Регуляция метаболических процессов при иммунодефицитных состояниях гормонами тимуса и алиментарными факторами

Мамутов, Жангабай Искендерович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Регуляция метаболических процессов при иммунодефицитных состояниях гормонами тимуса и алиментарными факторами
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Регуляция метаболических процессов при иммунодефицитных состояниях гормонами тимуса и алиментарными факторами"

* к, п&р(>£. ОМ'? от

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР о ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ

На правах рукописи МАМУТОВ Жангабай Искендерович УДК 577.11:616. 438—089. 87—097:615, 874:615. 357

РЕГУЛЯЦИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ состояниях ГОРМОНАМИ ТИМУСА И АЛИМЕНТАРНЫМИ ФАКТОРАМИ

(03.00.04 — Биохимия)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1989

Работа выполнена на кафедре биохимии (Зав, кафедрой—• член-корр. АН УзССР, профессор А. И. НИКОЛАЕВ) Среднеазиатского медицинского педиатрического института Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор М. М. левачев

доктор медицинских наук, Лауреат Государственной премии СССР, профессор 10. с. татаринов доктор медицинских наук, профессор и. е. ковалев Ведущее учреждение — 1-й Московский медицинский институт им. И. М. Сеченова

Защита состоится „_"____. 198 г. в „_~

часов на заседании специализированного Совета Д 001. 02. 01 при Институте питания АМН СССР (109240, Москва, Устьинский проезд, д. 2/14).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питания АМН СССР.

Автореферат разослан „_"____198 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

в. м. жминченко

БВЩЕШ4Е

Актуальность проблемы. Регуляция метаболических процессов суцествдяется главным образом при участий нейроэндокриннсй си-темы. Взаимодействие ее с тимиколимфатической системой под онтролэм гипоталамуса - основа гомеостаза. Нарушение этого заимодейстЕЯЯ служит причиной многих патологических процессов болезней {АЛ.Чернух, С.ВЛЛагаева, 1984; 2аЬг1:з ей а1., 1984). имус является центральны,? органом иммунитета и эндокринной же-езсй, продуцирующей пептидные гормоны, способствующие ииф$ерен-ировко лимфоцитов и превращению их в иммунокомпетентные клетки, то позволило некоторым авторам отнести тимус к органам вкутрен-ей секреции. Однако изучалось в основном влияние его на Т-звено кмунитета.

В последние десятилетия активизировались исследования по частию тимуса в обмене веществ и энергии в различных органах и астемах организма (И.С.Пояосенников и соавт. ,1985,1987; 1.Й.Ма-утов, 1985, 1987,1989; Б.Ю.Сальник и соавт.,1987; А.И.Николаев соавт.,1988,1939). Установлены взаимосвязь тимуса с другими рганами внутренней секреции, влияние его гормонов на отдельные оказатела обмена нуклеиновых кислот, белков, лйпидое, углеводов энергии. Результаты этих исследований, проведенных на различ-ых видах животных различных возрастных групп, порой противорзчя-а, а отдельные показателя обмена веществ, изученные на сыворот-е крови и гомогенатах органов, без ишунокоррекции гормонами та-уса не лают целостного представления о роли этого органа в обме-з веществ и энергии. Особый интерес представляют исследования этаболическях процессов в органах и клетках иммунной системы,яе-зни и ее субклеточных структурах,так как дефицит гормонов тимуса первую очередь обусловливает перестройку их структурно-с&укхцио-эльного состояния.

При недостаточности горлонов тимуса развиваются вторичные «мунодефщпты (ЗК). Они могут возникнуть при инвазии, вирусных бактериальных инфекциях, любом хроническом процессе, применении ямукоДбпрессантов, антибиотиков, гормонов, при голодании,стрес-эвых ситуациях, хирургических операциях, аутоиммунных болезнях» результата наркоза и т.п. ВИ проявляются в поражении как Т-, ак ч В-састемн иммунитета, а нередко бывают комбинированными. .й.3ильман я соавт.(1978), В.Й.Дидыаан (1981) показали, что в сковч на рушений иммунного ответа лежат расстройства метаболи-

ческзх процессов. По их мнению, метаболические сдвиги обладают шшунодепрессивным действием - формируют метаболическую иммуно-депрессшо. Важное значение и::еет изучение метаболизма и функций иммунокомпетентных клеток, которые в условиях дефицита гормонов тимуса нарушаются в первую очередь. Одним яз методов распознавания изменений молекулярных механизмов функционирования иммуноком петентнкх клеток является изучение ФЛ и их жирнокислотного состава, гликопротеинов клеточной поверхности, входящих в антигенный, рецепторный и структурный состав мембран. Липиды мембран,в том числе минорные компоненты, обрвзуя единую систему с белками и углеводами, участвуют в регуляции активности мембранных ферментов, транспорте разнообразных веществ, определяют отзывчивост; клеток к гормонам, функционирование лимфоцитов (В.Б.Спиричев.И.Я Конь, 1978; Е.Б.Бурлакова, 1982; Л.А.Болдырев, В.Д.Прокопьева, 1985; Goppelt et al. ,1985; Trail et al., I98S). Показано,что одним из ранних проявлений при нарушении функции кейроэндокрин-ной систем организма являются внутриклеточные адаптивные сдвиги в метаболизме углеводов.

В метаболизме клетки важную роль играют окислительные системы (митохондрии, микросомы), локализованные в биомембранах (Ю.Л.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972; В.П.Скулачев, 1974; В.В.Ляхо вич, И.Б.Цырлов, 1981; Н.Я.Головенко и соавт.,1984). Среди клето чных органелл особое внимание уделяют лизосомам, осуществляющим гидролиз собственных белков и других макромолекул, очищающих внутреннюю среду от чужеродных соединений, участвующих в секреторных, адаптационных и транспортных процессах, а также в развитии патологических процессов (А.А.Покровский, В.А.Тутельяк,

Сокращения: ЛО - ложная операция, ТЭ - тимэктомия, Тз - тшозин, ВИ - вторичные иммунодефицита, ФЯ - фосфолипиды, ФХ - фосфатидил холин, ФЭ - фосфэтидилэтаноламин, ФИ - фосфэтидилинозит, СФ -сфингомиелин, ФС - фосфатидилсерин, КЛ - кардиолапин, ФК - фосфа тидовая кислота, ЛФХ - лизофосфатидилхолин, ПОЛ- перекидное окисление лилидов, ДЦГ - лактатдегидрогеназа, ВДГ - малатдегидроге-наза, Г-б-Фаза -глюкозо-6-фосфатаза, Г-6-ФДГ- глюкозо-о-фссфат-дегидрогеназа, ХГГ - хронический гелиотринный гепатит, ВДА - малоновый диальдегид, РОК- розеткообразование, АОК- антителообра-зувдие клетки, ХЗП- хронические заболевания печени, АЛТ - аланин

аминотрансфераза.АСТ- аспартатаминстрансферазз.КФ-каслая фосфата:

976; Л.Н.Панин, Н.Н-Маянская,1237; С.Н.Лызлова.1987; Баааге! ■ь а1.1 1981). Эти же клеточные органеллн (микросомы и лизосомы) беспечивают взаимосвязь системы метаболизма ксенобиотиков с ся-,темой иммунитета (И.Е.Ковалеев, О.Ю.Полевая, 1985; Л.Е.Панин,Н. ,Маянская,1Э87). В связи с этим значительный интерес представляет комплексное исследование роли тимуса в функционировании тих клеточных органелл (митохондрий, микросомы, лизосомы).особенно в иммунокомпетентных клетках. Подобные исследования не про-юаились. Таким образом, актуальность проблемы обусловлена необ-юдимостью изучения трех тесно взаимосвязанных пробгэм: роли тиму-¡а э метаболических процессах, биохимических механизмов развития К и изыскания путей регуляции метаболических и иммунологических ¡арушений при Ей. Данная проблема неразрывно связана не только с теоретической, но и с практической медициной. Без ее решения тру-шо раскрыть механизмы возникновения БИ при многих заболеваниях, зазработать методы их ранней диагностики, провести целенаправлен-;ую коррекции и профилактику.

Иэль работы. Состояла в изучении роли тимуса в регуляции метаболизма в органах иммунной системы, лимфоцитах, печени и ее зубклеточных органеллах в норме и при развитии ЗИ. В холе исследования решались три основные группы задач: изучение роли тимуса а метаболических процессах, метаболических нарушений - в механизме развития ВИ, а такие разработка способов коррекции выявленных зэруаений или изменении гормонами тимуса и алиментарными факторами. При этом необходимо было выяснить роль тимуса в отдельных Зиозамичеоких процессах (обмен лишдоз, углеводов, белков, энергии, метаболиззцаи ксенобиотиков).

Кошлеке исследований включал следующие конкретные задачи:

- изучить изменения <?Л я нирнокислотного состава, содержания холестерина, обеих лппидов, гликопротеинов, циклических нук-леотадов, интенсивности неферментативного и ферментативного ПОЛ з органах (селезенка, костный мозг) и клетках иммунной системы, субклеточных органеллах печени (митохондрии, микросомы, лизосомы) з динамике развития ЗИ вызванного ТЭ, и на фоне коррекции нарушений гормоном тимуса (Тз) и алиментарными факторами;

- изучить на моделях ЗИ, вызванного ТЗ в разных возрастных группах животных (молодые, взрослые, старые), состояние окислительных систем (ферментная система макроссиальннх цитохромов Г-'-4Ь0, нитохондрпальная система биологического окисления) з пз-

чени и иммунокомпетентных клетках и влияние на них Тз;

- провести сравнительное исследование активности ключевых ферментоЕ гликолиза, глюконес'енеза и центозофосфатного цикла в иммунекомпетентных клетках, печени и ее субклеточных органеллах в динамике развития ВИ-, вызванного ТЭ, и на фоне коррекции нарушений Тз, витаминами А и Е;

- исследоЕать активность кислых гилролаз а лизосомальных фракциях печени и иммукокомпетентных клетках в динамике развития ВИ и влияние на них Тз;

- исследовать сочетанкое влияние Тз и алиментарных факторов на метаболические сдвиги в органах и клетках иммунной системы, печени и ее субклеточных органеллах е динамике развития ВИ, вызванного ТЭ. На основании этих исследований разработать способ коррекции метаболических нарушений при Ш гормонами тимуса и алиментарными факторами;

- исследовать влияние гормональной недостаточности тимуса на метаболические процессы в печени, ее субклеточных структурах и имыунекомпетентных клетках при ХГГ, сопоставить полученные результаты с аналогичны!,¡и показателями в иммунокемпетентных клетках больных ХЗП с целью подтверждения однотипности протекания метаболических нарушений при иммунодефицита* различного генеза, определения их диагностической к прогностической ценности, разработки критериев показания использования гормонов тимуса и алиментарных факторов, оценки их эффективности при ВИ в клинике;

- выяснить причинно-следственные связи между изменениями показателей -биохимических и иммунологических процессов в динамике развития ВИ в процессе их коррекции гормонами тимуса и алиментарными факторами;

- усовершенствовать метод получения высокоактивного иммуно-модулятора из тимуса различных животных, с целью расширения сырьевой базы, изучить его биологическую активность, физико-хиыи-ческие свойства.

Научная новизна. Впервые исследованы метаболические нарушения в органах и клетках иммунной системы, субклеточных структурах печени ниеотных в динамике развития ВИ, вызванного ТЭ, пути их регуляции гормонами тимуса и алиментарными факторами. Впервые применен системный комплексный подход к изучению биохимических механизмов развития ВИ. На основании новых данных о характере изменений метаболических прсцессоЕ в органах и клетках иммунной си-

■емн, субклеточных структурах печени в сравнения с нарушениями :оличествеяного и функционального состояния Т- и В-лимфоцитов ■становлены причинно-следственные связи между ними, определены [екоторые принципы биохимических механизмов развития Ш. Впервые 'становлена последовательность нарушения метаболических процес-юв в динамике развития ВИ. Показано, что наиболее ранние изменения в условиях дефп'ута гормонов тимуса происходят в структуре I функции мембран имыунокомпзтенткых клеток и органов, субкле-:очных органелл печеки (митохондрия, микросомы): снижается со-

ржа кие фракций ФХ, <Ш, повышается содержание КЛ, ОС, СФ и ЛФХ, штенсивность яеферментативного и ферментативного ПОЛ. Вслед за )тим (или одновременно) снижаются гликолиз, глюконеогенез, проис-содит компенсаторно-яриспособительноз усиление пентозофосфатного хути и активности кислых гидролэз лизосомы, а на более поздних этапах снижается функции окислительных систем эндоплазмзтическо-го ретихулума и митохондрий.

Установлено, что по мере нарастания гормональной недостато-шости тимуса (через I9C и 370 суток после ТЭ) усиливается шра-кенность метаболических сдвигов (особенно в органах и клетках системы ишлунитета) и нарушений функции Т-лимфоцитов, что свидетельствует об участий тимуса з регуляции не только иммунного ответа, но и метаболических процессов.

Ношми являются данные, яолученныэ в ходе исследования зако-¡гсмерностей деградации липидкого компонента мембран, органов и клеток иммунной системы и субклеточных структур печени при Щ. Среди ФЛ большим изменениям подвержены фракции ФХ, ФЭ - основные структурные компоненты мембран. Их содержание снижается с образованием продуктов гидролиза - ЛФХ, с повышением уровня ФК, КЛ, СФ, ФС и активности фосфолипазы А2. При этом перераспре деление ФЛ состава органов и клеток иммунной системы, субклеточных структур печени сопровождается увеличением интенсивности нефер-ментатавного и ферментативного ПОЛ. Впервые показано, что изменение ФЛ состаэа и активация неферментативного и ферментативного ПОЛ а лимфоцитах, митохондриях и микросомах печени у ТЭ животных сопровождается снижением активности мембраносвязанных ■ферментов.

Впервые исследован жирнокислотный состав мембранных ФЛ лимфоцитов, селезенка, костного мозга. При этом установлено, что степень изменения их профиля (уменьшение количества С20.4, повы-

шение - С16;0, Сд-8;0) коррелирует с нарушением ФЛ состава (снижение ФХ, ФЭ, возрастание ЛФХ) и повышением интенсивности ферментативного и неферментатив.:ого ПОЛ, активности фосфолипэзы До. Выявлена прямая корреляционная зависимость мекду снижением содержания фракций Ш и Т-лимфоцитов, свидетельствующая о вакной роли этого ФЛ в функционировании иммунокомпетентных клеток.

Существенное место в механизмах развития З'Л в условиях гормональной недостаточности тимуса занимают изменения интенсивности гликолизаглюконеогенеза, пентозофосфаткого цикла в лимфовд-тах и печени. В механизмах угнетения гликолиза и глюконеогенеза большое значение придается уменьшению количества осноекых субстратов для этих процессов (глюкозы, молочной и пировиноградной кислоты) и угнетению синтетических процессов у ТЭ тавотных. В этих условиях усиление пентозофосфаткого цикла, вероятно, носит компенсаторный характер и направлено на восстановление пластических и синтетических процессов.

Впервые на экспериментальных моделях ВИ и ХЗД обнаружено снижение функционального состояния лизосом в печени и иммунокомпетентных клетках. Установлена обратная корреляционная связь между снижением активности кислых гидролаз лизосом и повышением концентрации циркулирующих иммунных комплексов, свидетельствующая о нарушениях уникальных механизмов эндо-, экзо- а фагоцитоза в РЭС и соответственно иммунохимическох'о гомеостаза в условиях дефицита гормонов тимуса. Новыми являются данные об угнетении мивросомальной системы окисления и процессов дегсксика-цни, нарушении энергетического обмена е печени и лимфоцитах у ТЭ животных, зависящих от возраста, и восстановлегап? этих нарушений под влиянием Тз.

Показано, что необходимым условием в механизме реализации эффекта гормонов тимуса на метаболические процессы является структурно-динамические и функциональное состояние биомеыбран, а мембранотропные действия гормонов тимуса тесно связаны с их влиянием на метаболизм мембранных липидов и белков.

На основании анализа данных о влиянии ТЭ и Тз на показатели мзтаболизма липидов, белков, углеводов, энергии, метаболиза-цш! ксенобиотиков в иммунокомпетентных органах и клетках, субклеточных органеллах печени доказана роль тимуса в регуляции метаболизма.

Результаты исследований способствуют более глубокому по-

ишанив биохимических механизмов возникновения ВИ, расширяют хрецставления о роли тимуса и алиментарных факторов в этих процессах.

Научно-практическая значимость. Полученные результаты имеют теоретическое и практическое значение. Работа представляет собой новое перспективное научное направление в изучении гормональной регуляции молекулярных и метаболических нарушений при Вй. Сформулирована концепция о роли метаболических нарушений в органах и клетках иммунной системы и в печени в патогенезе Ж. Результаты исследований значительно расширяют и углубляют представления о зависимости механизмов развития ВИ от изменений ли-падного состава мембран, состояния окислительных систем эндоплазмам чоского ретикудума и митохондрий, лизосомального аппарата клетки, о роли гормоноа тимуса з этих процессах.

Полученные данные могут служить теоретическим обоснованием использования в клинике гормонов тимуса и алиментарных факторов в регуляции метаболических и иммунологических нарушений при первичных а многочисленных ВИ. Разработан и испытан способ коррекции метаболических и иммунологических изменений при ВИ гормонами тпмуса и алиментарными факторами.

Установленные изменения функционально-метаболической активности лимфоцитов, зависящие от гормональной недостаточности тимуса и тяжести клинического течения ХЗП, их высокая информативность я простота методов исследования могут служить основой для сознания новых диагностических и прогностических тестов, а такжз для оценки эффективности икмуномодуляруищей терапии при Вй. Результаты настоящей работы являются предпосылкой для создания высокоактивных и.?муномодуляторов на основе гормонов тимуса з комплекса с адвчэнтазкыдги факторами. Разработан способ получения высокоактивного гуморального фактора из тимуса телят и ягнят, изучены а сравнительном аспекте их физико-химические свойства а характер биологического действия. Активность этого препарата по ряду параметров выше существующих, способ менее громоздкий, не требует дорогостоящих дефицитных реактивен, а следовательно и более дешевый.

По материалам диссертации получена 4 удостоверения на рационализаторское предложение. Подготовлены методические рекомендации '"Дэтоеы оценка й коррекции метаболической и функциональной активности лимфоцитов при ЗИ", широко используеше в

системе Министерства здравоохранения УзССР. Способы получения "2а. -ГФТ" ьнедрекы в Ташкент скол? кнста туте вакцин и сывороток, Каракалпакском НИИ клинической и экспериментальной медицины (г. Нукус). По результатам работы изданы монография и методическое учебное пособие по биохимии и иммунобиологии тимуса, материалы которых используются в лекционном курсе и практических занятиях ряда кафедр Среднеазиатского медицинского педиатрического института.

На защиту выносятся следующие предлоаения:

1. Участие гормонов тимуса в регуляции метаболических процессов в органах и клетках иммунной системы, печени и ее субклеточных структурах. Воздействие тимуса затрагивает все стороны метаболизма в клетках, но наиболее глубоким изменениям подвергаются яммунокомпетентные каемся.

2. Метаболические нарушения в органах и клетках иммунной системы, печени и ее субклеточных структурах, возникающие при недостаточности гормонов тимуса, играют важную роль в биохимическом шханизые развития ВИ, Изменения метаболизма в клетках у ТЭ аивотных предшествуют нарушениям иммунного статуса. В ракнле сроки после ТЭ вслед за изменением структурно-динамического и функционального состояния биомембран (состав ФЛ, скорость ПОЛ, содернание гликопротеинов) снижается гликолиз, глюконеогенез

и происходит компенсаторно-приспособительное усиление пенгозо-фосфатного дуги, а на более поздних этапах - снижение функции окислительных систем микросом и митохондрий, катаболической и иммунной функций лиаосоы, что является основными факторами, приводящими к развитию ВИ.

3. Применение гормонов тимуса способствует восстановлению метаболических нарушений при ВИ. Включение дополнительного рациона , богатого легко усваемые белками, жирами, углеводами,содержащего различные витамины и макроэлементы, усиливает метаболический и иммуностимулирующий эффект гормонов тимуса.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Региональной сессии научного совета по неорганической химии АН СССР, по священной проблемам бионеоргзническ ой химии (х.Фрунзе, 1980); Республиканской научной конференции, посвященной актуальным вопросам краевой аллергологии (Тзшкенг,1985); Всесоюзном симпозиуме "Иммунодефицита и аллергия" (НоскЕа, 1986); XIX Всесоюзна? сюзде терапевтов (Тапкент.1987); Л Зое-

союзном съезде геронтологов и гериатров (Тбилиси, 1988);кон-ференцаи "Иммунный гомеостаз в норме я патологии" (Фрунзе,1989) 1У Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989); Рес.публи -канской конференции "Иммунодефицита и ньд -система" (Ташкент, 1989); научно-практической конференции ученых Среднеазиатского медицинского педиатрического института (Ташкент,1988); менка-фэдпалышх научных семинарах "Молекулярно-мэтаболические механизмы иммуногенеза и пути их регулянии"(Ташкент, 1983,1937,1938) Диссертация апробирована на ме'якафедральнсм сешнаре Среднеазиатского '«'едяцЕНСлого педиатрического института (IS8C ) и научной конференции отдела биохимии и физиология Института питания Ж СССР (1989).

.Публикации. Основные положения диссертации опубликована в 24 печатных работах, в том числе I монографии.

Структура 'л объем диссертации. Диссертационная работа представляет собой рукопись е 3 2с" е., состоят из введения, обзора литературы, списания методов и материалов исследования,изложения подученных результатов, включающего 3 основных раздела, заключения и выеодов. Работа иллюстрирована рисунками, содержит ó таблицы. Использованная литература представлена /¿"7е" работами на русском и на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. Материал и методы исследования.

Основная часть исследований выполнена на взрослых крысах-самцах массой 120-150 г. Ряд серий экспериментов проводили на молодых и старых крысэх-сзмцах, а также морских свинках. Модель иммунного дефицита воспроизводили ТЗ под легким эфирным наркозом. Полноту ТЭ оценивали макроскопически в момент забоя животных, а также косвенно путем исследования лейкоцитарной формулы з данэмике после операции. Развитие иммунодефицитного состояния подтверждалось определением количества субпопуляцяи лимфоцитов э периферической креза, селезенке, лимфоузлах (Scaáeker et ai., 1973) и числа АОХ э селезенке (Jeme , Ilordxu , 1963). Хронический токсический гепатит на фоне гормональной недостаточности тимуса вызывали введением ТЗ крысам через 6 мес после операции алкалоида гелиотрика по схеме Н.Х.Лбдудлаева (1968).Нейтральный раствор алкалоида вводили подкоето в убивающих дозах

через день в течение 25 суток (в 1-ю неделю по 10 мг на 100 г масси тела, ¿-о 2-я - по 7,5, в 3-ю - по 5). Для коррекции м?-таболичзсккх и пиаднологических сдвигов использован Тв пятой фракций, получвнцнй ГЮ штодаке Goldstein ez al. (1975), И " '¿а- ~ТШ" - no разработанной нами методика. В рядз серий экспериментов б сочетают с Тз использован дополнительный рацион, содержащий белков в 2,0 раз больие, чем в контроле, киров - в 2.,:? , yr.vjisonob - е , витаминов (A,Bj, В2, Bg, ЕР,С) к

макроэлементов - и 1..5-2,о»э такие витамины А (ретинол ацетат) в Е (5yi масляный раствор такоферола ацетата). Через 1,2,3,6- к 12 t.:ec поело операции ТЭ сивотные в течение 10 mot пэйучаям Тз (внутримыючко - 0,5 мкг/r ыассц), комбинации Тз с дополнительным рационом и витаминами А к Е в суточной дозе соответственно ЗСЗОО ME и 0,5 иг/кг (перораяьно). Биохимические иссяздовани;: проводили на гомогзнатах печ-эни и ее субклеточных структурах (гштохондрий, микросош, дпзосоыы), сыворотке а лимфоцитах периферической. крози» лгс.:фо££них клетках селезенки и костного мозга па 40t70,I03t ISO а 370-е сутки после ТЭ.

Шгохоидрия идаляли методом дифференциального центрифугирования. Микросомнуа фракцию печени получали методом дифференциального центрифугирования на центрифуге VAC-6QI (И.М.Кару-зша, А.И.АрчакоЕ, IS77). .Шафцзтн периферической кронв шда-лялп на градиенте фпколл-взрографин (Л.Б.Хейфец, В.Д.Абалакпп( 1973). Т-лимфоциты из парифсрической. крови человека выделяли по методике, описанной е работе А.С.Павяюка и соавт. (1982), A.LI.Co-чнева и соазт.(1978) с пекоторшд* модификациями. Суспензп;: глоток костного мозга и селейтотоглхя по общепринятому методу iP. В.Петров, Ю.М.ЗарацкаяДЗ&б). &рзкдаз> лизосой из гокогензч-а печени выделяли дифференциальным езктрпфугированием в грэлиекю плотности сахарозц (А.И.Арчакоз х; соавт. ,1971). Лишни из гомоге-ната органов и субклеточна фралтей, костного мозга г дк«$о:га-тов периферической крови экстрагировали по Солгщг (1257).- Созтеа Ш анализировали ызтоаои хрг.'.'гтогрзфии » колячог--

вешо определяла по фосфор.?. Сгдакагель к кгисгишш пригож/ жвал;, по способу, одисаккссу' З'Л^оышши (I£f.'*i)f СосерганЕЗ кь; по реакции с ревой к.'.елгюй Ьлаш-жы:^

А.П.Арчакоь, 1972). с со-.^зз сл кг>>-

годигн по методу В..S. ' Г-.-". " f JS'/J > ь^

3 иагосадочной проводя гепатоцитоа определяли активность

^-гслеталазы ашдашрзиа (П.Псков, 1973), в микросомальной фра-'сц11п - актлг-нп-.ть гилсоксцлазы анилина (А.П.Арчоков п соэет. , 1575) u ЕА-1 >Н-датохрогл-с-редуктази (fcastcrn et al., ISS7), со-

ярагаяяе 1:".;тохг.омов Г-450 я Зд (Озшгг , st-so , I9S4), в лзкфо-утг- - <5о!Шй'-энгйароксялазы (central et -.a. , 1976). Конпент-:ацт: ; xoz •cveprsna оп^едядз по Е.Г.Колб, З.С.Кг«ншнпкову(1282): .•Ki!i2~ocr~ оосислипас.м А - по С.А.Тугидину ;j А.И.Садузиья (1975), '!пект! лг.;:саро?.я!доз определяли методом дискового электрофореза • но г.-. ~э (Е.Я.Магрзчева, 1373) с пос«одувдей яен-

елтг. 'отрло/ фр.:"л:лй .гзоппотеидсв на прибора фцкз "Копл-Пейс-1ен?" (ИГ;-

• .пра.:."ШНйо акт;;г:юсс 5 зияк^гракссгерсги (ACT, АЕГ) проводи-,п! i-г :,?ето:;; Р.гЛтаанс-/рог :<еля (1357), ддг - по Sevela , Tova-••ek ' гсп;.) ( _ cwcla , ¿svar-*k (IrcO), Р-о-0азы - по .'.агр:' . (IS5:'r.- , Г-5-ТДГ - ПО ХсРвЬ.тг , Kerecier

.I2CC' . ЛХТЗВЕ''СТЬ Кл, зк-тоы ДТ'азп, PHKcv:: и -.сг.теясьтз Д лзу-та.т? :о ?•' -лашаг.; «е-.-.» inrauon» IiS3; Л.п.Мастзьслс-ч,

О.М. ' «лс:':'-.-зг ;?£0; 1280: Boctsas&y ДЭЗЗ; дпссп,

С922). Д.-:: .гное л- к::-\ К*\ --Ч44"-» п .'С4", ¡тз!* - ¿.-'.тивкруе-•!0Й .'.ч Зас. .'зу-з-тп ts-i xxn^iofe , 2сз ClSi>o), хлгохровок-

слдат' - ;;о сет г!„ {I::с2), Ос док - по io-чгу «fc al. (IS5I). Содос.лнлч :-ЛТс:.л.яа л опрт'.одядп по коток:::'? fiinoi (1958). Ояв-глвгздьвсг! Лое.хрллллзашп з иллохслдриял азулалп полярографаче-лал; лотолол А.Л..'«нгкещс<> (1973). Получение яле-

:сл :: :-гл?т:лп::;; л:шлл:л з срсползли лллЬолллшс клеток селезенки ; л:.:.:парт^вргже:«?. ооутстс,г1.1И ггстодом, сшсзя-."::.; ГЛ.Лслслйлхо» 2,. л Лог с::-л! (ЛСЗЗ). Соз^разнио цАГЛФ л в

."¿v ллл-.тг:; ;д ллоорз рактязоэ слрлы

Лл;?ллл} ■ : л: лл'лл.л- - -"л лолсчьгсл 5 i ^сагт^злостп

- ■'."-•■■j "лрслллллл . лал лллгрл.-ос■.:e,ror.o,j (В.Г. .-'Ыг".-'-.', л'. "} ,;:;г.:гясс-:ь - хешс25гу

^ire.-;., ,1567), кс;:ллолсл - по П.

"•"•-i" З.й.^гко- {1С88>, р^скнго торадойЭЕЯЯ шграцкя .:"■:,'V-.:i:ro-j - r:o , наьог:; (I3G9), Псследогания вноэшя-

'-з "i'-TK ЛР кл'.лпчосло.м катзсзалз, полученном от 71 больного

.чататш, цгррозсм сечена я хроначесотл холецистн-CfaTacrimcRys обработку реагльтатов нроиззодяли, исполь- -

зуя

-критерий Сткздента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕЩОВЛНЙ К ИХ ОЕСУЩЗЗНйЕ

2. Метаболические нарушения в динамике развития вторичного иммунодефицита, их регуляция гормонами тимуса в сочетании с алиментарными факторами

2.1. Участие тимуса в регуляции структурно-функционального состояния липидов мембран

Влияние тимуса на липидные компоненты и фосйолипалкый состав органов и клеток иммунной системы и субклеточных органелл печени. У ТЗ животных yse через 40 дней после операции содержание общих липидов в сыворотке крови превышало контроль на 15,5$, общих фосфояипидов - на 37,1, общего холестерина - на 7,6, уЗ -лппопротеидов - на 13,8, активность фосфолипазы Ag - на 32,1. Такая картина наблюдалась также на 70 и 100-е сутки. Максимальные отклонения этих показателей отмечены через 190 и 370 суток доело удаления тимуса. Исследования активности фосфолипазы Аз в митохондриях печени и лимфоцитах периферической крови показали, что уровень ее в разине сроки после удаления ТЗ был значительно повышенным (рис.1). Максимума он достигал на ISQ-e сутки.

----- - Рис.1. Активность фосфолипазы Ag

Е митохондриях печени (А) и лимфоцитах (Б) периферической крови крыс (в % от контроля).

Здесь и на остальных рисунках белые столбики - ТЭ крысы, заштрихованные - ТЭ, получавшие Тз.

Ъ.

"ЗГ

- я "1 ГЬ

\ Й 1

Во вое сроки эксперимента по СЛ составу печени и селезенки ТЭ крысы заметно отличались от контрольных. На 4.0-е сутки в митохондриях печени ТЭ крас достоверно пог.ксилось соззргаш;е КЯ+Фл (ка 32,,3%), в селезенке егг-итась еел^тзаизе Г.: 28,н повысься урокнь КГ, , ГС ( Г. с;.«лом5ь«лсг уьэ тэрэз 40

дней после ТЭ отмечались изменения в соотношениях ФЛ фракций. Достоверных изменений в иммунном статусе (количество п функции Т-лкмфоцитов) кивотных в этот срок не выявлено. Через 190 суток после ТЭ в митохондриях и микросомах печени уровень ФХ был достоверно ниже контроля (рис.2 и 3). Содержание остальных фракций повышалось как в целиной печени, так и в ее органоллах, особенно ФС и ЛФХ. При этом более значительные отклонения от контроля уровня ФХ прослеживались в митохондриях печени, ЛФХ - в микрссомах. С этот срок в селезенке, как и в печени, уменьшалось количество ФХ и ОК (соответственно на 18,3 и 26,4%) с одновременным повышением содержания ФС, КЛ+ФК и ЛФХ. Максимально повышенным по сравнению с контролем оказался уровень ФС и ЛФХ. Аналогичные, но более значительные отклонения в ФЛ составе печени я селезенки обнаружены и через 370 суток После ТЗ (табл.1), В костном мозге я лимфоцитах периферической крови через ISO дней после ТЭ такяе наблюдалось снижение содержания ФХ и повышение - СФ и ЛФХ. (рис.').

4 Гй ¡й ! ¡8 ¡й

й Й

1 ¡ё

Ч й it

-»д ■fr-

ЖЖЖЖ

mj!

кл

11I Щ ¡1 Ш ¡1

iJAAsLAxLjJLliiAR

П-

■ffe

ШАЛШ

-fb

^ га га

>ис.2. Изменение содержания ФЛ Рис.3. Изменение содержания ФЛ зракций з митохондриях печени фракций в микросоках (А) .костном :рыс через 40 (А), 190(Б) и мозге (5) и лимфоцитах перифэри-¡70 (В) дней после ТЭ. ческой крови (3) крыс через 190

дней после ТЭ.

:яедователыю, удаление вилочковой яедезы нарушает соотношение 51 состава в мембранах клеток не только центральных и периферя-

Таблица I

Влияние Тз на ®Л состав печени и селззенкн (в % от общего количества ЗШ) ТЭ крис

йосфо-!_

Л!11Гг1ПН!

Печень

ЛО

С© 7,2+0,41

45,0+0,80 2-С 4,2+0,53 ®И 6,2+0,68 ЙЭ 27,3+1,51 Ю1 6,1+0,76 1,6+0.20 я^; М+0Д4

СР 7.4+0,54

<•>/. 45,Б+.Т ,08 4,4+0,43

5,9+0,40

УЗ 26,3+0,66

6,6+0,45

1,8+0,23

2,0+0,19

КЛ ЙК

ЯШ

) ТЭ

! ТЭ+Тз

Селезенка

ЛО

10,65+0,54ххк 39,6+1,35х* 7,2+0,58хх 4,1+0,42х* 22,6+1.42 9,8+0,77х"

3,15+0, ЭХ3*"

11,6+0,66^ 35 6+1 32ххх 8,2+1),57ххх

з.о+о.го*3^

22,0+0,90х II,0+0,бЭ*®1 3,7+0,30®«

4,7+р,44ххх

190-е 8,2+0,46 43,3+1,09

6,0^5,51х

5,2+0,44 25,2+0,90 7,5+0,81 2,2+0,32 2,4+0,25к 370-е

8,8+0,57 „ 40,7+1,73'^ 7,2+и,59хх 4,7+0,43 24,3+1,34 8,8+0,87 2,5+0,23 3,0+0.24х

сутки

11,5+0,75 42,3*1,22 7,7+0,72 5,3+0,45 23,1+0.75 6,7+0,54 2,2+0,15 с 1,2+0,16 сутки

10,6+0,70

42,9+1,43

7,6+0,55

5,7+0,40

22,4+1,33

6,6+0,59

2,6+0,25

I,6+0,24

ТЭ

11,9+0,77 35,4+1,05** 13,0+0, 3,9+0,26х 20,6+0,76х 8,8+0,87 3,7+0,27х* 2,7+0,31х

13,8+0,99-х 31,5Т1 19ххх 13,7+0,59*** 3,6+0, Збхх 19,4+1,27 9,4+0,55хх 4,3+0,41хх 4,1~0,46хх

! ТЭ+Тз

11,3+0,62 40,1+1,36 9,6+0,77 4,9+0,47 21,7+0,81 7,7+0.64 2,6+0,27 2,1+0,22х

12,5+0,97 37,4+1,10х 7,7+0,42 5,9+0,60 21,6+1,39 8,8+0,63х 3,3^0,26 2,8+0,29х*

Пргшо*-.тже: Здесь и в остальных таблпцях достоверность различий по сравнению с аналогичны?! паяегатзясм у ЛО жпотннх: :сПу-п пс ххп ..___

Г--<0,05,""р<:о.01 ***

Р^0,001.

- ID -

часких органов иммунной системы, но а яругах органов, в частности полони. Введение ТЗ нивотным 'Гз через 30 дней после операции нормализует изменения в соотношении ФЛ. Аналогичная положительная 1лтам:ла прослеживается я б более поздние с рога ТЭ (через roo s з?о о.-'ток). хстл Тз оказшггэ? нормализующий эффект, не во "со ' ;л7тллл.

' гл.т;"'"- ¡fiv*олап::пов п тиио^-пга___in vitro _на Е-гогтептоды

7нкл чпгзтг.сгнгс., лдазллтичоохой мембрзки, обзднениой ФЛ, в .ас rears "'ос; .'ояыг ": гпппдага. нарушается ( СЬзр с- .а. ,1983; •.:aoi".-. ot . • :з). Показало, что антивашя ишпество ре-■олтелоз ", яае.*ечнс,1 лсг-ллносл; осирязекз с возникновением $ос-;сзт::г:лпг-"лтог.ьког" отв-л.'-з (!2хг-с, 1981). В этой связи прадстав-лло леллллхллл ш- ■■vac лляенллъ, елазыглет ли -53 влияние на лксп.-/селл "\-рг:^::тс л Т-ллл латах. С :~эй солью лл исследо-зпг: -ля яга е оллзльлл: ФЛ (л!, лл, ФЭ, СФ, :-"Л) на содержание Т-лн/Мллтол (S-PC) п-. : -.фз-.пчзсксй кревп :ло_:ол:'х сзаноч **ерез I8C ллел лоол" '73. • отил :л1£,лл было усталсвллло, что ирх/баплл (6G лзн) суслл-лли лл.,фе;.л:'ол 70° ллсток/мл) различными фракциями л ;:Г0 кг.4 яппдпог" ?/ш) подвоет содер~а:ше Д-РОК в случае • лХ, о, СЗ, П сготаг.сявнно на 12,1, 7,5, 6,1, 9,1 а 6,5¡?. В то -л нго л л 1ллсе:-;о d ;-ультуру клеток смеси ОЛ фракций в указанных лопал упеличлллло количество S-FCK на 21,2%. Добавление з лу ль туру клеток сиксзсомешю смеси ФЛ фракций и Тз (50 мкг/мл) увеличивало количество Е-РОХ ло кореш. Повышение содержания Е-РСК, по-илллсл:/, ирозехончт аз слот возрастания числа "активных" -7-ллу$охгатоа, дриобротаах пол влиянием ФЛ л Тз специфические Б-рецептосы. Эозмонно, это связано с взаимодействием ФЛ с биомем-Зрапаыа по принципу слияния зли осЗмэна ягашлов (О.В.Добрына и со-звт.,1987) п индукцией Тэ экспрессии зрелых Т-лимфоцитов ( Wybron ot al,,1975).

Следовательно, изменение ФЛ состава в условиях дефицита гор-золси тл.'уса оказывает отрицательное влияние на функционирование •зэднекоукетентных клетсл.

Печекисное окисление липидов в биологических мембранах и

тдм.7са в механизмах его регуляции.

Достоверное изменение интансивности переокисленпя ФЛ в лимфоцитах периферической крови и митохондриях печени выявляется на :00-е сутки после ТЭ (рис.4). Максимума оно достигает на

190-е и 370-е сутки. Отмечено изменение интенсивности ПОЛ в микросомах печени (спонтанное окисление снижалось, аскорбатзависи-мое - повышалось.

Рис. 4. Содержание ВДА яри спои тан- Рлс.5. Conepzame Г.ЗДА при ном (I) и аскорбатзависимоы (П) ПОЛ НАДШ-зависимом ПОЛ микромитохондрий сечена (А) и лимфоцитов сом печени (А) и лимфоци-периферической крови (Б). I -ТЭ, 2- тов периферической крови

В Ш1фосомах печени и лимфоцитах периферической крови ТЭ крыс (190-е в 370-е сутки) мы одновременно исследовали интенсивность неферментативного и ферментативного ПОЛ. Так, в указанные сроки как в микросомах печени, так и в лимфоцитах отмечено увеличенное образование липилных перекисей в обеих системах пере-кисного окисления- Максимальное возрастание уровня МДА в лимфоцитах и микросомах печени зарегистрировано на 370-е сутки после ТЭ в ходе НАДФН-зависимого ПОЛ (рис.5).

Таким образом, изменение интенсивности переокисления мембранных ФЛ в процессе развития иммунодефицита у ТЭ животных согла-ласуется с результатами изучения спектра ФИ в органах и клетках иммунной системы, в митохондриях и микросомах печени (снЕЕение содеркания 5Х, ФЭ, ФИ, повышение - СФ, ФС в ЛОХ). При введении ТЗ животным Тз в ранние сроки ео всех образцах полностью восстанавливалась интенсивность ПОЛ, а в более поздние сроки наблюдалось положительное действие, способствушее его нормализации.

Следовательно, ТЭ усиливает процесс пер&окпсления ФЛ, что приводит к накоплен!® в организме токсических продуктов (ЛФХ,

¡70 № J 70 л*и

ТЭ + Тз

(Б)

- г? -

диеновых коныогатов и др.) и изменению структурных компонентов мембран клеток. Бее это монно расценивать как один из механизмов отрицател'ного действия на организм ТЭ и инволшки тимуса при многочисленных E1-I. Гормоны тимуса оказывают выраженное стабилизирующее действие на интенсивность переокисления не только в органах п клетках иммунной системы, но а в печени. Это, видимо, является одним из основных механизмов регуляции ФЛ состава мембран клеток.

Нпр^окисдотпый состав лимфоцитов, клеток костного мозга и сзяозйякз при различном уровне гормонов тимуса. П реки па ем ость мембран для субстратов и ионов, активность мембранных ферментов' :з внутриклеточные обменные процессы в значительной степени зависят от sji я пх ¡-ярнокпелотного состава (Yeage, IS78; Cullies е - al., I960)'. Продукты окисления циклооксигаяазногс л дмпоксиг-пгзного пути апагизоновой кислом оказывают мсаулз-ЛУКЕИ» дэйстгао на ¿тпвдвз дягс&оцитоэ ( Valcue ,1984; schulisz. 1235; -

Однако до цаетоягэго времени влияние гормонов тимуса на зарноязсэтгнЕй еостя.т: .wtoisrroa периферической крови, селезенки л костного мезга чз изучалось. Мы исследовали его через ISO дней поело ТЭ л на фоне введения Тз.

Яодгчеккнз результаты ноказалп, что на фоне снижения содержания арахидоновой (20:4) п лдяолэковой (20:3) кислот в лимфоцитах перпфзрячеокой крови возрастает уровень CT3.0,Clg.0 и стз;2* Изменения зярнокислотиого состава костного мозга 1э' крас аналогичны изменения:.!, отмеченным визе для лимфоцитов.2ир-иокпелоташ состав л::гфопшых клеток селезенка в отличие от лимфоцитов а клеток костного мозга подвергался незначительным изменение: заметнее снижена© содержания С20.д сопровождалось небольшим погш&агем уроэня ¿i4:C»'cIS:0' 2i8:Q-

Следовательно, ТЗ вызывает тара"&нныэ изменения в обмене лзпплов, видимо, во всех органах и системах, в т числе иммунной. Введшие гормонов тимуса нормализует этот процесс. Учитывая вззяуя соль липидов, особенно ФЛ мембран, в функционирования клеток» козю прелполоаить взаимосвязь изменений иммунного статуса ТЭ няеотных с нарушения!® показателей обмена липидов. Это подтверждается параллелизмом между восстановлением показателей иммунитета а обмена липидов ара введении ТЭ животным Тз.

2.2. Нарушение метаболизма углеводов при вторичных иммунодефицита* п их регуляция гормонами тимуса

Состояние углеводного обмена в иммунокомпетентных клетках у ТЭ животных, взаимосвязь их с другими метаболическими процессами и иммунитетом, особенно возможность регуляции указанных нарушений гормонам тимуса в литературе не освещены. В связи с этим мы изучали некоторые ферменты углеводного обмена в лимфоцитах периферической крови и печени (Г-5-Фазы, Г-6-ФДГ-, Л£Г, ЦЦГ) в условиях иммунного дефицита, вызванного удалением тимуса, и влияние на их активность Тз.

На 40-е сутки доело операции актяЕноегь ДЦГ и МДГ в лимфоцитах была соответственно на 33,5 и 27? пике, чем з контроле. Однако в следующие сроки (70-е сутки) изменения в активности ДДГ и ЦДГ оказались менее значительными (соответственно на 29,5 в 19,22 ниже). На 100-е сутки активность обоих ферментов приближалась к уровню контроля. Через ISO суток она снижалась почти в одинаково!! степени. Максимальное снижение активности указанных ферментоЕ в лимфоцитах периферической крови зарегистрировано на 370-е сутки послэ ТЭ.

ПротиЕсаояолннЯ результат получен щи язучэнии динамики активности Г-5-4ДГ s яньфадцгаг периферической крови. Через 40 дней после ТЭ активность этого фермента повышалась достоверно, но на 70-е и 100-е сутки она находилась практически э пределах контрольных велзчгл. На 120-е сука активность Г-6-ФДТ была на 39,7$ вше, чш в контроле, оставаясь на высоком уровне и через 370 суток- С 40-х по 130-е суткл активность Г-5-ФДГ в лимфоцп-тах изменялась болзе аш^здю» та в тканях печзня. К 370-м суткам она повышалась в одинаковой «еяэнв б яс£«цатах и тканях печени. Снижение активности Г-6-&агы 2 печени зарегистрировано с 100-х суток после ТЭ цри^ая с паеболышй сгопенв через ISO z 370 суток после операщш (соответственно на 33,2 и 48,5% нигг контроля). Введение ТЭ савоташ Тз в ракше сроки акспераасзка ( 40-е, 70-е п 100-е сутки) Еоргаяизовадо активности аадоае&сс фзг:л-знгов углеводного обмена как в гвыфеггггах, так и в печева. В Ооебз поздние сроки (190-е и 370-е суадО Ts хотя к способствовал восст22озле£го аксавносяп гзц'чаешх (-укэктов, но sss до-казателз зос еда заметке сплелась от контрольных.

Анализ полученных результатов показал, что недостаточность гормонов тимуса отрицательно влияет на метаболизм углеводов в лимфоцитах и гачеки. Обнаруженное нат снижение активности ДДГ я мдг свидетельствует о том, что н условиях иммунодефицита наряду с нарушенном созраганяя и дяффзренцаровки Т-яимфоцитов развивается нздостатсчность их энергетического потенциала. Возрастание Г-5-0ДГ указывает на функциональнее напряжение адаптивных и за-гзганих систем лимфоцитов. Усиление пентозофосфатного пути носит, перолтко, компенсаторный характер, направленный на восполнение нарушения: после удаления вилочковой нелезы пластических и синтетических процессов. Регуляция уровня указанных ферментов, по-гпшгону, обусловлена не только прямим вляяняем гормонов тимуса за лэтаболпс-м углеводов, ко и восстановлением взаимоотношения ти-тямуо-зшхскринныенелезы, в частности надпочечники, щитовидная я псзслэ луговая зелззы.

3.2. Веяние тимэктс.мн;: и тет,?озяна на некоторые показателя белнсгого обмена

?а?"В?2э етндрсуг истощения при нэояатальной ТЭ предполагает ~слнлкно2?лиэ у лиеотных глубоких нарушений в обмене бел-кол. Зюллнне глл'уса з это:,! об:.:онз изучено недостаточно. Мы вн-яез;л , что соллрлаклз общего белка в гомогенатах и митохондриях печеяз чс^зз ¿0 плзй лак после удаления тимуса, так я на фога взэденпя Тз илзло тлллеклию к поз»г:онст. Под влиянием Тз созер-

жззг ; 2 л лтзх : возрастало на 17,3$. Статастическг до-

ото г !орнсо сние-3! зяе :.' кцз нлрлцлл бэдка з лимфоцитах, мятохокдри-

ях : лллроеема:: ПЭ-Г5 ли сталоллено на 190-е я 370-е сутка зке-

лзр: лсонтл. ЗК£л' "телллое (на 33,-Й) с л:; 1зеияе его выявлено в лзл-

фо ц: :тах лерэз 3' - г ___ . и :ал я лол'? ТЗ,

лкт—лсслъ обе; ::: л: ллотрллсчзрлз з длнампне пс сле ТЗ зяа-

лл - ? лась. . Тзь па лС-э сутки активность АСТ снк?л{-

лл'л Г - ; :яласл лл <6,е.: Чероз 70 и 100 дней по-

~л;э "3 аллллкссть сбс-зх ^-рггнтоа щэлгпческа «зло отличалась от ¡яаггзля. слзлугллз огон; (КО-е и 370-е сутки) активность как '.."Г, так л Д5Г сгатлстоэскз заоздао снизалась. Зведекнэ Тз ТЭ глыл слособсгзуст коркаяззатая со к» разная беяка, активности хс:л 3 солзв поздЕяэ срока их содэсазняе не дсстага-

асэл. -тал оодзхзанла белка л субклеточных органадлах пече-

ни и лимфоцитах, а также активности аминотрансфераз в печени ТЗ крыс на фске иммунокоррекции Тз, по гоей вероятности, связано с усилением синтетических прсцессов: биосинтеза белка, нуклеиновых ж слот и АТ2> не только в печени, но и в органах и клетках иммунной системы.

Таким образом, нами установлено, что гормоны тимуса существенно влияют на метаболизм белков в организме.

2.4. Влияние тимуса на поверхностные гликопротеины ишунокам патентных клеток и субклеточных ор-ганеля печени

Гликопротеины играют ванную роль в процессах биологического развития и узнававзя. Изучение этих соединений, являющихся структурными компонентами антигенов и рецепторов Т- и В-лимфоцитов, иозволяет раскрыть тонкий молекулярный механизм их функционирования (В.А.Деревицкая и соазт., I9S3). В связи с этеы одна из наших задач заключалась в изучении влияния дефицита гормонов тимуса на содержание сиаловнзс кислот в сыворотке и лимфоцитах крови, митохондриях и.ыикросомах печени крыс.

Через 70 и 100 суток лосле ТЭ содержание опаловых кислот во всех исследуешх объектах изменялось почти одинаково (снизилось в 1,2-1,3 раза по сравнению с контролем). В отдаленные сроки а к концу эксперимента (ISO-e и 370-е сутки после ТЭ) уровень си-аловых кислот в микросоыах к митохондриях печени снизился соответственно на 29,2 и 40,2; 33,6 и 4.1,7?. 3 лимфоцитах периферической крови этот показатель постигал максимального снижения на 370-е сутки (47,156). Через 40,70 и 100 суток после ТЭ Тзиорыэ-лизует содержание сиаловых кислот в исследуемых объектах. В более отдаленные сроки (через IS0 и ^70 суток) Тз заметно повыпал содержание сиаловых кислот во всех исслеЕУеьш: объектах, но не до нормы. При тимусзавиашых иммунодефицитах наблюдаются значительные сдвиги в содержании гликопротеиноЕ в сыворотке и лимфоцитах периферической крови, в печени и ее субклеточных фракциях, а гормоны тимуса способствуют их нормализации.

Узнавание антигена рацепторамв Т-лимфоцитов осуществляется только при наличии глнкопротеинов аутологичной клеточной мембраны, а приобретение рецепторов Т-клетками происходит ео время их созревания в ишусе ( bianrich , I9S5). Эха точка зрения по-сдуглла предпосылкой для выяснения возмонищ; дзаиыосвязей ыег-ДУ сшженггм годег--ггдгидщротеиног в двг$сдв?£Х и Т-кле -

ток в периферической кроЕи ТЭ морских свинок. С этой целью мы проводили исследования через 190 пней после операции. Относительное содержание E-PGK (Т-днмфоцитоэ) в периферической крови ТЭ морских ъвииск снижалось на 47,15?. Введение Тз (50 мкг/r массы жйеотзого) ТЭ морским свинкам в течение 10 дней, помимо возрастания содержания 2-РОХ, повышало ссдеркание опаловых кислот в Т-лямфоцптах периферической крови на 41,35®

Рис.6. Изменение авидности "активных" Е-РОК после инкубации с Тз. Светлые столбики - содержание Е-РОК в контроле, заштрихованные - после инкубации Тз. По оса ординат - процент клеток, сбразузяхах соответст-еоено: I-кизкоазидные розетки; 2-сраднеавидкые; З-зысоноавидкые.

По:! шкубпгзп ;~мфоцитов периферической крови ТЗ морских евино:; с Тс(50 [,".сг/и:-г)обнаружено значительнее возрастают содержания вксокоаЕПднш: РОК среди "активных" Т-лимфоцитов (рис.о). Эти по кзвнгэв З.С.Кожезкикова с соаэт.(1Э85), ууьх-оя еь

п1. (1575), 0£?аз8ат усиление экспрессия маркеров зрелых Т-лш-¿*сщтгоз под ггизшж* гортопов тимуса. Следовательно, аефшит глзггоототеадаз хчйтс'шой поверхности, возникавший при отсутствии гормонального Еоздчйстзая тимуса яа.организм, является одной из основных причал развитая количественного дефицита и нарушения йуккязенаяъпой активности вггаунорегулзториых лимфоцктов при ВН.

2.5. Лггонпнпя энергзтичеексго обмена в печени и ■жфецзтах при пшукодефацитшис состояниях и цх коррекция тпыизиксм.

Сведения об участии тг::уса з энергетическом метаболизме немногочисленны, нередко фрагментарны и противоречивы. Особый интерес представляет выяснение участия тимуса в рзгудяцми энерге-тачасиого иетаболкзиа э органах а кязтках кшунноЁ системы и сопоставление их с биоэнергетическими процессами в печени. Исслз-логаняя а от с« плане няаз проведены яа ТЭ красах-самцах трех во-

0/0

•fl

; г з

зрастных групп: молодых (4-5 мес), половозрелых (6-7 мес) и старых (24-26 нес;. Контрольные группы составляли ЛО крысы соответствующего возраста. Через 6 мс I после удаления тимуса животным опытной группы в течение 10 дней вводили Тз внутримышечно в лозе 0,5 мкг/г массы, а контрольным - 0,65$ раствор хлорида натрия. Исследования показателей энергетического обмена проводили на 190-е сутки после ТЭ.

Выявлено, что у ТЭ крыс в половозрелом возрасте снижается скорость потребления кислорода митохондриями печени в метаболических состояниях 3 и 4, уровень дыхательного контроля и коэффициент АДР:0. Скорость разобщенного дыхания также снижается. Следовательно, дефицит гормонов тимуса у взрослых крыс угнетает процессы окислительного фосфорилирования и снижает скорость переноса электронов по дыхательной цепи. У ТЭ старых кифотных обнаружено повышение скорости потребления кислорода митохондриями ге-патоцитов в активном состоянии, усиливающее стимулирующее действие ДДФ. Прослеживается тенденция к усилению дыхания в отрегулированном состоянии, что указывает на рыхлосопряженнссть процессов окисления к фосфоридарования. Подтверждением служит значительное снижение скорости потребления кислорода в разобщенном состоянии и резервного дыхательного контроля. Для сопоставления изменений энергетического обмена в печени, а также в органах и клетках иммунной системы ш одновременно изучали интенсивность дыхания в лимфоцитах периферической крви и лимфоидных клетках селезенки ТЭ крыс в половозрелой и старом возрастах. В результате удаления вилочковой железы у взрэсшж крыс скорость поглощения кислорода лимфоцитами периферической крови и селезенки снижалась (соответственно на -35,2 и 28,6$). В гтюфоидных же клетках селезенки ТЭ старых крыс этот показатель яостОЕзрно повышался, а в лимфоцитах периферической крови практически бал на уровне контроля. Следовательно, в условиях дефицита горыонов тетуса нарушается энергетический обмен не только в шчвни, но и в органах я клетках иммунной системы.

При изучении активности транспортных АТ&аэ ^2+

и К*-) в митохондриях печени ТЭ крыс разных возраст-

ных групп обнаружены значительные изменения. Так, в группе ш-вотныхГтЭ в"колодом и половозрелой возрастах, активность изучаемых АТФаз значительно снижалась- Активность ЛФззы у старых

ТЭ крыс возрастала, причем прослеживались почти одинаковые изменения уровня К*", иа+, Мд-+ и Мр-+ зависимой ЛТФазы. Выявлено такЕе снижение активности цитохромоксидазы во всех возрастных группах ТЭ крыс: у молодых - на 68,75?, у половозрелых - на 33,2, у старых - на 57,4.

Таким образом, при дефиците гормонов тимуса нарушаются процессы окислительного фосфорилирования, трансмембранного переноса иснсв я активность дыхательных ферментбв.

Введение Тз ТЭ животным сопровождалось развитием высокознер-гетического сдвига в митохондриях гепатоцитов: всзристала скорость потребления кислорода в активном я разобщенном состоянии, усиливались стимулирующие действие АДФ, дыхательный контроль, увеличивался коэйфиилент АДФ/0, укорачивался цикл фосфорилирова-ния по сравнению с соответствующими показателями у ЛО животных.

На этом этапе исследования механизм действия гормонов тимуса на энергетический обмен не вполне ясен. Однако монно предположить, что Тз усиливает процессы синтеза белка, ДНК, РНК и повышает зктавяость ферментов. Исходя из этого, видимо, следует ожидать повееэния интенсивности синтеза ыакроэргов и восстановления нарушенных после ТЭ внутриклеточных метаболических процессов.

2.5. Участие тимуса в функционировании микросомадьной окислительной системы печени и ишунокомпетентных клеток

Взаимосвязь конооксзгезазной п иммунной систем организма вызывает особый интерес в плане изучения резистентности организма к действет разлктакых патологических факторов экдо- а экзогенного происхождения. Практически не исследовано состояние ма-нросомадьной монооксагеназной си с тате печени к лимфоцитов в условиях дефицита гормонов тимуса а на фоне яммунокоррекции. Для решения этой задачи ма изучали функциональное состояние микро-соияльэой конооксягеиазной системы окисления печеночных клеток з условиях швднпого дефицита, вызванного ТЗ, а также коррекции иммунного отзэта с применением Тз у крыс. В этих ае условиях исследовалась активность бензгшренгяяроксилазы в лимфоцитах пепифервчзсзоа крови. Условия опытов описаны в 2.5. Подученные зяшдга свидетельствуют о том, что у взрослых крыс через 6 изо посла ТЗ активность го ел изучаемых микросомэльных ферг.?ентов онагалзсь (табл.2).

Таблица 2. Влияние Тз на активность микросомальных ферментов в печени та взрослых крыс

Группа ЕИ зст-ных

Цитохроыц, нмоль/ыг белка

Р-450

}НЛДФ*Н-цито-;Гицроксила-| Н-ломети-;хром-с-редук;зы анилиналазы амидо--;таза,нмоль ;нмоль а- ¡пирина, ¡цитохрома с ;аминофенола;кмоль НСОН ¡1 мг в I мин¡на 1мг в I ¡на I мг в ¡мин мин

ЯО 0,938+0,085 0,66^+0,52 78,82+2,84 0,942+0,066 0,788+0,034 ТЭ 0,540+0,056* 0,441+0,037*50,22+6,72* 0,633+0,34* 0,512+0,032* ТЭ+Тз С,635+0,058' 0,584+0,044 82,53+5,23 0,753+0,043 0,686+0,054

В наибольшей степени сникзлоя уровень цитохрома Р-450 н НАДФН-цитохром-с-редуктазы. Активность цитохрома в^ и анилингидрохсила-зы снижалась в одинаковой степени. При введении Тз ТЭ яивотгшм заметно повышалась активность цитохрома в5, анилингидрокшяазы и я-дэметилазы в печени.

У молодых ТЭ крыс активкссть КДДФС-цитохром-с-редуктази и амидопирин- й-деметилазы спасалась соответственно на 53,5 и 51,72 уровень анилингидрсксилазы - в несколько меньшей степени (на 33,8 %). Количественный уровень мшую стальных гемопротеинов изменялся тате неоднозначно: содержание цпюхрома Р-450 - главного компонента ыикросомальных кокоокаигенаа смешанной функции - уменьшалось незначительно, другого ыикросшального геыопротекна - цитохрома в5 - ца 58,1$. У ТЭ старик крыс содержание вдтохрома Р-450 и активность НДДФй-Н-цитохром-с-редуктазы снижалась более значительно,чей у молодых - соответственно ка 32,5 в 57,Содержание цитохрома в5 и актиЕНОсть аниликгидроксилазы у них снижались на 28,4 и 50,8$, т.'е. менее значительно, чем у молот" крыс. Несколько неожиданна оказалось повышение (на 29,б£) активности л-деыетилазн амидопирина. Следовательно, ТЭ неоднозначно влияет на различные звенья ыи-кросомальной монооксагеназной системы Сиотрансформации эндо- и экзогенных соединений печеночных клеток у молодых а старых крыс. ТЭ вызывает значительные нарушения процессов микросомального окисления и в лимфоцитах периферической крова. Так, через 1£0 суток после операции активность банзпиренгидроксилазы в лимфоцитах достоверно сниналась у кивотнах всех трех возрастных групп, причем более резко у молодых и етарнх (соответственно в 1,9 и 1,6 раза).

Гормоны тимуса, очевидно, пряло пли опосредованно влияют и на активность кикросомальннх моноокезгеназ, функция которых,как известно, заключается не только в птгоксикации поступающих извне ксенобиотиков, но и а биопревращении многих жизненно важных для организма эндогенных соединений. Можно предположить, что отсутствие регулирующего влияния гормонов тимуса на иммуногенез и функциональное состояние других эндокринных желез организма нарушает взаимосвязи между иммунной системой и метаболическими процессами.

2.7. Роль тимуса в регуляции функционального

СОСТОЯНИЯ Л230С0Н

Б реакциях иммунитета, образованна н распаде физиологически активных веществ (фермента, гор,тонн и Т.п.) важную роль играет внутриклеточный протеолпз. Мы исследовали активность 4 кнелнх гидролаз (К©, ДНКазыч РККазы, в катепсина Д) я лимфоцитах периферической креза, гомогензтах печени и ее лизосомнех фракциях.

Кзк eSeho из рис./, на 40-з сутки после удаления тимуса пабгзпас¥ся тенденция к повышению активности всех изучаемых лнзо-ссиальш'л гидролаз в лпмфоцатах периферической крови крыс.

По мере развитая иммунодефицита (70-э и 100-е сутки) наряду с на-рувеняс?* кггудологичоских показателей (умзнышэнЕЗ количества Т-кдэток) s ллмфэцзтах снижается Ягтарзость сззосоиальннх кислых гпаролаз. В отдаленные сроки и к пегц? эксп-эримэнта (чэрзз 190 и 370 суток кос,:" сперацяи) зарегистрировано значительное снижение аятявноста ЯЕСозомалып« фер^еатез лш.:§оцптоэ. В суспензии лизосом лзчетн осдайпа аналогичная яшг&етга p.ssshcss& активности фэртсн-тоз (рвс.8). Владение Тз ТЗ кигоетг: погкгаег азгивность кислю: гяяродаз в дакфецптах дерифериюсда:! лровп и згосокакг фракция:

S340KB.

Таким обрзгои» прп отсутстгг; горгсясяьного воздействия тл-иуса на органсзй вознпгэют пз::ешпт;,'; ^Ш^г.опагшюго состояния лззосоьшого аппарата клеток» заЕПйгл^пйЩ] срока ого удаления.Вве-доняе Тз в значительной степени Есесгайэзяивгзт активность лизо-сомальных ферментов. Это свидвтеяьсгвуат об участил тимуса з perys ляция структурно-функционального состсеяия днзосомалыгого авгщщ^ та клеток.

- -XV-.

---

л ¡и т 270 ¿«с

)гс ¡90 зад

Чй 70 №0 т 370 А*и

А Б

Рис.7. Активность КФ (А) и кислой 31Кззы (Б) в лимфоцитах (1,2) и ллэосаэдых фракциях печени (3,4) крыс. I и 3 - ТЗ, 2 и 4 - ТЭ+Тз.

А Б

Рис.8. Активность кислой РНК-азы (А) и катепсина Д(Б) в лимфоцитах (1,2) и лизоеомных фракциях печени (3,4) крыс.1 и 3 - ТЭ, 2 и 4 - ТЭ+Тз.

2.8. Влияние ткмэктомии и тиыозина на содержание циклических нуклэотидов в лимфоцитах

В наших экспериментах изменения содергаиия цАМФ и цШФ в лимфоцитах периферической крови ТЗ крыс через 100 суток после операции бшш разнонаправленные. Так, уровень нДО1ф снижался на 28,1$, уровень цШФ повышался на 33,1?. На 120~е сутки ечдераа-кие цАМФ имело тенденцию к сникенив по сравнении с предыдущим сроком, а уровень цКФ снизился Поело введения ТЭ ке-

вотньа Тз количество цШФ и ЦП.1Ф практически достигало контрольных показателей.

Сньконае уровня цАМФ и ЦП® в лимфоцитах крозЕ,возмознс,связано с угнетением синтетических процессов у ТЭ яззотных (Д.Мил-лзр, П.Дукор, 1367; С.П.Гроздов, 1375). В этом немаловажное зна -чение имбщт установленные нами изменения структурных компонентов мембран лимфоцитов (изменение Ф£ состааа, поЕ1аение содерзаная ЛФХ, продуктов ПОЛ и активности фосфошпазы Ад). В фушсодопаро-Еании основных ферментов метаболизма циклических нуклеотидов ваааое значение отводится лвпидноа? мвкроокруаешш (Я.Х.Туракулов, Т.С.Саатов. 1931; Bsrju.cs ,1373). Изменение его фазового состояния способствует переходу цаклазы из активного состояния в неактивное, а наоборот (Г.Н.Балиенков, В.АЛкзчуе, 2979). Нормализация концентрацаи цШФ и ЦШФ поело взвеэная Тз ТЭ жввотнкз, вэро-

[тнс, связана о возрастанием активности мембранозаЕисимых фермен-■ОЕ, необходимых для образования циклических нуклаотипов. Об этом ;зидетольств.ует повышение активности аденилатциклазы под влиянием '¿'морального фактора тимуса (А.Л.Ко;;:емякин и соавт. ,1984).

2.9. Сочетанное применение тимозина и алиментарных факторов в регуляции метаболических процессов у тимэктомированных тавотных

В основе биохимических механизмов развития ВИ в условиях гор-ональной недостаточности тимуса денат метаболические нарушения з рганах и клетках иммунной системы, субклеточных органеляах почо-и. Применение Тз в более поздние сроки ТЗ хотя и оказывало поло-ительное дейстзие на изучаемые метаболические процессы, но полого восстановления их не обеспечивало. 3 связи с этим перед наи встала проблема поиска соединений, в сочетании с гормонами ти-уса, способствующих восстановлению нарушенных при БИ ыбтаболи-эских процессов. В современной медицине все большее значение в зчестве лекарственных средств приобретают вещества естественного роисхоядения. В этом аспекте ванную роль играют аяиментарнае фак-зры. Установлено, что они участвуют в регуляция иммуногенеза и зтаболических процессов в организме. Для решения данной задачи 1 изучали влияние комплексного применения Тз и дополнительного ациона (с. 10), а такяе витаминов А и В на ©Я состав ,ц,|втенсшз-эсть ПОЛ в органах (селезенка, костныЗЪсзг) и клетказГ&::г/шго2 зетемы, субклеточных органеллах печена йндтохоядрий, .кккросойы) динамике развития ВИ. '

Подученные данные свидетельствуют' о том, что Тз в сочэтанзи дополнительным рационов" способствует восстановлен® спектра ФЛ ¡чени и азлезенки и в поздние сроки после удадзния тимуса (уров-! ФХ, ФЭ повысились, СФ, ФС, К1, ек, ЛФК - снизилпсь). Ада-!гичная полопзтельная динамика прослеживается в ФЛ спектре мито-'ндрий и макросом пече-:и, лимфоцитов и костного мозга (рис.Э и О. Наряду с этим выявлена нормализация интенсивности аскорбат~ ввеимого и НАДШ-зависимого ПСШ в гззтохондрияг и гзкроссмах чени, лимфоцитах периферической крови, активности фосфолисз«» : А., в митохондриях печени как в рднние, так и в поздние срогш еле ТЭ.

Следовательно, гормоны тимуса, о со беги о в сочетании а я"'--

- га -

кентарнши факторами, оказывают внрзкенное стабилизирующее влияние на М состав и интенсивность ПОЛ мембран клеток.

ер.I «X *А'*г>* Аф<

Рис.9. Изменение содержания й£ фракций в митохондриях печени "крыс через 4е1 (А), Ш) (В) с 370 (В) дней после ТЭ. З.йэсь и на рис.10: пгэ-ТЭ,ЕЕЗ-ТЗ*Тз, С22-ТЭ+ТЗ+Д?

Рис.1(3. Изменения содержания <йЛ в кзгЕросомах (А), коет-не:-1 цезге (Б) и кафадтах да-ркфзр^-соской кроен (3) крыс 43-рез 1£С дней после ТЭ

Ках отмечаязсь, а салео поздние срою? (120-е а 370-О сутки) Тз ::отя а способствует восстановлению активности ЛДГ, !«ЕГ3 Г-6-5азы, Г-6-£ДГ а пзчена а лжфоцитах периферической крозп ТЭ крыс, но ах показатели остается заметно отклоненной от контроль-пах, Црвменашзе га Тз в еочаташ с затежадаа ( А и Е) нормализует активность изучаемых фзруэстов углеводного оекглз. Исполь-оовзчае Тз 2 сочетании с ватагяаааа А п К э разкзз ержп посла ТЭ(с 40-х пс. 370-е суткл) «шз нормализует си вдовах

кислот в екворотке и зга^оцзтаг: аровв, 2 су&кеточж-: органедгах печена.

Алиментарные факторы, вюшчзвдз лгг:«зу сослепа ¿злкв, вепре дельгае гшры (источника фосфакшздов), Бзтамины я макроэлементы, с одной стороны, являются хюстшадшаии пластического материала, с другой - как миноркыо ксыпонанги меубран способству-

ют восполнению их лишвного и белкового состава, проявляют антиок-скдаитное действие, участвуют в синтетических и пролифоративных процессах и, тем самый, совместно с гормонами тимуса обеспечивают нормализацию метаболических процессов при тимусзависимых иммунс-деф1,цатах.

Таким образом, сочетанкое применение гормона тимуса (Тз) и алиментарных факторов оказывает вкраконное действие на метаболические s иммунологические процессы при Щ, что открывает перспективу их применения в клинической практике.

2.IO. Сравнительная сценка иммукостимулируюЕэй и

метаболической активности тикозика-У и я2п-ГФТя

Результаты наших исследований в анализа данных литературы показали, что ВИ проявляется как в поражении различных звеньев иммунитета, так п в нзрусенпя метаболизма в органах и клетках иммунной система, печени а ее субклеточных структурах. В связи с этим, 1еред нака встала проблема поиска соэзншшй, огазнвавцих регулирующие действие на иммунологические и метаболические процессы при ЗИ. Показано, что щкк участвует а функционирования иммунной сяс-:емы и синтезе гормонов тгмуса ( Cardenas ct al. ,1984; liercalli t ai„ 1934), является необходимым компонентом более ста различиях ферментов {в там числе таких, как НАД- и НАД-зависимые дегид-югеназы, ДНК- л РНК-голгмеразы). Для проявления биологической ктивности гормонов твдгеа требуются ионы данка (bietreau et al., 987). Саазанкоа шоз прзвопрзделило разработку способов получе-ия высокоактивного шеютодергаиего С Zs-Гет") гуморального фак-орз тдауса, изучение его фазико-хнштских свойств и характер иологзчоснохо ДЭЙС'ОПЯ.

Раззлтдэ ВИ(на 180-э супя после спороцзи) сопровождается сни-знием сояораания E-PQK (на 45,5$ нппа контроля) и повышением ВДА ходе аскорбатзависимого ПОЛ (на 41,6%) и енгсенгем активности КГ (на 33,4/1) в лимфоцитах пвряфзртяеекой кразп ТЭ елеотных (рис. [). Введение гормонов тимуса (Тз п " Zn-KST" по 0»5 ккг/г пассы течение 10 дней) способствовало восстановлению этих показателей, зачем наиболее выраженным терапевтическим эффэктом обладал *2л~ 71". Аналогичные положительные эффекты выявлены при изучении эли-шя Тз и "2а -ГОТ" на активность кислых гидролаз лиэосом, содер-¡шп глияолротеинов в лимфоцитах периферической крови я субклетол-

нах срганеллах печени,количество АОК в селезенке ТЭ кивотннх.

но

т —.......

i г з $

ко

Г 1 3

Рис.XI. Влияние Тз и "^ЧЖГ" на содержание ü-FOK (а) и ЫДА при эсжорбатзашсимом ПОЛ (б), активность ЛДГ (в) в лимфоцитах периферической крови крнс. I - ТЭ, 2 - ТЭ+Тз, 3 - T3+nZa-r&T"

Таким образом, шшкчсогеряаааЗ г^;о?:сдвкый фактор ти:.;уса оказывает более внрааекное- действие на метаболические к híjmjно-догические сдвиги при БИ, чем тимозиа-У.

3. и&тасояичэсхие н^рулонлл 25с:глчзс:^гх ЗР6О-хоодп&х пзчеет в .усдоаак го.с::оно£

t;iuyca,;rc лор.^якция тл^иллисл "лллолгз^шлш г-алтсла;.,/;

Эзбогокакая 1йчени еанимз-от с.тлеетглкнео лесто среги И8ТруДОСЯССОб!!ОСТЙ V. СМерТИОСТЦ. 5 vrjsi lutvmz установлено,

что при xsn ".! г.зг.-гдавоЕ<п2х с сливаются как коюг-;ест-еокнцй леолллт, тал л йук^гязсна.ты'л™ негслноцзнуостъ Т-екуЪця-тов, огироеоквяеизея и:-; гшзрсгнсдб:'.дизс^еИ л аечаночна! антигенам. Это свидетельствует г-ч учзстзг. -'t^mogoa клеточного им-иунвтета в рэзвлтлл з гг?сгрзссзисл:Сй;л^г";сз-йЕ^о2 патологий,осс-бенно ее активного варианта (АЛ\Яг#0т*ТЪ ссзвт. ,1578,1555, 1987, I52S; ЯЛ.йглутог, IS8I).

Нами дрогезеа анакаэ а.л.'ллл о сходсггз з слолелл-

чесних зэгк*:оЕ22 л ч пел:;: ! ТЭ а ХГГ, а

•Хаита 3 больных Х2П. Цэдсбш» лжздагглл'. тгтал ut» ероезхжсь Мы полагали, что вьявгэяЕэ сгодегза (Нздздэтэодвз зздеввкиЗ э

лимфоцитах а печени прл указанных патологиях е эксперименте и клинике полтвзрклт однотипность метаболических нарушений при им-куношзфицитах различного генеза. Пр." этом нами установлено, что ТЭ у анЕотннх адекватна Ей в няинег;.

Нарушение метаболЕЧзской активности лимфоцитов. Изучено влияние Тз а дополнительного рацаена на ектканость оксидоредукта-зы (ДДГ, ЩГ,Г-6-§ДГ), лзгосомалыт кисцдс гидролаз (КФ, ДНКазы, РККазы, кзтопезна Д), содорганче МДА и си&овых кислот в лимфоцитах периферической кроЕи крыс с ХГГ на фоне ТЭ. Активность ГДЦГ и ДДГ в лимфоцитах как у ТЭ крыс, так и у ТЭ с XIT (через 255 суток после шерации, 50 суток после окончания затравки) значительно снизалась, в наибольшей степени - при ХГГ на фоне ТЭ (а 2Д и 2,3 раза). Чзрээ 285 суток после ТЗ, 80 суток поста окончатся затравка зктввнссть ГДДГ снизилась в 2,7 раза, ДДГ - в 2,6. В отличие от указанных ферхезтов активность Г-6-ФДГ в ли'фоцвтах я печени ТЭ крыс в ai в срока повышалась (соответственно на 59,7 и 52,2; 34,4 и 45,2$). При ПТ па фоне ТЭ через 80 суток поолз окончания затравки активность згого фермента практически не отдавалась от койтроля. Установлено, *гто ХГГ кг фоне двфлцлта гор-ыснзз тимуса снижает активность Г-о-йзы з печени, в наибольшей сгэдснз vopes SO суток после окончания затравки (на 54,5%).

ПрлкаиенЕО Те в сочетайся с доподнитегьнка рационом и вате-сгинами (А и Е) пркбгзаавт активность фэр:.?ентоз к контрольным значениям, за иезеэтзпиея п?сзня ДДГ в лдмфоцатах г r-S-Зазы в печени при ZTT на фоне ТЗ (ВО-в сутки после окончания затравка). lis соЕэрсжвв оставалось заметет csszsmaae.

Результаты исслзлойзягп аггаезостн эт"х фэ^снтсс в цит-зх периферической крове больных Z3R СЕЗлегвльсгдгот о сядхэ-нко активности ДДГ и ВДГ. Самый низке!? уровень ДЩГ л ЮТ sapern-стрировзн дрз билпарном циррозе печени (ВШ) (на £0,3 о 63,1% ниже контрэгг) а портальном циррозе шчэг::! (ПШ) (на 55,6 я 65,5 %). Лктрнс5£ь~ГК5-ЗГ а сажает«: тяр^зрачоекзз хревп била повншааа э .s¿2 S23 SS02 <Яб£гнз ро rcer группах обследованных больных, оейбэхно пр хроническом гг.ггггтом гепатите (ХАГ) и БЕД (соответственно на 79,6 и 7£$).

' Установленное нами снижение активности ДЕТ и ЩГ свидетельствует, что течение 23П на фоне иммунодефицита как в знспзргкзя-те, ras и з больных сопровождаете.;*- пзрупэнзеи процессов дгффзреЕ-

цировки Т-лимфоцитов, и развитием недостаточности энергетического потенциала лимфоцитов. Усиление пектозофссфатного пути,' вероятно, указывает на функциональное напряжение адаптивных и защитных сас-'тем в лимфоцитах, связанное.с переключение;,; окислительных процессов на пентозофосфэтный дуть.

Изменение интенсивности переокисленпя липидов в ишунокомпе-1>:;тных клетках. При ХГГ на фоне ТЭ скорость накопления ЫДА в хо-„:.- /Лк аскорйат-, так и ЕЩН-завясамого ГОЛ значительно повышалась, причем максимально во второй срок опыта (соответственно на СО и 71$). Использование Тз и алиментарных факторов для коррекции ■метаболических сдвигов при ХГТ на фоне ТЭ приближает содержание ЫДА к контролььш ¡золичанаы, за асклзта-Е&м НАШ-зависимого ЮЛ во второй срок ошта, когда ах уровни превышала контроль а 1,3 роза. Результаты исследования ПОЛ а лимфоцитах периферической кр-ва больных лЗП показали, что интенсивность как аскорбат-, так и ПАДЗН-аависииого ПОЛ значительно тез контроля при ПЦП (соот-вет^канно на 33,6 и 47,85?) п БЦЕ (на 50,5 и 15,2%). Максимальная скорость накопления МИД. в ходе аскорбат- а НАКН-зашсамого ПОЛ установлена з Т-ликфопатах периферической крови этих больных. Следовательно, интенсивность »зроокаслоиая СД мгмбраи в Т-лимфоцитах намного вазе, чей в ойапх пояулкцаах лаагфецктез. Слодует отметить, что при ХГГ за фоне ТЭ выявлено более высокое юдэр^а-ние МДА, чем пра ТЭ. Это дает основание рассматривать процессы переохаслекил кипя лов в коибраазх еммдокомпбтзнтнщ. клеток как один аз факторов, щягозащих к нарушают их функционально-метаболической активности и зависящих от тяназста патологического процесса. Слодозательно, удаленно процессов липэперокспващш в лимфоцитах яалается кэспецгфичоским патогепотачеекка званом в развитии Е1 пра ХЗП,

Гсткоппотеини клеточной поверхности в их зуачепве в сЬунгаш-онировакзя лимфоцитов пни ХЗП. Роль поверхностных гляаопротеи-нсв лимфоцитов в их функционировании при ни исслэловзна. ХГТ на фона ТЭ у крыс влечет за ссбп£ зшттолькое сютвкве содержания еталэвых кислот в лимфоцитах периферической крова и митохондриях печени, наиболее опетллвое через 285 суток после ТЭ и 80 суток после окончания затравка гелиотринои (в 2,1 раза ниже контроля). Лечение крыс с ХГТ на фоне ТЗ Тз а адаментаршми фзк-. торами оказывает солоеттельша зффок? на союрнание гликопротеи-

нов в лимфоцитах периферической крови и митохондриях печени.

Снижение содержания опаловых кислот а общих популяциях лимфоцитов и Т-лшфоцитах периферической крови обнаружено у большое ХАТ, ПЦП и БЦП,' причем самое низкое в Т-линфоцитах при ВЦП (на 48,4%). При изучении корреляционных связей меялу содержанием си-аловых кислот и Т-лимфоцитов положительная корреляция высокой степени установлена при БЦП ( г -С 0,85) и ПЦП ( г < 0,92), а средней - при ХАТ -( г<0,53). Дефицит гликопротеинов клеточной поверхности, по-видимому, обусловлен снижением синтетических процессов в лимфоцитах, связанных с угнетением функции тимуса при указанных патологиях. Это подтверждает снижение содержания опаловых кислот в лимфоцитах ТЭ нивотных и восстановление его уровня после введения Тз.

Таким образам, одной из основных причин уменьшения количества и угнетения функции Т-звеньев иммунной системы при ХЗП является дефицит гликопротеинов клеточной поверхности.

Изменение активности лизосоиальных Ферментов в лимфоцитах и печени. Большое значение в синдроме аутолитического распада печеночной паренхимы придается лизосомальным кислым гилролазам (А. А.Покровский и соавт.,1968; А.Ф.Блюгер, 1970; £.И.Мамутов,1281). При нарушении целостности лизоссмальных мембран печеночных клеток их гидролитические ферменты высвобождаются в цитоплазму, обусловливая дальнейшее повреждение субклеточных структур и патологический аутолиз клетки (А.А.Покровский, В.А.Тутельян,1969; А.А.Покровский к соавт.. 1973; К.Де Дюв, 1964). Однако лизосо,-мальные ферменты в иммунокомпетентных клетках при 13П не исследованы.

В связи с этим нами было предпринято изучение активности кислых гидролаз в иммунокомпетентных клетках и лизосомных фракциях печени крыс с Х1Т на фоне ТЭ и терапии Тз и алиментарными факторам. Активность лизосомалькых кислых гидролаз исследовали такке в лимфоцитах периферической кроги больных ХЗП. •

Через 50 суток после окончания затравки и 255 суток после ГЭ активность кислых гидролаз (К5, ДНКазы, ИЖазы, катепсина Д) в лимфоцитах у ТЭ крыс с ХГТ значительно снижалась. Аналогичная динамика обнарукена и в лизосомеых фракциях печени. По

даре прогрессирогания ХГГ и нарастания дефицита гормонов тшуса (через 80 суток после окончания затрапки и 285 суток после ТЗ)

активность кислых гидролаз существенно снизилась. Цаксимальной снижение ее найдено в случае КФ в лимфоцитах и катепспна Д в ли-зоссмных фракциях печени (соответственно па 54,2 и 35,6$). При исследовании активностей двух лизосомзльннх кислых гидролаз (К® и РНКазн) в сыворотке крови больных ХЗП м:квлеяо повкгзнве их

;;ня, Значительный подт-ом активностей Сршенток загсги-' ссзровзн при ХДГ, ПЦП и БПП (в 2,2-3,9 ]•.-..?а вязе но;лл1).

Снижение активности одного из маркер^к ферментов лзгосзы -2 оСгах поауляцяях л»£оцятов и Т-яню-агитов обнаружено во „зх группах больных (кроке хроническим усдзшстпток;. в наиболь-степени - з Т-лякфоцгтах при ХД и д-'ДП (на 60,4 я 65,6$).

Ргоультэтц опытов с ХГГ на фоне ТЗ са^двтекьстзуот о том, что з условиях лефэцатз гормонов тимуса тегко возникают хрони-з^цая патологического процесса и его утядзязние. Значительный "логъем уровня лизоссыалььах кислых гидролаз в сыворотке крови урз "¿311 указывает на пову-леккый вкгод этих ферментов из "хранили;:'" ~ периферическую кровь гс^эдоше дас$;:лизацяв днзосомаяышх :;змбр«я. Это полтвэразаотся установлзкнкгг камл параллельным сни--.:нйом активности Ферментов ллзосом в л»?оцитах периферической сольны;: ХЗП, а так:;ь ^ .-тафдатах дизосомах печен:: крыс с 2ПГ га фоне ТЭ. Надо полагать, что поь-^пие аронкцззмостз ли-сосаизльэтас [.'гкбран создает условия для сихола кислых гидролаз ::з якгогош э шяопяазку, Б указанных услодшв: зротеолиягеоекие ^.зрмзптц, до-гл зимои?, аамэшеэт струкгупно-функцлсиадъноо состоять клеточных органалл и плазматической мембраны, подвергая их гидролитическому распаду, Сгогаение уровня кислих гидролаз в лам-фэцатах свидетельствует об угнетении иммунной и катабокической функций лизосом при ХЗП. Зто поягверзшаетса установленными нами отрицательными корреляционными связями между снижением активности лизосомальных ферментов в Т-лимфоцитах и повышением уровня циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови при ХЗП. Повышение актилюств ферментов лизосом в лимфоцитах и лпуосомнкх фракциях печени у ТЭ крыс с ХГГ на фоне применения Тз и алиментарных факторов указывает на во-становление стабильности лизо-ссмального аппарата клетки.

Таким образом, клинико-экспэримекталшые данные свидетельствуют о взаимосвязи метзоолизма и функции иммунокомпэтенткых клеток. Недостаточность энергетического потенциала лимфоцитов, нарушение дифферэкцаровхя субпопуляции еммунокомпетентных кле-

ток, метаболизма липидов и углеводов, накопление продуктов ПОЛ, повышение активности фосфолипазн снижение функциональной активности лизосом и содержания поверхностных гликопротеинов сопровождаются изменением количественных и функциональных показателей Т-лимфоцитов. Это главенствующее ЗЕено в генезе Вй при ХЗП.

При ХЗП большое патогенетическое значение имеют и неспецифические патологические факторы (гипоксия, деструкция тканей,образование эндогенных токсинов л т.п.). Совокупность изложенных факторов, по-видимому, приводит к нарушение функции тлмуса и развитию приобретенного кммунодефпцзта, коториэ, з сво:о очередь »пролонгируют хрокизацшэ патологического прсг;=ссзь

3. Взаимосвязь и взаикодзйстзие изменений в различных звеньях клеточного метаболпзмз в процесса развития вторичного имцунодефзцита

Мы предполагаличто перераспределение Ш состава в процессе развития ВИ связано с повышением активности фосфоляпазы интенсификацией ПОЛ в биомембранах. Действительно, было зарегистрировано повышение содерзания ВДА в ходе ферментативного и неферментативного ПОЛ в субкгэточных органеллах печени и лимфоцитах периферической крови, причем скорость НАДШ-зависимого ПОЛ была максимальной в микросомах печени. Нарушение функциональной активности иммунекомпетентных клеток и субклеточных органелл печени в процессе развития ВИ взаимосвязано с изменением их Ф1 состава п скорости ПОЛ в них. По мере нарастания дефицита гормонов тимуса происходит антибатное изменение активности монооксигеназ в скорости ПОЛ, содержания ЛФХ з микросомах печени ТЭ крыс (рпс.12,а)„

Рпс.12.Изменение интенсивности ПОЛ, содержания <К1 и активнеотн коноакспгеназ з микросомах (а), скорости асЕорбатзаиаспмого ПОЛ, состава ФЛ, активности АТс&аз п гсч'оярсаоясидазн э митохондриях (б) печени крыс через ISO дней ncc/ití ТЭ» По осп збсш:сс£ ЩК-завиодаая ПОЛ, -г-аспорбз?*-. ■завЕСоал ПОЛ» 3-ЛКР 4-СО, Ь.... 6-53» 7-®тохром W^i ífc.

-цитохром Bg, 9-1Щ®-Цитохром-с-релуктаза, Ю-анилиигидроксилаза, II- и -дематилаза амидопирина; б) I-аскорОатзависшая ПОЛ, 2-КЛ+ ФК, 3-ЛФХ^ 4-фосфолипаза 5-ФХ, S-K*", Na+, Щ-+ -зависимая АТФ-аза, -зависимая АТФазэ, б-цитохромоксидаза.

Вероятно это подтверждают данные о том, что продукты свобод-норадикального окисления яишдов оказывают повреждающее действие на мембраны эндоплазматическогс ретикулума, в частности на активное ;ь цатохрсма р-450 (А.И.Арчаков и соавт. ,1973). Значительное повышение интенсивности П°Л, содержания Л5Х, КЛ+ФК, активности фосфолялазы Ао в митохондриях ТЭ животных, сопрозоядаэдееся снижением активности транспортных АТФаз, цитохроыоксидазы, содержания ФХ, ФП (рис.12,б) свидетельствует о том, что в результате гидролиза ФЛ в мембранах повышается содержание свободных нирных кислот и лизоформ ФЛ, стимулируюсих вксокоамплятулкое нэбуханио митохондрий. Это щяводит к уменьшению жесткости мембран, и нарушению белок-фосфолидкдншс взаимодействий (В.И.Сороковой, Ю.А.Злалиыиров, 1975). В этих изменениях немаловажное значение имеет снижение ФИ, необходимых для функционирования Ка+, К+-ЛТФазы и здеяилатциклазы, для синтеза ATO СН.Е.Кучеренко, Я.Б.Блюм, 1986). Такие изменения способствуют нарушению функциональной активности митохондрий и снижению энергообеспечения многих метаболических путей при ВН.

В иммунокомпетентных клетках и субклеточных органеялах печени обнарукечы несвойственные норме «штатные изменения содержания ФХ, ФИ, ФЗ, Ц&1Ф, цШФ, гликопротеинов, количэства Е-рецеяторов Т-лпмфоцптов и активности Г-6-фазы, ДЦГ, Г.ЩГ, актибатное изменение интенсивности ПОЛ, содержания ЛФХ, СФ, ХЛ+ФК, активности фсс-фолипазы Ag и содержания ФХ, ФИ, ФЗ, цАГЛФ, цШФ, гликопротеинов, количество Е-рецепторов T-лимфоцятов, активности мембраносвязан-ных ферментов в субклеточных органеллах печени и лимфоцитах периферической. крови ТЭ животных (рис.12 и 13).

При анализе коррелятивных связей меаду снижением активности кислых гидролаз в лизосомах печени и иммукокомаетеитных клетках и повышением содержания иммунных комплексов в сыворотке крови кивст-ных с ТЭ и ХГТ на фоне ТЭ в большинстве случаев установлена отрицательная корреляция срепней степени ( (рис.14) ). это свиде -тельствует об угнетении иммунной и кзтаболическсй функции лизосом при Вй. Следовательно, проведенный сравнительный анализ взаимосвязей нарушений в различных звеньях клеточного метаболизма свидетель-

т ео

190 гтоаии

юо а 1.0 (3

« ГО ПО 1,0 770.

па

40 ГО ПО ПО 570

V—'

АХИ

Рис. 13. Взаимосвязь между изменением скорости НАД®-зависимого ПОЛ в мякреоомах (IЬ активностью Г-6-<5азы 'в цитозоле (2) гепатоцитов, а таете мекду изменением содержания глико-протеинов (3) п Е-РОК (4) в лимфоцитах периферической крови в процесса развития ВИ. Изменение интенсивности аскорбагзавистоого ПОЛ (5), активности ЛДГ (6) и ЦЦГ (7) в лимфоцитах пераферической крови в процессе развития БИ.

Рис.14. Изменение актишости КО (I), кислой'ДНКазы (2), кислой РНКазы (3), катепсина Д (4) в лимфоцитах п содержания циркулирующих иммунных комплексов (5) в сыворотке крови в динамике развития Ш.

твует, что деструктивные изменения плмбпя.ч в процессе развития И обусловлены в пергу?: очередь по: г:сш;е;: лишпной фазы цито-ембран за счет вовлечения липигов г процессы ПОЛ, а так ге воз-зйствием на И клеточных мембран гидогонянх фосфолипаз. Образ.у-циеся продукты ПОЛ {гидроперекиси, ненасыщенные альдегиды, 1.5ДА) называют мутагенное и цитотокспческое воздействие: подавляют гаивность гликолиза, гпоконеогенезэ, окислительного фос&орили->ва»ия, ингибирупт синтез балка, активность мекбрапосвязаннкх

ферментов. Деструктивше избиения ыембран, возиакаювла а розуль-тате ПОЛ, отрицательно вдяаат и на лпганд-роцопторгша юашодей-ствпя п приводят к развитая вторичной ддсфукхцяя рецепторов мембран, что является основным фактором, способствуй сга юрувзашо 7к;лг.юкальной активности тзимунорегуляторшх популяций Т-лимс.оцп-.о -;а ВН. Ссловной причт'оЯ указанных из'-гязнл;!, по-^ашс./у яв-г>.. л угнетение синтетпчэс::;х и пролифератгг пых процессов * ело, 5;зя5а гормонов (З.Кемялова, ХШ4)

образом, установленные взаииосвягл и ьзаимодязянп;: в •."ониях обмена веществ и энергии в сопос:т>2ления с н.гмунологи-чезими с ¡шагами сшдвтельстауют о тоги что кзы&нэшге отдельных метаоолвчесгах процессов з органах и клетках ашунной апотеш,субклеточных структурах пачек:) пр дефиците тпмнческих гормонов составляет существенное ъзено а патогенезе Ш.

Исследования тимуса из ыетзбо:лиеок:е процессы ь ор-

ган:;." и кдэтках гцвднной састе«а, сусклети;Г:!х структурах печэни поггодидп нам едчяать за}-гг"знле о гол-; ткмуса г обмено зесосгв и пноргия, Воздействие этого органа затрагк-ает вез стороны ¡*е-таоолязма з к;:ггхах, но калоолзе глубоким изменена®* подвергаются ХЕэтдаонскгглтеитгшс югеяга. Злзянйо тпадса на котаооличаскио процесса Г! опгсяи&„:о осуществляется, гю-викилму, кзеюллюш путл;,;л: нввоорехсгкшой ¿¡диягно его гоздоноа на оспзн ьлиоств: опосридо-Б«>:аое яогаз аиугяе органы шугренкей секссгин; де^стлае икгор-леляпкоэ Т-ллилацитси, Третий путь практически не лзучон.

В усдогдкх дес,:г>::?лта гормонов тауса развиваются метаболачес-кке нарушения а органах и кдзтках '.г-мукнеа спстеш. субклеточных оггакеллах печена, наиболее речкае г- отдзло'Жэ суакя после Тй, Зтч ?,зме"т-П!к п лзучэегшх показа:э,го. -ц.ач:.! зецэс:;; ТЭ глистных (краса, мс-ск:;е сашш) и у Г; с взвл?к.(вм Тз были однотипна. изменения з обмен? згодзетв ;; Г.? гньежи яре® .-й-г-зуят нартаеш«« 2 их танянна/ см^/се. Нассолзе оиннке изменения (чэсез 40 дне:': после ТЭ) -збнару^вав^зя в сг.октге ЗД: сниаааив со-дерззнкя фракций «И, коксеязе ссд^ка^и лЛ, «1С, в В связи с этим гдаако предполозять, что заабоаее рг.ш>Кб ьзиеценцл у Те жавоткнх происходят 2 стсг/ь™:;се, а слстнат^.ы-.о а а сдиш мембран клеток органов и ишфвдтоа. К атсад едску акр^зашш «з-

гленений в июлунологаческом статусс ТЗ еивотннх не наблюдалось. По мера нарастания лейцита гормонов тимуса (190-е и 370-е сутки после ТЭ) обнаруживается су^ос^шые .тетэСолачоскае сдвиги, особенно в шмуноко'летентных клс

Изменение в Ш состава гепатоцктов в лимфоцитов лосле ТЭ сопровождается возрастанием интенсивности переокясленая мембранных липидов. Об отом свидетельствуй? поЕЫЕЗнае активности фосфо-липазы содержания <Ж, ЛФХ, интенсивности зспорЗат- и ШЩЖ-зависамого ПОЛ, а такге снааенао фрэкцай СХ и СЭ, Зсдаг аз этим (или одновременно) развивается угнетение глнко.пзе, глюхокеоге-неза, кемпенезторно-лриспособятельясз усалзние зептозе^о'Звяю-го пути, а на более поздних этапах - изменение ^уакцки с:.:;:сла-тельных систем эндоплазматкческого рзтзкулуиз п етгохондрзй. 3?р, видимо, основные фактора, лривозкгзз к развитии кскгчестге-шогс дефицита и нар?гзшпз функциональной активности кжунорвгуяяторзух популяций Т-ламфоцатсв ара ВН.

Введениз Тз каряау с восстановлением показателей шаунитетг зпособстзузт нормаггзгцпЕ метаболических сдвигов в иьедунсксхпэ-гентккх клетках-п субклеточных структурах печени. Следовательно, гейстлае теса 'на к;, зтотай ивдуязтет осуществляется дутом стимуляции з лимфоцитах ебкэва веществ к эноргга.

3 результате нарушения стдектуряс^нкцзонального сэстсйнал таосом, связанного с дефицитом горюнов тамусзЕ изменяется укг» салышз >дш:нззг."н эндо-, экзо- а фагоцзтоза в РЗО а соответстггп-го ишушшозпзохай гомзсстаз. 3 этих условиях сктягеюг в клетка4-: }ЗС до конца иг расссгг.г»тся лнзосо.'.'злш:.".':: ф^рмоптсми с дязтель-ю в ш сохраняются. Их шгупная активность плз пзгзвто", что а »здаот условия для рззваткя аутоагтшв: рзз.-:;:;-:::. На это уггзг:-:-¡ает погашение ковдеятрацва тркулардаах пг^-уигз' хсаалзксог п нняенпе актихностп киелнх глапелгг г. осстпг: ±-;а/:..:.оаатзх дрова Э животных и у больных .ТЕП» гатасаготсгаоь,. сааг"1-а'о

ровня ц№ и цП/.Фг пзкоаош!« их. ; ..т..-.ото п

плитах свидетельствует: о парус;;:.■ ■ г:.т^ гр:псгг..'.'5р::?по:;

ерелачи гормонального сигнала с. ксгоги.

а на гффектор>г:з оп^тегта :: аэд:.\.. .. • .;■ :г. .т-ГгСо.:.:-

еские превращения.

На основании комплексного ас:: у меаао

еняе, что развязке Вй обусловлено р-зз^/Г. а-.кг;--. •

зтаболизма в целом, я нз отгелктпх ~та£>оа^сг::х .

условиях дефицита гормонов тимуса.

Положительные результаты при сочетанном применении Тз и алиментарных факторов у ТЭ гавотных и у ТЭ с Х1Т могут служить основой для использования их в регуляции метаболических и иммунологических нарушений при вторичных иммунодефнцитах.

ВЫВОДИ

1. При дефиците гормонов тимуса в органах и клетках иммунной системы, субклеточны- структурах печени происходят глубокие метаболические перестройки, предшествующие количественным и функциональным изменения.! в иммунной системе. Эти изменения носят сложный характер и тесно связаны со сроком удаления тимуса: по мере нарастания недостаточности гормонов тимуса развиваются более значительные метаболические нарушения, особенно з иммуно-ксашетентных клетках. Подученные данные о нарушениях в обмене веществ у ТЭ животных и возможности их коррекции Тз доказывают участке тимуса в регуляции метаболических процессов.

2. Наиболее ранние изменения после ТЭ (на 40-е сутки) обнаруживаются в <51 спзктро мембран клоток: повышается содержание

КЛ и ФК в гомогенатах и митохондриях печени, селезенке и лимфоцитах периферической крови, уменьшается количество СИ в селезенка, ФИ. и ФХ - в лимфоцитах. Одновременно возрастает активность фосфолипазч А£ в лимфоцитах и митохондриях печени. Нарастание недостаточности тимусных гормонов вызывает значительные перестройки ФЛ и жирнокислотном состава (снижается содержание ФХ, ФИ, ФЭ, С20:4» С20:3' С18:1' повышаются уровни ЛФХ, СФ, ФС, КЛ, ФК, С14;0 ^16:0' ♦ усиление интенсивности неферментативного и фермен-

тативного ПОЗ, возрастание активности фосфодипазы ¿2 в органах иммунной система (селезенка, костный мозг), лимфоцитах, митохондриях и микросомах печени ТЭ крыс.

3. В ранние срски после удаления тимуса Еслед за изменением структурыо-динашческих и функциональных параметров мембран (иди одновременно) снижается гликолиз, глюкснеогенез и происходит компенсаторно-приспособительное усиление вентозофосфатного пути.Эти сдвиги в период полного развития ЕИ приобретают стойкий характер.

4. Развитие ВИ сопровождается нарушением биоэнергетических процессов, снижением активности мокооксигеназной системы печени и лимфоцитов периферической крови а в значительной степени зави-

сет от возраста животных.

5. Изменение функциональной активности лизосом печени и им-мунокомпетентных клеток находится в зависимости от глубины дефицита гормонов тимуса.В ранний срэк после ТЭ (40 суток) оно выражается в активации лизосомальных Ферментов, а в отдаленные сроки и к концу эксперимента (190-е а 370-е сутки) е снижении их активности.

6. У ТЭ животных снижается содержание общего белка и глико-протеинов в органах иммунной системы (селезенка, костный мозг), общих и Т-лимфоцитах в периферической крова, печена и ее субклеточных структурах, активность ACT и АЛТ в печени, концентрация цАШ и ЦШФ в лимфоцитах периферической крови. В культуре клеток Тз параллельно с усилением экспрессии E-рецепторов Т-лимфоцитов повышает содержание гликопротеинсв их клеточной поверхности.Следовательно ТЭ приводит к снижению биосинтеза белка и метаболизма аминокислот, нарушению дифферекцировки лимфоцитов, механизмов трансмембранной передачи гормонального сигнала от гормон-рецеп-торного комплекса на зффектср^ке системы и дальнейших внутриклеточных метаболических процессов. Это язляется основными факторами, обусловливающими развитие количественного дефицита и нарушение функции иммунорегуляторных популяций Т-лимфоцитов при ВИ.

7. При хронической интоксикации, гелиотрином на фоне ТЭ и у больных X31I установлено сходство биохимических изменений в лимфоцитах и гепзтоцитах, что свидетельствует об однотипности метаболических нарушений при ЗИ различного генеза. Показано, что в условиях дефицита гормонов тимуса легко развивается хронизация патологического процесса и его утяжеление.

8. Введение ТЭ яивотным Тз в ранние сроки после операции (40, 'О, 100-е сутки) нормализует метаболические процессы, а в период годного развития ЗИ лишь оказывает положительный эффект на них. ;олее эффективное влияние оказывает Тз на метаболические наруше-ия в ишунокомпетентшх клетках. Следовательно, действие тимуса

а клеточный иммунитет осуществляется путем стимуляции обмена ве-естз и энергии в лимфоцитах. Ссчетанноз применение Тз с алшентар шли факторами восстанавливает изучаемые показатели метаболизма у 3 животных и при хроническом интоксикации гелиотрином на фоне ТЭ. з основе установленной закономерности разработан метод коррекции этабслических нарушений при Ш гормонами тимусз и алиментарными ¡кторами.

9. Тз как in vitro , так in. vivo значительно увеличива-

ет количество Е-рецепторов, содержание глжопротеинов, цАМФ и цШФ» ингибирует скорости ферментативного я нефермантативного ПОЛ, повышает активность органеллоспедафических ферментов в Т-лимфоцитах периферической крови ТЭ животных. Предварительная инкубация лимфоцитов периферической крови различными фракциями ФЛ усиливает нормализующее действие Тз на метаболические процессы. На основе этих результатов можно считать что в механизме реализации эффекта гормонов тимуса на обменные процессы необходимым условием является структурно-динамические и функциональное состояние биомембран, а мембранные эффекты этих гормонов тесно связаны с их влиянием на метаболизм мембранных липидов и белков.

10. Выявлены значительные различия в биологической активности (метаболической и иммунологической) тимозина-У и " аа-ГФГ" в зависимости от особенностей их химического состава. Введение ТЭ животным " 2а-ГФТ" способствовало нормализации активности органел-лоспацифическях ферментов, интенсивности ферментативного и нефар-ментативного ПОЛ, содержания глякопротеинов в общих и Т-лимфоцитах периферической крови. Тимогин-У проязлял менее выраженное терапевтическое действие.

11. На основе собственных результатов и анализа данных литературы сформулирована концепция о биохимических механизмах развития Ш, в соответствии с которой в патогенезе ВИ в условиях гормональной недостаточности тимуса ведущую роль играет нарушение различных ззеньев метаболизма в органах и клетках иммунной системы, печени и ее субклеточных структурах, а не отдельных метаболических процессов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЖОМЕНДЩШ

1. Доказанное настоящим исследованием положение о том, что развитие Вй при гормональной недостаточности тимуса обусловлено сочетаниями нарушениями различных звеньев метаболиз?ла в целом, а не отдельных метаболических процессов, необходимо учитывать в клинической практика при трактовка патогенеза многих заболеваний, сопровождающихся ВИ, разработке мероприятии для терапии и профилактики.

2. для успешного лечения многих заболеваний, сопровождающихся ВИ различного генеза, необходимо оценить нарушения функционально-метаболической активности общих и субпопуляции Т-лжйэци-

тоз периферической крови. В зависимости от степени этих нарушений целесообразно включать в комплекс лечебных средств гормоны тимуса и дополнительные диеты, богатые легко усвояемыми белками, жирами, углеводами.

3. В практику клинико-биохимических лабораторий в качестве дополнительных диагностических показателей предлагаются простые, не требующие дорогостоящих реактивов и аппаратуры методы определения активности ферментов различной внутриклеточной локализации

и содержания сиаловых кислот в общих и Т-диыфоцитзх периферической крови для оценки метаболической активности иммукокомпетеятных клеток при БИ различного генеза. Целесообразно одновременно определять количественные в функциональные показатели Т- и В-звеньев иммунной системы для установления уровня и степени дефицита иммунитета. Комплекс этих мероприятий позволяет дать полную функционально-метаболическую характеристику иммунокомпетентных клеток и соответственно определить тяжесть и течение Вй, разработать более эффективные методы лечения многих заболеваний.

4. Полученные результаты, характеризующие роль тимуса в метаболических процессах нэ только в органах и клетках иммунной системы, но и в других органах, в частности в печени и ее клеточных органеллах, механизмы участия его в регуляции обмена веществ и энергии, рекомендуется включить в курсы лекций по биологической химии на биологических факультетах университетов и медицинских чнетитутов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО Т3№ ДИССЕРТАЦИИ

I. Мамутов Ж.И. Влияние селвнита натрия на некоторые биохи-ические и иммунологические процессы при экспериментальном тоническом гепатите //Региональная сессия научного совета по неор-анкческой химии АН СССР, посвященная проблемам бионеорганической имии.-Фрунзе,1980,-С.86.

2. Мамутов Е.И. Аупаллергические реакции при хронических за-элеваниях органов пищеварения и их коррекция фактором тимуса // зсдубликанская научная конференция, посвященная актуальным вопро-)м краевой аллергологии в патологии детей.- Ташкент, 1985.-С. 130=-12.

3. Николаев А.И., Мамутов 2.И., Султанов Р.Г.Султанова Н.Г,, хмгнов Н.Х. Изменение динамики показателей естественной резис=

тентности больных с хроническими поражениями печени на фоне глю-кокортикостероилной терапии /Л"ед.журн.Узбекистана,1985.-й I.-С.18-21.

4. Николаева А.И., Мамутов Н.И. Получение и оценка биологической активности фактора тимуса ягнят //Доклада A4 УзССР, I98S.

S.-С.53-55. '

5. Мамутов 2.И. Влияние тимозина (фракции Ш) ягнят на яизо-coi.'u печени при вторичных иммунодефицктных состояниях /Всесоюзный симпозиум с МекЕунаролным участием "йммунодефициты и аллергия". -Москва, I98P.- G.162-163.

6. Мамутов 2.И., Хужаниязова У.Ю. Влияние гуморального фактора тимуса (тимозина) ягнят на содержание Т- и В-лимфоцитоз // "Актуальные вопросы иммунологии.-Ташкент,1Э37.-С.62-65.

7.Мамутов Ж.И., Холмухакедова Н.М., Султанхсдкаав У.Л., Му-хамедов X.G, Изменение липидного обгдана у тимэктомированных морских свинок и коррекция его фактором тимуса ягнят //Meд.¿курн.Узбеки стана, IS87.-.IS II.-G.58-61.

8. Николаев А.И., Бу.дякский М.В., Мамутов 2.И. Лизосомальные ферменты лейкоцитов и содержание Т- и В-лимфоцитов у больных хроническим гепатитом и циррозом печени //XIX Всесоюзный съезд терапевтов. -г,!., 1987. -С. 336-337.

9. Мамутов Ж.И., Мухамедов Х.С. Действие тимозина на субпопу-ляцаи лимфоцитов человека la vitro //Оценка иммунного статуса и его коррекция при различных патологических состояниях.-Ташкент, IS88.-С.60-63.

10. Мамутов Я.И. Изменение интенсивности процессов переокисления фосфолипидов митохондрий печени у тимэктомированных старых крыс. //У1 Всесоюзный съезд геронтологов и гериатров.-Киев, IS88. -C.4I0-4II.

11. Николаев А.И., Мамутов 2.И., "ноятова Ф.Х. Влияние гуморального фактора тимуса на состояние энергетического обмена у тшэктомирова.;ных крыс при старении //Узб.биол.журнал.-1988.-.К6. -О.12-15.

12. Мамутов Ж.И., Юлдашэва .Т.Н. Влияние тимозина к витаминов А и Е на активность органеллоспецифических ферментов печени и лимфоцитов икмунодефиилтных яивотных //1У Всесоюзный съезд патофизиологов.-Кишинев, 1989.-С.273.

13. Мамутов Н.й. Сравнительная оцзнка иммуностимулирующей а к-

тивности витаминов (Л и Е) в условиях гормональной недостаточности тимуса //Тез.конф."Иммунный гокеостаз в норме и патологии".-Фрунзе, 1989.-0.50-52.

14. Николаев Л.И., Мамутов Е.П., Карабанович А.К., Комарин А. С. Изменение активности микроссмальных монооксигеназ печени у тям-эктомированных крыс в зависимости от возраста и ее коррекция гуморальным фактором тимуса //Зопр,мед.химии, 1989.-Т.35.-й 4.-С.107-III.

15. Николаев А.И., Мамутов 2.И., Фазылов А.З. Функционально-метаболическая активность лимфоцитов при хронических гепатитах, циррозах печени и хроническом холецистите //Тер.архив.-1989.-й 9. -С.109-112.

18. Мамутов Ж.И. Роль тимуса в регуляции метаболизма.-Ташкент 1989.Медицина.-202 с.

17, Мамутов Ж. И. Оценка и коррекция функционально-метаболической активности лимфоцитов при хронических заболеваниях органов пищеварения //Иммунодефицита и Н1А-система: Тез.докл.республ.научной конф. -Ташкент, 1Р39.-СД18-120.

18. Мамутов Ж.И., Талимбекова Г.С. Влияние тимозина и витаминов (А и Е) на активность ферментов углеводного обмена тимэктоми-рованных крыс /Д1е д. «урн. Узбеки стана. -1989. II.-С.62-56. 19. Мамутов Е.И. Циркулирующие иммунные комплексы и активность ля-зосомалышх кислых гидролаз в сыворотке крови при хронических заболеваниях органов пищеварения //Вторичные иммунодефицитнке состо-шия (этиология, патогенез, диагностика).-Ташкент,1989,-С.84-87.

20. .Мамутов 2.И. Влияние тимозина и витаминов (А и Е) на со-[эрнэнке опаловых кислот в сыворотке крови и печени тимэктомиро-анных крыс //Узб.биол.журнал.-1990.-й 1.-С.5-7.

21. Мамутов Ж.И. Влияние тимэктомии, тимозина и алиментарных актеров на липадиый состав сыворотки кроЕИ, пэчени и селезенки рыс //Мед.курч.Узбекистана.-1990.-й 1.-С.

22. Мамутов Е.И. Влияние тимозина и алиментарных факторов на эсфолишшгый состав и интенсивность переокисления в печени,селе-гнке, костном мозге и лимфоцитах тпмэктошрованных крыс// Волр.

!д.химии.-1990.-3 2.-С.

23. .'Ламутов Е.И., Николаев А.И., Будянский М.В., Агзаыова М.Н. :малов Ж.Ы. Методы оценки состояния и коррекции метаболической и нкциональной активности лимфоцитов при вторичных иммунодефицитах

(Методические рекомендации^.-Ташкент, 1289.-14 с.

24. Акилов А.Т., Еуыашев С.Н., Мамутов Ж.И. Влияние тнмэкто-мии и тимозина на состояние естественных факторов иммунитета и показателей лейкоцитарной формулы у крыс //Узб.Биол.адрнал.-1990.

Информация о работе

Мамутов, Жангабай Искендерович
доктора медицинских наук
Москва, 1989
ВАК 03.00.04

Автореферат

Похожие работы