Роль ионного транспорта, сопряженного с изменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток

Анфиногенова, Яна Джоновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль ионного транспорта, сопряженного с изменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль ионного транспорта, сопряженного с изменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток"

На правах рукописи

АНФИНОГЕНОВА ЯНА ДЖОНОВНА

РОЛЬ ИОННОГО ТРАНСПОРТА, СОПРЯЖЕННОГО С ИЗМЕНЕНИЯМИ КЛЕТОЧНОГО ОБЪЕМА, В МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ СОКРАТИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ СОСУДИСТЫХ ГЛАДКОМЫШЕЧНЫХ КЛЕТОК

03.00.13 - физиология 03.00.02-биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ТОМСК-2005

Работа выполнена

в ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Баскаков Михаил Борисович Орлов Сергей Николаевич

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук доктор медицинских наук

Банков Александр Николаевич Афанасьев Сергей Александрович Евдокимов Евгений Васильевич

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

ГУ НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН

Защита состоится "_" _ 2005 г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.096.01 при ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава (634050 г. Томск, Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, проспект Ленина, 107).

Автореферат разослан "_"_2005 г.

Ученый секретарь ^

диссертационного совета 7 Суханова Г. А.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

В общей структуре заболеваемости населения развитых стран одно из ведущих мест принадлежит патологическим состояниям, связанным с нарушением сократительной функции гладких мышц (ГМ).

Несмотря на существенный прогресс в изучении механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладкомышечных клеток (ГМК), до настоящего времени остается открытым целый ряд вопросов, касающихся оперирования механизмов сопряжения возбуждения-сокращения в сосудистых ГМК. Это в первую очередь касается роли изменений объема клеток в регуляции ионного транспорта, электрогенеза и сократительной активности ГМК. Нет достаточной ясности и в определении роли внутриклеточных моновалентных ионов в регуляции функций клеток, хотя в последние годы появились данные о наличии в клетках Na+,- и С1",-опосредованной сигнализации [Taurin et al., 2002; 2003; Borin et al., 1993; Liedtke et al., 2002; Muimo et al., 1998; Trehame, 1994].

Многие годы среди исследователей доминировала точка зрения, согласно которой в основе электрогенеза ГМК лежит изменение ионной проницаемости мембраны для ионов Са2+, К+ и Na+. Однако в последние годы пристальное внимание уделяется возможному участию электронейтрального ионного транспорта в механизмах сопряжения возбуждения-сокращения в ГМК [Chipperfield и Harper, 2000]. Было показано, что, кроме потенциал-зависимых и рецептор-управляемых каналов, важный вклад в регуляцию электрической и сократительной активности ГМК вносят Na+,K+,C1" и К+,С1" котранспортеры, основной особенностью которых является чувствительность к изменениям объема клеток, а основной функцией - регуляция их объема и поддержание внутриклеточного гомеостаза моновалентных ионов [Ad-ragna et al, 2000; Alear et al., 1999; 2001; Russell, 2000]. Кроме влияния на ионтранс-портирующие системы мембраны, клеточный объем вовлечен в регуляцию разнообразных функций клеток, включая пролиферацию, рост, программируемую гибель и некроз [Van Cruchten and Van Den Broeck, 2002; Lang et al., 2000; Barros et al., 2001; Okada et al., 2001]. Тонкие механизмы связи объема клеток и регуляции их функциональной активности остаются малоизученными, а большинство экспериментальных данных о роли клеточного объема и объем-чувствительного ионного транспорта в регуляции функций клеток были накоплены при исследовании эпителиальных и эритроидных клеток.

ВИвЛМОТЕКА .

СОмеИ*"7 * ' «9

да

ем вазодилаторов, стимулирующих цАМФ- и цГМФ-опосредованные сигнальные системы [Akar et al, 1999; 2001; Orlov et al, 1992; Owen and Ridge, 1989; Smith and Smith, 1987; Tseng and Berk, 1992]. Противоположная регуляция вазоконстриктора-ми и вазодилататорами была обнаружена при исследовании №+-независимого К+,СГ котранспорта [Adragna et al, 2000; 2004], другого члена суперсемейства СГ-сопряженных котранспортеров, который обеспечивает направленный наружу перенос СГ [Adragna et al., 2000; 2004]. Имеются сведения о вовлечении Na+,K+,2C1" котранспорта в патогенез гипертонической болезни: генетически модифицированные мыши, имеющие дефектный ген Na+,K+,2C1" котранспортера, (NKCC1 knockout mice) характеризуются пониженной величиной кровяного давления и снижением тонуса и величины сократительных ответов сегментов сосудистых ГМК при действии ai-адреноагониста фенилэфрина [Flagella et al., 1999; Meyer et al., 2002].

Важная роль клеточного объема в регуляции сократительной функции ГМК подтверждается тем, что аппликация биологически активных веществ, активирующих цАМФ-зависимую сигнальную систему, ведет к стрикции культуралышх ГМК аорты [Orlov et al., 1996]. К сходному результату ведет дезинтеграция актинового цитоскелета, состояние которого, в свою очередь, модулируется активностью ряда протеинкиназ [Burgstaller and Gimona., 2004; Nunes, 2002; Matrougui et al., 2001; Abedi and Zachary, 1998]. Таким образом, несмотря на определенные успехи, достигнутые в изучении механизмов объем-зависимой регуляции функций сосудистых гладких мышц, многие вопросы требуют дополнительного изучения.

В течение длительного времени физиологическая роль СГ каналов в висцеральных и сосудистых гладкомышечных клетках обсуждалась в связи с их участием в регуляции клеточного объема. Однако, в последние годы появились данные о важной роли хлорных каналов в механизмах сопряжения возбуждения-сокращения в ГМК [Lamb et al., 2000; Chipperfield and Harper, 2000; Robert et al., 2004]."К настоящему времени в сосудистых ГМК обнаружены объем- и Са2+-зависимые СГ каналы, а также хлорные каналы семейства CFTR (cystic fibrosis transmembrane regulator), которые могут регулировать активность других мембранных протеинов, некоторые типы Na+ и СГ каналов, и принимать участие в трансмембранном переносе Н20 и ионов [Hume at al., 2000]. Роль хлорных каналов и соответствующих ионных токов в обеспечении сократительных реакций ГМК при сжатии и набухании, а также при действии физиологических стимулов изучена недостаточно.

Все вышеизложенное определяет необходимость изучения роли объема клеток, объем-чувствительного Na+,K+,2C1" котранспорта, хлорных каналов и внутриклеточной концентрации ионов хлора в регуляции сократительной активности ГМК. Выявление существующих взаимосвязей в объем-зависимой системе рефляции сократительной функции ГМК имеет важное фундаментальное значение и может служить теоретической базой для создания новых подходов при коррекции патологических состояний, связанных с Нарушением сократительной функции гладких мышц.

iv* и* t*

» «.. * -¡-.ч' 4M 4

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучить роль объема клеток и объем-зависимых механизмов в регуляции сократительной активности гладких мышц аорты крысы.

ЗАДА ЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследовать динамику механического напряжения гладкомышечных сегментов аорты крысы, объема гладкомышечных клеток линии WKY-7 и активности Ыа+,К+,2СГ котранспорта в моделях изменения объема клеток.

2. Изучить роль №+,К+,2СГ котранспорта в сократительных реакциях сосудистых гладкомышечных сегментов при активации щ-адренергических рецепторов, аппликации ангиотензина П, гиперкалиевой деполяризации мембраны и в моделях набухания и стрикции клеток.

3. Исследовать динамику внутриклеточной концентрации ионов хлора при игибировании №+,К+,2СГ котранспорта в интактных и активированных стрикцией ГМК изолированных сегментов аорты.

4. Выявить роль хлорной проводимости мембраны в обеспечении сократительных ответов сосудистых сегментов при активации агадренергических рецепторов, деполяризации мембраны и изменении объема клеток.

5. Провести сравнительный анализ особенностей оперирования Са2+-зависимых механизмов регуляции сократительных ответов гладкой мышцы сосудов при активации агадренергических рецепторов, деполяризации и изменениях объеМа клеток.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Изменение объема сосудистых гладкомышечных клеток при пипоосмоти-ческом набухании, гипер- и изоосмотической стрикции ведет к развитию сократительных реакций гладких мышц аорты крысы. Основными механизмами объем-зависимой регуляции сократительной активности сосудистых гладких мышц являются 1) активация №+,К+,2СГ котранспорта и 2) увеличение внутриклеточной концентрации ионов С1\

2. Ключевую роль в обеспечении сокращений сосудистых гладких мышц при гипоосмотическом набухании, гиперкалиевой деполяризации мембраны и стимуляции а гадренорецепторов играют неравновесное распределение ионов СГ, деполяризующие хлорные токи и потенциал-зависимый вход Са2+.

3. При уменьшении объема клеток снижается потенциал-зависимый вход 45Са в изолированные ГМК и существенно изменяется оперирование Са2+-зависимых механизмов регуляции сократительных ответов гладкой мышцы сосудов при деполяризации мембраны и активации агадренорецепторов. Сократительные ответы, индуцированные гипер- и изоосмотической стрикцией клеток, лишь частично зависят от внеклеточного кальция. Они устойчивы к блокаторам потенциал-зависимых Са2+ каналов, сохраняютя после длительной предобработки ЭГТА-содержащим бескальциевым раствором и обусловлены увеличением внутриклеточ-

ной концентрации ионов СГ, опосредованным №+,К+,2СГ котранспортом.

4. Регуляторное увеличение объема клеток, опосредованное активацией Ыа+,К+,2СГ котранспорта, является одним из механизмов, обеспечивающих транзи-торный характер сокращений гладких мышц в модели изоосмотической стрикции клеток.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые показано, что изменение осмолярности инкубационной среды ведет к сокращению сосудистых гладких мышц. При гипоосмотическом набухании и изоосмотической стрикции клеток сокращения имеют транзиторный характер, а в случае гиперосмотического сжатия развивается поддерживаемый сократительный ответ.

Впервые продемонстрирована согласованность динамики изменения механического напряжения сосудистых сегментов и объема клеток в моделях гипоосмоти-ческого набухания, гипер- и изоосмотической стрикции.

Впервые представлены данные, характеризующие различия клеточных механизмов индукции и поддержания сократительных ответов ГМ при набухании и стрикции клеток. Показано, что гипоосмотическое набухание клеток ведет к активации входа кальция по Са2+ каналам Ь-типа. При гипер- и изоосмотической стрикции уменьшается потенциал-зависимый вход 4 Са, а сокращения, индуцированные стрикцией, мало чувствительны к действию антагонистов входа Са2+ и лишь снижаются по величине в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе.

Впервые исследована роль Ма+,К+,2СГ котранспорта в сократительных реакциях сосудистых гладких мышц, индуцированных изменениями клеточного объема. Гиперосмотический раствор трехкратно увеличивал активность котранспорта в течение всего времени эксперимента. В отличие от этого при изоосмотической стрикции начальное повышение активности 1ЧКСС, сменялось ее снижением до контрольного уровня. Транзиторный характер сокращений гладких мышц в модели изоосмотической стрикции клеток обусловлен регуляторным увеличением объема клеток вследствие активации №+,К+,2СГ котранспорта.

Впервые установлено, что при гипер- и изоосмотической стрикции клеток резко уменьшается величина сокращений ГМ, индуцированных гиперкалиевой деполяризацией и агадреномиметиком фенилэфрином. Напротив, гипоосмотическое набухание клеток, не изменяя реактивности сегментов к ФЭ, ведет к потенцированию сократительных ответов на действие гиперкалиевого раствора.

Представлены новые данные о механизмах регуляции сокращений ГМ при стрикции клеток, оперирующих с участием На+,К+,2СГ котранспортера. Установлено, что выключение буметанид-чувствительнош №+,К+,2С1" котранспорта снижает внутриклеточную концентрацию ионов хлора как в интактных, так и подвергнутых стрикции сегментах аорты.

Впервые установлено, что выключение буметанид-чувствительнош №+,К+,2СГ котранспорта подавляет сократительные ответы сосудистых гладких мышц при умеренной, но не субмаксимальной деполяризации мембраны.

Впервые выявлена роль хлорной проводимости мембраны в сокращениях, вызванных изменением объема клеток. Буметанид угнетает сокращения сосудистых гладких мышц при умеренной, но не субмаксимальной деполяризации мембраны. Сократительные ответы на деполяризацию, действие ФАВ и стрикцию подавляются при блокировании Са2+-активируемых и объем-зависимых хлорных каналов. Это свидетельствует о ключевой роли изменений внутриклеточной концентрации СГ и хлорной проводимости в реализации вышеперечисленных воздействий на ГМК.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНА ЧИМОСТЬ

Результаты исследования являются важным вкладом в развитие фундаментальных знаний о роли объема, ионного транспорта и ионных каналов в регуляции функций сосудистых гладких мышц. Существенно дополнены представления об участии объем-чувствительного ионного транспорта в регуляции сопряжения возбуждения-сокращения сосудистых гладкомышечных клеток. Установлено, что вклад Ыа+,К+,2СГ котранспорта в обеспечение реакций ГМ на уменьшение объема клеток реализуется через увеличение внутриклеточной концентрации ионов хлора.

Сокращение в гипоосмотической среде обусловлено оперированием классических кальций-зависимых механизмов и индуцируется СГ-зависимой деполяризацией мембраны и открыванием Са2+-каналов Ь-типа. Сократительный ответ ГМ на стрикцию мало чувствителен к наружному кальцию и действию блокаторов потенциал-зависимого входа ионов кальция.

Полученные данные фундаментального характера открывают новые подходы к объяснению сосудистых реакций при гипертонической болезни и патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями водно-солевого обмена или метаболических процессов в организме, а также механизмов действия широко применяемых в клинической практике петлевых диуретиков. Результаты исследования расширяют научную базу для создания новых средств лечения заболеваний, связанных с дисфункцией сосудов и органов, сформированных гладкими мышцами.

Основные положения работы используются в курсах лекций и практических занятиях, проводимых на кафедре биофизики и функциональной диагностики, на кафедре нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета, на кафедре физиологии человека и животных Кемеровского государственного университета и на кафедре нормальной физиологии Омского медицинского университета.

Методические приемы и новые данные используются в научных исследованиях, проводимых на кафедрах биофизики и функциональной диагностики и нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета, а также на кафедре нормальной физиологии Омского медицинского университета. Областями применения полученных данных являются физиология, биофизика, фармакология.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 237 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы собственных результатов и их обсуждения и заключения. Библиография включает 676 ссылок, в том числе 27 - на работы отечественных авторов и 649 - зарубежных. Работа иллюстрирована 41 рисунком и включает 16 таблиц.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные результаты диссертации обсуждены на всероссийских и международных конгрессах: • 3 съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока, 1997 (Новосибирск). • VIII Национальный Конгресс по болезням органов дыхания, 22—24 окт., 1998 (Москва). • IX Национальный Конгресс по болезням органов дыхания, 31 окт-3 ноября 1999 (Москва). • Межрегиональная научная конференция Сибири и Дальнего Востока, посвященная 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова, 25-26 ноября 1999 (Томск). • Международный конгресс «Научная молодежь на пороге XXI века», 18-19 мая 2000 (Томск). • II Российская конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», 24-28 апреля 2001 (Москва). • 18 Съезд физиологического общества им. И.П. Павлова, 2001 (Казань). • IV Съезд физиологов Сибири с международным участием, 2001 (Новосибирск). • The 11"1 European Meeting on Hypertension, June 13-17, 2001 (Milan, Italy). • Ш международный конгресс молодых учёных и специалистов «Науки о человеке», 16-17 мая 2002 (Томск). 12 Национальный конгресс по болезням органов дыхания, 11-15 ноября, 2002 (Москва). • The 19111 scientific Meeting of the International Society of Hypertension, and 12й1 European Meeting on Hypertension, June 23-27, 2002 (Prague, Czech Republic). • The 13А European Meeting on Hypertension, June 13- 17, 2003 (Milan, Italy). • 20ш Scientific Meeting of the International Society of Hypertension, February 15-19,2004 (Slo Paulo - SP - Brazil). • X Международный Симпозиум «Биологическая подвижность» посвященный памяти академика Г.М. Франка (1904-1976), 23 мая-1 июня 2004 (г. Пущино, Московская область). • Симпозиум с международным участием «Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функций гладких мышц», 28-29 мая, 2004 (г. Томск). • The 14й1 European Meeting on Hypertension, June 13-17, 2004 (Paris, France). • Canadien Cardiovascular Congress. October 23-27, 2004. Calgary, Canada.

Основные результаты диссертации опубликованы в 53 печатных работах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объект исследования. Объектами исследования служили изолированные де-эндотелизированные гладкомышечные сегменты аорты белых крыс и культураль-ные сосудистые гладкомышечные клетки, полученные из аорты крыс линии Wistar-Kyoto (WKY).

Подготовка гладкомышечных сегментов аорты крысы для исследования сократительной активности. Для исследования сократительной активности ис~

пользовали изолированные гладкомышечные сегменты аорты белых крыс в возрасте 11-13 недель. После внутриперитонеальной анестезии нембуталом (70мг/кг) проводили декапитацию, выделяли аорту, помещали ее в физиологически сбалансированный солевой раствор, с помощью хирургических ножниц отпрепаровывали жировую и соединительную ткань и выделяли сегменты шириной 2-3 мм. Эндотелий удаляли механически, вращением деревянного шпателя в просвете сегмента в течение 1 минуты непосредственно перед выполнением эксперимента. Отпрепарированные де-эндотелизированные сегменты использовали немедленно, а оставшуюся часть отпрепарированной аорты сохраняли в холодильнике при 4°С. В предварительных экспериментах было показано, что 24-часовое хранение аорты при 4°С не влияет на сократительные свойства гладких мышц.

Исследование сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты крысы. Для исследования сократительной активности гладкомышечные сегменты фиксировали с помощью стальных крючков в камере объемом 1 мл, изготовленной из органического стекла. Камеру заполняли физиологическим раствором и термостатировали при 37°С в условиях проточной перфузии (1 мл/мин).

Гладкомышечные сегменты, закрепленные в перфузионой камере, предварительно растягивали нагрузкой 50-100 мН, после чего с помощью шелковой нити фиксировали на штоке электромеханического преобразователя (механотрон МХ2Б, Москва). Сегменты отмывали физиологическим раствором в течение 40-50 минут при РН=7.4 (37"С), после чего дважды вызывали гиперкаливое сокращение путем эквимолярного замещения NaCl на KCl, 30 мМ. Далее в зависимости от целей эксперимента использовали модифицированный физиологический раствор с измененным ионным составом или содержащий физиологически- или осмотически-активные вещества в отсутствии или присутствии тестируемых соединений. В качестве непроникающего биологически неактивного осмолита использовали сахарозу (50-300 мМ). Гиперосмотическую стрищию вызывали добавлением 150 мМ сахарозы. Изоосмотическую стрищию вызывали восстановлением ионного состава раствора после 60-минутной инкубации сегментов в гипоосмотической среде, содержащей 40 мМ NaCl. Для исследования сократительной активности сегментов в модели гипоосмотического набухания сегменты помещали в раствор с концентрацией NaCl равной 40 или 70 мМ.

Амплитуда сократительных ответов гладкомышечных сегментов рассчитывалось в процентах от амплитуды гиперкалиевого (эквимолярное замещение 30 мМ NaCl на KCl) или контрольного сокращения иной природы в зависимости от целей эксперимента. Изменения механического напряжения регистрировали с помощью XY рекодера (Carl Zeiss, Jena, Germany).

Получение культуры сосудистых гладкомышечных клеток линии WKY-7. Для культивирования сосудистых ГМК, полученных из аорты крыс линии Wistar-Kyoto (WKY), была использована стратегия low-density seeding с целью выделить линию клеток, обладающих наиболее высокой экспрессией специфичного для гладких мышц а-актина, белка SM22 и киназы легких цепей миозина (КЛЦМ). Линия клеток WKY-7 обладала наибольшей чувствительностью к ангиотегаину II и эндо-телину-1, измеренной по уровню митоген-активированного фосфорилирования про-теинкиназы ERK1/2. Клетки линии WKY-7 росли в течение 48-72 часов в среде

DMEM, содержащей эмбриональную сыворотку и сыворотку новорожденных телят (10% каждой), глутамин (2 мМ), пенициллин (100 Ед/мл) и стрептомицин (100 мг/мл). Для синхронизации культуры и прекращения пролиферативной активности, перед экспериментами клетки инкубировали в течение 48 часов в присутствии 0.2% телячьей сыворотки.

Измерение активности котранспорта (NKCC). Активность

NKCC измеряли как буметанид-чувствительный компонент входа 86Rb. Клетки WKY-7, осажденные в 24-ячеистые планшеты, дважды промывали аликвотирован-ными 2-мл порциями физиологического раствора. После аспирации среды, добавляли 0.25 мл физиологический раствор, содержащий 1 мкСл/мл HRb и 1 мМ уабаина в присутствие или в отсутствие буметанида. После 5-минутной инкубации при 37°С, накопление изотопа останавливали добавлением 2 мл ледяной среды W, содержащей 100 мМ MgCl2 и 10 мМ HEPES-TRIS буфер (рН 7.4). Радиоактивность инкубационной среды и лизата клеток были измерены с помощью жидкого сцинциляцион-ного анализатора, а значение входа

нМУмл протеина-5мин) было рассчитано как v=A/am, где А - радиоактивность образцов (cpm), а - специфическая радиоактивность

К+ (^Rb)

в среде (cpm/нМ), ш - содержание протеинов, измеренное модифицированным методом Lowry [Orlov et al., 1996].

Измерение объема WKY-7 клеток. Объем внутриклеточной воды измеряли как пространство, доступное для [14С]-меченой мочевины [Orlov et al., 1996], рассчитанное как V=AC/Amm, где А^ - радиоактивность клеток после 30-минутной инкубации с мочевиной, [14С]-меченой 2 mkCî/мл (dpm), Am - радиоактивность инкубационной среды (dpm/мл), m - содержание протеинов в лизате клеток (мг).

Измерение внутриклеточного СГ в WKY-7 клетках. Содержание внутриклеточного СГ в WKY-7 измерялось через поддерживаемое распределение 36С1 по методу [Orlov et al., 1996]. Для расчета [СГ]„ объем внутриклеточной воды оценивался в параллельных экспериментах по протоколу, приведенному выше. Чтобы измерить содержание СГ, в сосудистых ГМК, сегменты предварительно инкубировали в физиологическом растворе, содержащем 2 mkCï/мл 36С1. В ряде экспериментов, буме-танид и сахароза добавлялись в последние 30 мин инкубации. Затем сегменты омывали 3x50 мл аликвотами ледяного физиологического раствора и солюбилизировали в сцинциляционной смеси, содержащей Triton XI00rtoluene 1:2, 4 г/л 2,5-дифенил-1,3,4-оксадиазол (РРО) и 0.1 г/л 1,4-бис[5-фенил-2-оксазолил]-бензен; 2-2'-з-фенилен-бис[5-фенилоксазол] (РОРОР). Внутриклеточное содержание СГ (нМ/мг) рассчитывалось как [СГ],=А/атл, где А - радиоактивность образцов (cpm), а - специфическая радиоактивность СГ в среде (cpm/нМ), m - влажный вес сегментов (мг), измеренный перед инкубацией.

Измерение активности потенциал-зависимых

Cet1*

каналов в WKY-7 клетках. Активность потенциал-зависимых Са2+ каналов оценивалась как верапамил-или нифедипин-чувствительный компонент входа 45Са. Культуральные клетки WKY-7, помещенные в 24-ячеистые планшеты, преинкубировали в течение 30 мин в физиологическом растворе. Затем среду аспирировали и добавляли физиологический раствор, содержащий 0.1 мМ СаС12 в присутствие или отсутствие нифедипина и верапамила. Накопление изотопа инициировали добавлением 0.25 мл физиологического раствора такого же состава, содержащего 3 mkCï/мл 45Са, и прекращали че-

рез 5 мин, как описано выше. Чтобы индуцировать деполяризацию мембраны, увеличивали содержание KCl до 60 мМ, эквимолярно заменяя NaCl. Исследование радиоактивности сред инкубации и лизата клеток проводилось с помощью сцинциля-ционного анализатора.

Растворы и реактивы. Физиологический раствор содержал (мМ): 120.4 NaCl, 5.9 KCl, 2.5 CaCb, 1.2 MgCl2, 5.5 глюкоза, 15 C4H,,03N [tris(oxymethyl)-aminometan] (pH 7.4; 316.4 мосМ). Бескальциевый раствор содержал 0.5 мМ ЭГТА и 3.6 мМ MgCl2. С целью избежать влияния С17НС03" обмена на внутриклеточную концентрацию СГ, физиологический раствор готовили без бикарбонат-анионов во всех экспериментах. РН корректировали добавлением 0.1 N HCl. Осмолярность среды повышали добавлением 50 - 300 мМ сахарозы, как непроникающего осмолита (366.4 -466.4 мосМ). Гипоосмотический раствор готовили, снижая концентрацию NaCl (40.4 - 70.4 вместо 12.4 мМ NaCl, 156.4 - 216.4 мосМ). При исследовании потоков 86Rb в WKY-7 в бесхлорном физиологическом растворе, KCl, NaCl и MgCl2 заменяли глю-конатом натрия, глюконатом калия и MgSC>4, соответственно, в то время как СаС12 не добавляли. Предварительно было показано, что отсутствие Са2+0 не влияло на объем-зависимую регуляцию уабаин-резистентных потоков S6Rb в сосудистых ГМК [Orlov et al., 1992]. При исследовании влияния селективной нормализации ионного состава раствора (Na+, Cl") на сократительные реакции сегментов использовали хо-линхлорид и глутамат натрия.

Используемые реактивы. Реактивы были получены из SIGMA (St. Louis, Mo., USA) за исключением ЭГТА, РОРОР, РРО (Serva, Heidelberg, Germany), верапамила (Orion, Helsinki, Finland), нифлумовой кислоты (Gedeon Richter) и клеточных сред (Gibco BRL, Gaithersburg, Mo., USA). Радиоактивные реагенты были получены от New England Nuclear (Boston, Mass.) и Amersham (Mississauga, Ont.). Маточные растворы готовили в DMSO, нифедипин растворяли в 70% этаноле. Ни DMSO, ни этанол в максимальной концентрации 0.1% не влияли на исследуемые параметры.

Приборы и оборудование. Механографическая установка изготовлена из органического стекла и представляет собой платформу с теплообменником, в верхней части которого находится кювета объемом 1 мл. В стене кюветы закреплен крючок, выполненный из медицинской стали. В кювете постоянно перфузируется термоста-тируемый (37°С) физиологический раствор со скоростью 1 мл/мин. Сигнал, поступающий с усилителя, регистрировался на самописце «XY Recorder Endim 620.02».

Статистическая обработка. Результаты представлены как среднее арифметическое ± среднеквадратичное отклонение (а) и обработаны с помощью программного пакета Statistika с использованием непараметрического критерия Мана-Уитни или t-теста для зависимых образцов (t-test for dependent samples). Для оценки согласованности изменений ряда параметров в моделях стрикции клеток с помощью программного пакета Statistika рассчитывались корреляционные коэффициенты для пар: 1) объем WKY-7 клеток — активность NKCC; 2) активность NKCC — механическое напряжение сегментов; 3) объем WKY-7 клеток — механическое напряжение. Достоверными считали различия при значении р<0.05.

РЕЗУЛЪ ТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток

Изменение осмолярности среды инкубации является перспективным методическим подходом для активации объем-чувствительного ионного транспорта и выяснения роли систем поддержания клеточного объема в регуляции клеточных функций. Это позволяет модулировать активность Na+,K+,2Cr котранспорта и других объем-чувствительных ионтранспортирующих систем клетки без дополнительного воздействия какими-либо биологически активными соединениями. Первым этапом исследования объем-чувствительных механизмов в регуляции сократительной активности сосудистых ГМК было изучение сократительных ответов изолированных гладкомышечных сегментов аорты крысы при моделировании гиперосмотической и изоосмотической стрикции и гипоосмотического набухания клеток.

3.1.1. Сокращение гладкомышечных сегментов аорты в модели гиперосмотической стрикции клеток. С целью установить влияние гиперосмотически-индуцированного снижения клеточного объема на механическое напряжение (МП) сосудистых сегментов, был исследован эффект модифицированного физиологического раствора, содержащего 50-300 мМ сахарозы в качестве непроникающего ос-молита. Повышение осмолярности раствора (25-600 мосМ) приводило к развитию воспроизводимого дозозависимого сокращения (Рис. 1). В качестве основного исследуемого параметра во всех последующих экспериментах была выбрана амплитуда сокращения сегментов при добавлении 150 мМ сахарозы, вызывающей субмаксимальное повышение тонуса. Амплитудные и скоростаые параметры сокращения оставались стабильными, по крайней мере, при трехкратном повторении аппликации 150 мМ сахарозы с последующим отмыванием в течение 30 минут между ними. Амплитуда сокращения на 20 минуте действия 150 мМ сахарозы составляла 51.8±9.0% (п=78) по сравнению с величиной контрольного гиперкалиевого сокращения.

3.1.2. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в модели изоосмотической стрикции клеток. С целью изучить влияние альтернативного способа снижения объема сосудистых ГМК на их сократительную активность был исследован эффект так называемой изоосмотической стрикции клеток, которую вызывали восстановлением осмолярности среды после длительного гипоосмотического воздействия. Гладкомышечные сегменты экспонировали в гипоосмотиче-ской среде в течение 60 минут с целью вызвать потерю внутриклеточных осмолитов [Mongin and Orlov, 2001]. После этого сегменты возвращали в нормоосмотический раствор. В этой модели восстановление ионного состава раствора приводило к резкой транзиторной активации Na+,K+,2C1" котранспорта (NKCC), что является одним из основных механизмов регуляторного увеличения объема сосудистых ГМК [Mongin and Orlov, 2001] и что было продемонстрировано с использованием культу-ральных клеток линии WKY-7 при запуске изоосмотической стрикции с помощью манипуляций, аналогичных использованным в данной серии экспериментов (рис. 5С). Восстановление осмолярности раствора до 140.4 мМ NaCl после 60-минутной инкубации в гипоосмотическом растворе, содержащем 40.4 мМ NaCl, во всех случаях приводило к развитию транзиторного сокращения, длительность которого со-

ставляла 38.8±1.6 мин, а амплитуда - 21.6±8.7% по сравнению с величиной гиперкалиевой контрактуры (п=8) (рис. 2).

3.1.3. Сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели ги-поосмотического набухания клеток. Снижение осмотического давления физиологического раствора при уменьшении содержания в нем ЫаС1 до 40.4 и 70.4 мМ вело к быстрому развитию транзиторного сокращения сегментов аорты крысы (рис. 3). Амплитуда транзиторного сокращения составила 59.8%±12.3% (п=20) и 75.7±8.9% (п=18) по сравнению с величиной гиперкалиевого сокращения, а длительность -25.7±3.5 мин и 40±4.8 мин, соответственно.

3.2. Изменения объема ЦП.У-7 клеток при стрикции и набухании

3.2.1. Изменения объема Ц?КУ-7 клеток при гиперосмотической и изоос-мотической стрикции. С целью изучить модуляции объема клеток в условиях, соответствующих моделированию стрикции на изолированных сегментах аорты, было использовано косвенное определение содержания внутриклеточной воды, являющейся главным маркером объема клеток. 10-минутная инкубация клеток линии \УКУ-7 была достаточна для установления равновесного распределения [,4С]-меченой мочевины между внутриклеточной средой и средой инкубации. Перенос клеток в гиперосмотическую среду, содержащую 150 мМ сахарозы быстро снижал объем ,№КУ-7 клеток на —20%. Данное снижение объема оставалось поддерживаемым и не претерпевало существенных изменений в течение последующих 40 минут (Рис. 4, А, кривая 2). Рисунок В показывает зависимость модуляции клеточного объема от осмолярности среды инкубации, изменения которой были обусловлены увеличением концентрации сахарозы с 50 до 150 мМ._

20(Н

? 50-

КС1

Га

Рис. 1

Сахароза. мМ 50 100 200 300 +

Рис.2

30 «м*

. ка I

50-1

5 0

Рис. 3

Г К1аС1 '

Рис. 1. Влияние гиперосмотического раствора на механическое напряжение сегментов аорты крысы.

Рис. 2. Динамика механического напряжения сегментов аорты крысы в модели изоосмо-тической стрикции (пояснения в тексте). Рис. 3. Влияние гипоосмотического раствора на механическое напряжение сегментов аорты крысы.

По оси ординат - механическое напряжение (мН), по оси абсцисс - время (час).

Для исследования изменения объема клеток в модели изоосмотиче-

ской стрикции, был применен протокол, обычно используемый для подобных исследований [Ог1оу е1 а1., 1992; 1996; 2004] и соответствующий схеме экспериментов, выполненных на гладкомышечных сегментах аорты. Для этого клетки предварительно инкубировали в условиях глубокого гипоосмоса (40.4 мМ ЫаС1) в течение 60 минут, а затем осмолярность и состав раствора восстанавливали до контрольных значений (120.4 мМ ЫаС1). Во время предобработки в гипоосмотическом растворе запускалась потеря клетками внутриклеточных осмолитов, что при восстановлении осмолярности раствора приводило к осмотически-обусловленному выходу воды, снижению клеточного объема и активации механизмов регуляторного увеличения объема. Действительно, было обнаружено, что в данной модели стрикции объем WKY-7 клеток транзиторно снижался и через -30 минут после переноса в изоосмо-тическую среду восстанавливался до исходных значений (Рис. 4С).

Динамика изменения объема клеток WKY-7 и развития сократительных ответов сегментов аорты в соответствующих моделях стрикции проявляли существенное сходство (рис. 6 А, Б). Кривая механического напряжения сегментов была незначительно смещена вправо по сравнению с модуляциями объема клеток, что, очевидно, обусловлено меньшей скоростью диффузии растворов с измененным составом в пределах стенки сосудистых сегментов по сравнению со скоростью диффузии в культуральной среде.

3 2

2 8

2.6-

* 2.4-

2.2

2.0-

Рис. 4. Модуляции клеточного объема при гиперосмотическом (А, Б) и изоосмотиче-ском (В) сжатии клеток линии \VKY-7.

А. Кинетика модуляции объема клеток в контрольной (кривая 1) и гипертонической сре-

В момент времени, указанный стрелкой было добавлено 0.5 мл гиЛёросмотиче-ского (150 мМ сахарозы) раствора (кривая 2).

Б. Зависимость клеточного объема от осмолярности среды инкубации. В. Кинетика модуляции объема клеток при изоосмотическом сжатии. В момент времени, указанный стрелкой, среда инкубации была аспирирована, и был добавлен изо-осмотическийраствор (120.4 мМИаС1), содержащий [,4С]-меченую мочевину._

20 40 Мин

60 о

50 100 150 0 Сахароза, мМ

3.2.2. Активность Na,Jt,2Ct котранспорта в клетках WKY-7 в моделях гиперосмотической и изоосмотической стрикции. Как известно, одним из ключевых механизмов стабилизации объема клеток при стрикции, вызванной абсолютным или относительным увеличением осмотического давления среды, является активация NKCC [Russell, 2000]. Несмотря на то, что резкая активация NKCC характерна как для гипер-, так и для изоосмотической стрикции, особенностью сосудистых ГМК по сравнению с другими типами клеток является то, что NKCC опосредует ре-гуляторное увеличение объема только в случае изоосмотической, но не гиперосмотической, стрикции. Более того, при гиперосмотическом сжатии сосудистых ГМК регуляторного увеличения объема не наблюдается вообще. Для оценки возможного вклада NKCC в сократительные реакции сегментов при стрикции, была исследована динамика изменения активности этого котранспортера в WKY-7 клетках с учетом схем экспериментов, использованных в работе с сегментами аорты. Активность NKCC оценивалась как буметанид-чувствительный компонент накопления аналога К+ в отношении мембранного транспорта.

В присутствии ингибитора №+,К+-АТРазы уабаина добавление 10 мкМ буме-танида снижало значение накопления К+ (86Rb) в ~3 раза (Рис. 5А). Дальнейшее повышение концентрации этого соединения до 100 мкМ незначительно влияло вход К+ (86Rb) (Рис. 5А, линия 3). Эти данные согласуются со значением К, для этого соединения в пределах от 0.2 до 2 мкМ [Russell, 2000]. Повышение осмолярности среды при добавлении 150 мкМ сахарозы вело к -3-кратной активации NKCC (Рис. 5В, кривая 1). Дальнейшее повышение осмолярности среды ингибировало активность NKCC. Угнетение NKCC, вероятно, обусловлено рецинрокным ингибированием котранспортера внутриклеточным СГ [Russell, 2000]. Кроме того, повышение осмолярности среды снижало (уабаин+буметанид)-резистентный вход К+ (86Rb) с ~7 до 2 нМ-(мг протеина)"'-5 мин"1 (Рис. 5Б, кривая 2). Этот эффект полностью исчезал в отсутствие внеклеточного СГ, что указывает на подавление базальной активности К-С1 котранспорта в гиперосмотической среде (Рис. 5Б, кривая 3). Несмотря на то, что активность К-С1 котранспорта также подавляется петлевыми диуретиками, константа ингибирования К-С1 котранспорта буметанидом имеет более высокие значения, чем для NKCC, и составляет ~60 мкМ в эпителии почек кролика [Gillen et al., 1996] и ~190 мкМ в гипоосмотически-активированных клетках почечного эпителия человека линии НЕК-293 [Gillen and Forbush, 1999].

Повышение активности NKCC сохранялось до 30-ой минуты инкубации клеток в гиперосмотическом растворе. В противоположность этому, изоосмотическая стрикция вела к транзиторной активации этого переносчика, которая полностью исчезала к 30-ой минуте после переноса клеток из гипоосмотической в изоосмотиче-скую среду (рис. 5В, кривая 3).

Полученные сведения о динамике изменения объема и активности NKCC клеток линии WKY-7 согласуются с данными об изменениях механического напряжения сегментов в соответствующих моделях стрикции клеток. Коэффициенты корреляции для пар: 1) объем WKY-7 клеток — активность NKCC, 2) объем WKY-7 клеток — амплитуда сокращения сегментов и 3) активность NKCC — амплитуда сокращения сегментов составляли 0.94, 0.94, 0.90 в случае гиперосмотической стрикции и 0.94, 0.61, 0.65 при изоосмотической стрикции, соответственно (р<0.05).

10 t* 20 Мин

—i-1-1—

50 100 150 Мин Сахароза, мМ Рис. 5. Объем-зависимая модуляция NKCC в сосудистых ГМК. А. Влияние буметанида на вход 1С f6Rb). Б. Зависимость активности NKCC (кривая 1) и буметанид-резистентного компонента входа S6Rb (кривые 2 и 3) от осмо-лярности среды инкубации. В. Кинетика модуляции активности NKCC при гиперосмотическом (2) и изоосмотическом (3) сжатии клеток. *р<0.001 при сравнении со значениями кривой 3._________

Полученные результаты показали, что NKCC играет особую роль в регуляции сокращения гладкомышечных сегментов в модели изоосмотической стрикции. Бло-катор NKCC буметанид (10 мкМ), ингибировал NKCC, подавлял регуляторное увеличение объема и пролонгировал сокращение сегментов. Этот факт свидетельствует о первичной роли снижения объема клеток в развитии сокращения гладкомышечных сегментов в модели изоосмотической стрикции.

Механизм функциональной связи клеточного объема, активности NKCC и сократительной активности ГМК, по всей видимости, включает следующие этапы:

1) индуцированную стрикцией активацию сенсора клеточного объема,

2) изменение активности объем-чувствительной серин-треониновой киназ(ы) hsgk [Waldegger et al., 1997], препятствующей осмотическому сжатию клеток [Wagner et al., 2000],

3) опосредованную киназой hsgk активацию NKCC [Lang, knockout mouse], сопряженную с фосфорилированием молекулы котранспортера [Russell, 2000],

4) NKCC-зависимое увеличение [СГ](,

5) развитие сокращения гладкомышечных сегментов или в результате СГ-опосредованной деполяризации мембраны (происходящей в случае активации СГ каналов), или в результате запуска внутриклеточных СГ,-зависимых регулятор-ных каскадов. Последнее предположение основано на данных, подтверждающих существование С1",-чувствительных каскадов, вовлекающих СГ,-зависимые протеиновые киназы в регуляции активности ряда мембранных протеинов респираторного эпителия [Treharne KJ et al., 1994; Muimo R et al., 1998] и GABAA рецепторов нейронов коры головного мозга [Lanius RA et al., 1993].

лях изоосмотической (А) и гиперосмотической (Б) стрикции.

Уменьшение объема клеток рассчитывалось как разность между контрольными

и опытными значениями.__

Гипоосмотическое набухание (70.4 мМ ЫаС1) вело к транзиторному увеличению объема клеток, максимальное значение которого составило 3.68±0.22 мкл/мг протеина. После 45 минут инкубации в гипоосмотической среде наблюдалось лишь легкое увеличение объема до 3.03±0.16 мкл/мг протеина по сравнению с 2.85±0.18 мкл/мг протеина в контроле. Полученные данные согласуются с динамикой транзи-торного сокращения сегментов аорты в гипоосмотическом растворе.

3.3. Изучение вовлечения Ыа+,К^,2СГ котранспорта в сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты крысы в моделях изменения клеточного объема, при аппликации БАВ и гиперкалиевой деполяризации мембраны

Как было показано, модуляция активности NK.CC является важным механизмом регуляции объема ГМК. С целью дальнейшего исследования роли 1ЧКСС в сократительной регуляции сосудистых ГМК при моделировании набухания и стрикции и при их активации с помощью БАВ и гиперкалиевого раствора, был исследован эффект селективного блокатора ИКСС буметанида на развитие сокращений изолированных сегментов аорты крысы при действии контрактильных стимулов различной природы.

3.3.1. Роль Ш+,К*,2СГ котранспорта в сокращениях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных модуляциями клеточного объема

3.3.1.1. Роль 1Яа,1?,2СТ котранспорта в развитии гиперосмотически-индуцированного сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы. Согласно полученным данным, гиперосмотическое воздействие ведет к стрикции клеток, сопровождающейся поддерживаемой активацией №£СС. Предобработка сегментов в течение 5, 15, 30 и 60 минут селективным ингибитором этого переносчика буметанидом в концентрации 10-100 мкМ снижала амплитуду гиперосмотического

сокращения. Степень ингибирующего действия буметанида зависела от времени предобработки и достигала максимальных значений после 30 мин инкубации (рис. 7,

X "5 г

ш 150 £

8 125 §

с" 100 ?

§ "

Н 50 у

1 " 8 „

2 °

X "5

О) 150 х

§ 125 §

С 100 | 75

Ф 50

1 24 §

5 о

| n301,40 мм

N801,120ММ

~Г"

Рис. 7. Сокращение гладкомышеч-ных сегментов аорты крысы в модели гиперосмотической стрикции клеток в отсутствии (кривая 1, сплошная линия) и присутствии 10-мкМ (кривая 2, пунктир) или 100-мкМ буметанида (кривая 3, пунк-

Рис. 8. Сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели изоосмоти-ческой стрикции клеток в отсутствии (кривая 1, сплошная линия) и присутствии 10-мкМ буметанида (кривая 2, пунктир). Буметанид добавлялся за 5 минут до восстановления ионного состава раствора.

тир).

По оси ординат - механическое напряжение (мН), по оси абсцисс — время (час).

3.3.1.2. Роль №а,К*,2СТ котранспорта в развитии сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели изоосмотической стрикции клеток.

Транзиторная активация NK.CC является основным механизмом регуляторного увеличения объема при изоосмотической стрикции ГМК. Для выявления вклада этого переносчика в развитие транзиторного сокращения, развивающегося в модели изо-осмотического снижения объема, был исследован эффект селективного блокатора №£СС буметанида. 5-60-минутная предобработка буметанид ом (10 мкМ) существенно удлиняла сокращение сегментов (р<0.005, таблица 1) независимо от времени предобработки. При этом имелась тенденция к увеличению амплитуды сокращения (рис. 8, таблица 1). Полученные данные подтверждают важную роль клеточного объема в развитии сокращения ГМК при изоосмотической стрикции.

Таблица 1. Эффект 5-минутной предобработки буметанидом на амплитуду и длительность сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели изо-

Амплитуда сокращения, % Длительность сокращения, мин

Контроль 21.6±8.7 (п=8) 38.8±1.6(п=8)

Буметанид, 10 39.5±14.7 (п=6) мкМ 143.8±8.5* (п=5)

3.3.1.3. Роль Na,tt,2CT котранспорта в развитии гипоосмотически-индуцированного сокращения гладко-мышечных сегментов аорты крысы.

Предобработка сегментов блокатором NKCC буметанидом (10 мкМ) существенно снижала величину гипоосмоти-ческм-индуцированного сокращения, вызванного снижением наружной концентрации NaCl до 70.4 мМ. Подавляющее действие 10-мкМ буметанида усиливалось при увеличении времени инкубации с 10 до 30 мин. В последнем случае происходило полное подавление гмиоослмияыческы-индуцированного сокращения, так же как и в случае 15-мин предобработки 100-мкМ буметанидом (рис. 9). Полученные данные свидетельствуют о вовлечении NKCC в обеспечении сократительной активности сосудистых ГМК при гипоосмотическом набухании клеток.

По всей видимости, основным NKCC-опосредованным механизмом, участвующим в гипоосмотически-гтдуциропатюм сокращении, является базальное поддержание неравновесного электрохимического потенциала ионов СГ. В этом случае гипоосмотическая активация объем-чувствительных хлорных каналов ведет к деполяризации мембраны и активации потенциал-зависимых Са2+ каналов с последующим развитием классического кальций-зависимого сокращения. В связи с предложенной гипотезой, транзиторный характер сокращения обусловлен несколькими факторами: 1) ингибированием NKCC в гипоосмотической среде [Russell, 2000], 2) снижением электрохимического градиента хлора в результате гипоосмотической активации К-С1 котранспорта [Adragna et al., 2000, 2004] и выхода СГ через Са2+- и объем-активированные хлорные каналы и 3) инактивацией и/или закрыванием объем-чувствительных СГ каналов за счет развивающегося регуляторного снижения объема. Основным механизмом последнего в сосудистых ГМК является выход К+ по харибдотоксин-чувствительным Са2+-активируемым К+ каналам [Anfinogenova et al., 2001], что само по себе может вызывать рсполяризацию мембраны и способствовать расслаблению.

3.3.2. Участие Na котранспорта в сокращении гладкомышечных

сегментов аорты крысы при гиперкалиевой деполяризации мембраны. Одним из предполагаемых механизмов действия селективного блокатора NKCC буметанида является его способность вызывать гиперполяризацию мембраны ГМК за счет снижения NKCC-опосредованного СГ градиента и, таким образом, подавления хлорных токов. Данная гипотеза основана на прямых свидетельствах о гиперполяризующем

ЗОмМ |

170 мМ NaCl | [Бумеганвд 100 ми*^

0 05 10 15 20

Рис. 9. Влияние буметанида на гипоос-мотически-индуцированное сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы. По оси ординат — механическое напряжение (мН), по оси абсцисс — время (час).____

действии этого соединения на мембрану сосудистых ГМК [Davis et al, 1993], а также на данных, согласно которым NKCC участвует в создании неравновесного градиента анионов хлора [Davis, 1992; Koncz and Daugiras, 1994; Davis et al., 2000]. Эта гипотеза позволила предположить, что буметанид должен оказывать ингибирующий эффект на развитие сокращения, индуцированного умеренной гиперкалиевой деполяризацией мембраны сосудистых ГМК. Действительно, предобработка сегментов буметанидом (10, 50, 100 мкМ) в течение 5, 15, или 30 минут снижала максимальную амплитуду гиперкалиевого (KCl, 30 мМ) сокращения (рис. 11). При этом 30-минутная предобработка буметанидом (50, 100 мкМ) вела к двукратному подавлению амплитуды сокращения.

На основе гипотезы о гиперполяризующем действии буметанида было сформулировано предположение, что эффект этого соединения должен проявляться в большей степени в случае сокращения, индуцированного слабой или умеренной деполяризацией мембраны, в то время как при сильной деполяризации мембраны влияние буметанида на амплитуду сократительного ответа должено относительно снижаться. Для проверки данного предположения было исследовано влияние буметанида на амплитуду сокращения, вызванного эквимолярным замещением 60 мМ NaCl на KCl. Данная концентрация KCl была выбрана в связи с тем, что вызывала субмаксимальное по амплитуде повышение механического напряжения и, в то же время, снижение концентрации NaCl до 60.4 мМ в данном случае не должно было оказывать существенного влияния на активность NKCC, константа сродства которого равна к натрию -25 мМ [Russell, 2000].

Действительно, амплитуда сокращения, индуцированного сильной деполяризацией мембраны (60 мМ KCl) после 30-минутной предобработки сегментов 100 мкМ буметанида практически не изменялась (~97-± 4% по сравнению с контролем, п=7, р>0.5) (рис. 10 А, Б). Полученные результаты свидетельствуют в пользу вышеприведенной гипотезы. Эти данные указывают также на отсутствие значимого побочного влияния буметанида на основные звенья сопряжения возбуждения-сокращения в сосудистых ГМК при гиперкалиевой деполяризации._

Рис. 10. Влияние буметанида на сокращение гладкомышеч-ных сегментов аорты крысы, индуцированное слабой (А) и сильной (Б) деполяризацией мембраны в растворе, дополнительно содержащем 30 и 60 мМ KCl. По оси ординат — механическое напряжение (мН), по оси абсцисс — время (час).

3.3.3. Роль №+,К*,2СГ котранспорта в сокращениях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных аппликацией БАВ. С целью установить вовлечение NK.CC в механизмы сократительного действия вазоактивных соединений было исследовано влияние селективного блокатора МКСС буметанида на развитие ФЭ- и ангиотензин(АТ И)-индуцированных сокращений сегментов аорты крысы. Данные агонисты были выбраны в силу их важной физиологической роли в регуляции тонуса сосудов.

Предобработка буметанидом (10, 50, 100 мкМ) в течение 5, 15, и 30 минут достоверно снижала максимальную амплитуду ФЭ(1 мкМ)-индуцированного сокращения (рис. 11). Максимальный эффект 10-мкМ буметанида достигался уже после 5 минут преинкубации и практически не изменялся при удлинении времени предобработки. Полученные данные согласуются с данными, полученными на клетках линии что буметанид в концентрации 10 мкМ вызывает быстрое и полное

ингибирование уабаин-резистентного входа К+ (^КЬ). Тем не менее, увеличение концентрации буметанида до 100 мкМ значительно усиливало ингибирующий эффект буметанида при 30-минутной предобработке. При этом максимальная амплитуда ФЭ-индуцированного сокращения снижалась до 11.7±4.5 (п=9) (рис. 11, 12, Б) по сравнению с контролем. Ингибирующее действие 100-мкМ буметанида сохранялось после устранения этого соединения из раствора, по крайней мере, в течение последующих 40 минут.

ЮмкМ буметанид

50 мкМ буметанид

100 мкМ буметанид

Рис. 11, Зависимость амплитуды сокращения гладкомышечных сегментов аорты от времени предобработки буметанидом (10, ¡50 и 100 мкМ). Сокращение вызывали гипеосмотическим раствором (А), гиперкалиевой деполяризацией (Б) и фени-лэфрином (В)_________________________

Добавление в раствор ангиотензина II (АТ-П) (0.5 мкМ) приводило к развитию неподдерживаемого воспроизводимого сокращения сегментов аорты крысы, максимальная амплитуда которого составляла 27.7±4.9% по сравнению с величиной гиперкалиевого (30 мМ КС1) сокращения. 15-минутная предобработка буметанидом (50 мкМ) снижала максимальную амплитуду сокращения до 34.8±10.6% по сравнению с контрольным АТ-П-индуцированпым сокращением (п=5, р<0.05). Полученные данные указывают на участие МКСС в сократительных реакциях сосудистых гладких мышц на дейстрие БАВ.

Бумвтатзд, 100 мкМ [ час 15

Рис. 12. Влияние 10- и 30-минутной предобработки буметанидом (100 мкМ) на развитие ФЭ-индуцирюванного сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы (А и Б, соответственно). По оси ординат — механическое напряжение (мН), по оси абсцисс - время (час). ___

3.4. Изучение роли хлорной проводимости мембраны в регуляции сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты крысы. Одним из ключевых механизмов действия селективного блокатора МССС буметанида на сократительные реакции сегментов является снижение ЖСС-опосредованного неравновесного градиента СГ. В связи с этим было исследовано влияние модуляторов хлорной проницаемости мембраны на развитие сокращений сосудисых ГМК.

3.4.1. Участие СГ проводимости мембраны в сокращении гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированном аппликацией гиперкалиевого раствора. Предобработка сегментов блокатором Са2+-активируемых СГ каналов нифлумо-вой кислотой (50, 100 мкМ) существенно снижала амплитуду гиперкалиевого сокращения сегментов. Эффект нифлумовой кислоты был обратим, и после отмывания сегментов наблюдалось постепенное восстановление амплитуды гиперкалиевого сокращения. Необходимо отметить, что аппликация нифлумовой кислоты вызывала снижение базального тонуса сегментов и ее расслабляющее действие усиливалось в зависимости от времени предобработки.

Таблица 2. Влияние блокаторов хлорной проводимости мембраны на амплитуду гиперкалиевого (30 мМ KCl) сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы. *Р<0.001_

Вещество Концентрация, мкМ Время предобработки, мин Амплитуда сокращения, %

Контроль - 100

Нифлумовая ки- 100 15 28.7i3.9-" (п=6)

слота

SITS 100 15 43.2±5.6* (п=6)

DIDS 300 15 85.4±14.0(п=6)

15-минутная предобработка SITS, но не DIDS, также частично подавляла развитие гиперкалиевого сокращения (таблица 2). Это, вероятно, объясняется ингиби-

рующим действием SITS в отношении С1" каналов, в то время как DIDS является, прежде всего, блокатором СГ/НСО3" обменника [Chipperfield and Harper, 2000], функционирование которого невозможно в среде, не содержащей бикарбонат-ионы.

3.4.2. Участие хлорной проводимости мембраны в сокращении гладкомы-шечных сегментов аорты крысы, индуцированном аппликацией агониста аг адренергических рецепторов фенилзфрина. Механизмы активации СГ каналов при действии БАВ могут включать агонист-индуцированное открывание низкоселективных рецептор-управляемых катионных каналов, при котором происходит увеличение внутриклеточной концентрации кальция. Посутупивший в примембранные слои кальций может активировать Са2+-зависимые СГ каналы и К* каналы. Кроме того, открывание СГ каналов может происходить при активации G-белков, что подтверждается данными, полученными при исследовании Cl'-зависимой деполяризации мембраны мезангиальных клеток [Kremer SG et al., 1992]. В последнем случае было показано существование, по крайней мере, трех отдельных сигнальных путей, ответственных за активацию хлорных каналов, включая Са2+- и ПК-С-независимые механизмы опосредованной G-белками СГ-зависимой деполяризации мембраны.

В связи с кальций-мобилизующим действием вазоконстрикторов и возможной модуляцией Са2+-активируемой хлорной проводимости мембраны, было исследовано влияние блокатора СГ каналов этого типа нифлумовой кислоты на развитие ФЭ(1 мкМ)-индуцированного сокращения гладкомышечных сегментов. Нифлумовая кислота вызывала снижение амплитуды сокращения, при этом 5-минутная предобработка 100 мкМ-концентрацией этого соединения отменяла поддерживаемый компонент сокращения (п=7), а 15-минутная предобработка полностью предотвращала развитие ФЭ-индуцированного сокращения во всех экспериментах серии (п=8).

3.4.3. Роль хлорной проводимости мембраны в сократительных реакциях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных гипоосмотическим набуханием клеток. Как указывалось выше, 30-минутная предобработка 10-мкМ буметанидом предотвращала сокращение сегментов при гипоосмотическом набухании. Одним из предполагаемых механизмов вовлечения NKCC в регуляцию сократительной активности ГМК является увеличение внутриклеточной концентрации ионов хлора и формирование неравновесного электрохимического хлорного потенциала. Снижение наружной концентрации ионов хлора ведет к увеличению величины электрохимического хлорного потенциала, а снижение осмотического давления среды к активации объем-чувствительных хлорных каналов, что обусловливает появление деполяризующего хлорного тока.

15-минутная предобработка сегментов нифлумовой кислотой (100 мкМ) предотвращала развитие гипоосмотически (70.4 мМ ЙаС1)-индуцированного сокращения (п=8). 15-минутная аппликация блокаторов анионной проводимости SITS (100 мкМ) и DIDS (200 мкМ) также полностью подавляла развитие сокращения при аппликации гипоосмотического (70.4 мМ NaCl) раствора (п=5 в каждой серии). Принимая во внимание отсутствие в физиологическом растворе бикарбонат-ионов, предотвращающее функционирование С17НС03" обменника, полученный результат свидетельствует об объем-индуцированной активации DIDS-чувствительных СГ каналов, вовлекаемых в сократительный ответ. Полученные данные подтверждают ги-

потезу о том, что основным механизмом участия NKCC в регуляции сократительной активности гладких мышц является генерация неравновесного хлорного потенциала.

3.4.4. Роль внеклеточных моновалентных ионов в развитии сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели гипоосмотического набухания. Как указывалось выше, снижение осмотического давления физиологического раствора путем уменьшения концентрации NaCl запускает транзиторное сокращение. Однако, при уменьшении осмолярности среды инкубации происходит изменение концентрации ионов Na+ и СГ, каждый из которых имеет значение для оперирования NKCC. Для оценки вклада этих факторов были исследованы эффекты селективной нормализации внеклеточной концентрации ионов Na+ и СГ и осмотического давления раствора. *

Так, одновременная нормализация осмотического давления и внеклеточной концентрации ионов Na+ посредством эквимолярного добавления глутамата натрия предотвращала развитие транзиторного сокращения, не изменяя при этом реактивность сегментов к действию 30 мМ KCl. Полученный в этой серии результат свидетельствует о ключевой роли ионов Na+ в развитии сократительного ответа и возможном вовлечении Na+/Ca2+ обменника в механизмы развития гипоосмотически-индуцированного сокращения.

Эквимолярное замещение ионов Na+ анионами холина для компенсации осмотического давления и внеклеточного СГ также оказывало подавляющее действие на амплитуду гипоосмотического сокращения, однако полное ингибирование сокращения наблюдалось только в трети экспериментов.

Восстановление осмотического давления раствора посредством добавления сахарозы (160 мМ) во всех экспериментах изменяла характер гипоосмотического сокращения. Сокращение становилось поддерживаемым в течение длительного времени. Изменение характера сокращения при нормализации осмотического давления омывающего раствора, вероятно, обусловлено тем, что в отличие от гипоосмотиче-ских условий, в данном случае не происходило активации К+,СГ котранспорта. Это сокращение оставалось чувствительным к буметаниду и нифлумовой кислоте (Р<0.05), свидетельствуя о важной роли NKCC-опосредованного градиента СГ в развитии данного сократительного ответа.

Замена сахарозы глутаматом натрия 80 мМ на фоне поддерживаемой контрак- ь туры вызывала расслабление гладкомышечных сегментов до исходного уровня.

Учитывая данные литературы и полученные результаты, можно утверждать, что механизмы индукции сокращения при гипоосмотическом набухании предпола- ~ •» гают: 1) наличие NKCC-опосредованного неравновесного градиента СГ; 2) открывание объем-чувствительных СГ каналов, приводящую к возникновению деполяризующих хлорных токов; 3) повышение внутриклеточной концентрации Са2+ за счет активации потенциал-зависимого входа этих ионов и ингибирования Na+/Ca2+ обменника в результате снижения внеклеточной концентрации Na+; 4) открывание Са2+-зависимых СГ каналов.

3.4.5. Роль хлорной проводимости мембраны в сократительных реакциях гладкомышечных сегментов аорты крысы в моделях стрикции клеток Само по себе уменьшение объема миоцитов при гиперосмотическом воздействии ведет к согласованному пассивному увеличению концентрации внутриклеточных осмолитов.

До настоящего времени вклад хлорной проводимости мембраны в развитие гипе-росмотически-индуцированного сокращения сосудистых ГМК оставался неизученным. В связи с этим было исследовано действие блокаторов хлорной проводимости мембраны на развитие гиперосмотически-индуцированного сокращения ГМК.

15-ти минутная предобработка сегментов блокатором Са2+-зависимых СГ каналов нифлумовой кислотой (10-100 мкМ) [Greenwood and Large, 1995] дозозависи-мо угнетала амплитуду гиперосмотически-индуцированного сокращения, снижая амплитуду механического ответа более чем десятикратно при концентрации 100 мкМ (таблица 3).

На гладкомышечных клетках портальной вены кролика были получены данные [Greenwood, I. A., and Large W. А., 1995; Greenwood, I. A., and Large, W. A., 1998], что нифлумовая кислота может не только блокировать Са2+-зависимые СГ токи, но и активировать калиевую проводимость мембраны сосудистых ГМК, что также могло бы способствовать расслабляющему действию этого соединения. Однако в наших экспериментах блокатор калиевых каналов тетраэтиламмоний (ТЭА, 10 мМ) не влиял на ингибирующий эффект нифлумовой кислоты (таблица 3).

15-минутная предобработка SITS (50-500 мкМ), являющимся неселективным блокатором хлорной проводимости мембраны, включая Са2+ -активируемые СГ каналы [Fuller and Beños, 2000], дозозависимо угнетала сокращение сегментов в гипертопическом растворе, в то время как блокатор анионных каналов и СГ/НСОз" об-менника DIDS (300 мкМ) не оказывал угнетающего эффекта (таблица 3).

Согласно данным, полученным на клетках ранних эмбрионов мыши [Sonoda et al., 2003], хлорные токи, индуцируемые высоким осмотическим давлением среды инкубации, чувствительны к блокатору Са2+-активируемых хлорных каналов нифлумовой кислоте и нечувствительны к DIDS, в то время как DIDS подавляет хлорные токи, активируемые набуханием клеток, что было подтверждено и в данном исследовании. Другие авторы установили, что Са2+-активируемые хлорные каналы в ГМК легочной артерии кролика не чувствительны к DIDS [Piper et al., 2002].

Полученные результаты предполагают существование в сосудистых ГМК, по крайней мере, двух различных типов хлорных каналов, различающихся по своей чувствительности к блокаторам и активирующихся набуханием или стрикцией клеток, соответственно. В действительности, в сосудистых ГМК экспрессированы хлорные каналы, по крайней мере, трех субтипов [Chipperfield and Harper, 2000], через которые может происходить выход хлора. Это подтверждается подавляющим действием на гиперосмотическое сокращение таких блокаторов анионной проводимости мембраны, как SITS и нифлумовая кислота.

Для исследования вовлечения хлорной проводимости мембраны в сокращении сосудистых ГМК в альтернативной модели сжатия клеток оценивали влияние предобработки нифлумовой кислотой, SITS и DIDS на развитие транзиторного повышения тонуса сегментов при изоосмотической стрикции.

Нифлумовая кислота снижала амплитуду сокращения при изоосмотической стрикции до 6.2±1.4% от амплитуды гиперкалиевого сокращения по сравнению с 21.6+8.7% в ее отсутствии (р<0.05; гг 7). 15-минутная предобработка SITS (100 мкМ) не изменяла максимальную амплитуду сокращения, но задерживала нормализацию механического напряжения подобно буметаниду (Р<0.05), что, вероятно, свя-

зано с тем, что SITS может вызывать ингибирование NKCC. Предобработка сегментов DIDS не влияла на развитие сокращения.

Таблица 3. Влияние блокаторов хлорной проводимости мембраны на амплитуду сокращения, вызванного гиперосмотическим воздействием (150 мМ сахарозы). *р<0.05; **р<0.01; ***р<0.0001._

Блокатор Амплитуда сокращения, %

Название Концентрация, мкМ Время предобработки, мин

Контроль - 100

Нифлумовая 10 59.Ш2.6** (п=7)

кислота 50 15 31.8±12.0** (п=7)

100 7М5.2*** (п=7)

Нифлум. кислота, 100 мкМ + ТЭА, 10 мМ 15 10.1±5.5*** (п=5)

50 74±7.1** (п=5)

SITS 100 15 65.9±12.5** (п=5)

500 45.4±5.7** (п=5)

DIDS 300 15 112.7±9.2 (п=6)

3.5. Исследование динамики fCifj в ГМК линии WKY-7 и гладкомышечных сегментах аорты крысы

Как указывалось выше, NKCC участвует в регуляции сосудистого тонуса через поддержание [СП,. Было показано, что действие буметанида на сокращения, вызванные активацией агадренергических рецепторов, умеренной деполяризацией мембраны (30 мМ KCl), гипоосмотическим набуханием и гиперосмотической стрикцией, зависело от времени предобработки и концентрации этого соединения. Максимальные эффекты буметанида наблюдались после 30-минутной предобработки и при концентрации 100 мкМ, что на порядок превышает концентрацию, необходимую для быстрого и полного ингибирования котранспорта в культуральных клетках. В то же время, влияние буметанида на сокращение при изоосмотической стрикции наблюдалось уже при 5-минутной предобработке и концентрации 10 мкМ. По всей видимости, полное и быстрое ингибирование NKCC, обнаруженное в культуральных сосудистых ГМК в присутствие 10 мкМ не означает, что эта концентрация ведет к быстрому снижению [Cl"]i и гиперполяризации мембран ГМК на тканевом уровне. Кроме того, снижение электрохимического хлорного потенциала при блокировании NKCC в не активированных клетках, возможно, происходит лишь при длительном времени предобработки буметанидом, достаточном для того, чтобы произошел выход хлора через нестимулированные каналы.

Данные, полученные при исследовании накопления [14С] как маркера объема внутриклеточной воды в контроле, показали, что буметанид незначительно влиял на изменение клеточного объема в модели гиперосмотической стрикции клеток, но подавлял регуляторное увеличение объема, определяемое в клетках, подвергнутых изоосмотическому сжатию (таблица 4). Сравнение действия сахарозы на клеточный объем и СГ, показывают, что повышение [С1"]. на -40% при гиперосмотической стрикции, в основном, обусловлено снижением клеточного объема, нежели актива-

цией NK.CC. Напротив, в изоосмотически сжатых клетках, преинкубированных в гипоосмотической среде с низким содержанием СГ, увеличение [С1"], является следствием активации МК.СС и резко уменьшается в присутствие буметанида. Действительно, ингибирование №ССС буметанидом снижало 40%-ое повышение [СП, лишь на 10-15% в гиперосмотических условиях, в то время как на 15 минуте изоосмотиче-ского сжатия буметанид уменьшал внутриклеточную концентрацию хлора в 2,5 раза (таблица 4).

Таблица 4. Влияние гипо- и изоосмотического сжатия на внутриклеточное содержание воды и СГ в ГМК линии WKY-7. *р<0.05.

Тип сжатия клеток и Внутриклеточная Н20, Внутриклеточный СГ,

длительность после мкл/мг протеина мМ/л внутриклеточной воды

его инициации

контроль буметанид контроль буметанид

Контроль 2.71±0.14 2.63±0.07 46±4 43±4

Гиперосмос, 5 мин 2.33±0.19 2.30±0.12 59±6 53±3

Гиперосмос, 15 мин 2.24±0.11* 2.27±0.13* 63±3* 56±4*

Контроль 2.87±0.18 2.78±0.09 28±4 -

Изоосмос, 5 мин 2.30±0.10* 2.21±0.14» 39±4* 31±3

Изоосомс, 15 мин 2.7Ш.13 2.38±0.09* 49±7* 36±5

Длительное культивирование клеток влияет на различные клеточные функции, включая активность ионных транспортеров [Berk et al., 1989; Raat et al., 1994]. В культуральных сосудистых ГМК, которые претерпели более десяти митозов в отсутствие каких-либо стимулов, подобных увеличению осмолярности, могут наблюдаться особенности оперирования ион-транспортирующих систем. В связи с этим было исследовано влияние буметанида на [СГ], на тканевом уровне - в сегментах аорты, обработанных в соответствии с моделью гиперосмотической стрикции, и в контрольных не стимулированных сегментах.

Таблица 5 показывает, что 30-минутная преинкубация с 100-мкМ буметанидом вызывала достоверное -40% снижение содержания СГ, в контрольных не стимулированных сегментах аорты и полностью отменяла увеличение [С1"]„ обусловленное 20-минутным гиперосмотическим сжатием клеток в присутствие 150 мМ сахарозы.

Таблица 5. Влияние буметанида и сахарозы на содержание внутриклеточного СГ в гладкомышечных сегментов аорты крысы. *р<0 05.

Присутствие буметанида (концентра-ция/зремя преинкуба-ЦИИ) Присутствие сахарозы (время) Внутриклеточный СГ (нМ/мг влажного веса)

Нет Нет 22.8±2.7

10 мкМ/5 мин Нет 20.0±4.0

10 мкМ/30 мин Нет 18.7±1.9

100 мкМ/30 мин Нет 14.1±1.3*

Нет 150 мМ/20 мин 31.4±2.2*

100 мкМ/30 мин 150 мМ/20 мин 19.1±3.7

Совокупность полученных данных позволяют сделать вывод о том, что существует два пути вовлечения NKCC в регуляцию сократительной активности сосудистых ГМК. Оба из них связаны с NKCC-опосредованным созданием неравновесного электрохимического хлорного потенциала, который при открывании СГ каналов будет обусловливать хлорный ток.

В первом случае кючевая роль принадлежит базальной активности NKCC, и основным тригтерным NKCC-зависимым механизмом сокращения будет не столько повышение активности NKCC, сколько открывание хлорных каналов и снижение электрохимического хлорного потенциала. По всей видимости, данный тип NKCC-зависимой регуляции превалирует в случае сокращений, вызванных активацией аг адренергических рецепторов, умеренной деполяризацией мембраны (30 мМ КС1) и гипоосмотичестш набуханием. Это подтверждается необходимостью длительной предобработки буметанидом для проявления его максимального подавляющего эффекта.

Второй путь NKCC-опосредованной регуляции сокращений связан с дополнительным повышением активности NKCC и появляющимся de novo электрохимическим хлорным потенциалом. В этом случае максимальный эффект буметанида должен проявляться при минимальном времени предобработки этим соединением. Действительно, 5-минутная предобработка буметанидом (10 мкМ) была достаточной для изменения характера сокращения сегментов в модели изоосмотической стрик-ции. Дальнейшее увеличение времени предобработки (до 60 мин) и концентрации буметанида (до 100 мкМ) не изменяли действие этого препарата на сокращение ГМК.

3.6. Кальций-зависимая регуляция сократительных реакций сосудистых ГМК при изменении осмолярности среды инкубации

Дальнейшим этапом работы было проведение сравнительного анализа особенностей оперирования Са2+-зависимых механизмов регуляции сократительных ответов гладкой мышцы сосудов при изменении объема клеток, активации аг адренергических рецепторов и деполяризации мембраны.

3.6.1. Со2*-зависимые механизмы сократительных реакций сосудистых сегментов при изменении объема клеток, активации щ-адренергических рецепторов и деполяризации мембраны. Для изучения роли ионов Са2+ в сократительной регуляции сегментов аорты были использованы блокаторы потенциал-зависимых Са2+ каналов верапамил и нифедипин, а также бескальциевый ЭГТА-содержащий раствор.

Несмотря на то, что предобработка сегментов верапамилом (10 мкМ) резко подавляла развитие сокращения, вызываемого аппликацией гиперкалиевого раствора (30 мМ КС1), она не оказывала влияния на амплитуду гиперосмотически-индуцированного сокращения (150 мМ сахарозы), которая составила 96.7±10.2% по сравнению с контролем (р>0.5). Предобработка нифедипином (3 мкМ) аналогичным образом подавляла гиперкалиевое сокращение, но также не влияла на амплитуду сокращения (92,5±12,9%, р>0.2) в гиперосмотическом растворе (таблица 6).

Так же, как и при гиперосмотическом воздействии, сокращение сегментов в модели изоосмотической стрикции было нечувствительно к нифедипину (таблица 6). Это свидетельствует о том, что механизмы сократительных реакций при мо-

делировании стрикции клеток не связаны с активацией потенциал-зависимых кальциевых каналов.

С целью дальнейшего изучения роли кальция в развитии гиперосмотического сокращения, была проведена серия экспериментов с использованием бескальциевого раствора, содержащего хелатор ионов кальция ЭТТА. Инкубация сегментов в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе (500 мкМ) полностью подавляла изоос-мотическое гиперкалиевое сокращение (30 мМ KCl). Тем не менее, амплитуда гипе-росмотически-индуцированного сокращения после инкубации в бескальциевом растворе в течение 1 часа снижалась лишь до -40% от контроля (п=12) (рис. 13, таблица 6), несмотря на то, что при 60-минутной преинкубации в бескальциевой среде должна уменьшаться концентрация внутриклеточного кальция в [Sato et al., 1992; Bruschi et al., 1988].

Таблица 6. Влияиие блокаторов кальциевых каналов L типа и бескальциевого раствора на амплитуду сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы. *, ** - р<0.05 и <0.00005 в сравнении с контролем, соответственно.

Сокращение, %

Блокатор, мкМ KCl, 30 мМ ФЭ, 1 мкМ Гипоосмос, 40 MMNaCl Гиперосмос (сахароза, 150 мМ) Изоосм. стрикция

Контроль 100 92.1± 10.6 75.7±8.9 51.9±8.8 21.6±8.7

(п=52) (п=18) (п=78) (п=7)

Нифеди- 5.6±2.2* 4.5±2.3** 46.1 ±3.4* 18.4±6.1

пин, 3 *(п=4) (п=4) (п=5) (п=4)

Верапа- 4.6±1.6* 25.8±7.3* 3.8±1.1** 48.3±2.7

мил, 10 * (п=5) (п=5) (п=4) (п=4)

—Са2+; 1.7±2.1* 6.6±2.0* 1.0±2.5** 25.6±7.8** (п=12) 14.0±3.7

ЭГТА, 500 (п=9) <%=4) (п=6) * (п=8)

Для исследования роли внеклеточного кальция в развитии сокращения в модели изоосмотической стрикции клеток было изучено действие ЭГТА-содержащего бескальциевого раствора. 60-минутная инкубация в бескальциевом растворе (500 мкМ ЭГТА) резко подавляла развитие гиперкалиевой (30 мМ КС1) контрактуры, но не оказывала существенного влияния на развитие сокращения при изоосмотической модели стрикции (рис. 14, таблица 6).

Гипоосмотически-вызванное сокращение опосредовано Са2+-зависимыми механизмами и, прежде всего, активацией потенциал-зависимых Са2+ каналов. Необходимая для этого пороговая деполяризация первоначально развивается при активации объем-чувствительных СГ каналов, открывающихся при набухании клетки. Поступление ионов Са2+, в свою очередь, вызывает активацию Са2+-активируемых СГ каналов, которые поддерживают деполяризацию.

Таким образом, несмотря на то, что как стрикция, так и набухание клеток сопровождаются повышением механического напряжения сегментов, природа этих сократительных реакций носит различный характер.

2 OJ

KCl 30 MM

Ca» ISOMMf

•C^- МОмкЫЭГГЛ

0 05 10 1 5 20 25 30 35

Рис. 13. Влияние бескальциевого ЭГТА-содержащего раствора на гиперосмоти-чески индуцированное сокращение сегментов аорты.

По оси ординат —механическое напряжение (мН), по оси абсцисс - время (час).

—I I—

40 0

-Ca* ЯЮмМЭГТЛ

"1 час

05 10

Рис. 14. Влияние бескальциевого ЭГТА-содержащего раствора на сокращение сегментов аорты в модели шоосмоти-ческой стрикции. Пунктирной линией показана динамика механического напряжения в контрольных условиях.

KCl 30 мМ

г}

S 1004

3.6.2. Сократительные реакции сосудистых гладкомышечных сегментов, индуцированные гиперкалиевой деполяризацией мембраны и активацией щ-адренергических рецепторов, в моделях стрикции и набухания клеток. Одним из возможных механизмов сокращения ГМК в отсутствии внешнего Са2+ можно считать изменение чувствительности клеток к этим ионам [Janssen et al., 2001; Nakao et al., 2002].

С целью оценить чувствительность гладкомышечных сегментов аорты крысы к внеклеточным ионам Са2+ в моделях гиперосмотической и изоосмотической стрикции клеток, определяли амплитуду сократительных ответов, индуцированных аппликацией СаС12 на фоне ЭГТА-содержащего бескальциевого раствора в контрольных условиях и в соответствующих моделях уменьшения клеточного объема.

Аппликацию СаС12 во всех случаях осуществляли на фоне деполяризации мембраны ГМК гиперкалиевым раствором (KCl, 60 мМ) с целью активировать потенциал-зависимый вход кальция внутрь клеток. Вопреки первоначальному предположению о развитии кальциевой сенсибилизации ГМК, в моделях стрикции клеток не было

Caf. мМ л

\ i Т

/ ^ __Л

______[Сахароза,jl 50 мМ I v

Бескальциевый раствор, 500 м*М ЭГТД I

«.сиаий. .нщбош i l»*c'.aonw .«сГмшД ч.

0 05 1 0 1 5 20 25 30 35 40 45 60 55

Рис. 15. Влияние гиперосмотической стрикции на Сс? -зависимое гиперкалиевое сокрагцение гладко-мышечных сегментов аорты крысы. По оси ординат - механическое напряжение (мН), по оси абсцисс - время (час).___________

Ca*MnMt

обнаружено повышение чувствительности сегментов к наружному кальцию. Напротив, в отличие от контрольных условий, сокращения на аппликацию СаС12 не наблюдалось вовсе, что свидетельствует о резком снижении чувствительности сегментов к внеклеточному кальцию при стрикции ГМК (рис. 15, 16).

После отмывания сегментов в ЭГТА-содержащем бескальциевом растворе с нормализованной осмолярно-стью наблюдалась тенденция к восстановлению чувствительности сегментов к сократительному действию СаС12.

Более того, гиперосмотическая и изоосмотическая стрикция ГМК в присутствии наружного кальция также приводила к существенному подавлению сократительного действия ФЭ (1 мкМ) и гиперкалиевого раствора (30 мМ КС1) (Рис. 17).__

NaCMOmM

Ca", 1 мМ f

NaCI. 120 шМ

[[_бескальциёвый раствор, 500 мкМ ЭТТА |

I -ЫшО.К^ 1 I JW3 «Л I

[ .Ю1М1 J I .кан>м I Час

1 1б га 2S зо за 40 ал 50 s

Рис. 16. Влияние изоосмотической стрикции на Са2+-зависимое гиперкалиевое сокращение гладко-мышечных сегментов аорты крысы. По оси ординат - механическое напряжение (мН), по оси абсцисс — время (час).

S 200

150

с п I ш

NaCI,40мМ NaCI, 120мМ

NaCI, 40 мМ |NaCI 120 мМ |

Час

0 0.5 1 0 1 5 2 0 2 50 0.5 10 1.5 2 0 2 5 Рис. 17. Влияние гиперкалиевого раствора (А) и фенилэфрина (Б) на механическое гапряжеиие сегментов аорты крысы в контроле (кривые 1,3) и в модели изоосмотической стрикции клеток (кривые 2, 4). По оси ординат - механическое напряжение (мН), по оси абсцисс - время (час)._____________

Можно предположить следующие механизмы ингибирования KCl- и ФЭ-индуцированных сокращений в моделях стрикции клеток:

1. Возможно, при сжатии клеток происходит подавление потенциал-зависимого входа Са2+, который играет важную роль в развитии KCl- и ФЭ-индуцированного сокращения, но не участвует в развитии сокращения сегментов в обеих моделях стрикции. Это предположение связано с тем, что стрикция клеток может изменять архитектонику мембраны и влиять на белок-липидные взаимодействия в мембране,

что влечет за собой изменение функционального состояния ион-транспортирующих систем, включая кальциевые каналы.

2. Не исключено, что стрикция клеток может разобщать механизмы возбуждения-сокращения на более дистальных этапах Са2+-зависимой сигнализации, включая передачу Са2+ сигнала от мембраны кавеол к регуляторным белкам и снижение чувствительности сократительного аппарата клетки к кальцию.

3. Стрикция может повышать чувствительность к кальцию, и конечная концентрация свободного Са2*, которая в данном ЭГТА-буфере уже будет насыщающей. Однако учитывая, что максимальная амплитуда Са2+-зависимого сокращения превышает величину гиперосмотически-индуцированного в несколько раз, данное предположение кажется маловероятным.

С целью установить, изменяется ли чувствительность клеток к констрикторам во время гипоосмотического набухания, были проведены контрольные исследования сократительного действия ФЭ (1 мкМ) и гиперкалиевого раствора (30 мМ КС1) в гипоосмотической среде. Было установлено, что 30-минутная инкубация сегментов в гипоосмотическом растворе 1) не влияла на амплитуду ФЭ-индуцированного сокращения (100.0±14.4, п=6) и 2) приводила к увеличению амплитуды гиперкалиевого сокращения до 148.2±28.7% (п=9, р<0.05) по сравнению с контролем.

Блокатор МССС буметанид модулировал реактивность ГМК к гиперкалиевому раствору в гипоосмотической среде. Предобработка 10-мкМ буметанидом угнетала тестирующее гиперкалиевое сокращение в гипоосмотической среде, при этом его амплитуда составила 64,7± 1,7 8% по сравнению с нормоосмотическим контролем и 52.7±12.0% по сравнению с таковой в гипоосмотическом растворе без предобработки буметанидом (р<0.03). Напротив, увеличение концентрации буметанида до 100 мкМ потенцировало амплитуду гиперкалиевого сокращения, развивающегося в ги-поосмотических условиях, что, по всей видимости, связано с подавляющим действием буметанида на К-С1 котранспорт, активация которого происходит при гипоосмотическом набухании клеток и важная роль которого в сократительной регуляции ГМК была показана Ы.Аёга^ща й а1. (2000). При этом амплитуда сокращения составила 183,82146.4% по сравнению с нормоосмотическим контролем и 289±46.4% по сравнению с таковой в гипоосмотическом растворе в присутствие 10 мкМ буметанида (р<0.05). В отличие от гипоосмотических условий, в контрольном растворе бу- • метанид оказывал однонаправленное подавляющее действие на амплитуду гиперкалиевого сокращения во всем диапазоне концентраций (10-100 мкМ).

3.6.3. Потенциал-зависимый вход Са*+ в ГМК линии 1УКУ-7 при изменении •» осмолярности среды инкубации. При исследовании сократительной активности сегментов аорты было обнаружено, что в моделях стрикции сокращение гладкомы-шечных сегментов осуществлялось в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе и было резистентным к блокаторам потенциал-зависимых кальциевых каналов. В связи с этим было изучено потенциал-зависимое накопление 45Са в культуральных клетках аорты крысы линии >УКУ-7, обладающих выраженным контрактильным фенотипом, подтвержденным- экспрессией ряда сократительных и регуляторных белков (а-актин, белок 8М22 и КЛЦМ), и имеющих высокую чувствительность к

ангиотензину II и эндотелину-1, измеренную по уровню митоген-активированного фосфорилирования протеинкиназы ERK1/2.

В ГМК линии WKY-7, гиперкалиевая деполяризация мембраны вела к 2-3-кратному увеличению входа 45Са. Ни нифедипин, ни верапамил существенно не влияли на базальное накопление Са2+, однако полностью устраняли вызванный деполяризацией вход Са2+ с К, ~0.01 и 1 мкМ, соответственно. Сжатие клеток, обусловленное добавлением 150 мМ сахарозы, снижало индуцированный деполяризацией вход Са2* на -40% и не влияло на базальное накопление Са2+(Рис. 18).

■Контроль

Q Набухание

А. Контрольная среда

Потенциал-зависимый вход 45Са j

Б. Гиперкапиевая среда

Рис. 18. Влияние гиперосмотического сжатия и ги-поосмотинеского набухания на базальное (А) и индуцированное гиперкалиевой деполяризацией мембраны (Б) накопление 45Са клетками линии №КУ-7. Для запуска гиперосмотического сжатия в раствор добавляли 150 мМ сахарозы. Для запуска набухания клеток снижали концентрацию ЫаС1 до 60 мМ

В связи с обнаружением различий во влиянии буметанида на сокращение, индуцированное умеренной (30 мМ КС!) и сильной (60 мМ КС1) деполяризацией (рис. 10), было исследовано накопление 45Са при трех разных концентрациях наружного К+. 30-минутная предобработка 10 мкМ-буметанидом не влияла на накопление 45Са при [К+]0=6 и 60 мМ, в то время как при умеренной деполяризаций мембраны ([К^,, = 30 мМ) нифедипин-чувствительный компонент накопления 45Са снижался в обработанных буметанидом клетках -двукратно (таблица 7).

Таблица 7. Влияние буметанида на накопление45Са в \VKY~7 клетках. *р<0.02

Концентрация моновалентных катионов в физиологическом растворе (мМ) Присутствие буметанида Накопление 45Са пМ (мг протеина)"'-5 мин"1

1. в отсутствие нифеди-пина 2. в присутствие нифе-дипина 3. нифедипин-чувствительный компонент (Аи)

Na- 120; К-6 нет 10 мкМ 387±33 391±44 392±51 388±22 3

Na-96;K-30 нет 10 мкМ 972±70 689±51 * 368±40 411±44 604 278

Na - 66; К - 60 нет 10 мкМ 1188±88 1117±71 354±29 ¡Шли 834 ионалы2££ i

33 ВИМЮТЕКА [ М W иг |

Таблица 8. Влияние гипоосмотического набухания на накопление 45Са в ГМК линии ШКУ-7. * р < 0.01 по сравнению с контрольными клетками. _

Накопление 4SCa, пМ (мг протеина)"1 5 мин"'

Блокатор, мкМ Контрольные Клетки при гипоосмотиче-

клетки ском набухании

нет(контроль) Нифедипин, 1 3. Нифедипин-чувствительный компонент (А и) 378±43 370±29 8 621±48* 364±40 257

Таким образом, стрикция клеток не влияет на базальное накопление 45Са и существенно подавляет потенциал-зависимый вход кальция в WKY-7 клетки, в то время как гипоосмотическое набухание, напротив, ведет к индукции потенциал-зависимого входа 45Са (таблица 8). Эти результаты согласуются с данными о влиянии нифедипина и верапамила на сокращения сегментов в соответствующих моделях изменения объема клеток.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В представленной работе проведен системный анализа роли NKCC, СГ каналов, внутриклеточного СГ, внеклеточного Са2+ и объема клеток в регуляции сократительной активности сосудистых ГМК. Обобщенная схема объем-зависмой ветви регуляции сократительной активности сосудистых гладкомышечных клеток представлена на рисунке 19.

Модуляции объема клеток достаточны, чтобы индуцировать сокращение сосудистых ГМК. Полученные данные показывают, что переносы сегментов в гипер- или гипотонические растворы ведут к развитию сокращения сосудистых ГМК.

Несколько свидетельств указывают на то, что это сокращение запускается модуляцией клеточного объема, а не изменившейся осмолярностью среды инкубации. Во-первых, величина сокращения сегментов, запускаемого сахарозой в концентрациях 50-150 мМ пропорциональна снижению объема клеток. Во-вторых. объем клеток WKY-7 при гипоосмотическом набухании быстро нормализуется механизмами регуляторного снижения объема через активацию К+ и СГ каналов [Anfinogenova et al., 2001]. Эти данные согласуются с результатами, показывающими транзиторный характер сокращения сегментов в гипоосмотической среде и лишь незначительное повышение объема клеток после 45 мнут инкубации в гипоосмотической среде (3.03±0.16 против 2.85±0.18 мкл/мг протеина в контроле). В-третьих. наблюдается соответствие динамики поддерживаемого сокращения при аппликации сахарозы и транзиторного сокращение при изоосмотической стрикции с поддерживаемым и транзиторным характером снижения объема клеток в этих моделях стрикции (Рис. 6 А, Б). В-четвертых, транзиторная кинетика снижения объема клеток при изоосмотической drnpttkijuilr оЛуслОвЛена NKCC-опосредованным регуляторным увеличени-

ем объема [Ог1оу й а1., 1996]. В-пятых, как снижение объема клеток, так и развитие сокращения при изоосмотической стрикции пролонгируется при ингибировании ЫКСС буметанидом.

Сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы при сжатии и набухании: различия в Са2+-опсредуемой сигнализации. Несмотря на однонаправленное действие в отношении механического напряжения сегментов, клеточные механизмы, лежащие в основе сократительных ответов ГМК при сжатии и набухании клеток существенно различаются. Действительно, подобно К+„-зависимой деполяризации мембраны, гипоосмотическое набухание повышает вход 45Са, ингибируемый нифедипином (таблица 8). Более того, как нифедипин, так и верапамил подавляют сокращение сегментов при набухании (таблица 6). Эти результаты однозначно свидетельствуют о том, что индуцированное набуханием сокращение сосудистых ГМК опосредовано активацией Са2+ каналов Ь-типа. В противоположность этому, сокращение, вызываемое гипер- и изоосмотической стрикцией, устойчиво к блокаторам потенциал-зависимых Са2+ каналов (таблица 6).

Бум.

Вер. Са2*0 J> о Ниф. ЭГТА

Рис. 19. Схема объем-зависимой регуляции сократительной активности сосудистых ГМК. 1-Са24 -активируемые хлорные каналы; 2, каналы; NKCC — Na+,fC,2СГ котранспорт; RVI ~ регуляторное увеличение объема; СПР- саркоплаз-матический ретикулум; ФЛ С — фосфолипаза С; Gp ~ ГТФ-связывающий белок; ФЭ - фенилэфрин; КЛЦМ- киназа легких цепей миозина.

Сокращение ГМК при сжатии сохраняется также в отсутствии наружного Са2+ и истощении внутриклеточных депо

Са2+ при длительной инкубации в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе, то есть в условиях, отменяющих К+0- и ФЭ-индуцированные сокращения. Более того, стрикция резко подавляет сократительные

ответы на гиперкалиевый раствор и аппликацию ФЭ (рис. 10, 11, 12 Б). Напротив, 30-минутная преинкубация в гипоосмотическом растворе, предшествующая изоос-мотической стрикции, повышает амплитуду К*0-индуцированного сокращения и не влияет на амплитуду сокращения, вызванного ФЭ. Учитывая всю совокупность полученных данных, эти результаты демонстрируют различные механизмы сократительных ответов, запускаемых клеточным сжатием, набуханием и физиологическими стимулами.

Несколько заслуживающих внимания гипотез можно предложить для объяснения Са2+-независимого механизма сопряжения возбуждения-сокращения при стрикции сосудистых ГМК. Так, Кравцов с соавторами продемонстрировал возможность сокращения аорты крысы при гиперкалиевой деполяризации мембраны без увеличения внутриклеточной концентрации Са2+ в безмагниевой среде. Механизм этого сокращения отличался от К+-индуцированного сокращения в присутствии ди-валентных катионов, амплитуда которого коррелировала с повышением [Са2+],. Повышение К+ в изотонической среде вызывало увеличение связывания 45Са с плазма-леммой ГМК аорты. В противоположность общепринятой точке зрения о ключевой роли [Са2+], в сопряжении возбуждения-сокращения ГМК, авторы выдвинули гипотезу, что взаимодействие актина и миозина может активироваться М§2+-зависимым связыванием Са2+ с кальциевым каналом [Kravtsov GM et al, 2003]. Тем не менее, необходимо подчеркнуть, что в противоположность сокращению ГМК в моделях стрикции, К^-инДУЦированное сокращение в 6e3-Mg2+ растворе подавлялось блока-торами Са2+ каналов L-типа [Kravtsov et al., 2003]. Кроме того, гиперосмотическая стрищия клеток может непосредственно запускать фосфорилирование легких цепей миозина и Rho-зависимую транслокацию миозина П [Klein and O'Neill, 1993, 1995; Pedersen et al., 2002; Shrode et al., 1995; Takeda et al., 1993]. Одним из механизмом изменения реактивности сосудистых ГМК в моделях стрикции клеток, возможно, выступает увеличение общей концентрации макромолекул (macromolecular crowding), ключевая роль которой была установлена в регуляции объем-чувствительного мембранного транспорта [Colclasure et al., 1992; Dunham et al., 1995] и элементов цитоскелета [Cunco et al., 1992; Madden and Herzfeld, 1993].

Роль N<?,K?,2CF котранспорта и внутриклеточного СТ. Основной гипотезой вовлечения Na+,K+,2C1" котранспорта в сократительную регуляцию ГМК является создание неравновесного электрохимического хлорного потенциала. В этом случае, сокращение ГМК может запускаться при деполяризации сарколеммы, вызванной увеличением [СГ], и/или PCi. Эта гипотеза согласуется со следующими результатами: 1. Блокаторы С1" каналов нифлумовая кислота и SITS подавляют сокращения гладкомышечных сегментов при гиперкалиевой деполяризации мембраны ГМК, а также при действии ФЭ и ггаюосмотического растворов. 2. Селективный ингибитор NKCC буметанид вызывает снижение амплитуды сокращений сегментов, вызванных аппликацией фенилэфрина, КС1 (30 мМ), а также гипо- и гиперосмотического растворов. 3. Ингибирование NKCC буметанидом ведет к гиперполяризации мембраны сосудистых ГМК [Davis et al., 1993] и снижению [СП, в как в интактных, так

и в стимулированных аппликацией сахарозой сегментах аорты (таблица 5). 4. Буме-танид подавляет сокращение сегментов при слабой, но не сильной, деполяризации мембраны. Последнее наблюдение можно было бы связать с подавлением активности МССС, обусловленном снижением концентрации Ыа+0 со 120 мМ до 60 мМ. Однако, высокая афинность ИКСС для Ыа+0 (К1Д-25 мМ) [Ог1оу Л а1., 1996] противоречит этому предположению.

По всей видимости, в модели гиперосмотической стрикции быстрое повышение [СГ], в сосудистых ГМК является следствием сжатия клеток, в то время как при изоосмотической стрикции [СГ], увеличивается как за счет снижения объема, так и за счет активации ЫКСС. Это подтверждается тем, что буметанид отменяет увеличение [СГ], в модели изоосмотической, но не гиперосмотической стрикции клеток (таблица 4). Вероятно, ЫКСС вовлечен в сократительную регуляцию ГМК аорты при стрикции как модулятор [С1"]„ но независимо от СГ-зависимой деполяризации мембраны. Последнее предположение основано на том, что при моделировании гиперосмотической и изоосмотической стрикции выявлены ИКСС-опосредованные механизмы сократительной регуляции, независимые от потенциал-зависимого входа кальция, главного следствия деполяризации мембраны.

Полученные результаты свидетельствуют о существовании особой ветви регуляции сократительной активности сосудистых ГМК, включающей специфический объем-зависимый ионный транспорт. Изменение объема клеток является своеобразным сигнальным механизмом, который может запускать сокращение гладкомышеч-ных клеток и модулировать сократительное действие физиологически активных соединений и деполяризации мембраны.

ВЫВОДЫ

1. Варьирование осмолярности инкубационной среды сопровождается изменениями объема сосудистых гладкомышечных клеток. Как набухание, так и стрикция клеток ведут к развитию сокращений, динамика которых согласуется с изменениями объема клеток.

2. Изоосмотическая стрикция вызывает преходящую стимуляцию Ыа+,К+,2СГ котранспорта и регуляторное увеличение объема, в то время как гиперосмотическая стрикция ведет к поддерживаемой активации этого транспорта, не сопровождающейся регуляторным увеличением объема клеток.

3. Транзиторный характер сокращения при изоосмотической стрикции обусловлен восстановлением объема клеток, опосредованным активацией На+,Кн,2СГ котранспорта. Выключение №+,К+,2СГ котранспорта буметанидом пролонгирует как уменьшение объема клеток, так и сокращения сосудистых сегментов.

4. Уменьшение объема клеток увеличивают внутриклеточное содержание ионов хлора в изолированных ГМК аорты крысы. Ингибитор Ыа+,К+,2СГ котранспорта буметанид подавляет накопление ионов хлора как в интактных, так и в активированных гиперосмотической стрикцией сегментах аорты крысы.

5. Одним из ключевых механизмов, используемых гладкомышечными клетками с участием Na+,K+,2C1" котранспорта в регуляции сокращений гладких мышц, является поддержание неравновесного электрохимического потенциала ионов СГ.

6. Сокращения сегментов аорты крысы в моделях гиперосмотической и изо-осмотической стрикции лишь частично зависят от внеклеточных ионов Са2+ и устойчивы к действию блокаторов потенциал-зависимых кальциевых каналов.

7. Сокращение сегментов аорты, индуцированное гипоосмотическим воздействием обусловлено: 1) наличием неравновесного электрохимического хлорного потенциала, 2) открыванием объем-чувствительных и Са2+-активируемых СГ каналов 3) входом Са2+ по потенциал-зависимым кальциевым каналам, 4) угнетением Na+/Ca2+ обмена.

8. Гетероосмотические растворы ведут к значительным изменениям оперирования кальциевой сигнальной системы. Стрикция подавляет потенциал-зависимый вход наружного кальция по Са2+ каналам L-типа и угнетает сокращения, индуцированные гиперкалиевой деполяризацией мембраны и стимуляцией аг адренергических рецепторов. Набухание клеток в гипоосмотическом растворе усиливает эффекты гиперкалиевого раствора, не оказывая существенного влияния на величину сокращений, вызванных стимуляцией агадренергических рецепторов.

9. Активация объем- и Са2+ -зависимых хлорных каналов является важным механизмом запуска сокращения сосудистых ГМК при активации аг адренергических рецепторов и гиперкалиевой деполяризации мембраны.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Эпителий-зависимая регуляция сократительной активности гладких мышц трахеи и бронхов кролика Н Сб. Нейрогуморальные механизмы регуляции органов пищеварительной системы. - Томск, СГМУ, 1997 г., с. 171-172 (Соавт. Капи-левич Л.В., Пан В.В.).

2. Эпителий регулирует сократительную активность гладких мышц трахеи • и бронхов // Сб. резюме в журн. Пульмонология. - 1997 г. «VII Нац. конгр. по болезням органов дыхания». Москва 2-5 июля, 1372, с.370 (Соавт. Капилевич Л.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Ковалев И.В.). ?

3. Участие цАМФ в регуляции сократительных реакций гладких мышц трахеи и бронхов // Сб. резюме в журн. Пульмонология. - 1997 г. «VII Нац. конгр. по болезням органов дыхания». Москва 2-5 июля, 181, с.53 (Соавт. Капилевич Л.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Ковалев И.В.).

4. Особенности эпителийзависимых сократительных реакций гладких мышц в различных отделах респираторного тракта // В мат. сб. 3 съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск, 1997, 165, с.93 (Соавт. Капилевич Л.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Ковалев И.В.).

5. Внутриклеточные сигнальные системы в эпителии и гладких мышцах воздухоносных путей // Пульмонология, 1997, № 2, с.72-76 (Соавт. Баскаков М.Б., Капилевич J1.B., Медведев М.А., Петров Е.Ю., Ковалев И.В.).

6. Особенности эпителий-зависимых сократительных реакций гладких мышц в различных отделах респираторного тракта // В сб. Медико-биол. аспекты нейро—гуморальной регуляции, 1997, СГМУ, - Томск, с.217-219 (Соавт. Баскаков М.Б., Панов A.A., Капилевич JI.B., Медведев М.А., Ковалев И.В.).

7. Влияние нитропруссида натрия на гладкомышечные полоски мочеточника и taenia coli морской свинки // Тез. докл. XVII с. Всерос. физиол. о-ва им. И.П. Павлова, Ростов-на-Дону, 1998 г., с. 102 (Соавт. Баскаков М.Б., Ковалев И.В., Капилевич JI.B, Попов А.Г., Панов A.A., Петров Е.Ю.).

8. Исследование чувствительности гладкомышечных клеток к нитропрус-сиду натрия в различных отделах респираторного тракта // Сб. резюме в ж. Пульмонология,- 1998г. «VIII Нац. Конгр. по болезням органов дыхания».- Москва, 22-24 окт, 1998 г., XXI. 1, с.208 (Соавт. Баскаков М.Б., Капилевич J1.B., Ковалев И.В.).

9. Особенности эпителийзависимых сократительных реакций гладких мышц в различных отделах респираторного тракта // Сб. резюме в ж. Пульмонология- 1998 г. «VIII Нац. Конгр. по болезням органов дыхания». - Москва, 22-24 окт., 1998 г, XXI.5, с.209 (Соавт. Капилевич JI.B., Баскаков М.Б., Ковалев И.В., Медведев М.А.).

10. Особенности зависимых от эпителия сократительных реакций гладких мышц в различных отделах респираторного тракта // Бюлл экспер биол и мед. — 1998 г. № 12. С.618-620 (Соавт. Капилевич JI.B., Баскаков М.Б., Ковалев И.В., Медведев М.А.).

11. Релаксирующий эффект нитропруссида натрия в гладких мышцах: роль ионов кальция // Сб. резюме в ж. Пульмонология - 1998г. «VIII Нац. Конгр. по болезням органов дыхания» - Москва 22-24 окт., 1998 г, XXI.7, с. 210. (Соавт. Ковалев И.В., Панов A.A., Капилевич JI.B., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Попов А.Г.)

12. Роль монооксида азота в регуляции эндотелиально-гладкомышечных взаимодействий в стенке кровеносных сосудов малого круга кровообращения // Сб. резюме в ж. Пульмонология. 1999 г. «IX Нац. Конгресс по болезням органов дыхания» - Москва 31 октября - 3 ноября, XXI.8, с. 167. (Соавт. Капилевич JI.B., Ковалев И.В., Коптева Л.Ю., Носарев A.B., Баскаков М.Б.).

13. Исследование релаксирующего действия нитропруссида натрия на гладкие мышцы, предсокращенные фенилэфрином // Сб. Межрег. науч. кон. Сибири и Дальнего Востока, посвященной 150-летию со дня рождения академика Павлова И.П. 25-26 ноября,1999г, Томск, ТГУ, -с.187-189 (Соавт. Панов A.A., Попов А.Г., Бородин Ю.Л., Ковалев И.В., Медведев М.А. и др., всего 7 человек).

14. Исследование роли цГМФ-зависимых процессов в электромеханическом сопряжении гладких мышц // Сб. Межрег. науч. кон. Сибири и Дальнего Востока, посвященной 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова. 25-26 ноября, 1999 г., Томск, ТГУ, с. 189-191 (Соавт. Панов A.A., Попов А.Г , Бородин Ю.Л., Ковалев И.В., Медведев М.А. и др., всего 7 человек).

15. Влияние эпителия на сократительные реакции трахеи и бронхов кроликов // Совр. проблемы фундам. и клин, медицины (Сб. трудов молодых уч. и студ.) Томск, 1999. С.3-4 (Соавт. Коптева Л.Ю., Носарев A.B.)

16. Релаксирующий эффект нитропруссида натрия в гладких мышцах: роль ионов кальция // Сб. статей «Актуальные проблемы пульмонологии» - Москва, 2000 г., с.722-729 (Соавт. Ковалев И.В., Панов A.A., Капилевич Л.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Попов А.Г.)

17. Влияние нитросоединений на электромеханическое сопряжение гладко-мышечных клеток мочеточника // Бюлл. экспер. биол. и мед.— 2000, T.129.-N5. С.539-541 (Соавт. Ковалев И.В, Панов A.A., Бородин Ю.Л., Капилевич JI.B., Баскаков М.Б., Медведев М. А.).

18. Особенности холинэргической регуляции гладких мышц легочных артерий кролика // Бюлл. экспер. биол. имед.- 2000, T.130.-N8. С.134-136 (Соавт. Капилевич JI.B., Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Носарев A.B., Медведев М.А.).

19. Роль оксида азота в эндотелий-зависимой регуляции гладких мышц легочных артерий //Бюлл. эксперим. биол. имед.- 2000, —N1. С.7-19 (Соавт. Капилевич JI.B., Носарев A.B., Баскаков М.Б., Ковалев И.В., Медведев М.А.).

20. Механизмы NO-индуцированного расслабления гладких мышц сосудов // Актуальные вопросы кардиологии. Тезисы докладов, г. Томск, 14-15 сентября, 2000 г., с.242 (Соавт. Ковалев И.В., Попов А.Г., Панов A.A., Бородин Ю.Л., Медведев М.А., и др., всего 7 человек).

21. Механизмы действия нитропруссида натрия на гладкие мышцы, предсо-кращенные фенилэфрином // Актуальные вопросы медицины. Томск, 2000. С. 107109 (Соавт. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Панов A.A., Попов А.Г., Медведев М.А. и др., всего 7 человек)

22. Роль цГМФ — зависимых процессов в электромеханическом сопряжении ГМК // Актуальные вопросы медицины. Томск, 2000. С 109-110 (Соавт. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Панов A.A., Попов А.Г., Медведев М.А., и др., всего 7 человек)

23. Участие цГМФ-зависимых процессов в электромеханическом сопряжении гладких мышц // «Науки о человеке» — Сб. статей молодых ученых и специалистов. По мат. межд. конгр. «Научная молодежь на пороге XXI века» 18-19 мая 2000 г., Томск, СГМУ, с.88-89 (Соавт. Попов А.Г., Панов A.A., Бородин Ю.Л., Килин A.A.).

24. Участие цГМФ в регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц // «Проблемы нейрогуморальной регуляции физиологических функций висцеральных систем» - сб. тез. Докл. Конф., к 100-летию проф. Д.Я. Криници-на. - Омск: ИВМ ОмГАУ, 2000.-120 е.: с.36-38 (Соавт. Ковалев И.В., Попов А.Г., Панов A.A., Баскаков М.Б., Медведев М.А. и др., всего 7 человек).

25. Исследование эндотелий-зависимой регуляции сокращения гладких мышц легочной артерии кроликов // «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» - Материалы II Российской конференции молодых ученых России с международным участием. 24-28 апреля 2001, Москва, Том II, С.ЗОО (Соавт. Носарев A.B.)

26. Межклеточные взаимоотношения в гладкомышечных органах и сосудах // Мат. 18 Съезда физиол. общества им. И.П. Павлова.- Казань - 2001 - С.117 (Со-

авт. Ковалев И.В., Капилевич JI.B., Баскаков М.Б., Попов А.А., Бородин Ю.Л., Медведев М.А).

27. Внутриклеточные сигнальные системы в эпителий- и эндотелийзависи-мых процессах расслабления гладких мышц // Успехи физол наук,-2001, Т.32, №2,С.88-98 (Соавт. Капилевич Л.В., Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А.)

28. Особенности гистаминэргической регуляции гладких мышц легочных артерий кролика И Бюлл. экспер биол. и мед.- 2001, Т.132.-№8. С. 142-144 (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Баскаков М.Б., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Медведев М.А.).

29. Swelling-induced К+ influx in vascular smooth muscle cells (VSMC) is mediated by Kca channels and increased in SHR // (The 1l"1 European Meeting on Hypertension, June 13-17, 2001. Milan, Italy). Journal of Hypertension. 2001, Vol. 19 (suppl 2), p. S247 (Afanasieva G., Postnov A.Y., Hamet P., Orlov S.N.)

30. Реализация эффектов циклического гуанозинмонофосфата в гладкомы-шечных клетках // В сб. тез. докл. мат. IV Съезда физиологов Сибири с международным участием, Новосибирск, 2002- С. 117. (Соавт. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Капилевич Л.В., Панов А.А., и др., всего 9 человек).

31. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика // В сб. тез. докл. мат. IV Съезда физиологов Сибири с международным участием, Новосибирск, 2002- С. 109 (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Баскаков М.Б.).

32. Влияние ингибиторов фосфодиэстераз циклических нуклеотидов на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток // Бюлл экспер биол и мед.- 2002, т.133.-№1. С.47-50 (Соавт. Ковалев И.В., Попов А.Г., Баскаков М.Б., Капилевич Л.В., Медведев М.А. и др., всего 8 человек).

33. Особенности адренэргической регуляции гладких мышц легочных артерий кролика // Бюлл. экспер биол. и jue<).-2002.-T.133, №3.-С.254-256 (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А.).

34. Исследование роли Na+,K+,2CP котранспорта в регуляции электрической и сократительной активности гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки // Материалы третьего международного конгресса молодых учёных и специалистов - «Науки о человеке». Томск, 16-17 мая 2002, С. 159. (Соавт. Ю.Л. Бородин, Я.Д. Анфиногенова, И.Л. Миноченко, А.Г. Попов).

35. Механизмы влияния осмотического давления среды на сократительную активность сосудистых гладких мышц // Материалы третьего международного конгресса молодых учёных и специалистов - «Науки о человеке». Томск, 16-17 мая 2002, С. 171. (Соавт. Я.Д. Анфиногенова, Ю.Л. Бородин, И.Л. Миноченко).

36. Особенности рефляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика // Пульмонология 12 нац. конгр. по болезням орг. дыхания, Москва, 11-15 ноября, 2002 Г.-С.143 (Соавт. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Баскаков М.Б.).

37. Реализация эффектов гуанилатциклазы в гладкомышечных клетках // Пульмонология. 12 нац конгр. по болезням орг. дыхания, Москва, 11-15 ноября,

2002 г.-C.l 19 (Соавт. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Медведев М.А., Панов А.А., Бородин Ю.Л. и др., всего 9 человек).

38. Inhibition of Na+,K+,2C1~ prevents vascular smooth muscle contraction in Na+- and Cl~-depleted media // (The 19й1 scientific Meeting of the International Society of Hypertension, and 12th European Meeting on Hypertension, June 23-27, 2002. Prague, Czech Republic). Journal of Hypertension 2002, V. 20, Suppl.4.-P.S 280 (Kilin A., Kovalev I.V., Baskakov M., Orlov S.N.)

39. Влияние буметанида, ингибитора Na+,K+,2C1- котранспорта на электрическую и сократительную активность гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки // Бюлл. экспер. биол. и мед.- 2003, Т.135.-№8. С.167-172 (Соавт. Ковалев И.В., Попов А.Г., Баскаков М.Б., Миноченко И.Л., Килин А.А. и др. всего

9).

40. Исследование цГМФ-зависимых механизмов действия винпоцетина на гладкомышечные клетки II Эксп. и клин, фармакол. 2003. Т.66. №4.С. 25-28 (Соавт. Ковалев И.В., Попов А.Г., Баскаков М.Б., Килин А.А., Миноченко И.Л. и др. всего

9.).

41. Electrical and contractile function of vascular smooth muscle cells: regulation by cGMP-dependent mechanisms // (The 13th European Meeting on Hypertension, June 13-17, 2003. Milan, Italy). Journal of Hypertension. 2003, V.21, Suppl.4.-P.S101. (Kovalev I.V., Baskakov M., Kapilevich L., Panov A., Medvedev M.A. et al.).

42. Excitation-contraction coupling in vascular smooth muscle: role of Na-K-CI cotransport and anion channels // (The 13th European Meeting on Hypertension, June 1317, 2003. Milan, Italy). Journal of Hypertension. 2003, Vol. 21, Suppl 4, S101 (Kilin A., Kovalev I., Baskakov M.B., Orlov S.N.).

43. Vascular smooth muscle contraction in hyperosmotic medium: role of Ca2+, anion channels and cell volume-sensitive Na-K-Cl cotransport // (The 13th European Meeting on Hypertension, June 13-17,2003. Milan, Italy). Journal of Hypertension. 2003, Vol 21, Suppl 4, S94 (Kilin A, Kovalev I, Baskakov MB, Orlov SN.)

44. Контрактильные реакции внутренней грудной и лучевой артерий в условиях in vitro // Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функций гладких мышц: Материалы симп. Под ред. М.А. Медведева, М.Б. Баскакова. -Томск, 2004 - С. 80-82 (Соавт. Килин А.А., Баскаков М.Б., Ковалев И.В., Бородин Ю.Л., Мамчур С.Е. и др., всего 7 человек).

45. NO зависимая регуляция Na,,K+,2Cl~ котранспорта и хлорной проводимости мембраны гладкомышечных клеток // Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функций гладких мышц: Материалы симп. Под ред. М.А. Медведева, М.Б. Баскакова - Томск, 2004 - С. 42-45 (Соавт. Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Бородин Ю.Л., Килин А.А., Миноченко И.Л., Попов А.Г. и др., всего 9 человек)

46. Роль Na+,K+,2Cr котранспорта и внеклеточного Са2+ в сокращении гладких мышц аорты крысы в моделях стрикции и набухания клеток // Мембранные и молекулярные механизмы регуляции функций гладких мышц: Материалы симп. / Под ред. М.А. Медведева, М.Б. Баскакова. - Томск, 2004 - С. 50-53 (Соавт.

Баскаков М.Б., Безменова М.А., Ковалев И.В., Килин А.А., Миноченко И.Л., Орлов С.Н. и др., всего 8 человек).

47. Excitation-contraction coupling in vascular smooth muscle under hyposmotic challenge: role of Na+,K+,2Cr cotransport, extracellular calcium, and anion channels // Biological Motility. International Symposium, May 23-June 1, 2004. Pushchino, Russia 2004.-P.22. (Baskakov, M., Medvedev M.A., Kovalev I.V., Borodin Y.L., Kilin A.A. et al.)

48. cGMP-dependent mechanisms in regulation of electric and contractile activity in smooth muscles // Biological Motility. International Symposium, May 23-June 1, 2004. Pushchino, Russia 2004.-P.131. (Kovalev I.V., Baskakov M., Kilin A.A., Nosarev A.V., Borodin Y.L. et al.).

49. Peculiarities of contractile regulation of vascular smooth muscle in rabbit pulmonary artery // Biological Motility. International Symposium, May 23-June 1, 2004. Pushchino, Russia 2004.-P.142. (Nosarev A.V., Kapilevich L.V., Dyakova E.Y., Kovalev I.V., Baskakov M.B.).

50. The regulation of mechanical tension of pulmonary artery smooth muscle by a- and р-adrenoreceptor agonists H Pulmonology. 2004.-Suppl.-P.102. 3rd Congress of European Region International Union against Tuberculosis and Lung Diseases (IUATLD). June 22 26 2004. Moscow, Russia (Nosarev A.V., Kapilevich L.V., Dyakova E.Y., Kovalev I.V., Baskakov M.B.).

51. Cell shrinkage-induced vascular smooth muscle contraction: role of Na-K-2C1 cotransport, intracellular СГ and L-type of Ca2+ channels // (The 14й1 European Meeting on Hypertension, June 13-17, 2004. Paris, France). Journal of Hypertension 2004, Vol. 22, Suppl. 2, P.S44 (Kilin A., Kovalev I., Baskakov M.B., Dulin N.O., Orlov S.N.).

52. Cell shrinkage-induced vascular smooth muscle contraction: role of Na+,K+,2C1~ cotransport, intracellular СГ and L-type Ca2H channels // Pflugers Arch - Eur J Physiol. 449: 42-55, 2004. (Baskakov M.B., Kovalev I.V., Kilin A.A., Dulin NO, Orlov S.N.)

53. Cell volume-dependent vascular smooth muscle contraction: role of Na+,K+,2Cr cotransport and L-type Ca2+ channels // (Canadian Cardiovascular Congress, Calgary, Alberta, October 23- 27, 2004). Can. J. Cardiol. 2004;20 (suppl. D):57D (Baskakov M.B., Kovalev I.V., Kilin A.A., Dulin N.O., Orlov S.N

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии ГОУ ВПО СибГМУ Подписано к печати 17.04.05. Заказ № 100 Тираж 100 экземпляров

)

i h

I ¡

-88 0 2

РНБ Русский фонд

2006-4 14105

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Анфиногенова, Яна Джоновна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 15 1.1 .Структурно-функциональная характеристика гладких мышц гладкомышечных клеток

1.2.Механизмы регуляции объема клеток

1.3 .Участие NK.CC в регуляции функций ГМК

1.4. Хлорные каналы

1.5. Роль ионов хлора в регуляции сократительной активности гладкомышечных клеток

1.6. Роль внутриклеточных ионов Ыа+ и Ыа+/Са2+ обмена в регуляции функций гладкомышечных клеток

ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.2. Методика исследования

2.3. Растворы и реактивы

2.4. Статистическая обработка

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в моделях изменения объема клеток

3.1.1. Сокращение гладкомышечных сегментов аорты в модели гиперосмотической стрикции клеток

3.1.2. Сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты в модели изоосмотической стрикции клеток

3.1.3. Сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели гипоосмотического набухания клеток

3.2. Изменения объема гладкомышечных клеток и активность ЫКСС

3.2.1. Объем клеток \VKY-7 в моделях стрикции и набухания

3.2.2. Активность №ССС в культуральных клетках линии \VKYв моделях гиперосмотической и изоосмотической стрикции

3.3. Изучение вовлечения ЫКСС в сократительные реакции гладкомышечных сегментов аорты крысы в моделях изменения клеточного объема, при аппликации БАВ и гиперкалиевой деполяризации мембраны

3.3.1. Роль ЫКСС в сокращениях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных модуляциями клеточного объема

3.3.2. Участие Ыа+,К+,2СГкотранспорта в сокращении гладкомышечных сегментов аорты крысы при гиперкалиевой деполяризации мембраны

3.3.3. Роль Na+,K+,2C1"котранспорта в сокращениях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных аппликацией БАВ

3.4. Изучение роли хлорной проводимости мембраны в регуляции сократительной активности гладкомышечных сегментов аорты крысы

3.4.1. Участие хлорной проводимости мембраны в сокращении гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированном аппликацией гиперкалиевого раствора

3.4.2. Участие хлорной проводимости мембраны в сокращении гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированном аппликацией агониста а-адренорецепторов фенилэфрина

3.4.3. Роль хлорной проводимости мембраны в сократительных реакциях гладкомышечных сегментов аорты крысы, индуцированных гипоосмотическим набуханием клеток

3.4.4. Роль внеклеточных моновалентных ионов в развитии сокращения гладкомышечных сегментов аорты крысы в модели гипоосмотического набухания

3.4.5. Роль хлорной проводимости мембраны в сократительных реакциях гладкомышечных сегментов аорты крысы в моделях стрикции клеток

3.5. Исследование роли [СГ]; в клетках линии WKY-7 и гладкомышечных сегментах аорты крысы

3.6. Кальций-зависимая регуляция сократительных реакций сосудистых ГМК, вызванных изменениями осмолярности среды инкубации

3.6.1. Са -зависимые механизмы развития сократительных ответов сосудистых гладкомышечных сегментов при аппликации БАВ, деполяризующем действии гиперкалиевого раствора и в моделях изменения объема клеток

3.6.2. Сократительные реакции сосудистых гладкомышечных сегментов, индуцированные гиперкалиевой деполяризацией мембраны, и активацией оц-адренергических рецепторов, в моделях стрикции и набухания клеток

3.6.3. Потенциал-зависимый вход Са2+ в WKY-7 клетки при модуляциях осмолярности среды инкубации ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль ионного транспорта, сопряженного с изменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток"

Несмотря на существенный прогресс в изучении механизмов регуляции электрических и сократительных свойств гладкомышечных клеток (ГМК), до настоящего времени остается открытым целый ряд вопросов, касающихся оперирования механизмов сопряжения возбуждения-сокращения в сосудистых ГМК. Это в первую очередь касается роли изменений объема клеток в регуляции ионного транспорта, электрогенеза и сократительной активности ГМК. Нет достаточной ясности и в определении роли внутриклеточных моновалентных ионов в регуляции функций клеток, хотя в последние годы появились данные о наличии в клетках NaY и СГгопосредованной сигнализации [Taurin et al., 2002; 2003; Borin et al., 1993; Liedtke et al., 2002; Muimo et al., 1998; Treharne, 1994].

Многие годы среди исследователей доминировала точка зрения, согласно которой в основе электрогенеза ГМК лежит изменение ионной проницаемости мембраны для ионов Са2+, К+ и Na+. Однако в последние годы пристальное внимание уделяется возможному участию электронейтрального ионного транспорта в механизмах сопряжения возбуждения-сокращения в ГМК [Chipperfield и Harper, 2000]. Было показано, что, кроме потенциал-зависимых и рецептор-управляемых каналов, важный вклад в регуляцию электрической и сократительной активности ГМК вносят Na+,K+,2C1" и К+,СГ котранспортеры, основной особенностью которых является чувствительность к изменениям объема клеток, а основной функцией - регуляция их объема и поддержание внутриклеточного гомеостаза моновалентных ионов [Adragna et al, 2000; Akar et al., 1999; 2001; Russell, 2000]. Кроме влияния на ионтранспортирующие системы мембраны, клеточный объем вовлечен в регуляцию разнообразных функций клеток, включая пролиферацию, рост, программируемую гибель и некроз [Van Cruchten and

Van Den Broeck, 2002; Lang et al., 2000; Barros et al., 2001; Okada et al., 2001]. Тонкие механизмы связи объема клеток и регуляции их функциональной активности остаются малоизученными, а большинство экспериментальных данных о роли клеточного объема и объем-чувствительного ионного транспорта в регуляции функций клеток были накоплены при исследовании эпителиальных и эрит-роидных клеток.

Учитывая важную роль Na+,K+,2C1" и К+,СГ котранспортеров в поддержании неравновесного электрохимического потенциала ионов хлора, можно полагать, что объем-чувствительный ионный транспорт может быть вовлечен в регуляцию электрической и сократительной активности ГМК, а также реактивности гладких мышц к действию физиологически активных веществ (ФАВ). Так, было показано, что в сосудистых сегментах и культуральных ГМК сосудов Na+,K+,2C1" котранспорт активируется при действии вазоконстрикторов, повышающих внутриклеточную концентрацию Са2+. Напротив, ингибирование этого переносчика наблюдается под влиянием вазодилаторов, стимулирующих цАМФ- и цГМФ-опосредованные сигнальные системы [Akar et al, 1999; 2001; Orlov et al, 1992; Owen and Ridge, 1989; Smith and Smith, 1987; Tseng .and Berk, 1992]. Противоположная регуляция вазоконстрикторами и вазодилататорами была обнаружена при исследовании №+-независимого К+,СГ котранспорта [Adragna et al, 2000; 2004], другого члена суперсемейства СГ-сопряженных котранспортеров, который обеспечивает направленный наружу перенос СГ [Adragna et al., 2000; 2004]. Имеются сведения о вовлечении Na+,K+,2C1" котранспорта в патогенез гипертонической болезни: генетически модифицированные мыши, имеющие дефектный ген Na+,K+,2C1" котранспортера, (NKCC1 ''' knockout mice) характеризуются пониженной величиной кровяного давления и снижением тонуса и величины сократительных ответов сегментов сосудистых ГМК при действии ai-адреноагониста фенилэфрина [Flagella et al., 1999; Meyer et al., 2002].

Важная роль клеточного объема в регуляции сократительной функции ГМК подтверждается тем, что аппликация биологически активных веществ, активирующих цАМФ-зависимую сигнальную систему, ведет к стрикции культу-ральных ГМК аорты [Orlov et al., 1996]. К сходному результату ведет дезинтеграция актинового цитоскелета, состояние которого, в свою очередь, модулируется активностью ряда протеинкиназ [Burgstaller and Gimona., 2004; Nunes, 2002; Matrougui et al., 2001; Abedi and Zachary, 1998]. Таким образом, несмотря на определенные успехи, достигнутые в изучении механизмов объем-зависимой регуляции функций сосудистых гладких мышц, многие вопросы требуют дополнительного изучения.

О А-

Са -зависимые СГ каналы, а также хлорные каналы семейства CFTR (cystic fibrosis transmembrane regulator), которые могут регулировать активность других мембранных протеинов, некоторые типы Na+ и СГ каналов, и принимать участие в трансмембранном переносе Н20 и ионов [Hume at al., 2000]. Роль хлорных каналов и соответствующих ионных токов в обеспечении сократительных реакций ГМК при сжатии и набухании, а также при действии физиологических стимулов изучена недостаточно.

Все вышеизложенное определяет необходимость изучения роли объема клеток, объем-чувствительного Na+,K+,2C1" котранспорта, хлорных каналов и внутриклеточной концентрации ионов хлора в регуляции сократительной активности ГМК. Выявление существующих взаимосвязей в объем-зависимой системе регуляции сократительной функции ГМК имеет важное фундаментальное значение и может служить теоретической базой для создания новых подходов при коррекции патологических состояний, связанных с нарушением сократительной функции гладких мышц.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

ЗАДА ЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследовать динамику механического напряжения гладкомышечных сегментов аорты крысы, объема гладкомышечных клеток линии \VKY-7 и активности Ыа+,К+,2СГ котранспорта в моделях изменения объема клеток.

2. Изучить роль №+,К+,2СГ котранспорта в сократительных реакциях сосудистых гладкомышечных сегментов при активации агадренергических рецепторов, аппликации ангиотензина II, гиперкалиевой деполяризации мембраны и в моделях набухания и стрикции клеток.

3. Исследовать динамику внутриклеточной концентрации ионов хлора при игибировании Ыа+,К+,2СГ котранспорта в интактных и активированных стрикцией ГМК изолированных сегментов аорты.

5. Провести сравнительный анализ особенностей оперирования Са -зависимых механизмов регуляции сократительных ответов гладкой мышцы сосудов при активации агадренергических рецепторов, деполяризации и изменениях объема клеток.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Изменение объема сосудистых гладкомышечных клеток при гипоос-мотическом набухании, гипер- и изоосмотической стрикции ведет к развитию сократительных реакций гладких мышц аорты крысы. Основными механизмами объем-зависимой регуляции сократительной активности сосудистых гладких мышц являются 1) активация №+,К+,2СГ котранспорта и 2) увеличение внутриклеточной концентрации ионов СГ.

2. Ключевую роль в обеспечении сокращений сосудистых гладких мышц при гипоосмотическом набухании, гиперкалиевой деполяризации мембраны и стимуляции агадренорецепторов играют неравновесное распределение ионов СГ, деполяризующие хлорные токи и потенциал-зависимый вход Са2+.

3. При уменьшении объема клеток снижается потенциал-зависимый вход 45Са в изолированные ГМК и существенно изменяется оперирование Са2+-зависимых механизмов регуляции сократительных ответов гладкой мышцы сосудов при деполяризации мембраны и активации агадренорецепторов. Сократительные ответы, индуцированные гипер- и изоосмотической стрикцией клеток, лишь частично зависят от внеклеточного кальция. Они устойчивы к блока-торам потенциал-зависимых Са каналов, сохраняютя после длительной предобработки ЭГТА-содержащим бескальциевым раствором и обусловлены увеличением внутриклеточной концентрации ионов СГ, опосредованным №+,К+,2СГ котранспортом.

4. Регуляторное увеличение объема клеток, опосредованное активацией №+,К+,2СГ котранспорта, является одним из механизмов, обеспечивающих транзиторный характер сокращений гладких мышц в модели изоосмотической стрикции клеток.

НА УЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые продемонстрирована согласованность динамики изменения механического напряжения сосудистых сегментов и объема клеток в моделях ги-поосмотического набухания, гипер- и изоосмотической стрикции.

Впервые представлены данные, характеризующие различия клеточных механизмов индукции и поддержания сократительных ответов ГМ при набухании и стрикции клеток. Показано, что гипоосмотическое набухание клеток ведет к активации входа кальция по Са каналам Ь-типа. При гипер- и изоосмо-тической стрикции уменьшается потенциал-зависимый вход 45Са, а сокращения, индуцированные стрикцией, мало чувствительны к действию антагонистов входа Са2+ и лишь снижаются по величине в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе.

Впервые исследована роль №+,К+,2СГ котранспорта в сократительных реакциях сосудистых гладких мышц, индуцированных изменениями клеточного объема. Гиперосмотический раствор трехкратно увеличивал активность котранспорта в течение всего времени эксперимента. В отличие от этого при изоосмотической стрикции начальное повышение активности МКСС, сменялось ее снижением до контрольного уровня. Транзиторный характер сокращений гладких мышц в модели изоосмотической стрикции клеток обусловлен регуля-торным увеличением объема клеток вследствие активации №+,К+,2СГ котранспорта.

Впервые установлено, что при гипер- и изоосмотической стрикции клеток резко уменьшается величина сокращений ГМ, индуцированных гиперкалиевой деполяризацией и он-адреномиметиком фенилэфрином. Напротив, гипоосмоти-ческое набухание клеток, не изменяя реактивности сегментов к ФЭ, ведет к потенцированию сократительных ответов на действие гиперкалиевого раствора.

Представлены новые данные о механизмах регуляции сокращений ГМ при стрикции клеток, оперирующих с участием Ка+,К+,2СГ котранспортера. Установлено, что выключение буметанид-чувствительного Ка+,К+,2СГ котранспорта снижает внутриклеточную концентрацию ионов хлора как в интактных, так и подвергнутых стрикции сегментах аорты.

Впервые установлено, что выключение буметанид-чувствительного Ка+,К+,2СГ котранспорта подавляет сократительные ответы сосудистых гладких мышц при умеренной, но не субмаксимальной деполяризации мембраны.

Впервые выявлена роль хлорной проводимости мембраны в сокращениях, вызванных изменением объема клеток. Сократительные ответы на деполяризацию, действие ФАВ и стрикцию подавляются при блокировании Са -активируемых и объем-зависимых хлорных каналов. Это свидетельствует о ключевой роли изменений внутриклеточной концентрации СГ и хлорной проводимости в реализации вышеперечисленных воздействий на ГМК.

НА УЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНА ЧИМОСТЬ

Результаты исследования являются важным вкладом в развитие фундаментальных знаний о роли объема, ионного транспорта и ионных каналов в регуляции функций сосудистых гладких мышц. Существенно дополнены представления об участии объем-чувствительного ионного транспорта в регуляции сопряжения возбуждения-сокращения сосудистых гладкомышечных клеток. Установлено, что вклад Ма+,К+,2СГ котранспорта в обеспечение реакций гладких мышц на уменьшение объема клеток реализуется через увеличение внутриклеточной концентрации ионов хлора.

Сокращение в гипоосмотической среде обусловлено оперированием классических кальций-зависимых механизмов и индуцируется СГ-зависимой депол ■ ляризацией мембраны и открыванием Са -каналов Ь-типа. Сократительный ответ гладких мышц на стрикцию мало чувствителен к наружному кальцию и действию блокаторов потенциал-зависимого входа ионов кальция.

Основные положения работы используются в курсах лекций и практических занятиях, проводимых на кафедре биофизики и функциональной диагностики, на кафедре нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета, на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета и на кафедре физиологии человека и животных Кемеровского государственного университета.

Методические приемы и новые данные используются в научных исследованиях, проводимых на кафедрах биофизики и функциональной диагностики и нормальной физиологии Сибирского государственного медицинского университета. Областями применения полученных данных являются физиология, биофизика, фармакология.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Анфиногенова, Яна Джоновна

выводы

2. Изоосмотическая стрикция вызывает преходящую стимуляцию №+,К+,2С1~ котранспорта и регуляторное увеличение объема, в то время как гиперосмотическая стрикция ведет к поддерживаемой активации этого транспорта, не сопровождающейся регуляторным увеличением объема клеток.

3. Транзиторный характер сокращения при изоосмотической стрикции обусловлен восстановлением объема клеток, опосредованным активацией Ма+,К+,2СГ котранспорта. Выключение Ыа',К+,2СГ котранспорта буметанидом пролонгирует как уменьшение объема клеток, так и сокращения сосудистых сегментов.

4. Уменьшение объема клеток увеличивают внутриклеточное содержание ионов хлора в изолированных ГМК аорты крысы. Ингибитор №+,К+,2СГ котранспорта буметанид подавляет накопление ионов хлора как в интактных, так и в активированных гиперосмотической стрикцией сегментах аорты крысы.

5. Одним из ключевых механизмов, используемых гладкомышечными клетками с участием Ма+,К+,2СГ котранспорта в регуляции сокращений гладких мышц, является поддержание неравновесного электрохимического потенциала ионов СГ.

6. Сокращения сегментов аорты крысы в моделях гиперосмотической и изоосмотической стрикции лишь частично зависят от внеклеточных ионов Са2+ и устойчивы к действию блокаторов потенциал-зависимых кальциевых каналов.

7. Сокращение сегментов аорты, индуцированное гипоосмотическим воздействием обусловлено: 1) наличием неравновесного электрохимического хлорного потенциала, 2) открыванием объем-чувствительных и Са2+активируемых СГ каналов 3) входом Са по потенциал-зависимым кальциевым каналам, 4) угнетением № /Са обмена.

8. Гетероосмотические растворы ведут к значительным изменениям оперирования кальциевой сигнальной системы. Стрикция подавляет потенциал-зависимый вход наружного кальция по Са каналам Ь-типа и угнетает сокращения, индуцированные гиперкалиевой деполяризацией мембраны и стимуляцией оц-адренергических рецепторов. Набухание клеток в гипоосмотическом растворе усиливает эффекты гиперкалиевого раствора, не оказывая существенного влияния на величину сокращений, вызванных стимуляцией аг адренергических рецепторов. У

9. Активация объем- и

С а

-зависимых хлорных каналов является важным механизмом запуска сокращения сосудистых гладкомышечных клеток при активации агадренергических рецепторов и гиперкалиевой деполяризации мембраны.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В представленной работе проведен системный анализа роли NKCC, СГ л I каналов, внутриклеточного СГ, внеклеточного Са и объема клеток в регуляции сократительной активности сосудистых ГМК. Обобщенная схема объем-зависмой ветви регуляции сократительной активности сосудистых гладкомы-шечных клеток представлена на рисунке 41.

Модуляции объема клеток достаточны, чтобы индуцировать сокращение СГМК Полученные данные показывают, что переносы сегментов в гипер- или гипотонические растворы ведут к развитию сокращения СГМС.

Несколько свидетельств указывают на то, что это сокращение запускается модуляцией клеточного объема, нежели изменившейся осмолярностью среды инкубации. Во-первых, величина сокращения СГМС, запускаемого сахарозой в концентрациях 50-150 мМ коррелирует со снижением объема клеток (рис. 9). Во-вторых, объем WKY-7 СГМК при гипоосмотическом набухании быстро нормализуется механизмами регуляторного снижения объема через активацию К+ и СГ каналов [Anflnogenova et al., 2001]. Эти данные согласуются с результатами, показывающими транзиторный характер сокращения СГМС в гипоосмо-тической среде (рис. 6) и лишь незначительное повышение объема клеток после 45 мнут инкубации СГМК в гипоосмотической среде (3.03±0.16 против 2.85±0.18 мкл/мг протеина в контроле). В-третьих, наблюдается соответствие поддерживаемого характера сокращения при аппликации сахарозы (рис. 9) и транзиторного сокращение (рис. 10) при изоосмотическом сжатии и динамики поддерживаемого и транзиторного снижения объема клеток в этих моделях стрикции. В-четвертых, транзиторная кинетика снижения объема при изоосмотическом сжатии СГМК обусловлена NKCC-опосредованным RVI [Orlov et al., 1996]. В-пятых, как снижение объема клеток, так и развитие сокращения при изоосмотическом сжатии пролонгируется при ингибировании NKCC буметани-дом (табл. 4, рис. 12).

Сокращение ГМК О

Сжатие

Рис. 41. Схема объем-зависимой регуляции сократительной активности сосудистых ГМК. 1 - Са2л -активируемые хлорные каналы; ¿, 3 - каналы; МП - мембранный потенциал; NKCC - Na\lC ,2СГ котранспорт; 4-Со2' каналы саркоплазматического ретикулума; RV1 - регуляторное увеличение объема; СПР- саркоплазматический ретикулум; ФЛ С — фосфолипаза С; Gp - ГТФ-связывающий белок; ФЭ - фенилэфрин; КЛЦМ- киназа легких цепей миозина.

Сокращение СГМС при сжатии и набухании клеток: различия в Са2+-опосредуемой сигнализации

Несмотря на однонаправленное действие в отношении механического напряжения СГМС, клеточные механизмы, лежащие в основе сократительных ответов СГМС при сжатии и набухании клеток существенно различаются. Действительно, подобно К+0-индуцированной деполяризации мембраны, гипоосмоти-ческое набухание СГМК повышает вход 45Са, ингибируемый нифедипином. Более того, как нифедипин, так и верапамил подавляют сокращение СГМС при набухании клеток (табл. 12). Эти результаты однозначно свидетельствуют, что

Л I индуцированное набуханием сокращение СГМС опосредовано активацией Са каналов L-типа. В противоположность этому, сокращение, индуцируемое гипер-и изоосмотическим сжатием, устойчиво к присутствию блокаторов потенциал-зависимых Са2+ каналов (табл. 12). Сокращение СГМС при сжатии клеток сохраняется также в отсутствие Са2+0 и истощении внутриклеточных депо Са2+ при длительной инкубации в бескальциевом ЭГТА-содержащем растворе, то есть в условиях, отменяющих К+0- и фенилэфрин-индуцированные сокращения (табл. 14).

При дальнейшем исследовании Са2+-зависимой регуляции сокращения сегментов в моделях изменения объема клеток было обнаружено, что стрикция резко подавляет сократительные ответы на гиперкалиевый раствор и аппликацию фенилэфрина (рис. 31-34). Эти результаты согласуются с данными, обнаруженными на фоне сжатия клеток в присутствии 100-мМ мочевины [Wagner et al., 2000]. Напротив, 30-минутная преинкубация в гипоосмотическом растворе, предшествующая изоосмотическому сжатию, повышала амплитуду К+0-индуцированного сокращения (148.2±28.7 по сравнению с 100% контроле, п=9, р<0.05) и не влияла на амплитуду сокращения, индуцированного фенилэфрином (100±14.4%, п=6). Учитывая всю совокупность полученных данных, эти результаты демонстрируют различные механизмы сократительных ответов, запускаемых клеточным сжатием, набуханием и физиологическими стимулами.

Несколько заслуживающих внимания гипотез можно предложить для п I объяснения Са -независимого механизма сопряжения возбуждения-сокращения при стрикции СГМК. Так, Кравцов с соавторами продемонстрировал возможность сокращения аорты крысы при гиперкалиевой деполяризацией мембраны I без увеличения внутриклеточной концентрации Са в безмагниевой среде. Механизм этого сокращения отличался от К+-индуцированного сокращения в присутствии дивалентных катионов, амплитуда которого коррелировала с повышением [Са ]j. Повышение К в изотонической среде вызывало увеличение связывания 45Са с плазмалеммой ГМК аорты. В противоположность общепринятой точке зрения о ключевой роли [Са24-]1 в сопряжении возбуждения и сокращения ГМК, авторы выдвинули гипотезу, что взаимодействие актина и миозина может активироваться М§2+-зависимым связыванием Са2+ с кальциевым каналом [Kravtsov GM et al, 2003]. Тем не менее, необходимо подчеркнуть, что в противоположность сокращению сегментов в моделях стрикции (гл. З.6.1.), К+0

94- 9-1индуцированное сокращение в без-Mg растворе подавлялось блокаторами Са каналов L-типа [Kravtsov et al., 2003]. Кроме того, несколько исследовательских групп сообщали о фосфорилировании легких цепей миозина и Rho-зависимой транслокации миозина II при гиперосмотической стрикции клеток [Klein and O'Neill, 1993, 1995; Pedersen et al., 2002; Shrode et al., 1995; Takeda et al., 1993].

При исследовании механизмов подавляющего действия стрикции клеток на КС1- и ФЭ-вызванные сокращения было установлено, что стрикция ингиби

9+ рует потенциал-зависимый входа Са" (рис. 40). Тем не менее, нужно подчеркнуть, что снижение потенциал-зависимого входа при стрикции составляло лишь -40%, а базальное накопление 45Са не изменялось вообще. Возможно, механизмы подавляющего действия стрикции на реактивность сосудистых ГМК не ограничиваются подавлением потенциал-зависимого входа Са2+. Это предположение основано на том, что ФЭ- и KCl-индуцированное фосфорилирование легких

9-1цепей миозина (ЛЦМ) опосредуется не только классической Са /кальмодулин-зависимой активацией КЛЦМ, но и вовлекает различные сигнальные пути, модулируемые при изменении объема клеток. Так, активация ai-адренорецепторов ведет к запуску многочисленных сигналов, контролирующие взаимодействие актина и миозина. Эти сигнальные пути могут быть классифицированы в зависимости от принадлежности к миозин- или актин-зависимому типу регуляции.

Миозин-зависимый путь регуляции охватывает как кальциевую активацию, так и кальциевую сенситизацию. При адренергической активации происходит динамическая транслокация в мембрану и другие внутриклеточные сайты ряда протеиновых киназ (в частности, Са -активируемых протеинкиназ, Rho-ассоциированных киназ и ПК-С), которые вовлечены в регуляцию фосфатазы ЛЦМ и обеспечивают кальциевую сенситизацию сокращения. Актин-зависимая регуляция включает возможную дезинтеграцию актин-миозиновых взаимодействий посредством фосфорилирования кальдесмона с участием МАР-киназ, которые также транслоцируются в цитоплазме при адренергической стимуляции [Wier and Morgan, 2003]. Ранее участие Rho-ассоциированных киназ рассматривалось как главный механизм регуляции кальций-независимых компонентов сокращения сосудистых ГМК при активации ряда рецепторов [Shum et al., 2003; Nakao et al., 2003; Damron et al, 2002; Crowley et al, 2002; Shirao et al., 2002; Shirasawa, 2003]. Однако, в сосудистых ГМК существует и

Са2" -зависимая стимуляция Rho [Sakurada et al, 2003; Ghisdal et al., 2003]. При этом наблюдается сложное взаимодействие RhoA/ROCK-зависимой сигнализации с кальций-зависимыми механизмами.

Еще одним механизмом снижения чувствительности гладких мышц при аппликации КС1 и ФЭ в моделях стрикции клеток может выступать увеличение общей концентрации макромолекул (macromolecular crowding) [], роль которой была установлена в регуляции элементов цитоскелета [Cuneo et al., 1992; Madden and Herzfeld, 1993] и объем-чувствительного мембранного транспорта [Colclasure et al., 1992; Dunham et al., 1995].

Роль NKCC и внутриклеточного СГ

Основной гипотезой вовлечения Na+,K+,2C1" котранспорта в сократительную регуляцию СГМК является создание неравновесного электрохимического градиента для ионов СГ. В это случае, сокращение сегментов может запускаться при деполяризации сарколеммы, вызванной увеличением [Cl"]j и/или PCi. Эта гипотеза согласуется со следующими результатами: 1) Блокаторы СГ каналов нифлумовая кислота и SITS подавляют сокращения СГМС при гиперкалиевой деполяризации мембраны СГМК и аппликации фенилэфрина и гипоосмотического растворов. 2) Селективный ингибитор NKCC буметанид вызывает снижение амплитуды сокращений сегментов, вызванных аппликацией фенилэфрина, KCl (30 мМ), а также гипо- и гиперосмотического растворов. 3) Ингибирование NKCC буметанидом ведет к гиперполяризации мембраны СГМК [Davis et al., 1993] и снижению [Cl"]j в как в интактных, так и в стимулированных аппликацией сахарозой сегментах аорты (гл. 3.5., табл. 11). 4) Буметанид подавляет сокращение сегментов при слабой, но не сильной, деполяризации мембраны (гл. 3.3.2., рис. 15). Последнее наблюдение можно было бы связать с подавлением активности NKCC, обусловленном снижением концентрации Na+0 со 120 мМ до 60 мМ. Однако высокая афинность NKCC для Na+0 (Кш~25 мМ) [Orlov et al., 1996] противоречит этому предположению.

Были получены данные, что длительная (30 мин) предобработка буметанидом почти полностью подавляют сокращение, индуцированное аппликацией фенилэфрина (гл. 3.3.3., рис. 17). Этот результат отличается от ранее опубликованных данных [Akar et al., 1999], согласно которым 20-минутная предобработка 10 мкМ-буметанидом снижала ФЭ(1 мкМ)-индуцированное сокращение лишь на 5-10%. Противоречивость этих результатов может быть объяснена как различием экспериментальных животных, использованных в данном исследовании и в работе Akar et al., так и различными протоколами исследования.

По всей видимости, в модели гиперосмотической стрикции быстрое повышение [Cl"]i в СГМК является следствием сжатия клеток, в то время как при изоосмотической стрикции [Cl"]j увеличивается как за счет снижения объема, так и за счет активации NKCC. Это подтверждается тем, что буметанид отменяет увеличение [Cl"]j в модели изоосмотического, но гиперосмотического сжатия клеток (табл. 10). Вероятно, NKCC вовлечен в сократительную регуляцию СГМК при стрикции как модулятор [СГ];, но независимо от СГ-индуцированной деполяризации мембраны. Последнее предположение основано на том, что при моделировании гиперосмотической и изоосмотической стрикции выявлены NKCC-опосредованные механизмы сократительной регуляции, независимые от потенциал-зависимого входа кальция, который должен быть главным следствием деполяризации мембраны. Исключая классические Ca -зависимые механизмы сокращения, запускаемые при активации деполяризующих хлорных токов, С11 может участвовать в сопряжении возбуждения и сокращения 1) вызывая СГ-зависимую деполяризацию мембраны СГМК с последующим сокращением, независимым от повышения внутриклеточного кальция и не требующим входа наружного кальция или 2) запуская не идентифицированный до настоящего времени в СГМК СП-чувствительный регуляторный каскад.

Первая гипотеза основана на данных Кгау!зоу е! а1 (2003), согласно которым Mg2+-зaвиcимoe связывание Са2+ с кальциевым каналом может активировать взаимодействие актина и миозина при гиперкалиевой деполяризации мембраны [Кгауйоу вМ & а1, 2003].

Что касается второй гипотезы, то она основана на том, что рядом исследователей были идентифицированы С ['¡-чувствительные каскады, вовлекающие СП-зависимые протеиновые киназы в ряде негладкомышечных клеток [ТгеЬагпе Ю ег а1., 1994; Мшто Я ^ а1., 1998; Ьапшз ЫА е1 а1., 1993]. Тем не менее, модуляция [СГ]; вполне может влиять на активность внутриклеточных протеинов, вовлеченных в функционирование сократительного аппарата независимо от входа кальция.

Полученные результаты свидетельствуют о существовании особой ветви регуляции сократительной активности сосудистых ГМК, включающей специфический объем-зависимый ионный транспорт. Изменение объема клеток является своеобразным сигнальным механизмом, который может запускать сокращение гладкомышечных клеток и модулировать сократительное действие физиологически активных соединений и деполяризации мембраны.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Анфиногенова, Яна Джоновна, Томск

1. Антипенко, А.Е. Вторичные посредники в клетках сердца и гладких мышц сосудов/ А.Е. Антипенко // Биохимия. 1991. - Т. 56, вып. 4. - С.589-620.

2. Баскаков, М.Б. Кальмодулин в механизмах регуляции сократительной функции гладкой мускулатуры / М.Б. Баскаков, М.А. Медведев // Бюлл. СО АМН СССР 1984. - N4. - С.83-88.

3. Баскаков, М.Б. Механизмы регуляции вторичными посредниками электрической и сократительной активности гладких мышц / М.Б. Баскаков: Дисс.д.м.н. Томск, 1988. - 367 с.

4. Баскаков, М.Б. Роль протеинкиназы С в регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц: эффект форболового эфира / М.Б. Баскаков, В.Б Студницкий, М.А. Медведев, Б.И. Ходоров // Бюлл. эксперим. биол. мед.- 1987.-N7.-C.8-ll.

5. Бурый, В.А. Роль внутриклеточного кальция в активации сокращения гладких мышц легочных артерий / В.А. Бурый, A.B. Гурковская, Н.И. Гокина, М.Ф. Шуба// Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1989. - Т. 105,N9. - С.261-264.

6. Бурый, В.А. Роль внутриклеточного кальция в активации сокращения гладких мышц легочных артерий / В.А. Бурый, A.B. Гурковская, Н.И. Гокина, М.Ф. Шуба // Бюлл. эксперим. биол. и медицины 1989. - т. 105, N9. - С.261-264.

7. Веренинов A.A. Транспорт ионов у клеток в культуре / A.A. Веренинов, И.И. Марахова. Ленинград. - Наука. - 1986. - 290 с.

8. Есипова, И.К. Очерки по гемодинамической перестройке сосудистой стенки // И.К. Есипова, О .Я. Кауфман, Г.С. Крючкова, В.А. Шахламов, И.М. Яровая- 1971.-312 с.

9. Костерин, С.А. Транспорт кальция в гладких мышцах / С.А. Костерин. -Киев: Наукова думка, 1990. 216 с.

10. Кочемасова, Н.Г. Роль ионов кальция в формировании плато потенциала действия гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки в безнатриевых растворах / Н.Г. Кочемасова // Физиол. ж. 1982. - T.28,N2. - С.206-214.

11. Кочемасова, Н.Г. Роль ионов кальция в формировании плато потенциала действия гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки в безнатриевых растворах / Н.Г. Кочемасова // Физиол. ж. 1982. - T.28,N2. - С.206-214.

12. Кочемасова, Н.Г. Роль ионов кальция в формировании плато потенциала действия гладкомышечных клеток мочеточника морской свинки в безнатриевых растворах / Н.Г. Кочемасова // Физиол. ж. 1982. - T.28,N2. - С.206-214.

13. Крутецкая, З.И. Метаболизм фосфоинозитидов и формирование кальциевого сигнала в клетках / З.И. Крутецкая, O.E. Лебедев // Цитология. 1992. -T.34.N10. - С.26-44.

14. Курский, М.Д, Транспорт кальция и функции гладких мышц / М. Д. Курский, Е.Т. Михайленко, А.Н.Федоров.- Киев: Наукова думка, 1981. -127 с.

15. Орлов, С.Н. Кальмодулин / С.Н. Орлов. М: Итоги науки и тех. 1987. -209 с.

16. Орлов, С.Н. Са-насос плазматической мембраны // Кальций регулятор метаболизма. - Томск, 1987. - С.74-96.

17. Расмуссен, Г. Циркуляция кальция и внутриклеточная передача сигнала / Г. Расмуссен // В мире науки. 1989.-N12. - С.36-43.

18. Рекалов, В.В. Кальциевый ток и сокращение гладкомышечной клетки /

19. B.В. Рекалов, В.В. Тараненко, М.Ф. Шуба // Докл. АН СССР. 1985. - T.281,N2. - С.462-466.

20. Скок, В.И. Нервно-мышечная физиология / В.И. Скок, М.Ф. Шуба. Киев: В ища школа. 1986.- 224 с.

21. Тепперман, Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Дж. Тепперман, X. Тепперман: Пер. с англ.М.: Мир. 1989. - 656 с.

22. Ткачук, В.А. Гормональная регуляция транспорта Ca в клетках крови и сосудов / В.А.Ткачук // Рос. Физиол. ж. им. И.М.Сеченова. 1998. - T.84,N10.1. C.1006-1018.

23. Ткачук, В.А. Регуляция кальцием аденилатциклазной системы сердца / В.А. Ткачук // в сб. Кальций регулятор метаболизма. - Томск, 1987. - С.25-37.

24. Шуба, М.Ф. Мембранные механизмы возбуждения гладкомышечных клеток / М.Ф. Шуба, В.А Бурый // Физиол. ж. -1984. Т.30, N5. - С.545-559.

25. Шуба, М.Ф. Механизмы возбуждения и сокращения гладких мышц мозговых сосудов / М.Ф. Шуба., Н.И. Гокина. -Киев: Наукова думка. 1991. - 129 с.

26. Шуба, М.Ф. Пути и механизмы трансмембранного входа в гладкомышеч-ные клетки ионов кальция, участвующих в активации сокращения // Физиологический журнал. 1981. - т.27,N4. - С. 533-541.

27. Шуба, М.Ф. Физиология сосудистых гладких мышц / М.Ф. Шуба, Н.Г Ко-чемасова. Киев: Наукова думка, 1988. - 250с.

28. Шуба, М.Ф. Физиология сосудистых гладких мышц / М.Ф. Шуба, Н.Г. Кочемасова. Киев: Наукова думка, 1988. - 250 с.

29. Hedges J. Phosphorylation of caldesmon by ERK MAP kinases in smooth muscle. / J. Hedges, B. Oxhorn, M. Carty, et all. // Am. J. Physiol. Cell. Physiol.-2000.-V.278.-C718-C726.

30. Abedi, H. Cytochalasin D stimulation of tyrosine phosphorylation and phos-photyrosine-associated kinase activity in vascular smooth muscle cells / H. Abedi, I. Zachary // Biochem Biophys Res Commun. 1998 Apr 28;245(3):646-50.

31. Adames, N.R. Microtubule interactions with the cell cortex causing nuclear movements in Saccharomyces cerevisiae / N.R. Adames, J.A. Cooper // J Cell Biol. 2000/- 149(4).-P863-74.

32. Adragna, N / N. Adragna, M. Di Fulvio, P.K. Lauf // Regulation of K-Cl co-transport: from function to genes. J.Membr.Biol. 2004. - (in press).

33. Adragna, N.C. K-Cl cotransport in vascular smooth muscle and erythrocytes: possible implication in vasodilation / N.C. Adragna, R.E. White, S.N. Orlov, P.K. Lauf // Am J Physiol/- 2000, 278. - C381-C390.

34. Aiton, J.F. Occurrence of passive furosemide-sensitive transmembrane potassium transport in cultured cells / J.F. Aiton, A.R. Chipperfield, J.F. Lamb, P. Ogden, N.L. Simmons // Biochim. Biophys. 1981. - Acta 646, P.389-398.

35. Akar, F. Contractile regulation of the Na+-K+-2C1" cotransporter in vascular smooth muscle / F. Akar, G. Jiang, R.J. Paul, W.C. O'Neill // Am J Physiol Cell Physiol (United States). 2001. - 281. - P.C579-84.

36. Akar, F. Vasoconstrictors and nitrovasodilators reciprocally regulate the Na+-K+-2C1" cotransporter in rat aorta / F. Akar, E. Skinner, J.D. Klein, M. Jena, R.J. Paul, W.C. O'Neill II Am J Physiol 1999. - 276. - P.C1383-C1390.

37. Albert, A.P. Properties of a constitutively active Ca2+-permeable non-selectivecation channel in rabbit ear artery myocytes / A.P. Albert, A.S. Piper, W.A. Large // Ji

38. Physiol. 2003. - 549(Pt 1). - pl43-56. Epub 2003 Apr 04.

39. Alda, J.O. Purification and chemical characterization of a potent inhibitor of the Na-K-Cl cotransport system in rat urine / J.O. Alda, J.A. Mayoral, M. Lou, I. Gimenez, R.M. Martinez, R.P. Garay // Biochem Biophys Res Commun. 1996. 221(2). -P.279-85.

40. Alda, J.O. Site of origin of an urinary Na-K-Cl cotransport inhibitor / J.O. Alda, M. Alvarez-Guerra, M. Lou, I. Gimenez, A. Soler, R.P. Garay // Mineral Electrolyte Metab. 1995. - 21 - P.403-410.

41. Alexander, S.P.H. Trends in pharmacological Sciences Receptor and Ion Channel Supplement / S.P.H. Alexander, J.A. Peters. 2000. Vol. 11. Elsevier, - Amsterdam.

42. Alvarez-Guerra, M. Endogenous inhibitor of Na-K-Cl cotransport system in inbred Dahl rats / M. Alvarez-Guerra, F. Vargas, J.O. Alda, R.P. Garay // Am. J. Physiol. 1997. - 272. - F356-F363.

43. Alvarez-Guerra, M. The erythrocyte Na,K,Cl cotransporter and its circulating inhibitor in Dahl salt-sensitive rats / M. Alvarez-Guerra, C. Nazaret, R.P. Garay // J.Hypertens. 1998.-16. - P. 1499-1504.

44. Alvarez-Leefmans, F.J. Chloride transport, osmotic balance and presynaptic inhibition / F.J. Alvarez-Leefmans // In: Presynaptic Inhibition and Neural Control, edited by P. Rudomy'n, R. Romo, and L. Mendell. New York: Oxford Univ. Press, 1997.

45. Alvarez-Leefmans, F.J. Intracellular chloride regulation in amphibian dorsal root ganglion neurones studied with ion-selective microelectrodes / F.J. Alvarez-Leefinans FJ, Garni SM, Giraldez F, Noguer I // J. Physiol. (Lond.) 406: 225-246, 1988.

46. Anderson, R.G.W. The caveolae membrane system / R.G.W. Anderson // Annu. Rev. Biochem. 67. 1998. - P.199-225.

47. Arnon, A. Na+ entry via store-operated channels modulates Ca2+ signaling in arterial myocytes / A. Arnon, J.M. Hamlyn, M.P. Blaustein // Am J Physiol Cell Physiol. 2000. - 278. - P.C163-C173.

48. Asano, M. Contribution of sarcoplasmic reticulum Ca2+ to the activation of Ca2+ -activated K+ channels in the resting state of arteries from spontaneously hypertensive rats / M. Asano, Y. Nomura // J Hypertens. 2002. - 20(3). - P.447-54.

49. Babitch, J. Channel hands / J. Babitch // Nature. 1990. - 346. - P.321-322.

50. Bachmann, A. Potent inhibition of the CFTR chloride channel by suramin / A. Bachmann, U. Russ, U. Quast // Naunyn-Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1999. -360: P.473-476.

51. Bae, Y.M. Ca2+-dependent membrane currents in vascular smooth muscle cells of the rabbit / Y.M. Bae, K.S. Kim, J.K. Park, E. Ko, S.Y. Ryu, H.J. Baek, S.H. Lee, W.K. Ho, Ye. Earm // Life Sci (England). 2001. - 69(21). - P.2451-66.

52. Bahamonde, M.I. Voltage-dependent anion channel localises to the plasma membrane and peripheral but not perinuclear mitochondria / M.I. Bahamonde, M.A. Valverde // Pflugers Arch. 2003. 446(3). - P.309-13. Epub 2003 Apr 16.

53. Bahinski, A. Chloride conductance regulated by cyclic AMP-dependent protein kinase in cardiac myocytes / A. Bahinski, A.C. Nairn, P. Greengard, D.C. Gadsby // Nature. 1989. - 340. - P.718-721.

54. Bannister, J. Relaxation of isolated rat arterial smooth muscle by chloride transport inhibitors / J. Bannister, A.R. Chipperfield, P. Dubb, A.A. Harper, A. Haus-sain // J. Physiol. 1999. - 520P, 99.

55. Barandier, C. Small G proteins as novel therapeutic targets in cardiovascular medicine / C. Barandier, X.-F., Ming, Z. Yang // News Physiol Sci. 2003. - 18. -P. 18-22.

56. Barany, K. Myosin light chains / K. Barany, Barany M // In Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (M. Barany, Ed.). 1996a. - P.21-35, Academic Press.

57. Barany, M. (1996). Biochemistry of Smooth Muscle Contraction. Academic Press.

58. Barany, M. Exchange of the actin-bound nucleotide in intact arterial smooth muscle / Barany, M, Barron JT, Gu L, Barany K // J. Biol. Chem. 2001. -276. -P.48398-48403.

59. Barany, M. Inositol 1,4,5-trisphosphate production / K. Barany, Barany M // In Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (M. Barany, Ed.). 1996b. - P.269-282, Academic Press.

60. Barany, M. Protein phosphorylation during contraction and relaxation / K. Barany, Barany M // In Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (M. Barany, Ed.). 1996c. - P.321-339, Academic Press.

61. Barnes, P.J. Beta-adrenoreceptors smooth muscle, nerves cells / P. Barnes // Life sci. 1993. - V.52,N26. - P.2101- 2109.

62. Barros J. Necrotic volume increase and the early physiology of necrosis / L.F. Barros, T. Hermosilla, J. Castro // Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. -2001.- 130(3).-P.401-9.

63. Beall, A.C. Cyclic nucleotide-dependent vasorelaxation is associated with the phosphorylation of a small heat shock-related protein / A.C. Beall, K. Kato, J.R. Goldenring, R. Rasmussen, C.M. Brophy // J. Biol. Chem. 1997. -272. - P. 1128311287.

64. Becker, P.L. Regulation of calcium concentration in voltage-clamped smooth muscle cells / P.L. Becker, J.J. Singer, J.V. Walsh, F.S. Fay // Science. 1989.-244. -P.211-214.

65. Begum, N. Insulin signaling in the vasculature / N. Begum // Front Biosci. 2003.- 1;8. -P.s796-804.

66. Berger, HA. Regulation of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator CI 2 channel by specific protein kinases and protein phosphatases / H.A. Berger, S.M. Travis, M.J. Welsh // J. Biol. Chem. 1993. -268. - P.2037-2047.

67. Berk, B.C. Spontaneously hypertensive rat vascular smooth muscle cells in culture exhibit increased growth and Na+/Ii+ exchange / B.C. Berk, G. Vallega!, A.J. Muslin, H.M. Gordon, M. Canessa, R.W. Alexander // J.Clin.Invest. 1989. - 83. -P.822-829.

68. Berridge, M. Receptors and on calcium signaling / M. Berridge //Tends. Pharmacol. Sci. 1984.- V.2101 - P.345-360.

69. Bescond, J. Characterization of an angiotensin-II-activated chloride current in rabbit sinoatrial cells / J. Bescond, P. Bois, J. Petit-Jacques, J. Lenfant // J. Membr. Biol. 1994. - 140. -P.153-161.

70. Bialecki, R. KCa channel antagonists reduce NO donor-mediated relaxation of vascular and tracheal smooth muscle / R. Bialecki, C.Stinson-Fisher // Am. J. Physiol.-1995. V.268,N1. - P.L152-L159.

71. Bianchi, G. Red blood cell abnormalities and spontaneous hypertension in rats. A genetically determined link / G. Bianchi, P. Ferrari, P. Trizio, M. Ferrandi, L. To-rielli, B.R. Barber, E. Polli 11 Hypertension. 1985, 7. -P.319-325.

72. Biel, M. Primary structure and functional expression of a high voltage activated calcium channel from rabbit lung / M. Biel, P. Ruth, E. Bosse, R. Hullin, W. Stuhmer, V. Fockerzi, F. Hofmann // FEBSLett. 1990. - 269. - P.409^112.

73. Bkaily, G. Receptors and second messenger modulation of Ca2+ and K+ channels activity in vascular smooth muscle cells. In: Ion Channels of Vascular Smooth

74. Muscle Cells and Endothelial Cells, edited by N. Sperelakis and H. Kuriyama. New York: Elsevier, 1992, P. 185-198.

75. Blaustein, MP. Physiological effects of endogenous ouabain: control of intracellular Ca2+ stores and cell responsiveness / M.P. Blaustein // Am J Physiol Cell Physiol. 1993. -264. - P.C1367-C1387

76. Blumenstein, Y. Intracellular Na+ inhibits voltage-dependent N-type Ca2+ channels by a G protein subunit-dependent mechanism / Y. Blumenstein, O.P. Maximyuk, N. Lozovaya, N.M. Yatsenko et al // J Physiol. 2004. - 556. - P. 121-134.i

77. Boese, SH. The swelling-activated anion conductance in the mouse renal inner medullary collecting duct cell line mIMCD-K2 / S.H. Boese, M. Glanville, M.A. Gray, N.L. Simmons // JMembr Biol. 2000. - 177. - P.51-64.

78. Borin, ML. Intracellular free Na+ in resting and activated A7r5 vascular smooth muscle cells / M.L. Borin, W.F. Goldman, M.P. Blaustein // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1993.-264.-P.C1513-C1524.

79. Bortner, CD. Absence of volume regulatory mechanisms contributes to the rapid activation of apoptosis in thymocytes / C.D. Bortner, J.A. Cidlowski // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996.-271.-P.C950-C961.

80. Bourcier, N. Purinergic-induced ion current in monolayers of C7-MDCK cells: role of basolateral and apical ion transporters / N .Bourcier, R. Grygorczyk, M. Gekle, Y. Berthiaume, S.N. Orlov IIJ Membr Biol. 2002, - 186. - P. 131-143.

81. Bourreau, J.P. Acetylcholine Ca2+ stores refilling directly involves a dihydro-pyridine-sensitive channels in dog trachea / J.P. Bourreau, A.P. Abela, C.Y. Kwan, E.E. Daniel I I Am. J. Physiol. Cell Physiol. 30) 1991. - 261 -P.C497-C505.

82. Brock, T.A. Angiotensin increases Na+ entry and Na+/K+ pump activity in cultures of smooth muscle from rat aorta / T.A. Brock, L.J. Lewis, J.B. Smith // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1982. - 79. - P.1438-1442.

83. Brophy, C.M. The small heat shock-related protein-20 is an actin-associated protein / Brophy, CM, Lamb S, Graham A // J. Vase. Surg. 1999. - 29. - P.326-333.

84. Brown, R.A. Increased Na+K+Cl" cotransport in rat arterial smooth muscle in deoxycorticosterone (DOCA)/salt-induced hypertension / R.A. Brown, A.R. Chipper-field, J.P. Davis, A.A. Harper // J Vase Res. 1999. - 36. - P.492-501. ;

85. Brozovich, FV. Rho signaling: agonist stimulation and depolarization come together / F.V. Brozovich // Circ Res. 2003. - 19;93(6). - P.481-3.

86. Bruschi, G. Myoplasmic Ca2+-force relationship studied with fura-2 during stimulation of rat aortic smooth muscle / G. Bruschi, M.H. Bruschi, G. Regolisty, A. Borghetti // Am J Physiol. 1988. -254. - P.H840-H854.

87. Bukosi, R.D. Intracellular Ca2/ and force determined simultaneously in isolated resistance arteries / R.D. Bukosi, C. Bergmann, A. Gairard, J.C. Stoclet // Am. J. Physiol. (Heart Circ. Physiol. 26) 1989. - 257. -P. H1728-H1735.

88. Biilbring, E. Correlation between membrane potential, spike discharge and tension in smooth muscle / Biilbring, EII J. Physiol. (Lond.). 1955. - 128. - P.200-221.

89. Billow, A. Membrane stretch evoked by cell swelling increases contractile activity in vascular smooth muscle through dihydropyridine-sensitive pathways / A. Biilow, B. Johansson // Acta Physiol Scand. 1994. - 152. - P.419-427.

90. Burdyga, T.V. On the mechanisms whereby temperature affects excitation-contraction coupling in smooth muscle In Process Citation. / T.V. Burdyga, S. Wray // J Gen Physiol (United States). 1 2002. - 119(1). - P.93-104.

91. Burg, M.B. Macromolecular Crowding as a Cell Volume Sensor / MB. Burg // Cell Physiol Biochem. 2000. -10. -P.251-256.

92. Burgstaller, G. Actin cytoskeleton remodelling via local inhibition of contracitility at discrete microdomains / G. Burgstaller, M. Gimona // J Cell Sci. 2004. -117(Pt 2). -P.223-31.

93. Bursell, J.D. Swelling-activated K+ transport via two functionally distinct pathways in eel erythrocytes / J.D. Bursell, K. Kirk // Am. J. Physiol. Renal Physiol. -1996.-270.-P.R61-R70.

94. Cabantchik, Z.I. Chemical probes for anion transporters of mammalian cell membranes / Z.I. Cabantchik, R. Greger, // Am. J. Physiol. 1992. - 262. - P.C803-C827.

95. Caffrey, J.M. Calcium channels of amphibian stomach and mammalian aorta smooth muscle cells / J.M. Caffrey, I.R. Josephson, A.M. Brown // Biophys. J. -1986.-49.-P. 1237-1242.

96. Canessa, M. Cell growth and Na-K-Cl cotransport responses of vascular smooth muscle cells of Milan rats / M. Canessa, G. Salazar, E. Werner, G. Vallega, A. Gonzalez // Hypertension. 1994. - 23(6 Pt 2). - P. 1022-6.

97. Cantiello, HF. Actin-binding protein contributes to cell volume regulatory ion channel activation in melanoma cells / H.F. Cantiello, A.G. Prat, J.V. Bonventre, C.C. Cunningham et al // J. Biol. Chem. 1993. - 268. - P.4596^1599.

98. Cario-Toumaniantz, C. Role of Rho kinase signalling in healthy and varicose human saphenous veins / C. Cario-Toumaniantz, S. Evellin, S. Maury, O. Baron et al // Br J Pharmacol. 2002. - 137(2). - P.205-12.

99. Carmeliet, E. Mechanisms and control of repolarization / E. Carmeliet // Eur. Heart J. 1993. - 14. - P.3-13.

100. Caron, L. Cloning and functional characterization of a cation-Cl" cotrans-porter interacting protein / L. Caron, F. Rousseau, E. Gagnon, P. Isenring // J. Biol. Chem. 2000. - 275. - P.32 027-32 036.

101. Carter, R.W. Acute and chronic NOS inhibition enhances alpha(2)- adre-noreceptor-stimulated RhoA and Rho kinase in rat aorta / R.W. Carter, M. Begaye, N.L. Kanagy // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - 283(4). - P.H1361-9.

102. Casteels, R. Exchange characteristics of the noradrenaline-sensitive Ca2+ store in vascular smooth muscle cells of rabbit ear artery / R. Casteels, G. Droogmans // J. Physiol. (Lond.). 1981. - 317. - P.263-279.

103. Chamberlin, M.E. Anisosmotic cell volume regulation: a comparative view / M.E. Chamberlin, K. Strange // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1989. - 257. -P.C159-C173.

104. Chen, Q. The superficial buffer barrier in vascular smooth muscle / Q. Chen, M. Cannel, C. Van Breemen // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1992. - 70. -P.509-514.

105. Chen, Q. The superficial buffer barrier in venous smooth muscle: sarcoplasmic reticulum refilling and unloading / Q. Chen, C. Van Breemen // Br. J. Pharmacol. 1993. - 109. -P.336-343.

106. Chipperfield, A.R. An acetazolamide-sensitive inward chloride pump in vascular smooth muscle / A.R. Chipperfield, J.P.L. Davis, A.A.Harper // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. - 194. P.407-412.

107. Chipperfield, A.R. Chloride in smooth muscle / A.R. Chipperfield, A.A.Harper // Prog Biophys Mol Biol. 2000. - 74. - P. 175-221.

108. Chipperfield, A.R. Evidence for volume regulatory increase in rat arterial smooth muscle / A.R. Chipperfield, J.P.L. Davis, A.A.Harper // Exp. Physiol. -1991. -76.-P.971-974.

109. Chipperfield, A.R. Sodium-independent inward chloride pumping in rat cardiac ventricular cells / A.R. Chipperfield, J.P.L. Davis, A.A.Harper // Am. J. Physiol. -1997. 272. - P.H735-H739.

110. Chipperfield, A.R. The (Na+K+Cl) cotransport system / A.R. Chipperfield //Clin. Sci. 1986. -71. -P.465-476.

111. Chitaley K. Microtubule depolymerization facilitates contraction of vascular smooth muscle via increased activation of RhoA/Rho-kinase / Chitaley K, Webb RC // Med Hypotheses. 2001. - 56(3). - P.381-5.

112. Clemo, HF. Does C1C-3 modulate cardiac cell volume? / H.F. Clemo, J.S. Danetz, C.M. Baumgarten // Biophys. J. 1999. - 76. - P.A203.

113. Clemo, HF. Swelling-activated Gd 31 -sensitive cation current and cell volume regulation in rabbit ventricular myocytes / H.F. Clemo, C.M. Baumgarten // J. Gen. Physiol. 1997. - 110. -P.297-312.

114. Colclasure, G.C. Cytosolic protein concentration is the primary volume signal for swelling-induced K-Cl. cotransport in dog red cells / G.C. Colclasure, J.C. Parker // J Gen Physiol. 1992. - 100(1). - P. 1-10.

115. Collier, ML. Unitary chloride channels acti-vated by protein kinase C in guinea pig ventricular myocytes / M.L. Collier, J.R. Hume // Circ. Res. 1995. -76. -P.317-324.

116. Collier, ML. Unitary CI 2 channels activated by cytoplasmic Ca 21 in canine ventricular myocytes / M.L. Collier, P.C. Levesque, J.L. Kenyon, J.R. Hume // Circ. Res. 1996. - 78. - P.936-944.

117. Collins, K.D. The Hofmeister effect and the behaviour of water at interfaces / Collins, KD, Washabaugh MW// Q Rev Biophys. 1985. - 18. - P.323-422.

118. Counillon, L. The expanding family of eucaryotic Na+/H+ exchangers / L. Counillon, J. Pouyssegur // J. Biol. Chem. 2000. - 275. - P. 1-4.

119. Crabtree, G.R. Calcium, calcineurin, and the control of transcription / G.R. Crabtree // J. Biol. Chem. 2001. - 276. - P.2313-2316.

120. Criddle, D.N. Effect of niflumic acid on noradrenaline-induced contractions of the rat aorta / Criddle, DN, Soares de Moura R, Greenwood LA, Large WA // Br. J. Pharmacol. 1996. - 118. - P. 1065-1071.

121. Criddle, DN. Inhibitory action of niflumic acid on noradrenalina- and 5-hydroxytryptamine-induced pressor responces in the isolated mesenteric bed of the rat

122. D.N. Criddle, R. Soares de Moura, I.A. Greenwood, W.A. Large // Br. J. Pharmacol.- 1997.-120.-P.813-818.

123. Crowley, C.M. The mechanism of excitation-contraction coupling in phenylephrine-stimulated human saphenous vein / C.M. Crowley, C.H. Lee, S.A. Gin, A.M. Keep et al // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - 283(4). - P.H1271-81.

124. Cuneo, P. "Macromolecular crowding" is a primary factor in the organization of the cytoskeleton / P. Cuneo, E. Margi, A. Verzola, E. Grazi // Biochem. J. -1992.-281.-P.507-512.

125. Cunningham, SA. Cloning of an epithelial chloride channel from bovine trachea / S.A. Cunningham, M.S. Awayda, J.K. Bubien, I.I. Ismailov et al // J Biol Chem. 1995. - 270. - P.31016-31026.

126. Curtis, T.M. Evidence for two endothelin Et(A) receptor subtypes in rabbit arteriolar smooth muscle In Process Citation. / T.M. Curtis, C.N. Scholfield // Br J Pharmacol (England)/ 2001. - 134(8). - pl787-95.

127. Curtis, T.M. Transient Ca2+-activated Cl-currents with endothelin in isolated arteriolar smooth muscle cells of the choroids / T.M. Curtis, C.N. Scholfield // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000. - 41(8). - P.2279-85.

128. D'Angelo, G. Inhibition of ERK attenuates force development by lowering myosin light chain phosphorylation / G. D'Angelo, L.P. Adam // Am J Physiol ¡Heart Circ Physiol. 2002. - 282(2). - P.H602-10.

129. D'Urso, G. Production of ouabain-like factor in normal and ischemic rat heart / G. D'Urso, S. Frascarelli, S. Balzan, R. Zucchi et al // J Cardiovasc Pharmacol. -2004.-43(5).-P.657-62.

130. Dai Y. Role of CI- current in endothelin-1-induced contraction in rabbit basilar artery / Y. Dai, J.H. Zhang // Am J Physiol Heart Circ Physiol (United States). -2001.-281(5).-pH2159-67.

131. Damron, D.S. Role of PKC, tyrosine kinases, and Rho kinase in a-adrenoceptor-mediated PASM contraction /D.S. Damron, N. Kanaya, Y. Homma,

132. S.O. Kim et al // Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol. 2002. - 283. - P.L1051-L1064.

133. Darman, R.B. A regulatory locus of phosphorylation in the N terminus of the Na-K-Cl cotransporter, NKCC / R.B. Darman, B. Forbush // J Biol Chem. 2002. - 4. - 277(40). - P.37542-50. Epub 2002 Jul 26.

134. Davis, A. Functional significance of protein kinase A (PKA) activation by endothelin-1 and ATP: negative regulation of SRF-dependent gene expression by PKA / A. Davis, K. Hogarth, D. Fernandes, J. Solway et al // Cell.Signaling. 2003. -15. -P.597-604.

135. Davis, J.P.L. Evidence against a contribution of Na+-Cl- cotransport to to chloride accumulation in rat arterial smooth muscle / J.P.L. Davis // J. Physiol. 491, 61-66.

136. Davis, J.P.L. Stimulation of intracellular chloride accumulation by noradrenaline potentiates its depolarisation of rat aorta smooth muscle in vitro. Br. J. Pharmacol. 1997. - 133. - P.639-642.

137. Davis, J.P.L. The effects of Na+-K+-Cl- co-transport and CI—HC03- exchange blockage on the membrane potential and intracellular chloride levels of rat arterial smooth muscle, in vitro / J.P.L. Davis // Exp. Physiol. 1992. - 77. - P.857-862.

138. Davis, J.P.L. The three mechanisms of intracellular chloride accumulation in vascular smooth muscle of human umbilical and placental arteries / J.P.L. Davis, P.F.W. Chien, A.R. Chipperfield, A. Gordon et al II Pflugers Archiv. 2000. - 441. -P.150-154.

139. Davis, M.J. Signaling Mechanisms Underlying the Vascular Myogenic Response / M.J. Davis, M.A. Hill // Physiological Reviews. 1999. - 79. - 2. - P.387-423.

140. De Alfonzo, R. A Ca2+/CaM protein kinase associated with Ca2+ transport in sarco(endo)plasmic vesicles from tracheal smooth muscle / R.De Alfonzo, I.De Be-cemberg, M. Alfonzo //Life Sci. 1996. - V.58,N17. - P.1403-1412.

141. Dessy, C. A role for MAP kinase in differentiated smooth muscle contraction evoked by alpha-adrenoceptor stimulation / C. Dessy, I. Kim, C.L. Sougnez, R. Laporte et al // Am J Physiol. 1998. - 275(4 Pt 1). - P.C1081-6.

142. Di Fulvio, M. Protein kinase G regulates potassium chloride cotransporter-3 expression in primary cultures of rat vascular smooth muscle cells / M. Di Fulvio, T.M. Lincoln, P.K. Lauf, N.C. Adragna // J Biol Chem. 2001. - 276(24). - P.21046-52.

143. Dick, G.M. Effects of anion channel antagonists in canine colonic myocytes: comparative pharmacology of CI", Ca2+ and K+ currents / G.M. Dick, I.D. Kong, K.M. Sanders // Br J Pharmacol. 1999. - 127. - P. 1819-1831.

144. Doughty, J.M. Measurement of chloride flux associated with the myogenic response in rat cerebral arteries / J.M. Doughty, P.D. Langton // J Physiol. 2001. -534(Pt 3). -P.753-61.

145. Drewnowska, K. Regulation of cellular volume in rabbit ventricular myocytes, bumetanide, chlorothiazide and ouabain / K. Drewnowska, C.M. Baumgarten // Am. J. Physiol. 1991. - 260. - P.C 122-C131.

146. Du, XY. Cardiac swelling-induced chloride cur-rent depolarizes canine atrial myocytes / X.Y. Du, S. Sorota // Am. J. Physiol. (Heart Circ. Physiol. 41) -1997. 272. - P.HI 904-H1916.

147. Duan, D. A serine residue in C1C-3 links phosphorylation-dephosphorylation to chlo-ride channel regulation by cell volume / D. Duan, S. Cowley, B. Horowitz, J.R. Hume // J. Gen. Physiol. 1999. - 113. - P.57-70.

148. Duan, D. Alpha-adrenergic control of volume-regulated CI 2 currents in rabbit atrial myocytes. Char-acterization of a novel ionic regulatory mechanism / D. Duan, B. Fermini, S. Nattel // Circ. Res. 1995. -77. - P.379-393.

149. Duan, D. Evidence that outwardly rectifying CI 2 channels underlie volume-regulated CI 2 currents in heart / D. Duan, J.R. Hume, S. Nattel // Circ. Res. 1997b. -80. -P.103-113.

150. Duan, D. Molecular identification of a volume-regulated chloride channel / D. Duan, C. Winter, S. Cowley, J.R. Hume, B. Horowitz // Nature. 1997a. - 390. -417-421.

151. Duan, D.Y. Sustained outward current observed after I(tol) inactivation in rabbit atrial myocytes is a novel CI 2 current / D.Y. Duan, B. Fermini, S. Nattel // Am. J. Physiol. 1992. 263. - (Heart Circ. Physiol. 32). - P.H1967—H1971.

152. Dumler, F. Body composition analysis by bioelectrical impedance in chronic maintenance dialysis patients: comparisons to the National Health and Nutrition Examination Survey III / F. Dumler, C. Kilates // J Ren Nutr. 2003. - 13(2). -P. 166-72.

153. Dunham, PB. Effects of urea on K-Cl cotransport in sheep red blood cells: evidence for two signals of swelling / PB. Dunham // Am J Physiol. 1995. - 268(4 Pt 1).-P.C 1026-32.

154. Duzgun, S.A. Mitogen-activated protein phosphorylation in endothelial cells exposed to hyperosmolar conditions / S.A. Duzgun, H. Rasque, H. Kito, N. Azuma et al // J Cell Biochem. 2000. - 76(4). - P.567-71.

155. Earley, J J. Caldesmon inhibits active crossbridges in unstimulated vascular smooth muscle: an antisense oligodeoxynucleotide approach / J.J. Earley, X. Su, R.S. Moreland // Circ Res. 1998. - 83(6). - P.661-7.

156. Ebertz, SL. Cryoprotectant permeability parameters for cells used in a bio-engineered human corneal equivalent and applications for cryopreservation / S.L. Ebertz, L.E. McGann // Cryobiology. 2004. - 49(2). - P.169-80.

157. Ehring, G.R. Swelling-activated chloride channels in multidrug-sensitive and -resistant cells / G.R. Ehring, Y.V. Osipchuk, M.D. Cahalan // J Gen Physiol. -1994.-104.-P.1129-1161.

158. Ellershaw, D.C. Dual modulation of swelling-activated chloride current by NO and NO donors in rabbit portal vein myocytes / D.C. Ellershaw, I.A. Greenwood, W.A. Large // J Physiol. 2000. - 528 Pt 1. - P. 15-24.

159. Erdodi, F. Phosphorylation of the 20,000 dalton myosin light chain isoforms of arterial smooth muscle by myosin light chain kinase and protein kinase C / F. Erdodi, A. Rokolya, M. Barany, K. Barany // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - 266. -P.583-591.

160. Fasshauer, M. Suppression of aquaporin adipose gene expression by isoproterenol, TNFalpha, and dexamethasone / M. Fasshauer, J. Klein, U. Lossner, M. Klier, S. Kralisch et al // Horm Metab Res. 2003. - 35(4). - P.222-7.

161. Fay, F.S. Cellular and molecular physiology of calcium signalling in smooth muscle cells / F.S. Fay, S. Yagi, T. Itoh, J. McCarron et al II Jpn. J. Pharmacol. — 1992. 58. - Suppl. II. - P.35P^10P.

162. Fay, FS. Aequorion luminescence during activation of single smooth muscle cells / F.S. Fay, M.H. Shleven, W.C. Granger, S.R. Taylor // Nature. 1979. -180. -P.506-508.

163. Fedorova, OV. Plasma marinobufagenin-like and ouabain-like immunoreac-tivity in adrenocorticotropin-treated rats / O.V. Fedorova, D.E. Anderson, A.Y. Ba-grov // Am J Hypertens. 1998. - 11(7). - P.796-802.

164. Feng, J. Inhibitory phosphorylation site for rho-associated kinase on smooth muscle myosin phosphatase / J.Feng, M. Ito, K. Ichikawa, N. Isaka et al II J. Biol. Chem. 1999.-274.-P.37385-37390.

165. Ferrandi, M. Ouabain-like factor quantification in mammalian tissues and plasma: comparison of two independent assays / M. Ferrandi, P. Manunta, S. Balzan, J.M. Hamlyn et al //Hypertension. 1997. - 30(4). -P.886-96.

166. Flagella, M. Mice lacking the basolateral Na-K-2C1 cotransporter have impaired epithelial chloride secretion and are profoundly deaf / M. Flagella, L.L. Clarke, M.L. Miller, L.C.Erway, et al II J Biol Chem. 1999. - 274. - P.26946-26955.

167. Flatman, P.W. Regulation of Na-K-2C1 cotransport by phosphorylation and protein-protein interactions / P.W. Flatman // Biochim Biophys Acta. 2002. -1566(1-2).-P. 140-51.

168. Frelin, C. Biochemical characterization of the Na+/K+/Cl- co-transport in chick cardiac cells / C. Frelin, O. Chassande, M. Lazdunski // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1986. - 134. -P.326-331.

169. Fridman, A.I. Marinobufagenin, an endogenous ligand of alpha-1 sodium pump, is a marker of congestive heart failure severity / A.I. Fridman, S.A. Matveev, N.I. Agalakova, O.V. Fedorova // J Hypertens. 2002. - 20(6). - P. 1189-94.

170. Fukumitsu, T. Increase in calcium channel current by beta-adrenoceptor agonists in single smooth muscle cells isolated from porcine coronary artery / T. Fukumitsu, H. Hayashi, H. Tokuno, T. Tomita // Br. J. Pharmacol. 1990. - 100. -P.593-599.

171. Fuller, C.M. Ca2+-activated CI" channels: a newly emerging anion transport family / C.M. Fuller, D.J. Benos //News PhysiolSci. -2000. 15. - P.165-171.

172. Furstenau, M. Calcium sparks in human coronary artery smooth muscle cells resolved by confocal imaging / M. Furstenau, M. Lohn, C. Ried, F.C. Luft et al // J Hypertens. 2000. - 18(9). - P. 1215-22.

173. Fussle, R. On the mechanism of membrane damage by alpha-toxin / R. Fus-sle, S. Bhakdi, A. Sziegoleit, J. Tranum-Jensen et al // J. Biol. Chem. 1981. - 91. -P.83-94.

174. Gadsby, DC. The CFTR chloride channel of mammalian heart / D.C. Gadsby, G. Nagel, T.C. Hwang // Annu. Rev. Physiol. 1995. - 57. - P.387-416.

175. Gandhi, R. Molecular and functional characterization of a calcium-sensitive chloride channel from mouse lung / R. Gandhi, R.C. Elble, A.D. Gruber, K.D. Schreur et al IIJ Biol Chem. 1998. - 273. - P.32096-32101.

176. Ganitkevich, V.Y. Contribution of two types of calcium channels to membrane conductance of single myocytes from guinea-pig coronary artery / V.Y. Ganitkevich, G. Isenberg II J. Physiol. (Lond.). 1990. -426. - P. 19-42.

177. Ganitkevich, V.Y. Depolarization-mediated intracellular calcium transients in isolated smooth muscle cells of guinea-pig urinary bladder / V.Y. Ganitkevich, G. Isenberg II J. Physiol. (Lond.). 1991. - 435. - P. 187-205.

178. Gannon, B.J. Aquaporin-1 expression in visceral smooth muscle cells of female rat reproductive tract / B.J. Gannon, G.M. Warnes, C.J. Carati, C.J. Verco // J Smooth Muscle Res. -2000. 36(5). - P. 155-67.

179. Garay R.P. Inhibition of the Na+/K+ cotransport system by cyclic AMP and intracellular calcium in human red cells / R.P. Garay // Biochim. Biophys. Acta. -1982.- 688. -P.786-792.

180. Garay, R.P. 1993. A potent inhibitor of the Na+,K+,2C1" cotransport system in urine from salt-loaded rats / R.P. Garay, O. Alda, A. Soler, I. Pares et al. // J. Hypertension 11 (Suppl. 5), P.S266-S267.

181. Garber, S. Volume-regulated anion channels and the control of a simple cell behavior / S. Garber, M.D. Cahalan // Cell. Physiol. Biochem. 1997. - 7. - P.229-241.

182. Garner, M.H. Na,K-ATPase in the nuclear envelope regulates Na+: K+ gradients in hepatocyte nuclei / M.H. Garner // J Membr Biol. 2002. - 187(2). - P.97-115.

183. Gerstheimer, F.P. A chloride-bicarbonate exchanging anion carrie in vascular smooth muscle of the rabbit / F.P. Gerstheimer, M. Muehleisen, D. Nehring, V.A.W. Kreye // Pflugers Arch. 1987. - 409. - P.60-66.

184. Ghisdal, P. Rho-dependent kinase is involved in agonist-activated calcium entry in rat arteries / P. Ghisdal, G. Vandenberg, N. Morel // J Physiol. 2003. -55l(Pt 3). -P.855-67. Epub 2003 Jul 09.

185. Gillen, C.M. Functional interaction of the K-Cl cotransporter (KCC1) with the Na-K-Cl cotransporter in HEK-293 cells / C.M. Gillen, B. 3rd. Forbush // Am J Physiol. 1999. - 276(2 Pt 1). -P.C328-36.

186. Gilles, R. Comparative aspects of cell osmoregulation and volume control / R. Gilles // Renal Physiol. Biochem. 1988. - 11.- P.277-288.

187. Glukhova, M.A. Phenotypic changes of human aortic smooth muscle cells during development and in adult / M.A. Glukhova, M.G. Frid, V.E. Koteliansky // J.Atheroscler.Thromb. 1994. - l(suppl. 1). P.S47-S49.

188. Godfraind T. Calcium antagonists and vasodilation / T. Godfraind // Phar-mac. Ther. 1994. -Vol. 64. - P.37-75.

189. Godfraind, T. Calcium antagonists and vasodilation / T. Godfraind // Pharmacol. Ther. 1994. - 64. - P.37-75.

190. Gogelein, G.R.H. Stimulation of NaCl secretion in the rectal gland of the dogfish Squalus acanthias / G.R.H. Gogelein, E. Schlatter // Comp. Biochem. Physiol. A Physiol. 1988. - 90. - P.733-737.

191. Gollasch, M. Ca2+ channels, Ca2-f sparks, and regulation of arterial smooth muscle function / M. Gollasch, M. Lohn, M. Furstenau, M.T. Nelson et al. // Z Kar-diol. 2000. - 89. - Suppl 2. - P. 15-9.

192. Gollasch, M. Ontogeny of local sarcoplasmic reticulum Ca2+ signals in cerery ,bral arteries: Ca sparks as elementary physiological events / M. Gollasch, G.C. Wellman, H.J. Knot, Jaggar J.H. et al. // Circ Res. 1999. - 84(1). - P.125.

193. Golovina, VA. Na+ pump a2-subunit expression modulates Ca2+ signaling / V.A. Golovina, H. Song, P.F. James, J.B. Lingrel et al. // Am J Physiol Cell Physiol. -2003. 284. - P.C475-C486.

194. Gorenne, I. Caldesmon phosphorylation is catalyzed by two kinases in per-meabilized and intact vascular smooth muscle / I. Gorenne, X. Su, R.S. Moreland // J Cell Physiol. 2004. - 198(3). -P.461-9.

195. Gorenne, I. Inhibition of p42 and p44 MAP kinase does not alter smooth muscle contraction in swine carotid artery /1. Gorenne, X. Su, R.S. Moreland // Am J Physiol.- 1998.-275(1 Pt2).-P.H131-8.

196. Gould, D.J. a-adrenoceptor activation of chloride conductance in rat iris arterioles / D J. Gould, CE. Hill // Am. J. Physiol. 1996. - 27. - P.H2469-H4276.

197. Graves, J.E. Tonic regulation of vascular tone by nitric oxide and chloride ions in rat isolated small coronary arteries / J.E. Graves, I.A. Greenwood, W.A. Large //Am J Physiol Heart Circ Physiol (United States). 2000. - 279(6). P.H2604-11.

198. Greenwood, I.A. Comparison of the effects of fenamates on Ca -activated chloride and potassium currents in rabbit portal vein smooth muscle cells / I.A. Greenwood, W.A. Large // British Journal of Pharmacology. 1995. - 116. -P.2939-2948.

199. Greenwood, I.A. Inhibition of Ca -activated CI" currents in smooth muscle cells by compounds structurally similar to niflumic acid / I.A. Greenwood, W.A. Large II British Journal of Pharmacology. 1998. - 123. - 324P.

200. Greenwood, I.A. Modulation of ICl(Ca) in vascular smooth muscle cells by oxidizing and cysteine-reactive reagents / I.A. Greenwood, N. Leblanc, D.V. Gordi-enko, W.A. Large // Pflugers Arch. 2002. - 443(3). - P.473-82. Epub 2001 Oct 06.

201. Grinstein, S. Activation of permeabilized neutrophils: role of anions / S. Grinstein, W. Furuya, G.P. Downey II Am. J. Physiol -1992. 263 (CellPhysiol. 32). -P.C78-C75.

202. Grummt, F. The effect of cyclic nucleotides on cellular ATP levels and ri-bosomal RNA synthesis in Ehrlich ascites cells / F. Grummt, I. Grummt // Eur J Bio-chem. 1977. - 79(2). - P.387-93.

203. Grunnet, M. KCNQ1 channels sense small changes in cell volume / M. Grunnet, T. Jespersen, N. MacAulay, N.K. Jorgensen et al. // J Physiol. 2003. -549(Pt 2). -P.419-27. Epub 2003 Apr 17.

204. Haas M. Properties and diversity of (Na-K-Cl) cotransporters / M. Haas // Ann. Rev. Physiol. 1989. - 51. -P.443-457.

205. Haas, M. Bumetanide inhibits (Na-K-Cl) cotransport at a chloride site / M. Haas, T.J. Mcmanus // Am. J. Physiol. 1983. - 245 (Cell Physiol. 14). - P.C235— C240.

206. Haas, M. Catecholamine-stimulated ion transport in duck red cells. Gradient effects in electrically neutral (Na-K-2C1) co-transport / M. Haas, W.F. Schmidt, T.J. Mcmanus // J. Gen. Physiol. 1982. - 80. - P.125-147.

207. Haas, M. The Na-K-Cl cotransporters / M. Haas, B. Forbush // J. Bioenerg. Biomemb. 1998.-30.-P.161-172.

208. Haas, M.D. Dual mechanisms for Na-K-Cl cotransport regulation in airway epithelial cells / M.D. Haas, D. McBrayer, .JR. Yankaskas II Am. J.Physiol. 1993. -264 {Cell Physiol 33). - P.C189-C200.

209. Hagiwara, N. Stretch-activated anion currents of rabbit cardiac myocytes / N. Hagiwara, H. Masuda, M. Shoda, H. Irisawa // J. Physiol. (Lond.). 1992. - 456. -285-302.

210. Hallows, K.R. Fundamental principles and physiological roles of cell volume regulation / K.R. Hallows, P.A. Knauf // In: Cellular and Molecular Physiology of Cell Volume Regulation, edited by K. Strange. Boca Raton, FL: CRC, 1994, P.3-30.

211. Hamilton, C. Calmodulin and excitation-contraction coupling / C. Hamilton, I. Serysheva, G. Strasburg //News Physiol. Sci.-2000. V.15, N.12. - P.201-204.

212. Hansen, P.B. Chloride regulates afferent arteriolar contraction in response to depolarization / P.B. Hansen; B.L. Jensen; O. Skott // Hypertension (United States).- 1998, 32(6).-P. 1066-70.

213. Hartshorne, D.J. Myosin light chain phosphatase: subunit composition, interactions and regulation / D.J. Hartshorne, M. Ito, F. Erdodi // J. Muscle Res. Cell Motil. 1998.- 19.-P.325-341.

214. Harvey, RD. Chloride current in mammalian cardiac myocytes. Novel mechanism for autonomic regulation of action potential duration and resting membrane potential / R.D. Harvey, C.D. Clark, J.R. Hume // J. Gen. Physiol. 1990. - 95.- 1077-1102.

215. Harvey, RD. Effects of stilbenedisulfonic acid derivatives on the cAMPregulated chloride current in cardiac myocytes / R.D. Harvey // Pfliigers Arch. 1993.- 422. P.436—442.

216. Hassid, A. NO alters cell shape and motility in aortic smooth muscle cells via protein tyrosine phosphatase IB activation / A. Hassid, J. Yao, S. Huang // Am J Physiol. 1999. - 277(3 Pt 2). - P.HI014-26.

217. Herrera, A.M. Influence of calcium on myosin thick filament formation in intact airway smooth muscle / A.M. Herrera, K.-H. Kuo, C.Y. Seow // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002. - 282. - P. C310-C316.

218. Herzig, S. Mechanisms of beta-adrenergic stimulation of cardiac Ca 21 channels revealed by discrete-time Markov analysis of slow gating / S. Herzig, P. Patil, J. Neumann, C.M. Staschen, D.T. Yue // Biophys. J. 1993. - 65. - P. 15991612.

219. Hirakawa, Y. Ca(2+)-dependent Cl(-) channels in mouse and rabbit aortic smooth muscle cells: regulation by intracellular Ca(2+) and NO / Y. Hirakawa, M. Gericke, R.A. Cohen, VM. Bolotina // Am J Physiol. 1999. - 277(5 Pt 2). -P.H1732-44.

220. Hiraoka, M. Calcium-sensitive and -insensitive transient outward current in rabbit ventricular myocytes / M. Hiraoka, S. Kawano // J. Physiol. (Lond.) 1989. -410. -P.187-212.

221. Hiraoka, M. Role of cardiac chloride currents in changes in action potential charac-teristics and arrhythmias / M. Hiraoka, S. Kawano, Y. Hirano, T. Furukawa // Cardiovasc. Res. 1998. - 40. - P.23-33.

222. Hoffmann, E.K. Membrane mechanisms and intracellular signalling in cell volume regulation / E.K. Hoffmann, P.B. Dunham // Int. Rev. Cytol. 1995. - 161. -P. 173-262.

223. Hoffmann, E.K. Membrane mechanisms in volume and pH regulation in vertebrate cells / E.K. Hoffmann, L.O. Simonsen // Physiol. Rev. 1989. 69. - 315382.

224. Hogg, RC. Time course of spontaneous calcium-activated chloride currents in smooth muscle cells from the rabbit portal vein / R.C. Hogg, Q. Wang, W.A. Large // J. Physiol. (Lond.). 1993. - 464. - P. 15-31.

225. Holevinsky, KO. ATP-sensitive K+ channel opener acts a potent CI" channel inhibitor in vascular smooth muscle cells / K.O. Holevinsky, Z. Fan, M. Frame, J.C. Makielski, U. Groppi, D.J. Nelson // J. Membr. Biol. 1994. - 137. - P.59-70.

226. Hool, L.C. Role of G proteins in alphal -adrenergic inhibition of the beta-adrenergically activated chloride current in cardiac myocytes / L.C. Hool, L.M. Oleksa, R.D. Harvey // Mol. Pharmacol. 1997. -51.- P.853-860.

227. Hu, E. Rho kinase inhibitors as potential therapeutic agents for cardiovascular diseases / E. Hu, D. Lee // Curr Opin Investig Drugs. 2003. - 4(9). - P. 1065-75.

228. Hughes S. Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo / Hughes S, Chan-Ling T. // Invest Ophthalmol Vis Sci. -2004. 45(8). - P.2795-806.

229. Hughes, AD. 1995. Calcium channels in vascular smooth muscle cells.

230. Hullin, R. Calcium channel b subunit heterogeneity: functional expression of cloned cDNA from heart, aorta and brain / R. Hullin, D. Singer-Lahat, M. Freichel, M. Biel et al. // EMBO J. 1992. -11.- P.885-890.

231. Hume, JR. Anion transport in heart / Hume JR., Dayue Duan, Mei Lin Collier, Jun Yamazaki, Burton Horowitz // Physiological Reviews. 2000. -Vol. 80, No.l. -P.31-81.

232. Hwang, T.C. Molecular pharmacology of the CFTR CI" channel / T.C. Hwang, D.N. Sheppard // Trends Pharmacol Sci. 1999. - 20. - P.448-453.

233. Hyvelin J.M. Effect of changes in pH on wall tension in isolated rat pulmonary artery: role of the RhoA/Rho-kinase pathway / J.M. Hyvelin, C. O'Connor, P. McLoughlin // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2004. - 287(4). - P.L673-84. Epub 2004 Feb 06.

234. Ikigai, H. Assembly of the alpha-toxin-hexamer of Staphylococcus aureus in the liposome membrane / H. Ikigai, T. Nakae // J. Biol. Chem. 1987. - 262. — P.2156-2160.

235. Inoue, R, Isenberg G. Acetylcholine activates nonselective cation channels in guinea-pig ileum through a G-protein. Am. J. Physiol. 258 {Cell Physiol. 27): CI 173-C1178, 1990.

236. Inoue, Y, Nakao K, Okabe K, Izumi H, Kanda S, Kitamura K, Kuriyama H. Some electrical properties of human pregnant myometrium. Am. J. Obstet. Gynecol. 1990. 162: 1090-1098.

237. Isenring, P. Comparison of Na-K-Cl cotransporters: NKCC1, NKCC2 and HEK cell Na-K-Cl cotransporter / P. Isenring, S.C. Jacoby, J.A. Payne, B. Forbush I // J.Biol.Chem. 1998. - 273. -P.l 1295-11301.

238. Isenring, P. Ion and bumetanide binding by the Na-K-Cl cotransporter. Importance of transmembrane domains / P Isenring, B Forbush III // J.Biol.Chem. -1997. 272. - P.24556-24562.

239. Ishikawa, Y. alpha(l)-adrenoceptor-induced trafficking of aquaporin-5 to the apical plasma membrane of rat parotid cells / Y. Ishikawa, M.T. Skowronski, N. Inoue, H. Ishida // Biochem Biophys Res Commun. 1999. - 265(1). - P.94-100.

240. Ito, M. Myosin phosphatase: structure, regulation and function / M. Ito, T. Nakano, F. Erdodi, D.J. Hartshorne // Mol Cell Biochem. 2004. - 259(1-2). - P. 197209.

241. Itoh, A. Enhancement of aquaporin-3 by vasoactive intestinal polypeptide in a human colonic epithelial cell line / A. Itoh, T. Tsujikawa, Y. Fujiyama, T. Bamba // J Gastroenterol Hepatol. 2003. - 18(2). -P.203-10.

242. Itoh, T. Characteristic features of noradrenaline-induced Ca2/ mobilization and tension in arterial smooth muscle of the rabbit / T. Itoh, J. Kajikuri, H. Kuriyama II J. Physiol. (Lond.). 1992. - 457. - P.297-314.

243. Itoh, T. Effects of pinacidil on contractile proteins in high K+-treated intact and in b-escin-treated skinned smooth muscle of the rabbit mesenteric artery / T. Itoh, S. Suzuki, H. Kuriyama //Br. J. Pharmacol. 1991. - 103. - P. 1697-1702.

244. Iwasaki, H. Mechanical stretch stimulates growth of vascular smooth muscle cells via epidermal growth factor receptor / H. Iwasaki; S. Eguchi; H. Ueno; F. Marumo et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol (United States). 2000. - 278(2). P.H521-9;

245. Iyadomi, I. a-Adrenergic inhibi-tion of the beta-adrenoceptor-dependent chloride current in guinea pig ventricular myocytes /1. Iyadomi, K. Hirahara, T. Ehara II J. Physiol. (Lond.). 1995. - 489. - P.95-104.

246. Jackson, WF. Ion channels and vascular tone / W.F. Jackson // Hypertension (United States). 2000. - 35(1 Pt 2). - P. 173-8.

247. Jaconi, M. Calcium release and influx colocalize to the endoplasmic reticulum / M. Jaconi, J. Pyle, R. Bortolon, J. Ou et al. // Curr. Biol. 1997. -7. - P.599-602.

248. Jaggar, JH. Ca2+ channels, ryanodine receptors and Ca2+-activated K+ channels: a functional unit for regulating arterial tone / J.H. Jaggar, G.C. Wellman, TJ. Heppner, V.A. Porter et al. // Acta Physiol Scand. 1998. - 164(4). - P.577-87.

249. James, A.F. A quantitative analysis of cell volume and resting potential determination and regulation in excitable cells / James A. Fraser and Christopher L.-H. Huang. IIJ Physiol 2004. - 559. - 2. - P.459-478.

250. Janssen, L.J. Excitation-contraction coupling in pulmonary vascular smooth muscle involves tyrosine kinase and Rho kinase / L.J. Janssen, H Lu-Chao, S. Netherton // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2001. - 280. - P.L666-74.

251. Janssen, L.J. KC1 evokes contraction of airway smooth muscle via activation of RhoA and Rho-kinase / L.J. Janssen, T. Tazzeo, J. Zuo, E.Pertens, S. Ke-shavjee // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2004. - 287(4). - P.L852-8. Epub 2004 Jun 18.

252. Je, H.D. Calponin is required for agonist-induced signal transduction--evidence from an antisense approach in ferret smooth muscle / H.D. Je, S.S. Gangop-adhyay, T.D. Ashworth, K.G. Morgan // J Physiol. 2001. - 537(Pt 2). P.567-77.

253. Jensen, B.L. Chloride is essential for contraction of afferent arterioles after agonists and potassium / B.L. Jensen, P. Ellekvist, O. Skott // Am. J. Physiol. 1997. - 272. - P.F389-F396.

254. Jensen, P.E. Endogenous and exogenous agonist-induced changes in the coupling between Ca2+.i and force in rat resistance arteries / P.E. Jensen, M.J. Mul-vany, C. Aalkjaer //Pflugers Arch. 1992. -420. - 536-543.

255. Jentsch T.J. Molecular Structure and Physiological Function of Chloride Channels / T.J. Jentsch, V. Stein, F. Weinreich, A.A. Zdebik II Physiol. Rev. 2002. -Vol.82, No.2, P.503-568.

256. Jessen, B.S. Activation of Na+,K+,2C1- cotransport system by reorganization of the actin filaments in Ehrlih ascites tumor cells / B.S. Jessen, E.K. Hoffmann // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - 1110. - P. 199-201.

257. Jia, Y. Phosphorylation by protein kinase C is required for acute activation of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator by protein kinase // Y. Jia, C.J. Mathews, J.W. Hanrahan // A. J. Biol. Chem. 1997. - 272. - P.4978^1984.

258. Jiang, B. Expression and roles of CI- channel C1C-5 in cell cycles of myeloid cells / B. Jiang, N. Hattori, B. Liu, Y. Nakayama et al. // Biochem Biophys Res Commun.-2004. -317(1).-P.192-7.

259. Jiang, G. Aldosterone regulates the Na-K-Cl cotransporter in vascular smooth muscle / G. Jiang, S. Cobbs, J.D. Klein, W.C. O'Neill // Hypertension. 2003. -41. -P.1131-1135.

260. Jiang, G. Growth factors stimulate the Na-K-2C1 cotransporter NKCC1 through a novel Cl(-)-dependent mechanism / G. Jiang, J.D. Klein, W.C. O'Neill // Am J Physiol Cell Physiol. 2001. - 281(6). - P.C1948-53.

261. Jiang, J. Role of CI- currents in rat aortic smooth muscle activation by prostaglandin F2 alpha / J. Jiang, P.H. Backx, H. Teoh, M.E. Ward // Eur J Pharmacol. -2003.-481(2-3).-P.133-40.

262. Jiang, J. Role of CI- currents in rat aortic smooth muscle activation by prostaglandin F2 alpha / Jiang, J, Backx PH, Teoh H, Ward ME. // Eur J Pharmacol. 2003 Nov 28;481(2-3): 133-40.

263. Jones K.A. F-actin stabilization increases tension cost during contraction of permeabilized airway smooth muscles in dog / K.A. Jones, W.J. Perkins, R.R. Lorenz, Y.S. Prakash et al. II J.Physiol. 1999. - 519. - P.527-538.

264. Jones, AW. Altered ion transport in vascular smooth muscle from spontaneously hypertensive rats. Influence of aldosterone, norepinephrine and angiotensin / A.W. Jones // Circ Res. 1973. - 33. - P.563-572.

265. Jorgensen, N.K. On the role of calcium in the regulatory volume decrease (RVD) response in Ehrlich mouse ascites tumor cells / N.K. Jorgensen, S. Christensen, H. Harbak, A.M. Brown et al. // J Membr Biol. 1997. - 157(3). - P.281-99.

266. Juhaszova, M. Na+-Ca2+ exchanger in arteries: identification by im-munoblotting and immunofluorescence microscopy / M. Juhaszova, A. Ambesi, G.E. Lindenmayer, R.J. Bloch et al. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1994. - 266. -P.C234-C242.

267. Jury, J. Actions of putative chloride channel blocking agents on canine lower esophageal sphincter (LES) In Process Citation. / J. Jury, M. Patel, T. Bowes, E.E. Daniel // Can J Physiol Pharmacol (Canada). 2001. - 79(12). -P.1007-14.

268. Kaibuchi, K. Regulation of the cytoskeleton and cell adhesion by the rho family GTPases in mammalian cells / K. Kaibuchi, S. Kuroda, M. Amano // Annu. Rev. Biochem. 1999. - 68. - P.459-486.

269. Kaneda, M. Activation of chloride current by P2 -purinoceptors in rat ventricular myocytes / M. Kaneda, K. Fukui, K. Doi // Br. J. Pharmacol. 1994. -111.-P.1355-1360.i

270. Kang, Y.S. Caveolin internalization by heat shock or hyperosmotic shock / Y.SXang, Y.G. Ko, J.S. Seo // Exp Cell Res. 2000. - 255(2). - P.221-8.

271. Kao, C.Y. Cellular Aspects of Smooth Muscle Function. 1997. Cambridge University Press.

272. Kapus, A. Functional characterization of three isoforms of the Na+/H+ exchanger stably expressed in Chinese hamster ovary cells / A. Kapus, S. Grinstein, S. Wazan, B. Kandasamy et al. // J. Biol. Chem. 1994. - 269. - P.23 544-23 552.

273. Karaki, H. Calcium release in smooth muscle / H. Karaki, B. Weiss // Life sci. 1988. - V.42,N2.-P.l 11-122.

274. Kawano, S. Activation mech-anism of Ca2+-sensitive transient outward current in rabbit ven-tricular myocytes / S. Kawano, Y. Hirayama, M. Hiraoka // J. Physiol. (Lond.). 1995.-486. - 593-604.

275. Kawano, Y. Smooth muscle contraction by small GTPase Rho / Y. Kawano, T. Yoshimura, K. Kaibuchi // Nagoya J Med Sci. 2002. - 65(1-2). - P.l-8.

276. Kawasaki, M. Stable and functional expression of the C1C-3 chloride channel in somatic cell lines / M. Kawasaki, M. Suzuki, S. Uchida, S. Sasaki, F. MaRumo //Neuron 14: 1285-1291, 1995.

277. Kenyon, J.L. 4-Aminopyridine and the early outward current of sheep cardiac Purkinje fibers / J.L. Kenyon, W.R. Gibbons // J. Gen. Physiol. 73: 139-157, 1979a.

278. Kenyon, J.L. Influence of chloride, potas-sium, and tetraethylammonium on the early outward current of sheep cardiac Purkinje fibers / J.L. Kenyon, W.R. Gibbons // J. Gen. Physiol. 73: 117-138, 1979b.

279. Kerschbaum, H.H. Monovalent permeability, rectification, and ionic blockiof store-operated calcium channels in Jurkat T lymphocytes / H.H. Kerschbaum, M.D. Cahalan // J. Gen. Physiol. 1998. -111.- P.521-537.

280. Kimura, M. Specific inhibition of stretch-induced increase in L-type calcium channel currents by herbimycin A in canine basilar arterial myocytes / M. Kimura, K. Obara, T. Sasase, T. Ishikawa et al. // Br J Pharmacol (England). 2000. -130(4) P.923-31.

281. Kinjo, A.R. Effects of macromolecular crowding on protein folding and aggregation studied by density functional theory: Statics / A.R. Kinjo, S. Takada // Physical Review. 2002. - E 66, 031911.

282. Kirk, K. Functional properties and physiological roles of organic solute channels / K. Kirk, K. Strange // Annu. Rev. Physiol. 1998. - 60. - P.719-739.

283. Kiselyov, K. Functional interaction between InsP3 receptors and store-operated Htrp3 channels / K. Kiselyov, X. Xu, G. Mozhayeva, T. Kuo et al. // Nature. 1998.-396.-P.478-482.

284. Kitamura, K. Chloride channels and their functional roles in smooth muscle tone in the vasculature / K. Kitamura, J. Yamazaki // Jpn. J. Pharmacol. 2001. - 85. -P.351-357.

285. Klein J.D. Myosin light chain phosphorylation in endothelial cells is regulated by cell volume and correlates with volume-regulatory Na-K-2C1 cotransport (Abstract) / J.D. Klein, W.C. O'Neill // J.Gen.Physiol. 1993. - 102. - P. 18a.

286. Klein, J.D. INK is a volume-sensitive kinase that phosphorylates the Na-K-2C1 cotransporter in vitro / J.D. Klein, S.T. Lamitina, W.C. O'Neill // Am J Physiol. -1999. 277(3 Pt 1). - P.C425-31.

287. Klein, J.D. Regulation by cell volume of Na(+)-K(+)-2Cl- cotransport in vascular endothelial cells: role of protein phosphorylation / J.D. Klein, P.B. Perry, W.C. O'Neill//J Membr Biol. 1993. - 132(3).-P.243-52.

288. Klein, J.D. Volume-sensitive myosin phosphorylation in vascular endothelial cells: correlation with Na-K-2C1 cotransport / J.D. Klein, W.C. O'Neill // Am J Physiol. 1995. - 269(6 Pt 1). -P.C 1524-31.

289. Klockner, U. Intracellular calcium ions activate a low-conduc-tance chloride channel in smooth-muscle cells isolated from hu-man mesenteric artery / U. Klockner // Pfliigers Arch. 1993. - 424. - 231-237.

290. Koch, W.J. cDNA cloning of a dihydropyridine-sensitive calcium channel from rat aorta / W.J. Koch, P.T. Ellinor, A. Schwartz et al.// J. Biol Chem. 1990. -265.-P. 17786-17791.

291. Koh, YH. Osmotic stress induces HB-EGF gene expression via Ca(2+)/Pyk2/JNK signal cascades in rat aortic smooth muscle cells / Y.H. Koh; W. Che; S. Higashiyama; M. Takahashi et al. // J Biochem (Tokyo) (Japan). 2001. -130(3).-P.351-8

292. Kokubin, S. Effects of various intracellular Ca ion concentrations on the calcium current of guinea pig single ventricular cells / S. Kokubin, W. Irisawa // J. Physiol. (Gr. Brit.). 1984. - V. 34. - P. 599-611.

293. Koncz, C. Use of MQAE for measurement of intracellular CI". in cultured aortic smooth muscle cells / C. Koncz, J.T. Daugiras // Am. J. Physiol. 1994. - 267. -P.H2114-H2123.

294. Konev, SV. Structural Lability of Biological Membranes, Minsk: Nauka i Tekhnika, 1987.

295. Kordylewski, L. Rat atrial myocyte plasmalemmal caveolae in situ. Reversible experimental increases in caveolar size and in surface density of caveolar necks / L. Kordylewski, G.E. Goings, E. Page II Circ Res. 1993. - 73(1). - P.135-46.

296. Kracke, G.R. Asymmetry of Na-K-Cl cotransport in human erythrocytes / G.R. Kracke, M.A. Anatra, P.B. Dunham // Am. J. Physiol. 1983. -254 (Cell Physiol. 23). - P.C243—C250.

297. Kracke, GR. Effect of membrane potential on furosemide-inhibitable sodium influxes in human red blood cells / G.R. Kracke, P.B. Dunham // J. Membr. Biol.-1987.-98.- 117-124. !

298. Kravtsov, G.M. A new view of K+-induced contraction in rat aorta: the role of Ca2+ binding / G.M. Kravtsov, I.C. Bruce, T.K. Wong, C.Y. Kwan // Pflugers Archiv. 2003. - 446. - P.529-540.

299. Kremer, S.G. Multiple signaling pathways for Cl"-dependent depolarization of mesangial cells: role of Ca2+, PKC, and G proteins / S.G. Kremer, W. Zeng, S. Sridhara, K.L. Skorecki II Am J Physiol. 1992. - 262(4 Pt 2). -P.F668-78.

300. Kreye, V.A.W. Evidence for furosemide-sensitive active chloride transport in vascular smooth muscle / V.A.W. Kreye, P.K. Bauer, I. Villhauer et al. // Eur. J. Pharm. 1981.-73.-P.91-95.

301. Kuriyama, H. Physiological features of visceral smooth muscle cells, with special reference to receptors and ion channels / H. Kuriyama, K. Kitamura, T. Itoh, R. Inoue // Physiol. Rev.- 1998. V. 78. - P.811-920.

302. Kutzweiler, T.A. Asp804 and Asp808 in the transmembrane domain of the Na,K-ATPase a-subunit are cation coordinated residues / T.A. Kutzweiler, J.M. Arguello, J.B. Lingrel // J Biol Chem. 1996. - 271. - P.29682-29687.

303. Lai, ZF. Modulation of intracellular CI- homeostasis by lectin-stimulation in Jurkat T lymphocytes / Z.F. Lai, Y.Z. Chen, K. Nishi // Eur J Pharmacol. 2003. -482(1-3).-P.l-8.

304. Lamb F.S. The endothelium modulates the contribution of cloride currents to norepinephrine-induced vascular contraction /

305. Lamb, F.S. Chloride ion currents contribute functionally to norepinephrine-induced vascular contraction / F.S. Lamb, T.J. Barna II Am J Physiol 1998a. - 275. -P.H151-60.

306. Lamb, F.S. Chloride ion currents contribute functionally to norepinephrine-induced vascular contraction / F.S. Lamb, T.J. Barna // Amer. J. Physiol. 1998b. -275. - P.H161-H168.

307. Lamb, F.S. Expression of CLCN voltage-gated chloride channel genes in human blood vessels / F.S. Lamb, G.H. Clayton, B.X .Liu, R.L. Smith et al. // J Mol Cell Cardiol. 1999. - 31(3). -P.657-66.

308. Lamb, F.S. Role of Cl(-) channels in alpha-adrenoceptor-mediated vasoconstriction in the anesthetized rat /F.S. Lamb, N.W. Kooy, S.J. Lewis // Eur J Pharmacol (Netherlands). 2000. - 401(3). - P.403-12.

309. Lambert, I.H. Regulation of the cellular content of the organic osmolyte taurine in mammalian cells / IH. Lambert // Neurochem Res. 2004. - 29(1). - P.27-63.

310. Lambert, I.H. Role of prostaglandins and leukotrienes in volume regulation by Ehrlich ascites tumor cells / I.H. Lambert, E.K. Hoffmann, P. Christensen // J Membr Biol. 1987. - 98(3). - 247-56.

311. Lamboley, M. Recruitment of smooth muscle cells and arterial vasomotion / M. Lamboley, A.Schuster, J.L. Beny, J J. Meister // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2003. - 285(2). -P.H562-9. Epub 2003 Feb 06.

312. Lang, F. Ca2+ entry and vasoconstriction during osmotic swelling in vascular smooth muscle cells / F. Lang, G. Busch, G. Zempel, J. Ditlevsen et al. // Pfltigers Arch. 1995.-431.-P.253-258.

313. Lang, F. Cell volume in the regulation of cell proliferation and apoptotic cell death / F. Lang, M. Ritter, N. Gamper, S. Huber et al. // Cell Physiol Biochem. -2000.- 10(5-6).-P.417-28.

314. Lang, F. Functional significance of cell volume mechanisms / F. Lang, G. Busch, M. Ritter, H. Volkl et al. // Physiol Rev. 1998. - 78. - P.247-306.

315. Lang, F. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms / F. Lang, G.L. Busch, M. Ritter, H. Volkl et al. // Physiol Rev. -1998. -78. P.247-306. Acta 1285. - 1996. -P.229-236.

316. Lang, F. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms / F. Lang, G.L. Busch, M. Ritter, H. Volkl, S. Waldegger, E. Gulbins, D. Haussinger // Physiol. Rev. 1998. - 78. - P.247-306.

317. Lang, F. Regulation of channels by the serum and glucocorticoid-inducible kinase implications for transport, excitability and cell proliferation / F. Lang, G. Henke, H.M. Embark, S.Waldegger et al. // Cell Physiol Biochem. - 2003. - 13(1). -P.41-50.

318. Lang, F. The diversity of volume regulatory mechanisms / F. Lang, G.L. Busch, H. Volkl // Cell Physiol. Biochem. 1998b. - 8. - P.l-45.

319. Langton, P.D. Effect of mechanical strain on expression of Na+,K+-ATPase alpha subunits in rat aortic smooth muscle cells / P.D Langton., E. Songu-Mize; X. Liu; L.J. Hymel // Am J Med Sci (United States). 1998. - 316(3). - P. 196-9.

320. Lanius, R.A. gamma-Aminobutyric acidA receptor regulation by a chloride-dependent kinase and a sodium-dependent phosphatase / R.A. Lanius, B.A. Pasqualotto, C.A. Shaw // Brain Res Mol Brain Res. 1993. - 20(3). - P. 192-8.

321. Large, W.A. Characteristics and physiological role of the Ca2+-activated CI" conductance in smooth muscle / W.A. Large, Q. Wang // Am. J. Physiol. 1996. -271. -P.C435-C454.

322. Lauzon, A.-M. Coiled-coil unwinding at the smooth muscle myosin head-rod junction is required for optimal mechanical performance / A.-M. Lauzon, P.M. Fagnant, D.M. Warshaw, K.M. Trybus II Biophys. J. 2001. - 80. -P.1900-1904.

323. Ledoux, J. Dynamics of Ca2+-dependent CI- channel modulation by nif-lumic acid in rabbit coronary arterial myocytes / J. Ledoux, IA Greenwood, N. Leblanc // Mol Pharmacol. 2005 Jan;67(l):163-73. Epub 2004 Oct 1.

324. Ledoux, J. Modulation of Ca2+-dependent CI- channels by calcineurin in rabbit coronary arterial myocytes / J. Ledoux, I. Greenwood, L.R. Villeneuve, N. Leblanc // J Physiol. 2003. - 552(Pt 3). - P.701-14. Epub 2003 Aug 22.

325. Lee, C.H. The mechanism of phenylephrine-mediated Ca(2+).(i) oscillations underlying tonic contraction in the rabbit inferior vena cava / C.H. Lee, D. Poburko, P. Sahota, J. Sandhu et al. // J Physiol. 2001. - 534(Pt 3). - P.641-50.

326. Lee, CJ. Membrane stretch increases the activity of Ca(2+)-activated K+ channels in rabbit coronary vascular smooth muscles / C.J. Lee, S. Kwon, Y.H. Lee, D.S. Ahn et al. // Yonsei Med J (Korea (south)). 2000. - 41(2). - P.266-72.

327. Lee, Y.H. Regulation of vascular smooth muscle tone by N-terminal region of caldesmon. Possible role of tethering actin to myosin / Y.H. Lee, C. Gallant, H. Guo, Y. Li et al. // J Biol Chem. 2000. - 275(5). - P.3213-20.

328. Lehman, W. Visualization of caldesmon on smooth muscle thin filaments / W. Lehman, P. Vibert, R. Craig II J. Mol. Biol. 1997. - 274. - P.310-317.

329. Lemonnier L. Bcl-2-dependent modulation of swelling-activated CI- current and C1C-3 expression in human prostate cancer epithelial cells / L. Lemonnier, Y. Shuba, A. Crepin, M. Roudbaraki et al. // Cancer Res. 2004. - 64(14). - P.4841-8.

330. Levesque, PC. Anion and cation modulation of the guinea-pig ventricular action potential during beta-adrenoceptor stimulation / P.C. Levesque, C.D. Clark, S.I.

331. Zakarov, L.V. Rosensh-Traukh, J.R. Hume // Pfltigers Arch. 1993. - 424. - P.54-62.

332. Levitan, I. Modulation of volume-regulated CI" current by F-actin /1. Levi-tan, C. Almonte, P. Mollard, S.S. Garber // J. Membrane Biol. 1995. - 147. - P.283-294.

333. Levko, A.V. Response of the rat erythrocyte glycolytic system to hyperosmotic shrinkage. / A.V. Levko, S.L. Aksentsev, T.G. Gurlo, S.V. Konev et al. // Biofizika. 1995. - 40(2). -P.377-82.

334. Li, S. Signal transduction in matrix contraction and the migration of vascular smooth muscle cells in three-dimensional matrix / S. Li, J.J. Moon, H. Miao, G. Jin et al. // J Vase Res. 2003. - 40(4). - P.378-88. Epub 2003 Jul 29.

335. Li, X.-D. The interaction between the regulatory light chain domains on two heads is critical for regulation of smooth muscle myosin / X-D. Li, J. Saito, R. Ikebe, K. Mabuchi, et al. II Biochemistry, 2000. - 39. - P.2254-2260.

336. Lingrel, J.B. Ligand binding sites of Na,K-ATPase / J.B. Lingrel, M.L. Croyle, A.L. Woo, J.M. ArgQello // Acta Physiol Scand. 1998. - 163 (suppl. 643). -P.69-77.

337. Liu, X. Acetylcholine-induced chloride current oscillations in swine tracheal smooth muscle cells / X. Liu, J.M. Farley // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. -276. -P.78-186.

338. Loirand, G. Evidence for two distinct calcium channels in rat vascular smooth muscle cells in short term primary culture / G. Loirand, P. Pacaud, C. Miron-neau, J. Mironneau // Pflugers Arch. 1993. - 407. - P. 1149-1152.

339. Lopatin, D.A. Circulating bufodienolide and cardenolide sodium pump inhibitors in preeclampsia / D.A. Lopatin, E.K. Ailamazian, R.I. Dmitrieva, V.M. Shpen et al.// J Hypertens. 1999. - 17(8). - 1179-87.

340. Ludens, J.H. Nature of the inhibition of CI 2 transport by furo-semide: evidence for competitive inhibition of active transport of toad cornea / J.H. Ludens // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1982. - 223. - P.25-29.

341. Lymn J. Phospholipase C isoforms, cytoskeletal organization, and vascular smooth muscle / J. Lymn, A. Hughes //News Physiol. Sci.- 2000.-V.15,N.2.-P.41-45.

342. Lytle, C. A volume-sensitive protein kinase regulates the Na-K-2C1 co-transporter in duck red blood cells / C. Lytle, T. McManus // Am J Physiol. 1998. -274(4 Pt 1). -P.C1002-10.

343. Lytle, C. Activation of the avian erythrocyte Na-K-Cl cotransport protein by cell shrinkage, cAMP, fluoride, and calyculin-A involves phosphorylation at common sites / C. Lytle // J Biol Chem. 1997. - 272. - P. 15069-77.

344. Lytle, C. Coordinate modulation of Na-K-2C1 cotransport and K-Cl co-transport by cell volume and chloride. Am J Physiol Cell Physiol. 2002 Nov;283(5):C 1422-31

345. Lytle, C. Na-K-Cl cotransport in shark rectal gland. II. Regulation in isolated tubules / C. Lytle, B. Forbush III // Am. J. Physiol. 1992b. - 262 (Cell Physiol. 31). -P.C1009-C1017.

346. Lytle, C. The Na-K-Cl cotransport protein of shark rectal gland. II. Regulation by direct phosphorylation / C. Lytle, B. Forbush III // J. Biol. Chem. 1992a. -267. - P.25438-25443.

347. Ma, Y.H. Chloride-dependent calcium transients induced by angiotensin II in vascular smooth muscle cells / Y.H. Ma, H.W. Wei, K.H. Su, H.E. Ives et al. // Am J Physiol Cell Physiol. 2004. - 286(1). - P.C112-8.

348. Macknight, A.D. Regulation of cellular volume / A.D. Macknight, A. Leaf // Physiol. Rev. 1977. - 57. - P.510-573.

349. Madden, T.L. Crowding-induced organization of cytoskeletal elements: I. Spontaneous demixing of cytoplasmic proteins and model filaments to form filament bundles / T.L. Madden, J. Herzfeld //Biophys.J. 1993. - 65. -P.l 147-1154.

350. Mairbaurl, H. Na(+)-K(+)-2Cl- cotransport, Na+/H+ exchange, and cell volume in ferret erythrocytes / H. Mairbaurl, C. Herth // Am J Physiol. 1996. - 271(5 Pt 1).-P.C1603-11.

351. Majno, G. Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death / G. Majno, I. Joris // A J Pathol. 1995. - 146. -P.3-15.

352. Martonosi, A. Studies on actin. III. G-F transformation of actin and muscular contraction (experiments in vivo) / A. Martonosi, M.A.Gouvea, J. Gergely // J. Biol. Chem. 1960.-235.-P. 1707-1710.

353. Marunaka, Y. Effects of insulin and phospha-tase on a Ca -dependent CI" channel in a distal nephron cell line / Y. Marunaka, D.C. Eaton // J. Gen. Physiol. -1990. 95. - P.773-789.

354. Masuda, T. Effect of propofol on hypotonic swelling-induced membrane depolarization in human coronary artery smooth muscle cells / T. Masuda, Y. Tomi-yama, H. Kitahata, Y. Kuroda et al. // Anesthesiology. 2004. - 100(3). - P.648-56.

355. Matchkov, V.V. A cyclic GMP-dependent calcium-activated chloride current in smooth-muscle cells from rat mesenteric resistance arteries / V.V. Matchkov, C. Aalkjaer, H. Nilsson // J Gen Physiol. 2004. - 123(2). - P.121-34. Epub 2004 Jan 12.

356. Mathews, J. Effects of F-actin stabilization or disassembly on epithelial CI secretion and Na-K-2C1 cotransport / J. Mathews, J. Smith, B. Hrnjez. // Am. J. Physiol. 1997. -272 {Cell Physiol. 41). -P. C254-C262.

357. Matsuoka, S. Chloride-sensitive nature of the adrenaline-induced current in guinea-pig cardiac myocytes / S. Matsuoka, T. Ehara, A. Noma // J. Physiol. (Lond.). -1990.-425.-P.579-598.

358. Matsuzaki, T. Hypertonicity-induced expression of aquaporin 3 in MDCK cells / T. Matsuzaki, T. Suzuki, K. Takata // Am J Physiol Cell Physiol. 2001. -281(1).-P.C55-63.

359. McDonald, T.F. Regulation and modulation of calcium channels in cardiac, skeletal, and smooth muscle cells / T.F. McDonald, , S. Pelzer, W. Trautwein, D.J. Pelzer // Physiol.Rev. 1994. - 74. - P.365-512.

360. Mcroberts J.A. Furosemide-sensitive salt transport in the Madin-Darby canine kidney cell line: evidence for the cotransport of Na+,K+ and CI". J.A. Mcroberts, S. Erlinger, M.J. Rindler, M.H. Saier // J. Biol. Chem. 1982. - 257. -P. 2260-2266.

361. Mehta, D. Actin polymerization stimulated by contractile activation regulates force development in canine tracheal smooth muscle / D. Mehta, S.J. Gunst // J. Physiol. 1999. - 519. - P.820-840.

362. Meyer, J.W. Decreased blood pressure and vascular smooth muscle tone in mice lacking basolateral Na+-K+-2C1" cotransporter / J.W. Meyer, M. Flagella, R.L. Sutliff, J.N. Lorenz et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2002. - 283. -P.HI 846-55.

363. Middleton, L.M. PKC regulation of cardiac CFTR CI 2 channel function in guinea pig ventricular myocytes / L.M. Middleton, R.D. Harvey // Am. J. Physiol. -1998. -275 (Cell Physiol. 44). P.C293—C302.

364. Mills, JC. Apoptotic membrane blebbing is regulated by myosin light chain phosphorylation / J.C. Mills, N.L. Stone, J. Erhardt, R.N. Pittman // J Cell Biol. -1998. 140(3).-P.627-36.

365. Minetti, G. Characterization of the hypertonically induced tyrosine phosphorylation of erythrocyte band 3 / G. Minetti, C. Seppi, A. Ciana, C. Balduini et al. II Biochem J. 1998. - 335( Pt 2). - P.305-11.

366. Minton, A.P. Macromolecular crowding and molecular recognition / A.P. Minton // J Mol Recognit. 1993. - 6. - P.211-214.

367. Moffatt, J.D. Pharmacologically distinct intracellular calcium pools regulate tonic and oscillatory responses in porcine thoracic duct / J.D. Moffatt, T.M. Cocks // J Cardiovasc Pharmacol. 2004. - 43(1). - P.83-92.

368. Mongin, A.A. Hypotonic cell swelling changes Na+,K+,2C1- cotransport activity and a mode of its operation in cultured glial cells / A.A. Mongin, S.L. Aksent-sev, A.S. Fedulov, Z.B. Kvacheva et al. // J. Neurochem. 1997. - 69. - P.S31.

369. Mongin, A.A. Mechanisms of cell volume regulation and possible nature of the cell volume sensor / A.A. Mongin, S.N. Orlov // Pathophysiology. 2001. - 8. -P.77-88.

370. Moore, E.D. Coupling of the Na+/Ca2+ exchanger, Na+/K+ pump and sarcoplasmic reticulum in smooth muscle / E.D. Moore, E.F. Etter, K.D. Philipson, W.A. Carrington et al. IINature. 1993. - 365. - P.657-660.

371. Morita, H. Angiotensin II activation of a chloride current in rabbit cardiac myocytes / H. Morita, J. Kimura, M. Endoh // J. Physiol. (Lond.). 1995. - 483. -PI 19-130.

372. Mount, D.B. Cloning and characterization of KCC3 and KCC4, new members of the cation-chloride cotransporter gene family / D.B. Mount, A.Mercado, L. Song, J. Xu e al. // J Biol Chem (United States). 1999. - 274(23). - P. 16355-62.

373. Mount, D.B. The electroneutral cation-chloride cotransporters / D.B. Mount, E. Delpire, G. Gamba, A.E. Hall et al. // J.Exp .Biol. 1999. - 201. - P.2091-2102.

374. Muimo, R. Nucleoside diphosphate kinase and Cl(-)-sensitive protein phosphorylation in apical membranes from ovine airway epithelium / R. Muimo, S.J. Banner, L.J. Marshall, A. Mehta // Am J Respir Cell Mol Biol. 1998. - 18(2). - P.270-8.

375. Muraki, K. Effect of isoprenaline on Ca2/ channel current in single smooth muscle cells isolated from taenia of the guinea-pig caecum / K. Muraki, T.B. Bolton, Y. Imaizumi, M. Watanabe //J. Physiol. (Lond.). 1993. - 471. -P.563-582, 764.

376. Murphy, R.A. Signal transduction in smooth muscle / R.A. Murphy // Reviews of Physiology Biochemistry and Pharmacology. 1999. - vol.134.

377. Murthy K.Heterologous desensitization of response mediated by selective PKC-dependent phosphorylation of G(j.i) and G(i-2) / K. Murthy, J. Grider, G. Mak-hlouf //Am.J.Physiol.Cell Physiol.-2000.-V.279,N4.-C.925-934.

378. Muzyamba, M.C. Regulation of Na+-K+-2C1- cotransport in turkey red cells: the role of oxygen tension and protein phosphorylation / M.C. Muzyamba, A.R. Cossins, J.S. Gibson // J Physiol. 1999. - 517 (Pt 2). - P.421-9.

379. Myssina, S. CI- channel blockers NPPB and niflumic acid blunt Ca(2+)-induced erythrocyte 'apoptosis' / S. Myssina, P.A. Lang, D.S. Kempe, S. Kaiser et al. II Cell Physiol Biochem. 2004. - 14(4-6). - P.241-8.

380. Naganska, E. Ultrastructural characteristics of necrotic and apoptotic mode of neuronal cell death in a model of anoxia in vitro / E. Naganska, E. Matyja // Folia Neuropathol. 2001. -39(3). - P. 129-39.

381. Nagumo, H. Rho-kinase inhibitor HA-1077 prevents rho-mediated myosin phosphatase inhibition in smooth muscle cells / H. Nagumo, Y. Sasaki, Y. Ono, Oka-moto et al. II Am. J. Physiol. 2000. - 278. - P.C57-C65.

382. Nakayama, K. Interactive role of tyrosine kinase, protein kinase C, and Rho/Rho kinase systems in the mechanotransduction of vascular smooth muscles / K. Nakayama, K. Obara, Y. Tanabe, M. Saito et al. // Biorheology. 2003. - 40(1-3). -P.307-14.

383. Nelson, M.T. Calcium channels, potassium channels, and voltage dependence of arterial smooth muscle tone / M.T. Nelson, J.B. Patlak, J.F. Worley, N.B. Standen II Am. J. Physiol. 1990. -259 {Cell Physiol 28). -P.C3-C18.

384. Neylon CB. Vascular biology of endothelin signal transduction / C.B.1 Ney-lon // Clin Exp Pharmacol Physiol. 1999. - 26(2). - P. 149-53.

385. Nilius B. Annexin II modulates volume-activated chloride currents in vascular endothelial cells / B. Nilius, V. Gerke, J. Prenen, G. Szucs et al. // J. Biol. Chem. 1996. - 271. - P.30 631-30 636.

386. Nilius B. Volume-activated CI" channels / B. Nilius, J. Eggermont, T. Voets, G. Droogmans // Gen. Pharmacol. 1996. - 27. - P. 1131-1140.

387. Nilsson H. Role of intracellular calcium for noradrenaline-induced depolarization n rat mesenteric small arteries / H. Nilsson, L.M. Videbaeck, C. Toms, M.J. Mulvany // J. Vase. Res. 1998. - 35 - P.36-44.

388. Nobles M. Extracellular acidification elicits a chloride current that shares characteristics with ICl(swell) / M. Nobles, C.F. Higgins, A. Sardini // Am J Physiol Cell Physiol. 2004. - 287(5). -P.C 1426-35. Epub 2004 Aug 11.

389. Noguera M. Role of cyclic nucleotide phosphodiesterase isoenzymes in contractile responses of denuded rat aorta related to various Ca2+ sources / M. Noguera, M. Ivorra, C. Lugnier, P. D'Ocon // N.- Sch. Arch.Pharmacol. 2001. -V.363,N6. - P.612-619.

390. Novarino, G. Involvement of the intracellular ion channel CLIC1 in micro-glia-mediated beta-amyloid-induced neurotoxicity / G. Novarino, C. Fabrizi, R. Tonini, M.A. Denti et al. // J Neurosci. 2004. - 24(23). - P.5322-30.

391. Nunes, J.P. Cytoskeleton, passive tension and the contraction of the rat aorta to phorbol 12,13-dibutyrate / J.P. Nunes // Pharmacol Res. 2002. - 46(2). - P.l 13-7.

392. Nunes, J.P. The influence of the wall tension on the contractile responses of arteries / J.P. Nunes, S. Guimaraes // Fundam Clin Pharmacol. 1999. - 13(2). -P.193-7.

393. O'Donnel, M.E. Regulation of ion pumps and carriers in vascular smooth muscle / M.E. O'Donnel, N.E. Owen // Physiol. Rev. 1994. - 74. - P.683-721.

394. O'Donnell, M.E. Endothelial Na-K-Cl cotransport regulation by tonicity and hormones: phosphorylation of cotransport protein / M.E. O'Donnell, A. Martinez, D. Sun//Am J Physiol. 1995.-269(6 Pt l).-P.C1513-23.

395. O'Neill, W.C. Functional coupling of Nal-Kl-2C12 cotransport and Ca21-dependent K1 channels in vascular endothelial cells / W.C. O'Neill, D.F. Steinberg // Am. J. Physiol. 1995. - 269 {CellPhysiol 38). - P.C267-C274.

396. O'Neill, W.C. Physiological significance of volume-dependent transporters

397. W.C. O'Neill // Am. J. Physiol. Cell Physiol. (1999). - 276. - P.C995-C1011.i

398. O'Neill, W.C. Regulation of vascular endothelial cell volume by Na-K-2C1 cotransport / W.C. O'Neill, J.D. Klein // Am.J.Physiol. 1994. - 262. - P.C436-C444.

399. Ohta T. Chloride currents activated by caffeine in rat intestinal smooth muscle cells / T. Ohta, S. Ito // J. Physiol. (Lond.). 1993. - 465. -P.149-162.

400. Ohya Y. Effects of inositol phosphates on the membrane activity of smooth muscle cells of the rabbit portal vein / Y. Ohya, K. Terada, K. Yamaguchi, R. Inoue et al. // Pflugers Arch. 1988. -412. - P.382-389.

401. Oike M. Histamine H3-receptor activation augments voltage-dependent Ca2/ current via GTP hydrolysis in rabbit saphenous artery / M. Oike, K. Kitamura, H. Kuriyama // J. Physiol (Lond.). 1992. -448. - P. 133-152.

402. Okada Y. Receptor-mediated control of regulatory volume decrease (RVD) and apoptotic volume decrease (AVD) / Y. Okada, E. Maeno, T. Shimizu, K. Dezaki et al.//J Physiol.-2001. 532(Pt 1).-P.3-16.

403. Okada Y. Receptor-mediated control of regulatory volume decrease (RVD) and apoptotic volume decrease (AVD) / Y. Okada, E. Maeno, T. Shimizu, K. Dezaki et al.// J. Physiol. (Lond.). 2001. - P.532 3-16.

404. Okada Y. Volume expansion-sensing outward-rectifier CI 2 chan-nel: fresh start to the molecular identity and volume sensor / Y. Okada // Am. J. Physiol. 1997.- 273 (Cell Physiol. 42). P.C755—C789.

405. Okamoto T. Caveolins, a family of scaffolding proteins organizing 'preas-sembled signalling complexes' at the plasma membrane / T. Okamoto, A. Schlegel, P.E. Scherer, M. Lizanti // J. Biol. Chem. 1998. - 273. - P.5419-5422.

406. Oleksa L.M. al-adrenergic inhibition of the beta-adrenergically activated CI 2 current in guinea pig ventricular myocytes // L.M. Oleksa, L.C. Hool, R.D. Harvey // Circ. Res. 1996. - 78. - PI090-1099.

407. Orlov S.N. Bumetanide-sensitive ion fluxes in vascular smooth muscle cells: lack of functional Na+,K+,2C1~ cotransport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // J.Membrane Biol. 1996. - 153. -P.125-135.

408. Orlov, S.N. Altered a-adrenergic regulation of Na-K-Cl cotransport in cultured smooth muscle cells from the aorta of spontaneously hypertensive rats / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Am.J.Hypertens. 1995. - 8. - P.739-747. I

409. Orlov, S.N. Apoptosis in serum-deprived vascular smooth muscle cells: evidence for cell volume-independent mechanism. / S.N. Orlov, D. Pchejetski, S. Taurin, N. Thorin-Trescases et al. // Apoptosis. 2004. - 9. - P.55-66.

410. Orlov, S.N. Apoptosis in serum-deprived vascular smooth muscle cells: evidence for cell volume-independent mechanism / S.N. Orlov, D. Pchejetski, S. Taurin, N .Thorin-Trescases et al. // Apoptosis. 2004. - 9. - P.55-66.

411. Orlov, S.N. Bumetanide-sensitive ion fluxes in vascular smooth muscle cells: lack of functional Na+,K+,2C1- cotransport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // J. Membrane Biol. 1996. - 153. - P.125-135.

412. Orlov, S.N. Bumetanide-sensitive ion fluxes in vascular smooth muscle cells: lack of functional Na+,K+,2Cr cotransport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // J.Membrane Biol. 1996. - 153. - P. 125-135.

413. Orlov, S.N. Ca-activated K channels of erythrocytes: the study by means of the registration of Ca-induced alterations of membrane potential / S.N. Orlov, I.V.Petrova, M.B. Baskakov, M.A. Medvedev // Biol Membr. 1992. - 9. - P.885-903.

414. Orlov, S.N. cAMP signaling inhibits dihydropyridine-sensitive Ca2+ influx in vascular smooth muscle cells / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Hypertension. 1996. - 27. - P.774-780.

415. Orlov, S.N. Cell volume in vascular smooth muscle is regulated by bumetanide-sensitive ion transport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Am. J. Physiol. Cell Physiol. -1996b. 270. - P.C1388-C1397.

416. Orlov, S.N. Cell volume in vascular smooth muscle is regulated by bumetanide-sensitive ion transport / S.N. Orlov, J. Tremblay, P. Hamet // Am J.Physiol. -1996. 270. - P.C1388-C1397.

417. Orlov, S.N. Genetic and biochemical determinants of abnormal monovalent ion transport in primary hypertension / S.N.Orlov, N.Adragna, V.A. Adarichev, P. Hamet // Am J Physiol 1999. - 276. - P.C511-C536.

418. Orlov, S.N. Genetic and biochemical determinants of abnormal monovalent ion transport in primary hypertension / S.N. Orlov, N. Adragna, V.A. Adarichev, P. Hamet // Am J Physiol. 1999. - 276. - P.C511-C536.

419. Orlov, S.N. Hypertension. In Red cell membrane transport in health and disease / Bernhardt I. and Ellory J.C., editors. Springer, Berlin. 2003, P.587-602.

420. Orlov, S.N. Hypertension. In: Bernhardt I, Ellory JC, editors. Red cell membrane transport in health and disease. Berlin: Springer, 2003: P.587-602.

421. Orlov, S.N. Inversion of the intracellular Na+/K+ ratio blocks apoptosis in vascular smooth muscle at a site upstream of caspase-3 / S.N. Orlov, N. Thorin

422. Trescases, S.V. ICotelevtsev, J. Tremblay et al. // J Biol Chem. 1999. - 274. -P.16545-16552.

423. Orlov, S.N. Volume-dependent regulation of ion transport and membrane phosphorylation in human and rat erythrocytes / S.N. Orlov, N.I. Pokudin, P.V. Gulak, Yu.V. Postnov // J Membr Biol. 1989. - 107(2). - P. 105-17.

424. Orlowski, J. Na+/H+ exchangers of mammalian cells / J .Orlowski, S. Grin-stein // J. Biol. Chem. 1997. - 272. - P.22 373-22 376.

425. Overholt, J.L. On the mechanism of rectification of the isoproterenol-activated chloride current in guinea-pig ventricular myocytes / J.L. Overholt, M.E. Hobert, R.D. Harvey // J. Gen. Physiol. 1993. - 102. - P.871-895.

426. Owen, N.E. Mechanism of angiotensin II stimulation of Na-K-Cl cotrans-port of vascular smooth muscle cells / N.E. Owen, K.M. Ridge // Am.J.Physiol. — 1989. 257. - P.C629-C636.

427. Owen, N.E. Na/K/Cl cotransport in cultured human fibroblasts / N.E. Owen, M.L. Prastein//J. Biol. Chem. 1985. - 260. - P.1445-1451.

428. Owen, N.E. Regulation of Na/K/Cl cotransport in vascular smooth muscle cells / N.E. Owen // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984. - 125. - P.500-508.

429. Owen, N.E. Regulation of Na/K/Cl cotransport in vascular smooth muscle cells / N.E. Owen//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984. - 125. - P.500-508.

430. Owens G. Molecular control of vascular smooth muscle cell differentiation/G. Owens //Acta Physiol Scand.- 1998.-V. 164(4).-P.623-635.

431. Owens G. Molecular control of vascular smooth muscle cell differentiation/G. Owens // Acta Physiol Scand.- 1998.-V. 164(4).-P.623-635.

432. Pacaud, P. Release of Ca2+ by noradrenaline and ATP from the same Ca2+ store sensitive to both InsP3 and Ca2+ in rat portal vein myocytes / P. Pacaud, G. Loirand // J. Physiol. (Lond.). 1995. - 484. - P.549-555.

433. Page E. Water channel proteins in rat cardiac myocyte caveolae: osmolarity-dependent reversible internalization / E. Page, J. Winterfield, G. Goings, A. Bastaw-rous et al. // Am J Physiol. 1998. - 274(6 Pt 2). - H1988-2000.

434. Palfrey H.C. cAMP-stimulated cation cotransport in avian erythrocytes: inhibition by "loop" diuretics / H.C. Palfrey, P.W. Feit, P. Greengard // Am. J. Physiol. 1980. -238 (Cell Physiol. 7). - P.C139—CI48.

435. Palfrey H.C. The ATP and Mg2+ dependence of Na(+)-K(+)-2Cl- cotransport reflects a requirement for protein phosphorylation: studies using calyculin A / H.C. Palfrey, E.B. Pewitt // Pflugers Arch. 1993. - 425(3-4). - P.321-8.i

436. Papakonstanti, E.A. Actin cytoskeleton: a signaling sensor in cell volume regulation / E.A. Papakonstanti, E.A. Vardaki, C. Stournaras // Cell. Physiol. Biochem. 2000. - 10. - P.257—264.

437. Pasqualotto B.A. Regulation of GABAA and AMPA receptors by agonist and depolarizing stimulation requires phosphatase or kinase activity / B.A. Pasqualotto, R.A. Lanius, C.A. Shaw //Neuroreport. 1993. - 4(4). - P.447-50.

438. Pasqualotto, B.A. / B.A. Pasqualotto et al. // Neuroreport, 4 (1993) 447-450

439. Paul, RJ. Effects of microtubule disruption on force, velocity, stiffness and Ca(2+).(i) in porcine coronary arteries / R.J. Paul, P.S. Bowman, M.S. Kolodney // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000. - 279(5). - P.H2493-501.

440. Pearce, J.D. Differential effects of Rho-kinase inhibition on artery wall mass and remodeling / J.D. Pearce, J. Li, M.S. Edwards, W.P. English et al. // J Vase Surg. 2004. - 39(1). - P.223-8.

441. Pedersen, S.F. Possible interrelationship between changes in F-actin and myosin II, protein phosphorylation, and cell volume regulation in Ehrlich ascites tumor cells / S.F. Pedersen, E.K. Hoffmann // Exp Cell Res. 2002. - 277(1). - P.57-73.

442. Pedersen, S.F. Rho family GTP binding proteins are involved in the regulatory volume decrease in NIH3T3 mouse fibroblasts /S.F. Pedersen, K.H. Beisner, C. Hougaard, B.M. Willumsen et al. // J.Physiol. 2002. - 541. - P.779-796.

443. Pedersen, S.F. The cytoskeleton and cell volume regulation / S.F. Pedersen, E.K. Hoffinann, J.W. Mills // Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2001. -130(3). - P.385-99.

444. Perry, P.B. Swelling-activated K fluxes in vascular endothelial cells: volume regulation via KC1 cotransport and K channels / P.B. Perry, W.C. O'Neill // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1993. - 265. - P.C763-C769.

445. Philipp, S. A mammalian capacitative calcium entry channel homologous to Drosophila TRP and TRPL / S. Philipp, A. Cavalie, M. Freichel, U. Wissenbach et al. HEMBOJ. -1996.- 15.-P.6166-6171.

446. Piper, A.S. Direct effect of Ca2+-calmodulin on cGMP-activated Ca2+-dependent Cl-channels in rat mesenteric artery myocytes /A.S. Piper, W.A. Large // J Physiol. 2004 Sep l;559(Pt 2):449-57. Epub 2004 Jul 2.

447. Piper, A.S. Dual effect of blocking agents on Ca2+-activated CI" currents in rabbit pulmonary artery smooth muscle cells / A.S. Piper, I.A. Greenwood, W.A. Large // J Physiol. 2002. - 539. - P. 119-131.

448. Piper, A.S. Multiple conductance states of single Ca2+-activated CI- channels in rabbit pulmonary artery smooth muscle cells / A.S. Piper, W.A. Large // J Physiol. -2003. 547(Pt 1). -P.181-96. Epub 2003 Jan 10.

449. Piper, A.S. Single cGMP-activated Ca(+)-dependent Cl(-) channels in rat mesenteric artery smooth muscle cells / A.S. Piper, W.A. Large // J Physiol. 2004. -555(Pt 2). - P.397-408. Epub 2004 Jan 14.

450. Platts, S.H. Microtubule-dependent regulation of vasomotor tone requires Rho-kinase / S.H. Platts, L.A. Martinez-Lemus, G.A. Meininger // J Vase Res. 2002.- 39(2). -P.173-82.

451. Pollock, N.J.H. Chloride channels blockers inhibit Ca2+ uptake by smooth musle sarcoplasmic reticulum / N.J.H. Pollock, M.E. Kargacin, G.J. Kargacin // Bio-phys. J.- 1998. -75. -P. 1759-1766.i

452. Postnov, Yu.V. Altered permeability of the erythrocyte membrane for sodium and potassium in spontaneously hypertensive rats / Yu.V. Postnov, S.N. Orlov, P.V. Gulak, A.S. Shevchenko // Pflugers Archiv. 1976. - 365. - P.257-263.

453. Postnov, Yu.V. Altered sodium permeability, calcium binding and Na-K-ATPase activity in the red blood cell membrane in essential hypertension / Yu.V. Postnov, S.N. Orlov, A.S. Shevchenko, A.M. Adler // Pflugers Archiv. 1977. - 371.- P.263-269.

454. Puceat, M. Specific activation of adenylyl cyclase V by a purinergic agonist / M. Puceat, C. Bony, M. Jaconi, G. Vassort // FEBS Lett. 1998. - 431. - P. 189-194.

455. Quayle J. KATP channels in vascular smooth muscle / J. Quayle, N. Standen // Cardiovasc. Res.-1994.-V.28,N6.-P.797-804.

456. Quevillon-Cheruel, S. Role of the C-terminal extremities of the smooth muscle myosin heavy chains: implication for assembly properties / S. Quevillon-Cheruel, G. Foucault, M: Desmadril, A-M. Lompre, et al. // FEBS Letters. 1999. -454. -P.303-306.

457. Raat, N.J. Regulation of Na(+)-K(+)-2Cl- cotransport in rabbit proximal tubule primary culture / N.J. Raat, A. Hartog, van C.H. Os, R.J. Bindels et al.// Am J.Physiol. 1994. - 267. - P.F63-F69.

458. Raat, N.J.H. Culturing induced expression of baslateral Na+-K+-Cl" cotrans-porter BSC2 in proximal tubule, aortic endothelium, and vascular smooth muscle / N.J.H. Raat, E. Delpire, C.H. van Os, R.J.M. Bindels // Pflugers Arch. 1996. - 431. -P.458-460.

459. Remillard, C.V. Role of Ca2+- and swelling-activated CI" channels in alpha.-adrenoceptor-mediated tone in pressurized rabbit mesenteric arterioles / C.V Remillard, M.A. Lupien, V. Crepeau, N. Leblanc // Cardiovasc Res. 2000. - 46. - P.557-68.

460. Rhoden, KJ. Evidence of Na-K-Cl cotransport in airway smooth muscle / K.J. Rhoden, J.S. Douglas // Am. J. Physiol. 1995. - 268. - P.L551-L557.

461. Rishal, I. Na+ promotes the dissociation between GaGDP and Gbg, activating G-protein-gated K+ channels / I. Rishal, T. Keren-Raifman, D. Yakubovich, T. Ivanina et al. // J Biol Chem. 2003. - 278. - P.3840-3845.

462. Rohra, D.K. Functional role of CI- channels in acidic pH-induced contraction of the aorta of spontaneously hypertensive and Wistar Kyoto rats / D.K. Rohra, S.Y. Saito, Y. Ohizumi // Eur J Pharmacol. 2002. - 453(2-3). - P.279-86.

463. Rohwer, J.M. Implications of macromolecular crowding for signal transduction and metabolite channeling / J.M. Rohwer, P.W. Postma, B.N. Kholodenko, H.V. Westerhoff//Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1998. - Vol.95. -P.10547-10552.

464. Rose, C.R. MDA-receptor-mediated Na+ signals in spines and dendrites / C.R. Rose, A. Konnerth // J Neurosci. 2001. - 21. - P.4207-4214.

465. Rovner, A.S. The carboxyl-terminal isoforms of smooth muscle myosin heavy chain determine thick filament assembly properties / A.S.Rovner, P.M.Fagnant, S. Lowey, K.M. Trybus // J. Cell. Biol. 2002. - 156. - P.l 13-124.

466. Rowner, A.S. A long, weakly charged actin-binding loop is required for phosphorylation dependent regulation of smooth muscle myosin /A.S. Rowner // J. Biol Chem. 1998. - 273. - P.27939-27944.

467. Russ R. Pancreatic islet transplantation, but not intensive insulin therapy, corrects the pulmonary vascular complications of streptozotocin diabetes / R. Russ, B. Tobin // Can. J. Physiol. Pharmacol.- 1998.-V.76,N4.-P.407-417.

468. Russell, J.M. ATP-dependent chloride influx into internally dialyzed squid giant axons / J.M. Russell // J. Membr. Biol 1976. - 28. - P.335-349.

469. Russell, J.M. Sodium-potassium-chloride cotransport / J.M. Russell // Physiol.Rev. 2000. - 80. - P.212-276

470. Rutllant, J. Osmotic tolerance limits and properties of rhesus monkey (Macaca mulatta) spermatozoa / J. Rutllant, A.C. Pommer, S.A. Meyers // J Androl. -2003.-24(4).-P.534-41.

471. Sachs, J.R. The role of ATP in swelling-stimulated K-Cl cotransport in human red cell ghosts. Phosphorylation-dephosphorylation events are not in the signal transduction pathway / J.R. Sachs, D.W. Martin // J Gen Physiol. 1993. - 102(3). -P.551-73.

472. Sakaguchi, M. Swelling-induced CI 2 current in guinea-pig atrial myocytes: inhibition by gliben-clamide / M. Sakaguchi, H. Matsuura, T. Ehara // J. Physiol. (Lond.). 1997. - 505. - P41-52.

473. Saleh, S.N. Activation of chloride currents in murine portal vein smooth muscle cells by membrane depolarisation involves intracellular calcium release / S.N. Saleh, I.A. Greenwood // Am J Physiol Cell Physiol. 2004. - Epub ahead of print.

474. Saleh, S.N. Activation of chloride currents in murine portal vein smooth muscle cells by membrane depolarization involves intracellular calcium release / S.N. Saleh, IA. Greenwood // Am J Physiol Cell Physiol. 2005 Jan;288(l):C122-31. Epub 2004 Sep 8.

475. Salvail, D. Functional reconstitution of an eicosanoid-modulated CI- channel from bovine tracheal smooth muscle In Process Citation. / D. Salvail, M. Cloutier, E. Rousseau // Am J Physiol Cell Physiol (United States). 2002,. - 282(3). - P.C567-77.

476. Sandau, K.B. Nitric oxide-induced F-actin disassembly is mediated via cGMP, cAMP, and protein kinase A activation in rat mesangial cells / K.B. Sandau, F. Gantner, B. Brune // Exp Cell Res. 2001. - 10. - 271(2). - P.329-36.

477. Santell, L. Enhanced phosphorylation and dephosphorylation of a histone-like protein in response to hyperosmotic and hypoosmotic conditions / L. Santell, R.L. Rubin, E.G. Levin // J Biol Chem. 1993. - 268(28). - P.21443-7.

478. Saotome, M. Pituitary adenylate cyclase activating peptide induces cGMP-mediated relaxation in guinea-pig airways / M. Saotome, Y. Uchida, A. Nomura, T Endo // Pulm.Pharmacol.Ther. 1998. - V.l 1,N4. - P.281-285.

479. Sato, K. Myosin phosphorylation-independent contraction induced by phor-bol ester in vascular smooth muscle / K. Sato, M. Hori, H. Takano-Ohmuro, T. Tsu-chiya et al. // J Pharmacol Exp Ther. 1992. - 261. - P.497-505.

480. Savineau J-P. Cytosolic calcium oscillations in smooth muscle cells / J-P. Savineau, R. Marthan //News Physiol. Sei.- 2000.-15,N2.-P.50-55.

481. Schaefer, M. Monitoring of water content and water distribution in ischemic hearts / M. Schaefer, W. Gross, M. Preuss, .J Ackemann et al. // Bioelectrochemistry. -2003.-61(1-2).-P.85-92.

482. Schömberg, S.L. Cross Talk Between the GABAa Receptor and the Na-K-C1 Cotransporter Is Mediated by Intracellular CI' / S.L. Schömberg, J. Bauer, D.B. ICintner, G. Su et al. // JNeurophysiol. 2003. - 89. - P. 159-167.

483. Schramm, C.M. Mechanism of proteinkinase C potentiation of airway b-adrenergic relaxation / C.M. Schramm, M.M. Grunstein // Life Sei. 1995. -57. -P.l 163-1173.

484. Schultz, B.D. Pharmacology of CFTR chloride channel activity / B.D. Schultz, A.K. Singh, D.C. Devor, R.J. Bridges // Physiol. Rev. 1999. - 79. - Suppl. -P.S109—SI 44.

485. Schweda, F. Differential roles of the sodium-calcium exchanger in renin secretion and renal vascular resistance / F. Schweda, B.K. Kramer, A. Kurtz // Pflugers Arch.-2001. 442(5). -P.693-9.

486. Shanahan, C.M. Aquaporin-1 is expressed by vascular smooth muscle cells and mediates rapid water transport across vascular cell membranes / C.M. Shanahan, D.L. Connolly, K.L. Tyson, N.R. Cary et al. // J Vase Res. 1999. - 36(5). - P.353-6.

487. Shaw, C.A. / Shaw, C.A. et al. // Mol. Neuropharmacol. 1992. - 2. -P.297-302.

488. Shaw, C.A. Reversible kinase and phosphatase regulation of brain amino acid receptors in postnatal development / C.A. Shaw, R.A. Lanius // Brain Res Dev Brain Res. 1992. - 70(2). - P. 153-61.

489. Shaw, L. Inhibitors of actin filament polymerisation attenuate force but not global intracellular calcium in isolated pressurised resistance arteries / L. Shaw, S. Ahmed, C. Austin, M.J. Taggart // J Vase Res. 2003. - 40(1). - P.l-10.

490. Sheppard, D.N. Effect of ATP-sensitive K+ channel regulators on cystic fibrosis transmembrane conductance regulator chloride currents / D.N. Sheppard, M.J. Welsh IIJ Gen Physiol. 1992. - 100. - P.573-591.

491. Shida, S. Effects of CI" channel blockers on beta-adrenoceptor-mediated decreases in resting potential and intracellular CI" activity in guinea-pig heart / S. Shida, H. Nakaya, M. Kanno // Eur. J. Pharmacol. 1992. - 212. - P.267-270.

492. Shimokawa, H. Anti-anginal effect of fasudil, a Rho-kinase inhibitor, in patients with stable effort angina: a multicenter study / H. Shimokawa, K. Hiramori, H. Iinuma, S. Hosoda et al. // J Cardiovasc Pharmacol.- 2002. 40(5). - P.751-61.

493. Shirasawa, Y. Modulation of protein kinase C (PKC)-mediated contraction and the possible role of PKC epsilon in rat mesenteric arteries / Y. Shirasawa, T.J. Rutland, J.L. Young, D.A. Dean et al. // Front Biosci. 2003. - 1;8. - P.al33-8.

494. Shrode, L.D. Shrinkage-induced activation of Na+/H+ exchange in primary rat astrocytes: role of myosin light-chain kinase / L.D. Shrode, J.D. Klein, W.C. O'Neill, R.W. Putnam et al.// Am.J.Physiol. 1995. - 269. - P.C257-C266.

495. Shrode, L.D. Shrinkage-induced activation of Na+/H+ exchange: role of cell density and myosin light chain phosphorylation / L.D. Shrode, J.D. Klein, P.B. Douglas, W.C. O'Neill et al. // Am J Physiol. 1997. - 272(6 Pt 1). - P.C1968-79.

496. Shuba, L M. Phorbol ester activation of chloride current in guinea-pig ventricular myocytes / L.M. Shuba, T. Asai, T.F. Mcdonald // Br. J. Pharmacol. 1996. -117. - P.1395-1404.

497. Shum W.W. Involvement of Rho-kinase in contraction of guinea-pig aorta induced by prostanoid EP3 receptor agonists / W.W. Shum, G.Y. Le, R.L. Jones, A.M. Gurney et al. // Br J Pharmacol. 2003. - 139(8). - P. 1449-61.

498. Sipido, K.R. Ca2+ ., transients and [Ca2+ ]j-dependent chloride current in single Pur-kinje cells from rabbit heart / K.R. Sipido, G. Callewaert, E. Carmeliet // J. Physiol. (Lond.). 1993. - 468. -P.641-667.

499. Skou, J.C. Nobel lecture. The identification of the sodium-potassium pump / J.C. Skou II Biosci.Rep. 1998. - 18. - P. 155-169.

500. Smirnov, SV, Aaronson PI. Ca2+ currents in single myocytes from human mesenteric arteries: evidence for a physiological role of L-type channels / S.V. Smirnov, PI. Aaronson // J. Physiol. (Lond.). 1992. - 457. - P.455-475.

501. Smith J.B. Na+/K+/Cl" cotransport in cultured vascular smooth muscle cells: stimulation by angiotensin II and calcium ionophores, inhibition by cyclic AMP and calmodulin antagonists / J.B. Smith, L. Smith // J.Membrane Biol. 1987. - 99. -P.51-63.

502. Solaro, R.J. Myosin light chain phosphatase a Cinderella of cellular signal-ing/R.J. Solaro HCirc. Res. 2000. - 87.-P.173-175.

503. Somlyo, A.P. Signal transduction and regulation in smooth muscle / A.P. Somlyo, A.V. Somlyo II Nature, 1994. - 372. - P.231-236.

504. Somlyo, A.P. Signal transduction by G-proteins, Rho-kinase and protein phosphatase to smooth muscle and non-muscle myosin II / A.P. Somlyo, A.V. Somlyo II J. Physiol 2000. - 522. - P.177-185.

505. Sonoda, M. Acid-permeable anion channels in early mouse embryos and their possible effects on cleavage / M. Sonoda, F. Okamoto, H. Kajiya, Y. Inoue et al. //BiolReprod. 2003. - 68. - P.947-53.

506. Sorota, S. Delayed activation of cardiac swelling-induced chloride current after step changes in cell size / S. Sorota, X.Y. Du // J. Cardio-vasc. Electrophysiol. -1998. 9. - P.825-831.

507. Sorota, S. Pharmacologic properties of the swelling-induced chloride current of dog atrial myocytes / S.J. Sorota // Cardiovasc. Electro-physiol. 1994. — 5. — P.1006-1016.

508. Sorota, S. Swelling-induced chloride-sensitive current in canine atrial cells revealed by whole-cell patch-clamp method / S. Sorota // Circ. Res. 1992. -70. -P.679-687.

509. Standley, P.R. Cyclic stretch regulates autocrine IGF-I in vascular smooth muscle cells: implications in vascular hyperplasia / P.R. Standley, T.J. Obards, C.L. Martina // Am J Physiol. 1999. - 276(4 Pt 1). - P.E697-705.

510. Steenbergen, J.M. The quantal nature of calcium release to caffeine in single smooth muscle cells results from activation of the sarcoplasmic reticulum Ca2/-ATPase / J.M. Steenbergen, F.S. Fay H J. Biol Chem. 1996.-271.-P.1821-1824.

511. Strange, K. Cellular and molecular physiology of volume-sensitive anion channels / K. Strange, F. Emma, P. S. Jackson // Am. J. Physiol. 270 (Cell Physiol. 39): C711—C730, 1996.

512. Strange, K. Cellular and molecular physiology of volume-sensitive anion channels / K. Strange, F. Emma, P.S. Jackson // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996. - 270. - P.C711-C730.

513. Stull, JT. Myosin light chain kinase / JT. Stull, J.K. Krueger, K.E. Kamm,i

514. Z-H. Gao et al. // In Biochemistry of Smooth Muscle Contraction (M. Barany, Ed.). -(1996). P.l 19-130. Academic Press.

515. Sugiyama, Y. Osmotic stress up-regulates aquaporin-3 gene expression in cultured human keratinocytes / Y. Sugiyama, Y. Ota, M. Hara, S. Inoue // Biochim Biophys Acta. 2001. - 1522(2). - P.82-8. i

516. Sun, X.P. Characterization of large-conductance chloride channels in rabbit colonic smooth muscle / X.P. Sun, S. Supplisson, R. Torres, G. Sachs, E. Meyer // J. Physiol. (Lond.) 448: 355-382, 1992.

517. Sun, X.P. Chloride channels in myocytes from rabbit colon are regulated by a pertussis toxin-sensitive G protein / X.P. Sun, S. Supplisson, E. Mayer // Am. J. Physiol. 264 (Gastrointest. Liver Phys iol. 27): G774-G785, 1993.

518. Surks, H.K. Myosin phosphatase-Rho interacting protein. A new member of the myosin phosphatase complex that directly binds RhoA / H.K. Surks, C.T. Richards, M.E. Mendelsohn et al. // J Biol Chem. 2003. - 278(51). - P.51484-93. Epub 2003 Sep 23.

519. Sward, K. Inhibition of rho-associated kinase blocks agonist induced Ca2+sensitization of myosin phosphorylation and force in guinea pig ileum / K. Sward, K. Dreja, M. Susnjar, P. Hellstrand et al. II J. Physiol. 2000. - 522. - P.33-49.

520. Sward, K. The role of RhoA and Rho-associated kinase in vascular smooth muscle contraction / K. Sward, M. Mita, D.P. Wilson, J.T. Deng et al. // Curr Hyper-tens Rep. 2003. - 5(1). - P.66-72.

521. Sweeney, H.L. Regulation of asymmetric smooth muscle myosin II molecules / H.L. Sweeney, L-Q. Chen, K.M. Trybus et al. II J.B iol. Chem. 2000. - 275. -P.41273-41277.

522. Szado, T. Agonist-induced mitochondrial Ca2+ transients in smooth muscle / T. Szado, K.H. Kuo, K. Bernard-Helary, D. Poburko et al. // FASEB J. 2003. -17(1). — P.28-37.

523. Tabcharani, J.A. Phosphorylation-regulated CI 2 channel in CHO cells stably expressing the cystic fibrosis gene / J.A. Tabcharani, X.B. Chang, J.R. Riordan, J.W. Hanrahan //Nature. 1991. - 352. - P.628-631.

524. Tajimi, M. Effect of a novel inhibitor of cyclic AMP phospodiesterase, E-1020, on cytosolic Ca2/ level and contraction in vascular smooth muscle / M. Tajimi, H. Ozaki, K. Sato, H. Karaki // Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol. 1991. -344. -P.602-610.

525. Takano, M. Distribution of the isoprenaline-in-duced chloride current in rabbit heart / M. Takano, A. Noma // Pflugers Arch. 1992. - 420. - P.223-226.

526. Takeda, M. Volume and agonist-induced regulation of myosin light-chain phosphorylation in glomerular mesangial cells / M. Takeda, T. Homma, M.D. Breyer, N. Horiba et al. // Am.J.Physiol. 1993. - 264. - P.F421-F426.

527. Takeshima, H. Ca2+-induced Ca2+ release in myocytes from dyspedic mice lacking the type-1 ryanodine receptor / H. Takeshima, T. Yamazawa, T. Ikemoto, H. Takekura et al. // EMBO J. 1995. - 14. - P.2999-3006.

528. Tanaka, H. Use of chloride blockers: a novel approach for cardioprotection against ischemia-reperfusion damage / H. Tanaka, S. Matsui, T. Kawanishi, K. Shi-genobu // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. - 278. - P.854-861.

529. Tang, D.D. Downregulation of profilin with antisense oligodeoxynucleo-tides inhibits force development during stimulation of smooth muscle /D.D. Tang, J. Tan // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2003. - 285(4). - P.HI528-36. Epub 2003 Jun 12.

530. Tang, S. Molecular localization of regions in the L-type calcium channel critical for dihydropyridine action / S, Tang, A, Yatani, A, Bahinski, Y, Mori et al.// Neuron. 1993. — 11. - P.1013-1021.

531. Tani, E. Continuous elevation of intracellular Ca2+ is essential for the development of cerebral vasospasm / E. Tani, T. Matsumoto // Curr Vase Pharmacol. -2004.-2(1).-P.13-21.

532. Taurin, S. Na/K pump and intracellular monovalent cations: novel mechanism of excitation-transcription coupling involved in inhibition of apoptosis Article in Russian. / S. Taurin, P. Hamet, SN. Orlov // Mol Biol (Mosk). 2003 - 37(3). -P.371-81.

533. Thoreson, W.B. Reciprocal Interactions Between Calcium and Chloride in Rod Photoreceptors / Thoreson, WB, Bryson EJ, Rabl K. // J Neurophysiol 2003. -90.-P. 1747-1753.

534. Thoroed, S.M. Cell swelling activates phospholipase A2 in Ehrlich ascitestumor cells / S.M. Thoroed, L. Lauritzen, I.H. Lambert, H.S. Hansen et al. // J Membrf

535. Biol. 1997. - 160(1). - P.47-58.

536. Throckmorton, D.C. Protein kinase C activation during Ca2+-independent vascular smooth muscle contraction / Throckmorton, DC, Packer CS, Brophy CM. // J Surg Res. 1998. - 78(1). -P.48-53.

537. Tilly, B.C. Activation of the osmo-sensitive chloride conductance involves P21rho and is ac-companied by a transient reorganization of the F-actin cytoskele-ton

538. B.C. Tilly, MJ. Edixhoven, L.G. Tertoolen, N. Morii, Y. Saitoh, S. Narumiya; H.R. De Jonge. Mol. Biol. Cell 7: 1419-1427, 1996.

539. Tilly, B.C. Protein tyrosine phosphorylation is involved in osmoregulation of ionic conductances / B.C. Tilly, D.B. Van, L. G. Tertoolen, M.J. Edixhoven; H.R. De Jonge J et al. // Biol. Chem. 1993. - 268. - P.19919-19922.

540. Tominaga, M. Glibenclamide, an ATP-sensitive K+ channel blocker, inhibits cardiac cAMP-activated CI" conductance / M. Tominaga, M. Horie, S. Sasayama, Y. Okada// Circ. Res. 1995. - 77. - P.417-423.

541. Treharne, K.J. A novel chloride-dependent GTP-utilizing protein kinase inplasma membranes from human respiratory epithelium / K.J. Treharne, L.J. Marshall,i

542. A. Mehta // Am J Physiol. 1994. - 267(5 Pt 1). - P.L592-601.

543. Trouet, D. Caveolin-1 modulates the activity of the volumeregulated chloride channel / D. Trouet, B. Nilius, A. Jacobs, C. Remacle et al. // J. Physiol. (Lond.).- 1999.-520.-P.l 13-119. !

544. Trouet, D. Inhibition of volume-regulated anion channels by dominantnegative caveolin-1 / D. Trouet, D. Hermans, G. Droogmans, B. Nilius et al. // Bio-chem. Biophys. Res. Commun. -2001. -284. -P.461-465.

545. Trybus, K. Biochemical studies of myosin / K. Trybus // METHODS. -2000. 22. - P.327-335. 'i

546. Tseng, G.N. Cell swelling increases membrane conductance of canine cardiac cells: evidence for a volume-sensitive CI channel / G.N. Tseng // Am. J. Physiol.- 1992. 262 (Cell Physiol. 31). -P.C1056—C1068.

547. Tseng, H. The Na/K/2C1 cotransporter is increased in hypertrophied vascular smooth muscle cells / H. Tseng, B.C. Berk // J.Biol.Chem. 1992. - 267. -P.8161-8167.

548. Urban, N.H. K+ depolarization induces RhoA kinase translocation to caveo-lae and Ca2+ sensitization of arterial muscle / N.H. Urban, K.M. Berg, P.H.Ratz // Am J Physiol Cell Physiol. 2003. - 285(6). - P.C 1377-85. Epub 2003 Jul 30.

549. Valverde, M.A. Differential effects of tamoxifen and I 2 on three distinguishable chloride currents activated in T84 intestinal cells / M.A. Valverde, G.M. Mintenig, F.V. Sepulveda // Pflugers Arch. 1993. - 425. - P.552-554.

550. Van Breemen, C. Ca-regulation of vascular smooth muscle / C. Van Bree-men, C. Cauvin, A. Jons et al // Federation. Proc. 1986. - V.45. - P.2746-2751.

551. Van Cruchten, S. Morphological and biochemical aspects of apoptosis, oncosis and necrosis / S. Van Cruchten, W. Van Den Broeck // Anat Histol Embryol. -2002.-31(4).-P.214-23.

552. Van R.C. Endothelin and vasopressin activate low conductance chloride channels in aortic smooth muscle cells / R.C. Van, M. Lazdunski // Pfliigers Arch. -1993.-425.- 156-163.

553. Vivaudou, M.B. Multiple types of Ca2/ channels in visceral smooth muscle cells / M.B. Vivaudou, J.J. Singer, J.V. Walsh // Pflugers Arch. 1991. - 418. -P.144-152.

554. Voets, T. Regulation of a swelling-activated chloride current in bovine endothelium by protein tyrosine phosphorylation and G proteins / T. Voets, V. Manolopoulos, J. Eggermont, C. Ellory et al. // J Physiol. 1998. - 506 ( Pt 2). -P.341-52.

555. Von Weikersthal S.F. Functional and molecular characterization of a volume-sensitive chloride current in rat brain endothelial cells /S.F. Von Weikersthal, M.A. Barrand, S.B. Hladky // J Physiol (Lond). 1999. - 516. - P.75-84.

556. Wagner, C.A. Effect of urea and osmotic cell shrinkage on Ca2+ entry and contraction of vascular smooth muscle cells / C.A. Wagner, S.M. Huber, S. Warntges, G. Zempel et al. // Pflugers Arch. 2000. - 440. - P.295-301.

557. Wakabayashi, S. Molecular physiology of vertebrate Na+/H+ exchangers / S.Wakabayashi, M. Shigekawa, J. Pouyssegur, // Physiol. Rev. 1997. - 77. - P.51-74.

558. Waldegger, S. Effect of cellular hydration on protein metabolism / S. Waldegger, G.L. Busch, N.K. Kaba, G. Zempel // Miner Electrolyte Metab. 1997. -23(3-6).-P.201-5.

559. Walsh, K.B. Activation of a heart chloride current during stimu-lation of protein kinase C / K.B. Walsh // Mol. Pharmacol. 1991. - 40. - 342-346.

560. Walsh, K.B. Properties of a protein kinase C-activated chloride current in guinea pig ventricular myocytes / K.B. Walsh, K.J. Long // Circ. Res. 1994. - 74. -P.121—129.

561. Walsh, P.K.B. Effect of chloride channel blockers on the cardiac CFTR chloride and L- type calcium currents / K.B. Walsh, C. Wang // Cardiovasc. Res. -1996. 32. -P.391-399.

562. Wang X. Mechanism of SNAP potentiating antiproliferative effect of calcitonin gene-related peptide in cultured vascular smooth muscle cells / X. Wang, W. Wang, Y. Li, et all. // J.Mol.Celn Cardiol.-1999./V.31,N9.-P. 1599-1606.

563. Wang, F. Actions of genistein on cystic fibrosis transmembrane conductance regulator channel gating. Evidence for two binding sites with opposite effects / F. Wang, S. Zeltwanger, I.C. Yang, A.C. Nairn et al. // J Gen Physiol. 1998. - 111. -P.477-490.

564. Wang, G.L. Deficiency in C1C-3 chloride channels prevents rat aortic smooth muscle cell proliferation / G.L. Wang, X.R. Wang, M.J. Lin, H. He et al. // Circ Res. 2002. - 91(10). - P.E28-32.

565. Wang, G.X. Hypotonic activation of volume-sensitive outwardly rectifying chloride channels in cultured PASMCs is modulated by SGK / G.X. Wang, C.

566. McCrudden, Y.P. Dai, B. Horowitz et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2004. -287(2). - P.H533-44. Epub 2004 Apr 15.

567. Wang, Q. Action of histamine on single smooth muscle cells dispersed from the rabbit pulmonary artery / Q. Wang, W.A. Large // J. Physiol. (Lond.) 1993. -468. - 125-139.

568. Wang, Q. Properties of spontaneous inward currents recorded in smooth muscle cells isolated from the rabbit portal vein / Q. Wang, R.C. Hogg, W.A. Large // J. Physiol. (Lond.). 1992.-451. -P.525-537.

569. Wang, S, Chen J, Au KT, Ross MG. Expression of aquaporin 8 and its up-regulation by cyclic adenosine monophosphate in human WISH cells. Am J Obstet Gynecol. 2003 Apr; 188(4): 997-1001.

570. Wang, Z. Regulatory volume decrease of cardiac myocytes induced by beta-adrenergic activation of the CI- channel in guinea pig / Z. Wang, T. Mitsuiye, S.A. Rees, A. Noma // J. Gen. Physiol. 110: 73-82, 1997.

571. Wede, O.K. Mechanical function of intermediate filaments in arteries of different size examined using desmin deficient mice / O.K. Wede, M. Lofgren, Z. Li, D. Paulin et al. // J Physiol. 2002. - 540(Pt 3). - P.941-9.

572. Wehner, F. Cell volume-regulated cation channels / F. Wehner // Contrib. Nephrol. 1998. - 123. -P.8-20.

573. Wehner, F. The hypertonicity-induced Na+ conductance of rat hepatocytes: physiological significance and molecular correlate / F. Wehner, C. Bohmer, H. Heinzinger, F. van den Boom et al. // Cell. Physiol. Biochem. 2000. - 10.- P.335-340.

574. Wellman, G.C. Membrane depolarization, elevated Ca2+ entry, and gene expression in cerebral arteries of hypertensive rats / G.C. Wellman, L. Cartin, D.M. Eckman, A.S. Stevenson et al. II Am. J. Physiol. 2001. - 281. - P.H2559 - H2567.

575. Wermelskirchen, D. Veratridine activates a silent sodium channel in rat isolated aorta / D. Wermelskirchen, B. Wilffert, U. Nebel, A. Leidig et al. // Eur. J. Pharmacol. 1992. - 219. - P.253-259.

576. Whisenant, N. Regulatory interaction of ATP, Na 1 and CI 2 in the turnover cycle of the Na-K-2C1 cotransporter / N. Whisenant, M. Khademazad, S. Muallem // J. Gen. Physiol. 1993. - 101. -P.889-908.

577. White, M.M. Niflumic and flufenamic acids are potent reversible blockers of Ca2+-activated CI" channels in Xenopus oocytes / M.M. White, M. Aylwin // Mol Pharmacol. 1990. - 37. - P.720-724.

578. Wier, W.G. Alpha 1-adrenergic signaling mechanisms in contraction of resistance arteries / W.G. Wier, K.G. Morgan // Rev Physiol Biochem Pharmacol. -2003. 150. - 91-139. Epub 2003 Jul 17.

579. Wijetunge, S. pp60c-src increases voltage-operated calcium channel currents in vascular smooth muscle cells / S. Wijetunge, A.D. Hughes // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 1995.-217. - 1039-1044.

580. Wondergem, R. Blocking swelling-activated chloride current inhibits mouse liver cell proliferation / R. Wondergem, W. Gong, S.H. Monen, S.N. Dooley et al. // J Physiol. -2001. 532(Pt 3). -P.661-72.

581. Worth, N.F. Vascular smooth muscle cell phenotypic modulation in culture is associated with reorganisation of contractile and cytoskeletal proteins / N.F. Worth, B.E. Rolfe, J. Song, G.R. Campbell // Cell Motil Cytoskeleton. 2001. - 49(3). -P.130-45.

582. Xiao, G.N. Effects of CI- channel blockers on endothelin-1-induced proliferation of rat vascular smooth muscle cells. / G.N. Xiao, Y.Y. Guan, H. He // Life Sci. 2002. - 70(19). - P.2233-41.

583. Xie, Z. Na(+)/K(+)-ATPase as a signal transducer / Z.Xie, A. Askari // Eur J Biochem. 2002. - 269(10). - P.2434-9.

584. Xiong Z. Regulation L-type calcium channels by cyclic nucleotides and phosphorylation in smooth muscle cells from rabbites portal vein / Z. Xiong, N. Sperelakis, R. Fenoglio-Reiser // J. Vase. Res.-1994,-V.31,N5,-P.271-279.

585. Xiong, Z. Regulation of L-type calcium channels of vascular smooth muscle cells / Z. Xiong, N. Sperelakis II J. Mol. Cell. Cardiol. 1995. - 27. - P.75-91. 1

586. Yagi, S. Relationship between force and Ca2+ concentration in smooth muscle as revealed by measurements on single cells / S. Yagi, P.L. Becker, F.S. Fay // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1988. - 85. - P.4109-4113.

587. Yamada, M. P2 -purinoceptor activation stimulates phosphoinositide hydrolysis and inhibits accumulation of cAMP in cultured ventricular myo-cytes / M. Yamada, Y. Hamamori, H. Akita, and M. Yokoyama // Circ. Res. 1992. - 70. -P.477-485.

588. Yamakage, M. The repolarizing effects of volatile anesthetics on porcine tracheal and bronchial smooth muscle cells / M. Yamakage, X. Chen, A. Kimura, S. Iwasaki et al. // Anesth Analg (United States). 2002. - 94(1). - P.84-8.

589. Yamawake, N. Arrhythmogenic effects of isoproterenol-activated CI 2 current in guinea-pig ventricular myocytes / N. Yamawake, Y. Hirano, T. Sawanobori, and M. Hiraoka II J. Mol. Cell. Cardiol. 1992. - 24. - P. 1047-1058.

590. Yamazaki J, Kitamura K. Cell-to-cell communication via nitric oxide modulation of oscillatory Cl(-) currents in rat intact cerebral arterioles. J Physiol. 2001 Oct l;536(Pt l):67-78.

591. Yamazaki, J. Cell-to-cell communication via nitric oxide modulation of oscillatory Cl(-) currents in rat intact cerebral arterioles / Yamazaki J; Kitamura K. // J Physiol (England). -2001.- 536(Pt 1). P.67-78. ,

592. Yamazaki, J. Inhibitory effects of glibenclamide on cystic fibrosis transmembrane regulator, swelling-activated, and Ca2+-activated CI" channels in mammalian cardiac myocytes. Circ Res 81: 101-109, 1997

593. Yamazaki, J. Inhibitory effects of glibenclamide on cystic fibrosis transmembrane regulator, swelling-activated, and Ca2+ -activated CI" channels in mammalian cardiac myocytes / J. Yamazaki, J.R. Hume // Circ. Res. 81: 101-109, 1997.

594. Yamazaki, J. Regulation of recombinant cardiac CFTR chloride channels by protein kinase C / J. Yamazaki, F. Britton, M.L. Collier, B. Horowitz, J.R. Hume. Biophys. 1999. - J. 76. - P. 1972-1987.

595. Yamboliev, I.A. E vidence for modulation of smooth muscle force by thei (p38 MAP kinase/HSP27 pathway / Yamboliev IA, J.C. Hedges, J.L.Mutnick, L.P.

596. Adam et al. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2000. - 278(6). - P.HI 899-907.i

597. Yang, H. Cell signaling pathways mediating epidermal growth factor stimulation of Na:K:2Cl cotransport activity in rabbit corneal epithelial cells / H. Yang, Z. Wang, Y. Miyamoto, P.S. Reinach // J Membr Biol. 2001. - 183(2). - P.93-101.

598. Yano, S. Ionic mechanism for contractile response to hyposmotic challenge in canine basilar arteries / S. Yano, T. Ishikawa, H. Tsuda, K. Obara et al. // Am J Physiol Cell Physiol. 2004 Nov 3 Epub ahead of print.

599. Yu X-M. Gain control of NMDA-receptor currents by intracellular sodium / X-M. Yu, M.B. Salter // Nature. 1998. - 396. - P.469-474.

600. Yuan, X. J. Ionic currents in rat pulmonary and mesenteric arterial myocytes in primary culture and subculture / X.J. Yuan, W.F. Goldman, M.L. Tod, L.J. Rubin et al. II Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 1993. -264. -P.L107-L115.

601. Zhang, D. Microtubule disruption modulates the Rho-kinase pathway in vascular smooth muscle / D. Zhang, Z. Wang, N. Jin, L. Li, R.A. Rhoades et al. // J Muscle Res Cell Motil. 2001. - 22(2). - P. 193-200.

602. Zhang, J. A chloride current associated with swelling of cultured chick heart cells / J. Zhang, R.L. Rasmusson, S.K. Hall, M. Lieberman // J. Physiol. (Lond.) -1993.-472.-P.801-820.

603. Zhang, J. Chloride conductance is activated by membrane distention of cultured chick heart cells / J. Zhang, M. Lieberman // Cardiovasc. Res. 1996. - 32. — P. 168-179.

604. Zhang, J. Platelet-derived growth factor regulates K-Cl cotransport in vascular smooth muscle cells / J. Zhang, P.K. Lauf, N.C. Adragna // Am J Physiol Cell Physiol. 2003. - 284(3). - P.C674-80.

605. Zhang, Y. Opposing roles of K(+) and Cl(-) channels in maintenance of opossum lower esophageal sphincter tone / Y. Zhang, D.V. Miller; W.G. Paterson // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol (United States). 2000. - 279(6). -P.G1226-34.

606. Zhao, G. Trapped water of human erythrocytes and its application in ciyo-preservation / G. Zhao, L. He, H. Zhang, W. Ding et al.// Biophys Chem. 2004. -107(2).-P. 189-95.

607. Zhou, J.G. Regulation of intracellular CI- concentration through volume-regulated C1C-3 chloride channels in A10 vascular smooth muscle cells / JG Zhou, JL Ren, QY Qiu, H. He et al. // J Biol Chem. 2005 Feb 25;280(8):7301-8. Epub 2004 Dec 13.

608. Zhu, X. Calcium channels formed by mammalian trp homologues / X. Zhu, L. Birnbaumer. // News Physiol. Sci. 1998. - 13. - P.211 -217.

609. Zitt, C. Cloning and functional expression of a human Ca2+-permeable cation channel activated by calcium store depletion / C. Zitt, A. Zobel, A.G. Obukhov, C. Harteneck et al. II Neuron. 1996. -16. - 1189-1196. !I

610. Zygmunt, A.C. Calcium-activated chloride current in rabbit ventricular myocytes / A.C. Zygmunt, W.R. Gibbons // Circ. Res. 1991. - 68. - P.424-437.

611. Zygmunt, A.C. Intracellular calcium activates a chloride current in canine ventricular myocytes / A.C. Zygmunt // Am. J. Physiol. 1994. - 267 (Heart Circ. Physiol. 36). -P.H1984-H1995.

612. Zygmunt, A.C. Properties of the calcium-activated chloride current in heart / A.C. Zygmunt, W.R. Gibbons // J. Gen. Physiol. 1992. - 99. - P.391-414.

Информация о работе

Анфиногенова, Яна Джоновна
доктора медицинских наук
Томск, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Роль ионного транспорта, сопряженного с изменениями клеточного объема, в механизмах регуляции сократительной функции сосудистых гладкомышечных клеток - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы