней УТФ 10 ' предсердие 0,128±0,023 0,11610,022* 0,678±0,082 0,6681-0,080 0,328±0,10 0,31810,008

желудочек 0,109±0,019 0,09410,018* 1,22410,229 1,19310,224 0,425±0,021 0,41710,019

УТФ 10'" предсердие 0,170±0,024 0,14810,022* 0,601±0,005 0,597±0,002 0,31210,004 0,30810,002

желудочек 0,155±0,037 0,134±0,032* 1,300±0,109 1,260*0,102 0,423±0,007 0,413±0,006

Примечание: * - достоверность по сравнению с исходным значением: р<0,05

Таблица 1Б

Влияние УТФ на амплитудно-временные показатели сократимости миокарда 7-, 21- и 100- суточных крыс

Возраст Концентрация Время Время Скорость Скорость Скорость Скорость

агониста, М расслабления. расслабления. сокращения, сокращения. расслабления, расслабления.

исх. (с) мах. (с) исх. (с/0 мах. (с/0 исх. (с/0 мах. (с/0

7 дней УТФ 10"' предсердие 0,948*0,192 0,929*0,083 0,192*0,034 0,186*0,033» 0,389*0,109 0,355*0,100»

желудочек 0,826*0,024 0,825*0,025 0,219±0,031 0,202*0,027» 0,407*0,050 0,380*0,045»

УТФ 10" предсердие 0,834*0,017 0,825*0,016 0,172*0,023 0,155±0,022* 0,288*0,027 0,258*0,024»

желудочек 0,630*0,149 0,620±0,146 0,195±0,034 0,183*0,032» 0,353*0,064 0,333*0,058»

21 день УТФ 10~7 предсердие 0,376*0,096 0,377*0,098 0,146±0,016 0,128*0,016» 0,161*0,021 0,131*0,018»

желудочек 0,487*0,112 0,473±0,107 0,187*0,023 0,168±0,020* 0,212*0,030 0,192*0,026»

УТФ 10" предсердие 0,451*0,099 0,442*0,095 0,264*0,092 0,232*0,089» 0,290*0,092 0,244*0,072»

желудочек 0,569*0,093 0,546*0,086 0,135*0,020 0,115*0,018» 0,169*0,017 0,137*0,013»

100 дней УТФ 10' предсердие 0,355±0,072 0,353*0,071 0,541*0,079 0,472*0,072» 0,522*0,058 0,477*0,056»

желудочек 0,799*0,210 0,769*0,201 0,205±0,051 0,181±0,047 0,317*0,070 0,287*0,070

УТФ 10'" предсердие 0,289*0,001 0,288*0,001 0,527±0,070 0,464*0,053» 0,488*0,062 0,430*0,049»

желудочек 0,877*0,104 0,853*0,099 0,272*0,058 0,258*0,054» 0,517*0,102 0,448*0,079»

Примечание: * - достоверность по сравнению с исходным значением: р<0,05

Влияние PPADS иа амплитудно-временные характеристики сократимости миокарда крыс 7-100 суточного возраста.

Фармакологические исследования с использованием различных агонистов и антагонистов рецепторов позволят идентифицировать подтип Р2У - рецепторов.

Существуют противоречивые данные о селективности блокаторов Р2У-рецепторов. По мнению многих исследователей, блокаторы Р2У - рецепторов обладают видовой и тканевой специфичностью. В настоящее время установлено, что PPADS является антагонистом Р2У| и возможно, Р2У6 подтипов рецепторов (Kugelgen et al., 2000, Kugelgen, 2006; Wee et al., 2007). В литературе имеются данные, где показано отсутствие влияния PPADS на Р2У4 подтип рецепторов крыс (Collo et al., 1996; Townsend-Nicholson et al., 1999; Wildraan et al., 2003; Kugelgen, 2000, 2006). По данным других авторов PPADS умеренно блокирует Р2У2|б,п,1з подтипы рецепторов (Vassort, 2001; Kugelgen, 2005).

Изучали влияние PPADS на параметры сократимости миокарда предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста Блокатор добавляли в концентрации ЗОцМ (Burnstock, 2006).

Регистрацию действия препарата на амплитудно-временные характеристики сократимости миокарда изучали в течение 60 минут. Стабилизация показателей сократимости после добавления блокатора наступает к 10 минуте и не меняется в последующие 50 минут.

У новорожденных крысят добавление PPADS вызывает положительный инотрошшй эффект, который в предсердиях составляет 7,3± 0,7%, а в желудочках 5,3± 1,0% (р<0,05).

У 21-суточных крыс в предсердиях исследуемый блокатор опекает амплитуду сокращения на 7,4±1,4% (р<0,05). После инкубации миокарда желудочков с PPADS наблюдается увеличение амплитуды сокращения на 47,2±4,7% (р<0,05) по сравнению с исходной. Из исследуемых временных параметров инотропии миокарда, в большей степени увеличиваются скорость сокращения и скорость расслабления миокарда желудочков на 44,2±3,5% и 40,8±8,9 соответственно (р<0,05). Такие показатели как длительность, время сокращения и расслабления изменяются не значительно.

У взрослых крыс блокатор оказывает отрицательный инотропноый эффект. В предсердиях сила сокращения уменьшается на 8,9±1,7%, а в желудочках на 6,8±1,1% по сравнению с исходной (р<0,05) (рис.3).

возраст, суток 100

Рис.3. Влияние РРАШ на силу сокращения миокарда предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100 - суточного возраста

Примечание:* - достоверность по сравнению с исходным значением *р<0,05

Рис. 4. Влияние PPADS на амплитудно-временные характеристики сокращения миокарда желудочков крыс 21-суточного возраста.

Следовательно, PPADS оказывает разнонаправленное действие на параметры инотропии миокарда крыс разного возраста. У новорожденных крысят, как в предсердиях, так и в желудочках блокатор оказывает положительный инотропный эффект. У 21-суточных крыс антагонист приводит к развитию положительного инотронного и лкнитропного действия на миокард желудочков. У 100- суточных животных наблюдается уменьшение силы сокращения миокарда предсердий и желудочков.

Влияние УТФ на фоне PPADS на сократимость миокарда крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Для определения подтипа Р2У-рецепторов, участвующих в эффектах УТФ провели серию экспериментов по определению влияния УТФ на фоне блокатора PPADS. Исследовали влияние наиболее эффективных концентраций УТФ на силу сокращения миокарда. Для 7- и 100-суточных крысят добавляли УТФ в концентрации 10"8М, а для 21-суточных - 10"7М.

У новорожденных крысят в контроле агонист оказывает отрицательный инотропный эффект, который составляет в предсердиях 7,0±0,8%, а в желудочках - 4,3± 0,7%. На фоне блокады Р2У26 подтипов рецепторов отрицательный инотропный эффект УТФ сохраняется. В предсердиях он составляет 4,9±0,8%, в желудочках 2,3±0,5%.

У 21-суточных крысят УТФ в контроле снижает силу сокращения миокарда предсердий на 15,0±1,4%, а в желудочках на 15,7±0,8%. После инфузии с антагонистом добавление УТФ не изменяет амплитуду сокращения миокарда (рис. 5).

У 100-суточных крыс в контроле УТФ уменьшает силу сокращения желудочков на 14,5±1,7%, и предсердий на 16,6±0,8%. При блокаде Р2У2<6 подтипов рецепторов в предсердиях ингибирующий эффект УТФ также сохраняется (рис.6).

Таким образом, при блокаде Р2У26 подтипов рецепторов отрицательный эффект УТФ сохраняется в миокарде предсердий и желудочков всех возрастных групп. Однако, у 100- суточных крыс блокатор PPADS снижает эффект УТФ в миокарде желудочков с 16 до 6% (р<0,05). Следовательно, ингибирующий эффект УТФ у 100-суточных животных в миокарде желудочков реализуется через Р2У2 подтип рецепторов.

□ предсердие ижелудочек

Рис. 5. Влияние УТФ в контроле и при блокаде РРАОБ на силу сокращения миокарда предсердий и желудочков у 21- суточных животных

УТФ контр

PPADS

PPADS+УТФ

-5

-10

-15

-20

-25

-30 J

□ предсердия в желудочки

Рис. 6. Влияние УТФ в контроле и при блокаде PPADS на силу сокращения миокарда предсердий и желудочков у 100- суточных животных.

Влияние реактива голубого-2 на сократимость миокарда крыс в онтогенезе.

Известно, что у крыс реактив голубой-2 блокирует Р2У4 подтип рецепторов в сердце (Bogdanov et al., 1998; Wildman et al., 2003). У крыс этот подтип рецепторов не чувствителен к сурамину и PPADS (Burnstock, 2009). По данным исследования Wee и его сотрудников реактив голубой-2 является эффективным антагонистом, как при низких, так и высоких концентрациях. Реактив голубой -2 добавляли в концентрации 15 микроМ (Burnstock, 2006; Wee et al., 2007).

Реактив голубой является селективным блокатором для Р2У4 подтипа рецепторов в сочетании с УТФ как агонистом этих рецепторов.

В датой серии экспериментов изучали влияние реактива голубого-2 на силу сокращения предсердий и желудочков всех возрастных групп. Инфузия блокатора вызывает положительный инотропный эффект миокарда у 7-100-суточных животных. Увеличение силы сокращения изолированных полосок миокарда на действие препарата происходит постепенно, и стабилизация исследуемых параметров сократимости наблюдается к 15-20 минуте.

У 7-суточных крысят реактив голубой-2 вызывает положительный инотропный эффект в предсердиях на 16,3±5,1%, а в желудочках на 13,3±2,3% (р<0,05). У 21-суточных животных наибольший эффекг на добавление реактива голубого-2 наблюдался в желудочках и составил 20,0+3,9% (р<0,05).В предсердиях он достигал 15,9+2.6% (р<0,05). У взрослых крыс антагонист также увеличивает силу сокращения миокарда, но

в меньшей степени. В предсердиях на 5,9±1,13% и в желудочках на 6.0=1,39% по сравнению с исходной (р<0,05) (рис. 7).

Изучение влияния реактива голубого-2 на сократительную активность миокарда крыс выявило возрастные особенности. Так, у 7- и 21-суточных крысят сила сокращения полосок миокарда предсердий и желудочков на действие блокатора достоверно выше, чем у 100-суточных животных (р<0,05).

7 21 100

О предсердия ■ желудочки возраст, суток

Рис. 7. Влияние реактива голубого-2 на силу сокращения миокарда предсердий и желудочков крыс 7-, 21 - и 100 - суточного возраста

Примечание:* - достоверность по сравнению с исходным значением *р<0,05

Влияние УТФ на фоне реактива голубого-2 на сократимость миокарда крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Для определения подтипа рецепторов, участвующих в ингибирующих эффектах УТФ провели серию экспериментов по изучению влияния УТФ при блокаде Р2У4 подтипа рецепторов реактивом голубым-2.

Для эксперимента выбрали такие концентрации УТФ, которые вызывают достоверно значимые изменения показателей сократимости, и соответствуют содержанию внеклеточной УТФ.

У 7-суточных крысят в контроле УТФ уменьшает силу сокращений предсердий на 4,6±0,8%, а желудочков на 6,4+1,2% (р<0,05). При блокаде Р2У4 подтипа рецепторов отрицательный инотропный эффект УТФ не сохраняется (р<0,05) (рис.8А, 8Б).

У 21-суточных животных УТФ в контроле сила сокращения снижается в предсердиях на 29,1±4,8% (р<0,05), в желудочках на 22,7±2,9% (р<0,05). При блокаде

Р2У4 подтипа рецепторов ингибирующий эффект УТФ также не сохраняется (р<0,05) (рис. 9А, 9Б).

У 100-суточных крыс на полосках миокарда предсердий сила сокращения уменьшилась на 15,9+3,5% (р<0,05), а желудочков на 20,3+3,7% (р<0,05). При блокаде Р2У4 подтипа рецепторов ингибирующий эффект УТФ также не сохрагается (р<0,05). Введение УТФ на фоне предварительного добавления реактива голубого-2 сохраняет положительный инотропный эффект блокатора (р<0,05) (рис. 10).

Таким образом, у 7-, 21- и 100- суточных животных после инкубации миокарда с реактивом голубым-2 отрицательный инотропный эффект УТФ не сохраняется.

У 7- и 21-суточных крысят на фоне блокады реактива голубого-2 введение УТФ приводит к некоторому снижению силы сокращения миокарда предсердий и желудочков, которое однако не достигает контрольных значений УТФ (р<0,05).

Таким образом, реализация ингибирующего эффекта УТФ в сократимости миокарда осуществляется через Р2У4-подтип рецепторов у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста. У 100-суточных животных преобладают влияния УТФ с участием Р2У4 подтипов рецепторов.

Рис.8А. Влияние УТФ на силу сокращения миокарда желудочков 7- суточных животных в контроле и при блокаде реактивом голубым-2.

Рис. 8Б. Реакция силы сокращения миокарда желудочков на действие УТФ в контроле и при блокаде реактивом голубым-2 у 7-суточных животных.

Щ/

Рнс.9А. Влияние УТФ на силу сокращения миокарда желудочков 21- суточных животных в контроле и при блокаде реактивом голубым-2.

Рис. 9Б. Реакция силы сокращения миокарда желудочков на действие УТФ в контроле и при блокаде реактивом голубым-2 у 21-суточных животных.

Примечание:* - достоверность по сравнению с контролем *р<0,05,

130 1Д0

но 100 90 ! 80 70 | 60 50 1

Рис.10. Влияние УТФ на силу сокращения миокарда желудочков в контроле и при блокаде реактивом голубым-2 у 100- суточных животных.

выводы

1. УТФ в концентрации lO^-lO'V оказывает отрицательный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

2. Реакция миокарда предсердий и желудочков на УТФ у 21-суточных крысят более выражена по сравнению с новорожденными.

3. УТФ в концентрации 10'8М у 7- и 100-суточпых и в концентрации 10"7М у 21-суточных уменьшает скорость сокращения и расслабления миокарда предсердий и желудочков.

4. PPADS вызывает разнонаправленное действие на силу сокращения миокарда крыс разного возраста. У 7-суточных крысят блокада Р2У - рецепторов увеличивает, у 100- суточных животных снижает силу сокращения миокарда, у 21-суточных крыс приводит к развитию положительного инотропного и люзитропного эффекта в миокарде желудочков.

5. PPADS не оказывает влияния на отрицательный инотропный эффект УТФ в миокарде предсердий и желудочков всех возрастных групп. У 100-суточных животных PPADS снижает реакцию сократимости миокарда желудочков на УТФ.

6. Реактив голубой-2 оказывает положительный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков 7-, 21- и 100-суточных животных. Реакция сократимости миокарда на антагонист наиболее выражена у 21-суточных крысят.

7. Реактив голубой-2 предотвращает ингибирующий эффект УТФ на сократимость миокарда предсердии и желудочков 100-суточных животных и уменьшает его у 7-и 21-суточных крысят.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ситдиков Ф.Г., Аникина Т.А., Трофимова И.Н. Возрастные особенности влияния УТФ на сократительную активность миокарда крыс в раннем постнатальном онтогенезе. Вестник ТГГПУ, №3 (21), 2010.- С. 111-115.

2- Аннсимова И.И.. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г. Влияние блокады Р2У-пуринорецепторов на инотропную функцию сердца в онтогенезе. Вестник ТГГПУ, 2011, №3 (25).-С. 41-45.

3. Аникина Т.А., Зверев A.A., Ситдиков Ф.Г., Трофимова H.H. АТФ модулирует холинергические влияния на сократимость миокарда в зависимости от возраста крыс. IX Всероссийская конференция «Физиологические механизмы адаптации растущего организма», посвященная юбилею проф. Ф.Г. Ситдикова., 2008, с. 17-18

4. Аникина Т.А., Трофимова И.Н. Влияние УТФ на сократимость миокарда крыс. Вестник ТГТПУ, 2008, № 4 (15), с. 58-60

5. Аникина Т.А., Зверев A.A., Ситдиков Ф.Г., Трофимова И.Н. Пуринорецепторы сердца. Вестник ТППУ, 2008, № 4(15), с. 53-57

6. Ситдиков Ф.Г., Аникина Т.А., Зверев A.A., Трофимова И.П. Участие Р2Х и Р2У-рецепторов в сократимости миокарда крыс. Всероссийская научно-практическая конференция «Инновационные подходы к естественнонаучным исследованиям и образованию», посвященная юбилею ЕГФ, Казань, 2009, с. 21-23

7. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Зверев A.A., Трофимова И.Н. Пуринергическая регуляция сердца в постнатальном онтогенезе. Материалы международной конференции «Физиология развития человека». Москва.- 2009.- С. 8-9.

8. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Зверев A.A., Трофимова И.Н. Пуринорецепторы сердца крыс в онтогенезе. VU Всероссийская конференция с международным участием "Механизмы функционирования висцеральных систем", посвященная 160-летию со дня рождения И.П. Павлова Санкт-Петербург, 2009, с.29-30

9. Ситдиков Ф.Г., Аникина Т.А., Зверев A.A., Трофимова И.П. Влияние УТФ на сократимость миокарда крыс в постнатальном онтогенезе. Тезисы Всероссийской научной конференции с международным участием «Теоретические основы физической культуры». Казань: ТППУ, 2009,- С. 155-157

10. Трофимова И.Н. Влияние УТФ на сократимость миокарда крыс в рашкм постнатальном онтогенезе. Сборник тезисов лучших докладов XXX научной конференции молодых ученых и специалистов, посвященный Году учителя в РФ и РТ «Молодые ученые в научном поиске: выпуск 1. Казань,- ТГТПУ.- С. 79-83.

И. Трофимова H.H.. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Константинова И.В. Участие Р2У- пуринорецепторов в сократимости миокарда. Материалы X юбилейной Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиологические механизмы адаптации растущего организма»,- Казань: ТППУ, 2010.- С. 183-185.

12. Трофимова И.Н.. Аникина Т.А. Влияние АТФ и УТФ на сократимость миокарда крыс в постнатальном онтогенезе. Тезисы докладов XXI съезда физиологического общества им. И.П.Павлова- М.-Калуга, 2010.- С. 619.

13. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Билалова Г.А., Трофимова И.П. АТФ как модулятор эффектов классических медиаторов в постнатальном онтогенезе. Тезисы докладов XXI съезда физиологического общества им. И.П.Павлова.- М.-Калуга, 2010.- С. 759-760.

14. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Трофимова И.П. Участие Р2У- пуринорецепторов в сократимости миокарда крыс в раннем постнатальном онтогенезе. Тезисы докладов Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы регуляции физиологических систем организма в процессе адаптации к условиям среды», посвященной 85-летию со дня основания Института физиологии им. И.П. Павлова РАН. -Санкт-Петербург, 7-9 декабря 2010.- С. 16.

15. Анисимова И.П. Влияние уридш-5'-трифосфата па сократимость миокарда крыс в постнатальном онтогенезе. Тезисы докладов Конференции молодых ученых, посвященной 85-летию со дня основания Института физиологии им. И. П. Павлова РАН «Механизмы адаптации физиологических систем организма к факторам среды».- СПб.: Институт физиологии им. И. П. Павлова РАН, 2010. - С. 7-8.

16. Анисимова И.Н. Участие разных подтипов Р2У-рецспторов в сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе. Тезисы докладов XVIII международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2011»,-Москва, МГУ.-2011,- с. 237-238.

17. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Анисимова И.П.. Лохотская Л.А. Роль пуринорецепторов в регуляции деятельности сердца крыс. Тезисы докладов III Съезда физиологов СНГ, Ялта, 2011,- С.

18. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г., Зверев A.A., Аппсимова H.H. Пуринергическая регуляция сердца в онтогенезе. Учебное пособие "Избранные главы фундаментальной и восстановительной медицины",- Казань,- 2011,- С.95-114.

Подписано в печать 13.10.11 г. Форм. бум. 60x80 1/16. Печ. л. 1,5. Тираж 100. Заказ № 1310/1 Отпечатано с готового оригинал - макета в типографии «Вестфалика» (ИП Колссов В.Н.) г. Казань, ул. Московская, 22. Тел. 292-98-92

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Анисимова, Ирина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Литературный обзор.

1.1. Общие сведения о УТФ.

1.2. Метаболизм пиримидиновых нуклеотидов.

1.3. Классификация пуринорецепторов.

1.4. Общая характеристика Р2-пуринорецепторов.

1.5. Классификация Р2У -пуринорецепторов.

1.6. Молекулярная структура Р2У - рецепторов.

1.7. Внутриклеточные пути передачи сигнала.

1.8. УТФ в сердечно-сосудистой системе.

1.9. Р2У — пуринорецепторы сердца крыс в онтогенезе.

1.10. Характеристика основных агонистов и антагонистов P2Y-пуринорецепторов.

1.10.1 Агонисты Р2У - пуринорецепторов.

1.10.2. Антагонисты Р2У - пуринорецепторов.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследований.

2.2. Организация и методы экспериментов в условиях in vitro.

2.2.1. Методика регистрации сократимости полосок миокарда.

2.3. Методика фармакологических воздействий.

2.4. Схемы экспериментов.

2.5. Обработка и статистический анализ данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Влияние УТФ на сократимость миокарда крыс в постнатальном онтогенезе.

3.1.1. Определение дозозависимого эффекта УТФ на сократимость полосок миокарда крыс 7-100-суточного возраста.

3.1.2. Влияние УТФ на временные характеристики сокращения миокарда крыс 7-100-суточного возраста.

3.2. Влияние РРАОБ на амплитудно-временные характеристики сокращения миокарда крыс 7-100 суточного возраста.

3.3. Влияние УТФ на фоне РРАОЭ на сократимость миокарда крыс 7-, 21-и 100-суточного возраста.

3.4. Влияние реактива голубого-2 на амплитудно-временные характеристики сокращения миокарда крыс в онтогенезе.

3.5. Влияние УТФ на фоне реактива голубого-2 на сократимость миокарда крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе"

Актуальность темы

Внутриклеточные пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды (АТФ и УТФ) выполняют роль источника энергии, участвуют в биосинтезе рибонуклеиновых кислот, обеспечивая жизнедеятельность клетки. Установлено, что АТФ и УТФ находятся в везикулах вместе с основным медиатором и участвуют в передаче нервных импульсов, выполняя функции котрансмиттера (Burnstock and Kennedy, 1986; Burnstock, 1989, 1990, 2006, 2008, 2009; Kugelgen, 1991).

Свое влияние АТФ и УТФ реализуют через Р2Х и Р2У-рецепторы, разнообразие которых превышает все известные подтипы рецепторов для «классических» нейромедиаторов и гормонов (Зиганшин и др., 1999, 2007; Гиниатуллин, 1998; Гиниатуллин и др., 2005; Аникина, Ситдиков., 2011. Yang et al., 1994; Ralevic and Burnstock, 1998; Ralevic, 2008; Domingo et al., 2010). Пуриновые и пиридиновые нуклеотиды как сигнальные молекулы при взаимодействии с рецепторами осуществляют пролиферацию, дифференциацию, развитие, регенерацию и апоптоз клеток (Burnstock, 2009).

Присутствие внеклеточной УТФ в сердце считается доказанным, и несколько подтипов Р2У- рецепторов активируются пуриновыми и пиримидиновыми нуклеотидами (Vassort, 2001). Метаболизм пиримидиновых нуклеотидов в сердце, к которым относится УТФ, изучен мало. Известно, что содержание пиримидиновых нуклеотидов в сердце ниже по сравнению с пуриновыми нуклеотидами и соотношение соответствует 1:10 (Vassort, 2001) или 1:16 (Lazarowski, 2003). Показано, что уровень АТФ и УТФ в плазме значительно коррелируют между собой, что указывает на совместное освобождение этих нуклеотидов (Wihlborg et al., 2006).

В литературе показано разнонаправленное влияние УТФ на деятельность сердца. Отмечено снижение и увеличение силы сокращения, появление двойного эффекта сократимости миокарда при добавлении УТФ (Рынков., 2007; Froldi et al., 1995; Vassort., 2001; Kugelgen., 2006; Talasila., 2009).

Онтогенетический аспект пуринергической регуляции сердца рассматривался только на взрослых организмах и в период их неонатального развития (Webb et al., 1996; Bogdanov et al., 1998; Hansen et al., 1999; Cheung et al., 2003). Экспрессия Р2У-рецепторов определяется на 11-й день эмбрионального развития крыс в сердце, скелетной мускулатуре, периферической и центральной нервной системе, легких, печени, когда большинство органов еще не сформировано и функционально не активно (Cheung and Burnstock, 2003). Показано, что у крыс УТФ вызывает рост неонатальных кардиомиоцитов (Pham et al., 2003).

Многие аспекты функционирования Р2У-рецепторов на важнейших этапах раннего постнатального онтогенеза остаются малоизученными, а эффекты УТФ отличаются в различных тканях и на разных этапах онтогенеза (Vassort, 2001). Методами иммуногистохимии и ПЦР показано присутствие Р2У 1,2,4,6,11,13,14 - подтипов рецепторов в целом сердце, на отдельных кардиомиоцитах (Webb et al., 1996; Vassort, 2001; Burnstock, 2009), сердечных миофибробластах (Zheng et al., 1998; Talasila et al., 2009), эндотелии и гладкомышечных стенках сосудов (Wang et al., 2002). Экспрессия Р2У-рецепторов в миокарде меняется в онтогенезе и усиливается для Р2У 1,2,6-подтипа рецепторов (Webb et al., 1996).

Однако, нет данных, подтверждающих участие Р2У — рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс на ранних этапах постнатального онтогенеза в условиях незрелости регуляторных влияний на сердце и разных этапов биологического созревания организма.

Актуальность проблемы возрастает и в связи с установленным кардиопротектерным влиянием АТФ и УТФ при гипоксии, инфаркте миокарда, аритмии, ишемии сердца, сопровождающихся гибелью клеток и выходом АТФ и УТФ во внеклеточную среду с последующей активацией Р2-пуринорецепторов (Ninomiya et al., 2002b; Wee et al., 2007). АТФ и УТФ оказывают влияние на миофибробласты, которые играют важную роль в процессах восстановления миокарда при сердечно-сосудистых заболеваниях* (УкгЬак! et а1., 2005,2006; Та^к & а1., 2009).

Цель и задачи исследования

Цель: исследовать роль УТФ и разных подтипов Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе.

В соответствии с этой целью были сформулированы следующие задачи:

2. Определить влияние неселективного блокатора Р2У-рецепторов РРАББ на сократимость миокарда предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста;

3. Изучить влияние неселективной блокады Р2У-рецепторов РРАОБ на эффект действия УТФ у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста

4. Определить влияние селективного блокатора-реактива голубого-2 на? сократимость миокарда у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

5. Изучить влияние селективной блокады Р2У4 подтипа рецепторов реактивом голубым-2 на эффект действия УТФ у крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

Основные положения диссертации^ выносимые на защиту:

1. УТФ оказывает отрицательный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста в наибольшей степени ингибирующий эффект УТФ на сократимость миокарда наблюдается у 21-суточных крысят.

2. Ингибирующий инотропный эффект УТФ у 7- и 21- суточных реализуется через Р2У4 рецепторы, а у 100-суточных животных через Р2У4 и Р2У2 рецепторы.

Научная новизна

В диссертационной работе впервые проведено изучение влияния УТФ на сократимость миокарда крыс в раннем постнатальном онтогенезе. В работе впервые было установлено, что агонист Р2У2дб подтипов рецепторов УТФ вызывает уменьшение силы, скорости сокращения и расслабления миокарда предсердий и желудочков крыс 7-100-суточного возраста. Внеклеточная УТФ оказывает модулирующее влияние на сократимость миокарда в микро- и наномолярных концентрациях.

Получены новые данные о возрастных особенностях инотропии миокарда на действие УТФ. У 21-суточных крысят реакция силы, скорости сокращения и расслабления' на влияние агониста больше по сравнению с новорожденными животными.

Впервые выявлено наличие собственного действия, блокаторов Р2У-рецепторов РРАТЖ и реактива голубого-2 на амплитудно-временные1 характеристики! сократимости миокарда, крыс разного возраста. РРАБ8 оказывает разнонаправленное действие на исследуемые параметры, сократимости миокарда крыс 7-, 21 и. 100-суточного возраста. У 21-суточных1 крысят В' миокарде,желудочков,РРАОБ* вызывает положительный- инотропный-. и люзитропный,эффекты в сократимости миокарда.

Проведенные исследования с использованием разнообразных блокаторов Р2У-рецепторов позволили установить подтипы рецепторов, участвующих в ингибирующем действии УТФ. У 100- суточных животных инотропная реакция миокарда на добавление УТФ реализуется при участии Р2У2 подтипа рецепторов.

Научно - практическая ценность

Полученные экспериментальные данные значительно расширяют и дополняют наши представления о пуринергической регуляции инотропной функции сердца, возрастных особенностях функциональной активности разных подтипов Р2У~рецепторов в различные периоды постнатального онтогенеза.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы доложены на следующих конференциях и-форумах: VII Всероссийской конференции-с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем». (Санкт-Петербург, 2009); Международной конференции «Физиология развития человека» Института возрастной физиологии РАО (Москва, 2009); научных конференциях молодых ученых и специалистов ТГГПУ (Казань, 2009-2011); XXI Съезде Физиологического Общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010); X Всероссийской научно-теоретической конференции «Физиологические механизмы адаптации растущего организма» (Казань, 2008, 2010); Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы регуляции физиологических систем организма в процессе адаптации к условиям среды» (Санкт-Петербург, 2010); конференции молодых ученых «Механизмы адаптации физиологических систем организма к факторам среды» (Санкт-Петербург, 2010); XVIII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов 2011» (Москва, 2011), на заседаниях кафедры анатомии, физиологии и охраны здоровья человека ТГТПУ (Казань, 2008-2011).

Реализация результатов исследования

По материалам диссертации опубликовано 18 научных работ, в том числе 2 статьи в научных рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация объемом 114 страниц состоит из введения, обзора литературы, описания организации и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Диссертация содержит 16 таблиц и 27 рисунков. Список цитируемой литературы включает 231 источник, из них 42 отечественных и 189 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Анисимова, Ирина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. УТФ в концентрации 10"6-10"10М оказывает отрицательный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков крыс 7-, 21- и 100-суточного возраста.

2. Реакция миокарда предсердий и желудочков на УТФ больше у 21-суточных крысят более выражена по сравнению с новорожденными.

3. УТФ в концентрации 10"8М у 7- и 100-суточных и в концентрации 10"М у 21

-суточных уменьшает скорость сокращения и расслабления миокарда предсердий и желудочков.

4. РРАББ оказывает разнонаправленное действие на силу сокращения миокарда крыс разного возраста. У 7-суточных крысят блокатор увеличивает, у 100- суточных животных снижает силу сокращения миокарда, у 21-суточных крыс приводит к развитию положительного инотропного и люзитропного эффекта в миокарде желудочков.

5. РРАОЭ не оказывает влияния на отрицательный инотропный эффект УТФ в миокарде предсердий и желудочков всех возрастных групп. У 100-суточных животных РРАЕ)8 снижает реакцию сократимости миокарда желудочков на УТФ.

7. Реактив голубой-2 предотвращает ингибирующий эффект УТФ в предсердиях и желудочках у 100-суточных животных и уменьшает его у 7-и 21-суточных крысят.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Недавно установленные функции внеклеточной УТФ, регулирующие разнообразные функции организма, в настоящее время находят все новые подтверждения и общее признание. Одним из объектов, в которых пиримидиновые соединения могут играть важную роль, является сердце. Неослабевающий интерес к изучению влияния УТФ на деятельность сердечно - сосудистой системы и сердца в частности основывается на различных, нередко противоположных результатах, полученных разными исследователями в экспериментах как in vivo, так и in vitro.

УТФ является нестойким веществом, гидролизуется до уридина, который не является активным в отличие от аденозина, следовательно, можно говорить о прямом влиянии УТФ на Р2У2, Р2У4 и Р2У6 подтипы рецепторов, для которых он является агонистом (Wihlborg et al., 2006). УДФ как продукт гидролиза УТФ является агонистом Р2У6 подтипа рецепторов (Abbracchio, 2006).

Пиримидиновые нуклеотиды проявляют множество эффектов в сердечно-сосудистой системе. УТФ снижает силу сокращения миокарда ушка правого предсердия (Рычков, 2007), увеличивает сократимость миокарда крыс (Vassort, 2001; Froldi et al., 2001; Kugelgen, 2006; Talasila et al., 2009), оказывает двойной эффект на сократимость миокарда предсердий и желудочков крыс сначала снижая, а затем увеличивая инотропию сердца (Froldi et al., 1995).

В последние годы появились исследования, посвященные изучению защитного или кардиопротекторного влияния УТФ. В экспериментах на изолированном сердце по Лангендорфу при добавлении УТФ на фоне развития ишемии увеличивалось диастолическое давление, скорость кровотока (Ninomiya et al., 2002b; Yitzhaki et al ., 2005; Wee et al., 2007; Kugelgen, 2008).

Следует отметить, что эти результаты получены при использовании агониста в концентрации на 2 порядка больше, чем необходимо для активации Р2У-рецепторов. Используемая концентрация УТФ больше соответствует патофизиологической, чем физиологической (Yitzhaki et al.,

2006). Увеличение внеклеточной УТФ наблюдается при ишемии, коронарной окклюзии, гипоксии, то есть состояниях, сопровождающихся гибелью клеток и выходом внеклеточных АТФ и УТФ и последующей активацией Р2 - пуринорецепторов. Положительный инотропный эффект при использовании высоких концентраций, УТФ (100 jim), возможно, активирует не только Р2У2дб- рецепторы, но и Р2У1 и Р2УИ рецепторы, сопряженные с Gq/ц белком, для которых УТФ является слабым, но агонистом (Jacobson et al., 2002; Kugelgen, 2008).

Некоторые исследователи (Jacobson et al., 2002) для активации Р2У2 и Р2У4 подтипов рецепторов использовали небольшие концентрации УТФ (250нМ). УТФ в концентрации на 3 порядка выше активирует одновременно и другие подтипы рецепторов, в частности Р2У1дП рецепторы (Wee et al.,

2007), участвующие в регуляции положительной инотропии.

В сердце уменьшение сократимости миокарда реализуется при участии ацетилхолина и холинорецепторов. М2 и М4 холинорецепторы соединяются через. Gi/o белки (Felder, 1995; Wess, 1996), подавляют активность аденилатциклазы, понижают уровень цАМФ внутри клетки; что в свою очередь приводит к снижению активности Са2+"тока L-типа и является основным механизмом уменьшения силы сокращений, усиленных действием цАМФ агентов (Hove-Madsen et al., 1996; Mery et al., 1997). Дополнительная сигнальная система, через бета-гамма-субъединицу G белка, включает в себя | | возможность влияния на К - и Ca - каналы и активацию фосфолипазы А2, фосфолипазы D и тирозинкиназы (Caulfiel, 1993, Felder, 1995).

По нашим данным отрицательный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков может оказывать и внеклеточная УТФ.

УТФ в нано - и микромолярных концентрациях снижает силу, скорость сокращения и расслабления миокарда предсердий и желудочков крыс. Реакция сократимости миокарда на УТФ имеет выраженные возрастные особенности. У 7-суточных она составляет 5-7%, у 21-суточных -21-23%, а у 100-суточных животных — 18-20%, т.е. у 21-суточных крысят реакция сократимости больше по сравнению с новорожденными животными.

Общепризнано, что сокращение и расслабление миокарда обеспечивается координированной деятельностью основных функциональных систем клетки: сократительного аппарата, системы ионного транспорта, системы энергообеспечения и ядра клетки. Первые три системы обеспечивают быстрые изменения сократимости миокарда. Ядро с помощью генетического аппарата регулирует синтез белков и поддерживает структурное обеспечение функций кардиомиоцитов-(Чазов, 1992).

Функционирование всех систем, участвующих в регуляции сократимости миокарда имеет возрастные особенности. Сократительный аппарат кардиомиоцитов представлен миофибриллами. У новорожденных крысят в сердце содержится меньше миофиламентов (Solaro, 1986).

Увеличение массы миокарда крыс происходит за счет сменяющихся процессов: пролиферации, происходящей в раннем эмбриогенезе, гиперплазии, т.е. увеличения цитоплазматических ультраструктур (митохондрий, миофиламентов, эндоплазматического ретикулума, рибосом) и гипертрофии, которая развивается вследствие увеличения функциональной нагрузки. Диаметр кардиомиоцитов увеличивается с 5,5 jim до 15 цм с 5-14 дней постнатального развития до молодых-взрослых крыс (Hew et al., 2003).

У крыс развитие миокарда происходит в ранние сроки постнатального онтогенеза (Швалев и др., 2001). С 21 по 30 день постнатального развития крыс установлены максимальные среднесуточные приросты массы сердца (Нигматуллина, 1991). Деление кардиомиоцитов у крыс полностью прекращается к 21- суткам жизни, и в период с 21 по 30 день идет • 82 усиленный рост образовавшихся кардиомиоцитов. Таким образом, начиная с 3-х недельного возраста, совершенствуется сократительный аппарат миокарда крыс.

Система ионного транспорта кардиомиоцитов также имеет ряд возрастных особенностей. Показано, что в сердце взрослых млекопитающих Са -зависимое освобождение Са является преобладающим механизмом в реализации процессов возбуждения-сокращения (Escobar et al., 2004). У новорожденных крыс Са2+-зависимое освобождение Са2+ менее выражено, чем у взрослых (Cohen., 1988). Это обусловлено незрелостью саркоплазматического ретикулума (СПР) и недостатком Т-трубочек в кардиомиоцитах (Nakanishi et al., 1987; Klitzner, 1991). Считается, что активация сокращения в раннем постнатальном периоде зависит от поступления кальция через сарколемму (Escobar et al., 2004). Процесс входа

0-f- ' O-f"

Са осуществляется через Са" каналы L-типа и Т-типа (Vornanen, 1996; Skomedal et al., 1997; Leuranguer et al., 2000; Xiang et al., 2003) и с помощью^ Na /Са - обменника сарколеммы работающего в обратном направлении (Ostadalova et al., 1995; Studer et al., 1997). Плотность Са2+каналов Т-типа преобладает в эмбриональный- период развития;, а затем- с 1 по 5 день постнатального развития быстро снижается. С 21 дня жизни у крысят экспрессия Са каналов Т-типа в миокарде желудочков не обнаружена (Ferron et al., 2002). У крыс этого возраста преобладает Са -зависимое

Л I освобождение Са из СПР (Bootman et al., 2006).

К 21 дню жизни практически все системы, участвующие в регуляции сократимости миокарда уже достигают зрелого уровня. В кардиомиоцитах преобладает Са "индуцированное освобождение Са из СПР для активации сокращения (Escobar et al., 2004). С 21 дня жизни в желудочках крыс нет Са" -каналов Т-типа (Ferron et al., 2002). Таким образом, функциональные системы кардиомиоцитов начинают выходить на определенный стабильный уровень, характерный для взрослого организма. Возможно, поэтому положительный кардиотропный и люзитропный эффекты на действие блокаторов также максимально проявляется у 21-суточных крысят.

Для активации сокращения в кардиомиоцитах преобладает Ca** -индуцированное освобождения Ca из СПР (Escabar et al., 2004). Доказательством того, что в основе снижения сократимости миокарда на действие УТФ лежит Са2+- зависимый механизм, являются результаты одновременного снижения силы, скорости сокращения и расслабления миокарда.

Задача разделения подтипов- Р2У рецепторов является сложной, поскольку пока не существует селективных антагонистов для выделения разных подтипов рецепторов: К сожалению; для < определения* участия* Р2 подтипов рецепторов к функциональным, ответам препятствует смешанная селективность агонистов и особенно антагонистов (Kugelgen et al., 2000; Jacobson et al., 2002). Классическими, блокаторами для P2Y-пуринорецепторов являются PPADS, сурамин и реактив голубой-2 (Yitzhaki et al., 2005).

В сердце на кардиомиоцитах обнаружены метаботропные Р2У 1,2,4,6,11,13 рецепторы (Burnstock, 1999; Vassort; 2001; Talasila et al., 2009). Такое разнообразие пуринорецепторов предполагает, что одно и то же вещество может вызывать самые разные- специфические сигналы в зависимости от того, с каким рецептором оно будет связываться. Иммуногистохимический анализ показал наличие возрастных особенностей локализации Р2У-рецепторов в сердце крыс. Выраженность этих рецепторов у взрослых животных имеет следующий порядок: Р2Уб>Р2У1>Р2У2=Р2У4 (Hou et al., 1999). Также известно, что экспрессия Р2У-рецепторов в миокарде меняется в онтогенезе и усиливается для Р2У1;2,6- подтипа рецепторов (Webb et al., 1996).

Большая часть Р2У-рецепторов (Р2У 1,2,4,6,11) связаны с Gq/ц-белком, который активирует фосфолипазу С образованием инозитолфосфата и увеличением Са2+ в клетке и последующим увеличением силы сокращения миокарда (Abbracchio et al., 2006; Talasila et al., 2009). Однако в сердце отрицательный инотропный эффект может наблюдаться в ряде случаев при возбуждении Р2У2, Р2У4, Р2Уб подтипов рецепторов, которые активируются УТФ. В сердечных неонатальных миофибробластах крыс показано, что УТФ через активацию Gi/o белка ингибирует активность аденилатциклазы, и, следовательно, ингибирует уровень, внутриклеточного цАМФ, что приводит к уменьшению кальциевых токов L-типа, снижает образование цАМФ, уменьшая поступление Са2+ в клетку и уменьшая силу сокращения миокарда (рис. 27) (Abbracchio et al., 2006; Talasila et al., 2009).

Двойное связывание рецептора с Gs и ингибирующим Gi-белками или «переключение» рецептора с Gs на Gi - белки детально не изучено. На адренорецепторах кардиомиоцитов было показано присутствие этих явлений. Известно, что положительное инотропное действие (31-АР в миокарде реализуется путем стимуляции Gs-белков. Также было показано, что эти рецепторы могут переключаться* с Gs на Gi — белки при фосфорилировании pi-АР протеинкиназой A (Martin, 2004). Внутриклеточные пути этого переключения не изучены. Двойное связывание с Gs - и ингибирующим Gi — белками показано и для 02-АР, расположенных на кардиомиоцитах новорожденных мышей. В миокарде новорожденных мышей, нокаутных по pi и Р2 - рецепторам, показано двойное связывание РЗ -АР с обоими Gs и Gi- белками, с преобладанием связывания с Gi - белком (Brum, 2006).

Внеклеточная жидкость

Р2У11

Р2У1.2.4,6.11

Р2У2,4

Внутриклеточная

Аденилатциклаза АТФ'

Оч/11 и/или в; а й

О I©

Фосфолипаза

Цд

Протеинкиназа А

Рецепторы

Регуляторные белки г Врившш I шрные

Са" — Са-Кшюр 0 лротеиншазы

Рис. 27. Возможные пути реализации эффекта УТФ

В доступной нам литературе отсутствуют данные о влиянии антагонистов Р2У-рецепторов на сократительную активность миокарда в онтогенезе. По нашим данным РРА08, блокатор Р2У2 подтипа рецепторов оказывает разнонаправленное действие на силу и длительность сокращения миокарда крыс разного возраста. У 7-суточных крысят блокатор увеличивает, а у 100- суточных животных снижает силу сокращения миокарда. У 21-суточных крыс приводит к развитию положительного инотропного и люзитропного эффекта в миокарде желудочков.

Реактив голубой является селективным блокатором для Р2У4 подтипа рецепторов в сочетании с УТФ как агониста этих рецепторов.

Реактив голубой-2 оказывает положительный инотропный эффект на миокард предсердий и желудочков 7-, 21- и 100-суточных животных. Реакция миокарда на антагонист больше у 21-суточных крысят по сравнению со 100-суточными животными.

Учитывая, что УТФ является агонистом для Р2У2,4,6 подтипов рецепторов, использование антагониста PPADS позволит определить функциональную активность Р2У2 рецепторов. Потому, что PPADS не оказывает блокирующего эффекта на Р2У4 подтип рецепторов крыс, а Р2У6 подтип сопряжен с Gq/ц и не участвует в уменьшении сократимости миокарда при добавлении УТФ. Относительно недавно показано, что Р2Уб подтип сопряжен с Gi ингибирующим белком.

При блокаде Р2У2,6 подтипов рецепторов PPADS отрицательный эффект УТФ сохранялся в предсердиях и желудочках всех возрастных групп. Следовательно, эти подтипы рецепторов не вовлечены, в снижение сократимости миокарда и в реализации ингибирующего эффекта УТФ принимают участие другие подтипы Р2У - рецепторов. Однако, следует отметить, что в миокарде желудочков 100 суточных крыс эффект УТФ на фоне блокады не достигает контрольных значений. Следовательно, у взрослых животных инотропная реакция миокарда на добавление УТФ реализуется при участии Р2У2 подтипа рецепторов.

В последние годы появились, исследования посвященные изучению роли Р2У-рецепторов: показано, что активация Р2У2 подтипа рецепторов стимулирует синтез и освобождение арахидоновой кислоты,,простландидов, NO (Lustig et al., 1992; Pearson et al., 1992; Xing et al., 1999; Xu et al., 2002, 2003; Welch et al., 2003). Также показано, что УТФ снижает гибель кардиомиоцитов, индуцированных гипоксией через активацию Р2У2 подтипа рецепторов (Yitzhaki et al., 2006).

По нашим данным после инкубации миокарда с реактивом голубым-2, блокатором Р2У4 подтипа рецепторов» у крыс всех возрастных групп отрицательный инотропный эффект УТФ не сохраняется. Следовательно, реализация ингибирующего эффекта УТФ осуществляется через Р2У4-подтип рецепторов. Выявлены возрастные особенности сократимости миокарда на стимуляцию Р2У4 подтипа рецепторов. У 100-суточных животных функциональную активность Р2У4-подтипа рецепторов имеет более выраженную реакцию. У животных 7- и 21-суточного возраста на фоне блокатора Р2У4 подтипа рецепторов реактива голубого-2 добавление УТФ приводит к снижению силы сокращения миокарда предсердий и желудочков, которое не достигает контрольных значений УТФ, и реализация ингибирующего эффекта УТФ осуществляется при участии других подтипов пуринорецепторов.

Серотонин у 21 дневных крысят оказывает положительное инотропное действие на миокард правого предсердия и желудочка в большей степени по сравнению с 3-, 7-, 14-, 49- и 100- дневными животными, что, вероятно, связано с тем, что к 21-дню жизни практически все системы, .участвующие в регуляции сократимости миокарда уже достигают зрелого уровня (Якупова А.Ф.,2011).

Таким образом, эффекты УТФ на миокард 100-суточных крыс реализуются через Р2У2 и Р2У4 подтипы рецепторов. Р2У4 подтипы рецепторов функционирует в миокарде крыс с периода новорожденности до взрослого половозрелого периода. Полученные данные позволяют судить о преобладающей роли Р2У4 подтипа рецепторов в регуляции сократимости миокарда в ранний постнатальный период.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Анисимова, Ирина Николаевна, Казань

1. Аникина Т.А., Ситдиков Ф.Г. Пуринорецепторы сердца в онтогенезе. Казань: ТГТПУ, 2011.- 166 с.

2. Аршавский И.А. Физиологические механизмы и закономерности индивидуального развития / Аршавский И.А. // М.: Наука, 1982.- 270с.

3. Бернсток Дж. Пуринергические синапсы и эволюция /Бернсток Дж // Сравнительная фармакология синаптических рецепторов. Л.: Наука, 1977. С.26 - 33.

4. Болезни сердца и сосудов: руководство для врачей: в 4-х т./под ред Е.И. Чазова. М.: Медицина, 1992.-Т.1.- 496 с.

5. Гиниатуллин P.A. Модулирующая роль АТФ в нервно — мышечном синапсе / Гиниатуллин Р.А, Соколова Е. М. // Рос. Физиол. Журн. им. И.М. Сеченова. -1998. Т.84.- №10. - С.1132 - 1139.

6. Гиниатуллин P.A. Вторая «профессия» АТФ. Природа.-2000.-№11.- С.1'2 — С.17.i

7. Гришин С.Н. Механизмы действия АТФ на секрецию медиатора из двигательных нервных'окончаний. Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Гришин С.Н. Казань, 2001.

8. Западнюк И.П. Лабораторные животные. Развитие содержание, использование в эксперименте. Учебное пособие для студентов биол. вузов/ Западнюк И.П., Западнюк И.В., Западнюк Б.В. -Киев, 1983. -383с.

9. Зефиров А.Л. Медиаторы, эволюция представлений. Вестник Российской AM — 2005. Т.1. - С.49-52.

10. Зиганшин А.У. Перспективы клинического применения средств, воздействующих на рецепторы АТФ — Р2-пуринорецепторы /

11. Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е. // Каз. Мед. Журнал. 1996. - №2. — С.134 - 136.

12. Зиганшин А.У. Фармакология рецепторов АТФ / Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е. Гэотар медицина, Москва, 1999. — 209с.

13. Зиганшин А.У. Фармакологическая характеристика рецепторов АТФ / Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., Бернсток Дж. // Хим. -Фарм. Журнал. 1997а. - №1. - С.3-8.

14. Зиганшин А.У. Экто-АТФазы и рецепторы АТФ / Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., Бернсток Дж. // Эксп. Клинич. Фармакол. 19976. - №3. - С.78-82.

15. Зиганшин А.У. Р2-рецепторы: теоретические предпосылки клинического воздействия / Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., Бернсток Дж. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2002. — Т. 134.- №10. - С.365 — 369.

16. Зиганшин А.У. АТФ: новая роль для старого знакомого / Зиганшин А.У. // Химия и жизнь. 2003. - № 12. - С.18-21.

17. Зиганшин А.У. Роль рецепторов АТФ (Р2-рецепторов) в нервной системе // Неврологический вестник.-2005.-т XXXVII, вып. 1-2.-С.45-53.

18. Зиганшин А.У. Р2-рецепторы: перспективная мишень для будущих лекарств / А.У Зиганшин, Л.Е. Зиганшина. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.-136 с.

19. Ионные каналы возбудимой клетки (структура, функции, патология) / Зефиров А.Л., Ситдикова Г.Ф. Казань: Арт-кафе, 2010.-271с.

20. Махинько В.И. Константы роста и функциональные периоды развития в постнатальной жизни белых крыс / Махинько В.И., Никитин В.Н. // Молекулярные и физиологические механизмы возрастного развития. — Киев: Наукова думка, 1975. — С.308 -325.

21. Нигматуллина P.P. Клеточно моле1сулярные механизмы функционирования и регуляции сердца / P.P. Нигматуллина - Казань: КГМУ, 2004.-100 с.

22. Раевский; В.В. Онтогенез функциональных систем / Раевский В.В. // Науч. труды I съезда физиол. СНГ. 2005.- т.1. - С. 165166;

23. Раевский; В.В. Развитие теории системогенеза П.К. Анохина. / Раевский В:В.// Седьмые Анохинские чтения. М:: изд-во «Грааль», 2002.- С. 15-22.

24. Розанова В.Д. Очерки по экспериментальной и возрастной фармакологии / В.Д.Розанова JL: Медицина, 1968,- 223 с.

25. Рычков A.B. Влияние температуры на пуринорецептор-опосредуемые сократительные ответы i гладкой и сердечной; мышц. Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Рычков A.B. Казань, 2007. — 20с.

26. Ситдиков Ф.Г. Взаимоотношение адренергических и холинергических механизмов регуляции сердца при адаптации / Ситдиков Ф.Г. // Двигательная активность и симпато-адреналовая система в онтогенезе.— Казань, 1987. — С. 137 — 140.

27. Ситдиков Ф.Г. Механизмы и возрастные особенности адаптации сердца к длительному симпатическому воздействию: Дисс. . докт. биол: наук / Ситдиков Ф.Г. Казань, 1974. - 312с.

28. Ситдиков Ф.Г. Адренергические и холинергические факторы регуляции сердца в онтогенезе у крыс /Ситдиков Ф.Г., Аникина Т.А., Гильмутдинова Р.И. // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1998. №9. С.318 -320.

29. Ситдиков Ф.Г. Динамика статистических показателей сердечного ритма белых крыс в онтогенезе / Ситдиков Ф.Г., Савин В.Ф. // Вегетативные показатели адаптации организма к физическим нагрузкам. -Казань, 1984. С.100 - 109.

30. Ситдиков Ф.Г., Зефиров T.JI. Лекции по возрастной физиологии сердца. // Ситдиков Ф.Г., Зефиров Т.Л. // учебное пособие, Казань изд-во ТГГПУ 2006 102 с.

31. Ситдиков Ф.Г. Особенности адрен- и холинергической регуляции сердца крысят // Ситдиков Ф.Г., Гильмутдинова Р.И., Аникина Т.А.-Материалы XVII съезда физиологов России,- Ростов н/Дону, 1998.-С. 318.

32. Смирнов В.М. Симпатическая нервная система не участвует в развитии ваготомической тахикардии / Смирнов В.М. // Бюл. экспер. биол. и мед. 1995. - №8. - С. 125-128.

33. Современный курс классической физиологии (избранные лекции) с приложением на компакт-диске. Под ред.Ю.В. Наточина, В.А. Ткачука.-М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.-384с.

34. Соколова Е.М. Пуринергическая регуляция нервно-мышечной передачи. Дисс. канд. биол. наук / Соколова Е.М. — Казань, 1999.-140с.

35. Тарасова О.С. Влияние дезипрамина на нейрогенные ответы изолированной хвостовой артерии крысы / Тарасова О.С., Зотов A.B., Родионов И.М., Голубинская В.О., Боровик A.C. // Методология флоуметрии. -2000. -№ 4. с.121-138. .

36. Тарасова О.С. Пуринергический компонент симпатической регуляции системного артериального давления: Автореф. дис. . док. биол. наук / Тарасова О.С.- Москва, 2005 39с.

37. Фундаментальная и клиническая физиология: Учебник для студ. высш. учеб. Заведений / Под ред.А.Г. КамкинаА.А. Каменского.-М.: Издательский центр «Академия», 2004.-1072с.

38. Шакирзянова А.В. Взаимодействие холинергических и пуринергических механизмов регуляции спонтанной квантовой секреции медиатора в нервно-мышечном соединении лягушки: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Шакирзянова А.В.- Казань, 2005. 20с.

39. Якупова А. Влияние агонистов серотониновых рецепторов на сократимость миокарда в постнатальном онтогенезе крыс. Автореф. дис. . канд. биол. наук / Якупова А.- Казань, 2011. 20с.

40. Abbracchio М.Р. Purinoceptors: Are there families of P2X b P2Y purinoceptor / Abbracchio M.P., Burnstock G. // Pharmacol. Ther. 1994.-Vol. 64.- P.445-475.

41. Alexander SPH, Mathie A, Peters JA. Guide to Receptors and Channels (GRAG), 3rd edn. Br J Pharmacol.-2008.-V.153.-P 1-209.

42. Alvarez JL, Mongo K, Scamps F, and Vassort G. Effects of purinergic stimulation on the Ca current in single frog cardiac cells. Pflbgers Arch.- 1990:-V. 416.- P.189-195.

43. Babenko A. and Vassort G. Enhancement of the ATP-sensitive K+ current by extracellular ATP in rat ventricular myocytes. Involvement of adenylyl cyclase-induced subsarcolemmal ATP depletion. Circ Res.-1997.-V.80.-P.589-600.

44. Babenko A. and Vassort G. Purinergic facilitation of ATP-sensitive potassium current in rat ventricular myocytes. Br J Pharmacol.-1997.V. 120 (4). P. 631-8.

45. Benham C.D. and Tsien RW. A novel receptor-operated Ca2+-permeable channel activated by ATP in smooth muscle. / Benham CD, and Tsien RW // Nature: 1987.- P. 275-278.1. O I

46. Bidet M. Extracellular ATP increases Ca . in, distal tubule cells. I. Evidence for a P2Y2 purinoceptor / Bidet M., Renzis G., Martial S., Rubera I., Tauc T., PoujeolP. // Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2000. - V. 279. - P.92-101.

47. Bjornsson O.G, Monck JR, and Williamson JR. Identificationof P2Y purinoceptors associated with voltage-activated cation channels in i cardiac ventricular myocytes of the rat. Eur J-Biochem.- 1989.- V. 186.- P. 395-404.

48. Boarder M.R, Weisman G.A, Turner J.T, and Wilkinson G.F. G protein-coupled P2 purinoceptors: from molecular biology to functional responses. Trends Pharmacol Sci.- 1995.-V. 16. P. 133-139.

49. Boehm S. Fine tuning of sympathetic transmitter release via ionotropic and metabotropic presynaptic receptors / Boehm S., Kubista H. // Pharmacol. Rev.- 2002. V. 54. - № 1. - P.43-99.

50. Boeynaems J-M. overview of the P2-receptors / Boeynaems J-M., Communi D., Gonzales N.S. // Seminars in Ttombosis and Hemostasis.-2005.- V. 31.- P. 139-149.

51. Bogdanov Y., Rubino A. and Burnstock G. Characterization of subtypes of the P2X and P2Y families of ATP receptors in the foetal human heart. Life Sci. 1998.- V.62.- P. 697-703.

52. Bogdanov Y., Wildman S., Clements M.P., King B.F/ and Burnstock G. Moleclular cloning and characterization of rat P2Y4 nucleotide receptor. Br J Pharmacol.-1998.- V. 124.- P. 428-430.

53. Boyer JL Identification of competitive antagonists of the P2Y¡ receptor. / Boyer JL, Romero-Avila T, Schachter JB, and Harden TK. // Mol Pharmacol 50: 1323-1329, 1989

54. Boyer JL, Romero-Avila T, Schachter JB, and Harden TK. Identification of competitive antagonists^ of the P2Yi receptor. Mol Pharmacol.- 1996.- V.50.- P. 1323-1329.

55. Bradley E. Effects of varying impulse number on cotransmitter contributions to sympathetic, vasoconstriction in rat tail' artery / Bradley E., Law A., Bell D., Johnson C. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.- 2003. -V.284. -№ 6.- P.2007-2014.

56. Brake AJ, and" Julius D. Signaling by extracellular nucleotides. Annu Rev Cell Dev Biol.- 1996.- V.12.- P. 519-541.

57. Brum PC. Neurohumoral'activation in the heart failure: the role of adrenergic receptors // An. Acad.Bras.Cienc.- 2006.-V.78.-P. 485-503.

58. Burnstock G. Purinergic nerves / Burnstock G. // Pharmacol. Rev. 1972. - V.24. -P.508 -581.

59. Burnstock G- Do some nerve cells release more than one transmitter? Neuroscience.- 1976.- v. 1.- P. 239-248.

60. Burnstock G. A basis for Distinguishing two types of purinergic receptors/ Burnstock G. // Cell Membrane Receptors For Drugs and Hormones: A Multidisciplinary Approach / Eds. Straub R.W., Bolis L. New York: Raven Press. - 1978. - P. 107-118.

61. Burnstock G. Distribution and roles of purinoceptor subtypes / Burnstock G. // Nucleos. Nucleot. 1991. - V.10. -P.917-930.

62. Burnstock G The fifth Heymans memorial lecture-Ghent. Co-transmission. Arch Int Pharmacodyn Ther 304, 7-33.

63. Burnstock G. Noradreline and ATP as cotransmetters in sympathetic nerves / Burnstock G. // Neurochem. Int. — 1990b. —V.17. — P.357 -368.

64. Burnstock G. Classification and characterization of purinoceptors / Burnstock G. // Purines in cellular Signalling Targets for New Drug / Eds. Jacobson K.A., Daly J.W., Manganiello V. - New York: Springer- Verlag, 1990. - P.241-253.

65. Burnstock G. Purinergic signaling / Burnstock G. // Brit. J. Pharmacol. 2006. -V.147. - P. 172-187.

66. Burnstock G. Unresolved issues and controversies in purinergic signalling: J Physiol in press. -2008

67. Burnstock G. Numbering of cloned P2 purinoceptors / Burnstock G., Kind B.F. // Drug. Dev. Res. -1996. V.38. -P.67-71.

68. Burnstock G. P2-purinoceptors of two subtypes in the rabbit mesenteric artery: reactive blue 2 selectively inhibits responses mediated via the P2y- but not P2x-purinoceptor / Burnstock G., Warland J.J.I. // Br. J. Pharmacol. 1987. - V.90. -P.3 83-391.

69. Burnstock G. Vascular control by purines with emphasis on the coronary system / Burnstock G. // Eur. Heart J. 1989. V.10. P. 15-21.

70. Burnstock G. and Meghjip P. The effect of adenyl compounds on the rat heart / Burnstock G. and Meghjip P/ // Br J.Pharmacol, 1983 P. 211218.

71. Burnstock G., Verkhratsky A. Evolutionary origins of the purinergic signaling system. Acta Physiol (Oxf). 2009 Apr; 195 (4): 415-47.

72. Burnstock G. Purines and Purinoceptors: Molecular Biolody Overview. Encyclopedia of Neuroscience. 2009.- v.7, P. 1253-1262.

73. Burnstock G. Unresolved issues and controversies in purinergic signalling / Burnstock G. // J. Physiol.- 2008.- V. 586.- P. 3307-3312.

74. Calcium signaling during excitation-contraction coupling in mammalian atrial myocytes / M.D. Bootman et al// Journal of cell Science.-2006/-V. 119, N19.- P. 3915-3925.

75. Chen Z.-P. Nucleotides as extracellular signaling molecules / Chen Z.-P., Levy A., Lightman S.L. // J. Neuroendocrinol. — 1995. — V.7. — P. 83-96.

76. Cheung K.K, Ryten M., Burnstock G. Abundant and dynamic expression of G protein-coupled P2y receptors in mammalian development / Cheung K.K, Ryten M., Burnstock G. // Developmental dynamics.- 2003.-V.228.- P. 254-266.

77. Chen WC, and Chen CC. ATP-induced arachidonic acid release in cultured astrocytes is mediated by Gi protein coupled P2Y1 and P2Y2 receptors. Glia.-1998.- V. 22.- P. 360-370.

78. Chevalier B., Mansier P., Teiger E., Callens E., Amrani F. And Swynghedauw B. Alteration in p- adrenergic and muscarinic receptors in aged rat. heart. Effects chronic administration of propranolol and atropine.- 1991.- P. 215-224.

79. Churchill P.C. Pharmacological characterization of the renovascular P2 purinergic receptors / Churchill P.C., Ellis V.R. // J. Pharmacol. Exp. Ther. -1993a. V. 265. -P.334-338.

80. Cohen N M and Lederer W J. Changes in the calcium current of rat heart ventricular myocytes during development / J Physiol.-1988.- V. 406.-P. 115-146.

81. Communi D. and Boeynaems J.M. Receptors responsive to extracellular pyrimidine nucleotides. Trends Pharmacol Sci.-1997.- V. 18.- P. 83-86.

82. Communi D, Govaerts C, Parmentier M, and Boeynaems JM. Cloning of a human purinergic P2Y receptor coupled to phospholipase C and adenylyl cyclase. J Biol Ghem.-1997.-V. 272.-P. 31969-31973.

83. Damron DS. and Bond M. Modulation of Ca2+ cycling in cardiac myocytes by arachidonic acid. Circ Res.-1993.- V.72.- P.376-386.

84. Denniston I.C. Measurement of cardiac output by electrical impedance at rest and during exercise / Denniston I.C., Makes J.T., Reeves J.T. et al //J. Apll. Physiol. 1976. - V.40, №1. -P.91-95.

85. Dhein S. Muscarinic receptors in the mammilian heart / Dhein S., van Koppen C.J., Brodde O.E. // Pharmacological researt.- 2001.- V.44.- P. 161-175.

86. Di Virgilio F, Ferrari D, Chiozzi P, Falzoni S, Sanz JM, Dal Susino M, Mutini C, Hanau S, and Baricordi OR. Purinoceptor in the immune system. Drug Dev Res.- 1996.- V.39.- P. 319-329.

87. Dorigo P. Negative and positive influences exerted by purine compounds on isolated guinea pig atria. / Dorigo P, Gaion RM, and Maragno I. // J Auton Pharmacol.-1988.- P. 191-196.

88. Drury AB, and Szent-Gyorgy A. The physiological activity of adenine compounds with special reference to their action upon the mammalian heart. J Physiol (Lond).-1929.- V.68.- P. 213-237.

89. Du XJ, Anderson KE, Jacobsen A, Woodcock EA, and Dart AM. Suppression of ventricular arrhythmias during ischemia-reperfusion by agents inhibiting Ins (1,4,5)P3 release. Circulation.- 1995.- V.91.- P. 27122716.

90. Dubyak GR, Schomisch SJ, Kusner DJ, and Xie M. Phospholipase D activity in phagocytic leucocytes is synergistically regulated by G-protein- and tyrosine kinase-based mechanisms. Biochem J 1993.- V. 292.-P. 121-128.

91. Dunn P.M. Diinosine pentaphosphate: An antagonist which discriminates between recombinant P2X3 and P2X2/3 receptors and between two P2X receptors in rat sensory neurons / Dunn P.M., Liu M., Zhong Y., King

92. B.F., Burnstock G. // Br. J. Pharmacol. 2000. -V. 130. -P. 1378-1384.

93. Erlinge- D. Characterisation of- an ATP receptor mediating mitogenesis in vascular smooth muscle, cells / Erlinge D., You J., Wahlestedt

94. C., Edvinsson L. // Eur. J. Pharmacol. 1995. -V. 289. - P.135-140.

95. Erlinge D, Harnek J, van Heusden C, Olivecrona G, Jern S & Lazarowski E. Uridine triphosphate (UTP) is released during cardiac ischemia. Int J Cardiol.- 2005.-V. 100.-P. 427-433.

96. Escobar AL., Ribeiro-Costa R, Villalba-Galea C, Zoghbi ME, Pfirez CG., and MejHa-Alvarez R. Developmental changes of intracellular Ca2+ transients in beating rat hearts // Am, J Physiol Heart Circ Physiol.-2004,- V. 286.- P. 971-978.

97. Ferrari A., Daffonchio A., Gerosa S. and Mancia G. Alteration in cardiac parasympathetic function imaged'rats.- 1991.-P. 647-649.

98. Ferron L, Capuano V, Deroubaix E, Coulombe A, Renaud JF. Functional and molecular characterization of a T-type Ca(2+)■ channel during fetal and postnatal rat heart development // J Mol Cell Cardiol.- 2002.- V. 34(5).- P. 533-46.

99. Fleetwood G, and Gordon JL. Purinoceptors in the rat heart. Br J Pharmacol.- 1987.- V. 90.- P. 219-227.

100. Forrester T and Williams CA (1977) Release of adenosine triphosphate from isolated adult heart cells in response to hypoxia. J Physiol 268: 371-390.

101. Froldi G, Pandolfo L, Chinellato A, Ragazzi E, Caparrotta L, and Fassina G. Dual effect of ATP and UTP on rat atria: which types of receptors are involved? Naunyn-Schmiedebergs Arch Pharmacol.- 1994. — V.349.- P. 381-386.

102. Froldi G, Varani K, Chinellato A, Ragazzi E, Caparrotta L, and Borea PA. P2X-purinoceptors in the heart: actions of ATP and UTP. Life Sci.-1997.-V.60.- P. 1419-1430.

103. Grosman C. Mapping the conformational wave of acetylcholine receptor channel gating / Grosman C., Zhou M., Auerbach A. // Nature (Lond) -2000.-V. 403. P.773-779.

104. Hansmann G. Characterization by antagonists of P2-receptors mediating endothelium-dependent relaxation in the rat aorta / Hansmann G., Bbltmann R., Tuluc F., Starke K. // Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. -1997. -V.356. P.641-652.

105. Harden TK, Boyer JL, and Nicholas RA. P2-purinergic receptors: subtype-associated signaling responses and structure. Annu Rev Pharmacol Toxicol.-1995.- V.35.- P. 541-579.

106. Hescheler J, Kameyama M, and Trautwein W. On the mechanism of muscarinic inhibition of the cardiac Ca current. Pfltgers Arch.-1986.- V. 407.-P. 182-189.

107. Hew KW, Keller KA. Postnatal anatomical and functional development of the heart: A species comparison // Birth Defects Research.-2003/-V. 68.-P. 309-320.

108. Hodgson D.M. Cellular remodeling in heart failure disrupts Katp channel- dependent stress tolerance / Hodgson D.M., Zingman L. V., Kane G.C., Perez-Terzic C., Bienengraeber M., Ozcan C., Gumina R.J., Pucar

109. D., O Coclain F., Mann D.L., Alekseev A.E., Terzic A. // EMBO J. 2003. -V. 22. - P. 1732 - 1742.

110. Horackova M, Huang MH, and Armour JA. Purinergic modulation of adult guinea pig cardiomyocytes in long term cultures and co-cultures with extracardiac or intrinsic cardiac neurones. Cardiovasc Res.-1994.- V. 28.- P. 673-679.

111. Horiuchi T. Analysis of purine- and pyrimidine-induced vascular responses in the isolated rat cerebral arteriole / Horiuchi T., Dietrich H.H., Tsugane S., Dacey Jr. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001. -V. 280 (2) -P.767 - 776.

112. Horowitz M. Central and peripherical contributions o control of heart fccumulation / Horowitz M., Meiri U. // Pflugers- Arch.- 1993.- V. 422(4).- P. 386-390.

113. Hopwood A.M. ATP mediates coronary vasoconstriction via P2X-purinoceptors and coronary vasodilatation via P2Y- purinoceptors in the isolated perfused rat heart / Hopwood A.M., Burnstock G. // Eur. J. Pharmacol.1987. V.136 (1). — P.49-54.

114. Hoyle C.H.V. A review of the pharmacological activity of adenine dinucleotides in the periphery: possible receptor classes and transmitter function / Hoyle C.H.V. // Gen. Pharmacol. 1990. - V.21. - P.827 -831.

115. Hume JR, Duan D, Collier ML, Yamazaki J, Horowitz B (2000) Anion transport in heart. Physiol Rev 80:31-81.

116. Iijima T, Irisawa H, and Kameyama M. Membrane currents and their modification by acetylcholine in isolated single atrial cells of the guinea pig. J Physiol (Lond).-1985.- V. 359.- P. 485-501.

117. Illes P. Signaling by extracellular nucleotides and nucleosides / Illes P., Klotz K.-N., Lohse M.J. // Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol.- 2000. V. 362. - P.295-298.

118. Illes P. Molecular physiology of P2 receptors in the central nervous system / Illes P., Ribeiro J. // Eur. J. Pharmacol. 2004. - V.483. -P.5-17.

119. Inscho E.W. P2 receptors in regulation of renal microvascular function / Inscho E.W. // Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 2001. - V. 280(6). -P. 927-944.

120. Jacobsen AN, Du XJ, Lambert KA, Dart AM, and Woodcock EA. Arrhythmogenic action of thrombin during myocardial reperfusion via release of inositols 1,4,5-triphosphate. Circulation.-1996.- V.93.- P. 23-26.

121. Kelliher G. and' Conahan S. Change in vagal activity and response to muscarinic receptor agonist with age.-1980.- P. 842-849.

122. Kennedy C. P2-purinoceptors mediate both vasodilation (via the endothelium) and vasoconstriction of the isolated rat femoral artery / Kennedy C., Delbro D., Burnstock G. // Eur. J. Pharmacol. 1985. -V. 107. -P.161-168.

123. Khakh B. ATP Receptor-Mediated Enhancement of Fast Excitatory Neurotransmitter Release in the Brain / Khakh B., Henderson G. // Mol. Pharmacol. -1998. V. 54. - № 2. - P. 272-378.

124. King B. Investigation of the effects of P2 purinoceptor ligands on the micturition reflex in female urethane-anaesthetized rats / King B., Knowles I., Burnstock G., Ramage A. // Br. J. Pharmacol.- 2004. -V.142. -P.519 530.

125. King BF, Townsend-Nicholson A, and Burnstock G. Metabotropic receptors for ATP and UTP: exploring the correspondencebetween native and recombinant nucleotide receptors. Trends Pharmacol Sci.-1998.- V.19.- P. 506-514.

126. Klitzner TS. Maturational changes in excitation-contraction coupling in mammalian myocardium // J Am Coll Cardiol.-1991.- V. 17.- P. 218-225

127. Knight G.E. The effects of purine compounds on the isolated aorta of the frog Rana temporaria / Knight G.E Burnstock G. // Br. J. Pharmacol. -1996. -V. 117. -P.873-878.

128. Kubicek W.G. The minnesoz impedance cardiograph-theory and applications / Kubicek W.G.// Biomed. Eng. 1974. - V.9. - P.410-416.

129. Kugelgen I, Starke K Noradrenaline-ATP co-transmission in the sympathetic nervous system. Trends Pharmacol Sci.- 1991.-V. 12. P. 319324.

130. Kugelgen Ii, Stoffel D., Starke K. P2-purinoceptor-mediated inhibition of noradrenaline release in rat atria. Br J Pharmacol.- 1995.- V. 115 (2).- P. 247-254.

131. Kugelgen I. P2- purinoceptors on postganglionic sympathetic nrurones / Kugelgen I.

132. Kugelgen I. Pharmacological profiles of cloned mammalian P2Y-receptor subtypes. Pharmacol Ther.2005 :doi: 10.1016/j .pharmthera.2005.08.014.

133. Ktgelgen. Pharmacological profiles of cloned mammalian P2Y-receptor subtypes. Pharmacol Ther.- 2006.-V. 110.- P. 415-432.

134. Lazarowski ER, Homolya L, Boucher RC, and Harden TK. Direct demonstration of mechanically induced release of cellular UTP and its implication for uridine nucleotide receptor activation. J Biol Chem.-1997.-V.272.-P. 24348-24354.

135. Lazarowski ER, Homolya L, Boucher RC, and Harden TK. Identification of an ecto-nucleoside diphosphokinase and its contribution tointerconversion of P2 receptor agonists. J Biol Chem.-1997.- V.272.- P.20402-20407.

136. Lazarowski ER., Boucher RC. and Harden T.K. Mechanisms of Release of Nucleotides and Integration of Their Action as P2X- and P2Y-Receptor Activating Molecules // Molecular Pharmacology.- 2003 v. 64.- P. 785-795.

137. Leuranguer V, Monteil A, Bourinet E, Dayanithi G, Nargeot J. T-type calcium currents in rat cardiomyocytes during postnatal development: contribution to hormone secretion // Am J Physiol Heart Circ Physiol.- 2000 V. 279(5).- P.2540-8.

138. Liu C. Extracellular ATP facilitates flow-induced vasodilatation in rat small mesenteric arteries / Liu C., Mather S., Huang Y., Garland C.,Yao X. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2004. -V. 286. -P.1688-1695.

139. Liu D.M. P2Y purinoceptor activation mobilizes intracellular Ca and induces a membrane currenr in rat intracardiac neurones / Liu D.M., Katnic C., Stafford M, Adams DJ. // J. Physiol. 2000. - V. "15:526. - P.287-298.

140. Liu S.F. Evidence for two P2-purinoceptor subtypes, in human small pulmonary arteries / Liu S.F., McCormack D.G., Evans T.W., Barnes P.J. // Br. J. Pharmacol. -1989. V.98 (3). 1014 -1020.

141. Liu Qu-Yi. Stimulation of cardiac L-type calcium channels by extracellular ATP / Liu Qu-Yi, Rosenberg R. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. -2001. V.280. -P.l 107-1113

142. Liu WW, Mattingly RR, and Garrison JC. Transformation of Rat-1 fibroblasts with the v-src oncogene increases the tyrosine phosphorylation state and activity of the alpha subunit of Gq/Gn. Proc Natl Acad Sci USA.-1996.- V. 93.- P. 8258-8263.

143. MacGregor R., Klein R., Bansal D. Secretion of plasminogen activator activity from neonatal rat heart cell is regulated by hormones and growth factors. Ann. N.Y. Acad. Sci.- 1995.- V.752.- P. 331-342.

144. Mahmod S.M. Purinergic modulati on of spontaneous activity and of responses to high potassium and acetylcholine in rat ileal smooth muscle / Mahmod S.M., Huddart H // Comp. Biochem. Physiol .C. 1993. -V.106(l).-P.- 79 - 85.

145. Mantelli L, Amerini S, Filippi S, and Ledda F. Blockade of adenosine receptors unmasks a stimulatory effect of ATP on cardiac contractility. Br J Pharmacol.-1993. V.109.- P. 1268-1271.

146. Marks AR. Intracellular calcium-release channels: regulators of cell life and death. Am J Physiol Heart Circ Physiol.-1997. V.272.- P.597-605.

147. Martin NP'et al. PKA-madiated phosphorylation of the beta 1-adrenergic receptors promotes Gs/Gi switching // Cell. Signal.- 2004.-V.16.- P. 1397-1403.

148. Matsubayashi T, Matsuura H, and Ehara T. On the mechanism of the enhancement of delayed rectifier K+ current by extracellular ATP in guinea pig ventricular myocytes. Pfltgers Arch.-1999.- V.437.- P. 635-642.

149. Matsuura H and Ehara T. Activation of chloride current by purinergic stimulation in guinea pig heart cells. Circ Res.-1992.- V.70:4.-P.851-855.

150. M. Farias III. Plasma ATP during exercise: possible role in regulation of coronary blood flow / M. Farias III, Gorman M. W., Savage M. V., Feigl E. O // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2005. -V.288 (4). -P.1586 - 1590.

151. McKitrick D.J. Intrathecal injection of ATP decreases heart rate in anasthetised rats / McKitrick D.J., Powers K., Arnolda L.F. // Br. J. Pharmacol. 2000. - V.76. - P. 118-126.

152. McMillan M.R. Vasodilatation of intrapulmonary arteries to P2-receptor nucleotides in normal and pulmonary hypertensive newborn piglets / McMillan M.R., Burnstock G., Haworth S.G. // Br. J. Pharmacol. -1999. V.128 (3). P. 543 - 548.

153. Mei Q. P2 purinergic receptor activation enhances cardiac contractility in isolated rat and mouse heart / Mei Q., Liang B // Am. J. Heart Physiol. Circ. Physiol.- 2001. V.281. -P.334-341.

154. Meghji P., Pearson J., Slakey L. Regulation of extracellular adenosine production by ectonucleotidases of adult rat ventricular myocytes/ AJP-Heart fiid Circulation physiolody.-1992.- V.263, P. 40-47.

155. Nicholls J. The1 ontogeny of purinoceptors in. rat urinary bladder and duodenum / Nicholls J., Hourani S.M., Kitchen I. // BR. J/ PharmacoL 1990. -V. 100 (4). - P.874-878.

156. Nakanishi T, Okuda H, Kamata K, Abe K, Sekiguchi M, Takao A. Development of myocardial contractile system in the fetal rabbit // Pediatr Res. 1987 Aug;22(2):201-7.

157. Ninomiya H, Otani H, Lu K, Uchiyama T, Kido M, and Imamura H Enhanced IPC by activation of pertussis toxin-sensitive and -insensitive G protein-coupled purinoceptors. Am J Physiol.-2002b.-V. 282.-P. 1933.

158. Ogilvie A., Blasius R., Schulze-Lohoff E., Sterzel RB. Adenine dinucleotides: a novel class of signaling molecules. J Auton Pharmacol.-1996.-V.16(6).- P. 325-328.

159. Olsson RA, and Pearson JD. Cardiovascular purinoceptors. / Olsson RA, and Pearson JD. // Physiol Rev.-1990.- V.70.- P. 761-845.

160. Osadchii O.E. Sybtype-selective blockade of cardiac muscarinic receptors inhibts vagal chronotropic responses in cats / Osadchii O.E. // Pflugers. Arch. Eur. J.PhysioL-2008. V. 455. - P. 819-828.

161. Ost'6dalov6 I, Kol6r F, Ost'6dal B. Inotropic effect of low extracellular sodium on perfused perinatal rat heart // Can J Physiol Pharmacol.-1995.- V.73(l).- P. 50-4.

162. Ostrom S. Cellular Release of and Response to ATP as Key Determinants of the Set-Point of Signal Transduction Pathways / Ostrom S., Gregorian C., Insel P:A. // J. Biol. Chem. 2000. - V.275 (16). -P. 11735 -11739.

163. Parker KE, and Scarpa A. An. ATP-activated nonselective cation channel in guinea pig ventricular myocytes. Am J Physiol Heart Circ Physiol.- 1995.- V.269.- P. 789-797.

164. Pasyk EA, and- Foskett JK. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator-associated ATP and adenosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate channels in endoplasmic reticulum and plasma membranes. J Biol Chem.-1997.- V.272.- P. 7746-7751.

165. Pearson RA, Dale N, Llaudet E, Mobbs P. ATP released via gap junction hemichannels from the pigment epithelium regulates neural retinal progenitor proliferation. Neuron.- 2005.-V. 46.-P. 731-744.

166. Pelleg A, Hurt CM, and Hewlett EL. ATP shortens atrial action potential duration in the dog: role of adenosine, the vagus nerve, and G-protein. Can J Physiol Pharmacol.-1996. -V. 74.- P. 15-22.

167. Pelleg A, Mitamura H, Michelson EL, and Dreifus LS. Evidence against prostaglandin mediation of the differential electrophysiologic effects of ATP versus adenosine in the canine heart. J Cardiovasc Pharmacol.-1986. -V. 8.- P. 534-538.

168. Pelleg A. Vagal component; in the chronotropic and dromotropic actions of adenosine and ATP / Pelleg A., Mitsuoka T., Mazgalev T., Michelson.//Prog. Clin. Biol. Res. 1987.'-V.230.-P.375-384.

169. Pfeilschifter J, and Merriweather C. Extracellular, ATP and UTP activation of phospholipase D is mediated by protein kinase C- in rat renal mesangial cells. Br J Pharmacol.-1993.- V.1T0.-P. 847-853.

170. Puceat M, and Vassort G. Purinergic stimulation of rat cardiomyocytes induces tyrosine phosphorylation and membrane association of phospholipase C: a major mechanism for InsP3 generation. Biochem J.-1996. — V.318.- P. 723-728.

171. Ralevic R, Milner P, Kirkpatrick KA, and Bursntock G. Flow-induced release of adenosine 5'-triphosphate from endothelial cells of the rat mesenteric arterial bed. Experientia.-1992.- V.48.- P. 31-34.

172. Ralevic V. Receptors for Purines and Pyrimidines / Ralevic V., Burnstock G // Pharmacol. Rev. -1998. -V.50. No 3. - P.413-492.

173. Ralevic V. Roles of P2-purinoceptors in the cardiovascular system / Ralevic V., Burnstock G// Circulation. -1991. -V. 84. P.l-14.

174. Rossi A and Olivares J. Basis of Pyrimidine Nucleotide Metabolism in the Myocardium. CARDIOVASCULAR DRUGS AND THERAPY.- 1998.-V. 12.-P: 171-177

175. Rettinger J. The suramin analogue NF279 is a novel and potent antagonist selective for the P2X(1) receptor / Rettinger J., Schmalzing G., Damer S., Muller G., Nickel P., Lambrecht G. // Neuropharmacol. 2000. — V.39 (11). -P.2044-2053.

176. Sadoshima J, and Izumo S. The heterotrimeric Gq proteincoupled angiotensin II receptor activates p21 ras via the tyrosine kinase-Shc-Grb2-Sos pathway in cardiac myocytes. EMBO J.-1996.- V.15.- P. 775-787.

177. Saito D, Ueeda M, Abe Y, Tani H, Nakatsu T, Yoshida H, Haraoka S, and Nagashima H. Treatment of paroxysmal supraventricular tachycardia with intravenous injection of adenosine triphosphate. Br Heart J.-1986.- V.55.-P. 291-294.

178. Scamps F. The mechanism of positive inotropy induced by adenosine triphosphate in rat heart. / Scamps F. Legssyer A, Mayoux E, and Vassort G. // Circ Res.- 1990.- P. 1007-1016.

179. Scamps F. Modulation of L-type Ca channel activity by P2-purinergic agonist in cardiac cells. / Scamps F, Nilius B, Alvarez J, and Vassort G. Pfltgers // Arch:- 1993.- P. 465-471.

180. Scamps F. A Gs protein couples P2-purinergic stimulation to cardiac Ca channels without cyclic AMP production. / Scamps F. Rybin V, Puceat M, Tkachuk V, and Vassort G // J Gen Physiol.- 1992.- P. 675-701.

181. Scamps F, and Vassort G. Mechanism of extracellular ATP-induced depolarization in rat isolated ventricular cardiomyocytes. Pfltgers Arch.-1990.- V. 417.- P. 309-316.

182. Scamps F. and Vassort G. Effect of extracellular ATP on the Na+ current in;rat ventricular myocytes. / Scamps F. and Vassort G // Circ Res.- 1994.- P. 710-717.

183. Schachter JB, Li Q, Boyer JL, Nicholas RA, and Harden TK. Second messenger cascade specificity and" pharmacological selectivity of the human P2Yrpurinoceptor. Br J Pharmacol.-1996.- v. 118.- P. 167-173.

184. Shacher J.B:, Sromek S.M, Nicholas A.A., et al Human embryonic kidney cells endogenously expess the P2Yi and P2Y2 receptoss // Europharmacology. 1997. - V.36. - P. 1181-1187.

185. Soleymani S., Aroonsakool N., Landeen L.,. Yokoyama U., Giles W.R., Insel P.A. ATP release via Connexin Hemichannels from Rat Venticular fibroblasts. The FASEB Journal.-2008.- V.22.- P. 1129.

186. Sillinsky E.M., Redman RS. Synchronous release of ATP and neurotransmitter within milliseconds of a motor nerve impulse in the frog. Journal of Physiology 1996, P. 815-822

187. Simon J, Webb TE, King BF, Burnstock G, and Barnard EA. Characterisation of a recombinant P2Y purinoceptor. Eur J Pharmacol.-1995.-V. 291.- P. 281-289.

188. Soltoff S.P. Cantley L.C. Bljcade of ATP binding site of P2 purinoceptors in rat parotid acinar cells by isotiocyanate compounds / Soltoff S.P., McMillian M.K., Cantley L.C // Biochem. Pharmacol. 1993. -V. 45- P. 1936-1940.

189. Suto F; Habuchi Y; Yamamoto T.; Tanaka FL; Hamaoka K. Increased sensitivity of neonate atrial myocytes to adenosine A1 receptor74stimulation in regulation of the L-type Ca current. Eur. J Pharmacol 2000 Dec 15; 409 (3): P 213-221.

190. Talasila A, Germack R, Dickenson JM. Characterization of P2Y receptor subtypes functionally expressed on neonatal rat cardiac myofibroblasts. Br J Pharmacol.-2009.- V.158.- P. 339-353.

191. Tarasova O.S., Eodionov I.M. The role of purinergic neurotransmission in various cardiovascular reflexes // Acta Physiol. Scand. — 1992.-V. 146.-P. 441-448.

192. Todorov L. Inhibitory and facilitatory effects of purines on transmitter release from sympathetic nerves / Todorov L., Bjur R.A., Westfall D.P. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1994. -V.268. - P.985-989.

193. Todorov LD, Mihaylova-Todorova S, Westfall TD, Sneddon P, Kennedy C, Bjur RA, and Westfall DP. Neuronal release of solublenucleotidases and their role in neurotransmitter inactivation. Nature. 1997. -V. 387.- P. 76-79.

194. Trezide D.J. Characterization of purinoceptors mediating depolarization of rat isolated vagus nerve / Trezide D.J., Kennedy I., Humphrey P.P. // Br. J. Pharmacol.- 1993. -V.l 10 (3). P.1055-1060.

195. Vassort G. Adenosine 5'-Triphosphate: a P2-Purinergic Agonist in the Myocardium / Vassort G. // Physiol. Rev. -2001. V. 81. - No. 2. - P. 767-806.

196. Vigne P, Hechler B, Gachet C, Breittmayer JP, and Frelin C. Benzoyl ATP is an antagonist of rat and5 human P2Y1 receptors and of platelet aggregation. Biochem Biophys Res Gommun.-1999.- V. 256,- P. 94-97.

197. Vigne P. Thr effects of PPADS as an antagonist of inositol (l,4,5)triphosthate induced intracellular calcium mobilization / Vigne P., Pacaud P., Urbach Y., Feolde F., Breattinayer J.P., Frelin C. // Br. J. Pharmacol. 1996. -V.I 19.-P. 360-364.

198. Von Kugelgen I. P2-purinoceptor-mediated inhibition of noradrenaline release in rat atria / Von Ktgelgen I., Stoffel D., Starke K. // B.r J.1 Pharmacol. 1995. - V.l 15. -P.247-254.

199. Voogd T.E. Recent research on the biological activity of suramin / Voogd T.E., Vansterkenburg E.L.M., Wilting J., Janssen L.H.M. // Pharmacol. Rev. -1993. -V. 45. -P.177-203.

200. Vornanen M. Contribution of sarcolemmal calcium current to total cellular calcium in postnatally developing rat heart // Cardiovasc Res. -1996.- V.32(2). -P. 400-10.

201. Xiang Y and Kobilka BK. Myocyte Adrenoceptor Signaling Pathways // Science.- 2003.- V. 300.-P. 1530-1532.

202. Wang L., Karlsson L., Moses S., et al. P2 receptor expression profiles in human vascular smooth muscle and endothelial cells. J. Cardiovasc. Pharmacol.- 2002.- V.40.-P. 841-853.

203. Webb T.E. Molecular biology of P2Y purinoceptors: Expression in heart / Webb T.E., Boluyt M.O., Barnard E.A. // J. Auton. Pharmacol. 1996. -V.16. - P.303-307.

204. Wee S., Peart JN., Headrick JP. P2 purinoceptor-mediated cardioprotection in ischemic-reperfused mouse heart. J Pharmacol Exp Ther.-2007.- V. 323 (3).- P. 861-867.

205. White T.D. Characteristics of neuronal, release of ATP / White T.D. // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 1984. -V.8. - P.487-493.

206. Wu S.N. Activation of muscarinic K+ channels by extracellular ATP and UTP in rat atrial myocytes/ Wu S.N., Liu S.I., Hwang T.L. // J. Cardiovasc. Pharmacol.-1998. V.31(2) / - P:203-211.

207. Yang S, Cheek DJ, Westfall DP, and Buxton IL. Purinergic axis in cardiac blood vessels. Agonist-mediated release of ATP from cardiac endothelial cells. Circ Res.-1994.- V. 74.- P. 401-417.

208. Yamada M. P2-purinoceptor activation stimulates phosphoinositide hydrolysis and inhibits accumulation of cAMP in cultured ventricular myocytes // Yamada M., Hamamori Y, Akita H, and Yokoyama M. Circ Res.- 1992.- P. 477-485.

209. Yitzhaki S, Shainberg A, Cheporko Y, Vidne BA, Sagie A, Jacobson KA, and Hochhauser E. Uridine-5'-triphosphate (UTP) reducesinfarct size and improves rat heart function after myocardial infarct. Biochem Pharmacol.- 2006.- V. 72.-P. 949-955.

210. Yitzhaki S, Shneyvays V, Jacobson KA, and Shainberg A. Involvement of uracil nucleotides in protection of cardiomyocytes from hypoxic stress. Biochem Pharmacol.-2005.-V. 69.-P. 1215-1223.

211. Zheng JS, Christie A, Levy MN, and Scarpa A. Modulation by extracellular ATP of two distinct currents in rat myocytes. Am J Physiol Cell Physiol.-1993.- V.264.- P. 1411-1417.

Информация о работе

Анисимова, Ирина Николаевна
кандидата биологических наук
Казань, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Роль Р2У-рецепторов в регуляции сократимости миокарда крыс в постнатальном онтогенезе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы