Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль липопротеинов во всасывании и распределении витамина Е в организме поросят раннего отъема

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль липопротеинов во всасывании и распределении витамина Е в организме поросят раннего отъема"

Всероссийский научно - исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных

На правах рукописи

^ Сушинский

ат Маратович

РОЛЬ ЛИПОПРОТЕИНОВ ВО ВСАСЫВАНИИ И РАСПРЕДЕЛЕНИИ ВИТАМИНА Е В ОРГАНИЗМЕ ПОРОСЯТ РАННЕГО ОТЪЕМА

03.00.04 - Биохимия

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Научный руководитель - кандидат биологических наук

В.И.Дудин

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В.А.Галочкин кандидат биологических наук Е.В.Крапивина

Ведущее учреждение:

Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства

Защита диссертации сос ~ _199 7 г. на

научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Адрес: 249010, г.Боровск, Калуиской области, ВНИИФБиП с.-х. нивотных

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан " Хб "___199 7е г.

заседании диссертационного

Всероссийском

Ученый секретарь диссертационного совета, к.с.-х.н.

Г. В.Деоряичйнова.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. В силу того, что для альфа-токоферола не обнаружен специфический транспортный белок, принято считать, что в распределении этого вещества между тканями основную роль играют липопротеины (W.A.Sehrens е.а«, 1982; M.Traber е.а., 1988). В то же время выводы разных исследователей относительно роли отдельных фракций липопротеинов в транспорте витамина Е существенно расходятся (H.M.Rubinstein е.а., 1969; Y.Takahashi е.а., 1976; S.S.O.Hungs е.а., 1982; C.A.Thelxnan е.а., 1985; Marita Tashi е.а., 1989). По-видимому, различные токоферол-зависимые биохимические ситуации в тканях рождают неоднозначный ответ организма в отношении транспорта витамина Е. Предположение о существовании ансамбля механизмов распределения витамина Е между тканями в литературе детально не прорабатывалось. Основной акцент пока сделан на количественных характеристиках метаболизма липопротеинов в преломлении к переносу с ними альфа-токоферола, рассматривая его как частный случай транспорта липидкых веществ вообще ( Ь.к.в^оггшоп е.а.,1976). Между тем попытки проследить судьбу витамина Е в связи с судьбой других липидов в отношении их переноса за счет липопротеиновой системы весьма весьма малочисленны. Мало исследованным оказался также вопрос регулирующей роли стенки тонкого кишечника и печени по поддержанию необходимой концентрации витамина Е в крови.

Особое практическое значение упомянутые выше проблемы имеют в свиноводстве у поросят раннего отъема (28-30 дней иизни). Этот технологический прием интенсификации животноводства чреват рядом отрицательных последствий, вследствие нарушений в пищеварении. При этом, совершенно неясным остается полезно ли применять ранний

отъем, резко повышающий Е-витаминный статус поросят за счет гораздо более высокого уровня витамина Е в корме, чем в материнскс молоке, если в результате отъема окажется нарушенной функция ли-попротеиновой транспортной системы. В связи с этим неизвестно, какова роль липопротеиновой системы в отсутствии адекватного ответа уровня витамина Е в крови на его супердозирование в корме при раннем отъеме поросят (С.В.Грищук, 1995).

Таким образом, несмотря на заметный прогресс в исследования структуры и метаболизма липопротеинов не складывается более или менее ясной картины их роли во всасывании и распределении витамина Е между тканями. Предлагаемая диссертационная работа представляет собой попытку выяснить на примере поросят раннего отъе» характер количественных изменений в липопротеиновой системе кро! при изменении условий липидного и Е-витаминного питания.

Цели и задачи исследований. Исходя из вышеизложенного, цели настоящей диссертационной работы состояли в исследовании:

1) регуляторной роли стенки тонкого кишечника и печени ра-ноотнятых поросят в транспорте альфа-токоферола с липопротеинам& крови при различной обеспеченности их рациона липидами;

2) особенностей всасывания и транспорта альфа-токоферола с липопротеинами плазмы крови раноотнятых поросят при различной обеспеченности их рациона витамином Е.

При этом, в каждом случае основные задачи работы сводились к получению количественных характеристик:

а) связывания альфа-токоферола стенкой тонкого кишечника и его распределения в организме;

б) транспорта альфа-токоферола с липопротеинами различной плотности.

Научная новизна. В работе впервые в условиях раннего отъема поросят показана роль отдельных фракций липопротеинов во всасывании и распределении в их организме альфа-токоферола, выявлено в какой мере его перенос с кровью связан с изменениями в липидном питании и в снабжении рациона витамином Е. Показано, что транспорт альфа-токоферола в организме поросят зависит от сочетайного действия ЛПОНП и ЛПВПд, причем последняя фракция в полной мере отражает уровень альфа-токоферола в организме вцелом, что может быть использовано для прижизненной диагностики обеспеченности животных витамином Е.

Практическая значимость. Результаты исследований свидетельствуют о необходимости в производственных условиях при выращивании поросят раннего отъема строго контролировать фон витамина Е в организме при балансировании энергии в рационе за счет включения в них повышенных количеств нейтральных ¡тиров, резко снижающих всасывание альфа-токоферола в кишечнике и требующих введения в рацион дополнительных количеств витамина Е, вплоть до удвоения. Контроль Е-витаминной обеспеченности поросят при этом лучше всего вести путем анализа спектра липопротеинов в плазме крови и определения концентрации альфа-токоферола в ЛПВПд.

Объем работы. Диссертация изложена на 114 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, предложений для науки и практики. Собственные исследования представлены в 18 таблицах (из них 8 в приложении) и 17 рисунках. Список литературы включает 172 наименования, из них 156 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для решения поставленных задач в условиях вивария института провели 2 опыта на поросятах-помесях (ландрас х крупная белая) с момента отъема в 28 дней до 60-дневного возраста.

Опыт I имел целью изучение связывания альфа-токоферола стенкой тонкого кишечника, его транспорта с ЛП плазмы крови и распределения между тканями поросят в зависимости от обеспеченности рациона липидами. В опыте участвовало 3 группы животных по 3 головы в каждой, подобранных по принципу аналогов с учетом происхождения. Различия между группами состояли в составе комбикорма, в содержании в нем подсолнечникового масла, в постепенном замещении им по массе крахмала (табл.1).

Таблица I

Рецептура комбикорма для поросят

№№ :

Группы животных

Ингредиенты

I

2 : 3

1. Кукуруза

2. Ячмень

3. Пшеница

4. Соевый шрот

5. Рыбная мука

6. Сухой обрат

7. Травяная мука

8. Крахмал

9. Растительное масло

10. Монокальцийфосфат

11. Соль

12. Мел

13. Премикс КС-3 В I кг содержится:

13,5 32,2 12,0 14,0 4,0 10,0 3,0 8,0

13,5 13,5

32,2 32,2

12,0 12,0

14,0 14,0

4,0 4,0

10,0 10,0

3,0 3,0 4,0

1.0

0,3 1,0 1,0

4,0 8,0

1,0 1,0

0,3 0,3

1,0 1,0

1,0 1,0

обменной энергии, МДж сырого протеина, г сырого жира, г

11,92 12,78 13,65 182,3 182,3 182,3 20,6 60,6 100,6

1 группа поросят получала комбикорм, включающий 8% крахмала, 2 -4% крахмала + 4% подсолнечникового масла, 3-8% подсолнечниково-го масла. В качестве добавки витамина Е использовали ¿,1-альфа-токоферилацетат в количестве 294 мг/кг корма (по непосредственному анализу), введя его в таком количестве во все группы.

Пелыо опыта 2 было исследовать связывание альфа-токоферола стенкой тонкого кишечника, его транспорт с ЛП плазмы крови и его распределение между тканями поросят в связи с уровнем витамина Е в рационе ( й,1-альфа-токоферилацетат). В качестве основного рациона (ОР) скармливали кормосмесь 2 группы опыта I, включавшей 4% крахмала + 4% подсолнечникового масла. В опыте 2 участвовало 3 группы поросят по 4 головы в каждой, подобранных по принципу аналогов с учетом происхождения. Разница между группами состояла в количестве добавленного к рациону витамина Е. I группа поросят получала иР с Фоном природного альфа-токоферола 10 мг/кг корма,

2 - ОР + 107 мг, 3 - ОР + 249 мг -альфа-токоферилацетата на I кг кормосмеси (по непосредственному анализу).

Убой поросят проводили в 60-дневном (опыт I) и в 50-дневном (опыт 2) возрасте. Для анализов препарировали 10 участков тонкого кишечника: двенадцатиперстная и подвздошная кишки, 8 одинаковых отрезков тощей кишки. Пробы отбирали из середины фрагментов (10% длины), затем промывали физраствором от жира и остатков брыжейки. Образцы печени, надпочечников, щитовидной железы, стенки тонкого кишечника и кала до анализов хранили в полиэтиленовых контейнерах при температуре -30°С. С целью сведения к минимуму ферментативного и окислительного пути деградации ЛП к свекеполу-ченной плазме крови добавляли в качестве предохранительных средств следующие реагенты: азид натрия - 0,13 мг/мл, этилмеркуритиосали-

цилат (тимеросал) - 0,08 мг/мл и ЭДТА - 0,37 мг/мл.

Выделение липопротеинов из плазмы вели по методу Р.Т.Ыпй-£геп (1975), использующему принцип последовательного ультрацентрифугирования. В работе была ультрацентрифуга Весктап-Ь-6-70 (США). Использовали фиксированный угловой ротор 50 и со следующей характеристикой: число пробирок х объем - 12x13 мл, угол 26°. Разница между максимальным и минимальным радиусами - 4,3 см Выделение липопротеинов проводили непосредственно из свежеполу-ченной плазмы с добавленными к ней бактериостатиками и ЭДТА в двух параллельных пробах по схеме:

Стадия I. Выделение ЛПОНП

Проба I 4,3 мл р-ра, пл.=1,0063 г/мл

8,7 мл плазмы

Ультрацентрифугирование

4,3 мл ЛПОНП 36000 об/мин, 18 ч, 7-13°С

Стадия 2. Выделение ЛПНП

4,3 мл р-ра, пл.=1,065 г/мл 8,7 мл + 689,5 мг бромида натрия, пл.=1,065 г/мл

Ультрацентрифугирование

4,3 мл ЛПНП 36000 об/мин, 18 ч, 7-13°С

Стадия 3. Выделение ЛПВП2

4,3 мл р-ра, пл.=1,125 г/мл 8,7 мл образца + 746,5 мг бромида натрия, пл.=1,125 мг/мл

Ультрацентрифугирование

2,15 мл ЛПВП2 40000 об/мин, 24 ч, 17-20°С

Промежуточный буфер

2,15 мл 2,15 мл

Стадия 4. Выделение ЛПВПд

4,3 мл р-ра, пл.=1,21 г/мл 8,7 мл образца + 1202,3 мг бромида натрия, пл.=1,21 г/мл

УльтрацентрифугироЕание

40000 об/мин, 24 ч, 17-20°С

Проба 2

4,3 ЛПОНП

4,3 ЛПНП

2,15 ЛПВП2

ЛПВП.

2,15 мл

Определение концентрации в липопротеинах белка осуществляли по методу Бредфорда (1976), липидов - по методу Л.Н.Вга^аоп (1951). Одновременное определение альфа-токоферола и состава жирных кислот в корме, кале, липопротеинах плазмы, стенке тонкого кишечника, печени, щитовидной и надпочечниковой железах проводили с омылением образцов. Анализ альфа-токоферола вели с помощью хроматографа высокого /-деления "Милихром-4". Длина колонки 120 мм, диаметр - 2 мм, адсорбент - силасорб-бОО с размером частиц 5 мкм. В качестве злюента использовали смесь гексана, метанола и серного эфира (89:10:1). Анализ нирнокислотного состава осуществляли с помощью газояидкостного хроматографа Хром-5 (ЧССР). Длина колонки - 3 м, фаза: 8% диэтиленгликоля на хроматоне N .

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Связывание альфа-токоферола стенкой тонкого кишечника и его распределение в организме

Из материалов и методов следует, что изменение липидной обеспеченности рационов поросят (опыт I) проводили путем включения в них различных количеств подсолнечникового масла, являющегося богатым источником линолевой кислоты. Анализ содерэания этой кислоты в фрагментах стенки тонкого кишечника поросят выявил существенные различия мевду группами. Поросята, получавшие наибольшее количество линолевой кислоты с кормом (гр.З), проявили характерный максимум связывания кислоты в верхней трети кишечника, приходящийся на 3-4 фрагменты стенки. С уменьшением количества линолевой кислоты в рационе (гр.2) наблюдалась деформация кривой ее связывания стенкой тонкого кишечника, серьезная лишь в случае отсутствия добавок растительного масла в рационе (гр.1). По средним данным между фрагментами стенки тонкого кишечника различия в

содержании линолевой кислоты в стенке в связи с увеличением уров ня кислоты в рационе были контрастными (гр.1 - 1,56+0,2; гр.2 -13,62+1,14; гр.З - 22,41+1,89%) и достоверными (гр.1 против гр.2 - Р < 0,0001; гр.1 против гр.З - Р < 0,0001; гр.2 против гр.З - Р <0,001).

В связи с дозой альфа-токоферилацетата в рационе (опыт 2) отмечены некоторые изменения в содержании в стенке тонкого кишечника линолевой кислоты. В основном они касались характера кри вой распределения между фрагментами стенки и проявились в сдвиге максимума с 7-8 фрагментов (гр.1) к 6 (гр.2) и к I (гр.З). По средним значениям содержания линолевой кислоты между фрагментами стенки тонкого кишечника поросят (гр.1 - 12,42+0,88; гр.2 -12,94+1,38; гр.З - 16,73+1,73%) обнаружена незначительная тенден ция к~ повышению с увеличением Е-витаминной обеспеченности рациона (гр.1 против гр.З - Р< 0,05).

Введение в рацион поросят растительного масла в качестве ис точника линолевой кислоты существенно сказалось на уровне этой кислоты в печени (табл.2). Ее содержание с повышением добавок подсолнечникового масла в рацион увеличивалось пропорционально дозе (Р< 0,0001-0,03). Подобные изменения касались и других изу ченных тканей, но они не были столь контрастными, как в печени.

Повышение Е-витаминной обеспеченности рациона поросят также заметно сказалось на содержании линолевой кислоты в исследованных тканях (табл.2). В отношении нее отмечена тенденция к повышению, очень четкая для надпочечников (Р< 0,001-0,0001) и с максимумом у поросят 2 группы в отношении печени. Для щитовидной железы был характерен резкий спад концентрации кислоты у животных 3 группы. Сопоставляя эти данные с результатами изучения свя

Таблица 2

Содержание линолевой кислоты в печени, щитовидной яелезе и надпочечниках в зависимости от обеспеченности рациона раяоотнятых поросят линолевой кислотой и

витамином Е (%)

Группы : поросят:

Печень

Щитовидная железа

; Надпочечники

Опыт I

1

2 3

3,52+0,39 10,52+0,79 18,83+0,39

0,11+0,03 0,15+0,01 1,55+0,12

0,10+0,01 1,42+0,02 2,14+0,07

Опыт 2

1

2 3

9,55+0,20 18,17+0,38 12,94+0,31

0,89+0,08 0,82+0,03 0,15+0,00

0,18+0,02 0,32+0,01 1,29+0,04

зывания линолевой кислоты стенкой тонкого кишечника по его ходу в связи с повышением Е-витаминной обеспеченности рациона, монно заключить, что поступление кислоты в ткани в значительной мере зависит от интенсивности ее транспорта из верхней трети кишечника.

В связи с повышением обеспеченности рациона поросят витамином Е, содержание в стенке тонкого кииечника стеариновой кислоты по средним данным между ее фрагментами имело тенденцию к снижения (гр.I - 17,09+0,54; гр.2 - 16,34+0,42; гр.З - 12,98+0,48) и в 2 вариантах из 3 различия оказались достоверными (гр.1 против гр.З - Р< 0,0001; гр.2 против гр.З - Р< 0,0001). Вдобавок к этому, в печени содернание стеариновой кислоты находилось в обратной зависимости с концентрацией альфа-токоферола ( г = -0,97), что заставляет обратить внимание на эту, не очень известную в литературе, сторону проявления действия витамина Е на животный ор-

гани.зм.

Особенный интерес в связи с включением в рацион поросят подсолнечникового масла представляют данные по связыванию стенкой тонкого кишечника альфа-токоферола. Характер связывания у поросят контрольной группы не отличался от известного в литературе с максимумом, при.ховяггпмся на 4 :Грагменг стенки. Ро5эр;-::т растительного масла в качестве источника лино.г=,пс"; -зелоты привели к заметной деформации кривой связывания аль'*а-токо?-ерола. По средним значениям между фрагментами стенки тонкого кишечника (гр.1 - 5,31+0,93; гр.2 - 3,86+0,25; гр.З - 2,05+0,19 мкг/г) выявилась четкая тенденция к снижения кенцентраци;» аль^а-токоферола в стенке тонкого кишечника с увеличением обеспеченности рансот-нятых поросят линолевой кислотой, в 2 из 3 случаев статистически достоверная (гр.1 против гр.З - ? <С0,Э2; гр.2 против гр.З -Р < 0,0001). На основании этих материалов в значительной мере могно утвердиться во мнении, что использование растительного мае-ла в качестве источника линолевой кислоты приводит к снижения всасывания альфа-токоферола в просвете тонкого кипечняка. Г.ак вытекает из литературы, подобного не наблюдается при сачах поросятам свободной линолевой кислоты. Вполне мозно было предположить, что основной причиной тор«ояения всасывания витамина Е при дачах подсолнечникового масла служит недостаточная активность гидролитических процессов в момент раннего отъема поросят, однако подоб ные эффекты обнаружены другими исследователями в неэкстремальных ситуациях и на других видах еиеотных (L.Akerib с.и., IS7I; Н.Vogtman с.;,., 1971; L.J.kachlin с.u., IPSO), что впрочем не мешает в качестве причины усматривать измененное мицеллообразо-вание в связи с включением в раиион, как источников полиеновых

мирных кислот, повышенных количеств нейтральных масел.

Характер кривой, связывания альТ:а-токс!ерола менялся и н связи с уровнем Е-витаминного питания. В основном это касалось поросят, получавших максимальную добавку аль:1а-токо?ерйлацетата, что проявилось в сдвиге максимума связывания альфа-токоферола со 2-4 фрагмента к 5-6. По средним данным мэнду фрагментами стенки тонкого кавэчн/.ка (гр.1 - 0,59+0,14; гр.2 - 1,54+0,18; гр.З - 2,51+ 0,35 мкг/г) с увеличением Е-вктаминной обеспеченности происходило существенное повышение концентрации аль^а-токо^ерола (гр.1 против гр.2 - Р < 0,002; гр.1 против гр.З - Р < 0,007; гр.2 против гр.З - Р< 0,04).

В условиях скармливания увеличивающихся количеств растительного масла, группы поросят по концентрации альфа-токоферола различались менду собой существенно только в отношении печени (таблица 3), с достоверной разницей мевду I и 3 группами (Р < 0,04).

Концентрация альФа-токоферола в плазме, печени, щитовидной железе и надпочечниках раноотнятых поросят в зависимости от обеспеченности их рациона линолевой кислотой и витамином Е

группы ; ; Печень j : Надпочечники

Таблица 3

(мкг/г)

Опыт I

о о

I

6,1+0,3 17,1+2,1 5,9+0,03 12,7+2,7 6,4+0,6 7,4+1,8

3,4+1,3 3,5+1,1 1,7+0,8

7,7+1,7

5,6+0,5 5,6+2,2

Опыт 2

0,7+0,1 3,2+0,2 5,8+0,2

1,1+0,2 3,7+0,4 5,1+0,4

1,1+0,1 2,4+0,2 8,2+0,1

Во всех остальных тканях и вариантах достоверных различий обнаружено не было. Эти данные вкупе с результатами исследований стенки свидетельствуют не только о блокировании всасывания альфа-тз-коферола линолевой кислотой, когда в качестве ее источника используют нейтральные масла, но и о существовании в организме механизмов поддержания необходимого уровня альфа-токоферола в тканях.

Точно так же, как стенка тонкого кишечника, на повышение обеспеченности рациона витамином Е реагировали все изученные ткани (табл.2). Ввиду контрастности воздействий, полученные менду группами различия оказались статистически достоверными при всех возможных вариантах сравнения (плазма - Р < 0,0005-0,0001; печень -Р< 0,008-0,0001; надпочечники - Р< 0,0004-0,0001).

Таким образом, анализ полученных результатов на предмет выполнения роли стенки тонкого кишечника и печени в регуляции распределения альфа-токоферола мэвду тканями организма раноотнятых поросят в условиях увеличения обеспеченности их рациона линоле-вой кислотой за счет добавок подсолнечникового масла выявил яе-ную зависимость процесса доставки альфа-токоферола к тканям от липопротеиновой системы крови. В пользу этого свидетельствует тот факт, что при снижении всасывания альфа-токоферола в кишечнике, проявившемся также в уменьшении его концентрации в печени, под влиянием добавок растительного масла, наблюдается кэсткое гомео-статирование витамина в плазме крови л относительная независимость от фонда альфа-токоферола в организме подопытных поросят у щитовидной железы и надпочечников.

3.2. Транспорт альфа-токоферола с липопротеинами плазмы

Как и ожидалось, добавки подсолнечникового масла в качестве источника линолевой кислоты существенно увеличивали концентрацию в плазме крови поросят липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП} (табл.4).

Таблица 4

Распределение альфа-токоферола меиду фракциями липопротеинов плазмы крови раноотнятых поросят в зависимости от уровня линолевой кислоты в их рационе

Группы

Количество ЛП нг/100 мл плазмы

Соотношение :Содержание белок/липид : аТ в ЛП, гмкг/ЮО мл : плазмы

Концентрация аТ в ЛП, мг/г

42,6+2,8 51,7+0,4 55,5+3,0

129,2+5,7 152,2+2,5 151,5+3,4

57,2+1,5 57,6+3,4 60,2+2,2

99,4+3,3 98,3+3,4 92,8+5,4

ЛПОНП 0,1+0,0 0,1+0,0 0,1+0,0

ЛПНП 0,3+0,0 0,3+0,0 0,3+0,0

лпвп^ 0,7+0,0 0,7+0,0 0,7+0,0

ЛПВП, 1,2+0,0 1,2+0,0 1,2+0,0

'2

'3

123+6 210+9 282+8

132+4 149,9 119+14

112+28 55+12 102+26

243+13

178+6

140+10

2,89+0,07 4,07+0,17 4,31+0,10

1,02+0,04 0,98+0,07 0,78+0,08

1,97+0,52 0,95+0,20 1,70+0,45

2,46+0,20 1,82+0,13 1,53+0,19

В 2 случаях из 3 различия оказались статистически достоверными (гр.1 против гр.З - Р < 0,02; гр.2 против гр.З - Р < 0,05). Соответственно происходило увеличение количества переносимого с

3

ЛПОНП аль^а-токоферола (гр.1 против гр.2 - Р < 0,005; грЛ против гр.З - Р< 0,0001; гр.2 против гр.З - Р< 0,009). При этом вакно, что усиление переноса альфа-токоферола с ЛПОНП происходило не только за счет увеличения количества ЛПОНП, но и вследствие повышения концентрации альфа-токоферола в этой фракции липопротеи-нов (грЛ против гр.2 - Р < 0,01; гр.1 против гр.З - Р < 0,0001).

Увеличение уровня липидов в рационе практически не сказалось на концентрации в плазме крови подопытных поросят других фракций липопротеинов. В то же время, перенос альфа-токоферола с липопро-теинами высокой плотности (ЛПВПд) претерпевал заметное снкнение (гр.1 против гр.З - Р < 0,07; гр.2 против гр.З - Р< 0,05). Это могло происходить за счет уменьшения концентрации альфа-токоферола в ЛПВП3, а отсутствие достоверных различий (гр.1 против гр.З Р < 0,05) объяснялось большими разбросами индивидуальных данных.

По сравнению с результатами опыта I, в опыте 2 мы обнаружили несколько иное количественное соотношение фракций липопротеинов в плазме крови поросят (табл.5). В основном отличия заключались в количестве ЛПОНП и ЛПНП. В опыте 2 было меньше ЛПНП и больше ЛПОНП. Как показали исследования, повышение Е-вктанинной обеспе ченностк рациона поросят не поелияло на уровень ни одной из изученных фракций липопротеинов. В то же время увеличение в рационе количества альфа-токоферилацетата приводило к повышению концентрации альфа-токоферола во всех фракциях липопротеинов, однако в наибольшей степени это касалось ЛПНП и ЛПВПд. Достоверные различия между группами имели место не всегда. Так, в ЛПОНП и ЛПНП статистически значимое различие (Р<.0,02) было зафиксировано кенду I и 3; в ЛПЗП2 - между I и 2 (Р< 0,005) и между I и 3 (Р < 0,007); в ЛПВП, - между I и 3 (Р< 0,0001) и между 2 и 3 (Р < 0,02) груп-

пами поросят. Что касается транспорта альфа-токоферола с липопротеинами, то в самой значительной степени он был связан с ЛПВПд с очень четким ответом на обеспечение рациона поросят витамином Е (гр.1 против гр.2 - Р< 0,05; гр.1 против гр.З - Р< 0,01; гр.2 против гр.З - Р< 0,006).

Таблица 5

Распределен/о альфа-токоферола между фракциями липопро-теинов плазмы крови раноотнятых поросят в зависимости от уровня Е-витаминной обеспеченности их рациона

•.Количество ЛП: Соотношение : Содержание : Концентрация ггтоппи : мг/100 мл : белок/липид : аТ в ЛП, : аТ в ЛП, 1РУ1ШЫ . плаэмы : : мкг/100 мл : мг/г

: : : плазмы :

100,4+9,5 97,2+16,1 103,5+11,9

55,3+10,6 52,6+13,4 58,0+10,3

52,8+4,8. _ 47,2+9,37' 54,1+2,9

129,3+2,4

135,0+14,6

126,6+2,5

ЛПОНП 0,1+0,0 0,1+0,0 0,1+0,0

ЛПНП 0,3+0,0 0,3+0,0 0,3+0,0

ЛПВП

2

0,7+0,0 0,7+0,0 0,7+0,0

ЛПВП.

1,2+0,0 1,2+0,0 1,2+0,0

26+9 94+16 127±4

14+2 68+8 130+20

5+4 40+7 59+8

22+4 122+29 267+18

0,26+0,08 1,10+0,27 1,29+0,18

0,28+0,07 1,75+0,71 2,61+0,68

0,10+0,09 0,88+0,10 1,08+0,13

0,17+0,03 0,96+0,25 2,11+0,13

В попытках проследить роль липопротеинов различной плотности с формированием Е-витаминного статуса печени проанализировали взаимосвязь количества транспортируемого с липопротеинами альфа-

токоферола с его концентрацией в печени подопытных поросят. С помощью регрессионного анализа установили, что между содержанием альфа-токоферола в ЛПОНП и его концентрацией в печени в условиях включения в рацион поросят различных количеств растительного масла (опыт I) существует обратная взаимосвязь (г = -0,8), а в ЛПВПд - прямая ( г = 0,69). Если исходить из этого, Е-витаминный статус печени определяется взаимодействием 2-х фракций липопротек нов - ЛПОНП и ЛПВПд. Что касается других тканей, то интересных взаимосвязей их Е-витаминного статуса с концентрацией альфа-токоферола в отдельных липопротеинах нами обнаружено не было.

В связи с повышением Е-витаминной обеспеченности рациона поросят (опыт 2), содержание альфа-токоферола во всех изученных фракциях липопротеинов находилась в прямой связи с его концентрацией в печени, наиболее четко ( г = 0,91) отвечали ЛПОНП, другие фракции реагировали лишь немного слабее ( г= 0,83-0,84). Здесь обнаружились различия с результатами опыта I, когда повышение уровня растительного масла в рационе поросят изменяло изучаемую взаимосвязь в отношении ЛПОНП. Эти различия, однако, диктовались ответом организма поросят на повышение Е-витаминной обеспеченности и ни в какой мере не противоречат результатам опыта I.

Как мы уже показали, увеличение общего уровня липидов в рационе раноотнятых поросят на распределении альфа-токоферола между ЛПОНП и ЛПВПо плазмы крови. Это могло быть следствием изменений в содержании отдельных жирных кислот в липопротеинах. Согласно полученным материалам (табл.5), во всех изученных фракциях липопротеинов в связи с увеличением обеспеченности рациона поросят линолевой кислотой отмечалось адекватное повышение ее уровня с высокодостоверными различиями между группами (Р< 0,0001).

Таблица б

Содержание линолевой кислоты в липопротеинах плазмы крови раноотнятых поросят в зависимости от обеспеченности их рациона линолевой кислотой и витамином Е (%)

Группы : Опыт I : Опыт 2

10,99+0,47 22,68+0,97 41,92+1,30

9,86+0,42 25,27+1,07 44,87+1,82

5,66+0,32 12,86+0,65 22,81+1,16

9,78+0,37 22,52+0,84 38,38+0,06

ЛПОНП

ЛПНП

ЛПВПг

лпвп.

29,19+0,78 30,83+0,85 28,27+1,55

26,21+0,70 27,94+0,79 25,39+1,39

19,34+1,87 13,68+1,04 15,06+0,53

26,07+2,54 26,80+2,04 26,82+0,63

Линейная зависимость между концентрацией альфа-токоферола и содержанием в них линолевой кислоты существовала только в ЛПОНП и ЛПВПд. Для ЛПОНП она носила прямой характер ( г = 0,96), а для ЛПВП3 _ обратный (г = -0,92).

Увеличение Е-витаминной обеспеченности рациона поросят (опыт 2) практически не сказалось на составе жирных кислот липид-ной части липопротеинов различной плотности. Исключение составила линолевая кислота в ЛПВП2, проявившая тенденцию к снижению с повышением уровня витамина Е в рационе (табл.6).

ВЫВОДЫ

1. Введение в рацион поросят раннего отъема в качестве источника линолевой кислоты подсолнечникового масла (0; 4; 8% по массе) приводит к дозозависимому усилению связывания этой кислоты стенкой тонкого кишечника с максимумом в его верхней трети, вызывает повышение ее содержания во всех изученных тканях (печени, щитовидной железе, надпочечниках).

2. Повышение Е-витаминной обеспеченности рациона раноотня-тых поросят за счет добавок альфа-токоферилацетата (0; 107; 249 мг/кг корма) обуславливает плавный сдвиг максимума связывания линолевой кислоты стенкой тонкого кишечника к верхней его трети, приводит к повышению содержания этой кислоты в печени при средней (107 мг) дозе альфа-токоферилацетата в комбикорме, а только к четко выраженной обратной зависимости между альфа-токоферолом и стеариновой кислотой (г = -0,97) в этом органе.

3. Включение в рацион поросят раннего возраста аль^а-токо-ферилацетата повышает связывание альфа-токоферола стенкой тонкого кишечника (Р < 0,04-0,002) и его концентрацию в исследованных органах (Р < 0,008-0,0001), повышение ке уровня подсолнечникового масла, наоборот, резко (Р < 0,02-0,0001) уменьшает связывание альфа-токоферола стенкой и его концентрацию во внутренних органах (в печени - Р < 0,04).

4. У поросят, не получавших подсолнечниковое масло, наибольшее количество альйа-токоферола переносится с ЛПВП.,, тогда как до

О

бавки на этом фоне масла максимальную активность переноса сдвигают в сторону ЛПОНП в такой ке степени, в какой она параллельно уменьшается для ЛПВПд.

5. На фоне природного альфа-токоферола (10 мг/кг корма) наибольший его транспорт характерен для ЛПОНП, добавки альфа-токоферилацетата усиливают включение альфа-токоферола во все фракции липопротеинов, но в существенно большей степени это происходит в отношении ЛПВПд. '

6. Гомеостатирование уровня альфа-токоферола в системе кровь-печень осуществляется двумя его встречными потоками: одним из печени в кровь с ЛПОНП, другим из крови в печень с ЛПВПд, причем ЛПВПд в полной мере отражает количество витамина Е в организме вцелом.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ НАУКИ И ПРАКТИКИ

1. Для точного прижизненного тестирования Е-витаминного статуса поросят предлагается определять распределение альфа-токоферола между ЛПОНП и ЛПВПд их плазмы крови.

2. Не рекомендуется использовать в кормлении поросят раннего возраста растительное масло из-за его способности резко уменьшать всасывание витамина Е в тонком кишечнике.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. М.М.Сушинский - Липидная обеспеченность рациона и всасывание витамина Е у поросят раннего отъема. Сб.Проблемы физиологии, биохимии, биотехнологии и питания сельскохозяйственных животных. - Боровск, ВНИИФБиП, 1993, стр.284-285.

2. М.М.Сушинский - Влияние липидной обеспеченности рациона на транспорт витамина Е с липопротеинами плазмы крови поросят -там же, стр.286-288.