Роль эндокринных и паракринных механизмов в изменении микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях

Булаева, Светлана Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль эндокринных и паракринных механизмов в изменении микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль эндокринных и паракринных механизмов в изменении микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях"

На правах рукописи

□□34Э1ЭВ9

Булаева Светлана Владимировна

РОЛЬ ЭНДОКРИННЫХ И ПАРАКРИННЫХ МЕХАНИЗМОВ В ИЗМЕНЕНИИ МИКРОРЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ В НОРМЕ И ПРИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЯХ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

03.03.01 - физиология

1 8 ФЕБ 2010

Ярославль - 2010

003491969

Работа выполнена на кафедре медико-биологических основ спорта ГОУ ВПО «Ярославский государственный университет имени К. Д. Ушинского»

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Алексей Васильевич Муравьев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Марина Зотовна Федорова

доктор биологических наук, профессор Анатолий Кузьмич Бобылев

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет»

Защита состоится «_» февраля 2010 г. в «_» часов

на заседании диссертационного совета Д 212.307.02 при ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет имени К.Д. Ушинского» по адресу 150000, г. Ярославль, Которосльная наб., 46 в.

Отзывы на автореферат присылать по адресу: 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, 108.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета Автореферат разослан «__» января 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета @

кандидат биологических наук, доцент Осетров И.А.

Общая характерист ика работы

Актуальность исследования. Процессы обмена веществ в организме или метаболизм связаны с транспортом кислорода и субстратов окисления в тканевые микрорайоны и последующим удалением из них продуктов белкового, жирового и углеводного обмена, жидкости и С02. Это достигается скоординированной деятельностью разных систем организма и, в том числе, системы крови (Р. Эккерт и др., 1991). В этой связи важным свойством крови является ее оптимальная текучесть (К. Каро и др., 1981, В.А. Левтов и др., 1982). Она зависит от вязкости и ее определяющих факторов, таких как вязкость плазмы, концентрация клеток (гематокрит), агрегация и деформация эритроцитов (A.B. Муравьев, 1993; S. Forconi, М. Guerrini, 1996). В разных условиях, как в норме, так и при патологии, изменения текучести крови и ее транспортного потенциала связывают, в основном, с количественными перестройками вышеуказанных факторов (H.H. Фирсов, П.Х. Джанашия, 2008; L. Dintenfass, 1985; J.F. Stoltz et al., 1991; O.K. Baskurt et al., 2007). Вместе с тем появляются работы, в которых приводятся факты, свидетельствующие об изменениях микрореологических свойств клеток крови и, в том числе, эритроцитов при действии биологических регуляторов. Так, Т. Oonishi et al. (1997) указывали на существенное изменение фильтруемости этих клеток после инкубации с адреналином и простагландином Ej. Об изменении агрегации и деформируемости эритроцитов под влиянием адреналина и инсулина сообщали S. Hilario et al. (1999) и И.А. Тихомирова (2006). Важно иметь в виду, что эти гормоны и простагландины участвуют в регуляции метаболизма. С другой стороны, имеются работы, в которых приведены данные о существенном изменеши реологических свойств крови при расстройствах метаболизма, например, при диабете (В.А. Галенок и др., 1987; J.F. Brun et al., 1998; N. Babu, M. Singh, 2005). Эритроциты лиц больных диабетом в течение всего периода их жизни находятся в условиях повышенного уровня глюкозы. Это сочетается с ухудшением их деформируемости и приростом агрегации (О. Linderkamp et al., 1999; М. Singh, S. Shin, 2009). Сниженный уровень инсулина при диабете первого типа (J. Tepperman, Н. Tepperman, 1987) и измененная чувствительность к катехоламинам тоже могут сказываться на функциональном состоянии эритроцитов и их микрореологических свойствах. При этом наличие функционально активных рецепторов на мембранах зрелых эритроцитов к ряду гормонов, таких как инсулин, адреналин и норадреналин (G. Sager et al., 1985; J. Sundquist et al., 1992; S. Tuvia et al., 1999; J.F. Horga et al., 2000), ставит два вопроса: 1) будут ли изменяться их микрореологические свойства при прямом стиму-

лировании этих рецепторов соответствующими агонистами и 2) каковы микрореологические реакции клеток на стимулирование разных подтипов этих рецепторов (адренорецепторов). Для ответа на эти и ряд других вопросов и было предпринято диссертационное исследование.

Цель исследования

Изучение параметров гемореолошческого профиля в норме и при метаболических расстройствах и анализ роли регуляторов метаболизма - гормонов и простагландинов - в изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

Задачи исследования

1. Изучить особенности гемореологического профиля и транспортный потенциал крови в норме и при метаболических нарушениях у лиц с диабетом первого и второго типов.

2. Исследовать роль инсулина, адреналина и агонистов адренорецепторов в изменениях агрегации и деформируемости эритроцитов.

3. Изучить влияние простагландинов групп Е и Ф на микрореологические свойства эритроцитов: их агрегацию и деформируемость.

Научная новизна исследования

Впервые проведено сравнительное исследование изменений параметров гемореологического профиля и транспортного потенциала крови в условиях метаболических расстройств - при диабете первого и второго типов. Показаны значительные изменения вязкости цельной крови, в основном обусловленные приростом вязкости плазмы. Определен вероятностный вклад разных реологических факторов, связанных с текучестью цельной крови. Установлено, что при метаболических расстройствах на долю вязкости плазмы может приходиться до 56% изменений текучести цельной крови, а на долю микрореологических свойств эритроцитов (их агрегацию и деформируемость) - 32%. Впервые показано, что транспортный потенциал крови при метаболических расстройствах снижен в среднем на 30%. При этом ведущая роль в его уменьшении принадлежит текучести крови (74%), которая в значительной степени обусловлена микрореологическими свойствами эритроцитов и в первую очередь их деформируемостью. Показана возможность срочной коррекции негативно измененных реологических свойств крови ln vivo путем введения лекарственного препарата пентоксифиллина, обладающего способностью ин-гибировать активность фосфодиэстераз в клетках. Найдена положитель-

ная корреляция между агрегацией эритроцитов и концентрацией глюкозы. В опытах in vitro установлено, что при концентрации глюкозы 5 мМ величина агрегации эритроцитов минимальная. Впервые установлена разная степень изменения агрегации эритроцитов под влиянием инсулина в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. Получены данные о дозозависимом влиянии инсулина на микрореологические характеристики эритроцитов. Впервые выполнен детальный анализ изменений агрегации и деформируемости эритроцитов при стимулировании разных подтипов адренорецепторов, показаны вероятные внутриклеточные сигнальные пути, связанные с этими физиологическими ответами клеток. Проведен анализ изменений деформируемости и агрегации эритроцитов под влиянием простагландинов. Показано, что простагландины группы Е благоприятно влияют на микрореологию эритроцитов: снижают их агрегацию и увеличивают деформируемость, тогда как простагландин группы Ф (ПГФ2а), напротив, выраженно стимулировал агрегацию эритроцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы

В исследовании показаны типичные отличия параметров гемо-реологического профиля при метаболических нарушениях от тех, что характерны для физиологической нормы. Получены новые количественные характеристики реологии крови, ее текучести и транспортного потенциала при метаболических расстройствах, связанных с инсулинозависимым и инсулиннезависимым диабетом. Показана возможность срочной коррекции негативно измененных микрореологических параметров эритроцитов при использовании препарата пентоксифиллина с фосфодизстеразной ингибиторной активностью. В работе получены новые данные об особенностях влияния инсулина и адреналина, а также агонистов адренорецепторов на микрореологические свойства эритроцитов в физиологических условиях и на фоне расстройств метаболизма. Изучено влияние разных концентраций глюкозы на агрегацию и деформируемость клеток. Исследованы элементы внутриклеточных молекулярных сигнальных путей эритроцитов, связанных с изменениями их микрореологических параметров. Это может дать направление коррекционным мероприятиям - поиску и применению препаратов, адресно влияющих на клеточные молекулярные мишени, действие на которые приводит к позитивным микрореологическим эффектам. Результаты исследований дополняют знания о механизмах межклеточных взаимодействий, о влиянии сигнальных молекул эндокринной и иаракринной природы на процессы агрегации и деформируемости эритроцитов. Материалы диссертации могут быть использованы для преподавания физиологии и патофизиологии, при написании об-

зоров, монографий и учебных пособий, а также служить основой для дальнейшей научно-исследовательской работы в данной области.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В физиологических условиях у здоровых лиц гемореологический профиль отличается более высокой текучестью крови и ее эффективным транспортным потенциалом от профилей лиц с метаболическими нарушениями.

2. Инкубация эритроцитов с инсулином приводит к существенному дозо-зависимому снижению агрегации эритроцитов и умеренному приросту их деформируемости. Сходное влияние оказывает и глюкоза в физиологических концентрациях.

3. Адреналин дозозависимым образом повышает агрегацию эритроцитов и способствует умеренному приросту их деформируемости. Агонисты а-1 и а-2-адренорецепторов (фенилэфрин и клонидин) в избранных концентрациях также выраженно повышают агрегацию эритроцитов, но не влияют существенно на их деформируемость. Напротив, метапротеренол - агонист р-адренорецепторов достоверно повышает деформируемость эритроцитов, но не оказывает существенного влияния на агрегацию клеток.

4. Механизмы регуляторного влияния гормонов на микорореологические свойства эритроцитов могут быть связаны с активацией аденилатциклаз-ного или кальциевого сигнальных путей в клетках.

5. Простагландины группы Е в избранных концентрациях проявляют позитивный микрореологический эффект: улучшают текучесть суспензий эритроцитов и снижают их агрегацию; тогда как простагландин Ф2а дозо-зависимо повышает агрегацию эритроцитов и не оказывает существенного влияния на их деформируемость.

Апробация результатов работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на V Международной конференции «Гемореология в микро- и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); XX съезде физиологического общества им. Павлова (Москва, 2007); VI Международной конференции «Гемореология и микроциркуляция» (Ярославль, 2007); V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2007); 14-й конференции по клинической гемореологии (Дрезден, Германия, 2007); Всероссийской школе-семинаре «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2008, 2009); Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2008); IV Всероссийской с международным участием школе-конференции

по физиологии кровообращения (Москва, 2008); Международном конгрессе по Биореологии (Пенсильвания, США, 2008); IV Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиология и геморсология в сердечнососудистой хирургии» с международным участием (Москва, 2009); 15-й конференции по гемореологии (Сан-Мориц, Швейцария, 2009); на Европейской школе-конференции по Биореологии (Варна, Болгария, 2006, 2009).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав «Методы исследования», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение полученных результатов», выводов, приложения. Указатель литературы включает 53 отечественных и 195 иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 19 таблицами и 54 рисунками.

2. Организация, материал и методы исследования

2.1. Организация исследования

Для проведения исследований были сформированы три группы наблюдения. Первую группу составили 24 человека с сахарным диабетом 1 типа (мужчины, п=24, в возрасте 40,81±8,54). Вторую группу составили 26 человек с сахарным диабетом 2 типа (женщины, п=26, в возрасте 67,62±3,50). Группа здоровых лиц была обозначена как «Контроль», се составили лица обоего пола (п^59, 38,8±4,9 года). В предварительных опытах не было найдено различий реологических характеристик проб крови мужчин и женщин (различия менее а).

Для оценки срочного гемореологического ответа исследовали влияние однократной дозы лечебного препарата пентоксифиллина (400 мг), который назначался больным диабетом с терапевтической целью.

На эритроцитах лиц всех 3 групп было проведено in vitro исследование механизмов изменений микрореологических характеристик эритроцитов, включающее несколько серий опытов. В первой серии исследовалось влияние глюкозы в разных концентрациях на микрореологию клеток. Эритроциты делили на 4 аликвоты: первую инкубировали в физиологическом растворе без глюкозы, а другие три инкубировали в физиологическом растворе с глюкозой в концентрациях 1, 5 и 10 рМ. Во второй серии опытов исследовали влияние инсулина: эритроциты инкубировали в качестве контроля в физиологическом растворе без препарата и с инсулином в концентрациях 0,1 цМ, 0,01 цМ и 0,001 ¡iM.

В третьей серии опытов исследовали влияние катехоламинов и агонистов а- и Р-адренорецепторов на микрореологические свойства эритроцитов. Клетки инкубировали в физиологическом растворе без препарата, а остальные аликвоты инкубировали с адреналином в концентрациях от 1,0 до 0,01 цМ; фенилэфрином (агонистом а-1-адренорецепторов) в концентрациях от 1,0 до 0,01 рМ; клонидином (агонистом а-2-адренорецепторов) в концентрациях от 1,0 до 0,001 рМ; метапротерено-лом (агонистом Р-адренорецепторов) в концентрации 1,0 рМ. Для уточнения вероятных внутриклеточных сигнальных путей, связанных с физиологическими ответами клеток, в этой серии исследовали влияние со-четанного действия стабильного проникающего аналога циклического аденозин-3',5'-циклический монофосфата (дБ-цАМФ, 50 рМ) и клонидина на микрореологические свойства эритроцитов и сочетанного действия верапамила и фенилэфрина. Кроме того, оценивали изменения микрореологических характеристик эритроцитов под влиянием активации белков мастапараном-7 (10 рМ) и влияние активатора аденилатциклазы (АЦ) - форсколшта (10 рМ).

В четвертой серии опытов исследовали влияние простагланди-нов на агрегацию и деформируемость эритроцитов. Клетки были разделены на несколько аликвот: первую инкубировали в физиологическом растворе без препарата, 3 аликвоты инкубировали ПГФ2а(концентрациях от 1 иМ до 0,1 пМ), 3 аликвоты - с ПГЕ! (в концентрациях от 100 пМ до 0,01 пМ), дополнительно одну аликвоту инкубировали с простагландииом Е2 (1,0 пМ). Все суспензии эритроцитов инкубировали 15 минут при температуре 37°С. После этого производили регистрацию микрореологических характеристик.

2.2. Методы исследования

Кровь для анализа (в объеме 10 мл с гепарином в качестве антикоагулянта, 500 ЕД) брали из локтевой вены в асептических условиях клинической лаборатории опытным медперсоналом. Эритроциты отделяли от плазмы центрифугированием (10 минут, при 2750 об/мин), затем их трижды отмывали в изотоническом растворе МаС1, содержавшем глюкозу (5,0 мМ). Все измерения и манипуляции с цельной кровыо проводились в течение 4 часов после ее взятия при комнатной температуре (20,0±2,0°С).

Измерение вязкости крови, плазмы и суспензий эритроцитов

В эту группу методов включали измерение вязкости цельной крови, плазмы и суспензии эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия с гематокритом 40%. Их регистрацию проводили на полуавтоматическом капиллярном вискозиметре при шести величинах напряжс-

ниях сдвига: 0,2 Н-м"2; 0,4 Н-м"2; 0,8 Н-м"2; 1,2 Н-м"2; 1,6 Н-м"2 и 2,0 Н-м"2 (A.B. Муравьев и др., 2005).

Определение показателя гематокрита и гемогюбина

Определение показателя гематокрита (Hct) цельной крови и приготовленных суспензий эритроцитов проводили на специальной микро-гематокритной центрифуге (СМ-70, Латвия). Концентрацию гемоглобина крови (Hb) измеряли при помощи гемоглобинцианидного метода на биохимическом фотометре Микролаб-540. На основе регистрации общей концентрации гемоглобина крови и величины гематокрита (Hct) рассчитывали среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС). На основе измерения вязкости крови и гематокрита рассчитывали эффективность доставки кислорода к тканям (Т02) по формуле: T02=Hct/r]Ki (J. Stoltz et al., 1991).

Определение биохимических показателей крови

Концентрацию общего белка (биуретовым методом), триглице-ридов (энзиматическим колориметрическим методом), глюкозы (глюко-зооксидазным методом), альбумина (по реакции с бромкрезоловым зелёным) в плазме определяли на биохимическом фотометре Микролаб-540, используя реагенты фирм «Внтал-Европа» и «Агат».

Регистрация деформируемости эритроцитов

Для оценки деформируемости эритроцитов (ДЭ):

1) Измеряли вязкость суспензий г|с с Hct=40% при напряжении сдвига 2,0 Н-м"". Рассчитывали индекс ригидности эритроцитов (Tk, L. Dintenfass, 1981).

2) Определяли индекс удлинения эритроцитов (ИУЭ) в проточной микрокамере по методу, разработанному в нашей лаборатории (A.B. Муравьев и др., 2008). Для этого измеряли длину и ширину деформированных клеток (около 100) и рассчитывали индекс удлинения эритроцитов, как показатель их деформации: ИУЭ = (L~W)/(L+W),

где L - длина деформированной клетки, W - ее ширина.

Peeucmpaiim агрегации эритроцитов

Агрегацию эритроцитов (АЭ) определяли методом оптической микроскопии с последующей видеорегистрацией и компьютерным анализом изображения (И.А. Тихомирова, 2006). Это позволяло рассчитать показатель агрегации (ПА), а также число клеток, приходящихся на один агрегат (Ч/А). Интегральный индекс агрегации (ИИА) рассчитывали как произведение ПА на Ч/А.

Статистическая обработка результатов

Статистическую обработку полученных цифровых материалов и все виды анализа результатов, включая корреляционный, проводили на PC IBM, используя табличный редактор Microsoft Excel и программу «Statistica» (версия 6.0). Проверку выборочного распределения на нормальность проводили с помощью геста Шапиро-Уилка. Если выборка подчинялась закону нормального распределения, достоверность различий в исследуемых группах определяли с помощью t-критерия Стьюдента. Поскольку параметры не всегда соответствовали критерию нормального распределения, то в ряде случаев оценку статистической значимости различий в группах наблюдения проводили с использованием пепараметри-ческих критериев Манна-Уитни, Вилкоксона. За уровень статистически значимых принимали изменения при р<0,05 и р<0,01. В таблицах приведены средние (М) и стандартные отклонения (о).

3. Результаты исследования и их обсуждение

3.1. Изменение гемореологического профиля у лиц с

метаболическими расстройствами Разница в 25 и 34% вязкости крови у лиц 1 и 2 групп по сравнению с контролем была обусловлена главным образом высокой вязкостью плазмы (г1р) (табл. 1).

Таблица 1. Макрореологические характеристики у здоровых лиц и при нарушениях метаболизма (М±а)

Показатели Контроль (п~58) Группа 1 (п=24) Группа 2 (п=26)

T|i, мПа.с 5,51±0,68 6,91i0,46* 7,41±1,60*

г]2, мПа.с 13,74±4,21 18,43±5,77* 18,74±4,58*

г)р, мПа.с 1,87±0,13 2,44±0,16* 2,45±0,23*

Hct, % 44,22±3,35 42,62±4,84 44,15±2,54

Hb, г/л 147,2±16,9 133,8±25,76 140,45± 11,44

Hct/ri, 8,84±0,84 6,16±0,45* 6,21±0,30*

Обозначения: т^ - вязкость цельной крови при высокой скорости сдвига (2,0 Н-м"2); Г|2 - вязкость цельной крови на низкой скорости сдвига (0,2 Н-м"2); г|р- вязкость плазмы; Нс^т!,- показатель эффективности транспорта; *- различия достоверны при Р<0,05 по Ькритерию Стьюдента; различия достоверны при Р<0,05 по непараметрическим критериям.

На это указывала положительная корреляция этих двух характеристик (г=0,748; р<0,05). Тогда как с Hct вязкость коррелировала с коэффициентом, равным всего 0,344. Это свидетельствует о доминирующей роли г)р в изменениях вязкости крови. Расчеты показали, что на ее долю может приходиться 56% вклада в изменение текучести крови, тогда как на Hct только 12%. Остальные 32% - это вклад микрореологических характеристик эритроцитов. Имеются свидетельства того, что увеличение t|p у лиц с метаболическими расстройствами может отрицательно сказываться на кровообращении в целом (В.А. Галенок и др., 1987; M.R. Boisseau, 2001; С. Le Devehat et al., 2001). Отношение Hct/ïii как индекс эффективности транспорта кислорода у лиц с метаболическими нарушениями в обеих группах наблюдений было примерно на 30% (р<0,05) ниже, чем в норме.

В целом можно заключить, что гемореологические изменения относительно контроля у лиц групп 1 и 2 были практически одинаковы за исключением несколько большей АЭ в группе 2 (рис. 1). Одной из причин значительного прироста агрегации мог быть высокий уровень глюкозы в крови у лиц с метаболическими расстройствами (S. Shin, 2008).

Рис. 1. Гемореологические профили лиц с метаболическими расстройствами первой и второй групп относительно контроля (нулевая, линия на графике)

Обозначения: 1 - вязкость крови при высокой скорости сдвига: 2 -вязкость крови при низкой скорости сдвига; 3 - вязкость плазмы; 4 -вязкость суспензии эритроцитов с Нй=40%; 5 - показатель гематокри-та; 6 - индекс деформируемости эритроцитов; 7 - белок плазмы; 8 -агрегация эритроцитов; 9 - Нс1/т],

Была найдена корреляция между ПА и концентрацией глюкозы в плазме (г- 0,776; р<0,01; рис. 2).

£ ° у = 5,6597х + 3,7959 \

2" R2 =0,5972

1 ■.

О 0,1 0.2 0,3 0.4 0,5 0,6

. Агрегация, отн. ед.

Рис. 2. Корреляция агрегации эритроцитов с концентрацией глюкозы в плазме крови лиц с метаболическими расстройствами

Механизм изменения АЭ при высокой концентрации глюкозы мог быть связан с выраженными отклонениями формы клеток от нормы (N. Babu, М. Singh, 2004). Известно, что нарушения формы клеток сочетаются не только с изменениями их деформируемости (R. Rand., А. Burton, 1964), но и агрегации (Р. Whittingstall et al, 1994).

3.2. Влияние однократной лечебной дозы пентоксифиллина на микрореологические свойства эритроцутов

Оценка однократной лечебной дозы пентоксифиллина (400 мг) у лиц с метаболическими расстройствами показала, что агрегация эритроцитов существенно снижается, а деформируемость повышается под влиянием препарата на 19 и 40% (р<0,05), соответственно. Механизм его действия, вероятно, связан с ингибированием активности фосфодиэстераз (ФДЭ) в эритроцитах (В. Horvath et al., 2008). Данные о позитивном влиянии однократного введения препарата мотивируют исследование роли внеклеточных сигнальных путей в микрореологических перестройках эритроцитов.

3.3. Микрореологические свойства эритроцитов при их инкубации с глюкозой

Добавление в среду инкубации глюкозы (1 мМ) привело к снижению пс на 6% (с 4,38±0,15 до 4,12+0,06 мПа-с). Несколько большие изменения вязкости были при 10 мМ глюкозы, где снижение г|с составило 9% (р<0,05) (с 4,38+0,15 до 4,02±0,123 мПа-с). Что касается АЭ, то она более заметно изменялась после инкубации клеток с глюкозой (рис. 3).

NaO, 0,9 1 мМ 5 мМ 10 мМ Глюкоза

Рис. 3. Изменение показателя агрегации (ПА) при инкубации эритроцитов контрольной группы с глюкозой в разных концентрациях

При этом наибольшее изменение (снижение на 40%) наблюдали при инкубации клеток в среде с 5 мМ глюкозы. АЭ уменьшилась с 0,03010,011 до 0,018+0,009 отн. ед. (р<0,05).

3.4. Влияние инсулина на микрореологические показатели эритроцитов

Инсулин в концентрации 0,01 цМ снизил г\с на 12% (р<0,05) и увеличил ИУЭ на 19% у лиц контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2. Изменение микрореологических свойств эритроцитов под влиянием инсулина у здоровых лиц (М±а, п=26)_

Показатели Котроль Инсулин (0,01 цМ)

мПа.с 3,54±0,27 3,10±0,32*

ИУЭ, отн. ед. 0,196±0,014 0,233±0,013*

ПА, отн. ед. 0,027±0,012 0,025±0,017

Обозначения: Г|с - вязкость суспензии эритроцитов;

ПА - показатель агрегации; ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов;

* различия достоверны при р<0,05

В группе здоровых лиц АЭ под влиянием инсулина уменьшалась в среднем на 7%, тогда как у лиц с метаболическими расстройствами снижение было более значительно: в группе 1 - на 45%, а в группе 2 - на 17% (рис. 4).

Контроль Группа 1 Группа 2

-50 -

Рис. 4. Снижение агрегации эритроцитов под влиянием инсулина (0,01 цМ) в трех сравниваемых группах

Текучесть суспензии эритроцитов существенно не изменилась в группе контроля (+5%) и достоверно повысилась у лиц группы 1 на 20%, а в группе 2 - на 14% (рис. 5).

25 "

Контроль Группа 1 Группа 2

Рис. 5. Повышение текучести суспензии эритроцитов под влиянием инсулина (0,01 цМ) в трех сравниваемых группах

Один из механизмов влияния инсулина на микрореологические свойства эритроцитов и в первую очередь на их ДЭ может быть связан с его способностью активировать протеинкиназу С (ПКС-зета), имеющуюся в человеческих эритроцитах (G. Ceolotto, 1999; M. Sauvage et al., 2000). Стимулирование активности последней при помощи форболового эфира приводило к приросту ДЭ (S. de Oliveira et al., 2008). Сигнальный путь, который может быть реализован при действии на эритроциты инсулина, включает активацию ПКС и фосфорилирование мембранных белков: по-

лосы 3, полосы 4.1 и полосы 4.9. Это сопровождалось повышением пластичности клеток (Б. Маппо е! а1., 2005; XV. Шпотига, У. Такакигуа, 2006).

Инсулин оказывал дозозависимое влияние на микрореологическое поведение эритроцитов. Снижение агрегации составило при трех избранных концентрациях инсулина соответственно 10%, 34% и 54% (р<0,05). Эту зависимость можно вполне удовлетворительно представить графически в обратных координатах Скетчарда (рис. 6).

у = 0,245ех+ 7,1073 R* s 0,6206

-50 -40 , ' ' -30 -20 -10 0 10 20

-4 -

1/концентрация инсулина

Рис. 6. Снижение агрегации эритроцитов при уменьшении концентрации инсулина в среде инкубации клеток (представление данных в обратных координатах Скетчарда)

Таким образом, получены убедительные данные, свидетельствующие о том, что инсулин положительно влияет на микрореологические свойства эритроцитов - снижает АЭ и повышает ДЭ. Это влияние носит дозозависимый характер и проявляется в том, что при уменьшении концентрации гормона в среде инкубации клеток эффект становится более выраженным.

3.5. Изменение микрореологических свойств эритроцитов при их

инкубации с адреналином и агонистами о- и fl-адренорецепторов

При инкубации эритроцитов с адреналином в концентрации 1,0 ¡дМ наблюдали умеренное увеличение ДЭ. На это указывал прирост ИУЭ на 10%, с 0,198±0,021 до 0,218±0,018 отн. ед. Это позитивное влияние адреналина на текучесть эритроцитов подтверждалось и снижением т]с с 3,50±0,018 мПа-с до 3,11±0,016 мПа-с. Разница составила 11% и была достоверной (р<0,05). Зависимость изменения г|с от концентрации адреналина имеет вид: у=ах+в. При этом экспериментальные точки совпадали с математической моделью с вероятностью, которая превышала 98%. Что

касается агрегации, то, напротив, адреналин вызывал дозозависимое ее повышение. Причем уменьшение концентрации препарата приводило к приросту агрегации. Важно заметить, что при концентрации адреналина в среде инкубации, равной 0,01 рМ, агрегация на 54% (р<0,01) превышала таковую контроля (табл. 4).

Таблица 4. Изменения микрореологических показателей эритроцитов здоровых лиц после инкубации суспензий с адреналином в разных концентрациях (М+с>, п=18)

Показатели Контроль (без адреналина) Адреналин 1,0 рМ Адреналин 0,10 рМ Адреналин 0,01 рМ

ПА, отн. ед. 0,157±0,042 0,200+0,046 0,203+0,056* 0,241+0,052**

Лс, хмПа.с 3,85+0,016 3,42±0,014* 3,39±0,018* 3,34+0,012*

Обозначения: ПА - показатель агрегации; т|с - вязкость суспензии эритроцитов при высокой скорости сдвига; *- различия достоверны при р<0,05; **- различия достоверны при р<0,01

Агонист а-1-рецепторов фенилэфрин (Дж. Теппермен, X. 'Геп-пермен, 1987) в концентрации 1,0 рМ проявил выраженный проагрегаци-онный эффект, однако мало повлиял на ДЭ. В целом агрегация возросла после инкубации с препаратом почти в два раза. А-1-адренорецептор связан с Са2+-сигнальным путем (8. Отшагаем, Э. Моига, 2001). При его стимуляции происходит усиление входа кальция в клетку (Р. Веппекои, 1993). Вероятно, повышение АЭ под влиянием фенилэфрина было связано именно с активацией кальциевого механизма регуляции. Для проверки этого предположения клетки предварительно инкубировали с блокатором кальциевых каналов веранамилом (10 рМ). Последующее воздействие фенилэфрина на фоне блокады Са2+ каналов не изменяло АЭ (при инкубации клеток только с фенилэфрином отмечен 50%-ный прирост агрегации, а в комбинации с верапамилом - только 12%). Существенное влияние фенилэфрина только на прирост АЭ при отсутствии значимых изменений деформируемости клеток, вероятно, связано с их большей чувствительностью к Са2+ при реализации агрегационного ответа. Тогда как для заметного изменения ДЭ необходимы достаточно высокие концентрации Са2+ в клетке, превышающие 100 рМ, которые вероятно не достигаются при стимулировании а-1-адренорецепторов (У. Такаки\уа а!., 1990; Т. ОошбЫ е! а!., 1997).

Стрессовые гормоны адреналин и норадреналин могут также действовать на клетки путем активации a-2-адренорецепторов (S.B. Liggett et al., 1988; М. Galinier et al., 1994). При инкубировании эритроцитов с ююнидином - агонистом a-2-адренорецепторов (Т. Young et al., 2006) хотя и наблюдали умеренное повышение ДЭ, однако прирост на 8% Т|с не был статистически достоверным. Тогда как агрегацию этот препарат повышал почти на 160%. A-2-адренорецептор связан с аденилатциклазой (АЦ) при помощи ингибирующего ее G i-белка. Его активация ведет к снижению концентрации циклического АМФ (G. Fuller, D. Shields, 2000) в клетке. Напротив, увеличение концентрации цАМФ сочетается с позитивными микрореологическими сдвигами (A.V. Muravyov et al., 2007). При стимулировании активности Gi- белка при помощи его специфического активатора мастапарана-7 (R. Sprague et al., 2005) не наблюдали достоверного изменения ДЭ, вместе с тем АЭ возросла на 24% (р<0,05). С другой стороны, введение в среду инкубации эритроцитов стабильного проникающего аналога цАМФ привело к приросту деформируемости на 24% (р<0,05) и уменьшило агрегацию

200

180 -160 -

5? 140 -!

S? 120 :

s 1 оо ;

| 80 :

- 60 -40 -20 -0 -

Рис. 7. Изменение агрегации (в % к контролю) под влиянием проникающего аналога ц-АМФ, клонидина и их сочетания в группе здоровых лиц

Обозначения: К - клонидин; дБ-цАМФ - проникающий аналог цАМФ, дБ-цАМФ+К - сочетанное воздействие проникающего аналога цАМФ и клонидина

Если предварительно клетки инкубировать с дБ-цАМФ, а затем добавить клонидин, то его выраженный проагрегационный эффект значительно ослаблялся (рис. 7). Имеющийся дозозависимый проагрегационный эффект клонидина был представлен в обратных координатах Скетчарда

координатах Скетчарда (рис. 8). При этом достоверность такой презентации оказалась весьма высокой и составила 99%.

- 1/концентрация клонидина

Рис. 8. Повышение агрегации эритроцитов при уменьшении концентрации клонидина в среде инкубации клеток (представление данных в обратных координатах Скетчарда)

Хотя на эритроцитах имеются оба подтипа ß-адрепорецепторов (J.F. Horga et al., 2000), однако их плотность распределения на мембранах клеток неодинакова. Соотношение числа ß-Hß-2 рецепторов представляет как 33/66 (F. Bree et al., 1984). С учетом этого соотношения был использован метапротеренол - агонист ß-адренорецепторов с преимущественным влиянием на ß-2 подтип. При инкубации эритроцитов с этим препаратом агрегация снизилась, однако изменения не были статистически достоверными, тогда как деформируемость достоверно повышалась. Прирост ИУЭ достиг 29% (р<0,01). Активация ß-адренорецепторов стимулирует АЦ и повышает уровень цАМФ в клетке (S.A. Morris, J.P. Bilezikian, 1983). При этом стимулирование протеинкиназы А (ПКА) может быть ответственно за повышение пластичности эритроцитов. Было показано, что ПКА фосфорилирует белок полосы 4.1 мембраны эритроцита и спектрин - основной элемент цитоскелета клетки (Е. Ling et al., 1988; S. Manno et al., 1995). Это сопровождается распадом «тройного комплекса» белков мембраны и ведет к повышению ее пластичности и деформируемости клетки в целом (W. Nunomura, Y. Takakuvva, 2006). Если сравнить изменение деформируемости эритроцитов под влиянием ме-тапротеренола и специфического стимулятора АЦ - форсколина (10 цМ), то можно наблюдать сходные изменения микрореологических показателей (рис. 9). Микрореологические эффекты адреналина отличались от таковых инсулина. Поскольку последний выражено снижал агрегацию,

у = -0,0643х + 2,6211 2 R2 = 0,9979

1,5 : 1 -

0,5 -

_os 0 10 20 30 40 *ч.50

адреналин ее повышал. На деформируемость эритроцитов оба метаболических гормона оказывали сходное влияние.

Рис. 9. Изменение индекса удлинения эритроцитов (ИУЭ) при инкубации эритроцитов со стимулятором аденилатциклазы форсколином и метанротереиолом (группа здоровых лц)

Ответные микрореологические реакции эритроцитов на действие аго-нистов разных подтипов а- и Р-адренорецепторов в определенной мере объясняют влияние адреналина, который может активировать как а-, так и Р-адренорецепторы. Эти факты свидетельствуют о том, что гормональная регуляция микрореологических свойств эритроцитов довольно гибкая. Она позволяет адаптировать микрореологическое поведение и транспортные возможности эритроцитов под текущие метаболические нужды клеток, тканей и органов организма.

3.7. Влияние простагландинов на микрореологические свойства эритроцитов

Паракринные сигнальные молекулы оказывают заметное влияние на микрореологические свойства эритроцитов. 'Гак при инкубации с про-стагландином Ег (ПГЕО наблюдали снижение АЭ на 48% и достоверное повышение ДЭ на 14%. По направленности изменений и их величине действие ПГЕ1 было сходным с форсколином и проникающим аналогом цАМФ. Это не случайно, поскольку ПГЕ| является стимулятором АЦ (К.Б. Брга§ие й а!., 2002) и способствует повышению ДЭ (О. Б1аг2ук е! а)., 1999; в. СшГ1"еШ е1 а1., 2003). Снижение АЭ под влиянием их инкубации с ПГЕ1 носило дозозависимый характер. При инкубации эритроцитов с другим представителем семейства простагландинов Е - ИГЕ? (1,0 пМ)

хотя и были выявлены сходные изменения агрегации и деформируемости, однако они не достигли уровня статистически значимых (рис. 10).

■ Контроль ОПГЕ1 ОПГЕ2

ПА ВС

Рис. 10. Изменение микрореологических свойств эритроцитов здоровых лиц под влиянием их инкубации с простагландинами Ei и Е2 (1,0 пМ) Обозначения: I1A - показатель агрегации; ВС - вязкость суспензии эритроцитов; ПГЕ! - нросгагландин Еь ПГЕ2 - простагландин Е2

Простагландин из другой группы - группы Ф (ПГФ2а) проявил сильный проагрегационный эффект. Было найдено повышение АЭ на 107% (р<0,01). Прирост АЭ можно объяснить стимуляцией входа Са2+ в эритроциты при их инкубации с ПГ'Ф2а (J.G. Pitter et al., 2005). Ha это указывалось в ряде работ (И.А. Тихомирова и др., 2002; А.В. Муравьев и др., 2005; W. Nunomura, Y. Takakuwa, 2006). С другой стороны, блокирование входа Са2+ в клетку или связывание его в среде инкубации снижает АЭ (М.В. Замышляева, 2008; А.В. Муравьев и др., 2009). Необходимо заметить, что ПГФ2а повышал агрегацию дозозависимым образом. При уменьшении концентрации от 1,0 цМ до 0,1 пМ отмечалось повышение АЭ. Процесс прироста агрегации со снижением концентрации ПГФ2а удовлетворительно описывался уравнением линейной регрессии вида: у=ах+Ь, при достоверности аппроксимации экспериментальных данных этой математической моделью, равной 84%.

Если сравнить влияние трех простагландинов на микрореологические свойства эритроцитов, то обращает на себя внимание тот факт, что препараты группы Е имели противоположный микрореологический эффект по сравнению с представителем группы Ф (рис. 11).

■ Контроль □ ПГЕ1

ИПГЕ2

Ш ПГФ2а

0 -

ПА

ВС

Рис. 11. Изменение показателя агрегации эритроцитов и вязкости их суспензий под влиянием простагландинов групп Е и Ф (группа здоровых лц)

Обозначения: ПА - показатель агрегации; ВС - вязкость суспензии эритроцитов, ПГЕ1 - простагландин Еъ ПГЕ2 - простагландин Е2; ПГФ2а - простагландин Ф2а

Заключение

При метаболических расстройствах, связанных с диабетом I и II типов наблюдаются изменения параметров гемореологического профиля по сравнению с данными здоровых лиц. При этом негативные сдвиги касались всего изученного комхшекса реологических характеристик крови. Наибольшие изменения были отмечены в показателях микрореологии эритроцитов. Разница между данными группы контроля и групп с метаболическими нарушениями для микрореологических параметров была равной в среднем 50%, тогда как изменение макрореологических характеристик - 26% на один показатель.

Показана возможность срочной коррекции негативно измененных микрореолопгческих свойств эритроцитов при однократном приеме препарата, обладающего гемореологической эффективностью. В качестве такого препарата был использован пентоксифиллин. Было получено достоверное снижение агрегации эритроцитов, прирост их текучести и деформируемости. Это мотивировало более детальное изучение влияния на микрореологические свойства эритроцитов внеклеточных сигнальных молекул - гормонов и простагландинов, участвующих в срочной регуляции метаболизма в организме. Было показано, что для нормализации микрореологических свойств эритроцитов, особенно агрегации, необхо-

дима оптимальная концентрация глюкозы в среде инкубации клеток, которая составляет 4-5 мМ. Инсулин снижал агрегацию эритроцитов и в большей степени этот эффект проявлялся у лиц с метаболическими расстройствами, особенно с диабетом первого типа. Прирост деформируемости эритроцитов был тоже в большей степени у этих лиц.

Адреналин сходным образом влиял на деформируемость эритроцитов, но, по сравнению с инсулином, противоположно на их агрегацию, которая повышалась дозозависимым образом. Прирост АЭ при действии адреналина, вероятно, связан с его действием на а-адренорецепторы. На это указывали данные, полученные при инкубации эритроцитов с а-1 и а-2-агонистами - фенилэфрином и клонидином. Через р-адренорецепторы возможно влияние катехоламинов на ДЭ. Их стимуляция при помощи метапротеренола достоверно повышала деформируемость. Паракринные регуляторные вещества - простагландины тоже могут оказывать влияние на микрореологические свойства эритроцитов. Так простагландины группы Е - Г1ГЕ) и ПГЕ2 заметно улучшали микрореологию эритроцитов, тогда как представитель другого семейства ПГФ2н, напротив, выраженно стимулировал агрегацию эритроцитов, но слабо влиял на их деформируемость.

Таким образом, проведенное исследование ясно демонстрирует участие гормонов и простагландинов в регуляции микрореологических свойств эритроцитов, а посредством этого и регуляторное влияние на текучесть цельной крови и ее транспортный потенциал.

Выводы

1. В физиологических условиях текучесть крови и ее транспортный потенциал достоверно выше, чем при метаболических расстройствах, связанных с диабетом первого и второго типов. Из-за высокой вязкости цельной крови и плазмы эффективность транспортной функции крови при метаболических нарушениях была на 28-30% ниже, чем в нормальных физиологических условиях.

2. Деформируемость эритроцитов была существенно выше у здоровых лиц по сравнению с данными групп с метаболическими нарушениями. Различия в среднем составили 22%. Метаболические расстройства при диабете сочетались с выраженным приростом агрегации эритроцитов по сравнению с физиологической нормой. Несколько большие изменения агрегации были у лиц с диабетом первого типа. Различия с данными здоровых лиц в среднем составили 78%, а при диабете второго типа - 63%.

3. Инкубация эритроцитов с глюкозой в разных концентрациях позволила выявить дозозависимое изменение агрегации эритроцитов. При этом наи-

больший снижающий агрегацию эффект был при физиологической концентрации, равной 5 мМ, где уменьшение агрегации составило 40%.

4. Инсулин в избранных концентрациях снижал агрегацию эритроцитов и повышал их деформируемость. Выявлен дозозависимый эффект этого гормона. Наибольшие изменения агрегации (ее снижение на 45%) под влиянием инкубации с инсулином были у лиц с инсулинозависимым диабетом, а деформируемость в большей степени повышалась у лиц инсу-линнезависимым диабетом (на 20%).

5. Адреналин умеренно повышал деформируемость эритроцитов и выра-женно дозозависимо влиял на агрегацию. Агонисты а-1 и а-2-адренорецепторов фенилэфрин и клонидин в концентрации 1,0 цМ стимулировали агрегацию эритроцитов, но существенно не изменяли их деформируемость. Метапротеренол - агонист ß-адренорецепторов не влиял достоверно на агрегацию эритроцитов в избранной концентрации 1,0 рМ, но заметно повышал их деформируемость.

6. Поскольку преинкубация эритроцитов с блокатором кальциевых каналов верапамилом устраняла проагрегационный эффект фенилэфрина, то один из механизмов изменения агрегации под влиянием катехоламинов, вероятно, связан с входом Са2+ в клетку.

7. Положительное влияние адреналина и особенно ß-агониста (метапро-терснола) на деформируемость эритроцитов, а также ее повышение при действии проникающего аналога цАМФ и прямого стимулятора адени-латциклазы (форсколина) указывают на то, что внутриклеточный механизм влияния катехоламинов на это микрореологическое свойство эритроцитов связан с аденилатциклазной сигнальной системой.

8. Простагландиньг группы Е, особенно ПГЕЬ позитивно влияли на микрореологические свойства эритроцитов, тогда как простагландин Ф2а существенно дозозависимо стимулировал агрегацию эритроцитов, но не оказал заметного влияния на их деформируемость.

Список работ, опубликованных но теме диссертации I. В рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Замышляев A.B. Анализ действия гормонов и их синтетических аналогов на микрореологические свойства эритроцитов // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2007. - Т. 6. - № 2(22). - С. 18- 23.

2. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Тихомирова И.А., Петрочеико Е.П. Изменение микрореологических свойств эритроци-

тов с возрастом: роль Са2+ // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2007. - № 4(22). - С. 34-41.

Bulaeva S.V., Maimistova А.А., Muravyov A.V., Chuchkanov F.A. Hemorheological efficiency of drugs, targeting on intracellular phosphodiesterase activity: in vitro study // Clinical Hemorheol. and Microcirculation. - 2007. - Vol. 36. - № 4. - P. 327- 334. Bulaeva S.V., Muravyov A.V., Maimistova A.A. and Tikhomirova I.A. Cross-talk between adenylyl cyclase signaling pathway and Ca2+ regulatory mechanism under red cell microrheological changes // Clinical Hemorheology and Microcirculation. - 2009. - Vol. 42. - № 3. - P. 199. Bulaeva S.V., Maimistova A.A., Muravyov A.V. and Viktorova E.A. Endo- and paracrine signaling pathways under red cell microrheological changes // Biorheology. - 2008. - Vol. 45. - № 1/2. - P. 118.

II. В других журналах

6. Булаева С.В., Маймистова А.А., Муравьёв А.В., Тихомирова И.А., Ройтман Е.В. Роль гормонов и простагландинов в изменениях микрореологических свойств эритроцитов человека /7 Тромбоз, гемостаз и реология. - 2007. - № 4. - С. 47-52.

7. Булаева С.В., Муравьев А.В., Замышляев А.В., Чучканов Ф.А., Маймистова А.А., Стельмах АЛО. Гемореологические показатели и пере-кисное окисление липидов при лечении Тренталом у пациентов с церебральным атеросклерозом // Клиническая фармакология и терапия. -2009.-№ 5.-С. 38.

8. Булаева С.В., Муравьев А.В., Замышляев А.В., Чучканов Ф.А., Тихомирова И.А., Маймистова А.А Изменение гемореологического профиля у больных диабетом 1 и 2 типа II Клиническая фармакология и терапия. -2009,-№2.-С. 87.

9. Булаева С.В., Муравьев А.В., Тихомирова И.А., Маймистова А.А., Михайлов П.В., Круглова Е.В. Анализ основных факторов связанных с механизмами деформируемости эритроцитов // Ярославский педагогический вестник, серия «Естественные науки». - 2009. - № 1(1). -С. 93-97.

10. Булаева С.В., Муравьев А.В., Маймистова А.А., Кошелев В.Б., Шумейко Л.В. Микрореология эритроцитов: роль протеинкиназ в ее изменениях // Тромбоз. Гемостаз. Реология. - 2009. - № 3. - С.28.

И. Булаева С.В., Муравьев А.В., Маймистова А.А., Михайлов П.В., Муравьев А.А. Математическое моделирование изменения микрореологических свойств эритроцитов // Ярославский педагогический вестник. Серия «Естественные науки». - 2009. - № 1(1). - С. 88-93.

III. В тезисах докладов конгрессов, съездов и конференций

12. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Викторова Е.А., За-мышляев A.B. Изменение микрореологических свойств эритроцитов под влиянием адреналина // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)». - Ярославль, 2007. - С. 143.

13. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Викторова Е.А., Чуч-канов Ф.А. Эндо - и паракринные сигнальные пути при изменении микрореологических свойств эритроцитов // Мат. международн. конф. «Еемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)». - Ярославль, 2007. - С. 144.

14. Булаева C.B., Маймистова A.A., Зубова Н.В., Замышляев A.B., Чуч-канов Ф.А. Микрореологический эффект ингибирования фосфодиэ-стераз и блокирования Са2+-каналов эритроцитов у больных сахарным диабетом 2 типа и атеросклерозом // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)». - Ярославль, 2007. - С. 147.

15. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Викторова Е.А., Волков Ю.Н. Анализ механизмов изменения микрореологических свойств эритроцитов: in vitro исследование // Тез. Докл. V Всеросс. Конф. «Механизмы функционирования висцеральных систем». -Санкт-Петербург. - 2007. - С. 213-214.

16. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьёв A.B., Чучканов Ф.А., Шинкаренко B.C. Роль фосфодиэстераз в изменении деформируемости эритроцитов // Мат. XX Съезда ф из иол. Общества им. И.П. Павлова. - М., 2007,- С. 163

17. Булаева C.B., Маймистова A.A., Тихомирова И.А., Муравьев A.B., Викторова Е.А., Кислов П.В., Волкова E.J1. Сравнительный анализ роли Са2+ и циклического АМФ в изменениях деформируемости эритроцитов // Механизмы функционирования висцеральных систем. -СПБ, 2008.-С. 122-123.

18. Булаева C.B., Маймистова A.A. Роль микрореологических свойств эритроцитов в обеспечении транспорта фармакологических препаратов кровью // Тез. Докл. Всероссийской школы-семинара «Нанобио-технологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 9-11 декабря 2008 года). - Белгород: ИГ1Ц «ПОЛИТЕРРА», 2008. - С. 15-16.

19. Булаева C.B. Сравнительный анализ изменений микрореологических свойств эритроцитов под влиянием адреналина и инсулина у больных

сахарным диабетом: in vitro исследование // Тез. докл. 4-й Всероссийской с международным участием школы-конф. по физиол. кровообращения. - М., 2008. - С. 20-21.

20. Булаева С.В, Маймистова A.A., Муравьев A.B.. Роль тирозиновых протеинкиназ, фосфатаз и аденилатциклазной системы в изменениях деформируемости эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемо-реология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)». - Ярославль, 2009. - С. 54.

21. Булаева С.В, Маймистова A.A., Муравьев A.B.. Анализ участия про-теинкиназы С и Ca 2т в изменениях микрореологических свойств эритроцитов // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)». - Ярославль, 2009.-С. 55.

22. Булаева C.B., Маймистова A.A., Муравьев A.B., Чепоров C.B., Кислое Н.В., Волкова E.JI. Агрегация и деформируемость эритроцитов: существует ли взаимосвязь? // Мат. международн. конф. «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)». - Ярославль, 2009. - С. 58.

23. Bulaeva S.V., Maymistova A.A., Muravyov A.V. Erythrocyte deformability changes under activation of Ca2+ and protein kinase signal transduction pathways // Book of abstracts 3rd Eurosummer school on Biorheology. - Sofia. - 2009. - P. 48.

24. Булаева C.B., Маймистова A.A., Вдовин В.А. Разработка способов повышения эффективности транспорта лекарственных препаратов кровью за счет позитивного изменения микрореологических свойств эритроцитов // Мат. I Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях». - Москва, 2009. - С. 367.

Список сокращений:

Г|Р - вязкость плазмы

ВС - вязкость суспензии эритроцитов

МСНС - среднее содержание гемоглобина в эритроците

Тк - индекс ригидности эритроцитов

Hct - гематокрит

НЬ - гемоглобин

Hct/r|K| - индекс эффективности транспорта кислорода в ткани

ПА - показатель агрегации

Ч/А - средний размер агрегата

ИИА - интегральный индекс агрегации

Т)с - вязкость суспензии эритроцитов при высокой скорости сдвига

r|Ki - вязкость цельной крови при высокой скорости сдвига (1,96 Н-м'2)

Рй - вязкость цельной крови при низкой скорости сдвига (0,96 Н-м"2)

ДЭ - деформируемость эритроцитов

ИУЭ - индекс удлинения эритроцитов

АЭ - агрегация эритроцитов

Лк2 /ты - показатель неньютоновости крови

ФДЭ - фосфодиэстераза

ПКА - протеинкиназа А

Г1КС - протеинкиназа С

АЦ - аденилатциклаза

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

дБ-цАМФ - стабильный проникающий аналог цАМФ

ТПК - тирозиновая протеинкиназа

Формат 60x91/16. Усл. печ. л. 1.2. Тираж 100 экз. Заказ №00% ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет имени К.Д. Ушинского» 150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, д. 108

Типография ЯГПУ 1500006 Ярославль, Которосльная наб., 46 Тел.: (4852) 32-98-69, 72-64-03

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Булаева, Светлана Владимировна

Введение

Глава 1 Обзор литературы.

1. 1 Анализ роли реологических свойств крови в обеспечении ее транспортной функции.

1. 2 Влияние вязкости плазмы на текучесть цельной крови в норме и при метаболических расстройствах.

1. 3 Гематокрит как реологическая характеристика крови

1. 4 Агрегация эритроцитов и ее механизмы.

1. 5 Деформируемость эритроцитов и текучесть крови-••

1. 6 Клеточные и молекулярные механизмы изменений микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях.

Глава 2 Организация, материалы и методы исследования.

2.1 Описание объекта исследований (группы).

2. 2 Методы регистрации реологических свойств крови

2. 3 Биохимические и гематологические методы исследования.

2.4 Статистическая обработка результатов.

Глава 3 Результаты исследования параметров гемореологического профиля при метаболических нарушениях-••

3. 1 Анализ основных макрореологических характеристик, ассоциированных с метаболическими изменениями в организме.

3.2 Влияние однократного действия реологически активного препарата пентоксифиллина (Трентал) на микрореологические свойства эритроцитов.

Глава 4 Анализ влияния метаболических гормонов и простагландинов на микрореологические свойства эритроцитов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль эндокринных и паракринных механизмов в изменении микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях"

Процессы обмена веществ в организме или метаболизм связаны с обязательным транспортом кислорода и субстратов окисления в тканевые микрорайоны и последующим удалением из них продуктов белкового, жирового и углеводного обмена, жидкости и С02. Это достигается скоординированной деятельностью разных систем организма, в том числе и системой крови (Р. Эккерт и др., 1991). Основная функция крови - способность к течению или текучесть (В. А. Левтов и др., 1982; Е. W. Merrill et al., 1968). Это величина являтся обратной вязкости крови (L. Dintenfass, 1981). Она зависит от определяющих ее факторов, таких как вязкость плазмы, концентрация клеток (ге-матокрит), агрегация и деформация эритроцитов (В. А. Галенок и др., 1987; А. В. Муравьев, 1993; S. Forconi, М. Guerrini, 1996). В разных условиях как в норме, так и при патологии изменения текучести крови и ее транспортного потенциала связывают, в основном, с количественными перестройками вышеуказанных факторов (Н. Н. Фирсов, П. X. Джанашия, 2008; L. Dintenfass, 1986; J. F. Stoltz et al., 1991; О. K. Baskurt et al., 2007). Вместе с тем имеется ряд работ, в которых приводятся факты, свидетельствующие об изменениях микрореологических свойств клеток крови и в том числе эритроцитов при действии на них биологических регуляторов (P. Boivin 1984; N. Mohandas, 1992; L. L. Munn, M. M. Dupin, 2008). Так, например, Т. Oonishi et al. (1997) указывали на существенное изменение фильтруемости эритроцитов при их инкубации с адреналином, простагландином Ei и пентоксифиллином. На изменение агрегации и деформируемости эритроцитов под влиянием адреналина указывали S. Hilario et al. (1999), А. В. Муравьев и др. (2005) и И. А. Тихомирова (2006). Следовательно, гормоны и паракринные регуляторные вещества принимают участие в изменении микрореологических свойств эритроцитов. Важно заметить, что катехоламины, инсулин и простагландины участвуют в регуляции метаболизма (Дж. Теппермен., X. Теппермен, 1987; Р.

Эккерт и др., 1991). С другой стороны, имеются работы, в которых приведены данные о существенном изменении реологических свойств крови при метаболических расстройствах, таких как диабет (В. А. Галенок и др., 1987; N. Babu, М. Singh, 2005). При диабете эритроциты в течение всего периода их жизни находятся в условиях повышенного уровня глюкозы, и это приводит к ухудшению их деформируемости и выраженному приросту агрегации (О. Linderkamp et al., 1999; М. Singh, S. Shin, 2009). Сниженный уровень инсулина при диабете первого типа (Дж. Теппермен, X. Теппермен, 1989) и измененная чувствительность к катехоламинам тоже могут сказываться на функциональном состоянии эритроцитов и их микрореологических свойствах.

Наличие функционально активных рецепторов на мембранах зрелых эритроцитов к ряду гормонов и в том числе инсулину, адреналину и норад-реналину (G. Sager et al., 1985; J. Sundquist et al., 1992; S. Tuvia et al., 1999; J. F. Horga et al., 2000) ставит два вопроса — будут ли изменяться микрореологические свойства эритроцитов при прямом стимулировании этих рецепторов разными концентрациями соответствующих агонистов, и каковы будут реакции клеток на стимулирование разных подтипов этих рецепторов (адре-норецепторов).

Для ответа на эти и ряд других вопросов и было предпринято диссертационное исследование.

Цель исследования

Изучение параметров гемореологического профиля в норме и при метаболических расстройствах и анализ роли регуляторов метаболизма - гормонов и простагландинов в изменениях микрореологических свойств эритроцитов.

Задачи исследования

Научная новизна исследования

Впервые проведено сравнительное исследование изменений параметров гемореологического профиля и транспортного потенциала крови в условиях метаболических расстройств при диабете первого и второго типов. Показаны значительные изменения вязкости цельной крови, в основном обусловленные приростом вязкости плазмы. Определен вероятностный вклад разных реологических факторов, связанных с текучестью цельной крови. Установлено, что на долю вязкости плазмы может приходиться до 56%, а 32% - это вклад микрореологических характеристик эритроцитов. Впервые показано, что транспортный потенциал крови при метаболических расстройствах снижен в среднем на 30%. При этом ведущая роль в его снижении принадлежит текучести крови (74%), которая в значительной степени обусловлена микрореологией эритроцитов.

Показана возможность коррекции негативно измененных реологических свойств крови in vivo путем введения лекарственного препарата - пен-токсифиллина, обладающего способностью ингибировать активность фос-фодиэстераз в клетках.

Найдена положительная корреляция между агрегацией эритроцитов и концентрацией глюкозы, в опытах in vitro подтверждено, что при относительно низкой концентрации глюкозы наблюдается уменьшение агрегации эритроцитов.

Впервые установлена разная степень изменения микрореологических свойств эритроцитов (их агрегации) под влиянием инсулина в физиологических условиях и при метаболических нарушениях. Получены данные о дозо-зависимом влиянии инсулина на микрореологические характеристики эритроцитов. Впервые дан детальный анализ изменений агрегации и деформируемости эритроцитов при стимулировании разных подтипов адренорецеп-торов, показаны вероятные внутриклеточные сигнальные пути, связанные с этими физиологическими ответами клеток.

Проведен анализ изменений деформируемости и агрегации эритроцитов под влиянием простагландинов. Показано, что простагландины группы Е и особенно ПГЕ1 благоприятно влияют на микрореологию эритроцитов, тогда как простагландин группы Ф, ПГФ2а, напротив выраженно стимулировал агрегацию эритроцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы

В исследовании показаны типичные отличия параметров гемореологи-ческого профиля при метаболических нарушениях от тех, что характерны физиологической норме. Получены новые количественные характеристики реологии крови, ее текучести и транспортного потенциала при метаболических расстройствах, связанных с инсулинозависимым и инсулиннезависи-мым диабетом. Показана возможность адресной лекарственной коррекции негативно измененных микрореологических параметров эритроцитов. В работе получены новые данные об особенностях влияния инсулина и адреналина на микрореологические свойства эритроцитов в физиологических условиях и на фоне расстройств метаболизма. Изучено влияние разных концентраций глюкозы на агрегацию и деформируемость эритроцитов. Изучены элементы молекулярных сигнальных путей, связанных с позитивными изменениями микрореологических параметров эритроцитов. Это определяет направление коррекционных мероприятий - поиск и применение препаратов, адресно влияющих на клеточные молекулярные мишени, действие на которые приводит к позитивным микрореологическим эффектам. Результаты исследований дополняют знания о механизмах межклеточных взаимодействий, влиянии сигнальных молекул на процессы агрегации эритроцитов и их деформируемость. Материалы диссертации могут быть использованы для преподавания физиологии и патофизиологии, при написании обзоров, монографий и учебных пособий, а так же служить основой для дальнейшей научно — исследовательской работы в данной области.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В физиологических условиях у здоровых лиц гемореологический профиль отличается более высокой текучестью крови и ее эффективным транспортным потенциалом от лиц с метаболическими нарушениями.

2. Инкубация эритроцитов с глюкозой и инсулином приводит к существенному дозозависимому снижению агрегации эритроцитов и умеренному приросту их деформируемости.

3. Адреналин дозозависимым образом повышает агрегацию эритроцитов и способствует подъему их деформируемости. Агонисты а-1 и а-2 адреноре-цепторов - фенилэфрин и клонидин, в избранных концентрациях, также выражен но повышают агрегацию эритроцитов, но не влияют на их деформируемость. Напротив, метапротеренол - агонист (3-адренорецепторов, достоверно повышает деформируемость эритроцитов, но не оказывает существенного влияния на агрегацию клеток.

4. Механизмы регуляторного влияния гормонов на микоререологические свойства эритроцитов могут быть связаны с активацией аденилатциклазного или кальциевого сигнальных путей в клетках.

5. Простагландины группы Е в избранных концентрациях проявляют позитивный микрореологический эффект: улучшают текучесть суспензий эритроцитов и снижают их агрегацию, тогда как простагландин Ф2а выраженно, дозозависимо повышал агрегацию эритроцитов и не оказывал существенного влияния на их дефорормируемость.

Апробация результатов работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на международной конференции «Гемореология в микро - и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); XX съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (Москва, 2007); VI международной конференции «Гемореология и микроциркуляция» (Ярославль, 2007); V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2007); Conference on Clinical Hemorheology and Microcirculation (Дрезден, Германия, 2007); Всероссийской школе-семинаре «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2008, 2009); Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2008); IV Всероссийской с международным участием школе-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2008); Biorheology (Пенсильвания, США, 2008); IV Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» с международным участием (Москва, 2009); 1 Международной научно-практической конференции «Научно-техническое творчество молодежи» (Москва, 2009); Conference on Clinical Hemorheology and Microcirculation (Сан-Мориц, Швейцария, 2009); на Европейской школе-конференции по Биореологии (Варна, Болгария, 2006, 2009).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Булаева, Светлана Владимировна

Выводы

3. Инкубация эритроцитов с глюкозой в разных концентрациях позволила выявить дозозависимое изменение агрегации эритроцитов. При этом наибольший снижающий агрегацию эффект был при физиологической концентрации, равной 5 мМ, где уменьшение агрегации составило 40%.

4. Инсулин в избранных концентрациях снижал агрегацию эритроцитов и повышал их деформируемость. Выявлен дозозависимый эффект этого гормона. Наибольшие изменения агрегации (ее снижение на 45%) под влиянием инкубации с инсулином были у лиц с инсулинозависимым диабетом, а деформируемость в большей степени повышалась у лиц инсулиннезависимым диабетом (на 20%).

5. Адреналин умеренно повышал деформируемость эритроцитов и выражен-но дозозависимо влиял на агрегацию. Агонисты а-1 и а-2-адренорецепторов фенилэфрин и клонидин в концентрации 1,0 рМ стимулировали агрегацию эритроцитов, но существенно не влияли на их деформируемость. Метапро-теренол - агонист Р-адренорецепторов не влиял достоверно на агрегацию эритроцитов в избранной концентрации 1,0 рМ, но заметно повышал их деформируемость.

7. Положительное влияние адреналина и особенно р-агониста (метапротере-нола) на деформируемость эритроцитов, а также ее повышение при действии проникающего аналога цАМФ и прямого стимулятора аденилатциклазы форсколина) указывают на то, что внутриклеточный механизм влияния ка-техоламинов на это микрореологическое свойство эритроцитов связан с аде-нилатциклазной сигнальной системой.

8. Простагландины группы Е, особенно ПГЕь позитивно влияли на микрореологические свойства эритроцитов, тогда как простагландин Ф2а существенно дозозависимо стимулировал агрегацию эритроцитов, но не оказал заметного влияния на их деформируемость.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Булаева, Светлана Владимировна, Ярославль

1. Авдонин П. В., Меньшиков М. Ю., Орлов С. Н., Ткачу к В. А. Механизм увеличения концентрации Са2+ в цитоплазме тромбоцитов при действии фактора агрегации Текст. // Биохимия. 1985. — Т. 50. — С. 1241-1248.

2. Алексеев О. В. Микроциркуляторный гомеостаз Текст. // В кн. : Гомео-стаз.-М. : Медицина, 1981. С. 419-457.

3. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. — М. : Мир, 1987.-223 с.

4. Аметов А. С., Грановская-Цветкова А. М., Казей IT. С. Инсулиннезави-симый сахарный диабет: основы патогенеза и терапии Текст. // Российская Медицинская Академия Минздрава РФ. Москва, 1995.

5. Варфоломеев С. Д., Гуревич К. Г. Биокинетика. М. : ФАИР-ПРЕСС, 1999.-720 с.

6. Галенок В. А., Гостинская Е. В., Диккер В. Е. Гемореология при нарушениях углеводного обмена. Новосибирск: Наука, 1987. - 257 с.

7. Джонсон П. Периферическое кровообращение. М. : Медицина, 1982. -440 с.

8. Замышляев А. В. Реологические свойства крови у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией Текст. : автореф. . канд. мед. наук. Ярославль, 2002. - 24 с.

9. Занозина О. В. Ерохина М. Н., Рунов Г. П., Щербатюк Т. Г. Перикисное окисление липидов и нейропсихологические нарушения у больных сахарным диабетом 2 типа Текст. // Мат. междунар. конф «Гемореология и микроциркуляция». Ярославль. - 2007. - С. 5.

10. Зинчук В. В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты Текст. // Усп. физиол. наук. 2001. - Т. 32. - № 3. - С. 63-68.

11. Ивенс И., Скейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран. М. : Мир, 1982. - 304 с.

12. Каро К., Педли Т., Шротер Р., Сид У. Механика кровообращения. М. : Мир, 1981.-623 с.

13. Куприянов В. В., Караганов Я. Д., Козлов В. И. Микроциркуляторное русло. М. Медицина, 1975. - 216 с.

14. Левин В. Н., Муравьев А. В. Реологические особенности крови при долговременной и срочной адаптации к мышечным нагрузкам Текст. // Бюл. экспер. биол. и медицины. 1985. - Т. 99. - № 2. - С. 142-144.

15. Левин Г. Я., Кораблев С. Б., Модин А. П. и соавт. Микроциркуляция при ожоговом шоке. Клинические аспекты нарушений микроциркуляции и реологии крови. Горький, 1984. - 234 с.

16. Левтов В. А., Регирер С. А., Шадрина Н. X. Реология крови. М. : Медицина, 1982. - 272 с.

17. Люсов В. А., Белоусов Ю. Б., Савенков М. П. и др. Состояние гемостаза и реологии крови при застойной недостаточности кровообращения Текст. // Кардиология. 1979. - Т. 19. - № 4. - С. 86-89.

18. Манухин Б. Н. Физиология адренорецепторов. Л. : Наука, 1968. - С. 234-244.

19. Мельников А. А. Комплексный анализ факторов, взаимосвязанных с реологическими свойствами крови у спортсменов Текст. : автореф. . докт. биол. наук. Ярославль, 2004. - 48 с.

20. Муравьев А. В. Морфофункциональные основы изменений микрососудистого русла, реологических свойств крови и транспорта кислорода при адаптации к мышечным нагрузкам Текст.Гдис. . докт. биол. наук. Ярославль, 1993. - 423 с.

21. Муравьев А. В. Чепоров С. В. Гемореология (экспериментальные и клинические аспекты реологии крови): Монография. — Ярославль: Изд-во ЯГПУ, 2009.- 178 с.

22. Муравьев А. В., Зайцев Л. Г., Муравьев А. А. Оптимальный гематокрит в норме и патологии Текст. // Мат. междунар. Конф. «Гемореология в микро и макроциркуляции». - Ярославль. - 2005. - С. 17.

23. Муравьев А. В., Муравьев А. А. Вне- и внутриклеточные механизмы изменения агрегации эритроцитов Текст. // Физиология человека. -2005.-Т. 31,-№4.-С. 1-5.

24. Муравьев А. В., Тихомирова И. А., Борисов Д. В. Анализ влияния плазменных и клеточных факторов на агрегацию эритроцитов разных возрастных популяций Текст. // Физиология человека. — 2002. Т. 28. - № 4.-С. 144-148.

25. Муравьев А. В., Тихомирова И. А., Чучканов Ф. А. и др. Сравнительная гемореологическая эффективность Трентала и его генерических копий Текст. // Клинич. Фармакология и терапия. 2005. - 14(5). - С. 1-4.

26. Муравьев А. В., Шинкаренко В. С., Баканова И. А. Реологические механизмы, обеспечивающие эффективность транспорта кислорода кровью Текст. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2000. - № 4 (4). - С. 34-37.

27. Негреску Е. Б., Балденков Г. Н., Григорян Г. Ю., Ткачук. В. А. Биохимические особенности а-2-адренорецепторов тромбоцитов и их связь с поо Iвышением концентрации внутриклеточного Са Текст. // Биохимия. -1989. Т. 54. - №6. - С. 909-915.

28. Перцева М. Н. Вклад эволюционной эндокринологии в изучение структуры и механизмов действия инсулина и родственных пептидов Текст. // Петербургская Академия наук в истории Академий мира. 1999. - С. 282-294.

29. Перцева М. Н., Плеснева С. А., Шпаков А. О. и др. Новые данные, свидетельствующие об участии аденилатциклазной системы в механизме действия инсулина и родственных пептидов Текст. // Докл. РАН. 1995. -Т. 342.-С. 410-412.

30. Перцева М. Н., Шпаков А. О., Плеснева С. А. Современные достижения в изучении сигнальных механизмов действия инсулина и родственных ему пептидов Текст. // Ж. эвол. биохим. и физиол. 1996. - Т. 32. - С. 318-340.

31. Простагландины / Под ред. И.С.Ажгихина. М.Медицина, 1978. - 416 с.

32. Селезнев С. А., Назаренко Г. И., Зайцев В. С. Клинические аспекты мик-рогемоциркуляции. — М. : Медицина, 1985. 179 с.

33. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы Текст. М. : Мир, 1989. - 656 с.

34. Тихомирова И. А. Роль экстрацеллюлярных, мембранных и внутриклеточных факторов в процессе агрегации эритроцитов Текст. : авто-реф. . докт. биол. наук. Ярославль, 2006. -48 с.

35. Ткачук В. А. Введение в молекулярную эндокринологию. — М. : Изд во МГУ, 1983.-256 с.

36. Ткачук В. А. Гормональная регуляция транспорта Са2+ в клетках крови и сосудов Текст. // Российский физиологический журнал им И. М. Сеченова. 1998. - Т. 84.-№10.-С. 1006-1018.

37. Уилкинсон У. JI. Неньютоновские жидкости Текст. М. : Мир, 1964. -216 с.

38. Фаллер Дж., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М. : «БИНОМ», 2003.-272 с.

39. Физиология человека / Под ред. Р. Шмидта и Г. Тевса Текст. М. : Мир, 1996.-Т. 2.-351 с.

40. Фирсов Н. Н. Реологические свойства крови и патология сердечнососудистой системы Текст. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. -№2.-С. 26-32.

41. Фирсов Н. Н., Джанашия П. X. Введение в экспериментальную и клиническую гемореологию. М. : Изд-во ГОУ ВПО «РГМУ», 2004. - 280 с.

42. Фирсов Н. Н., Сирко И. В., Приезжев А. В. Современные проблемы аг-регометрии цельной крови Текст. // Тромбоз, гемостаз и реология. -2000.-№2(2).-С. 9-11.

43. Фундаментальная и клиническая физиология Текст. // Под ред. А. Г. Камкина и А. А. Каменского. М: Академия, 2004. - 1072 с.

44. Черницкий Е. А., Воробей А. В. Структура и функции эритроцитарных мембран. Минск : Наука и техника, 1981.-214с.

45. Чернух А. М., Александров П. Н., Алексеев О. В. Микроциркуляция. -М. : Медицина, 1984. 432 с.

46. Шпаков А. О. Гомология первичной структуры третьих цитоплазмати-ческих доменов рецепторов родопсинового типа и цитоплазматического хвоста (3-субъединицы инсулинового рецептора Текст. // Цитология. -1996.-Т. 38.-С. 467^-88.

47. Шпаков А. О., Перцева М. Н. Молекулярные основы функционального сопряжения белков — компонентов инсулиновой сигнальной системы Текст. // Усп. биол. хим. 1999.-Т. 39. - С. 141-186.

48. Эккерт Р., Ренделл Д., Огастин Дж. Физиология животных: Механизмы адаптации. М. : Мир, 1991. - 424 с.

49. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М. : МАИК «Наука /Интерпериодика», 2002. - 446 с.

50. Ajmani R. S. Hypertension and hemorheology Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 1997. - Vol. 17. -№ 6. - P. 397-420.

51. Allen I. V., Dermott E., Connolly J. H., Hurwitz L. J. A study of a patient with the amyotrophic form of Creutzfeldt-Jakob disease Текст. // Brain. -1971. Vol. 94. - № 4. - P. 715-724.

52. Allen J. E., Rasmussen H. Human red blood cells: prostaglandin E2, epinephrine, and isoproterenol alter deformability Текст. // Science. 1971. -Vol. 29.-№ 174(8).-P. 512-514.

53. Alonso C., Oviedo J. M., Martin-Alonso J. M., Diaz E., Boga J. A., Parra F. Programmed cell death in the pathogenesis of rabbit hemorrhagic disease Текст. // Arch Virol. 1998. - Vol. 143. - № 2. - P. 321-332.

54. An X., Zhang X., Debnath G., et al. Phosphatidylinositol-4,5-biphosphate (PIP2) differentially regulates the interaction of human erythrocyte protein 4.1 (4.1R) with membrane proteins Текст. // Biochemistry. 2006. - Vol. 9. -№45(18).-P. 5725-5732.

55. Anderson J. P., Morrow J. S. The interaction of calmodulin with human erythrocyte spectrin. Inhibition of protein 4.1-stimulated actin binding Текст. // J Biol Chem. 1987. - Vol. 5. - № 262(13). - P. 6365-6372.

56. Armstrong J. K., Meiselman H. J., Fisher Т. C. Evidence against macromolecular "bridging" as the mechanism of red blood cell aggregation induced by nonionic polymers Текст. // Biorheology. 1999. - Vol. 36. - № 5-6.-P. 433-437.

57. Attali J. R., Valensi P. Diabetes and hemorheology Текст. // Diabete Metab.- 1990,- Vol. 16. -№ l.-P. 1-6.

58. Azoui R., Vignon D., Safar M., Cuche J. L. Plasma erythrocyte relationship of catecholamines in human blood Текст. // J. Cardiovasc. Pharmacol. -1994.-Vol. 23.-P. 525-531.

59. Babu N., Singh M. Analysis of aggregation parameters of erythrocytes in diabetes mellitus. Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 2005. - Vol. 32. -№4.-P. 269-277.

60. Babu N., Singh M. Influence of hyperglycemia on aggregation, deformability and shape parameters of erythrocytes. Текст. // Clin Hemorheol Microcirc.- 2004. Vol. 31. - № 4. - P. 273-280.

61. Bagchi P., Johnson P. C., Popel A. S. Computational fluid dynamic stimulation of aggregation of deformable cells in a shear flow Текст. // J Biomech Eng. -2005. -Vol. 127.-№7.-P. 1070-1080.

62. Baskurt О. K., Farley R. A., Meiselman H. J. Erythrocyte aggregation tendency and cellular properties in horse, human, and rat: a comparative study Текст. // Am J Physiol. 1997. - Vol. 273.-6 Pt 2. - H2604-H2612.

63. Baskurt О. K., Hardeman M. R., Rampling W. Meiselman H. J. Handbook of hemorheology and Hemodinamics. IOS Press, 2007. - 456 p.

64. Baskurt О. K., Meiselman H. J. Blood rheology and hemodynamics Текст. // Semin Thromb Hemost. 2003. - Vol. 29. - P. 435-450.

65. Bauduceau В., Renaudeau С., Mayaudon H., Helie С., Ducorps M., Sonnet E., Yvert J. P. Modification of hemorheological parameters in microvascular complications of diabetes Текст. // Diabete Metab. 1995. — Vol. 21(3). - P. 188-193.

66. Bauersachs R. M., Wenby R. В., Meiselman H. J. Determination of specific red cell aggregation indices via an automated system Текст. // Clin. Hemorheol. 1989. - Vol. 9. - P. 1-25.

67. Baumler H., Neu В., Donath E., Kiesewetter H. Basic phenomena of red blood cell rouleaux formation Текст. // Biorheology. 1999. - Vol. 36(5-6). -P. 439-442.

68. Baumler H., Neu В., Mitlohner R., Georgieva R., Meiselman H. J., Kiesewetter H. Electrophoretic and aggregation behavior of bovine, horse and human red blood cells in plasma and in polymer solutions Текст. // Biorheology.-2001.-Vol. 38.-№ l.-P. 39-51.

69. Becker R. C. The role of blood viscosity in the development and progression of coronary artery disease Текст. // Clin. J. Med. 1993. - Vol. 60. - № 5. -P. 353-358.

70. Bennekou P. The voltage-gated non-selective cation channel from human red cells is sensitive to acetylcholine Текст. // Biochim Biophys Acta. 1993. -Vol. 1147.-P. 165-167.

71. Bhattacharyya S., Tracey A. S. Vanadium(V) complexes in enzyme systems: aqueous chemistry, inhibition and molecular modeling in inhibitor design Текст. // J Inorg Biochem. 2001. - Vol. 85. - № 1. - P. 9-13.

72. Bishop J. J., Nance P. R., Popel A. S., Intaglietta M., Johnson P. C. Effect of erythrocyte aggregation on velocity profiles in venules Текст. // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2001. - Vol. 280. - H222-H236.

73. Bohler Т., Wagner S., Seiberth V. et al. Blood rheology and rhetinopathy in premature infants with very low birth weight Текст. // Clin. Hemorheol. -1995.-Vol. 15.-№3.-P. 305-309.

74. Boisseau M. R. Are rheological markers of poor prognosis present in diabetic arteriopathies? Текст. // J Mai Vase. 2001. - Vol. 26. - № 2. - P. 117-121.

75. Boivin P. Molecular interactions of membrane proteins and erythrocyte deformability // Pathol Biol (Paris). 1984. - Vol.32. - P.717-735.

76. Boivin P., Garbarz M., Dhermy D., Galand C. In vitro phosphorylation of the red blood cell cytoskeleton complex by cyclic AMP-dependent protein kinase from erythrocyte membrane Текст. // Biochim Biophys Acta. 1981. — Vol. 21.-№647(1).-P. 1-6.

77. Bongrand P., Bouvenot G., Bartolin R., Tatossian J., Bruguerolle B. Are there circadian variations of polymorphonuclear phagocytosis in man? Текст. // Chronobiol Int. 1988.-Vol. 5.-№ l.-P. 81-83.

78. Braasch D. The missing negative effect of red cell aggregation upon blood flow in small capillaries at low shear forces Текст. // Biorheology. 1984. -Suppl. l.-P. 227-230.

79. Bree F., Gault I., P. d'Athis and Tillement J. P. Beta adrenoceptors of human red cells, determination of their subtypes Текст. // Biochem. Pharmacol. -1984. Vol. 33. - P. 4045-4050.

80. Brooks D. E. Mechanism of red cell aggregation Текст. // Red blood cell, rheology and aging. D. Piatt editor. Springer Verlag. Berlin, 1988. - P. 158-162.

81. Brooks D. Red cell interactions in low flow states Текст. // Microcirculation. 1976.-V. l.-P. 33-52.

82. Brun J. F., Monnier J. F., Charpiat A. et al. Longitudinal study of relationships between red cell aggregation at rest and lactate response to exercise after training in young gymnasts Текст. // Clin. Hemorheol. 1995. -Vol. 15.-P. 147-156.

83. Brun J. F., Varlet Marie E., Mauverger I., Mercier J. Hemorheology in insulin resistance Текст. // Мат. междунар. Конф «Гемореология и микроциркуляция». - Ярославль. - 2009. - С. 71.

84. Byers Т. J., Brandon D. Visualization of the protein associations in the erythrocyte membrane skeleton Текст. // PNAS. 1985. - Vol. 82. - P. 6153-6157.

85. Carroll S., Cooke С. В., Butterly R. J. Plasma viscosity, fibrinogen and the metabolic syndrome: effect of obesity and cardiorespiratory fitness Текст. // Blood Coagul Fibrinolysis. -2000.-Vol. 11.-№ 1.-P. 71-78.

86. Cella A., Bianchi E., Reali G. L., Piana A., Armani U. Evaluation of various hemorheologic parameters in diabetes mellitus Текст. // Boll Soc Ital Biol Sper. 1990.-Vol. 66.-№4.-P. 335-342.

87. Ceolotto G., Sartori M., Felice M., Clari G., Bordin L., Semplicini A. Effect of protein kinase С and insulin on Na+/H+ exchange in red blood cells of essential hypertensives Текст. // J Hum Hypertens. 1999. - Vol. 13. - № 5. -P. 321-327.

88. Charm S. E., Kurland G. S. Viscometry of human blood for shear rates of 0 -10000 s~1 Текст. // Nature. 1965. - Vol. 206. - P. 617-624.

89. Chasis J. A., Mohandas N. Erythrocyte membrane deformability and stability: two distinct membrane properties that are independently regulated by skeletal protein associations Текст. // J Cell Biol. 1986. - Vol. 103. - № 2. - P. 343-350.

90. Chien S. Electrochemical interactions between erythrocyte surfaces Текст. // Thrombosis Research. 1976. - Vol. 8. - P. 189-202.

91. Chien S. Rheology in the microcirculation in normal and low flow states Текст. // Adv. Shock Res. 1982. - Vol. 8. - P. 71-80.

92. Chien S., Lipowsky H. Correlation of hemodynamics in macro- and microcirculation Текст. //Microvasc. Res. 1981. - Vol. 21. - P. 265-269.

93. Chien S., Lung L. Physicochemical basis and clinical implications of red cell aggregation Текст. // Clin. Hemorheol. 1987. - Vol. 7. - P. 71-91.

94. Chien S., Sung L. A., Kim S. et al. Determination of aggregation force in rouleaux by fluid mechanical technique Текст. // Microvas. Res. 1977. -Vol. 13.-P. 327-333.

95. Christophersen P., Bennekou P. Evidence for a voltage-gated, non-selective cation channel in the human red cell membrane Текст. // Biochim Biophys Acta.-1991.-Vol. 1065.-P. 103-106.

96. Ciuffetti G., Sokola E., Lombardini R., Pasqualini L., Pirro M., Mannarino E. The influence of iloprost on blood rheology and tissue perfusion in patients with intermittent claudication Текст. // Kardiol Pol. 2003. - Vol. 59. - № 9.-P. 197-204.

97. Clari G., Michielin E., Moret V. Interrelationships between protein kinases and spectrin phosphorylation in human erythrocytes Текст. // Biochim Biophys Acta. 1981.-Vol. 8.-№ 640(1).-P. 240-251.

98. Cohen С. M., Foley S. F. Biochemical characterization of complex formation by human erythrocyte spectrin, protein 4.1, and actin Текст. // Biochemistry. 1984. - Vol. 4. - № 23(25). - P. 6091-6098.

99. Connes Ph. et al. Impaired blood rheology in sickle cell trait carriers during exercise but few anomalies: why? Текст. // Мат. междунар. Конф. «Гемореология и микроциркуляции». Ярославль. - 2009. - С. 50.

100. Corry W. D., Meiselman Н. J. Modification of erythrocyte physicochemical properties by millimolar concentrations of glutaraldehyde Текст. // Blood Cells. 1980. - Vol. 6. - № 1. - P. 93-95.

101. Datta Roy A., Ray T. R., Sinha A. K. Control of erythrocyte membrane microviscosity by insulin Текст. // Biochim. Biophys. Acta. - 1985. - Vol. 44.-№ i.p. 187-190.

102. Dettelbach H., Aviado D. Clinical pharmacology of pentoxifylline with special reference to its hemorheologic effect for treatment of intermittent claudication Текст. // J. Clin. Pharmacol. 1985. - Vol. 25. - P. 8-26.

103. Dhermy D., Simeon J., Wautier M. P., Boivin P., Wautier J. L. Role of membrane sialic acid content in the adhesiveness of aged erythrocytes tohuman cultured endothelial cells Текст. // Biochim Biophys Acta. 1987. — Vol. 13. - № 904(2). - P. 201-206.

104. Dintenfass L. Blood viscosity, hyperviscosity and hyperviscosaemia. — MTP Press, 1986.-482 p.

105. Dintenfass L. Clinical Applications of heamorheology Текст. // In. : The Rheology of blood, bloodvessels and associated tissues. Oxford Press, 1981.-P. 22-50.

106. Dintenfass L. Theoretical aspects and clinical applications of the blood viscosity equation containing a term for the internal viscosity of the red cell Текст. // Blood Cells. 1977. - Vol. 3. - P. 367-374.

107. Donner M., Mills P., Stoltz J. F. Influence of plasma proteins on erythrocyte aggregation Текст. // Clin. Hemorheol. 1989. - Vol. 9. - P. 715-721.

108. Dormandy J. A. Haemorheological aspects of thrombosis Текст. // Br J Haematol. 1980.-Vol. 45.-№4.-P. 519-522.

109. Eder P. S., Soong C. J., Tao M. Phosphorylation reduces the affinity of protein 4.1 for spectrin Текст. // Biochemistry. 1986. - Vol. 8. - № 25(7). -P. 1764-1770.

110. Ernst E. Plasma fibrinogen an independent cardiovascular risk factor Текст. // J Intern Med. - 1990. - Vol. 227. - № 6. - P. 365-372.

111. Ernst E., Matrai A. Blood rheology in athletes Текст. // J. Sports Med. and Phis. Fitness. 1985. - Vol. 25. - № 4. - P. 207-212.

112. Evans E. A. Structure and deformation properties of red blood cells: concepts and quantitative methods Текст. // Methods Enzymol. 1989. Vol. 173. - P. 3-35.

113. Forconi S., Guerrini M. Do hemorheological laboratory assays have any clinical relevance? Текст. // Clin. Hemorheol. 1996. - Vol. 16. - № 1. - P. 17-21.

114. Forst Т., Kunt T. Effects of C-peptide on microvascular blood flow and blood hemorheology Текст. // Exp Diabesity Res. 2004. - Vol. 5. - № 1. - P. 51-64.

115. Fuller G., Shields D. Molecular Basis of Medical Cell Biology, Appleton & Lange. Stamford: Connecticut, 2000. - 272 p.

116. Gaehtgens P. Blood rheology and blood flow in the circulation current knowledge and concepts Текст. // Rev. Port. Hemorreol. - 1987. - Suppl. 1. -P. 5-16.

117. Gambhir К. K., Archer J. A., Bradley C. J. Characteristics of human erythrocyte insulin receptors Текст. // Diabetes. 1978. - № 27. - P. 701708.

118. Gamier M., Attali J. R., Valensi P., Delatour-Hanss E., Gaudey F., Koutsouris D. Erythrocyte deformability in diabetes and erythrocyte membrane lipid composition Текст. // Metabolism. 1990. - Vol. 39. - № 8. - P. 794-798.

119. Goldstone S., Schmid-Schonbein H., Wells R. The rheology of red cell aggregates Текст. // Microvasc. Res. 1970. - V. 2. - P. 273-286.

120. Guimaraes S. and Moura D. Vascular Adrenoceptors: An Update Текст. // Pharmacol. Rev.-2001.-Vol. 53. Issue 2. - P. 319-356.

121. Gustafsson L., Appelgren L., Myrvold H. E. Effects of increased plasma viscosity and red blood cell aggregation on blood viscosity in vivo Текст. // Am J Physiol. 1981. - Vol. 241. -№ 4. -H513-H518.

122. Hach Т., Forst Т., Kunt Т., Ekberg K., Pfutzner A., Wahren J. C-peptide and its C-terminal fragments improve erythrocyte deformability in type 1 diabetes patients Текст. // Exp Diabetes Res. 2008. - P. 730594.

123. Harrison M. L., Isaacson С. C., Burg D. L., Geahlen R. L., Low P. S. Phosphorylation of human erythrocyte band 3 by endogenous p72syk Текст. // J Biol Chem. 1994. - Vol. 14. - № 269(2). - P. 955-959.

124. Heilmann L., Siekmann U. Effect of metoprolol on the flow properties of blood Текст. // Arzneimittelforschung. 1984. - Vol. 34. - № 3. - P. 298302.

125. Hilario S., Saldanha C., Martins-Suva J. The effect of adrenaline upon human erythrocyte properties. Sex-related differences? Текст. // Biorheology. — 1999. Vol. 36. - N /2. - P. 124.

126. Hjemdahl P. Plasma catecholamines: analytical challenges and physiological limitations Текст. // Baillieres Clin. Endocrinol. Metab. 1993. - № 7. - P. 307-353.

127. Horvath В., Vekasi J., Kesmarky G., Toth K. In vitro antioxidant properties pentoxifylline in a rheological model Текст. // Clin. Hemorheol. Microcirc.- 2008. Vol. 40. - P. 165-166.

128. Johnson P., Cabel M., Popel A. Venous resistance and red cell aggregation Текст. // Abstr. Microcirculatory Soc. 41st Annu. Conf, Anaheim, California.- 1994.-P. 82-83.

129. Kaestner L., Bernhardt I. Ion channels in the human red blood cell membrane: their further investigation and physiological relevance Текст. // Bioelectrochemistry. 2002. - № 55. - P. 71-74.

130. Kesmarky G., Feher G., Koltai K., Horvath В., Toth K. Viscosity, hemostasis and inflammation in atherosclerotic heart diseases Текст. // Clin Hemorheol

131. Microcirc.-2006.-Vol. 35.-№ 1-2.-P. 67-73.

132. Kotchen T. A., Hartley L. H., Rice T. W. et al. Renin, norepinephrine, and epinephrine responses to graded exercise Текст. // J. Appl. Physiol. 1971. -№31.-P. 178-184.

133. Lacombe C., Bucherer D., Lodjouzi J. et al. Competetive role between fibrinogen and albumin on the thixotropy of red cell suspension Текст. // Biorheology. 1988. - Vol. 25. - P. 349-354.

134. Le Devehat C. Blood rheology abnormalities in diabetes mellitus Текст. // J Mai Vase. 1989. - Vol. 14. - № 1. - P. 64-67.

135. Le Devehat C., Khodabandehlou T. Transcutaneous oxygen pressure and hemorheology in diabetes mellitus Текст. // Int Angiol. 1990. - Vol. 9. -№ 4. - P. 259-262.

136. Le Devehat С., Khodabandehlou Т., Vimeux M. Impaired hemorheological properties in diabetic patients with lower limb arterial ischaemia Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 2001. - Vol. 25. -№ 2. - P. 43-48.

137. Le Devehat C., Vimeux M., Bondoux G., Khodabandehlou T. Red blood cell aggregation in diabetes mellitus Текст. // Int Angiol. 1990. - Vol. 9. -№ 1. -P. 11-15.

138. Le Devehat C., Vimeux M., Khodabandehlou T. Blood rheology in patients with diabetes mellitus Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 2004. - Vol. 30.-№3-4.-P. 297-300.

139. Lee A, D., Hansen P. A., Schluter J., Gulve E. A., Gao J. and Holloszy J. O. Effects of epinephrine on insulin-stimulated glucose uptake and GLUT-4 phosphorylation in muscle Текст. // Am J Physiol Cell Physiol. 1997. -Vol. 273. - № 3. - C1082-C1087.

140. Lim В., Bascom P. A., Cobbold R. S. Simulation of red blood cell aggregation in shear flow Текст. // Biorheology. 1997. - Vol. 34. - № 6. -P. 423-441.

141. Linderkamp O., Meiselman H. J. Geometric, osmotic, and membrane mechanical properties of density-separated human red cells Текст. // Blood. 1982. - Vol. 59. - № 6. - P. 1121-1127.

142. Linderkamp O., Ruef P., Zilow E. P., Hoffmann G. F. Impaired deformability of erythrocytes and neutrophils in children with newly diagnosed insulin-dependent diabetes mellitus Текст. // Diabetologia. 1999. - Vol. 42. - № 7.-P. 865-869.

143. Ling E., Danilov Y. N., Cohen С. M. Modulation of red cell band 4.1 function by cAMP-dependent kinase and protein kinase С phosphorylation Текст. // J Biol Cheml. 1988. - Vol. 15. - № 263(5). - P. 2209-2216.

144. London M. The role of blood rheology in regulating blood pressure Текст. // Clin Hemorheol and Microcirc. 1997. - Vol. 17. - P. 93-106.

145. Lowe G. D., Barbenel J. C. Plasma and blood viscosity Текст. // Clinical Blood Rheology. 1988. - CRC Press, Boca Raton G. D. O. Lowe, ed. - Vol. l.-P. 11-44.

146. Maeda N., Izumida Y., Suzuki et al. Influence of IgG and its related macromolecules on RBC aggregation Текст. // Hemorheologie et agregation erythrocytaire. 1994. - Vol. 4. - P. 44-49.

147. Maeda N., Shiga T. Opposite effect of albumin on the erythrocyte aggregation induced by immunoglobulin G and fibrinogen Текст. // Biochim Biophys Acta.- 1986.-Vol. 13.-№ 855.-№ l.-P. 127-135.

148. Manno S., Takakuwa Y., Mohandas N. Modulation of erythrocyte membrane mechanical function by protein 4.1 phosphorylation Текст. // J Biol Chem. — 2005.-Vol. 280.-№9.-P. 7581-7587.

149. Manno S., Takakuwa Y., Nagao K., Mohandas N. Modulation of erythrocyte membrane mechanical function by beta-spectrin phosphorylation and dephosphorylation Текст. // J Biol Chem. 1995. - Vol. 10. - № 270(10). -P. 5659-5665.

150. Mantskava M., Pargalava N., McHedlishvili G. Direct beneficial effect of insulin on blood rheological disorders in the microcirculation Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 2004. - Vol. 30. - № 3-4. - P. 431-433.

151. Mardar H. I. The effect of hypoxia on the erythrocyte catecholamine depot Текст. // Fiziol. Zh. 1998. -№ 44. - P. 37-40.

152. Martin D., Ferguson E., Wigutoff S. Blood Viscosity responses to maximal exercise in endurance trained and sedentery female subjects Текст. // J. Appl. Physiol. 1985. - Vol. 59. - P. 348-353.

153. Martin G. P., el-Hariri L. M., Marriott C. Bile salt- and lysophosphatidylcholine-induced membrane damage in human erythrocytes Текст. // J Pharm Pharmacol. 1992. - Vol. 44. - № 8. - P. 646-650.

154. Marton Z., Kesmarky G., Vekasi J., Cser A., Russai R., Horvath В., Toth K. Red blood cell aggregation measurements in whole blood and in fibrinogen solutions by different methods Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 2001. -Vol. 24,-№2.-P. 75-83.

155. Meiselman H. J. Hemorheologic alterations in hypertension: chicken or egg? Текст. // Clin Hemorheol Microcirc. 1999. - Vol. 21. - № 3-4. - P. 195200.

156. Meiselman H. J. Red blood cell role in RBC aggregation: 1963-1993 and beyond Текст. // Clin. Hemorheol. 1993. - Vol. 13. - P. 575-592.

157. Meiselman H. J., Bauersachs R. M., Hein H. J., Koutsouris D., Moessmer G., Nash G. B. Rheological behavior of human PMN studied by micropipette aspiration and by micropore filtration Текст. // Monogr Atheroscler. 1990. -Vol. 15.-P. 181-185.

158. Merrill E. W., Benis A. F., Gilliland E. R. Pressure flow relations of human blood in hollow fibres at low flow rates Текст. // J. Appl. Physiol. 1965. -Vol. 20. - № 5. - P. 954-967.

159. Merrill E. W., Pelletier G. A., Cheng C. S. Yield stress of normal human blood as a function of the endogenous fibrinogen Текст. // J. Appl. Physiol. 1968.-Vol. 26.-P. 1-3.

160. Messmer K. Oxigen transport capacity Текст. // In. : High Altitude Phisiol. -N. Y. : Springer. 1982. - P. 117-122.

161. Minetti G., Ciana A., Balduini C. Differential sorting of tyrosine kinases and phosphotyrosine phosphatases acting on band 3 during vesiculation of human erythrocytes Текст. // Biochem. J. 2004. - Vol. 377. - P. 489-497.

162. Mohandas N. Molecular bases for for red cell membrane viscoelastic properties // Biochim. Soc. Trans.-1992.- Vol. 20.-P.776-782.

163. Mohandas N., Chasis J. A., Shohet S. B. The influence of membrane skeleton on red cell deformability, membrane material properties, and shape Текст. // Semin Hematol. 1983. - Vol. 20. - № 3. - P. 225-242.

164. Morris C. D., Menashe V. D., Anderson P. H., Malinow M. R. Community cholesterol screening: medical follow-up in subjects identified with high plasma cholesterol levels Текст. // Illingworth DR. Prev Med. 1990. - Vol. 19. -№ 5. - P. 493-501.

165. Morris S. A., Bilezikian J. P. Evidence that forskolin activates turkey erythrocyte adenylate cyclase through a noncatalytic site Текст. // Arch Biochem Biophys. 1983. - Vol. 220. - № 2. - P. 628-636.

166. Muller R., Lehrash F. Hemorheplogy of the cerebrovascular multifunctional disoders Текст. // Currant medical research and opinions. 1981. - Vol. 7. -P. 253-263.

167. Munn L.L., Dupin M.M. Blood cell interactions and segregation in flow //

168. Nakagawa Т., Willner J., Cerri C., Reydel P. The effect of membrane preparation and cellular maturation on human erythrocyte adenylate cyclase Текст. // Biochim. Biophys. Acta. 1984. - Vol. 770. - P. 122-126.

169. Nash G. В., Meiselman H. J. Effect of dehydration on the viscoelastic behavior of red cells Текст. // Blood Cells. 1991. - Vol. 17. - № 3. - P. 517-522.

170. Nash G. В., Parmar J., Reid M. E. Effects of deficiencies of glycophorins С and D on the physical properties of red cell Текст. // Brit. J. Haem. 1990. -Vol. 76. - P. 282-287.

171. Nash G. В., Wenby R. В., Sowemimo Coker S. O. et al. Influence of cellular properties on red cell aggregation Текст. // Clin. Hemorheol. 1987. - Vol. 7.-P. 93-108.

172. Negrean V., Suciu I., Sampelean D., Cozma A. Rheological changes in diabetic microangiopathy. Rom J Intern Med. - 2004. - Vol. 42. - № 2. - P. 407-413.

173. Neu В., Armstrong J. K., Fisher Т. C., Baumler H., Meiselman H. J. Electrophoretic mobility of human red blood cells coated with poly(ethylene glycol) Текст. //Biorheology. 2001. -Vol. 38.-№ 5-6.-P. 389-403.

174. Nunomura W., Takakuwa Y. Regulation of protein 4.1R interactions with membrane proteins by Ca and calmodulin Текст. // Front Biosci. 2006. -Vol. 11.-P. 1522-1539.

175. Oonishi Т., Sakashita K., Uysaka N. Regulation of red blood cell filtrability by Ca~ inflax and cAMP-mediated signaling pathways Текст. // Am. J. Physiol. 1997.-Vol. 273.-P. 1828-1834.

176. Pearson M., Mistry P. S., Ford P. M. Voluntary screening for hepatitis С in a Canadian federal penitentiary for men Текст. // Can Commun Dis Rep. -1995. -30. -№21(14). -P. 134-136.

177. Pfafferott C., Meiselman H. J., Hochstein P. The effect of malonyldialdehyde on erythrocyte deformability Текст. // Blood. 1982. - Vol. 59. - № 1. - P. 12-15.

178. Phillips P. G., Long Lu., Wilkins M. R., Morrell N. W. cAMP phosphodiesterase inhibitors potentiate effects of prostacyclin analogs in hypoxic pulmonary vascular remodeling Текст. // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2005. - Vol. 288. - L103-L115.

179. Pitter J. G., Szanda G., Duchen M. R. et al. Prostaglandin F2a potentiates the calcium dependent activation of mitochondrial metabolism in luteal cells Текст. // Cell Calcium. 2005. - V. 37. - Issue l.-P. 35-44.

180. Poredos P., Zizek B. Plasma viscosity increase with progression of peripheral arterial atherosclerotic disease Текст. // Angiology. 1996. - Vol. 47. - № 3.-P. 253-259.

181. Pries A. R., Secomb T. W., Gaehtgens P. Design principles of vascular beds Текст. // Circ Res. 1995. - Vol. 77. - № 5. - P. 1017-1023.

182. Pries A., Secomb T. Resistance to blood flow in vivo: from Poiseuille to the «in vivo viscosity law»// Biorheology. 1997. - Vol. 34. - № 4/5. - P. 369373.

183. Pries A., Secomb T. Rheology of microcirculation Текст. // Clin. Hemorheol. And Microcirc. 2003. - Vol. 29. - P. 143-148.

184. Quemada D. Rheology of concentrated disperse systems. A model for non-newtonian shear viscositi in steady flows Текст. // Rheol. Acte. 1978. — Vol. 17.-P. 632-642.

185. Rampling M. W., Meiselman H. J., Neu В., Baskurt О. K. Influence of cell -specific factors on red blood cell aggregation. Текст. // Biorheology. 2004. -№ 41(2). - P. 91-112.

186. Rasmussen H., Lake W., Allen J. E. The effect of catecholamines and prostaglandins upon human and rat erythrocytes Текст. // Biochim. Biophys. Acta. 1975.-№411.-P. 63-73.

187. Reilly D. Т., Quinton D. N., Barrie W. W. A controlled trial of pentoxifylline (Trental 400) in intermittent claudication: clinical, haemostatic and rheological effects Текст. // N Z Med J. 1987. - Vol. 22. - № 100(828). -p. 445—447.

188. Reinhart W. H., Singh A. Erythrocyte aggregation: the roles of cell deformability and geometry Текст. // Eur. J. Clin. Invest. 1990. Vol. 20. -P. 458-462.

189. Reinke W., Johnson P. C., Gaehtgens P. Effect of shear rate variation on apparent viscosity of human blood in tubes of 29 to 94 microns diameter Текст. // Circ Res. 1986. - Vol. 59. - № 2. - P. 124-132.

190. Richter C. Biophysical consequences of lipid peroxidation in membranes Текст. // Chem Phys Lipids. 1987. - Vol. 44. - № 2-4. - P. 175-189.

191. Robertson D., Johnson G. A., Robertson R. M. et al. Comparative assesment of stimuli that release neuronal and adrenomedullary catecholamines in man Текст. // Circulation. 1979. - Vol. 59. - P. 637-643.

192. Sabo A., Jakovljevic V., Stanulovic M., Lepsanovic L., Pejin D. Red blood cell deformability in diabetes mellitus: effect of phytomenadione Текст. // Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol. 1993. - V. 31. - № 1. - P. 1-5.

193. Saenko E. L., Yaropolov A. I. Studies on receptor interaction of ceruloplasmin with human red blood cells Текст. // Biochem. Int. 1990. -Vol. 20.-№2.-P. 215-225.

194. Sager G., Jacobsen S. Effect of plasma on human erythrocyte beta-adrenergic receptors Текст. // Biochem. Pharmacol. 1985. - Vol. 34. - P. 3767-3771.

195. Sakashita K., Oonishi Т., Ishioka N., Uyesaka N. Endothelin-1 improves the impaired filterability of red blood cells through the activation of protein kinase С Текст. // Jpn. J. Physiol. 1999. - № 49. - P. 113-120.

196. Saltiel A. R. Diversy signalling patways in the cellular actions of insulin Текст. // Am. J. Physiol. 1996. - V. 270. - E375-E385.

197. Santos R. F., Palmieri M. G., Wajchenberg B. L., Azhar S. Insulin-receptor tyrosine kinase activity is decreased in erythrocytes from non-obese patients with NIDDM Текст. // Horm Metab Res. 1994. - Vol. 26. - № 6. - P. 283-287.

198. Sauvage M., Maziere P., Fathallah H., Giraud F. Insulin stimulates NHE1 activity by sequential activation of phosphatidylinositol 3-kinase and protein kinase С zeta in human erythrocytes Текст. // Eur J Biochem. 2000. - Vol. 267.-№4.-P. 955-962.

199. Schmid-Schonbein H. Blood rheology in hemoconcentration Текст. // In. High Altitude Phisiol. And Med. N. Y. Springer. - 1982. - P. 109-116.

200. Schmid-Schonbein PI., Hoymann H., Goebel W. Erythrocyte aggregation and stasis: effect of intravascular sedimentation on microvascular perfusion in hypotension and treatment with defibrinogenization Текст. // Vasa Suppl. -1989.-Vol. 27.-P. 58-60.

201. Schneider R. Results of hemorheologically active treatment with pentoxifylline in patients with cerebrovascular disease Текст. // Angiology.- 1989.-Vol. 40. -№ 11. P. 987-993.

202. Schut N. H., van Arkel E. C., Hardeman M. R., Bilo H. J., Michels R. P., Vreeken J. Blood and plasma viscosity in diabetes: possible contribution to late organ complications? Текст. // Diabetes Res. 1992. - Vol. 19. - № 1. -P. 31-35.

203. Shin S., Ku Y. H., Suh J. S., Singh M. Rheological characteristics of erythrocytes incubated in glucose media Текст. // Clin Hemorheol Microcirc.- 2008. Vol. 38. - № 3. - P. 153-161.

204. Shin S., Ku Y., Babu N., Singh M. Erythrocyte deformability and its variation in diabetes mellitus Текст. // Indian J Exp Biol. 2007. - Vol. 45. - № 1. -P. 121-128.

205. Shyy J. Y., Chien S. Role of integrins in cellular responses to mechanical stress and adhesion Текст. // Curr Opin Cell Biol. 1997. - Vol. 9. - № 5. -P. 707-713.

206. Singh M., Muralidharan E. Mechanism of erythrocyte aggregate formation in presence of magnetic field and dextrans as analysed by laser light scattering Текст. // Biorheology. 1988. - Vol. 25. - P. 237-245.

207. Singh M., Shin S. Changes in erythrocyte aggregation and deformability in diabetes mellitus: a brief review Текст. // Indian J Exp Biol. 2009. - Vol. 47. -№ 1.-P. 7-15.

208. Sirin B.H., Yilik L., Co§kun E., Orta? R., Sirin H. Pentoxifylline reduces injury of the brain in transient ischaemia // Acta Cardiol.- 1998.-Vol. 53(2).-89-95.

209. Skalak R., Zhu C. Rheological aspects of red blood cell aggregation Текст. // Biorheology. 1990. - Vol. 27. - P. 309-325.

210. Sprague R. S., Bowles E. A., Olearczyk J. J., Stephenson A. H., Lonigro A. J. The role of G protein beta subunits in the release of ATP from human erythrocytes Текст. // J Physiol Pharmacol. 2002. - Vol. 53. - P. 667-674.

211. Stadel J. M., Nambi P., Shorr R. G., Sawyer D. F., Caron M. G., Lefkowitz R. J. Catecholamine-induced desensitization of turkey erythrocyte adenylate cyclase is associated with phosphorylation of the beta-adrenergic receptor

212. Текст. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1983. - Vol. 80. - № 11. - P. 31733177.

213. Starzyk D., Korbut R., Gryglewski R. J. Effects of nitric oxide and prostacyclin on deformability and aggregability of red blood cells of rats ex vivo and in vitro Текст. // J Physiol Pharmacol. 1999. - Vol. 50. — № 4. -P. 629-637.

214. Stoltz J. F., Donner M. Hemorheology: importance of erythrocyte aggregation Текст. //Clin. Hemorheol. - 1987. -№ 7. - P. 15-23.

215. Stoltz J. — F., Paulus F., Donner M. Experimental approaches to erythrocyte aggregation Текст. // Clin. Hemorheol. 1987. - № 7. - P. 109-118.

216. Stoltz J. F., Donner M. New trends in clinical hemorheology: an introduction to the concept of the hemorheological profile Текст. //Schweiz Med Wochenschr. 1991. - Vol. 43. - P. 41-49.

217. Sutton D. W., Schmid-Schonbein G. W. The pressure-flow relation in resting rat skeletal muscle perfused with pure erythrocyte suspensions Текст. // Biorheology. 1995. - Vol. 32. - № 1. - P. 29-42.

218. Takakuwa Y. Mohandas N. Ishibashi T. Regulation of red cell membrane deformability and stability by skeletal protein network Текст. // Biorheology. 1990. - Vol. 27. - № 3-4. - P. 357-365.

219. Tang L. C., Schoomaker E., Wiesmann W. P. Cholinergic agonists stimulate calcium uptake and cGMP formation in human erythrocytes Текст. // Biochim. Biophys. Acta 1984. - Vol. 772. - P. 235-238.

220. Tong W., Zhang J., Lodish H. F. Lnk inhibits erythropoiesis and Epo-dependent JAK2 activation and downstream signaling pathways Текст. // Blood.-2005.-Vol. 15.-№ 105(12).-P. 4604-4612.

221. Tuvia S., Moses A., Gulayev N. et al. Beta adrenergic agonists regulate cell membrane fluctuations of human erythrocytes Текст. // J. Physiol. - 1999. -Vol. 516.-P. 781-787.

222. Ursitti J. A., Pumplin D. W., Wade J. В., Bloch R. J. Ultrastructure of the human erythrocyte cytoskeleton and its attachment to the membrane Текст. // Cell Motil. Cytoskel. 1991. - Vol. 19. - P. 227-243.

223. Vekasi J., Marton Z., Kesmarky G., Cser A., Russai R., Kovacs B. Hemorheologic factors in hypertensive and diabetic retinopathy Текст. // OrvHetil.-2001.-Vol. 20.-№ 142(20).-P. 1045-1048.

224. Whitmore R. Rheology of the Circulation. Pergamon Press : Oxford, 1968. - 190 p.

225. Whittingstall P., Toth K., Wenby R. et al. Cellular factors in RBC aggregation: effects of autologous plasma and various polymers Текст. // Hemorheologie et agregation erythrocytaire. 1994. - Vol. 4. - P. 21-30.

226. Young M. J., Bennett J. L., Liderth S. A., Veves A., Boulton A. J., Douglas J. T. Rheological and microvascular parameters in diabetic peripheral neuropathy Текст. // Clin Sci (Lond). 1996. - Vol. 90. - № 3. - P. 183— 187.

227. Zail S. Clinical disorders of the red cell membrane skeleton Текст. // Crit Rev Oncol Hematol. 1986. - Vol. 5. - № 4. - P. 397-453.

Информация о работе

Булаева, Светлана Владимировна
кандидата биологических наук
Ярославль, 2010
ВАК 03.03.01

Диссертация

Роль эндокринных и паракринных механизмов в изменении микрореологических свойств эритроцитов в норме и при метаболических нарушениях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы