Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регуляция ДНК-зависимой РНК-полимеразной активности в клетках эукариот в норме и при патологии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Регуляция ДНК-зависимой РНК-полимеразной активности в клетках эукариот в норме и при патологии"

ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНСКОЙ ССР ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ имени А.В.ПАЖАДИНА

На правах рукописи

АРДУЛЛАЕВ Фикрат Ильяс оглы

УДК 547.963.32

РЕГУЛЯЦИЯ ДНК-ЗАВИСИМОЙ РНК-ПОЖМЕРАЗНОЙ АКТИВНОСТИ В МЕТКАХ ЭУКАРИОТ В НОШЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Киев - 1988

Работа выполнена в лаборатории биохимии генома Института ботаники АН Азербайджанской ССР. Часть исследований проведена в Институте биохимии Мюнхенского Университета, ФРГ.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор ГОРБАЧЕВА 1.Б.,

доктор химических наук ЛИПКИН В.М.,

доктор биологических наук ДОНЧЕНКО Г.В.

Ведущая организация - Институт молекулярной биологии АН СССР.

Защита диссертации состоится "^¡^ " 198„9г.

час. на заседании специализированного совета Д 016.07.01. при Институте биохимии им.А.В.Палладина АН УССР по адресу: 252030 Киев 30, ул. Леонтовича, 9.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан

«/¿7- 198£г.

Ученый секретарь

специализированного

совета

КИРСЕНКО О.В.

' ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

""'"'"'Актуальность проблемы» Выяснение механизмов регуляции процесса транскрипции в клетках высших организмов является одной из важнейших научно-практических проблем современного , естествознания.

В связи с этим поиск и изучение специфических и высокоэффективных регуляторов транскрипции являются обоснованными и представляют большой интерес, обусловленный как стремлением найти методологические подхода для решения фундаментальных задач, так и возможности) выявить новые перспективные препараты для лечения вирусных и онкологических заболеваний.

В этом аспекте особый интерес представляют селеносодер-жащие соединения поскольку в настоящее время достоверно установлено, что селен является необходимым микроэлементом для полноценной жизнедеятельности животного организма, а его недостаток вызывает определенные патологические изменения /Ермаков, Ковальский, 1974; Левандер, 1980, 1982; Шзмбергвр, 1983, 1985; Хогмая, 1988/.

Актуальность выявления роли селена в метаболизме клетки особенно возросла в связи с установлением обратной корреляции между некоторыми вирусными и раковыми заболеваниями и содержанием селена в организме, пищевых продуктах и окружающей срег де. Показано, что применение микроскопических количеств селена задерживает рост и развитие злокачественных новообразований, вызванных действием разных канцерогенов и онкогенных вирусов. Эти результаты настолько убедительны, что в настоящее время в некоторых странах начат выпуск и использование препаратов селена для профилактики рака /браузер, 1985; Вейсс, 1987/. Механизм антиканцерогенного и антивирусного действия селена до конца еще не выяснен, хотя были высказаны различные гипотезы, в которых противоопухолевый эффект производных селена связывают с гос антиоксидантниш свойствами, способностью изменять метаболизм химических канцерогенов, влиять на постинициационные превращения, усиливать имунную реакцию, инги-1 бировать клеточную пролиферацию, синтез макромолекул, активность некоторых ферментов /Гриффин и др., 1978, 1979; Томеоя

и др., 1980, 1983; Мильнер и др., 1981, 1982; Левандер, 1980, 1982; Шамбергер, 1983, 1985; Френкель и др., 1985, 1986,1987, 1988/.

г*

Несмотря на имеющиеся данные о влиянии селенсодержащих ■соединений на синтез ДНК, РНК и белка /Штудман и др., 1973, 1975; Абдуллаев и др., .1976; Гриенведел и др., 1979; Хогверг я др., 1979; Медина и др., 1984; Снайдер, 1987; Френкель и др., 1986, 1987, 1988/ биохимический механизм действия селена на биосинтез этих макромолекул остается пока невыясненным.

Исследования в этом направлении являются весьма перспективными, так как позволят с одной стороны - внести весьма значительна вклад в понимание молекулярного механизма действия селена на метаболические процессы в клетках высших организмов, а с другой - определить новые пути к более эффективному использованию соединений селена при лечении некоторых заболеваний и создать теоретические предпосылка для синтеза новых препаратов с заданными терапевтическими свойствами.

Цель и задачи исследований. Исследование характера распределения и внутриклеточной локализации селена в различных органах и тканях животных и механизма воздействия биологически активных соединений селена in vivo и ia vitro на биосинтез рибонуклеиновых кислот в эукариотических и прокариотических клетках в норме и при некоторых патологических изменениях. Выполнение поставленной цели предопределило экспериментальное решение следующих аадач:

- изучить распределение и локализацию селена в органах, субклеточных фракциях и биомакромолекулах экспериментальных животных,

- выявить влияние селена на синтез рибонуклеиновых кислот в клетках высших организмов,

- исследовать влияние селена на синтез рибонуклеиновых кислот в изолированных ядрах эукариотических клеток,

- выяснить характер и механизм действия селена на активность ДНК-зависимых РНК-полимераз,

- изучить влияние селена на РНК-синтезирутацую систему в опухолевых' и зараженных вирусом клетках,

- выявить характер действия селена на активность про-кариотлческой ДНК-зависимой РНК-полимеразы.

Научная новизна работы. В результате детального изучения характера включения и распределения селена в разных органах, тканях, субклеточных фракциях и биомакромолекулах экспериментальных животных показана высокая метаболическая активность этого микроэлемента. Наибольшее включение селена происходило в печень, почки, кровь и белки.

Выявлено, что эффективность действия селенссдергаащих соединений на синтез рибонуклеиновых кислот в эукарлотичес-ких метках определяется валентным состоянием селена. Наибольший ингябируюцйй эффект :га синтез рибонуклеиновых кислот наблюдался при действии четырехвалентных соединений селена.

В результате проведенных на органязменяом, меточном, субклеточном, молекулярном уровнях исследований впервые установлена регуляторная функция селена, проявляющаяся в избирательном :штт1ироЕанш1 транскрипции рибосомальных генов в клетках в;гс>:.пх организмов в норме и при патологии.

Устанонтено, что селен специфически подавляет активность ДНК-зависимой PIEÎ-полимеразы I в результате прямого взаимодействия селена с молекулой фермента с образованием через се-ленотрисульфидную ковалентную связь стабильного солэпополиме-разного продукта.

Обнаружен ингибнругаидеи эффект производных селена на син-тоз нуклеиновых кислот в опухолевых клетках и сформулирована концепция, о механизме антиканцерогенного действия селена, в основе" которого лежит избирательное итерирование селеном повышенной в опухолевых клетках активности РНК-полимеразы I.

Показано усиление ингибирутвдего действия селена в сочетают с изпостнымя антивирусными хишгопрепаратами на репродукция вируса гриппа, которое преимущественно осуществляется на уровне вирусной транскриптазн.

Установлен шггибируйщй эффект се лона кя активность бак-тзриллыюй ДИК-завпсчмой ШК-лол;шергзц.

Подученные результаты об инглбирующем действии производных селена на ДНК-зависимую РНК-полимеразу I в клетках высших организмов животного и растительного происхождения, в одухолевых /карцинома Эрлиха, карцинома яичника человека, лим^олейкоз 1 1210/ и зараженных вирусом гриппа клетках, а также в бактериальных клетках являются экспериментальным доказательством универсального характера /отличия отмечены только в концентрации ингибитора/ действия селена на синтез рибонуклеиновых кислот в клетках про- и эукариотических организмов и существования общего механизма ингибирования • селеном активности ферментов, катализирующих в клетках процесс транскрипции.

Натчно-пграктическое значение работы.Установленный эффект избирательного ингибирующего действия селена на синтез рибосомальной рибонуклеиновой кислоты позволил разработать способ, в котором использование селеносодержащих соединений в. качестве специфических и высокоэффективных регуляторов транскрипции позволяют решить ряд фундаментальных задач по выяснению механизмов контроля и регуляции биосинтеза рибонуклеиновых кислот в клетках высших организмов.

Полученные результаты об избирательном ингибировании селеном активности ДНК-зазисимой РНК-полимеразы I в клетках эукариотических организмов в норме и при патологии могут служить научно-теоретическим обоснованием для поиска и целенаправленного синтеза селеносодержащях препаратов с целью практического применения их при лечении некоторых опухолевых и вирусных заболеваний.

Атюбахтая работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуздены на научных семинарах Института физики АН Азерб.ССР, 1975-1976; Института молекулярной биологии АН СССР, 1976; Сектора молекулярной биологии и молекулярной генетики Научного центра биологически исследований АН Азерб.ССР, .1978, -1981; на П Совотско-занадногерманс-ком симпозиуме "Структура и функция генома", Пэду, 1977; на заседаниях Прозидиут ЛИ Азерб.ССР, 1970, 1981; на 17 Всесоюзном биохимическом съезде, Ленинград, аУ7Э: на Всесоюзном

симпозиуме "Макромолекулы клетки", Москва, 1979; на У Всесоюзном симпозиуме по химии, физике белков и пептидов, Баку, 1980; на научной сессии по экспериментальному мутагенезу, Баку, 1980; на Л1 Менделеевском съезде по общей и прикладной химия, Баку, 1981; на 17 Советско-западногерманском симпозиуме "Структура и тарнскрипция генома", Ереван,1982; на научннх семинарах Институтов биохимии 1йонхенского университета, молекулярной генетики Гейдельдерского и Кельнского университетов, ФРГ, 1982; на 17 съезде ВОГИС им.Н.И.Вавилова, Кишинев, 1984; на 31 научной конференции Института вирусолопш, микробиологии я гигиена Ш Азерб.ССР, Баку, 1984; на Всесоюзном сшлгозиут.'е по химии и биологии органических соединений селена, Иркутск, 1984; на ХУ и ХУ1 конференциях ФЕБО, Брюссель, 1983, Москва, 1984; на УШ объединенном симпозиуме биотических обществ СССР и ГДР "Проблемы современной биохимии и биотехнологии", Rira, 1985; на XI7 Иелдународаом биохимическом конгрессе, Прага, 1988.

Публикации .По материалам диссертации опубликована 31 печатная работа и получено 2 авторских свидетельства на изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 7 глав, в которых рассмотрены литературные данные и результата собственных исследований, заключения, выводов и перечня цитируемой литератур*. Общий объем S-'// г гранта. . машинописи. Работа содержит Ç-? таблиц, t}'£ рисункеёч 585 библиографических источников.

Объекты и методы исследования. В работе применялись следующие соединения селена: неорганические коммерческий соединения - селена?, селенит, кислый селегатстокислый натрий и органическое соединение селена - селенол, синтезированное в ИТПХТ АН Азерб.ССР в лаборатории д.х.н. Мамедова ЭАШ.. Объектами исследования случпли белые беспородные крысы и мыши, зародили костистой рнбы - вьюна, зародыши птаетшы, культура клеток фибробластон куриных эмбрионов /ЗЭК/, культура клеток карциномы яичника человека /Ср.ог /, асцитше кдотки карт««»*? Ярдцха и л;га;,юлзйко?а ЫЯ10, 'клетки ФЭК,

зараженные вирусом гриппа А.'В экспериментах с зародышами выэна: икру получали, оплодотворяли, инкубировали, определяли стадии развития по Нейфаху, IS54, бластодермы от желтка отделяли по Айтхожину и др., 1964, В опытах ia vivo инкубацию зародышей вьюна с 3-Н-урвдином /у.а.=20 щсК/мл/ проводили по Стрелкову и др., 1975, дальнейшую обработку проб проводили по Шшдг-Таягаузеру, 1945, с небольшой модификацией. Эффективность включения и перехода метки в кислото-растворшдую фракцию /КР5/ и нукпеотиды /НТР/ определяли по Ивесу и др., 1969. Модельные опыты на изолированных ядрах зародышей вьюна в басклаточной системе синтеза РНК прово-дищ по Кафиада и др., 1973, В экспериментах с крысами in vivo в разные сроки до декалитации животным вводили водные растворы селеносодеркащих соединений /доза введенного вещества варьировала от 0,1 до I мг на кг жив./. Количественное определение тотальной РЖ проводили по Шмидт-Тангаузеру в модификации Спирина, 1968. Выделение нативных препаратов нуклеиновых кислот проводили фенольнодетергентным методом Георги-ева и др,, 1968. Нативнне препараты ядер получали по Бло-бвлю и Поттеру, 1966, рибооом - по Молдаве-Скагкрсону, 1967. Выделение, очистку и определение ферментативной активности проводили из печени крыс - по Родеру и Руттеру, 1970, из лиадфозшх клеток по Воровскому и др., 1978, из зародышей пшеницы - по Ендразаку и др., 1979, 1981, из бактериальных клеток - по Чемйерлйну и Др., 1974,

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУВДЕНИЕ

Имеющиеся в литературе данные о распределении и локализации селена в организме разных животных /Ермаков, Ковальский, 1974} Левандер, 1980} Белыдтейн и др., 1985, 1986/ носят противоречивый характер, что, возможно, связано с использованием разных соединений селена, способов их вве-

дения, видов и возраста животных, а также различных методов измерения радиоактивности.

Для изучения характера включения, распределения и локализации селена в организме подоштных животных в условиях Наших экспериментов, крысам внутриброшинно вводили в разные сроки до декалитации водный раствор "^Зо -селената натрия из'расчета 4-6 мкК/животиое. Наибольшим содержанием селена во всех вариантах опыта отличались печень, почки и кровь подопытных животных /табл. I/.

Распределение селена в субклеточных фракциях происходило следующим образом: в вдернув фракцию включалось 20-25$, а в постъядерную фракцию - 74-80$ радиоактивного селена. Включение метки отмечено в КРФ, липиды, нуклеотиды, нуклеиновые кислоты и белки. Наибольшее включение селена наблюдали в белках /табл. 2/.

Изучение характера распределения селена в органах, субклеточных фракциях и биомакромолекулах у крыс разного возраста показало, что включение метки у молодых животных по всем показателям выше, чем у более взрослых крыс.

Подученные результаты, благодаря применения соединения с высокой удельной радиоактивностью и современных методов измерения радиоактивности, дали достогрнуго картину включения, распределения и локализации селена в органах, субклеточных фракциях и биомакромолекулах подопытных животных, а также свидетельствовали о высокой метаболической активности этого микроэлемента в организме.

2. Влияние селена на синтез рибонуклеиновых кислот в полостных клетках животных

В работах ряда авторов было показано, что соединения селена оказывают влияние на биосинтез нуклеиновых кислот и белка /Маутнер и др., 1961, 1966; Мак-Конель и др., 1972, 1974; Штудман и др., 1973, 1975; Накамуро и др., 1976; Ле-вандер, 1980; Штадмзн и др., 1985, 1984; Иамбергер, 1985; Френкель и др., 1985, 1986, 1987/, но прямых доказательств о мспалипмо действия селена на эти процесса! приведено не било.

Таблица I.

Распределение Зе -селена в разных органах крыс в различные интервалы времени после введения вещества ( часы, М та ,п.=10).

Орган Включение метки имп/мин/г. ткани х!0^

2-3 8-9 18-19 24-26 '

Печень 220,8 ± 42,8 197,6 ± 36,5 172,7 ± 32,а 158,2 ± 32,3

Почки 141,3 ± 33,6 160,0 ±'33,2 140,2 ± 27,2 79,1 ± 26,1

Кровь 117,0 ± 29,4 51,4 ± 23,8 44,6 ± 16,7 37,9 ± 18,7

Сердце 68,4 ± 25,5 22,7 ± 12,1 19,8 ± 10,4 19,5 ± 5,8

Легки! ' 62,0 ± 24,1 . 49,4 ± 16,4 42,4 ± 13,9 27,9 ± 14,3

Селезенка 44,1 ± 18,3 29,6 ± 14,8 24,7 ± 13,6 20,4 ±. 11,8

7е)

Включение £е -селена в субклеточные фракции и биомакромолекулы органов крыс. ( М -д , п =5 ).

Таблица 2.

о

Орган Вес Включение метки имп/мин/г. ткани хЮ

органа (г)__________

т.,и ядерная потъядернал

°Рган фракция фракция КРФ Липиды РНК ДНК Белок

Печень 9,9*1,1 172,8*32,8 43,2*12,1 129,6*28,7 20,8*6,7 27,0*8,9 2,5*0,6 3,2+1,4 41,5*12,0

Почки 1,6* 0,2 140,2*27,2 26,1*9,4 104,1*23,8 19,3*3,6 8,9*3,2 5,5*0,9 6,6*2,8 49,1*18,5

Селезен- х^+о.г 20,7*8,3 7,2±1,9 21,5*8,4 6,3*3,0 3,0*1,2 1,2*0,9 0,6*0,2- 4,3^0,9

Сердце 0,9*0,05 20,8*3,8 5,4±1,1 15,4*7,8 2,4*0,8 2,9=0,9 1,9*0,7 0,9*0,1 3,1*0,3

г

На рис. I /а/ приведены кинетические кривые, характеризующие зависимость содержания тотальной РНК в печени крыс от дозы введенного вещества. Видно, что с увеличением дозы введенного вещества содержание тотальной РНК в клетках печени крыс по сравнению с контролем уменьшается. Наиболее заметное снижение этого показателя отмечено при действии селенита натрия. Для дальнейших экспериментов с крысами была выбрана доза вещества 0,5 мг/кг массы животного. Сравнительный анализ показал, что при действии соединений селена уменьшение в содержании тотальной РНК, в основном, происходит за счет высокополимерной фракции. Это позволило предположить с ингибирубщем эффекте селена на синтез рибосомалъ-ной РНК. Было установлено, что соединения селена снижают уровень содержания рибосомальной РНК в печени крыс. Наиболее заметное уменьшение наблюдали при действии селенита натрия /рис. 1,6/.

Результаты опытов по влияний селенсодержавдх соединений на уровень включения ^Н-уридина в КР5, свободные нуклеотиды и РНК зародышей выона на различных стадиях развития показали, что эти соединения ингибируют включение метки в нуклеотида и РНК. При этом на ранних стадиях процесс икгибировалия выражен слабее, чем на более поздних стадиях развития. Наибольший ингибирующий эффект наблюдали при действии селенита натрия на стадии гаструлц, когда в зародышах вьюна по данным Нейфа-ха и др., 1977; Кафиани а др., 1878, происходит синтез, преимущественно, рибосомальной РЖ.

Кинетический анализ включения 3Н-уридина в РНК зародышей в иона на стадии гаструлы в зависимости от времени инкубации показал, что при всех сроках инкубации селенит натрия инги-бнруег включение предшественника в РНК /рис.2/. Селенит натрия оказывает ингибирующее действие на синтез РНК в зародышах вьюна, начиная с концентрации 10 йМ /табл. 3/. Аналогичное действие на синтез РНК в зародышах выона, но с меньшей эффективностью, оказывали и другие селенсодержащие соединения.

ТдДдида 3

Включение %-уридина в Р1К зародышей вызяа на стадии гаструлц под зл/днием селенита натрия /М£а ,п =5, Т=60 мин/

Концентрация селенита натрия Мм

Включение метки

в РНК имп/мин/зародыш

Соотношение радаоактив.РНК на радиоактив. нуклеотвдов

Степень ШГГИбирО-

вания %

Контроль 10 20 40

3400 + 408,1 2160 + 454,6 970 + 126,1 570 + 103,5

4,8 3,6 2,8 2,4

25 41 50

Анализ полученных результатов исследований икгибируто-щего действия селенсодержадих соединений на содержание и синтез РНК в клетках животных позволяет предположить, что селен /наиболее аффективным действием обладали четырехвалентные соединения селена/ в клетках высших организмов оказывает избирательное ингибирутащее действие на синтез пибо-сомальной РНК.

3. Действие селена н^ РНК-полицеразную активность ' изолированных ядер эукашогических клеток

Исследования с использованием модельной бесклеточной системы синтеза РНК на изолированных ядрах зародышей вьюна, в которой возможно дифференцировать влияние экзогенных факторов на активность разных форм ДНК-зависимой РНК-полимера-зы, показали, что селенит натрия оказывает шгибирущее действие на активность РНК-полимеразы I ядер зародышей вьюна на всех изучаемых стадиях развития и почти не влияет на активность РНК-полимеразы П. Установлено, что селенит натрия обнаруживает такую ке высокую степень избирательности ингибиро-вания активность РНК-полимеразы I в ядрах зародышей вьюна как и '-< -аманитин по отношении к РНК-полимеразо П /табл. 4/.

Кинетические кривые /рис. 3/ зависимости включения метки в РНК, в условиях оптимальных для проявления активности ШК-полимаразы I /кривая I/ и РНК-полимеразы П /кривая 2/, ядер зародышей вьюна на стадии гаструлы от наличия в реакционной среде различных концентраций селенита натрия показали, что с увеличением концентрации селенита натрия включение метки в продукт, синтезируемый I формой фермента, экспоненциально снижается, в то время как внесение в среду, в которой проявляется активность РНК-полимеразы П, еысоких концентраций ингибитора не оказывает заметного влияния на включение метки в синтезируемый продукт.

_Эксперименты in vitro с применением метода двойной метет /•^С-иТР и 32Р-АТР/ показали, что ингибирующее действие -i-аманитина на активность РНК-полимеразы П и селенита натрия на активность FHK-полимеразы I в ядрах зародышей в кона направлено, преимущественно, на включение *4С->-1ТР в РНК /табл. 5/, Это свидетельствует о действии обоих ингибиторов на элонгацию вновь синтезируемых цепей РЖ.

Избирательный ингябирубщй эффект селенита натрия на активность РНК-полимеразы I установлен и в опытах in vitro с ядрами печени крыс /табл. 4, рис. 5/.

Таким образом результаты изучения влияния селенита натрия на активность разных форм ДНК-зависимой РНК-псишмеразы в ядрах животных клеток in vitrono:ca3ajni, что селен избирательно ингибирует активность РНК-полимеразы I, катализирующей в клетках синтез р-РНК, Установлено, что ингибирующее действие селена направлено на элонгацию новосинтезируемых гепей РНК.

Полученные в экспериментах с изолированными ядрами животных клеток результаты подтверждают наши данные in vivo об избирательном ингибировании селеном синтеза р-РНК в клетках высших организмов.

4. рлияние селена на активность очищенных препаратов ДНК-зависимых РНК-гтолимеоаз высших организмов

Для изучения влияния селенита натрия на синтез РНК в модельной системе использовали очищенные из клеток высших

Рис. I. Содержание тотальной (а) и рибосомальной РНК (б) в клетках печени крыс при введения животным селенсодержащих соединений. ( М - ш , п -5 ).

Обозначения: (а)- I- органическое соедкнение-селенол, 2- кис.шй селенистокислый натрий, 3- селенит натрия.

(б)- К-контроль, I- селенат натрия, 2- селенит натрия, 3- кислый селенистокислый натрий, 4- органическое соединение - селенол.

организмов препараты ДНК-зависимой РНК-лолимеразы I и П и ДНК. Результаты очистки ферментов из печени крысы и зародышей пшеница свидетельствуют о том, что полученные белковые пики достаточно гомогенны и по ферментативной активности соответствуют РНК-полимеразам I к П.

Установлено, что активность FHK-полимераза I из печени крыс ингибируется селенитом натрия при более низких концентрациях /50$ ингибирования происходит при действии 500 мкМ селенита натрия/, чем активность РНК-полиморазы П /рис. 4/.

Аналогичный ингибирующий эффект наблюдался и в экспериментах in vi tro с очищенными препаратами ферментов зародышей пшещшу.

Результаты оштов с преинкубацией препаратов фнрмэнтов и ДНК с селенитом натрия показали, что наиболее чувствительным звеном в зукариотической транскрипционной системе к действию, селена является сам фермент, независимо от его происхождения. Эксперимгнты, в которых были исследованы УФ-спектры с компонентами инкубационной среды /бинарные смеси ДНК-селенит натрия, фермент-селенит натрия, ДТТ-селенит натрия, глутатион-селенит натрия и другие/, показали, что характерные полосы поглощения в области 260 и 275 нм наблюдались лишь в случае ДТТ и глутатиона. В соответствии с данными Пэинтера, 1941; Гантера и др., 1968; эти полосы могут быть отнесены к продуктам взаимодействия селенита натрия с соединениями, содержащими сульфгидрильные или тиоэфирные группы. В случае ДТТ и глутатиона эти химические взаимодействия могут быть представлены реакциями:

4 GSH

GSSG

-S-S-

Ua2Se03 "H¡0 KagSeO^

н2о Н.,0

G-SSeS-K

G-SSe3

-SSeS-

+G33G

Одним из вероятных механизмов ингибиругацего действия авлена на ферменты транскрипции может быть механизм, пред-

с

Таблица 4.

Активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы I и П ядер эукариотических клеток при действии ингибиторов (Mim , п=5) в условиях in vitro -

Условия опыта

Активность, в имп/мин/ЮО миг ДИК

I форма

П форма

печень крысы зародаши пшеницы печень крысы зародшпи пшеницы

Контроль

1900 + 251,1 3900 + 460,1 2100 + 280,4 4200 + 400,2

+ <х-шланитин (0,5 мкг/пробу) 1750 + 102,3

3700 ± 171,2 400 + 58,1

1200 + 400,1

+ селенит натрия

(8 мМ) 850 + 101,4

I4D0 + 290,6 1750 + 300,1 4200 + 402,4

+ «-аманитик

(0,5 ыкг/пробу)

+ селенит натрия (8 ыМ) 800 + 60,9

1400 + 290,6 220 + 40,4 1050 + 150,1

Таблица 5.

ДНК-зависимая РНК-полимеразная активность ядер зародышей вьюна при действии ингибиторов (Т=60 мин., при 21°, М±ш , п=5).

Включение метки имп/мин/ЮО мкг ДНК Соотношение

■1Д опыта С ¿¡¿р 14с/32р

I форма П форма I форма Д форма I форма П форма

Контроль 400 ±45,1 750 ± 81,4 6300 ±354,2 3200 ±281,6 0,063 0,23

+ ¿-аыанитин (0,5 мкг/пробу) 550 ±62,3 190 ± 25,£ 7100 ±486,1 3200 ±264,5 0,076 0,06

+ селенит натрия (4 мМ) 150 ±15,1 750 ± 80,4 6300 ±501,4 3100 ±196,1 0,023 0,29

о

30 60 90 . 120 ' "О1*

Рис.2. Включение ^Н-уридина в РНК зародышей вьюна на стадии гаструлы с учетом внедрения метки в свободные нуклеотиды ( М - ш , п= 5 )•

Обозначения: I- контроль, 2- в присутствии 40 мМ селенита натрия.

J_L

8

мМ

Рис.3. FHK-пшшиерааная активность ядер зародышей вьюна на стадии гаструлы in vitro при разлизных концентрациях селенита натрия (м ± n, п=5 ) Обозначения: I- РпК-полимераза 1,

2- РНК-полимераза П.

Сч

к Z

о о

х ж 2

см . о

?

о

ш

К X

О)

г?

б >=! К

аз

24 г

20

16

12

8 .

<4

Л_L

О

8

мМ

S

ёг

с. к 5

о о

£

—

с

п

о

I 2

со

О)

5

о ?г £ К X CQ

Л-J-

12 16

32

Рис.4. РШ-полимеразная активность ядер печени крыс in vitro при различных концентрациях селенита натрия. ( и t m, n = 5 )•

Обозначения: I- РНК-полимераза I, 2- РНК-полимераза П.

Рис.6. Активность ДНК-зависимой РНл-по-

лимеразы I и П клеток лимфолейяе-

за L I2I0in vitro при раз.'п;';-ных концентрациях селенита ¡¡атрия. ( м - т, п-. 5 ) .

Обозначения: I- РНК-полккераза 1,

2- РНК-полимераза н

полагающий замещение сульфгидрильных групп энзима селено-трисульфидной группой ингибитора /Гантер и др., 1969/:

+Зе'1н---^ +2Ш1

Показано, что влияние селена на активность РНК-полиме-зы связано с взаимодействием его с ^Н-группами фермента, а результате которых образуется стабильной селенополимераз-ный продукт.

Показано, что селенотрисульфзды, образованные в результате реакции селенита натрия с сульфгидрилышми соединениями, легче взаимодействуют с ферментом /Френкель и др., 1987/.

Таким образом, результаты изучения влияния соединений селена на активность очищенных препаратов эукариотических ферментов в модельной транскрипционной системе подтвердили наше предположение о том, что селен избирательно ингибирует активность РНК-полимеразы I. Определен механизм ингибирова-ния селеном активности фермента, катализирующего в эукариотических клетках синтез р-РНК. Показано, что подавление синтеза РНК происходит, преимущественно, на стадии элонгации новосинтезируешх цепей РНК.

5. Действие селена на ДНК-зависимто РНК-полимеразыто активность в опухолевых клетках

В последнее время изучению свойств РНК-синтезирующей системы в опухолевых клетках уделяется большое внимание. Это связано с тем, что выяснение молекулярных механизмов нарушений в транскрипционной системе этих клеток может сыграть важную роль в регуляции экспрессии генов при дифференцировке и раке.

В литературе имеются данные об использовании соединений селена в качестве химиотерапевтических препаратов при лечении опухолевых заболеваний /Ермаков, Ковальский, 1974; Кудрин, 1975; Шамбергер, 1983, 1985/. Недавно появилось сообщение,что фармакологическая промашленность ФРГ выпускает новое синтетическое соединение "Эбселен", обладающее радиопротекторными и

противовоспалительными свойствами /Вейсс, 1987/.

Сравнительный анализ активностей разных форм ДНК-зависимых РНК-полимераз в нормальных и опухолевых клетках показал, что активность РНК-полимеразы I при некоторых формах рака существенно выше по сравнению с другими формами фермента /Веровский и др., 1978; Блалр, 1982, 1984, 1985/'.

Результаты наших экспериментов с асцитными клетками карциномы Эрлиха показали, что селенит натрия в нетоксических концентрациях оказывает ингибирующее действие на активность РНК-полимеразы I в ядрах опухолевых клеток in vitro и практически не влияет на активность РНК-полимеразы П. Сравнительный анализ позволил установить, что селенит натрия в ядрах опухолевых клеток оказывает такое же избирательное ингибирующее действие на активность РНК полимеразы I, какое -аманитин оказывает на активность РНК-полимеразы П. Кинетические кривые рис. 6 отражают результаты исследования влияния селенита натрия на активность очищенных из клеток лимфолейкоза L 1210 препаратов ДЖ-зависимой РНК-полимеразы I и П in vitro , при низких концентрациях селенита натрия подавляется активность РНК-полимеразы I, а активность П формы фермента практически не изменяется.

В экспериментах с клеткаш карциномы яичника человека была определена цитогоксическач активность различнгх соединений селена. Установлено, что наибольшей активностью обладают четырехвалентные соединения селена /табл. 6/.

Результаты проведенных исследований позволили установить, что селенсодеркащие соединения /наиболее эффективным действием обладал селенит натрия/ ингибирует синтез нуклеиновых кислот в опухолевых клетках. Показано, что селенит натрия избирательно ингибирует активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы I в клетках разных типов опухолей.

Наши результаты позже получили подтверждение в работах американских ученых, которые показали, что селенит натрия ингибирует синтез нуклеиновых кислот в клетках не Ln. Инги-бирование активности ДНК- и РНК-полимераз клеток н<> La как и в наших экспериментах связано о образованием через селено-

Рис.5. Активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы П (а) и РНК-полимеразы I (б) печени крыс in vitro при различных концентрациях селенита натрия. ( М - т, п=5 ).

трисульфидаую ковалентную связь селенополимеразного продукта /Френкель и др., 1986, 1987; Медина и др., 1986/.

Таблица 6

Концентрации селеносодержащих соединений, вызывающе снижение включение 3Н-тимидана и %-уридина в нуклеиновые кислоты клеток Cao»' на 50% /М+ ш, п=5/

Соединение СЕ50 МКГ/МЛ

%-тимидин %-ушдин

Селенит натрия 2,6 ± 0,3 17,5 + 2,6

Кислый селенисто-кислый натрий 4,2 + 1,2 14,2 + 4,0

Селенат натрия 60,0 £ 4,4 500

Селенол 27,0 £ 3,9 300

На основе полученных экспериментальных данных разработана концепция о биохимическом механизме действия селена в регуляции процесса транскрипции в клетках высших организмов и обосновано предположение о том, что антиканцерогенный эффект селена может быть также связан с его избирательным ингибируювдщ действием на повышенную в опухолевых клетках активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы I.

6. Влияние селена на РНК-полимеюазную активность в клетках, зараженных вирусом гриппа

В последнее время внимание исследователей, занимающихся поиском и изучением новых эффективных противовирусных препаратов, привлекли ееленсодержащие соединения. Противовирусная активность селена /Оксфорд, 1973, 1975; Мансоор и др., 1980; Лазымова и др., 1987/ открывает переспективу для-использования селеносодержащих соединений в химиотерапии и хишоггрофилакгике вирусных инфекций.

Изучение токсичности и протипорусной активности селенита натрия и селенола, как в отдельности, так и в сочеташи

с ремантадином и рибавирином /опиты проводили на куриных эмбрионах и кулиуре клеток фибробластов куриных эмбрионов/ показали, что селенит натрия обладал более высокой токсичностью, чем селенол, а при комбинированном применении селенита натрия и известных аятигрштозшх препаратов наблюдалось усиление антивирусного эффекта, которое носило синер-гидный характер действия.

Результаты изучения противовирусной активности селенита натрия при экспериментальной гриппозной инфекции также показали, что добавление препарата в питьевую воду мышам обеспечивало защитный эффект на 20-25$. Характер динамики накопления селена в разных органах дает основание предположить, что наблюдаемый противовирусный эффект у мышей связан с вы-, соким содержашем этого микроэлемента в легких.

Серия экспериментов на культуре клеток ФЭК и в бесклеточной системе синтеза РНК, в которой в качестве источника фермента использовали суспензию очищенного вируса, было показано, что селенит натрия подавляет синтез РНК, ингибируя при этом активность РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса гриппа /рис. 7/. Селенит натрия, особенно выражено при комбинации с ремантадином, также подавлял синтез вирусспецнфических белков в зараженных вирусом гриппа клетках ФЭК с восстановлением при этом синтеза клеточных белков.

Анализ собственных результатов и данных литературы /Хо-Петерс и др., "1970; Кирси и др., 1981; Балански и др., 1983; Унтинг и др., 1984/ позволил установить, что ведущим звеном в репликативном цикле вируса гриппа А для ингибирующего действия селена являются процессы транскрипции и трвдсляции. Результаты этих исследований дают теоретические предпосылки для создания новых средств для борьбы с гриппозной инфекцией и указывают на преимущество применения комбинированной химиотерапии.

7. Действие селена на активность бактешальной ДНК-зависимой РНК-долимеразы

Для изучения характера действия селенита натрия на активность РНК-полимеразы, катализирующей в бактериальных клетках -

24 20.,

а а

ю

с\г

IG

12

CD В*

I I -Г——————О— Ц_1

о 5 10 го мест/мл

Рис.7. Активность РНК-завясимой РНК-полшаеразы вируса гриппа in vitro Пр2 различных концентрациях селенита натрия /М+m , а =5/.

О 5 10 15 20 Î,&

Рис.8. Активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы Е. сои in vitro щ® различных концентрациях селенита натрия /М+т , п =5/.

о

транскрипцию была использована модальная система синтеза РНК на очищенных препаратах ДНК и фермента из E.coli. Установлено, что с увеличением концентрации селенита натрия в инкубационной среде происходит снижение активности РНК-полимеразы /рис. 8/. Эксперименты с иреитсубацкей ДНК и РНК-полимеразы при разных условиях показали, что ингибирование синтеза РНК в бактериальной системе in vitro происходит в результате прямого взаимодействия селена с молекулой фермента. В присутствии сульфгвдрильных соединений типа ДТТ или меркаптоэтанол химическое взаимодействие селена с FHK-полимеразой происходит намного легче и при этом, как и в случае эукариотической полимеразы образуется стабильный се-ланополимеразный продукт.

Обобщая полученные экспериментальные данные о действии селена на РНК-синтезирующую систецу в различных эукариоти-ческих клетках животного и растительного происхоздения, в опухолевых и зараженных вирусом гриппа клеисах, а также в бактериальных клетках можно отметить универсальность шгги-бирующего действия селена на активность ферментов транскрипции /рис. 9/. Во всех исследованных системах селенит натрия иягибировал активность РНК-полимеразы, ■ так, в случае эукарио-тов низкие концентрации селенита натрия избирательно ингиби-ровали активность РНК-полимеразы I, для подавления активности этого фермента из патологических клеток требовалась более низкая концентрация ингибитора, а для ингибировашш активности бактериального фермента необходимо было присутствие высоких концентраций селенита натрия. Разная чувствительность этих ферментов к ингибирующему действию селена, возможно, связана с топографией SH-групп в молекуле фермента по отношению к его активному центру. Присутствие в реакционной среде эндо- или экзогенных сульфгидрилыщх соединений облегчает химическое взаимодействие селена с молекулой фермента. Внедрение селена в молекулу РНК-полимеразы изменяет конформацион-нуга структуру и вызывает потерю ферментативной активности.

Рис.9. Активность РНК-полимераз про- и эукариотических клеток в норме и при патологии при действии различных концентраций селенита натрия in vitro.

Обозначения: I- РНК-полшераза I лимфолейкоза l 1210, 2- РНК-полимераза вируса гриппа, 3- PriK-полимераза I печени крыс, 4- РНК-полимераза I зародышей пшеницы, 5- РНК-полиыераза 2. coli.

fflBOffl

1. Изучен характер распределения селена в организме /разных органах, ядерной, постядерной фракции, КР£, лиш-дах, РНК, ДНК и белках/ подопытных животных. Наибольшее включение радиоактивного селена происходит в печень, постядерную фракцию, липиды и белки, что, возможно, свидетельствует о высокой метаболической активности селена в клетках высших организмов. Незначительное включение селена наблюдалось и

в нуклеиновые кислоты.

2. Выявлено избирательное ингибирующее действие селена на активность РНК-полимеразы I. Получены как в опытах in vivo так и разных бесклегочннх системах синтеза РНК /изолированные ядра животных и опухолевых клеток, очищенные препараты РНК-полимераз из животных, растительных, опухолевых и Ьи-русных клеток/ экспериментальные доказательства существования возможных общих механизмов ингибнровшшя селеном синтеза р-РНК в клетках высших организмов в норме и при патологии.

3. Впервые на организменном, клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях установлена регуляторная функция селена, проявляющаяся в избирательном ингибировании транскрипции р-генов в клетках высших организмов. Наибольшим ингибирующим эффектом на синтез РНК обладала четырехвалентные соединения селена. Доказан универсальный характер действия селена на процесс транскрипции в клетках про- и эукариотических организмов.

4. Установлено, что избирательное ингибирующее действие селена, независимо от источника получения фермента, на активность РНК-полимеразы 1 связано с образованием через селено-трисульфидную ковалэнтную связь стабильного селено-полимеразного продукта. Конформационные изменения в структуре белка вызывают потерю его ферментативной активности. Ингибирование синтеза РНК происходит, преимущественно, на стадии элонгации. Показано на основании кинетического анализа ингибиторного эффекта, что подавление селеном активности РНК-полимеразы I

in vitro усиливается в присутствии сульфида идрильшх соедине-

кий. Это связано с образованием в результате реакции селенита натрия и тиолов селенотрисульфидов, которые, видимо, легче реагируют с s Н-группами фермента.

5. Все испытанные соединения селена оказывали ингибирую-щее действие на синтез нуклеиновых кислот в опухолевых клетках, наиболее эффективное действие оказывали четырехвалентные соединения селена.

Установлено, что селен избирательно ингибирует активность РНК-полимеразы I в модельной системе синтеза РНК на изолированных ядрах и очищенных препаратах ферментов из асцитных клеток карциномы Эржха и лимфолейкоза ь 1210. Сопоставление данных об опухолевоспевдфической активации РНК-полимеразы I при некоторых формах рака и инигибирущем эффекте селена на частоту возникновения, рост и развитие опухоли с полученными результатами об избирательном подавлении селеном активности РНК-полимеразы I позволило сформулировать концепцию о механизме антиканцерогенного действия селена, связанного со специфическим ингибированием повышенной в опухолевых клетках активности фермента, катализирующего синтез р-РНК.

6. Показано, что селенсодержащие соединения подавляют репродукцию вируса гриппа, ингибируя при этом активность вирусной полимеразы. Обнаружено усиление ингибиторного эффекта на репродукцию вируса гриппа А, в условиях комбинированного применения селенита натрия и ремантадина.

' 7. Установлено, ингибирование селенитом натрия активности бактериальной ДНК-зависимой РНК-полимеразы in vitro . Чувствительным, звеном к ингибирующему действию селена является сам фермент, с которым через селеногрисульфидную связь образуется селено-полимеразный продукт.

8. Обнаруженный эффект ингибирующего действия селена на РНК-полимеразную I активность в клетках эукариотов в норме и при патологии может служить научно-теоретическим обоснованием для возможного поиска и синтеза новых селенсодержаищх препаратов для практического их применения в медицине при ле-'чении онкадо'мческих и вирусных заболеваний.

Основные положения диссертации опубликованы в следующих работах;

[. Изучение транскрипции эукариотов в раннем эмбриогенезе: Материалы Ш съезда генетиков я селекционеров Азербайджа-на/Абдуллаев Ф.И., Мехтиев H.I., Кафиани К.А.. - Баку, 1976. - Т.4. - С.375-376.

2.' Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Ф.И. Влияние селена на активность ДНК-зависимой ИЖ-полимеразы Е coli // Докл. АН АзССР.-1976. - № 8. - С.27-30.

В. Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Ф.И. Влияние селена на синтез РНК в бесклеточной система. Селен в биологии. - 1977. - 3»-С.72-80.

1. Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Г.Б. Влияние селена на синтез РНК в развивающихся зародышах Mi3gurnus fossilia // Изв.АН АзССР. Сер.биол-ог. - 1977. - № 6. - C.I03-I09.

5. Действие селенита натрия на синтез РНК в зародышах и изолированных ядрах Misgumus fossilis : Совет.-западногерман. симпоз. "Структура и функция генома" /Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Кафиани К.А., Абдуллаев Г.Б..т Баку, сент . 1977: Тез.докл. - Баку: Элм, 1977. - С.17.

5. Селен и нуклеиновые кислоты: Сб. "Селен в биологии" /Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Ф.И., Казиев А.Т.. - Баку, 1977. -Т.З.-С.175-178.

7. Ингибитор активности фермента: Автор.св-во № 627162 / Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Г.Б. - Болл.откр.изобр.-1978.-37. - С.105. о

3. Определение механизма ингибирования р-РНК у эукариотов селенитом натрия: Всесоюз.Биохм.съезда / Абдуллаев Ф.И., Ма-лафриев O.K., - Л., окг; . Г979: Тез.докл. - Л.> 1979. — С.275.

3. Ингийярозание активности А формы ДНК-зависимой РНК-лолимера-зы селенитом натрия: Всесоюз.симпоз. "Макромолекулы клетки" /Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х. - М., дек., 1979: Твз.докл.-М.¡Наука, 1979. - С.62.

10. Действие селенита натрия на синтез РНК в зародышах выона

/ Абдуллаев Г.Б., Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Ф.И., Кафишш К.А. // Биохимия. - 1980. - ¿5, вып.Г. - С.98-101.

11. Влияние селена на содержание нуклеиновых кислот в печени крыс /Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Рзаева H.A., Абдуллаев М.М. // Изв.АН АзССР. Сер.биол ог.-1980. - № 2. - С.78-81.

12. Изменение синтеза ДНК под влиянием селена // Экспериментальный цутагенез /Абдуллаев Ф.И., Рзаева H.A., Абдуллаев М.М. - Баку, 1980. - С.16.

13. О ингибирующем э#екте селенита натрия на активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы: У Всесоюз.симпоз. по химии и физике белков и пептидов / Абдуллаев Г.Б., Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Ф.И.. - Баку, oktj . 1980г.: Тез.докл. - Рига: ИН'-т.орг.синтеза, 1980. - С.4.

14. Исследование активности ДНК-зависимых FHK-полимераз про- и эукариотического происхождения: ХП Менделеевского съезда по общей и прикладной химии /Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Абдуллаев Г.Б.. - Баку, сент... 1981г.: Тез.докл. - М.: Наука, 1981. - С.109.

15. Исследование механизма действия органических соединений селена на митоховдриальные мембраны / Абдуллаев Ф.И., Мехтиев Н.Х., Мамедов Ш.В. и др. // Докл. АН АзССР. - 1981. - №4.-С.40-44.

16„ Действие с-АМР-зависимой протеинкиназы и ее белкового модулятора на активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы E.col : 1У Совет.-западногерман.симпоз. "Структура и транскрипция генома" / Абдуллаев Ф.И., Баба-заде С.Н., Абдуллаев М.М. и др. -> Ереван, окт. . 1981 г.: Тез.докл..- Ереван.¡Ереван, гос.ун-т, 1981. - С.37. •

17. ДНК-зависимая РНК-полимераза и регуляция транскрипции в эука-риотических клетках: Материалы 1У съезда ВОГиС им.Н.И.Вавилова / Абдуллаев Ф.И.. - Кишинев: Штиинца, 1981. - С..'].

18. Способ ингибяроваияя синтеза р-РНК: Автор, св -во № 93239Э / Абдуллаев Г.Б., Мехтиев Н.Х., Абдудлаеи Ф.Н.. - Гплллтср, изобр. - 1982. - 20. - ¿38-239.

1Э. Регуляццяг генной активности эугсариотичвояик -{.т/тог. in .voorho ГГОО-полпморач // Мот ррнятн ,1У съемка гопотчч ">«• « i~F¡40H'r;-> ■

Азербайджана / Абдуллаев Ф.И., Рзаева H.A., Абдуллаев М.М., "Мехтиев Н.Х.. - Баку: Элм, 1982. - C.I09.

20. Абдуллаев Ф.И., Рзаева H.A., Абдуллаев М.И. Распределение селена в биомакромолекулах, субклеточных фракциях и органах крыс // Изв. АН АзССР. Сер.биол-ог. - 1982. - № 3. - С.115-119.

21. Абдуллаев Ф.И., Джохаридзе Т.З. ДНК-зависимые РНК-полимеразы эукаршсов // Там же. - 1983. - № 2. - 1983.

22. Study of eukariotic ША-dependent ENA.-polyTaera3es: Thesis of ХГ confer. FEBS /Abdullaev F.I.-Brusse]., 1983.-P.191.

23. Абдуллаев Ф.И. Очистка ДНК-зависимых РНК-полимераз I и П из зародышей пшеницы // Изв.АН АзССР. Сер.биол-ог. - 1984. -

№ 2. - С.99-105.

24. Изучение действия селенита натрия на репродукцию вируса гриппа / Ахундов В.Ю., Асадуллаев Т.Б., Абдуллаев Ф.И. и др. // Докл. АН АзССР. - 1984. - И, № 5. - С.62-66.

25. ДНК-зависимые РНК-полимеразы в нормальных и опухолевых клетках: Материалы ХУ1 конф. ФЕЕО / Абдуллаев Ф.И.. - М»,1984. -Т.2. - С.99-105. "

26. Абдуллаев Ф.И. Разная степень шгибирования ДНК-зависимых РНК-полимераз зародышей пшеницы селенитом натрия // Биохимия. - 1984. - 49, выпЛ2, - C.I972-I976.

27. Регуляция РНК-полимеразной активности в ядрах нормальных и опухолевых клеток: Тез.докл. 8 Объед.сиш.<биох. об-в СССР-ГДР" Проблемы современной биохимии и биотехнологии" /Рзаева H.A., Абдуллаев Ф.И., - Рига, 1985. - C.I9I-I92.

28. Изучение цитотоксической активности селенсодержащих соединений в культивируемых клетках карциномы яичника человека /Рзаева H.A., Абдуллаев Ф.И., Иванова Т.П., Добрынин Я.В. // Эксперимент.онкология. - 1985. - 2« № 6. - С.67-69.

.29. Изучение ингибирующего действия селенита натрия на репродукцию вируса гриппа / Лазымова З.А., Абдуллаев Ф.И., Абдуллаев И.И., Асадуллаев Т.Б. // Вопр.вирусологии. - 1986. - I . -С.236—238.

30. Изучение противовирусного действия селенита натрия и его комбинации с ремантадином / Абдуллаев Ф.И., Сычева И.В., Ла-

suuoBa 3.A. h j®. // TaM ae. - 1987. - № 6. - C.670-675. 31. Specific inhibition of eukariotic - DIJA-dependent ENA-polyme-rase activity by selencoataining compounds : Thesis of 14-th. Intern. Congr. of Biochem. / Abdullaev P.X.. - Prague, 1983. -P.360.

Uoan.B neq. 28.II.88. 6« 19839.®opuat 60x84/I6,Byuara iHn.O$o.ne-<iais.yofl.nei.Ji. E.09.yca.Kp.on, 2.09.y«j.-iiaa.;n. I.7.Tnpas 100 8K8 3aita8/o2g BeonnaiHo.

OineiaraBO b BHOiiisyss iiscbmbthkh AH yCCP. 252601 KieiB 4, PCD, ya.PeiMaa,8