Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов

Тихомирова, Ирина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов"

На правах рукописи

Тихомирова Ирина Александровна

РОЛЬ ЭКСТРАЦЕЛЛЮЛЯРНЫХ, МЕМБРАННЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ В ПРОЦЕССЕ АГРЕГАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ

03.00.13 — физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Ярославль — 2006

Работа выполнена на кафедре медико-биологических основ спорта ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет имени К.Д. Ушинского»

Научный консультант

доктор биологических наук, профессор Алексей Васильевич Муравьев

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор академик РАН и РАМН Всеволод Арсеньевич Ткачук

доктор медицинских наук, профессор Сергей Борисович Назаров

доктор биологических наук Евгений Витальевич Ройтман

Ведущая организация Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова

Защита состоится « 22 » ноября 2006 г. в 14 часов на заседании

диссертационного совета Д 212.307.02 при Ярославском государственном педагогическом университете им. К.Д. Ушинского по адресу: 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, 108

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета

Автореферат разослан « »

2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических на;

наук, профессор /

Л.Г. Зайцев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение газообмена является основной функцией эритроцитов. Оксигенация клеток и тканей организма в значительной степени зависит не только от способности гемоглобина связывать и высвобождать кислород, но также и от реологических свойств эритроцитов — их способности к деформации и объединению в агрегаты, поскольку клеточные функции осуществляются, в основном, через свободную поверхность их мембран. Эти свойства во многом определяют эффективность перфузии на уровне микроциркуляции (Куприянов В.В. и соавт., 1975; Левтов В.А. и соавт., 1982).

Эритроциты человека в физиологических условиях объединяются в агрегаты при снижении скоростей сдвига до критического уровня. Формирование таких агрегатов обуславливает до 60% венозного сопротивления (Cabel М. et al., 1997), и степень агрегации эритроцитов считается одной из важнейших детерминант неньтоновских свойств крови, в том числе и в условиях течения in vivo (Левтов В.А. и соавт., 1982; Фирсов Н.Н., Джанашия П.Х., 2004).

Агрегация эритроцитов in vivo оказывает многофакторное комплексное влияние на сопротивление кровотоку и оно может реализо-вываться посредством следующих механизмов: 1) за счет уменьшения упорядоченности линейного течения при увеличении размера движущихся частиц (Baskurt O.K. et al., 1997); 2) повышением затрат энергии на разобщение клеток в условиях микроциркуляции (Vicaut Е., 1995); 3) агрегация способствует аксиальному дрейфу эритроцитов и образованию краевого плазменного слоя (Goldsmith H.L. et al., 1989; Cokelet G.R. et al., 1991). Повышенное аксиальное скопление эритроцитов способствует снижению локальной вязкости в пристеночной зоне сосуда (Reinke W. et al., 1987; Alonso С. et al., 1993; Suzuki Y. et al., 1996), тем самым модулируя активность сосудистых регуляторных механизмов, активируемых механическим стрессом. Это выражается в ингибирова-нии генерации NO эндотелием (Baskurt O.K. et al., 2004), затруднении процесса деоксигенации и снижении отдачи кислорода тканям при существенном увеличения пристеночного слоя плазмы, выступающего в качестве барьера для диффузии кислорода (Tateishi N. et al., 2001, 2002).

Значение агрегации эритроцитов особенно возрастает в условиях патологии, поскольку при этом изменяются степень агрегации, скорость агрегатообразования, устойчивость образующихся агрегатов, их размеры и морфология (Галенок В.А. и соавт., 1987; Селезнев С.А. и соавт., 1985). Повышенная степень агрегации ведет к ухудшению окси-генации тканей, способствует развитию ишемии и тромбоза, приводит к нарушению микроциркуляции органов и тканей (Чернух A.M., 1984; Koenig W. et al., 1988; Mchedlishvili G., Maeda N., 2001; Meiselinan HJ., 2002).

Несмотря на то, что исследования процесса объединения эритроцитов в агрегаты ведутся уже достаточно давно, механизмы этого явления остаются предметом предположений и гипотез (Fabry T.L., 1987; Brooks D„ 1988;Bäumler I. et al., 1999; Neu В., Meiselman H.J., 2002).

В более ранних экспериментальных работах по изучению агрегации эритроцитов основное внимание уделялось влиянию суспензионной среды (плазмы или растворов высокомолекулярных соединений) на межклеточные взаимодействия (Maeda N. et al., 1984; Donner M. et al., 1989). В последнее время внимание исследователей все больше фокусируется на клеточных факторах агрегации, т.е. на свойствах самих эритроцитов (Nash G.B. et al., 1987; Meiselman H„ 1993; Neu B. et al., 2003).

Функциональное состояние эритроцитов в значительной степени зависит от физико-химических свойств и химического состава плазмы крови, поскольку, являясь высокоспециалгоированной клеткой, эритроцит не способен к основным видам биосинтеза а, следовательно, внутриклеточной регенерации (Блохина Т.А. и соавт., 2001).

Мембрана эритроцита, как и любой другой клетки, выполняет барьерную функцию, в то же время через нее осуществляется как активный, так и пассивный транспорт веществ. Мембрана является местом протекания важнейших ферментативных процессов и осуществления иммунных реакций. На своей поверхности она несет информацию о группе крови, на мембране имеется поверхностный электрический заряд, который играет важную роль во многих процессах, обеспечивающих жизнедеятельность клетки.

При передаче сигнала гормонами, простагландинами и другими биологически активными веществами основные молекулярные компо-: ненты, участвующие в регуляции, локализованы в клеточных мембранах (Черницкий Б.А., Воробей A.B., 1981).

что эти клетки обладают значительным набором сигнальных молекул (Minetti G., Low P.S., 1997; Tuvia S. et al., 1999; Bhattacharaya S. et al., 2001; Hines P.S. et al., 2003), что свидетельствует об участии красных клеток крови в регуляторных процессах, направленных на интеграцию функций организма.

Таким образом, процесс объединения эритроцитов в агрегаты является сложным, многофакторным и оказывает существенное влияние на выполнение кровью ее основной кислородтранспортной функции. Недостаточная изученность механизмов агрегатообразования как в физиологических условиях, так и, особенно, при патологии затрудняет возможность управления этим процессом и коррекцию возможных негативных последствий.

Кроме того, процесс объединения эритроцитов в агрегаты представляет собой удобную модель для выявления общих закономерностей межклеточных взаимодействий.

Все вышеизложенное предопределило тему настоящего исследования.

Цель работы: комплексное изучение влияния физико-химических свойств плазмы, мембранных и внутриклеточных факторов на процесс объединения в агрегаты эритроцитов человека.

Задачи исследования.

1. Оценить вклад агрегации эритроцитов в проявление неньютоновских свойств крови в условиях низкосдвигового течения и провести сравнительный анализ методов оценки агрегатного состояния крови in vitro.

2. Определить роль изменений основных физико-химических констант плазмы (уровня кислотности, содержания ионизированного кальция, белков свертывающей системы крови) в агрегатообразовании эритроцитов.

3. Изучить влияние регуляторных молекул (гормонов, нейроме-диаторов, паракринных факторов) на процесс объединения в агрегаты красных клеток крови.

4. Исследовать взаимосвязь адренореактивности организма и агрегации эритроцитов под действием адренергических соединений в норме и при патологии.

5. С учетом возможной рецепторной инициации провести анализ механизмов транедукции сигнала при гормональных воздействиях на эритроциты.

6. Выяснить, влияют ли антигенные детерминанты мембран эритроцитов на процесс их объединения в агрегаты под действием адренергических соединений.

7. Оценить взаимосвязь агрегации эритроцитов с их мембранными свойствами: электрофизиологическими характеристиками, проницаемостью и сорбционной способностью.

8. Изучить роль внутриклеточного ионизированного кальция в процессе агрегации эритроцитов.

9. Оценить взаимодействие эритроцитов при изменениях их ионного гомеостаза и в условиях энергодефицита.

' Научная новизна проведенного исследования заключается в том, что впервые проведено комплексное исследование эндогенных факторов, определяющих процесс агрегатообразования эритроцитов человека! в норме и при патологии.

Продемонстрировано влияние изменений уровня кислотности плазмы в физиологических пределах на агрегацию эритроцитов. Получены новые данные о влиянии катехоламинов, простагландинов и белков свертывающей системы крови на процесс агрегатообразования.

Впервые показана стимулирующая роль ионизированного кальция (как экстрацеллюлярного, так и внутриклеточного) в процессе объединения красных клеток крови в агрегаты. Показан дозозависимый характер изменения степени агрегации при повышении уровня свободного кальция плазмы. Установлены новые факты особенностей агрегатного поведения эритроцитов при открытии Гардош-каналов.

J Выявлены механизмы адренергических воздействий на эритроциты: показано, что при высоких концентрациях катехоламинов их влияние на процесс агрегатообразования эритроцитов опосредуется активацией а-адренергических рецепторов. Получены новые данные об особенностях проагрегантного действия p-адренергических соединений на эритроциты человека.

Впервые показана взаимосвязь адренореактивности организма и изменения агрегатного поведения красных клеток крови под действием катехоламинов. Установлены новые факты особенностей адренореактивности и агрегатных свойств эритроцитов под действием адренергических соединений в норме и при разных формах патологии.

Впервые зафиксировано влияние ABO групповой принадлежности эритроцитов на их агрегатные свойства под действием адренергических соединений. Показано, что степень выраженности влияния этих соединений зависит от мембранных антигенных детерминант. Выявлены особенности катехоламинового ответа клеток в зависимости от присутствия антигенов на эритроцитарной мембране.

Продемонстрировано отсутствие жесткой детерминированности агрегатных свойств эритроцитов величиной их поверхностного заряда, сорбционной способности и проницаемости мембран.

Впервые показано влияние изменений ионного гомеостаза красных клеток крови и их энергетического баланса на агрегатные свойства.

Экспериментально подтвержден существенный вклад процесса аг-регатообразования эритроцитов в проявление неньютоновских свойств крови при низкосдвиговом течении. Произведен сравнительный анализ ряда методов изучения процесса агрегатообразования in vitro с оценкой их информативности и адекватности. Усовершенствован комплекс методов исследования с целью повышения их точности и чувствительности.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные о вкладе процесса агрегатообразования в повышение вязкости крови при низких скоростях сдвига, о взаимосвязи агрегатных свойств и коагуляционного потенциала крови, обусловленности адренореактивности организма изменением мембранных свойств эритроцитов убедительно показывают важность процесса агрегатообразования эритроцитов в обеспечении кислородтранспортной функции крови и интеграции функций организма.

Получены новые данные о межклеточных взаимодействиях форменных элементов крови, механизмах их активации и ингибирования под действием физиологически активных соединений, ионного и энергетического баланса клетки, которые в сушественной мере пополняют существующее научное знание в этой области.

Установленное влияние гуморальных факторов с участием различных сигнальных молекул и активацией рецепторного аппарата клетки, ее транспортных систем на объединение эритроцитов в агрегаты позволяет выработать подходы к управлению процессом межэрит-роцитарных взаимодействий с целью предупреждения или коррекции возможных негативных последствий этого явления при стрессе или патологии.

Выявленные особенности агрегатного поведения эритроцитов разной ABO групповой принадлежности под действием катехоламинов, адренореактивности организма и степени агрегации при разных видах патологии могут послужить основой для разработки индивидуальных корригирующих воздействий.

Материалы диссертации расширяют представления о факторах и механизмах регуляции вязкости крови, создают новые направления в

гемореологии, важнейшем разделе физиологии крови,- Они могут быть использованы при чтении соответствующих разделов физиологии в вузах,' а также для совершенствования методов регуляции кровотока в сердечно-сосудистой системе человека.

Апробированные методики можно рекомендовать исследователям и медицинским работникам для оценки агрегатных свойств крови.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Физико-химические свойства и биологически активные вещества плазмы оказывают выраженное влияние на процесс агрегатообра-зования эритроцитов человека. Эти эффекты обусловлены модификацией клеточных свойств.

2. Адренореактивность организма человека в норме и при патологии различна. Изменения адренореактивности отражаются во влиянии адренергических соедииений на процесс объединения эритроцитов в агрегаты.

3. Проагрегантное действие катехоламинов обусловлено активацией адренорецепторов и сопровождается изменением ионного баланса клетки. .......

4. Антигенные детерминанты (ABO групповая принадлежность красных клеток крови) влияют на межэритроцитарные взаимодействия в присутствии адренергических соединений.

5. Изменения электрофизиологических характеристик, сорбци-онной способности и неспецифической проницаемости мембран эритроцитов не детерминируют процесс их агрегации.

6. Повышение уровня внутриклеточного ионизированного кальция в эритроцитах способствует их объединению в агрегаты.

7. Изменения ионного гомеостаза эритроцитов влияют на их способность к агрегатообразованию. В условиях энергодефицита клеток их агрегация интенсифицируется.

Апробация результатов работы.

Материалы, изложенные в диссертации, доложены и обсуждены на международных конференциях «Микроциркуляция и гемореология» (Ярославль 1997, 1999, 2001, 2003, 2005 гг.), конференции молодых ученых России с международным участием, посвящ. 240-летию ММА им. И.М. Сеченова «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 1998), на II международном конгрессе «Central European Vascular Forum» (Италия, Рим, 2000), на XI Европейской конференции по клинической гемореологии (Франция, Руан. 2000), на II Всероссийском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000), на ме-

ждународной конференции, посвящ. 75-летию со дня рождения A.M. Уголева «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2001), на XYIII съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Казань, 2001), на XI международном конгрессе по биореологии и IY международной конференции по клинической гемо-реологии (Турция, Анталья, 2002), на научно-практических конференциях «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике» (Санкт-Петербург, 2003, 2004, 2005), на XII Европейской конференции по гемореологии и европейской летней школе по биореологии (Болгария, София, 2003), на Третьей Всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2004), на XIX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004), на I и II Всероссийских научных конференциях с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2004, 2006), на III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием (Москва, 2004), на II Всероссийской научной конференции с международным участием «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечнососудистой хирургии» (Москва, 2005), на XIII Европейской конференции по клинической гемореологии (Италия, Сиена, 2005), на I съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005).

По теме диссертации опубликованы 53 печатные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 297 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием организации, материалов и методов исследования, 9 глав с изложением полученных результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 47 рисунками. Библиографический указатель включает в себя 597 наименований: 124 отечественных и 473 иностранных источника.

ОРГАНИЗАЦИЯ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводили на венозной крови доноров-добровольцев (лиц обоего пола) разных возрастных групп. Общее количество исследованных образцов крови составило 513.

Основной объем исследований выполнен на образцах крови молодых практически здоровых мужчин в возрасте от 18 до 22 лет при следующем распределении по этапам эксперимента: 1) оценка вклада агрегации эритроцитов в реологические свойства крови при низкосдви-

говом течении и сравнительная характеристика методов оценки процесса агрегатообразования (п=21); 2) изучение влияния уровня рН на агрегатные свойства эритроцитов (п=34); 3) оценка роли экстрацеллю-лярного кальция (п=32); 4) исследование влияния биологически активных веществ на агрегатные свойства эритроцитов (п=36); 5) изучение влияния электрофизиологических характеристик эритроцитов (п=62); 6) изучение вклада внутриклеточного свободного кальция (п=45); 7) изучение агрегации эритроцитов в условиях энергодефицита и при изменениях ионного гомеостаза клетки (п=23); 8) исследование механизмов влияния адренергических соединений на процесс агрегатообразования эритроцитов (п=92) и 18 образцов крови практически здоровых доноров-добровольцев женщин в возрасте от 19 до 24 лет; 9) оценка мембранных свойств эритроцитов (сорбциокной способности, проницаемости) (п=51) и кровь пациентов с гипертонической болезнью — лиц обоего пола в возрасте от 37 до 53 лет (п=31). При оценке степени агрегации эритроцитов и адренореактивности организма в норме и при патологии исследовали кровь здоровых мужчин (п=17) и лиц обоего пола с различными формами патологии: сердечно-сосудистыми заболеваниями (п=14); с дисциркуляторной энцефалопатией (п=16); с хронической обструктивной болезнью легких (п=7); с раком желудка (п=8) и сахарным диабетом (п=6).

В группах пациентов с различными формами патологии диагноз был поставлен лечащим врачом и подтвержден записью в амбулаторной карте. Исследование крови больных (за исключением пациентов с раком желудка) начинали после «периода отмывания» (не менее 7 дней), в течение которого они не принимали лекарственные средства. Часть больных вообще не лечилась до исследования длительное время.

Забор крови производился утром натощак из локтевой вены без наложения жгута в условиях клинической лаборатории квалифицированным медицинским персоналом после получения информированного согласия донора. В качестве антикоагулянта использовали гепарин (10 Ед/мл). Все измерения и манипуляции с кровью проводились в течение 4 часов после ее забора. Эритроциты использовались в экспериментах после отделения от плазмы центрифугированием и 3-кратной отмывки в 0,154 М растворе ЫаС1.

1. Методы оценки процесса агрегатообразования эритроцитов

1.1. Эритроциты ресуспендпровали в обедненной тромбоцитами аутологичной плазме при стандартном показателе гематокрита Ш = 0,5% и определяли степень агрегации с помощью метода оптической

микроскопии с последующей видеорегистрацией и компьютерным анализом изображения (Муравьев А.В. и соавт., 2003).

1.2. Степень агрегации эритроцитов определяли с помощью полуавтоматического агрегометра типа MAI, разработанного на основе метода H. Schmid-Schônbein (Myrenne, Германия). Образец крови подвергался вращению со скоростью сдвига 600 с"1, после остановки степень агрегации измерялась и подсчитывалась автоматически для двух интервалов времени — 5 и 10 секунд (М5 и Мщ). После высокосдвигового режима вращения степень агрегации измеряли при низкой скорости сдвига — 3 с"1 также в двух временных интервалах (М13 и Ml 10).

Динамический параметр D (Dj и Di0), равный отношению показателей степени агрегации М1/М (М15/М5 и М1ю/М10) , использовали для оценки влияния условий течения на процесс объединения эритроцитов в агрегаты (Schmid-Schônbein H., 1990).

1.3. Расчетные показатели из данных вискозиметрии и оценки суспензионной стабильности крови: оценку степени агрегации форменных элементов крови производили по L. Dintenfass (1972) как отношение объема эритроцитов, полученного в результате принудительного осаждения (центрифугирования), к аналогичному показателю после седиментации форменных элементов в покое (показатель агрегации ПА).

При сравнении вязкостей суспензий эритроцитов со стандартным показателем гематокрита (Ht=40) в разных (агрегирующих и неагреги-рующих) средах рассчитывали коэффициент агрегации (КА), равный их отношению (Катюхин Л.Н., 1995): ICA = т^/Пфр, где r[M - кажущаяся вязкость суспензии эритроцитов в плазме; т|фР — кажущаяся вязкость суспензии эритроцитов в физиологическом растворе.

Для численной оценки неньютоновских свойств крови использовали реологический коэффициент (РК), равный отношению кажущейся вязкости при низких скоростях сдвига к высокосдвиговой кажущейся вязкости (Шабанов В.А., 1972): РК = Т]7г|.

2. Методы оценки свойств плазмы и суспензионной среды

2.1. Концентрацию ионизированного Са2+ и уровень рН жидких сред (крови, плазмы, сыворотки, стандартных растворов) оценивали методом прямой потенциометрии с использованием рН-метра (рН-150, Беларусь).

Для определения содержания ионизированного кальция использовали кальций-селективный электрод, для измерения рН — стеклянный электрод.

2.2. С целью устранения возможного влияния плазменных факторов на процесс объединения эритроцитов в агрегаты в ряде случаев

степень агрегации оценивали в стандартной суспензионной среде с добавлением 3% реофортана (гидроксиэтилкрахмала), который в данной концентрации в буферном растворе обладает проагрегантными свойствами (Corry W.D. et al., 1983).

3. Методы оценки клеточных свойств

3.1. Измерения электрофоретической подвижности эритроцитов выполняли в микрокамере с плоскими хлор-серебряными электродами, в качестве электрофоретической среды использовали стандартный фосфатный буферный раствор (рН=7,38; 300 мОсм). Для вычисления потенциала эритроцитов использовали уравнение Смолуховского, определив электрофоретическую подвижность клеток и зная величины вязкости (г|) и диэлектрической постоянной среды (D).

3.2. Сорбциошгую способность эритроцитов определяли колори-метрированием по степени поглощения катионного (метиленовый синий) и анионного (метиловый оранжевый) красителей эритроцитарной массой.

3.3. Проницаемость эритроцитарных мембран оценивали по степени гемолиза клеток после инкубации в растворах с разным соотношением изотонического раствора мочевины и физиологического раствора. Рассчитывали общий средний процент гемолиза (СПГ) и средний процент гемолиза в области концентраций 50:50 и 55:45 (СПГ50/55) (Макшанова Г.П. и соавт., 2003).

3.4. Определение эритроцитарных антигенов системы ABO производили с помощью стандартных сывороток отечественного производства (НИИ г. Нижний Новгород) методом агглютинации на плоскости. Резус-принадлежность устанавливали экспресс-методом в пробирках.

3.5. Фракционирование эритроцитов по возрасту производили по методу J. Murphy (1973), основанному на различии в плотностях эритроцитов разного возраста.

4. Реологические измерения

4.1. Кажущуюся вязкость крови и суспензий эритроцитов со стандартным показателем Ht=40 в разных средах (плазме, физиологическом растворе) измеряли с помощью полуавтоматического капиллярного вискозиметра (Муравьев A.B. и соавт., 2005). На основания полученных показателей вязкости, измеренных при разных напряжениях сдвига, строили кривые вязкости в координатах вязкость — напряжение сдвига. Эти зависимости с высокой степенью достоверности аппроксимировались степенной функцией вида у=кх", характерной для псев-

допластичиых жидкостей, где к - показатель консистенции, п - индекс течения (Селезнев С.А. и соавт., 1985).

4.2. Измерение показателя гематокрита производили общепринятым методом с использованием микрогематокритной центрифуги ТН-21 (Германия).

4.3. Скорости оседания эритроцитов гепаринизированной крови измеряли в капилляре Панченкова по методу A. Westergren через интервалы времени 15, 30, 45 и 60 минут с последующим построением СОЭ-граммы (зависимости высоты столбика эритроцитов в мм от времени в минутах).

4.4. Эффективность доставки кислорода к тканям рассчитывали по формуле: Т = Ht/i], (S. Chien, 1987; J. Stoltz et al., 1991).

S. Методы оценки адренергических воздействий на свойства

эритроцитов

5.1. Определение адренореактивности организма производили по методу, предложенному Р.И. Стрюк и И.Г. Длусской (2003). Метод основан на факте торможения гемолиза эритроцитов, помещенных в гипоосмотическую среду, в присутствии p-адреноблокатора. В дополнение к стандартной методике оценки адренореактивности по ингиби-рованию гипоосмотического гемолиза эритроцитов в присутствии р-адреноблокатора пропранолола, параллельно исследовалась осмотическая резистентность эритроцитов в тех же условиях в присутствии эк-вимолярных количеств адренергических соединений: катехоламинов (адреналина и норадреналина), агонистов а- и (3-адренорецепторов (клонидина и изопротеренола), p-блокатора атенолола и а-антагонистов йохимбгаа и коринантина.

5.2. Определяли реакцию на адреномиметические вещества в возрастающих концентрациях. В системе координат Скэтчарда строили график зависимости доза — эффект, по которому определяли основные параметры адренергической реакции (Нестерова JI.A., Манухин Б.Н., 1983).

5.3. При совместном действии агониста и блокатора адренорецеп-торов последний вводился в среду инкубации на 5 минут раньше, чем адреномиметик. При оценке сочетанного эффекта гормонов инсулин вводили в среду инкубации за 5 минут до катехоламинов.

6. Модельные эксперименты

6.1. Изменения рН суспензионной среды моделировали добавлением к аутоплазме или стандартному раствору 0,05Н растворов НС1 (ацидификация) и NaOH (алкалинизация). В качестве контроля для

исключения эффекта дилюции использовали аутоплазму с добавлением такого же объема 0,9% раствора NaCl.

6.2. Контролируемые изменения уровня свободного кальция плазмы: эритроциты ресуспендировали в аутоплазме с добавлением раствора хлорида кальция с фиксированным содержанием свободного Ca (рСа=2,45), а затем - с добавлением СаСЬ и ЭДТА (хелатора кальция).

6.3. Для оценки влияния фибриногена на агрегатные свойства эритроцитов кровь одновременно отбирали в две пробирки: с использованием антикоагулянта и без него. Степень агрегации эритроцитов оценивали при ресуспендировании в плазме и сыворотке (дефибрини-рованной плазме).

6.4. Увеличение внутриклеточного пула кальция достигалось либо стимуляцией его входа (с использованием ионофора А23187, тромбина, фторида натрия), либо ингибированием кальциевого насоса (инкубацией с ванадатом натрия, трифторперазином и стауроспорин агли-коном).

6.5. С целью исследования вовлеченности Са-активируемых калиевых каналов в процесс агрегатообразования эритроцитов в среду (аутоплазму) вводили 2,5 мМ ВаС12, который устраняет Гардош-эффект (Kaestner L., Bernhardt I., 2002).

6.6. Энергодефицитное состояние эритроцитов моделировали следующим образом: 1) хранением крови при комнатной температуре в течение 2 часов и 2) инкубацией эритроцитов в течение 1,5 ч при 37°С в растворах а) йодацетамида; б) 2-дезокси-0-глюкозы. В качестве контроля использовали эритроциты, инкубировавшиеся в тех же условиях (1,5 ч при 37'С) в физиологическом растворе.

7. Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку полученных материалов, включая корреляционный анализ, проводили на PC IBM, с использованием программы Statistica v5.5A и диалоговой статистической системы Stadia. За уровень статистически значимых принимали изменения при р<0,05. Поскольку гемореологические параметры не всегда соответствуют нормальному распределению (Stuart J., 1985), в ряде случаев при оценке статистической значимости различий использовали непараметрические критерии.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Оценка вклада процесса агрегатообразовання в повышение вязкости крови при низких скоростях сдвига и сравнительный анализ методов оценки агрегации эритроцитов

При построении кривых вязкости суспензий эритроцитов с Ш=40 в агрегирующей (плазма) и неагрегирующей (физиологический раствор) средах было отмечено, что показатель консистенции суспензии эритроцитов в аутоплазме был в 1,71 раз выше (р<0,01), чем при сус-пендировании клеток в физиологическом растворе. Тенденция к росту индекса течения при переходе от одной среды к другой была статистически недостоверной (рис. 1).

Рис. 1. Кривые вязкости суспензии эритроцитов с Н1=40 в плазме (А) и физиологическом растворе (Б)

С целью оценки вклада процесса агрегатообразовання эритроцитов в изменения вязкости крови при низких напряжениях сдвига была проведено сравнение ряда показателей, характеризующих межэритро-цитарные взаимодействия, измеренных или вычисленных с помощью различных методов.

Степень агрегации эритроцитов измеряли фотометрическим методом (оценивали степень агрегации в стазе после высокосдвигового вращения М5 и Мю и при низкосдвиговом вращении — М15 и М1 ю) и методом оптической микроскопии с видеорегистрацией (оценивали степень агрегаций (СА) и средний размер агрегата (РА)). Динамический параметр (Б$ и Ою), рассчитывали для учета влияния условий течения на процесс объединения эритроцитов в агрегаты,

В качестве косвенного метода использовали определение суспензионной стабильности крови. Параллельно на одних и тех же образцах

крови измеряли вязкость суспензий с Ш=40 в аутоплазме (т]пл) и в физиологическом растворе 01фр).

Для оценки агрегации эритроцитов рассчитывали следующие показатели: реологический коэффициент (РК), коэффициент агрегации (КА), показатель агрегации (ПА). Степень агрегации, измеренная методом видеорегистрации, составила СА = 0,329±0,021 (отн. ед.), средний размер агрегата РА = 5,8±0,3 (отн. ед.). Результаты определения параметров процесса агрегатообразования с помощью полуавтоматического агрегометра представлены на рис.2.

режимы измерения

Среднее значение показателя агрегации, рассчитанного из значений суспензионной стабильности крови, составило ПА = 0,497±0,037 (отн. ед.).

Рис. 2. Степень агрегации эритроцитов, измеренная фотометрическим методом в стазе после высокосдивогового вращения (М) и в условиях низкосдвигового вращения (М1)

Статистически значимых корреляций между этим показателем и результатами агрегатометрии фотометрическим методом и методом видеорегистрации выявлено не было. Эти результаты еще раз подтверждают точку зрения о многофакторности и неспецифичности теста СОЭ и нецелесообразности его использования в данных целях (Jurado R.L., 2001).

Корреляционный анализ не выявил статистически значимой взаимосвязи показателей степени агрегации, полученных прямыми методами, с результатами вискозиметрии. Однако была зафиксирована выраженная корреляция между показателями агрегации и расчетными вискозиметрическими параметрами (табл. 1). Статистически значимой взаимосвязи показателей агрегации, измеренных с помощью полуавтоматического агрегометра, с вискозиметрическими данными не выявлено. Слабо выраженная корреляция отмечена лишь между динамическим параметром D и некоторыми расчетными вискозиметрическими показателями (коэффициентом агрегации и показателем консистенции

к суспензии эритроцитов в плазме и соотношением этих показателей для агрегирующей и неагрегирующей сред). Выраженная статистически значимая корреляция зафиксирована между динамическим параметром О и степенью агрегации (СА), измеренной методом видеорегистрации (г=0,862, р<0,01).

Таблица 1

Коэффициенты корреляции между показателями агрегации и расчетными вискозиметрическими параметрами

Показатели агрегации Коэффициенты корреляции

КА РК кПл

СА 0,573 0,738 0,862 0,947

О,0 0,446 — 0,388 0,355

Обозначения: СА - степень агрегации, Б - динамический параметр, КА — коэффициент агрегации, РК — реологический коэффициент, к — показатель консистенции

Для метода видеорегистрации выявлена значимая корреляционная взаимосвязь с расчетными вискозиметрическими показателями. Исходя из полученных коэффициентов корреляции между СА и показателем консистенции суспензии эритроцитов в плазме, коэффициент детерминации составил 74,3%, при использовании соотношения таких показателей консистенции для плазмы и физиологического раствора коэффициент детерминации превысил 89%. Данные факты указывают на существенный вклад процесса агрегатообразования эритроцитов в проявление неньютоновских свойств крови при низкосдвиговом течении. Полученные результаты свидетельствуют, что для оценки процесса агрегатообразования эритроцитов методами вискозиметрии представляется достаточно корректным использование таких расчетных параметров, как показатель консистенции к, полученный из кривой вязкости и отношение таких коэффициентов в агрегирующей и неагрегирующей средах.

Фотометрический метод оценки агрегации обладает определенными преимуществами при использовании в клинических условиях: быстрота и простота выполнения, минимальное количество используемой крови. Однако применение этого метода в исследовательских целях имеет свои ограничения: невозможность оценить причину изменения светопропускания, поскольку это может быть связано не только с

процессом агрегатообразования, но и с изменением формы, фрагментацией клеток при использовании различных препаратов и т.д.

Метод оптической микроскопии с видеорегистрацией позволяет рассчитывать степень агрегации, производить дифференцировку качественных характеристик наблюдаемых агрегатов (линейные, разветвленные, глыбчатые) и оценивать кинетику процесса агрегатообразования. Основным достоинством этого метода наряду с достаточной чувствительностью и выраженной корреляцией результатов с данными, полученными другими методами, представляется возможность непосредственного визуального наблюдения процесса объединения эритроцитов в агрегаты (в отличие от фотометрического или вискозиметриче-ского методов), что позволяет учитывать возможные изменения формы клеток и морфологии агрегатов.

1. Влияние плазменных факторов на межэритроцитарные взаимодействия

2.1. Изменение уровня рН среды

Метаболизм эритроцитов направлен на обеспечение их основной функции - транспорта кислорода, причем выполнение этой функции в значительной степени зависит от уровня кислотности крови (КаШо1Т Н. е1а1„ 1994).

При моделировании сдвигов рН плазмы было зафиксировано снижение степени агрегации при ацидификации и повышение при добавлении щелочного раствора (табл. 2).

Таблица 2

Изменение степени агрегации эритроцитов при снижении и повышении уровня рН плазмы (М±т)

Плазма+ЫаС1 Плазма+НС1 Плазма+ИаОН

рН 7,37±0,05 7,03±0,04** 7,76±0,07**

степень агрегации 0,183±0,019 0,131±0,013* 0,252±0,021*

Примечание', здесь и далее статистически значимые различия обозначены * - при р<0,05, ** при р<0,01, *** - при р<0,001.

Анализ корреляционных зависимостей позволил выявить взаимосвязь агрегации эритроцитов и рН крови (рис. 3).

Для стандартного раствора с реофортаном минимальная степень агрегации эритроцитов также была зафиксирована при сниженном рН

(7,0), максимальная — при рН=7,8. Коэффициенты корреляции между

pH крови и степенью агрегации эритроцитов в стандартных растворах реофортана составили: г (7,0) = 0,696 (р<0,05); г (7,4) = 0,725 (р<0,05); г (7,8) =0, 729 (1X0,05).

Рис. 3. Корреляционная взаимосвязь степени агрегации эритроцитов в плазме (СА) и значения рН крови

Выраженная взаимосвязь агрегируемое™ эритроцитов в разных средах и уровня кислотности крови (а не плазмы или сыворотки), выявленная на всех этапах эксперимента, позволила предположить обусловленность изменения агрегатных свойств при варьировании уровня кислотности вкладом скорее клеточного, чем плазменного уровня рН.

Среди возможных причин изменения степени агрегации при исследуемых сдвигах рН можно рассматривать следующие: известно, что при изменении рН в мембранах эритроцитов происходят различные изменения в структуре (нарушения связи между белковыми и липид-ными компонентами, между компонентами и ионами кальция и т.д.) (Черницкий Е.А., Воробей А.В., 1981). Роль ионов кальция в межклеточных взаимодействиях хорошо известна (Oberleithner H. et al., 1982; Ткачук B.A., 1983, 1994), в бескальциевой среде нарушаются любые клеточные контакты. При снижении рН плазмы усиливается конкуренция между ионами водорода и кальция за места адсорбции, что приводит к уменьшению количества мембраносвязанного кальция и, как следствие, к уменьшению агрегации (Левин C.B., 1976). При алкалозе концентрация ионов водорода снижается, что обеспечивает увеличение количества мест связывания кальция с мембраной эритроцитов и рост степени агрегации. По мнению I. Cicha и соавт (2003) одним из факторов, ингибирующих процесс агрегатообразования при снижении рН в кислую область является изменение формы эритроцитов (эхиноцитоз). Сдвиг рН в щелочную сторону вызывает уплощение формы эритроцитов (т.е. увеличение соотношения площадь поверхности — объем).

Кроме того, было показано, что при повышении рН происходит ингибирование кальциевого насоса, который в эритроцитах является единственным механизмом удаления кальция из клетки (Нао L. et al.,

1994). Следовательно, при повышении рН увеличивается возможность связывания экстрацеллюлярного кальция с мембраной эритроцита и вероятность повышения его внутриклеточного уровня. Таким образом, изменение рН среды может влиять на проявление рел/ляториых механизмов, обусловленных сигнальной ролью ионизированного кальция.

1.2. Изменение уровня свободного экстрацеллюлярного кальция

Около половины общего кальция плазмы находится в ионизированном состоянии, а, следовательно, физиологически активно. Даже умеренное повышение содержания свободного кальция в плазме (на 20,6%) приводило к интенсификации агрегатообразования эритроцитов (на 80,4%, р<0,01). Было отмечено, что Са-индуцированный прирост степени агрегации дозозависим, и при физиологических концентрациях ионизированного кальция выявлена экспоненциальная зависимость степени агрегации от рСа (-^[Са2+]) (рис. 4). При превышении физиологического уровня ионов кальция (выше 1,5-1,7 мМ) отмечалось формирование эхиноцитов.

Рис. 4. Зависимость степени агрегации (CA) от содержания свободного кальция (рСа) в плазме

Са-индуцированное повышение агрегации значительно ингибиро-валось в присутствии ЭДТА (рис. 5).

Повышение содержания ионизированного кальция в плазме крови вызывает увеличение доли мембраносвязанного кальция. Он способен связываться с мембранными анионами (главным образом с карбоксильными группами белков и кислыми фосфолипидами). Известно, что обработка хелаторами кальция (ЭДТА) почти полностью (до 90%) удаляет мембраносвязанный кальций (Орлов С.Н., Шевченко A.C., 1978). Ингибирование прироста агрегации после обработки ЭДТА свидетель-

ствует об участии мембраносвязанного кальция в агрегатообразовании эритроцитов. Мембраносвязанный кальций способен значительно изменять не только

0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05

поверхностный клеточный заряд, но и свойства и структуру клеточной мембраны (Левин С.В., 1976). Также повышается вероятность входа ионов в клетку.

Рис. 5. Степень агрегации эритроцитов: 1 — в аутоплазме; 2 - в ау-топлазме с добавлением 1мМ СаС12; 3 - в аутоплазме с добавлением 1 мМ СаС12 и 1 мМ ЭДТА

Косвенным свидетельством увеличения содержания внутриклеточного кальция может служить наблюдаемый при повышенной концентрации плазменного Ca2* (1,5-1,7 мМ) эхиноцитоз. Известно, что рост содержания экстрацеллюлярного ионизированного кальция не вызывает трансформации эритроцитов при значительно более высоких значениях (до 50 мМ), однако эхиноцитоз наблюдается, если происходит повышение внутриклеточного уровня кальция (Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981).

Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что концентрация ионизированного кальция в плазме оказывает влияние на процесс агрегатообразования эритроцитов. Изменения агрега-бельности при этом связаны с модификацией мембранных свойств красных клеток крови.

1.3. Влияние белков свертывающей системы крови на объединение эритроцитов в агрегаты

Важность роли фибриногена в процессе агрегатообразования эритроцитов показана в ряде исследований (Dintenfass L., 1981; Maeda N. et al„ 1994), полученные нами данные полностью согласуются с известными фактами. В ходе исследования было установлено, что максимальная степень агрегации при микроскопии разбавленной крови наблюдалась для эритроцитов в аутологичной плазме; степень агрега-

ции дефибринированной крови была значительно ниже (табл. 3), но имела место. При замене суспендирующей среды (плазмы) на сыворотку агрегация «молодых» эритроцитов снижалась в 2,37 раза, а «старых» — в 3,02 раза. При этом значительно сокращалась разница между степенью агрегации разных возрастных фракций эритроцитов.

Таблица 3

Степень агрегации фракционированных по возрасту эритроцитов в плазме и сыворотке (М±ш)

Степень агрегации эритроцитов

зрелые молодые старые

В плазме 0,317±0,039 0,220±0,028* 0,393±0,025*

В сыворотке 0,101±0,00б 0,093±0,008 0,130±0,016*

В механизме свертывания крови фибриноген занимает исключительное положение, так как представляет собой единственный субстрат, из которого под действием протеолитического фермента тромбина возникает волокнистая сеть фибрина — материальная основа сгустка, предупреждающая потерю крови. Однако фибриногену присущи и другие важные функции как в физиологических, так и патологических процессах - в заживлении ран, росте опухолей и метастазирова-нии (Зубаиров Д.М., 2000).

Инкубация эритроцитов с тромбином привела к росту их агрега-бельности на 43,9%, средний размер агрегата увеличился 18,2% (р<0,05). В присутствии дибутирильного аналога цАМФ и хлорида бария проагрегантный эффект тромбина полностью нивелировался, а при совместном действии тромбина и адреналина наблюдался аддитивный эффект. Тромбин одновременно является и мощным ингибитором аде-нилатциклазы, и эффективным агентом, повышающим уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах. Адреналин увеличивает чувствительность тромбоцитов к индукторам агрегации, повышающим Са2+:„ (тромбину, АДФ и др.) (Ткачук В.А., 1998). В ряде клеток активация тромбином инозитол-1,4,5,-трифосфата, приводящего к повышению уровня внутриклеточного кальция, подавляется коклюшным токсином (НоиБ1ауМ., 1991).

Полученные нами данные (ингибирование проагрегантного эффекта тромбина в присутствии проникающего аналога цАМФ и хлорида бария, препятствующего повышению уровня внутриклеточного кальция), свидетельствуют о сходстве механизмов активации тромбином агрегации эритроцитов и тромбоцитов: этот процесс, по всей видимости, реализуется с участием цАМФ и ионизированного Са2+.

(7,0), максимальная — при рН=7,8. Коэффициенты корреляции между

рН крови и степенью агрегации эритроцитов в стандартных растворах реофортана составили: г (7,0) = 0,696 (р<0,05); г (7,4) = 0,725 (р<0,05); г (7,8) =0, 729 (р<0,05).

Рис. 3. Корреляционная взаимосвязь степени агрегации эритроцитов в плазме (СА) и значения рН крови

Выраженная взаимосвязь агрегируемости эритроцитов в разных средах и уровня кислотности крови (а не плазмы или сыворотки), выявленная на всех этапах эксперимента, позволила предположить обусловленность изменения агрегатных свойств при варьировании уровня кислотности вкладом скорее клеточного, чем плазменного уровня рН.

Среди возможных причин изменения степени агрегации при исследуемых сдвигах рН можно рассматривать следующие: известно, что при изменении рН в мембранах эритроцитов происходят различные изменения в структуре (нарушения связи между белковыми и липид-ными компонентами, между компонентами и ионами кальция и т.д.) (Черницкий Е.А., Воробей А.В., 1981). Роль ионов кальция в межклеточных взаимодействиях хорошо известна (Oberleithner H. et al., 1982; Ткачук В.A., 1983, 1994), в бескальциевой среде нарушаются любые клеточные контакты. При снижении рН плазмы усиливается конкуренция между ионами водорода и кальция за места адсорбции, что приводит к уменьшению количества мембраносвязанного кальция и, как следствие, к уменьшению агрегации (Левин C.B., 1976). При алкалозе концентрация ионов водорода снижается, что обеспечивает увеличение количества мест связывания кальция с мембраной эритроцитов и рост степени агрегации. По мнению 1. Cicha и соавт (2003) одним из факторов, ингибирующих процесс агрегатообразования при снижении рН в кислую область является изменение формы эритроцитов (эхиноцитоз). Сдвиг рН в щелочную сторону вызывает уплощение формы эритроцитов (т.е. увеличение соотношения площадь поверхности — объем).

1994). Следовательно, при повышении рН увеличивается возможность связывания экстрацеллюлярного кальция с мембраной эритроцита и вероятность повышения его внутриклеточного уровня. Таким образом, изменение рН среды может влиять на проявление регуляторных механизмов, обусловленных сигнальной ролью ионизированного кальция.

1.2. Изменение уровня свободного экстрацеллюлярного кальция

Около половины общего кальция плазмы находится в ионизированном состоянии, а, следовательно, физиологически активно. Далее умеренное повышение содержания свободного кальция в плазме (на 20,6%) приводило к интенсификации агрегатообразования эритроцитов (на 80,4%, р<0,01). Было отмечено, что Са-индуцированный прирост степени агрегации дозозависим, и при физиологических концентрациях ионизированного кальция выявлена экспоненциальная зависимость степени агрегации от рСа (-1о§[Са2+]) (рис. 4). При превышении физиологического уровня ионов кальция (выше 1,5—1,7 мМ) отмечалось формирование эхиноцитов.

2,5 2,6 2,7 2.8 2.9 3

Рис. 4. Зависимость степени агрегации (CA) от содержания свободного кальция (рСа) в плазме

Са-индуцированное повышение агрегации значительно ингибиро-валось в присутствии ЭДТА (рис. 5).

ствует об участии мембраносвязанного кальция в агрегатообразовании эритроцитов. Мембраносвязаиный кальций способен значительно изменять не только

0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05

поверхностный клеточный заряд, но и свойства и структуру клеточной мембраны (Левин C.B., 1976). Также повышается вероятность входа ионов в клетку.

Рис. 5. Степень агрегации эритроцитов: 1 — в аутоплазме; 2 — в ау-топлазме с добавлением 1мМ СаС12; 3 — в аутоплазме с добавлением 1 мМ СаС12 и 1 мМ ЭДТА

Косвенным свидетельством увеличения содержания внутриклеточного кальция может служить наблюдаемый при повышенной концентрации плазменного Са2+ (1,5-1,7 мМ) эхиноцитоз. Известно, что рост содержания экстрацеллюлярного ионизированного кальция не вызывает трансформации эритроцитов при значительно более высоких значениях (до 50 мМ), однако эхиноцитоз наблюдается, если происходит повышение внутриклеточного уровня кальция (Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981).

1.3. Влияние белков свертывающей системы крови на объединение эритроцитов в агрегаты

Важность роли фибриногена в процессе агрегатообразования эритроцитов показана в ряде исследований (Dintenfass L., 1981; Maeda N. et al., 1994), полученные нами данные полностью согласуются с известными фактами. В ходе исследования было установлено, что максимальная степень агрегации при микроскопии разбавленной крови наблюдалась для эритроцитов в аутологичной плазме; степень агрега-

ции дефибршшроваиной крови была значительно ниже (табл. 3), но имела место. При замене суспендирующей среды (плазмы) на сыворотку агрегация «молодых» эритроцитов снижалась в 2,37 раза, а «старых» — в 3,02 раза. При этом значительно сокращалась разница между степенью агрегации разных возрастных фракций эритроцитов.

Таблица 3

Степень агрегации фракционированных по возрасту эритроцитов в плазме и сыворотке (М±ш)

Степень агрегации эритроцитов

зрелые молодые старые

В плазме 0,317±0,039 0,220±0,028* 0,393±0,025*

В сыворотке 0,101±0,006 0,093±0,008 0,130±0,016*

В механизме свертывания крови фибриноген занимает исключительное положение, так как представляет собой единственный субстрат, из которого под действием протеолитического фермента тромбина возникает волокнистая сеть фибрина — материальная основа сгустка, предупреждающая потерю крови. Однако фибриногену присущи и другие важные функции как в физиологических, так и патологических процессах — в заживлении ран, росте опухолей и метастазирова-ний (Зубаиров Д.М., 2000).

Инкубация эритроцитов с тромбином привела к росту их агрега-бельности на 43,9%, средний размер агрегата увеличился 18,2% (р<0,05). В присутствии дибутирильного аналога цАМФ и хлорида бария проагрегантный эффект тромбина полностью нивелировался, а при совместном действии тромбина и адреналина наблюдался аддитивный эффект. Тромбин одновременно является и мощным ингибитором аде-нилатциклазы, и эффективным агентом, повышающим уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах. Адреналин увеличивает чувствительность тромбоцитов к индукторам агрегации, повышающим Са2+„, (тромбину, АДФ и др.) (Ткачук В.А., 1998). В ряде клеток активация тромбином инозитол-1,4,5,-трифосфата, приводящего к повышению уровня внутриклеточного кальция, подавляется коклюшным токсином (Нош1ауМ., 1991).

Коэффициенты корреляции между адренореактивностью в присутствии различных адренергических соединений и степенью агрегации под действием катехоламинов (измеренной методом видеорегистрации) представлены в табл.7.

Таблица 7

Коэффициенты корреляции между адренореактивностью (АР) и степенью агрегации (СА) под действием катехоламинов (метод видеорегистрации)

АР с препаратом (10 3 М) СА в присутствии адреналина (Ю-6 М

зд дэп ССЗ ХОБЛ РЖ сд

пропранолол 0,485 0,621 0,620 0,983 0,992 0,884

адреналин 0,961 0,520 — 0,621 0,780 0,995

норадреналин 0,521 — — — -— 0,673

йохимбин — — 0,596 — 0,969 —

коринантин 0,602 — — — 0,698 —

атенолол 0,612

клонидин 0,498 — — — — —

изопротеренол — — — 0,956 — 0,693

СА в присутствии но радреналина (10"6 М)

пропранолол 0,494 0,794 0,568 0,975 0,975 0,782

адреналин — 0,924 — 0,900 — 0,996

норадреналин 0,764 — 0,541 — — 0,846

коринантин — — 0,748 — 0,988 —

атенолол 0,789 — 0,995 — — —

клонидин — — 0,981 — — 0,706

изопротеренол — — 0,690 0,732 — 0,871

Примечание: в таблице представлены только статистически значимые коэффициенты корреляции

Как в норме, так и при различных формах патологии выявлена тесная корреляционная взаимосвязь между адренореактивностью в присутствии пропранолола, адреналина и агрегацией эритроцитов под действием катехоламинов. Корреляции между мембранной резистентностью эритроцитов в присутствии а-блокаторов, ррблокатора и адре-нергической агрегацией красных клеток крови отмечены для здоровых лиц, пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и раком желудка. Взаимосвязь изменений мембранных свойств эритроцитов под действием а2-агониста клонидина и р2-агониста изопротеренола и аг-

регатными свойствами клеток под действием катехоламинов зафиксирована в группах пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, хронической обструктивной болезнью легких и сахарным диабетом.

Полученные в ходе нашего исследования данные о существенном увеличении агрегируемости эритроцитов при разных формах патологии соответствуют литературным данным (Селезнев С.А. и соавт., 1985; Галенок В.А. и соавт., 1987; М^БеЬпап Н., 2002). При этом было выявлено, что исходно высокий уровень агрегации эритроцитов при патологии в большинстве случаев не претерпевает существенных изменений при действии высоких доз катехоламинов, в отличие от состояния нормы, где адренергические воздействия оказывают выраженное стимулирующее влияние. Следует отметить, что изменения агрега-белыюсти эритроцитов и адренореактивности под действием а- и р-адренергических соединений имели одинаковую направленность.

Опубликованные экспериментальные данные свидетельствуют о снижении р-адренореактивности организма при ряде патологий (при артериальной гипертонии, ишемической болезни сердца и других сердечно-сосудистых заболеваниях), и повышении у практически здоровых лиц при нервно-эмоциональных напряжениях, депривации сна, интенсивной физической нагрузке и т.д. (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Возможно, что при действии длительных или чрезмерных раздражителей имеет место десенситизация Р-адренорецепторов, направленная на предотвращение энергетического истощения клеток. Нами также зафиксировано снижение р-адренореактивности при ряде патологий, что может быть связано с изменением количества и/или функционального состояния адренорецепторов. Однако при тяжелой форме патологии (рак желудха 1У ст.) отличительной особенностью было значительное влияние а-адренергических соединений на мембранные свойства эритроцитов на фоне несущественного изменения р-адренореактивности организма.

Связь функционального состояния эритроцитов с прогрессирова-нием заболевания и степенью десенситизации адренорецепторов, т.е. адренореактивностью организма была доказана экспериментально для различных стадий гипертонической болезни (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Предложенные нами дополнения к методике определения адренореактивности организма позволяют оценить не только р-, но и а-адренергическую реактивность. Это позволило, например, выявить серьезный характер изменений мембранных свойств эритроцитов при тяжелой патологии (онкологическом заболевании), когда при относительно небольшом снижении Р-адренореактивности была показана выраженная а-адренореактивность, что подтвердилось и различиями в

агрегационном ответе эритроцитов на а- и р-адренергические воздействия.

5. Анализ механизмов трансдукцин сигнала при адренергических воздействиях на эритроциты

При изучении зависимости проагрегантного эффекта катехолами-нов от их концентраций (построении кривых доза-эффект) были получены типичные кривые с насыщением, характерные для лиганд-рецегггорного взаимодействия (рис. 7).

о,в

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

СА, отн. ед.

. --"а

концентрация Адр (X ЮМ)

Рис. 7. Зависимость степени агрегации (СА) эритроцитов от концентрации адреналина

При активации разных подтипов адре-012345 норецепторов, сопряженных с разными О-белками, запускаются различные внутриклеточные процессы. Катехоламины через соответствующие ГТФ-связывающие белки могут регулировать активность как фосфолипазы С, так и аденилатциклазы (Ткачук В. А., 1983,2002).

Чтобы выяснить, активацией каких подтипов адренорецепторов обусловлен проагрегантный эффект катехоламинов, оценивали степень агрегации эритроцитов под действием а- и р-адреномиметиков (рис. 8).

Согласно классическим представлениям о механизмах трансдук-ции гормонального сигнала, активация различных типов (а2- и Р-) адренорецепторов должна сопровождаться противоположным эффектом. Однонаправленное проагрегантное влияние обоих типов (а и Р) адре-номиметиков, выявленное ходе эксперимента, может быть объяснено, исходя',из гипотезы Сергеева П.В. и соавт. (1999), согласно которой классическая сигналинг-система представлена во всех клетках крови, за исключением эритроцитов человека (хотя она имеется в эритроцитах амфибий, птиц и млекопитающих). В процессе филогенеза эритроциты человека, утратив систему О-белок — аденилатциклаза, сохранили р-адренорецепторы, а катехоламиновый ответ осуществляется в них иными путями. Возможный механизм взаимодействия р-

адренорецепторов с агонистами обусловлен регуляцией №"7 Н+ обмена в клетке.

Рис. 8. Повышение степени агрегации эритроцитов после инкубации с а-агонистами (фэ — фенилэфрин, кло — клонидин) и р-адреноми-метиками (изо — изопротеренол, фено - фенотерол).

При изучении эффекта катехоламинов в присутствии адренобло-каторов отмечено статистически значимое ингибирование влияния адреналина при введении аг и а2-блокаторов коринантина и йохимбина. Стимулирующий эффект норадреналина существенно снижался в присутствии агблокатора коринантина (рис. 9).

Активация агадренорецепторов сопровождается каскадом реакций с участием ионизированного кальция и протеинкиназы С. При активации а2-адренорецепторов происходит ингибирование аденилат-циклазы и, как следствие, снижение уровня цАМФ в клетке. В следующей серии экспериментов мы инкубировали эритроциты с катехо-ламинами в присутствии ингибитора протеинкиназы С стауроспорин агликона или с реагентами, повышающими уровень цАМФ (простаг-ландин Е) и проникающий аналог цАМФ).

Все эти реагенты в значительной степени нивелировали эффект адреналина на агрегацию эритроцитов, в то время как стимулирующее действие норадреналина снизилось только в присутствии стауроспори-на. Что подтверждает предположение о том, что эффект адреналина опосредуется стимуляцией как щ-, так и а2-адренорецепторов, а действие норадреналина осуществляется путем активации аг адренорецепторов.

Таблица 7

АР с препаратом (Ю-3 М) СА в присутствии адреналина (10"6 М

зд дэп ССЗ ХОБЛ РЖ сд

пропранолол 0,485 0,621 0,620 0,983 0,992 0,884

адреналин 0,961 0,520 — 0,621 0,780 0,995

норадреналин 0,521 — — — — 0,673

йохимбин — — 0,596 — 0,969 —

коринантин 0,602 — — — 0,698 —

атенолол 0,612 — — — — —

клонидин 0,498 — — — — —

изопротеренол — — — 0,956 — 0,693

СА в присутствии норадреналина (10"6 М)

пропранолол 0,494 0,794 0,568 0,975 0,975 0,782

адреналин — 0,924 — 0,900 — 0,996

норадреналин 0,764 — 0,541 — — 0,846

коринантин — — 0,748 — 0,988 —

атенолол 0,789 — 0,995 — — —

клонидин — — 0,981 — — 0,706

изопротеренол — — 0,690 0,732 — 0,871

Примечание: в таблице представлены только статистически значимые коэффициенты корреляции

Как в норме, так и при различных формах патологии выявлена тесная корреляционная взаимосвязь между адренореактивностью в присутствии пропранолола, адреналина и агрегацией эритроцитов под действием катехоламинов. Корреляции между мембранной резистентностью эритроцитов в присутствии а-блокаторов, Ррблокатора и адре-нергической агрегацией красных клеток крови отмечены для здоровых лиц, пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями и раком желудка. Взаимосвязь изменений мембранных свойств эритроцитов под действием а^-агониста клонидина и р2-агониста изопротеренола и аг-

Полученные в ходе нашего исследования данные о существенном увеличении агрегируемости эритроцитов при разных формах патологии соответствуют литературным данным (Селезнев С.А. и соавт., 1985; Галенок В.А. и соавт., 1987; Ме1зе1тап Н., 2002). При этом было выявлено, что исходно высокий уровень агрегации эритроцитов при патологии в большинстве случаев не претерпевает существенных изменений при действии высоких доз катехоламинов, в отличие от состояния нормы, где адренергические воздействия оказывают выраженное стимулирующее влияние. Следует отметить, что изменения агрега-бельности эритроцитов и адренореактивности под действием а- и р-адренергических соединений имели одинаковую направленность.

Опубликованные экспериментальные данные свидетельствуют о снижении р-адренореактивности организма при ряде патологий (при артериальной гипертонии, ишемической болезни сердца и других сердечно-сосудистых заболеваниях), и повышении у практически здоровых лиц при нервно-эмоциональных напряжениях, депривации сна, интенсивной физической нагрузке и т.д. (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Возможно, что при действии длительных или чрезмерных раздражителей имеет место десенситизация р-адренорецепторов, направленная на предотвращение энергетического истощения клеток. Нами также зафиксировано снижение р-адренореактивности при ряде патологий, что может быть связано с изменением количества и/или функционального состояния адренорецепторов. Однако при тяжелой форме патологии (рак желудка 1У ст.) отличительной особенностью было значительное влияние а-адренергических соединений на мембранные свойства эритроцитов на фоне несущественного изменения р-адренореактивности организма.

Связь функционального состояния эритроцитов с прогрессирова-нием заболевания и степенью десенснтизации адренорецепторов, т.е. адренореактивностью организма была доказана экспериментально для различных стадий гипертонической болезни (Стрюк Р.И., Длусская И.Г., 2003). Предложенные нами дополнения к методике определения адренореактивности организма позволяют оценить не только р-, но и а-адренергическую реактивность. Это позволило, например, выявить серьезный характер изменений мембранных свойств эритроцитов при тяжелой патологии (онкологическом заболевании), когда при относительно небольшом снижении р-адренореактивности была показана выраженная а-адренореактивность, что подтвердилось и различиями в

агрегационном ответе эритроцитов на а- и р-адренергические воздействия.

5. Анализ механизмов трансдукции сигнала при адренергических воздействиях на эритроциты

При изучении зависимости проагрегантного эффекта катехолами-нов от их концентраций (построении кривых доза-эффект) были получены типичные кривые с насыщением, характерные для лиганд-рецепторного взаимодействия (рис. 7).

0,6 0,5 0,4 0.3 0.2 0,1

СА, отн. ед.

концентрация Адр (X Ю М)

Рис. 7. Зависимость степени агрегации (СА) эритроцитов от концентрации адреналина

При активации разных подтипов адре-о 1 2 з 4 5 норецепторов, со-

пряженных с разными О-белками, запускаются различные внутриклеточные процессы. Катехоламины через соответствующие ГТФ-связывающие белки могут регулировать активность как фосфолипазы С, так и аденилатциклазы (Ткачук В.А., 1983, 2002).

Согласно классическим представлениям о механизмах трансдукции гормонального сигнала, активация различных типов (а2- и р-) адренорецепторов должна сопровождаться противоположным эффектом. Однонаправленное проагрегантное влияние обоих типов (а и р) адре-номйметиков, выявленное ходе эксперимента, может быть объяснено, исходя из гипотезы Сергеева П.В. и соавт. (1999), согласно которой классическая сигналинг-система представлена во всех клетках крови, за исключением эритроцитов человека (хотя она имеется в эритроцитах амфибий, птиц и млекопитающих). В процессе филогенеза эритроциты человека, утратив систему О-белок - аденилатциклаза, сохранили р-адренорецепторы, а катехоламиновый ответ осуществляется в них иными путями. Возможный механизм взаимодействия р-

адренорецепторов с агонистами обусловлен регуляцией Иа+/ Н+ обмена в клетке.

70 -с

СА %

50 40 30 20 10 0

ФЭ

кло

изо

ФЕНО

Рис. 8. Повышение степени агрегации эритроцитов после инкубации с а-агонистами (фэ - фенилэфрин, кло - клонидин) и р-адреноми-метиками (изо — изопротеренол, фено — фенотерол).

При изучении эффекта катехоламинов в присутствии адренобло-каторов отмечено статистически значимое ингибирование влияния адреналина при введении аг и а2-блокаторов коринантина и йохимбина. Стимулирующий эффект норадреналина существенно снижался в присутствии с^-блокатора коринантина (рис. 9).

Активация а ¡-адренорецепторов сопровождается каскадом реакций с участием ионизированного кальция и протеинкиназы С. При активации а2-адренорецепторов происходит ингибирование аденилат-циклазы и, как следствие, снижение уровня цАМФ в клетке. В следующей серии экспериментов мы инкубировали эритроциты с катехо-ламинами в присутствии ингибитора протеинкиназы С стауроспорин агликона или с реагентами, повышающими уровень цАМФ (простаг-ландин Е1 и проникающий аналог цАМФ).

Все эти реагенты в значительной степени нивелировали эффект адреналина на агрегацию эритроцитов, в то время как стимулирующее действие норадреналина снизилось только в присутствии стауроспори-на. Что подтверждает предположение о том, что эффект адреналина опосредуется стимуляцией как а]-, так и а2-адренорецепторов, а действие норадреналина осуществляется путем активации а,-адренорецепторов.

Адр

НА

Рис. 9. Изменение степени агрегации (СА) эритроцитов, стимулированной катехоламинами (КА) в присутствии а- и р-адреноблокаторов: коринантина (кори), йохимбина (йох), атенолола (атено) и пропранолола (про)

То, что оба катехоламина активируют агадренорецепторы, свидетельствует о том, что их действие связано с повышением уровня ионизированного кальция. Известно, что увеличение входа кальция в эритроциты сопровождается Гардош-эффектом, т.е. компенсаторным выходом калия из клетки. Учитывая, что Гардош-эффект полностью инги-бируется в присутствии хлорида бария, мы использовали обработку эритроцитов катехоламинами в сочетании с добавлением в среду 2,5 мМ ВаС12- Кроме катехоламинов, эритроциты подвергались также инкубации с фторидом натрия, который, как известно, напрямую, без участия гормон-стимулируемых рецепторов активирует ГТФ-связывающие белки.

Во всех указанных случаях проагрегантный эффект и катехоламинов, и фторида натрия значительно снижался в присутствии ВаОг, что свидетельствует о том, что стимулирующее действие катехоламинов на процесс агрегации эритроцитов сопровождается изменением ионного гомеостаза клеток, а именно, Гардош-эффектом (выходом из клетки калия в ответ на повышение уровня внутриклеточного кальция).

Использование p-адреноблокаторов не позволило получить достоверного уменьшения проагрегантного эффекта р-агонистов. Высокая степень агрегации при использовании адреноблокатора пропранолола, возможно, объясняется тем, что пропранолол, сам по себе, является одним из хорошо известных индукторов Гардош-эффекта, хотя механизм его действия пока изучен недостаточно (Wiley J.S. et al., 1982).

6. Влияние групповой (ABO) принадлежности эритроцитов на их агрегатные свойства

При общей интенсификации процесса агрегатообразования под действием катехоламинов были выявлены значительные индивидуальные различия агрегационного ответа на адренергическую стимуляцию. Такая же тенденция — выраженные индивидуальные различия эффекта адреналина на фильтруемость эритроцитов человека были описаны и в работе Т. Oonishi et al. (1997). Варьирование эффекта адреналина на адгезивные свойства эритроцитов при серповидноклеточной анемии от пациента к пациенту выявлены и в исследовании Р. Hiñes et al. (2003). Одним из факторов, обусловливающих индивидуальные различия в свойствах эритроцитов, могут выступать их антигенные характеристики.

Наиболее выраженное статистически значимое повышение степени агрегации наблюдалось для эритроцитов группы О (I). Для всех остальных групп крови отмечена выраженная тенденция к росту агреги-руемости под действием адреналина и норадреналина.

Для эритроцитов группы 0 (I) также зафиксирован максимальный агрегационный ответ на стимуляцию агонистами как а-, так и р-адренорецепторов. Минимальный эффект адреномиметиков отмечен для эритроцитов группы АВ (IY) — статистически значимый прирост степени агрегации наблюдался только при обработке а2-агонистом клонидином.

Инкубация с агагонистом фенилэфрином оказала существенный проагрегантный эффект на эритроциты, не имеющие на своей мембранной поверхности антигена А (группы 0 (I) и В (III)). Стимулирующее действие р-агонистов (изопротеренола и фенотерола) и аг-агониста клонидина постепенно убывало от 0 (I) к АВ (IY) группе крови (табл. 8).

В целом полученные нами результаты свидетельствуют о различной выраженности агрегационного ответа эритроцитов разной групповой принадлежности на однотипные адренергические воздействия.

Существенные отличия проагрегантного эффекта адренергических соединений для эритроцитов разной ABO групповой принадлежности демонстрируют, что степень влияния этих соединений зависит от присутствия антигенных детерминант на мембране — в присутствии антигенов А и В воздействие минимальное, в их отсутствие (группа 0 (I)) — максимальное.

Таблица 8

Степень агрегации эритроцитов разной групповой принадлежности после обработки катехоламинами и а-, ß-адреномиметиками (М±ш)

Условия эксперимента Степень агрегации, отн. ед.

0 (I) Rh + п= 10 А (II) Rh + п = 13 В (III) Rh + n= 12 AB (IY) Rh + n = 6

Контроль 0,342±0,027 0,334±0,045 0,231 ±0,029 0,348±0,089

Адреналин 10"6 М 0,576±0,057* 0,403±0,034 0,291 ±0,049 0,429±0,062

Норадреналин 10"4 М 0,717±0,074* 0,421 ±0,044 0,294±0,041 0,395±0,044

Фенилэфрин 10"6 М 0,532±0,061* 0,443±0,055* 0,360±0,042* 0,410±0,054

Клонидин 10"6 М 0,543±0,043* 0,486±0,068* 0,329±0,048* 0,48б±0,040*

Фенотерол 1СГ6 М 0,595±0,072* 0,519±0,064* 0,346±0,051* 0,474±0,061

Изопротеренол 10"6 М 0,557±0,049* 0,466±0,051 * 0,309±0,047 0,393±0,044

Выявленные особенности позволяют предположить, что присутствие антигенов на эритроцитарной мембране оказывает влияние на количество и/или функциональную активность адренорецепторов.

7. Оценка взаимосвязи агрегатных свойств эритроцитов с их мембранными свойствами

Традиционно считается, что агрегации красных клеток крови способствует снижение поверхностного заряда, уменьшающее силы электростатического отталкивания. С целью оценки влияния электрофизиологических характеристик на процесс агрегатообразования были изучены изменения электрофоретической подвижности и ¿¡-потенциала под действием ряда соединений, оказывающих выраженный проагре-гантный эффект (адреномиметики и простагландины) (табл. 9).

Приведенные данные свидетельствуют о том, что, несмотря на однонаправленное влияние этих препаратов на объединение эритроцитов в агрегаты, имеет место разнонаправленное изменение их электрофизиологических характеристик.

Из данных табл. 10 видно, что степень агрегации существенно повышена как при снижении (обработка ванадатом и фторидом натрия),

так и при росте электрофоретической подвижности (инкубация с тромбином, кофеином, ацетилхолином) красных клеток крови.

Таблица 9

Электрофоретическая подвижность (V) и дзета-потенциал (Q эритроцитов при действии агонистов адрекорецепторов и простагландинов (М±ш)

V, мкм с"'-В"1-см С MB

Контроль 1,289 ±0,037 18,04 ±0,52

Клонидин 10"6 М 1,178 ±0,038* 16,49 ±0,53*

Фенилэфрин 10~6 М 1,374 ±0,043* 19,24 ±0,60*

Изопротеренол 10"й М 1,413 ±0,061* 19,78 ±0,85*

Фенотерол 1СГ6 М 1,383 ±0,055* 19,36 ± 0,77*

ПГЕ, 10 " М 1,312 ±0,041 18,37 ±0,57

ПГЕ2 КГ" М 1,152 ±0,028* 16,13 ±0,39*

Таблица 10

Изменение в % электрофоретической подвижности (ЭФП) и степени агрегации (СА) эритроцитов под действием препаратов

Препарат Изменение в % от контроля

ЭФП CA

Тромбин 0,05 ед/мл +7,1** +42,3**

Валиномицин 10"^ М -1,6 +99,5**

DIDS Ю-7 М -5,3 -31,5*

Ванадат натрия 10"4 М -5,8 +63,9**

Фторид натрия 10"3 М -3,7 +35,1*

Кофеин 10"* М +5,9 +37,9*

Ацетилхолин 10"5 М +5,2* +45**

Самый существенный прирост степени агрегации под действием валиномицина имел место на фоне неизменной электрофоретической подвижности, а выраженная тенденция к снижению поверхностного заряда после обработки ЮЮБ сочеталась с ингибированием агрегации эритроцитов.

Поскольку изменения поверхностного заряда не оказывали определяющего влияния на агрегатные свойства эритроцитов, было решено проверить наличие взаимосвязи агрегации с другими мембранными свойствами красных клеток крови. При оценке изменения проницаемо-

сти и сорбционной способности мембран эритроцитов исследовали изменение этих показателей под действием хлорпромазина, который оказывает разупорядочивающее действие на липидный бислой.

Результаты изменения параметров, характеризующих проницаемость мембран (СПГ, СПГ50/55), сорбционной способности (ССЭ) и степени агрегации (СА) под действием хлорпромазина 10'5 М, представлены в табл. 11.

Таблица 11

Влияние хлорпромазина на проницаемость (СПГ), сорбционную способность (ССЭ) и степень агрегации (CA) эритроцитов (М±т)

Показатели Контроль Хлорпромазин Изменение, в %

СПГ, % 30,6±2,1 32,4±1,4 +5,9

СПГ,о;;5, % 42,1±4,5 50,9±4,2** +20,9

ССЭ,% 49,б±2,5 44,8±2,0* -9,7

CA, отн. ед. 0,322±0,042 0,214±0,027*** -33,5

Таблица 12

Коэффициенты корреляции между показателями агрегации (СА), сорбционной способности (ССЭ) и проницаемости мембран (СПГ)

эритроцитов

CA ССЭ

СПГ -0,241 0,045

СПГ 50/5:5 -0,232 0,156

Статистически значимых корреляций между сорбционной способностью мембран, их проницаемостью и степенью агрегации эритроцитов выявлено не было, что свидетельствует об отсутствии обусловленности межэритроцитарных взаимодействий изменением этих мембранных характеристик (табл. 12).

8. Оценка роли внутриклеточного ионизированного кальция в процессе агрегации эритроцитов

Поддержание низкой концентрации внутриклеточного кальция (на четыре порядка меньше, чем экстрацеллюлярного) и вход Са2+ через плазматическую мембрану играют важную роль в генерации специфн-

ческих сигналов и формировании клеточного ответа (Ткачук В.А., 2001).

В эритроцитах универсальной, единственной системой, регулирующей удаление кальция из клетки, является Са-насос, функционирование которого обеспечивается специальным ферментом — зависимой, Са-стимулируемой АТФазой.

Контролируемое изменение внутриклеточного пула кальция достигалось двумя способами: 1) увеличением потока входящего в клетку кальция — с этой целью использовали стимуляторы этого процесса(Са ионофор А23187, тромбин и фторид натрия; и 2) ингибированием удаления кальция из клетки (инкубацией с ванадатом натрия, трифторпе-разином и стауроспорин агликоном). Специфического ингибитора Са-АТфазы пока нет, однако известно, что Са-АТФаза эритроцитов активируется кальмодулином и протеинкиназой С, поэтому мы использовали ингибиторы этих регуляторных белков — трифторперазин и стауроспорин.

Инкубация эритроцитов со стимуляторами входа кальция привела к росту их агрегируемости. Присутствие различных ингибиторов Са-АТФазы также способствовало повышению степени агрегации. Общим свойством всех использовавшихся реагентов была их способность повышать внутриклеточный пул кальция (независимо от механизма действия) (рис.10).

60 50 40 30 20 10 о

«г

л®4

т 1 51

35 Ж ч» _

29 J

||Я —

J 1 \

Рис. 10. Изменения степени агрегации (СА) в % при контролируемом повышении пула внутриклеточного кальция

Увеличение концентрации внутриклеточного Са21" приводит к открытию высокоселективных К-каналов в эритроцитах (Гардош-эффекту). Ингибирование этого эффекта осуществляется введением в среду хлористого бария, в присутствии которого активация этих каналов исключается.

Ранее было показано, что стимуляция агрегации катехоламинами сопряжена с открытием Са-зависимых К-каналов. Было отмечено, что прагрегантный эффект ряда соединений (тромбина, кофеина, ацетил-холина и ванадата натрия) также нивелируется в присутствии ВаС12 (рис. 11).

ацетилхолин кофеин тромбин фторид Na ванэдат Na

Рис. 11. Изменение степени агрегации (СА) эритроцитов под действием препаратов в присутствии хлорида бария

При физиологических концентрациях внутриклеточного Са (~ 2050 нМ) Гардош-каналы инактивированы, но они активируются при повышении содержания Са2+ в патологических или экспериментальных условиях. В интактных эритроцитах человека уровень Са, при котором активируются эти каналы, составляет — 150 нМ (TifFert Т. et al., 1988). Количество Гардош-каналов в эритроцитах точно не установлено, по приблизительным оценкам оно составляет порядка 100-200 (Alvarez J. et al., 1987; Hoffman J.F et al., 2003). В отличие от эритроидных клеток других видов.млекопитающих, у которых активность Гардош-каналов утрачивается при созревании, зрелые эритроциты человека демонстрируют их устойчивую активность (Brown A.M. et al., 1978). Интересно, что такие Са-индуцируемые каналы отсутствуют в эритроцитах быка,

которые не способны к агрегации (Черницкий Е.А., Воробей А.В., 1981).

9. Оценка взаимодействия эритроцитов в условиях энергодефицита и при изменениях ионного гомеостаза

При хранении крови в течение 2 часов при комнатной температуре отмечено существенное повышение уровня рН (на 4,3%, р<0,001), содержание ионизированного кальция в плазме достоверно снизилось (р<0,001), степень агрегации эритроцитов повысилась на 44%, р<0,01, зафиксировала тенденция к увеличению среднего размера агрегатов (табл.13).

Коэффициенты корреляции между относительными изменениями степени агрегации и рН плазмы (ДСА/САИИ1 и ЛрН/рНисх), степени агрегации и концентрации свободного кальция в плазме (ДСА/САисх и ДрСа/рСа„сх), составили г = 0,626 и г = 0,497 (р<0,05) соответственно.

Таблица 13

Влияние хранения на физико-химические и агрегатные свойства крови

Условия измерения Агрегатные и шзико-химические свойства крови (М±т)

CA отн. ед. РА, отн.ед. pH плазмы рСа

Интактные 0,134±0,024 4,78±0,39 7,77±0,04 2,74±0,01

После 2 ч хранения 0,193±0,028** 5,32±0,42 8,10±0,05*** 2,77±0,01***

Под действием метаболических ингибиторов также отмечен существенный прирост степени агрегации, наиболее выраженный при инкубации с йодацетамидом (на 50,8%, р<0,05) (табл.14).

Таблица 14

Показатели агрегации эритроцитов под действием ингибиторов метаболизма (М±т)

Показатели агрегации (отн. ед.) Среда инкубации

0,9 % NaCl (контроль) Иодацетамид 5 мМ Дезоксиглюкоза 30 мМ

CA 0,301±0,041 0,454±0,059* 0,386±0,039*

РА 4,63±0,35 5,15±0,45 4,52±0,28

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о повышении агрегируемости эритроцитов в условиях энергодефицита. Известно, что ванадат натрия и истощение по АТФ оказывают триггерное действие на эффект Гардоша в эритроцитах человека, при этом была показана аддитивность этих факторов, несмотря на разные механизмы входа кальция в клетку (Ка1$егоуа К. е1 а1., 2002). В эритроцитах АТФ в основном потребляется ионными транспортными системами, которые обеспечивают осмотический баланс клетки (Иакауаша У. е1 а1., 2005).

Различные ингибиторы транспортных систем эритроцитов оказывали разнонаправленное влияние на процесс агрегатообразования: от практически полного отсутствия эффекта при инкубации с ингибитором Иа+, К+, 2СГ-котранспорта фуросемидом, до существенного роста агрегабельности под действием валиномицина (99,5%, р<0,01) и значительного снижения агрегации под действием ингибитора анионного транспортера белка полосы 3 - БШБ (31,5%, р<0,05).

СА, %

Еалиномицин DIDS Фуросемид

Рис. 12. Изменения степени агрегации (СА) эритроцитов (в %) после обработки ингибиторами ион-транспортных систем

Сопоставление величины ингибируемых фуросемидом потоков натрия и калия показывает, что переносчик осуществляет транспорт этих ионов в эквимолярных количествах, причем этот процесс может быть направлен как в клетку, так и из нее (Garay R.P. et al„ 1980). При отсутствии дополнительных воздействий в эритроцитах человека величины входящего и выходящего потоков натрия и калия, генерируемые этим переносчиком, примерно равны. Иными словами Na+, К+-котранспорт не принимает существенного участия в регуляции концентрации Na+¡„ (Постнов Ю.В., Орлов С.Н., 1987), возможно этим

объясняется отсутствие эффекта фуросемида на процесс агрегатообра-зования эритроцитов.

Калиевый ионофор валиномицин и ингибитор анионного переносчика белка полосы 3 DIDS оказывают выраженное влияние на изменение ионного гомеостаза клетки. Для этих соединений зафиксирован и статистически значимый эффект на процесс объединеши эритроцитов в агрегаты. '

ВЫВОДЫ:

Наиболее адекватным методом оценки процесса агрегатообразо-вания эритроцитов in vitro является метод оптической микроскопии с видеорегистрацией и последующим компьютерным анализом изображения. Данные, полученные при использовании этого метода, хорошо согласуются с изменениями реологических свойств крови при низкосдвиговом течении, показателями агрегации, измеренными фотометрическим методом, и позволяют оценивать не только количественные, но и качественные параметры процесса агрегации: морфологию агрегатов, возможные изменения формы клеток крови.

2. Степень агрегации эритроцитов возрастает при повышении уровня кислотности среды от 7,0 до 7,8. Выявленные корреляционные зависимости агрегации от уровня рН крови и однонаправленные изменения степени агрегации при различных показателях кислотности как плазмы, так и стандартного раствора, указывают на обусловленность этих процессов модификацией клеточных свойств.

3. Изменение концентрации ионизированного кальция в плазме оказывает влияние на процесс объединения эритроцитов в агрегаты. В физиологической области концентраций рост степени агрегации с повышением уровня свободного кальция в плазме имеет дозозависимый характер. Агрегируемость эритроцитов определяется повышением содержания мембраносвязанного кальция.

4. Белки свертывающей системы крови (фибриноген и тромбин) способствуют объединению эритроцитов в агрегаты. Повышенное содержание в плазме катехоламинов, простагландинов Ei, Е2 и ацетилхо-лина стимулирует агрегатообразование эритроцитов. Этот эффект опосредуется взаимодействием биологически активных веществ с красными клетками крови, а не влиянием на свойства плазмы.

5. В состоянии нормы выявлена максимальная адренореактив-ность организма, что отразилось также и в значительном повышении степени агрегации под влиянием катехоламинов. При патологии зафиксирована исходно высокая степень агрегации в сочетании с пониженной адренореактивностью и менее выраженным изменением агре-гационных свойств эритроцитов при адренергических воздействиях. При тяжелых формах патологии отмечены существенные изменения а-адренореактивности и повышенная чувствительность процесса агрега-тообразования эритроцитов к а-адренергическим воздействиям.

6. Повышенные концентрации катехоламинов оказывают стимулирующее действие на процесс агрегатообразования эритроцитов. Эффект катехоламинов опосредуется активацией аг и а2-адренорецепторов. Проагрегантное действие катехоламинов сопровождается Гардош-эффектом. Кроме того, повышение степени агрегации эритроцитов после инкубации как с а-, так и с Р-агонистами адреноре-цепторов свидетельствует о реализации клеточного ответа без участия классической сигналинг-системы (G-белок — аденилатциклаза) при действии р-адреномиметиков.

7. Существенные отличия проагрегантного эффекта адренергических соединений для эритроцитов разной ABO групповой принадлежности демонстрируют, что степень выраженности влияния этих соединений зависит от присутствия антигенных детерминант на мембране — в присутствии антигенов А и В воздействие минимальное, в их отсутствие (группа О (I)) - максимальное. Выявленные особенности указывают на то, что присутствие антигенов на эритроцитарной мембране оказывает влияние на количество и/или функциональную активность адренорецепторов.

8. Физиологически активные соединения способны оказывать существенное влияние на величину заряда мембран эритроцитов, однако отсутствие корреляционной зависимости между изменением поверхностного заряда клеток и степенью их агрегации свидетельствует о том, что взаимодействие красных клеток крови не может быть сведено лишь к электростатическому притяжению или отталкиванию, и в основе процесса агрегации лежат более сложные молекулярно-биологические механизмы. Изменение сорбционной способности и проницаемости мембран эритроцитов не является основным фактором объединения эритроцитов в агрегаты.

лективных калиевых каналов (Гардош-эффект). Агрегируемость эритроцитов возрастает при активации Са-зависимых калиевых каналов.

Ю. Ингибирование анионного переносчика (белка полосы 3) приводит к снижению агрегируемости эритроцитов, изменение баланса ионов калия способствует агрегации красных клеток крови. В условиях энергодефицита способность эритроцитов к агрегатообразованию возрастает.

Список публикаций по теме диссертации.

1. Tikhomirova I.A., Levin V.N., Muravyov A.V. The effect of dehydration on macro- and microrheological blood properties // Abstr. The Second Asian Congress of Microcirculation. — Benjin, China, 1995. -P. 208.

2. Тихомирова И.А., Левин B.H., Муравьев A.B. Влияние клеточных факторов на процесс агрегатообразования эритроцитов при алиментарной дегидратации // Тез. докладов межвуз. конф. «Акту-альн. вопросы физиологии и теории физической культуры» - Ярославль, 1997. - С. 46-48.

3. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Якусевич В.В., Зайцев Л.Г., Левин В.Н. Гемореологические профили у пациентов с артериальной гипертензией и бронхиальной астмой // Вестник РАМН. — 1997. — №8.-С. 19-22.

4. Тихомирова И.А., Левин В.Н., Муравьев A.B. Агрегационные характеристики возрастных фракций эритроцитов при водной депри-вации // Мат. международн. конф. «Микроциркуляция и геморео-логия» — Москва-Ярославль, 1997. - С. 206.

5. Тихомирова И.А. Белковый состав плазмы и агрегатные свойства крови при дегидратации // Тез. области, научн. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы естествознания» - Ярославль, 1997.-С. 158.

6. Тихомирова И.А. Влияние продолжительности водной депривации на агрегатные свойства эритроцитов крови // Мат. конф. «Актуальные вопросы теории и практики физического воспитания» - Ярославль, 1998. - С. 48-51.

7. Тихомирова H.A. Некоторые аспекты влияния эндогенных факторов на процесс агрегатообразования эритроцитов при водной депривации // Мат. конф. молодых ученых России с международн. участием, посвящ- 240-летию ММА им. И.М. Сеченова «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» — Москва, 1998.-С. 251-252.

8. Тихомирова И.А. Методические подходы к изучению агрегации эритроцитов // Сб. мат. межвуз. научн. конф., посвящ. 10-летию кафедры медико-биологических основ спорта «Биология. Медицина. Спорт» - Ярославль, 1999. — С. 37-38.

9. Tikhomirova I.A. Density separation of red blood cells as a model for studying cellular factors of aggregation in vitro 11 Biorheology. - 1999. — Vol. 36. — N 1/2. — P. 170.

10. Тихомирова И.А. Агрегатные свойства крови в норме и экстремальных условиях // Сб. мат. II международн. конф. «Микроциркуляция и гемореология». — Ярославль, 1999. - С. 243-244.

11. Тихомирова И.А., Муравьев А.В. II Международная конференция «Микроциркуляция и гемореология» // Физиология человека. — 2000.-т. 26.-№2.-С. 193-194.

12. Тихомирова И.А. Об использовании теста СОЭ для оценки агрега-тообразования эритроцитов // Мат. межвуз. научн. конф. «Биология. Медицина. Спорт». - Ярославль, 2000. - С. 32-34.

13. Tikhomirova I.A., Levin V.N., Muravyov A.V. Major alterations in body fluid status and blood rheology: Abstr. 2nd Inetrn. Congress of the Central European Vascular Forum, Rome, September 14-16, 2000 // Minerva Cardioangiologica, 2000. - Vol. 48. - Suppl. 1. -N 9. - P. 20.

14. Tikhomirova I.A. The effect of dehydration on macro- and micror-heological blood properties: Abstr. 11th European Conference on clinical hemorheology, Rouen, September 20-22, 2000 // Journal des Maladies Vasculaires. - 2000. - Vol. 25. - Suppl. B. - P. 145.

15. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Зайцев Л.Г. Оценка вклада микрореологических свойств эритроцитов разных возрастных популяций в сопротивление кровотоку // Мат. II Всерос. конгресса по патофизиологии. — Москва, 2000. — С. 273.

16. Тихомирова И.А., Муравьев А.В. 11-я Европейская конференция по клинической гемореологии // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2000.-№4.-С. 2.

17. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Якусевич В.В. Сравнительная оценка методов исследования процесса агрегации эритроцитов in vitro // Сборник итоговых работ хирургич. общества им. Н.И. Пи-рогова, секция сердечно-сосудистой хирургии и ангиологии. — СПб, 2001. - Вып. 2. - С. 93-96.

18. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Зайцев Л.Г., Борисов Д.В., Старшинов А.В. Агрегация эритроцитов разных возрастных популяций при нарушении кровообращения // Мат. международн. конф., посвящ. 75-летию со дня рождения A.M. Уголева «Меха-

низмы функционирования висцеральных систем». — СПб., 2001. — С. 252.

19. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Быков И.В. Изменения в системе крови при экспериментальной дегидратации организма белых крыс Н Мат. международн. конф., посвящ. 75-летию со дня рождения A.M. Уголева «Механизмы функционирования висцеральных систем». - СПб., 2001. - С. 361-362.

20. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Быков И.В., Борисов Д.В. Влияние рН среды на агрегатные свойства крови // Тез. докл. XYIII съезда физиол. общества им. И.П. Павлова. - Казань, 2001. -С. 435.

21. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Борисов Д.В. Исследование вовлеченности кальмодулина в процесс агрегатообразования эритроцитов // Мат. международн. конфер. по гемореологии. - Ярославль, 2001.-С. 34-35.

22. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Борисов Д.В. Кислотно-основное равновесие и агрегатные свойства крови // Мат. международн. конфер. по гемореологии. — Ярославль, 2001. —С. 64-65.

23. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Yakusevich V.V., Kabanov A.V. Comparison of the effects of ACE-inhibotor fosinopril and simvastatin therapy on hemorheological profiles in hypertensive patients // Biorheology. - 2002. - Vol. 36. - N 5. - P. 693.

24. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Michailov P.V., Turova E.V. Study of the role of Ca2+ as a second messenger in changes of red blood cell aggregation // Biorheology. - 2002. - Vol. 36. - N 5. - P. 676.

25. Tikhomirova I.A. The effect of dehydration on macro- and micror-heological blood properties // Clinical Hemorheology and Microcirculation (blood flow and vessels). - 2002. - Vol. 26. - N 2. - P. 85-90.

26. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Levin V.N. Major alterations in body fluid status and blood rheology // Clinical Hemorheology and Microcirculation (blood flow and vessels). - 2002. - Vol. 26. - N 3. -P. 195-198.

27. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Борисов Д.В. Анализ влияния плазменных и клеточных факторов на агрегацию эритроцитов разных возрастных популяций // Физиология человека. — 2002. — Т. 28. — № 4. — С. 118-122.

28. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Borisov D.V. The effect of ionized calcium and acid-base balance on erythrocyte aggregability // Biorheology. - 2002. - Vol. 36. - N 5. - P. 600.

29. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Михайлов П.В., Борисов Д.В., Турова Е.В. Компьютерная регистрация агрегации эритроцитов

при их инкубации с адреналином // Мат. научно-практ. конференции «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике». - СПб, 2003. — С. 78-80.

30. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Михайлов П.В. Влияние некоторых физико-химических констант плазмы на процесс агрегато-образования эритроцитов // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2003. -№2(14).-С. 51-54.

31. Тихомирова И.А., Муравьев A.B. Изменение кальциевого гомео-стаза и агрегатные свойства эритроцитов // Мат. международн. конференции «Гемореология и микроциркуляция». — Ярославль,

2003.-С. 12.

32. Tikhomirova I.A., Muravyov A.V., Mikhailov P.V. Investigation of the effect of elevated level of catecholamines on erythrocyte aggregation // Abstr. 12th European conference on clinical liemorheology & Eurosummer School on biorheology. — Sofia, 2003. - P. 52-53.

33. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Михайлов П.В. Влияние содержания экстрацеллюлярного ионизированного кальция на агрегатные свойства крови // Теоретические основы современного естествознания. Мат. конф. «Чтения Ушинского, ЕГФ». - Ярославль: ЯГПУ, 2003. - С. 103-108.

34. Тихомирова И.А. Изменение агрегации эритроцитов при стимуляции входа кальция в клетку // Тез. докл. Третьей Всеросс. с международн. участием школы-конференции по физиологии кровообращения. — Москва, 2004. - С. 105.

35. Тихомирова И.А. Агрегация эритроцитов при инкубации с адре-номиметиками у лиц с разными группами крови // Мат. научно-практ. конф. «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике». - СПб, 2004. — С.103-104.

36. Тихомирова И.А., Муравьев A.B. Влияние катехоламинов на процесс агрегатообразования эритроцитов // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 2004. - Т. 90. - № 8. - С. 150.

37. Тихомирова И.А. Влияние катехоламинов и инсулина на электро-форетическую подвижность эритроцитов // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2004. - Т. 10. - № 3. - С. 49.

38. Тихомирова И.А., Муравьев A.B. Агрегация эритроцитов при изменении экстрацеллюлярного pH // Тез. докл. III Российского конгресса по патофизиологии с международн. участием. — Москва,

2004. - С. 75.

39. Тихомирова И.А. Влияние экстрацеллюлярного уровня кислотности на агрегатные свойства эритроцитов // Вестник Костромского

государственного университета им. H.A. Некрасова. — 2004. — № 4 (48). - С. 4-6.

40. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Голубкова Е.В. Гардош-эффект и агрегация эритроцитов И «Регионарное кровообращение и микроциркуляция».-2005.-№ 1(13).— С. 137-138.

41. Тихомирова И.А. Агрегация и электрофоретическая подвижность эритроцитов под воздействием метаболических гормонов // Мат. второй Всерос. научн. конф. «Клиническая гемостазиология и ге-мореология в сердечно-сосудистой хирургии» (с межцународн. участием). — Москва, 2-4 февраля 2005. — С. 134.

42. Тихомирова И.А., Голубкова Е.В. Изменение электрофоретиче-ской подвижности эритроцитов под влиянием некоторых гормонов // Мат. конф. «Чтения Ушинского» ЯГПУ. - 2005. - С. 121-127.

43. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Чучканов Ф.А., Муравьев A.A., Маймистова A.A. Сравнительная гемореологическая эффективность трентала и его генерических копий // Клиническая фармакология и терапия. - 2005. - № 14 (5). - С. 1-3.

44. Тихомирова И.А., Голубкова Е.В., Гусева Е.П., Муравьев A.B., Спасов A.A., Степанов A.B. Изучение влияния разных концентраций трентала на мембранные свойства эритроцитов человека // Мат. международн. конф. «Гемореологая в микро- и макроциркуляции». -Ярославль, 2005. - С. 22.

45. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Туров В.Е., Колбаско И.В., Маймистова A.A. Новый капиллярный полуавтоматический вискозиметр // Мат. международн. конф. «Гемореологая в микро- и макроциркуляции». — Ярославль, 2005. — С. 28.

46. Тихомирова И.А., Гусева Е.П., Муравьев A.B. Изучение адреноре-активности и агрегационного ответа эритроцитов на адренергиче-ские воздействия в норме и при патологии // Мат. международн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». — Ярославль, 2005.-С. 200.

47. Тихомирова И.А., Гусева Е.П., Муравьев A.B., Волков Ю.Н. Влияние катехоламинов на степень агрегации и сорбционную способность эритроцитов при сердечной патологии // Мат. международн. конф. «Гемореология в микро- и макроциркуляции». — Ярославль, 2005. - С. 204.

48. Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Гусева Е.П. Влияние антигенных свойств эритроцитов человека на их способность к агрегато-образованию под действием адренергических соединений И Научные труды I съезда физиологов СНГ, Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. — Т.1. — С. 93.

49. Tikhomirova I.A. Selective response of the degree of red blood cell aggregation to the action of the catecholamines: effect of ABO blood groups // Abstr. 13th of the European Society for Clinical Hemorheol-ogy, June 26-29, Siena, Italy, 2005. - P. 35-36.

50. Тихомирова И.А. Агрегационные свойства эритроцитов разной групповой (АВО) принадлежности при адренергических воздействиях // Технологии живых систем. — 2005. - № 3. — С. 26-31.

51. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Голубкова Е.В. Анализ возможных механизмов трансдукции гормонального сигнала в эритроцитах человека // Вестник Костромского государственного университета им. Н.А. Некрасова. - 2005. - № 8. - С. 15-19.

52. Тихомирова И.А., Гусева Е.П., Петроченко А.С. Мембранные свойства эр1процитов и адренореактивность организма в норме и при патологии // Ангиология и сосудистая хирургия. Мат. II Все-рос. конф. с международн. участием «Микроциркуляция в клинической практике», Москва, 19-20 апреля 2006. - С, 54.

53. Тихомирова И.А., Муравьев А.В., Гусева Е.П. Адренореактивность организма и агрегатные свойства эритроцитов в норме и при патологии И «Регионарное кровообращение и микроциркуляция». - 2006. - Т. 5. - № 2(18). - С. 63-68.

Подписано в печать 29.09.2006 г. Формат 60x84 1/16. Объем 2,8 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 984

Издательство Ярославского государственного педагогического Университета имени К.Д. Ушинского 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, 108

Типография ЯГПУ им. К.Д. Ушинского 150000, г. Ярославль, Которосльная наб., 44

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Тихомирова, Ирина Александровна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Феномен внутрисосудистой агрегации эритроцитов и реологические свойства крови.

1.2. Механизмы процесса агрегатообразования.

1.3. Экстрацеллюлярные факторы агрегации эритроцитов.

1.4. Мембранные свойства эритроцитов.

1.5. Трансдукция сигнала и внутриклеточные процессы.

Глава 2. Организация, материалы и методы исследования.

Глава 3. Оценка вклада процесса агрегатообразования в повышение вязкости крови при низких скоростях сдвига и сравнительный анализ методов оценки агрегации эритроцитов.

Глава 4. Влияние плазменных факторов на межэритроцитарные взаимодействия.

4.1. Изменение уровня рН среды.

4.2. Изменение уровня свободного экстрацеллюлярного кальция.

4.3. Влияние белков свертывающей системы крови на объединение эритроцитов в агрегаты.

Глава 5. Влияние регуляторных молекул на агрегацию эритроцитов.

Глава 6. Оценка адренореактивности организма и агрегации эритроцитов под действием адренергических соединений.

Глава 7. Анализ механизмов трансдукции сигнала при адренергических воздействиях на эритроциты.

Глава 8. Влияние групповой (ABO) принадлежности эритроцитов на их агрегатные свойства.

Глава 9. Оценка взаимосвязи агрегатных свойств эритроцитов с их мембранными свойствами.

Глава 10. Оценка роли внутриклеточного ионизированного кальция в процессе агрегации эритроцитов.

Глава 11. Оценка взаимодействия эритроцитов в условиях энергодефицита и при изменениях ионного гомеостаза.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов"

Обеспечение газообмена является основной функцией эритроцитов. Оксигенация клеток и тканей организма в значительной степени зависит не только от способности гемоглобина связывать и высвобождать кислород, но также и от реологических свойств эритроцитов - их способности к деформации и объединению в агрегаты, поскольку клеточные функции осуществляются, в основном, через свободную поверхность их мембран. Эти свойства во многом определяют эффективность перфузии на уровне микроциркуляции (Куприянов В.В. и соавт., 1975; Левтов В.А. и соавт., 1982).

Эритроциты человека в физиологических условиях объединяются в линейные и разветвленные агрегаты при снижении скоростей сдвига до критического уровня. Формирование таких агрегатов обуславливает до 60% венозного сопротивления (Cabel М. et al, 1997), и степень агрегации эритроцитов считается одной из важнейших детерминант неньтоновских свойств крови, в том числе и в условиях течения in vivo (Левтов В.А. и соавт., 1982; Фирсов H.H., Джанашия П.Х., 2004).

Обратимая агрегация красных клеток крови необходима для нормального кислородного питания тканей и удаления из них продуктов метаболизма. При пониженной склонности эритроцитов к агрегации наблюдаются диффузионные расстройства дыхания. Образование агрегатов по типу монетных столбиков способствует обмену кислородом между эритроцитами. Если учесть, что по артерио-венозным анастомозам, где отдачи кислорода не происходит, в норме проходит около 30% крови, то в венулярном отделе образуется смесь оксигенированных и полностью деоксигенированных красных клеток крови. В монетных столбиках и происходит усреднение их степени оксигенации для более эффективного восприятия кислорода в легких (Фок М.В., 1999).

Агрегация эритроцитов in vivo оказывает многофакторное комплексное влияние на сопротивление кровотоку и оно может реализовываться посредством следующих механизмов: 1) за счет уменьшения упорядоченности линейного течения при увеличении размера движущихся частиц (Baskurt O.K. et al., 1997); 2) повышением затрат энергии на разобщение клеток в условиях микроциркуляции (Vicaut Е., 1995); 3) агрегация способствует аксиальному дрейфу эритроцитов и образованию краевого плазменного слоя (Goldsmith H.L. et al., 1989; Cokelet G.R. et al., 1991). Повышенное аксиальное скопление эритроцитов способствует снижению локальной вязкости в пристеночной зоне сосуда (Reinke W. et al., 1987; Alonso С. et al., 1993; Suzuki Y. et al., 1996), тем самым, модулируя активность сосудистых регуляторных механизмов, активируемых механическим стрессом. Это выражается в ингибировании генерации N0 эндотелием (Baskurt O.K. et al., 2004), затруднении процесса деок-сигенации и снижении отдачи кислорода тканям при существенном увеличения пристеночного слоя плазмы, выступающего в качестве барьера для диффузии кислорода (Tateishi N. et al., 2001, 2002).

Значение агрегации эритроцитов особенно возрастает в условиях патологии, поскольку при этом изменяются степень агрегации, скорость агрега-тообразования, устойчивость образующихся агрегатов, их размеры и морфология (Галенок В.А. и соавт., 1987; Селезнев С.А. и соавт., 1985). Повышенная степень агрегации ведет к ухудшению оксигенации тканей, способствует развитию ишемии и тромбоза, приводит к нарушению микроциркуляции органов и тканей (Чернух A.M., 1984; Koenig W. et al., 1988; Mchedlishvili G., Maeda N., 2001 ; Meiselman H.J, 2002).

Несмотря на то, что исследования процесса объединения эритроцитов в агрегаты ведутся уже достаточно давно, механизмы этого явления остаются предметом предположений и гипотез (Fabry T.L., 1987; Brooks D., 1988; Bäumler I. et al, 1999; Neu В, Meiselman H.J, 2002).

В более ранних экспериментальных работах по изучению агрегации эритроцитов основное внимание уделялось влиянию суспензионной среды (плазмы или растворов высокомолекулярных соединений) на межклеточные взаимодействия (Maeda N. et al, 1984; Donner M. et al, 1989). В последнее время внимание исследователей все больше фокусируется на клеточных факторах агрегации, т.е. на свойствах самих эритроцитов (Nash G.B. et al., 1987; Meiselman H., 1993; Neu В. et al., 2003).

Функциональное состояние эритроцитов в значительной степени зависит от физико-химических свойств и химического состава плазмы крови, поскольку, являясь высокоспециализированной клеткой, эритроцит не способен к основным видам биосинтеза а, следовательно, внутриклеточной регенерации (Блохина Т.А. и соавт., 2001).

Мембрана эритроцита, как и любой другой клетки, выполняет барьерную функцию, отделяя его от внешней среды. В то же время через нее осуществляется как активный, так и пассивный транспорт веществ внутрь клетки и из нее во внешнюю среду. Мембрана является местом протекания важнейших ферментативных процессов и осуществления иммунных реакций. На, своей поверхности мембрана несет информацию о группе крови. На мембране имеется поверхностный электрический заряд, который играет важную роль во многих процессах, обеспечивающих жизнедеятельность клетки, он непосредственно связан с физико-химическими превращениями, происходящими на клеточных мембранах.

При передаче сигнала гормонами, простагландинами и другими биологически активными веществами основные молекулярные компоненты, участвующие в регуляции, локализованы в клеточных мембранах (Черницкий Е.А., Воробей А.В., 1981).

Традиционно эритроциты считались достаточно редуцированными клетками и рассматривались лишь в качестве простых резервуаров для транспорта кислорода. Однако впоследствии было установлено, что эти клетки обладают значительным набором сигнальных молекул (Minetti G., Low P.S., 1997; Hines P.S. et al., 2003). Так, экспериментально было доказано наличие в мембранах эритроцитов человека а- и (3-адренорецепторов (Rasmussen Н. et al., 1975; Sundquist J. et al., 1992; Tuvia S. et al., 1999), рецепторов к инсулину (Gambhir К. et al., 1978; Bhattacharaya S. et al., 2001) и церулоплазмину (Saenko Е., Yaropolov А., 1990), эндотелину-1 (Sakashita К. et al., 1999), мускариновых холинергических рецепторов (Tang L. et al., 1984) и т.д. Эти факты свидетельствуют об участии красных клеток крови в регулятор-ных процессах, направленных на интеграцию функций организма.

Всякая стимуляция эритроцитов к агрегации приводит к увеличению коагуляционного потенциала крови. В этой системе положительной обратной связи изменения реологических свойств крови играют роль усилителя. Нарушение микроциркуляции, свертывающей системы крови и реологических свойств крови есть единство трех взаимно усиливающих друг друга неспецифических процессов (Фирсов H.H., Джанашия П.Х., 2004).

Таким образом, процесс агрегации эритроцитов является сложным, многофакторным и оказывает существенное влияние на выполнение кровью ее основной кислородтранспортной функции. Недостаточная изученность механизмов агрегатообразования как в физиологических условиях, так и, особенно, при патологии затрудняет возможность управления этим процессом и коррекцию возможных негативных последствий.

Все вышеизложенное предопределило тему настоящего исследования. Цель работы: комплексное изучение влияния физико-химических свойств плазмы, мембранных и внутриклеточных факторов на процесс объединения в агрегаты эритроцитов человека. Задачи исследования.

3. Изучить влияние регуляторных молекул (гормонов, нейромедиаторов, па-ракринных факторов) на процесс объединения в агрегаты красных клеток крови.

5. С учетом возможной рецепторной инициации провести анализ механизмов трансдукции сигнала при гормональных воздействиях на эритроциты.

8. Изучить роль внутриклеточного ионизированного кальция в процессе агрегации эритроцитов.

9. Оценить взаимодействие эритроцитов при изменениях их ионного гомео-стаза и в условиях энергодефицита.

Научная новизна проведенного исследования заключается в том, что впервые проведено комплексное исследование эндогенных факторов, определяющих процесс агрегатообразования эритроцитов человека в норме и при патологии.

Выявлены механизмы адренергических воздействий на эритроциты: показано, что при высоких концентрациях катехоламинов их влияние на процесс агрегатообразования эритроцитов опосредуется активацией а-адренергических рецепторов. Получены новые данные об особенностях про-агрегантного действия (3-адренергических соединений на эритроциты человека.

Впервые зафиксировано влияние ABO групповой принадлежности эритроцитов на их агрегатные свойства под действием адренергических соединений. Показано, что степень выраженности влияния этих соединений зависит от присутствия антигенных детерминант на мембране. Выявлены особенности катехоламинового ответа клеток в зависимости от присутствия антигенов на эритроцитарной мембране.

Продемонстрировано отсутствие жесткой детерминированности агрегатных свойств эритроцитов величиной их поверхностного заряда, сорбци-онной способности и проницаемости мембран.

Экспериментально подтвержден существенный вклад процесса агрегатообразования эритроцитов в проявление неньютоновских свойств крови при низкосдвиговом течении. Произведен сравнительный анализ ряда методов изучения процесса агрегатообразования in vitro с оценкой их информативности и адекватности. Усовершенствован комплекс методов исследования с целью повышения их точности и чувствительности.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные о вкладе процесса агрегатообразования в повышение вязкости крови при низких скоростях сдвига, о взаимосвязи агрегатных свойств и коагулядионного потенциала крови, обусловленности адренореак-тивности организма изменением мембранных свойств эритроцитов убедительно показывают важность процесса агрегатообразования эритроцитов в обеспечении кислородтранспортной функции крови и интеграции функций организма.

Получены новые данные о межклеточных взаимодействиях форменных элементов крови, механизмах их активации и ингибирования под действием физиологически активных соединений, ионного и энергетического баланса клеток, которые в существенной мере пополняют существующее научное знание в этой области.

Установленное влияние гуморальных факторов с участием различных сигнальных молекул и активацией рецепторного аппарата клетки, ее транспортных систем на объединение эритроцитов в агрегаты позволяет выработать подходы к управлению процессом межэритроцитарных взаимодействий с целью предупреждения или коррекции возможных негативных последствий этого явления при стрессе или патологии.

Выявленные особенности агрегатного поведения эритроцитов разной ABO групповой принадлежности под действием катехоламинов, адренореак-тивности организма и степени агрегации при разных видах патологии могут послужить основой для разработки индивидуальных корригирующих воздействий.

Материалы диссертации расширяют представления о факторах и механизмах регуляции вязкости крови, создают новые направления в гемореоло-гии, важнейшем разделе физиологии крови. Они могут быть использованы при чтении соответствующих разделов физиологии в вузах, а также для совершенствования методов регуляции кровотока в сердечно-сосудистой системе человека.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Физико-химические свойства и биологически активные вещества плазмы оказывают выраженное влияние на процесс агрегатообразования эритроцитов человека. Эти эффекты обусловлены модификацией клеточных свойств.

2. Адренореактивность организма человека в норме и при патологии различна. Изменения адренореактивности отражаются во влиянии адренергиче-ских соединений на процесс объединения эритроцитов в агрегаты.

3. Проагрегантное действие катехоламинов обусловлено активацией адрено-рецепторов и сопровождается изменением ионного баланса клетки.

5. Изменения электрофизиологических характеристик, сорбционной способности и неспецифической проницаемости мембран эритроцитов не детерминируют процесс агрегации эритроцитов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Тихомирова, Ирина Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Между степенью агрегации эритроцитов и показателем консистенции крови существует высокая коррелятивная взаимосвязь, которая свидетельствует о существенном вкладе агрегации эритроцитов в неньютоновские свойства крови (коэффициент детерминации составил более 60%). Наиболее адекватным методом оценки процесса агрегатообразования эритроцитов in vitro является метод оптической микроскопии с видеорегистрацией и последующим компьютерным анализом изображения. Данные, полученные при использовании этого метода, хорошо согласуются с изменениями реологических свойств крови при низкосдвиговом течении, показателями агрегации, измеренными фотометрическим методом, и позволяют оценивать не только количественные, но и качественные параметры процесса агрегации: морфологию агрегатов, возможные изменения формы клеток крови.

3. Изменение концентрации ионизированного кальция в плазме оказывает влияние на процесс объединения эритроцитов в агрегаты. В физиологической области концентраций рост степени агрегации с повышением уровня свободного кальция в плазме имеет дозозависимый характер. Агрегируе-мость эритроцитов определяется повышением содержания мембраносвя-занного кальция.

4. Белки свертывающей системы крови (фибриноген и тромбин) способствуют объединению эритроцитов в агрегаты. Повышенное содержание в плазме катехоламинов, простагландинов Е[ и Е2 и ацетилхолина стимулирует агрегатообразование эритроцитов. Этот эффект опосредуется взаимодействием биологически активных веществ с красными клетками крови, а не влиянием на свойства плазмы.

5. В состоянии нормы выявлена максимальная адренореактивность организма, что отразилось также и в значительном повышении степени агрегации под влиянием катехоламинов. При патологии зафиксирована исходно высокая степень агрегации в сочетании с пониженной адренореактивностью и менее выраженным изменением агрегационных свойств эритроцитов при адренергических воздействиях. При тяжелых формах патологии отмечены существенные изменения а-адренореактивности и повышенная чувствительность процесса агрегатообразования эритроцитов к а-адренергическим воздействиям.

6. Повышенные концентрации катехоламинов оказывают стимулирующее действие на процесс агрегатообразования эритроцитов. Эффект катехоламинов опосредуется активацией a¡- и аг-адренорецепторов. Проагрегант-ное действие катехоламинов сопровождается Гардош-эффектом. Кроме того, повышение степени агрегации эритроцитов после инкубации как с а-, так и с (3-агонистами адренорецепторов свидетельствует о реализации клеточного ответа без участия классической сигналинг-системы (G-белок - аденилатциклаза) при действии (3-адреномиметиков.

7. Существенные отличия проагрегантного эффекта адренергических соединений для эритроцитов разной ABO групповой принадлежности демонстрируют, что степень выраженности влияния этих соединений зависит от присутствия антигенных детерминант на мембране - в присутствии антигенов А и В воздействие минимальное, в их отсутствие (группа О (I)) - максимальное. Выявленные особенности указывают на то, что присутствие антигенов на эритроцитарной мембране оказывает влияние на количество и/или функциональную активность адренорецепторов.

9. Повышение внутриклеточного пула кальция как при стимуляции входа в клетку, так и при ингибировании Са-насоса приводит к интенсификации процесса агрегатообразования эритроцитов. Повышение концентрации внутриклеточного кальция приводит к открытию селективных калиевых каналов (Гардош-эффекту). Агрегируемость эритроцитов возрастает при активации Са-зависимых калиевых каналов.

10. Ингибирование анионного переносчика (белка полосы 3) приводит к снижению агрегируемости эритроцитов, изменение баланса ионов калия способствует агрегации красных клеток крови. В условиях энергодефицита способность эритроцитов к агрегатообразованию возрастает.

239

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Тихомирова, Ирина Александровна, Ярославль

1. Авакян О.М. Фармакологическая регуляция функции адренорецепторов. -М.: Наука, 1988.-256 с.

2. Авдонин П.В, Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. -М.: Наука, 1994.-288 с.

3. Аксенцев С.Л. Структурно-функциональная специфичность перестроек биологических мембран: Автореф. дис. докт. биол. наук. Минск, 1983.

4. Андреев И.М, Романова B.C., Петрухина А.О, Андреев С.М. Аминокислотные производные фуллерена С60 ведут себя как липофильные ионы, проникающие через биологические мембраны // Физика твердого тела. 2002. - Т. 44. - Вып. 4. - С.658-660.

5. Андрианова И.Г. Плазма крови / В кн.: Физиология системы крови. Л.: Наука, 1968.-С. 14-41.

6. Ашкинази И.Я. Агрегация эритроцитов и тромбопластинообразование // Бюлл. экспер. биол. мед. 1972. - Т. 74. -№ 7. - С. 28-31.

7. Баркаган З.С, Костюченко Г.И, Котовщикова Е.Ф. Эндотелиоз и воспалительная концепция атеротромбоза критерии диагностики и проблемы терапии // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2004. - № 4. - С. 3-11.

8. Бергельсон Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука, 1982. - 182с.

9. Бережная Н.М, Котова С. А. Бета-адренергические рецепторы цитоплазматической мембраны лимфоцитов больных атопической бронхиальной астмой // Иммунология. 1990. - № 1. - С. 46-48.

10. Блохина Т.А, Назаров С.Б, Чемоданов В.В. Роль плазменных факторов в регуляции реологических свойств эритроцитов человека // Мат. меж-дународн. конф. по гемореологии. Ярославль, 2001. - С. 60-61.

11. Блохина Т.А, Назаров С.Б. Зависимость реологических характеристик эритроцитов от состава плазмы // Мат. международн. научн. конф. «Актуальные проблемы адаптации организма в норме и патологии» Ярославль: Ремдер, 2005. - С. 49-51.

12. Брюханов В.М. Влияние дофамина на транспорт органических веществ в почках собак // Физиол. журн. СССР. 1983. - Т. LXIX. - № 8. - С. 1085-1091.

13. Бычков С.М., Кузьмина С.А. Агрегация эритроцитов в крови при различных состояниях организма // Бюлл. экспер. биол. мед. 1993. - Т. 115.-№6.-С. 604-607.

14. Ваньков Д.Е. Изменения реологических свойств крови при травматическом шоке и их роль в развитии расстройств системной гемодинамики // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1974. - № 2. - С. 28-32.

15. Варфоломеев С.Д., Гуревич К.Г. Биокинетика. М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999.-720 с.

16. Визир В.А., Березин А.Е. Патогенетическое значение плазменных и депонированных катехоламинов в формировании артериальной гипертен-зии //Укр. мед. час.-2001.-Т. 21.-№ 1.-С. 14-22.

17. Выборнова И.И., Епифанов С.Ю., Каданцев В.Н., Кононенко K.M. Исследование механизмов влияния температурного и химического факторов на функционирование биологических мембран // Физиология человека. 1997.-Т. 23.-№ 1.-С. 70-80.

18. Галенок В.А., Гостинская Е.В., Диккер В.Е. Гемореология при нарушениях углеводного обмена. Новосибирск: Наука, 1987. - 257 с.

19. Говырин В.А., Жоров Б.С. Лиганд-рецепторные взаимодействия в молекулярной физиологии. СПб: Наука, 1994. - 240 с.

20. Голубев М.А., Городецкий В.К., Аниськина А.П. и соавт. Сравнительная характеристика ванадий-содержащих соединений, обладающих инсули-но-подобным действием // Вопросы медицинской химии,- 2000. № 2. -С. 12-18.

21. Додхоев Д.С. Особенности проницаемости эритроцитарных мембран и сорбционная способность эритроцитов у здоровых доношенных новорожденных детей и их матерей // Физиология человека. 1998. - т. 24. - № 2.-С. 135-137.

22. Дубынин В.А., Каменский A.A., Сапин М.Р., Сивоглазов В.И. Регуля-торные системы организма человека. M.: Дрофа, 2003. - 368 с.

23. Зинчук В.В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты // Усп. физиол. наук.-2001.-Т. 32.-№3.-С. 63-68.

24. Зотиков Е.А. Антигенные системы человека и гомеостаз. М.: Наука, 1982.-233 с.

25. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообра-зования. Казань: Фэн, 2000. - 364 с.

26. Зубаиров Д.М., Киселев C.B., Булатова А.И. Влияние лектина Glycine Мах на взаимодействие протромбина с эритроцитами // Вопросы мед. химии. 1997. - Т. 43. - № 4. - С. 226-232.

27. Ивлева А.Я. Различия фармакологических свойств ß-адреноблокаторов и их клиническое значение // Фармакотерапия в кардиологии. 2003. - Т. 5,- № 11.- С. 5-13.

28. Кабанов A.B. Модификация гемореологического профиля у пациентов с артериальной гипертонией при терапии диуретиками: Автореф. дис. канд. мед. наук. Москва, 2002.

29. Кайракбаева Г.М., Токтамысова З.С. Чувствительность эритроцитов к гемолизу в зависимости от степени окисленности гемоглобина // Лабораторное дело. 1990,-№2.-С. 31-33.

30. Камман К. Работа с ионселективными электродами. М.: Мир, 1980. -283 с.

31. Катюхин JI.H. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования // Физиол. журнал. 1995. - Т.81. - № 6. - С.122-129.

32. Киричук В.Ф., Болотова Н.В., Николаева Н.В. Изменения микроцирку-ляторного гомеостаза и реологии крови при сахарном диабете // Тромбоз, гемостаз и реология. 2004. - № 4. - С. 12-19.

33. Кленова H.A. Биохимические механизмы дезинтеграции эритроцитов человека в различных условиях функционирования: Автореф. докт. биол. наук. Тюмень, 2003.

34. Клиническая биохимия / Под ред. В.А. Ткачука. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002.-360 с.

35. Козинец Г.И., Зоделава М.М., Борзова JI.B., Кульман P.A. Электрофорез клеток гемопоэтической ткани. Тбилиси: Сабчота Сакартвело, 1986. -150 с.

36. Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. и соавт. Клетки крови -современные технологии их анализа. М: Триада-фарм, 2002. - 200 с.

37. Кондратьев A.C., Михайлова И.А., Петрищев H.H. Влияние скорости кровотока на процесс тромбообразования в микрососудах // Биофизика. 1990. - Т. 35.'- № 3. - С. 469-472.

38. Красникова Т.Л. Бета-2-адренорецепторная система лимфоцитов человека при некоторых сердечно-сосудистых заболеваниях и действии лекарственных препаратов: Автореф. дис. докт. биол. наук. Москва, 1993.

39. Крыжановский Г.Н. Дизрегуляционная патология // Патогенез. 2004. -№ 1.-С. 21-29.

40. Крылов В.Н., Густов A.B., Дерюгина A.B. Электрофоретическая подвижность эритроцитов и стресс // Физиология человека. 1998. - Т. 24. -№6.-С. 108-111.

41. Крылов В.Н., Дерюгина A.B. Типичные изменения электрофоретической подвижности эритроцитов в условиях стресса // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Т. 139. - № 4. - С. 377-379.

42. Куприянов В.В., Караганов Я.Л., Козлов В.И. Микроциркуляторное русло. -М.: Медицина, 1975.-216 с.

43. Левин Г.Я., Кораблев С.Б., Модин А.П. и соавт. Микроциркуляция при ожоговом шоке. Клинические аспекты нарушений микроциркуляции и реологии крови. Горький, 1984. - 234 с.

44. Левин Г.Я. Нарушения гемостаза и ДВС-синдром в острый период ожоговой болезни // Тромбоз, гемостаз и реология. 2004. - № 4. - С. 5562.

45. Левин C.B. Структурные изменения клеточных мембран. Ленинград: Наука, 1976.- 198 с.

46. Левицкий Д.О. Кальций и биологические мембраны. М.: Высшая школа, 1990.- 124 с.

47. Левтов В.А., Регирер С.А., Шадрина Н.Х. Реология крови. М.: Медицина, 1982.-272 с.

48. Лукьянова Л.Д., Курлаев С.Н. О роли норадреналина в регуляции окислительного метаболизма миокарда крыс с разной резистентностью к гипоксии // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1992. - № 12. - С. 586-588.

49. Маленков А.Г. Ионный гомеостаз и автономное поведение опухоли. -1976.- 175 с.

50. Манухин Б.Н. Физиология адренорецепторов. Л.: Наука, 1968. - 234 с.

51. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. М: Мир, 1993.-т. 2.-414 с.

52. Матюшичев В.Б, Шамратова В.Г, Ахунова А.П, Гуцаева Д.Р. Половые и возрастные характеристики распределения электрофоретической подвижности // Журнал эвол. биохим. физиол. 2000. - Т. 36. - № 3. - С. 273-275.

53. Матюшичев В.Б, Шамратова В.Г. Регуляция электрокинетических свойств эритроцитов человека под воздействием эмоционального стрессора // Цитология. 2003. - Т. 45. - № 11. - С. 1119-1123.

54. Матюшичев В.Б, Шамратова В.Г, Ахунова А.П. Корреляция электрофоретической подвижности эритроцитов и скорости их седиментации в норме и при почечной патологии // Клиническая лабораторная диагностика. 2004. - № 4. - С. 22-24.

55. Матюшичев В.Б, Шамратова В.Г. Корреляция между электрофоретической подвижностью эритроцитов и содержанием эритроцитов в крови // Физиология человека. 2004. - Т. 30.-№4.- С. 138-140.

56. Матюшичев И.Б, Шамратова И.Г. Электрокинетическое поведение эритроцитов крови крыс: зависимость от клеточного объема // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. - Т. 137. - № 1. -С. 4-5.

57. Матюшичев В.Б, Шамратова В.Г. Зависимость электрофоретической подвижности эритроцитов от состояния кислотно-щелочного равновесия крови // Вестник Санкт-Петербургского университета, серия 3, биология. 2005.-вып.1,-С. 98-103.

58. Меерсон Ф.З, Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988. - 254 с.

59. Меерсон Ф.З. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца // Кардиология. 1990. - № 1. - С. 6-12.

60. Михайличенко Л.А, Александров П.Н. Модификация установки с камерой Горяева для измерения электрофоретической подвижности форменных элементов крови и других клеток / В кн.: Методы исследования микроциркуляции. Москва - Уфа, 2004. - С. 292-300.

61. Мищенко A.A. Зависимость кислотно-основных свойств эритроцитов человека, крысы и лягушки от адреналина, пропранолола и фитогемо-агглютининов: Автореф. дис. канд. биол. наук. Сыктывкар, 2000.

62. Муравьев A.B., Шинкаренко B.C., Баканова И.А. Реологические механизмы, обеспечивающие эффективность транспорта кислорода кровью // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. - № 4 (4). - С. 34-37.

63. Муравьев A.B. и соавт. Компьютерная регистрация агрегации эритроцитов при их инкубации с адреналином // Мат. научно-практ. конференции «Методы исследования регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинике». СПб, 2003. - С. 78-80.

64. Муравьев A.B., Туров В.Е., Колбаско И.В. и соавт. Новый капиллярный полуавтоматический вискозиметр // Мат. международн. конф. «Геморео-логия в микро- и макроциркуляции». Ярославль, 2005. - С. 28.

65. Нестерова JI.A., Манухин Б.Н. Закономерности ингибирования адренер-гической реакции катехоламинами // Физиол. журнал СССР им. И.М. Сеченова.- 1983.-Т. LXIX.-№8.-C. 1031-1036.

66. Нестерова JI.A., Шайымов Б.К., Манухин Б.Н. Характеристика адренер-гической реакции воротной вены печени крыс // Физиол. журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1990. - Т. 76. - № 9. - С. 1159-1164.

67. Нормальное кроветворение и его регуляция./ Под ред. H.A. Федорова. -М.: Медицина, 1976. 543 с.

68. Орлов С.Н., Шевченко A.C. О возможном механизме действия мембра-носвязанного кальция на активность аденозинтрифосфатазы и проницаемость эритроцитов для одновалентных катионов // Биохимия. 1978. -Т. 43,-№2.-С. 208-215.

69. Орлов С.Н., Покудин Н.И., Постнов Ю.В. Транспорт кальция в эритроцитах, нагруженных высокоселективным хелатором Са2+. Характеристики, связанные с первичной гипертензией // Кардиология. 1986. - Т. 26. -№ 11.-С. 90-96.

70. Орлов С.Н., Новиков К.Н. Регуляция объема клеток: механизмы, сопряженные клеточные реакции и патофизиологическое значение // Росс, фи-зиол. журнал им. И.М. Сеченова. 1996. - Т. 82. -№ 8-9. - С. 1-15.

71. Парфенова Е.В. Нейрогуморальные и рецепторные характеристики больных гипертонической болезнью с гипертрофией левого желудочка: Автореф. дис. докт. мед. наук. Москва, 1994.

72. Петрова И.В., Степовая Е.А., Колосова М.В. и соавт. Роль внутриклеточных сигнальных систем в регуляции Са2+-активируемых калиевых каналов эритроцитов // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1997. - Т. 123. - Т 6. -С. 653-655.

73. Поликар А. Элементы физиологии клетки. Ленинград: Наука, 1976. -389 с.

74. Постнов Ю.В. О мембранной концепции первичной артериальной гипертонии (к развитию представлений о природе гипертонической болезни) // Кардиология. 1985. - № 10. - С. 63-71.

75. Постнов Ю.В., Орлов С.Н. Первичная гипертензия как патология клеточных мембран. М.: Медицина, 1987. - 192 с.

76. Простагландины / Под ред. И.С. Ажгихина. М.: Медицина, 1978. - 416 с.

77. Пурло Н.В., Попова Н.В., Бирюкова Л.С., Козинец Г.И. Электрофорети-ческая подвижность эритроцитов как индикатор оценки функциональной интактности эритроцитов // Клиническая лабораторная диагностика. -2005.-№ 1,-С. 40-44.

78. Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов: междисциплинарный подход / под ред. Р.У. Штрауба. М.: Медицина, 1983. - 368 с.

79. Ройтман Е.В., Фирсов Н.Н., Дементьева М.Г. и соавт. Термины, понятия и подходы к исследованиям реологии крови в клинике // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. - №3 (3). - С. 5-12.

80. Ройтман Е.В. Клиническая гемореология // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003.-№ 3(15). - С. 14-15.

81. Сашенков C.JI., Захаров Ю.М., Егорова Н.В. и соавт. Механизм изменения электрофоретической подвижности эритроцитов акклимированных к теплу животных // Физиол. журн. СССР. 1989. - Т. 75. - № 9. - С. 1238-1242.

82. Селезнев С.А., Назаренко Г.И., Зайцев B.C. Клинические аспекты микро-гемоциркуляции. -М.: Медицина, 1985. 179 с.

83. Сергеев П.В., Шимановский H.JT, Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. М.: Медицина, 1999. - 637 с.

84. Соминский В.Н., Окунь К.В. Повышение осмотической резистентности эритроцитов под влиянием пропранолола // Лаб. дело. 1981. - № 9. - С. 525-527.

85. Соминский В.Н., Бердышева JI.B., Блума Р.К. и соавт. Использование эритроцитов крови для прижизненной оценки функционального состояния адренорецепторов // Физиол. журн. СССР. 1989. - № 2. - С. 189-193.

86. Столяр Г.М. Методика определения электрофоретической подвижности и дзета-потенциала клеток крови // Вопросы экспериментальной биофизики. Труды Горьковского мединститута. Горький, 1975. - Вып. 65. -С. 117-121.

87. Стрюк Р.И., Длусская И.Г. Адренореактивность и сердечно-сосудистая система. М.: Медицина, 2003. - 160 с.

88. Суслина З.А., Танашян М.М., Ионова В.Г. Дизрегуляция систем гемо-реологии и гемостаза при ишемических нарушениях мозгового кровообращения // Ангиология и сосудистая хирургия. 2006. - Прил. - с. 5.

89. Теппермен Дж, Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринная система. М: Мир, 1989.-656 с.

90. Титов В.Н. Фундаментальная медицина: функциональная роль инсулина как фактора обеспечения энергией биологической функции локомоции (обзор литературы) // Клин. лаб. диагностика. 2005. - № 2. - С. 3-8.

91. Ткачук В.А. Введение в молекулярную эндокринологию. М.: Изд-во МГУ, 1983.-256 с.

92. Ткачук В.А. Гормональная регуляция транспорта Са в клетках крови и сосудов // Рос. физиол. журнал им. И.М Сеченова. 1998. - Т. 84. - № 10.-С. 1006-1018.

93. Ткачук В.А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляция ионов

94. Са2+ // Биохимия. 1998а. -№ 63. - С. 49-58.

95. Ткачук В. А. Мембранные рецепторы и внутриклеточный кальций // Со-росовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7.-№ 1.-С. 10-15.

96. Ткачук В.А, Авакян А.Э. Молекулярные механизмы сопряжения в-белков с мембранными рецепторами и системами вторичных посредников // Росс, физиол. журнал им. И.М. Сеченова. 2003. - Т. 89. - № 12. -С. 1479.

97. Тухватулин Р.Т, Левтов В.А, Шуваева В.Н. и соавт. Агрегация эритроцитов в крови, помещенной в макро- и микрокюветы // Физиол. журнал СССР. 1986,- Т. ЬХХП. - № 6. - С.775-784.

98. Тухватулин Р.Т, Аносова Н.В, Обратимая агрегация эритроцитов у человека и животных: исследование в микрообъемах крови // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. - № 2(2). - С. 12-16.

99. Ульянинский Л.С. Эмоциональный стресс и экстракардиальная регуляция // Физиол. журн. СССР. 1994. - Т. 80. -№ 2. - С. 23-33.

100. Федоров Б.М. Стресс и система кровообращения. М.: Медицина. -1991.-С. 12.

101. Физиология системы крови / Под ред. А.Я. Ярошевского. Л.: Наука, 1968.- 280 с.

102. Физиология человека / Под ред. Р. Шмидта и Г. Тевса. М.: Мир, 1996. -Т.2.-351 с.

103. Фирсов H.H., Сирко И.В., Приезжев A.B. Современные проблемы агрегометрии цельной крови // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. -№2(2).- С. 9-11.

104. Фирсов H.H. Реологические свойства крови и патология сердечнососудистой системы // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. - № 2. - С. 26-32.

105. Фирсов H.H., Джанашия П.Х. Введение в экспериментальную и клиническую гемореологию, М.: Изд-во ГОУ ВПО «РГМУ», 2004. -280 с.

106. Фок М.В. Некоторые вопросы биохимической физики, важные для врачей. М.: Наука, 1999. - 76 с.

107. Фукс Г.И. Вязкость и пластичность нефтепродуктов. М.: Гостоптехиздат, 1956. - 312 с.

108. Фундаментальная и клиническая физиология / Под ред. А.Г. Камкина и A.A. Каменского. М: Академия, 2004. - 1072 с.

109. Харамоненко С.С., Ракитянская A.A. Электрофорез клеток крови в норме и патологии. Минск: Беларусь, 1974. - 143 с.

110. Хьюз Р. Гликопротеины. -М.: Мир, 1985. 140 с.

111. Чазов E.H. Лечение сердечной недостаточности // Клин. фарм. и терапия. 1993,-№4.-С. 16-20.

112. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. - 214 с.

113. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. М.: Медицина. - 1984. - 432 с.

114. Чижевский А.Л. Биофизические механизмы реакции оседания эритроцитов. Новосибирск: изд-во СО АМН СССР, 1980. - 178 с.

115. Шабанов В.А. О нарушениях периферического кровообращения в остром периоде инфаркта миокарда по данным микроскопии сосудовконъюнктивы глазного яблока и реологии крови: Автореф. дис. канд. мед. наук. Горький, 1972.

116. Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Влияние внутриклеточного АТФ на Ьа3+-индуцированную агрегацию и слияние эритроцитов // Биофизика. 2002. - Т. 47. - № 2. - С. 300-303.

117. Шошенко К.А. Кровеносные капилляры. Новосибирск: Наука, 1995. -375 с.

118. Эккерт Р., Рэнделл Д., Огастин Дж. Физиология животных. Т.1. М.: Мир, 1992.-267 с.

119. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2002. - 446 с.

120. Aarts P.A., Heethaar R.M., Sixma J.J. Red blood cell deformability influences platelets-vessel wall interaction in flowing blood // Blood. 1984. - Vol. 64. - №6.-P. 1228-1233.

121. Allan D, Thomas P. The effects of Ca'+ and Sr on Ca -sensitive biochemical changes in human erythrocytes and their membranes // Biochem. J. -1981.-Vol. 198.-№3.-P. 441-445.

122. Allan D. Inositol lipids and membrane function in erythrocytes // Cell Calcium. 1982. - Vol.3. - № 4-5. - P. 451-465.

123. Allen I, Rasmussen H. Human red blood cells: Prostaglandin E2, epinephrine and isoproterenol alter deformability // Science. 1971. - Vol. 144. - P. 512— 516.

124. Allen I, Rasmussen H. Some effects of vasoactive hormones on the mammalian red blood cell/ In: Prostagladins in Cellular Biology. (P. W. Ramwell, B. B Pharriss, ed.) New York, 1972. - P. 27-40.

125. Alloisio N, Venezia N.D, Rana A. et al. Evidence that red blood cell protein p55 may participate in skeleton-membrane linkage that involves protein 4.1 and glycophorin C // Blood. 1993. - Vol. 82. - P. 1323-1327.

126. Alonso C, Pries A.R, Gaehtgens P. Time-dependent rheological behavior of blood at low shear in narrow vertical tubes // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1993. - Vol. 265. - P. H553-H561.i

127. Alvarez J, García-Sancho J.J. An estimate of the number of Ca -dependent K+ channels in the human red cell // Biochim. Biophys. Acta. 1987. - Vol. 903.-P. 543-546.

128. Antezana A.M., Kasimi R, le Trong J, Marchal M. Adrenergic status of human during prolonged exposure to the altitude of 6.542 m // J. Appl. Physiol. 1994.-Vol. 77. - № l.-P. 1055-1059.

129. Aplin A.E, Howe A.K, Juliano R.L. Cell adhesion molecules, signal transduction and cell growth // Curr. Opin. Cell Biol. 1999. - № 11. - P. 737744.

130. Armstrong J.K, Meiselman H.J, Fisher T.C. Covalent binding of Polyethylene Glycol (PEG) to the surface of red blood cells inhibits aggregation and reduces low shear blood viscosity // Am. J. Hematol. 1997. - Vol. 56. - C. 26-28.

131. Armstrong J.K., Meiselman H.J., Wenby R.B., Fisher T.C. Modulation of red blood cell aggregation and blood viscosity by the covalent attachment of Plu-ronic copolymers //Biorheology. -2001. Vol. 38. - P. 239-247.

132. Avent N.D., Reid M.E. The Rh blood group system: a review // Blood. -2000. Vol. 95. - № 2. - P. 3 75-3 87.

133. Azam M., Gupta G., Baquer N.Z. Effect of hyperglycemia and hyperinsu-linemia on rat red blood cell insulin receptors and catecholamines: relationship with cellular ageing // Biochem. Int. 1990. - № 22. - P. 21-30.

134. Azarov I., Huang K.T., Basu S., et al. Nitric oxide scavenging by red blood cells as a function of hematocrit and oxygenation // J. Biol. Chem. 2005. -Vol. 280. - № 47. - P. 39024-39032.

135. Azoui R., Vignon D., Safar M., Cuche J.L. Plasma erythrocyte relationship of catecholamines in human blood // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1994. - Vol. 23.-P. 525-531.

136. Azoui R., Cuche J.L., Renaud J.F. et al. A dopamine transporter in human erythrocytes: modulation by insulin // Exp. Physiol. 1996. - Vol. 81. - P. 421-434.

137. Azoui R., Schneider J., Dong W.X. et al. Red blood cells participate in the metabolic clearance of catecholamines in the rat // Life Sci. 1997. - Vol. 60. -P. 357-367.

138. Bailly P., Tontti E., Hermand P. et al. The red cell LW blood group protein is an intercellular adhesion molecule, which binds to CD11/CD18 leukocyte integrals // Eur. J. Immunol. 1995. - Vol. 25. - P. 3316-3320.

139. Ballas S.K., Clark M.R., Mohandas N. et al. Red cell membrane and cation deficiency in Rh null syndrome // Blood. 1989. - Vol. 63. - P.1046-1055.

140. Barabino G.A., Mclntire L.V., Eskin S.G. et al. Rheological studies of erythrocyte-endothelial cell interactions in sickle cell disease // Prog. Clin. Biol. Res.- 1987.-Vol. 240.-P. 113-127.

141. Barbagallo M, Gupta R.K, Resnick L.M. Cellular ionic effects of insulin in normal human red cells: a nuclear magnetic resonance study // Diabetologia. -1993.-Vol. 36. — P.146—149.

142. Barbagallo M, Gupta R.K, Bardicef 0. et al. Altered ionic effects of insulin in hypertension: role of basal ion levels in determining cellular responsiveness //J. Clin. Endocrinol. Metabol. 1997. - Vol. 82. - № 6. - P. 1761-1765.

143. Barshtein G, Tamir I, Yedgar S. Red blood cell rouleaux formation in dex-tran solution: dependence on polymer conformation // Eur. Biophys. 1998. -Vol. 27.-P. 177-181.

144. Barshtein G, Wajnblum D, Yedgar S. Kinetics of linear rouleaux formation studied by visual monitoring of red cell dynamic organization // Biophys. J. -2000. Vol. 78. - № 5. - P. 2470-2474.

145. Baskurt O.K., Farley R.A, Meiselman H.J. Erythrocyte aggregation tendency and cellular properties in horse, human, and rat: a comparative study // Amer. J. Physiol. 1997. - Vol. 273. - P. H2604-H2612.

146. Baskurt O.K., Meiselman H.J. Cellular determinants of low shear blood viscosity // Biorheology. 1997. - Vol. 34. - № 3. - P. 235 - 247.

147. Baskurt O.K., Bor-Kuciikatay M, Yalcin O, Meiselman H.J, Armstrong J.K Aggregation behavior of red blood cells in different polymer solutions: Comparative studies // Biorheology. 1999. - Vol. 36. - № 1/2. - P. 63.

148. Baskurt O.K., Kucukatay M, Yalcin 6, Meiselman H.J. Aggregation behavior and electrophoretic mobility of red blood cells in various mammalian species // Biorheology. 2000. - Vol. 37. - № 5-6. - P. 417-428.

149. Baskurt O.K., Tugral E, Neu B, Meiselman H.J. Particle electrophoresis as a tool to understand the aggregation behavior of red blood cells // Electrophoresis. 2002. - Vol. 23. - № 13. - P. 2103-2109.

150. Baskurt O.K., Tugral E., Neu B., Meiselman H.J. RBC electrophoresis can be used to investigate the role of polymer depletion in RBC aggregation // Biorheology. 2002. - Vol. 39. - № 5. - P. 646-647.

151. Baskurt O.K., Uyuklu M., Meiselman H.J. Protection of erythrocytes from sub-hemolytic mechanical damage by nitric oxide mediated inhibition of potassium leakage // Biorheology. 2004. - Vol. 41. - № 2. - P. 79-89.

152. Baskurt O.K., Yalcin 0., Meiselman H.J. Hemorheology and vascular control mechanisms // Clin. Hemorheol. Microcirc. 2004. - Vol. 30. - P. 169-178.

153. Baskurt O.K., Yalcin O., Ozdem S. et al. Modulation of endothelial nitric oxide synthase expression by red blood cell aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 286. - P. H222-H228.

154. Bauersachs R., Wenby R., Meiselman H. Determination of specific red cell aggregation indices via automated system // Clin. Hemorheol. 1989. - № 9. -P. 1-25.

155. Baumler I., Donath E., Neu B., Kiesewetter H. Basic mechanisms of RBC aggregation models and experimental results // Biorheology. - 1999. - № 36. -P.63-64.

156. Baumler H., Neu B., Mitlohner R. et al. Electrophoretic and aggregation behavior of bovine, horse and human red blood cells in plasma and polymer solutions // Biorheology. 2001. - Vol. 38. - № 1. - P. 39-51.

157. Ben-Ami R., Sheinman G., Yedgar S. et al. Thrombolitic therapy reduces red blood cell aggregation in plasma without affecting intrinsic aggregability // Thrombosis Research. 2002. - Vol. 105. - P. 487-492.

158. Ben-Ami R., Barshtein G., Mardi T. et al. A synergistic effect of albumin and fibrinogen on immunoglobulin-induced red blood cell aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Vol. 285. - P. H2663-H2669.

159. Bergfeld G.R., Forrester T. Release of ATP from human erythrocytes in response to a brief period of hypoxia and hypercapnia // Cardiovasc. Res. -1992.-Vol. 26.-P. 40-47.

160. Berridge M.J., Lipp P., Bootman M.D. The versatility and universality of calcium signaling // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2000. - № 1. - P. 11-21.

161. Bevan P. Insulin signaling. // J. Cell Sci. 2001. - Vol. 114. - P. 1429-1430.

162. Bhattacharya S., Chakaborty Patra S., Basu Roy S. et al. Purification and properties of insulin-activated nitric oxide synthase from human erythrocyte membranes // Arch. Physiol. Biochem. 2001. - Vol. 109. - P. 441-449.

163. Bilto Y., Abdalla S. Effects of selected flavonoids on deformability, osmotic fragility and aggregation of human erythrocytes // Clin. Hemorheol. Micro-circ. 1998. -№ 18.-P. 165-173.

164. Bishop J.J., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Effect of aggregation and shear rate on the dispersion of red blood cells flowing in venules // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2002. - Vol. 283. - H1985-H1996.

165. Bishop J.J., Nance P.R., Popel A.S. et al. Relationship between erythrocyte aggregate size and flow rate in skeletal muscle venules // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 286. - HI 13-H120.

166. Bize I., Guven? B., Robb A. et al. Serine/threonine protein phosphatases and regulation of K-Cl cotransport in human erythrocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1999. - Vol. 277. - № 5. - P. C926-C936.

167. Blank M.E., Ehmke H. Aquaporin-1 and HC03 CI transporter-mediated transport of C02 across the human erythrocyte membrane // J. Physiol. -2003.-Vol. 550.-№ 2.-P. 419-429.

168. Bobrowska-Hagerstrand M, Hagerstrand H, Iglic A. Membrane skeleton and red blood cell vesiculation at low pH // Biochim. Biophys. Acta. 1998. -Vol. 1371.-P. 123-128.

169. Bogle R.G, Coade S.B, Moncada S. et al. Bradykinin and ATP stimulate L-arginine uptake and nitric oxide release in vascular endothelial cells // Bio-chem. Biophys. Res. Commun. 1991,-Vol. 180. - P. 926-932.

170. Bohler T, Wagner S, Seiberth V. et al. Blood rheology and retinopathy in premature infants with very low birth weight // Clin Hemorheol. 1995. -Vol. 15.-№3.-P. 305-309.

171. Boogaerts M.A, Roelant C, Temmerman J. et al. Effect of beta-blocking drugs on red cell adhesive and rheological properties // J. Lab. Clin. Med.1983.-Vol. 102.- №6.-P. 899-908.

172. Bordin L, Brunati A.M., Donella-Deana A. et al. Band 3 is an anchor protein and a target for SHP-2 tyrosine phosphatase in human erythrocytes // Blood. -2002. Vol. 100. - № 1. - P. 276-282.

173. Borner U, Muller H, Hoge R, Hempelmann G. The influence of anticoagulant on acid-base status and blood-gas analysis // Acta Anaesthesiol. Scand.1984.-Vol. 28.-P. 277-279.

174. Bos J.L, Zwartkruis F.J. Signal transduction. Rhapsody in G proteins // Nature.- 1999.-Vol. 400.-P. 820-821.

175. Boutilier R.G, Iwama G.K, Randall D.J. The promotion of catecholamine release in rainbow trout, Salmo gairdneri, by acute acidosis: interactions between red cell pH and haemoglobin oxygen-carrying capacity // J. Exp. Biol. -1986.-Vol. 123.-P. 145-157.

176. Bowdler A.J, Williams R.H, Dougherty R.M. Abrogation of calcium exclusion by erythrocytes under hypotonic stress // Scand. J. Haematol. 1984. -Vol. 32. -№ 3. - P. 283-296.

177. Bradley A.J, MuradK.L, Regan K.L, Scott M.D. Biophysical consequences of linker chemistry and polymer size on stealth erythrocytes: size does matter

178. Biochim. Biophys. Acta Biomembranes. - 2002. - Vol. 1561. - № 2. - P. 147-158.

179. Bratosin D., Mazurier J., Tissier J.P. et al. Cellular and molecular mechanisms of senescent erythrocyte phagocytosis by macrophages. A review // Biochimie. 1998. - Vol. 80. - P. 173- 195.

180. Brooks D.E., Goodwin J.W., Seaman G.V.F. Rheology of erythrocyte suspension: electrostatic factors in the dextran-mediated aggregation of erythrocytes // Biorheology. 1974. - №. 11. - P. 69-77.

181. Brooks D.E. Mechanism of red cell aggregation / Red blood cell, rheology and aging. D. Piatt editor. Springer Verlag. Berlin, 1988. - P. 158-162.

182. Brown A.M., Ellory J.C., Young J.D., Lew V.L. A calcium-activated potassium channel present in foetal red cells of the sheep but absent from reticulocytes and mature red cells // Biochim. Biophys. Acta. 1978. - Vol. 511. - P. 163-175.

183. Brown A.M., Lew V.L. The effect of intracellular calcium on the sodium pump of human red cells // J. Physiol. 1983. - Vol. 343. - P. 455-493.

184. Brown A.M., Birnbaumer L. Direct G protein gating of ion channels // Am. J. Physiol.- 1988.-Vol. 254.-P. H401-H410.

185. Brown J.H. Depolarization-induced inhibition of cyclic AMP accumulation: cholinergic-adrenergic antagonism in murine atria // Mol. Pharmacol. 1979. -Vol. 16. -№ 3. - P. 841-850.

186. Bruce L.J., Ghosh S., King M.J. et al. Absence of CD47 in protein 4.2-deficient hereditary spherocytosis in man: an unteraction between the Rh complex and the band 3 complex // Blood. 2002. - Vol. 100. - P. 18781885.

187. Bruce L.J., Beckmann R., Ribeiro M.L. et al. A band 3-based macrocomplex of integral and peripheral proteins in the RBC membrane // Blood. 2003. -Vol.101.-№ 10.-P. 4180-4188.

188. Brugnara C., Bunn H.F., Tosteson D.C. Regulation of erythrocyte cation and water content in sickle cell anemia // Science. 1986. - Vol. 232. - P. 388— 390.

189. Brun J.-F., Supparo I., Fons C., et al. Low values of blood viscosity and erythrocyte aggregation are associated with lower increases in blood lactate during submaximal exercise // Clin. Hemorheol. 1994. - Vol. 14. - № 1. - P. 105— 116.

190. Buhler I, Walter R, Reinhart WH. Influence of D- and L-glucose on erythrocytes and blood viscosity // Eur. J. Clin. Invest. 2001. - Vol. 31.- № 1. - P. 79-85.

191. Buxbaum K., Evans E., Brooks D.E. Quantitation of surface affinities of red blood cells in dextran solutions and plasma // Biochemistry. 1982. - Vol. 21. -P. 3235-3239.

192. Cabel M., Meiselman H.J., Popel A.S., Johnson P.C. Contribution of red blood cell aggregation to venous vascular resistance in skeletal muscle // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1997. - Vol. 272. - № 41. - P. HI 020-1032.

193. Cambier J.C. Commentary: Inhibitory receptors abound? // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94. - P. 5993-5995.

194. Campanella M.E., Chu H., Low P.S. Assembly and regulation of a glycolytic enzyme complex on the human erythrocyte membrane // PNAS. 2005. -Vol. 102. -№ 7. - P. 2402-2407.

195. Carton J.P., Bailly P., Le Van Cim C. et al. Insights into the structure and function of membrane polypeptides carrying blood group antigens // Vox. Sang. 1998. - № 74(suppl.2). - P.29-64.

196. Carton J.P., Colin Y. Structural and functional diversity of blood group antigens // Transfos. Clin. Biol. 2001. - Vol. 8. - P. 163-199.

197. Chabanel A., Samama M. Evaluation of a method to assess red blood cell aggregation // Biorheology. 1989. - Vol. 26. - P. 785-797.

198. Charansonney 0., Mouren S., Dufaux S. et al. Red blood cell aggregation and blood viscosity in an isolated heart preparation // Biorheology. 1993. - Vol. 30.-P. 75-84.

199. Chen S., Gavish B., Zhang S. et al. Monitoring of erythrocyte aggregate morphology under flow by computerized image analysis // Biorheology. 1995. -Vol. 32.-P. 487-496.

200. Chen X.H., Bezprozvanny I., Tsien R.W. Molecular basis of proton block of L-type Ca2+ channels // J. Gen. Physiol. 1996. - Vol. 108. - P. 363-374.

201. Chen Y., Cann M.J., Litvin T.N. et al. Soluble adenylyl cyclase as an evolu-tionarily conserved bicarbonate sensor // Science. 2000. - Vol. 289. - P. 625-628.

202. Chien S., Jan K.M. Red cell aggregation by macromolecules: roles of surface absorption and electrostatic repulsion // J. Supramol. Stuct. 1973. - Vol. 1. -P. 385-409.

203. Chien S., Jan K.M. Ultrastructural basis of the mechanism of rouleax formation//Microvasc. Res. 1973. - Vol. 5.-P. 155-166.

204. Chien S. Electrochemical interactions between erythrocyte surfaces // Thrombosis Research. 1976. - Vol. 8. - P. 189-202.

205. Chien S. Rheology in the microcirculation in normal and low flow states // Adv. Shock Res. 1982. - Vol. 8. - P. 71-80.

206. Chien S., Lung L. Physicochemical basis and clinical implications of red cell aggregation// Clin. Hemorheol. 1987. - Vol. 7. - P.71-91.

207. Chowienczhyk P., Ritter J., Gender J. Differences in vascular function: time to look beyond oestrogen and NO? // Clin. Sci. 2001. - Vol. 100. - P. 471472.

208. Chunyi W, Yanjun Z, Weibo K. The influence of calcium ions and iono-phore A23187 on microrheological characteristics of erythrocytes by new model ektacytometry // Clin. Hemorheol. Microcirc. 2001. - Vol. 24. - № 1. -P. 19-23.

209. Cicco G, Carbonara M, Stingi G, Pirrelli A. Cytosolic calcium and hemor-heological patterns during arterial hypertension // Clin. Hemorheol. 2001. -Vol. 24.-P. 25-31.

210. Cicha I, Suzuki Y, Tateishi N, Maeda N. Changes of RBC aggregation in oxygenation-deoxygenation: pH dependency and cell morphology // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Vol. 284. - № 6. - P. H2335-H2342.

211. Civenni G, Test S.T, Brodbeck U, Biitikofer P. In vitro incorporation of GPI-anchored proteins into human erythrocytes and their fate in the membrane // Blood. 1998. - Vol. 91. - №5.-P. 1784-1792.

212. Clapham D.E. Direct G protein activation of ion channels? // Annu. Rev. Neu-rosci.- 1994.-Vol. 17.-P. 441-464.

213. Clark M.R. Senescence of red blood cells: progress and problems // Physiol. Rev. 1988. - Vol. 68. - P. 503-554.

214. Cohen N.S, Ekholm J.E, Luthra M.G, Nanahan D.J. Biochemical characterization of density-separated human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. -1976.-Vol. 419.-P. 229-242.

215. Cokelet G.R, Goldsmith H.L. Decreased hydrodynamic resistance in the two-phase flow of blood through small vertical tubes at low flow rates // Circ. Res. -1991.-Vol. 68.-P. 1-17.

216. Corry W.D, Jackson L.J, Seaman G.V. Action of hydroxyethyl starch on the flow properties of human erythrocyte suspensions // Biorheology. 1983. -Vol. 20,- №5.-P. 705-717.

217. Cotecchia S, Kobilka B.K, Daniel K.W. et al. Multiple second messenger pathways of a2-adrenergic receptor subtypes expressed in eukaryotic cells // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - № 1. - P. 63-69.

218. Couturier E, Deleers M, Malaisse W.J. Inhibition by sodium of A23187-mediated calcium translocation // Cell Calcium. 1980. - Vol. 1. - № 3. - P. 171-179.

219. Crandall E.D, Klocke R.A, Forster R.E. Hydroxyl ion movements across the human erythrocyte membrane. Measurement of rapid pH changes in red cell suspensions // J. Gen. Physiol. 1971. - Vol. 57. - P.664-683.

220. Daniels G. Functional aspects of red cell antigens // Blood Reviews. 1999. -Vol. 13.-P. 14-35.

221. Daniels G.L, Green C.A, Powell R.M, Ward T. Hemagglutination-inhibition of Cromer blood group antibodies with soluble recombinant decay-accelerating factor// Transfusion. 1998. - Vol. 38. - P.332-336.

222. Datta-Roy A, Ray T.R, Sinha A.K. Control of erythrocyte membrane micro-viscosity by insulin // Biochim. Biophys. Acta 1985. - Vol. 44. - № 1. - P. 187-190.

223. David-Dufilho M, Pernollet M.G, Morris M. et al. Erythrocyte Ca2+ handling in the spontaneously hypertensive rat, effect of vanadate ions // Life Sci. -1994.-Vol. 54.-№4.-P. 267-274.

224. Davis F.B, Davis P.J, Nat G. et al. The effect of in vivo glucose administration on human erythrocyte Ca -ATPase activity and on enzyme responsiveness in vitro to thyroid hormone and calmodulin // Diabetes. 1985. - Vol. 34 -№ 7. - P. 639-646.

225. Davtian T.K, Giul'khandanian A.V, Gambarov S.S. et al. The effect of adri-amycin and ethidium bromide on the Ca2(+)-dependent K channel of human erythrocytes // Tsitologiia. 1996. - Vol. 38. - № 2. - P. 135-144.

226. Dawson D.L, Zheng Q, Worthy S.A. et al. Failure of pentoxifylline or cilostazol to improve blood and plasma viscosity, fibrinogen, and erythrocyte deformability in claudication // Angiology. 2002. - Vol. 53. - № 5. - P. 509-520.

227. Del Carlo B., Pellegrini M., Pellegrino M. Calmodulin antagonists do not inhibit IKca channels of human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. 2002. -Vol. 1558.-P. 133-141.

228. DeLuca G.M., Donnel M.E., Carrigan D.G., Blackall P. Plasmodium falciparum merozoite adhesion is mediated by sialic acid // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1996. - Vol. 225. - P. 726-732.

229. Di Cera E., Dang Q.D., Ayala Y.M. Molecular mechanisms of thrombin functions // Cell Mol. Life Sci. 1997. - Vol. 53. -№ 9. - P. 701-730.

230. Dintenfass L. Consideration on the internal viscosity of red cells and its effect on the viscosity of whole blood // Angiology. 1962. - Vol. 13. - № 5. - P. 333-344.

231. Dintenfass L. Some rheological factors in the pathogenesis of thrombosis // Lancet. 1965. - № 2. - P. 370-372.

232. Dintenfass L. Influence of ABO blood groups on the selective dissaggregation of the red cells caused by drug RA 433 // Med. J. Aust. 1970. - Vol. 2. - № 18.-P. 827-830.

233. Dintenfass L. ESR and aggregation of red cells after addition of fructose or glucose: effect of ABO blood groups // Med. J. Aust. 1972. - Vol. 2. - № 8. -P. 425-429.

234. Dintenfass L. The role of ABO blood groups in blood rheology of cardiovascular disorders // Angiology. 1973. - Vol. 24. - № 7. - P. 442-453.

235. Dintenfass L., Milton G.W. Blood viscosity factors and prognosis in malignant melanoma. Effect of ABO blood groups // Med. J. Aust. 1973a. - Vol. 2.-№22.-P. 1091-1095.

236. Dintenfass L. Blood rheology as diagnostic and predictive tool in cardiovascular diseases. Effect of ABO blood groups // Angiology. 1974. - Vol. 25. - № 6.-P. 365-372.

237. Diverse-Pierluissi M., Mclntire W.E., Myung Ch.-S. et al. Selective coupling2+of G-Protein (3y complexes to inhibition of Ca channels // J. Biol. Chem. -2000. Vol. 275. -№ 37. - P. 28380-28385.

238. Donner M., Mills P., Stoltz J-F. Influence of plasma proteins on erythrocyte aggregation // Clin. Hemorheol. 1989. - № 9. - P. 715-721.

239. Dorn G.W., Oswald K.J., McCluskey T.S. et al. Alpha 2A-adrenergic receptor stimulated calcium release is transduced by Gi-associated G(Py)-mediated activation of phospholipase C // Biochemistry. 1997. - Vol. 36. - № 2. - P. 6415-6423.

240. Doronin S., Wang H.-y., Malbon C.C. Insulin stimulates phosphorylation of the beta 2-adrenergic receptor by the insulin receptor, creating a potent feedback inhibitor of its tyrosine kinase // J. Biol. Chem. 2002. - Vol 277. - № 12.-P. 10698-10703.

241. Downward J. The ins and outs of signaling // Nature. 2001. - Vol. 411. - P. 759-762.

242. Duling B.R., Hogan R.D., Langille B.L. et al. Vasomotor control: functional hyperemia and beyond // Fed. Proc. 1987. - Vol. 46. - P. 251-263.

243. Dumont J. E., Dremier S., Pirson I., Maenhaut C. Cross signaling, cell specificity, and physiology // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002. - Vol. 283. - № l.-P. C2-C28.

244. Dunham P.B. Oxygen sensing and K+-C1" cotransport // J. Physiol. 2000. -Vol. 526.-№ l.-P. 1.

245. Dunham P.B., Stewart G.W., Ellory J.C. Chloride-activated passive potassium transport in human erythrocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. - Vol. 77.- P. 1711-1715.

246. Duroeher J.R., Payne R.C., Conrad M.E. Role of sialic acid in erythrocyte survival //Blood. 1975. -Vol. 45,- № l.-P. 11-20.

247. Dwight R.F., Hendery B.M. The effects of tret-butyl hydroperoxide on human erythrocyte membrane ion transport and the protective actions of antioxidants // Clin. Chim. Acta. 1996. - Vol. 249. - № 1-2. - P. 167-181.

248. Ehrly A.M., Bauersachs R. Role of erythrocyte aggregation in the pathophysiology of vascular diseases // Clin. Hemorheol. 1995. - Vol. 15. - № 3. -P.429.

249. Elishkevitz K., Fusman R., Koffler M. et al. Rheological determinants of red blood cell aggregation in diabetic patients in relation to their metabolic control //Diabet. Med.-2002.-Vol. 19.-№2.-P. 152-156.

250. Ellsworth M.L., Forrester T., Ellis C.G, Dietrich HH. The erythrocyte as a regulator of vascular tone // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1995. -Vol. 269.-P. H2155-H2161.

251. Fabry T.L. Mechanism of erythrocyte aggregation and sedimentation // Blood. 1987,- Vol. 70. - P.1572-1576.

252. Fahraeus R. The viscosity of the blood in narrow capillary tubes // Am. J. Physiol. 1931. - Vol. 96. - P. 562.

253. Fahraeus R. The influence of rouleaux formation of the erythrocytes on the rheology ofthe blood //Acta Med. Scand. 1958.-Vol. 161.-P. 151-165.

254. Ferreira H.G., Lew V. Use of ionophore A23187 to measure cytoplasmic Ca buffering and activation of the Ca pump by internal Ca // Nature. 1976. -Vol. 259.-P. 47-49.

255. Firsov N.N., Bjelle A., Korotaeva T.V. et al. Clinical application of the measurements of spontaneus erythrocyte aggregation and disaggregation. A Pilot Study // Clinical Hemorheology and Microcirculation. 1998. - P. 8797.

256. Fisher T.C., Armstrong J.K., Wenby R.B., Meiselman H.J. Modification of the red blood cell to alter aggregation a usefull tool for hemorheology studies // Biorheology. - 1999. - Vol. 36. - № 1/2. - P.62-63.

257. Fisher T.C., Armstrong J.K., Wenby R.B., Meiselman H.J. Modification of the surface properties of human erythrocytes by covalent attachment of polymers // Biorheology. 1999. - Vol. 36. - № 1/2. - P. 53.

258. Fisman D.N., Smilovitch M. Intravenous immunoglobulin, blood viscosity and myocardial infarction // Can. J. Cardiol. 1997. - № 13. - P. 775-777.

259. Forster R.E., Gros G., Lin L. et al. The effect of 4,4'-diisothiocyanato-stilbene-2,2'-disulfonate on C02 permeability of the red blood cell membrane // PNAS. Physiology. 1998. - Vol. 98. -№ 26. - P. 15815-15820.

260. Fredholm B.B., IJzerman A.P., Jacobson K.A. et al. International Union of Pharmacology XXV. Nomenclature and Classification of Adenosine Receptors // Pharmacological Review. 2001. - Vol. 53. - № 4. - P. 527-552.

261. Freedman J.C., Novak T.S. Electrodiffusion, barrier, and gating analysis of DIDS-insensitive chloride conductance in human red blood cells treated with valinomycin or gramicidin // J. Gen. Physiol. 1997. - Vol. 109. - № 2. - P. 201-216.94

262. Friederichs E., Winkler H., Tillman W. Influence of the red blood cell Ca -ion concentration on the erythrocyte aggregation in stasis // Biochem. Med. Metab. Biol. 1989. - Vol. 41. - № 2. - P. 85-92.

263. Fuá Y.-C., Chia C.-S., Yinc S.-C. et al. Norepinephrine induces apoptosis in neonatal rat endothelial cells via down-regulation of Bcl-2 and activation of (3-adrenergic and caspase-2 pathways // Cradiovasc. Res. 2004. - Vol.61. - № l.-P. 143-151.

264. Fujinaga J., Tang X.-B., Casey J.R. Topology of the membrane domain of human erythrocyte anion exchange protein, AE1 // J. Biol. Chem. 1999. - № 274.-P. 6626-6633.

265. Gaehtgens P. Blood rheology and blood flow in the circulation current knowledge and concepts // Rev. Port. Hemorreol. - 1987. - № l.-P. 5-16.

266. Gambhir K.K., Archer J. A., Bradley C.J. Characteristics of human erythrocyte insulin receptors // Diabetes. 1978. - № 27. - P. 701-708.

267. Game L., Voegel J.-F., Schaaf P., et al. Do physiological concentrations of IgG induce a direct aggregation of red blood cells: comparison with fibrinogen.- BiochimetBiophys Acta. 1996,- Vol. 1291.- P. 138-142.

268. Gao A.G., Lindberg F.P., Finn M.B. et al. Integrin-associated protein is a receptor for the C-terminal domain of thrombospondin // J. Biol. Chem. 1996. -Vol. 271.-P. 21-24.

269. García-Sancho J., Lew V.L. Detection and separation of human red cells with different calcium contents following uniform calcium permeabilization // J. Physiol. 1988. - Vol. 407. - P. 505-522.

270. Gardos G. The role of calcium in potassium permeability of human erythrocytes//Acta Physiol. Acad. Sci. Hungary. 1959,-№ 15.-P. 121-125.

271. Garray R.P., Dagher G., Pernollet M.G. et al. Inherited defect in Na+, K+-cotransport system in erythrocytes from essential hypertensive patients // Nature. 1980. - Vol. 284. - P. 281-283.

272. Gassner B., Luterbacher S., Schatzmann H.J., Withrich A. Dependence of red blood cell calcium pump on the membrane potential // Cell Calcium. 1988. -Vol. 9.-№ 2.-P. 95-103.

273. Geek P., Pietrzyk C., Burckhardt B.-C. et al. Electrically silent cotransport of Na+, K+ and CI" in Ehrlich cells // Biochim. Biophys. Acta. 1980. - Vol. 600.-P. 432-447.

274. Gedde M.M., Yang E., Huestis W.H. Resolution of the paradox of red cell shape changes in low and high pH // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - Vol. 1417.-P. 245-253.

275. Geers C., Gros G. Carbon dioxide transport and carbonic anhydrase in blood and muscle // Physiol. Rev. 2000. - № 80. - P. 681-715.

276. Gibson S.K., Gilman A.G. G¡a and Gp subunits both define selectivity of G protein activation by a2-adrenergic receptors // PNAS. 2006. - Vol. 103. -№ 1. - P. 212-217.

277. Gimsa J. Red cell echinocytogenesis is correlated to the recruitment of external band 3 conformations // Bioelectrochemistry and Bioenergetics. 1995. -Vol. 38.-P. 99-103.

278. Glynn I.M., Karlish S.J. The sodium pump // Annu. Rev. Physiol. 1975. -Vol. 37.-P. 13-55.

279. Gobel W., Perkkio J., Scmid-Schonbein H. Compact stasis due to gravitational red cell migration in plastic tubes and mesenteric venules // Virchows Arch. A Pathol. Anat. 1989. - Vol. 415. -P.243-251.

280. Goldsmith H.L., Cokelet G., Gaehtgens P. Robin Fahraeus: evolution of his concepts in cardiovascular physiology // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -1989. -№ 257. -P. H1005-H1015.

281. González O., González E., Sánchez C. et al. Effect of exercise on erythrocyte beta-adrenergic receptors and plasma concentrations of catecholamines and thyroid hormones in Thoroughbred horses // Equine Vet. J. 1998. - № 30. -P. 72-78.

282. Grygorczyk R. Temperature dependence of Ca -activated K currents in the membrane of human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. 1987. - Vol. 902.-P. 159-168.

283. Grygorczyk R., Guyot A. Osmotic swelling-induced ATP release: a new role for tyrosine and Rho-kinases? // J. Physiol. 2001. - Vol. 532. - № 3. - P. 582.

284. Gutkind J.S. Cell growth control by G protein-coupled receptors: from signal transduction to signal integration // Oncogene. 1998. - № 17. - P. 1331— 1342.

285. Hadley T.J., Peiper S.C. From malaria to chemokine receptors: the emerging physiologic role of the Duffy blood group antigen // Blood. 1997. - № 89. -P. 3077-3091.

286. Hagiwara H., Hollister A.S., Carr R.K., Inagami T. Norepinephrine and epinephrine in human erythrocyte plasma membranes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. - № 154.-P. 1003-1009.

287. Hall R.A., Premont R.T., Chow C.W. et al. The beta2-adrenergic receptor interacts with the Na+/H+-exchanger regulatory factor to control Na+/H+ exchange // Nature. 1998. - № 392. - P. 626-630.

288. Hall R.A. (3-Adrenergic receptors and their interacting proteins // Sem. Cell Develop. Biol. 2004. - Vol. 15. - № 3. - P. 281-288.

289. Hamill O.P., McBride D.W. Mechanoreceptive membrane ion channels // Am. Sci.- 1995.-№83.-P. 30-37.

290. Hamill O.P., Martinac B. Molecular basis of mechanotransduction in living cells // Physiol. Rev. 2001. - № 81. - P. 685-740.

291. Handa K. et al. Plasma fibrinogen level as an independent indicator of severity of coronary atherosclerosis // Atherosclerosis. 1989. - Vol. 77. - № 2-3. -P.209-213.

292. Hao L, Rigaud J.L, Inesi G. Ca countertransport and electrogenecity in proteoliposomes containing erythrocyte plasma membrane Ca-ATPase and exogenous lipids // J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - № 19. - P. 1426814275.

293. Heard D.H, Seaman G.V.F. The influence of pH and ionic strength on the electrokinetic stability of the human erythrocyte membrane // J. Gen. Physiol. 1960.-Vol. 43.-P. 635-654.

294. Heilmann L, Siekmann U. Effect of metoprolol on the flow properties of blood // Arzneimittelforschung. 1984. - Vol. 34. - № 3. - P. 298-302.

295. Hilârio S, Saldanha C, Martins e Silva J. An in vitro study of adrenalin effect on human erythrocyte properties in both gender // Clin. Hemorheol. 2003. -№ 28. - P. 89-98.

296. Hilpert P, Fleischmann R.G, Kempe D, Bartels H. The Bohr effect related to blood and erythrocyte pH // Am. J. Physiol. 1963. - Vol. 205. - P. 337-340.

297. Hines P.S, Zen Q, Burney S.N. et al. Novel epinephrine and cyclic cAMP -mediated action on BCAM/Lu dependent sickle (SS) RBC adhesion // Blood.-2003.-Vol. 101.- №8.-P. 3281-3287.

298. Hjemdahl P. Plasma catecholamines: analytical challenges and physiological limitations // Baillieres Clin. Endocrinol. Metab. 1993. - № 7. - P. 307-353.

299. Hodgkin, A.L, Katz B. The effect of Na ions on the electrical activity of the giant axon of the squid. J. Physiol. (Lond.) - 1949. - Vol. 108. - P. 37-77.

300. Hoffman J.F, Joiner W, Nehrke K. et al. The hSK4 (KCNN4) isoform is the2+ "t*

301. Ca -activated K channel (Gardos channel) in human red blood cells // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2003.-Vol. 100.-P. 7366-7371.

302. Holmuhamedov E.L, Sadykov Y.H, Teplova V.V. Oscillation of ion fluxes in mammalian erythrocytes. Mechanism of oscillation // Eur. J. Biochem. -1987.-Vol. 166. -№ 3. P. 723-726.

303. Horga J.F, Gisbert J, De Agustin J.C. et al. A beta-2-adrenergic receptor activates adenilate-cyclase in human erythrocyte membranes at physiologicalcalcium plasma concentrations // Blood Cells Mol. Dis. 2000. - № 3. - P. 223-228.

304. Hou Y, Azpiazu I, Smrcka A, Gautam N. Selective role of G-protein y subunits in receptor interaction // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - № 50. -P. 38961-38964.

305. Houslay M. "Crosstalk": a pivotal role for proteinkinase C in modulating relationships between signal transduction pathways // Eur. J. Biochem. 1991. -№ 195,- P. 2-27.

306. Houslay M.D, Kolch W. Cell-type specific integration of cross-talk between extracellular signal-regulated kinase and cAMP signaling // Mol. Pharmacol. -2000. Vol. 58. - № 4. - P. 659-668.

307. Hsu J.-P, Lin S.-H, Tseng S. Effect of cell membrane structure of human erythrocyte on its electrophoresis // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. -2003. Vol. 32. - № 3. - P. 203-212.

308. Huang C.-H, Peng J. Evolutionary conservation and diversification of Rh family genes and proteins // PNAS. 2005. - Vol. 102. - № 43. - P. 1551215517.

309. Hurley J.H. Structure, mechanism, and regulation of mammalian adenylyl cyclase // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 7599-7602.

310. Ikarugi H, Taka T, Nakajima S. et al. Norepinephrine, but not epinephrine, enhances platelet reactivity and coagulation after exercise in humans // J. Appl. Physiol.- 1999.-Vol. 86.-№ l.-P. 133-138.

311. Jacobs M.H, Stewart D.R. Osmotic properties of the erythrocyte. XII. Ionic and osmotic equilibria with a complex external solution // J. Cell Comp. Physiol. 1947. - Vol. 30. - P. 79-103.

312. Jakobs K.H, Aktories K, Shultz G. GTP-dependent inhibition of cardiac adenylate cyclase by muscarinic cholinergic agonists // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1979. - Vol. 310 - № 2. - P. 113-119.

313. Janas T, Bjerrum P. J, Brahm J, Wieth J. O. Kinetics of reversible DIDS inhibition of chloride self exchange in human erythrocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1989. - Vol. 257. - № 4. - P. C601-C606.

314. Jarolim P, Rubin H.L, Zakova D. et al. Characterization of seven low incidence blood group antigens carried by erythrocyte band 3 protein // Blood. -1998. Vol. 92. -№ 12. - P. 4836-4843.

315. Jena M, Minore J.F, O'Neill W.C. A volume-sensitive, IP3-insensitive Ca2+ store in vascular smooth muscle // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1997. - № 273.-P. C316-C322.

316. Jennings M.L, Adame MF. Direct estimate of 1:1 stoichiometry of K(+)-Cl() cotransport in rabbit erythrocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2001. -Vol. 281.-P. C825-C832.

317. Jentoft N. Why are proteins O-glycosylated? // Trends Biochem. Sci. 1990. -№ 15. - P. 291-294.

318. Johnson P.C. The importance of red blood cell aggregation in vivo the "pro" view // Biorheology. - 1995. - Vol. 32. - № 2-3. - P. 105-106.

319. Johnson R.M, Tang K. Induction of Ca -activated K channel in human erythrocytes by mechanical stress // Biochim. Biophys. Acta. Biomembranes.- 1992.-Vol. 1107.-№2.-P. 314-318.

320. Johnson R.M. Membrane stress increases cation permeability in red cells // Biophys. J.- 1994.-Vol. 67.- №5.-P. 1876-1881.

321. Joiner C.H., Morris C.L., Cooper E.S. Deoxygenation-induced cation fluxes in sickle cells. III. Cation selectivity and response to pH and membrane potential// Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1993. - Vol. 264. - P. C734-C744.

322. Joiner C.H., Jiang M., Fathallah H. et al. Deoxygenation of sickle red blood cells stimulates KC1 cotransport without affecting Na+/H+ exchange // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1998. - Vol. 274. - P. C1466-C1475.

323. Jovtchev S., Djenev I., Stoeff S., Stoylov S. Role of electrical and mechanical properties of red blood cells for their aggregation // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 2000. - Vol.164. - № 2-3. - P. 95-104.

324. Juel C., Lundby C., Sander M. et al. Human skeletal muscle and erythrocyte proteins involved in acid-base homeostasis: adaptations to chronic hypoxia // J. Physiol. 2003. - Vol. 548. - № 2. - P. 639-648.

325. Jurado R.L. Why shouldn't we determine the erythrocyte sedimentation rsate? // Clinical Infectious Diseases. 2001. - № 33. - P. 548-549.

326. Kaestner L., Bernhardt I. Ion channels in the human red blood cell membrane: their further investigation and physiological relevance // Bioelectrochemistry. -2002.-№55.-P. 71-74.

327. Kalhoff H., Werkmeister F., Kiwull-Schone H. et al. The Haldane effect under different acid-base conditions in premature and adult humans Adv. Exp. Med. Biol. - 1994. -№ 36. - P. 353-361.

328. Kameneva M.V., Antaki J.F., Watach M.J. et al. Heparin effect on red blood cell aggregation // Biorheology. 1994. - № 31. - P. 297-304.

329. Kameneva M.V., Watach W., Borovetz H. Gender differences in rheologic properties of blood and risk cardiovascular diseases // Clin. Hemorheol. Mi-crocirc.- 1999. -№21. -P. 357-363.

330. Kaplan N. New requirements and perspectives in initial drug selection for hy-prtension // Eur. Heart J. 1999. - Vol. 1. - № 8. - P. 1-4.

331. Keularts I.M.L.W., van Gorp R.M.A., Feijge M.A.H. et al. a2A~Adrenergic receptor stimulation potentiates calcium release in platelets by modulating cAMP levels // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - № 3. - P. 1763-1772.

332. Kido Y. et al. Clinical review 125: The insulin receptor and its cellular targets // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001. - № 86. - P. 972-979.

333. Kiefer C.R., Snyder L.M. Oxidation and erythrocyte senescence // Curr. Opin. Hematol. 2000. - Vol. 7. - № 2. - P. 113-116.

334. Kikuchi Y., Koyama T. Effects of Na+ and K+ on protein adsorption on red blood cell surface // Am. J. Physiol. 1984. - Vol. 247. - № 5. - P. H748-753.

335. Kim S., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Aggregate formation of erythrocytes in postcapillary venules // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. -2005. Vol. 288. - H584-H590.

336. Kim S., Popel A.S., Intaglietta M., Johnson P.C. Effect of erythrocyte aggregation at normal human levels on functional capillary density in rat spinotra-pezius muscle // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. - Vol. 290 - № 3.-P. H941-947.

337. Kim S.-J., Kang H.-S., Kang M.-S. et al. ai-Agonists-induced Mg2+ efflux is related to MAP kinase activation in the heart // Biochem. Biophys. Res. Comm.-2005.-Vol. 333,-№4.-P. 1132-1138.

338. Klarl B.A., Lang P.A., Kempe D.S. et al. Protein kinase C mediates erythrocyte "programmed cell death" following glucose depletion // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2006. - Vol. 290. - P. C244-C253.

339. Knauf P.A., Law F.Y., Marchant P.J. Relationship of net chloride flow across the human erythrocyte membrane to the anion exchange mechanism // J. Gen. Physiol. 1983. - Vol. 81. - P. 95-126.

340. Knauf P.A, Brahm J. Functional asymmetry of the anion-exchange protein, capnophorin: effects on substrate and inhibitor binding // Methods Enzymol. -1989. -№ 173.-P. 432-453.

341. Knisely M.H, Bloch E.H, Eliot T.S. et al. Sludged blood // Science. 1947. -Vol. 106.-№ 11.-P. 431-440.

342. Knisely M.H. Intravascular erythrocyte aggregation (blood sludge) / Handbook of physiology, sect.2; Circulation. London, 1965. - Vol. 3. - P. 22492292.

343. Koenig W, Ernst E, Matrai A. Blood rheology associated with cardiovascular risk factor and chronic cardiovascular diseases: results of epidemiologic cross-sectional study // Angiology. 1988. - № 39. - 986-995.

344. Koller A, Dornyei G, Kaley G. Flow-induced responses in skeletal muscle venules: modulation by nitric oxide and prostaglandins // Am. J. Physio.1 Heart Circ. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. H831-H836.

345. Koscielak J. A hypothesis on the biological role of ABH, Lewis and P blood group determinant structures in glycosphingolipids and glycoproteins // Gly-coconjugate. 1986. -№ 3. - P. 95-108.

346. Koscielak J. A possible biological function of carbohydrate structures which are typical of erythrocytes // Med. Biol. 1986a. - № 64. - P. 331-334.

347. Kotchen T.A, Hartley L.H, Rice T.W. et al. Renin, norepinephrine, and epinephrine responses to graded exercise // J. Appl. Physiol. 1971. - № 31. - P. 178-184.

348. Kumaravel M, Singh M. Sequential analysis of aggregation process of erythrocytes of human, buffalo, cow, horse, goat and rabbit // Clin. Hemorheol. -1995.-№ 15.-P. 291-304.

349. Kurtzer R.J, Roberts M.L. Calcium-dependent K+ efflux from rat submandibular gland. The effects of trifluoperazine and quinidine // Biochim. Bio-phys. Acta. 1982. -№ 693. - P. 479-484.

350. Kuzman D, Znidarcic T, Gros M. et al. Effect of pH on red blood cell de-formability // Pflugers Arch. 2000. - Vol. 440. - P. R193-R194.

351. Lacombe C., Bucherer C., Ladjouzi J., Lelievre J.C. Competitive role between fibrinogen and albumin on thixotropy of red cell suspensions // Biorheology. -1988.-№25.-P. 349-354.

352. Lang F., Busch G.L., Ritter M. et al. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms // Physiol. Rev. 1998. - Vol. 78. - № 1. - P. 247306.

353. Lauf P.K., Bauer J., Adragna N.C. et al. Erythrocyte K-Cl cotransport: properties and regulation // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1992. - Vol. 263. - № 5. -P. C917-C932.

354. Lecompte F., Castaing M., Pocidalo J.J. Influence of oxygen and carbon dioxide on the plasma-erythrocyte relationship in normal human whole blood // Bull. Eur. Physiopathol. Respir. 1975. - Vol. 12. - P. 423-431.

355. Lecompte E., Castaing M., Joubin C., Pocidalo J.J. Erythrocyte pH in respiratory and metabolic acid-base disturbances. Studies on human blood in vitro // Biomedicine- 1976.-№25.-P. 331-334.

356. Leinders T., van Kleef R.G., Vijverberg H.P. Single Ca -activated K channels in human erythrocytes: Ca dependence of opening frequency but not of open lifetimes //Biochim. Biophys. Acta. 1992. - Vol. 1112. - P. 67-74.

357. Levin I., Gamzu R., Hasson Y. et al. Increased erythrocyte aggregation in ovarian hyperstimulation syndrome: a possible contributing factor in the pathophysiology of this disease // Hum. Reprod. 2004. - Vol. 19. - № 5. -P.1076-1080.

358. Levine S., Levine M., Sharp K.A., Brooks D.E. Theory of the electrokinetic behavior of human erythrocytes // Biophys. J. 1983. - Vol. 42. - № 2. - P. 127-135.

359. Lew V.L., Bookchin R.M. Volume, pH and-ion content regulation in human red cells: analysis of transient behavior with an integrated model // J. Membr. Biol. 1986. - Vol. 92. - P. 57-74.

360. Lew V.L., Ortiz-Carranza O.E., Bookchin RM. Stochastic nature and red cell population distribution of the sickling-induced Ca permeability // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 99. - P. 2727-2735.

361. LewV.L., Daw N., Perdomo D. et al. Distribution of plasma membrane Ca2+ pump activity in normal human red blood cells // Blood. 2003. - Vol. 102. -P. 4206-4213.

362. Lew V.L., Bookchin R.M. Ion transport pathology in the mechanism of sickle cell dehydration // Physiol. Rev. 2005. - Vol. 85. - P. 179-200.

363. Li Q., Jungmann V., Kiyatkin A., Low P. S. Prostaglandin E2 stimulates a2*1* • Ca -dependent K channel in human erythrocytes and alters cell volume andfilterability // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 18651-18656.

364. Lijnen P., Echevaria-Vazquez D., Fagard R., Petrov V. Protein kinase C induced changes in erythrocyte Na+/H+ exchange and cytosolic free calcium in humans // Am. J. Hypert. 1998. - Vol. 11. - № 1. - P. 81-87.

365. Lijnen P., M'Buyamba-Kabangu J.R, Lissens W., Amery A. Erythrocyte cati-onic transport systems in normal male and female volunteers // Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol. 1985.-Vol. 7.- № l.-P. 35-40.

366. Lijnen P., Petrov V. Cholesterol modulation of transmembrane cation transport systems in human erythrocytes // Biochem. Mol. Med. 1995. -Vol. 56. - № l.-P. 52-62.

367. Linderkamp O., Wu P. Y., Meiselman H. J. Geometry of neonatal and adult red blood cells // Pediatr. Res. 1983. - № 17. - P. 250-253.

368. Linderkamp O., Ozanne P., Wu P.Y., Meiselman H.J. Red blood cell aggregation in preterm and term neonates and adults // Pediatr. Res. 1984. - № 18. -P. 1356-1360.

369. Lipowsky H.H., Kovalcheck S., Zweifach B. The distribution of blood rheological parameters in microvasculature of cat mesentery // Circ. Res. -1978.-Vol. 43.-P. 738-749.

370. Litvin T.N, Kamenetsky M, Zarifyan A. et al. Kinetic properties of "soluble" adenylyl cyclase: synergism between calcium and bicarbonate // J. Biol. Chem. -2003. Vol. 278.-№ 18.-P. 15922-15926.

371. Liu X, Samouilov A, Lancaster J.R, Zweier J.L. Nitric oxide uptake by erythrocytes is primarily limited by extracellular diffusion not membrane resistance // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. - № 29. - P. 26194-26199.

372. Lominadze D, Dean W.L. Involvement of fibrinogen specific binding in erythrocyte aggregation // FEBS Lett. 2002. - Vol. 517. - P. 41-44.

373. London R.D, Berson L, Lipkowitz M.S. Hormonal modulation of ionic permeability in human red blood cells // J. Am. Soc. Nephrol. 1993. - № 3. - P. 1607-1612.

374. Low P.S, Rathinavelu P, Harrison M.L. Regulation of glycolysis via reversible enzyme binding to the membrane protein, band 3 // J. Biol. Chem. 1993. -Vol.268. - P. 14627-14631.

375. Lowe G.D.O. Clinical blood rheology. C.R.C. Press. Boca Raton, 1988. -Vol. 1-2. - 473 p.

376. Luner S.J, Szklarek D, Knox R.J. et al. Red cell charge is not a function of cell age //Nature. 1977. -№ 269. - P. 719-721.

377. Lutz H.U, Fehr J. Total sialic acid content of glycophorins during senescence of human red blood cells // J. Biol. Chem. 1979. - № 254. - P. Ill77— 11180.

378. Lutz H.U. Red cell clearance (a review) // Biomed. Biochim. Acta. 1987. -№46.-P. S65-S71.

379. Madl C, Koppensteiner R, Wendelin B. et al. Effect of immunoglobulin administration on blood rheology in patients with septic shock // Circ. Shock. -1993. -№40. -P. 264-267.

380. Maeda N., Imaizumi K., Sakiya M., Shiga T. Rheological characteristics of desialylated erythrocytes in relation to fibrinogen-induced aggregation // Bio-chim. Biophys. Acta. 1984. - Vol. 776. - P. 151-158.

381. Maeda N., Sekiya M., Kameda K., Shiga T. Effect of immunoglobulin preparations on the aggregation of human erythrocytes // Eur. J. Clin. Invest. -1986.-Vol. 16.-P. 184-191.

382. Maeda N., Shiga T. Opposite effect of albumin on the erythrocyte aggregation induced by immunoglobulin G and fibrinogen // Biochim. Biophys. Acta. -1986.-№ 855.-P. 127-135.

383. Maeda N., Seike M., Shiga T. Effect of temperature on the velocity of erythrocyte aggregation // Biochim. Biophys. Acta 1987. - Vol. 904. - P. 319— 329.

384. Maeda N., Seike M., Kume S. et al. Fibrinogen-induced erythrocyte aggregation: erythrocyte-binding site in the fibrinogen molecule // Biochim. Biophys. Acta. 1987. - Vol. 904. - P. 81-91.

385. Maeda N., Seike M., Suzuki Y., Shiga T. Effect of pH on velocity of erythrocyte aggregation // Biorheology. 1988. - Vol. 25. - P. 25-30.

386. Maeda N., Izumida Y., Suzuki Y., Shiga T. Influence of IgG and it's related macromolecules on RBC aggregation // Hémorhéologie et agrégation érythro-cytaire. 1994. - Vol.4. - P.44-49.

387. Maeda N., Tanaka H., Yamamoto J. et al. Whole blood neutrophil aggregation in diabetes mellitus // Clin. Hemorheol. 1995. - Vol. 15. - № 3. - P. 494.

388. Mallinson G., Martin P.G., Anstee D.J., et al. Identification and partial characterization of the human erythrocyte membrane component(s) that express the antigens of the LW blood-group system // Biochem J. 1986. - Vol. 234. - P. 649-652.

389. Mardar G.I. Catecholamine deposition and erythrocyte structural transformation in functional disorders of the sympathetic adrenaline system // Fiziol. Zh. -2001.-№47.-P. 53-60.

390. Mardar H.I. The effect of hypoxia on the erythrocyte catecholamine depot // Fiziol. Zh. 1998. -№ 44. - P. 37-40.

391. Marikovsky Y., Danon D., Katchalsky A. Agglutination by polylysine of young and old red blood cells// Biochim. Biophys. Acta. 1966. - Vol. 124. -P.154.

392. Marini A.M., Urrestarazu A., Beauwens R., André B. The Rh (rhesus) blood group polypeptides are related to NH4+ transporters // Trends Biochem. Sci. -1997. № 22. - P.460-461.

393. Martinez M., Vayâ A., Labios M. et al. The effect of long-term treatment with hypotensive drugs on blood viscosity and erythrocyte deformability in patients with essential arterial hypertension // Clin. Hemorheol. Microcirc. 1997. -№ 17.-P. 193-198.

394. Martini J., Carpentier B., Chavez Negrete A. et al. Beneficial effects due to increasing blood and plasma viscosity // Clinical Hemorheology and Microcirculation. 2006. - Vol. 35.-N 1-2.-P. 51-57.

395. Matsumoto M., Yamaguchi T., Terada S., Kimoto E. Effects of intracellular pH on high pressure-induced hemolysis of anion transport inhibitor-treated erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. 1996. - Vol. 1280. - № 2. - P. 243250.

396. Mchedlishvili G., Gobejishvili L., Beritashvili N. Effect of intensified red blood cell aggregability on arterial pressure and mesenteric microcirculation // Microvasc. Res. 1993. - № 45. - P. 233-242.

397. Mchedlishvili G., Varazashvili M., Mamaladze A., Momtselidze N. Blood flow structuring and its alterations in capillaries of the cerebral cortex // Microvasc. Res. 1997. - Vol. 53. - P. 201-210.

398. Mchedlishvili G., Maeda N. Blood flow structure related to red cell flow: a determinant of blood fluidity in narrow microvessels // Jpn. J. Physiol. 2001. -Vol. 51.-P. 19-30.

399. Meiselman H.J. Red-blood-cell role in RBC aggregation // Clin Hemorheol. -1993.-№ 13.-P. 575-592.

400. Meiselman H.J., Baskurt O.K., Sowemimo-Coker S.O., Wenby R.B. Cell electrophoresis studies relevant to red blood cell aggregation // Biorheol.1999.-№36.-P. 427-432.

401. Meiselman H.J. In vivo circulatory correlates of altered RBC aggregation // Biorheology. 2002. - Vol. 39. - № 5. - P. 636.

402. Meiselman H., Baskurt O. Hemorheology and hemodynamics: Dove andare? // Clinical Hemorheology and Microcirculation. 2006. - Vol. 35. - № 1-2. -P. 37-43.

403. Meldon J.H., Garby L. The blood oxygen transport system. A numerical simulation of capillary-tissue respiratory gas exchange // Acta Med. Scan. Suppl. -1975.-Vol. 578.-P. 19-29.

404. Meszaros J., Villanova L., Pappano L.J. Calcium ions and 1-palmitoyl carnitine reduce erythrocyte electrophoretic mobility: test of a surface charge hypothesis // J. Mol. Cell Cardiol. 1988. - Vol. 20. - № 6. - P. 481-492.

405. Miller C. An overview of the potassium channel family // Genome Biology.2000.-Vol. l.-№4.-P. 41-45.

406. Miller V. Gender, estrogen and NOS // Circ. Res. 1999. - № 85. - P. 979981.

407. Minetti G., Low P.S. Erythrocyte signal transduction pathways and their possible functions // Curr. Opin. Hematol. 1997. - Vol. 4. - № 2. - P. 116-121.

408. Minetti G., Ciana A., Profumo A. et al. Cell age-related monovalent cations content and density changes in stored human erythrocytes // Biochim. Bio-phys. Acta. 2001.- Vol. 1527.- №3,- P. 149-155.

409. Minetti G., Ciana A. New and old integral proteins of the human erythrocyte membrane // Blood. 2003. - Vol. 101. - № 9. - P. 3751-3752.

410. Mizobe T., Maze M. a-Adrenomimetics and anesthesia 11 New Drugs in Anesthesia. 1995. - Vol. 33. - № 1. - P. 81-103.

411. Mohandas N., Evans E. Mechanical properties of the red cell membrane in relation to molecular structure and defects // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1994.-№23.-P. 787-818.

412. Morris A.J., Malbon C.C. Physiological regulation of G protein-linked signaling // Physiol. Rev. 1999. - № 79. - P. 1373-1430.

413. Motais R., Baroin A., Baldy S. Chloride permeability in human red cells: influence of membrane protein rearrangement resulting from ATP depletion and calcium accumulation // J. Membr. Biol. 1981. - Vol. 6. - № 3. - P. 195— 206.

414. Motais R., Garcia Romeu F., Borgese F. The control of Na^/FT1" exchange by molecular oxygen in trout erythrocytes. A possible role of hemoglobin as a transducer // J. Gen. Physiol. 1987. - № 90. - P. 197-207.

415. Mouro-Chanteloup I., Delaunay J., Gane P. et al. Evidence that the red cell skeleton protein 4.2 interacts with Rh membrane complex member CD47 // Blood. 2003. - Vol. 101. - P. 338-344.

416. Muller G.H., Schmid-Schonbein H., Meiselman H. J. Development of viscoe-lasticity in heated hemoglobin solutions // Biorheology. 1992. - № 29. - P. 203-216.

417. Mulquiney P.J., Kuchel P.W. Model of the pH-dependence of the concentrations of complexes involving metabolites, haemoglobin and magnesium ions in the human erythrocyte // Eur. J. Biochemistry. 1997. - Vol. 245. - P. 7183.

418. Murad F., Strauch B. S., Vaughan M. The effect of gonadotropins on testicular adenyl cyclase // Biochim. et Biophys. Acta. 1969. - Vol. 177. - № 3. -P. 591-598.

419. Muramatsu I., Ohmura T., Kigoshi S. et al. Pharmacological subclassification of alfai-adrenoceptors in vascular smooth muscle // Br. J. Pharmacol. 1990. -Vol. 99.-P. 197-201.

420. Murphy J.R. Influence of temperature and method of centrifugation on the separation of erythrocytes// J. Lab. Clin. Med. 1973. - Vol. 82. - P. 334342.

421. Myung Ch.-S., Lim W.K., DeFilippo J. M. et al. Regions in the G-protein y subunit important for interaction with receptors and effectors // Mol. Pharmacol. 2006. - Vol. 69. - P. 877-887.

422. Nabors K.L., Baumgartner W.A., Steven J.J. et al. Red blood cell orientation in pulmonary capillaries and its effect on gas diffusion // J. Appl. Physiol. -2003. Vol. 94. - № 4. - P. 1634 - 1640.

423. Nakayama Y., Kinoshita A., Tomita M. Dynamic simulation of red blood cell metabolism and its application to the analysis of a pathological condition // Theoretical Biology and Medical Modelling. 2005. - № 2. - P. 18.

424. Nash G.B., Wenby R.B., Sowemimo-Coker S.O., Meiselman H.J. Influence of cellular properties on red cell aggregation // Clin. Hemorheol. 1987. - № 7. -P. 93-108.

425. Nash G.B., Meiselman H.J. Effect of dehydration on the viscoelastic behavior of red cells // Blood Cells. 1991. - Vol. 17. - № 3. - P. 517-522.

426. Neu B., Meiselman H.J. Depletion-mediated red blood cell aggregation in polymer solution // Biophys. J. 2002. - Vol. 83. - № 5. - P. 2482-2490.

427. Neu B., Sowemimo-Coker S.O., Meiselman H.J. Cell-cell affinity of senescent human erythrocytes // Biophys. J. 2003. - Vol. 85. - № 1. - P. 75-84.

428. Nikinmaa M., Jensen F.B. Inhibition of adrenergic proton extrusion in rainbow trout red cells by nitrite-induced methaemoglobinaemia // J. Comp. Physiol. 1992. - Vol. 162. - P. 424-429.

429. Nikinmaa M. Oxygen and carbon dioxide transport in vertebrate erythrocytes: an evolutionary change in the role of membrane transport // J. Exp. Biol. -1997. Vol. 200. -№ 2. - P. 369-380.

430. Nordt F.J. Hemorheology in cerebrovascular diseases: approaches to drug development//Ann. N. Y. Acad. Sci. 1983. -№ 416. - P. 651-661.

431. Oberleithner H, Greger R, Lang F. The effect of respiratory and metabolic acid-base changes on ionized calcium concentration: in vivo and in vitro experiments in man and rat //Eur. J. Clin. Invest. 1982. -№ 12. - P. 451-455.

432. Ohnishi S.T, Ohnishi T, Ogunmola G.B. Green tea extract and aged garlic extract inhibit anion transport and sickle cell dehydration in vitro II Blood Cells, Molecules, and Diseases. 2001. - Vol. 27. - № 1. - P. 148-157.

433. Ohta K, Gotoh F, Tomita M, Tanahashi N, Kobari M, Shinohara T, Tera-yama Y, Mihara B, Takeda H. Animal species differences in erythrocyte ag-gregability // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. Vol. 262. - № 4. - P. H1009-H1012.

434. Olearczyk J.J, Stephenson A.H, Lonigro A.J, Sprague R.S. NO inhibits signal transduction pathway for ATP release from erythrocytes via its action on heterotrimeric G protein Gj // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. -№ 287. - P. H748-H754.

435. Oonishi T, Sakashita K, Uyesaka N. Regulation of red blood cell filterability by Ca influx and cAMP-mediated signaling pathways // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1997. - Vol. 273. -№ 42. - P. C1828-C1834.

436. Passow H. Molecular aspects of band 3 protein-mediated anion transport across the red blood cell membrane // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. -1986.-Vol. 103.-P. 161-203.

437. Pawson T, Nash P. Protein-protein interactions define specificity in signal transduction // Genes Dev. 2000. - № 14. - P. 1027-1047.

438. Pearson M.J, Rampling M.W. Fibrinogen acts differently from dextran on en-zimatically altered red blood cells // Clin. Hemorheol. 1995. - Vol. 15. - № 3. - P.449.

439. Pearson M.J, Rampling M.W, Gribbon P, Winlove C.P. Microscopic observations of fluorescently labeled fibrinogen fixed to the red blood cell surface // Clin. Hemorheol. 1995. - Vol. 15. - № 3. - P. 453.

440. Pearson M.J., Lipowsky H.H. Influence of erythrocyte aggregation on leukocyte margination in postcapillary venules of rat mesentery // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000. - Vol. 279. - № 4. - P. H1460-H1471.

441. Pehrsson S.K., Hjemdahl P., Nordlander R., Astrom H. A comparison of sympathoadrenal activity and cardiac performance at rest and during exercise in patients with ventricular demand or atrial synchronous pacing // Br. Heart J. -1988.-№60.-P. 212-220.

442. Pereira A.C., Samellas D., Tiffert T., Lew V.L. Inhibition of the calcium pump by high cytosolic Ca in intact human red blood cells // J. Physiol. -1993.-Vol. 461.-P. 63-73.

443. Petrov V., Edissonov I. The role of aggregation kinetics in the sedimentation of erythrocytes //Biorheology. 1996. - Vol. 33. -№ 4/5. - P. 353-364.

444. Popel A.S., Johnson P.C., Kameneva M.V., Wild M.A. Capacity for red blood cell aggregation is higher in athletic mammalian species than in sedentary species // J. Appl. Physiol. 1994. - № 77. - P. 1790-1794.

445. Potron G., Nguyen P., Pignon B. Fibrinogen, arterial risk factor in clinical practice // Clin. Hemorheol. 1994. - Vol. 14. - P. 739-767.

446. Pressman B.C. Biological applications of ionophores // Annu. Rev. Biochem. 1976.-Vol. 45.-P. 501-530.

447. Pribush A., Meiselman H., Meyerstein D., Meyer N. Dielectric approach to investigation of erythrocyte aggregation. Kinetics of erythrocyte aggregation-disaggregation in quiescent and flowing blood // Biorheology. -2000. Vol. 37.-№5-6.-P. 429-441.

448. Primmett D.R., Randall D.J., Mazeaud M., Boutilier R.G. The role of catecholamines in erythrocyte pH regulation and oxygen transport in rainbowtrout (Salmo gairdneri) during exercise // J. Exp. Biol. 1986. - Vol. 122. - P. 139-148.

449. Raess B.U., Gersten M.H. Calmodulin-stimulated plasma membrane (Ca + Mg2+)-ATPase: inhibition by calcium channel entry blockers // Biochem. Pharmacol. 1987. -Vol. 36. - P. 2455-2459.

450. Rampling M.W., Whittingstall P. Blood fluidity and endothelial influences on microcirculation//Klin. Wochenschr. 1986. -№ 64. - P. 1084-1088.

451. Rampling M.W. Red cell aggregation as a risk factor for thrombosis // Rev. Port. Hemorreol. 1991. - № 5. - P. 39-47.

452. Rampling M.W., Martin G. Albumin and rouleaux formation // Clin. Hemor-heol. 1992. - № 12. - P. 761-765.

453. Rampling M.W., Warren 0. A comparison of the effects of bromelain digestion on the aggregation of human and equine red cells // Biorheology. 1999. -Vol. 36.-P. 168.

454. Rasia M., Bollini A. Red blood cell shape as a function of medium's ionic strength and pH // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1372. - P. 198204.

455. Rasmussen H., Lake W., Allen J. E. The effect of catecholamines and prostaglandins upon human and rat erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta. -1975.-№411.-P. 63-73.

456. Razavian S., Wenby R., Fisher T., Meiselman H. Determination of particle sedimentation rate by ultrasonic interferometry: role of particle size, density and volume fraction // Biorheology. 1997. - Vol. 34. - № 4/5. - P. 349-362.

457. Reinhart W.H., Nagy C. Albumin affects erythrocyte aggregation and sedimentation // Eur. J. Clin. Invest. 1995. - № 25. - P. 523-528.

458. Reinke W., Gaehtgens P., Johnson PC. Blood viscosity in small tubes: effect of shear rate, aggregation and sedimentation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1987. -№ 253. - P. H540-H547.

459. Resnick L.M., Gupta R.K., Sosa R.E., Corbett M.L., Laragh J.H. Intracellular pH in human and experimental hypertension // PNAS. 1987. - Vol. 84. - P. 7663-7667.

460. Rettig M.P., Orendorf C.J., Campanella E., Low P.S. Effect of pH on the self-association of erythrocyte band 3 in situ // Biochim. Biophys. Acta. 2001. -Vol. 1515.-P. 72-81.

461. Ripoche P., Bertrand 0., Gane P. et al. Human Rhesus-associated glycoprotein mediates facilitated transport of NH3 into red blood cells // PNAS. 2004. -Vol. 101.-№49.-P. 17222-17227.

462. Rivera A., Rotter M.A., Brugnara C. Endothelins activate Ca2+-gated K+ channels via endothelin B receptors in CD-I mouse erythrocytes // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1999. - Vol. 277. - P. C746-C754.

463. Rivera A., Jarolim P., Brugnara C. Modulation of Gardos channel activity by cytokines in sickle erythrocytes // Blood. 2002. - № 99. - P. 557-603.

464. Robertson D., Johnson G.A., Robertson R.M. et al. Comparative assesment of stimuli that release neuronal and adrenomedullary catecholamines in man // Circulation.- 1979.-Vol. 59.-P. 637-643.

465. Rogowski O., Zeltser D., Rotstein R. et al. Correlated expression of adhesive properties for both white and red blood cells during inflammation // Biorheol-ogy. 2000. - Vol. 37. - № 56. - P. 361-370.

466. Romero P.J., Rojas L. The effect of ATP on Ca -dependent K channels of human red cells // Acta Cient. Venez. 1992. - № 43. - P. 19-25.

467. Romero P. J., Romero E.A. The role of calcium metabolism in human red blood cell ageing: a proposal // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 1999. - Vol. 25. -№ 1. - P. 9-19.

468. Roos A., Boron W.F. Intracellular pH // Physiol. Rev. 1981. - Vol. 61. - P. 296-434.

469. Rosenbaum J.T. Myocardial infarction as a complication of immunoglobulin therapy // Arthritis Rheum. 1997. - № 40. - P. 1732-1733.

470. Rossi J.P., Schatzmann H.J. Is the red cell calcium pump electrogenic? // J. Physiol.- 1982.-Vol. 327.-P. 1-15.

471. Russell J.M. Sodium-Potassium-Chloride Cotransport // Physiol. Rev. 2000. -Vol. 80.-№ 1.-P. 211-276.

472. Sachs C., Rabouine P., Chaneac M. et al. In vitro valuation of a heparinized blood sample for ionized calcium measurement // Ann. Clin. Biochem. -1991.-№28.-P. 240-244.

473. Sachs F., Morris C.E., Hamill O.P. et al. Does a stretch-inactivated cation channel integrate osmotic and peptidergic signals? // Nature. 2000. - № 3. -P. 847-848.

474. Saenko E.L., Yaropolov A.I. Studies on receptor interaction of ceruloplasmin with human red blood cells // Biochem. Int. 1990. - Vol. 20. - № 2. - P. 215-225.

475. Sager G. Receptor binding sites for beta-adrenergic ligands on human erythrocytes // Biochem. Pharmacol. 1982. - Vol. 31. -№ 1. - P. 99-104.

476. Sakashita K., Oonishi T., Ishioka N., Uyesaka N. Endothelin-1 improves the impaired filterability of red blood cells through the activation of protein kinase C // Jpn. J. Physiol. 1999. - № 49. - P. 113-120.

477. Saltiel A.R., Kahn C.R. Insulin signalling and the regulation of glucose and lipid metabolism//Nature. -2001. Vol. 414. - P. 799-806.

478. Salzer U., Prohaska R Stomatin, flotillin-1, and flotillin-2 are major integral proteins of erythrocyte lipid rafts // Blood. 2001. - № 97. - P. 1141-1143.

479. Santos-Silva A, Castro E.M, Teixeira N.A. et al. Altered erythrocyte membrane band 3 profile as a marker in patients at risk for cardiovascular disease // Atherosclerosis. 1995. - Vol. 116. - № 2. - P. 199-209.

480. Sargento L, Saldanha C, Martins Silva J. Centrifugous force influence on erythrocyte aggregation in vitro study in blood from stroke and diabetes melli-tus patients// Clin. Hemorheol.- 1995. -Vol. 15.-№3.-P. 518.

481. Schmid-Schonbein H, Gallash G, Volger E. et al, Microrheology and protein chemistry of pathological red cell aggregation (blood sludge) studied in vitro // Biorheology. 1973. - № 10. - P. 213-223.

482. Schmid-Schonbein H, Reiger H, Gallasch G et al. Pathological red cell aggregation (clump aggregation). Molecular and electrochemical factors // Bibl. Anat. 1977. - № 16. - P. 484-489.

483. Schmid-Schonbein H. Fáhraeus-effect-reversal (FER) in compaction stasis (CS): microrheological and haemodynamic consequences of intravascular sedimentation of red cell aggregates // Biorheology. 1988. - Vol. 25. - P. 355-366.

484. Schmid-Schonbein H, Malotta H, Striesow F. Erythrocyte aggregation: causes, consequences and methods of assessment // Tijdschr. NVKC. 1990. -Vol. 15.-P. 88-97.

485. Schofield A.E, Reardon D.M, Tanner M.J. Defective anion transport activity of the abnormal band 3 in hereditary ovalocytic red blood cells // Nature. -1992.-№ 355.-P.836-838.

486. Schwartz M.A, Brown E.J, Fazeli B. A 50-kDa integrin-associated protein is required for integrin-regulated calcium entry in endothelial cells // J. Biol. Chem. 1993. -№ 268. - P. 19931-19934.

487. Seaman G.V.F. Electrokinetic behavior of red cells / In The Red Blood Cell. -N. Y.: Academic Press, 1975. P. 1135-1229.

488. Seaman G.V.F, Knox R.J, Nordt F.J, Regan D.H. Red cell aging. I. Surface charge density and sialic acid content of density-fractionated human erythrocytes//Blood. 1977.- №50.-P. 1001-1011.

489. Sekar M.C, Hokin L.E. Phosphoinositide metabolism and cGMP levels are not coupled to the muscarinic-cholinergic receptor in human erythrocyte // Life Sci. 1986. - № 39. - P. 1257-1262.

490. Shalak R, Zarda P, Jan K.M, Chien S. Mechanism of rouleaux formation // Biophys. J. 1981. -№35. -P. 771-781.

491. Shields J.M, Pruitt K, McFall A. et al. Understanding Ras: "it ain't over 'til it's over" // Trends Cell Biol. 2000. - № 10. - P. 147-154.

492. Shiga T, Imaizumi K, Harada N, Sekiya M. Kinetics of rouleaux formation using TV image analyzer. I. Human erythrocytes. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1983. - Vol. 245. - № 2. - P. H252-H258.

493. Shumay E, Gavi S, Wang H, Malbon C.C. Trafficking of B2-adrenergic receptors: insulin and B-agonists regulate internalization by distinct cytoskeletal pathways // J. Cell Sci. 2004. - Vol. 117. - P. 593-600.

494. Skou J.C, Esmann M. The Na, K-ATPase // J. Bioenerg. Biomembr. 1992. -Vol. 24.-P. 249-261.

495. Smit M.J, Iyengar R. Mammalian adenylyl cyclases // Adv. Second Messenger Phosphoprotein Res. 1998. -№ 32. - P. 1-21.

496. Smith R.C, Nunn V. // Arch. Biochem. 1984. - Vol. 232. - P. 348 - 353.

497. Snabre P, Bitbol M, Mills P. Cell disaggregation behavior in shear flow // Biophys. J. 1987. -№ 51. - P. 795-807.

498. Soderling S.H, Beavo J.A. Regulation of cAMP and cGMP signaling: new phosphodiesterases and new functions // Curr. Opin. Cell Biol. 2000. -№ 12.-P. 174-179.

499. S0rensen B, Weber R.E. Effects of oxygenation and the stress hormones adrenaline and Cortisol on the viscosity of blood from trout, Oncorhynchus mykiss // J. Exp. Biol. 1995. - № 198. - P. 953-959.

500. Southcott M.J.G, Tanner M.J, Anstee D.J. The expression of human blood group antigens during erythropoiesis in a cell culture system // Blood. 1999. - №93,- P. 4425-4435.

501. Sowemimo-Coker S.O, Whittingstall P, Pietsch L. et al. Effects of cellular factors on the aggregation behavior of human, rat and bovine erythrocytes // Clin. Hemorheol. Microcirc. 1989. - № 9. - P. 723-737.

502. Spengler M.I, Rasia M. Plasma proteins influence on erythrocyte aggregation in different mammalian species // Biorheology. 1999. - Vol.36. - № 1/2. -P.121.

503. Sprague R.S, Ellsworth M.L, Stephenson A.H, Lonigro A.J. ATP: the red blood cell link to NO and local control of the pulmonary circulation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1996. - Vol. 271. - P. H2717-H2722.

504. Sprague R.S, Ellsworth M.L, Stephenson A.H, Lonigro A.J. Participation of cAMP in a signal-transduction pathway relating erythrocyte deformation to ATP release //Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2001. - Vol. 281. - P. CI 158-C1164.

505. Stampe P, Vestergaard-Bogind B. The Ca -sensitive K" -conductance of the human red cell membrane is strongly dependent on cellular pH // Biochim. Biophys. Acta. 1985.-Vol. 815.-№2.-P. 313-321.

506. Stanosz S, Kuligowski D. Excretion of free catecholamines in urine and water electrolyte balance in women with arterial hypertension during, before and after menopause // Ginekol. Pol. 1995. - Vol. 66. - № 4. - P. 223-227.

507. Stoltz J.F, Donner M, Muller S. Hemorheology in practice: an introduction to the concept of a hemorheological profile // Rev. Port. Hemorreol. 1991. -Vol. 5.-№2.-P. 175-188.

508. Stoltz J.-F, Donner M. Hemorheology: importance of erythrocyte aggregation // Clin. Hemorheol. 1987. - № 7. - P. 15-23.

509. Stoltz J.-F., Paulus F., Donner M. Experimental approaches to erythrocyte aggregation // Clin. Hemorheol. 1987. - № 7. - P. 109-118.

510. Stoltz J.F. Clinical hemorheology: past, present and future // Clin. Hemorheol. 1995.-Vol. 15. -№3. -P. 399-600.

511. Stromqvist M., Berglund A., Shanbhang V.P., Backman L. Influence of calmodulin on the human red cell membrane skeleton // Biochemistry. 1988. -Vol. 27.-P. 1104-1110.

512. Stuart J. Red cell filterability and cell size // Br. J. Haematol. 1987. - Vol. 66. - № 3. - P. 431-432.

513. Sundquist J., Bias S.D., Hogan J.E. et al. The alpha 1-adrenergic receptor in human erythrocyte membranes mediated interaction in vitro of epinephrine and thyroid hormone at the membrane Ca(2+)-ATPase // Cell Signal. 1992. -№4.-P. 795-799.

514. Suzuki Y., Tateishi N., Soutani M., Maeda N. Flow behavior of erythrocytes in microvessels and glass capillaries: effects of erythrocyte deformation and erythrocyte aggregation // Int. J. Microcirc. Clin. Exp. 1996. - № 16. - P. 187-194.

515. Suzuki Y., Tateishi N., Maeda N. Electrostatic repulsion among erythrocytes in tube flow, demonstrated by the thickness of marginal cell-free layer // Biorheology. 1998. - Vol. 35. -№ 2. - P. 155-170.

516. Swislocki N.I., Tierney J.M. Different sensitivities of rat and human red cells to exogenous Ca2+//Am. J. Hematol. 1989. - Vol. 31. -№ 1. - P. 1-10.

517. Takeoka S., Teramura Y., Okamura Y. et al. Fibrinogen-conjugated albumin polymers and their interaction with platelets under flow conditions // Biomac-romolecules. 2001.-№2.-P. 1192-1197.

518. Tamura S., Brown T.A., Dubler R.E., Larner J. Insulin-like effect of vanadate on adipocyte glycogen synthase and on phosphorylation of 95,000 dalton subunit of insulin receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983. - Vol. 113. -№ l.-P. 80-86.

519. Tang L.C. Identification and characterization of human erythrocyte muscarinic receptors // Gen. Pharmacol. 1986. - № 17. - P. 281-285.

520. Tang L.C., Schoomaker E., Wiesmann W.P. Cholinergic agonists stimulate calcium uptake and cGMP formation in human erythrocytes // Biochim. Bio-phys. Acta 1984,-Vol. 772. - P. 235 -238.

521. Tanner M.J. Molecular and cellular biology of the erythrocyte anion exchanger (AE1) // Semin Hematol. 1993. - № 30. - P. 34-57.

522. Tartakover-Matalon S., Shoham-Kessary H., Foltyn V., Gershon H. Receptors involved in the phagocytosis of senescent and diamide-oxidized human RBCs // Transfusion. 2000. - № 40. - P. 1494-1502.

523. Tateishi N., Suzuki Y., Cicha I., Maeda N. 02 release from erythrocytes flowing in a narrow 02-permeable tube: effects of erythrocyte aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001. - Vol. 281. - № 1. - P. H448-H456.

524. Tateishi N. et al. Reduced oxygen release from erythrocytes by the accelera-tion-indused flow shift, observed in an oxygen permeable narrow tube // J. Biomech. 2002. - Vol. 36. - № 9. - P. 1241.

525. Taylor P. The cholinesterases // J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266. - P.4025-4028.

526. Telen M.J. Red blood cell surface adhesion molecules: their possible roles in normal human physiology and disease // Semin. Hematol. 2000. - Vol. 37. -№2.-P. 130-142.

527. Tiffert T., Spivak J.L., Lew V.L. Magnitude of calcium influx required to induce dehydration of normal human red cells // Biochim. Biophys. Acta. -1988.-Vol. 943.-P. 157-165.

528. Tiffert T., Etzion Z., Bookchin R.M., Lew V.L. Effects of deoxygenation on active and passive Ca transport and cytoplasmaic Ca2 buffering in normal human red cells // J. Physiol. 1993. - Vol. 464. - № 1. - P. 529-544.

529. Tiffert T., Lew V.L. Cytoplasmic calcium buffers in intact human red cells // J. Physiol. 1997.-Vol. 500.-№ l.-P. 139-154.

530. Tiffert T., Bookchin R.M, Lew V.L. Calcium homeostasis in normal and abnormal human red cells / In: Red Cell Membrane Transport in Health and Disease, edited by I. Bernhardt and J. C. Ellory. Berlin: Springer-Verlag, 2003.-P. 373-405.

531. Toews M.L., Prinster S.C., Schulte N.A. Regulation of alpha-IB adrenergic receptor localization, trafficking, function, and stability // Life Sciense 2003. - Vol. 74. - № 2-3. - P. 379-389.

532. Tomoda F., Takata M., Kagitani S. et al. Different platelet aggregability during mental stress in two stages of essential hypertension // Am. J. Hypertens. -1999.-Vol. 12.-№ 11.-p. 1063-1070.

533. Toth K., Wenby R.B., Meiselman H.J. Inhibition of polymer-induced red blood cell aggregation by poloxamer 188 // Biorheology. 2000. - Vol. 37. -P.301-312.

534. Tufts B.L., Mense D.C., Randall D.J. The effects of forced activity on circulating catecholamines and pH and water content of erythrocytes in the toad // J. Exp. Biol. 1987. - Vol. 128. - P. 411-418.

535. Tuvia S., Moses A., Gulayev N. et al. Beta-adrenergic agonists regulate cell membrane fluctuations of human erythrocytes // J. Physiol. 1999. - Vol. 516.-№3.-P. 781-792.

536. Uings I. J., Farrow S. N. Cell receptors and cell signalling // J. Clin. Pathol.: Mol. Pathol. 2000. - № 53. - P. 295-299.

537. Van der Horst I., Ottervanger J.P., van't Hof A.et al. The impact of glucose-insulin-potassium infusion in acute myocardial infarction on infarct size and left ventricular ejection fraction // BMC Medicine. 2005. - P. 3-9.

538. Vandegriff K.D., Olson J.S. Morphological and physiological factors affecting oxygen uptake and release by red blood cells // J. Biol. Chem. 1984. - Vol. 259.-№20.-P. 12619-12627.

539. Varecka L., Peterajova E., Sevcik J. Vanadate changes Ca influx pathway properties in human red blood cells // Gen. Physiol. Biophys. 1997. - Vol. 16,- №4.-P. 359-372.

540. Vaughn M.W., Huang K.-T., Kuo L., Liao J.C. Erythrocytes possess an intrinsic barrier to nitric oxide consumption // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. -№ 4. - P. 2342-2348.

541. Vestergaard-Bogind B., Bennekou P. Calcium-induced oscillations in K+ conductance and membrane potential of human erythrocytes mediated by the ionophore A23187 //Biochim. Biophys. Acta. 1982. - Vol. 688.-№ l.-P. 37-44.

542. Vestergaard-Bogind B. Spontaneous inactivation of the Ca2+-sensitive K+ channels of human red cells at high intracellular Ca2+ activity // Biochim. Biophys. Acta. 1983. - Vol. 730. - № 2. - P. 285-294.

543. Vestergaard-Bogind B., Stampe P. Trans to cis proton concentration gradients9.1accelerate ionophore A23187-mediated net fluxes of Ca across the human red cell membrane // Biochim. Biophys. Acta. 1984. - Vol. 775. - № 3. - P. 328-340.

544. Vicaut E. Opposite effects of red blood cell aggregation on resistance to blood flow//J. Cardiovasc. Surg. 1995.-№ 36.-P. 361-368.

545. Vitvitsky V.M., Frolova E.V., Martinov S.V. et al. Effect of membrane permeability to anions on swelling rate of erythrocytes treated of amphotericin B or gramicidin D // Biochem. 2005. - № 2. - P. 255-260.

546. Walter H., Widen K.E. Cell partitioning in two-polymer aqueous phase systems and cell electrophoresis in aqueous polymer solutions. Human and rat young and old red blood cells // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - Vol. 1194. -P. 131-137.

547. Warnke K.C., Skalak Th.C. Leukocyte plugging in vivo in skeletal muscle arterioles trees // Am. J. Physiol. 1992. - Vol. 262. - P. HI 149-H1155.

548. Waugh R.E. Reticulocyte rigidity and passage through endothelial-like pores // Blood. 1991. - Vol. 78. - № 11. - P. 3037-3042.

549. Waugh R.E., Narla M., Jackson C.W. et al. Rheologic properties of senescent erythrocytes: loss of surface area and volume with red blood cell age // Blood.- 1992.-№79.-P. 1351-1358.

550. Wehling M., Vetter W., Neyses L. et al. Altered calcium and sodium metabolism in red blood cells of hypertensive man: assessment by ion-selective electrodes//J. Hypertens. 1983.-№ 1.-P. 171-176.

551. Weirich J., Dumont L., Fleckenstein-Grun G. Contriburion of store-operated Ca -entry to pH0 changes in vascular tone of porcine coronary smooth muscle // Cell Calcium. 2004. - Vol. 35. - № 1. - P. 9-20.

552. Wen Z., Yao W., Xie L. et al. Influence of neuraminidase on the characteristics of microrheology of red blood cells // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2000. Vol. 23. - № 1. - P. 51-57.

553. Weng X., Cloutier G., Pibarot P., Durand L.-G. Comparison and stimulation of different levels of erythrocyte aggregation with pig, horse, sheep, calf, and normal human blood // Biorheology. 1996. - V. 33. - № 4/5. - P. 365-377.

554. Weng X., Roederer G.O., Beaulieu R., Cloutier G. Contribution of acute-phase proteins and cardiovascular risk factors to erythrocyte aggregation in normolipidemic and hyperlipidemic individuals // Thromb. Haemost. 1998. -№80.-P. 903-908.

555. Westergren A. The technique of the red cell sedimentation reaction // Am. Rev. Tuberc.- 1926.-№ 14.-P. 94-101.

556. Westhoff C.M., Ferreri-Jacobia M., Mak D.-O. D., Foskett J.K. Identification of the erythrocyte Rh blood group glycoprotein as a mammalian ammonium transporter// J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. -№ 15. - P. 12499-12502.

557. Whittingstall P., Toth K., Wenby R.B., Meiselman H.J. Cellular factors in RBC aggregation: effects of autologous plasma and various polymers // Hemorheologie et aggregation erythrocytaire. 1992. - Vol. 4. - P. 21-30.

558. Wiley J.S., Clarke D.A., Bonacquisto L.A. et al. Erythrocyte cation cotrans-port and countertransport in essential hypertension // Hypertension. 1984. -Vol. 6.-P. 360-368.

559. Wiley J.S., McCulloch K.E. Calcium ions, drug action and the red cell membrane // Pharmacol. Ther. 1982. - Vol. 18. - № 2. - P. 271-292.

560. Wintour E.M. Water channels and urea transporters // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 1997. - № 24. - P. 1-9.

561. Woodland N.B., Cordatos K., Hung W.T. et al. Erythrocyte sedimentation in columns and the significance of ESR // Biorheology. 1996. - № 33. - P. 477-488.

562. Wu Y.Y., Csako G. Rapid and/or high-throughput genotyping for human red blood cell, platelet and leukocyte antigens, and forensic applications // Clinica Chimica Acta. 2006. - Vol. 363. - № 1- 2. - P. 165-176.

563. Yaari A. Mobility of human red blood cells of different age groups in an electric field // Blood. 1969. -№ 33. - P. 159-163.

564. Yalcin 0., Aydin F., Ulker P. et al. Effects of red blood cell aggregation on myocardial hematocrit gradient using two approaches to increase aggregation // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. - Vol. 290. - № 2. - P. H765-H771.

565. Yalcin O., Uyuklu M., Armstrong J.K. et al. Graded alterations of RBC aggregation influence in vivo blood flow resistance // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 287. - P. H2644-H2650.

566. Yamamoto M. Effects of fibrinogen, globulin, albumin and hematocrit on the kinetics of erythrocyte aggregation in man // Angiology. 1986. - № 37. - P. 663-671.

567. Yedgar S, Ben-Ami R, Berliner S, Barshtein G. Identification and formulation of clinically-relevant parameters of in vitro measured red blood cell aggregation // Biorheology. 2002. - Vol. 39. - № 5. - P. 636-637.

568. Zavodnik I.V, Lapshina E.A, Rekawiecka K. et al. Membrane effects of nitrite-induced oxidation of human red blood cells // Biochim. Biophys. Acta. -1999.-Vol. 1421.-P. 306-316.

569. Zhang Y, Manning L.R, Falcone J. et al. Human erythrocyte membrane Band 3 protein influences hemoglobin cooperativity: possible effect on oxygen transport // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - № 41. - P. 39565-39571.

570. Zhu Q, Casey J.R. The substrate anion selectivity filter in the human erythrocyte C17HC03" exchange protein, AE1 // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. -№22.-P. 23565-23573.

571. Zicha J, David-Dufilho M, Kunes J. et al. Cytosolic pH and calcium in Dahl salt-sensitive and salt-resistant rats: the relationship to plasma lipids // J. Hy-pertens.- 1997.-Vol. 12.-№2.-P. 1715-1721.

572. В соответствии с пунктом 75 открытиях, изобретениях и рационалй!З^Т0рё^;кх^ предложениях, утвержденного лостановледа^^^;^?^'-вета Министров СССР от 21 августа 1973 Р.?'№.,51$, настоящее удостоверение выдано . " ".

573. Гупимпву Г.И. ,Клутпвпй Л.Я. ' ' '1. Фамилия, имя, отчество)

574. Смирнову И.Ю. и Тихомировой И.'А.на предложение, признанное рацио налпринятое Ярославским государственна; педагогическим университетом-г^ШЩШ'наименование предприятия,им. К.Д.Ушинскогоорганизации, когда)1

Информация о работе

Тихомирова, Ирина Александровна
доктора биологических наук
Ярославль, 2006
ВАК 03.00.13

Диссертация

Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы