Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль антиокислительных ферментов в защите эритроцитарного гемоглобина и внеклеточных физиологических сред от перекисной деструкции

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Титов, Владимир Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ.

I. Перекись водорода в живых организмах: физиологическая роль, проблемы защиты.

1.1. Основные пути деструкции перекиси водорода в организме.

1.1.1. Свободнорадикальный.

1.1.1.1. Методы, применяемые для контроля свободнора

1.1.1.2. дикального разложения перекиси под действием ионов металлов переменной валентности.

1.1.2. Каталазный.

1.1.3. Пероксидазный.

II. Ферментативные антиокислительные системы организма.

II. 1. Каталаза: локализация, структура, механизм действия.

II. 1.1.Методы исследования функциональной эффективности катал азы в биообъектах.

11.2. Глютатионпероксидаза: история открытия, структура, предполагаемый механизм действия.

Н.2.1.Методы определения функциональной эффективности глютатионпероксидазы.

II.2.2. Глютатионредуктаза: структура, механизм действия.

11.3. Супероксиддисмутаза (СОД): локализация, структура, механизм действия.

II.3.1. Методы определения функциональной эффективности СОД.

11.4. Гемсодержащие пероксидазы: механизм действия, разнообразие функций в живых организмах.

11.4.1. Метгемоглобин как пероксидаза.

11.4.2. Методы определения функциональной эффективности гемсодержащих пероксидаз.

III. Эритроциты - клетки, наиболее подверженные

Поражению активными формами кислорода.

III. 1. Окислительная деструкция гемоглобина - ключевое звено гемолиза в условиях in vivo.

III.2. Основные механизмы окисления гемоглобина под действием различных факторов.

III.2.1. Краткие сведения о строении гемоглобина и механизме его функционирования.

П1.2.2. Активные формы кислорода - ключевое звено окислительной деструкции гемоглобина в аэробных условиях.

III.2.3. Нитритиндуцированное окисление гемоглобина: физиологическая роль, механизм.

111.2.3.1. Нитритиндуцированная метгемоглобинемия: этиология и основные клинические симптомы.

111.2.3.2. Исследование закономерностей развития нитритинду-цированной метгемоглобинемии в условиях in vivo.

111.2.3.3. Исследование процесса нитритиндуцированного метгемоглобинобразования на модельных системах.

IV. Взаимодействие ферментативных и неферментативных антиоксидантов в биологических обектах. Аскорбат.

IV.1. Общефизиологическое значение аскорбата.

IV.2. Окислительно-восстановительные свойства аскорбата.

IV.3. Взаимодействие аскорбата с гемоглобином.

IV.4. Аскорбат как субстрат гемсодержащих пероксидаз.

IV.5. Метаболизм аскорбата в организме. Роль антиокислительных ферментов в сохранении его пула.

IV.5.1. Роль аскорбата в организме. Современный взгляд на его физиологическое значение и метаболизм.

IV.5.2. Поступление аскорбата в организм человека. Всасывание в желудочно-кишечном тракте.

IV.5.3. Транспорт аскорбата к органам и тканям.

IV.5.3.1. Поступление аскорбата в плазму.

IV.5.3.2. Усвоение окисленной и восстановленной формы аскорбата из кровяного русла клетками органов и тканей.

IV.5.3.2.1. Различие в проницаемости биомембран окисленной и восстановленной формой аскорбата. Гипотезы.

IV.5.3.2.2. Восстановление дегидроаскорбата в клетках высших организмов. Физиологическая значимость процесса.

IV.5.3.2.3. Различие в усвоении окисленной и восстановленной форм аскорбата тканями синтезирующих и несинтезирующих аскорбат животных.

IV.5.4. Метаболизм аскорбата в организме.

IV.5.4.1. Факторы, оказывающие влияние на усвоение аскорбата клетками и на время его жизни в организме.

IV.5.4.2. Закономерности выведения аскорбата и его метаболитов из организма.

IV.5.4.3. Роль крови и, в частности, эритроцитов в поддержании целостности пула аскорбата.

IV.5.4.4. Факторы, влияющие на эффективность восстановления окисленного аскорбата в эритроцитах.

IY.5.4.5. Цинга: клинические проявления и предполагаемый патогенез.

V. Роль активных форм кислорода во внеклеточных физиологических средах.

V.I. Молоко: основные источники активных форм кислорода, их физиологическая роль, системы защиты.

VI. Проблемы определения активности антиокислительных ферментов в биологических объектах и их индивидуального вклада в антиокислительную защиту. Необходимость поиска новых методических подходов.

VI. 1. Проблемы определения вклада перекиси в различных физиологических и патологических процессах.

VI.2. Проблемы соотношения различных путей распада перекиси водорода в биологических объектах и дифференциации этих путей.

VI.3. Воздействие различных факторов на антиокислительные ферменты и на соотношение их активностей.

VI.3.1. Взаимодействие нитрита и окиси азота с антиокислительными ферментами

VII. Использование перекисьметаболизирующих ферментов для экологического мониторинга.

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1.Препаративные методы.

1.1. Приготовление растворов и сред.

1.2. Методика выделения эритроцитов.

1.2.1. Получение чистого гемоглобина.

1.2. Отбор образцов коровьего и женского молока и их очиситка от липопротеинов.

2. Аналитические методы.

2.1 Перманганатометрический метод определения концентрации Н202.

2.2. Метод определения содержания нитрита с помощью реактива НЭД.

2.2.1. Построение калибровочной кривой.

2.2.2. Определение содержания нитрита в исследуемом объекте.

2.3. Методика облучения светом ультрафиолетового и видимого диапазонов.

2.4. Методика проведения экспериментов в анаэробной среде.

2.5. Метод динамической калориметрии.

2.6.Спектрофотометрические исследования.

2.6.1 Спектрофотометрические исследования окисления гемоглобина.

2.6.2 Динамическая спектрофотометрия.

2.6.3 Спектрофотометрические исследования окисления аскорбата.

2.7. Определение концентраций закисного и окисного железа.

2.7.1. Определение концентрации закисного железа (тест А).

2.7.2. Определение концентрации окисного железа (тест Б).

2.8. Переходные характеристики измерительных устройств. 137 3. Статистическая обработка данных.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Калориметрическая регистрация разложения перекиси водорода.

1.1.Тепловые эффекты каталазной, пероксидазной реакций, а также свободнорадикального пути разложения перекиси водорода по механизму реакции Фентона.

1.1.1. Калориметрическая регистрация каталазного процесса.

1.1.1.1.0сновные параметры каталазного процесса, регистрируемые калориметрически.

1.1.2. Калориметрическая регистрация пероксидазного процесса.

1.1.3. Тепловые эффекты свободнорадикального пути разложения перекиси водорода.

II. Взаимодействие каталазы и гемовых пероксидаз с рядом физиологически значимых соединений.

II. 1. Взаимодействие каталазы и гемовых пероксидаз с нитритом.

11.1.1. Инактивация каталазы в присутствии нитрита.

II.1.1.1. Возможность использования каталазы для количественного определения нитритов.

11.1.2. Взаимодействие гемсодержащих пероксидаз с нитритом.

II.2. Закономерности ингибирования каталазы гидроксиламином.

11.3. Влияние этанола на активность каталазы.

11.4. Пероксидазное окисление аскорбата. Аскорбат-связующее звено между ферментативными и неферментативными антиоксидантами.

III. Роль каталазы и гемсодержащих пероксидаз в защите эритроцитарного гемоглобина и внеклеточных ■ физиологических сред при воздействии различных окислительных агентов.

111.1. Перекисная деструкция эритроцитарного гемоглобина.

Ее механизм и роль в условиях in vivo.

ШЛЛ.Эритроциты как детектор на перекись водорода.

111.2. Нитритиндуцированное окисление гемоглобина. Механизм и физиологическое значение процесса. Роль каталазы и гемовых пероксидаз в защите эритроцитов от токсического воздействия нитрита.

111.3. Окисление гемоглобина под воздействием тетрациклина. Роль каталазы и гемовых пероксидаз.

IV. Роль гемовых пероксидаз в антиперекисной защите клеток и внеклеточных физиологических сред (на примере молока).

V. Возможность использования антиокислительных ферментов для экологического мониторинга.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль антиокислительных ферментов в защите эритроцитарного гемоглобина и внеклеточных физиологических сред от перекисной деструкции"

Несмотря на то что функции ферментов, разлагающих перекись водорода (каталазы, различных пероксидаз) в общих чертах известны, их роль в конкретных физиологических и патологических процессах в организме в большинстве случаев по прежнему неясна. Так и нет четкого представления о роли каталазы и глютатионпероксидазы в защите клеток аэробных организмов от перекисной деструкции. Нет ясности в вопросе о том. какая функция каталазы преобладает в норме: каталазная или пероксидазная. Нет определенного представления о роли этих ферментов в таких процессах как нитритиндуцированная метгемоглобинемия и других токсических воздействиях нитрита, а также других агентов, вызывающих метгемоглобинемию и гемолиз.

Противоречива и во многом неясна физиологическая роль гемсодержащих пероксидаз. С одной стороны они, безусловно, выполняют перекисьразрушающую функцию. Но физиологический эффект их активности может быть различен в зависимости от природы окисляемых ими субстратов.

К сожалению, все современные методики не позволяют количественно дифференцировать основные пути разложения перекиси водорода в биологических объектах: каталазный, пероксидазный и свободнорадикальный. Ни контроль убыли экзогенно введенной перекиси, ни контроль сопровождающего ее выделения кислорода, либо накопления продукта пероксидазного окисления, не могут дать однозначного ответа на данный вопрос в столь сложных системах, какими являются биообъекты. В связи с этим нет четких представлений о механизме развития многих гемолитических анемий и метгемоглобинемий, о механизмах токсических воздействий нитрита, гидроксиламина и ряда других соединений (например, антибиотиков тетрациклинового ряда). Хотя известно, что все упомянутые процессы -перекисьзависимы.

В этой работе установлено, что каталазный, пероксидазный и свободнорадикальный (по типу реакции Фентона) пути разложения перекиси водорода имеют различную энтальпию, величины которой были экспериментально установлены и найдены, соответственно, 20.24, 69.25 и 58.5 ккал / моль перекиси. Причем для пероксидазного пути найденная 8 величина не зависела от природы окисляемого субстрата. Таким образом, контролируя кинетику теплопродукции, сопровождающей процесс разложения перекиси, возможно: 1/ дифференцировать основные пути разложения перекиси водорода в биообъекте; 2/ контролировать кинетику разложения перекиси водорода; 3/-контролировать изменение активности ферментов в процессе реакции путем последовательных вводов перекиси в реакционную среду и контроля кинетик ее разложения.

С помощью данной методики показано, что основным перекисьзащитным фактором в эритроцитах является каталаза. При ее полной инактивации перекись водорода даже в концентрациях 0,1-1,0 мкМ индуцировала процесс окислительной деструкции гемоглобина в эритроцитах, в котором количество окисленных гем-групп на несколько порядков превышало количество изначально введенной перекиси. Удалось также установить механизм воздействия нитрита на каталазу, и экспериментально показать, что соотношение активностей каталазы и гемсодержащих пероксидаз является определяющим фактором в токсических эффектах таких соединений как нитрит, тетрациклин и других, дающих при их пероксидазном окислении токсические продукты. Предложены схемы развития нитритиндуцированной метгемоглобинемии, токсического воздействия антибиотиков тетрациклинового ряда.

Специфичность воздействия нитрита и некоторых его метаболитов на каталазу позволило использовать ее для количественного определения данных соединений, что имеет большой не только чисто научный, но и практический смысл.

Показана также роль аскорбата как специфического субстрата гемсодержащих пероксидаз. Она заключается не только в его способности окисляться в пероксидазной реакции, но и восстанавливать другие соединения, окисляемые пероксидазой, обеспечивая, таким образом, сохранения их пула. Так как основным восстановителем окисленного аскорбата в организме является глютатион, то его расход при воздействии перекиси водорода на биологический оьъект может быть обусловлен отнюдь не только активностью глютатионпероксидазы.

Ниже эти вопросы будут рассмотрены более конкретно.

10

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы диссертации.

Роль антиокислительных ферментов в жизнедеятельности растительных и животных организмов является предметом интенсивных исследований в последние десятилетия. К настоящему времени ясно, что эти ферменты (СОД, катал аза, различные пероксидазы) не только являются важнейшими факторами защиты организм^ от активных форм кислорода, но выполняют и другие физиологически значимые функции. Известна, например, роль пероксидаз в синтезе тиреоидных гормонов, меланина, различных секретов насекомых [22]. Известна роль миелопероксидазы, а также лактопероксидазы в антибактериальной защите [60], роль растительных пероксидаз в регуляции роста растений и обеспечении их иммунитета [6, 125]. Но в то же время до сих пор нет ясности как в вопросе о значении данных ферментов во многих физиологических и патологических процессах, так и об индивидуальном вкладе каждого из них. Например, так и нет единого мнения о роли каталазы и глютатион-пероксидазы в антиперекисной защите эритроцитов и других клеток аэробных организмов [92, 118, 119, 210]. Неясна конкретная роль антиокислительных ферментов в защите организма от токсического воздействия нитритов, хотя установлено, что последнее непосредственно связано с генерацией активных форм кислорода и перекиси водорода [105, 177].

Известно также, что некоторые из этих ферментов могут проявлять различные виды активности. Так каталаза может проявлять и чисто каталазную и пероксидазную активность [122]. Некоторые исследователи склонны считать, что именно каталаза играет большую, если не основную роль в окислении нитрита [292,314].

Также неясна в значительной мере роль гем содержащих пероксидаз как антиперекисных ферментов: очевидно, что они разлагают перекись, но их субстратами могут оказаться физиологически важные соединения -катехоламины, эстрогены, некоторые аминокислоты [13-15, 332], неферментные антиоксиданты [29]. Кроме того, при пероксидазном окислении некоторых соединений образуются высокореакционноспособные продукты. Таковы нитрит [31, 33, 48], галоид-ионы [60], некоторые антибиотики [20]. Эта проблема особенно актуальна для таких объектов, как молоко, растительные ткани, где гемовые пероксидазы являются основными перекисьметаболизирующими ферментами [60]. Актуальна она и в эритроцитах, где присутствует метгемоглобин (в норме до 2% от всего гемоглобина) [82].

11

В связи с вышеупомянутым, немаловажное значение приобретает воздействие различных соединений на функциональные характеристики антиокислительных ферментов и на соотношение их активностей. Известно, например, что каталаза подвержена инактивации под воздействием перекиси водорода, причем эта инактивация зависит как от концентрации последней, так и от ряда других факторов [46, 141]. Некоторые соединения могут выступать по отношению к гемовым ферментам и как пероксидазные субстраты, и как ингибиторы. Таков, например, нитрит [33, 93]. В связи с этим трудно бывает определить, ч^м вызвано в конкретном случае регистрируемое снижение активности фермента в биообъекте - его ингибированием, конкуренцией какого-то соединения за фермент-перекисный комплекс, инактивацией фермента перекисью или снижением его синтеза.

Решение данных вопросов упирается, на наш взгляд, в следующую проблему: необходимость дифференцировать каталазный, пероксидазный и свободнорадикальный пути разложения перекиси в биообъектах. Все современные методики определения каталазной и пероксидазной активности основаны либо на контроле убыли перекиси [44, 107, 273], либо на регистрации накопления окисленного субстрата [1, 2, 306] (вариант - убыли неокисленного [ИЗ]). Таким образом невозможно ответить на вопрос - каково соотношение путей разложения Н202. Особенно в биообъектах, где существует большое количество пероксидазных субстратов, а также соединений, способных восстанавливать окисленные субстраты и влиять на спектр получаемых продуктов.

В последнее время антиокислительные ферменты используются в методиках количественного определения различных соединений [293, 304], в диагностике некоторых заболеваний животных и человека [95, 169], а также растений, в экологическом мониторинге [6, 125]. Ряд соединений, способных специфически взаимодействовать с этими ферментами, могут быть обнаружены с их помощью, причем значительно более достоверно, чем при помощи общепринятых методик [30, 32]. Но здесь опять встает задача определения соотношения путей разложения перекиси.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлось выяснение роли антиокислительных ферментов в защите клеток (на примере эритроцитов), а также внеклеточных физиологических сред (на примере молока) от

12 непосредственно перекисной деструкции, а также от воздействия ряда биологически активных агентов: нитрита, гидроксиламина, тетрациклина, чьи эффекты зависят от присутствия перекиси водорода. В работе ставились и решались следующие задачи:

1.Разработка и обоснование метода, позволяющего дифференцировать различные пути разложения перекиси водорода в биообъектах.

2.Выяснить механизм перекисной деструкции гемоглобина при малых (10"6-10"7М) ее концентрациях, а также роль этого процесса при воздействии на гемоглобин ряда известных индукторов его окисления. Определить роль различных антиокислительных ферментов в защите гемоглобина от перекисной деструкции.

3.Выяснить механизм окисления гемоглобина под воздействием нитрита, тетрациклина и роль антиокислительных ферментов в этих процессах. 4.0пределить физиологическую роль аскорбата как субстрата гемовых пероксидаз.

5.Определить характер и механизм воздействия на антиокислительные ферменты нитрита, являющегося одним из основных метаболитов окиси азота и в норме постоянно присутствующего в организме. Объект и предмет исследования.

Объектами исследования служили гемоглобин, антиокислительные ферменты, эритроциты человека и животных, молоко коровье и женское. Предметом исследования являлись механизмы процесса окисления гемоглобина под воздействием перекиси водорода и ряда индукторов метгемоглобинемии, выяснение роли антиокислительных ферментов в этих процессах, а также механизмы воздействия на активность этих ферментов ряда физиологически активных соединений. Исследована возможность использования каталазы для количественного определения нитритов.

Методология и методы проведенного исследования.

В работе использовались методы гельфильтрации, динамической калориметрии, спектрофотометрии, динамической фотометрии.

Научная новизна и значимость полученных результатов.

1.С помощью разработанного калориметрического метода экспериментально определены тепловые эффекты каталазного, пероксидазного и сврбрднорадикального (по типу реакции Фентона) путей разложения \ перекиси водорода. Последние найдены, соответственно, 20.24, 58.5 и 69.25 ккал / моль перекиси. Таким образом,

13 калориметрическая регистрация позволяет не только контролировать разложение Н202, но и дифференцировать различные пути данного процесса.

Показано, что тепловая эффективность пероксидазного пути разложения перекиси не зависит от природы окисляемого субстрата (были испытаны 1-нафтол, фенол, серотонин, эстрогены, аскорбат).

2.При помощи калориметрического метода установлено, что различные биообъекты могут иметь каталазу с различной устойчивостью к инактивации перекисью. Данный параметр может изменяться при различных патологических процессах. В связи с этим каталаза может обладать большой активностью, но низкой устойчивостью к инактивации. Не контролируя этот параметр, можно получить заниженное значение активности фермента.

3 .Показано, что нитрит в присутствии хлорида, бромида и тиоцианата способен эффективно ингибировать каталазу даже в микромолярных (реальных в условиях in vivo) концентрациях. В отсутствие галоидов и тиоцианата ингибирование не наблюдалось. Тепловой эффект каталазного процесса при этом не изменялся, то есть имело место ингибирование, но не изменение характера функционирования фермента.

4.Поскольку зависимости степени ингибирования от концентрации нитрита были, практически, идентичны как для фирменного препарата каталазы так и для каталазной активности всех исследованных биообъектов, а особенности ингибирования каталазы нитритом (зависимость степени ингибирования от присутствия галоид-ионов, рН-зависимость, снятие ингибирующего эффекта лактопероксидазой) не были обнаружены у других известных ее ингибиторов, данный фермент предложено использовать для количественного определения содержания нитритов в биообъектах. Предложенный метод, имея чувствительность до 0,3 мкМ, т.е. не уступая официальным методикам, позволяет проводить определение в нейтральной и околонейтральной среде, избегая неконтролируемых потерь нитрита при закислении, что имеет место в официальных методиках. Так как активность каталазы контролируется калориметрически, то мутность и окрашенность объекта не являются помехами для определения.

5. Благодаря предложенному методу установлено, что в результате некоторых химических процессов могут образовываться производные нитрита, способные ингибировать каталазу в присутствие галоид-ионов аналогично нитриту, но не способные быть обнаруженными по стандартной методике Грисса. Соединения с такими свойствами были обнаружены в молоке, где их концентрация, в пересчете на нитрит,

14 достигала десятков микромолей в коровьем молоке и сотен микромолей -в женском. Таким образом, можно предположить, что значительная часть нитрита, а возможно и окиси азота, метаболизируется по пути, который не может быть обнаружен и контролируем стандартными методиками.

6. Предложен механизм нитритиндуцированного окисления гемоглобина. Установлены факторы, влияющие на его интенсивность, стехиометрию, а также реально возможные пути его предотвращения и профилактики.

7. Показана роль аскорбата и глютатиона в реакциях, катализируемых гемовыми пероксидазами. Аскорбат, восстанавливая окисленные в пероксидазной реакции субстраты, среди которых могут быть катехоламины, эстрогены, некоторые антиоксиданты, предотвращает их потерю и придает пероксидазной реакции чисто перекисьметаболизирующий характер. Глютатион, в свою очередь, восстанавливает окисленный аскорбат, предотвращая его потерю вследствие необратимой деструкции окисленной формы.

8. Установлена роль пероксидазной реакции в токсическом воздействии тетрациклина. Образующиеся в результате пероксидазного окисления тетрациклина продукты, схожие по физико-химическим параметрам с таковыми, продуцирующимися при деструкции тетрациклина под действием видимого света, способны непосредственно окислять гемоглобин. Кроме того, при окислении тетрациклина под действием видимого света генерируются активные формы кислорода, вызывающие инактивацию каталазы, а также индуцирующие окисление гемоглобина.

9. Установлено, что перекись водорода в малых концентрациях (10'6-10"7М) способна в присутствии кислорода инициировать окисление гемоглобина, вследствие которого число окисленных гем-групп может на порядок и более превышать начальное количество перекиси. Неферментативные антиоксиданты не оказывали влияния на данный процесс, и только каталаза была способна его предотвратить, а также полностью остановить, будучи добавленной после перекиси. В эритроцитах процесс имел место только при ингибировании каталазы азидом. Поскольку любое окисление оксигемоглобина сопряжено с продукцией активных форм кислорода и перекиси водорода, можно предположить, что этот процесс является важным звеном в развитии метгемоглобинемий, что показано на примере ряда индукторов.

10. Предложен метод определения Н202 с чувствительностью до 10"7М, основанный на запуске перекисью вышеуказанного процесса окисления

15 гемоглобина. Данный метод не подвержен артефактам, свойственным существующим хемилюминесцентному и флуоресцентному методам из-за влияния на них содержащихся в биообъектах аскорбата, глютатиона и ряда других соединений. С помощью предложенного метода было установлено, что при УФ облучении ряда физиологически важных соединений, в частности, некоторых антиоксидантов, образуется перекись водорода.

Практическая значимость полученных результатов.

Настоящая работа относится к области фундаментальных исследований. Однако ряд ее результатов имеют очевидное научно-практическое значение.

1 .Разработанный калориметрический метод позволяет не только контролировать каталазный, пероксидазный и свободнорадикальный пути разложения перекиси, но и дифференцировать эти пути. В связи с этим его применение видится весьма целесообразным везде, где есть необходимость определения активности соответствующих ферментов в биообъектах. В настоящее время каталазную активность молока, почв определяют по количеству кислорода, выделившегося после добавления перекиси. Однако, отнюдь не только каталазный процесс может быть причиной выделения кислорода при добавлении перекиси в вышеуказанные объекты. Он может выделяться и в результате свободнорадикального распада перекиси, взаимодействия перекисных радикалов с различными соединениями. Кроме того, при введении больших концентраций перекиси неизбежна инактивация каталазы. Таким образом, фактически контролируется отнюдь не каталазная (или не только каталазная) активность. И только калориметрическим методом возможно количественно разделить все вышеупомянутые пути разложения перекиси, оценить долю того или иного пути, оценить активность каталазы в условиях, исключающих ее инактивацию перекисью.

2.На базе вышеуказанного метода предложен способ определения содержания нитритов в биологических объектах, позволяющий измерять содержание последних в нейтральной и околонейтральной среде, избегая неконтролируемых потерь нитрита при закислении, что имеет место в официальных методиках. В основе способа лежит обнаруженное нами специфическое воздействие нитрита на активность каталазы. Калориметрическая регистрация позволяет избежать артефактов,

16 связанных с мутностью и окрашенностью объекта. По чувствительности метод не уступает официально принятым.

З.При помощи данного метода было установлено, что в результате проведения различных физико-химических процедур, в частности по снижению мутности и окрашенности объекта, могут образовываться производные нитрита, не способные быть обнаруженными по стандартной методике. В связи с этим, а также неконтролируемыми потерями нитритов при их определении по стандартной методике (см. выше), предложенный метод может иметь большое значение для мониторинга качества продуктов и окружающей среды.

4.Предложенный в работе механизм нитритиндуцированного окисления гемоглобина, в котором ключевым звеном является пероксидазное окисление нитрита до высокотоксичного диоксида азота, дает возможность вести целенаправленный поиск эффективных средств для предотвращения и купирования данного патологического процесса. Показано, что высокоэффективные пероксидазные субстраты способны практически полностью предотвращать окисление гемоглобина в концентрациях на несколько порядков меньших, чем нитрит.

5.Предложенный в работе метод определения микроколичеств перекиси водорода, основанный на использовании перекисьиндуцированного окисления гемоглобина в эритроцитах, также может быть применим для определения перекиси в биообъектах, особенно содержащих большое количество аскорбата и прочих соединений, могущих внести артефакты при использовании высокочувствительных флуоресцентного и хемилюминесцентного методов. С помощью предложенного метода было установлено, что при УФ облучении аскорбата, токоферола и некоторых других антиокислителей генерируется перекись.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1.Методом динамической калориметрии экспериментально установлены величины тепловых эффектов каталазного, пероксидазного и свободнорадикального (по типу реакции Фентона) путей разложения перекиси водорода (соответственно, 20.24, 69.25 и 58.5 и ккал / моль перекиси). Данный метод, таким образом, позволяет дифференцировать различные пути разложения перекиси в конкретной системе, а также осуществлять непрерывную регистрацию кинетики разложения перекиси, контролируя кинетику теплопродукции.

2. Показана ведущая роль каталазы в защите эритроцитарного гемоглобина от перекисной деструкции. Эффект гем-со держащих

17 пероксидаз может быть различен в зависимости от качественного и количественного состава пероксидазных субстратов. В присутствии аскорбата, восстанавливающего окисленные субстраты и поддерживающего их пул, гемовые пероксидазы способны эффективно разлагать перекись без нежелательных физиологически побочных эффектов. ,у

3. Установлено, что нитрит даже в микромолярных - нормальных in vivo концентрациях, способен эффективно ингибировать каталазу в присутствии хлорида, бромида и тиоцианата, не оказывая этого эффекта на исследованные нами гем-содержащие пероксидазы: хрена, лактопероксидазу и метгемоглобин. Низкая концентрация анионов внутри клетки является, по-видимому, важным защитным фактором, препятствующем ингибированию каталазы нитритом и увеличению доли пероксидазного пути разложения перекиси, которое чревато интенсификацией пероксидазного окисления нитрита с образованием высокотоксичного продукта.

4. Уникальность свойств нитрита как ингибитора каталазы (зависимость эффекта от присутствия галоид-ионов, характерная рН-зависимость), по сравнению со всеми остальными известными ее ингибиторами, позволила использовать каталазу для количественного определения нитритов. Данный метод, не уступая в чувствительности официально применяемым, дает возможность определять их содержание в нейтральной и околонейтральной среде, что позволяет избежать неконтролируемых потерь нитрита в результате побочных реакций с аскорбатом и другими соединениями. Калориметрическая регистрация активности каталазы позволяет избежать артефактов, сопряженных с использованием оптических методик (мутность, окрашенность объекта).

5.Предложена схема развития нитритиндуцированной метгемоглобинемии, согласно которой ключевым звеном процесса является пероксидазное окисление нитрита, t катализируемое метгемоглобином, а образующаяся при этом двуокись азота -непосредственным окислителем гемоглобина. В результате окисления образуется непосредственно метгемоглобин-перекисный комплекс, а двуокись азота восстанавливается до нитрита. Число окисленных гем-групп, таким образом, может многократно превышать изначальное количество нитрита. Соединения, способные конкурировать с нитритом за пероксидазу, являются наиболее эффективными протекторами. Так как нитрит в норме присутствует в тканях как метаболит окиси азота,

18 опасность развития вышеуказанного процесса всегда в той или иной степени существует. с 7

6.Перекись водорода в малых концентрациях (10" -10" М) в присутствии кислорода способна инициировать окисление гемоглобина, вследствие которого число окисленных гем-групп может на порядок и более превышать начальное количество перекиси. Неферментативные антиоксиданты не оказывали влияния на данный -процесс, и только каталаза была способна его предотвратить, а также остановить, будучи добавленной после перекиси. В эритроцитах процесс имел место только при ингибировании каталазы азидом. Поскольку любое окисление оксигемоглобина сопряжено с продукцией активных форм кислорода и перекиси водорода, можно предположить, что этот процесс является важным звеном в развитии метгемоглобинемий, что показано на примере ряда индукторов.

7. Предложен метод определения концентрации Н202 с чувствительностью до 10"7М, основанный на запуске перекисью процесса окисления гемоглобина в эритроцитах. Данный метод не подвержен артефактам, свойственным существующим хемилюминесцентному и флуоресцентному методам из-за влияния на них содержащихся в биообъектах аскорбата, глютатиона и ряда других соединений. Личный вклад соискателя

Выбор и обоснование научной концепции исследования, постановка экспериментов, анализ полученных результатов и их интерпретация сделаны автором самостоятельно. Все основные научные результаты, представленные в диссертации, получены лично автором. Апробация результатов диссертации

Материалы диссертации докладывались на: 2-ой Всесоюзной конференции по теоретическим и прикладным вопросам криобиологии (Харьков, 1984), Международной ежегодной научной конференции "Медико-биологические проблемы экологической безопасности агропромышленного комплекса" (Сергиев Посад - Москва, 1995-2002), Итоговой конференции 2-го МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова (1989), Заседании МОИП (Москва, 30 марта 1990), 2-ом съезде биофизиков России (Москва, 1999), 2-ом Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 9-12 октября 2000)

Опубликованность результатов

По материалам диссертации всего опубликовано 40 работ, из них 32 непосредственно связаны с ее главными результатами. В их числе 26

19 статей в научных журналах и 6 тезисов докладов на научных конференциях. Общее количество опубликованных страниц - 195.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы (7 глав), методов исследования (1 глава), результатов исследования и их обсуждения (5 глав), заключения, выводов и списка использованной литературы (339 источников). Она изложена на 248 страницах машинописного текста и содержит 61 рисунок и 12 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Титов, Владимир Юрьевич

ВЫВОДЫ:

1.Методом динамической калориметрии экспериментально установлены величины тепловых эффектов каталазного, пероксидазного и свободнорадикального (по типу реакции Фентона) путей разложения перекиси водорода. Последние найдены, соответственно, 20,24, 69,25 и 58,5 ккал / моль перекиси. Таким образом, регистрация кинетики теплопродукции позволяет не только контролировать разложение Н202, но и дифференцировать пути данного процесса.

2. Показано, что физиологическая эффективность каталазы определяется такими показателями, как активность и устойчивость к инактивации под действием перекиси водорода. По последнему показателю ферменты из различных источников могут существенно различаться. При определении активности необходим подбор концентрации перекиси, исключающей инактивацию под воздействием Н202.

3.Показана роль аскорбата как связующего звена между ферментативными и неферментативными антиоксидантами. Помимо функции пероксидазного субстрата, аскорбат при соокислении с 1-нафтолом, фенолом, тетрациклином, серотонином, эстрогенами способствовал полному предотвращению окисления данных соединений, которое начиналось после его полного окисления. Таким образом, аскорбат предотвращает окисление физиологически важных соединений, способствуя исключительно перекисьдеструктивной функции пероксидазы.

4. Установлено, что нитрит способен обратимо ингибировать каталазу даже в микромолярных концентрациях при наличии в среде хлорида либо тиоцианата и бромида. На исследованных нами гемсодержащих пероксидазах - хрена, лактопероксидазе и метгемоглобине вышеуказанный эффект не выявлен. В связи с этим присутствие нитрита в системах, содержащих каталазу и гемсодержащие пероксидазы, а также хлорид, бромид и тиоцианат, приводит к интенсификации пероксидазного пути разложения перекиси и пероксидазного окисления самого нитрита, в результате чего образуется токсичный свободнорадикальный продукт.

5. Уникальность свойств нитрита как ингибитора каталазы (необходимость присутствия галоид-ионов, характерная рН-зависимость), по сравнению со всеми остальными известными ее ингибиторами, позволила использовать каталазу для количественного определения нитритов. Данный метод, в отличие от официально применяемых, дает возможность определять содержание нитритов в нейтральной и околонейтральной среде, что позволяет избежать их неконтролируемых потерь в результате побочных реакций с аскорбатом и другими соединениями. Калориметрическая регистрация активности каталазы

215 позволяет избежать артефактов, сопряженных с использованием оптических методик (мутность, окрашенность объекта).

6. При помощи калориметрического метода установлено, что в результате взаимодействия нитрита с глютатионом и ферроцианидом в кислой среде образуются производные нитрита, сохраняющие способность ингибировать каталазу, но не регистрируемые стандартным методом определения нитритов, основанном на реакции Грисса. Субстанция, обратимо ингибирующая каталазу аналогично нитриту (совпадают зависимости от галоид-ионов, рН), окисляемая, как и нитрит, лактопероксидазой, но не регистрируемая по стандартной методике, обнаружена в коровьем и женском молоке в концентрациях, достигающих, соответственно, десятков и сотен микромолей в пересчете на нитрит.

7.Перекись водорода в малых концентрациях (10"6-10'7М) в присутствии кислорода способна инициировать окисление гемоглобина, вследствие которого число окисленных гем-групп может на порядок и более превышать начальное количество перекиси. Неферментативные антиоксиданты не оказывали влияния на данный процесс, и только каталаза была способна его предотвратить, а также остановить, будучи добавленной после перекиси. В эритроцитах процесс имел место только при полном ингибировании каталазы азидом. Поскольку любое окисление океигемоглобина сопряжено с продукцией активных форм кислорода и перекиси водорода, можно предположить, что этот процесс является важным звеном в развитии метгемоглобинемий, индуцированных различными агентами. у

8. Предложен метод определения Н2О2 с чувствительностью до 10" М, основанный на запуске перекисью вышеуказанного процесса окисления гемоглобина в эритроцитах. Данный метод не подвержен артефактам, свойственным существующим хемилюминесцентному и флуоресцентному методам определения микроколичеств Н202 из-за влияния на них содержащихся в биообъектах аскорбата, глютатиона и ряда других соединений. С помощью предложенного метода было установлено, что при УФ-облучении ряда физиологически важных соединений, в частности, некоторых антиоксидантов, образуется перекись водорода.

9. На основании анализа полученных данных об окислении эритроцитарного гемоглобина под действием перекиси водорода, защитного эффекта каталазы, а также об эффективности метгемоглобина как пероксидазы и роли аскорбата как пероксидазного субстрата, сделано предположение, что наблюдаемые рядом исследователей резкое снижение концентрации глютатиона и активизация гексозомонофосфатного шунта в

216 эритроцитах под воздействием перекиси водорода, возможно, обусловлены не действием глютатионпероксидазы, как принято считать, но восстановлением глютатионом аскорбата, окисленного в пероксидазной реакции, катализируемой метгемоглобином.

10. Предложена схема развития нитрит-индуцированной метгемоглобинемии, согласно которой ключевым звеном процесса является. пероксидазное окисление нитрита, катализируемое метгемоглобином, а образующаяся при этом двуокись азота -непосредственным окислителем гемоглобина. В результате окисления образуется непосредственно метгемоглобин-перекисный комплекс, а двуокись азота восстанавливается до нитрита. Число окисленных гем-групп, таким образом, может многократно превышать изначальное количество нитрита. Соединения, способные конкурировать с нитритом за пероксидазу, являются наиболее эффективными протекторами.

11. Показано, что облучение водных растворов тетрациклина видимым светом сопровождается продуцированием перекиси водорода, полностью предотвращаемым каталазой. Однако, при инкубации эритроцитов и их гемолизатов с тетрациклином при облучении видимым светом происходит окисление гемоглобина, лишь частично предотвращаемое каталазой. Последнее, как было установлено, вызывалось продуктами фото- и пероксидазного окисления тетрациклина и не предотвращалось ни каталазой, ни ловушками кислородных радикалов. 217

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Калориметрический метод, основанный на контроле теплопродукции, сопровождающей ферментативные процессы и позволяющий дифференцировать различные пути разложения перекиси водорода, желательно использовать везде, где стоит проблема определения конкретно каталазной активности в биообъектах.

2. При разработке средств купирования и профилактики нитрит-индуцированной метгемоглобинемии, по-видимому, следует, в первую очередь, руководствоваться их эффективностью как пероксидазных субстратов, при условии, что продукты их окисления не являются токсичными.

3. Метод количественного определения нитритов, основанный на их способности ингибировать каталазу, целесообразно применять везде, где исследуемый объект содержит большое количество восстановителей, искажающих результаты стандартных методик, а также исходную окрашенность и мутность.

4. Использование эритроцитов с заингибированной азидом каталазой для количественного определения содержания перекиси водорода целесообразно в тех случаях, когда объект содержит большое количество аскорбата и прочих соединений, могущих внести артефакты при использовании высокочувствительных флуоресцентного и хемилюминесцентного методов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработанный калориметрический метод, основанный на регистрации кинетики теплопродукции при разложении перекиси водорода, позволяет дифференцировать катал азный, пероксидазный и свободнорадикальный пути разложения перекиси. Использование субстратов каталазной и пероксидазной реакций, а также ингибиторов - антиокислительных ферментов, специфичность и эффективность которых были установлены калориметрически на модельных системах, позволило установить, что в эритроцитах млекопитающих основным защитным фактором от чисто перекисной деструкции гемоглобина является каталаза. Гем-содержащие пероксидазы могут играть различную роль в зависимости от количественного и качественного состава пероксидазных субстратов. Это показано на примере нитрит-индуцированного, а также тетрациклин-индуцированного окисления гемоглобина.

Установлено, что нитрит даже в микромолярных - нормальных в условиях in vivo концентрациях, способен эффективно ингибировать каталазу в присутствии хлорида, бромида и тиоцианата, не оказывая ингибирующего эффекта на исследованные нами гем-содержащие пероксидазы: хрена, лактопероксидазу и метгемоглобин. Низкая концентрация анионов внутри клетки является, по-видимому, важным защитным фактором, препятствующем ингибированию каталазы нитритом и увеличению таким образом доли пероксидазного пути разложения перекиси, что чревато интенсификацией пероксидазного окисления нитрита с образованием высокотоксичного продукта.

Можно также предположить, что преобладание гемовых пероксидаз в растительных тканях, где нитрит регулярно присутствует как звено в цепи восстановления нитрата, а также во внеклеточных физиологических средах, в частности в молоке, обусловлено, среди прочих причин, и вышеуказанным обстоятельством. В присутствии достаточного количества пероксидазных субстратов, и в частности аскорбата, восстанавливающего окисленные субстраты и поддерживающего их пул, гемовые пероксидазы способны эффективно разлагать перекись без нежелательных физиологически побочных эффектов, что было продемонстрировано экспериментально.

Вопреки мнению ряда исследователей (Mills G. 1957, Cohen G. е.а., 1963). каких-либо данных, свидетельствующих о значительном вкладе глютатионпероксидазы в антиперекисную защиту эритроцитов, не было получено в наших экспериментах. Есть основание предположить, что наблюдаемый упомянутыми исследователями защитный эффект

213 глютатиона и интенсификации гексозомонофосфатного цикла при добавлении перекиси в эритроциты был в значительной мере обусловлен интенсификацией процесса восстановления аскорбата и, возможно, некоторых других соединений вследствие интенсификации окисления последних, в частности, гем-содержащими пероксидазами.

На основании полученных результатов можно ^сделать следующие выводы.

214

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Титов, Владимир Юрьевич, Боровск

1. Артёмчик В.Д., Кучеренко В.П., Метелица Д.И. Пероксидазная активность каталазы по отношению к ароматическим аминам. // Биохимия, 1985, т.50, №5, с.826-832.

2. Артемчик В.Д., Кучеренко В.П., Метелица Д.И. Пероксидазная активность сукцинилированной каталазы // Биохимия, 1985, т.50, №7, с. 1183-1188.

3. Бурбелло Ф.Т., Баскович Г.А., Доброхотова Е.Г., Слесарев В.И. Защитное действие антиоксидантов при метгемоглобинемии, вызванной нитритом натрия в эксперименте. // Гигиена труда и профзаболеваний, 1991, №8, с. 13-15.

4. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах.// М.: Наука, 1972, 252с.

5. Грубан 3., Рехцигл М. Микротельца и родственные им структуры. Морфология, биохимия, физиология. // Пер. Цоглиной И.В., Ред. Залкинд С.Я.: М„ Мир, 1972,310с.

6. Карташова Е.Р., Руденская Г.Н., Юрина Е.В. Полифункциональность растительных пероксидаз и их практическое использование. // Сельскохозяйственная биология, 2000, №5, с.63-70.

7. Качанова Ж.П. Взаимодействие супероксидного радикала с кислотами в водных растворах // Журнал физической химии, 1987, т.61, №7, с. 18371843.

8. Ленинджер А. Биохимия.//М.: Мир, 1974, 958с.

9. Малер Г., Кордес Ю. Основы биологической химии. // М.:Мир, 1970, 567с.

10. Методы почвенной микробиологии и биохимии. // М., изд-во МГУ, 1991, с.244-245.219

11. Загаевский И.С. Нитритная проба при определении санитарного качества молока. // Вопросы питания, 1969, т.28, №5, с.66-69.

12. Опополь Н.И., Добрянская Е.В. Нитраты. // Кишинев, 1986, с.44-86.

13. Петренко Ю.М., Матюшин А.И., Титов В.Ю. Новый взгляд на биотрансформацию эстрадиола в организме. Метаболизм эстрадиола в эритроцитах путем пероксидазной реакции // Эсперим. клин, фармакол., 1994, т.57, № 4, с.45-49.

14. Петренко Ю.М., Матюшин А.И., Титов В.Ю., Владимиров Ю.А. Эритроцитарный путь метаболических превращений половых гормонов. // Эксп. Клин. Фарм., 1995, т.58, №4, с.36-40.

15. Петренко Ю.М., Матюшин А.И., Титов В. Ю. Окислительная деструкция эстрадиола под действием перекиси водорода, катализируемая пероксидазой хрена и метгемоглобином // Биофизика, 1999. т. 44, №2, с. 236 243.

16. Петренко Ю.М., Титов В.Ю. Калориметрический метод определения эффективности функционирования каталазы в биообъектах // Вопросы мед. химии, 1989, т.35, № 6, с.143-148.

17. Петренко Ю.М., Титов В.Ю., Владимиров Ю.А. Метаболические превращения антибиотиков тетрациклинового ряда в пероксидазных реакциях // Антибиотики и химиотерапия, 1994, т.39, № 11, с. 3-10.

18. Петренко Ю.М., Титов В.Ю., Владимиров Ю.А. Генерация активных форм кислорода антибиотиками тетрациклинового ряда при катализируемом ими окислении закисного железа // Антибиотики и химиотерапия, 1995, т.40, №2, с. 3-8.

19. Петренко Ю.М., Титов В.Ю., Владимиров Ю.А. Свойство тетрациклинов вызывать метгемоглобинообразование в эритроцитах и инактивировать каталазу под действием излучения видимого диапазона // Антибиотики и химиотерапия, 1995, т.40, № 6, с. 10-18.

20. Петренко Ю.М., Титов В.Ю., Владимиров Ю.А. Метаболиты тетрациклина, полученные при его облучении видимым светом или220пероксидазном окислении. Их токсические свойства в отношении гемоглобина // Антибиотики и химиотерапия, 1995, т.40, № 7, с.43-50.

21. Рыскулова С.Т., Верболович В.П., Петренко Е.П., Цветкова Т.В., Балахчи Т.А. Системы антирадикальной защиты плазматических мембран в облученном организме // Радиобиология, 1983, т.23, №5, с.648-650.

22. Саундерс Б.К. В сб. Неорганическая биохимия. // Ред. Г.Эйхгорн. Пер. Левитина И.Я., Ред. Вольпин М.Е., Яцимирский К.Б.- М.: Мир, 1978., т.2, с.434-470.

23. Скорчеллети В.В. Теоретическая электрохимия. // JL: Химия, 1974, 304с.

24. Сперанский С.Д., Полюхович Г.С., Сперанская Б.Ч., Терещенко С.М. Сравнительное изучение активности противогипоксических средств при гемической гипоксии. // Эксп. Клин. Фарм., 1992, т.55, №4, с. 38-40.

25. Степуро И.И., Чайковская Н.А., Солодунов А.А., Арцукович А.Н. Образование NO в процессе окисления ферроформ гемоглобина нитритом. // Биохимия, 1997, т.62, №9, с. 1122-1129.

26. Титов В.Ю., Петренко Ю.М., Владимиров Ю.А. Изучение реакции каталазы с перекисью водорода калориметрическим методом. // Биофизика, 1988, т.ЗЗ, №1, с.162-163.

27. Титов В.Ю., Петренко Ю.М., Петров В.А., Владимиров Ю.А. Механизм окисления оксигемоглобина, индуцированного перекисью водорода // Бюлл. Экспер. Биол. Мед., 1991, т. 112, №7, с.46-49.

28. Титов В.Ю., Петренко Ю.М., Петров В.А. Калориметрическое исследование окисления аскорбиновой кислоты пероксидазой хрена // Биофизика, 1992, т.35, № 1, с.37-41.

29. Титов В.Ю., Марголина А.А., Петренко Ю.М. Ингибирование нитритами каталазы важный элемент их токсичности. Возможность использования каталазы как детектора на нитриты // Агрохимич. Вестник, 1997, №1, с.8-12.

30. Титов В.Ю., Фисинин В.И., Столляр Т.А., Марголина А.А., Петренко Ю.М. Механизм развития нитритиндуцированной метгемоглобинемии у животных и человека. Пути предотвращения и профилактики // Сельскохоз. биология. Сер. биол. животных, 1997, № 4, с.34-46.

31. Титов В.Ю., Марголина А.А., Петренко Ю.М., Столляр Т.А. Ингибирование каталазы нитритом и гидроксиламином в присутствии галоид-ионов. Механизм и физиологическая значимость // Сельскохоз. биология, 1998, №4, с.24-32.

32. Титов В.Ю., Петренко Ю.М., Марголина А.А. Взаимодействие нитритов с антиокислительными ферментами важнейший элемент их токсичности. Физиологические механизмы защиты // Сельскохоз. Биология, 1999, №6, с. 10-22.

33. Титов В.Ю., Петренко Ю.М. Нитриты в молоке: проблемы определения, вероятные пути метаболизма и возможная физиологическая роль // Проблемы экологической безопасности агропромышленного комплекса./ РАСХН, Москва, Сергиев Посад, 2001, вып.5, с. 15-31.

34. Угарова Н.Н., Лебедева О.В. Структура и функции пероксидазы из хрена. // Биохимия, 1978, т.43, №10, с.1731 -1742.

35. Ханке Т., Эберт Б. Исследование методом ЭПР свободных радикалов при окислении производных бензидина при помощи пероксидазы и перекиси водорода. // Биофизика, 1987, т.32, №4, с.569-572.

36. Цибулевский А.Ю., Титов В.Ю., Петренко Ю.М. Изменение некоторых свойств тонкой кишки при ваготомии // Пат. физиол. и экспер. терап. 1992, т.35,№3, с.44-46.222

37. Шамб У., Сеттерфилд Ч., Вентворс Р. Перекись водорода. // М. Изд-во Иностранной Литературы, 1958, 576с.

38. Шидловская В.П. Содержание нитратов и нитритов в молоке и сухих молочных продуктах. // Молочная промышленность, 1986, №1, с.29-31.

39. Abu-Soud Н., Hazen S. Nitric oxide is a physiological substrate for mammalian peroxidases. // J. Biol. Chem., 2000, v.275, №48, p.37524-37532.

40. Abu-Soud H., Khassawneh M., Sohn J., Murray P., Haxhiu M., Hazen S. Peroxidases inhibit nitric oxide (NO) depend bronhodilation: development of a model describing NO-peroxidase interaction. //Biochemistry, 2001, v.40, №39, p.l 1866-11875.

41. Achenbach C., Hauswirth O., Wiemer J., Ziskoven R. The reaction of haemoglobin and sodium nitrite in intact bovine erythrocytes. // J. Physiol (London). 1983, v.334, p. 80p-81p.

42. Aebi H. Catalase in vitro. //Methods in Enzymology, 1984, v.105, p.121-126.

43. Aebi H., Suter H. Acatalasemia. / Advances in Human Genetics v.2; ed. H.Harris, K.Hirschhorn.- New-York-London.: Plenum Press, 1971, p.143-199.

44. Altomare R.E., Kohler J., Greenfield P.F., Kittrell J.R. Deactivation of immobilized beef liver catalase by hydrogen peroxide. // Biotechnol and Bioeng., 1974, v.16, №12, p.1659-1673.

45. Ames В., Cathart R., Schwiers E., Hochstein P. Urik acid provides an antioxidant defense in humans against oxidant and radikal caused aging and cancer: a hypotesis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, v.78, №11, p.6858-6862.223

46. Arduini A., Mancinelli G., Luca Radatti G., Hochsteia P., Cadeaas E. Possible mechanism of inhibition of nitrite induced oxidation of oxyhemoglobin by ergothioneine and uric acid. // Arch. Biochem. Biophys., 1992, v.294, №2, p. 398-402.

47. Arrio В., Lecuyer В., Dupaix A., Volfin P., Jousset M. Design of a chemiluminescent and bioluminescent photometer. // Biochimie, 1980, v.62, №7. p.445-453.

48. Asahi M., Fujii J., Suzuki K., Seo H., Kuzuya Т., Hori M., Tada M., Fujii Sh. laniguchi N. Inactivation of glutathione peroxidase by nitric oxide. // J. Biol. Chem., 1995, v.270, №36, p.21035-21039.

49. Atkins G., Dean В., Griffin W., Watts R. Quantitative aspects of ascorbic acid metabolism in man. // J. Biol. Chem., 1964, v.239, №9, p.2975-2980.

50. Balazy M., Kaminski P., Mao K., Tan J., Wolin M. S-nitroglutathione, a product of the reaction between peroxynitrite and glutathione that generated nitric oxide. // J. Biol. Chem., 1998, v.273, №48, p.32009-32015.

51. Baker E.M., Hodges R.E., Hood J., Sauberlich H.E., March S.C., Canham J.E. Metabolism of 14C- and 3H- labeled L- ascorbic acid in human scurvy. // Am. J. Clin. Nutr., 1971, v.24, № 4, p.444-454.

52. Baker E.M., Saari J.C., Tolbert B.M. Askorbic Acid. Metabolism in Man. // Am. J. Clin. Nutr., 1966, v. 19, №6, p.371-378.

53. Banerjee R., Datta A. Salivary peroxidases. // Mol. Cell. Biochem., 1986, v.70, №l,p.21-29.

54. Banerjee S., Deb Ch., Belavady B. Effect of scurvy on glutathione and dehydroascorbic acid in guinea pig tissues. // J. Biol. Chem., 1952, v. 195, №1, p.271-276.224

55. Barb W.G., Baxendale I.H., George P., Hargrave K.R. Reaction of Ferrous and Ferric Ions with Hydrogen Peroxide. Part I -The Ferrous Ion Reaction. // Trans. Faraday Soc., 1951, v.47, №5(341), p.462-500.

56. Barnes M.J., Function of Ascorbic Acid in Collagen Metabolism. // Ann. N. Y. Acad. Sci. USA, 1975, v.258, p.264-276.

57. Barrett N., Grandison A., Lewis M. Contribution of the lactoperoxidase system to the keeping quality of pasteurized milk.// J. Dairy Res. 1999, v.66, №1, p.73-80.

58. Basu S., Som S., Deb S., Mukheijee D., Chatterjee I.B. Dehydroascorbic Acid Reduection in Human Erythrocytes. // Biochim. Biophys. Res. Commun., 1979. v.90, №4, p.1335-1340.

59. Bazylinski P.A., Arkowitz R.A., Hollocher T.C. Decomposition of Hydroxylamine by Haemoglobin. // Arch. Biochem. Biophys., 1987, v.259, №2, p.520-526.

60. Beers R.F., Sizer I.W. A spectrophotometric method for measuring the breakdown of hydrogen peroxide by catalase. // J. Biol. Chem., 1952, v. 195, №1. p.133-140.

61. Benatti U., Morelli A., Guida L., De. Flora A. The Production of Activated Oxygen Species by an Interaction of Methemoglobin with Ascorbate. // Biophys. Biochem. Res. Comm., 1983, v.l 11, №3, p.980-987.

62. Beres L., Sturtevant I.M. Calorimetric Studies of the Activation of Chymotrypsinogen A. //Biochemistry, 1971, v.10, №11, p.2120-2126.

63. Bianchi J., Rose R.C. Na+ independent dehydro-Lascorbic acid uptake in renal brush-border membrane vesicles. // Biochim.Biophys. Acta, 1985, v.819, №1, p. 75-82.

64. Bianchi J., Rose R.C. Transport of L-ascorbic acid across renal cortical basolateral membrane vesicles. // Biochim. Biophys. Acta, 1985, v. 820, №2, p.265-273.

65. Bianchi J., Rose R.C. Glucose- Independent Transport of dehydroascorbic Acid in Human Erythrocytes. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1986, v.181, №3, p.333 337.

66. Bianchi J., Wilson F.A., Rose R. Dehydroascorbic acid and ascorbic acid transport systems in the guinea pig ileum. // Am. J. Physiol., 1986, v.250, №4, Pt.l, p. J461-J468.

67. Bielski B.H.J. Chemistry of Ascorbic Acid Radikals. / Ascorbic Acid: Chemistry, Metabolism and Uses; Eds. Seib P.A., Tolbert B.M.: Amer. Chem. Soc. Washington D.C., 1982, p.81-100.

68. Bielski B.H.J, and Richter H.W. Some Properties of the Ascorbate Free Radikals. // Ann. N. Y. Acad. Sci. USA, 1975, v.258, p.231-237.

69. Bigley R.H., Stankova L. Uptake and Reduction of Oxidized and Reduced Ascorbate by Human Leukocytes. // J. Exp. Med., 1974, v. 13 9, .№5, p. 10841092.

70. Bigley R., Stankova L., Roos D., Loos J. Glutathione Dependent Dehydroascorbate Reduction : a Determinant of Dehydroascorbate Uptake by Human Polymorphonuclear Leukocytes. // Enzyme, 1980, v.25, №3, p.200-204.

71. Blaug S.M., Hajratwala B. Kinetics of Aerobic Oxidation of Ascorbic Acid. // J. Pharm. Sci., 1972,v. 61, № 4, p. 562.

72. Borsook H., Davenport H.W., Cecil E.P., Warner J., Warner R. The Oxidation of Ascorbic Acid and Its Reduction in Vitro and in Vivo. // J. Biol. Chem., 1937, v.l 17, № 1, p. 237-279.

73. Brown A.-M., Benboubetra M., Ellison M., Powell D., Reckless J., Harrison R. Molecular activation-deactivation of xanthine oxidase in human milk. // Biochim. Biophys. Acta, 1995, v.1245, №2, p.248-254.

74. Broun G. Reversible binding and inhibition of catalase by nitric oxide. // Eur. J. Biochem., 1995, v.232, №1, p.l88-191.

75. Brown W.D., Mebine L.B. Autooxidation of Oxymyoglobins. // J. Biol. Chem., 1969, v.244, №24, p.6696-6701.

76. Bruning Fann C., Kaneene J. The effects of nitrate, nitrite and N-nitrosocompounds on human health: A review. // Vet. Hum. Toxicol., 1993, v.35, №6, p.521-538.

77. Buettner G.R. Ascorbate autoxidation in the presence of iron and copper chelates. // Free Rad. Res. Comms., 1986, v.l, №6, p. 349-353.

78. Carlbery I., Mamerwick B. Purification and characterization of the Flavoenzyme Glutatione Reductase from Rat Liver. // J. Biol. Chem., 1975, v.250, №14, p.5475-5480.

79. Carrell R.W., Winterbourn C.C., Rachmilewitz E.A. Activated Oxygen and Haemolysis. // British Journal of Haematology, 1975, v.30, №3, p.259-264.

80. Castro C., Wade R., Belser N. Conversion of oxyhemoglobin to methemoglobin by organic and inorganic reductants. // Biochemistry, 1978, v.l7. №2, p.225-231.

81. Chance B. The primary and secondary compounds of catalases and methyl of ethyl hydrogen peroxides. // J. Biol. Chem., 1949, v.179, p. 1331-1339.

82. Chance В., Herbert D. The Enzyme Substrat Compounds of Bacterial Catalase and Peroxidase. // Biochem. J., 1950, v.46, p.402-414.

83. Chance B. The kinetics and stoichiometry of transition from the primary to the secondary peroxidase complexes. // Arch. Biochem. Biophys., 1952, v.41, №2, p. 416-424.

84. Chatterjee I.B., Banerjee A. Estimation of Dehydroascorbic Acid in Blood of Diabetic Patients. // Analytical Biochemistry, 1979, v. 98, №2, p.368-374.

85. Chaudiere J., Wilhelmsem E.C., Tappel A.L. Mechanism of Selenium -Glytatione peroxidase and its Inhibition by Mercaptocar-boxylic Acid and other Mercaptans //J.Biol.Chem., 1984, v.259, №2, p.1043-1050.227

86. Christine L., Thompson G., Iggo В., Brownie A., Stewart C.P. The Reduction of Dehydroascorbic Acid by Human Erythrocytes. // Clin. Chim. Acta, 1956, v.l, №6,p.557- 569.

87. Chung Y., Xu D., Jue Th. Nitrite oxidation of myoglobin in perfused myocardium: implications for energy coupling in respiration. // Am. J.Physiol., 1996, v.271, №3 (Pt 2), p. H1166-H1173.

88. Cohen G., Hochstein P. Glucose 6 - phosphate dehydrogenase and detoxification of hydroden peroxide in human erythrocytes. // Science, 1961, v.l34, №3492, p. 1756-1757.

89. Cohen G., Hochstein P. Glutatione peroxidase: the primary agent for elimination of hydrogen peroxide in erytrocytes // Biochemistry, 1963, v.2, , №6. p. 1420-1428.

90. Cohen G., Martinez M., Hochstein P. Generation of Hydrogen Peroxide During the Reaction of Nitrite with Oxyhaemoglobin. // Biochemistry, 1964, v.3, №7, p. 901-903.

91. Cooper Ch.E., Odell E. Interaction of human myeloperoxidase with nitrite. // FEBS Letters, 1992, v.314, №1, p.58-60.

92. Cooray R. Use of bovine myeloperoxidase as an indicator of mastitis in dairy cattle. // Vet. Microbiol., 1994, v.42, №4, p.317-326.

93. Cox B.D., Whichelow M.J. The Measurement of Dehydroascorbic Acid and Diketogulonic Acid in Normal and Diabetic Plasma. // Biochemical Medicine, 1975, v.12, №2, p.183-193.

94. Crowder A.L., Swenson Ch.A., Barker R. Calorimetric Studies of the Binding of Ligands to Aldolase. // Biochemistry, 1973, v.12, №15, p.2852-2855.

95. Csuros Z., Petro J. Autoxidation of ascorbic acid as a function of pH values. // Acta Chim. Acad. Sci. Hung., 1955, v.7, № 1-2, p. 199-222.228

96. Dalziel К., О Brien J.R.P. Spectrokinetic studies of the reaction of hydrogen peroxide with haemoglobin in dithionite solutions. // Biochem. J., 1957. v.67, №1, p.124-136.

97. Dar S.K., Nain R.C. Superoxide dismutase, glytatione peroxidase, catalase and lipid peroxidation of normal and sickled erythrocytes. // British J. Haematol., 1980, v.44, №1, p.87-92.

98. Davison A., Kettle A., Fatur D. Mechanism of the inhibition of catalase by ascorbate. Roles of active oxygen species, copper and semidehydroascorbate. // J. Biol. Chem., 1986, v.261, №3, p. 1193-1200.

99. Doerr R.C., Gates R., Fiddler W. Chemiluminescence detection of nitrite in nonfat milk powders. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1982, v.65, №3, p.616-618.

100. Doyle M., Pickering R., De Weert Т., Hoekstra J., Pater D. Kinetics and mechanism of the oxidation of human deoxyhemoglobin by nitrites. // J. Biol. Chem., 1981, v.256, №23, p.12393-12398.

101. Doyle M., Pickering R., Dykstra R., Nelson C., Boyer R. Involvement of peroxide and superoxide in the oxidation of hemoglobin by nitrite. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1982, v.105, №1, p.127-132.

102. Doyle M.P., Herman J.S., Dykstra.L. Autocatalytic oxydation of haemoglobin induced by nitrite: activation and chemical inhibition. // J. Free Radic. Biol. Med., 1985, v.l, №2, p.145-153.

103. Elliott K. Milk peroxidase. Its preparation, properties and action with H202 on metabolites. With a method for determining small amounts of H202 in complex mixtures. Biochem. J., 1932, v.26, P.I, p.10-24.

104. Egerton A., Everett A., Minkoff G., Rudrakanchana S., Salooja K. Some improvements in the methods of analysis of peroxides. // Anal. Chim. Acta, 1954. v.10, №5, p.422-428.

105. Evans M.G., Hush N.S., Uri N. The Energetics of Reactions Involving Hydrogen Peroxide, Its Radicals and Its Ions. // Quarterly Reviews, 1952, v.6, №2. p. 186-196.229

106. Evans R.M., Currie L., Campbell A. The distribution of ascorbic acid between varicus cellular components of blood, in normal individuals, and its relation to the plasma concentration. // Brit. J. Nutr., 1982, v.47, №3, p.473-482.

107. Eyer P., Hertle H., Kiesse M., Klein G. Kinetics, of ferrihaemoglobin formation by some reducing agents, and role of hydrogen peroxide. // Mol. Pharmacol., 1975, v.ll, №3, p.326-334.

108. Fahimi H., Herzog V. A colorimetric assay for peroxidatic reactions based on the oxidation of 3,3'-diaminobenzidine (DAB). // J. Histochem. Cytochem., 1972, v.20, p.840-852.

109. Finkelstein E., Rosen G., Raauckman E. Spin Trapping. Kinetics of the Reaction Superoxide and Hydroxyl Radicals with Nitrones // J. Am. Chem. Soc. 1980, v. 102, № 15, p.4994-4999.

110. Fletcher M.P., Seligmann B.E. Gallin J.I. Correlation of human neutrophil secretion; chemoattractant receptor mobilization and enhanced functional capacity. // J. Immunol., 1982, v.128, №2, p.941-948.

111. Flohe L., Gunzler W.A. Assays of glutation peroxidase. // Methodes in Enzymology, 1984, v. 105, p. 114-121.

112. Frei В., England L., Ames B.N. Ascorbate is an Outstanding Antioxidant in Human Blood Plasma. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v.86, №16, p. 6377-6381.

113. Fridowich I. Superoxide Dismutases. // Ann. Rev. Biochem., 1975, v.44, p.147-159.

114. Fridowich I. Biological effects of the superoxide radical. // Arch. Biochem. Biophys., 1986, v.247, №1, p. 1-11.

115. Gaetani G.F., Galiano S., Сапера L., Ferraris A.M., Kirkmann H.N. Catalase and glutatione Peroxidase Are Equally Active in Detoxification of Hydrogen Peroxide in Human Erythrocytes. // Blood, 1989, v.73, №1, p.334-339.230

116. Gaetani G., Kirman H.N., Mangerini г., Ferraris A.M. Impotance of catalase in the disposal of hydrogen peroxide within human erythrocytes. // Blood, 1994, v.84, №3, p;325-330.

117. Galaris D., Cadenas E., Hochstein P. Redox Cycling of Myoglobin and Ascorbate: A Potential Protective Mechanism against Oxidative Reperfusion Injury in Muscle. // Arch. Biochem. Biophys., 1989, v.273, №2, p.497-504.

118. Galaris D., Cadenas E., Hochstein P. Glutathione-dependent reduction of peroxides during ferryl- and met-myoglobin interconversion: a potential protective mechanism in muscle. // Free Rad. Biol. & Med., 1989, v.6, p.473-478.

119. Gang H., Cederbaum A., Rubin E. Stereocpecifity of ethanol oxidation. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1973, v.54, №1, p.264-269.

120. Ganther H., Kraus R. Oxidation states of glutatione peroxidase. // Methods in enzymology, 1984, v. 107, p.593-602.

121. Garel M.C., Domenget Ch., Caburi-Martin J., Prehu C., Galouteros F., Beuzard Y. Covalent binding of glutatione to haemoglobin. 1. Inhibition of haemoglobin S polymerization. // J. Biol. Chem., 1986, v.261, №31, p. 1470414709.

122. Gazaryan I., Lagrimini L., Ashby G., Thorneley R. Mechanism of indole -3-acetic acid oxidation by plant peroxidases: anaerobic stopped-flow spectrophotometric studies on horseradich and tobacco peroxidases. // Biochem. J., 1996, p.841-847.

123. George P., Irvine D.H. The reaction between metmyoglobin and hydrogen peroxide. // Biochem. J., 1952, v.52, №3, p.511-517.

124. Goldberg В., Stern A., Peisach J. The mechanism of superoxide anion generation by the interaction of phenyihydrazine with haemoglobin. // J. Biol. Chem., 1976, v.251, №10, p.3045-3051.

125. Green L., Rait D. Tannenbaum S. Nitrate, nitrite and N-nitroso compounds: biochemistry, metabolism, toxicity and carcinogenicity. // Human Nutrition. Eds: Burgess J. Inc., Englewood, N.J., 1982, p.87-140.231

126. Grochmalicka J. Trwalosc kwasu 1-askorbinowego w roztworach wodnych. // Zesz. Probl. Postepow. Nauk. Poln., 1965, z.53, c. 57-63.

127. Grun E., Furll В., Kramer A;, Thurkow В., Weuffen W., Paetzelt H. Thiocyanatgehalt in blutplasma, euterlymphe und milch von gesunden und euterkranken kuhen. // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr., 1995, v. 108, №3, p.93-97.

128. Haber F., Weiss I. The Catalytic Decomposition of Hydrogen Peroxide by Iron Salts. //Proc. Ray. Soc. Ser. A, 1934, v. 147, №861, p.332-351.

129. Hall A., Kulig K., Rumack B. Drug- and chemical induced methemoglobinemia. Clinical features and management. // Med. Toxicol., 1986, v.l, №4, p.253-260.

130. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. / Free Radicals in Biology and Medicine. Ed. Halliwell В., Gutteridge J.- Oxford: Science Publications, Clarendon Press, 1986, p.100-106.

131. Hanuokuglu A., Fired D., Bodnu D. Methaemoglobinemia in infants with enterits. // J. Pediatr., 1983, v. 102, №1, p. 161-162.

132. Нага Т., Minakami S. On the functional rde of cytochrome Ь5 II NADH linked ascorbate radical reductase activity in microcomes. // J. Biol. Chem., 1971. v.69,p. 325.

133. Hardwick T.J. The Rate Constant of the Reaction Between Ferrous Ions and Hydrogen Peroxide in Acid Solution. // Can. J. Chem., 1957, v.35, №5, p.428-436.

134. Hartman Ph. Nitrates and nitrites: ingestion, pharmacodynamics and toxicology. // Chemical Mutagens, 1982, v.7, p.211-294.

135. Harvey A.E., Smart J.A., Amis E.S. Simultaneous Spectrophotometric Determination of Iron (II) and Total Iron with 1,10 Phenanthroline // Anal. Chem., 1955, v.27, № 1, p.26-29.

136. Herzog V., Fahimi H. A new sensitive colorimetric assay for peroxidase using 3,3'-diaminobenzidine as hydrogen donor. // Anal. Biochem., 1973, v.55, p.554-569.

137. Herzog V., Fahimi H. :The effect of glutaraldehyde on catalase.Biochemical and cytochemical stydies with beef liver catalase and rat liver peroxisomes. // J. Cell. Biol., 1974, v.60, №1, p.303-311.

138. Hillar A., Nicholls P. A mechanism for NADPH inhibition of catalase compound II formation. // FEBS Letters, 1992, v.314, №2, p.179-182.

139. Herbert J., Sipe J., Jordan J., Hanna Ph., Mason R. The metabolism of 17p-estradiol by lactoperoxidase: a possible source of oxidative stress in breast cancer. // Carcinogenesis, 1994, v. 15, №1, p.2637-2646.

140. Hornig D., Weber F., Wiss O. Uptake and Release of ( 1-14C ) Ascorbic Acid and ( 1-14C ) Dehydroascorbic Acid by Erythrocytes of Guinea Pigs. // Clin. Chim. Acta, 1971, v.31, №1, p. 25-35.

141. Hornig D., Weber F., Wiss O. Studies on the uptake ofl-14C. ascorbic acid by platelets of guinea pigs. // Clin. Chim. Acta, 1971, v.33, №1, p.187-196.

142. Hornig D., Weber F., Wiss O. Autoradiographic Distribution of ( 1-14C ) Ascorbic Acid in Male Guinea Pigs after Intravenous Injection. // Internal J. Vit. Nutr. Res., 1972, v.42, №2, p.223-241.

143. Hornig D., Weber F., Wiss 0. Tissue Distribution of Labelled Material in Vitamin С Deficient Guinea Pigs after Intravenous Injection of 1-14C. Ascorbic Acid or ( 1-14C ) Dehydroascorbic Acid. // Internat. J. Vit. Nutr. Res. 1972, v.42, №4, p.511-523.

144. Hornig D., Weiser H., Weber F., Wiss O. Uptake and release of 1-14C. ascorbic acid and [1-14C] dehydroascorbic acid by leucocytes of guinea pigs. // Clin. Chim. Acta, 1971, v.32, №1, p.33-39.

145. Hornig D., Weiser H., Weber F., Wiss O. Effect of Massive Doses of Ascorbic Acid on its Catabolism in Guinea igs. // Internat. J. Vit. Nutr. Res., 1973, v.43,№l,p. 28-33.

146. Hornig D., Weber F., Wiss O. Studies on the Distribution of ( 1-14C ) Ascorbic Acid and ( 1-14C ) Dehydroascorbic Acid in Guinea Pigs after Oral Application. // Internat. J. Vit. Nutr. Res., 1974, v.44, №2, p.217-229.

147. Hughes R.E. Reduction of Dehydroascorbic Acid by Animal Tissues. // Nature, 1964, v.203, №4949, p.1068- 1069.

148. Hughes D.E. Irreversible Reaction Kinetics of the Aerobic Oxidation of Ascorbic Acid. // Anal. Chem., 1985, v.57, № 2, p.555-558.

149. Hughes R., Kilpatrick G.S. The Reduction of Dehydroascorbic Acid by Haemolysates of Pernicious Anaemia Erythrosates. // Clin. Chim. Acta, 1964, v.9,№3, p.241-244.

150. Hughes D.E., Maton S.C. The Passage of Vitamine С across the Erythrocyte Membrane. // Brit. J. Haematol., 1968, v.14, №3, p.247-253.

151. Irving H., Mellor D.H. The Stability of Metal Complexes of 1,10-Phenanthroline and its Anallogues. Part 1. 1,10-Phenanthroline and 2,2 Bipyridyl // J. Chem. Soc., 1962, № 12, p. 5225-5237.

152. Irwin M., Hutchins B. A conspectus of reseach on vitamin С requirements of man. // J. Nutr., 1976, v.106, № 6, p. 821-880.

153. Jones P. Dissociation of catalase. // Biochem. J., 1970, v.180, №2, p.319-321.

154. Jones P. Catalases and Iron-Porphyrin Model Systems: Rols of the Coordination Environment of Iron in Catalytic Mechanisms. // Proc. NATO/234

155. Adv. Study Inst. Edmonton. 1981, Aug. 23-Sept. 4, Ed. Dunford H.B.Dordrecht P.A., 1982, p.427-438.

156. Kanai Y., Sugimura J., Matsushima J., Kawamura A. Studies on in vivo degradation of rat hepatic catalase with or without modification by 3 amino-1,2,4 triazole // J. Biol. Chem., 1974, v.249, №20, p.6505-6511.

157. Kapeghian J.C., Verlangieri A. The Effects of Glucose on Ascorbic Acid Uptake in Heart Endothelial Cells: Possible Pathogenesis of Diabetic Angiopathies // Life Sci., 1984, v.34, №6, p.577-584.

158. Kaveeshwar R., Cherian L., Gupta V. Extraction spectrophotometric determination of nitrite using l-aminonaphthalene-2-sulphonic acid. // Analyst, 1991, v. 116, №6, p.667-669.

159. Keating J., Lell M., Strauss A., Zarkowsky H, Smith G. Infantile methemoglobinemia caused by carrot juice. //New Engl. J. Med., 1973, v.288, №16, p.824-826.

160. Keilin D., Hartree E. The Combination between Methaemoglobin and Peroxides: Hydrogen Peroxide and Ethyl Hydroperoxide. // Proc. Proy. Soc. B,1935, v.l 17, № B802, p.1-15.

161. Keilin D., Hartree E. Coupled oxidation of alcohol. // Proc. R. Soc. В.,1936. v.l 19, №1, p.141-155.

162. Keilin D., Hartree E. Catalase, peroxidase and metmyoglobin as catalysts of coupled peroxidase reaction. //Biochem. J., 1955, v.60, №2, p.310-325.

163. Keilin D., Nicholls P., Reactions of catalase with hydrogen peroxide and hydrogen donors.// Biochim. Biophys. Acta., 1958, v.29, №2, p. 302-307

164. Kirkman H.N., Gaetani G.F. Catalase:A tetrameric enzyme with four tightly bound molecules of NADPH. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, v.81, №14, p. 4343-4347.

165. Kitchen B. Review of the progress of dairy science: bovine mastitis: milk compositional changes and related diagnostic tests. // J. Dairy Res., 1981, v.48, p.167-188.235

166. Kniewald I., Kniewald Z., Mildner P. New Approach to the Study of Hormone-Protein Interaction Using the Microcalorimetric Method. // Steroids, 1975. v.25, №4, p. 477-485.

167. Kociba R., Sleight S. Nitrite toxicosis in the ascorbic acid deficient guinea pig. // Toxic. Appl. Pharmacol., 1970, v.16, p.424-429.

168. Kolthoff I.M., Leussing D.L., Lee T.S. Reaction of Ferrous Monophenanthroline Complex and the Colorimetric Determination of Phenanthroline // J. Am. Chem. Soc., 1950, v.72, № 5, p. 2137-2177.

169. Kono Y. The production of nitrating species by the reaction between nitrite and hypochlorous acid. // Biochemistry and Molecular Biology International, 1995, v.36, №2, p.275-283.

170. Kono Y., Fridowich I. Superoxide radical inhibits catalase // J. Biol. Chem., 1982, v.257, №10, p.5751-5754.

171. Kosaka H., Imaizumi K., Imai K., Tyuma I. Stoichiometry of the reaction of oxyhemoglobin with nitrite. // Biochim. Biophys. Acta, 1979, v.581, №1, p. 184-188.

172. Kosaka H., Imaizumi K., Tyuma I. Mechanism of autocatalytic oxidation of \/ oxyhemoglobin by nitrite. An intermediate detected by electron spin resonance // Biochim. Biophys. Acta, 1982, v.702, №2, p. 237-241.

173. Kosaka H., Tyuma I. Mechanism of autocatalytic oxidation of oxyhemoglobin by nitrite// Environ. HealthPerspect., 1987, v.73, p. 147-151.

174. Kosaka H., Uozumi M. Inhibition by amines indicates involvement of nitrogen dioxide in autocatalytic oxidation of oxyhemoglobin by nitrite. // Biochim. Biophys. Acta, 1986, v.12, №871(1), p.14-18.

175. Kraus R.J., Prohaska J.R. Gauther H.E. Oxidized forms of ovine erythrocyte glutatione peroxidase.Cyanide inhibition of a 4- glutatione : 4-selenoenzyme // Biochim. Biophys. Acta, 1980, v.615, №1, p. 19-26.

176. Kremer M.L., Baer S. Stable intermediates in kinetic model of catalase action. // J. Phys. Chem., 1974, v.78, №19, p.1919-1922.

177. Krisam G., Schmidt H.L. Development and Properties of Caloric System for Substrate Determinations with Immobilized Enzymes. // Appl. Calorymetry in Life Sciences, Ed. Lamprecht. L., Schaarschmidt B. Walter de Gruyter.-Berlin, New-York, 1977, p.39-47.

178. Lacasse P., Farr V., Davis S., Prosser C. Local secretion of nitric oxide and the control of mammary blood flow. // J. Dairy Sci., 1996, v.79, №8, p.1369-1374.

179. Lee T.S., Kolthoff I.M., Leussing D.L. Reaction of Ferrous and Ferric Iron with 1,10-Phenanthroline. I Dissociation Constants of Ferrous and Ferric Phenanthroline. // J. Am. Chem. Soc., 1948, v.70, №7, p.2348-2352.

180. Lee W., Davis K.A., Rettmer R., Labbe R.F. Ascorbic acid status: biochemical and clinical considerations // Am. J.Clin. Nutr., 1988, v.48, №2, p. 286-290.

181. Legge J.W., Lemberg R. Coupled oxidation of ascorbic acid and haemoglobin. 4.The "labile iron " in blood and its increase during choleglobin formation // Biochem. J., 1941, v.35, №3, p.353-362.

182. Lemberg R., Legge J.W., Lockwood W.H. Coupled oxidation of ascorbic acid and haemoglobin. 3. Quantative studies on choleglobin formation estimation of haemoglobin ascorbic acid oxidation. // Biochem. J., 1941, v.35, №3. p.339-352.

183. Lemberg R., Phil D. The chemical mechanism of bile pigment formation К Rev. Pure Appl. Chem., 1956, v.6, №1, p.1-23.

184. Leffler A.J. A Study of the Hydrolysis of Iron (III) Ion by Sodium Bicarbonate Using an Inert NMR Probe Technique // Inorganic Chemistry, 1979, v. 18, №9, p. 2529-2532. •

185. Legge J.W., Lemberg R. Coupled oxidation of ascorbic acid and haemoglobin. 4.The "labile iron " in blood and its increase during choleglobin formation // Biochem. J., 1941, V.35, №3, p.353-362.

186. Ljones Т., Skotland Т. Evidence from Acceleration of Cytochrome С Reduction for the Formation of Ascorbate Free Radical by Dopamine -Monooxygenase // Febs Letters, 1979, v. 108, №1, p.25-27.

187. Licht W., Tannenbaum S., Deen W. Use of ascorbic acid to inhibit nitrosation: kinetic and mass transfer consideration for an in vitro system. // Carcinogenesis, 1988, v.9, №3, p.365-372.

188. Loewus F.A., G.Wagner and S.C.Yang. Biosintesis and Metabolism of Ascorbic Acid in Plants. // Ann. N. Y. Acad. Sci. USA., 1975, v.258, p.7-23.

189. Loh H., Wilson C. The origin of ascorbic acid stored in the leucocytes. // Brit. J. Pharm., 1970, v.40, №1, р.169Р-170Р.

190. Lovstad R.A. Copper Catalyzed Oxidation of Ascorbate (Vitamin C). Inhibitory Effect of Catalase, Superoxide Dismutase ,Serum Proteins (Ceruloplasmin, Albumin, Apotransferrin) and Amino Acides // Int. J. Biochem., 1987, v. 19, №4, p.309-313.

191. Maickel R.P. A Rapid Procedure for the Determination of Adrenal Ascorbic Acid.Application of the Sullivan and Clarke Method to Tissues. // Anal. Biochem., 1960, v.l, №6, p.498-501.

192. Mann G., Newton P. The Membrane Transport of Ascorbic Acid // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1975, v. 258, p. 243- 252.

193. Manning P.B., Coulter S.T., Jenness R. Determination of nitrate and nitrite in milk and dry milk products. // J. Dairy Sci., 1968, v.51, №11, p.1725-1730.

194. Mansouri A. Oxidation of human haemoglobin by sodium nitrite effect of B-93 thiol groups //Bioch. Bioph. Res. Comm., 1979, v.89, №2, p.441-447.

195. Mansouri A., Winterhalter K.H. Nonequivalence of chains in haemoglobin oxidation // Biochemistry, 1973, v. 12, №24, p.4946-4949.

196. Maral J., Puget K., Michelson M. Comparative study of superoxide dismutase, catalase and glutation peroxidase levels in erythrocytes of different animals // Biochem. Bioph. Res. Commun., 1977, v.11, №4, p. 1525-1535.238

197. Margoliash E., Novogrodsky A., Schejter A. Irreversible reaction of 3-amino-l:2:4-triazole and related inhibitors with protein of catalase. // Biochem. J., 1960, v.74, №2, p.339-350.

198. Marietta M., Yoon P., Iyengar R., Leaf C., Wishnok J. Macrophage oxidation of L-arginine to nitrite and nitrate: nitric oxide is an intermediate. // Biochemistry, 1988, v.27, №24, p.8706-8711.

199. Martin G.R., Mecca Ch.E. Studies on the Distribution of Ascorbic Acid in Rat//Arch. Biochem. Biophys., 1961, v.93,№l, p.110-114.

200. May R. An infant with sepsis and methemoglobinemia. // J. Energ. Med., 1985, v.3, p.261-264.

201. Mbemba F., Houbion A., Raes M., Remucle J. Subcellular localization and modification with ageing of glutatione, glutatione peroxidase and glutatione reductase activities in human fibroblasts // Biochim. Biophys. Acta, 1985. v.838, №2, p.211-220.

202. McCord G.M., Fridowich I. Superoxide dismutase. An enzy-mic function for erythrocuprein (haemocuprein) // J. Biol. Chem., 1969, v.244, №22, p. 6049-6055.

203. Meerhof L.J., Roos D. An Easy, Specific and Sensetive Assay for the Determination of the Catalase Activity of Human Blood Cell // J. Reticuloendothelial. Society, 1980, v.28, №5, p.419-425.

204. Mehlhorn H. Ethylene promoted ascorbate peroxidase activity protects plants against hydrogen peroxide, ozone and paraquat. // Plant. Cell. Envir., 1990. v. 13. №9, p.971-976.

205. Mehlhorn H., Lelandais M., Korth H., Foyer C. Ascorbate is the natural substrate for plant peroxidases. // FEBS Letters, 1996, v.378, №3, p.203-206.

206. Mills G.G. Glutation peroxidase as erythrocyte enzime which protected hemoglobin from oxidative breakdown // J.Biol. Chem., 1957, v.229, №1, p.189-197.239

207. Mills G., Randall H. Hemoglobin catabolism. The protection of hemoglobin from oxidative breakdown in the intact erythrocyte. // J. Biol. Chem., 1958, v.232, №2, p.589-598.

208. Minotti G., Aust S.D. The Requirement for Iron (III) in the Initiation of Lipid Peroxidation by Iron (II) and Hydrogen Peroxide // J. Biol. Chem.-1987,-V.262, № 3.-P. 1098-1104.

209. Mirvish S. Formation of N-nitroso compounds: chemistry, kinetics, and in vivo occurrence. Toxicol. Appl. Pharmacol. 1975, v.,31, №3, p.325-351.

210. Misra H., Fridowich I. The generation of superoxide radical during the autoxidation of haemoglobin // J. Biol. Chem., 1972, v.247, №21, p.6960-6962.

211. Misra H., Fridowich I. Inhibition of superoxide dismutases by azide // Arch.Biochem. Biophys., 1978, v. 189, №2, p.317-322.

212. Modi S., Deodhar S., Behere D., Mitra S. Lactoperoxidase-catalized oxidation of thiocyanate by hydrogen peroxide: 15N nuclear magnetic resonance and optical spectral studies. // Biochemistry, 1991, v.30, №1, p.l 18124.

213. Mori Y., Murakami S., Sagae Т., Hayashi H., Sakata M., Sagai M., Kumagai'Y. Inhibition of catalase activity in vitro by diesel exhaust particles. J. Toxicol. Environ. Health, 1996, v.47, №2, p.125-134.

214. Morse M.D. Toxic effects of drugs on erythrocytes. // Ann. Clin. Lab. Sci., 1988, v.18, №1, p.13-18.

215. Murphy M., Noack E. Nitric oxide assay using hemoglobin method. // Method. Enzymol., 1994, v.233, p.240-250.

216. Nahum A., Wood L., Sznajder J. Measurement of hydrogen peroxide in plasma and blood. // J. Free Rad. Biol. & Med., 1989, v.6, p.479-484.

217. Nicholls P. Activity of catalase in the red cell // Biochim. Biophys. Acta., 1965. v.99, №2, p.286-297.240

218. Nishikimi M. Oxidation of Ascorbic Acid with Superoxide Anion Generated by the Xanthine Xanthine Oxidase System // Biochim. Biophys. Res. Commun., 1975, v.63, №2, p.463-468.

219. Nishikimi M. L-Gulono- Lactone Oxidase (Rat and Gost Idvor) // Methods Enzymol., 1979, v.62, p.24-30. *

220. Norwitz G., Keliher P. Study of organic interferences in the spectrophotometric determination of nitrite using composite diazotisation-coupling reagents. Analyst, 1986, v.l 11, №9, p.1033-1037.

221. Norwitz G., Keliher P. Interference of ascorbic and isoascorbic acids in the spectrophotometric determination of nitrite by the diazotisation coupling technique. Analyst, 1987, v.l 12, №6, p.903-907.

222. Okamura M. An Improved Method for Determination of L-Ascorbic Acid and L-Dehydroascorbic Acid in Blood Plasma. // Clin. Chim. Acta, 1980, v.l03,№3, p.259-268.

223. Okamura M. Uptake of L-Ascorbic Acid and L-Dehydroascorbic Acid by Human Erytrocytes and Hela Cells // J. Nutr. Sci. Vitaminol., 1979, v.25, №4, p. 269-279.

224. Orringer E.P., Roer M.E.S. An Ascorbate Mediated Transmembrane -Reducing System of the Human Erytrocyte // J. Clin. Invest., 1979, v.63, №1, p.53-58.

225. Osaki Sh., Johnson D., Frieden E. The Possible Significance of the Ferrous Oxidase Activity of Ceruloplasmin in Normal Human Serum II J. Biol. Chem., 1966, v.241, №12, p.2746-2751.

226. Osaki Sh., Walter Ch., Frieden E. The Ascorbate Oxidase Activity of Chelex Treated Ceruloplasmin. // Biochim. Biophys. Res. Commun, 1963, v.l2.№l,p. 1-7.241

227. Oshino N., Chance B. The role of H202 generation in perfused rat liver and the reaction of catalase compound II and hydrogen donors. // Arch. Biochem. Biophys., 1973, v.154, №1, p.l 17-131.

228. Ovi C. Studies of Ascorbic Acid Factors Influencing the Ascorbate -Mediated. Inhibitions of Catalase // Biochemistry, 1967, v.6, №10, p.2995-2999.

229. Paglia D., Valentine W. Studies on quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutatione peroxidase. // J. Lab. Clin. Med., 1967. v.70, №1, p.158-169.

230. Palcic M., Dundford H.B. The reaction of human erythrocyte catalase with hydroperoxides to form Compound I. // J. Biol. Chem., 1980, v.255, №13, p.6128-6132.

231. Paniker N.V., Iyer G.Y.N. Erythrocyte catalase and detoxication of hydrogen peroxide // Canadian J. Biochem., 1965, v.43, №7, p.1029-1039.

232. Patel R., Okun M., Edelstein L., Epstein D. Biochemical studies of peroxidase mediated oxidation of tyrosine to melanin: demonstration of the hydroxylation of tyrosine by plant and human peroxidases. // Biochem. J., 1971, v.124, №2, p.439-441.

233. Pauling L. Nature of the Iron -oxygen bound in oxyhaemoglobin // Nature, 1964, v.203, №4941, p.l82-183.

234. Paszkowski Т., Sikorski R., Kozak A., Kowalski В., Jakubik J. Skazenie mleka kobiecego azotanami i azotynami. // Polski tygodnik lekarski, 1989, t.44, №46-48, s. 961-963.

235. Peisach G., Blumberg W.E., Prachmilewitz E.A. The demonstration of ferrihaemochrome intermediates in Heinz body formation following the reduction of oxyhaemoglobin A by acetyl-phenylhydrazine // Biochim. Biophys. Acta, 1975, v.393, №2, p.404-418.

236. Perutz M.F. Structure and function of haemoglobin. 1. A tentative atomic model of horse oxyhaemoglobin// J. Mol. Biol., 1965, v. 13, №3, p.646-668.

237. Perutz M.F., Kendrew J.С., Watson H.C. Structure and function of haemoglobin. II. Some relations between polypeptide chain configuration and amino acid sequence. // J. Mol. Biol., 1965, v. 13, №3, p.669-678.

238. Pirie A. Glutatione Peroxidase in Lens and a Source of Hydrogen Peroxide in Aqueous Humor // Biochem. J., 1965, v.96, Jsfel, p. 244-253.

239. Politzer P. A charge-transfer interpretation of the interactions of haemoglobin with oxygen and carbon monoxide // Biochim. Biophys. Acta, 1968. v.153, №4, p. 799-803.

240. Prohaska J.R., Oh S.H., Hoekstra W.G., Ganter H.E. Glutatione peroxidase: Inhibition by cyanide and realase of selenium // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, v.74, №1, p.64-71.

241. Priitz W.A., Monig H., Butler J., Land E.J. Reaction of nitrogen dioxide in aqueous model systems: oxidation of tyrosine units in peptides and proteins. // Arch. Biohem. Biophys., 1985, v.243, №1, p. 125-134.

242. Pryor W.A., Lightsey J.W. Mechanisms of nitrogen dioxide reactions: initiation of lipid peroxidation and the production of nitrous acid. // Science, 1981.V.214, № 4519, p. 435-437.

243. Puppo A., Halliwell B. Formation of Hydroxyl Radicals from Hydrogen Peroxide in the presens of Iron.Is Haemoglobin a biological Fenton reagent // Biochem. J., 1988, v.249, №1, p.185-190.

244. Rachmilewitz E.A., Peisach L., Blumberg W.E. Studies on the stability of oxyhaemoglobin A and its constituent chains and their derivatives // J. Biol. Chem. 1971, v.246, №10, p.3356-3366.

245. Raiha N. On the placental transfer of vitamin C. An experimental study on guinea pigs and human subjects. // ActaPhys. Scand., 1958, v.45, suppl. 155.

246. Ramakrishna Rao D.N., Fischer V., Mason R.P. Glutathione and Ascorbate Reduction of the Acetaminophen Radical Formed by Peroxidase // J. Biol. Chem., 1990, v.265, №2, p.844-847.243

247. Rao B.S.N. Radiolysis of Ascorbic Acid in Aqueous Solution by Gamma Radiation // Radiat. Res., 1962, v.17, №5, p.683-693.

248. Ribarov S., Bochev P. Lead-hemoglobin interaction as a possible source of reactive oxygen species -a chemiluminescent study // Arch. Bichem. Biophys., 1982, v.213, №1, p.288-292.

249. Rifkind J.M. The autoxidation of horse haemoglobin :The effect of glutathione. // Biochim. Biophys. Acta, 1972, v.273, №1, p.30-39.

250. Rifkind J.M. Copper and the autoxidation of haemoglobin // Biochemistry, 1974, v.13, №12, p.2475-2481.

251. Riis'e E., Berg-Nielsen K. Improved extraction method for avoiding the interference of ascorbic acid in the spectrophotometric determination of nitrite in meat products. // Analyst, 1990, v.l 15, №9, p.1265-1267.

252. Rodkey F. A mechanism for the conversion of oxyhemoglobin to methemoglobin by nitrite. II Clin. Chem., 1976, v.22, №12, p. 1986-1990.

253. Roman R., Dunford H. Studies on horseradish peroxidase. A kinetic study of the oxidation of sulfite and nitrite by compounds I and II. Canadian J. Chem., 1973, v.51,№4,p. 588-596.

254. Root R.K., Metcalf J., Oshino N., Chance В. H2O2 Release from Human Granulocytes during Phagocytosis. 1. Documentation, Quantitation and some regulating factors //J. Clin. Invest., 1975, v.55, №5, p.945-955.

255. Rose R.C. Solubility properties of reduced and oxidized ascorbate as determinants of membrane permeation. // Biochim. Biophys. Acta, 1987, v.924, №1. p. 254-256.

256. Rose R.C. Transport of ascorbic acid and other water-soluble vitamins // Biochim. Biophys. Acta, 1988, v.947, №2, p. 335-366.

257. Rose R., Choi J.-L., Koch M. Intestinal transport and of oxidized ascorbic acid ( dehydroascorbic acid ) // Am. J. Physiol., 1988, v.264, №6 (Pt 1), p. G824-G828.

258. Roeser H.P. The Role of Ascorbic Acid in the Turnover of Storage Iron // Seminars in Hematology, 1983, v.20, № 2, p. 91-100.

259. Rush J.D., Bielski D.HJ. Pulse Radiolytic Studies of Reactions of HO20with Fe (II)/Fe (III) Ions. The Reactivity of HO20 with Ferric Ions and1.plication on the Occurence of the Haber-Weiss Reaction // J. Phys. Chem., 1985. v.89, №23, p.5062-5066.

260. Saez G., Thornalley P., Hill H.A.O., Hems R., Bannister J.V. The Production of Free Radicals During the Autoxidation of Cysteine and their Effect on Isolated Rat Hepatocytes. // Biochim. Biophys. Acta, 1982, v.719, №1, p.24-31.

261. Salvati A.M., Ambrogioni M.T., Tentori L. The autoxidation of haemoglobin. Effect of copper // Italian. J. Biochem., 1969, v.18, №1, p.1-18.

262. Samojima Т., Yang J. Reconstitution of Acid denaturated Catalase // J. Biol. Chem., 1963, v.238, №10, p.3256-3261.

263. Schacter L.P. Generation of superoxide anion and hydrogen peroxide by erythrocytes from individuals with sickle trait or normal haemoglobin // Eur. J. Clin. Invest., 1986, v. 16, №3, p.204-210.

264. Scotland Т., Ljones T. Direct Spectrophotometric Detec-tion of Ascorbate Free Radical Formed by Dopamine -monooxygenase and by Ascorbate Oxidase // Biochim. Biophys. Acta, 1980, v.30, №1, p. 30-35.

265. Seeger W., Roka L., Moser U. Detection of organic hydroperoxides in rabbit lung lavage fluid, but not in lung tissue homogenate using GSH peroxidase and GSH reductase // J. Clin. Chem.Clin.Biochem., 1984, v.2, №11, p.711-715.

266. Shapira E., Ben-Yoseph Y., Aebi H. Nature of residual erythrocyte catalase activity in Swise-type acatalasemia // Enzyme, 1974, v. 17, №5, p.307-318.245

267. Shigeoka Sh., Nakano Y., Kitaoka Sh., The Biosynthetic Pathway of L-Ascorbic Acid in Euglena Gracilis. // J. Nutr. Sci. Vitaminol., 1979, v.25, №4, p. 299-3Q7.

268. Sinha A. Colorimetric assay of catalase // Anal. Biochem., 1972, v.47, №2. p.389-394. *

269. Schmidt K., Klatt P., Mayer B. Reaction of peroxynitrite with oxyhaemoglobin: interference with photometrical determination of nitric oxide. // Biochem. J., 1994, v.301, Pt.3, p.645-647.

270. Schroeder W.A., Schelton J.R. Aminoacid sequence of bovine liver catalase // Arch. Biochem. Biophys., 1969, v.431, p.652-658.

271. Scott E.M., Duncan I.W., Ekstrand V. Purification and Properties of Gluthione Reductase of Human Erythrocytes // J. Biol. Chem., 1963, v.238, №12, p.3928-3933.

272. Shigeoka Sh., Nakano Y., Kitaoka Sh., The Biosynthetic Pathway of L-Ascorbic Acid in Euglena Gracilis z // J. Nutr. Sci. Vitaminal., 1979, v.25, №4, p. 299-307.

273. Shimiru N., Kobayashi K., Hayashi K. The Reaction of Superoxide Radical with Catalase. Mechanism of inhibition of catalase by superoxide radical // J.Biol. Chem., 1984, v.259, № 7, p.4414-4418.

274. Spagnuolo C., Rinelli P., Coletta M., Chiancone E., Ascoli F. Oxidation reaction of human oxyhemoglobin with nitrite: a reexamination. // Biochim. Biophys. Acta, 1987, v.911, №1, p.59-65.

275. Spector A., Garner W.H. Hydrogen Peroxide and Human Cataract // Exp. Eye. Res., 1981, v.33, №6, p.673-681.246

276. Stankova L., Rigas D.A., Bigley R.H. Dehydroascorbate Uptake and Reduction by Human Blood Neutrophils, Erythrocytes and Lymphacytes // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1975, v.258, p.238-242.

277. Stankova L., Riddle M., Larned J., Burry K., Menashe D., Hart J., Bigley R. Plasma Ascorbate Concentrations and Blood Cell Dehydroascorbate Transport in Patients with Diabetes Mellitus // Metabolism, 1984, v.33, №4, p.347-353.

278. Stedman G., Whincup P. The equilibrium constant for the formation of nitrosyl thiocyanate in aqueous solution. J. Chem. Soc., 1963, v.12, p.5796-5799.

279. Stevenson N.R. Active Transport of L-Ascorbic Acid in the Human Ileum // Gastroenterology, 1974, v.67, №5, p. 952-956.

280. Stevenson N.R., Brush .K. Existence and Characteristics of Na+ -Dependent Active Transport of Ascorbic Acid in Guinea Pig H Am. J. Clin. Nutr. 1969, v.22,№3,p. 318-326.

281. Stocks J., Dormandy J.L. The autoxidation of human red cell lipids induced by hydrogen peroxide // Brit. J. Haematol., 1971, v.20, №1, p. 95-111.

282. Stringer D. Nitrate and drinking water. // Technical Report №27, ECETOC. Brussels, 1988.

283. Sullivan S.G., Stern A. Interdependence of haemoglobin, catalase and the hexose monophosphate shunt in red blood cells exposed to oxidative agents // Biochemical Pharmacology, 1980, v.29, №17, p.2351-2359.

284. Sullivan S.G., Stern A. Effect of Ascorbate on Methemoglobin Reduction in Intact Red Cells U Arch. Biochem. Biophys., 1982, v.213, №2, p.590-594.

285. Takahashi M.A., Asada K. Superoxide Anion Permeability of Phospholipid Membranes and Chloroplast Thylakoids // Arch. Biochem. Biophys., 1983, v.226, №2, p.558-566.

286. Takano Т., Miyazaki Y., Nakata K. Interaction of nitrite with catalase in the perfused rat liver. И Food Chem. Toxicol. 1988, v.26, №10, p.837-839.247

287. Thorpe G., Kricka L., Gillespie E., Moseley S., Amess R., Baggett N., Whitehead T. Enhancement of horseradish peroxidase catalysed chemiluminescence. Oxidation of cyclic hydrazides by 6-hydroxybenzotriazoles. Anal. Biochem., 1985, v.145, №1, p.96-100.

288. Thomas J. Rates of reaction of hidroxil radical. // Trans. Faraday Soc., 1965, v.61, N508, P.4, p.702-707.

289. Thomsen L., Miles D., Happerfield L., Bobrow L., Knowles R., Moncada S. Nitric oxide synthase activity in human breast cancer. // Brit. J. Cancer, 1995, v.72.№l; p.41-44.

290. Thompson R.Q. Peroxidase Based Colorimetric Determination of Ascorbic Acid //Anal. Chem., 1987, v.59, №8, p.l 119-1121.

291. Titov V.Yu., Margolina A.A. and Petrenko Yu.M. Catalase inhibition by nitrite as the highly important element of its toxic effect. Catalase as nitrite detector. // Probl. Ecol. Secur. Agric./ RAAS, Sergiev Posad, 1996, v.2, p.32-40. '

292. Titov V.Yu., Fisinin V.I., Stollyar T.R., Margolina A.A., Petrenko Yu. M. Mechanism of nitrite-induced metgemoglobinemia development. Ways of its prevention and prophylactic measures // Probl. Ecol. Secur. Agric.; Sergiev Posad. 1996, v.2, p.40-52.

293. Titov V.Yu., Petrenko Yu.M. and Margolina A.A. Interaction of nitrite with antioxidant enzymes high important element of its toxicity. // Probl. Ecol. Secur. Agric./ RAAS, Sergiev Posad, 1999, v.4, p. 11-25.

294. Tomoda A., Tsuji A., Matsukawa Sh., Takeshita M., Yoneyama Yo. Mechanism of Methemoglobin Reduction by Ascorbic Acid under Anaerobic Conditions. // J. Biol. Chem., 1978, v.263, №20, p.7420-7423.

295. Tomoda A., Tsuji A., Yoneyama Y. Mechanism of hemoglobin oxidation by erricytochrome с and nitrite. // Acta Biol. Med. Germ., 1981, v.40, №7, p.943-954.

296. Tomoda A., Tsuji A., Yoneyama Y. Involvement of superoxide anion in the reaction mechanism of haemoglobin oxidation by nitrite. // Biochem. J., 1981. v.193, №1, p.169-179.

297. Tran-Minh C., Vallin D. Enzyme -Bound Thermistor as an Enthalpimetric Sensor//Anal. Chem., 1978, v.50, №13, p.1874-1878.

298. Uchida H., Klapper M.H. Evidence for an irreversible reaction between nitrite and human methemoglobjn. // Biochim. Biophys. Acta, 1970, v.221, p. 640-643.

299. Van der Vliet A, Eiserich J.P., O'Neill C.A., Halliwell В., Cross C.E. Tyrosine modification by reactive nitrogen species: a closer look // Arch Biochem Biophys., 1995,v.319, №2, p. 341-349.

300. Vobis V., Grun E., Thurkow В., Kramer A. Lactoperoxidase -aktivitat und thiocyanat-gehalt der milch bei euterkranken kuhen in unterschiedlichen laktationsstadien. // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr., 1995, v.108, №3, p.88-92.

301. Walaas E., Walaas O., Lovstad R. The Interaction of Ceruloplasmin with Catecholamines. // In Biochemystry of Copper. Eds by Peisach J., Aisen Ph., Blumberg W.-N. Y, London.- Acad. Press, 1966, p. 537-544.

302. Wallace W., Caughey W. Mechanism for the autoxidation of hemoglobin by phenpls, nitrite and ozidant drugs. Peroxide formation by one electron donation-to bound dioxigen. // Biocem. Biophys. Res. Commun., 1975, v.62, №3. p.561-567.

303. Wallace W.J., Houtchens R.A., Maxwell J.C., Caughey W.S. Mechanism of autoxidation for hemoglobins and myoglobins. Promo-tion of superoxide249production by protons and anions // J. Biol. Chem., 1982, v.257, №9, p.4966-4977.

304. Walker R. The metabolism of dietary nitrites and nitrates. // Biochem. Soc. Trans. // 1996, v.24,, №3, p.780-785.

305. Waschko Ph., Rotrosen D., Levine M. Ascorbic Acid Transport and Accumulation in Human Neutrophils // J. Biol. Chem., 1989, v.264, №32, p. 18996-19002.

306. Watanabe M., Takano Т., Nakata K., Nakamura K. Effect of ethanol on nitrite oxidation in the perfused rat liver. // Food Chem. Toxicol., 1995, v.33, №11, p.935-940.

307. Weinstein J., Bielski B.H.J. Kinetiks of the Interaction of HO20 and O20" Radicals with Hydrogen Peroxide. The Haber-Weiss Reaction // J. Am. Chem. Soc., 1979, v.101, № 1, p.58-62.

308. Weiss S., Lobuglio A. Phagocyte-generated oxygen metabolites and cellular injury. // Lab. Invest., 1982, №47, p.5-18.

309. Weiss S.J. Neutrophil mediated Methemoglobin Formation in the Erythrocyte. The role of Superoxide and hydrogen Peroxide. // J. Biol. Chem., 1982. v.257, №6, p. 2947-2953.

310. Whitburn K.D. The interaction of hydrogen peroxide with oxymyoglobin. // Oxygen Radicals in Chemistry and Biology, eds. Bors W., Saran M., Tait D., Walter de Gruyter.- Berlin, New York, 1984, p.447-451.

311. White-Stevens R.H. Interference by Ascorbic Acid in Test Systems Involving Peroxidase 1 Reversible Indicators and the Effects of Copper, Iron and Mercury // Clin. Chem., 1982, v.28, №4, p.578-588.

312. White-Stevens R.H., Stover L.R. Interference by Ascorbic Acid in Test Systems Involving Peroxidase 2 Redox-Coupled Idicator Systems // Clin. Chem., 1982, v.28, №4, p.589-595.250

313. L Wilson С. Clinical Pharmacological Aspects of Ascorbic Acid IJ Ann. N. Y. Acad. Sci. USA, 1975, v.258, p. 355-376.

314. Winkler B.S. In Vitro Oxidation of Ascorbic Acid and Its Prevention by GSH. // Biochim. Biophys. Acta, 1987, v.925, №3, p. 258-264.

315. Winterbourn C.C., Carrell R.W. Studies of haemoglobin denaturation and Heinz body formation in the unstable haemoglobins. // J. Clin. Invest., 1974, v.54. №3, p.678-689.

316. Winterbourn C.C., McGrath В., Carrell R.W. Reactions involving superoxide and normal and unstable haemoglobins // Biochem. J., 1976, v. 155, №3, p.493-502.

317. Witkop C. Albinism // In Advances in Human Genetics. Ed. By Harris H., Hirschhorn. v.2, p.61-142.: Plenum press, N.Y.-London, 1984.

318. Wu W., Chen Y., Hazen S. Eosinophyl peroxidase nitrates protein tyrosyl residues. '// J. Biol. Chem., 1999, v.274, №36, p.25933-25944

319. Wunderling M., Paul H.H., Lohmann W. Evaluation of a Direct Spectrophotometric Method for the Rapid Determination of Ascorbate and Dehydroascorbate in Blood Using Ascorbate Oxidase // Biol. Chem. Hoppe-Seyler.J.- 1986, v.367, №10, p.1047-1054.

320. Wuthrich S., Richterich R., Hostettler H. Untersuchungen uber milchenzyme. I. Mitteilung. Enzyme in kuhmilch und frauenmilch. // Z. Lebensm. Unter. Forsch., 1964, bol.124, s.336-344.

321. Yamaguchi T. Activation with catalase of mutagenicity of hyperoxides of some fatty acids and hydrocarbons // Agr. Biol. Chem., 1980, v.44, №8, p. 1989-1991.251

322. Yamaguchi Т., Fujita Y., Kuroki S., Ohtsuka K., Kimoto E. A study on the reaction of human erythrocytes with hydrogen peroxide // J. Biochem., 1983, v.94, №2, p.379-386.

323. Yamazaki I. The Oxidoreductive Feature of Intermediates Formed in the Reaction of Peroxidase // Proc. Intern. Symp. Enzyme Chem.Tokyo-Kyoto, 1957, v. 2, p. 224-229.

324. Yamazaki I., Mason H.S., Piette L. Identification by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy of Free Radicals Generated from Substrates by Peroxidase // J. Biol. Chem., 1960, v.235, №8, p.2444-2449.

325. Yamazaki I., Piette L.H. The Mechanism of Aerobic Oxidase Reaction Catalyzed by Peroxidase // Biochim. Biophys. Acta, 1963, v.77, №1, p.47-64.

326. Yamazaki I., Piette L.H. Mechanism of Free Radical Formation and Disapperance During the Ascorbic Acid Oxidase and Peroxidase Raection // Biochim. Biophys. Acta, 1961, v.50, №1, p.62-69.

327. Yamazaki I., Piette L. ESR spin-trapping studies on the reaction of Fe ions with H202-reactive species in oxygen toxicity in biology. // J. Biol. Chem., 1990, v.265, №23, p. 13589-13594.

328. Young L.J., Siegel L.M. On the reaction of ferric heme proteins with nitrite and sulfite. // Biochemistry, 1988, v.27, №8, p. 2790-2800.

329. Yusa K., Shikama K. Oxidation of Oxymyoglobin to Metmyoglobin with Hydrogen Peroxide: Involvement of Ferryl Intermediate // Biochemistry, 1987, v.26, №27, p.6684-6688.

330. Zidoni E., Kremer M.L. Kinetics and mechanism of catalase action. Formation of the intermediate complex // Arch. Biochem. Biophys., 1974, v. 161, №2, p.658-664.