Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль дрожжевых полисахаридов в коррекции иммунного ответа на некоторые грибные антигены

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Роль дрожжевых полисахаридов в коррекции иммунного ответа на некоторые грибные антигены"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

БЛИНОВА

Наталья Николаевна

УДК 616-002.828:582.288.45:576.809.7

РОЛЬ ДРОЖЖЕВЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ В КОРРЕКЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА НА НЕКОТОРЫЕ ГРИБНЫЕ АНТИГЕНЫ

03.00.07 — МИКРОБИОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ — 1992

Работа выполнена в Санкт-Петербургском Химико-фармацевтическом институте Министерства здравоохранения России.

доктор медицинских наук профессор Г. Е. АФИНОГЕНОВ доктор медицинских наук профессор В. Г. КУБАСЬ

Ведущая организация — Научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения, Санкт-Петербург.

Защита состоится « && » Ш-ОНЯ 1992 года в /часов на заседании специализированного совета К 084.63.01 в Санкт-Петербургском Химико-фармацевтическом институте по адресу: 197022, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского Химико-фармацевтического института.

Научный руководитель — доктор биологических наук ВИТОВСКАЯ Г. А.

Официальные оппоненты:

Автореферат разослан « » ¿¿¿осе? 1992

года

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

КИРИЛЛОВА

Ьё51й5ьность_. ьспорогенпые дрож.чеподобные организмы рода Candida и вызываемые ими кандидозы по-пре>днеыу остаются предметом разностороннего изучения в лабораториях и клиниках различного процлля. ¿то обусловлено их значимостью не только в возникновение и развития самостоятельных нозологических £орм заболевании ( особенно на фоне нерациональной антибиотической терапии ), но и как оппортунистических инйекции при ослаблении иммунной системы макроорганизма, в том числе при Ciiiuie. Основным возбудителем кандидозов является вид Candida albicans, который наряду с другими видами этого гриба, например, используемым в биотехнологии Candida maltosa, откосится к разряду слабых антигенов, поэтому до сих пор б мире нет стандартных антигенных препаратов, которые могли бы быть использованы для изучения развития иммунного ответа в эксперименте и клинике, 5 том числе, в качестве диагностических и профилактических средств, ъот почему исследование nyiei. и механизмов трансформации ьнякгеишзс детерминант в клетках Gandida с целью повышения их ант^гзпыах свойств является актуальным и своевременным.

^ejibFJ яддхялось изучение возмо:шости химиче-

ской, трансформации полисахаридншс антигенных детерминант в составе i.-utok при обработке их натрия пер:;одатом и олределе-¡.kthbhoct.: пОСлеДких/в .¿.лунном ответа макроорганизма, 'ti*«'iiOb.rfHü. ^перв^е установлено, что один их основ-ню: ьандидо^а х:<иет бит в гранс(,лр;йирован из

разряд:; u:í.ülx антигенов ь разряд cwibfitóc с помощью реакции конт^о.-.и^. j.:oro окисления натрия njpi одьтом. иокезано, что ь ave ^.Одесса происходит модификация углеводных детер-; .ха^го^оь за счет образования свободных альдегидных i-p;íi!L, благодаря чему ¿.сзристьйт химическая реактогенностх) „0:1 ccxpuíCHíiia цолисахаридного кору антигенов в целом. .Уста-

новлено, что окисление грибных клеток натрия перйодатом сопровождается незначительным нивелированием межвидовой специфичности внутри рода Candida при сохранении межродовых антигенных различии. Выяснена "заинтересованность" альдегидных групп в образовании шшЬшовых оснований, стимулирующих антителогенез. Установлено, что окисленные клетки с.albicans обладают возросшей адгезивностыо к стеклу и лимфоцитам, благодаря чему ответная реакция на них некоторых клеточных компонентов иммунной системы более выражена ( повышенная фагоцитарная активность макрошагоБ, возрастание антителообразования ). В опытах на мышах доказан протективный эофект окисленных натрия перйодатом клеток с.albicans при экспериментальном канди-дозе.

Практическая_значшостьл 'предложенный метод химической модификации антигенных детерминант в клетках с.albicans с помощью UaJ04 пригоден для трансформации слабых грибных антигенов в сильные. Убитые, обработанные клетки с.albicans могут быть использованы при комплексном обследовании для выявления кандидоносмтельства у людей и в качестве вакцинирующих преиаратов для профилактики соответствующих заболеваний.

АпробациЯ_работы. материалы диссертации были представлены на 15—:л лиздународном специализированном симпозиуме по дрожал; ( Рига, 1УЬи ) и на втором международном микологическом симпозиуме "кшкозк и имиунодефицПты" ( Оанкт-цетербург, 1-У1 ).

и.ублиыдШ1п. по тема дассертацои опубликовано о работ.

Об-оем и структура ьдссортацаи. диссертация изложена на /У^странлцах машинописного текста и состоит пз введения, обзора л^тературы, <Р глав соОсте-знньл доследований, обсу.;:-' денпя полученных результатов, ьакдючойия и выводов. Работа

иллюстоирована оисунками, £ фотографиями, таблицами. Указатель литературы содержит .^"отечественных и 7'<^зару-бежных источников.

_Мате2иалы_и_методы_исследованиял Для исследований были отобраны следующие культуры микроорганизмов: С.albicans шт. 1080 (669/330 ), выделенный от больного, C.maltosa шт. ВСБ-869, используемый в производстве белка, Aspergillus fumigatus ^ 122; все они получены из коллекции НИО глубоких микозов СПбГЦЦУВа; Cryptососсus humi-oolus ИБФМу-984 и Cryp-Ьососсиз albidue ИБФМ 1643 предоставлены нам В.И.Голубевым ( институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН, г.Дущино ).

Морфолого-биохимические характеристики культур изучали согласно определителям Крегер-ван Рей ( 1984 ), В.И.Голубе-ва ( 1980 ), Пидопличко ( 1S53 ). Злектронную микроскопию выполняли на микроскопе фирмы " jeol;" Япония . Термообработку с .albicans , C.maltosa и Cr.humieolus осуществляли при 93°С в течение 20 минут, а мицелия Asp.fumigatus - при 100°С в течение 40 минут.

Перйодатному окислению подвергали взвесь двухсуточной тест-культуры определенной густоты. С этой целью нами были использованы растворы HaJ04 в концентрациях от 0.0019 М до 0.12 М; процесс вели при комнатной температуре в течение 1ч. Количество редуцирующих Сахаров в клетках с.albicans определяли методом Хагедорна-Йенсена. Полисахарид, образуемый Сг. albidus . осаждали из нативного раствора 96%-м этанолом после центрифугирования культуральной жидкости ( 6 тыс. об/мин, 15 мин ). Очистку полисахарида проводили цетавлоном ( Abercombie et al •. 1S£0 )• Полисахарид клеточных стенок С.albicans получали ^>-нафтольно-глицериновым методом ( Pulca-

zawa et al •. 1968 )• Перйодатное окисление полисахаридов, a также определение количеств поглощенного UaJO^ и выделяющейся НСООН проводили по известным методам ( Goldstein .»Ь al., 1965; Hay et al 1965 ). Оценку адгезивных свойств микроорганизмов к стеклу " Reanal" проводили с помощью установки оригинальной конструкции, разработанной в СПбГВДУВе. Иммунизацию белых беспородных мышей проводили взвесью клеток ( 5 -10^

кл/мл, 0.2 мл ) 1 раз в неделю в течение 2-х недель. Кроли-

/ 9

ков породы шиншилла иммунизировали взвесью клеток ( 10 кл/мл, 1 мл ) 2 раза в неделю в течение 3-х недель. Взвесь мицелия Asp.fumigatus в 0.85% растворе NaCl готовили по стандарту мутности после разрушения в дезинтеграторе микроорганизмов дискового типа ( А.с. № 440153 ). slide -агглютинацию выполняли по стандартной методике ( Вязов и др., 1967 ). Протективное действие корпускулярных вакцин из С.albicans изучали на белых беспородных мышах, заражаемых однократно интраперитонеально взвесью живых клеток гомологичной культуры в концентрациях LD-0 и 1 Dim через неделю после второй иммунизации. Обсемененность внутренних органов оценивали подсчетом количества клеток, приходящихся на 1 мг органа, после подсчета числа проросших колоний на сусло-агаре. Имму-ноферментный анализ ( ИФА) проводили известным методом ( Игнатьева, 1990 ). В ходе апробации модифицированных клеток в реакции ягглютинации ( РА ) и ИФА использовали 160 сывороток крови здоровых доноров и 13 сывороток больных кандидозом. Реакцию розеткообразования ( Николаев, Розгон, 1<>74 ) ставили с ллм/хщитауи гшше? и клетками с.albicans . Фагопитзр-нук активность макоохагальных клеток иммунизиоовкнных мы-шеч определяли в отношении у. итоГ, культуоы с.albicans .Статистическую о-'.раоотку данных проводили по ГСОТу 11.004-74.

Исходя из установленных данных о. наличии преимущественно термостабильных антигенов в клетках с.albicans ( Fulcazawa Y. et al 1961, 1988 , а также о том, что'специфическими группами антигенов этого вида являются маннаны установленной структуры ( Блинов Н.П., 1963, 1984 J, мы решили несколько видоизменить антигенные детерминанты клеточной стенки, используя для этого натрия перйодат. Идея основывалась на том, что контролируемая обработка с.albicans раствором NaJO^ сопровождается образованием альдегидных групп в соответствующих остатках маннозы, что должно приводить к частичной модификации антигенных детерминант тест-культуры вследствие возрастания.химической реактогенности соответствующих структур в целом.

н^ L t?*

'п +nNaJQif

их СН20И

О 1

п

О

(f

т

Рис. 1. Окисление антигенной детерминанты c-.albicans натрия перйодатом.

Образование альдегидных групп в процессе обработки тест-кулъ-

ТУРЫ Ha.ro подтвердили в опытах с применением реактива Шиффа. 4

Б предварительных экспериментах с использованием иммунных

сывороток крови белых беспородных мышей против термически убитой те_ст-культуры было установлено, что РА с исходным антигеном не регистрируется. Клетки с.albicans . обработанные натрия перйодатом, агглютинировались антителами против вышеупомянутого антигена. Таким образом, была показана принципиальная возможность повышения чувствительности антигенов тест-культуры при обработке их натрия перйодатом.

Поскольку повышение антигенности c.albicann . по нашему мнению, в данном случае связано с увеличением числа альдегидных групп на поверхности клеток, мы определяли величину ( процент ) редуцирующих Сахаров и антигенность модифицированных клеток при обработке с.albicans натрия перйодатом разной мо-

лярности I рис. 2 ). Редуцирующие

диТшцированных клетках С.albicans от концентрации применяемого для окисления натрия перйодата.

С повышением молярности раствора NaJO^ при обработке им клеток С.albicans происходило возрастание процента редуцирующих Сахаров, а следовательно, и количества свободных альдегидных групп. Обработка клеток тест-культуры раствором натрия перко-

дата в концентрациях 0.03 М и выше сопровождалась образованием в клетках с.albicans предельного количества альдегидных групп. Модификация клеток растворами uaJO^ в тех же концентрациях была оптимальной и с точки зрения достижения максимальных титров антител ( рис. 3 ). Клетки о.albicans , обработанные 0.06 М NaJO^ , в РА с сыворотками крови иммунизированных мышей давали наиболее выраженную агглютинацию ( по величине агглютината и скорости его образования J. Тидр антител

im

1:256-!■■№

i>3&. 146

v в r-ч-

d-Z-

rti

rfi

Щ

0.0019 O.OOS& 0.007? OOiS

Ш1 ДО I I XI ЦИ ЦИ - цикл иммунизации

rtl

0-03

rfi

0- 06

L

J22—L Молярам ность NaJO.

Рис. 3. Агглютинация окисленных клеток с.albicans сыворотками крови мышей, иммунизированных термически убитой гомологичной культурой.

На представленных ниже снимках видно, что с повышением концентрации окислителя происходило постепенное разрыхление клеточной стенки, начиная с ее наружного слоя; наблюдали также частичную деструкцию цитоплазмы и вакуолизацию клеток в целом.

-ю-'

Фото I, 2. Электронно-микроскопические снимки с.albicans шт. J.i 1080 (669/330), ( * 60.000 ): наивные ( фото I ) и окисленные 0.06 М MaJ04( фото 2 ). Обозначения: КС - клеточная стенка, ШМ - цитоплазматическая мембрана, М - митохондрии, ЖЕ - жировые капли, ЦБ - центральная вакуоль.

/

qoto i.

Установлено, что в процессе химической модификации клеток

С.albicans происходит быстрое взаимодействие их гликановых

структур с NaJO . благодаря чему можно значительно сократить 4

время обработки тест-культуры по сравнению с полисахаридом, получаемым из нее р-нафтольно-глицериновым методом ( рис. 4 ). Такая разница в скорости окисления объясняется, вероятно, большими доступностью и упорядоченностью гликановых структур в клетках с.albicans . что немаловажно для довольно крупных молекул йода.

мл O.OIh

-i-í-

¿ч

72 НО

.часы

Рис. 4. Поглощение натрия перйодата при окислении полисахарида клеточной стенки (1) и клеток (2) С.albicans.

Усиление антигенных и иммуногенных свойств модифицированных клеток может происходить не только благодаря возрастанию числа функционально активных альдегидных групп в углеводных детерминантах корпускулярных антигенов, но и благодаря возможным взаимодействиям карбонилов с белками in situ или in vivo. Альдегидные группы на клеточной поверхности с.albicans могут образовывать основания Шиффа в качестве интермедиатов, обеспечивающих благоприятное протекание и завершение иммунохимиче-ских реакций ( рис. 5 ). Для исключения возможной спонтанной агглютинации окисленного антигена любыми белками были поставлены реакции с модифицированными клетками с.albicans и бел-

ками различного происхождения ( табл. 1 ).

+R-NH*

Н^с сяон R-/W-О,

J tn-

Рис. 5. Образование оснований Шиффа в окисленной антигенной детерминанте С.albicans.

Таблица 1

Агглютинация окисленных клеток с.albicans различными белками.

Белок Титры антител

Альбумин сыворотки крови человека (35-45 мг/мл) не выявляются

Пероксвдаза из хрена ( 3545 мг/мл) не выявляются

Сыворотка крови мышей после введения: 1). 0.85$ ИаС1 2 ). окисленных клеток С.albicans после 1,2 ЦИ 1:4 - 1:13 после 1 ЦИ 1:4 - 1:13 после 2 ЦИ 1:490 - 1:1010

Сыворотка крови кроликов после введения: l). 0.85$ НаС1 2). окисленных клеток С.albicans посте 1-5 ¡¡Л 1:14 - 1:22 после 1-3 ЦИ 1:1£ после 4 ЦИ 1:35 - 1:57 по :ле 5 Щ 1:155 - 1:228

По негативным результатам реакттп можно сделать вывод о кон-формационной стабильности кора окисленного антигена с.albicans , индуцирующего образование повышенного количества антител за счет возрастания числа альдегидных групп. Аналогичный ьывод можно сделать на основании сходства данных, полученных в результате использования неокисленного и окисленного антигенов в ИФА с применением сывороток крови иммунизированных мышей и кроликов. При сравнении антигенов, приготовленных путем окисления нативных и убитых клеток с.albicans . установлено, что химическая модификация натрия перйодатом нативной тест-культуры также приводит к повышению ее антигенности, однако, предварительная термообработка клеток сопровождается • большим повышением функциональной активности иммунной системы экспериментальных животных после интраперитонеального введения соответствующих препаратов ( рис. 6 ).

Титры антител

¿гм-

i'SV-ш i:/6\

J: г

'is

5Г

5S

й

К1

+

м IÄ

it "»I

ri" ■V

5s щ

if

Антиген в FA:

живые окисленные клетки С.albicans

I I убитые окисленные клетки С.albicans

хибыв oxt/c- yiti/пые леиные ленные

Рис. 6. Агглютинация окисленных клеток с.albicans сыворотками мышей, иммунизированных убитой гомологичной культурой.

Данные о процессе окисления HaJO^ нативных и убитых клеток с.albicans представлены на рис. 7 и 8.

мл O.OIh NaOH

мл Q.OIh J.

k

3+

2—

Ultimi"

V

-мин

■so зо so 70 go

i-1 убитые клетки

Рис. 7. Поглощение najo

4

нативными и убитыми клетками С.albicans.

10 зо so ic ¿э ---■ живые клетки

•мин

Рис. 8. Выделение НСООН в ходе перйодатного окисления клеток с.albicans. Установлено, что после обработки клеток с.albicans натрия перйодатом у них возрастает адгезия к стеклу по сравнению с убитой тест-культурой ( табл. 2 ).

Таблица 2

Адгезия термически убитых клеток с.albicans к стеклу до и после обработки их натрия перйодатом.

Клетки С.albicans Отношение числа адгезирован-ных клеток к количеству не-адгезированных

убитые окисленные 2.46 1 0.26

убитые неокисленные 0.49 ± 0.07

На основании приведенных данных можно было бы предположить, что окисленные клетки будут склонны к спонтанному склеиванию. Однако, их агглютинация специфическими иммунными сыворотками характерна морфологическими особенностями агглюти-

ната ( крупнохлопчатый или крупнозернистый ) и скоростью его формирования ( секунды - минуты ). Кроме того, результаты РА гетерологичных антигенов противокацпидозными сыворотками подтверждают ранее полученные данные об отсутствии какого-либо существенного вклада адгезии к стеклу в образовании специфических агглютинатов ( рис. 10 ).

Титры антител

i mí im im am-

1:641-12 i:i6-iS i-к i¡¿

«s-

Сыворотка от введения:

У//Л окисленных клеток С.albicans

í» ÍT

"а

окисленных таеток С.maltosa

к\\Ч окисленных клеток СГ .]ИШ1С01и8

| окисленного мицелия

Рис. 10а. Агглютинация окисленных грибных антигенов сыворотками мышей, иммунизированных убитой культурой с.а1Ысапз.

Титры антител

1:512:

i-.ы-i:m

Í-Í4-P12-i-i6-ib-М-

ii i

1

I

5*

ir

Антиген:

окисленные клетки

С.maltosa

окисленные клетки Cr.humicolus

окисленный мицелий

Азр .fumi¿atus

Рис. 106. Агглютинация окисленных грибных антигенов гомологичными мышиными антисыворотками.

Как видно, между представителями рода Candida ( С.albicans и с.maltosa ) имеется высокое антигенное родство. При постановке РА с окисленными клетками других грибов мы наблюдали различия не только в регистрируемых титрах антител, но также во внешнем виде агглютината и скорости его образования. При постановке РА с гомологичными антисыворотками { рис. 10б) интенсивность реакций, как и в первом случае, возрастала в ряду: Aspergillus —*■ Cryptococcus —Candida. Сравнивая представленные данные, можно утверждать, что обработка клеток натрия перйодатом н§ сопровождается нивелированием межродовых различий грибных антигенов, однако, способствует незначительному возрастанию межвидовой неспецифичности.

При использовании убитых окисленных клеток тест-культуры в качестве своеобразного диагностякума для определения противокандидозных антител были проверены сыворотки крови больных и здоровых людей. Модифицированная тест-культуоа как антиген в РА обладала повышенной чувствительностью по сравнению с живой и особенно с убитой с.albicans • Ее применение в РА позволило обнаружить антитела с титоом 1:128 в 68% сывороток крови больных кандидозом людей i табл. 3 ).

Таблица 3

Агглютинация клеток С.albicans сыворотками крови больных кавдвдозом людей.

Антиген в РА Титры антител

нативные клетки с.albicans 1:28 - 1:52

убитые неокисленные клетки с.albicans 1:2 - 1:3

убитые.окисленные клетки С.albicans 1:111 - 1:125

Выявление противокандидозных антител с титром 1:128 при использовании в качестве антигена окисленных клеток с.а1ЫоаЕз свидетельствует о возможной кандщюзной инфекции или длительном миконосительстве приблизительно у 2% доноров крови ( рис.и).

к (%)

среди общего числе сывороток крови доноров.

Рис. И. Агглютинация клеток с.albicans сыворотками крови доноров.

На основании результатов И?А I рис. 12 I можно сделать вывод о том, что и з этом случае окисленныг антиген являлся более чувствительным по сравнению с убито-'! тест-культурой.

Оптическая плотность

Антиген: >--" убитые клетки С.albicans

I-1 убитые окисленные клетки

С.albicans

Титры антител

' Рис. 12. Результаты ИФА с использованием сывороток крови двух кандидозных больных ( I, 2 ) и с применением в качестве антигенов убитых окисленных и неокисленных клеток с.albicans .

Протективный эйс&ект окисленных клеток с.albicans изучали на белых беспородных мышах, заражаемых интраперитонеально завой. гомологичной культурой ( рис. Tö ). При введении с.albicans в дозе ld&0 100/2 иммунизированных животных оказывалось защищенными; при заражении 1 Ulm выживаемость достигала 605» при ЮО^-нои гибели в контроле. Более выраженный протективныи эффект окисленных клеток С.albicans по сравнению с убитой тест-культурой регистрировали и в опытах по исследованию обсе-мененности внутренних органов иммунизированных мышеи после их заражения живой гомологичной культурой ( рис. 14 ).

для выяснения роли ¿г-лимфоцктов в возрастании гуморально-.го ответа на модифицированные клетки с.albicans при введении их в макроорганизм ставили реакцию розеткообразования клеток тест-культуры с лимфоцитами селезенки иммунизированных мышек ( рис. 15 ). Как видно из рисунка, иммунизация с.albicans

способствует возникновению гуморального ответа на данные клетки ( примерно при одинаковом их количестве в контрольной и опытных группах ). Лимфоциты селезенки контрольных животных не, образовывали розеток ни в одном случае, лимфоциты иммунизированных мышей активно вступали во взаимодействие с обработанными натрия перйодатом клетками с.albicans • При этом адгезия была непосредственной и опосредованной, когда окисленные клетки аггломератами группировались вокруг лимфоцита. Убитые не-окисленные клетки с.albicans также формировали розетки вокруг иммунных лимфоцитов, но число присоединившихся клеток при этом не превышало 2-х.

Рис. 13. Выживаемость контрольных (I) мышей и иммунизированных убитыми (2) и окисленными (3) клетками с.albicans после заражения kuboL гомологичной культурой в дозах ld50 (а) и 1 Dim (б).

Чиоло клеток в I мг органа

Иммунизация: убитыми клетками С.albicans окисленными клетками с.albicans

селезенка печень

i 2 3 Ч S б 7 в 9 J0 Л J2

Сутки после заражения

ванных клетками с.а1Ысаяз мышей после заражения их живой гомологичной культурой.

Процент РОК

30 20 JO

№ 30 го

JO io

pbi

i-г

£

i-Z

Г7

Л

S-JO >10

uh

T7Ö

s-ч

5-iO

1 I реакция с убитыми клетками С.albicans

l-v.vj реакция с окисленными клетками с.albicans

>io

число присоединившихся к лимфо-' ШТу клеток C.albicana

Рис. х4. ибсеменешость внутренних органов яимушзиро

Рис-. 16. реакция розеткообразования между ьлеткамис.albicans и лимфоцитами контрольных мышеи (А) и иммунизированных убитыми (В) и окисленными (С) клетками тест-культуры.

для выяснения роли клеточного ответа макроорганизма при иммунизации определяли характер качественных и количественных изменений в составе перитонеальных лейкоцитов мышей. Установлено, что после иммунизации происходило незначительное ( около 1% ) повышение количества макрофагов и уменьшение ( около-2% ) количества нейтрофилов в обеих группах животных. Фагоцитарная активность макрофагов ( табл. 4 ) возрастала е среднем на 10% при переходе от группы контрольных животных к группе иммунизированных неокисленными клетками и от последней к группе иммунизированных окисленной тест-культурой. Фагоцитарная активность нейтрофилов оставалась приблизительно одинаковой.

Таблица 4

Фагоцитарная активность перитонеальных-лейкоцитов мышей, иммунизированных клетками С.albicans.

Перитонеаль-ные лейкоциты

ыакрофаги

иеитроцшлы i_____

^дмунизация

убитыми клетками С .albicans

43.44± 4.26'

I.-.4 ± 0.09

окисленными клетками С.albicans

50.25 i 4.S7

2.± О.Ы

введение НаС1

31.5*3.5 2 ¿0.71

процентное содержание клеток от общего числа перитонеаль-ных лейкоцитов

i.a основании пшведевшзс данных моано сделать вывод о том, что :кзлукизация окислзннши ыюткслл!с.albicans ведет к су-

щественному повышению гуморального ответа макроорганизма, вызванного образованием антител, а также к изменению клеточного ответа, связанного с возрастанием антигенпредставляющей функции макрофагов.

Выводы.

1) На примере Candida albicans шт. 1080 (669/330) установлено, что один из основных возбудителей каадидоза может быть трансформирован из разряда слабых антигенов в разряд сильных с помощью реакции контролируемого окисления натрия переодетом.

2) В результате исследования кинетики реакции окисления предложена схема приготовления химически модифицированных клеток. Показано, что концентрация используемых для этих целей растворов натрия перйодата должна быть не менее 0.03 М.

3) В процессе' окисления клеток С.albicans происходят следующие изменения: а) углеводные детерминанты антигенов модифицируются за счет образования свободных альдегидных групп, благодаря чему возрастает реактогенность при сохранении стабильности полисахаридного кора антигенов в целом;

tí) основания Шиффа, формирующиеся in situ в клетках или in vivo за счет взаимодействия свободных альдегидных групп и аминогрупп белков, оказываются важным звеном в ивдукшга антителообразования в процессе иумунизадии макроорганизма окисленными клетками;

в) возрастание антигенной активности окисленных клеток сопровождается незначительным нивелированием межвидовой специфичности внутри рода Candida при сохранении межродовых антигенных различий.

-234) Доказано, что окисленные клетки с.albicans обладают возросшей адгезивностью к стеклу и лимфоцитам, благодаря чему ответная реакция на них некоторых клеточных компонентов иммунной системы более выраженная ( повышенная фагоцитарная активность макрофагов, более выраженное антителообразование).

5) Предлагаемый нами окисленный антиген с.albicans может быть использован при комплексном обследовании для выявления кавдидоносительства у людей.

6) При сравнительном анализе сывороток крови доноров и больных кавдидозом людей показано, что титры агглютининов не ниже, чем 1:128, являются прогнозирующими для кавдидозной инфекции.

7) Доказан выраженный протективный эффект окисленных натрия перйодатом клеток с.albicans! при заражении вакцинированных белых мышей гомологичной культурой в дозе ld5Q 100$ животных оказывалось защищенными, при заражении 1 Dim выживало 60$ мышей при 100$-ной гибели в контроле.

8) Предложен простой и удобный метод для приготовления высоко антигенных вакцин и диагностикумов.

Основное содержание, диссертации изло-ё§но_в_след2Ших_2§ботах2

1. Блинова Н.Н., Битовская Г.А. Роль детерминантних групп антигенов в детеклии иммунного ответа // Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации: Тез. докл.Всес.конф. -Л.,1985.-С.18.

2. Блинова Н.Н., Перекалина Т.А., Ершова Л.М. Исследование влияния модифицированных микробных клэток на некоторые защитные реакции организма // Современные проблемы получения лекарственных препаратов: Тез.докл.конф.молодых ученых. -Л., 1991.-С.80.

-243. Блинова Н.Н., Витовская Г.А. Модификация антигенной активности клеток Candida albicans (Robin) Berkhout, 1923 // Микол. и фитопатол. 1991. Т.25, вып. 4. С. 312-317.

4. Епинова Н.Н., Витовская Г.А. Антигенная активность и им-муногенность клеток Candida albicans (Robin) Berkhout .обработанных периодатом натрия // Микол. и фитопатол. 1991. Т.25, вып. 5. С. 398-401.

5. Elinova N. The chemical modification of yeast surface // Abstracts of the 15-th International Specialized Symposium on Yeasts. Riga, 1991.

6. Елинов Н.П., Васильева H.B., Блинова Н.Н., Кашкина М.А., Витовская Г.А.- Вклад антигенной информации в понимание механизмов развития иммунитета при .некоторых микозах // Микозы и иммунодефицита: Тез.докл. Второго Междунар. микол. симп. СПб,1991.

Подписано к печати т. формат бумаги 60x84 1/16, ПО - 3 "Ленуприэдата". 131104 Ленинград, Литейный пр.

. Заказ «/й? . Тираж печ.л. Бесплатно.

, дом № 55.