Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль Д2 и Д3 рецепторов дофамина в пресинаптической регуляции центральной дофаминергической нейропередачи

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Роль Д2 и Д3 рецепторов дофамина в пресинаптической регуляции центральной дофаминергической нейропередачи"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им.М.В. ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ПА ПРАВАХ РУКОПИСИ

СОТНИКОВА Татьяна Дмитриевна

/7) / /¿7

РОЛЬ Д2 И ДЗ РЕЦЕПТОРОВ ДОФАМИНА В ПРЕСИНАПТИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ ЦЕНТРАЛЬНОЙ ДОФАМИНЕРГИЧЕСКОЙ НЕЙРОПЕРЕДАЧИ

03.00.13 - физиология человека и животных 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1996 г.

Работа 1 выполнена в лаборатории нейрохимической фармакологии НИИ фармакологии РАМН (директор - член-корреспондент РАМН, профессор С.Б.Середенин)

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

член-корреспондент РАМН, профессор К.С. Раевский

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор Т.А. Воронина г -

Доктор биологических наук, профессор А.А. Каменский

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ - НИИ нормальной физиологии РАМН имени П.К-Анохина

Защита диссертации состоится "// " ьЛ/г. в ' ^ часов на -асцданви Спецаализированного Ученого Совета Д 053.05.35 при Московском Государственном Университете им. М. В Ломоносова по адресу^_11?899, Москва, Воробьевы Горы, МГУ, Биологический факультет у СИ^^ £) ¡с) гч

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им. М-ВЛсмонвсова

Автореферат разослан " шиххи^*-1996 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат биологических наук Умарова Б.А,

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

сгуальность теми. "Интерес к изучению- механизмов дофаминергической ¡йропередачи в мозге обусловлен хорошо известно» ролью последней в :уществлении двигательных, когнитивных, нейроэндокринных функций, а также «можным участием в патогенезе ряда важнейших нервно-психических болсваний: болезни Паркннсона, Альцгеймера, шизофрении и некоторых )угих (Carlsson, 1975; Roth, 1983; Э.Б.Арушанян, 1985; К.С.Раевский, 1995а).

Достижения молекулярной биологии последних лет существенно изменили эедставления о гетерогенности рецепторов дофашта (ДА), которые относятся большому семейству метаботропных рецепторов нейромеднаторов и гормонов libley et al., 1994). В настоящее время известно по крайней мере пять основных эдтипов этих рецепторов, среди которых принято выделять семейство Д1-одобных, состоящее из Д1 и Д5 подтипов рецепторов, семейство Д2-подобных, шочающее Д2, ДЗ и Д4 подтипы рецепторов (Jajvie and Carón, 1993). Важно гметить, что только Д2 и ДЗ подтипы рецепторов локализованы ресинаптически и могут рассматриваться как ауторецепторы, участвующие, по еханизму обратной связи, в пресинаптической ауторегуляшш офаминергической нейропередачи, оказывая.влияние на импульсную активность эфаминергичеекмх нейронов, синтез, высвобождение и метаболизм ДА (Arbila nd Langer, 1981; Sokoloff et al., 1990; Cooper et al., 1990; Carlsson, 1991). ДЗ гцепторы ДА отличаются от ранее описанных Д2 рецепторов как своими олекулярными свойствами, так и распределением в мозге - предпочтительно в кмбических структурах мозга. Основная, фармакологическая особенность ДЗ ецепторов ДА проявляется в их высоком сродстве к агонистам ДА и равнительно низком сродстве к типичным (каталептогенным) нейролептикам, ажно отметить, что атипичные (некаталептогенные) нейролептики в сравнении с ипичными облапают относительно более высоким сродством к ДЗ рецепторам [А (Sokoloff et al., 1990; Levesque et al., 1992).

Ранее'было показано, что атипичные и типичные нейролептики по-разному лияют на процессы высвобождения и синтеза/метаболизма ДА в дорзальном триатуме (lmperato and Angelucci, 1989; Rayevsky et al., 1993; Gainetdinov et al., 994) и прилежащем ядре (Waters et al., 1993) мозга крыс. Эти и ряд других шблюяений позволили предположить, что различия в функциональной роли Д2 и

ДЗ ауторсцептороБ . Л определяются разной степенью влияния на процес высвобождения ДА, с одной стороны, и его синтеза/метаболизма, с другой. ■

Среди психотропных средств, используемых в лечении психичесх заболеваний, центральное место принадлежит нейролептикам - веществам, основе терапевтического эффекта которых лежит уникальное антипсихотическ действие (В.В.ЗакусовШЗ; К.С.Раевский, 1976; 1992; 19956; Г.Я.Авруцкий А.А.Недува, 1988). Поиск новых нейролептиков среди производных разм химических рядов, в том числе гамма-карболина, аренамвдов и др. протяжении ряда лет ведется в НИИ фармакологии РАМН, где синтезирован изучен ряд оригинальных соединений, проявляющих нейролептическз потенциал при достаточно низкой каталептогенной активности (Н.К.Баркс 1973; В.А.Загоревский и соавт., 1988). При прогнозировании терапевтическо потенциала и возможного побочного действия нейролептиков важны\ представляются данные о нейрохимическом, в том числе рецепторном профш препарата. Особенное значение в свете представлений о гетерогенное] рецепторов ДА приобретают данные об участии ДЗ рецепторов ДА в механизм действия нейролептиков (Sokoloff et al., 1990). Постулируется, что последи* наряду с Д4 рецепторами ДА могут рассматриваться как специфические мишен антипсихотического эффекта (Sokoloff et al., 1990; Seeman, 1993). Интерес изучению функциональной роли ДЗ рецепторов ДА в последнее врем существенно возрос в связи с недавно опубликованными данными молекулярно генетических исследований о возможной ассоциации мутации аллели гена Д рецепторов с биполярными аффективными расстройствами, а такж шизофренией (Parsian et al., 1995; Kennedy et al., 1995). Принципиально новы возможности для анализа рецепторных механизмов, ответственных з поддержание дофаминергаческого баланса мозга, открываются благодаря использованию метода внутримозгового микродиализа на свободноподвижньс животных. Данный подход, основанный на стереотаксической имплантации i ткань мозга микродиализного зонда с последующей перфузией и химически* анализом диализата, позволяет оценивать состояние и динамику процессе! дофамикергической нейропередачи при сохранении целостности регуляторньо механизмов мозга (Ungerstedt, 4984; Imperato and Di -Chiara, 1985). Целью данного исследования явилось изучение функциональной роли Д2 и ДЗ дофаминовых рецепторов в ауторецепторной регуляции процессов биосинтеза,

.'.свсбождения и метабол;:.'-а дофамина б базальных ганглиях мозга крыс, а

кже сспени их вовлечения в м-ханизм действии антипсихотечесюк вешеств. - - ----

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи: Изучить влияние предпочтительных антагонистов Д2 и ДЗ рецепторов ДА на лсвобожденне и метаболизм дофамина в дорзальном стриатуме юбодноподвижных крыс при системном и локачьном введении. Избить влияние селективного агониста ДЗ дофаминовых рецепторов 7-ОН-РАТ на синтез, высвобождение и метаболизм дофамина в дорзальном стриатуме прилежащем ядре мозга крыс in vivo.

Изучить влияние 7-OH-DPAT на показатели двигательной активности крыс.

Используя метод микродиализа, оценить нейрохимический профиль стивности транс-изомера атипичного нейролептика карбидина. Определить сродство цис- и транс-изомеров карбиаина к Д2 и ДЗ рецепторам А. •

Используя количественный микродиализный метод определения точки улевого переноса вещества ("point of no net flux") оценить динамику «клеточной концентрации предпочтительного антагониста ДЗ дофаминовых гцепторов транс-карбидина и селективного агониста ДЗ рецепторов 7-OH-DPAT дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс.

[аучная новизна работы. Впервые методом внутримозгов'бго мйкродиализа роведено сравнительное изучение предпочтительных антагонистов Д2 и ДЗ гцепторов ДА, а также селективного агониста ДЗ рецепторов ДА на синтез, ысвобождение и метаболизм дофамина в дорзальном стриатуме и прилежащем цре свободноподвижных крыс. Сформулирована и экспериментально обоснована шотеза, согласно которой ДЗ рецепторы ДА преимущественно вовлечены в ресинаптическую регуляцию высвобождения ДА, в то время как Д2 рецепторы онтролируют биосинтез ДА в базальных ганглиях мозга крыс. Впервые пределена внеклеточная концентрация предпочтительного антагониста ДЗ ецепторов ДА транс-изомера карбидина и селективного агониста ДЗ рецепторов [Д 7-OH-DPAT в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс, [аучио-практическое значение работы. Использованная- в данной работе схема кспёриментов ' "может" -быть рекомендована в качестве тест-системы для ыявления прямого влияния новых фармакологически активных соединений, в ом числе с потенциальной нейролептической активностью, на

нейрохимические : хщессы пресинаптического уровня, обеспечиваюн центральную дофаминергическую передачу. В результате проведенн исследований определены функциональные различия в механизме действия Д^ ДЗ дофаминовых рецепторов при использовании различных селективных агент« среди которых наибольший интерес представляют типичные и атипичн нейролептики. Установленные в данной работе отличия в механизме их действ имеют большое значение для дальнейшего направленного поиска нов] нейролептиков с атипичным профилем действия. Определен нейрохимически профиль производного- гамма-карболина транс-изомера карбидина, что позволи. охарактеризовать его в качестве предпочтительного антагониста ДЗ рецептор» ДА с потенциальной атипичной нейролептической активностью. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференци "Организованный мозг" НИИ Мозга РАМН (Москва, 1993); II международно конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности психотропным веществам"-{Москва, 1993); на VIII международной Сардинско конференции по нейронаукам (Сардиния, 1995); на II международно нейрохимической школе молодых ученых (Оказаки, 1995); на XV конгрес международного общества нейрохимии (Киото, 1995); на международной школ молодых .ученых "Нейрональная пластичность, травма и регенерация"- (Эльба 1995); на I съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград 1995); на межлабораторном семинаре НИИ фармакологии РАМН (Москва, 1996) на межлабораторном семинаре Биологического факультета МГУ (Москва, 1996) По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ. Структура диссертации. Представленная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав результатов исследования, заключения, выводов и списка литературы, содержащего отечественных и зарубежных источников. Диссертация изложена на страницаЬс машинописного текста, содержит 5 таблиц и'43 рисунка.

Материалы и методы исследования

Материалы исследования, ,,< ... ■ -

Работа проводилась на 385 крысах - самцах линии Вистар, весом 180-280 г. Содержание моноаминов и их метаболитов в диализатах анализировали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США), снабженном инжектором Rheodyne 7125 с петлей на 20 мкг, для нанесения

разцов. Изучаемые вещества разделим на обращенно-фазной колонке (3x150 !, C1R, 5 мкм, МНПП Элсико, Москва; Ultraspheré ODS, 5 мкм, 4.6 х 150 мм; )S, 3 >'кл:, 1x10мм, SepStik, BAS, West Lafayette, IN, USA) и определяли жрохимически. используя амперометрический детектор LC-4B с ячейкой TL-5 nmtlett, 1980; Gainetdinov et al., 1991). Имплантирование микродиализной обы в мозг животного проводили при помощи стереотахсического прибора ivid Kopf Instalments (США). Для перфузии раствора Рингера через :кродиализную пробу использовали щприцевой насос (Braun Perfusor VI, рмания). Для оценки параметров двигательной активности животных пользовали автоматизированный аппарат "открытое поле" (модель "Родео-2").

В исследовании использовали следующие вещества: пшоперндол, спиперон За - Janssen Pharmaceutics, Бельгия), тасршшии (Polfa, Польша), клозапин rzneimittelwerk, Дрезден, Германия), тиопроперазин (Rhone Poulenc, Париж, эанция), иис-(+)-( 1 S,2R)-5-MeTOKcH-1 -метил-2-(п-пропиламино) тетралин, (+)-76 , цис-(+)-(15,2К)-5-метокси-1-метил-2-(п-ди-пропиламино) тетралин, (+)-Я232 (оба - Upjohn, Kalamazoo, США), цис- и транс-изомеры карбидина (НИИ фмакологии РАМН, Москва, Россия), 7-rwipoKCH-N,N-ÄH-n-npomtri-2-[инотетралин, 7-OH-DPAT (RBI, США).

Летод внутримозгового микродиализа на свободноподвижных крысах

Животных анестезировали хлоралгидратом (400 мг/кг, внугрибрюшинно) и >мещали Ъ стереотаксический прибор. Трансцеребральную микродиализную :мбрану (тип AN-69, проницаемость до 15000 Да, "Hospaî", Италия) с .утренним вольфрамовым стержнем имплантировали в дорзальный стриатум или млежашее ядро по координатам АР+2, V-4 и АР+2.5, V-6 относительно брегмы, ответственно (Paxinos & Watson, 1982). К концам диализной мембраны »иклеивались металлические трубки (d=0.8 мм), которые крепились к черепу с »мощью акрилоксида. После операции животных помещали в клетки со ободным доступом к воде и пище. Перфузию раствором Рингера (состав в мМ: аС1 147, СаС12 1.5, KCl 4, pH 6.0) проводили через 24-48 часа после операции с >мощью щприцевого насоса со скоростью 2.7 мкл/мин.

Сбор образцов диализата начинали через 1-1.5 ч после начала перфузии, «ализаты собирали каждые 20 мин и анализировали без дополнительной [истки методом ВЭЖХ\ЭД. После получения ' 3-4 базальных образцов квотным вводили вну1рибрюшинно либо локально (в исследуемую структуру эзга) вещества или физиологический раствор и собирали диализат в течение следующих 2 ч. Среднее значение содержания Ь-3,4-дигидроксифенилаланина ,-ДОФА), ДА, диоксифенилуксусной кислоты (ДОфУК) и гомованилиновой 4слоты (ГВК) в образцах диализата до введения препаратов принимали за 100% юзальный уровень). Эффекты веществ выражали в процентах к базальному ювню.

зучение динамики экстраклеточных концентраций дофамина и его метаболитов базальных ганглиях мозга крыс

Для определения концентрации ДА, ДОФУК и ГВК в диализатах эрзального стриатума и прилежащеуо ядра мозга свободноподвижных крыс в. iHCCTSe подвижной фазы для хроштографического анализа использовали 0.1 M итратно-фосфатный буфер, содержащий 0.3 ММ октансульфоната натрия, 0.1 M ЭДТА и 7% аиетонитркла (pH 3.6). Детекцию осуществляли на

стеклоуглеродном рабочем электроде при +0,75В против Ag/AgCl элекгро, сравнения.. При данных условиях анализа предел детекции для ДА составил 4 пг Изучение биосинтеза дофамина в базальных ганглиях мозга крыс in vivo условиях перфузии 3-оксибензилгидразина. ингибитора декарбоксилазы ' ароматических аминокислот

Из-за низкого базального экстраклеточного уровня L-ДОФА в структур; мозга крыс, для изучения биосинтеза ДА in vivo, в перфузируемый раств< Рингера добавляли ингибитор декарбоксилазы L-ароматических аминокислот оксибензилгвдразин (3-ОБГ) в концентрации 10"5 М "(Westerink et al., 1990). этих условиях экстраклеточное содержание L-ДОФА градуально нарастало и чер 2 часа достигало стабильных значений. Концентрацию L-ДОФА в диализат дорзального стриатума и прилежащего ядра мозга крыс измеряли методе ВЭЖХ/ЭД. Для определения L-ДОФА использовали ту же самую колонку подвижную фазу с модификацией (2.2 мМ октансульфоната натрия, рН 3.1 Назальный уровень, в ^диализатах , дорзального стриатума. составил 3.2+0.6' пикомоль/20 Мин'дл^ ^ДОФА; -в прилежащем ядре - 2.037+0.351 пикомоль/: мин для L-ДОФА. Содержание L-ДОФА в базальных образцах принимали : 100% (контроль). Эффекты 7-OH-DPAT оценивали по отношению к базально» уровню L-ДОФА.

Определение внугримозговых экстраклеточных концентраций веществ использованием количественного микродиализного метода определения точ> нулевого переноса вещества ("point of no net flux

Для определения внугримозговой экстраклеточной концентрации вещества структурах мозга крыс при его системном введении был "использовг количественный микродиализный метод ("point of no net flux"). Метод основан i одновременном системном введении изучаемого вещества и перфузии различнь концентраций этого же вещества" в исследуемую структуру мозга чер микродиализный зонд. Определение разницы (ДС) между концентрацие вещества, добавленной в среду перфузии (Cin), и измеренной в диализате (Cout позволяло рассчитать ту концентрацию, при которой не происходило перено« вещества через мембрану. Это значение рассматривалось как реальн; экстраклеточная концентрация вещества.

Для измерения внугримозговой концентрации транс-карбидина дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс в качестве Cin использовал следующие его концентрации: 0.025, 0.25, 0.5 и 2 мкМ. Через 60-80 минут nocj системного введения транс-карбидина на фоне перфузии различнь концентраций этого же вещества определялась его концентрация в диализа: (Cout) с помощью ВЭЖХУЭД. Для хроматографического определения -тран< карбидзша использовали стандартную подвижную фазу дня анализа моноаминов небольшой модификацией (20% ацетонитрила). Детекцию осуществляли * стеклоуглеродном рабочем электроде при +0.875В против Ag/AgCl электро; сравнения. Для рассчета внугримозговой концентрации 7-OH-DPAT дорзальном стриатуме одновременно с внугрибрюшинном введение перфузировали одну из 3-ех концентраций, которая рёссматривалась как Cin (0.' 0.25, 1.75 и 7 мкМ). Через 40-60 минут после системного введения определял концентрацию вещества в диализате также с помощью ВЭЖХ\ЭД. Дг хроматографического анализа 7-OF-DPAT использовали аналогичную подвижну фазу с небольшой модификацией (35% ацетонитрилл). Детекцию осуществляли *

склоуглеродном рабочем электроде при +0.99ß против Ag/AgCl электрода эавнения.

------Для дополнительной —идентификации . веществ фракции элюента,

эотносящиеся с хроматографическим пиком 7-OH-DPAT или транс-карбидина,-чализировали при помоши метода газовой хроматографии с масс-шеетроскопической детекцией (SSQ-710; Finigan, USA). [оведенческие методы.

Двигательную активность животных оценивали по тесту "открытое поле" с омощью установки "Родео-2". Для привыкания к новой обстановке животных омещали в камеру на 2 часа до введения вещества. Измерения параметров роводили в течение 30 мин до и через 5 мин после введения вещества. • Выраженность каталепсии оценивали одновременно с регистрацией ейрохимических параметров по времени удерживания передних лап животного а горизонтальной перекладине диаметром 2 см, находящейся на высоте 10 см от одставки. Интенсивность каталепсии выражали в баллах по шкале Morelli and-Di lüara (1985), учитывая время сохранения животными неподвижной позы: 0 (0-14 ек), 1 (15-29 сек), 2 (30-59 сек), 3 (60 сек или больше).

Стереотипное поведение у крыс оценивали согласно методике Murray and /adington (1990). , •

Изучение специсЬического связывания цис- и тоанс-изомеров карбилина к Д2 и ¡3 дофаминовым рецепторам мозга

Изучение специфического связывания цис- и транс-изомеров карбидина с 12 и ДЗ рецепторами дофамина мозга проводили совместно с Dr. H. Schoemaker Synthelabo Recherche, Франция) согласно методам Briley and Langer (1978) и choemaker (1993). Связывание изомеров карбидина с ДЗ рецепторами дофамина роводили на синаптических мембранах стриатума бычьего мозга, используя елективный агонист ДЗ дофаминовых рецепторов [3H]-7-OH^DPAT. Сродство ¡зомеров карбидина к Д2 рецепторам ДА оценивали на мембранах стриатума рыс, используя в качестве лиганда [3Н]-спиперон. Статистическая обработка данных^

Данные представлены в виде М±м. В микродиализных экспериментах реднее значение трех стабильных базальных проб до введения вещества [ринимали за 100% и последующий эффект оценивали по отношению к этой еличине. Результаты исследования обрабатывали статистически по U-критерию Ланна-Уитни и t-критерию Стьюдента. Значения ED» и 95% доверительного мтервала были рассчитаны путем регрессионного анализа средних значений, [спользуя статистический пакет программ (Fig. Р, BioSoft, USA).

Результаты исследования

>лияние предпочтительных антагонистов Д2 и ДЗ рецепторов дофамина_m

ipoueccu высвобождения и метаболизма доФамииз в лорзальном стриатуме дгободноподвижных крыс

В первом разделе исследования изучалось влияние системного введения фсдпочтительных антагонистов Д2 и ДЗ рецепторов ДА ' на процессы освобождения и метаболизма "ДА в дорзальном стриатуме свободноподвижных

крыс. Было обнаружь»' ■. (Рис. 1), что классические нейролептики - галоперидс (0.05, 0.1 и 0.2 мг/кг), тиопроперазин (0.1, 0.2 и 0.4 мг/кг), спиперон (0.02, 0.04 0.07 мг/кг) - вещества, проявляющие наиболее высокое сродство к Д2 рецептора дофамина, в большей степени повышают экстраклеточное содержат метаболитов ДА, оказывая при этом ■ менее выраженное влияние к высвобождение самого ДА. Вместе с тем, атипичные нейролептики клозапин тиоридазин (2, 5 и 20 мг/кг), проявляющие равное сродство к Д2 и Д рецепторам (Sokoloffet al., 1990) и предпочтительные антагонисты ДЗ рецепторе дофамина (+)-UH232 и (+)-AJ76 вызывают значительное усилени высвобождения ДА, причем максимальная степень повышения экстраклеточног уровня ДА была отмечена при действии (+)-AJ76 (Рис. 2). Влияние этих вещест на содержание метаболитов ДА было менее выраженным. Ранее было изучен

влияние атипичных нейролептиков сульпирвда, ремоксиприяа, ракпоприца, цис

>

и транс- изомеров карбидина, которые вызывая приблизительно равно повышение высвобождения и метаболизма ДА, существенно отличались по свош эффектам от галоперидола и метоклопрамида, в большей степени усиливающи метаболизм ДА (Gainetdinov et al., 1991; Gainetdinov et al., 1994). Сходные данны были получены при изучении эффектов атипичных нейролептиков клозапина ] ' флуперлапина (Imperato and Angelucci, 1989). Настоящие результат! подтверждают высказанное ранее предположение, что типичные и атипичны нейролептики по-разному влияют на процесы высвобождения и метаболизма Д1 в стриатуме крыс in vivo (Rayevsky et al., 1993). Принято считать, что ДОФУ1 образуется из новосинтезированного цитоплазматического ДА и,* следовательно

ее содержание в диализате может отражать интенсивность биосинтеза Д/

с

(Zetterstrom et al., 1988; Waters et al., 1993). Таким образом, можно предположить что предпочтительное действие антагонистов Д2 и ДЗ рецепторов ДА на процео высвобождения или метаболизма ДА может быть связано с их различны» действием на ауторецепторы, контролирующие синтез/метаболизм шп высвобождение нейромедиатора. Следовательно, наблюдавшиеся в предыдущи: работах (Кудрин и соавт., 1988) и в нашем исследовании неодинаковые эффекта типичных и атипичных нейролептиков, проявляющих различное сродство к Д2 i ДЗ дофаминовым • редаепторам,. . на • процессы , высвобождения ] метаболизма/биосинтеза дофамина, опосредуются, по всей вероятности

разными подтипами дофаминовых ауторецепторов. Последние данные пс

¡>

. 4»

п и

о 100

ft

& но

о too

и

g но

1 100

К 10

0

1 алоицрндид \\J~\IKJ ни/.»,

• - да а -дофук о - гвк

lOO-ISO

20 40 40 СО 100 120

Время в мин

♦» too-

100

Время в мни

20 40 SO 40 100 120

Время в мин

ДА ДОФУК ГВК

1

ДА ДОФУК ГВК

+ **

¡fa

!

ДА ДОФУК ГВК

Рис. 1. Влияние галоперидола на экстраклеточное содержание ДА и его метаболитов ДОФУК и ГВК в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс. Вверху - кривые динамики эффектов в процентах к базальному уровню; внизу - площади под кривыми (AUC) в процентах к контролю. М±м (п=5-6). * г р<0.05, - р<0.01 в сравнении с контролем; + - р<0.05 в сравнении с АиСдотук (U - критерий Манна-Уитни). .

5 400 1 и

• Э 350 о

й 300 >, г

о

м >4

<3

М

* 100

.и 50 ■

в4 0

250 -200

• - да а-дофук п - гвк

(+)-А^6 (4 мг/кг)

20 40 _ 50 >0 100

Время в мин

400 ' 350 ■ 300 -250 • 200 • 150 100 -50 -0 ■

(+)-АЛ76 (7 мг/кг)

20 40 50 50 . 100

Время в мни

400 550 ■ 100 250 200 ■ 150 100 ■ 60 О

а ■

(+)-АЛ76 (14 мг/кг)

20 40 10 «0. 100

Время в мин

350

300 •

о

1* 250 •

о

и 200-

м

150

и 100

о

50

гДл

1

ДА ДОФУК ГВК

500 259 200 150 100 -10 О

к

ДА ДОФУК ГВК

500 -250 200 ■ 150 -100 ■ О О

+ **

д.

ДА ДОФУК ГВК

Рис. 2. Влияние (+)-ЛЛ7б на экстраклеточное содержание ДА и его метаболитов ДОФУК и ГВК в дорзальном стриатуме свободноиодвижных крыс. Вверху - кривые динамики эффектов в процентах к базальному уровню; виизу - площади под кривыми (АиС) в, процентах к контролю. М+м (п=5-6) * -рСО.05, ** - р<0.01 в сравнении с контролем; + - р<0.05 в сравнении с АисДОфук (и - критерий Манна-Утин).

|г = 0.853 Г jp = 0.015 ¡

2.0

1.5

1.0

0.5 -

i+VÁJTG

e i

Тиоркдазип /¡(+)-IJH232

TI / I

M wmoTTMjr Ш y #

i' '

Сштерон Тиопроперазия

л ЛГ-,ТТГ,"ТТТТОЛ

3.01

0.1

KjD2/K¡D3

J_

10

Рис.3. Корреляция между относительной аффинностью антагонистов ДА к ДЗ и Д2 рецепторам ДА- и их способностью повышать экстраклеточный уровень ДА и ДОФУК в дорзальном стриатуме свободнолодвижных крыс. Площадь под кривой (AUC) рассчитывалась по результатам изучения эффектов веществ на экстраклеточное содержание ДА и ДОФУК. дАиСдд и ДАиСдотук - разница между соответствующими значениями AUC ..ociic вьедения вещества и 0.85% NaCl. Отношения ААЪС.дд.'^^иСдоФу:.'. представлены для каждого антагониста ДА в виде М ± ш (п=3) на основании анализа эффектов различных доз исследуемого вещества. Значения K¡ для Д2 и ДЗ рецепторов ДА приведены по Sokoloff et al. (1990).

юучению эффектов (+)-UH232 и (+)-AJ76 на процессы дофаминергической пейролереаши подтвегжлают это предположение (Waters et al., 1993). Важно отакгитъ, что найденные различия в способности актагоннстоз порыи:ать высвобождение или метаболизм ДА в дорзальном стриатуме in vivo коррелируют с относительным сродством к Д2 и ДЗ ДА рецепторам, причем эта различия проявлялись незашеимо от доз веществ (Рис.3).

При системном введении антагонистов Д2 и ДЗ рецепторов ДА, наблюдаемое повышение высвобождения и метаболизма ДА в нигростриатальнон и мезолимбической системах, по-видимому, является результатом блокады как пресинаптических - соматодендритных и терминальных ауторецепторов, так и постсинаптических рецепторов ДА (Westerink and de Vries, 1989; Waters et al., 1993). В связи с этим, для оценки роли терминальных ауторецепторов ДА в эффектах антагонистов в следующей серии экспериментов использовали локальное введение веществ через микродиализный зонд вчстриатум мозга крыс. Локальная перфузия позволяет изучать влияние дофаминергических агентов непосредственно на уровне терминальных стриатных ауторецепторов, контролирующих высвобождение ДА (Santiago and Westerink, 1991). Предпочтительные антагонисты как Д2, так и ДЗ рецепторов ДА (галоперидол, спиперон, клозапин, (+)-AJ76, (+)-UH232) при локальной перфузии приводили к повышению высвобождения ДА до максимальных значений, наблюдаемых при системном введении веществ. Таким образом, максимальный эффект, достигаемый при локальной перфузии антагонистов ДА рецепторов- различной химической структуры и фармакологических свойств (типичные и атипичные нейролептики) подтверждает основную роль терминальных ауторецепторов в вызываемом нейролептиками повышении высвобождения ДА Различия в эффектах между Д2 и ДЗ предпочтительными антагонистами на высвобождение ДА были обнаружены только в степени усиления высвобождения ДА: (+)-AJ76 > (+)-UH232 > клозапин > спиперон > галоперидол. Следует отметить, что этот порядок активности веществ соотносится с их относительным сродством к Д2 и ДЗ рецепторам- ДА (Sokoloff et al., 1990). Таким образом, данные этого исследования подтверждают преимущественную роль терминальных ауторецепторов в повышении высвобождения ДА, вызванного введением предпочтительных антагонистов как Д2, так и ДЗ рецепторов ДА Влияние селективного агониста ДЗ рецепторов дофамина 7-OH-DPAT на дофаминергическую нвйоопеоеяачу в дорзальном стоиатуме и прилежащем ядре свобоянопоггвижньи крыс in vjvo

Для дальнейшего изучения функциональной роли Д2 и ДЗ рецепторов ДА в следующей серии экспериментов был использован селективный агонист ДЗ ДА рецепторов 7-OH-DPAT, охарактеризованный ранее как предпочтительный агонист пресинаптических рецепторов дофамина. Было показано, что он обладав!

высокой способностью • снижать локомоторную активность у крыс, при этом оказывая угнетающее влияние в большей степени на процессы высвобождения ДА, чем на его биосинтез (Feenstra et al., 1983; Mulder et аГ, 1987). НёдавнсГбыло обнаружено, что 7-OH-DPAT проявляет аффинность связывания с ДЗ рецепторами в субнаномолярных концентрациях, и в настоящее время рассматривается как один из наиболее селективных агонистов ДЗ рецепторов ДА (значения констант ингибирования, полученные на трансфецированной клеточной линии Chinese hamsters ovary (СНО): для ДЗ рецепторов ДА - 0,78 нМ и Д2 рецепторов ДА - 61 нМ ( Levesque et al., 1992)). Однако в последних исследованиях на рецепторах ДА, клонированных на клеточных линиях были получены результаты, оспаривающие высокую селективность 7-OH-DPAT к ДЗ против Д2 рецепторов ДА (Chio et al., 1994; Sautel et al. 1995). Вследствие относительно ограниченной селективности вещества к ДЗ по сравнению с Д2 рецепторами ДА представлялось важным оценить дозы агониста, которые можно рассматривать как ДЗ селективные. В связи с этим, следующим этапом работы явилось определение внутримозговой экстраклеточной концентрации 7-OH-DPAT в диализатах дорзального стриатума свободноподвижных крыс. Используя количественный микродиализный метод определения точки нулевого переноса вещества ("point of no net flux") (Stahie, ¡991), была рассчитана экстраклеточная внутрим'озговая концентрация 7-OH-DPAT в диализатах дорзального стриатума свободноподвижных крыс (Рис.4). Истинная стриатная концентрация 7-OH-DPAT, рассчитанная через 40-60 минут после введения вещества в дозе 6 мг/кг оказалась равной 1.31+0.4 мкМ. Следовательно, в точке максимального эффекта (через 20 мин после введения) истинная концентрация вещества не должна превышать 1.61 мкМ. Исходя из наблюдаемой линейной зависимости диализатной концентрации вещества в мозге от дозы, можно предположить, что внутримозговая концентрация 7-OH-DPAT после введения в дозе 0.05 мг/кг не будет превышать 13 нМ, что "существенно ниже значения аффинности связывания с Д2 рецепторами ДА Следовательно, дозы 7-OH-DPAT ниже 0.05 мг/кг могут рассматриваться как ДЗ селективные дозы (Gainetdinov et al., 1995).

Следующим разделом работы явилось изучение влияния системного введения 7-OH-DPAT на процессы высвобождения, синтеза и метаболизма ДА в -прилежащем ядре и дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс. 7-OH-DPAT вызывал дозозависимое снижение экстраклеточного уровня ДА, как в

о l>

0.5

0.4

S

К

S

X

л к tí

2 0-3

ч и

0.2

52-

Рн 0.1

а к

0.0

Время и мин

Динамика копцептрацнн 7-ОН-DPAT d стриатных диализатах при спстсмпон введении вещества (й иг/кг, п.б.)

Виугрноюзгойая концентрация.1.3±0.4 мкМ '

" Эффективность мнкродиалкзпого' зонда In vivo - 43.1± 2.9% '

Определение внугримозговой экстраклеточной концентрации 7-0II-DPAT через 60 мин после в.б. введепия в дозо 6 мг/кг

т-1-i-i 2

т-гп

5

Доза 7-OH-DPAT (мг/кг, в.б.)

Зависимость концетрашш 7-OH-DPAT в стриатных диализатах от дозы (и,б.) вещества

Рис. 4. Определение внугримозговой экстраклеточной концентрации агониста ДЗ рецепторов ДА 7-OH-DPAT в дорзальном стриатуме свободиоподвшкных крыс (колютиственный микродиализный метод, определения точки нулевого переноса вещества "point of no net flux").

прилежащем ядре, так и в дорзальном стриатуме свободноподвкжных крыс. При этом, данный эффект в прилежащем ядре наблюдался при более низких дозах 7-ОНГ-БРАТ: так, пороговая доза агониста, при которой отмечалось достоверное снижение экстраклеточного уровня ДА составила 0.005 мг/кг, в то время как в дорзальном стриатуме сходный по величине эффект был получен лишь в дозе 0.05 мг/кг (Ркс.5). Снижение экстраклеточной концентрации Ь-ДОФА, рассматриваемой как отражение скорости синтеза ДА в условиях перфузии 3-ОБГ (10"5 М), отмечалось при более высоких дозах 7-ОН-ОРАТ (по сравнению с влиянием на высвобождение ДА), причем значимой разницы в эффектах по структурам мозга не наблюдалось (Рис. 5). Достоверное снижение уровня Ь-ДОФА отмечалось лишь при введении агониста в дозе 0.1 мг/кг, причем уже в дозе 0.25 мг/кг снижение Ь-ДОФА было максимальным. Следует отметить, что значения ЭД5о для 7-ОН-БРАТ по эффекту снижения Ь-ДОФА в дорзальном стриатуме и прилежащем ядре существенно не. отличались, и составили 0.101 мг/кг и 0.124 мг/кг, соответственно. Наблюдаемое в наших опытах более выраженное влияние 7-ОН-ОРАТ на высвобождение ДА в прилежащем ядре по сравнению со стриатумом может быть обусловлено преимущественным распределением ДЗ рецепторов з лимбической системе мозга (8око!о£Г е! а!., 1990). Зажно подчеркнуть, что предпочтительные антагонисты ДЗ рецепторов ДА-(+)~иН232 и (+)-АЛё также оказывали наибольшее слияние на повышение высвобождения ДА в прилежащем ядре (\Vaters й а!.. 1993). Снижение метаболизма ДА, индексом которого является экстраклеточная концентрация ДОФУК, основного метаболита ДА, происходило только в тех дозах, при которых наблюдалось также подавление синтеза нейромедиатора. Эти данные могут служить дополнительным доказательством того, что экстраклеточная концентрация ДОФУК является отражением синтеза ДА (2ейегЯгош « а1., 1988). Важно подчеркнуть, что значительных отличий в угнетении синтеза/метаболизма ДА в дорзальном стриатуме ;; прилежащем ядре мозга крыс обнаружено не было.

Таким образом, снижение высвобождения ДА в дорзальном стриатуме и прилежащем ядре, вызванное 7-ОН-ОРАТ в дозах меньших чем 0.05 мг/кг, при которых внутримозговая концентрация вещества значительно ниже показателей аффинности связывания с Д2 рецепторами, логично объяснить селективным воздействием агониста на ДЗ ауторецепторы. По-видимому, именно Д2 ауторецепторы играют ключевую роль в пресинапгической регуляции синтеза ДА,

120 n

100 -

-80

.60 -

40 -

20 -

0 J

ДЗ "селективные" дозы

ю:

I II I) П|-1-1 '1)1111)-

.....Q.ppi 0.01 : o.i

Доза (мг/кг, в.б.)

■г i ii ni)-1—i,i i 11П|-1—i iii"Ч

10

Рис. 5. Влияние 7-OH-DPAT на двигательную активность крыс, синтез и высвобождение ДА в базальных ганглиях мозга крыс ín vivo. Данные представлены в виде М± м (п=5-6). ПЯ - прилежащее ядро; ДС - дорзалышй стриатум.

поскольку 7-0H-DPAT вызывает угнетение синтеза ДА в базальных ганглиях мозга крыс только в дозах 0.1 мг/кг и выше,-при которых эффект опосредуется как ДЗ, так и Д2 ауторецепторами ДА. Результаты этой серии экспериментов, как и полученные нами ранее данные, подтверждают ведущую роль ДЗ ауторецепторов в регуляции высвобождения ДА, но не его синтеза/метаболизма.

В следующей серии опытов было изучено влияние предварительного введения 7-OH-DPAT в "ДЗ селективной" дозе 0.05 мг/кг на повышение высвобождения и метаболизма ДА в дорзальном стриатуме крыс, вызванное предпочтительными антагонистами Д2 и ДЗ рецепторов дофамина галоперидолсм и (+)-AJ76, соответственно. Предварительное введение 7-OH-DPAT за 20 минут до введения галоперидола (0.1 мг/кг) или (+)-AJ76 (7 мг/кг) предотвращало нарастание высвобождения ДА, но не экстраклеточного уровня ДОФУК, вызываемого предпочтительными антагонистами как Д2, так и ДЗ рецепторов ДА Таким образом, повышение высвобождения дофамина в стриатуме in vivo, вызываемое антагонистами ДА рецепторов, можно рассматривать как результат блокады исключительно ДЗ ауторецепторов дофамина, тогда как повышение биосинтеза/метаболизма, по-видимому, не связано с блокадой ДЗ рецепторов ДА.

Измерение локомоторной активности крыс после введения 7-OH-DPAT было проведено с целью изучения роли-ДЗ рецепторов ДА в контроле этого типа поведения. Кроме того, оценивалась связь нейрохимических параметров дофаминергической нейропередачи в нигростриатной и мезолимбической системах мозга с двигательной активностью животных. Системное введение агониста в дозах 0.002-0.25 мг/кг приводило к выраженному снижению двигательной активности крыс (Рис.5). Необходимо подчеркнуть, что угнетение локомоторной активности у крыс сопровождалось снижением высвобождения ДА в прилежащем ядре, но не в дорзальном стриатуме мозга крыс. Таким образом, •результаты данного исследования подтверждают оригинальную ауторецепторную теорию A Cartean (1575), согласно которой подавление локомоторной активности животных, вызванное агонистами ДА, рассматривается как результат снижения синаптического уровня нейромедиатора в лимбических структурах мозга; . .опосредованное, в свою очередь, • стимуляцией (ауторецепторов, регулирующих высвобождение ДА Последние, как мы полагаем, относятся к рецепторам ДЗ подтипа.

Для выяснения роли терминальных аугорецепторов ДА в регуляции процесса пресинаптического высвобождения ДА было использовано локальное введение 7-OH-DPAT через микродиализную мембрану в дорзальный сгриатум и прилежащее ядро мозга свободноподвижных крыс (Timmerman et al., 1990). Существенное снижение' высвобождения ДА в дорзальном стриатуме и прилежащем ядре, вызванное 7-OH-DPAT при локальной перфузии, подтверждает ключевую роль терминальных аугорецепторов в контроле высвобождения ДА. Используя метод "point of no net flux", был рассчитан выход вещества через мембрану, который оказался равным 43%. Это означает, что истинная внугримозговая концентрация вещества, которая вызывает значительное снижение высвобождения ДА в изучаемых структурах мозга, существенно ниже аффинности связывания с Д2 рецепторами ДА (Levesque et al., 1992). Более того, предпочтительное снижение высвобождения ДА в прилежащем ядре по сравнению со стриатумом, как при локальном, так и при системном введении 7-OH-DPAT, подчеркивает функциональную лимбическую селективность вещества in vivo, которая также может служить доказательством вовлечения ДЗ рецепторов ДА в ауторецепторный контроль высвобождения ДА. Эти наблюдения согласуются с данными по изучению эффектов 7-OH-DPAT на высвобождение ДА в стриатуме и прилежащем ядре мозга крыс в условиях in vitro, которые также показывают региональные различия в' регуляции' высвобождения при стимуляции * ДЗ рецепторов ДА (Yamada et al., 1994).

Характеристика изомеров_атипичного нейролептика каибидина как

предпочтительных антагонистов ДЗ рецепторов ДА

Результаты наших предыдущих микродиализных исследований по влиянию ряда типичных и атипичных нейролегггиковитоказали, что как цис-, так и трансизомеры атипичного нейролептика кар&шшна наряду с предпочтительными

с

антагонистами ДЗ рецепторов ДА проявляют наиболее выраженное влияние на пресинаптическую регуляцию высвобождения," чем синтеза/метаболизма ДА в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс (Rayevsky et al., 1993; Gainetdinov et al, 1994). В связи с этим для дальнейшей характеристики транс-карбидина как потенциального антагониста ДЗ рецепторов ДА, была использована методика внутримозгового микродиализа на свободноподвижных крысах с одновременной регистрацией динамики стриатной эксграклеточной концентрации вещества, а также поведенческих и нейрохимических параметров дофаминергической

i

>8

нейропередачи. Было обнаружено, что транс-карбидин в дозах до 5 мг/кг оказывает предпочтительное влияние-на повышение высвобождения" ДА по сравнению с эффектом на его метаболизм (Рис.б). Сравнение динамики изменений ДА, ДОФУК. и ГВК, с одной стороны, и концентрации транс-карбидина в диализатах (Рис.6), с другой стороны, показали, что в точке максимальной концентрации вещества через" 40-60 минут после системного введения, наблюдается максимальный эффект вещества на высвобождение и метаболизм ДА (0.5-5 мг/кг). Более выраженное влияние транс-карбидина, равно как и предпочтительных антагонистов ДЗ рецепторов ДА (+)-UH232 и (+)-AJ7ó, на высвобождение ДА по сравнению с его метаболизмом, подтверждает предположение о предпочтительном антагонизме вещества к ДЗ по сравнению с Д2 рецепторами ДА.

Следующим этапом работы явилось _ определение внутримозговой экстраклеточной концентрации транс-карбидина в дорзальном стриатуме мозга свобожноподвижных крыс с помощью метола "point of no net flux". Рассчитанная максимальная концентрация транс-карбидина в дорзальном стриатуме после введения в дозе 5 мг/кг составила около 1 мкМ. Исходя из значений диализатных 1 концентраций транс-карбидина, можно предположить, что максимальные значения истинной экстраклеточной концентрации транс-карбидина после системного введения в дозах 1 и 25 мг/кг, составят 0.24 и 4.53 мкМ, соответственно. Эффективность микродиализного зонда в условиях данного эксперимента in vivo оказалась равной 42.4+8.9% для транс-карбидина.

В отличие от других известных дофаминовых антагонистов, предпочтительные антагонисты ДЗ рецепторов ДА,- (+)-AJ76 и (+)-UH232, в широком диапозоне доз обладают стимулирующим эффектом на поведение животных и не вызывают развития каталепсии (Svensson et al., 1986). Однако, транс-карбидин обнаруживал стимулирующе действие лишь в относительно узком диапазоне доз (Рис.6), а, в более высокой дозе 25 мг/кг вызывал каталепсию. Сходным эффектом обладал также другой новый предпочтительный антагонист ДЗ рецепторов ДА нафадоприд, который повышал локомоторную активность животных в малых дозах, вызывая каталепсию в больших (Sautel et al:,1995). Важно подчеркнуть, что этот антагонист ДЗ рецепторов ДА также значительно сильнее влиял на высвобождение ДА по сравнению с воздействием • на его синтез/метаболизм.

й 1Т5

Я а

о но о,

Е

о 100

к

д

3 "

п

О 80 из

И П

04

О

- ДЛ А - ДОФУК п - гвк1

трапс-карбидин (0.5 мг/кг)

20 ДО 60 <0 50 0 120

Время в мни

3.

Л

о «1«

В" В

я а

ю р

а 5 ю

С8 И

Й 1 « - з |

Н в о

Трапс-карбнднн

20 ДО <0 10 100 130

Время в мин

-I о

до ю ао юо но Время в мнв

20 40 10 10 100

Время в мин

0 0.1 .0.2 . 0.5 1.0 .

Трапс-карбиднп (мг/кг, в.б.)

Рис. 6. Дозозависимые эффекты транс-изомера карбвдина:

1. на экстраклеточное содержание ДА, ДОФУК и ГВК в дорзальном стриатуме свободноподвлжных крыс (верхний рад); ■ '

2. на динамику диализатной концетращш транс-изомера карбвдина (нижний ряд, слева);

3. на двигательную активность крыс (нижний ряд, справа).

Данные представлены в виде М±м (п=5-6). * - р<0.05, ** - р<0:01 по сравнению с контролем (и-критерий Манна-Уитни).

Интересно отметить, что транс-карбшшн вызывал каталепсию в дозе 25________

мг/кг»_ при которой - не наблюдалось усиления высвобождения ДА. Предполагается, что неспособность типичных неГфолептиков в высоких дозах повышать высвобождение ДА., может быть результатом ряда нерецепторных механизмов, таких как блокада кальциевых каналов либо местный анестезирующий эффект, которые препятствуют нарастанию высвобождения ДА, опосредуемого блокадой пресинаптических терминальных ауторецепторов (Seeman, 1980; Р.Р.Гайнетдинов и соавт., 1992).

Результаты предыдущего раздела позволяют предполагать более высокую активность изомеров карбидина в отношении ДЗ по сравнению с Д2 рецепторами ДА Для проверки' данного предположения было проведено изучение сродства цис- и транс-карбидина к нативным Д2 рецепторам ДА крыс (Briley and Langer, 1978) и к бычьим ДЗ рецепторам ДА (Schoemaker 1993). Результаты этих исследований показали, что транс-харбидин проявляет наиболее высокое сродство по связыванию с ДЗ рецепторами ДА (Kj по ингибированиго связывания [3H]7-OH-DPAT - 260 нМ; Kj по ингибированию связывания рЩспиперона - 4.7 мкМ), являясь на сегодня одним из наиболее селективных антагонистов данного подтипа рецепторов ДА, в то время как цис-карбидин может рассматриваться, по-видимому, как смешанный антагонист 5-НТ2.и ДЗ-рецепторов ДА.

Таким образом, результаты данного исследования позволяют заключить, что пресинаптическая регуляция высвобождения ДА модулируется, в основном, ДЗ ауторецепторами, в то время как регуляция процессов биосинтеза/метаболизма связана, по-видимому, с вовлечением Д2 ауторецепторов ДА

Предполагаемое участие ДЗ рецепторов ДА в патогенезе шизофрении (Kennedy et а!., 1995), аффективных биполярных расстройств (Parsian et al., 1995), болезни Альцгеймера (Gurevich et al., 1994), наркоманий (Caine and Koob, 1993) может быть связано с • ключевой функциональной ролью ДЗ подтипа ауторецепторов в пресинаптической регуляции высвобождения ДА в структурах дофаминергических систем мозга.

Выводы

1. Дофаминовые ауторецепторы Д2 подтипа, локализованные на нервных окончаниях и функционирующие по механизму обратной связи, преимущественно вовлечены в пресинаптическую регуляцию синтеза дофамина, в то время как ауторецепторы ДЗ подтипа, в основном, контролируют высвобождение нейромедиатора в базальных ганглиях мозга крыс,

2. Неодинаковые эффекты типичных и атипичных нейролептиков на нейрохимические показатели дофаминергической передачи в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс связаны с их различным сродством к Д2 и ДЗ рецепторам дофамина.

3. Селективная активация ДЗ рецепторов, вызванная агонистом этих рецепторов 7-ОН-ОРАТ, приводит к снижению высвобождения дофамина в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс, а также предотвращает повышение высвобождения, вызываемое предпочтительными антагонистами Д2 и ДЗ рецепторов, не влияя на процессы его синтеза и метаболизма.

4. Механизмы ауторецепторной регуляции высвобождения дофамина, но не его

- синтеза и метаболизма, оказываются • более чувствительными к действию

агониста ДЗ дофаминовых рецепторов в структурах мезолимбической системы мозга по сравнению с нигростриатной.

5. Угнетение двигательной активности крыс при действии 7-ОН-ЪРАТ коррелирует со снижением высвобождения дофамина в прилежащем ядре мозга 1фыс.

6. Транс-изомер атипичного нейролептика карбидина по своим фармакологическим свойствам и нейрохимическому профилю является предпочтительным антагонистом ДЗ рецепторов дофамина.

Список публикаций по теме диссертации

1. Раевский К.С., Р.Р.Гайнетдинов, Т.В.Грехова, Т.Д.Сотникова. Пресинаптические рецепторы дофаминергических нейронов мозга: функциональная роль и эффекты психотропных веществ. // Тезисы докладов конференции "Организованный мозг", посвященной 70-летию со дня рождения академика РАМН Адрианова А.С. - М. - 1993. - С.58.

2. Gainetdinov R.R., T.V.Grekhova, T.D.Sotnikova, M.B.Bogdanov, V.S.Kudrin, K.S.Rayevsky. Differential effects of typical and atypical neuroleptics on the dopaminergic processes in the rat striatum; in vivo microdialysis study. // Abstr. of Second International Conference "Biological Basis of individual Sensitivity to Psychotropic drugs". M. - 1993. - P. 88.

3. Гайнетдинов P.P., Т.Д.Сотникова, Т.В.Грехова, K.C.Раевский. Регуляция высвобождения и ' метаболизма дофамина в дорзальном стриатуме свободноподвижных крыс: роль Д2- и ДЗ-доФаминовых рецепторов. // Доклады Академии Наук РАН.- 1994. - Т. 337, N 6.*- С. 821-823.

4. Gainetdinov R.R., T.V. Grekhova, T.D. Sotnikova, K.S. Rayevsky. Dopamine D2 and D3 receptor preferring antagonists differentially affect striatal dopamine release and metabolism in conscious rats. // Europ. J. Pharmacol. - 1994. - Vol. 261. - P. 327 - 331.

5. Gainetdinov R.R., T.D. Sotnikova, T.V. Grekhova, K.S.Rayevsky. Estimation of the interstitial free concentration of the putative dopamine D3 receptor selective agonist 7-OH-DPAT in the dorsai striatum of freely moving rats. // Neurosci. Lett. - 1995. -Vol. 193. - P. 65-67.

6. Сотникова Т.Д.к Р.Р.Гайнетдинов, Т.В.Грехова, К.С.Раевский. Дофаминовые рецепторы ДЗ подтипа преимущественно регулируют высвобождение дофамина, в базальных ганглиях мозга. // Бюлл. э'ксп. биол. мед.- 19% (в печати).

7. Rayevsky K.S., R.R. Gainetdinov, T.V. Grekhova, T.D. Sotnikova. Regulation of dopamine release and metabolism in rat striatum in vivo: effects of dopamine receptor antagonists. // Prog.Neuro-Psychopharmacol. & Biol. Psychiat. - 1995. - Vol.19 (in press).

8. Rayevsky K.S., R.R. .Gainetdinov, T.V. Grekhova, T.D. Sotnikova, A Khariamov. Typical and atypical neuroleptics differentially affect "striatal dopamine release and metabolism studied by microdialysis in freely moving rats. // Soc. Neurosci.Abstr. -1993. - P. 1065. . _ • ~ " .

9. Gainetdinov R.R., T.V. Grekhova, T.D. Sotnikova, K.S. Rayevsky. Relative affinities of neuroleptic drugs to D2/D3 dopamine receptors may underly their effects on dopamine release and metabolism in dorsal striatum: microdialysis study on awake rats. // Neuropsychopharmacology. - 1994. - Vol. 10, N 35. - Part. 2. - 236s.

10.Rayevsky K., R. Gainetdinov, T. Grekhova, T. Sotnikova, M. Ganiev. Old and new antipsychotics: how different are they in relation to various subtypes of dopamine

• receptors. // Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. - 1994. - Vol. 72. -' Suppl. 1 - P. 446.

11.Gainetdinov R.R., T.V, Grekhova, T.D. Sotnikova, K.S. Rayevsky. Selective dopamine D3 receptor activation by 7-OH-DPAT induces hypomotility and decreases striatal dopamine release but not metabolism in awake rats. // Soc. Neurosci. Abstr. - 1994. - Vol. 20. - Part 2. - P. 1355.

12. Раевский K.C., Р.Р.Гайнетдинов, Т.В.Грехова, TД.Сотникова. Регуляция высвобождения дофамина в стриатуме свободноподвижных крыс. // Тезисы

докладов 16-го съезда Физиологического Общества при РАН. Успехи физиологических наук. - 1994. - Т. 25, № 4. - С.34.

13. GainetdinovR-R., T.D. Sotnikova, T.V. Grekhova, K.S. Rayevsky. Preferential role of D3 dopamine autoreceptor in regulation of dopamine release but "not synthesis in nucleus accumbens and dorsal striatum of freely moving rats. Behav. Pharmacol. -1995. - Vol. 6. - Suppl. 1. - P. 74-75. ' "

14. Sotnikova T.D. Presynaptic autoregulation of dopamine release and synthesis in rat basal ganglia in vivo: role of D2 and D3 dopamine autoreceptors. // The Advanced School of Neurochemistry, 2nd biennial course "From signal transduction to gene expression". 1995. - P. 25-26.

15. Sotnikova T.D., R.R.Gainetdinov, T.V. Grekhova, ICS. Rayevsky. Estimation of interstitial free concentration of the putative D3 dopamine receptor preferring agents in the dorsal striatum of freely moving rats. // J.Neurochem. - 1995. - Vol. 65. -Suppl.-1. - 162d. ' ^

16.Gainetdinov R.R., H.Shoeraaker,. VA-Zagorevsky, N.M.Sipilina, T.D.Sotnikova, 'T.V. Grekhova, K.S. Rayevsky. Stereoisomers of caibidine as D3 dopamine receptor

preferring antagonists. // Soc. Neurosci. Abstr. - 1995. - VoL 21. - P. 1138.

17. Sotnikova T.D., R-R-Gainetdinov, T.V. Grekhova and K.S. Rayevsky. Differences in effects of putative D3 dopamine receptor agonist 7-OH-DPAT on dopamine release and synthesis in rat basal ganglia in vivo.// Soc. Neurosci. Abstr. - 1995. - Vol. 21. -P. 1139,

18.Гайнетдинов P.P., ТД.Сотникова. • Влияние селективного агониста ДЗ дофаминовых рецепторов 7-OH-DPAT на высвождение и синтез дофамина в базальных ганлиях мозга крыс (микродиализное исследование). // Тезисы докладов 1-го Съезда Российского Научного Общества Фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств". - М. - 1995. - С.96.

Список сокращений:

(+)-AJ76 - цис-(+)-( 1 S,2R)-5-MerroKCH-1 -метил-2-(п-пропиламино) тетралин (+)-UH232 - цис-(+)-( 1 S,2R)-5-MeroKCH-1 -метил-2-(п-ди-пропиламино) тетралин 7-OH-DPAT - 7-гидрокси-К,Н-ди-п-пропил-2-аминотегралин 3-ОБГ - 3-оксибензилгидразин

ВЭЖХ/ЭД- высокоэффективная жидкостная хроматография с электрохимической детекцией <

ГВК - гомованилиновая кислота ДА-дофамин

ДОФУК - диоксифенилуксусная кислота L-ДОФА - L- 3,4-дигидроксифенилаланин