Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль фотоокислительных реакций 8-метоксипсоралена в индукции ПУФА-эритемы и в ПУФА-терапии псориаза

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мошнин, Михаил Витальевич

Список сокращений.

I. Введение.

2.Обзор литературы.

2Д.ПУФА-терапия кожных болезней.

2.1.1.Побочные эффекты ПУФА-терапии псориаза.

2.1.2.Методы регистрации эритемы и пигментации.

2.2.Фотофизические и фотохимические свойства псораленов.

2.2Л.Спектральные характеристики.

2.2.2.Первичные фотопродукты псораленов.

2.2.3.Псоралены как фотосенсибилизаторы

I и II типа.

2.3.Реакции фотоприсоединения 8-МОП к пирими-диновым основаниям.

2.4.Фотоприсоединение псораленов к ДНК.

2.5.Фотоокислительные реакции псораленов.

2.5.1.Реакции псораленов с белками.

2.5.2.Сенсибилизированное 8-МСП фотоокисление липидов.

2.6.Сенсибилизированное псораленами повреждение биологических мембран.

2.7.Влияние антиоксидантов на фотохимические реакции и фотобиологические эффекты псораленов.

3.Материалы и метода.

3.1.Использовавшиеся соединения и материалы.

3.2. УФ-облучение.

3.3.Шделение общей фракции фосфолипидов из желтка куриных яиц.

3.4.Приготовление суспензии липосом.

3.5«Очистка линоленовой кислоты и метилового эфира линоленовой кислоты от продуктов автоокисления.

3.6.Приготовление суспензии линоленовой кислоты.

3.7.Определение гидроперекисей липидов методом регистрации хемилюминесценции, индуцированной ионами Fe^+.

3.8.Использование ТБК-реакции для определения продуктов окисления липидов.

3.9.Определение конъюгированных диенов.

ЗЛО. Изучение фотосенсибилизированного 8-М СП окисления липидов в зависимости от степени их исходной окисленности.

3.11.Исследование флюоресцирующих продуктов фотохимических реакций 8-МОП.

3.12.Изучение темнового окисления липидов УФ-облученным 8-МОП.

3.13.Изучение генерации синглетного кислорода 8-метоксипсораленом.

3.14.Изучение термолюминесценции растворов 8-МШ.

3.15.Изучение фотоприсоединения 8-МОП к ДНК.

3.16.Изучение инактивации E.coli при ПУФА-воздействии.

3.17.Изучение фотосенсибилизированной 8-МОП инактивации лизоцима.

3.18. Регистрация ПУФА-эритемы.

3.19.Методика клинических испытаний ионола как ингибитора фототоксических эффектов 8-МОП.,

3.20.Расчет ошибки среднего значения.

4.Результаты и обсуждение.

4.1.Фотосенсибилизированное 8-метоксипсораленом окисление липидов.

4.2.1.Изучение способности 8-МОП генерировать синглетный кислород.

4.2.2.Окисление ненасыщенных липидов фотоокисленным 8-МОП.

4.2.3.Влияние растворителя на способность фотоокисленного 8-МШ индуцировать окисление липидов.

4.2.4.Изучение продуктов фотоокисления 8-МШ.

4.2.4.1.Спектроскопия фотопродуктов 8-МОП.

4.2.4.2.Флюоресцентные исследования продуктов фотоокисления 8-MCQ.

4.3.Исследование низкотемпературных реакций фотопродуктов УФ-облученного 8-метокси-псоралена методом термолюминесценции.

4.4.Фотоинактивация 8-метоксипсораленом фермента лизоцима.

4.5.Изучение влияния антиоксидантов на присоединение 8-МОП к ДНК.

4.5Л.Влияние антиоксидантов на образование флюоресцирующих 4',5-моноаддуктов 8-М0П-ДНК.

4.5.2.Влияние антиоксидантов на образование диаддуктов 8-М0П-ДНК.

4.5.3.Влияние ионола на фотосенсибилизированную 8-МОП инактивацию культуры е.соli t*,.IZ

4.6.Влияние ионола на индукцию ПУФА-эритемы.

4.6Л.Оценка спектров отражения кожи при ингибировании ионолом ПУФА-эритемы.

4.7.ПУФА-терапия псориаза с использованием ионола.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль фотоокислительных реакций 8-метоксипсоралена в индукции ПУФА-эритемы и в ПУФА-терапии псориаза"

В настоящее время в дерматологии для лечения таких заболеваний, как псориаз (8 ), витилиго ( 80 ) и некоторые другие 4 дерматозы (7 ), широко применяется метод ПУФА-терапии (псора-* * лен + УФА-излучение, А = 315-400 нм). Псоралены - это группа веществ растительного или синтетического происхождения, способных сенсибилизировать кожу к длинноволновому ультрафиолетовому свету (УФА). Фотосенсибилизация кожи приводит к терапевтическим или другим фотобиологическим эффектам - индукции эритемы, пигмент ообразованшо, при больших дозах облучения может возникнуть эдема. ПУФА-воздействие вызывает также летальные и мутагенные эффекты у микроорганизмов (87 ),

При изучении молекулярных механизмов ПУФА-воздействия на биологические объекты было установлено, что псоралены способны вступать в реакции фотоприсоединения с ДНК и РНК ( 76 ). эта л уникальная реакция, отличающая псоралены от других фотосенсибилизаторов, хорошо изучена. В результате реакции фотоприсоединения образуются или моноадаукты псорален - пиримидиновое основание ДНК, или диаддукты, которые ковалентно сшивают нити двуспи-ральной ДНК ( зб ,37 ). Эти реакции протекают без участия кисл лорода.

Известны также фотоокислительные реакции псораленов. К ним относятся инактивация белков ( 88 ), рибосом ( 95 ),окисление липидов ( 51 ). Механизм этих реакций выяснен далеко не N полностью. Существует точка зрения, что фотоокислительные реакции псораленов осуществляются через синглетный кислород ( 31 ), но это мнение основано на косвенных данных, и не исключена возможность участия других механизмов в реакциях данного типа.

Таким образом, при ПУФА-воздействии на кожу могут идти реакции двух видов - кислороднезависимое фотоприсоединение псора-лен - ДНК и реакции фотоокисления белков, лидидов и других биологических молекул.

Каков молекулярный механизм индукции фотобиологических эффектов дсораленов? Анализ литературы не дает однозначного ответа на этот вопрос. Большинство авторов считает, что при псориазе терапевтический эффект ПУФА обусловлен реакциями псорален -ДНК; однако существуют и другие точки зрения (66 ), Относительно молекулярных механизмов индукции ПУФА-эритемы и образования пигмента также есть несколько мнений. Одни авторы считают, что эритемогенная активность обусловлена фотореакциями псо-раленов с ДНК ( 37 , 21 )• Другие полагают, что фотоокислительными реакциями псораленов в биомембранах (51 , 13 ).

•i,

Следует отметить, что если фотореакциям псорален - ДНК посвящено значительное количество работ и в этой области накоплен существенный багаж знаний, то механизмы фотоокислительных реакций изучены гораздо слабее и нуждаются в дополнительной разработке.

Основной целью нашей работы была попытка идентификации фотобиологических эффектов, вызываемых псораленами в коже, с фотохимическими реакциями псораленов на молекулярном уровне. Для решения поставленной задачи мы использовали метод ингиби-торного анализа - избирательное ингибирование отдельных фотореакций псораленов на молекулярном уровне, а затем изучали влияние ингибитора на фотобиологические эффекты на тканевом уровне. В качестве ингибитора были использованы антиоксиданты -ск -токоферол и ионол.

В настоящей работе изучали:

1) механизм реакций окисления лидидов, фотосенсибилизщю-ванного 8-метоксидсораленом, и влияние антиоксидантов на этот процесс;

2) влияние антиоксидантов на фотосенсибилизированную 8-МОП инактивацию фермента лизоцима, рассматриваемую как модель взаимодействия дсорален - белок;

3) влияние антиоксидантов на фотоприсоединение 8-МОП к ДБК;

4) способность антиоксиданта ионола ингибировать развитие ПУФА-эритемы;

5) влияние ионола на эффективность лечения псориаза методом ПУФА-терапии.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1, ПУФА-терапия кожных заболеваний

ПУФА-терапия, то есть комбинированное применение псорале-нов и УФА-излучения, в настоящее врегдя является самым эффективным способом лечения псориаза ( 2 ) и помогает при многих других заболеваниях кожи. Псориаз - это заболевание кожи невыясненной этиологии, характеризующееся усиленной пролиферацией клеток эпидермиса. Различают локальные и генерализованные формы заболевания, в некоторых случаях поражаются суставы. Псориазом болеют примерно 1-3$ населения США. (ИЗ в нашей стране это также один из самых распространенных дерматозов (8 ). Борьба с псориазом составляет одну из самых серьезных проблем дерматологии: с одной стороны, любые проявления псориаза наносят больным тяжелые морально-психические травмы, а генерализованные формы приводят к стойкой потере трудоспособности; с другой стороны, этиология и патогенез заболевания неизвестны и применяемые методы лечения носят симптоматический характер. Выяснение молекулярных механизмов ПУФА-терапии представляет собой шаг в направлении установления этиологии и патогенеза заболевания.

Применение ПУФА-терапии для лечения псориаза впервые описано в 1974 году ( П7 ). Этот метод сочетает в себе возможность амбулаторного применения, простоту и, главное, - высокую эффективность. Клиническое выздоровление в случае применения ПУФА-терапии достигается в 70-95$ случаев ( 2 ). Метод позволяет эффективно бороться с тяжелыми, торпидно текущими формами псориаза, в том числе и с псориатической эритродермией.

Наиболее распространена методика проведения ПУФА-терапии с использованием таблеток, содержащих фотосенсибилизаторы,-"Пувален" (Финляндия), "Бероксан" и "Аммифурин" (СССР), "Меток-сален" (США) и др. Больные принимают препарат за полтора-два часа до УФА-облучения (8 ).

Для целей ПУФА-терапии может быть использовано и локальное нанесение фотосенсибилизаторов в виде спиртовых растворов или мазей ( 42 ). Такой метод позволяет получить терапевтические концентрации препарата (4-6«10"5 М) в базальном слое эпидерми са через 10 минут после нанесения ( 108). Описаны случаи использования ванн с раствором фотосенсибилизатора, при этом концентрация в базальном слое сразу после приема ванны на порядок превышала концентрацию препарата в дерме и на несколько порядков - в крови ( 108). Возможно введение препарата в микроклизмах ( НО), это исключает, с одной стороны, токсическое воздействие препарата на печень, а с другой - разрушение их в гепато-цитах. Различные модификации ПУФА-терапии имеют общую цель -увеличение концентрации фотосенсибилизаторов в коже и снижение ее во внутренних органах, поскольку при приеме псораленов внутрь наблюдаются побочные эффекты (61 ). При проведении курса ПУФА-терапии суммарная доза облучения, необходимая для достижения клинического эффекта, разбивается на разовые дозы, длительность которых лимитируется ПУФА-эритемной чувствительностью кожи. Разовая доза ПУФА-воздействия должна быть ниже минимальной эритемной дозы (МЭД).

Молекулярные механизмы фотохимиотерапии до конца не выяснены. В литературе есть данные, что ПУФА-воздействие приводит к торможению клеточной пролиферации. Описано тормозящее действие ПУФА на рост культур бактерий (34 ), дрожжей (23 ) и вирусов ( 48 ). Необходимость многократных процедур при лечении > псориаза объясняют тем, что ПУФА-терапия сильнее всего действует на пролиферирующие клетки, а в псориатической бляшке не все клетки находятся в фазе пролиферации, поэтому для достижения терапевтического эффекта необходимы повторные процедуры. Показано, что псорален и УФА наиболее эффективно действует на s-фазу клеточного цикла (фаза синтеза ДНК). В эпидермисе псориа-тических бляшек число клеток в s-фазе резко увеличено по сравнению с эпидермисом здоровой кожи (21 ). В работе ( 21 ) % показано снижение синтеза ДНК в эпидермисе бляшек с 74$ до 65$ при ПУФА-терапии. Методом ауторадиографии наблюдали снижение индекса мечения тимидина в бляшках при ПУФА-терапии ( 62 ), это также указывает на ослабление синтеза ДНК в бляшках. Описана задержка синтеза ДНК в фибробластах эндотелия и в культивируемых лимфоцитах, возникающая при ПУФА-воздействии (90 ).

Эти данные авторы объясняют образованием ковалентных связей 8-М0П с пиримидиновыми основаниями ДНК.

Кроме реакции псорален-ДНК, при ПУФА-терапии, по мнению некоторых авторов, могут играть заметную роль и другие фотореакции. Так, методом флюоресцентной микроскопии было изучено связывание 8-МОП с эпидермальными структурами, при этом обнаружено, что 8-МОП образует флуоресцирующие фотопродукты в цитоплазме , а не в ядре (60 ). Авторы предполагают, что лечеб ный эффект ПУФА обусловлен повреждением цитоплазматических мембран лизосом, выходом лротеолитических ферментов из лизо-сом и разрушением ими клетки.

Некоторые авторы рассматривают влияние ПУФА-терапии на иммунитет. Показано, что при фотохимиотерапии нормализуется уровень Т-лимфоцитов и иммуноглобулинов (2 ). Высказано мнение, что иммуностимулирующий эффект ПУФА-воздействия связан с образованием комплекса псорален - ДБК и выработкой специфических комплексных антител (2 ).

Перечисленные данные указывают на то, что дсоралены в сочетании с УФА-излучением вызывают в коже разнообразные фотореакции, но на основании имеющихся в литературе данных нельзя однозначно решать, какая из них играет ведущую роль при ПУФА-терапии псориаза.

ПУФА-терапия используется для лечения не только псориаза, но и других дерматозов. Она является практически единственным относительно эффективным методом лечения локальных нарушений пигментации кожи - витилиго ( 42 ). Описано успешное применение ПУФА для лечения Pustulosis plantaris et palmaris ( 74 ), а также ОДНОЙ ИЗ форм облысения - Allopecia areata . Курс лечения состоит из 70-80 сеансов облучения, рост волос наблюдается уже после 25-30 сеансов. В дальнейшем волосяной покров оставался устойчивым ( 114) . л

В литературе обсуждается возможность использования ПУФА-воздействия для лечения рака. Был изучен эффект ПУФА на клетки асцитной карциномы Эрлиха. Показано ингибирование их способности к делению и синтезу макромолекул (2 ). В клинической практике ПУФА-терапия рака пока не используется. Трудности связаны с необходимостью подведения УФА-излучения непосредственно к опухоли. Если опухоль находится во внутренних органах, то могут использоваться световоды, вводимые хирургическим путем.

Применение QMQTL и УФА-излучения в эксперименте на животных продемонстрировало хороший фунгицидный эффект и рекомендуется для применения в клинике ( 57 ).

Сравнительное изучение эффективности ПУФА- и рентгенотерапии красной волчанки выявило примерно одинаковую их эффективность ( U6). Учитывая неионизирующий характер УФА-излучения, авторы указанного исследования отдают предпочтение ПУФА-терапии.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Мошнин, Михаил Витальевич

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено, что антиоксидант ионол ингибирует фотосен-сибилизированную 8-метоксипсораленом (8-МОП) эритему кожи человека.

2. Показано, что антиоксиданты ионол и (А -токоферол инги-бируют сенсибилизированное 8-МОП фотоокисление липидов и не влияют на фотоприсоединение 8-МОП к двуспиральной ДНК и на инактивацию фермента лизоцима. Сделан вывод, что в основе индукции ПУФА-эритемы лежат реакции сенсибилизированного 8-МОП фотоокисления липидов.

3. Фотосенсибилизированные 8-МОП эритема и окисление липидов протекают по свободнорадикальному механизму, синглетный кислород, очевидно, не играет заметной роли, так как оба процесса примерно одинаково эффективно ингибируются «^-токоферолом и ионолом, хотя известно, что ионол в 100 раз хуже тушит синглетный кислород, чем cL -токоферол.

4. Выявлен новый механизм фотосенсибилизированного 8-МОП окисления ненасыщенных липидов. Фотоокисление осуществляется в две стадии. На борзой под действием УФА-излучения происходит окисление 8-МОП. На второй стадии, протекающей без облучения, фотоокисленный 8-МОП окисляет ненасыщенные лилиды.

5. На коже больных псориазом показано, что терапевтическая эффективность комбинированного воздействия псоралены + УФА-изл . лучение (ПУФА-терапия) не снижается в присутствии ионола, тогда как эритемогенная активность резко падает. На этом основании предполагается, что в основе эритемы и ПУФА-терапии псориаза лежат различные фотохимические реакции псораленов.

6. Предложен и испытан в клинике новый способ лечения псориаза, заключающийся в том, что вместе с псораленами на кожу наносят антиоксидант ионол и затем подвергают кожу УФА-облучению. Способ позволил сократить число сеансов ПУФА-терапии, необходимое для выздоровления, в 1,5 + 0,1 раза и уменьшить суммарную дозу УФА-облучения в 1,2 ± 0,1'раза.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Молекулярные механизмы реакций, протекающих при комбинированном воздействии псораленов и УФА на биологические объекты представляют существенный интерес для исследователей, работающих в различных областях биологии и медицины. ПУФА-воздействие широко применяется в клинике кожных болезней для лечения псориаза ( 8 ), витилиго ( 83 ) и других дерматозов, генетики ис \ пользуют псоралены как молекулярные зонды для изучения механизмов репарации повреждений ДНК (3 ), проведены первые опыты по получению вакцин путем ДУФА-воздействия на культуру вирусов ). \

Расшифровка механизмов реакций, происходящих при ПУФА-терапии псориаза, может быть шагом к пониманию этиологии и, особенно, патогенеза этого заболевания.

Основной задачей нашей работы было сопоставление первичных фотохимических реакций на молекулярном уровне с фотобиологическими процессами, вызываемыми ПУФА-воздействием на различных биологических объектах.

Известно, что псоралены могут вступать в фотохимические реакции с рядом биологически важных молекул - с белками ( gg ), ДНК ( ^ ), липидами ( * ). Описано также несколько фотобиологических процессов, индуцируемых псораленами и УФА-облучением -ПУФА-терапия ( 8 ), ПУФА-эритема кожи ( 80), бактерицидное действие ( ) и другие. Роль тех или иных фотохимических реакций в индукции фотобиологических процессов неясна, для ответа на этот вопрос можно применить как методический подход метод ингибиторного анализа - избирательное ингибирование определенного класса фотореакций в модельной системе и проверка действия этих ингибиторов на фотобиологические процессы.

Рассмотрим особенности каждого типа фотохимических реакций псораленов с биомолекулами.

Относительно реакций псорален - ДНК из литературы известно, что: эти фотореакции не нуждаются в присутствии кислорода ( 44 ), фотореакции предшествует образование темнового комплекса лсорален-ДНК ( 52 ), механизм реакций - свободнорадикальный ), в результате образуются ковалентные моноаддукты псора-\ лен - пиримидиновое основание ДНК, а также диаддукты - поперечные сшивки между двумя нитями ДНК ( 21 )• Нами обнаружено, что фотоприсоединение 8-МОП к двуспиральной ДНК не ингибируются антиоксидантами ионолом и с( -токоферолом.

О фотореакциях псорален-белок из литературы известно, что: псоралены легко образуют комплексы с белками ( 91 ), фотохимические реакции псорален - белок на 100$ зависят от присутствия кислорода ). Неизвестно, какие молекулы псораленов - свяч завшиеся или свободные - вступают в фотохимические реакции.Этот вопрос важен для понимания механизма реакции, так как известно, что предварительное темновое связывание способствует протеканию последующей фотохимической реакции по свободнорадикальному механизму, в случае участия в реакции псорален - белок свободных, находящихся в растворе молекул фотосенсибилизатора, нельзя исключить возможность участия в этой фотореакции синглетного кислорода,подобный механизм широко обсуждается в литературе ( 91,63,75 ).

Нами показано, что антиоксидант ионол не влияет на инактивацию фермента лизоцима при ПУФА-воздействии.

Механизмы фотореакций поораленов с липидами в доступной литературе освещены сравнительно слабо, известно лишь, что: эти реакции нуждаются в присутствии 02, считается, что реакции идут с участием синглетного кислорода (I ), показано ингиби-рование фотосенсибилизированного 8-МОП окисления липидов (к -токоферолом (I ). л

Нами показано, что: эти фотореакции протекают по свободно-радикальному механизму потому, что антиоксиданты -токоферол и ионол одинаково эффективно их ингибируют. Свободнорадикальные реакции могут протекать двумя путями - непосредственная атака свободными радикалами 8-метоксипсоралена молекул липидов, кроме того, нами обнаружен новый механизм фотосенсибилизированного псораленами окисления, который осуществляется в две стадии: образование фотоокислеиного 8-МОП (по свободнорадикальному механизму) и взаимодействие 02-8-МОП с субстратом окисления.

Таким образом, из трех видов изученных фотореакций: псора-лен-ДНК, псорален-белок и псорален-липиды только фотохимическое взаимодействие псораленов с липидами ингибируется антиок-сидантами.

В нашей работе изучено влияние антиоксидантов и на фотобиологические эффекты псораленов.

Из литературы известно, что бактерицидный эффект ПУФА-воздействия является следствием фотоприсоединения псораленов к ДНК (4 ). Нами показано, что ионол не предотвращает гибель культуры е.coll. Этого следовало ожидать, так как антиоксиданты не ингибируют фотореакции дсорален-ДНК.

В работе ( 32 ) высказана точка зрения, что ПУФА-эритема возникает в результате фотореакций псораленов с ДНК, позже в нашей лаборатории получены данные о том, что сС -токоферол способен ингибировать ДУФА-эритему. Результаты опытов указывают на ведущую роль реакций фотосенсибилизированного окисления липидов в индукции ПУФА-эритемы и позволяют исключить участие син-глетного кислорода в фотореакциях данного типа.

Относительно механизма терапевтического эффекта при ПУФА-терапии псориаза в литературе существует точка зрения, что ведущая роль в развитии этого процесса принадлежит фотореакциям псораленов с ДБК ( ^ ). Нами показано, что терапевтический эффект ионолом не ингибируется; если в основе терапии лежат действительно реакции псораленов с ДНК, то отсутствия ингиби-рования антиоксидантами терапевтического эффекта следовало ожидать, поскольку фотореакции псораленов с нативной ДНК не чувствительны к антиоксидантам (см.выше). Однако, учитывая тот I факт, что сенсибилизированная псораленами фотоинактивация ферментов также не чувствительна к присутствию антиоксидантов, нельзя исключить участия фотореакций псорален-белок в реализации терапевтического эффекта при ПУФА-терапии псориаза. Этот вопрос остается открытым.

Таким образом, из трех фотобиологических процессов - бактерицидного эффекта, терапии псориаза и ПУФА-эритемы только развитие эритемы ингибируется антиоксидантами.

На основании данных ингибиторного анализа можно сделать вывод, что ПУФА-эритема и терапевтический эффект при ПУФА-тера-лии псориаза обусловлены различными фотохимическими реакциями.

На основании вышеизложенного материала можно предложить следующую схему связи первичных фотореакций псораленов с фотобиологическими эффектами:

Поскольку ПУФА-эритема, с одной стороны, не связана с терапевтической эффективностью ПУФА-воздействия при псориазе, а с другой - является лимитирующим фактором для увеличения продолжительности сеансов облучения при проведении лечения, нами была предпринята попытка ингибировать у 19 больных ПУФА-эритему в процессе ПУФА-терапии псориаза. Данные, полученные в результате клинических испытаний, показали, что вследствие увеличения разовых доз облучения число сеансов, необходимое для достижения клинического выздоровления, сокращено в 1,5 раза, а суммарная доза УФА-облучения уменьшилась в 1,25 раза. Таким образом, комбинированное применение псораленов и антиоксиданта ионола в сочетании с УФА-облучением может быть рекомендовано как новый, более эффективный способ лечения псориаза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мошнин, Михаил Витальевич, Москва

1.Абиев Г.А., 1980.

2. Молекулярные механизмы индукции эритемы кожи, фотосен-сибилизированной 8-метоксипсораленом. Автореферат канд. диссертации. Баку.

3. Бабаянц Р.С.,Владимиров В.В.,Куликова Е.П.,Панички-на Г.С. 1980.

4. Лечение псориаза методом фотохимиотерапии (ПУФА). Вестн. дерматол.венерол., 10, № I, стр.4-7.

5. Белогуров А.А.,Зуев А.В.,Завигельский Г.Б., 1976. Репарация моноаддуктов и диадцуктов 8-метоксипсоралена у бактериофагов и бактерий. Молек.биол., 10, № 4, стр. 857-867.

6. Белогуров А.А.,Завигельский Г.Б., 1978.

7. Механизм инактивирующего действия фотосенсибилизатора 8-метоксипсоралена на бактерии и бактериофаги. Генетика, 14, № 2, стр.321-327. б.Бурлакова Е.Б.,Алесенко А.В.,Молочкина Е.М.,Пальми-на Н.П.Драпова Н.Г., 1975.

8. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М., "Наука".6.Бурлакова Е.Б.,1975.

9. Биоантиоксиданты и синтетические ингибиторы радикальных процессов. Успехи химии, т.XI 1У, вып.10, стр.187I-1886.

10. Владимиров Ю.А.,Арчаков А.И.,1972.

11. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.,"Наука".

12. Каламкарян А.А.,Марзеева Г.И.,Кирсанова М.М.,1979.

13. Первый опыт фотохимиотерапии больных псориазом в СССР. Вестн.дерматол.венерол., № I, стр.7-12.

14. Конев С.В.,Волотовский И.Д.,1974. Фотобиология. Издательство БГУ им.Ленина, Минск.

15. Красновский А.А.мл.Шапошникова М.Г.,Литвин Ф.Ф.,1974. Участие синглетного кислорода в фотохемилюминесценции, фотоокислении и фотосенсибилизирующем действии хлорофилла "а". Биофизика, 19, вып.4, стр.650-654.1. Н.Паркер С., 1972.

16. Фотолюминесценция растворов. М.,нМир".12.Петренко Ю.М.,1978.

17. Кинетика взаимодействия закисного железа с окисленными липидами и возможность хемилюминесцентного определения гидроперекисей. Автореферат канд.дисс.,Москва.

18. Потапенко А.Я.,Абиев Г.А.,Пликетт Ф.,1980. Ингибирование </-токоферолом эритемы кожи, фотосенсиби-лизированной 8-метоксипсораленом. Бюлл.эксперим. биол. мед., 89, № 5, стр.560-563.

19. Н.Рабинович М.И.Девин П.К.,1970. М., "Наука".

20. Рощупкин Д.И.,Потапенко А.Я.,Клебанов Г.И., 1975. Практикум по биофизике. М.,2-й МОЛГМИ, часть I, стр.191.

21. Сороковой В.И.,Путвинский А.В.,Рощупкин Д.И.,Алимов Г.А., Владимиров Ю.А., 1974.

22. Получение стабильных унифицированных липосом с помощью замораживания-оттаивания. Комплексный сборник изобретений и рацпредложений медицинских ВУЗов и научно-исследовательских институтов РСФСР. Иваново, стр.223-225.17.Храпова Н.Г.,1977.

23. Кинетические особенности действия токоферолов как антиоксидантов. Биофизика, 22, № 3, стр.436-443.18.Храпова Н.Г., 1975.

24. Изучение антирадикальной активности токоферолов хеми-люминесцентным методом. В сб.Витамины, 8."Наукова думка", Киев, стр.22-30.19.Шляпинтох В.Я.,1979.

25. Фотохимические превращения и стабилизация полимеров. М., "Химия".

26. АИ R.,Agarwala S.С. ,1974.1. vitro and in vivo effect of normal and irradiated psoralen on glucose oxidation of brain and liver. Enzyme, 18, N 6, 321-326.

27. Asakawa Т., Matsushita S., 1980.

28. Coloring conditions of Thiobarbituric Acid Test for Detecting Lipid Hydroperoxides. Lipids, 1J5, N 3, 137140.

29. Averbeck D.,Chandra P.,Biswas R.K.,1975. Structural Specifity in the Lethal and Mutagenic Activity of Furocoumarins in Yest Cells. Rad. and Envi-ronm. Biophysies, 12, N 2, 241-252.

30. Bensasson R.V.,Land E.D.,Salet C.,1978.

31. Triplet excited state of furocoumarins: riaction With nucleic acid bases amino acids. Photochem.Photobiol., 27, N 3, 273-280.

32. Berncheim F.,Berncheim M.L.C.,Wilbur C.M.,1948.

33. The reaction between thiobarbituric acid and the oxidation products of certain lipids. 0. Biol. Chem., 174, N 1, 267-264.

34. Bevilacqua R.,Bordin F.,1973. Photo-C^-cycloaddition of psoralen and pirimidine bases: effect of oxygen and paramagnetic ions. Photochem. Photobiol., 17, N 3, 191-194.

35. Bligh E.G.,Dyer W.O., 1959.

36. A rapid method of total lipid extraction and purification. Can.0.Biochem.Physiol., 37, N 8, 911-917.

37. Brabcham D.E.,Lee 3., 1976.

38. Exited states interactions of oC-tocopherol and molecular oxygen. O.Phys.Chem., 80, N 20, 2292-2296.29.Bridges D.A.,1978.

39. Possible long-term hasards of photochemotherapy with psoralens and near ultraviolet light. Clin.and Exp. Dermatol., 3, N 4, 349-353.

40. Cannistraro S.,Van der Vorst A.,1978.

41. Formation photosensibilisee du radical anion du pso-ralene. Biochim.Biophys.Acta, 476, N 2, 166-177.

42. Cannistraro S.,Van der Vorst A.,1977.

43. ESR and optical absorption evidence for free radical involvement in the photosensitizing action of furocoumarin derivatives and for their singlet oxygen production. BBA, 476, N 2, 166-177.

44. Caporale G.,Musajo L. ,Rodighiero G.fBaccichetti F.,1967. Skin-Photosensitizing activity of some methylpsoralens. Experientia, 23, N 12, 985-986.

45. Cech T.,Pathak M.A.,Biswas R.K., 1979.

46. An electron microscopic study of the photochemical cross-linking of DNA in guinea pig epidermis by psoralen derivates. BBA, 562, N 2, 342-360.

47. Cole R.S.,Levitan D.,Sinden R.R., 1976.

48. Dall'Acqua F.fMarciani S.,Rodighiero G., 1969. Photoreactivity (3655 A) of various skin photosensitizing furocoumarins with nucleic acid. Z.Naturforschg., 246, 307-314.

49. Dall'Acqua F.,Marciani S.,Vedaldi D.,Rodighiero G., 1974. Studies on the Photoreactions (365 nm) between DNA and some methylpsoralens. BBA, 353, N 3," 267-273.

50. Dall'Acqua F.,Magno S.M.,Zambon F.,Rodighiero G.,1979. Kinetic analysis of the photoreaction (365 nm) between psoralen and DNA. Photochem.Photobiol., 29, N 3, 489-495.

51. Dall'Acqua F.,Terbojevich M.,Marciani S.,Vedaldi D.,1. Recher M.,1978.1.vestigation on the dark interaction between furocou-marins and DNA. Chera.-Biol. Inteact., 21,, N 1, 1o3-115.

52. Dall'Acqua F.,Caffieri S.,Rodighiero G.,1978. Fluorimetric determination of 4',5'-cycloadducts in the DNA-psoralen photoreaction. Photochem.Photobiol., 27, N 1, 77-79.

53. Daniels F.,Imbrie I.D.,1958.

54. Comparison between visual grading and reflectance measurement of erythema prodused by sunlight. D.Invest. Dermatol., 30, N 6, 295-304.

55. Danuo K.,Horio T.,0zaku M.,Imamura S., 1983. Topical 8-methoxypsoralen photochemotherapy of psoriasis: a clinical study. Brit.0.Dermatol., 108, N 5, 519-524.

56. Derios G.,Chau I.T.,Black M.S.,Rudolph A.H.,Knox I.M., 1978.

57. Systemic protection by antioxidants against UVL-indu-ceed erythema. 0.Invest.Dermatol., 70» N 3, 123-125.44.Epstein CJ.H., 1977.

58. Photomedicine. In:"The Science of Photobiology". Ed. Smith, K.C., A Plenum Rosetta Edition, N.Y.,175-207.

59. Everett M.A.,Sayre R.M.,Olson R.S., 1969. Physiologie Response of Human Skin to Ultraviolet Light. In: "The biologie effect of ultraviolet radiation (with epidermis on skin), ed.F.Urbach, Oxford, Pergamon Press, 181-186.

60. Fujita H.,Sano M.,Suzuki K.,1979.

61. Factors influencing the near UV effect on DNA in thepresence of 8-methoxypsoralen: renaturability DNA. Photochem.Photobiol., 29, N 1, 71-74.

62. Fujita H.,Katakami M.,1977.

63. Effect of paramagnetic species on 8-methoxypsoralen-sensitized photoinactivation of bacteriophage lambda. Photochem.Photobiol., 26, N 6, 647-649.

64. Gast W.,Haustein U.F.,Barth CJ.,Rytter M., 1980.1. vitro photochemical effects on PHA-stimulated lum-phocytes. Paper presented on the XX Congress of the European Academy for Immunology. 6-10.10. 1980tVienna.49.Giese A.C.,1971.

65. Photosensitization by natural pigments. Photophysio-logy, 6, chapter 3, 77-129.

66. Glass K.,Pliquett F.,Grimm E.,Potapenko A.0a.,Abij-ev G.A.,Roschupkin D.I.,Vladimirov Ou.A.,1979. UV-Sensibilisirung von Lipidmembranen durch 8-meth-oxypsoralen. Wiss.Z.Karl-Marx-Univ., Leipzig, Math. Naturwiss, R., 28, N 2, 148-152.

67. Goyal G.C.,Grossweiner L.I.,1979.

68. The effect of DNA binding on initial 8-methoxypsora-len photochemistry. Photochem.Photobiol., 29, N 4, 847-850.52.Gray 3.1.,1978.

69. Measurment of Lipid Oxidation: A Rewiew. O.Amer.Oil Chera.Soc., 55, N 6, 539-546.

70. Greenbery R.A.Eaglstein W.H.,Turnier H.,Houdek P.V., 1975.

71. Orally given indomethacin and Blood flow response to UVL. Arch.Dermatol., 111, N 3, 328-330.

72. Gschnait F.,Brenner W.,Wolff K., 1978. Photoprotective Effect of a Psoralen-UVA-Induced Tan. Arch.Dermatol. Res.263. N 2, 181-188.55.Hearst D.E.,1979.

73. Photochemical fixation of the nucleic acid double helix utilizing psoralens. Chem.and Biochem.Appl.Lasers., 4, N.Y., e.a., 389-403.

74. Horio T.,VVatanabe S.,1981.

75. Photosensitization of Trichophyton with 8-methoxypso-ralen to UV-A light radiation. Brit .CJ.Dermatol., 104, 397-404.57.K51mel K.,Glasen M.,1978.

76. The discrimination of UV-erythema and pigmentation by measuring spectral reflectance. Arch.Dermatol.Res., 461, N 1, 105-106. 58.l<raemer K.H. ,Weinstein G.D.,1977.

77. Decreased thymidine incorporation in circulating Leukocytes after treatment of psoriasis with psoralen and long wave ultraviolet light. 0.Invest.Dermatol., 69, N 2, 211-214.

78. Lange B.,Meffert H.,B6hm F.,1980. Chemolumineszentersuchung der Bindung von 8-Methoxy-psoralen an Proteine und Lymphozytenoberflshen. Dermatol.Monatsschr. ,166, N 9, 599-604.

79. Lanthales M.,Hofmann C.,Plevig G.,1979.1. vivo autoradiografie investigation of epidermis in psoriatics under oral 8-MOP-UVA-therapy. Arch. Dermatol.Res., 264, N 1, 114-117.

80. Lerman S.,Megaw 3.,Willis I. ,1980.

81. The photoreactions of 8-methoxypsoralen with tryptophan and lens proteins, Photochem.Photobiol., N 3, 31, 235-242.63.lessus A.,Reunala T.,Idanpaa-Heikkila I.,Duvakoski Т., Salo 0.,1981•

82. PUVA-treatment and skin cancer: a follow-up study. Acta Dermatovener,, 61, 141-145.

83. Levan N.E.,Hyman C,,Freedraan R.,Rohter F., 1964. Biphasic changers in cutaneous effective blood flow after U.V.irradiation. O.Invest.Dermatol.,43, N 6, 451 -452.65.Luo Ren Pan, 1978.

84. Photobiological action of 8-methoxypsoralen to the respiratory response and lipid peroxide formation on mitochondria. O.Kurume Med., 41^, N 8-9, 723-735.

85. Mantulin W.W.,Song P.-S.,1973.

86. Excited States of Skin-Sensitizing Coumarins and psoralens. Spectroscopic Studies. 3.Amer.Chem.Soc., 95, N 16, 5122-51-29.

87. Morison W.L.,Paul B.S.,Parrish 3.A.,1977.

88. The Effects of Indometacin on Long-Wave Ultraviolet Indused Delayed Erythema. 3.Invest.Dermatol., 68, N 3, 130-133.

89. Meffert H.,Dizel W.,Gunter W.,Sonnighsen N.,1976.

90. Photochemotherapie der Psoriasis mit 8-Methoxypsoralen und UVA.II.Bindung des Photosensibilisators an Protein. Dermatol.Monatsschr.f 162, N 11, 887-892.

91. Meffert H.,Diezel W.Sonnighsen N.,1980. Inaktivierung und Protektion von Phosphofructokinase durch Bechandlung mit 8-MOP und UVA. Dermatol.Monatsschr., 166, N 1, 43-44.

92. Meffert H.,Metz D.Sonnighsen N.,1980. Stabilisierung der Erythrozytenmembran gegenuber UVA-Bestrahlung durch 8-MOP. Dermatol.Monatsschr.#166,1. N 3, 160-161.

93. Meffert H.,Bohm F.,Sonnighsen N.,1980. Lerstorung peripherer Lymphozyten durch 8-MOP + UVA. Dermatol.Monatsschr.,166, N 4, 244-246.

94. Monger E.L.,Bchattacharjee H.R.,Hammond G.S.,1979. Quenching of the fluorescence of 8-methoxypsoralen by protons. Photochem.Photobiol.,29, N 2, 393-394.

95. Mizuno N.,Uematsu S.,0hio M.,1976.

96. Methoxalen and Irradiation: Treatment for Pustulosis Palmaris et Plantaris. Arch.Dermatol., 112, N 6, 883884.

97. Mol de N,Beyerbergen van Henegouwen G.M.J.,1979. Formation of singlet molecular oxygen by 8-methoxypsoralen. Photochem.Photobiol.,30, N 3, 331-335.

98. Morcuse R.,3ohansson L., 1973.

99. A Review. O.Amer.Oil Chem.Soc., 50, 387.

100. Muller-Runkel R., Grossweiner L.I.,1981.

101. Dark Membrane Lysis and Photosensitization by 3-Car-betoxypsoralen. Photochem.Photobiol.,33, N 3, 399402.

102. Musajo L.,Rodighiero G.,Caporale G.,Dall'Acqua F., Marciani S.,Bordin F.,Baccichetti F.,Bevilacqua R., 1974.

103. Photoreactions between skin-photosensitizing furocou-marins and nucleic acid. In:"Sunlight and Man"(ed.T.B. Fitzpatrick), 369-387, Tokyo.

104. Musajo L.,Rodighiero G.,1972. Photo-C^-cyclo-addition reactions to the nucleic acids. Research Progress Organic, Biological and Medical Chemistry. Eds. V.Gallo and L.Santamaria. North-Holland Publishing Company Amsterdam. Ill, N 1, 115182.

105. Musajo L.,Rodighiero G.,1962.

106. The Skin-Photosensibilizing Furocoumarins. Experientia, 18, N 4, 153-161. 80.0hkawa H.,0hishi N.,Dagi K., 1978.

107. Parrish 3.A.,Fitzpatrick Т.В.,Shea C.,Pathak A.,1976. Photochemotherapy of vitiligo. Use of Orally Administered Psoralens and a High-Intensity Long-Wave Ultraviolet Light System. Arch.Dermatol.,112, N 11, 15311534.

108. Pathak M.A.,Fitzpatrick T.B.,1959.

109. Bioassay of natural and synthetic furocoumarins: Psoralens. Nature, 185, N 4710, 382-383.

110. Pathak M.A.,Kramer D.M.,1969. Photosensitization of skin in vivo by furocoumarins (psoralens). BBA, 195, N 1, 197-206.

111. Pathak M.A.,Worden L.R.,Kaufman K.D., 1967.

112. Effect of structural alterations on the photosensitizing potency of furocoumarins (psoralens) and related compounds. J.Invest.Dermatol.,48, N 2, 103-118.

113. Peterson S.P.,Berns M.W.,1978.

114. Effect of psoralen and near UV on vertebratr cells in culture: comparison of laser with standard lamp. Photochem.Photobiol.,27, N 3,367-370.

115. Plewig G.,Hofmann С.,Braun-Falco 0.,1978. Photoallergic Dermatits from 8-Methoxypsoralen. Arch. Dermatol.Res., 261, N 2,201-211.

116. Pliquett F.,Solncev M.K.,1978. Thermolumineszenz biologischer Objekte. Fortxchritte der experimentellen und theoretixchen Biophysik. Band 22.1978.VEB Georg Thieme Leipzig.

117. Pouhl I.Christophers E.,1979. Photoinactivetion of skin fibroblasts by sublethal dosages of 8-methoxypsoralen and UVA in vitro. Arch.Dermatol.Res.,264, N 1, 115.

118. Poppe W.,Grossweiner L.I.,1975.

119. Rodighiero G.,Musajo L.,Dall'Acqua F.,Marciani S., Caporale G.,Giavatta M.,1969.

120. A comparison between the photoreactivity of some fu-rocoumarins with native DNA and their skin-photosensitizing activity. Experientia, 25, N 5, 479-481.

121. Molecular and genetics basis of furocoumarins reaction. Mutat.Res., 39, N 1, 29-74. 96.Seki T.,Nozu K.,Kondo S.,1978.

122. Differential causes of mutation and killing treatment: monoadducts and cross-links. Photochem.Photobiol., 27, N 1, 19-24. 97.Silva E., 1979.

123. Rate constants studies of the dye-sensitized photoin-activation of lysozime. Rad.a Environm.Biophys.,16, N 1, 71-79. 98.Singh H.,Vadasz I.A.,1978.

124. Singlet oxygen: A major reactive species in the furocoumarins photosensitized inactivation of E.coli ri-bosomes. Photochem.Photobiol.,26, N 415, 539-545.

125. Sloper R.W.,Truscott T.G.,Land E.T.,1979.

126. Excited states of biomolecules. Photochem.Photobiol., 20, N 6, 527-532. 102.Song P.-S.Mantulin W.W.Meinturff D.,Flexner I.C., Harter M.L.,1975.

127. Photoreactivity of hydroxypsoralens and their photobi-ological effects in Bacillus subtilis. Photochem.Photobiol., 21, N 5, 317-324. 103.Stevens D.,Small R.D.,Perez S.R., 1974.

128. Theory of ultraviolet erythema. Photochem.Photobiol., 4, N 3, 453-458.

129. Vaatainen N.,Taskinen I.,1981.

130. Penetration of Trioxalen into Skin from Trioxalen Bathes. Arch.Dermatol.Res., 270, 157-158.

131. Veronese F.M.,Bevilacqua R.,Schiavon 0.,Rodighiero G., 1979.

132. Drug-protein interaction: plasma protein binding of furocoumarins. II farmaco, 34, N 8, 3-12.

133. Veronese F.M.Bevilacqua R.,Schiavon 0.Rodighiero G., 1978.

134. The binding of 8-methoxypsoralen by human serum albumin. II farmaco, 33, N 9, 667-675.

135. Veronese F.M.,Schiavon 0.,Bevilacqua R.,Rodighiero G.,1978.

136. Drug-Protein Interaction: 8-methoxypsoralen as photo-sensitizer of Enzymes and Amino Acids. Z.Naturforsch., 34, 392-396.

137. Von W.Helm, Pliqett F.,Piszov M.3u.,Potapenko A.CJa., Roschupkin D.I.,Anosov A.K.,Abijev G.A.,Babajev A.S.,1979.

138. Veranderung mechanoelectrischer und optischer Eigen-schaften der Haut durch UV-Wircung. Wiss.Z.Karl-Marx-Univ., Leipzig. Math.-Naturwiss.R.,28, N 2, 153162.

139. Von H.Meffert, Diezel W.,Sonnichsen N.,1980. Inactivierung und Protection von Phosphofruktokinase durch Behandlung mit 8-MOP und UVA. Dermatol.Monatsschr., 166, N 1, 43-44.

140. Waissmann I.,Hofmann C.,Wagner G.,Plewig G.,Braun-Falco 0.,1978.

141. PUVA-therapy for Alopecia areata. An Investigative study. Arch.Dermatol.Res.,262, N 3, 333-336.113.Wennersten G.,1979.

142. Membrane damage caused by 8-MOP and UVA-treatment of cultivated cells. Acta Derroato-Venerologica (Stockholm) , 59, N 1, 21-26.

143. Wirth H.,Ranner N.,Gloor M.,Osswald F./Schnyder U.W., 1981.

144. On the Influence of X-Ray Irradiation and Photochemo-therapy with 8-methoxypsoralen on the Subaceous Gland of the Syrian Hamster Ear. Dermatologica, 162, 321-326.

145. Wolff K.,Fitzpatrick T.D.,Parrish 3.A.,Gschnait F., Gilchrest B.,Honigsmann H.,Pathak M.A.,Tannenbaum L., 1976.

146. Photochemotherapy for Psoriasis with orally administered methoxalen. Arch.Dermatol., 112, N 7, 943-950.

147. Yamauchi R.,Matsushita S.,1977.

148. Quenching effect of tocopherole on the methyl linole-ate photooxydation and their oxidation products. Agric.Biol.Chem.,41, N 8, 1425-1430.

149. Yoshino I.,Tatsuo M.,Ohkido M.,1980.

150. Effect of UVA irradiation and 8-methoxypsoralen on squalene peroxide formation. Photochem.Photobiol., 2, N 2. 53-54.

151. Yoshikawa K.,Mori N.,Sakakibara S.,Mizuno N.,Song PtS., 1979.

152. Photoconjugation of 8-methoxypsoralen with proteins. Photochem.Photobiol.,29, N 6, 1127-1133.119.Yudis I.,1960.

153. The photooxidation of Dihydroxyphenilamine in the presence of 8-Methoxypsoralene. CJ.Araer.Pharm.Ass. ,49, N 7, 447-449.