Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль а1-кислого гликопротеина а патогенезе термических поражений и перспективы его лечебного применения

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Роль а1-кислого гликопротеина а патогенезе термических поражений и перспективы его лечебного применения"

РГС ел

министерство здравоохранения российской федерации

2 и i ] ^ ¡] ш&тсш государственный мвдицинйкщ институт

На правах рукописи УДК 616.5-001.17-008.9-085.382

Саломатин Вениамин Владимирович

РОЛЬ а,-КИСЛОГО ГЛЖОПРОТЕИНА В ПАТОГЕНЕЗЕ ТЕРМИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ЕГО ЛЕЧЕБНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

03.00.04. - биологическая хтш

АВТОРЕФЕРАТ

• диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск, 1993

Работа выполнена на кафедре биологической химии Челябинского государственного медицинского института

научный консультант

член-ксрр. АЕН РФ, засл. деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Р.И. ЛШШЦ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ член-корр. АН Башкортостана,

доктор медицинских наук, профессор Ф.Х. КАМИЛОВ ,

доктор медицинских наук, профессор Г.Я.. ЛЕВИН

доктор медицинских наук, профессор В.Б. СЛОБОДИН

ведущее учреждение

Российский государственный медицинский университет им. Н.И. Шрогова, г. Москва

Защита диссертации состоится "_"_ 199_-г.*

в_часов на заседании специализированного ученого совета

Д.084.04.01 Челябинского государственного, медицинского института. 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке Челябинского государственного медшЗинского института." .

Автореферат разослан "/У" #с я1993 г.

Ученый секретарь специализированного ученого совета-, доктор медицинских наук -Л*В. Крийохшзгаа

СБЩЯ XAPAICTEKICUIXA РАБОТЫ

Актуальность прсбдеш. Патогенез тяжелых термически тракл представляет собой одну из слояных и недостаточно изученных проблем медицинской науки. Течение обширных ошгов сопровождается глубокими изменениями в функциях практически всех основных органов и отстой. Эти .изменения характеризуются периодичности и слоеной причинной взаимосвязью, точное описание которых новозиокно без применения катодов неточного к молекулярного уровней исследования.

Объектом постоянного внимания кокбусткологов остаются белей ■плззгя^крови. Известно, что изменения в их составе и функциях находятся в непосредственной связи с основными патофизиологическими проявлениями окоговой; болезни, такими как наруиение центральной и периферической гемоданаиоот, синдром эндогенной интоксикации, им-иунодепроссия и раневой процесс. Однако, несмотря на значительнее достикешм в изучении этих вопросов, патогенетическая роль отдельных белков плазмы крови при окогах остается неясной. Особенно это относится к так называемым острофазовктл белкам и, в частности, к а,-кислому гликопротеину (KTÎI), называемому тага» орозему-коидом. Мэяду тем известно, что окоговая. травма,. как и др газ остроразвшзаюпдаеся воспалительные'процесса, сопровождается многократным усиление..! синтеза КГП гепатоциташ и увеличением его плазменной концентрации (Zeinch., KurJml, 1970; Laurent et al., 1986; Paymorwilla et al., 1987). Генетическая детерминированность этой реакции организма, а такна некоторые уникальннэ особенности строения-и свойств КГЦ предполагают его. большую значимость в патогенезе онэгов. ■'

Известная, способность белка к внеокоаффянноцу связывании на-• которых лигандов основного характера предполагает его участия в транспорте средгоэмолекулярнык пептидов (СШ). Считается, что эти соединения вносят определяющий вклад в развитие острой токсемии при ожогах (Ла&шц Р.И., 1978; Вальдаан Б.М. с соавт., 1983; Мар-келов И.М. с соавт., 1983; Ннколзйчик В.В., 1984), однако регуляция их активности до сзх пор не изучена при том, что■предположение о существовании специфических для СШ транспортных систем крови было обосновано Р.И. Лйфиицем 8ВД в 1978 году.

Особого внимания заслуживают данные о регулирующей воздействии КГП на функции нейтрофилов (Лютоз А.Г. с соавт., 1992; Со-

stello et al., 1984; baine et al., 1990) и тромбоцитов (Snyder et Goodley, I97S; Andersen et al., 1980). Эти свойства белка предполагают его участие в развитии воспалительного процесса при ожогах и также требуют специального изучения.

Рассматриваемая проблема важна и своей практической стороной. К настоящему времени разработаны метода выделения КГП, характеризующиеся высокой чистотой получаемых препаратов (Laurent st al., 1984; Алешгат В.А. с соавт., 1986). Однако, эти препарата не находят своаго применения как лекарственные средства ввиду недостаточной изученности их свойств. Решение этой проблемы мокэт явиться, во гергых, важным этапом в освоении безотходной технологии фракционирования белков донорской плазмы и, во-вторых, расширением возможностей трансфузионной терапии при ожогах и близких, к ним состояниях.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы - изучить биологические функции и возможности лечебного применения КТО в условиях экспериментальной ожоговой травмы.

В соответствии с цельа и известными данными о свойствах КГП было предпринято решение следующих задач:

I. Исследовать роль КГП в развитии воспалительной реакции при ожогах. Определить при этом его влияние на клетки крови, активно участвующие в этом процессе (нейтрофилы, тромбоциты и эритроциты ). . - •

Z. Изучить влияние КГП на течение обменных процессов при окогах,. обратив особое внимание на пэрэкисное окисление липидов (ПОЛ), обмен коллагеновых структур, биотический состав и активность ферментов плазш.' ' .

3. Определить способность КГП к связыванию и транспорту СШ как факторов "эндогенной интоксикации при окогах.

4. Выяснить основные пути естественного обезвреживания СШ и предложить на этой основе новые клинические методы стимуляции их элиминации из организма. -

5. Исследовать фармакокинетику н терапевтическую активность КГП при ожогах.

Научая новизна. Впервые обнаружено, что в раннем периоде посла oöiuiputix окогов поракенншс организм испытывает функциональ-

екй дефицит КГП. Введение этого бежа оказывав? выраженное тера-. повтическоо действие и приводит к yi.roпьшешсо летальности, сохрэ-пониа сроков заживления ожоговых ран и уменьшению частоты различиях ослоннений.

Впервые в условиях целостного организма на модели ожоговой болезни определено влияние КГП на функциональные свойства эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофалов. При этом обнаружено, что КГП путем прямого взаимодействия увеличивает электрический заряд эритроцитов и их способность к проходимости через мэльчойшие капилляры, уменьшает спонтанную агрегат® тромбоцитов и секрецию радакальшх форм кислорода активированным* нейтр-офилами.

Впервые обнаружено, что основными местом аккумуляции КГП при ожогах являются кровь и ожоговая рана. При этом выход .КГП в очаг воспаления ограничивает прогрессирующий тетчвстй некроз ожоговой раны, что проявляется в изменении ее морфологических характеристик, уменьшении пероксидации лшидов, распада коллагена и выхода некоторых ферментов в кровь.

Впервые установлено, что КГП в отлично от других белков плазмы проявляет высокую активность к связыванию и транспорту С'Я7 основного характера. При этом обнаружено, что именно эта группа пептидов проявляет при ожогах высокун токсическую активность и характеризуется резкой интенсификацией образования'. Получены дан-нив, свидетельствующие о том, что как уменьшение .альбумина, так и увеличение КТО в пЛазме ведет к уменьшению концентрации свободной, активно действующей фракции СШ.

Впервые с использованием .методов радиоизотопной индикации определены, некоторые параметры образования и обмена СШ. При этой обнаружено, что экскреция СМП с'мочой является основным путем их естественной элиминации при ожогах. Поэтому степень концентрирования отдельных фракций"СМП в плазме крови находится в обратной " зависимости от величины ях почечного клиренса.

Получены прямые доказательства сорбции ,СМП эритроцитами и обнаружено, что, эффективность этого механизма нейтрализации СШ при окогах уменьшается.

Впервые установлено, что недостаточность -транспортной Функции альбумина при ожогах связана не только с уменьшением его количества в плазме, но и уменьшением свободных связывающих мест на его молекулах. Обнаружено, что уыонъпетв связывашей способности альбумина при ожогах коррелирует с кдиничоскима проявлениями за-

цэфалопатая.

2сорзтачэсх»а еначежв работа. В итоге проведанного исследования охарактеризованы биологические функции КГП как полифункционального бежа, обладакщего защитным противовоспалигельнш; действием. Это делает более понятным биологический с;,тел острофз-зоеой реакции организма, поскольку усиление синтеза ряда плазменных белков в процесса ее развития подчинено общим регуляторам механизмам.

Полученные данные позволили' суцествекно дополнить патогенез ожоговой болезни,- в котором КТО выполняет роль естественного фактора нормализации тггкроцкркуляцпи и обмена в ожоговой ране и обеспечивает системный транспорт эндогенно образующихся токсических пептидов.

Благодаря новым данным о свойствах, механизмах образования, транспорте и путях элиминации СМП, получила дополнительное развитие концепция о роли этих соединений в развитии острой ожоговой токсемии.

Цразтнасксэ значение рабогы. Полученные материала о лечебном действии КГП при ожогах явились основанием для развертывания производства белка из донорской крови в НПО "Иммунопрепарат" (г. Уфа). .В результате созданной лекарственной формы КГП и мате-* риалов по его исследованию получено положительное решение фармко-штета РФ на проведение .шшкчееккх испытаний препарата в клинике термических горааэний. ' ' .

. Экспериментальные данные о транспорте - СМП эритроцитами и • стимулировании их экскреции шзкомолекулярным поливишшшрролндо-ном явились основанием для внедрения в практику- Челябинского областного окогового центра новый; методов леченая ожоговой токсемии. Положительные результаты этих методов опубликованы в метода- . ческих рекомендации ' "Переливание опитых эритроцитов и дробные ннфузин гемодеза в лечении ожоговой токсемии", утварвденных Ш РСФСР (1984 Г.).

¿лробацая работа. Материалы диссертации докладывались на 3 зональной конференции биохимиков Западной Сибири и Урала, Тюмень, 1982; на Ыездународном симпозиуме "Мембранные процесса в медицине", Владимир, 1985; на 5 Всесоюзном биохимическом съезде, )

.Москва, 1988; на Третьей Всесоюзной конференции "Современные сродства первой помоща и кетода лечения ожоговой бодозки", Москва, 1986; ьа 6 Республиканской конференции "Патогенез н лечение термических поражений и их последствий у детей", Харьков, 1938; на 6 Республиканской конференции по проблеме термически порая:ений, Горький, 1990; ..а Меудународной конференции "Интенсивное лачеккэ тялюлообозженных", Москва, 1992; на I Кездународной кс.фзренции по гомунорэабилитации, Сочи, Дагомыс, 1992; на I Республиканской конференции "Актуальные вопросы лечения оеогоз", Ташкент, 1992; на Международной радиоэкологической; конференции, Челябинск, 1992; на I съезде иммунологов России, Новосибирск, 1992.

Публпкаши. Основные »/лтериал! диссертации опубликована в 26 печатных работах, приведенных в конце автореферата.

Структура л обгон работа. Диссертация изложена наЗО^стра-шщах машинописного текста, иллюстрирована 34 таблицами и 20 рисункам! и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, пята глав собственных исследований, заключения, заводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, который включает в себя 375 отечественных', и 1о1 зарубежных источника.

Пологеппл, Елносшсгэ кз заггггу,

1. В остром периоде обгшрных окогов имеет шсто эндогенный дефицит КГП, что является одной кз причин формирования вторичных некрозов ожоговых ран и обусловливает, терапевтическое дайствпг этого белка.

2. КГП обладает способностью концентрироваться в области • окоговой раны, где активно воздействует на функции нейтрофялсв,

тромбоцитов и эритроцитов. При этом конечные эффекты белка сводятся к нормализации макроциркуляции и ограниченна деструктивных процессов.

3. Течение окоговой болезни сопровождается интенсивным образованием большой группы СМП основного характера с молекулярной массой 500-2000 дальтон. Эта группа пептидов принимает участие в развитии острой ожоговой токсемии и зкскротируется с мочой, что является осноеннм путем их естественной элиминации из организма.

4. КГП является основным белком плазмы, осущветвляшш свя-

зываше и транспорт СМП нейтрального и основного характера.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДУ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперимента были выполнены на 800 ?»чиах, основное количество которых представлено двухлянейными гибридами F1<сва к с57В1), 1920 крысах, из которых 120 - линии "Вистар", и 20 беспородных собаках.

Клинические исследования проводились на базе Челябинского областного ожогового центра. При изучении экскреции СШ и транспортной фуш.дик сывороточных белков было обследовано 15 здоровых людей и 23 больных с терличесюши ожогами площадью от 8 до 80%. Терапевтическая эффективность переливания отмытых эритроцитов была проанализирована на 174 больных с ожогами.

Термический ожог наносился ¡¡сивотным посредством облучения на установке с кварцево-галогенными лампами. Дозированность ожога по. глубже достигалась длительностью облучения и высотой расположения ламп, а по площади - величиной облучаемой .поверхности. В опытах с собаками оког наносился погружением сгшкы на 60 секунд в ванну с кипящей водой. Нанесение окогов проводилось под обдам наркозом.

При моделировании радиационно-термической травма у крыс за 2 часа до нанесения ожога швотных подвергали общему 7-облучешш в дозе 3 Гр (0,72-Рр/шн) на радиобиологической установке ИГУР-1 о цез«евым источником. - '

В опытах использовали КГП, производимый из.донорской крови в НПО "Иммунопрепарат" (г. Уфа). Благодаря хроматографической очистке на ДЭАЭ-целлвлозе. и КМ-цэллюлозе, содержание основного вещества в препарате составляло около 99S. В части экспериментов использовали КГП собственного выделения из плазмы крыс методом высаливания по' Weiiner et al. (1950). Ери этом белок перед использованием очищали методом ультрафильтрадаи и стерилизующей фильтрации.

Биохимические летода исследования. Количественное опредв-' ление КГП проводили на нефелометрической установке array Protein (Becicman, США.) по реакции со специфической антисывороткой, а такие химическим методом, как описано у Кузьмак Н.И. (1973).

При выделении, очистке и вчализэ СЮ из крови и мочи использовали оригинальную комбинацию [лэтодов, включающих в себя сорбцию

на ионообменной смоле Дауэкс 50x4, гэль-хроматографию на сефадек-• се 0-15, ультрафильтрацию через мембраны Диафло та-0,5 или УАИ-50 и тонкослойную хроматографию на пластинках "Фиксион 50x8". При суммарном определении СМП использовали также экспресс-методы, основанные па реакции плазменных ТХУ-экстрактов с реактивом Венедикта (Однопозов А.К. с соавт., 1985) и определении пептидов методом Лоури в сывороточных ультрафильтратах (Глинский Г.В., 1982).

Определение связывающей способности КГП, альбумина и эритроцитов по отношению к СМП и другим соединениям определяли посредством разделения и количественного определения свободной и связанной фраадй лигандэ. Для разделения использовали гель-хроматографа» на сефадбксз G-200, ульграфшгьтрзщга через мембраны УПМ-67000, УАМ-150 и УЛЬ-ЗСО, либо хроматографию в тонком слое на "Фиксион 50x8". В опытах с СШ использовали их меченые по ' iC или Зн фракции, которые определяли радиометрически.

При изучении влияния КГП на обменные процессы в плазме крови на анализаторе Vitra ("Копе", Финляндия) определяли активность аланинаминотрансферазн (МГ), аспзртаттраясамянззы (ACT) методом Henry et al. (I960), креатшфосфэкиназн (КФК) , методом Oliver (1955), амилазы методом Wallenfels et al., (1980), -у-глутамю'-транспептидазы (ГГТП) методом Szasz (1969), содержание мочэвшш методом lallte (1965), креатннина методом larsen (Г972), триглице-ридов методом Fredickson et al., .(1967), глюкозы.методом Peterson et Young (1968), холестерина методом /»Hain et al.,('I974), яеле-за методом Artlss (1981),• кальция мз годом Bauer (1981) и фосфора методом Doli (1972). Белковый■состав плазма определяли методом электрофореза на пластинках с гелзм агарозы с использованием рис-теш Paragon ("Sectarian", США). В сыворотке крови я моче определяли. свободный и пептидносвязанный. оксипролдя по реакции его окисленных продуктов с тарадаиетапаминобензальдегвдом, как описано у * Бараева П.Н. (1989). Для оцеякп перекисного окисления лкпвдов в гоптановах и изрпропанольных экстрактах плазш кроЕи, кожи и печени определяла., содержание диеновых конъюгатов (первичные продукты ПОЛ) и кетонов с сопряженными .тркекада (вторичные ^продукта ПОЛ), как описано у Волчегорского И'.А. с coaBTi (1939).

Ргдчгазотшше истоду исследования. В опытах'но изучения СМ использовала в качество радаометка i,5-3нг-.хз:с-{ .л 1-1 С-ли-еяз с радиохимической чистотой более 99.?.. ■ Ыечеше KITI по проводили по методу Hunter et Crsenwood ¡1922.!. После процедур!

иэчения белок очищали гель-хроматографией на .колонке с сефадексо:.: G-75.

Подсчет радиоактивности проводили на программируемом счотчкко 1s-I800 ("ВэоЬиап", США) в сцшшшшционных еэдкостях hp и ЕР, обесшчиваицих эффективность счета по тритию на уровне 33-52S, в по утлароду - 94-95«.

Гогмтояоганоска» г.етода кссладовашш. Деформируемость эритроцитов определял! по их способности к прохоздеюш через микропористые кбьйраны Синпор-I (iiaeda et al., 1S34). Поглощение эритроцитами глюкозы определяли да -ее убыли в растворе Кребса после двучасовой инкубации (Lutz., 1977). Интенсивность внутрисосудистого гемолиза эритроцитов оценивали по уровни свободного гемоглобина в сыворотке крови.Кислотоустойчивость эритроцитов определяли по катоду Гительзон И.И.(IS6I).Поверхностный заряд эритроцитов измеряли по их електрофоретической подвижности в горизонтальной камере Харамоненко С.С.(1974). Морфометраческие характеристики эритроцитов,их количество в крови,содержание гемоглобина и величину гема-токрита определяли общепринятыми в лабораторной практике методами.

Спонтанную агрегацию тромбоцитов оценивали по методу Ku et Hoak. (1974) с определением взвешенных тромбоцитов колориметрическим способом.

1Ыцуволоютеские кетода использовали для изучения влияния КГП на метаболическую активность нейтрофилоз,которые выделяли у мышеЯ из брюшной полости после индукции асептического воспаления введением казеина.

Кислородозависимый метаболизм найтррфилов опредэляли по кх способности восстанавливать-р-Еитросиний тетразолий в двформазан (НСТ-тест) но методу Segal (1974).Генерацию нейтрофилами радикальных форм -кислорода определяли по величине их спонтанной и индуцированной латексом хемилюлинесценцш, которую измеряли как описано у Зурочки A.B. с соавт. (1989). •

РЕЗУЛЬТАТЫ ЕССВДОВШИ- К Ш ОБСУЖДЕНИЕ

I. Влияние КГП ва течение вксперикантальнах терютзекгх

ezoroü

Обнаружен® у КГП терапевтических свойств -при окогах было осяоапии условием для изучения функций этого.белка и его патогене-

тичоской роли при окоговой болезни как актуальной и практически важной проблема.

Пр.. определении влияния КГП на летальность животных наиболее отчетливые результаты были получены в опытах на генетически однородных пбпуляциях мышей.В нескольких сериях экспериментов в течение месячного наблюдения было обнарукено,что двухкратное введение животным КГП в дозе 2,5-3 мг в первые сутки после ожога (10-12%, Шб ст.) уменьшает летальность с 40-60% до 5-20%. Это различие в большинстве экспериментов по точному критерию Фишера было статистически достоверным.

Уменьшение летальности под влиянием двухкратных инъекций КГП. .(20-220 мг/кг) в первые сутки после ожога было зафиксировано в 5 экспериментах на белых беспородных крысах.У контрольных зкивотных, отличающихся в кавдом эксперименте возрастом,полом,тякестью травмы летальность колебалась от 8 до 100%,в у опытных - от 0 до 502.

Наиболее ярко положительное действие КГП на течение ожоговой болезни проявилось на процессе заживления ожоговых ран (рис. I).

рдс. I. Влияние КГП на заживление окоговых ран у крыс (А) и у мшпей (Б).

Белок вводился дважды через I и 13 часов после ого-га по 2,5 мг мшам и по 15 да крысам.

Сплошной линией контроль (введение физиологического раствора), пунктирной линией - опыт.

У крыс это действие балка сильнее проявилось на показателях контрактуры ожоговых ран', а у мышей - эпителизацик. Действие белка на раневой процесс ыокно было отметить и визуально.У контрольных животных в течение первых двух суток наблюдалось увеличение начальной о коговой.поверхности за счет вторичного некроза го периферии обожженной поверхности. При глубоких ожогах у них наступала отслойка дермы с обнажением мокнущей поверхности мышечной ткани. Такие явления не наблюдались или были единичными в группах опытных вивотных.

При гистологическом исследовании ожоговых рай у крыс было отмечено, что ^ледени© КГП способствует сохранению в обожженной коеэ островков регенерируодих клеток эпидермиса, приводит к более раннему формированию демаркационной зоны в крае раны и под векроти-зированной тканью и молодой грануляционной ткани с почкующимися капиллярами и" размкокавдимися фкбробласташ.

Положительное влияние КГП на заживление окоговых ран было зафиксировано- в нескольких экспериментах, при выполнении которых удалось установить также, что эффективность действия препарата существенно понижается при его использовании позднее первых суток после ожога и что оптимальная доза соответствует валовому эндогенному синтезу КГП на высоте острофазовой реакции. Для крыс эта доза составляет около 40 мг, а для мышей - около 4 иг.-

Терапевтическое действие КГП при ожогах проявлялось также в уменьшении частоты некоторых осложнений (влажный некроз раны,наг-ноеаие ран, кровоточивость слизистой оболочки кииечнзка) .уменьшении степени гемоконцэнтрации по показателям гематокрита в первые трое суток после оюга и соответствующем атому увеличении суточ-.ного диуреза.

Было обнаружено также, что введение КГП повышает температуру тела животных на период до 2 суток после инъекции: г вызывает характерные изменения в динамика массы.Под влиянием белка изменение массы животных в первые две недели после травш характеризовалось более интенсивным и продолжительным снижением по сравнению с контролем, а в-период рекоквалесцеяции (четвертая и пятая недели заболевания) - более крутым и высоким подъемом. Гфимэчательно," что введение мышам альбумина в первые сутки после ожога, в отличие от КГП, замедляло процесс заживления ожоговых ран и вызывало прямо противоположные изменения в динамике массы.

Пройденные эксперименты позволили прийти к заключению, что

введение КГП оказывает лечебное действие на течение ожоговой болезни. При этом раннее введение белка является необходимым условием для проявления■его защитного эффекта и это указывает на эндогенный функциональный дефицит КГП в остром периоде заболевания. Причиной этого дефицита может являться внезапный и массивный характер воспалительного процесса при ожогах,с одной стороны, и существенная заторможенность острофазовой реакции,восполняющей возросшую потребность в КГП, в силу значительных белковых потерь при ожогах, с другой.

2. Действие КГП на обменные процесса при термических

озогах

В этой части работы были исследованы некоторые известные в клинической практике биохимические показатели крови. Преследовалась цель более углубленного определения влияния КГП на течение экспериментальных окогов у крыс.

В результате исследования активности некоторых сывороточных ферментов было обнаружено, что ожоговая травма приводит к более чем двухкратному. повышенно активности АЛТ, ACT и КСК в первые сутки. На третий день после ожога отмечалось умеренное повышение 'активности ЛЯГ, а к исходу первой недели - ГГТП. Практически неизменной оставалась активность сывороточной амилазы'. В целом полученные результата соответствовали клиническим наблюдениям.

Введение животным КГП приводило к статистически достоверному ограничению роста активности АЛТ,_АСТ, КФК и ЛДГ. Особенно заметным это действие было в отношении КФК, йктивкость которой снижалась в среднем на 34%. Своеобразной реакцией отличалась 1ТТП, активность которой у животных, леченых КГП, в период активной репарации (14 сут) была в 2,5 раза выше по сравнении с контрольными животными.

Характерна, что понижение активности АЛТ, ACT'и КФК под влиянием вводимого КГП наблкщалось и у здоровых кивотных. Зто предполагает, что в основе влияния КГП на активность сывороточных ферментов лекит его взаимодействие с клеточными мембранами различных органов и уменьшение их проницаемости для макромолекул. Однако во влиянии КГП на развитие послйоеогоеой гиперфермеат&жя более вероятны опосредованные механизм. Следует учитывать, что

активность КФК при ожогах возрастает лишь при условии 'поражения мышечной ткани (Wang et al., 1987; Shahangian et al., 1984). С этих позиций действие КГП может реализоваться через ограничение глубины и распространенности некротического процесса в ожоговой ране и вовлечение таким образом в патологический процесс мышечной ткани. Увеличение активности ГГТП под .влиянием КГП можно также расценивать как активное местное воздействие белкз. Известно, что повышение активности 1ТТП наблюдается при активном течении репа-ративных процоссов (Бородин Е.А., 1989).

При исследовании действия КШ на белковый состав плазмы было обнаружено, что его введение не уменьшает,а увеличивает характерные для ожогов изменения. Это проявлялось в более интенсивной гд-поальбуминемии и более пролонгированном и высоком увеличении с^-и о^-глобулинов. Было отмечено, что максимум различий в содержании белковых фракций у леченых и нелеченых животных совпадал по времени (14 сут) с максимумом различий в темпах заживления ожоговых ран, а различия в динамике общего белка плазмы у опытных и контрольных животных соответствовали ранее описанным различиям в динамике массы. Полученные результаты указывают на то, что величина и протяженность типичных для ожогов изменений в белковом спектре 1фови отражают не столько тяжесть поражения, сколько силу развивающихся компенсаторно-приспособительных реакций. Это необходимо учитывать при оценке данных по белкам крови в клинических условиях.

Введение крысам К1Л в первые сутки после ожога еще больше увеличивало развивающуюся у них пшвргллквтт и гшэртриглицерзд-емию. Так, содержание общих- триглицеридов на 3 сутки после ожога у контрольных животных было увеличено на 24%, а у опнтных-ка 40%. Аналогичные тенденции отмечались в отношении уровней общего холестерина и мочевины. При исследовании минерального обмена у животных с ожогами было отмечено понижение в плазме уровней фосфора' и . железа. При этом введение КГП нэ оказывало существенного влияния на данные показатели.

В целом, по результатам проведенного исследования можно сделать вывод, что КГП существенно модифицирует течение обменных процессов при ожогах. Он усиливает катаболические реакции в обмене белков, способствует мобилизации киров и гликогенолизу". В соответствии с отцу, у животных под влиянием КГП -отмечается более интегеи-зкоз уменьшение массы тела в остром периоде ожоговой трав-

мы и повышение температуры. По-видимому, способность КГП ускорять обменные процессы является неотъемлемой чертой его фармакологиче-лсого действия. Это на противоречит данным о лечебном действии белка, так как согласуется с известными воззрениями о роли после-ожогового гипермотаболизма в мобилизации пластических ресурсов организма с цель;) обеспечения процессов раневого заживления.

3. Влияние КГП на процессы евободао-радакалыюто окисления

при озогах

3.1« Влияние КГП на хемилшинесценции нейтрофилов при ожогах

Свободно-радикальное окисление биополимеров при оногах является ведущим молекулярным механизмом повреждения клеточных структур. В инициации этого процесса важная роль отводится нейтрофилам, активация которых в очаге воспаления ведет к резкому усилении секреции радикальных производных кислорода и сопровоадается их хе-милшинесценцией. Учитывая данные о способности КГП vitro подавлять активацию нейтрофилов (Costello et al., 1984; Laine et al., 1990), было предпринято исследование этого свойства бел*"! в условиях in vivo на модели ожоговой травш.

В эксперимент^ на шшах было установлено, что ожоговая травма приводит к уменьшении спонтанной хвшшшнвецеяции нейтрофилов и показателей их НСТ-активности. Введение животным КГП приводило к еще большему угнетению НСТ-реакции при окогах, но не оказывало влияния на активность нейтрофилов в норма.

Наиболее вахный результат этих' экспериментов состоял в обнаружении сильного угнетающего эффекта КГП на способность нейТ-.рофилов к индуцированной хешшеднесценция. Введение животным КГП по 2,5 мг через I и 12 часов после окога приводило к тому,что индуцированная хемилшинэсценция нейтрофилов, выделенных через сутки после ожога, снижалась в ответ на раздражение латьясом с 600 -НО до 47 - 14 раз.Аналогичное действие КГП оказывал и у здоровых мышей, где индекс индуцированной хемилшинесценцш нейтрофилов снижался с 624 - 58 до 91 i'22.

Учитывая способность КГП к непосредственному взаимодействию с фосфзлипвдшми слоями клеточных мембран нейтрофилов, можно сделать вывод о его прямом регулирущем воздействии на мвтаболичэс-

кие функции нейтрофилбв.

Можно полагать,что эндогенная наработка КГП в течении острофазовой реакции ведет к ограничению продукции нейтрофилами активных форм кислорода и ослаблению процессов свободно-радикального окисления. Последствия этих эффектов в очаге воспалительного поражения, являющегося основным местом скопления нейтрофилов, могут состоять в ограничении деструктивных процессов и явлений вторичного некроза ожоговой раны. Как известно, в основе этих деструктивных процессов лежат реакции перекисного окисления липвдов, являющихся основным субстратом свободно-радикального окисления. Это обстоятельство побудило нас к проведению дальнейших экспериментов в плане разрабатываемой гипотезы.

3.2. Изменение под влиянием КГП процессов перекисного окисления лилидов

Изучение' этого вопроса было проведено в экспериментах на крысах. Интенсивность процессов ПОЛ оценивали по содержанию в плазме, гомогенатах печени и кожи первичных и вторичных продуктов, которые определяли как в изопропанольной, так и гептановой фазах липидных экстрактов. Определение показателей проводили в различные сроки после ожоговой травмы.

Результаты проведенных экспериментов показали, что двухкратное введение КГП сразу и через 14 часов после ожога в дозе 15 мг (75. мг/кг) способно существенно ограничить интенсивность перокси-. дации лилидов. Особенно наглядно это проявилось при исследовании гептановой фаза липидных экстрактов.Из большого количества проведенных измерений выделяются результаты по содержанию первичных продуктов ПОЛ в плазме через 18 часов после ожога.Их концентрация у животных с ожогами была увеличена по сравнению с нормой в 5,5 раза,в то время.как у опытных животных, которым вводился КГП, она не отличалась от нормы. Содержание продуктов ПОЛ в участках коки, прилегающих к окоговой ране, было увеличенным на протяжении всего трехнедельного наблюдения., В результате „ведения КГП содержание вторичных продуктов ПОЛ в коже через сутки после ожога было более чем в 2 раза сниженным по сравнению с контролем.

следует полагать,что уменьшение продуктов пероксидации лилидов в остром периоде окоговой травмы связано с подавлением КГП гослеожогозом активации нейтрофилов.При этом ограничение липопар-

оксидации непосредственно в зоне окога монет Оыть одной из причин ■положительного воздействия белка на раневой процесс.Вместе с тем, Солее интенсивное изменение показателей ПОЛ в плазме крови свидетельствует об их интегральности, отражении образования и выхода в кровь тканевых продуктов ПОЛ. Это согласуется с данными о гипер-триглицеридемии при ожогах. Влияние КШ на эти показатели отражает не только местное, но и системное действие белка на процессы ПОЛ.

Было обнаружено,что образование продуктов ПОЛ при ожогах имеет второй значительный пик увеличения в позднем периоде (21 сут). Так, в плазы их концентрация в гептэновой фазе была повшгона по сравнению с нормой в 2,5 раза,а в печени - более, чем в 1,5 раза. У кивотных, которым вводился КГП, повторного усиления липоперок-сидащта не наблюдалось. Следует отметить, что эти различия соответствовали развитию у животных раневой инфекции,которая была частим явлением в контроле и единичным - в опыте. Из этого следует, что повторное усиление процессов ПОЛ связано с окоговой инфекцией, а защитное действие КГП в отношении ее развития обусловлено либо его иммунокоррегирувдими свойствами, либо положительным воздействием на процесс заживления ожсговой раны, являющейся входными воротами для бактериальной инфекции.

4,' Средаеиолекулярные пептида как факторы 'эндогенной ■ интоксикации, при сяогах и возможные пути совершенствования дезинтоксикационной терапии

4Л. Экскреция СМП с мочой как основной путь их элиминации кз кровеносного русла

.. На рис. 2 представлены основные этапы и биохимические процедуры, которые были использованы для Еыделения.СМП из мота а плаз-ют крови животных и больных с термическими-ожогами.' В ходе проводимых анализов во внимание принимались только те фракции соединений, которые обладали бысокой активностью в тесте острой токсичности при вяутрибрзяпишюм введении'мшем.

Было установлено, что основное количество токсических СТО содержится во фрчкции соединений, сорбирующихся на колоиле с ка-тионитом Дауэкс 50x4, которые при последуицей гель-хроматограф",п<

Сорбция на "анионите Дауэко 1x8

Сорбцая на •катионите Дауэкс 50x4

Гель-хрома тографая на сефадексе 6-15

' У.очц рН 9,О'

51

Водный элюат рй.5,0

Концентрирование ультра&зльтрацаей на'УАМ-50

Щелочной элюат рН 7,0 ^

,Десорбция в градиенте муравьиной кислоты •

. Десорбция . 0,3п №0Н

Шшгидран-

положительные фракции

Фракции на токоянт

Фракция токсична, дает положительную реакцию на полнвиюширролййон■

■Фракции токсичны

Определение токсичности

Хроглатогтзафия Еа Факсиоя 50x8

0

1

Рис. 2. Ооновннй этапы и процедуры, связанные с поиском и выделением

токсических СШ из мочи хивотных и больных с термическими оаогамя.

на сефадексе 0-15 элшруютс'я, в основном, в составе 2 и 3 пиков. Химический анализ этих соединений показал, что они представлены поимущественно пептидами основного характера с массой 500 -2000. При хроматографии на пластинках "Фиксион 50x8я в составе этих фракций обнаруживалось 6-8 пятен, мигрирующих в зоне веществ с р1 от 7,0 до 10,5. Кислотный гидролиз концентратов этих фракций приводил к увеличению количества нингидринполокитольных пятен до 14-16 с увеличением а-ашноазота в 6-8 раз и утрате токсических свойств. В составе гидролизатов обнаруживалось значительное количество лизина, аргинина и появлялись свободные амины. Таким образом, используемые метода выделения позволяла получить в очищенном виде и количественно измерять высокоактивные СМП основного характера.

Было обнаружено, что суммарная токсичность фракций СМП, определяемая по количеству Ы)50 для мышей на этапе гель-хроматографии, у больных с термическими ожогами (от 8 до 50%, II - IV ст., п=8) от 2 до 9 раз (в среднем,в 4 раза) превышает нормальный .уровень. Соответственно увеличенной токсичности этих фракций, в них среднем в 3,5 раза было увеличено содержание аминног^ азота и в 4 раза - сооданений пептидной природы. Было отмечено также,.что дробные инфузта гемодаза (2 раза по 200 мл) увеличивают экскрецию СМП с мочой в большей степени, чем однократное введение препарата в той жэ суммарно? дозе.

Посредством ЮОО-кратного условного концентрирования фракций СМИ на мембранах,исключающих вещества с массой менее 500 дальтон, достигалась юс дополнительная очистка от примесей коротких пептидов и других, низко молекулярных соединений. Повторное тестирование материала на токсичность показало, что у больных с ожогами суммарная активность СШ колебалась от 5 до 13' (9,5 -1,1) мышиных .ш&0 на I кг массы. Одной дозе. 1Л50. соответствовало в среднем 1,75 мг соодкнэшй пептидной природы. У здоровых людей из аликво-тного объема мочи (6* суточного диуреза) выделяемых соединений было недостаточно для определения токсичности вви&у отсутствия летального эффекта, что указывало на то, что их содержание как минимум нэ порядок ниже, чем при ожогах.

Дополнительные данные о роли почек в элиминации СШ с мочой были получены в эксперименте на крысах с комбинированной радиаци-онно-термической травмой. В этих опытах с целью мочения СШ контрольным и опытным животным сразу после ожога и за сутки до сбора

мота вводился 3Н-х*13!Ш из рассчета 2 МБк/100 г. На рис. 3 представлены результаты гель-хроматографии СМП, выделенных из мочи и плазмы крови животных.

Рис. 3. Гель-хроматография СМП мочи (сплошной линией).и крови (пунктирной линией) крыс на 2 сутки поело комбинированной радиационно-тормической травмы.

Колоша с сефадексом G-I5 (24 см2 х 50 см). Хроматографии подвергнуты безбелковые ультрафильтраты 34 мл мочи (1/4 суточного объема) от 12 животных и 90 ил крови (плазмы и смывов с клеточных элементов крови) от 47 животных.

•Элвционныэ профили выделяемых СМП были практически идентичны и различия касались лишь количественной стороны. Анализ показал, что концентрация выделяемых фракций (J6 1-7) в моче в 5-80 раз превосходит -их концентрацию в плазме. Как я у больных с термической травмой основное количество нингидринположительных соединений элюировалось в составе 2 и 3 пиков, сконцентрированный материал которых обладал токсической активностью. У кивотных с травмой эта активность примерно в 3 раза превосходила уровень нормы. Рассчеты количественного содержания этих фракций, основанные на их радио-

активности и химическом определении, показали, что общий пул СШ из фракции Л 2 в плазме травмированных гивотшх составляет ко болов 1/30 от их содержания в суточной моча, а из фракции № 3 - ив более 1/20. В норме эти соотношения составляют соответственно 1/50 и 1/7. Из этого 'следует,' что СШ характеризуются высоким почечным клиренсом и что состояние выделительной функции почек является важным определяющим фактором их плазменной концентрации.

При определении активности СУД было установлено, что в результате комбинированной травмы ео удельные величины для фракции И 2 были снижены в 6 раз,а для фракции Л 3 ~ в 2,5 раза. При анализе радиоактивности отдельных компонентов этих фракций после хроматографии на "Фиксион 50x8" наблюдалось большее или меньшее снижение радиоактивности всех }шнгидршшоложительных пятен.

Известно, что как ожоговая, так и лучевая травмы в первые сутки характеризуются увеличенным включением меченых аминокислот в балки (Заец Т..Т., 1969; Камилов Ф.Х., 1973; Федорова Т.А. с со-авг., 1972). Из этого следует, что сниженная радиоактивность СМП в наших опытах указывает на их происхождение из катаболизируекых белков, синтезировашшх до нанесения животным лучевой и ожоговой травм. Образующиеся из них нерадаоактивша пептида приводят .<; значительному разбавлению радиометки в составе общего пула СМП. В таком качестве могут выступать,, в частности, коагулированные белки термически пораженной коки, а также белки подвергшихся гемолизу эритроцитов. " '

Установлено, что двухкратное введение гемодеза по 1,0 мл на ICO г массы перед сбором суточной мочи и спустя 8' часов от начала приводило к-достоверному-увеличению экскреции СМП фракции J5.3 и увеличения общей и удельной радиоактивности СМП фракций Я 2 я Я 3. При этом суточный диурез у животных возражал с 11,3 - 1,9 мл до 16,5 - 2,6 мл. Следовательно, стимулирующее действие гемодеза на ' экскрецию СМП связано преимущественно с его диуретическим эффектом.

4.2. Связывание и транспорт СШГ эритроцитами. Переливание, отмытых эритроцитов как способ дозинтоксикацксясюй

терапии 1 . • .

Считается, что проявление активности СШ в значительной сто--пени зависит не только от' уровня их разрушения л выведения из

организма, но также и от сорбции-плазменными.белками и клеточными мембранами. На основе некоторых косвенных данных сделано предположение, что в связывании и транспорте СМП участвуют эритроциты (Лифшщ Р.И. с соавт., 1977, 1978; Са^сЮо, 1981). Наличие меченых фракций СМП делало возможным получение прямых доказательств этой гипотезы.

В опытах использовали взвеси эритроцитов различной процент-ности, стабилизированные цитратом натрия и полученные как от нормальных крыс, так и в разные сроки после термической травмы. Было установлено, что увеличение процентного содержания эритроцитов в пробе ведет к прогрессивному уменьшению обеих (В 2 у. В 3) свободных фракций СМП. При этом связывание фракции Л 2 при ожогах снижалось, особенно на 3 сутки после-травмы. Именно эта фракция СШ у животных с комбинированной травмой характеризовалась более высокой степенью концентрирования в плазме.

Учитывая,что механизм связывашя -СМП эритроцитами может быть обусловлен их перераспределением меаду вне- и внутриклеточным пространством, было определено связывание СЫН с эритроцитарными мембранами. Отмытые физиологическим раствором фрагменты клеточных мембран получали после осмотического гемолиза эритроцитов. Было обнаружено, что обе фракции СМП.связываются с мембранами, однако фракция Л 2 - с более высокой избирательностью. При анализе спектральных .характеристик этих фракций было обнаружено, что удельное-содержание ароматических аминокислот во фракции Л 2 почти в 2 раза выше, чем во фракции >« 3. Это соответствует известным положениям о более высокой мембранотропности гидрофобных структур. Это также предполагает, что большинство пептидов фракции Л 2 находятся в связанном с липофяльными структурами состоянии и поэтому проявляют большую активность, так как именно мембранотропное действие -СМП лежит в.основе их патологических эффектов (Николайчик В.В., 1984; Галактионов С.Г. с соавт., 1984, 1991; Лифшиц Р.И. с . соавт., 1988). Взаимодействие СМП с эритроцитами является, по-видимому, одной из причин их ыорфо-функционального повреждения при окогах и, вместе с' тем,ограничивает их действие на другие кизнен-.но более важные клетки и органы.

;; Обнаруженное связывание СШ эритроцитами явилось одной из теоретических предпосылок для клинических испытаний при 'ожогах инфузий отмытых гритроцитов как нового метода дезинтоксикзционноЯ терапии.. Исследования проводились в Челябинском областном ожого-

вом центре, где инфузии эритроцитов (по 250 мл от I до 5 раз) били выполнены у 174 больных в стадии острой токсемии. Для повышения сорбционной способности эритроциты перед использованием подвергались 3 - 4-кратному отмыванию физиологическим раствором в соотношении 1:3.

Было установлено, что проведение ¿казенных процедур у 762 больных понижало температуру, у 58& - уменьшало или ликвидировало токсическую зернистость неЯтрофилов, снижало лейкоцитарный индекс интоксикации, в среднем, с 4,7 до 2,9, уменьпало также тахикардию, тахшшое и проявления нейроинтоксикации. Таким образом, клинические испытание этого метода дали хотя и косвенные, но важные подтверждения роли эритроцитов в нейтрализации активности и транспорте СМП как факторов эндогенной интоксикации при ожогах.

4.3. Изменение связывающей способности альбумина при ожогах и ее коррекция гемосорбцией

Наиболее мощные транспортные системы крови представлены бэл' ками, среди которых альбумин является основным представителем. В отличии от КГП, связывающего вещества основного характера, альбумин проявляет большее сродство к соединениям кислого и нейтрального характера. Он же является основным белковым препаратом в лечении тяжелых ожогов при том, что единое мнение относительно показаний к его применению отсутствует. Поэтому информация о состоянии транспортной функции альбумина при ожогах необходима для понимания роли плазменных белков в развитии острой токсемии.

Связывающая способность альбумина определялась по отношению к 2,4-динитрофенолу (2,4-ДНФ) и' салицилату натрия в норме и в различные сроки после ожогов у крыс, собакой лвдей. Было установлено, что содержание альбумина в плазме у крыс через I сугки пос-*ле ожога (1355, Шб ст.) снижено на 22%, через 3 суток - на 2А% и через 7 суток - на 16%, а его связывание 'салицилата натрия - на 41, 35 и 46£ соответственно срокам, определения. Способность к связыванию 2,4-ДНФ была также снижена на 31, 27 и 38%. Аналогичные результаты были обнаружены и в 'опытах на собаках, у которых через 12 и 24 часа после ожога связывание салицилата 'натрия былб'_ в 2 раза пониженным, тогда как достоверных изменений концентрации альбумина в плазме не обнаруживалось.

В клинических исследованиях также обнаружено резкое, кепро-

порциональное гипоальбуминемии, ионихюние связывающей способности альбумина. При снижении содераания альбумина у ожоговых больных (п=10, оеоги от 14 до 805) в среднем на 35%, связывание салицила-та натрия было уменьшено в среднем на 70%. Это понижение коррелировало с площадью оаога (г=0,69) и в группе ожоговых больных было достоверно выше при наличии симптомов энцефалопатии. Сходные изменения обнаружены в связывании альбумином 2,4-ДНФ.

Феномен поникания связывающей способности альбумина при око-гах уже был нзоднократно описан {йаекв et а1., 1978; В1оепйоя е! а!., 198В; ЫаН1п вt а1., 1989; Вопа1е, 1990). Однако это явление увязывалось только с уменьшением альбумина в плазме. Полученные данные указывает на то, что оно обусловлено также качественными изменениями его молекул. Возможной причиной этих'изменений может быть аккумуляция в крови при ожогах эндогенно образующихся метаболитов, которые активно взаимодействуют с альбумином и уменьшают количество ого свободных связывающих мест. Экспериментальное' подтверждение этому было получено в опытах с обработкой сыворотки крови гемосорбентом СКН-2М. В результате инкубации сыворотки крови с гемосорбентом различия в связывающей способности альбумина у крыс в норме и при окогах хотя и сохранялись, однако существенно нивелировались. Известно, что гемосорбенты активно поглощают пигменты, жирные кислоты, пептиды и нуклеозады. Поэтому восстанавливающее действие гемосорбента на способность альбумина по связыванию салицилата натрия и 2,4-ДНФ обусловлено в данном случае освобождением его реакционно ■ активных центров от других конкурентно связываемых лигандов. •

. Б противовес экспериментальным данным было отмечено, что операция гемосорбции у больных с окогами не привадила к существенным изменениям связывающей способности альбумина. Только в одном из семи исследованных случаев было" отмечено ее существенное увеличение. По-видимому, в процессе гемосорбции происходит пере-, распределение низкомолекулярных метаболитов меаду кровью и тканями, Гемосорбция может стимулировать .их переход из тканей в кровь и связывание с альбумином. Такое явление, в частности, было описано в отношении кинетики билирубина у больных с поражениями пе-_ чени (Чиколайчик Б.В., 1984).

Увеличенная "загрузка" транспортных белков крови при ожогах низко- к среднемолекулярншл! метаболитами была подтверждена также в опытах с ультрафильтрацией сыворотки через мембраны, исключаю-

щиэ белок, в присутствии и отсутствии 8М мочевины как детергента. Добавление мочевины к сывороточным пробам существенно увеличивало количество соединений, переходящие, в состав ультрафильтрата и определяемых по взаимодействий с реактивом Фолина. Эта фракция соединений, ' включающая в себя ароматические аминокислоты, мочевую кислоту, производные фенола, СШ и другие метаболиты и характеризующаяся как связанная с белками, была достоверно увеличпа как у крыс с ожогами (в 1,5 раза на 6 сутки),так и у больных (до 3 раз). Эти результаты являются еще одним подтверждением роли низкомолекулярных метаболитов, в данном случае белкового происхождения, в ограничении транспортной функции альбумина при ожогах. Последствия этого будут касаться изменения чувствительности больного к действию токсических субстанций из-за нарушения механизма срочной регуляции их активности, а также изменения фзрдакокинетики лекарственных соединений, обладающих высоким сродством к альбумину.

Вместе с тем, связывание альбумином даже потенциально токсических соединений - это всего лишь один из легко преодолеваемых барьеров в процессе развития звдотоксемии. Ведущими факторами, ограничивающими ее развитие, являются системы детоксикации, осуществляющие катаболизм эндотоксинов и их выведение из организма. Даже массивные трансфузии альбумина способны уменьшить содержяние свободной фракции токсического соединения в плазме не более, чем на 15-20% (Луйк A.M., Лукьянчук В.Д., 1934). При этом нужно учитывать, что выведение этого соединения с мочой будет уменьшено, между тем как этот путь обезвреживания эндотоксинов способен многократно превысить связывающий эффект альбумина.

4.4. Способность КГП к связывании и транспорту СШ как один из возможных механизмов его терапевтического действия

Исследования по связывающей способности плазмеишх белков в развитии эндотоксемии могут быть более информативными, если в качестве лигандов использовать соединения, ответственные за развитие конкретных проявлений интоксикации. Поэтому были выполнены эксперименты по изучению связывания СШ плазменными белками.

В одном из таких экспериментов 14С-СШ, выделенные из мочи крыс,смешивали с сывороткой крови и подвергали гель-хроматографии

на колонке с сефадексом g-200. В результате удавалось отделить и по уровню радиоактивности замерить фракции свободных пептидов и пептидов, связавшихся с сывороточными белками. Волки при этом делились на три основные фракции: I - макроглобулины и липопротеины; 2 - иммуноглобулины; з - альбумин, трансф^ррин и КГП.

Основной результат этих опытов состоял в том, что 14С-СМП обнаруживались в составе всех трех фракций белков, причем в суммарном количестве больше в составе третьего пика, а в удельном -в составе первого.Если сыворотку предварительно очищали от низко-и среднемолекулярных компонентов ультрафил^трацшй через мзмбращ УАМ-200 с достижением 200-кратного уменьшения веществ с массой менеее 1000, то распределение 14С-СМП по белковым фракциям было аналогичным, однако уровень их связывания увеличивался в среднем более, чем в 3 раза. Напротив, при использовании сыворотки, полученной от крыс на 2 сутки после общего облучения в дозе 9 Гр или ожога (15%, Шб ст.), достоверных значений радиоактивности в составе белковых фракций не обнаруживалось. ■

Полученные результаты указывают на способность сывороточных белков к реакциям комплексообразования с СМП. Очевидно также, что иеазду С;7Л и низкомолекулярными компонентами сыворотки существуют конкурентные взаимоотношения за места связывания. Это означает, что взаимодействие СМП с белками носит неспецифический характер и может бить подавлено при состояниях, сопровождающихся аккумуляцией в крови эндогенных метаболитов.

. Описанию эксперименты .дали основание для предположения об' альбумина и КГП как основных белках, связывающих СМП. Поэтому в следующей серии опытов было предпринято непосредственное изучение способности этих белков к реакции комплексообразования с СШ. На рис. 4 изображен типичный результат одного из таких опытов,из которого видно,' что уровень свободных фракций СМП прогрессивно уменьшается с увеличением концентрации КГП в растворе и, напротив, увеличивается пропорционально, концентрации альбумина. Указанное действие белки проявляли в концентрациях,реально обнаруживаемых в плазме. Это дает основание считать,что выпаленные свойства альбу-'мкна и КГП проявляются и в составе плазмы на уровне целостного организма.

Обращает внимание,что при достижении концентрации КГП в пределах 2-4 г/л кривая свободной фракции СМП Еыходит на плато. Следовательно , основная часть СШ, обладающих сродством к белку, пе-

роходит при этом в связанное состояние.•Влияние' ко альбумина на •уровень свободной фракции СМП носит прямолинейный характер, что

Рис. 4. Влияние альбумина и КШ на величину, свободной ' фракции 3Н-СМП, выделенных из мочи крыс.

По оси абсцисс - концентрация белка, г/л;

.• по оси ординат - свободная фракция 3Н-СМЛ в % . ' от исходной (1720 раЬп./мин. для СШ фракции & 2 и 3140 расп./мин для СМП фракции Л 3).

Ультрафоьтрация проводилась*через мембраны УПМ-67000.

»

объясняется его способностью к. связыванию значительного количества вода с соответствующим концентрированием СМП. Это соответствует известной функции альбумина в определении онкоплоского давления плазмы и распределения воды по ее оснозда секторам в органа-• емэ.

Известно, что уменьшение альбумина и увеличение КГП является типичным изменением в белковом составе крови при ожогах и других воспалительных заболеваниях. Ведущей причиной этой реакции выступает генетически детерминированное изменение синтеза этих белков печенью. В этой связи полученные результаты указывают на то, что данная реакция плазменных белков кооперативно способствует уменьшению свободной активно действующей фракции СМП и поэтому может расцениваться как компенсаторно-приспособительная.

Основной характер исследуемых СШ соответствует известным данным о способности КГП к связыванию веществ,преимущественно основного характера. Эта способность белка была дополнительно исследована в опытах с тонкослойной хроматографией смеси СМП и КГП на пластинках "Фиксион 50x8", которые 'позволяли оценить действие белка на отдельные представители СШ в составе их суммарной фракции. Это действие проявлялось как в изменении радиоактивности, так и коэффициента подвижности отдельных пятен. При этом наибольшим изменениям подвергались СШ, мигрирующие в зоне, соответствующей их нейтральной и щелочной реакции, а распределение радиоактивности по полосе разделения характеризовалось ее смещением к линии старта, где находился не способный к миграции белок.

Связывание основных и нейтральных СШ с КГП может быть одним из решающих факторов их участия в развитии послеокоговой эндоток-семии. Известные данные об увеличении КГП в плазме больных с ожогами в 3-4 раза, а скорости его оборота - в 6 и более раз (Раушо-nvill et al., 1987; Laurent et al., 1986; Zeinch et al.,-1970) предполагают резкое возрастание его роли.в нейтрализации активности, и транспорте СШ. Это свойство белка обеспечивает ему также терапевтическое действие при ожогах. В специальных экспериментах по определению уровня СШ в крови крыс с ожогами было обнаружено, что введение им КГП приводило к достоверному снижению их концентрации. Особенно ярко это действие бежа проявилось в отношении оксипролинсодержащих-пептидов (понижение уровня в 2,4 раза через 18 часов после ожога),образование которых связано с распадом коллагена в зоне ожога.

В целом, с изложенных позиций и результатов экспериментов можно заключить,что острофазоЕая реакция организма и интенсификация синтеза КПГ при ожогах носит защитный характер и направлена на нейтрализацию активности образующихся в организме эндотоксинов и восстановление таким образом биохимического гомеостаза.

5. Участие КГП в развитии местного воспалительного и раневого процесса

5.1. Активный выход КГП в зону терлического поражения

Влияние КГП на метаболическую активность нейтрофилов и положительное действие на морфологию и заживление ожоговых ;ан предполагают высокую активность белка непосредственно в зоне ожога. Поэтому для более полной характеристики действия белка при ожогах был определен характер его распределения в тканях.

Опыты проводились на крысах линии "Вистар" с ожогами И-Ша ст. Поглощение тканями 1г51-КГП, который вводился однократно в минимальной терапевтической дозе (100 мг/кг) либо сразу, либо через сутки после ожога, определяли в различные сроки после травмы.

Было установлено, что аккумуляция КГП печенью у животных с ожогами во есэ исследованные сроки в среднем в 2-3 раза превышает уровень нормы.Аналогичные изменения наблюдались в почках, где содержание препарата через I час после его введения было в 3-3,5 раза выше нормы. Значительное увеличение аккумуляции 1251-КГП наблюдалось также в легких и селезенке на протяжении всего трехсуточного наблюдения. Незначительные изменения в содержании меченого КГП под влиянием ожогов наблюдались при исследовании крови и тимуса, а головной мозг не аккумулировал КГП ни в контрольной, ни в опытных грушах животных.

Наиболее важный результат проведенных экспериментов состоял в обнаружении резкого увеличения выхода КГП в ткани термически поврежденной кожи. В норме удельное содержание КГП в коже было незначительным и уступало всем исследованным органам и тканям, кроме головного мозга. При ожогах аккумуляция КГП в коже возрастала в несколько сотен раз и в результате его общее содержание в ней уступало только крови. Более того, у животных, которым препарат вводился сразу после ожога, его содержание в коже, в рассчете на единицу массы, на протяжении первых суток было даже в 2 раза выше, чем в крови. Это указывает на выход КГП из крови в обожженную кожу, возможно, против градиента его тканевой концентрации, чего не наблюдалось в отнопении других исследованных органов.

Было обнаружено также, что примерно 94-96% всей введенной с препаратом радиоактивности выводится из организма почками. Пои этом примерно 5СЖ меченого КГП в норме выводится с мочой равно-

мерными порциями в течение первых 4 суток. У крыс с ожогами 50Х введенного КГП выводится в течение первых 3 суток с максимальным уровнем экскреции на 2 сутки после ожога.

Обнаруженное увеличение аккумулировашя КГП в печени, селезенке, почках, легких и особенно термически поврежденной коке связано в определенной степени с увеличением капиллярной проницаемости этих органов в стадии ожогового иока. Однако, увеличение транскапиллярной проницаемости для белков наблюдается преимущественно лишь в зоне ожога, на что указывает анализ лимфы и пузырной жидкости, получаемых из зоны ожога и интактных органов и тканей (Говорова Л.H., 1983; Dettch et al., 1986; Land et al., 198?). При этом концентрация КГП и других белков в этих жидкостях остается Есе-таки ниже, чем в плазме. Поэтому выход КГП в экстравас-кулярное пространство, особенно против градиента концентрации, не может быть объяснен изменением только капиллярной проницаемости. Так, аккумуляция белка печенью и почками может быть обусловлена общим ускорением его обмена при ожогах и ролью этих органов в элиминации из кровеносного русла десиалированных и коиформационно •измененных молекул КГП. Концентрирование КГП в зоне ожога может бить связано с его активным взаимодействием там с различными клетками, участвующими в воспалении. При этом его взаимодействие с нейтрофилами играет, возможно, решающую роль,поскольку последние, как было показано, имеют к нему хемотаксические рецепторы (Лютов А..Г. с соавт., 1992). •

. В целом проведенное исследование фармакокинетики КГП показало , что потребность в нем при ожогах увеличиваемся и- основным потребителем при этом выступает ожоговая рана. Это предполагает, .что именно здесь, в.очаге воспаления реализуются основные биологические функции белка и с этим связано развитие самой острофазовой реакции. Отсюда следует также, что дополнительнее ББвдешле белка в первые двое суток после ' ожога будет способствовать удовлетворению этой потребности, ликвидировать его функциональный дефицит и оказывать поэтому лечебное действие.

Дополнительное подтверждение этому С :ло получено при определении концентрации бежа в плазме в условиях его лечебного применения. Стандартные дозировки КГП по 15 мг для крысы и по 3 мг для мыши приводили к повышению его плазменного уровня через час после инъекции в 3-5 раз. При этом повышенный уровень белка сохранялся на прст.5Л2кяй 6-10 часов, но оставался ниже того, который маша

било наблюдать у животных через 2-4 суток после ожога и без применения белка. Между том, вводимая суточная доза белка (30 мг для крыс и б мг для мышей) соответствовала уровню его эндогенного синтеза, на высоте острофазовой реакции и примерно в 15-20 раз превышала его образование в норме. Из этого следует, что при обширных ожогах действительно имеет место больной внутренний дефицит и расход КГП, который организм в течение первых двух суток не способен устранить самостоятельно/

5.2. Значение КГП в нормализации процессов микроциркуляции

при ожогах .

Местные и системные нарушения гемодинамики являются ведущими проявлениям;! патогенеза и клиники окоговой болезни. В свою очередь, в развитии этих нарушений ведущее место занимает ухудшение реологических свойств крови, связанное с ее сгущением, повревдэ-нием эритроцитов и активацией тромбоцитов. Имеющиеся дашше о способности КГП in vitro шгибировать индуцированную агрегацию тромбоцитов (Andersen et al., 1980; licNamara et al., 1986) и увеличивать деформируемость эритроцитов (lîaeda., 1984) делают вероятным проявления этих свойств белка и на уровне целостного организма в условиях ожоговой травмы.

Это предположение получило свое подтверадение в результате анализа'более- двадцати показателей, характеризующих влияние КГП ■ на реологические свойства•крови, ее клеточный состав, морфологические и функциональные свойства эритроцитов и тромбоцитов. Было обнаружено*- что введение' КГП крысам смягчает развитие послеокого-вой анемии, особенно ее гемолитического компонента. Это проявлялось ь положительном изменении таких показателей, как количество эритроцитов, содержание гемоглобина и величина гематокрита. Заме* тное действие КГП оказывал и на показатель сферичности эритроцитов (отношение среднего диаметра к толщине). Через сутки после ожога, когда еще продолжалось непосредственное действие вводимого КГП, у опытных кквопшх, в отличии от контрольных, не наблюдалось сдвига в сторону сфероидной трансформации эритроцитов. Известно, что связанное с этим явлением образование куполообразных, односторонне и двояковыпуклых клеток определяется действием на эритроциты мембраноповрехдавдих факторов. При этом изменение морфологии эритроцитов протекает синхронно с измевднием их метаболизма,

устойчивости к гемолизу и электрических свойств. Поэтому для уточнения механизма действия КГП было определено его влияние на поглощение эритроцитами глюкозы, их устойчивость к кислотному гемолизу, интенсивность внутрисосудистого гемолиза и электрофоретиче-скую подвижность.

Было установлено,что под влиянием КГП увеличивается скорость поглощения эритроцитами гликозы. При индивидуальном анализе этого показателя установлено, что наиболее низкие его значения обнаруживаются у животных с тяжелым течением ожогов, сопровождающихся некрозом всей толщ кожи и высокой гемоконцентрацией.•

Действие КГП на электрические свойства эритроцитов сводилось к увеличению их отрицательного заряда с соответствующим изменением электрофоретической подвижности. Это свойство белка проявлялось как при введении его животным с ожогами, так и при добавлении к взвеси эритроцитов в физиологических концентрациях. Оно доказывает способность белка к непосредственному взаимодействию с мембранами эритроцитов и, по-видимому, обусловливает тем-самым защитное действие на их морфологию. Кроме того известно, что соединения, активирующие свертываемость крови, уменьшают заряд эритроцитов и это может дать импульс к развитию ДВС-синдрома. Б этом отношении КГП выступает их антагонистом. Увеличивая отрицательный заряд эритроцитов, он препятствует их стазу и агрегации за счет сил электростатического отталкивания.

Сорбция КГП на поверхности эритроцитов увеличивает также их деформируемость. Его добавление к взвеси эритроцитов, подвергаемых микрофильтрации, вызывает дозозависимое уменьшение гемолиза и увеличение проходимости через микропоры, диаметр которых соответствовал просвету мельчайших капилляров (рис. Б).

Соответствующие эффекты КГП обнаруживаются и при его введении животным с ожогами. Двухкратные инъекции белка крысам сразу и через 13 часов посла ожога увеличивали спустя 3 часа после второй инъекции деформируемость эритроцитов и их стойкость к механическому гемолизу более, чем в 2 раза.При этом достоверно уменьшалась и спонтанная агрегация тромбоцитов.

Описанное действие КГП с большей эффективностью может проявляться в области ожоговой раны, где происходит аккумуляция белка и где явления *&кроваскулярного тромбоза получают наибольшее развитие . В этом случаэ КГП препятствует прогрессирующей ишемизации к углубление вторачпого некроза ожоговой раны, s в конечном итоге

Рис. 5. Влияние КГП на прохождение и гемолиз эритроцитов крыс при микрофильтрашш через мембраны "Вупрог-!"

(атюр = ккм).

Сшгтной линией - эритроцита здоровых енвотеых» пунктирной линией - через 16 часов посла огога;

го оси абсцисс - концентрация КГП в мг/ил,.

по оси ординат --изменение показателей в % от контроля.

сокращает срока ее заживления и облегчает' течение сзюговой Со-.лэзни.

5.3. Влияние КГП на обмен кодяагановых структур при osorax

Соответствующее исследование было предпринято для получения биохимических подтверздений активного участия- КГП з раневсм процессе при оногах.

В экспериментах на крысах бшга установлено, что черзз суяси

тидюсвязанного оксипролина значительно, в сродном в 1,3 и в 1,6 раза, возрастают. При этом'уровень-суточной экскреции оксипролина с мочой оставался неизменным. Очевидно, что обнаруженная здесь гипороксипролинемия связзна с усиленным катаболизмом коллагена и других оксипролинсодсржацдах соединительно-тканных белков в области ожоговой раны.

Иная картина наблюдалась у животных, которым вводился КГП. Здесь существенному увеличению, в среднем в 1,4 раза,. подвергался уровень только свободного оксипролина плазмы. Пептидносвязанный оксипролин, циркулирующий в крови в составе фрагментов коллагена, не только н. увеличивался, но даже уменьшался по сравнению с нормой в 1,5 раза. В результате у опытных животных уровень пептидно-связанного оксипролина плазмы через 18 часов после ожога был снижен в 2,5 раза, а общего, т.е. в сумме со свободным, - в 1,4 "раза. Соответственно этому под влиянием КГП изменилось соотношение пептидносвязанного оксипролина к свободному. Так, если в норме эго соотношение составляло 0,83, то при ожогах без введения КГП -1,10; 1,21; 1,13; 0,91, а с введением - 0,42; 0,88; 0,62 и 0,58 соответственно срокам определения (18 часов, 3, 7 и 21 сутки после ожога).

Ранее в клинических исследованиях было установлено, что преимущественный рост пептидносвязанного оксипролина плазш коррелирует с площадью и глубиной ожоговой травмы (Кляцкин С,А., 1989). Известно также,-что увеличение пептидов в плазме крови в условиях возросшего белкового катаболизма объясняется относительной недостаточностью сывороточных экзопептидаэ, что является одним из ключевых механизмов развития эвдотоксемии (Николайчик В.В., 1984). Из этого вытекает, что введение КГП при ожогах ограничивает ката-болическую реакцию в обмене коллагена и препятствует аккумуляции в крови С№. Эти молекулярные аспекты влияния КГП лежат в основе его ограничивающего действия на объем деструктивных процессов в. ожоговой ране к развитие острой ожоговой токсемии.

Характерным в обмене оксипролина при ожогах являлось также наблюдение увеличения его экскреции с моч X в периоде 7-21 суток.-Это увеличение при введении КГП было более .интенсивным: суточное выделение оксипролина в опыте в среднем в 1,8 раза превышало уровень контроля. Это отражает ускорение обмена коллагена в период' активной ргпарзции и связано с увеличением в коже быстросбменива-вщихся иезрглых фракций коллагена. Изменение этого процесса под

в™ хянкем КГП соответствует его ускоряющему дэйстею ка зекявлонке слоговых рзя а гистологически выявленному Оолзе рани-эму и интенсивному формированию в краях раны грану ляцпсшой ткани с размно-яакцимися фибробластами.

В целом действие КГП на обмен коллагена следует рзсцетивать как опосредованное, связанное с улучшением процессов мккроцирку-лпцки в огюговой ране и уменькением ее вторичного crctsmcxoro пекроза. Это действие колет быть опосредовано такг:о подазлением окислительной активности нейтрофилов и умкнызенаем те;.! ca,viim свободно-радикальной деструкция соедгоштельно-тяашшх бгкшошгтероз. Такой механизм разрушения коллагена является одной из соврогйлшх гипотез в патологии соединительной ткани (Герасимов A.M., Фурцевз Л.Н., 1986).

ЗА! ШШ

Основной итог проведенного исследования состоит в определении КГП (а,-кислого гликопротеина) как защитного белка с пола-функционзльными свойствами. В соответствии с этим, острофазовгя реакция организма, связанная с .индукцией пэченочнбго синтеза КГП и некоторых других белков плазмы, получает дополнительную характеристику как реакция, направленная на восстановление гошостаза и активацию репаративных процессов в условиях острого воспаления.

■ Некоторые принципиальные положения участия КГП в патогенезе обширных озэговых травм продемонстрированы на рис. 6. Сосредотачиваясь преимущественно в крови и воспалительно?* экссудате, белок оказывает активное действие на функции клеуок, участвующих в воспалении. Его взаимодействие с нейтрофилами ведет к ограничению " свободно-радикального окисления при ожогах. Сорбция КГП на поверхности эритроцитов и тро!«3оцитов у?леныпаег явления микрозаскуляр-пого тромбоза в,.окоговой ране. В итоге этого действия КГП ограничиваются явления вторичного некроза.и получают развитие восстановительные процессы. Это находит свое отражение, и в изменен/:^ согбенных процессов: уменьшается пероксидэцкя липидов, 'уровень гк-шрферментемия, образование СШ и продуктов распада коллагена.

Действие КГП проявляется и на молекулярном уровне при свягы--вании и нейтрализация активности СЯ® основного характера. Более

Пгчекь

Активация тромбоцитов'

€

Цовревдешга ■ сритроцитоз

< •

|&2ф0 ДВС- тромбоз, синдром • Нарушение пассажа в инкрососудах

¥

Ишемия тканой

_I

азразоваша • Ш1

Связывание и транспорт белками •

Экскреция с'мочой

54

Токсическое действие

?

Ишемия в области ожоговоД ^ раны ^

Вторичный Распад коллагена ж

некроз других биополимеров

Рис. 6. Принципиальная схема участия КГП (а.-кислого глшсо-протеика) в патогенезе ожоговой болезни

того, способность КГП потенциировать диурез при ожогах и при этом интенсивно выделяться с мочой предполагает участие белка в почечной элиминации СМП. Последняя же является основным путем удаления этих эндотоксинов из кровеносного русла.

Защитные функции КГП делают возможным его лечебное применение. Введение б^лка в остром периоде окоговой травш дает многообразный терапевтический эффект, согласующийся с привэдеиой схемой его участия в патогенезе ожогов. Само проявление этого.эффекта свидетельствует об эндогенном дефиците КГП в остром периода тяжелых ожоговых травм, что является одной из причин наращивания деструктивных процессов в очаге воспаления.

В перспективе раннее введение КГП при лечении ожоговых больных может явиться новым эффективным средством трансфузнонной терапии. Более того-, способность КТО нормализовать микроциркуляцтэ в местах воспалительного и некротического поражения может обеспечить ему лечебное действие и при других остроразвивающихся состояниях, таких как отморожения, шиемические некрозы, механическая, хирургическая и лучевая травка.

вывода '

1. Интенсификация эндогенного синтеза КГП в развитии острофазовой реакции при ожогах носит защитный характер и- направлена на уменьшение деструктивных процессов в зоне воспаления.

2. Защитное действие КГП реализуется посредством его агасуку-ляции в области ожоговой раны и прямого взаимодействия с клетками, участвующими в.воспалении. В частности, это касается:

а) эритроцитов,по отношения.к которым КГП выступает как мембранный протектор, увеличивает их деформируемость и электрокинетический заряд, обеспечивая в конечном счете нормализации реологических свойств крови и сохранность микроциркуляции в паранекро-тической зоне ожоговой раны;

б) тромбоцитов, взаимодействие которых с КГП уменыааат их способность к агрегации и ограничивает таким образом развитие синдромз диссеминированного внутрисосуднстого свертывания;

в) нейтрофилов, взаимодействие которых с КГП подавляет продуцирование шг активных производных кислорода и в результате ог-

раничквает процессы свободно-радикальной деструкции липидов и других биополимеров.'

3. В остром периоде тяжелой ожоговой травмы развитие воспалительного процесса протекает в условиях эндогенного дефицита КГП. Поэтому раннее (перЕые сутки после ожога) введение белка в дозах, соответствующих его валовому синтезу на высоте острофазовой реакции, оказывает терапевтическое действие, проявляющееся в уменьке-шш летальности животных, ускорении заживления ожоговых ран к улучшении ряда общекликических показателей.

4. КГП усиливает послпонзгоБЫй гиперметаболизм, что способствует кобш. .зации пластических ресурсов организма. Это действие проявляется в уменьшении массы животных,повышении температуры тела, увеличении в плазме крови метаболитов киров и углеводов, усилении типичных для ожогов изменений в содержанки белковых фракций Крови.

5. Под влиянием КГП при ожогах наблюдается положительная динамика обрззоваия продуктов перекисного окисления липидов, актив-кости некоторых сывороточных ферментов (АЛТ, ACT, ЛДГ, КФК) и показателей обмена оксипролина. Эти эффекты КГП отражают его преимущественно мастное воздействие на развитие воспалительного и раневого процессов, где он ограничивает генерацию кислородных радикалов, пораженке мышечной ткани и деструкцию коллагена.

6. Образование среднемодекулярных пептидов при ожогах увеличивается в несколько раз и это становится одним из ведущих факторов, развития острой токсемии.. Наиболее активная фракция СШ представлена соединениями нейтрального и основного характера с молекулярной массой 500-2000, образующимися в результате катаболизма белков, синтезированных до получения травш. Экскреция СШ с мочой является основным механизмом их естественной элиминации из кровеносного русла и поэтому степень концентрирования отдельных фракций СШ в пдазме крови находится в обратной зависимости от их почечного клиренса.

7. КГП проявляет высокую активность к связыванию токсических СШ основного характера. Генетически дате}. .инированная при ожогах

' реакция плазменных белков, проявляющаяся в уменьшении альбумина и увеличении КГП, ведет к уменьшению концентрации свободной, биологически активной фракции СШ и по этому признаку носит защитный характер.

8. Ь транспорте и регуляции активности СМП участвуют эрктро-

цптп, которые проявляют способность к внутриклеточному поглощению пептидов и их сорбция на поверхности клеточных мембран.При ожогах

мембранный механизм связывания СШ уменьшается.

Э. Взотишеаш спутником развития о:::оговсй токсемии выступает недостаточность' транспортной функции альбугаша. Это явленно обусловлено на столько ппгоальбуг.жкемюЯ,сколько уменьпешюм свободных связываниях мест на молекулах белка. Уменьшение связывзю-цзЗ способности альбумша коррелирует с развитие;! энцефалопатии и изменяет кинетику низкомолекулярных соединений плазм, однако не является определяющим фактором развития эвдотсксемж, обусловленной СШ.

пракеизские рексяендщи

1. С целью дальнейшего совершенствования принципов лечения скогоЕых больных необходимо проведение клинических испытаний К1И как нового средства трансфузионной терапии. Результаты экспериментальных исследований указывают на целесообразность его применения в остром периоде ожоговой травмы (первые сутки после ожога) посредством 1-2 внутривенных введений, соответствующих 1-2 нормальным плазменным пулам.

2.-В плане дезинтоксикационной терапии больных с ожогами необходимо- уделять внимание -мероприятиям, направленным на усиление транспорта СШ и их элиминацию с мочой. Эффективным средством в достижении.этой цели.являются переливания отмытых эритроцитов и дробные инфузт гемодеза, которые внэдрейы в клиническую практику. В перспективе этой цели могут служить и трансфузии КГП.

3. Для ускорения процедуры ■ Еыделения из крови и мочи препа-" ратрных количеств высокоочищенных фракций СШ целесообразно использование метода ультрафильтрации. Данный метод может с успехом применяться как для депротеинизации, тан и обессоливания СШ. Подходящими для проведения ультрафильтрации свойствами обладают сцетилцеллвдозше (УАМ) и полисульфбнамнднне (УТШ) мембраны, .выпускаемые ШО "Полимерсивтез" (г. Владимир).

. СПИСОК" РАБОТ, СШЕС ¡КОВАННЫХ ПО ЫАТЕР»1ШЛ5 ДКССЕРТАЩК

I- Саламатин В.В., Бочша Т.В. Изучение механизма дезияток-.спкационного действия гемодеза у обок&энных в стадии острой токсемии // Ожога: Тез.докл. VII науч.конф. - Л., I9SI. - С. I2I-I22.

2. Саломатин В.В., Бочина Т.В. Экспершленталько-клишгческое _ исследование элиминации токсических веществ при окоговой токсемии

// Патохимия обмена веществ и механизм его регуляции: Тез. докл. III зональной конф. биохим. Урала и Ban. Сибири. --Таишь, 1832.-С. 72.

3. Саломатин В.В.-, Щшенко Г.П. Применение ацеталцеллюлоз-ных ультрафильтрационных мембран "Владипор" в выделении коротких пептидов // Вопр. мед. химии. - 1983. -.»55. - С. 132-134.

4. Голиков В.А., Балдан В.Г., Саломатин В.В. Кнфузия отмытых эритроцитов к дробное введение гешдеза в лечении ожоговой токсемии // Вопросы теории и практики лечебно-профилактической работы медицинской службы промышленного предприятия: Тез. докл. на-учно-првкт. конф. - Челябинск, 1983. - С. 93-94.

5. Саломатин В.В., Лифшц Р.И. Экскреция токсических пептидов с мочой у больных с термическими ожогами // Вопр. мэд. химик. - 1984. - » 3. - С. 120-124.

6. Лившиц Р.И., Вальдаан Б.Ы., Брмзнко Г.П., Саломатин В.В.' и др. Переливание отмытых эритроцитов и дробные кнфузии гемоде-за в лечении ожоговой токсемии // Методические рекомендации: r МЗ РСФСР, Челябинск, 1984. - 13 с. " •

. ?. Саломатин В.В. Метод определения и клиническое значение связывающей способности белков сыворотки крови •// Охрана труда на промышленных предприятиях.: Тез. докл. науч. конф. - Челябинск, 1985. - С. 42. ' •

8. Саломатин В.В., Ефименко Г.П., Лифшиц Р.И. ' Образование . токсических пептидов у'облученных крыс и их связывание с белками сыворотки крови // Радиобиология. - 1935. - JS 4. - С. 495-499.

9. ЭДименко Г.П., Саломатин В.В., Овчинников Г.А. и др. Спектры средкемолекудярных пептидов крови и мочи при термических ожогах а их изменения при дезинтоксикацйойной терапии // V Всесо-вз. биохии. съезд: Тез. стенд, cooöm. Т. 2. - M., 1986. - С» 265*266. •

;о. Саломатин В.В., Курилова Т.В. Паптидурия при ожогах, ее

значение и механизмы развития // Современные средства первой помощи и методы лечения ожоговой болезни: Тез.докл. III Всесога.конф.

- М., J.38S. - С. 288-290.

11. Саломатин В.В., Савинова И.И. Транспортная функция белков крови в развитии эндотоксемии и кинетике лекарств при ожогах // Ожоговая токсемия: Сб. науч. тр. - Челябинск, I98S. - С. 7281.

12. Саломатин В.В., Лифпиц Р.И. Связывающая способность сывороточного альбумина при термических ожогах // Вопр. мед. химии.

- 1987. - Л 2. - С. 73-77.

13. Ефимэнко Г.П., Саломатин В.В., Корытный B.C.,Лифяиц Р.И. .Образование и выведение средних молекул .при комбинированной ради-ационю-термической травме // Комбинированные радиационные поражения: Сб. науч. тр. - Обнинск, 1988. - С. 98-102.

14. Саломатин В.В., Соболевская Т.М., Курилова Т.В., ЛИфпиц Р.И. Влияние острофазовых белков плазмы на заживление ожоговых ран // Патогенез и лечение термических поражений и их последствий у детей: Тез. докл. vi Респ. конф. - Киев, 1988. - С. 157-158.

15. Саломатин В.В., Соболевская Т.М., Курилова Ш.В., Лифшиц Р.И. Ускорение заживления оеогоеых ран у мышей под влиянием а1-кислого гликопротеина // Пат. физиол. - 1989. - й 6. - С. 3740.

16. Саломатиг В.В., Волчегорский H.A., Рябинин В.Е. Оптимизация определения•задерживающей способности ультрафильтрационных мембран, предназначенных для очистки и концентрирования- белковых рлстворов // Ред. Хим.-фарм. журнала. - М., 1990. - 8 с. Деп. 3118 - В 90. ' '

17. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Курилова Т.В., Цытович А.Л. Связывание среднемолекулярных пептидов а,-кислим глвкопротеином .при термических ожогах // Патохщия экстремальных состояний,методы коррекции наруиений метаболизма: Сб. науч. тр. биохим. Урала и Зап. Сибири. - Екатеринбург, 1991. - С. 38-44.

18. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Чарная Л.Ф. и др. О возможном применении а,-кислого гликопротеина в лечении термических ожогов // Интенсивное лечение тягелообожженных: Тез. докл. кеэду-нар. конф. - М., 1992. - С. 143-144.

19. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Холодев А.Я. а др. Влияние а, -кислого гликопротеина на реологические показателя крови щж экспериментальных термических ожогах // Пат.физиол. - 1992. - а I

С. 35-37. . '

20. Лютов А.Г.,' Зурочка A.B., Саломатин В.В., Любчанко A.B. Изучение влияния а,-кислого гликопротеша на иммунный ответ // I съезд иммунологов России: Тез. докл. - Новосибирск, IS92. - • С. 282-283.

21. Саломатин в.В., Лютов А.Г. Кислый гликопротеин как естественный защитный фактор при ожоговой болезни // Актуальные вопросы лечения ожогов: Тез. докл. I Респ. конф. комбустиологов. -Ташкент, 1992. - С. 100.

22. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Цытович А.Л., Чарная Л.Ф. Регуляторна». способность а,-кислого гликопротеша в отношении срвднемолекуляркых пептидов при ожоговой травме // Обман веществ в норме и патологии : Сб. науч. тр. Тюменского медицинского института. - Тюмень, 1992. - С. 85.

23. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Цытович А.Л. и др. Влияние а,-кислого гликопротеша на обмен оксипролина при экспериментальной термической травме // Вопр. мед. химии. - 1992. - & 3. С. 5860.

24. Lyutov A.C., Zurochlca A.Y., Saloaiatin Y.Y. Iiranunooorre-oting effect of orosomucoid in burning 1ез1оп // First International conferenoo on irernunoreabilitation: Abstracts Soohi-Dagomys -1992. - P. 48.

25. Саломатин B.B., Попков Д.А., Баранов Э.М. и др. Влияние at-кислого гликопротеина на обменные процессы при термических ожогах // Актуальные Еопройы теоретической и практической медицины: Сб. науч. тр. Челябинского медицинского института. - Челябинск, '1993. - С. 49-50.

. ■ '26. Саломатин В.В., Лютов А.Г., Еникеева С.А. и др. Влияние а,-кислого гликопротеина на хемилшинэсцэнцию нейтрофилов к перв-кисное окисление липидов при экспериментальной термической травме // Вопр. кед; химки. - 1993. - S3. - С. 24-26.