Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль генов белков сурфактанта, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы в формировании дыхательных расстройств у новорожденных

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Роль генов белков сурфактанта, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы в формировании дыхательных расстройств у новорожденных"

003055390

На правах рукописи

Данилко Ксения Владимировна

РОЛЬ ГЕНОВ БЕЛКОВ СУРФАКТАЯТА, ЦИТОКИНОВОЙ СЕТИ И РЕШШ-АИГИОТЕНЗИНОЗОЙ СИСТЕМЫ В ФОРМИРОВАНИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ РАССТРОЙСТВ У НОВОРОЖДЕННЫХ

Специальность 03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА-2007

003055390

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Викторова Татьяна Викторовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна

доктор медицинских наук, профессор Файзуллина Резеда Мансафовна

Ведущая организация:

Медико-генетический научный центр РАМН, г. Москва

Защита диссертации состоится « » апреля 2007 г. в « » часов на заседании Регионального диссертационного Совета КМ 002.133.01 при Институте биохимии и генетики УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, просп. Октября, 71 и на сайте Института биохимии и генетики http://www.anrb.ru./molgen/dissov.html

Автореферат разослал « » марта 2007 г.

Ученый секретарь

Регионального диссертационного совета

С.М. Бикбулатова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Несмотря на значительные достижения неонатологии последних десятилетий, проблема дыхательных расстройств у новорожденных по-прежнему актуальна. Патологии легких остаются самыми частыми причинами развития критических состояний у новорожденных, особенно недоношенных [Дементьева Г.М., 2002, Nogee L., 2004].

Среди всех дыхательных нарушений новорожденных одно из ведущих мест принадлежит респираторному дистресс-синдрому (РДС). Считается, что РДС встречается повсеместно у 1-2% всех живорожденных и у 14% детей, родившихся с массой тела менее 2500 грамм. Частота развития РДС обратно пропорциональна степени недонашивания беременности [Stranjord Т.Р. et al., 2000; Hacking D. et al., 2001; Haataja R„ 2001; Grafoor et al., 2003]. В структуре причин неонатальной смертности в России на долю РДС и его осложнений приходится 17.5%. По данным на 1996 г., распространенность РДС в Российской Федерации составляла 197.6 на 10 000 родившихся живыми [Шабалов Н.П., 2004]. За последние годы не наблюдалось тенденции уменьшения количества заболевших [Дементьева Г.М., 2002].

Наряду с РДС, внутриутробная пневмония (ВП) также остается одной из важных проблем неонатальной пульмонологии в связи с ухудшением состояния здоровья матерей. Более того, нередко заболевание протекает по схеме: РДС-пневмония-сепсис [Шабалов Н.П., 2004]. Пневмонию диагностируют примерно у 0.5-1% доношенных и 10-15% недоношенных новорожденных. По данным литературы, на секции пневмонию выявляют у 15-38% мертворожденных и 2032% умерших живорожденных детей [Бойко Т.В. и др., 2000].

В основе респираторного дистресс-синдрома (РДС) лежит нарушение функции сурфактанта - поверхностно-активного вещества протеолипидной природы, выстилающего поверхность альвеол. Патологические изменения могут быть обусловлены дефицитом или иным дефектом продукции, инактивацией или усилением деградации сурфактанта. Нарушение состава и количества сурфактанта легких приводит к ухудшению его поверхностно-активных свойств и снижению защитной функции, возникновению воспаления и дезадаптации сердечно-сосудистой системы [Архипов В.В. и др., 2002].

Хотя воспалительный процесс в ткани легкого может быть изначально и неинфекционной этиологии, ВП всегда рассматривают как инфекционный

процесс, инициирующий, в свою очередь, вторичный дефицит сурфактанта [Фомичев М.В., 2004].

Для лечения и профилактики дыхательных нарушений в настоящее время активно применяются препараты сурфактанта и различные способы дотации кислорода. Однако на фоне лечения часто возникают осложнения, приводящие позднее к хроническим заболеваниям органов дыхания и даже летальным исходам. Механизм действия сурфактанта остается во многом неясным, кроме того, искусственная вентиляция легких сама по себе может вызвать патологические изменения в легких новорожденного [Apisarnthanarak A. et al., 2003., Jobe А., 2006].

В связи с вышесказанным, проблемы прогнозирования и профилактики РДС и ВП новорожденных остаются в центре внимания исследователей во всем мире.

Подобно другим многофакторным заболеваниям, развитие респираторного дистресс-синдрома новорожденных и врожденной пневмонии контролируется множественными взаимодействующими факторами экзогенного и эндогенного характера, в том числе генетическими. [Makri V. et al., 2000., Haataja R., 2001, Sonderen van L., et al., 2002, Marttila R. et al., 2003, Floras J., 2005, Аульченко, Ю.С., Аксенович Т.И., 2006]. Одним из методов генетики многофакторных заболеваний является исследование ассоциации полиморфных вариантов генов, продукты которых предположительно задействованы в развитии и регуляции тех или иных звеньев патогенеза заболевания [Silverman Е., Palmer L., 2000, Lornas D., Silverman E., 2001, Hall I., 2002]. Поскольку важными факторами развития таких патогенетических признаков дыхательных расстройств, как повреждение сурфактантной системы и нарушение легочного кровообращения, являются разнообразные медиаторы воспаления и регуляторы сосудистого тонуса, целесообразным представляется комплексный анализ соответствующих генетических систем, эффект которых может быть модифицирован экзогенным влиянием.

Цель работы: оценить роль полиморфных вариантов генов белков сурфактанта, цитокинов и ангиотензин-превращающего фермента в формировании наследственной предрасположенности к дыхательным расстройствам у новорожденных.

Задачи исследования:

1. Сформировать выборки и создать коллекцию ДНК новорожденных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

2. Проанализировать полиморфизм генов белков сурфактанта SFTPB, SFTPC, SFTPD и гаплотипов генов SFTPB, SFTPD у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

3. Провести анализ полиморфных локусов генов цитокинов TNFa, LT А, IL IB, IL1RN, IL6, IL8, ¡LIO, а также гаплотипов генов TN Fa-LT А и ILlB-LLIRNy больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

4. Изучить особенности распределения частот аллелей и генотипов инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

5. Определить генетические маркеры предрасположенности и устойчивости новорожденных к дыхательным расстройствам, врожденной пневмонии, респираторному дистресс-синдрому и его инфекционным осложнениям.

Научная новизна.

Впервые в России у новорожденных с дыхательными расстройствами и здоровых детей проведен анализ полиморфизма генов белков сурфактанта (SFTPB, SFTPC, SFTPD), цитокинов (TNFa, LTA, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, ILIO) и ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). Впервые показана взаимосвязь аллелей и генотипов полиморфных локусов генов SFTPD, цитокинов и АСЕ с развитием РДС, врожденной пневмонии и риском возникновения инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.

Практическая значимость работы.

Результаты исследования могут быть использованы для прогнозирования развития дыхательных расстройств у новорожденных и инфекционных осложнений у детей с РДС.

Материалы работы применимы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов, а также на курсах последипломного образования врачей.

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на European Human Genetics Conference (ESHG, Prague, 2005, Amsterdam, 2006); 3rd Lung Science Conference (Taormina, Italy, 2005); The XlXth international congress of allergology and clinical immunology (ICACI, Munich, Germany, 2005), European Respiratory Society Annual Congress (Copenhagen, 2005, Munich, 2006); The 72nd annual international scientific assembly of the American College of Chest (CHEST, 2006); V Съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005); Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 2005, Санкт-Петербург,

2006); III Российском конгрессе «Педиатрическая анестезиология и интенсивная терапия» (Москва, 2005); Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2005, 2006); Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН (Москва, 2006); межлабораторном семинаре Института биохимии и генетики (Уфа, 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 1 статья.

Положения, выносимые на защиту:

1. По распределению частот гаплотипов гена SFTPB, гаплотипов генов семейства IL1 и генотипов гена АСЕ выборка новорожденных с дыхательными расстройствами достоверно отличается от группы здоровых новорожденных.

2. Генетическими маркерами предрасположенности к расстройствам дыхания в первые сутки после рождения являются аллельные варианты генов SFTPD к АСЕ.

3. Риск развития РДС у новорожденных маркируется генами SFTPB, IL1B, IL1RN

4. Полиморфные варианты генов SFTPB, SFTPD, TNFa, IL1RN, ILIO ассоциированы с развитием инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.

5. Важной составной частью генетической структуры подверженности к РДС и ВП новорожденных являются полиморфные варианты генов SFTPB, SFTPD, TNF, HIB, 1L1RN, ILIO.

Благодарности. Автор выражает глубокую признательность заведующей ОРИТН ГКБ № 17 г.Уфы Фатыховой А.И. и врачу-реаниматологу Богдановой Р.З., а также сотрудникам РД № 8 за содействие в организации формирования выборки и клиническое обследование больных.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и приложения. Библиографический список включает 172 источника, из них 26 - отечественных и 146 - зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами и 23 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили 108 новорожденных детей с дыхательными расстройствами, в том числе с клиническим диагнозом респираторный дистресс-синдром и врожденная пневмония. Все дети

проходили лечение в ГКБ № 17 г. Уфы в период с 2003 по 2005 гг. Все новорожденные нуждались в интенсивной дыхательной терапии продолжительностью не менее 48 часов.

В контрольную группу случайным образом вошли 104 практически здоровых новорожденных, родившихся в РД № 8 г. Уфы в 2003 - 2005 гг.

Материалом для исследования служили образцы ДНК, выделенной из лимфоцитов периферической венозной крови больных с дыхательными расстройствами (N=108) и пуповинной крови здоровых новорожденных (N=104).

Методы исследования. Постановка клинического диагноза проводилась врачами-неонатологами ГКБ№ 17.

Для выделения ДНК использовали стандартный метод фенольно-хлороформной экстракции. Полиморфизм генов SFTPB (VNTR интрона 4), IL1RN (VNTR интрона 2), АСЕ (инсерция-делеция) изучали методом ПЦР. Для детекции полиморфизм гена SFTPD использована амплификация рефрактерной мутационной системы (ARMS). Методом ПДРФ-анализа изучен полиморфизм генов SFTPC (128Т>А), TN Fa (-308G>A), LT A (252A>G), ILIB (-5110T, 3953ОТ), IL6 (-174G>C), IL8 (-251T>A), ILIO (-6270A). Амплифицированные фрагменты ДНК разделялись электрофоретически (ЭФ) в полиакриламидном неденатурирующем геле (ПААГ) и визуализировались в проходящем УФ-свете после окрашивания гелей бромистым этидием. Исследование промоторной области и экзона 4 гена SFTPB проводили с помощью анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) и последующего секвенирования. Визуализация однонитевых фрагментов ДНК после щелочной денатурации и электрофореза в ПААГ осуществлялась путем окрашивания гелей нитратом серебра.

Статистический анализ. Математическую обработку результатов исследования проводили на IBM Pentium IV, используя пакеты статистических программ: STATISTICA v.6.0, BIOSTAT, а также программы Microsoft: Excel и Access. Частоты гаплотипов рассчитывали в программе «The EH software program». Разницу в распределении частот аллелей, генотипов и гаплотипов между группами рассчитывали, применяя точный критерий Фишера или критерий X2 с поправкой Йетса на непрерывность [Животовский H.A., 1991]. Статистически значимыми различия считали при р<0.05. Силу ассоциаций генотипических характеристик с риском развития ДР и клиническими особенностями РДС оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ratio, OR) [Schlesselman J., 1982].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ анкет послужил основой для разделения общей выборки новорожденных с дыхательными расстройствами на три условные группы, исходя из поставленных диагнозов. Дальнейший анализ проводился по следующей схеме: 1. Общую выборку новорожденных с дыхательными расстройствами (ДР, N=108) сравнивали с контрольной группой здоровых новорожденных (контроль, N=104) для выявления маркеров повышенного и пониженного риска формирования дыхательных расстройств. 2. Условные группы новорожденных с респираторным дистресс-синдромом (РДС, N=72) и врожденной пневмонией (ВП, N=36) сопоставляли с контрольной группой с целью выявления маркеров повышенного и пониженного риска формирования РДС и ВП. 3. С целью выявления маркеров повышенного и пониженного риска развития инфекционных осложнений у новорожденных с РДС подгруппу детей с РДС без врожденной пневмонии (РДС без ВП, N=24) сопоставляли с подгруппой детей с РДС, осложненным вторичной пневмонией (РДС+ВП, N=48).

Анализ полиморфизма генов белков сурфактанта

Важную роль в патогенезе многих заболеваний легких у новорожденных играют качественные и количественные изменения компонентов сурфактантного комплекса, в том числе специфичных белков (SP). SP-B и SP-C непосредственно взаимодействуют с липидами сурфактанта. Обусловленное генетически снижение их синтеза приводит к тяжелым (хроническим или летальным) дыхательным нарушениям у человека [Haataja R. et al., 2002; Nogee L.M., 2004]. SP-A и SP-D участвуют, в основном, в защитных реакциях организма [Pantelidis P.et al., 2002]. В литературе есть сообщения об ассоциации генов SP-A и SP-B с РДС [Floros J. et al., 2001; Haataja R. et al., 2000].

Изучено 6 полиморфных локусов генов белков сурфактанта SFTPB, SFTPC и SFTPD.

Известно, что мутации, заключенные в промоторной области, могут значительно, влиять на уровень экспрессии гена. Экзон 4 гена SFTPB некоторые исследователи считают «горячей точкой» мутаций [Lin Z. et al., 1998]. Для выявления возможных мутаций у больных с дыхательными расстройствами нами проведен SSCP-анализ промоторной 5'-области и экзона 4 гена гена SFTPB. Секвенирование фрагментов ДНК промоторной области гена SFTPB, соответствующих трем вариантами подвижности однонитевых цепей, и последующий ПДРФ-анализ позволили детектировать замену аденина (А) на цитозин (С) в положении -18 гена у больных с ДР и в контроле (рис. 1).

ЙЙСР Е Г Г 0 0

Г ЕЛ

ф- ^Ь-^-.^г— * - «Г Ч-»

а)

ЙЙСР о в I Р I { Е О П Р ПДРФ М АС АС СС АС АС АС СС АА АА АС

200 ;оо

В)

Рис.!. I Гоиск изменений последовательности ДНК промоторной области гена $ЕТРВу новорожденных в изучаемых группах: а) 5Ь>СР»анализ: дорожки Щ Е, Г - вариант« подвижности цепей ДНК; б) ПДРФ-анализ (рестриктаза Взс4Г)', в) фрагмент сиквенса образцов ДНК - вариантов подвижности Е и II

88СР- и ПДРФ-анализ "жзона 4 гена 5РТРВ выявил наличие замены цитозина (С) па тачим (Т) в положении 1580 гена, встречающейся ао всех грушах (рис. 2). Оба полиморфизма были ранее описаны в литературе [Ьщ '¿. е! а1., 2000].

SSCP

С ; д

ЛВС

а Л. л

• ■ " * 1 i ч

БЭСР Л

ПДРФ тт

265 ■ ■

■

199

, л

шя

Рис.2. ] 1оиск изменений последовательности ДНК экзона 4-генэ ЗПРИ у Новорожденных в изучаемых группах: а) Й^СР-апализ: дорожки А, В, С-варианты подвижности цепей ДНК; б) ПДРФ-анализ (рестриктаза В я (4 (Л)

Идентификация ВЭСР-полиморфизма промоторной области и экзона 4 гена $РТРВ позволила провести анализ частот генотипов и аллелей по данным лвкусам в группах сравнения.

Сравнение групп больных с ДР, РДС и В11 с контролем по частотам аллелей и генотипов полиморфных локусов -!8А>С и 15800Т гена 5ЩРВ, а также 32С>Т гена ЗРТРВ существенных различий не выявило.

Отмечена тенденция повышения частоты гетерозиготного генотипа СТ полиморфного л о куса 15800Т гена 8РТРВ в подгрупп! РДС+ВП (59,57% против 37.50% у больных РДС без ВП) (р-~0.087). При лом генотип СС чаще встречался у детей с РДС без ВП - 33.33% против 19.15% в подгруппе РДС+ВП (р=0.24) (рис.3).

сс ст тг □ рдс - вп______■ рдс + вп

Рис. 3. Частоты генотипов полиморфного локуса 15800Т генаЩ'ТРВ у больных с разным течением РДС

Анализ У>ЛГК.-ло1суса нитрона 4 гена $РТРВ показал, что гетерозиготные по делениям генотипы Тчл'/Ое1 достоверно реже встречались у больных с ДР (0,93%) (р=0.011) н в группе с РДС (0%) (р=0.0089), по сравнению с контроле (8.65%). По-видимому, они являются маркерами устойчивости к развитию РДС (0к=0.099, 95%С1 0.0050-0.78) и ДР в целом (0к=0.071, 95%С1 0.004-0,504 (^ответствен ф) (рис. 4).

Рис. 4. Распределение генотипов полиморфного VNTR-.ioK.vca гена Б РТР В в анализируемых группах больных с ДР и в контроле

Большинство носителей делеционных аллелей в контроле (8.65%) оказалось гетерозиготами, с размером одного из ПЦР-фрагментов около 330 и.и. (1г(Ш30). В 1руппе РДС этот аллель не встречался (0%). Таким образом, именно генотип 1пу/330 обуславливает достоверную разницу в распределении генотипов между группой РДС и контролем (р=0.042; ОГ<=0,091, 95%С( 0.0048-0.67). Почти

двукратное увеличение частоты гетерозиготных по инсерциям генотипов у больных с ДР по сравнению контролем оказалось недостоверным.

Поскольку три описанных выше полиморфных локуса находятся в одном гене, мы провели анализ гаплотипов по локусам: SFTPB:-18 А>С, SFTPB: 1580С>Т, SFTPB'NNTR. Инсерционные аллели VNTR локуса интрона 4 гена SFTPB суммировались, также как делеционные, и образовали группы аллелей Ins и Del.

Распределение частот гаплотипов в группе больных с ДР значительно отличалось от такового в контроле (х2=17.99, pO.OOl) (табл. 1). По данному параметру достоверные отличия обнаружены также между группой РДС и контролем (x^ie.65, р<0.001). При этом в группе РДС была существенно повышена частота гаплотипа A-C-Inv (29.85% против 18.69% в контроле) (х2=4.98, р=0.026) и, напротив, снижена частота гаплотипа A-T-Inv (26.12% против 39.39% соответственно) (х2=5.27, р=0.017).

Таблица 1

Распределение частот гаплотипов локусов 18А>С, 1580С>Т и VNTR экзона 4 гена SFTPB у больных с ДР, РДС и в контроле

Гапл отнвы n, ДР ns РДС P* n, Контроль

Pi±Sp,CI % Pfts„,CI % РгЦ»С1 %

N 208 134 198

A-C-Ins 0 0 0 0 0 0

A-C-Del 3 1 44±0.83 (0 30-4 16) 2 1 49±1 05 (0.18-5 29) 0 73 1 0 51±0 50 (0 01-2 78)

A-C-Inv 50 24 04±2 96 (18 40-30 43) 40 29 85±3 95 (22 26-38 36) * 0.026V 37 18 69±2 77 (13 51-24 83)

A-T-Ins 4 1.92±0 95 (0 53-4.85) 2 1 49±1 05 (0.18-5 29) 0 95 4 2.02±1 00 (0 55-5 09)

A-T-Del 0 0 0 0 0 163 5 2.53±1 11 (0 82-5 79)

A-T-Inv 64 30.77±3 20 (24 57-37 52) 35 26 12±3 79 (18.92-34 41) 0.017 _ 78 39 39±3 47 (32 54-46 57)

C-C-Ins 0 0 0 0 0 40 3 1.52±0.87 ' (0 31-4 36)

C-C-Del 0 0 0 0 0 84 1 0.51±0 SO (0 01-2 78)

C-C-Inv 47 22 60±2 90 (17 10-28 89) 26 19 40±3.42 (13 08-27 12) 0 71 34 17 17±2 68 (12 19-23 16)

C-T-Ins 3 1 44±0 83 (0 30-4 16) 2 1 49±1 05 (0 18-5 29) 0 32 0 0

C-T-Del 0 0 0 0 - 0 0

C-T-Inv 37 17 79±2 65 (12 84-23 68) 27 20.15±3 47 (13 72-27 95) 0 67 35 17 68±2 71 (12 63-23 72)

Примечание, здесь и далее * - различия с контролем, серым цветом выделены достоверные различия при р<0 05

Основываясь на полученных данных, можно заключить, что гаплотип А-С-1пу является маркером предрасположенности к развитию РДС (011=1.85, 95%С1 1.07-3.12). В то же время гаплотип А-Т-1пу является маркером устойчивости к развитию РДС (011=0.54, 95%С1 0.32-0.90). Вероятно, наибольшее значение для формирования РДС имеет присутствие того или иного аллеля локуса 1580С>Т гена БРТРВ, связанного с заменой 131ТЬг>11е в пропротеине БР-В, но только в сочетании с более распространенными аллелями 5'-области и интрона 4, участвующими в определении транскрипционной активности гена и процессе сплайсинга мРНК.

ПДРФ-анализ экзона 4 гена БРТРС не выявил ни одного случая замены 128Т>А ни среди больных, ни в контрольной группе.

В ходе сравнительного анализа распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера 32С>Т гена ЕРТРИ выявлены достоверные отличия между подгруппами новорожденных с РДС (х2=9.329, р=0.0090) (рис.5).

сс от тт с т

□ РДС-ВП_■ РДС + ВП

Рис. 5. Распределение генотипов и аллелей полиморфного локуса 32С>Т гена ЕРТРО в подгруппах больных РДС

Генотип СС не встречался в подгруппе РДС+ВП, тогда как у больных РДС его частота составила 17.39% (р=0.011). Мы полагаем, что генотип СС является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений РДС, поскольку снижает их риск почти в 17 раз (0л=0.048, 95% С1 0.0026-0.39). В то же время, генотип ТТ оказался более частым в подгруппе РДС+ВП (40.0% против 21.74% при РДС без ВП), но различия оказались достоверны (р=0.18).

Сопоставление выборок новорожденных с ДР и контроля в ходе изучения полиморфного локуса 478А>С гена БРТРИ продемонстрировало лишь тенденцию к увеличению доли аллеля в среди больных (58.88% против 50.00%).

При гаплотипическом анализе полиморфных локусов 32С>Т и 478А>С, расположенных одном гене БРТРО, выяснилось, что указанные локусы

сцеплены между собой только в группе здоровых индивидов, и пары аллелей Т + А и С + G встречаются значительно чаще (х2=28.28, р<0.001).

Показано также, что доля гаплотипа T-G гена SFTPD существенно увеличена в группе больных с ДР по сравнению с контролем (х2=5.50, р=0.019), в то время как доли гаплотипов Т-А и С-А незначительно уменьшены (табл. 2). Сходное распределение частот гаплотипов наблюдалось в группах с РДС и ВП, однако различия с контролем по частоте гаплотипа T-G сохранили значимость лишь в группе с ВП (х2=4.80, р=0.028). Кроме того, гаплотип T-G почти в 2 раза чаще встречался в подгруппе РДС+ВП, (32.74% против 16.47% у больных РДС без пневмонии), a C-G - в 1.5 раза реже (26.15% против 42.22% соответственно).

По-видимому, гаплотип T-G является маркером предрасположенности к развитию ДР (OR=1.77, 95%С1 1.09-2.86), особенно связанных с ВП (OR=2.06, 95%С1 1.07-3.9) (табл. 2). Наши результаты согласуются с данными литературы о важной роли SP-D в реализации защитных механизмов врожденного иммунитета в легких [Crouch Е.С., 2000].

Таким образом, в нашем исследовании не только подтверждена связь гена SFTPB с развитием РДС, но и показана ассоциация разных аллельных и гаплотипических вариантов гена SFTPD с развитием ВП, в том числе у новорожденных с РДС.

Таблица 2

Распределение частот гаплотипов локусов 32С>Т и 478A>G гена SFTPD у новорожденных с ДР и в контроле

Гяпло типы Бальные с ДР ВП РДС РДС без ВП РДС+ВП Контроль

PFfcSpCI % Pi±s,,CI % p,±Sp,CI % Pi±»pCI % Pftsp,CI % PffcSp.CI %

N 206 70 136 46 90 208

С-А S83±1 63 (3 05-9 95) 5 71±2 77 (1 58-13 99) 5 15±1 89 (2 09-10 32) 6 52±3 64 (1 37-17 90) 4 44±2 17 (1 22-10 99) 8 17±1 90 (4 83-12 76)

C-G 29 61±3 18 (23 47-36 35) 27 14±5 32 (17 20-39 10) 31 62±3 99 (23 92-40.14) 41 30±7 26 (27.00-56 77) 26 67±4 66 (17 89-37 03) 30 77±3 20 (24 57-37 52)

Т-А 34 95±3 32 (28 46-41 89) 34 29±5 67 (23 35-46 60) 36 03±4 12 (27 98-44 70) 34 78±7 02 (21.35-50 25) 36 67±5 08 (26 75-47 49) 41 83±3 42 (35 04-48 85)

T-G 29.61±3.18 (23.47-36 35) 32.86±5.61 (22 09-45 12) 27 21±3 82 (19 93-35 50) 17.39±5 59 (7.82-31.42) 32 22±4 93 (22 75-42 90) 19 23±2 73 (14 11-25 25)

Анализ полиморфизма генов цитокинов

Исследования разных авторов свидетельствуют о многообразном влиянии медиаторов воспаления и компонентов сурфактанта легких друг на друга. [Gardai S. et al., 2003; Ikegami M. et al., 2005]. Показано, что ранний воспалительный ответ, включающий активацию нейтрофилов, тканевых макрофагов и цитокинов, играет важную роль в патогенезе РДС, а также других хронических и острых заболеваний легких у детей [Özdemir A. et al., 1997; Sarafidis К. et al., 2001; Nupponen I. et al., 2002].

В нашем исследовании изучено 8 полиморфных маркеров генов цитокинов (TNFa, LTA, ILIB, IL1RN, IL6, IL8, ILIO).

Достоверных различий в распределении генотипов и аллелей полиморфных локусов генов TNFa (-308G>A), LTA (252A>G), ILIB (-5HOT), ILIB (39530T), IL1RN (VNTR), IL6 (-174G>C), IL8 (-251T>A), ILIO (-6270A) между группами новорожденных с ДР и контролем не обнаружено.

При сопоставлении двух подгрупп новорожденных с разными формами РДС по частотам генотипов полиморфного локуса -308G>A гена TNFa гомозиготный генотип АА не встретился ни разу в подгруппе РДС+ВП (0%), в отличие от подгруппы РДС без ВП (12.5%) (р=0.035) (табл. 3). Следовательно, этот генотип является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений РДС (OR=0.06, 95%С1 0.0033-0.55). Генотип АА не встречался и среди больных с ВП.

В ходе сравнительного анализа подгрупп с разным течением РДС показаны значительные отличия в распределении частот генотипов полиморфного локуса -5110Т гена ILIB (х2=7.01, р=0.03) (табл.3). Однако, наблюдалась лишь тенденция увеличения доли гетерозиготного генотипа CT в подгруппе РДС+ВП (51.06% против 26.09% при РДС без ВП) (р=0.071) и уменьшения доли генотипа TT (6.38% против 26.09% соответственно) (р=0.050).

Проанализировав распределение частот аллелей и генотипов VNTR-локуса гена IL1RN в подгруппах новорожденных с РДС, выявлены существенные различия в распределении аллелей и генотипов (x^l 1.062, р=0.014) (табл.3). Это обусловлено достоверным снижением частоты аллеля *А2 в подгруппе РДС+ВП (18.09%), по сравнению с подгруппой РДС без ВП (37.50%) (р=0.014) и существенным повышением частоты аллеля *А1 (56.25 против 80.85% соответственно) (р=0.0028) и генотипа AI AI в подгруппе РДС+ВП (р=0.023).

Таблица 3

Распределение частот аллелей и генотипов генов цитокинов у больных РДС в зависимости от наличия инфекционного осложнения заболевания

Генотипы РДС без ВП (N=24) РДС + ВП (N=47) Р

р,±з„С1 % п, Р?к8„С1 %

СС 17 70 83±9 28 (48 91-87.38) 35 74 47±6 36 (59 65-86 06) 0 78

л о ^ 5 £ ел 4 16 67±7 61 (4 74-37 38) 12 25 53±6 36 (13 94-40 35) 0 55

7 АЛ 3 12 50±6 75 (2 66-32 36) 0 0 ,0.035 .

сс 11 47 83±10 42 (26 82-69 41) 20 42 55±7 21 (28 26-57 82) 0 80

НО шв ст 6 26 09±9 16 (10.23-48 41) 24 51 06±7 29 (36 06-65 92) 0 071

1 тт 6 26 09±9 16 (10.23-48 41) 3 6 38±3 57 (1 34-17 54) 0 051

А1А1 8 33 33±9 62 (15 63-55 32) 30 63 83±7 01 (48 52-77 33) 0.023,,

А1А2 И 45 83±10 17 (25 55-67 18) 15 31 91±6 80 (19 09-47 12) 0 30

А1АЗ 0 0 1 213±2 10 (0 05-11 29) 0 99

У а а о А2А2 3 12 50±6 75 (2 66-32 36) 1 213±2 10 (0 05-11 29) 0 11

А2АЗ 1 4 17±4 08 (0 11-21 12) 0 0 0 34

« АЗАЗ 1 4 17±4 08 (0 11-21.12) 0 0 0 34

£ *А1 27 56 25±7 16 (41 18-70 52) 76 80 85±4 06 (71 44-88 24) 0.0028

*А2 18 37 50±6 99 (23 95-52 65) 17 18 09±3 97 (10.90-27 37) 0014

*АЗ 3 6 25±3.49 (1 31-1720) 1 1 06±1 06 (0 03-5 79) 0 11

Установлено, что маркером предрасположенности к развитию инфекционных осложнений у больных РДС является аллельный вариант *А1 гена ИШЫ ((Ж=3.28, 95%С1 1.43-7.61) и генотип А1А1 (011=3.53, 95%С1 1.1211.41), а аллель *А2 является маркером устойчивости (011=0.37, 95%С1 0.160.87).

Поскольку гены ТМ-а и ЬТА сцеплены, располагаются на коротком плече хромосомы 6, мы провели анализ гаплотипов 7ВД7« -308й>А, ЬТА:252А>0 у больных с ДР, РДС и в контроле. В группе больных с ДР и в контроле отмечено неравновесие по сцеплению указанных генов (р<0.001). Выявлена тенденция к уменьшению частоты гаплотипа А-А в подгруппе с РДС+ВП (%2=3.36, р=0.067).

Следовательно, гаплотип А-А является маркером устойчивости к развитию ВП у больных РДС новорожденных ((Ж=0.069, 95%С1 0.0035-0.57) (табл. 4).

Таблица 4

Частоты гаплотипов локусов -308G>A гена TNF, 252A>G гена LTA у новорожденных с ДР и в контроле

Гапло типы Больные с ДР ВП РДС РДС без ВП РДС + ВП Контроль

p¡±sftCI % РгЦ.,С1 % PffcSpCI % pr±jp,CI % Pi±s,,CI % Pi±s,,CI %

N 216 74 142 48 94 206

G-А 72 69±3.03 (66 23-78 51) 77 03±4 89 (65 79-86 01) 70 42±3 83 (62 19-77.78) 68 75±=6 69 (53 75-81.34) 71.28±4 67 (61 02-80.14) 69 42±3 21 (62 64-75 63)

G-G 13 43±2.32 (9.18-18 71) 10.81±3.61 (4 78-20 20) 14 08±2 92 (8 82-20 91) 1042±4 41 (3 47-22 66) 15 96±3 78 (9.22-24 95) 16 99±2 62 (12 13-22 83)

А-А 1 39±0 80 (0 29-4 01) 0 2 11±121 (0 44-6.05) 6.25í-3.49 (1.31-17.20) ■>/,<> у',. 1 94±0 96 (0 53-4 90)

A-G 12 50±2 25 (8 40-17 66) 12.16±3 80 (5.71-21 84) 13 38±2 86 (8 25-20 10) 14 58±5 09 (6 07-27 76) 12 77±3 44 (6 77-21 24) 11 65±2 24 (7 61-16 84)

По данным литературы аллель -308А гена TNF а и аллель 252G гена LT А ассоциированы с повышенной экспрессией генов в разных клетках [Hajeer А.Н., Hutchinson I.V., 2001, Messer G. et al., 1991]. Протективная роль гаплотипа A-A в нашем исследовании, возможно, связана с относительно высокой продукцией TNFa при низком уровне LT А у его носителей, что обеспечивало адекватную острую защитную реакцию организма новорожденного от инфекции, и умеренное повреждающее действие на сурфактант в условиях его первичной недостаточности.

Так как семейство ИЛ-1 кодируется генами, расположенными в непосредственной близости друг от друга, целесообразным представлялось проведение анализа гаплотипов по трем локусам IL1B:-511С>Т, IL1B:3953С>Т, ILIRN-.VNTR. Показано, что только в контрольной группе данные локусы находились в неравновесии по сцеплению (pO.OOl).

Распределение частот гаплотипов в группе больных с ДР и в контроле существенно различалось (£= 18.68, р<0.001). Однако, статистически значимые различия с контролем обнаружены лишь в группе больных с РДС, где доля гаплотипа Т-Т-*А2 повышена (р=0.0098), и снижена доля гаплотипа Т-Т-*А1 (р=0.0070) (табл.5). Мы полагаем, что аллель *А2 гена IL1RN является маркером предрасположенности к возникновению РДС, но только в сочетании с двумя аллелями Т локусов -511С>Т и 3953С>Т гена IL1B (OR=17.13, 95% CI 2.28-361.60). Напротив, аллель *А1 гена IL1RN в сочетании с теми же аллелями

гена П1В ассоциирован со сниженным риском развития РДС и является маркером устойчивости (011=0.068, 95% С1 0.038-0.47).

Таблица 5

Распределение частот гаплотипов локусов 1ЫВ:-511 ОТ, 1ЫВ:3953С>Т, 1ЫШ\*М>*А2 у новорожденных с ДР, РДС и контроле

Гаплотяпы ДР Р* РДС Р* Контроль

pptj^CI % PftSpCI % PFtjj, CI %

N 204 132 198

С-С-*А1 37 75±3 39 (31 07-44 78) 0061 39 39±4 25 (31 01-48 27) 0 18 47 47±3 55 (40 35-54 68)

С-С-*А2 5 88±1 65 (3 08-10 05) 0 085 5 30±1 95 (2.16-10 62) 0 19 2 02±1 00 (0 55-5 09)

С-Т-*А1 16 67±2 61 (11 83-22 50) 0 32 16 67±3 24 (10 75-24 14) 0 39 12 63±2 36 (8 34-18 07)

С-Т-*А2 3 92±1 36 (1 71-7 58) 0 83 3 79±1 66 (1 24-8 62) 0 95 3 03=fcl 22 (1 12-6 48)

Т-С-*А1 21 08±2 86 (15 69-27 32) 0 12 20 45±3 51 (13 93-28 35) 0 22 14 65±2 51 (10 03-20 35)

Т-С-*А2 11,27±2 21 (7 28-16 44) 031 10 61±2 68 (5 92-17 15) 031 15.15±2 55 (10 46-20 92)

Т-Т-*А1 1 47±0 84 (0 30-4.24) 0081 0 5 05±1 56 (2 45-9 09)

Т-Т-*А2 1 96±0 97 (0 54-4 94) 0 14 3 79±1 66 (1 24-8 62) ^ : 0 022 0

В ходе попарного сравнения частот гаплотипов в подгруппах РДС показано отсутствие гаплотипа С-Т-А2 (х2=8.77, р=0.004) в подгруппе с РДС+ВП (0% против 12.5% при РДС без ВП). Следовательно, гаплотип С-Т-*А2 является маркером устойчивости к развитию инфекционных осложнений у больных РДС (OR=0.035, 95% CI 0.0021-0.27).

Накоплены противоречивые сведения о связи различных аллельных вариантов генов семейства IL1 с уровнями кодируемых белков в плазме и изменениями продукции отдельными клетками. Показана ассоциация разных аллелей и гаплотипов со многими заболеваниями человека или тяжестью их течения [Dinarello С., Wolff S., 1993; Arend W.P., Guthridge C.J., 2000]. Все они свидетельствуют, в целом, о важном значении, баланса про- и противовоспалительных цитокинов (ILla, ILip и ILIRa) в развитии или прогрессировании того или иного заболевания.

В результате сравнения информации о частотах аллелей и генотипов полиморфного локуса -174G>C гена IL6 мы отметили несущественное

повышение частоты генотипа СС в группе больных с ВП (22.22%), по сравнению с контролем (9.62%) (р=0.079,). Генотип GC встречался значительно реже в этой группе больных (27.78% против 48.08% в контроле, р=0.049), однако риск развития пневмонии у носителей генотипа GC оказался несущественно снижен (OR=0.42,95%С10.17-1.01).

Анализ полиморфного локуса -6270А гена ILIO показал, что аллель А достоверно чаще встречается в подгруппе РДС+ВП (38.30%), чем у больных РДС без ВП (20.83%) (р=0.039). Несмотря на это, отмечалась только тенденция повышения риска развития инфекционных осложнений у больных РДС новорожденных при наличии аллеля А (OR=2.36, 95% CI 0.98-5.77) (рис.6).

Рис.6. Распределение частот аллелей и генотипов локуса -627С>А гена ILIO в подгруппах разного течения РДС

Поскольку известно, что аллель А полиморфизма -627С<А гена ILIO ассоциирует с резким снижением уровня экспрессии гена [Grove G. et al., 2000], мы не исключаем возможности ассоциации данного аллеля с развитием пневмонии в легком больного РДС ребенка, так как снижение уровня противовоспалительных цитокинов, приводит к усилению провоспалительных реакций.

Резюмируя вышеизложенные результаты, можно заключить, что генетические варианты цитокинов могут занимать определенную место не только в структуре механизмов определения фенотипических вариантов РДС у новорожденных, но и играть важную роль в формировании предрасположенности к развитию РДС и ВП. Согласно современным данным, воспалительные реакции в легких, во многом опосредованные цитокинами, могут быть как причиной, так и следствием повреждения альвеолярного сурфактанта и способствуют повреждению эпителиального слоя и эндотелия

сосудов легких. Указанные механизмы принимают участие в процессах формирования признаков как РДС, так и ВП.

Анализ полиморфизма гена ангнотензнн-нревращающего фермента

АСЕ является ключевым звеном в поддержании равновесия между факторами вазоконстрикции и вазодилатации. Во время внутриутробного развития и в перинатальном периоде система ренин-ангиотензин находится в состоянии гиперактивности и служит поддержанию сердечно-сосудистого гомеостаза в условиях начинающегося легочного кровообращения [НаИогу М.А. й а1„ 2000].

Группа больных с ДР достоверно отличалась от контрольной группы по распределению генотипов инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ (Х2=8.95, р=0.011) за счет снижения частоты генотипа II у новорожденных с ДР (17.76% против 35.92% соответственно; х2=7.95, р=0.0057) (рис. 7). Аллель Б существенно преобладал в группе больных с ДР (53.27%) по сравнению с контролем (40.78%) (х2=6.08, р=0.014).

Таким образом, генотип II снижает риск возникновения дыхательных расстройств в 2 раза и может служить маркером устойчивости ((Ж=0.38, 95%С1 0.19-0.76). Аллель Б гена АСЕ является маркером предрасположенности к развитию ДР у новорожденных (<Ж=1.65, 95%С11.10-2.48).

О 10 20 30 40 50 60

■ Больные с ДР О Контроль

Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов 1/0 локуса гена Л СЕ среди больных с ДР и в контроле

Ассоциированный с аллелем Б повышенный уровень АСЕ может приводить к ухудшению адаптационных возможностей дыхательной системы только что рожденного ребенка, с одной стороны, и препятствовать адекватному снижению резистентности легочных сосудов - с другой, что приводит к развитию респираторных нарушений. Это, возможно, объясняет выявленную ассоциацию гена АСЕ с РДС и ВП новорожденных.

Таким образом, наличие определенных генотипов и гаплотипических вариантов по полиморфным локусам генов белков сурфактантного комплекса легких, цитокинов и ренин-ангиотензиновой системы может оказать существенное влияние на формирование предрасположенности к дыхательным расстройствам (РДС и ВП) и инфекционным осложнениям РДС.

Полученные результаты раскрывают некоторые аспекты генетики дыхательных расстройств у новорожденных и свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения полиморфизма генов, вовлеченных в патогенез заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что генетическими маркерами предрасположенности новорожденных к дыхательным расстройствам являются гаплотип 32T/478G гена SFTPD (OR=1.77), аллель D полиморфного локуса гена ACE (OR=1.65) Маркерами устойчивости к развитию дыхательных расстройств являются генотип Inv/Del минисателлитного локуса гена SFTPB (C)R=0.099) и генотип II инсерционно-делеционного полиморфизма генаЛС£((Ж=0.38).

2. Предрасположенность к развитию респираторного дистресс-синдрома маркируют гаплотипы -18A/1580C/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=1.85) и -511T/3953T/VNTR:*A2 генов IL J В и ILJRN (OR=17.13). Маркерами устойчивости к развитию респираторного дистресс-синдрома являются генотип Inv/ЗЗО минисателлитного локуса гена SFTPB (C)R=0.042), а также гаплотипы -18А/1580T/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=0.54) и -511T/3953T/VNTR:*A1 генов IL1B и IL1RN (OR=0.068).

3. Установлено, что маркером предрасположенности к развитию врожденной пневмонии является гаплотип 32T/478G гена SFTPD ((Ж=2.06) .

4. Предрасположенность к инфекционным осложнениям респираторного дистресс-синдрома маркируют аллель AI (OR=3.38) и генотип AI AI минисателлитного локуса гена IL1RN (OR=3.53) и аллель А локуса -6270А гена ILIO (OR=2.36). Маркерами устойчивости к возникновению инфекционных осложнений респираторного дистресс-синдрома являются генотипы СС локуса 32Т>С гена SFTPD (C)R=0.048), АА локуса -308G>A гена TNFa (OR=0.06), а также гаплотипы: -308А/252А генов TNFa и LT A (OR=0.069) и -511C/3953T/VNTR:*А2 генов IL1B и ILIRN (ORK).035) и аллель А2 минисателлитного локуса гена ILIRN (OR=0.37).

5. Установлено, что полиморфные варианты генов протеинов сурфактанта-В SFTPB и -D SFTPD, фактора некроза опухоли a TNFa, интерлейкина lß iL IB, рецепторного антагониста интерлейкина 1 ILIRN,

интерлейкина 10 ILIO являются важными генетическими компонентами мультифакторной структуры респираторного дистресс-синдрома и врожденной пневмонии новорожденных.

Практические рекомендации. При обнаружении генетических маркеров риска полиморфных локусов генов белков сурфактанта (SFTPB, SFTPD), цитокинов (TNFa, IL1B, IL1RN, ILIO) и ангиотензин-превращающего фермента АСЕ можно прогнозировать развитие дыхательных расстройств и инфекционных осложнений респираторного дистресс-синдрома у новорожденных.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Ахмадишина Л.З., Данилко К.В., Викторова Т.В. Полиморфизм генов про- и противовоспалительных цитокинов у больных хроническими заболеваниями дыхательной системы // Материалы V Съезда Российского общества медицинских генетиков. Медицинская генетика. Т. 4. №5. 2005. С.210.

2. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Поиск генов-кандидатов дыхательных расстройств новорожденных // Материалы V Съезда Российского общества медицинских генетиков. Медицинская генетика. Т. 4. №4.2005. С.177.

3. Корытина Г.Ф., Янбаева Д. Г., Ахмадишина JI.3., Данилко К.В., Викторова Т.В. Ассоциация полиморфизмов генов про- и противовоспалительных цитокинов (TNFA, LTA, IL1B, IL8, IL6, IL1RN, ILIO) с развитием хронических заболеваний дыхательной системы // Материалы IX Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2005. Т.7. №2-3. С.305.

4. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Роль полиморфизма генов интерлейкинов 8 и 10 в развитии синдрома дыхательных расстройств и новорожденных // Материалы IX Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2005. Т.7. №2-3. С.183-184.

5. Корытина Г.Ф., Янбаева Д.Г., Ахмадишина Л.З., Данилко К.В., Викторова Т.В. Полиморфизмов генов цитокинов и риск развития хронических бронхолегочных заболеваний у детей // Всероссийский научный симпозиум с международным участием «Цитокины. Стволовая клетка. Иммунитет», Новосибирск. Цитокины и воспаление. 2005. Спец. вып. 1. С.27.

6. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., ВикторовВ.В. Полиморфизм 4 интрона гена протеина В сурфактанта у новорожденных с дыхательными расстройствами // 15 национальный конгресс по болезням органов дыхания, Москва. Пульмонология. 2005. Спец. вып. 1. С. 18.

7. Фатыхова А.И., Богданова Р.З.,Викторов В.В., Викторова Т.В., Данилко К.В. Роль генов-цитокинов (TNF A, LT А, IL1B,IL1-RN, ILIO) в развитии респираторного дистресс-синдрома новорожденных // Материалы III Российского конгресса "Педиатрическая анестезиология и интенсивная терапия". Москва. 2005. С.262-263.

8. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Викторова Т.В., Викторов В.В. Легочные нарушения у новорожденных и полиморфизм интрона 4 гена протеина В сурфактанта // Материалы Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН. Москва. 2006. С.58.

9. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Ахмадишина JI.3., Викторова Т.В., Викторов В.В. Генетические варианты интерлейкинов 6,1 и рецепторного антагониста интерлейкина 1: ассоциация с дыхательными расстройствами у новорожденных // Материалы X Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». Медицинская Иммунология. 2006. Т.8. №23. С.309.

10. Данилко К.В., Богданова Р.З., Фатыхова А.И., Корытина Г.Ф.Викторова Т.В., Викторов В.В.Генетические варианты АСЕ: ассоциация с дыхательными расстройствами у новорожденных // 16 национальный конгресс по болезням органов дыхания, Санкт-Петербург. Пульмонология. 2006. Спец. вып. 1. С.177.

11. Данилко К.В., Корытина Г.Ф., Ахмадишина JI.3., Янбаева Д.Г., Загидуллин Ш.З., Викторова Т. В. Ассоциация полиморфных маркеров генов цитокинов с развитием хронической обструктивной болезни легких // Молекулярная биология. 2007. Т. 41. №.1.С.26-36.

12. Фатыхова А.И., Богданова Р.З., Данилко К.В., Викторов В.В., Идрисова А.Ф. Прогнозирование и диагностика синдрома дыхательных расстройств у новорожденных // Харисова И.М., Мурзабаева С.Ш., Викторов В.В. и др. Актуальные проблемы перинатологии и неонатологии/ Международный опыт: Материалы школы-семинара по неонатологии.-Уфа: Издательство «Здравоохранение Башкортостана». 2006. С. 192-193.

13. Korytina G.F., Yanbaeva D.G, Akhmadishina L.Z., Danilko K.V., Victorova T.V. Polymorphisms in promotor region of IL10 gene and susceptibility to chronic airway inflammation at children with severe chronic bronchitis // The XlXth international congress of allergology and clinical immunology (ICACI). Munich, Germany. (2005).

14. Korytina G.F., Yanbaeva D.G, Akhmadishina L.Z., Danilko K.V., Zagidullin Sh.Z., Victorova T.V. Genetic polymorphisms in IL10 gene and susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease and severe chronic lung disease in children // 3rd Lung Science Conference. Taormina. Italy. (2005).

15. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova Т.V., Victorov V.V. The role of ACE insertion/deletion polymorphism in RDS development in neonates from Russia (Роль инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ в развитии РДС у новорожденных из России) Н European Respiratory Society 15th annual congress, Copenhagen // European Respiratory Journal. 2005. Vol.26. Supl.49. P.393.

16. Danilko K., Victorova Т., Bogdanova R., Fatyihova A., Victorov B. Intcrleukin-ip and its receptor antagonist gene polymorphism and the risk of respiratory distress syndrome in neonates from Russia // European Human Genetics Conference, Prague, Czech Republic. European Journal of Human Genetics. 2005. Vol.13. Supl.l.P.117.

17. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Victorova T.V., Fatyihova A.I., Victorov V.V. Surfactant protein В polymorphism in infants With lung failure from Russia. // European Human Genetics Conference, Amsterdam // European Journal of Human Genetics.2006. Vol.14. Supl.l. P. 158.

18. Danilko K.V., Yanbaeva D.G., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova T.V. The risk of respiratory distress syndrome (RDS) in neonates from Russia and IL-1 genotyping // European Respiratory Society 16-th annual congress, Munich // European Respiratory Journal. 2006. Vol. 28 Sup.50. P. 492-493.

19. Danilko K.V., Bogdanova R.Z., Fatyihova A.I., Victorova T.V., Victorov V.V. Angiotensin converting enzyme insertion/deletion polymorphism is associated with congenital pneumonia susceptibility // Chest. 2006. Vol.130 (4). Supl.l. P.140-141.

ДАИИЛКО КСЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА

РОЛЬ ГЕНОВ БЕЛКОВ СУРФАКТАНТА, ЦИТОКИНОВОЙ СЕТИ И РЕНИН-АНГИОТЕНЗШЮЗОЙ СИСТЕМЫ В ФОРМИРОВАНИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ РАССТРОЙСТВ У НОВОРОЖДЕННЫХ

Специальность 03.00.15 - генетик»

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 16.03.2007. Формат 60x84 1/16 Бумаги кссроксная Печать ризографическак Тираж 100 экз. Заказ 091 Гарнитура «Times New Roman» Отпечатано с готовых оригинал-макетов в типографии «ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИПВЕРКО Объем 1,4 пл Уфа, Карла Маркса12/4, т/ф 2727-600, 2729-123

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Данилко, Ксения Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика дыхательных расстройств новорожденных.

1.1.1. Респираторный дистресс-синдром.

1 1.2. Эпидемиология и факторы риска РДС.

1.1.3. Наследственные факторы риска РДС.

1.1 4 Врожденная пневмония.

1.1.5. Эпидемиология и факторы риска врожденной пневмонии.

1.2. Сурфаюантный комплекс легких.

12 1 Состав, свойства и функции сурфактантной системы легких.

12 2 Метаболизм сурфактанта.

1.3. Гены-кандидаты дыхательных расстройств у новорожденных.

1.3.1. Роль гидрофильных белков сурфактанта SP-A и SP-D в составе сурфактанта.

13 2 Роль гидрофобных апопротеинов сурфактанта SP-B и SP-C в составе сурфактанта.

1.4. Циюкины и дыхал ел ьная система новорожденных.

1.5. Ангиотензин-превращающий фермент и дыхательная система новорожденных.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Объект исследования.

2 11. Распределение обследуемых индивидов по группам.

2.2. Выделение ДНК.

2.3. Проведение полимеразной цепной реакции и ПДРФ-анализа.

2.4. Проведение электрофореза и визуализация результатов.

2.5. SSCP-анализ.

2 5 1. SSCP-анализ с щелочной денатурацией.

2.6. Определение иуклеотидной последовательности.

2.7. Статистические методы обработки резулыаюв исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Полиморфизм генов белков сурфактанта у больных с дыха1сльными расстройствами.

3.1.1. Результаты SSCP-анализа промоторной обчисти и 4-го экзона гена SFTPB.

3.1.2. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфных локусов генов SFTPB, SFTPC, SFTPD среди бочьных с дыхательными расстройствами и в контрольной группе.

3.2. Полиморфизм генов цитокинов у больных с дыхательными рассфойствами.

3.2.1. Распределение частот генотипов и аллелей почиморфных локусов генов TNFauLTA среди больных с дыхательными расстройствами и в контра ie. 86 3.2 2. Распределение генотипов и амелей полиморфных локусов генов семейства IL1B среди больных с дыхательными расстройствами и в контроле 90 3.2.3 Распределение генотипов и аллелей полиморфного локуса -174G>C гена IL6 среди больных с дыхательными расстройствами и в контроле.

3.2.4. Распределение генотипов и аллелей полиморфного локуса -251Т>А гена IL8 среди больных с дыхательными расстройствами и в контроле.

3.2.5. Распределение генотипов и аллелей полиморфного локуса -627С>А гена IL10 среди бочьных с дыхательными расстройствами и в кон тропе \

3.3. Полиморфизм гена ангио1ензин-нревращающего фермента у новорожденных с дыхательными расстройствами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль генов белков сурфактанта, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы в формировании дыхательных расстройств у новорожденных"

Несмотря на значительные достижения неонатологии последних десятилетий, проблема дыхательных расстройств по-прежнему актуальна. Jlei очные патологий остаются самыми частыми причинами развития критических состояний у новорожденных, особенно недоношенных. Это определяется сохранением, и даже увеличением высокого уровня заболеваемости детей с экстремально низкой массой тела по мере улучшения их выхаживания [Дементьева Г.М., 2002; Nogee L., 2004]. Среди всех дыхательных нарушений новорожденных одно из ведущих мест принадлежит респираторному дистресс-синдрому и врожденной пневмонии.

Большую часть пациентов отделений реанимации и интенсивной терапии новорожденных составляют больные респираторным дистресс-синдромом (РДС) [Bober К., Swietlinski J., 2006]. А в структуре причин неонатальной смертности в России на долю этой патологии приходится 17.5% [Шабалов Н.П., 2004].

Хотя терминология в отечественной и зарубежной литераiype не совпадает, считается, что РДС встречается повсеместно у 1-2% всех живорожденных и у 14% детей, родившихся с массой тела менее 2500 грамм. Частота развития РДС обратно пропорциональна степени недонашивания беременности [Strandjord Т.Р. et al., 2000; Haataja R., 2001; Grafoor Т. et al., 2003]. По данным на 1996 г., распространенность РДС в России составляла 197.6 на 10 000 родившихся живыми [Шабалов Н.П., 2004]. За последние годы не наблюдалось тенденции уменьшения количества заболевших [Дементьева Г.М., 2002]. По данным Горздрава за 2006 год в г. Уфе дыхательные нарушения наблюдались у 15.18% новорожденных от числа всех рожденных, из них 46.52% оказались недоношенными.

В основе респираторного дистресс-синдрома (РДС) лежит нарушение функции сурфактанта, что может быть связано с дефицитом, или дефектом его продукции, инактивацией или усилением деградации. Вторичный дефицит сурфакташа наблюдается и в случае развития внутриутробной пневмонии. Нарушение состава и количества сурфактанта связано со снижением его защитной функции и возникновением воспаления [Фомичев М.В., 2004].

Клинические и рентгенологические признаки РДС неспецифичны, во многом сходны с таковыми при врожденной пневмонии: одышка, экспираторные шумы, западение грудной клетки на вдохе, прис1упы апноэ и т.п. Очень типичны для РДС нарушения со стороны сердечно-сосудистой системы. Серьезную опасность представляет также вторичная инфекция [Шабалов ПЛ., 2004].

В связи с ухудшением состояния здоровья матерей и распространенностью внутриутробного инфицирования, внутриуфобная пневмония также остается одной из важных проблем неонатальной пульмонологии. Более того, нередко заболевание протекает по схеме: РДС-пневмония-сепсис [Шабалов Н.П., 2004].

Пневмонию диагностируют примерно у 0.5-1% доношенных и 10-15% недоношенных новорожденных. По данным литературы, пневмонию на секции выявляют у 15-38% мертворожденных и 20-32% умерших живорожденных детей [Бойко Т.В. и др., 2000].

Хотя воспалительный процесс в ткани легкого может быть изначально и неинфекционной этиолоеии, пневмонию всегда рассматривают как инфекционный процесс. Врожденные пневмонии вызываются возбудителями, проникшими к ребенку от матери трансплацентарно, анте- или интранатально [Архипов В.В. и др., 2002].

С целью профилактики и лечения РДС, пневмонии и некоюрых других заболеваний opianoB дыхания в настоящее время применяется экзогенный сурфактанг и различные способы дотации кислорода. Однако, механизм действия сурфактанта не всегда ясен, а данные последних лет говорят о возможности возникновения патологий, связанных с применением искусственной вентиляции легких. В контексте вышесказанного, эффективность и показания к применению указанных способов профилактики и лечения нуждаются в дополнительном изучении и экспериментальном обосновании [Herting Е. et al., 1999; Apisarnthanarak A. et al., 2003; Jobe A., 2006].

Респираторный дистресс-синдром новорожденных и врожденная пневмония относятся, по всей видимости, к многофакторным заболеваниям [Copland 1.В., Post М., 2002]. Такие признаки контролируются множественными взаимодействующими факторами как экзогенного, так и эндогенного характера, в том числе генетическими. В случае многофакторных болезней мугантный генотип обладает неполной пенетрантностью, и риск, ассоциированный с такой мутацией, превышает среднепопуляционный всего в несколько (2-3) раз [Аульченко Ю.С., Аксенович Т.Н., 2006]. Одним из методов генетики многофакторных заболеваний является исследование ассоциации полиморфных вариантов генов, продукты которых предположительно задействованы в развитии и регуляции тех или иных звеньев патогенеза заболевания [Silverman Е., Palmer L., 2000; Hall I., 2002].

К факторам риска, способствующим развитию РДС относятся: сахарный диабет у матери, острая кровопотеря в родах, кесарево сечение, перинатальная гипоксия и асфиксия, мужской пол новорожденного, рождение вторым из двойни, внутриутробные инфекции [Haataja R., 2001; Шабалов Н.П.,

2004]. Как было показано в нескольких исследованиях, одним из факторов риска РДС является генетическая предрасположенность [Makri V. et al., 2002; Haataja R., 2001; Marttila R. et al., 2003; Van Sonderen L., et al., 2002; Floras J.,

2005].

Поскольку в патологическом повреждении сурфактантной системы и нарушениях кровообращения в легких принимают участие разнообразные медиаторы воспаления и регуляторы сосудистого тонуса, молекулярно-генетическое исследование ирироды дыхательных расстройств у новорожденных является наиболее полным, когда в анализ включается множество генов, эффект которых модифицирован внешнесредовым влиянием.

Исходя из патогенеза респираторного дистресс-синдрома и врожденной пневмонии новорожденных, для молекулярно-генетического анализа нами были выбраны гены, белковые продукты которых относятся к системам сурфактанта, цитокиновой сети и ренин-ангиотензиновой системы.

Цель исследования: оценить роль полиморфных вариантов генов белков сурфактанта, цитокинов и ангиотензин-превращающего фермента в формировании наследственной предрасположенности к дыхательным расстройствам у новорожденных.

Задачи:

1. Сформировать выборки и создать коллекцию ДНК новорожденных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

2. Проанализировать полиморфизм генов белков сурфактанта SFTPB, SFTPC, SFTPD и гаплотипы генов SFTPB, SFTPD у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

3. Провести анализ полиморфных локусов 1енов цитокинов TNFa, LTA, 1L1B, IIJRN, IL6, IL8, IL10, а также гаплотипов генов TNFa-LTA и IL1B-IL1RN у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

4. Изучить особенности распределения частот аллелей и генотипов инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ у больных с дыхательными расстройствами и здоровых новорожденных.

5. Определить генетические маркеры предрасположенности и устойчивости новорожденных к дыхательным расстройствам, врожденной пневмонии, респираторному дистресс-синдрому и его инфекционным осложнениям.

Научная новизна

Впервые в России у новорожденных с дыхательными расстройствами проведен анализ полиморфизма генов белков сурфактанта (SFTPB, SFTPC, SFTPD), цитокинов (TNFa, LTA, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, ILIO) и ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ). Впервые исследована ассоциация аллелей и генотипов полиморфных локусов генов SFTPD, цитокинов и АСЕ с развшием РДС, врожденной пневмонии и риском возникновения инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.

Практическая значимость

Результаты исследования можно использовать для прогнозирования развития дыхательных расстройств у новорожденных и инфекционных осложнений у детей с РДС.

Материалы работы Moiyr быть использованы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов, а также на курсах последипломного образования врачей.

Положения, выносимые на защигу:

1. По распределению частот гаплотипов гена SFTPB, гаплотипов генов семейства ILIB и генотипов гена АСЕ выборка новорожденных с дыхательными расстройствами достоверно отличается от группы здоровых новорожденных.

2. Генетическими маркерами предрасположенности к расстройствам дыхания в первые сутки после рождения являются определенный гаплотипический вариаш гена SFTPD и делеционный аллель гена АСЕ.

3. Риск развития РДС новорожденных маркируется генами SFTPB, ILIB, ILIRN. Риск развития врожденной пневмонии маркирует ген SFTPD.

4. Полиморфные варианты генов SFTPD, TNFa, ILIRN, ILK) ассоциированы с развитием инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.

5. Важной составной частью генетической структуры подверженности РДС и врожденной пневмонии новорожденных являются полиморфные варианты генов SFTPB, SFTPD, TNFa, ILIB, ILIRN, IL10, ACE.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Данилко, Ксения Владимировна

ВЫВОДЫ

Установлено, что генетическими маркерами предрасположенности новорожденных к дыхательным расстройствам являются гаплотип 32T/478G гена SFTPD (OR=1.77) и аллель D полиморфного локуса гена АСЕ (OR=1.65). Маркерами устойчивости к развитию дыхательных расстройств являются генотип Inv/Del минисателлитного локуса гена SFTPB (OR=0.099) и генотип II инсерционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ (OR=0.38).

Предрасположенность к развитию респираторного дистресс-синдрома маркируют гаплотипы -18A/1580C/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=1.85) и -511T/3953T/VNTR:*A2 генов IL1B и IL1RN (OR=17.13). Маркерами устойчивости к развитию респираторного дистресс-синдрома являются генотип Inv/ЗЗО минисателлитного локуса гена SFTPB (OR=0.042), а также гаплотипы -18A/1580T/VNTR:Inv гена SFTPB (OR=0.54) и -511T/3953T/VNTR:*A1 генов IL1B и /L7tfJV(OR=0.068).

Установлено, что маркером предрасположенности к развитию врожденной пневмонии является гаплотип 32T/478G гена SFTPD (OR=2.06).

Предрасположенность к инфекционным осложнениям респираторного дистресс-синдрома маркируют аллель *А1 (OR=3.38) и генотип А1А1 минисателлитного локуса гена IL1RN (OR=3.53) и аллель А локуса -6270А гена IL10 (OR=2.36). Маркерами устойчивости к возникновению инфекционных осложнений респираторного дистресс-синдрома являю 1ся генотипы СС локуса 32Т>С гена SFTPD (OR=0.048), АА локуса -308G>A гена TNFa (OR=0.06), а также гаплотип -308А/252А генов TNFa и LTA (OR=0.069), аллель *А2 минисателлитного локуса гена IL1RN (OR=0.37) и гаплотип -511C/3953T/VNTR:*A2 генов IL1B и IL1RN (OR=0.035).

5. Установлено, что полиморфные варианты генов протеинов сурфактанта-В SFTPB и -D SFTPD, фактора некроза опухоли a TNFa, интерлейкина 1р IL1B, рецепторного антагониста ингерлейкина 1 IL1RN, интерлейкина 10 JL10 являются важными генетическими компонентами мультифакторной структуры респираторного дистресс-синдрома и врожденной пневмонии новорожденных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При обнаружении генетических маркеров риска полиморфных локусов генов SFTPB, SFTPD, IL1B, ILIRN, ACE можно предсказывать развитие дыхательных расстройств (РДС и/или врожденной пневмонии) у новорожденных.

2. При обнаружении маркерных вариантов генов SFTPD, TNFa, IL1B, 1L1RN, IL10 можно прогнизировать риск развития инфекционных осложнений у новорожденных с РДС.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Данилко, Ксения Владимировна, Уфа

1. Актуальные проблемы неонатологии / Под ред. Н.Н. Володина. М.: ГОЭТАР-МЕД. - 2004. - 448 с.

2. Архипов В.В., Валеев Р.Ш., Махмутходжаев А.Ш., Огородова Л.М., Тимошина Е.Л., Фассахов Р.С., Цой А.Н. Заболевания легких при беременности / Под ред. Чучалина А.Г., Краснопольского В.И., Фассахова Р.С. М.: Издательство «Атмосфера». - 2002,- 88 с.

3. Аульченко Ю.С., Аксенович Т.И. Методологические подходы и стратегии картирования генов, контролирующих комплексные признаки человека // Вестник ВОГиС. 2006. - Т. 10, № 1. - С. 189-202.

4. Биркун А.А., Нестеров Е.Н., Кобозев Г.В. Сурфактант легких. М.: Медицина. - 1987. - 287 с.

5. Болезни органов дыхания / Под. ред. Н.Г1. Палеева. М.:Медицина . - 2000. - 728 с.

6. Геномика медицине. Научное издание / Под ред. академика РАМН Иванова В.И. и академика РАН Киселева Л.Л. - М.: ИКЦ «Академкнига». -2005. - 392 с.

7. Гинтер Е.К. Популяционная генетика и медицина // Вестник РАМН. -2001.-№ 10.-С. 25-31.

8. Гребенников В.А., Миленин О.О., Рюмина И.И. Респираторный дистресс-синдром (заместительная терапия синтетическим сурфактантом Exosurf neonatal). М.: при участии фирмы Welcome Foundation Ltd. (Великобритания). - 1995. - 138 с.

9. Дементьева Г.М. Пульмонологические проблемы в неонатологии // Пульмонология. -2002. №1. - С.6-12.

10. Евтюков Г.М., Иванов Д.О. Синдром дыхательных расстройств (СДР) 1 типа у новорожденных детей Электронный ресурс. / Сайт Medlinks. -Электрон. Дан. 2005. - Режим доступа: http://www.medlinks.ru, свободный. - Загл. с экрана.

11. Елисеева Ю.Е. Ангиотензин-превращающий фермент, его физиологическая роль // Вопросы медицинской химии. -2001.- Т. 47, № 1. С.25-37.

12. Ерохин В.В. Функциональная морфология легких. М.: Медицина. - 1987. -270 с.

13. Животовский JT.A. Популяционная биометрия. М.: 11аука - 1991.- 272 с.

14. Каганов С.Ю., Розинова П.Н. Пульмонология детского возраста и ее насущные проблемы // Российский вестник перинатологии и педиатрии. -2000.-№ 6,-С.6-11.

15. Коваль Г.С., Самсыгина С.А., Кузнецова JT.K. Особенности иммунитета глубоконедоношенных новорожденных при инфекционно-воспалительных заболеваниях // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1999. -№ 2. - С.8-11.

16. Корнеева М.Ю., Коровина Н.А., Заплатииков АЛ., Шипулина О.В., Науменко JI.JI. Состояние здоровья внутриутробно инфицированных детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. 2005. - № 2. - С.48-52

17. Кушнарева М.В., Дементьева Г.М., Виноградова Т.В., Цветкова Е.И., Бобровская Т.А., Щербакова Э.Г. Особенности ответа слизистых оболочек дыхательных путей у недоношенных детей с пневмониями // Педиатрия. -2002. -№1. -С.13-18.

18. Марусин А.В., Пузырев В.П., Сшпоков В.Б., Брагина Е.Ю. взаимосвязь полиморфных вариантов генов трансферрина и ангиотензин-превращающего фермента с антиоксидантной активностью плазмы крови // Генетика. 2003. - Т. 39, № 6. - С.840-846.

19. Насибуллин Т. Р. Особенности генетической конституции у больных эссенциальной гипертензией по полиморфным ДНК-локусам: Дис. .канд. мед. наук. Уфа, 2002. - 160 с.

20. Савицкая К.И. Ферменты, продуцируемые условно-патогенными бактериями и сурфактантная система легких // 5-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Москва. 1995. - № 1700.

21. Симбирцев А.С. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление. - №1. - 2002.

22. Сыромятникова II.B. Биохимическая природа легочного сурфактанта // Сурфактанты легкого в норме и патологии. Киев: Наукова думка. - 1983. -С. 38-44.

23. Ройт А., Брюстофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. - 2000. -592 с.

24. Романова J1.K. Сурфактантная система легкого//Физиология дыхания/ Под ред. И.С. Бреслава и Г.Г. Исаева. 1994. - JL: 11аука. - С. 31-53.

25. Фомичев М.В. Респираторная поддержка в пеонатоло! ии. Е.: Уральское изд-во.-2002.- 150с.

26. Фомичев М.В. Сурфактант и его клиническое применение Электронный ресурс. / Сайт Неонатология. Электрон. Дан. - 2004. - Режим доступа: http://www.neonatology.ru, свободный. - Загл. с экрана.

27. Царегородцев А.Д., Рюмина И.И. Заболеваемость новорожденных внутриутробными инфекциями и задачи по ее снижению в Российской Федерации // российский вестник перинатологии и педиатриии. 2001. -№2. - С.4-7.

28. Шабалов Н.П. Неонатология: Учебное пособие: В 2 т./ Шабалов Н.П. Т. 1. - М.: МЕДпресс-информ. - 2004. - 608 с.

29. Ashavaid T.F., Shalia K.K., Nair K.G. et al. ACE and AT1R gene polymorphisms and hypertension in Indian population II). Clin. Lab. Anal. -2000.-Vol. 14.-P. 230-237.

30. Arnold C., McLean F.H., Kramer M.S., Usher R.H. Respiratory distress syndrome in second-born versus first-born twins. A matched case-control analysis // N. Engl. J. Med. 1987. - Vol. 317. - P. 1121 -1125.

31. Avery M.E., Mead J. Surface properties in relation to atelectasis and hyaline membrane disease // Am. J. Dis. Child. 1959. - Vol.97. - P. 517-523.

32. Baier R.J., Loggins J., Yanamandra K. Angiotensin converting enzymeinsertion/deletion polymorphism does not alter sepsis outcome in ventilated very low birth weight infants // J. Perinatol. 2005. - Vol. 25, №3. -P. 205-209

33. Ballard P.L., Nogee L.M., Beers M.F. et al. Partial deficiency of surfactant protein В in an infant with chronic lung disease // Pediatrics. 1995. - Vol.96. -P. 1046-1052.

34. Bazzoni F., Beutler B. The Tumor Necrosis Factor Ligand and Receptor Families // N. Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334. - P. 1717-1725.

35. Beresford M.W., Shaw N. Detectable IL-8 and IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid from preterm infants ventilated for respiratory distress syndrome // Pediatr. Res. 2002. - Vol.52. - P.973-978.

36. Bober K., Swietlinski J. Diagnostic utility of ultrasonography for respiratory distress syndrome in neonates // Med. Sci. Monit. -2006. Vol. 12, №10. - P. 440-446.

37. Bottema C.D.K., Michels V.V., Fisch R.G., Sommer S.S. Direct carrier testing for phenylketonuria by PCR amplification of specific alleles. In: Amplifications: a forum for PCR users. 1990. - P.27-29.

38. Brinkman B.M., Zuijdees D., Kaijzel E.L. et al. Relevance of the tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) -308 promoter polymorphism in TNF alpha gene regulation // J. Inflamm. 1995. - Vol. 46. - P. 32-41.

39. Brown E.S. Lung area from surface tension effect // Fed. Proc. 1956. - Vol. 15. -P. 26.

40. Bruns G., Stroh H., Veldman G. M., Latt S. A., Floras J. The 35 kd pulmonary surfactant-associated protein is encoded on chromosome 10 // Hum. Genet.1987.-Vol. 76.-P. 58-62.

41. Bucchioni E., Kharitonov S.A., Allegra L., Barnes P.J. High levels of interleukin-6 in the exhaled breath condensate of patients with COPD // Respir. Med. 2003. - Vol. 97, № 12. - P. 1299-1302.

42. Cambien F., Alhenc-Gelas F., Herbeth B. et al. Familial resemblance of plasma angiotensin-converting enzyme level: the Nancy study //Am. J. Hum. Genet.1988.-Vol. 43.-P. 774-780.

43. Chen W.C., Wu H.C., Chen H.Y., Wu M.C., Hsu C.D., Tsai F.J. Interleukin-lbeta gene and receptor antagonist gene polymorphisms in patients with calcium oxalate stones // Urol. Res. 2001. - Vol. 29, №5. - P. 321-324.

44. Clark J.C., Weaver Т.Е., Iwamoto H.S. et al. Decreased lung compliance and air trapping in heterozygous SP-B- deficient mice // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. -1997.-Vol. 16.-P. 46-52.

45. Claus M.H., Clements J.A., Havel R.J. Composition of surface-active material isolated from beef lung // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1961. - Vol.47. -P. 1858-1859.

46. Clements J.A. Dependence of pressure-volume characteristics of lungs on intrinsic surface active material // Am. J. Physiol. 1956. - Vol.187. - P.592.

47. Clements J.A., Avery M.A. Lung surfactant and neonatal resoiratory distress syndrome // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. - Vol. 157. - P. 59-66.

48. Cole F.S., Hamvas A., Rubinstein P., King E., Trusgnich M., Nogee L.M., deMello D.E., Colten H.R. Population-based estimates of surfactant protein В deficiency// Pediatrics. 2000. - Vol. 105. - P. 538-541.

49. Copland I.В., Post M. Undestanding the mechanisms of infant respiratory distress and chronic lung disease // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2002. -Vol.26.-P. 261-265.

50. Cormier Y., Israel-Assayag E., Desmeules M., Lesur O. Effect of contact avoidance or treatment with oral prednisolone on bronchoalveolar lavage surfactant protein A levels in subjects with farmer's lung // Thorax. 1996. -Vol. 51.-P. 1210-1215.

51. Crouch E.C. Collectins and pulmonary host defense // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.- 1998.-Vol. 19.- 177-201.

52. Crouch E., Rust K., Veile R., Donis-Keller D., Grosso L. Genomic organization of human surfactant protein D (SP-D) // The J. of Biol. Chem. 1993. - Vol. 268,№4.-P. 2976-2983.

53. Day C., Grove J., Daly A. et al. Tumour necrosis factor-alpha gene promoter polymorphism and decreased insulin resistance // Diabetologia. -1998. -Vol. 41. -P. 430-434.

54. DeBoer W.I. Cytokines and therapy in COPD: a promising combination? // Chest.-2002.-Vol.121 (Suppl 5).-P. 209-218.

55. DeMello D. Pulmonary pathology // Seminars in Neonatology.-2004-Vol. 9. -P.311-329.

56. DiAngelo S., Lin Z., Wang G., Phillips S., Ramet M., Luo J., Floras J. Novel, non-radioactive, simple and multiplex PCR-cRFLP methods for genotyping human SP-A and SP-D marker alleles // Dis. Markers 1999. - Vol.15. - P.269-281.

57. DiFiore J.W., Wilson J.M. Lung development// Semin. Pediatr. Surg. 1994-Vol.3.-P. 221-232.

58. DiGiovine F.S., Takhsh E., Blakemore A.I. et al. Single base polymorphism at -511 in the human interleukin-lP gene (ILlP) // Hum Mol. Genet. 1992. - Vol. l.-P. 450.

59. Dinarello C.A., Wolff S.M. The role of interleukin-1 in disease // N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 328. - P. 106-113.

60. Dunbar A.E. Ill, Wert S.E., Ikegami M. et al. Prolonged survival in hereditary surfactant protein В (SP-B) deficiency associated with novel splicing mutation // Pediatr. Res. 2000. - Vol. 48. - P. 275-282.

61. Eskdale J., Gallagher G., Verweij C.L., Keijsers V., Westendorp R. G. J., Huizinga T. W. J. Interleukin 10 secretion in relation to human IL-10 locus haplotypes // Proc. Nat. Acad. Sci. 1998. - Vol. 95. - P. 9465-9470.

62. Farrell P.M., Wood R.E. Epidemiology of hyaline membrane disease in the United States: analysis of national mortality statistics // Pediatrics. 1976. -Vol. 58.-P. 167-176.

63. Feng D., Ishibashi II., Yamamoto S., Hosoi Т., Orimo H., Machida Т., Koshihara Y. Association between bone loss and promoter polymorphism in the1.-6 gene in elderly Japanese women with hip fracture // Bone Miner. Metab. -2003.-Vol. 21.-P. 225-228.

64. Floros J., Fan R., DiAngelo S., Guo X., Wert J., Luo J. Surfactant protein (SP) В associations and interactions with SP-A in white and black subjects with respiratory distress syndrome // Pediatr. Int. 2001. - Vol. 43. - P. 567-576.

65. Floros J., Veletza S.V., Kotikalapudi P. et al. Dinucleotide repeats in the human surfactant protein-B gene and respiratory-distress syndrome// Biochem. J. -1995.-Vol. 305.-P. 583-590.

66. Floros J., Wang G. A point of view: quantitative and qualitative imbalance in disease pathogenesis; pulmonary surfactant protein A genetic variants as a model

67. Сотр. Biochem. Physiol. A Mol. Integr. Physiol. 2001. - Vol. 129. -P. 295-303.

68. Floras J., Wang G., Lin Z. Genetic diversity of human SP-A, a molecule with innate host defense and surfactant-related functions; characteristics, primary function and significance//Current Pharmacogenomics.-2005.-Vol.3-P.87-95.

69. Francis G.S., Cohn J.N., Johson G. Plasma norepinephrine, plasma rennin activity, and congestive heart failure // Circulation. 1993. - Vol. 87. - P. 4048.

70. Frerking 1., Gunther A., Seeger W., Pison U. Pulmonary surfactant: functions, abnormalities and therapeutic options // Intensive Care Med. 2001. - Vol. 27. -P. 1699-1717.

71. Frossard P.M., Hill S.H., Elshahat Y.I. et al. Associations of angiotensinogen gene mutations with hypertension and myocardial infarction in galf population // Clin. Genet. 1998. - Vol. 54. - P.285-293.

72. Frossard P.M., Kane J.P., Malloy M.J. et al. Renin gene Mbo\ dimorphism is a discriminator for hypertension in hyperlipidaemic subjects // Hypertens. Res. -1999.-Vol. 22.-P. 285-289.

73. Frossard P.M., Malloy M.J., Lestringant G.G. et al. Haplotypes of human rennin gene associated with essential hypertension and stroke // J. Hum. Hypertension. -2001.-Vol. 15, №1.-P. 49-55.

74. Gao E., Wang Y., McCormick S. M., Li J., Seidner S. R., Mendelson C. R. Characterization of two baboon surfactant protein A genes // Am. J. Physiol. -1996.-Vol. 271.-P. 617-630.

75. Glasser S., Korfhagen T.R., Weaver T. et al. cDNA and deduced amino acid sequence of human pulmonary surfactant-associated proteolipid SPL(Phe)// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - Vol.84. - P. 4007-4011.

76. Gluck L., Kulovich M.V. Lecithin-sphingomyelin ratios in amniotic fluid in normal and abnormal pregnancy // American Journal of Obstetrics and Gynecology. 1973. - Vol. 115. - P.539-546.

77. Goetz F.W., Planas J.V., MacKenzie S. Tumor necrosis factors // Dev. Сотр. Immunol. 2004. -Vol. 28. - P. 487-497.

78. Gong M.N., Thjmpson B.T., Williams P.L., Zhou w., Wang M.Z., Pothier L., Christiani D.C. Interleukin-10 polymorphism in position -1082 and acute respiratory distress syndrome // Eur. Respir J. 2006. - Vol. 27. - P. 674-681.

79. Grafoor Т., Mahmud S., Ali S., Dogar S.A. Incidence of respiratory distress syndrome //J. Coll. Physicians Surg. Рак. -2003. -Vol. 13, №5. P. 271-273.

80. Graven S. N., Misenheimer H.R. Respiratory distress syndrome and the high risk mother // American Journal of Diseases in Children. 1965. - Vol. 109. - P.489-494.

81. Greene К. E., Wrigh, J. R., Steinberg K. P. et al. Serial changes in surfactant-associated proteins in lung and serum before and after onset of ARDS // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. - Vol. 160. - P. 1843-1850.

82. Griese M. Pulmonary surfactant in health and human lung diseases: state of the art //Eur. Respir. J.-1999.-Vol. l.-P. 1455-1476.

83. Grove J., Daly A. K., Bassendine M. F., Gilvarry E., Day C. P. Interleukin 10 promoter region polymorphisms and susceptibility to advanced alcoholic liver disease // Gut. 2000. - Vol. 46. - P. 540-545.

84. Gurel О., Ikegami M., Chroncos Z.C. Jobe A.H. Macrophage and type II cell catabolism of SP-A and saturated phosphatidylcholine in mouse lungs // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2001. - Vol. 280. - P. 1266-1272.

85. Guzman J., Wang Y. M., Kalaycioglu 0. et al. Increased surfactant protein A content in human alveolar macrophages in hypersensitivity pneumonitis // Acta Cytol. 1992. - Vol. 36. - P. 668-673.

86. I Iaagsman H.P., van Golde L.M. Synthesis and assembly of lung surfactant // Annu. Rev. Physiol. 1991. - Vol. 53. - P. 441-464.

87. Haataja R. The role of surfactant protein A and В genes in heritable susceptibility to neonatal respiratory distress syndrome Oulu: Oulu University Press. -2001.-69 p. (URL:http://hercules.oulu.fi/issn03553221/j

88. Haataja R., Hallman M. Surfactant proteins as genetic determinants of multifactorial pulmonary diseases // Ann. Med. 2002. - Vol.34. - P.324-333.

89. Hall I. P. Pharmacogenetics, pharmacogenomics and airway disease // Respir. Res.-2002.-Vol.3.-P. 10.

90. Hallman M., Haataja R. Genetic influences and neonatal lung disease // Seminars of Neonatology. 2003. - Vol.8. - P. 19-27.

91. Hamm H., Luhrs J., Guzman у Rotaeche J., Costabel U., Fabel H., Bartsch W. Elevated surfactant protein A in bronchoalveolar lavage fluids from sarcoidosisand hypersensitivity pneumonitis patients // Chest. 1994. - Vol. 106. -F. 1766-1770.

92. Harding D., Dhamrait S., Marlow N. et al. Angiotensin-converting enzyme DD genotype is associated with worse perinatal cardiorespiratory adaptation in preterm infants //J. Pediatr. 2003. - Vol.143, № 6. - P.746-749.

93. Hattori M.A., Del Ben G.L., Carmona A.K., Cesarini D.E. Angiotensin I-converting enzyme isoforms (high and low weight) in urine of premature and full-term infants //1 lypertension. 2000. - Vol.35. - P. 1284-1290.

94. Hawgood S., Clements J.A. Pulmonary surfactant and its apoproteins // J. Clin. Invest.-1990.-Vol. 86.-P. 1-6.

95. Hawgood S., Derrick M., Poulain F. Structure and properties surfactant protein В //Biochem. Biophys. Acta.- 1998.- Vol. 1408.-P. 150-160.

96. He C. Proteomics of human pulmonary surfactant proteins // Current proteomics. -2005.-Vol. 2.-P. 303-318.

97. Hoidal J.R. Genetics of COPD: present and future // Eur. Respir. J. -2001. -Vol.18.-P. 741-743.

98. Holm В.A. Keicher L., Liu M. et al. Inhibition of pulmonary surfactant function by phospholipases // J. Apple. Physiol. 1991. - Vol. 71, № 1. - P. 317-321.

99. Hoover R. R., Floros J. Organization of the human SP-A and SP-D loci at 10q22-q23. Physical and radiation hybrid mapping reveal gene order and orientation // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1998. - Vol. 18. - P. 353-362.

100. Hoppe H.J., Reid K.B. Collectins-soluble proteins containing collagenous regions and lectin domains and their roles in innate immunity // Protein Sci. -1994.-Vol.3.-P. 1143-1158.

101. Hull J., Ackerman II., Isles K., Usen S., Pinder M., Thomson A., Kwiatkowski D. Unusual haplotypic structure of IL8, a susceptibility locus for a common respiratory virus // Am. J. Hum. Genet. 2001. - Vol. 69. - P. 413-419.

102. Hull J., Thomson A., Kwiatkowski D. Association of respiratory syncytial virus bronchiolitis with the interleukin 8 gene region in UK families // Thorax. 2000. -Vol. 55.-P. 1023-1027.

103. Hurme M., Santtila S. IL-1 receptor antagonist (IL-1RA) plasma levels are co-ordinately regulated by both IL-1RA and IL-lP genes // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28. - P. 2598-2602.

104. Husley T.C., Alexander G.R., Robillard P.Y., Annibale D.J., Keenan A. Hyaline membrane disease: the role of ethnicity and maternal risk characteristics // Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. -Vol. 169, №3. -P.751-752.

105. Ikegami M., whitsett J., Martis P.C., Weaver Т.Е. Reversibility of lung inflammation caused by SP-B deficiency // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2005. - Vol.289. - P. 962-970.

106. Ishihara K., Ilirano T. IL-6 in autoimmune disease and chronic inflammatory proliferative disease // Cytokine Growth. Factor Rev. 2002. - Vol. 13. -P. 357-368.

107. Jeunemaitre X., Lifton R.P., Hunt S.C. et al. Absence of linkage between the angiotensin-converting enzyme locus and human essential hypertension // Nat. Genet. 1992. - Vol. 1. - P. 72-75.

108. Jobe A.I I. Why surfactant works for respiratory distress syndrome // NeoReviews. 2006. - Vol. 7, №2. P. 95-105.

109. Jobe A.I I., Ikegami M. Lung development and function in preterm infants in the surfactant treatment era// Annu. Rev. Phisiol. -2000-VoI. 62. P. 825- 836.

110. Kala P., Ten Have Т., Nielsen H., Dunn M., Floras J. Association of pulmonary surfactant protein A (SP-A) gene and respiratory distress syndrome: interaction with SP-B // Pediatr. Res. 1998. -Vol.43. - P. 169-177.

111. Kala P., Koptides M., Diangelo S., Hoover R.R., Lin Z., Veletza V., Kouretas D., Floras J. Characterization of the markers flanking the human SP-B locus // Dis.Markers. 1997. - Vol. 13. - P. 153-167.

112. Karinch A. M., Floras J. 5' splicing and allelic variants of the human pulmonary surfactant protein A genes // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995. - Vol.12. -P. 77-88.

113. Keller A., Eistetter II.R., Voss Т., Schafer K.P. The pulmonary surfactant protein С (SP-C) precursor is a type II transmembrane protein // Biochem. J. -1991.- Vol.277. -P.493-99.

114. Khoury M.J., Calle E.E., Joesoef R.M. Recurrence of low birth weight in siblings // J. Clin. Epidemiol. 1989. - Vol.42. - P. 1171 -1178.

115. King R.J. Pulmonary surfactant//J. Appl. Physiol. 1982. - Vol. 53. P. 1-8.

116. King R.J., Clements J.A. Surface active materials from dog lung: II. Composition and physiological correlations // Am. J. Phisiol. 1972. - Vol.223. -P. 715-725.

117. Klein J. M., Thompson M. W., Snyder J.M. et al. Transient surfactant protein В deficiency in term infant with severe respiratory failure // J. Pediatr. Vol.132. -P. 244-248.

118. Kondrashov F. A., Rogozin I. В., Wolf Y. I., Koonin E. V. Selection in the evolution of gene duplications // Genome Biol. 2002. - Vol.3. RESEARCH0008.

119. Kotecha S. Lung growth: implications for the newborn infant // Arch. Dis. Child. Fetal. Neonatal Ed. 2000. - Vol.82. - P.69-74.

120. Krege J.I I., Kim H.S., Moyer J.S. et al. Angiotensin-converting enzyme gene mutations, blood pressure, and cardio-vascular homeostasis // Hypertension.1997.-Vol. 29.-P. 150-157.

121. Lahti M., Lofgren J., Marttila R., Renko M., Klaavuniemi Т., Haataja R., Ramet M., Hallman M. Surfactant protein D gene polymorphism associated with severe respiratory syncytial virus infection // Pediatric Research. 2002. - Vol. 51, №6. - P. 696-699.

122. Lahti M., Marttila R., Hallman M., Surfactant protein С gene variation in the Finnish population association with perinatal respiratory disease // Eur. J. Hum. Genet. - 2004. - Vol. 12. - P. 312-320.

123. Lander E.S. The new genomics: global views of biology // Science. 1996. -Vol. 274, №5287. - P. 536-539.

124. Lankenau H.M. A genetic and statistical study of the respiratory distress-syndrome// Eur. J. Pediatr. 1976. - Vol.123. - P. 167-177.

125. Lawson P., Reid K.B.M. The roles of surfactant proteins A and D in innate immunity // Immunological Reviews. 2000. - Vol. 173. - P.66-78.

126. Lesage S., Zouali H., Cezard J.P. et al. CARD15/NOD2 mutational analysis and genotype phenotype correlation in 612 patients with inflammatory bowel disease // Am. J. Hum. Genet. 2002. - Vol. 70, №4. - P. 845-857.

127. Lin Z., deMello D.E., Batanian J.R. et al. Aberrant SP-B mRNA in lung tissue of patients with congenital alveolar proteinosis // Clin. Genet 2000-Vol. 57-P. 359-369.

128. Lin Z., deMello D.E., Wallot M., Floros J. An SP-B gene mutation responsible for SP-B deficiency in fatal congenital alveolar proteinosis: evidence for a mutation hotspot in exon 4 // Molecular Genetics and Metabolism. 1998. -Vol. 64. - P.25-35.

129. Lin Z., Pearson C., Chinchilli V., Pietschmann S. M., Luo J., Pison U., Floros J. Polymorphisms of human SP-A, SP-B, and SP-D genes : association of SP-B Thr 131 He with ARDS // Clin. Genet. 2000. - Vol.58. - P. 181-191.

130. Lin Z., Thomas N.J., Wang Y., Guo X., Seifart C., Shakoor H., Floros J. Deletion within a CA repeat-rich region of human SP-B intron 4 affect mRNA splicing // Biochem. J. Immediate Publ. Published on 24 Mar 2005. -Manuscript BJ20042032.

131. Lofgren J., Ramet M., Renko M., Marltila R., Hallman M. Association between surfactant protein A gene locus and severe respiratory syncytial virus infection in infants // J. Infect. Dis. 2002. - Vol. 185. - P. 283-289.

132. Lyon H., Lange C., Lake S., Silverman E., Randolph A., Kwiatkowski D, Raby В., Lazarus R., Weiland K., Laird N., Weiss S. IL10 gene polymorphisms are associated with asthma phenotypes in children // Genet. Epidemiol. 2004. -Vol.26.-P. 155-165.

133. Makri V., Hospes В., Stoll-Becker S., Borkhardt A., Gortner L. Polymorphisms of surfactant protein В encoding gene: modifiers of the course of neonatal respiratory distress syndrome? // Eur. J. Pediatr. 2002. - Vol.161. - P. 604608.

134. Malik F.S., Lavie C.J., Mehra M.R. et al. Renin-angiotensin system: genes to bedside // Am. Heart. J. 1997. - Vol. 134. - P. 514-527.

135. Marttila R., Haataja R., Ramet M., Pokela M.L., Tammela O., Hallman M. surfactant protein a gene locus and respiratory distress syndrome in Finnish premature twin pairs // Ann. Med. 2003. - Vol. 35, №5. - P. 344-352.

136. Mason R.J., Greene K., Voelker D.R. Surfactant protein A and surfactant protein D in health and disease // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. 1 -13.

137. Mathew С.С. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA // Methods in Molecular Biology. Ed. Walker J.M. N.Y., L.: Human Press. -1984.-Vol. 2.-P. 31-34.

138. McCormack F.X. Structure, processing and properties of surfactant protein // A. Biochim. Biophys. Acta. 1998. -Vol. 1408. - P. 109-131.

139. McCormack F. X., King Т. E. Jr., Bucher B. L., Nielsen L., Mason R. J., McCormac F. X. Surfactant protein A predicts survival in idiopathic pulmonary fibrosis//Am. J. Respir. Crit. Care Med. -1995. -Vol.152. P.751-759.

140. Mead J., Wittenberger J.L., Radford E.P. Surface tension as a factor in pulmonary volume-pressure hysteresis // J. Appl. Physiol. 1957. - Vol.10. - P. 191-196.

141. Mercer B.M., Crocker L.G., Pierce W.F., Sibai B.M. Clinical characteristics and outcome of twin gestation complicated by preterm premature rupture of the membranes//Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. - Vol. 168.-P. 1467-1473.

142. Myrianthopoulos N.C., Churchill J.A., Baszynski A.J. Respiratory distress syndrome in twins // Acta. Genet. Med. Gemellol. 1971. - Vol. 20. - P. 199204.

143. Nagourney B.A., Kramer M.S., Klebanoff M.A., Usher R.H. Recurrent respiratory distress syndrome in successive preterm pregnancies // Jounal of Pediatrics. 1996.-Vol. 129, №4.- P.591-596.

144. Newton C.R., Summers C., Schvarz M.J. et al. Amplification refractory mutation system for prenatal diagnosis and carrier assessment in cystic fibrosis // Lancet. 1989. - Vol. 30. - P. 1481 -1482.

145. Nogee L.M. Alterations in SP-B and SP-C expression in neonatal lung disease // Annu. Rev. Physiol. 2004. - Vol.66. -P.601-623.

146. Nogee L.M., deMelo D.E., Dehner L.P., Colten H.R. Brief report: deficiency of pulmonary surfactant protein В in congenital alveolar proteinosis // N. Engl. J. Med. 1993.-Vol. 328.-P. 406-410.

147. Nogee L.M., Wert S.E., Proffit S.A., Hull W.M., Whitsett J.A. Allelic heterogeneity in hereditary surfactant protein В deficiency// Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - Vol. 161. - P. 973-981.

148. Orita M., Iwahana H., Kanazawa., Sckya Т. Detection of polymorphism of human DNA by gel electrophoresis as single cell conformation polymorphism // Proc. Natl. Acad. Sci. 1989. - Vol.86 - P. 2766-2770.

149. Pantelidis P., Lagan A.L., Davies J.C., Welsh KI, du Bois RM. A single round PCR method for genotyping human surfactant protein (SP)-Al, SP-A2 and SP-D gene alleles//Tissue Antigens. 2003. -Vol. 61, №4. - P.317-321.

150. Patel S., Woods D.R., Macleod N.J. et al. Angiotensin-converting enzyme genotype and the ventilatory response to exertional hypoxia // Eur. Respir. Journal. 2003. - Vol. 22. - P. 755-760.

151. Patthy L. Homology of the precursor of pulmonary surfactant-associatad protein SP-B with prosaposin and sulfated glycoprotein 1 // J. Biol. Chem. 1991. -Vol.266. -P.6035-6037.

152. Pattle R.E. Properties, function and origin of the alveolar lining layer // Nature. -1955.-Vol. 175.-P. 1125-1126.

153. Pattle R.E., Thomas L. C. Lipoprotein composition of the film lining of the lung // Nature. 1961. - Vol. 189. - P. 844.

154. Phelps D. S., Umstead Т. M., Mejia M., Carrillo G., Pardo A., Selman M. Increased surfactant protein-A levels in patients with newly diagnosed idiopathic pulmonary fibrosis. Chest. 2004. - Vol. 125 - P. 617-625.

155. Phillips D.I. Twin studies in medical research: can they tell us whether diseases are genetically determined? //Lancet. 1993.- Vol. 341.-P. 1008-1009.

156. Pilot-Matias T.J., Kister S.E., Fox J.L., Kropp K., Glasser S.W., Whitsett J.A. Structure and organization of the gene encoding human pulmonary surfactant proteolipid SP-B // DNA. 1989. - Vol.8. - P.75-86.

157. Posch P.E., Cruz I., Bradshaw D., Medhekar B.A. Novel polymorphisms and the definition of promoter 'alleles' of the tumor necrosis factor and lymphotoxin alpha loci: inclusion in HLA haplotypes // Genes Immun. 2003. - Vol. 4. -P. 547-558.

158. Prins R.P. The second-born twin: can we improve outcomes? // Am. J. Obstet. Gynecol. 1994. - Vol. 170. - P. 1649-1656.

159. Pritchard J.K., Cox N.J. The allelic architecture of human disease genes: common disease-common variant . or not? // Hum. Mol. Genet. 2002. - Vol. 11,№20.-P. 2417-2423.

160. Radford E.P. Method for estimating respiratory surface area of mammalian lungs from their physical characteristics // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1954. - Vol. 87.-P. 58-61.

161. Ramet M., Haataja R., Marttila R., Floros J., Hallman M. Association between the surfactant protein A (SP-A) gene locus and respiratory-distress syndrome in the Finnish population // Am. J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 66. - P. 1569-1579.

162. Reich D.E., Lander E.S. On the allelic spectrum of human disease // Trends Genet. 2001. - Vol. 17, №9. - P. 502-510.

163. Rigat В., Hubert C., Corvol P., Soubrier F. PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene (DCP1) (dipeptidyl carboxypeptidase 1)//Nucleic Acids Res.- 1992-Vol.20, №6. P. 1433.

164. Robert M.F., Neff R.K., Ilubbell J.P., Taeusch H.W., Avery M.E. Assotiation between maternal diabetes and the respiratory-distress syndrome in the newborn // New England Journal of Medicine. 1976. - Vol.294. - P.357-360.

165. Robillard P.Y., Husley T.C., Alexander G.R., Sergent M.P., de Caunes F., Papiernik E. Hyaline membrane disease in black newborns: does fetal lung maturation occur earlier? // Eur. J. Gynecol. Reprod. Biol. 1994. - Vol. 55, №3. - P. 157-161.

166. Robson E., Hey E. Resuscitation of preterm babies at birth reduces of the risk of death from hyaline membrane disease // Archives of Disease in Childhood. -1982. Vol.57. -P.l84-186.

167. Roger M. Influence of host genes on HIV-1 disease progression // FASEB.J. -1998.-Vol. 12.-P. 625-632.

168. Rooney S.A. The surfactant system and lung phospholipid biochemistry // Amer. Rev. Respirat. Dis. 1985. - Vol. 131. - P. 439-460.

169. Rooney S.A., Gobran L.I., Umstead T.M., Phelps D.S. Secretion of surfactant protein A from rat type II pneumocytes // Am. J. Physiol. -1993. -Vol. 265. -P. 586-590.

170. Rothermund L., Paul M. Hypertension and the rennin-angiotensin system -evidence from genetic and transgenic studies // Basic Res. Cardiol. 1998. -Vol. 93.-P. 1-6.

171. Sandford A J., Silverman E.K. Chronic obstructive pulmonary disease. 1: Susceptibility factors for COPD the genotype-environment interaction // Thorax. -2002.-Vol. 57.-P. 736-741.

172. Santtila S., Savinainen K., Hurme M. Presence of the IL-1RA allele 2 (IL1RN*2) is associated with enhance IL-1 beta productin in vitro // Scand. J. Immunol. 1998. - Vol.47. - P.195-198.

173. Sayed-Tabatabaei F.A., Oostra B.A., Isaacs A., van Duijn C.M., Witteman J.C.M. ACE Polymorphisms // Circ. Res. -2006. Vol. 98. - P. 1 123-1133.

174. Schlesselman J., Case-control studies. Design, conduct, analysis. New York, Oxford: Oxford University Press. - 1982. - P. 58-96.

175. Schmidt S., Van Hooft I.M.S., Grobbee D.E. et al. Polymorphism of the angiotensin I converting enzyme gene is apparently not related to high blood pressure: Dutch Hypertension and Offspring Study // J. Hypertens. 1993. -Vol.11.-P. 345-348.

176. Schwartz D.A. The Genetics of Innate Immunity // Chest. 2002. Vol. 121. - P. 62-68.

177. Segal S., Hill A.V. Genetic susceptibility to infectious disease // Trends Microbiol. 2003. - Vol. 11. - P. 445-448.

178. Selman M., Lin H. M., Montano M., Jenkins A.L., Estrada a., Lin Z., Wang G., DiAngelo S.L., Guo X., Umsted T.M., Lang C.M., Pardo A., Phelps D., Floros J.

179. Surfactant protein A and В genetic variants predispose to idiopathic pulmonary fibrosis // Hum. Genet. 2003. - Vol. 113. - P.542-550.

180. Shulenin S., Nogee L.M., Annilo Т., Wert S.E., Whitsett J.A., Dean M. ABCA3 gene mutations in newborns with fatal surfactant deficiency // N.Engl. J. Med. -2004.-Vol.350.-P.1296-1303.

181. Silverman E.K., Palmer L.J. Case-control association studies for the genetics of complex respiratory diseases // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2000. - Vol. 22. -P. 645-648.

182. Strandjord T.P., Emmanuel I., Williams M.A., Leisenring W.M., Kimro C. Respiratory diseases syndrome and maternal birth weight effect // Obstet. Gynecol. 2000. - Vol. 95, №2. - P. 174-179.

183. Strieter R.M., Belperio J.A., Keane M.P. Cytokines in innate host defense in the lung // Clin. Invest. 2002. - Vol. 109. - P. 699-705.

184. Strieter R.M., Belperio J.A., Keane M.P. Cytokines in innate host defense in the lung // Clin. Invest. 2002. - Vol. 109. - P. 699-705.

185. Tarlow J.K., Blakemore A.I., Lennard A., Solari R., Hughes H., Steinkasserer A., Duff G.W. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numbers of an 86-bp tandem repeat // Hum. Genet. 1993. -Vol. 91.-P. 403-404.

186. Taylor J.J., Preshaw P.M., Donaldson P.T. Cytokine gene polymorphism and immunoregulation in periodontal disease // Periodontol. 2004. - Vol. 35 -P. 158-182.

187. Tiret L, Rigat B, Visvikis S. Evidence from combined segregation analysis that a variant of the angiotensin I-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels // Am. J. Hum. Gen. -1992. Vol. 51. - P. 197-205.

188. Tokieda K., Iwamoto H.S., Bachurski C. et al. Surfactant protein-B-deficient mice are susceptible to hyperoxic lung injury // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. -1999.-Vol.21.-P. 463-472.

189. Tredano M., Cooper D.N., Stuhrmann M. et al. Origin of the prevalent SFTPB indel g.l549C>GAA (121 ins2) mutation causing surfactant protein В (SP-B) deficiency// Am. J. Med. Genet. 2006. - Vol.140, №1. - P. 62-69.

190. Treszl A., Toth-Heyn P., Kocsis I., Nobilis A., Schuler A., Tulassay Т., Vasarhelyi B. Interleukin genetic variants and the risk of renal failure in infants with infection // Pediatr. Nephrol. 2002. - Vol.17. - P.713-7I7.

191. Thomas G.N. Young R.P., Tomlinson B. et al. Renin-angiotensin-aldosterone system gene polymorphisms and hypertension in Hong Kong Chinese //Clin. Exp. Hypertension. 2000. - Vol. 22, №1. - P. 87-97.

192. Turner D.M., Williams D.M., Sankaran D., Lazarus M., Sinnott P.J., Hutchinson IV. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter // Eur. J. Immunogenet. 1997. - Vol.24. - P. 1-8.

193. Uglialoro A.M., Turbay D., Pesavento P.A. et al. Identification of three new single nucleotide polymorphisms in the human tumor necrosis factor-u gene promoter//Tissue Antigens. 1998. - Vol. 52. - P. 359-367.

194. Vamvakopoulos N.C., Modi W.S., Floros J. Mapping the human pulmonary surfactant-associated protein В gene (SFTP3) to chromosome 2pI2-pll.2 // Cytogenet. Cell Genet. 1995. - Vol.68. - P.8-10.

195. Van Sonderen L., Halsema E.F., Spiering E.J., Koppe J.G. Genetic influences in respiratory distress syndrome: a twin study // Semin. Perinatol. 2002. - Vol. 26, №6. - P. 447-449.

196. Vayrynen O., Glumoff V. Hallman M. inflammatory and anti-inflammatory responsivness of surfactant protein in fetal and neonatal rabbit lung // Pediatr. Res. 2004. - Vol.55. - P. 55-60.

197. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W. et al. The sequence of the human genome // Science. 2001. - Vol. 291. - P. 1304-1351.

198. Verduzco R.D.L.T, Rosario R., Rigatto H. Hyaline membrane disease in twins: a 7-year review wit a study on zygosity // American Journal of Obstetrics and Gynecology. 1976. - Vol. 125. - P.668-671.

199. Von Neergaard K. New interpretations of basic concepts of respiratory mechanisms // Z. Gesamte Exp. Med. 1929. - Vol.66. - P.373-394.

200. Vorbroker D.K., Profitt S.A., Nogee L.M., Whitsett J.A. Aberrant processing of surfactant protein С (SP-C) in hereditary SP-B deficiency// Am J. Physiol.-1995.-Vol. 268.-P. 647-656.

201. Warzocha К., Ribeiro P., Bienvenu J. et al. Genetic polymorphisms in the tumor necrosis factor locus influence non-1 lodgkin's lymphoma outcome // Blood. -1998.-Vol. 91.-P. 3574-3581.

202. Waterer G.W., Quasney M.W., Cantor r.M., Wunderink R.G. Septic shock and respiratory failure in community-acquired pneumonia have different TNF polymorphism associations // Am. J. Respir. Cut Care Med. 2001. - Vol. 163. -P. 1599-1604.

203. Weaver ТЕ. Synthesis, processingand secretion of surfactant proteins В and С // Biochim. Biophys Acta. 1998. - Vol. 1408. - P. 173-179.

204. Wedzicha J.A., Seemungal T.A., MacCallum P.K., et al. Acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease are accompanied by elevations of plasma fibrinogen and serum 1L-6 levels // Thromb. Haemost. 2000. - Vol.84. - P. 210-215.

205. White R.T., Damm D., Miller J., Spratt K., et al. Isolation and characterization of the human pulmonary surfactant apoprotein gene // Nature. 1985. - Vol. 317. - P. 361-363.

206. White E., Shy K.K., Daling J.R. An investigation of the relationship between cesarean section birth and respiratory distress syndrome of the newborn // Am. J. Epidem. 1985. - Vol. 121, №5. - P. 651-663.

207. Williams M.C. Conversion of lamellar body membranes into tubular myelin in alveoli of fetal rat lungs // J. Cell. Biol. 1977. - Vol. 72. - P. 260-277.

208. Wilson A.G., Symon J.A., McDowel T.L. et al. Effects of a polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - Vol. 94. - P. 3195-3199.

209. Wright J.R., Clements J.A. Metabolism and turnover of lung surfactant // Am. Rev. Respir. Dis. 1987. - Vol.136. - P.426-444.

210. Wright A.F., Hastie N.D. Complex genetic diseases: controversy over the Croesus code // Genome Biol. 2001. - Vol. 8, №2. - CQMMENT2007.

211. Yamaguchi E., Itoh A., Hizawa N. et al. The gene polymorphism of tumor necrosis factor-13, but not that of tumor necrosis factor-и, is associated with the prognosis of sarcoidosis // Chest. 2001. - Vol. 119. - P. 753-761.

212. Yamamoto C., Yoneda Т., Yoshikawa M., Fu A., Tokuyama Т., Tsukaguchi K., Narita N. Airway inflammation in COPD assessed by sputum levels of interleukin-8 // Chest. 1997. - Vol. 112. - P. 505-510.

213. Yurdakok M. Inherited disorders of neonatal lung diseases // The Turk. J. Pediatr. 2004. - Vol.46. - P. 105-114.