Резистентность и иммунологическая реактивность веслоноса (Polyodon spathula (Walb. )) в условиях промышленного разведения

Ситнова, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Резистентность и иммунологическая реактивность веслоноса (Polyodon spathula (Walb. )) в условиях промышленного разведения
ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Резистентность и иммунологическая реактивность веслоноса (Polyodon spathula (Walb. )) в условиях промышленного разведения"

На правах рукописи

СИТНОВА

ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА р р £ ОД

- 7 ФЕЗ 2000

РЕЗИСТЕНТНОСТЬ И ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ ВЕСЛОНОСА (РОЬУОООИ БРАТИКА (Ш.))/ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОГО РАЗВЕДЕНИЯ

Специальность: 03.00.10 - ихтиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2000

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ)

Научный руководитель:

Доктор биологических наук Вихман A.A.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук,

профессор Илясов Ю.И.

Доктор биологических наук,

профессор Симаков Ю.Г.

Ведущая организация: Государственный научно-

исследовательский институт озерного и речного рыбного хозяйства (ГосНИОРХ)

Защита диссертации состоится "&0"Сре6{иСи$ 2000 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 117.04.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ) по адресу: 141821, Московская обл., Дмитровский р-он, пос.Рыбное

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИПРХ Автореферат разослан " " ЯМбсцШ " 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Трямкина С.П.

пив. W Ясоил/^е -¿9/J П ?Ъ 6. Ъ, О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Разведение ценных пород рыб,* к которым относятся осетровые, представляет большой интерес для рыбного хозяйства страны. Современная аквакультура связана с воздействием на организм разнообразных факторов интенсификации: химических компонентов водной среды, механических стресс факторов и др. Изучение реагирования организма рыб на указанные факторы, возникающих отклонений деятельности физиологических систем и оценка их рыбоводного значения являютЬя актуальными задачами при культивировании нового объекта, представителя осетрообразных -веслоноса. Организация воспроизводства веслоноса как объекта ак-вакультуры требует разработки систем контроля его важнейших физиологических функций и способов их направленного регулирования.

Одной из важнейших сторон деятельности организма является резистентность к воздействию токсических агентов, физических параметров среды обитания и т.д. Достаточный уровень резистентности организма к воздействию факторов среды обитания, способных нарушить жизненноважные функции, является обязательным условием воспроизводства вида. Эта устойчивость обусловлена, в основном, активностью иммунологических систем, мало изученных у веслоноса. В связи с этим методы иммунологического исследования веслоноса требуют дальнейшего совершенствования.

Цель и задачи работы. Цель настоящего исследования - оценка резистентности и иммунологической реактивности промышленного стада американского веслоноса при воздействии природных и технологических факторов. Для решения указанной цели ставились следующие задачи: •

- анализ и обобщение сведений по резистентности веслоноса к факторам среды обитания и иммунологической реактивности осетрообразных;

- совершенствование методов оценки иммунологического статуса веслоноса и их применение в условиях производства;

- рыбоводная и иммунологическая характеристика состояния стада веслоноса и условиях промышленного хозяйства;

- изучение изменчивости гуморальных факторов иммунитета в зависимости от возраста рыб и сезона обследования;

- оценка влияния на выживаемость и иммунологическую реактивность веслоноса некоторых химических воздействий, связанных с искусственным воспроизводством.

Фактическим материал, и диссертации <Юо(щ<;и ч проанализирован материал наблюдений и опытеш, проводимых автором совместно с сотрудниками лаборатории осстроводстоа и акклиматизации Всероссийского научно-исследовательского института пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ) за период 1988-1994 гг. Работа проведена в рамках КЦП "Амур", в той сс части, которая посвящена новым объектам разведения, о частности, разработке технологии разведения веслоноса. При анализе и обобщении полученных данных использованы отечественные и зарубежные литературные источники.

Научная новизна. Впервые проведены иммунологические исследования в условиях искусственного воспроизводства. Получены новые данные по сравнительной оценке устойчивости различных возрастных групп веслоноса при промышленном разведении к двум видам химического воздействия, различающихся по природе и технологической принадлежности. Установлены пороговые летальные и сублетальные уровни воздействия концентрации водородных ионов в водной среде и лечебно-профилактического средства фиолетового К. Показано различное реагирование веслоноса в течение онтогенеза на испытанные воздействия. Найдены два гуморальных фактора иммунитета: естественные антитела (гемагглютинины) и лизоцим. Выявлено несколько уровней изменчивости иммунологической реактивности. Полученные данные по структуре иммунологической реактивности являются новым методологическим подходом при характеристике состояния систем резидентное™ веслоноса.

Практическая значимость. Полученные данные дополняют разработанную технологию промышленного разведения веслоноса и могут быть включены в соответствующие инструктивно-методические документы. Данные о сублетальном и летальном действии водной среды с высоким значением рН и лечебно-профилактического средства фиолетового К могут быть использованы при оценке ухудшения состояния веслоноса и его гибели. Разработана экономичная и более простая модификация диффузно-гелевого метода определения лизоцима.

Апробация. Результаты исследований, составляющих основу диссертации, обсуждались на заседаниях Ученого совета ВНИИПРХ, УШ научной конференции по экологической физиологии и биохимии рыб (Петрозаводск, 1992), 2 Международном симпозиуме по осетровым (Кострома, 1993), совещании "Развитие аквакультуры на внутренних водоемах" (Москва, 1995), Международном симпозиуме "Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре" (Краснодар, 1996), Первом конгрессе ихтиологов России (Астрахань, 1997), 1 российско-американском симпозиуме по аквакультуре и болезням рыб (Рыбное, 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста.. Состоит из введения, 5 глав, заключения. выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 173 наименования, в том числе 63 иностранных. В тексте 28 рисунков и 51 таблица.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследований являлся веслонос Polyodon spathula Walbaum (Polyodontidae. Acipenseriformes). Исследования проводили n Краснодарском крае на базе рыбплемхоза "Горячий Ключ" (YI зона рыбоводства) в период с 1988 по 1994 гг. Эксплуатируемое стадо состояло из производителей, выращенных в прудах от завезенных из США в конце 80-х годов личинок, и их потомства (Виноградов. 1984; Мельченков, 1991). Для получения сравнительных данных были исследованы рыбы, выращенные на Краснодарском специализированном заводе растительноядных рыб.

Для наблюдений и экспериментальных работ были взяты различные возрастные группы веслоноса. При производственных наблюдениях и проведении экспериментов определяли массу рыб, морфометрические показатели, количество полученной от самок икры, процент оплодотворения и выживаемость потомства (Правдин, 1966). Учитывали также поведение рыб, проводили их внешний осмотр, отмечали другие признаки в соответствии с правилами ихтиопатологического исследования (Мусселиус и др., 1983).

Для определения иммунологических показателей при исследовании неоплодотворенной икры, развивающихся эмбрионов и личинок использовали тотальный гомогенат материала. Отдельные особи объединяли в суммарные пробы в зависимости от стадии развития: неоп-лодотворенная икра - 30 экз., эмбрионы - 15, личинки - 6 экз. Органы мальков и сеголетков отбирали после вскрытия рыб по общепринятой в ихтиопатологии методике. В связи с небольшим размером органов у мальков пробы сердца и селезенки объединяли от 10 рыб, жабр - от 2 рыб. По той же причине пробы селезенки и почки у сеголетков объединяли от 3 рыб. По данным измерений массы и объема органов высчитывали индекс органов (Яржомбек и др., 1986).

В качестве иммунологических показателей были использованы два гуморальных фактора: один вид естественных антител - агглютинины - к чужеродным эритроцитам, и фермент лизоцим. Для определе-

ния гемагглютининов применяли микротитратор системы Такачи. С целью совершенствования методов определения лизоцима были проведены исследования по комбинированному использованию диффузного метода и метода серийных разведений. На основе полученных данных нами разработан модифицированный метод учета активности лизоцима.

Для оценки общей резистентности и изменения уровня гетероге-магглютининов и лизоцима при технологических воздействиях изучали влияние лечебно-профилактического средства - органического красителя фиолетового К и водной среды с различным показателем рН. Во всех экспериментах с икрой при обработке органическим красителем концентрация его составляла 10 и 30 мг/л. В опытах с личинками (в бассейнах) и сеголетками (в прудах) концентрация составляла 0,2 и 0,4 мг/л. Обработка икры и рыб красителем соответствовала методике, принятой в ихтиопатологии (Бауэр и др.,1977).

При изучении влияния рН воды значения активной реакции варьировали от 6,0 (опыты в чашках Петри) до 12,0 (опыты с двухлетками в прудах). Значения рН выше нейтральной достигались путем под-щелачивания воды ИаОН. Более подробно условия опытов описаны в соответствующих разделах. Для выявления изменения содержания иммунологических факторов у веслоноса по разным сезонам и годам рыбу индивидуально метили термоклеймением.

Статистическую обработку результатов исследований осуществляли с помощью непараметрического критерия Крускала-Уоллиса по программе ВМБРЗБ (критическое значение 3,84) и критерия Ман-на-Уитни (критическое значение 0,05). Корреляцию определяли по критерию Спирмена (критическое значение 0,45). Объем исследованного материала приведен в табл. 1.

АНАЛИЗ СВЕДЕНИЙ ПО РЕЗИСТЕНТНОСТИ ВЕСЛОНОСА И ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОСЕТРОВЫХ

Иммунологические исследования веслоноса носили чисто академический характер и были связаны с изучением эволюции иммунной системы позвоночных. В значительной мере они касались морфологической организации органов и тканей, участвующих в иммуногенезе, а также тесно связанных с ним систем кроветворения и др. Изучение кроветворной системы веслоноса, лимфоидных органов и их клеточного состава показали, что этот вид обладает достаточно развитыми элементами, определяющими иммунологическую реактивность (Купер, 1980; Галактионов, 1995).

Таблица 1

Объем исследованного материала

Показатель Количество

Количество исследованных рыб, шт.:

эмбрионы 241980

личинки 3430

мальки 170

сеголетки 424

годовики 94

двухлетки 140

двухгодовики 83

трехлетки 90

трехгодовики 11

четырехлетки 20

четырехгодовики 10

пятилетки 20

пятигодовики 11

шестилетки 20

производители ( 174

Размерно-весовой анализ рыб, шт. 915

Постановка реакций, число анализов, шт. 2000

Анализ литературных данных по изменению резистентности всс-лоноса при воздействии природных и биотехнологических факторов показал:

1. Л'шмып пил характеризуется длительным периодом еущестпо вания, эвритермностью, незначительной патологией, возможностью пппольпопанил как объекта рыбоводства, что позволяет считать вес-лоноса видом с высокой, и целом, ризистентпостмп.

2. Установлены параметры сублетального и летального действия ряда физических (температура и др.), химических (ионный состав водной среды, содержание кислорода, питательные вещества) и механических (транспортировка, пересадка) факторов.

3. Определены основные условия, позволяющие обеспечить деятельность важнейших физиологических систем веслоноса при искусственном выращивании в рыбоводном хозяйстве. Полученные данные использованы для разработки биотехнологии разведения веслоноса и создания промышленного стада.

4. Выявлено летальное действие на веслоноса ряда неблагоприятных факторов в естественной среде обитания (изменение гидрологического режима водоемов, ухудшение токсикологической ситуации). При искусственном разведении высокочувствительны к грибковому поражению эмбриональные стадии развития.

5. Отсутствуют или требуют расширения сведения о влиянии на жизнеспособность веслоноса ряда факторов, действие которых необходимо учитывать при его разведении: водной среды с высоким значением рН, различных концентраций лечебно-профилактических средств.

6. Полностью отсутствуют сведения об изменении иммунологической реактивнрети веслоноса при воздействии природных и биотехнологических • факторов. Имеющиеся данные по осетровым позволяют предположить возможность экологической модуляции деятельности иммунной системы веслоноса и использование этих показателей как тсстоп оценки общего физиологического статуса, уровня резистентности и иммунитета, адекватности среды обитания.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ВЕСЛОНОСА

Организация разведения веслоноса как объекта аквакультуры требует разработки системы контроля его важнейших физиологических функций и способов их направленного регулирования (Виноградов и др., 1987; Мельченков, 1991). Одним из актуальных направлений исследований является изучение иммунологической реактивности, отражающей уровень защитной способности организма и характер его адаптивной реакции. На первом этапе исследований первостепенное значение имеет формирование методических основ оценки иммунологической реактивности веслоноса с учетом его анатомофизиологических особенностей.

Для изучения иммунологической активности анатомических образований у веслоноса необходимо иметь методы оценки содержания в них иммунологических факторов гуморальной и клеточной природы. В наших исследованиях изучали два естественных гуморальных показателя, характеризующих образование антител - гемагглютинины и неспецифический фактор - лизоцим. Определяли два вида гемагглютини-нов: агглютинины к эритроцитам кролика (АЭК) и агглютинины к эритроцитам человека (АЭЧ). Кроме того, устанавливали индексы некоторых органов и связь иммунологических показателей с рыбоводной характеристикой объектов выращивания. 6

Топография лимфоидных органов и их индексы

Для более полной характеристики иммунологической реактивности были уточнены анатомические особенности некоторых органов и тканей сеголетков сеслоноса, связанных с образованием защитных факторов.

У сеголетков и мальков были взяты органы: жабры, сердце, ночка, селоуопк.ч. При обработке ргаультлтоп была определена сначала масса органов, а затем их морфофизиологические индексы (табл. 2).

Таблица 2

Показатели измерений массы рыб и органов и их индексы

Показатели Сеголетки Сеголетки Мальки

1988 г. 1989 г. 1991 г.

Вес рыб, г 77,7 63,6 23,6

Вес селезенки, мг 120 50 29

Вес жабр, мг 300 400 259

Вес сердца, мг 34

Вес почки, мг 140 140 ■

МФИ селезенки 1.5 0,7 ' 12,3

МФИ жабр 3.8 6,5 109,7

МФИ сердца 14,3

МФИ почки 1.9 2,4

Статистическая обработка результатов по критерию Круска-ла-Уоллиса показала достоверность различия между органами сеголетков веслоноса по их массе и морфофизиологическим индексам. Наибольшую массу имели жабры, значение которой примерно в 2 раза превышала другие органы. Массы селезенки и почки в исследовании 1988 г. не отличались, а в 1989 г. различия наблюдали. Аналогичные результаты получены и у мальков. Масса органов и их индексы достоверно отличались. Масса жабр была значительно больше по сравнению с селезенкой и сердцем, а масса сердца выше массы селезенки. При сопоставлении индексов органов достоверность различия показателей оказалась идентичной установленной для масс органов.

Модификация диффузно-гелеоого метода определения лизоцима

С целью совершенствования методов определения лизоцима были проведены исследования по комбинированному использованию диффузного метода и метода серийных разведений в жидкой среде.

При отработке метода использована техника подготовки гелевой среды с микрококком, параметры инкубации реакционной среды и методы учета, используемые при определении лизоцима у рыб известным диффузным мртодом (Каграманова, Ермольева, 1966).

Ой шипим материалом дли исследования служила сыворотка крови веслоноса. Первые эксперименты были посвящены разбору минимальных концентраций микрококка в агаровой и агарозной средах, пригодных для визуального учета в диапазоне 1,0-3,0 мг/мл. В первом опито Ошю научено влиянии ни результат реакции вида голи и ого концентрации, а так*»' длительности эксплуатации при 37°С. Покапано, что для определения данного фермента пригодны оба геля, агар и агароза. в концентрациях, соответственно. 1.25-1.5 и 1,5%. Опыты проводили при экспозиции 3 и 6 ч. Второй вариант оказался наиболее эффективным.

В следующем опыте была проверена пригодность полученных в предыдущем опыте данных для титрования материала (сыворотки) веслоноса. Концентрация микрококка составила 1,5 мг/мл. Экспозиция была увеличена до 17 ч при 37°С, что привело к увеличению чувствительности реакции. В этом опыте подтверждена приемлемость использования агара и агарозы в концентрации 1,5%.

Предлагаемая модификация использует положительные стороны диффузного метода (использование небольшого количества материала любого вида, визуальный учет) и метода разведения (простота). Его принцип заключается в локальном воздействии каждого разведения на гелевый столбик с индикаторным микрококком в лунке серологического планшета.

Распределение гетерогемагглютининов и лизоцима у мальков и сеголетков веслоноса

Для изучения распределения факторов резистентности в органах и тканях сеголетков веслоноса (генерация 1988 г.) определяли содержание гетерогемагглютининов в почке, селезенке, жабрах и сыворотке крови. В почке и селезенке отметили низкий уровень гемагг-

лгатининов. Учет реакции проводили двумя различными методами: по обратному титру и более чувствительному способу - по сумме крестов. Наибольшее количество агглютининов установлено в жабрах, особенно по уровню АЭК. Различие между сывороткой и жабрами было подтверждено статистически - коэффициент Крускала-Уоллиса составил 25,4-30,9. По абсолютному содержанию уровень АЭК в жабрах достоверно превышал содержание АЭЧ (коэффициент Крускала-Уоллиса равен 15,5). Корреляция содержания АЭК и АЭЧ между сывороткой и жабрами отсутствовала, так как величина коэффициента Спирмена составила < 0,45. Как в сыворотке, так и в жабрах не наблюдали корреляции между АЭК и АЭЧ (коэффициент Спирмена колебался в пределах -0,14-0,38).

Помимо гемагглютининов было изучено содержание лизоцима в органах и тканях сеголетков генерации 1989 г. Высокой лизоцимной активностью обладали все исследованные образования, причем наиболее высокие уровни фермента отмечали в почке и селезенке. Статистический анализ не выявил различия в содержании факторов в органах. Исключение составило содержание лизоцима в почке и селезенке по сравнению с сывороткой. Корреляция содержания АЭК, АЭЧ и лизоцима в основном отсутствовала, кроме 2-х случаев при исследовании соотношения АЭК-АЭЧ и АЭК-лизоцим в почке (табл. 3).

Таблица 3

Корреляция содержания различных факторов в органах и сыворотке сеголетков веслоноса

Исследуемый материал

Сравниваемые показатели

АЭЧ- АЭК- АЭК-АЭЧ лизоцим лизоцим

Ночка абсол. сод., усл. ед. 0,40

относ, сод., усл. ед. /мл 0,27

Селезенка абсол. сод., усл. ед. -0,21

относ, сод., усл. ед. /мл 0,10

Жабры абсол. сод., усл. ед. 0,19

относ, сод., усл. ед. /мл 0,15 Сыворотка относ.сод., усл.ед. /мл

0,76 0,66

0,79 0,66

-0,21 -0,17 0,10 -0,17

-О, 30 0,24

-О, 05 0, 34 0,01

В 1991 г. для определения гуморальных факторов были исследованы органы и сыворотка крови мальков веСлоноса. Содержание агглютининов в сыворотке крови оказалось меньше, чем в жабрах в 1,5 раза, лизоцим в сыворотке также был меньше в 3.9 раза. При сравнении уровня АЭК и лизоцима наблюдали такую же тенденцию: в сыворотке содержание агглютининов было в 3, 6 раза, а в жабрах в 9,3 раза меньше, чем содержание в них лизоцима (табл. 4).

Таблица 4

Содержание гуморальных факторов в сыворотке и жабрах мальков веслоноса, усл. ед. /мл

NN Сыворотка Жабры

п/п

АЭК Лизоцим АЭК Лизоцим

1 8,0 8,0 9.7 38,0

2 6.0 16,0 18,0 144,0

3 18,0 32,0 9.0 144.3

4 12,0 16,0 11.9 49,7

5 3,0 8,0 9,8 79,0

6 6,0 0 12,4 99,5

7 6,0 24,0 20,7 164,9

8 10,0 24,0 3,8 30,3

9 3,0 48,0 4,0 194,3

10 3,0 96,0 13,4 106,0

Среднее 7,5 27,2 11,3 105,0

Результаты исследований выявили различный характер распределения каждого изученного фактора в исследованных образованиях и отличие в распределении разных факторов. По уровню гемагглютини-иов, особенно АЭК, более активными оказались жабры и сыворотка, а по содержанию лизоцима - лимфоидные органы, хотя сыворотка и жабры дали четкий положительный результат.

Полученные данные определили выбор материала для оценки иммунологического статуса. Оказалось вполне целесообразным определять гуморальные естественные факторы (гетерогемагглютинины и лизоцим) прижизненно в сыворотке крови, а при вскрытии рыб использовать в качестве источника факторов жабры, почку и селезенку.

ИЗМЕНЕНИЕ РЫБОВОДНЫХ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ ПРОМЫШЛЕННОМ ВЫРАЩИВАНИИ ВЕСЛОНОСА

Использование показателей оценки резистентности веслоноса для оптимизации условий его выращивания требует определения иммунологических показателей всех рыбоводных групп, начиная с эмбрионального периода и кончая производителями. В настоящей главе представлены материалы по оценке выживаемости и иммунологической реактивности различных по рыбоводным признакам групп стада веслоноса.

Характеристика рыбоводных и иммунологических показателей у производителей и потомства на ранних стадиях развития

Особого внимания при определении уровня резистентности веслоноса заслуживает изучение ранних этапов эмбриогенеза, которые определяют численность потомства и физиологические свойства выживших особей. Резистентность потомства зависит от двух основных причин: наследственных признаков, полученных от родителей, и формирующейся в процессе онтогенеза приобретенной реактивности.

В эксперименте 1990 г. от 12 самок были исследованы пробы развивающейся икры и выклюнувшихся эмбрионов. У потомства не обнаружены АЭК, а содержание фактора у самок было незначительным (2-4 усл.ед./мл). Содержание лизоцима у самок отличалось в большей степени и колебалось в пределах 16-128 усл.ед./мл.

В опыте 1991 г. изменение содержания АЭК и лизоцима изучали у полусибсов без обработки красителем, чтобы определить изменение реактивности, максимально приближенное к естественным процессам (табл. 5). Содержание АЭК было наименьшим в неоплодотворенной икре, затем постепенно повышалось на ст. 31. В этот период развивающаяся икра в 1 и 3 группах погибла от сапрологнии. Уровень агглютининов во 2 группе личинок на выклеве понижался до 0 и вновь повышался у 7-дневных личинок. Колебание уровня лизоцима было иным: по сравнению с неоплодотворенной икрой его уровень понижался на ст.31, затем вновь повышался у личинок на выклеве. У 7-дневных личинок содержание лизоцима было наиболее высоким. Наибольшие различия между группами по уровню лизоцима наблюдали в неоплодотворенной икре, причем в 3 группе две пробы отличались более, чем в 2 раза. Выживаемость 2 группы в отсутствии обработки красителем была крайне низкой и составила 4,6%.

Таблица 5

Относительное содержание АЭК и лизоцима у эмбрионов и личинок веслоноса без обработки красителем

Группы полу- АЭК, усл.ед./мл Лизоцим, усл. ед. /мл

сибсов э0 Эз1 А> Л7 Э0 Э31 Ло Л7

0,85 0,73 0,83

0,55 0,68

2,03 1,95 2.25 1,93 2,50 1,95

1,85 3,35

13,7 11,4 3,3 3,9 9,0 21,3

4,0 3,9 1.3

5,5 3,9

6,9

27,1 59,7

Примечание: Э0 - икра до оплодотворения, на ст. 31, Лд - личинка на выклеве, на 7 день после выклева

Э31 - эмбрион Л7 - личинка

Выявленное изменение содержания факторов на ранних стадиях развития является, по нашему мнению, соотношением двух различных процессов: постепенным уменьшением запасов гуморальных факторов, находящихся в икре до оплодотворения и синтезом факторов активными клетками развивающегося организма.

Влияние возраста и сезонности на уровень гуморальных иммунологических факторов

В процессе онтогенеза и перехода из одной возрастной рыбоводной группы в другую развиваются органо-тканевые образования, связанные с продуцированием иммунологических факторов молекулярной и клеточной природы.

Более точное представление о характере и стабильности изменчивости реактивности могло дать изучение индивидуальных отклонений в уровне фактора, т.е. определение иммунограмм. С этой целью осенью 1991 г. у двухлетков дважды брали пробы крови с интервалом в 7 дней. Индивидуальное исследование изменения гуморальных факторов позволило отнести каждую особь к одному из трех функциональных типов: +реакция (стимуляция реактивности), -реакция (сни-

жение реактивности), 0-реакция (отсутствие изменений). Реактивность рыб по типам распределилась следующим образом:

Показатели АЭК' Лизоцим

+ - 0 + - 0

Кол-во рыб, шт. 18 3 19 И 29 % 45.0 7.5 47,5 27.5 72.5

По уровню АЭК количество рыб с положительной динамикой и нейтральным состоянием было почти равным, а рыб с отрицательной реакцией - всего 7,5%. По содержанию лизоцима, наоборот, количество рыб с отрицательной динамикой было наибольшим, а нейтральное состояние вообще не зафиксировано. Выявление связи характера реагирования с массой и длиной рыб показало, что различные в функциональном отношении группы мало отличаются по массе и длине.

В течение вегетационного периода 1991 г. определяли характер изменения активности сыворотки у годовиков в начале и конце нагула, когда наблюдали увеличение массы в 9,3 раза, .а длины в 1,8 раза. Агглютинины к эритроцитам кролика не были обнаружены весной, а осенью их количество колебалось в пределах 2-32 усл.ед./мл. При сравнении индивидуальной активности рыб по уровню лизоцима отмечали неравнозначную направленность и степень изменения реактивности (рис. 1). Основная часть рыб (72%) характеризовалась отчетливым снижением уровня лизоцима к осени . Две другие группы рыб были отнесены к "нейтральному" и "положительному" типам реагирования (соответственно 12 и 16%).

Осенью 1992 г. у трехлетков трижды индивидуально брали пробы крови. Содержание АЭЧ не превышало, в основном, 4 усл.ед. /мл и не изменилось в течение опыта. Несколько выше было содержание АЭК, которое снижалось к концу наблюдения. Колебания уровня лизоцима носили иной характер: увеличивалось число рыб с активностью выше 80 усл.ед./мл. Распределение рыб по типам индивидуального реагирования, отражающего динамику ответа, представлено в табл. 6.

Многолетнее выращивание рыб в условиях полносистемного хозяйства открыло возможность длительного наблюдения за отдельными особями и выяснения изменчивости реактивности в зависимости от возраста и сезонных факторов. С этой целью изучили динамику содержания АЭК и лизоцима в 2 группах рыб от годовиков до трехлет-

Рис. 1. Индивидуальное содержание лизоцима у годовиков и двухлетков веслоноса

Таблица 6

Распределение трехлетков по типу реагирования (п-36)

Исследо- Типы реагирования

ванные

факторы • +- +0 0+ -+ — 00 0- -0

АЭК 1 6 1 .4 6 1 3 3 11

АЭЧ 4 5 4 3 2 1 6 8 3

Лизоцим 4 13 5 4 4 1 2 2 1

Примечание: х) - первый знак - от первого ко второму сроку взятия крови;

второй знак - от второго к третьему срок" взятия крови

ков. Сопоставление динамики индивидуального содержания факторов по сезонам показало, что наблюдались различия как между характером изменений разных факторов, так и между сезонами исследования. При определении АЭК у двух- и трехлетков установлено повышение уровня фактора осенью по сравнению с предшествующим весенним периодом. В обеих группах отмечена большая доля рыб, у которых не изменилось содержание фактора по сравнению с осенью. При установлении уровня лизоцима выявлено четкое его снижение к весеннему периоду и затем повышение к осени. С этими данными согласуется изменение лизоцима у двухгодовиков 2 группы, но у двухлетков повышение лизоцима осенью не наблюдали. Определение активности производителей в разные сезоны 1989-1992 гг. дало возможность сопоставить изменчивость их реактивности (табл. 7), при этом учитывали отдельно самок и самцов. Более высокий уровень агглютининов отмечен в октябре 1989 г., самый низкий - в апреле 1991 г. Не совпадала активность рыб, исследованных в апреле в разные годы: в 1992 году наблюдали высокие уровни АЭК по сравнению с 1990 и 1991 гг. как у самок, так и самцов. В отношении лизоцима получены иные данные: при высоком уровне фермента отметили его наибольшее содержание в апреле 1991 г. и наименьшее - в октябре 1989 г.

Таблица 7

Распределение производителей по уровню содержания АЭК и лизоцима в 1989-1992 гг.

Пол Сроки исследо- Всего Число рыб (шт.) по рангам активности

рыб вания рыб. (усл. ед. /мл)

шт.

год месяц 0 2 4 8 16 32 64 128 256 512

Агглютинины к эритроцитам кролика

Сам- 1989 октябрь 13 - - - 6 3 4 - - -

ки 1990 апрель 24 1 2 20 1

1991 апрель 11 7 - 4 - - - - - -

1991 октябрь 18 - - 7 8 2 1 - - -

1992 апрель 9 - - - 8 1

Сам- 1989 октябрь 16 - - 2 4 4 2 1 2 1 -

цы 1990 апрель 16 - - 12 3 1

1991 апрель 15 7 - 8 - - - - - -

1991 октябрь 13 - - 8 3 1 1 - - -

1992 апрель 19 - - - 6 7 2 4 - -

Продолжение таблицы 7

Пол Сроки исследо- Число Число рыб (шт.) по рангам активности

рыб вания; рыб, (усл. ед./мл)

ШТ.

год месяц 0 2 4 8 16 32 64 128 256 512

Лизоцим

Сам- 1909 октябрь 13 - 2 4 6 1

ки 1990 апрель 24 - - - 2 8 8 6 - -

1991 апрель 11 - - - - 1 1 - 2 7

1991 октябрь 18 - - 2 3 5 1 4 2 -

1992 апрель 9 - - - 1 5 3 - - -

Сам- 1989 октябрь 16 - 3 5 7 1

цы 1990 апрель 16 - - 3 4 3 5 1 - -

1991 апрель 15 2 1 4 8

1991 октябрь 13 - - 1 1 7 4 - - -

1992 апрель 19 - - 1 1 4 4 5 4 -

По многолетним данным было проведено сравнение содержания иммунологических факторов у разных возрастных групп веслонода. Для анализа были взяты двухлетки, трехлетки и производители в возрасте тринадцатилеток. Наибольший уровень как АЭК, так и лизо-цима был у производителей, наименьший - у двухлеток.

Проведенные исследования показали широкую изменчивость иммунологических показателей. Выявлено отчетливое влияние на уровень активности исследованных гуморальных факторов возраста рыб, сезонности и года выращивания.

ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС ВЕСЛОНОСА

Одним из элементов технологии выращивания прудовых рыб является контроль их физиологического состояния, в том числе, уровня резистентности к действию двух видов факторов: природных и рыбо-водно-технологических. Проведенные нами наблюдения касались влияния в условиях прудового хозяйства на некоторые возрастные группы веслоноса водной среды с различным показателем рН и применяемого для профилактики заболеваний препарата фиолетового К. 16

Критические значения рП для разных возрастных групп и изменение реактивности в условиях повышения рН

При выращивании веслоноса в прудах возникает вопрос об устойчивости данного вида к резким отклонениям рН воды применительно к различным этапам, начиная с эмбрионального.

Первые наблюдения по влиянию рН водной среды на развивающуюся икру были проведены в чашках Петри. Наблюдения велись вплоть до вылупления эмбрионов. Полная гибель эмбрионов происходила при рН 10,0. При рН 8.0 гибель замедлялась, но была большей по сравнению с инкубацией при рН 6,0. Средняя выживаемость составила 25.3% и 49,3%, соответственно. Наибольшая выживаемость эмбрионов, равная 90,6%, была отмечена при 20-минутной экспозиции при рН 8,0 с последующим переносом икры в воду с рН 6,0.

В последующем изучали влияние воды с различными параметрами рН на 4-дневных личинках. При рН 11,0 все личинки погибали через 15 мин после кратковременной резкой двигательной реакции (выпрыгивание из воды) с последующей адинамией и потерей плавучести. При более низком значении рН равном 10,0 средняя выживаемость через 6 сут составила 92,6%, в контроле при рН 7,8 - 94,3%. К концу опыта у 10-дневных личинок содержание АЭК и лизоцима в опыте и в контроле повышалось. Статистическая обработка данных по Ман-на-Уитни достоверных различий не выявила. Величина критерия составила 0,18-0,44 при критическом значении 0,05.

Было проведено наблюдение за мальками средней массой 24 г, содержащихся в бассейнах при различных значениях рН. Средняя температура в бассейнах была равна 28,7°С. При рН 10,0 наблюдали полную гибель мальков. В опыте рН был равен 9, 5. контролем служила водная среда с рН 7,8. Результаты определения гуморальных факторов представлены на рис. 2. Достоверное различие уровня АЭК и лизоцима отмечали между двумя контрольными группами. Величина критерия Крускала-Уоллиса составила 5,03. В опытных группах отмечали достоверное различие уровня лизоцима (коэффициент Крускала-Уоллиса 4,54). Сравнение объединенных повторностей не выявило влияния рН 9,5 на уровень агглютининов и лизоцима.

Был поставлен также опыт по влиянию водной среды с повышенным рН на двухлетков веслоноса. В опыте уровень рН равнялся 12,0, в контроле - 9,0. Данные по содержанию гуморальных факторов в исследуемых группах представлены в табл. 8.

лизоцим

Кол-во рыб, шт.

Рис. 2. Содержание агглютининов и лизоцима в сыворотке крови мальков веслоноса | | контроль 1, |-У:'".у.:.::М контроль 2,

м^щ опыт 1, У////УХ °ПЬ1Т 2

Таблица 8

Содержание АЭК и лизоцима у двухлетков всслоноса при разных значениях рН

Группа рыб

АЭК, усл. ед. /мл . Лизоцим, усл. ед. /мл

начало

окончание

начало

окончание

О О К К

4.8

6.0 6,6 5,1

7.6 10.7 12,2 7.2

29,6 31,2 39,6 45,1

45.6 21,0

25.7 22,2

Сравнение рыб, содержащихся в контрольных группах показало, что за период опыта отмечено достоверное увеличение АЭК к концу опыта, что свидетельствует о влиянии новых условий содержания. В отношении лизоцима показано снижение фактора в контроле к концу опыта. Можно полагать, что выявленные изменения обоих факторов отражают адаптацию организма рыб после пересадки в пруд.

Препарат фиолетового К широко применяется в рыбоводной практике, т.к. обладает выраженным противопаразитарным действием. Представляет интерес испытание более высоких (по сравнению с принятыми) концентраций,., пытаясь повысить эффективность препарата, а также прогнозировать ситуацию при его передозировке. Поэтому на разных этапах выращивания рыб были испытаны дне концентрации Фиолетового К: близкая к используемой на практике (10 мг/л) и более высокая (30 мг/л).

Первые наблюдения за развивающейся икрой были проведены в лабораторных условиях в чашках Петри со ст. 8 бластомеров и до вы-лупления при температуре 23°С. Уровень лизоцима в икре до постановки опыта был равен 37 усл.ед./мл. После проведения эксперимента содержание фактора понизилось при концентрациях 10 и 30 мг/л. В контроле без обработки красителем этот показатель увеличился в несколько раз. Прослеживалась корреляция между средними показателями выживаемости и уровней лизоцимной активности.

Оценка действия антипаразитарного средства Фиолетового К на состояние веслоноса на первом году жизни

Опыты по воздействию фиолетового К на разных этапах развития трех групп полусибсов были продолжены в бассейнах. Опыт был поставлен без контроля (не подвергнутая действию препарата икра), чтобы избежать гибели эмбрионов. Поэтому полученные результаты позволили сопоставить влияние двух концентраций фиолетового К. Результаты изменения иммунологических факторов представлены в табл. 9.

Таблица 9

Относительное содержание гуморальных факторов и выживаемость на ранних стадиях развития веслоноса при воздействии фиолетового К, усл.ед./мл

Груп- До оп- Ст.31 эмбриона- 7 сут.личиноч- Выживае-

пы полу- лодот- льного периода ного периода мость, %

воре-

сибсов ния 10 мг/л 30 мг/л 10 мг/л ЗОмг/л 10мг/л ЗОмг/л

Агглютинины к эритроцитам кролика

1 20,0 10,3 6,5 1,8 25,4 8,1 27,4

2 7.5 8,8 8, 9 '8,5 14,5 3,2 6,7

3 10,5 7.2 10,0 7,2 10,7 5,5 13,2

Агглютинины к эритроцитам человека

1 10.0 8.3 3.9 0 0

2 6,2 3.1 5,6 0 0

3 10,0 3.9 4,9 0 Лизоцим 0

1 21,9 19,2 7,8 31,2 37,4

2 18,2 7,3 4,2 27,5 21,5

3 20,2 5.9 2,7 16,5 16,9

Изменение иммунологических факторов характеризовалось на ст. 31 снижением агглютининов и лизоцима по сравнению с неоплодот-воренной икрой. В дальнейшем у 7-дневных личинок обнаружено падение гемагглютининов к эритроцитам человека, повышение содержания лизоцима. Соответственно изменилось соотношение уровня агглютининов после оплодотворения в сторону преобладания агглютининов к эритроцитам кролика. Сопоставление количества факторов у всех групп эмбрионов выявило отличие в их иммунологическом статусе, за исключением содержания АЗК у 7-дневных личинок, у которых при воздействии 30 мг/л красителя уровень фактора не изменился.

В последующих экспериментах изучали влияние красителя на 4-дневных личинок. При концентрации 0,2 мг/л выживаемость составила 16%, а при 0,4 мг/л наблюдали полную гибель личинок через сутки. Изменение содержания факторов при воздействии красителя в дозе 0,2 мг/л представлено в табл. 10.

Таблица 10

Относительное содержание факторов и выживаемость при обработке личинок веслоноса красителем

Концентрация красителя Определяемый иммунологический фактор Содержание факторов на различных сроках оыращиоания, усл.сд./мл Относительная выживаемость, %

4 день* 6 день 7 день 10 день

0.2 мг/л лик 13,0х11 13,3 17.4 22,0 10,0

ляч 0 . 0 3,2 0

Лизоцим 14,2 20,6 14,4 28,2

Контроль АЭК 13,0 21,2 23,5 18,0 73.5

АЭЧ 0 2,1 0 0

Лизоцим 14,2 24,9 19.1 22,0

Примечание: х) - до обработки красителем, хх) - средний уровень фактора

По динамике уровня факторов отметили тенденцию к увеличению содержания АЭК и лизоцима по сравнению с 4-дневными личинками, однако статистический анализ не выявил различий между опытной и контрольной группой, т.к. величина критерия Манна-Уитни колебалась в пределах 0,06-1,0 (при критическом значении 0,05).

Последующие опыты были направлены на изучение реагирования иммунологических систем при воздействии фиолетового К на сеголетков. Было проведено два опыта в 1988 и 1989 гг. В первом опыте в сыворотке крови определяли агглютинины к эритроцитам кролика, во втором - агглютинины к эритроцитам кролика и лизоцим. Концентрации красителя были применены такие же, как и для 4-дневных личинок: 0,2 и 0,4 мг/л. Для выявления достоверных различий между отдельными группами рыб был проведен статистический анализ материалов с помощью непараметрического критерия Крускапа-Уоллиса. Было установлено, что между всеми исследованными группами отсутствует различие в содержании гемагглютининов (критерий Крускала-Уоллиса

составил 0-3,3). Опытные и контрольные группы были сопоставлены также между собой путем объединения групп с одинаковым воздействием красителя. И в этом случае не отмечено различия между опытом и контролем и между группами с разной концентрацией внесенного красителя, (критерий Крускала-Уоллиса 0-3,6). Иные результаты получены во втором опыте при определении содержания сывороточного лизоцима. После статистической обработки материала установлено неодинаковое соотношении активности опытных и контрольных групп. Между группами рыб. обработанных фиолетовым К в концентрации 0,4 мг/л и контрольными особями установлено достоверное различие, причем урошш лизоцима у опытных рыб были значительно меньше. При меньшей концентрации препарата между опытными и контрольными группами эти различия отсутствовали. Следует отметить одинаковый уровень фактора у однотипных групп в опыте и контроле (рис. 3).

АЭК, 1988 г. АЭК, 1989 г.

Рис. 3. Достоверность изменения содержания гуморальных факторов у сеголетков веслоноса при воздействии фиолетовго К

Таким образом, представленные выше материалы позволили характеризовать некоторые стороны реагирования разных возрастных групп веслоноса на воздействие водной среды с различными значениями рН и используемым при профилактической обработке химического агента - красителя фиолетового К.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленная работа касается изучения резистентности американского веслоноса, выращиваемого в промышленном рыбоводном хозяйстве в условиях действия природно-климатических факторов Северного Кавказа и рыбоводно-технологических факторов воспроизводства.

Иммунологическая реактивность формируется начиная с ранних этапов развития, сменяя фазу наследования факторов, полученных в материнском организме. [! отношении лизоцима актишюс его оПразо ваиие начинается, видимо, у 7-дневных личинок, а для гетероге-магглютининов - у более старших возрастов. Следующий этап увеличения образования факторов для лизоцима после двухлетнего возраста, для гемагглютининов - после года. Влияние сезонности на уровень гуморальных иммунологических факторов было подтверждено на разных возрастных группах и показало при использовании интегральных групповых показателей сравнения неодинаковый характер изменения лизоцима и гетерогемагглютининов.

Оценка резистентности по интегральному клиническому показателю - выживаемости показала, что имеются существенные различия в летальном действии водной среды с высоким значением рН на различные возрастные группы. Установлено абсолютно летальное действие на эмбрионов и мальков среды с рН 10,0, но мальки полностью выживали при рН 9, 5. Еще более устойчивыми оказались двухлетки, выдержавшие рН 12,0. В этих опытах отчетливо проявилось действие возрастного фактора и повышение устойчивости с увеличением возраста.

В отношении фиолетового К, применяемого для борьбы с сапро-легниозом, установлено отсутствие летального действия на эмбриональные стадии при 3-кратном увеличении концентрации препарата. Однако,.- концентрация 0,4 мг/л вызывала полную гибель 4-дневных личинок. При действии фиолетового К в отличие от влияния рН самые ранние стадии развития оказались более устойчивыми.

ВЫВОДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная технология искусственного воспроизводства и выращивания американского веслоноса позволяет создать уровень резистентности! •' необходимый для эффективного функционирования физиологических систем рыб и создания промышленных ремонтно-маточных стад.

2. При действии ряда факторов химической и физической природы, уровень резистентности является недостаточным. В этих ситуациях наблюдали ухудшение состояния и гибель рыб.

3. Установлено абсолютно летальное действие водной среды с рН=10,0 на эмбрионов и мальков веслоноса и частичное при рН=9,5; двухлетки полностью выживали при рН=12,0.

4. Летальное действие лечебно-профилактического средства фиолетового К наблюдали у сеголетков при концентрации препарата 0, 4 мг/л; в эмбриональном периоде концентрации свыше 10 мг/л не вызывали гибели рыб.

5. Иммунологическая активность органов и тканей по данным определения двух гуморальных факторов - лизоцима и гетерогемагг-лютининов - зависит как от факторов, полученных в материнском организме, так и от новообразования собственными физиологическими системами.

6. Наиболее выражена изменчивость иммунологической реактивности в эмбриональном и личиночном периодах, а также в зависимости от сезона исследования рыб однотипных возрастных групп.

7. Реагирование иммунной системы веслоноса при воздействии щелочной среды и фиолетового К оказалось достаточно инертным; наиболее изменчниым оказался показатель, характеризующий уроиеим лизоцима; отмечено снижение этого показателя при действии на се-голоткоп леталыш концентрации фиолетового К.

8. В процессе выращивания веслоноса в прудах следует избегать применения иптененфикационпых мероприятий, которые могут вызвать резкие колебания рН среды обитания и привести к гибели рыбы.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. ВихманА. А., Ситнова 0. В. Изучение иммунофиЗиологической реактивности веслоноса, выращиваемого в прудовых условиях (предварительное сообщение) // Растительноядные рыбы и новые объекты рыбоводства и акклиматизации / Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. - М. ,1990. -

Вып. 61.- С. 103-107.

2. Ситнова О. В.. Генералова Л.П., Мсльчснков Е.А.. Вихман

A.A. Оценка иммунофизиологического статуса веслоноса (Polyodon spathula (WalЬ.)) в условиях промышленного выращивания // Водные биоресурсы, воспроизводство и экология гидробионтов / Сб.науч.тр. ВНИИПРХ. - М.. 1992.- Вып. 66. - С. 96-106.

3. Ситнова 0. В., Генералова Л. П., Мельченков Е. А., Илясова Н.Ю. К изучению иммунофизиологической реактивности веслоноса в онтогенезе // Тез.докл. YIII науч.конф. по экологич. физиологии и биохимии рыб. - Петрозаводск, 1992.- Т. 2.- С. 104-105.

4. Генералова Л. П., Ситнова 0.В. Методика определения лизо-цима жидкостно-гелевым способом. - М.: ВНИИПРХ, 1993.- 4 с.

5. Godovich P.L., Melchenkov Е.А., Sitnova O.V., Vinogradov V.K. The content of steroid hormones in the blood serum of paddle fish, Polyodon spathula (Walb.), during postembryonic development // 2 nd Int Symp. on Sturgeons, 6-11 Septem. 1993, Moscow-Kostroma-Moscow: Abstr. Bull. / VNIRO. - Moscow, 1993.- P. 16-17.

6. Ситнова 0.В., Вихман А.А., Мельченков Е.А. Изучение иммунофизиологического статуса различных возрастных групп веслоноса (Polyodon spathula (Walb.)), выращиваемого в прудовом хозяйстве // Рыбное хозяйство.- Сер.:Аквакультура. Информ.пакет "Прудовое и озерное рыбоводство". - М. :ВНИЭРХ, 1995.- Вып. 3.- С. 18-23.

7. Вихман А. А., Ситнова 0. В., Генералова Л. П., ШартЛ. А., Борщев В.Н. О методах изучения изменчивости иммунофизиологической реактивности рыб // Развитие аквакультуры на внутренних водоемах / Тез. докл. - М.: МСХА, 1995.- С. 58-59.

8. Мельченков Е. А., Виноградов В. К., Ерохина Л. В., Чертихин

B. Г., Илясова В. А., Бреденко М. В., Ситнова 0. В., Хрисанфов В. Е., Канидьева Т. А., Бубунец Э. В., Харзин 0. Б. Отечественный опыт разведения и выращивания веслоноса // Рыбное хозяйство. Обзор.информ. Сер.: Аквакультура. - М., 1996. - Вып. 1. - 68 с.

9. Мельченков Е.А.. Чертихин В.Г., Бреденко М.В., Ситнова 0. В. Отечественный опыт освоения веслоноса // Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре / Тез. докл. Междунар. симпоз. - Краснодар, 1996,- С. 49.

10. Мельченков Е. А.. Виноградов В. К., Ерохина Л. В., Чертихин В. Г.. Илясова В. А., Бреденко М. В., Ситнова 0. В.. Хрисанфов В. Е., Канидьева Т.А., Бубунец В.Е., Харзин 0.Б. Руководство по разведению и выращиванию веслоноса. М., 1997. - 88 с.

11. Vikhraan A.A., Ford L.A.. Sltnova O.V. Paddlefish. Polyo-don spathula (Walbaum), adaptation in nature and aquaculture / First Russia-USA Symposium "Aquaculture and fish health" // Program and abstracts (12-19 July, 1998, Rybnoe, Dmitrov Region, Moscow Province, Russia). - Moscow, 1998.- P. 82-83.

BHH3PX. 3an. 6. Tup. 100

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ситнова, Ольга Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. РЕЗИСТЕНТНОСТЬ АМЕРИКАНСКОГО ВЕСЛОНОСА К

ДЕЙСТВИЮ ПРИРОДНЫХ И БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ

ФАКТОРОВ И ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ФУНКЦИЯ

0СЕТР00БРАЗНЫХ (аналитический обзор).

1. Резистентность веслоноса в условиях естественного ареала и при искусственном воспроизводстве.

2. Организация иммунной системы осетрооб-разных и ее изменчивость.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ВЕСЛОНОСА.

1. Топография лимфоидных органов и их индексы.

2. Модификация диффузно-гелевого метода определения лизоцима.

3. Распределение гетерогемагглютининов и лизоцима у мальков и сеголетков.

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЕ РЫБОВОДНЫХ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ

ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ ПРОМЫШЛЕННОМ ВЫРАЩИВАНИИ

ВЕСЛОНОСА.

1. Характеристика рыбоводных и иммунологических показателей у производителей и потомства на ранних стадиях развития.

2. Влияние возраста и сезонности на уровень гуморальных иммунологических факторов.

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС ВЕСЛОНОСА.

1. Критические значения рН для разных возрастных групп и изменение реактивности в условиях повышения рН.

2. Оценка действия антипаразитарного средства фиолетового К на состояние веслоноса на первом году жизни.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Резистентность и иммунологическая реактивность веслоноса (Polyodon spathula (Walb. )) в условиях промышленного разведения"

Достаточный уровень резистентности организма к воздействию факторов среды обитания, способных нарушить жизненноважные функции, является обязательным условием воспроизводства вида. В отношении американского веслоноса, Polyodon spathula Walb., эта биологическая закономерность проявилась как в условиях естественной жизни, так и при создании технологии искусственного выращивания. Решение проблемы резистентности веслоноса включало три этапа, соответствующие углублению знаний о его адаптационной способности и биологии в целом. Первый этап носил, в основном, описательный характер и позволил получить первые сведения о требованиях вида к качеству естественной среды обитания (Decker et all., 1991; Gun-dersen, Pearson, 1993; Jennings, Wilson, 1993; Blackwell, Murphy, 1995), о свойствах некоторых физиологических систем, в частности, системы крови (Downey, 1909, 1910; Dauforth, 1912). Второй этап был связан с более детальным изучением влияния антропогенных факторов среды обитания, описанием эмбриогенеза, получением данных по эндокринной и иммунной системам (Purkett, 1961, 1963; Ballard, Needham, 1964; Good et all., 1966; Russell, 1986; Leung, Wourms, 1991; Bemis, Grande, 1992). Были предприняты попытки искусственного разведения. На третьем этапе предпринято широкое и детальное изучение взаимосвязи физиологических функций организма веслоноса с комплексом факторов рыбоводного хозяйства, определены основные параметры жизнеобеспечения и развития вида в новом ареале (Бурцев, 1975; Гершанович, 1977, 1983; Виноградов и др., 1984; Герша-нович, Николаев, 1984; Мельченков, 1991; Devitsina, 1993; Девици-на, Кажлаев, 1993; Бреденко, 1994; Мельченков и др., 1996, 1997).

Широкий температурный диапазон существования вида в естественном ареале и незначительная патология выдвинули представление

- Б о высокой адаптационной способности веслоноса и возможности его воспроизводства в новом ареале (Ильин,1960; Виноградов и др.,1987; Мельченков и др., 1991; Краюшкина и др., 1996). Вместе с тем, ряд наблюдений свидетельствует о неблагоприятном влиянии ряда экологических факторов на естественные популяции и при искусственном разведении. Американские исследователи отмечали гибель веслоноса при механическом и токсическом воздействиях (Eddy, Underhill,1974; Graham et all., 1986). Имеются сведения о паразитарном и бактериальном заражении (Мошу, Думитру, 1997; Ford et all., 1994). При искусственном разведении особенно чувствительны ранние стадии развития, грибковые поражения, перепады температур и, видимо, токсическое воздействие водной среды вызывают гибель рыб или искажают их развитие (Мельченков, 1991; Бреденко, 1993, 1999; Бреденко и др., 1993; Vikhman et all., 1998). Требуют дальнейшего изучения отдельные параметры и воздействия, являющиеся компонентами рыбоводного процесса, к которым относятся значение концентрации водородных ионов в водной среде, лечебно-профилактические средства, токсиканты и др.

В методологическом отношении следует учитывать, что оценка резистентности может быть проведена по различным направлениям и на разных уровнях жизнедеятельности. Наиболее общими показателями являются такие интегральные признаки как выживаемость, динамика роста и развития, клиническое состояние в соответствии с принципами ихтиопатологического исследования. Другой способ - оценка частной резистентности, т.е. устойчивости к отдельным факторам воздействия.

В современной физиологии и патологии получило развитие системное направление, связанное с участием в явлениях резистентности различных физиологических систем и соответствующих функций. Это направление включает как оценку состояния специализированных систем резистентности, например, иммунной, так и других жизненно-важных систем. В отношении веслоноса лишь после создания основных принципов культивирования и полноценного стада стало возможным детальное изучение (преимущественно морфологическое) функциональных систем: воспроизводительной, пищеварительной и др. (Илясова, 1989; Мельченков, 1991; Канидьева, 1991). Были углублены знания о ионном обмене веслоноса (Краюшкина и др., 1990, 1991, 1996). Однако осталась неизученной иммунная система - одна из важнейших адаптационных систем организма позвоночных (Сиротинин, 1981; Ройт, 1991). Можно предположить, исходя из накопленного опыта использования оценки иммунологического статуса в рыбоводстве, что эти данные способствовали бы характеристике физиологического состояния организма веслоноса, степени воздействия неблагоприятных рыбоводных и природных факторов, определению отклонений в динамике развития (Лукьяненко, 1971, 1989; Anderson, 1974; Микряков, 1978, 1986, 1991; Вихман, 1996). Применение иммунологических методов лимитировано чрезвычайно слабой изученностью иммунологической функции веслоноса и полным отсутствием сведений о проявлении иммунологической реактивности в условиях искусственного воспроизводства. Известно лишь, что у веслоноса имеются развитые органы иммуногенеза - тимус, селезенка и специфические реакции отторжения трансплантата и антителообразования при иммунизации модельными антигенами (Legler et all., 1971а,б; Купер, 1980; Галактионов, 1995; Фонталин, 1967; Пестова, Четвертных, 1990). Поэтому применительно к искусственному воспроизводству необходимо получить первые данные по состоянию иммунной системы в течение роста и развития веслоноса в условиях промышленного хозяйства.

Цель настоящего исследования - оценка резистентности и иммунологической реактивности промышленного стада американского веслоноса при воздействии природных и технологических факторов. Для решения указанной цели ставились следующие задачи:

- анализ и обобщение сведений по резистентности веслоноса к факторам среды обитания и иммунологической реактивности осетрооб-разных;

- рыбоводная и иммунологическая характеристика состояния стада веслоноса в условиях промышленного хозяйства;

Работа проведена в рамках КЦП "Амур", в той ее части, которая посвящена новым объектам разведения, в частности, разработке технологии разведения веслоноса.

Считаю своим приятным долгом выразить сердечную благодарность моему научному руководителю доктору биологических наук Вих-ману Арнольду Анатольевичу за оказанную помощь и постоянное внимание к моей работе.

Особую признательность хочу выразить заведующему лаборатории осетроводства и акклиматизации доктору биологических наук, профессору Владимиру Константиновичу Виноградову за доброжелательное отношение к моей работе.

За постоянную поддержку и содействие выражаю искреннюю признательность и благодарность всем сотрудникам лаборатории осетроводства и акклиматизации ВНИИПРХ.

- 8

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Ситнова, Ольга Владимировна

ВЫВОДЫ И ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная технология искусственного воспроизводства и выращивания американского веслоноса позволяет создать уровень резистентности, необходимый для эффективного функционирования физиологических систем рыб и создания промышленных ремонтно-маточных стад.

3. Установлено абсолютно летальное действие водной среды с рН=10,0 на эмбрионов и мальков веслоноса и частичное при при рН=9,5; двухлетки полностью выживали при рН=12,0.

6. Наиболее выражена изменчивость иммунологической реактивности в эмбриональном и личиночном периодах; показана ее зависимость от сезона исследования рыб однотипных возрастных групп.

7. Реагирование иммунной системы веслоноса при воздействии щелочной среды и фиолетового К оказалось достаточно инертным; наиболее изменчивым оказался показатель, характеризующий уровень лизоцима; отмечено снижение этого показателя при действии на сеголетков летальных концентраций фиолетового К.

8. В процессе выращивания веслоноса в прудах следует избегать применения интенсификационных мероприятий, которые могут вызвать резкие колебания рН среды обитания и привести к гибели рыбы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ситнова, Ольга Владимировна, Москва

1. Алекин О. А. Основы гидрохимии. Л., 1970.- 443 с.

2. Архангельский В.В., Беляева Е.С., Сокольский А. Ф. Опыт выращивания молоди веслоноса // Рыбное хоз-во.- 1991.-М 12.- С.28-30.

3. Архангельский В.В., Крупий В.А., Попова А.А. Опыт выращивания веслоноса в поликультуре с осетровыми рыбами // Рыбное хоз-во.Информ. пакет.Аквакультура. Прудовое и озерное Рыбоводство. М.: ВНИЭРХ, 1995.- Вып.З.- С. 9-18.

4. Балахнин И.А. Иммунофизиологический аспект эмбриогенеза стальноголового лосося // Эколог, физиология и биохимия рыб.-Ярославль, 1989.- Т.1.- С.25-27.

5. Балахнин И.А., Нагорная И.М., Стрилько Г.А. Динамика уровня лизоцима в икро стальноголового лосося в норме и при сапролегнио-зе // Рыбное хоз-во.- Киев, 1990.- N 44.- С.68-70.

6. Бауэр 0.Н., Мусселиус В.А., Николаева В.Н., Стрелков Ю.А. Ихтиопатология.- М.: Пищевая пром-сть, 1977.- 431 с.

7. Беляева Е.С. Особенности строения пищеварительного тракта веслоноса Polyodon spatula (Walb.) в раннем онтогенезе // Систематика, морфология и экология рыб / Тр. ЗИН АН СССР.- Л.:Б.И., 1988.- С. 62-71.

8. Беляева Е. С., Козлов А. В., Ермолаев Г.Н., Мальдов Д. Г. Сравнение активности ферментов пищеварительного тракта белуги и вест-т <•-> т тппо / / Г1 г-\ ул гл т т t"i т г г-> т тпрплп тгхгтпл nnrirvn О'"** 'ч *» * Ф/^у»-» патл п ( A nmr\i">

9. Viwi;~^ с. / / i lu{jL>i>iH hum реъо пллнили! ujl> гио^пп. Дикл.- 125 хань, сентябрь 1997).- M.:Изд-во ВНИРО, 1997.- С.212.

10. Бреденко М. В. Влияние температуры на раннее развитие веслоноса // Тез.докл.совещ. "Проблемы развития пресноводной аквакуль-туры".- М. :ВНИИПРХ, 1993.- С. 50-51.

11. Бреденко М. В. Эколого-морфологические особенности раннего развития веслоноса в связи с искусственным воспроизводством. Ав-тороф.диссканд.биол.наук.- М.:ВНИИПРХ, 1999.- 30 с.

12. Бреденко М.В. Реакция зародышей веслоноса на экстремальное температурное воздействие // Ресурсосберегающие технологии в ак-вакультуре / Тез.докл. второго междунар.симп.- Краснодар, 1999.-С. 18-19.

13. Бреденко М.В., Виноградов В.К., Чертихин В.Г., Мельченков Е.А. Особенности разведения веслоноса (Polyodon spathula (Walbaum)) в раннем онтогенезе в связи с вопросами разведения // Сб. науч.тр.ВНИИПРХ.- 1993.- Вып.69.- С.108-114.

14. Бубунец Э.В. Опыт подращивания личинок веслоноса в УЗВ с использованием стартовых комбикормов // Тез. докл. Всерос. науч. -произведет. совещ. по проблемам развития пресноводной аква-культуры.- М.:ВНИИПРХ, 1993.- С.85-87.

15. Бурцев И.А. Веслонос // Рыбоводство и рыболовство. 1975. -N1.- С.1.

16. Бурцев И.А., Гершанович А.Д. Об акклиматизации веслоноса в СССР // Рыбное хозяйство. 1976.- N 10.- С. 13-16.

17. Васецкнй С.Г. Рыбы семейства Polyodontidae// Вопросы ихтиологии." 1971,- Т.Н. Вып. 1(66).- С. 26-42.

18. Виноградов В. Акклиматизантов становится все больше // Рыбоводство и рыболовство. 1978.- N 2.- С. 10-11.

19. Виноградов В.К. Новые виды поликультуры в товарном рыбоводстве // Рыбное хозяйство. 1981.- N5.- С. 41-42.

20. Виноградов В.К. Поликультура в товарном рыбоводстве // Обзор. информ. М.: ЦНИИТЭИРХ, 1985.- 45 с.

21. Виноградов В.К., Ерохина Л. В. Новые объекты рыбоводства и акклиматизации // Рыбное хозяйство.- 1976.- N 10.- С.10-13.

22. Виноградов В.К., Ерохина Л.В. Буффало. Канальный сом. Весло-нос // Рыбоводство и рыболовство. 1980.- N4.- С. 2-4.

23. Виноградов В.К., Канидьева Т. А. Первые результаты применения стартовых кормов для выращивания веслоноса // Рыбные биоресурсы и экология гидробионтов / Тез.докл.науч.конф.- М.:ВНИИПРХ, 1989.-С. 55-59.

24. Виноградов В.К., Канидьева Т. А. Эффективность комбикорма для ранней молоди веслоноса // Сб.науч.тр.ВНИИПРХ.- 1990.- Вып.59.-С.95-100.

25. Виноградов В.К., Канидьева Т.А. Стартовые корма для культивируемых рыб как предпосылка к рыбоводному освоению веслоноса // Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. 1990.- Вып. 61.- С. 45-52.

26. Виноградов В.К., Мельченков Е.А.,Ерохина Л.В., Воропаев Н.В. Опыт выращивания производителей и искусственного воспроизводства веслоноса // Экспресс-информ.- М.:ЦНИИТЭИРХ, 1984.- Вып.9.- С.1-6.- 127

27. Виноградов В.К.,Мельченков Е. А., Ерохина Л.В., Воропаев Н.В., Чсртихпн В.Г. Выращивание производителей и разведение веслоноса (предварительные рекомендации).- М.:ВНИИПРХ, 1986.- 21 с.

28. Виноградов В., Мельченков Е., Ерохина Л.,Воропаев Н., Черти-хин В. Разведение веслоноса // Рыбоводство.- 1987.-N 4.- С.20-23.

29. Виноградов В.К., Мельченков Е.А., Ерохина Л.В., Чертихин

30. B.Г. Веслонос (Polyodon spathula Walbaum) в рыбном хозяйстве России. // Первый конгресс ихтиологов России / Тез. докл. Астрахань, сентябрь 1997 г. - М.: ВНИРО, 1997.- С. 270.

31. Вихман А.А. Изучение лизоцима наружных покровов рыб // Физиология прудовых рыб / Сб. науч. тр. ВНИИПРХ. М., 1975.- Вып. 12.1. C. 97-104.

32. Вихман А.А. Системный анализ иммунофизиологической реактивности рыб в условиях аквакультуры.- М.:Экспедитор, 1996.- 176 с.

33. Вихман А.А., Генералова Л.П. Методические указания по количественному анализу гуморальных факторов резистентности в органах и тканях рыб. М.: ВНИИПРХ, 1991.- 20 с.

34. Вихман А.А., Ситнова 0.В., Генералова Л.П., Шарт Л.А., Бор-щев В.Н. О методах изучения изменчивости иммунофизиологической реактивности рыб // Развитие аквакультуры на внутренних водоемах / Тез. докл. М. :МСХА, 1995.- С. 58-59.

35. Владимиров В.Л. Антителообразующая функция у рыб и ее связь с гуморальными факторами естественного иммунитета комплементом и лизоцимом // Симпозиум по паразитам и болезням рыб и водных беспозвоночных / Тез. докл.- М., 1966.- С.10-12.

36. Власов В.А., Лесин К.М. Выращивание русского осетра, веслоноса и белого амура совместно с сеголетками карпа // Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре / Тез.докл.междунар. симп. -Краснодар, 1996.- С. 40.

37. Галактионов В.Г. Очерки эволюционной иммунологии.- М.:Наука, 1995.- 255 с.

38. Генералова Л.П., Ситнова 0.В. Методика определения лизоцима жидкостно-гелевым способом.- М.:ВНИИПРХ, 1994.- 3 с.

39. Гершанович А.Д. Выращивание сеголетков веслоноса, Polyodon spathula (Walbaum) / Советско-американское сотрудничество в области исследования Мирового океана // Симп. по реакции водных экосистем на вселение новых видов.- М.:ВНИРО, 1977.- С.30-31.

40. Гершанович А.Д. Энергетический баланс и пищевые потребности- 129 молоди веслоноса // Физиология морских рыб / Сб. науч. тр. ВНИРО.-М. , 1980.- С. 27-32.

41. Гершанович А. Д. Эколого-физиологическая характеристика молоди осетровых в связи с их выращиванием / Автореф.дисс.канд.би-ол. наук. М.: ВНИРО, 1982. - 24 с.

42. Гершанович А.Д. Факторы, определяющие изменения скорости роста и распределение особей по размерам в группах молоди веслоноса Polyodon spathula Walbaum (Polyodontidae) // Вопр. ихтиологии. 1983.- Т. 23.- Вып. 4.- С. 584-589.

43. Гершанович А.Д., Николаев А.И. Результаты трехлетнего выращивания веслоноса Polyodon spathula (Walbaum) в поликультуре с гибридами осетровых, карпом и растительноядными рыбами // Морское рыбов-во. М. ,1984.- С. 170-175.

44. Гершанович А.Д., Пегасов В.А., Шатуновский М. И. Экология и физиология молоди осетровых.- М.:В0"Агропромиздат", 1987.- 215 с.

45. Гончаров Г.Д. Лаборторная диагностика болезней рыб // М.:Колос, 1973.- 119 с.

46. Девнцина Г.В., Кажлаев А.А. Органы хеморецепции у ранней молоди веслоноса Polyodon spathula // Вопросы ихтиологии.- 1993.-Т.ЗЗ, N 1. С. 142-146.

47. Демкина Н. В., Паюсова А. Н., Целикова Т. Н., Ситнова 0. В., Бреденко М.В. Полиморфизм белков сыворотки крови у веслоноса // Первый конгресс ихтиологов России.Тез. докл. (Астрахань, сентябрь 1997 г.). М.: Изд-во ВНИРО. 1997.- с. 353.

48. Ильин Б. С. Ихтофауна Северной Америки как источник рекрутов для акклиматизации //Тр. ВНИРО. I960. - Т. 43.- Вып. 1.- С. 31-65.

49. ИлясовА.Ю., Киселев А.Ю. Подращивание личинок веслоноса (Polyodon spathula) в установке замкнутого цикла водоснабжения // Проблемы развития пресноводной аквакультуры / Тез.докл.Всеросс.совещ. М., 1993.- С. 47-48.

50. Илясопа В.А. Гаметогенез и половые циклы веслоноса (Polyodon spathula (V/albau.m) // Автореф. диос. канд. биол. наук. М.: ВНИИПРХ, 1989.- 24 с.

51. Илясова В. А., Мельченков Е.А. Гаметогенез и половые циклы веслоноса. Сообщение 1. Оогенез // Растительноядные рыбы и новые объекты рыбоводства и акклиматизации / Сб.науч. тр. ВНИИПРХ.-1988.- Вып. 54.- С. 30-35.

52. Илясова В. А., Мельченков Е. А. Гаметогенез и половые циклы веслоноса. Сообщение 2. Сперматогенез // Там же.- С. 35-39.

53. Илясова В.А., Канидьева Т.А. Гистологический анализ некоторых элементов пищеварительной системы ранней молоди веслоноса в связи с оценкой комбикормов // Корма и кормление ценных объектов аквакультуры / Сб.науч.тр.ВНИИПРХ.- М., 1992.- Вып. 67.- С.11-21.

54. Каграманова J1. К., Ермольева 3. В. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима // Антибиотики. -1966.- N П. С. 917-919.

55. Канидьева Т.А. Некоторые особенности пищеварения у личинок и мальков рыб в связи с созданием стартового корма для американского веслоноса // Биологические основы индустриального осетроводства / Сб. науч. тр. ВНИРО.- М., 1991.- С. 80-85.

56. Киселев А.Ю., Ширяев А.В., Илясов А.Ю. и др. Технология выращивания веслоноса до массы 1-2 г в установках с замкнутым циклом водоснабжения.- М.:ВНИИПРХ, 1995.- 15 с.

57. Костылев В.А. Выращивание веслоноса в прудах тепловодного хозяйства // Растительноядные рыбы и новые объекты рыбоводства и акклиматизации / Сб. науч. тр. ВНИИПРХ.- М., 1988.- Вып. 54. С. 39-47.

58. Костылев В.А. Подращивание молоди и выращивание посадочного- 131 материала веслоноса в емкостях разных конструкций в индустриальном хозяйстве // Проблемы развития пресноводной аквакультуры / Тез. докл. Всеросс. совещ. М., 1993.- С. 48-49.

59. Краюшкина Л.С., Беляева Е.С., Семенова О.Г. Реакция на солевое воздействие и солеустойчивость молоди веслоноса // Экологический и морфофункциональные основы адаптации гидробионтов / Тез. докл. Л., 1990.- С. 61-63.

60. Краюшкина Л.С., Беляева Е.С., Семенова 0. Г. Исследование со-леустойчивости молоди веслоноса // Рыбное хозяйство.-1991.- N12.-С.31-32.

61. Краюшкина Л.С., Семенова 0.Г., Панов А.А., Герасимов А.А. Функциональные особенности осморегуляторной системы веслоноса Polyodon spathula (Polyodontidae)// Вопр. ихтиологии.-1996.- Т. 36. -Вып. 6.- С. 827-833.

62. Купер Э. Сравнительная иммунология.- М. :Мир, 1980.- 422 с.

63. Ларцева Л.В. Профилактика и терапия сапролегниоза икры осетровых и белорыбицы при искусственном их разведении // Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1987.- 22 с.

64. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб. М.: Пищевая пром-сть, 1971.- 364 с.

65. Лукьяненко В.И. Иммунобиология рыб: Врожденный иммунитет.-М. :В0 Агропромиздат, 1989.- 271 с.

66. Лукьяненко В.В. Фракционный состав гемоглобина веслоноса // Осетровое хозяйство водоемов СССР / Тез.докл.всесоюз.совещ.- Астрахань, 1989.- Ч. 1.- С. 192-194.

67. Лурье Ю.Ю. Юнифицированные методы анализа вод.- М.:Химия, 1973.- 376 с.

68. Марченко A.M. Микозы рыб и причины их возникновения // Вопросы паразитологии и патологии рыб / Тр.ЗИН АН СССР. Л., 1987.1. Т. 171.- С. 86-101.

69. Мельченков Е.А. Рыбоводно-биологичеокая характеристика веслоноса (Polyodon spathula (Walbaum). Автореф. дисс.канд.биол-наук. М. :ВНИИПРХ, 1991.- 28 с.

70. Мельченков Е.А. 0 современном состоянии и перспективах освоения веслоноса // Тез.докл.совещ. "Проблемы развития пресноводной аквакультуры".- М.:ВНИИПРХ, 1993.- с. 45-47.

71. Мельченков Е.А., Виноградов В.К., Ерохина Л.В. и др. Технология разведения веслоноса.- М.:ВНИИПРХ, 1991.- 69 с.

72. Мельченков Е.А., Виноградов В.К., Ерохина Л.В., Чертихин

73. B.Г., Илясова В.А., Бреденко М.В., Ситнова 0.В., Хрисанфов В.Е., Канидьева Т.А., Бубунец В.Е., Харзин О.Б. Руководство по разведению и выращиванию веслоноса. М., 1997.- 88 с.

74. Мельченков Е.А., Чертихин В.Г. Гормональная стимуляция производителей веслоноса // Сб. науч. тр. ВНИИПРХ.- 1992.- Вып.67.1. C.46-52.

75. Мельченков Е.А., Чертихин В.Г., Бреденко М.В., Ситнова 0. В. Отечественный опыт освоения веслоноса // Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре / Тез.докл. Междунар.симпоз.- Краснодар, 1996.- С. 49.

76. Микряков В.Р. Актуальные вопросы иммунологии рыб // Теоретические аспекты рыбохозяйственных исследований водохранилищ.- Л.: Наука, 1978.- С. 116-133.

77. Микряков В. Р. Иммунологические основы контроля эпизоотичес- 133 кого состояния рыбохозяйственных водоемов // Тез.докл. Y Всесоюз. снмп. по инфекционным болезням рыб. М., 1986.- С. 62-63.

78. Микряков В.Р. Закономерности формирования приобретенного иммунитета у рыб. Рыбинск, 1991.- 152 с.

79. Мошу А., Думитру Ч. Паразиты веслоноса Poliodon spathula в прудах // Тез.докл. Первого конгресса ихтиологов России (Астрахань, 1997).- М. :ВНИР0, 1997.- С. 381.

80. Мусселиус В.А., Ванятинский В.Ф., Вихман А.А. и др. Лабораторный практикум по болезням рыб.- М.:Легкая и пищевая пром-сть, 1983.- 295 с.

81. Незлин Р. С. Строение и синтез антител.- М.:Наука, 1972.312 с.

82. Никитин В.М. Справочник серологических реакций // Кишинев: Штиинца, 1977,- 206 с.

83. Никольская М. П. Особенности развития системы ампулярных электрорецепторов в онтогенезе веслоноса Polyodon и осетровых рыб // Доклады АН СССР. 1983.- т. 268.- N2.- с. 474-477.

84. Никольская М.П. Развитие системы ампулярных органов у осет-рообразных рыб (Chondrostei, Acipenseriformes) и ее функциональное значение // Сигнализация и поведение рыб.- Апатиты:Кольский филиал АН СССР, 1985.- С. 46-56.

85. Павлов Д.С., Савватеева К.А., Соколов Л.И., Алексеев С.С. Редкие и исчезающие животные.- Рыбы.- М.: Высшая школа, 1994.-344 с.

86. Пестова И.М., Четвертных В. А. Морфофункциональная организация системы гемиммунопоэза в эволюции // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1990.- Т. 99.- N 11.- С. 90-99.

87. Правдин И.Ф. Руководство по изучению рыб.- М.:Пищепромиздат, 1966.- 375 с.- 134

88. Ресурсосбер1гаюча технология вирощувания риби у малых водос-ховищах. М1кола1в:МП"Возможности Кимерии", 1996.- 42 с.

89. Ройт А. Основы иммунологии.- М.:Мир, 1991.- 328 с.

90. Руниони Р. Справочник по непараметрической статистике.- М.: Финансы и статистика, 1982.- 200 с.

91. Сиротинин Н.Н. Эволюция резистентности и реактивности организма // М.: Медицина, 1981.- 236 с.

92. Ситнова 0. В., Генералова Л. П., Мельченков Е.А., Илясова Н.Ю. К изучению иммунофизиологической реактивности веслоноса в онтогенезе // Тез.докл. YIII науч.конф. по экологич.физиологии и биохимии рыб. Петрозаводск, 1992.- Т. 2.- С. 104-105.

93. Субботкин М. Ф. Антигенный состав сывороточных белков веслоноса // Формирование запасов осетровых в условиях комплексного использования водных ресурсов / Тез.докл.всесоюз.совещ.- Астрахань, 1986.- С. 333-334.

94. Строганов Н. С., Бузинова Н. С. Гидрохимия. М. :МГУ, 1969.166 с.

95. Терлецкая 0.В. Влияние некоторых факторов водной среды на выживаемость личинок осетровых рыб // Совершенствование биотехни- 135 ки прудового рыбоводства / Тез.докл.Всесоюз.совещ.- М.:ВНИИПРХ, 1980.- С. 251-253.

96. Тихонова Э.Ю., Медная Л.И. 0 некоторых нарушениях эмбрионального развития веслоноса под влиянием низких температур // Первый конгресс ихтиологов России.Тез. докл. (Астрахань, сентябрь 1997 г.). М.: Изд-во ВНИРО. 1997.- с. 259.

97. Тюрин Ю.Н. Непараметрические методы статистики.- М.:Знание, 1978.- 64 с.

98. Фонталин Л.Н. Иммунологическая реактивность лимфоидных органов и клеток. М.:Медицина, 1967.- 210 с.

99. Чебанов М.С., Тлеуж М.Г., Савельева Э.А., Чертихин В.Г., Мельченков Е.А. Результаты эксперимента по управлению сезонностью размножения веслоноса // Ресурсосберегающие технологии в аква-культуре / Тез.докл. второго междунар.симп.- Краснодар, 1996.-с. 49.

100. Чертихин В.Г., Бай B.C., Мельченков Е.А. Первый опыт выращивания товарных двухлетков веслоноса // Рыбное хозяйство. Сер. "Аквакультура". Обзор.информ.- М.:ВНИЭРХ, 1992.- Вып.З.- С.24-31.

101. Шестерин И.С., Иванов Э.В., Андронников С.Б. Роль показателя рН при оценке качества воды в прудах // Растительноядные рыбы и новые объекты рыбоводства и акклиматизации / Сб.науч.тр.ВНИИПРХ.-М., 1979.- Вып. 26.- С. 133-141.

102. Щелкунов И.С. Вирусные болезни рыб: состояние и перспективы // Вс-пр. паразитологии и патологии рыб / Тр. ЗИН АН СССР. Л.,1987.- Т. 171.- С. 47-67.

103. Яржоыбек А.А., Лиманский В. В., Щербина Т.Е. и др. Методические указания по диагностике физиологического состояния личинок и сеголеток карпаю. М.: ВНИИПРХ, 1986.- 35 с.

104. Acton R. Т., Weinheimer P. F., Dupree Н.К. et all. Isolation and characterization of the immune macroglobulin from the paddle-fish, Polyodon spatula // J.Biol. Chem.- 1971.- Vol. 246(22).-P. 6760-6769.

105. Acton R.T., Hall S.J., Weidermeier W. et all. Tetrameric immune macroglobulins in three orders of bony fishes // Proc.Wat 1.Acad.Sci.- 1971.- 68(1).- P. 107-111.

106. Adams L. A. Age determination and rate of growth in Polyodon spathula, by means of the growth rings of the otoliths and denta-ry bone // American Midland Naturalist.- 1942.- V.28.- N. 3. -P.617-630.

107. Alexander M.L. The paddlefish (Polyodon spathula) // Transactions of the American Fisheries Society. 1914.- V. 44.- N.I.-P. 73-78.

108. Amlacher E. Taschenbuch fur Fischkrankheiten // 2 Auflage Gustav Fischer Verlag.- Leipzig.- 1972.- 378 s.

109. Anderson D.P. Immunobiology. Diseases of fishes. Book 4. Fish immunology. N. -Y. :Neptun Publ.Inc. - 1974.- 279 p.

110. Anderson D.P. Immunological indicators: effects of environmental stress on immune protection and disease autbreaks // Amer. Fisheries Society Symp.- 1990.- N 8.- P. 38-50.

111. Anderson D.P., Van Muiswinkel W.B. Effects of chemically immune modulation on infections diseases of fish // Progress in chimical and biological research / Eds.Kende et all.- N.-Y.:Alan P.Liss Inc. 1984.- Vol. 161.- P. 187-211.- 137

112. Ballard W.W., Needham R.G. Normal embryonic stages of Polyo-don spathula (Walbaum) // J.Morphol.- 1964.- V. 114.- N. 3.

113. Beedle D., Georgi T. The kidney of the chondrostean Rich, Polyodon spathula (Walbaum) // Proc.Nebr.Acdd and Affil Soc. -1977.- 87.- p. 7.

114. Belyaeva E.S., Maldov D. G. Digestive enzyme activities in paddlefish juveniles //Intern, symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept. 6-11 1993. Moscow Kostroma - Moscow. Russia. Moscow:VNIRO. 1993.- p.84.

115. Bemis W.E., Grande (R.)L. Early development of the actinop-terygian head. I. External development and staging of the paddlefish Polyodon spathula // Journal of Morphology.- 1992.-213.-77 pp.

116. Blackwell B.G., Murphy B.R. Suitability of food resources and physiochemical parameters in the lower Trinity River, Texas, for paddlefish. // Journal of Freshwater Ecology.- 1995.- N. 10(2).- p. 163-166.

117. Brady D. R. Caudal neurosecretory system of the paddle fish, Polyodon spathula // Zool.Anz (Jena). 1984.- Vol. 213.- Bd 1/2.-p. 215-233.

118. Carlson D.M., Bonislawsky P.S. The paddlefish (Polyodon spathula) fisheries of the midwestern United States //Fisheries.-1981.- V. 6.- N. 2. P. 17-22.

119. Carlson D.M., Kettler M. K., Fisher S.E., Whitt G. S. Low genetic variability in paddlefish populations // Cope-ia.-1982.-N.3.-P. 721-725.

120. Chebanov M.S., Savelyeva E.A., TleoujM.G., Chertichin V.G., Melchenkov E.A. An exsperiment seasous control of paddlefish propagation // 3 International symp. on sturgeon.- Italy, july 8-11,1997.- P. 5 di 10.

121. Coker R.E. Nethuselah of the Missisipi (Paddlefish) // Sci. Monthly. 1923.- V. 16.- N. 1.

122. Collinge W.E. The sensory canal system of fishes. 1. Ganoi-dei // Quart. J. Microscop. Sci., N. S. 1894.- V.36.

123. Cowan C.M. Protein profiles in lower fish // Proc.Nebr. Acad. Sci. 1966.- 76.- p. 5-6.

124. Cvancara V.A. Liver carabamyl phosphate synthetase in the primitive freshwater bony fishes (Chondrostei, Holostei) // Сотр. Biochem Physiology.- 1974.- 49 b(4).- p. 785-787.

125. Dabrowski K. Do Acipenserids reguere vitamin C? // Intern, symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept.6-11,1993. Mos-kow-Kostroma-Moskow. Russia. Moskow:VNIRO, 1993.- P. 88.

126. Danforth C.H. The heart and arteries of Polyodon // J.Morp-hol. 1912.- 23(3).- p. 409-454.

127. Decker E.A., Crum A.D., Mims S.D. Processing yields and composition of paddlefish (Polyodon spathula), a potential aqu-aculture species // Gournal of Agricultural and Food Chemistry." 1991.- V. 39, N. 4. P. 686-688.

128. Devitsina G.V. Chemosensory systems in sturgeon fry // Intern. symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept.6-11,1993. Moskow-Kostroma-Moskow.Russia.- Moskow:VNIRO, 1993.- P. 6-7.

129. Downey H. Lymphatic tissue of the kidney of Polyodon spathla // Folia haematologica (Leipzig). I. Morphologische Teil.- 1909.-Bd. 8, H. 6.- S. 415-464.

130. Downey H. Phagocytosis of erythrocytes in the lymphorenal tissue of Polyodon spathula // Folia haematologica (Leipzig). Teil Archiv. 1910.- Bd. 9, H. 1.- S. 81-86.

131. Eddy S., Underhi11 J.C. Northern fishes // 3rdedition.- Min- 139 ncapolis: Univ. of Minnesota Press, 1974.- 414 p.

132. Fange R. A comparative study of lymphomyeloid tissue in fish // Development and Comparative Immunology.- Suppl. 2.- 1982.-P. 23-33.

133. Finstad J., Papermaster B.W., Good R.A. Evolution of the immune response. II. Morphological studies on the origin of the thymus and organized lymphoid tissue // Lab.Invest.- 1964.- 13.-p. 430.

134. Fish L.A., Pollard В., Good R.A. Characterization of an immunoglobulin from the paddlefish (Polyodon spathula) // Phylogeny of immunity / Ed.R.T.Smith et all.- Gainesville:Good Univ.Fla.Press.- 1966.- p. 99-104.

135. Good R.A., Gabrielsen E. The thymus and other lympfoid organs in the development of the immune system // Human transplantation.- 1966.- p. 526-536.

136. Gundcrsen D.T., Pearson W.D. Reproduction, age and growth analysis of paddlefish, Polyodon spathula, in the falls of the Ohio National Wildlife Conservation Area // Transactions.- 1993.-V. 54.- N. 1/2.- p. 1.- 140

137. Hayashida Т., Legios M.D. Fish grouth hormone: a biological, immunochemical and ultrastructural study of sturgeon and paddle-fish pituitaries // General а. Сотр.Endocrinol.- 1969.- Vol. 13, n. 3.- p. 403-411.

138. Horowitz J. J., Whitt G.S. Evaluation of a nervous specific lactate dehydrogenase isozyme in fish // J. Exp.Zool.- 1972.-Vol. 180, n. 1.- p. 13-32.

139. Houser A., Bross M.G. Observations on the growth and reproduction of the paddlefish // Trans.Amer.Fish.Soc.- 1959.- V.88, N. 1.- P. 50-52.

140. Jennings C.A., Wilson D.M. Spawning activity of paddlefish (Polyodon spathula) in the lower Black River, Wisconsin // Wisconsin J. Freshwat. Ecol.- 1993.- N 8(3).- P. 261-262.

141. JianhuL., Chenghan L., Xiaoming D., Todd A. G. Histological study on the kidney of Chinese paddlefish Psephurus gladius // Intern.symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept.6-11,1993. Moscow Kostroma - Moscow. Russia. Moscow:VNIRO. 1993a.- p.27.

142. Kasumyan A.O. Olfactory and taste responses of acipenserid and paddlefish juveniles to chemical stimuli //Intern, symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept.6-11 1993. Moscow Kostroma - Moscow. Russia. Moscow: VNIRO. 1993.- p. 7.

143. Norris H.W. Observatione upon the peripheral distribution of the cranial, nerves of certain ganoid fishes (Amia, Lepisosteus, Polyodon, Scaphyrhynchas and Acipenser) // G.Сотр.Neurol.- 1925.39.- P. 33-345.

144. Olson G. Nonspecific and specific lymphoid blastogenesis in leukocyte cultures from Polyodon spathula and Dasyatis americans // Fed.Proc.- 1967.- Vol. 26, N. 2.- P. 357.

145. Pash R.N., Alexander C.M. Effect of commercial fishing on paddlefish populations // The Paddlefish: Status, Management and Propagation.- North Central Division of American Fisheries Society Special Publication Number 7 August 1986.- P.47-53.

146. Purkett C.A. Reproduction and early development of the paddlefish // Trans. Amer. Fish. Soc. 1961.- V. 90, N.2.- P. 125-129.

147. Purkett C.A. Artificial propagation of the paddlefish // The Progressive Fish-Culturist.- 1963.- V.25, N. 1.- P.31-33.

148. Rideg A., Rideg G. Sturgeon fingerling production based on several types of feeds in indoor recirculating system // Intern.- 142 symposium on sturgeons. Abstract Bulletin. Sept.6-11 1993. Moscow Kostroma - Moscow. Russia. Moscow:VMIRO. 1993.- P.78-79.

149. Robinson J.W. Observations on the life history, movement and harvest of the paddlefish, Polyodon spathula, in Montana // Proceedings of the Montana Academy of Science.- 1966.- V. 26. -P. 33-34.

150. Russell T.R. A study of artificial propagation of the paddlefish // Missouri Departament of Conservation Dingell-Johnson Project F-1R-21, Study S-5, Job Numbers 1 and 2. Final Report.-1973.- 16 pp.

151. Russell R. Biology and Life History of the Paddlefish A Revies // The Paddlefish: Status, Management and Propagation.-North Central Division of American Fisheries Society Special Publication Number 7 August 1986.- P.36-45.

152. Schrekenbach K., Spangenberg R. pH Werbabnangige Ammoniak-vergiftungtn bei Fischen und Moglichkeiten ihrer Beenflussung // Z. Binnenf ischerei DDR. - 1978.- 25, H. 10. - P. 239-314.

153. Swingle H.A. Growth rates of paddlefish receiving supplemental feeding in fertilized ponds // The Progressive Fish-Cultu-rist.- 1965,- V. 27. N 4.- P. 220.

154. Suppes V.C., Meyer F.P. Polypodium sp. (Coelenterata) infection of paddlefish (Polyodon spathula) eggs // J.Parasitology.-1975.- Vol. 61, N. 4.- P. 772-774.

155. Unkenholz D.G. Investigation of paddlefish populations in- 143

156. South Dakota and development of management plans, 1976 // South Dakota Departament of Game, Fish and Parks. Dingel1-Johnson Project F-15-R-12, Study Number 9. Job Numbere 3,5 and 7. Progress Report. 1976.- 19 pp.

157. Unkenholz D.G. Effect of Dams and other habitat alterations on paddlefishb sport fisheries // The Paddlefish: Status, Management and Propagation.- North Central Division of American Fisheries Society Special Publication Number 7 August 1986.- P.51-67.

Информация о работе

Ситнова, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.10

Диссертация

Резистентность и иммунологическая реактивность веслоноса (Polyodon spathula (Walb. )) в условиях промышленного разведения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы