Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регуляция дельта-сон индуцирующим пептидом свободнорадикальных процессов в тканях и мембранах эритроцитов крыс при действии холода

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Регуляция дельта-сон индуцирующим пептидом свободнорадикальных процессов в тканях и мембранах эритроцитов крыс при действии холода"

На правах рукописи

ШУСГАНОВА Татьяна Анатольевна

РЕГУЛЯЦИЯ ДЕЛЬТА-СОН ИНДУЦИРУЮЩИМ ПЕПТИДОМ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ В ТКАНЯХ П МЕМБРАНАХ ЭРИТРОЦИТОВ КРЫС ПРИ ДЕЙСТВИИ ХОЛОДА

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Ростов - на - Дону 1999

Работа выполнена на кафедре биохимии и микробиологии биолого-почвенного факультет и в НИИ Биологии Ростовского государственного универсетета

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ : Ростовский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится декабря 1999 года в 10.00 часов на заседании

диссертационного Совета Д 063.52.08 по биологическим наукам в Ростовском государственном университете (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105, РГУ, ауд. 203).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГУ (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148).

Автореферат разослан « /6 » ноября 1999 года.

Учёный секретарь диссертационного Совета

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ;

доктор биологических наук, профессор Т.И. БОНДАРЕНКО; кандидат биологических наук, доцент Н.П. МИЛЮТИНА

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ :

доктор биологических наук, профессор И. А. ГОРОШИНСКАЯ;

доктор биологических наук, профессор Н.Г. ВОЛЖИНА

доктор биологических наук, профессор

Т.И. БОНДАРЕНКО

£ дн - ШИ) О р Z ,6X1 О

1- «?</. О '

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Современное изучение регуляторных пептидов (РП) направлено на понимание устройства и механизмов действия сложной пептидергаческой системы надклеточной регуляции биохимических и физиологических функций (Ашмарин, Обухова, 1994). Система РП оказалась одной из важнейших регуляторных систем организма. По сравнению с другими системами межклеточной сигнализации пептидная система является наиболее многочисленной, а сами пептидные регуляторы - самыми полифункциональными. Это послужило основой гипотезы об образовании РП вместе с другими гуморальными регуляторами функционального континуума, который обеспечивает высокую гибкость и избирательность действия данной системы (Ашмарин, Обухова, 1998). Практическое применение РП сулит наиболее физиологичные и целенаправленные лечебные воздействия Будучи эндогенными олигопептидами, сходными с продуктами метаболизма, они не являются токсичными веществами, эффективны в очень низких дозах, не накапливаются в организме, отличаются высокой селективностью действия, не вызывают опасных для организма иммунологических реакций (Ашмарин, 1984, 1988).

Одним из представителей класса РП является дельта-сон индуцирующий пептид (ДСИП), открытый как гипногенный модулятор мозга (Monnier, Schoenenberger, 1977). Впоследствии было обнаружено, что ДСИП оказывает влияние на ряд функций, непосредственно не связанных со сном. Наибольший практический интерес представляют обнаруженные в ряде экспериментов аятистрессорный и адалтогенный эффекты ДСИП, установленные при эмоционально-болевых воздействиях, холодовом стрессе, гнпер- и гипоксии, гипокинезии (Коплик и др., 1982, Бондаренко и др., 1985, Менджерицкий и др., 1987, Судаков, 1991, Хватова и др., 1995). Пептидная природа ДСИП предполагает возможность его взаимодействия со множеством регуляторных механизмов в живых системах. Важнейшей регуляторной системой организма является система свободноради-кальных процессов (СРП). С ней связаны такие биологические явления, как окислительное фосфорилирование в митохондриях, генерация и проведение нервного импульса, клеточное деление, синтез ряда гормонов, механизмы регуляции мембранной проницаемости и активности мембранных ферментов.

Действие пептидов на процессы, происходящие в организме, может не проявляться на фоне оптимального функционирования физиологической или биохимической системы, но может быть выражено при сдвигах функционального состояния этих систем, например, при действии экстремальных факторов среды. Для изучения молекулярных механизмов ан-тистрессорного действия ДСИП в нашей работе использована модель холодового стресса.

Воздействие на животных холода (0 - +4 °С) в течение 1-3 суток характеризуется развитием стрессорксй реакции, что выявляется по гормональным сдвигам н усилению катаболизма (Щеглова, 1969, Ардашев и др., 1978, Майстрах, 1979, Бондаренко и др., 1985, 1990, 1992). Длительное действие низкой температуры окружающей среда 0 - +4 °С приводит к постепенному переходу от стресса к адаптации, что обеспечивается рядом специфических и неспецифических реакций. Основными и универсальными механизмами развития сгрессор-ной реакции, возникающей при действии на организм различных факторов, и, в частности, низкой температуры среды, являются интенсификация перекисного окисления липидов (ПОЛ) на фоне повышенной активности прооксидантной системы, истощения потенциала эндогенной антиохсидантной системы (АОС) и дестабилизации структуры клеточных мембран. Мембраны клеток являются мишенью для действия стресс-факторов и фармакологических веществ. В связи с этим изучение молекулярных механизмов функционирования бно-мембран в норме, при сгрессорных процессах и в условиях корректирующего воздействия физико-химических агентов необходимо, прежде всего, для разработки современных методов и критериев оценки нарушений дативного структурно-функционального состояния компонентов биомембран, а также поиска эффективных способов профилактики и лечения различных сгрессорных состояний, создания новых лекарственных средств. В этом плане определенный интерес представляет изучение механизма реализации биологической активности ДСИП, как соединения, регулирующего СРП.

В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение роли ДСИП в регуляции СРП в тканях и мембранах эритроцитов крыс, а также их структурно-функционального состояния в условиях нормально функционирующего организма и при действии холода.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования :

1. Изучить влияние ДСИП на интенсивность липопереокисления в мозге, печени и эритроцитах интахтных крыс и содержащихся в условиях воздействия низкой температуры среды 00 - + 4 °С в течение 3-х суток.

2. Изучить влияние ДСИП на активность прооксидантных ферментов - ксантиноксидазы в ткани мозга и печени и миелоперохсидазы в нейгрофилах крови интактных крыс и подверженных действию холода.

3. Установить влияние ДСИП на активность антиоксидантных ферментов - супероксид-дисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы в мозге, печени и эритроцитах, а также активность ангиоксидантного белка плазмы крови - церулоплазмина у крыс контрольной группы и при воздействии холода.

4. Изучить влияние ДСИП на содержание неферментативных антиоксидантов - восста-

новленного глутатиона, моневшш, мочевой кислоты, молекул средней массы, холестерина в мозге, печени, плазме крови и эритроцитах иншсгньк крыс и в условиях действия низкой температуры среды.

5. Исследовать действие ДСИП на структурное состояние и поверхностный заряд мембран эритроцитов интактньгх крыс и содержащихся в условиях холода в опытах in vivo и in vitro.

Научная новизна работы. Впервые показано, что ДСИП регулирует СРП в тканях и мембранах эритроцитов (МЭ) крыс в норме и при действии неблагоприятных факторов среды. ДСИП эффективно подавляет интенсивность ПОЛ, предотвращая накопление молекулярных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и шиффовых оснований, в тканях и эритроцитах интактных крыс и помещённых в условия холода. ДСИП разно направлено влияет на активность прооксидантных ферментов : стимулирует миелопероксидазу в нейтрофшгах крови, при отсутствии существенного изменения активности ксантиноксидазы в тканях интактных животных, и активирует миелопероксидазу, подавляет ксантиноксидазную реакцию у крыс при действии холода, поддерживая таким образом скорость наработки активных форм кислорода на стационарном уровне. Впервые показан мощный АО эффект ДСИП, опосредованный различными эндогенными механизмами АО защиты клетки и внеклеточной жидкости, включающей активность высоко- и низкомолекулярных регуляторов СРП. В ин-тактном организме ДСИП оказывает стимулирующее влияние как на активность СОД, ката-лазы и глутатионзависимых ферментов, так и концентрацию соединений-АО, особенно восстановленного глутатиона, в тканях и эритроцитах. При холодовом стрессе, в условиях энзимной недостаточности АОС тканей, наибольшее значение приобретают специфические белки плазмы крови, в частности, церулоплазмин, и неферментативные механизмы ингиби-рования СРП. При действии холода ДСИП повышает ёмкость эндогенных систем АО защиты тканей и крови, главным образом, глутатионпероксвдазной ферментативной системы и способствует нормализации содержания неферментативных соединений. Впервые показано, что мембранотропное действие ДСИП заключается в повышении структурной упорядоченности белок-липидной фазы МЭ интактных хрыс а результате увеличения степени погружения белков в липидный бислой и/или снижения степени их агрегации и увеличения микровязкости зон белок-липидных контактов. Экзогенный ДСИП не оказывает при этом существенного влияния на микровязжость и полярность липидной фазы мембран, однако обуславливает дополнительный отрицательный заряд на поверхности МЭ. В условиях холодового стресса отмечается дестабилизация структуры МЭ крыс, характеризующаяся снижением микровязкости зон белок-липидных контактов и уменьшением степени погружения белков в бислой вследствие экспонирования белков из гидрофобной зоны мембран, либо их arpera-

ции, увеличением полярности лгашдной фазы и отрицательного поверхностного заряда. Мембраностабилизирующин эффект ДСИП при воздействии холода проявляется в нормализации структурной организации МЭ, предотвращении накопления полярных соединений в глубинных слоях и модификации поверхностного слоя МЭ крыс. Обоснована возможность использования экзогенного ДСИП в профилактике и терапии заболеваний как препарата ан-тиоксидантного и адаптогенного действия.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. ДСИП обладает способностью регулировать интенсивность ПОЛ в тканях мозга, печени и эритроцитах в условиях физиологической нормы и восстанавливать функциональное состояние организма, оцененное по показателям свободнорацикального окисления, на исходном или новом уровне функционирования при действии холода.

2. Регулирующий эффект ДСИП в отношении СРП реализуется через модуляцию проок-сидантно-антиоксидантного равновесия. Экзогенный ДСИП повышает ёмкость АОС тканей мозга, печени и крови в условиях нормы и холодового воздействия. Антистрессорное действие ДСИП направлено как на увеличение мощности эндогенной ферментативной, особенно глутатиокпероксидазной, так и неферментативной систем АО защиты.

3. ДСИП оказывает разнонаправленное влияние на активность прооксидантных ферментов : угнетение ксаитииоксидазы в тканях мозга, печени и активация миелопероксидазы в нейтрофилах крови в норме и при действии низкой температуры среды, что свидетельствует о повышении адаптивных возможностей и иммунного потенциала организма.

4. Мембранотрогшый эффект ДСИП в норме и при действии холода связан с увеличением стабильности белок-липидных взаимодействий, снижением полярности липидной фазы и отрицательного поверхностного заряда МЭ, модифицированных в ходе липопереокисления.

Теоретическая и практическая значимость работы. В общетеоретическом плане выполненная работа расширяет существующие представления о функциональном континууме РП и молекулярных механизмах их действия, позволяет более точно воссоздать целостный образ системы пептидной регуляции и вносит существенный вклад в понимание процессов регуляции метаболизма в организме в норме и при стрессорных состояниях. В работе представлены данные об универсальной способности ДСИП участвовать через различные механизмы в регуляции СРП в тканях и структурно-функционального состояния биомембран. Изученные молекулярные механизмы действия и биологические свойства ДСИП свидетельствуют о повышении адаптивных способностей организма при его введении, вследствие ингибирования ПОЛ и прооксщщгтнсй активности, повышения ёмкости АОС, активизации фагоцитарного звена иммушггега, стабилизации структуры клеточных мембран, что

позволяет прогнозировать возможное применение ДСИП в лечебно-профилактической медицине как препарата аигиоксидантного действия, а также использование его практически здоровыми людьми в качестве адаптогена и для восстановления функций при профессионально вредных воздействиях, а также как стимулятора работоспособности.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научных сессиях биолого-почвенного факультета РГУ (1998, 1999), на Ш Международном симпозиуме по патофизиологии (Финляндия, 1998), на 12 Европейском обществе нейрохимиков (Санкт-Петербург, 1998), на ХУЛ Съезде физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998), на V Международной конференции «Биоантиоксиданто (Москва, 1998), на Международной конференции «Свободнорадикальные процессы : экологические, фармакологические и клинические аспекты» (Санкт-Петербург, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Структура н объём диссертации. Диссертация изложена на 197 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов; содержит 11 таблиц и 31 рисунок. Список литературы включает 439 источников, 142 - иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено на половозрелых белых беспородных крысах-самцах массой 150-180 г в зимние месяцы. Контрольные и подопытные животные были разделены на 4 группы : 1. Инггактные животные, содержащиеся в условиях вивария при температуре +18 -+20 °С (контроль); 2. Интактные животные, которым за 3-е суток до декаяитации однократно внутрибрюшинно вводили ДСИП, растворенный в стерильном физ растворе, в дозе 12 мкг/100 г массы теда (контроль + ДСИП). 3. Животные, содержащиеся 3-е суток в холо-довой камере при температуре 0 - +4 °С (3-е суток холода). Период 1 - 3 сутки пребывания животных в холодовой камере определяется как стрессорньш по тестам стресса и адаптации (Щеглова, 1969, Ардашев, 1978, Майстрах, 1979, Бондаренко и др., 1985-1992). 4. Животные, которым перед помещением на 3-е суток в холодовую камеру вводили ДСИП также, как и животным 2-ой группы (3-е суток холода + ДСИП). ДСИП хорошо проникает через ГЭБ при его периферическом введении (Kastin et а!., 1980, Graf et al., 1981). В эксперименте использовали ДСИП, синтезированный в лаборатории химии пептидов Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина - Ю.А. Овчинникова РАН, г. Москва. Во всех сериях эксперимента ДСИП вводили в утренние часы, так как установлено, что эндогенный уровень ДСИП может изменяться как в течение суток, так и в разные сезоны года, приводя к комплексу малых эффектов в организме, которые в конечном итоге могут привести к резким

изменениям метаболизма (Graf, Kastin, 1984). ДСИП в дозе 12 мкг/100 г массы проявляет аитисгрессоршый эффект у животных, находящихся в условиях действия низкой температуры среды (Бондаренко и др., 1984). При исследовании структурного состояния мембран в опытах in vitro ДСИП использован в концентрации Ю"6 М. Именно в этой концентрации, как показано ранее (Крупенникова, 1985), ДСИП в опытах in vitro обладает метаболической активностью. Животных всех исследуемых групп декапитировали в утренние часы, чтобы избежать суточных колебаний метаболизма, через 3-е суток после начала эксперимента, кровь собирали в центрифужные гепариннзированные пробирки, извлекали мозг, печень и немедленно помещали в ледяной физ.раствор. Из цельной крови получали плазму путём центрифугирования 15 мин при 3000 об/мин. Эритроцитарную массу трижды отмывали охлаждённым физ раствором. Лимфоциты и нейтрофилы выделяли из цельной крови в градиенте плотности фиколл-еерографина методом Boyum (1968). Исследуемые показатели определяли в эритроцитах, нейгрофилах, плазме крови, гомогенатах и супернатангах 20 %-ных гомо-генатов тканей печени и мозга (вес/объём), приготовленных на физ.растворе и обработанных тритоном Х-100 (конечная концентрация ОД %).

Экстракцию липидов проводили по методу Е. Bligh, W. Dyer (1959). Содержание первичных продуктов ПОЛ - диеновых конъизгатов определяли методом И.Г. Стальной (1977), конечных продуктов ПОЛ - шиффовых оснований - методом W. Bidlack, А. Tappe! (1973), холестерина - методом йльха (Колб, Камышников, 1982) и общих липидав сульфофосфова-нилиновкм методом, используя коммерческий набор Био-Лг-Тесг «TL 180» фирмы «Lachema» (Чехия). Активность ксаятиноксидазы определяли по методу P.G. Avis (1955) в модификации И.В. Корниенко (1997), миелопероксидазы - спектрофотометрическим методом (Саидов, Пиаегин, 1991) в нашей модификации. Содержание белка определяли по методу Lowry et al. (1951). Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли методом R. Fried (1975), каталазы - методом М А. Королюка и др. (198S), глутатионпероксидазы - методом В.М. Моина (1986) - по скорости окисления восстановленного глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила, глутатионредуктазы - по скорости окисления НАДФН2 методом Л.Б. Юсуповой (1989), концентрацию восстановленного глутатиона - методом G.L. ЕШпап (1959) в модификации И.В. Корниенко (1997). Содержание гемоглобина определяли модифицированным методом A.B. Каракащова, В.В. Вичева (1973) с помощью набора фирмы «Реагент?) (Россия), оксидазную активность церулогашмина - модифицированным методой Ревина (Колб, Камышников, 1982). Содержание молекул средней массы (МСМ) определяли скрининг-методом Н.И. Габриэлян, В.И. Липатовой (1984), мочевины -стандартным диацетилмоносксимным методом, используя коммерческий набор Био-Ла-Тест

«Urea 450» фирмы «Lacheina» (Чехия), мочевой кислоты - колориметрическим методом с использованием фосфорновольфрамового реактива Фолина-Дениса с помощью набора фирмы «Реагент» (Россия). Влияние ДСИП на структурное состояние МЭ крыс в опытах in vivo и in vitro определяли по эффективности безызлучательного переноса энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен, микровязкости зон белок-липидных контактов, относительной микровязкости и полярности липидного бислоя мембран методом латеральной диффузии флуоресцентного зонда пиреяа. Поверхностный заряд МЭ оценивали с помощью флуоресцентного зонда-аяиоиа 1-анилннонафталин-8-сульфоната (АНС) (Владимиров, Добрецов, 1980, Добрецов, 1989). Интенсивность флуоресценции зондов регистрировали на спектрофлуоримегре «Hitachi 650-60» (Япония).

Статистическую обработку данных проводили на компьютере FP Р - 200 ММХ. Достоверность различий между опытными и контрольными группами оценивали по t - критерию Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние ДСИП на интенсивность лиявпереокяеления, прооксидантно-анти-оксндантное равновесие в тканях н структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов ннтсктиых крыс. Согласно результатам проведённого нами исследования, экзогенный ДСИП в дозе 12 мкг/ЮО г массы интакгного животного, введённый внутри-брюшинно, однократно, оказывает существенное влияние на систему СРП, выступающую ключевым метаболическим звеном и маркером функционального состояния организма (рис.1). Об этом свидетельствует снижение содержания молекулярных продуктов ПОЛ -диеновых конъюгатов и шиффовых оснований, соответственно, на 39,3 % (р < 0,01) и 53,4 % (р < 0,001) в мозге, на 45,7 % (р < 0,001) и 57,3 % (р < 0,001) в печени, на 43,3 % (р < 0,001) и 35 % (р < 0,05) в эритроцитах интактных крыс по сравнению с контролем. Действие ДСИП, вероятно, можно объяснить угнетением прооксидантной и/или активацией АО систем организма. Введение ДСИП интаетным животным не приводит к достоверному изменению активности прооксидантного фермента ксангтиноксидазы в мозге и печени. Нами установлено, что одним из механизмов действия ДСИП у интактных животных является активация фагоцитарного звена иммунитета, проявляющаяся в увеличении активности миело-пероксвдазы в нейтрофилах крови на 39 % (р < 0,01) по сравнению с контролем.

Ферментативные антиоксиданты - СОД и каталаза являются первым звеном внутриклеточной защиты от активных кислородных соединений. На фоне введения ДСИП интакт-ным крысам отмечается повышение активности СОД в мозге, печени и эритроцитах на 56 % (р < 0,001), 61,6 % (р < 0,01) и 40,2 % (р < 0,01), соответственно, и увеличение активности

Рис. 1. Влияете дельта-сои вндуотруювдетз гкяпида аз втенсивность дишивреохисления и прооксиааятно-аитаоксндоншое равновесие в мозге, печеян, (^крмснлых элементах н плазме крови итакгаых крыс Примечание ■. га рнс. 1 - 3 * - озаачагг статистически достоверные различия по сравнению с контролем (р< 0,05 - 0,001).

каталазы на 38 % (р < 0,001), 43,3 % (р < 0,001) и 40,5 % (р < 0,001), соответственно, по сравнению с контролем. Глутатионпероксидазная система, включающая активность глута-тконпероксидазы, пгутатионредуктазы и восстановленный глутатион, выступает вторым звеном внутриклеточной защиты организма от окислительного поражения. Под влиянием ДСИП у ингактных крыс происходит повышение активности глутатионпероксидазы и глута-тионредуктазы, соответственно, на 37 % (р < 0,01) и 50 % (р < 0,001) в мозге, на 48,7 % (р < 0,001) и 28 % (р < 0,001) в печени, на 15 % (р < 0,001) и 42,4 % (р < 0,01) в эритроцитах ин-такгных крыс, ещё в большей степени повышается концентрация восстановленного глута-тиона - неферментативного компонента глутатионпероксидазной системы в мозге, печени и эритроцитах на 90,5 % (р < 0,001), 51,6 % (р < 0,001) и 28,4 % (р < 0,001), соответственно, по сравнению с контролем, что обусловлено, по-видимому, активацией в клетках глутатион-

редуктазы. Столь существенное повышение активности глутатионпероксидазной системы в тханях, особенно в мозге, при введении ДСИП является важным звеном в механизме его АО действия. Результаты исследования показывают, что введение экзогенного ДСИП интакт-ным животным не приводит к изменению оксидазной активности церулошшмина, являющегося важным АО плазмы крови, одним из факторов естественной защиты организма.

Зарегистрированное нами увеличение активности ферментативной АОС защиты тканей мозга, печени и зрш-рошпов интакпшх животных под влиянием ДСИП может быть следствием активации синтеза пептидом дельта-сна исследуемых соединений как непосредственно, где ДСИП может выступать в роли регулятора транскрипции генов специфических областей ДНК, ответственных за образование АО ферментов, так и опосредованно через гормональную систему. Возможно и непосредственное влияние ДСИП на активность ферментов АОС в качестве «прямого эффектора».

Молекулы средней массы (МСМ) заслуживают интерес исследователей благодаря широчайшему спектру своих биологических активностей в организме, включающему и АО активность. ДСИП, введённый интакгным животным, не вызывает достоверного изменения содержания пептидного (преобладающего в плазме крови) и непептидного (преобладающего в печени и мозге) компонентов МСМ по сравнению с контролем. Соответственно, индекс распределения вышеуказанных фракций к = Е^о / Е2» - в исследованных биологических субстратах не изменяется. Отсутствие прироста МСМ в плазме крови и тканях интактных крыс на фоне введения ДСИП может послужить прямым доказательством в пользу того, что непосредственно в условиях данного физиологического состояния катаболизм в крови и/или тканях существенный образом не активируется.

Низкомолекулярные азотсодержащие метаболиты - мочевина и мочевая кислота -играют важную регуляторную роль в организме и выступают в качестве ешё одного звена неферментативной АО защиты. Введение ДСИП интакгным животным вызывает повышение содержания мочевины и мочевой кислоты, соответственно, на 60,3 % (р < 0,001) и 57,8 % (р < 0,01) в мозге, на 41,2 % (р < 0,001) и 35 % (р < 0,001) в печени по сравнению с контролем, без существенных изменений исследуемых показателей в плазме крови.

Известно, что в поддержании АО гомеосгаза организма наряду с водорастворимыми низкомолекулярными АО, проявляющими своё протекторное действие в цитоплазме клетки или плазме крови, определённая роль принадлежит гидрофобным соединениям, АО действие которых основано на торможении реакций, непосредственно протекающих в липидном слое мембран и липопротеидов крови. Под влиянием ДСИП в мозге и МЭ интактных крыс содержание холестерина - важнейшего регулятора текучести биомембран - снижается на

19,7 % (р < 0,05) и 22,8 % (р < 0,05), соответственно, по сравнению с контролем, в печени данный показатель достоверно не изменяется.

Особое внимание в нашем исследовании молекулярного механизма действия ДСИП обращено к изучению структурного состояния биомембран. Экзогенный ДСИП в опытах in vivo, а также добавленный в концентрации 10"6 М в суспензию МЭ интактных крыс в опытах in vitro, повышает эффективность безызлучатеяьного переноса энергии с мембранных трип-тофаншзов на пнрен, соответственно, на 15,4 % (р < 0,001) и 17,1 % (р < 0,001), что может свидетельствовать об увеличении степени погружения белков в липидный бислой, либо снижении степени их агрегащш. ДСИП увеличивает микровязкость зон белок-липидиых контактов на 10,2 % (р < 0,05) в опытах in vivo и на 20,2 % (р < 0,001) в опытах in vitro по сравнению с контролем. Вероятно, таким образом ДСИП увеличивает структурную упорядоченность белок-липидной фазы изучаемых мембран. Микровязкость и полярность липид-ной фазы мембран при этом не изменяются. Экзогенный ДСИП обуславливает дополнительный отрицательный заряд на поверхности МЭ, на что указывает снижение интенсивности флуоресценции зонда-аниона АНС при концентрациях 10, 20, 30 мкмоль на 10,3 % (р < 0,001), 12,4 % (р < 0,001) и 14,6 % (р < 0,001), соответственно, в опытах in vivo и на 9,1 % (р < 0,001), 12,3 % (р < 0,001) и 13,3 % (р < 0,001), соответственно, в опытах in vitro по сравнению с контролем. Установленная в наших исследованиях идентичность, однонаправленность изменений изученных структурных характеристик МЭ интактных крыс под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro предполагает- как опосредованное, так и прямое участие пептида дельта-сна в регуляции структурно-функционального состояния биомембран.

Таким образом, корригирующее воздействие ДСИП в интактном организме направлено на предотвращение интенсификации ПОЛ, смещение прооксидантно-антиоксидант-ного равновесия в сторону повышения ёмкости АОС в тканях и крови и изменение структуры клеточных мембран, как бы заранее создавая известную «гарантию» от чрезмерной активации ПОЛ и закономерно предупреждая повреждение клеток. Следует отметить, что в целом, в интактном организме ДСИП оказывает стимулирующее влияние как на активность различных ферментных систем АО защиты, так и концентрацию низкомолекулярных соединений-АО в тканях и эритроцитах. Эффект ДСИП в интактном организме в большей степени реализуется в печени, мозге и, далее, в крови. Прежде чем перейти к изучению механизма антистрессорного действия ДСИП нами были изучены вышеперечисленные биохимические показатели в тканях и крови стрессированных животных.

Интенсивность лнпопереокислепня, прооксидантно-антиоксидантное равновесие в тканях и структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов крыс при

холодовом стрессе. Нами зарегистрированы значительные изменения метаболических процессов в организме животных, находящихся 3-е суток в условиях действия холода, особенно, в системе крови и печени, а затем в мозге (рис.2). Отмечено усиление интенсивности ПОЛ в мозге, печени и эритроцитах крыс при холодовом стрессе, о чём свидетельствует повышение уровня диеновых конъюгатов и шнффовых оснований на 41,6 % (р < 0,01) и 26,6 % (р < 0,01) в мозге, на 36,6 % (р < 0,01) и 50,6 % (р < 0,01) в печени и более значительный ¡ее рост в эритроцитах - на 62 % (р < 0,001) и 81 % (р < 0,001), соответственно, по сравнению с контролем. Нами показано, что холодовое воздействие сопровождается резким увеличением активности ксантиноксвдазы в мозге и печени крыс, соответственно, на 86,5 % (р < 0,001) и 93,4 % (р < 0,001) и снижением активности миеяоперсксидазы в нейтрофилах крови на 34 % (р < 0,001) по сравнению с контролем. Дисбаланс в системе регуляции ПОЛ, вызванный активацией реакций инициирования, усугубляется функциональной недостаточностью АОС.

Холодовой стресс характеризуется существенным снижением ёмкости АОС, о чём свидетельствует ингибирование активности АО ферментов СОД и кзталазы соответственно, на 30,4 % (р < 0,01) и 50 % (р < 0,001) в мозге, на 53,6% (р < 0,01) и 50,3 % (р < 0,001) в печени, на 55,7 % (р < 0,001) и 18,2 % (р < 0,01) в эритроцитах крыс по сравнению с контролем, причём разная степень торможенда активности АО ферментов создаёт условия для накопления активных форм кислорода. Воздействие на животных холодового стресса однона-правлено изменяет активность глутатионзависимых ферментов. Так, активность глутатион-пероксидазы и глутатионредуктазы снижается, соответственно, на 39 % (р < 0,001) и 23 % (р < 0,001) в головном мозге, на 42,6 % (р < 0,001) и 24,8 % (р < 0,001) в печени, на 17,5 % (р < 0,001) и 37,4 % (р < 0,001) в эритроцитах «холодовых» крыс по сравнению с контрольными; при этом концентрация восстановленного глутатиона оказывается сниженной на 51,8 % (р < 0,001) в печени и на 18 % (р < 0,001) в эритроцитах, а в мозге стрессированных крыс достоверно не изменяется по сравнению с таковым показателем у интаетных животных, что можно рассматривать как своеобразный защитный механизм, поддерживающий резервный уровень БН-групп в биосубстрате. Регистрируемое при холодовом стрессе торможение активности ферментов АО защиты тканей мозга, печенн и эритроцитов, очевидно, обусловлено ингибируюшим действием активных форм кислорода : Ог - , ОН , вызывающим окислительную модификацию и конформационные изменения молекул ферментов, а также нарушением их синтеза и распада. Комплекс щггозольных макрооксипротеиназ, локализованных в эритроцитах и ретикулоцитах, способен распознавать и избирательно деградировать окисленные белки-АО (Оа\пез, 1987). Снижение активности АО ферментов эритроцитов крыс при холодовом стрессе, происходит, вероятнее всего, за счёт разбавления

Рис. 2. Интенсивность лнлоиереокислевяя и проокжвяшо-аншоксжвнтное равновесие в мозге, печенв. форменных элементах а швзме крови крыс при холодовом стрессе

популяции эритроцитов «старыми» формами, имеющими низкую активность, либо выхода внутриэритроцигарных ферментов в плазму крови вследствие гемолиза.

В условиях энзимной недостаточности АОС тканей наибольшее значение в анти-окислигельной защите организма приобретают специфические белки плазмы крови, в частности церулоплазмин, и неферментативные механизмы ингибирования свободнорадикаль-ных реакций. При действии низкой температуры среды в плазме крови крыс нами отмечено увеличение на 67,3 % (р < 0,001) активности церулоплазмина по сравнению с контролем.

Холодовой стресс приводит к избыточному накоплению в жидкостях и тканях организма конечных и промежуточных продуктов обмена, о чём свидетельствует увеличение содержания МСМ в плазме крови крыс: Е 234 повышается на Ш % (р < 0,001), Е гю - на 62 % (р < 0,001) по сравнению с контролем. Снижение коэффициента к на 25,2 % (р < 0,001) у (дрессированных животных по сравнению с нормой указывает на большую чувствитель-

носгь непептидяого компонента МСМ в плазме крови к действию холода. В тканях животных под воздействием стресс-фактора обнаружена несколько иная картина распределения фракций МСМ: Е 254 в печени и мозге снижается на 25,6 % (р < 0,001) и 15,7 % (р < 0,001), соответственно, Е гзо снижается на 26,6 % (р с 0,001) в мозге и не претерпевает существенных изменений в печени, намечается лишь тенденция к снижению пептидного компоне1гга в печени при стрессе. Коэффициент к повышается на 19,5 % (р < 0,05) в печени стрессирован-ных крыс, что свидетельствует о более значительном изменении непептидной фракции МСМ, и снижается на 13 % (р < 0,0Г) в мозге этих животных, по сравнению с контролем, указывая на неравномерное снижение составляющих МСМ, в большей степени пептидного компонента. Стрессорное действие холода приводит к компенсаторному увеличению ёмкости неферментативкой АОС, о чём свидетельствует повышение уровня мочевины и мочевой кислоты, соответственно, на 93,4 % (р < 0,001) и 97,3 % (р < 0,001) в мозге, на 36 % (р < 0,001) и 98 % (р < 0,001) в плазме крови крыс, при этом в печени концентрация мочевины возрастает на 17,4 % (р < 0,001) по сравнению с контролем, а содержание мочевой кислоты - не изменяется.

Действие на животных низкой температуры окружающей среды и сопутствующее ему усиление ПОЛ характеризуются увеличением концентрации холестерина в мозге, печени и МЭ на 20 % (р < 0,05), 51,6 % (р < 0,01) и 35,8 % (р < 0,05), соответственно, по сравнению с контролем, что, в свою очередь, влечёт за собой структурные перестройки клеточных мембран. В условиях холодсвого стресса отмечается уменьшение эффективности безызлучательного переноса энергии с трнптофаяилов мембранных белков на пирен на 28,1 % (р < 0,001) и снижение микровязкости зон белок-липидных контактов МЭ на 25,1 % (р < 0,001), что обусловлено, вероятно, экспонированием белков из гидрофобного бислоя, либо их агрегацией вследствие кокформационных изменений под действием активных форм кислорода и продуктов ПОЛ. Существенного изменения микровязкости липвдного бислоя МЭ не установлено, однако происходит увеличение полярности внутренних областей мембраны на 18,3 % (р < 0,001) и возрастание отрицательного поверхностного заряда, регистрируемое при концентрациях зонда АНС 10-30 мкмоль, на 13,5 % (р < 0,001), 15 % (р < 0,001) и 18 % {р < 0,001), соответственно, по сравнению с контролем, что может быть вызвано как интенсификацией ПОЛ, так и активацией липаз, фосфолипаз.

Таким образом, целесообразно ещё раз перечислить основные звенья стрессорного повреждения при действии холода активация СРО, смещение прооксидантно-антиоксидаэтного равновесия в сторону усиления ПОЛ, истощение, главным образом, ферментативной внутриклеточной АОС и, как следствие, повреждение структуры клеточных

мембран. В условиях стресса наиболее эффективной системой защиты от активных форм кислорода оказывается неферментативная АОС.

Влияние ДСИП на интенсивность лнпопереокисления, прооксидантпо-анти-оксалантиое равновесие в тканях и структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов крыс пр» действии холода. Формирование защитных эффектов адаптации обеспечивается активацией генетического аппарата и изменением метаболизма клеток, а также изменением функционирования практически всех основных систем организма : нервной, эндокринной, сердечно-сосудистой, дыхательной, мышечной и т.д. Поэтому очевидно, что в механизме адаптации наиболее важную роль играют универсальные факторы регуляции физиологических, биохимических систем и экспрессии генов. Согласно нашим представлениям, таким универсальным регулятором может выступать ДСИП.

Нами установлено эффективное ограничение ДСИП активации СРО и его негативных последствий на организм животных, находящихся в условиях действия низкой температуры среды (рис.3). Предварительное введение экзогенного ДСИП перед помещением крыс в условия холода сопровождается уменьшением интенсивности ПОД, о чём свидетельствует снижение уровня диеновых конъюгатов и шиффовых оснований, соответственно, на 43,8 % (Р! < 0,001) и 16,5 % (р! < 0,01) в мозге, на 48 % (р, < 0,001) и 44,5 % (р, < 0,001) в печени, на 30,2 % (р[ < 0,01) и 32,7 % (р> < 0,001) в эритроцитах по сравнению с Холодовым стрессом, при этом концентрация диеновых конъюгатов в мозге и печени оказывается на 20,4 % (р < 0,05) и 29,2 % (р < 0,01), соответственно, ниже уровня контроля, а содержание диеновых конъюгатов в эритроцитах и шиффовых оснований во всех исследуемых биологических субстратах достоверно не отличается от контрольных величин. Подавление ДСИП интенсивности липоперескясления в тканях и эритроцитах «холодовых» крыс может быть обусловлено, с одной стороны, ингибированием генерации активных форм кислорода, а, с другой стороны, повышением мощности и эффективности АОС. Антистрессорный эффект ДСИП в условиях холодового воздействия состоит в понижении активности ксантиноксида-зы в мозге и печени, запускающей свободнорадикальные реакции, сопровождающиеся накоплением побочного токсичного продукта - активных форм кислорода, на 30 % (р! < 0,001) и 29,4 % (р! < 0,001), соответственно, по сравнению с группой стрессированных крыс; при этом исследуемый показатель на 30,7 % (р < 0,001) в мозге и на 36,5 % (р < 0,001) в печени остаётся выше такового у шггаюгаых крыс. Активность миелопероксидазы в нейтрофилах крови, как важнейшей и необходимой бактерицидной системы организма, в данных условиях на фоне введения ДСИП возрастает на 49,3 % (р| < 0,01) по сравнению с Холодовым стрессом, достигая уровня контроля.

Рис. 3. Влияние дельта-сон ицдуцируюшего пеппш на интенсивность лкпопереокисленяи и прооксндантао-аютгокстшвтяое равновесие в мозге, печени, форменных элементах и плазме крова крыс, находящихся 3-е суток в условиях холода

Более значительный, на наш взгляд, защитный эффект ДСИП связан с его способностью увеличивать ёмкость АОС, включающей ферментативные и неферменгативные компоненты. Несмотря на то, что сама молекула ДСИП антирадмсальными свойствами не обладает, АО действие ДСИП, опосредованное через основные АО ферменты и соединения-АО, ярко выражено. Нами показано, что предварительное введение ДСИП крысам перед помещением их в холодовую камеру, характеризуется активацией, в первую очередь, специфических защитных механизмов мозга и печени, а затем и крови. Это согласуется с данными Е.Ю. Крупенниковой и др.(1986), установивших, что антисгрессорный эффект ДСИП при холодовом стрессе наблюдается при его концентрации в мозге, почти в 6 раз превышающей физиологический уровень. ДСИП нормализует состояние АОС, что проявляется в значительном повышении активности СОД и каталазы, соответственно, нз 46,8 % (pj < 0,01) и 91,7 % (р,< 0,001) в мозге, на 132 % (р, < 0,001) и 121,6 % (pi < 0,001) в печени, на 104 %

(р! < 0,001) и 25,3 % (р! < 0,05) в эритроцитах крыс по сравнению с Холодовым стрессом. Исследуемые показатели достоверно не отличаются от контроля. Под влиянием ДСИП происходит существенное увеличение активности глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы и концентрации восстановленного глутатиона, соответственно, на 93 % (р! < 0,01), 38 % (р! < 0,01) и 16,8 % (р, < 0,05) в мозге, на 67 % (р! < 0,01), 64 % (р, < 0,001) и 103,2 % Срг < 0,001) в печени и на 30 % (р, < 0,001), 56,5 % (р! < 0,01) и 30 % (р( < 0,001) в эритроцитах животных, содержащихся в условиях действия низкой температуры среды, по сравнению с Холодовым стрессом. Практически все показатели достигают контрольных величин, активность глутатионредуктазы в печени оказывается на 23,2 % (р < 0,01) выше уровня кошроля, что можно рассматривать как адаптивную реакцию, направленную на поддержание необходимого уровня восстановленного глутатиона, усиленно расходуемого при стрессе, и содержание восстановленного глутатиона в мозге на 26 % (р < 0,01) превышает таковое у интактных животных. Наиболее мощный стимулирующий эффект ДСИП на активность глутатионпе-роксидазной системы тканей при стрессе позволяет говорить о превалирующем в некоторой степени глутатионовом механизме действия ДСИП, что играет огромную биологическую роль для организма.

Широкий спектр биологической активности ДСИП, как показано нами, включает в себя влияние как на внеклеточные ферментативные системы, так и на иеферментативные механизмы АО защиты организма при стрессе. ДСИП в условиях холода вызывает снижение оксидазной активности церулоплазмина в плазме крови крыс на 28,7 % (р) < 0,001) по сравнению с Холодовым стрессом; вместе с тем исследуемый показатель превышает таковой у интактных животных на 19,4 % (р < 0,05). Предварительное введение животным, помещённым в холодовую камеру, ДСИП способствует нормализации содержания МСМ в плазме крови : £ 234 и Е гао снижаются на 50 % (р! < 0,001) и 31,6 % (р[ < 0,001), соответственно, по сравнению с Холодовым стрессом. Коэффициент распределения к достигает нормы, повышаясь на 37,6 % (р! < 0,001), по сравнению с таковым при стрессе. В то же время, ДСИП препятствует снижению уровня среднемолекулярных АО в тканях, вероятно, вследствие стабилизации структуры клеточных мембран. На фоне введения ДСИП «Холодовым» крысам Е и« и Е гао в печени повышаются на 30,2 % (р| < 0,001) и 17 % (р! < 0,05), соответственно, по сравнению с Холодовым стрессом, достоверно ие отличаясь от контрольных величин, также отсутствуют достоверные изменения коэффициента к. В мозге животных, подверженных действию холода, при введении ДСИП имеет место однонаправленное увеличение содержания на 29 % (р1 < 0,001) непептидного и на 21,8 % (р] < 0,001) пептидного компонентов пула МСМ по сравнению с таковыми показателями у крыс при стрессе. При этом Е 254

на 9 % (р < 0,001) выше, а Е »> на 11 % (р < 0,05) ниже контроля. Коэффициент к, указывающий на соответствующие изменения компонентов общей фракции МСМ, в мозге снижается на 17,8 % (р < 0,001) по сравнению с интакгными крысами и практически не отличается от такового при стрессе.

Представляет интерес способность ДСИП регулировать прооксидантно-антиоксидантный баланс тканей и крови в норме и при стрессе путём изменения содержания низкомолекулярных соединений, обладающих, в зависимости от концентрации, как анти-, так и прооксидаягными свойствами. Так, на фоне введения ДСИП «Холодовым» животным снижается уровень мочевины и мочевой кислоты, соответственно, на 43 % (p¡ < 0,001) и 26,4 % (р( < 0,001) в мозге, на 24% (pi < 0,01) и 33,2 % (pi < 0,001) в плазме крови, в печени концентрация мочевины уменьшается на 15,4 % (pi < 0,01) по сравнению с Холодовым стрессом, содержание мочевой кислоты - не изменяется; тем самым ДСИП способствует нормализации содержания мочевины в тканях и плазме крови, тогда как концентрация мочевой кислоты в мозге и плазме крови остаётся на 45,2 % (р < 0,001) и 32,2 % (р < 0,01), соответственно, выше контрольных величин, достоверно не отличаясь от контроля в печени. Механизм действия ДСИП на азотистый метаболизм тканей и крови реализуется, вероятно, через изменение структуры, активности, огггимума действия ферментов синтеза и деградации мочевины и мочевой кислоты, а также регуляцию фильтрации, реабсорбции и выделения их из организма.

ДСИП, по-видимому, принимает активное участие в регуляции липидного метаболизма, а посредством этого, и структурного состояния биомембран. Пептид дельта-сна, предварительно введённый животным перед помещением их в холодовую камеру, предотвращает избыточное накопление холестерина в мозге, печени и МЭ путем снижения его содержания, соответственно, на 27,5 % (p¡ < 0,01), 37 % (pt < 0,05) и 39 % (pi < 0,01) по сравнению с Холодовым стрессом и поддержания на уровне контроля. Наряду с регуляцией метаболических и функциональных изменений, происходящих в органах и тканях крыс, помещённых в условия холода, ДСИП корректирует и структурные модификации клеточных мембран, вызванные липопереокисленнем. Мембраностабшшзируюшее действие ДСИП при стрессе, обнаруженное нами как в опытах in vivo, так и ¡n vítro, обусловлено его влиянием на ряд физико-химических параметров. Экзогенный ДСИП нормализует изученные структурные характеристики мембран в результате увеличения эффективности безызлучательного переноса энергии с мембранных тршггофанилов на пирен, а, соответственно, степени погружения белков в мембрану и/или снижения степени их ассоциации, на 17,5 % (pi< 0,01) в опытах in vivo и на 22,9 % (p¡ < 0,001) в опытах in vitxo, повышения микровязкости зон бе-

лок-лишдашх контактов на 20,3 % (p¡< 0,001) в опытах in vivo и на 22,4 % (pi < 0,001) в опытах in vitro по сравнению с Холодовым стрессом; микровязкость липидного бислоя МЭ «холодовых» крыс достоверно не изменяется, что указывает на сохранение мембранами эластичных свойств. Под влиянием ДСНП отмечается снижение полярности в гидрофобной зоне бислоя на 11,1 % (pi < 0,001) в опытах in vivo, достигая контрольных величин, и на 8,2 % (pi < 0,001) в опытах in vitro по сравнению с Холодовым стрессом, однако, данный показатель остаётся при этом выше такового у интактных животных на 8,7 % (р < 0,05). ДСИП понижает отрицательный поверхностный заряд мембран, о чём свидетельствует увеличение интенсивности флуоресценции АНС в МЭ крыс, помещённых в условия холода, при концентрациях зонда 10, 20 и 30 мкмоль, соответственно, на 15,4 % (pi < 0,001), 10,8 % (pi < 0,001), 8,9 % (pi < 0,001) в опытах in vivo и на 13,8 % (pi < 0,001), 11,4 % (р, < 0,001) и 12,4 % (pi < 0,001) в опытах in vitro по сравнению со стрессом, вероятно, в результате инги-бирования ПОЛ, активности фосфолипаз и/или возрастании соотношения белок/лнпид в МЭ практически до уровня контроля. Интенсивность флуоресценции АНС в пробах с концентрацией зонда 20 и 30 мхМ остается ниже контроля, соответственно, на 6 % (р < 0,001) и 11,2 % (р < 0,001) в опытах in vivo и на 5,3 % (р < 0,05) и 7,9 % (р < 0,01) в опытах in vitro.

Таким образом, ДСИП, предварительно введённый животным перед помещением их в условия холодового воздействия, предотвращает активацию и подавляет СРП, восстанавливает прооксидантно-антиоксадантное равновесие, нарушенное действием холода, в сторону повышения мощности эндогенных систем АО защиты тканей и крови, особенно глута-тионпероксидазной ферментативной системы, и неферментативных механизмов, корректирует изменения структурного состояния клеточных мембран, обеспечивая структурированность и стабильность белок-липидного бислоя и, тем самым, стационарность ПОЛ. Схема, представленная на рис.4, иллюстрирует возможные ДСИП-зависимые механизмы регуляции стресс-реакщш, ключевым и пусковым звеном в развитии которой выступает система СРП, как на центральном, так и на периферическом уровнях.

Полученные нами данные позволяют выдвинуть утверждение о том, что ДСИП участвует в регуляции стресс-реакции, ограничивая её чрезмерную активацию и повреждающие эффекты, как на уровне нейрогуморальных регуляторных механизмов, так и на уровне органов-мишеней. Важно, что независимо or типа ткани (мозг, печень, кровь) ДСИП всегда препятствует чрезмерной выраженности стресс-реакции, однонаправлено усиливая и воспроизводя защитные эффекты сгресс-лнмитарующих систем. Локальное ангиперекисное действие ДСИП связано с угнетением прооксидантной и активацией антиоксидантной систем организма при его введении. Современные представления о молекулярных механизмах действия

Рис. 4. Участие дельта-сон индуцируюшего пептида в регуляции стресс-реаклин

РП на клеточной уровне, основанные на способности пептидных молекул, заложенной в их химической природе, образовывать мобильные комплексы с белками и фосфолипидами, и дополненные новыми экспериментальными данными, полученными в нашем исследовании механизма ангистрессорного действия ДСИП, позволяют утверждать о существовании как рецеггторного пути действия ДСИП на клетки, при наличии высокоселекпшных рецепторов для ДСИП в клеточной мембране, так и пути прямого «нерецепторного» воздействия пептида дельта-сна на мембранные структуры и внутриклеточные процессы.

Влияние ДСИП на структурное состояние биомембран является наиболее важным элементом механизма его ангистрессорного действия, поскольку играет огромную роль в прикладном аспекте, имеет большие перспективы в лечении наркомании, алкоголизма, неврологических расстройств, как патологий, связанных с дестабилизацией мембранного аппарата и нарушением реактивности рецепторов, их способности связывать биологически-активные вещества и фармакологические препараты. Экзогенный ДСИП нормализует структурную организацию и стабилизирует белок-липидные взаимодействия мембран, что может приводить к нормализации реактивности рецепторов и их чувствительности к различным химическим сигналам, активации мембраносвязанных ферментных систем (ответственных за передачу сигнала в клепках (ц-АМФ), синтез АТФ, процессы пролиферации), и, тем самым, повышению эффективности фармакологической терапии. Изучение роли ДСИП в адаптивных возможностях организма при действии экстремальных условий среды даёт возможность рекомендовать его для использования при адаптации к действию неблагоприятных факторов среды и в клинической практике, а также для профилактики, коррекции ряда метаболических сдвигов и предупреждения окислительной деструкции мембран в норме.

ВЫВОДЫ

1. Экзогенный ДСИП, введённый однократно, внугрибрюшинно, приводит к снижению накопления молекулярных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и шиффовых оснований в мозге, печени, эритроцитах интакгных крыс в среднем на 35-57 % по сравнению с контролем.

2. При введении ДСИП ингактным животным наблюдается смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону усиления активности как ферментативной, так и неферментативной АОС тканей и крови. Активность СОД, каталазы, глугатионпероксидазы, глутатионредуктазы в мозге, печени и эритроцитах повышается в среднем на 15-62 % по сравнению с контролем, значительно возрастает концентрация восстановленного глутатио-на, особенно в мозге, в тканях и эритроцитах, увеличивается содержание низкомолекулярных АО - мочевины и мочевой кислоты в мозге и печени, без изменения их уровня в плазме

крови, снижается содержание холестерина в мозге и МЭ, без изменения его уровня в печени. ДСИГТ предотвращает накопление МСМ в плазме крови и тканях и не оказывает влияния на активность церулоплазмияа в плазме крови интактных крыс. Действие ДСИП направлено на стимуляцию фагоцитарного звена иммунитета, проявляющуюся в увеличении активности миелопероксидазы в нейтрофилах крови, предупреждение активации прооксидантного фермента ксантиноксидазы в мозге и печени.

3. Мембранотропное действие ДСИП у интактных животных состоит в повышении эффективности безызлучатеяьного переноса энергии с мембранных триггтофанилов на пирен, что свидетельствует об увеличении степени погружения белков в бислой, либо снижении их агрегации, возрастании микровязкости зон белок-липидных контактов, отсутствии изменений микровязкости и полярности лишщной фазы мембран, появлении дополнительного отрицательного заряда на поверхности МЭ интактных крыс.

4. Холодовой стресс характеризуется резкой активацией липопереокисления, сопровождающейся существенным повышением уровня диеновых конъюгатов и шиффовых оснований в тканях и, в ещё большей степени, в эритроцитах крыс. При этом прооксидантно-антиоксидантное равновесие сдвигается в сторону усиления активности прооксидантов : происходит резкое увеличение активности ксантиноксидазы в мозге и печени, и снижение активности миелопероксидазы в нейтрофилах крови. Истощение при стрессе, главным образом, ферментативной внутриклеточной АОС в результате ингибирования активности СОД, каталазы и глутатионзависимых ферментов в мозге, печени и эритроцитах компенсируется повышением активности церулоплазмина в плазме крови и активацией неферментативных АО механизмов : ростом уровня мочевины и мочевой кислоты в тканях и плазме крови, без изменения содержания мочевой кислоты в печени. Холодовое воздействие не приводит к снижению концентрации восстановленного глутатиона в мовге и сопровождается накоплением фракций МСМ (254,280 им) в плазме крови на фоне уменьшения общего пула МСМ в печени и мозге, увеличением концентрации холестерина в мозге, печени и МЭ крыс.

5. В условиях холодового стресса отмечается дестабилизация структуры МЭ крыс. Уменьшается на 28 % эффективность безызлучательного переноса энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен, указывающая на экспонирование белков из гидрофобного бислоя, либо их агрегацию, снижается на 25 % микровязкость зон белок-липидных контактов, без существенного изменения шкровязкости липидиой фазы МЭ, увеличивается на 18,3 % полярность внутренних областей мембраны и на 13,5-18 % отрицательный поверхностный заряд, регистрируемый при концентрациях зонда АНС 10-30 мкмоль, соответственно.

6. Антистрессорный эффект ДСИП заключается в предотвращении индукции ПОЛ, норма-

лизации содержания диеновых конъюraros в эритроцитах и шиффовых оснований во всех исследуемых биосубсгратах, понижении концентрации диеновых конъюгатов в мозге и печени ниже уровня контроля. ДСИП восстанавливает прооксидантно-антиоксидантное равновесие, нарушенное действием холода, подавляя активность ксантиноксидазы в мозге и печени и повышая активность миелопероксидазы в нейтрофилах крови до уровня контроля. ДСИП повышает ёмкость и мощность эндогенных ферментативных систем АО защиты, значительно увеличивая активность СОД, катал азы и, особенно глутатионзависимых ферментов, в мозге, печени и эритроцитах, снижает активность церулоплазмнна в плазме крови по сравнению с Холодовым стрессом, при этом активность глутатионредуктазы в печени, содержание восстановленного глутатиона в мозге и церулоплазмина в плазме крови превышают уровень контроля. ДСИП способствует нормализации содержания неферментативных соединений - МСМ в плазме крови и печени, с тенденцией их к норме в мозге, уровня мочевины в тканях и плазме крови, мочевой кислоты - в печени, снижению содержания мочевой кислоты в мозге и плазме крови по сравнению с Холодовым стрессом, предотвращению накопления холестерина в мозге, печени, МЭ и поддержанию его на уровне контроля.

7. Мембраностабшшзирующий эффект ДСИП при действии холода проявляется в нормализации состояния зоны белок-липидных контактов и микровязкости липидного бислоя, снижении полярности и отрицательного поверхностного заряда МЭ «холодовых» животных. Параллелизм, идентичность и однонаправленность изменений структурных характеристик МЭ как у интактных, так и у «холодовых» крыс под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro являются доказательством не только опосредованного, но и прямого участия пептида дельта-сна в регуляции структурно-функционального состояния биомембран, а также усиления его эффектов при стрессе.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шусганова Т.А., Чемисова О.С. Влияние дельта-сон индуцирующего пегггида на активность антиоксидантных ферментов и содержание веществ - антиоксидантов в крови и тканях крыс // Изв.высщ.учебных заведений, Сев.-Кавк.регион, Естесгв.науки. - 1998. -Т. 103, № 3. - С. 99-102.

2. Bondarenko T.I., Goroshinskaya I A, Mikhaleva I.I., Shustanova Т. A Molecular effects of delta-sleep inducing peptide under stress // In : Д1 Internat. Congress of Pathophysiology, Lahti, Finland, 1998. - J. Pathophysiology. - 1998. - Suppl.l, Ks 5. - P. 203.

3. Bondarenko T.I., Milutina N.P., Mikhaleva I.I., Shustanova ТА Regulative effects of delta-sleep inducing peptide in brain under stress // In: 12tt ESN'98 Gen. Meeting, Europ. Society for Neu-rochemistry, St.Petersburg, Russia, 1998. - J. Neurochem. - 1998. - Suppl., Vol. 71. - S 44.

4. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Михалёва И.И., Шустанова Т.А. Молекулярные механизмы действия дельта-сон индуцирующего пептида при стрессе // В мат. XVI] Съезда физиол. России, Ростов-на-Дону, 1998. - С. 403.

5. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Михалёва И.И., Шустанова Т А. Молекулярные механизмы антиоксидантного действия дельта-сон индуцирующего пептида при стрессе // В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», Москва, 1998. - С. 114.

6. Шустанова Т А., Чемисова О С. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на активность антиоксидантных ферментов при стрессе // В мат.научн.конф.асп. и соискателей РГУ, Ростов-на-Дону, 1999. - С. 7-8.

7. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Шустанова Т А., Михалёва ИИ. Регуляторное влияние дельта-сон индуцирующего пептида на активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах и тканях крыс при холодовом стрессе//Рос.физиол.журнал. - 1999. - Т. 85, № 5. -С. 671-679.

8. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Шустанова Т А., Калмыкова Ю.А., Михалёва И.И Регуляция дельта-сон индуцирующим пептидом свободнорадикальных процессов в мембранах эритроцитов при действии холода и в условиях патологии // В мат. Межд.конф «Свободнорадикальные процессы : экологические, фармакологические и клинические аспекты», Санкт-Петербург, 1999. - С. 38-39.

9. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Шустанова Т А, Михалёва И.И. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на интенсивность лилопереокисления и активность ксангинок-сидазы в тканях крыс при холодовом стрессе // Рос.физиол.журнал - 1999. - Т. 85, № 8. -С. 1076-1080.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АО, АОС - антиоксиданты, антиоксидантная система

ДСИП - дельта-сон индуцирующий пептид

МСМ - молекулы средней массы

МЭ - мембраны эритроцитов

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РП - регуляторные пептиды

СОД - супероксиддисмутаза

СРО, СРП - свободнорадикальное окисление (процессы)

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шустанова, Татьяна Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Строение, метаболизм и биологическая роль дельта-сон индуцирующего пептида (ДСИП).

1.2. Действие на теплокровных животных низкой температуры окружающей среды.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 41 2Л. Постановка эксперимента.

2.2. Получение биологического материала.

2.2.1. Получение плазмы крови.

2.2.2. Приготовление суспензии эритроцитов и гемолизатов.

2.2.3. Выделение лимфоцитов и нейтрофилов в градиенте плотности фиколл - верографина.

2.2.4. Приготовление гомогенатов тканей.

2.3. Биохимические методы исследования.

2.3.1. Определение содержания диеновых конъюгатов.

2.3.2. Определение содержания шиффовых оснований.

2.3.3. Определение содержания общего холестерина.

2.3.4. Определение содержания общих липидов.

2.3.5. Определение активности ксанти'ноксидазы.

2.3.6. Определение активности миелопероксидазы.

2.3.7. Определение содержания белка.

2.3.8. Определение активности супероксиддисмутазы.

2.3.9. Определение активности каталазы.

2.3.10. Определение активности глутатионпероксидазы.

2.3.11. Определение концентрации восстановленного глутатиона.

2.3.12. Определение активности глутатионредуктазы.

2.3.13. Определение концентрации гемоглобина.

2.3.14. Определение оксидазной активности церулоплазмина.

2.3.15. Определение содержания молекул средней массы.

2.3.16. Определение концентрации мочевины.

2.3.17. Определение концентрации мочевой кислоты.

2.4. Биофизические методы исследования.

2.4.1. Определение эффективности безызлучательного переноса энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен.

2.4.2. Определение относительной микровязкости липидного бислоя и микровязкости зон белок-липидных контактов мембран.

2.4.3. Определение полярности липидной фазы мембран.

2.4.4. Определение поверхностного заряда мембран.

2.5. Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Влияние ДСИП на интенсивность липопереокисления в мозге, печени и эритроцитах интактных крыс и при действии низкой температуры окружающей среды.

3.2. Влияние ДСИП на состояние прооксидантно-антиоксидантного равновесия в тканях и крови интактных крыс и при действии низкой температуры окружающей среды.

3.2.1. Влияние ДСИП на активность прооксидантных ферментов в тканях и крови интактных крыс и при действии холода.

3.2.1.1. Активность ксантиноксидазы в мозге и печени интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.1.2. Активность миелопероксидазы в нейтрофилах и моноцитах крови интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.2. Влияние ДСИП на активность антиоксидантных ферментов в тканях и крови интактных крыс и при действии холода.

3.2.2.1. Активность супероксиддисмутазы и каталазы в мозге, печени и эритроцитах интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.2.2. Активность глутатио н перо кс ид аз ы, глутатионредуктазы и концентрация восстановленного глутатиона в мозге, печени и эритроцитах интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.2.3. Оксидазная активность церулоплазмина в плазме крови интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.3. Влияние ДСИП на содержание неферментативных антиоксидантов в тканях и крови интактных крыс и при действии холода.

3.2.3.1. Содержание молекул средней массы в плазме крови, печени и мозге интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.3.2. Концентрация мочевины и мочевой кислоты в мозге, печени и плазме крови интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.2.3.3. Содержание общего холестерина в мозге, печени и эритроцитах интактных животных, при действии холода и введении ДСИП.

3.3. Влияние ДСИП на структурное состояние и поверхностный заряд мембран эритроцитов интактных крыс и при действии низкой температуры окружающей среды.

3.3.1. Эффективность безызлучательного переноса энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен и микровязкость зон белок-липидных контактов мембран эритроцитов интактных животных, при действии холода и под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro.

3.3.2. Относительная микровязкость и полярность липидного бислоя мембран эритроцитов интактных животных, при действии холода и под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro.

3.3.3. Поверхностный заряд мембран эритроцитов интактных животных, при действии холода и под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Регуляция дельта-сон индуцирующим пептидом свободнорадикальных процессов в тканях и мембранах эритроцитов крыс при действии холода"

Современное изучение регуляторных пептидов (РП) направлено на понимание устройства и механизмов действия сложной пептидергической системы надклеточной регуляции биохимических и физиологических функций (Ашмарин, Обухова, 1994). Система РП оказалась одной из важнейших регуляторных систем организма. По сравнению с другими системами межклеточной сигнализации пептидная система является наиболее многочисленной, а сами пептидные регуляторы - самыми полифункциональными. Это послужило основой гипотезы об образовании РП вместе с другими гуморальными регуляторами функционального континуума, который обеспечивает высокую гибкость и избирательность действия данной системы (Ашмарин, Обухова, 1998). Практическое применение РП сулит наиболее физиологичные и целенаправленные лечебные воздействия. Будучи эндогенными олигопеп-тидами, сходными с продуктами метаболизма, они не являются токсичными веществами, эффективны в очень низких дозах, не накапливаются в организме, отличаются высокой селективностью действия, не вызывают опасных для организма иммунологических реакций (Ашмарин, 1984, 1988).

Одним из представителей класса РП является дельта-сон индуцирующий пептид (ДСИП), открытый как гипногенный модулятор мозга, фактор, регулирующий дельта-волновую стадию сна (Мопшег, ЗсЬоепепЬещег, 1977). Впоследствии было обнаружено, что ДСИП оказывает влияние на ряд функций, непосредственно не связанных со сном. Наибольший практический интерес представляют обнаруженные в ряде экспериментов антистрессорный и адаптогенный эффекты ДСИП, установленные при эмоционально-болевых воздействиях, холодовом стрессе, гипер- и гипоксии, гипокинезии (Коплик и др., 1982, Бондаренко и др., 1985, Менджерицкий и др., 1987, Судаков, 1991, Хватова и др., 1995). Пептидная природа ДСИП предполагает возможность его взаимодействия со множеством регуляторных механизмов в живых системах. Важнейшей регуляторной системой организма является система свободнорадикальных процессов (СРП). С ней связаны такие биологические явления, как окислительное фосфорилирование в митохондриях, генерация и проведение нервного импульса, клеточное деление, синтез ряда гормонов, механизмы регуляции мембранной проницаемости и активности мембранных ферментов (Владимиров, 1989).

Действие пептидов на процессы, происходящие в организме, может не проявляться на фоне оптимального функционирования физиологической или биохимической системы, но может быть выражено при сдвигах функционального состояния этих систем, например, при действии экстремальных факторов среды. Для изучения молекулярных механизмов ан-тистрессорного действия ДСИП в нашей работе использована модель холодового стресса. Выбор этой модели стрессорного воздействия связан с необходимостью изучения механизмов холодового стресса и адаптации организма как наиболее сложной и мало изученной проблемы биологии и медицины. Актуальность данной проблемы обусловлена тем, что около 15 % населения земного шара живёт в полярных районах, а также трудностями, связанными с освоением Севера и морских глубин. Существенное значение приобретает использование защитных веществ, повышающих устойчивость организма к действию низких температур, что является основой для формирования нового направления науки - адаптационной медицины.

Воздействие на животных холода (О - +4 °С) в течение 1-3 суток характеризуется развитием стрессорной реакции, что выявляется по гормональным сдвигам и усилению катаболизма (Щеглова, 1969, Ардашев и др., 1978, Майстрах, 1979, Бондаренко и др., 1985, 1990, 1992). Длительное действие низкой температуры окружающей среды 0 - +4 °С приводит к постепенному переходу от стресса к адаптации, что обеспечивается рядом специфических и неспецифических реакций. Основными и универсальными механизмами развития стрессорной реакции, возникающей при действии на организм различных факторов, и, в частности, низкой температуры среды, являются интенсификация перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) на фоне повышенной активности прооксидантной системы, истощения потенциала эндогенной антиоксидантной системы (АОС) и дестабилизации структуры клеточных мембран. Мембраны клеток являются мишенью для действия стресс-факторов и фармакологических веществ. В связи с этим изучение молекулярных механизмов функционирования биомембран в норме, при стрессорных процессах и в условиях корректирующего воздействия физико-химических агентов необходимо, прежде всего, для разработки современных методов и критериев оценки нарушений нативного структурно-функционального состояния компонентов биомембран, а также поиска эффективных способов профилактики и лечения различных стрессорных состояний, создания новых лекарственных средств. В этом плане определённый интерес представляет изучение механизма реализации биологической активности ДСИП, как соединения, регулирующего СРП.

В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение роли ДСИП в регуляции СРП в тканях и мембранах эритроцитов (МЭ) крыс, а также их структурно-функционального состояния в условиях нормально функционирующего организма и при холодовом стрессе.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи исследования : 1. Изучить влияние ДСИП на интенсивность липопереокисления в мозге, печени и эритроцитах интактных крыс и содержащихся в условиях воздействия низкой температуры среды 0 0 - + 4 °С в течение 3-х суток.

2. Изучить влияние ДСИП на активность прооксидантных ферментов - ксантиноксидазы в ткани мозга и печени и миелопероксидазы в нейтрофилах крови интактных крыс и подверженных действию холода.

3. Установить влияние ДСИП на активность антиоксидантных ферментов - супероксиддис-мутазы, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы в мозге, печени и эритроцитах, а также активность антиоксидантного белка плазмы крови - церулоплазмина у крыс контрольной группы и при воздействии холода.

4. Изучить влияние ДСИП на содержание неферментативных антиоксидантов - восстановленного глутатиона, мочевины, мочевой кислоты, молекул средней массы, холестерина в мозге, печени, плазме крови и эритроцитах интактных крыс и в условиях действия низкой температуры среды.

5. Исследовать действие ДСИП на структурное состояние и поверхностный заряд МЭ интактных крыс и содержащихся в условиях холода в опытах in vivo и in vitro.

В общетеоретическом плане выяснение молекулярных механизмов действия ДСИП, его участия в регуляции важнейших процессов жизнедеятельности клеток в результате разрешения поставленных задач может оказаться ключом к решению наиболее актуальной проблемы нейробиологии, связанной с познанием молекулярных механизмов действия гормонов, РП, биологически активных веществ, позволит более точно воссоздать целостный образ системы пептидной регуляции и, на наш взгляд, является одной из самых перспективных и увлекательных областей современной биохимии. Весьма интересным и практически значимым представляется исследование фармакологической эффективности ДСИП при стрессе с целью дальнейшего применения в лечебной и профилактической медицине нового лекарственного препарата - дельтарана, синтезированного на основе данного пептида.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Шустанова, Татьяна Анатольевна

выводы

1. Экзогенный ДСИП, введённый однократно, внутрибрюшинно, приводит к снижению накопления молекулярных продуктов ПОЛ - ДК и ШО в мозге, печени и эритроцитах ин-тактных крыс в среднем на 35-57 % по сравнению с контролем.

2. При введении ДСИП интактным животным наблюдается смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в сторону усиления активности как ферментативной, так и неферментативной АОС тканей и крови. Активность СОД, каталазы, ГПО, ГР в мозге, печени и эритроцитах повышается в среднем на 15-62 % по сравнению с контролем, значительно возрастает концентрация ВГ, особенно в мозге, в тканях и эритроцитах, увеличивается содержание низкомолекулярных АО - мочевины и МК в мозге и печени, без изменения их уровня в плазме крови, снижается содержание холестерина в мозге и МЭ, без изменения его уровня в печени. ДСИП предотвращает накопление МСМ в плазме крови и тканях и не оказывает влияния на активность ЦП в плазме крови интактных крыс. Действие ДСИП направлено на стимуляцию фагоцитарного звена иммунитета, проявляющуюся в увеличении активности МПО в нейтрофилах крови, предупреждение активации прооксидантного фермента КО в мозге и печени.

3. Мембранотропное действие ДСИП у интактных животных состоит в повышении эффективности безызлучательного переноса энергии с мембранных триптофанилов на пирен, что свидетельствует об увеличении степени погружения белков в бислой, либо снижении их агрегации, возрастании микровязкости зон белок-липидных контактов, отсутствии изменений микровязкости и полярности липидной фазы мембран, появлении дополнительного отрицательного заряда на поверхности МЭ интактных крыс.

4. Холодовой стресс характеризуется резкой активацией ЛПО, сопровождающейся существенным повышением уровня ДК и ШО в тканях и, в ещё большей степени, в эритроцитах крыс. При этом прооксидантно-антиоксидантное равновесие сдвигается в сторону усиления активности прооксидантов : происходит резкое увеличение активности КО в мозге и печени, и снижение активности МПО в нейтрофилах крови. Истощение при стрессе, главным образом, ферментативной внутриклеточной АОС в результате ингибирования активности СОД, каталазы и глутатионзависимых ферментов в мозге, печени и эритроцитах компенсируется повышением активности ЦП в плазме крови и активацией неферментативных АО механизмов : ростом уровня мочевины и МК в тканях и плазме крови, без изменения содержания МК в печени. Холодовое воздействие не приводит к снижению концентрации ВГ в мозге и сопровождается накоплением фракций МСМ (254, 280 нм) в плазме крови на фоне уменьшения общего пула МСМ в печени и мозге, увеличением концентрации холестерина в мозге, печени и МЭ крыс.

5. В условиях холодового стресса отмечается дестабилизация структуры МЭ крыс. Уменьшается на 28 % эффективность безызлучательного переноса энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен, указывающая на экспонирование белков из гидрофобного бислоя, либо их агрегацию, снижается на 25 % микровязкость зон белок-липидных контактов, без существенного изменения микровязкости липидной фазы МЭ, увеличивается на 18,3 % полярность внутренних областей мембраны и на 13,5-18 % отрицательный поверхностный заряд, регистрируемый при концентрациях зонда АНС 10-30 мкмоль, соответственно.

6. Антистрессорный эффект ДСИП заключается в предотвращении индукции ПОЛ, нормализации содержания ДК в эритроцитах и ШО во всех исследуемых биосубстратах, понижении концентрации ДК в мозге и печени ниже уровня контроля. ДСИП восстанавливает про-оксидантно-антиоксидантное равновесие, нарушенное действием холода, подавляя активность КО в мозге и печени и повышая активность МПО в нейтрофилах крови до уровня контроля. ДСИП повышает ёмкость и мощность эндогенных ферментативных систем АО защиты, значительно увеличивая активность СОД, каталазы и, особенно глутатионзависи-мых ферментов, в мозге, печени и эритроцитах, снижает активность ЦП в плазме крови по сравнению с Холодовым стрессом, при этом активность ГР в печени, содержание ВГ в мозге и ЦП в плазме крови превышают уровень контроля. ДСИП способствует нормализации содержания неферментативных соединений - МСМ в плазме крови и печени, с тенденцией их к норме в мозге, уровня мочевины в тканях и плазме крови, МК - в печени, снижению содержания МК в мозге и плазме крови по сравнению с холодовым стрессом, предотвращению накопления холестерина в мозге, печени, МЭ и поддержанию его на уровне контроля.

7. Мембраностабилизирующий эффект ДСИП при стрессе проявляется в нормализации состояния зоны белок-липидных контактов и микровязкости липидного бислоя, снижении полярности и отрицательного поверхностного заряда МЭ «холодовых» животных. Параллелизм, идентичность и однонаправленность изменений структурных характеристик МЭ как у интактных, так и у «холодовых» крыс под влиянием ДСИП в опытах in vivo и in vitro являются доказательством не только опосредованного, но и прямого участия пептида дельта-сна в регуляции структурно-функционального состояния биомембран, а также усиления его эффектов при стрессе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема молекулярных механизмов действия РП приобрела в настоящее время особую актуальность. Пептидергическая система надклеточной регуляции биохимических и физиологических функций является наиболее сложной по сравнению с системами другого типа. Функциональный континуум РП представлен несколькими уровнями иерархии, высший из которых формируется пептидами гипоталамуса. Они регулируют продукцию пептидных и белковых гормонов гипофиза, образующих следующий уровень пептидной иерархии. Следуя далее к периферии, можно отметить как прямое действие гипофизарных РП на функции клеток и тканей, так и модуляцию активности периферических эндокринных желез, образующих низший уровень регуляторной системы. Наряду с этой стройной иерархической системой, существуют многочисленные другие регуляторные активности РП, принадлежащих к высшим уровням. Они действуют, минуя классическую систему иерархии, оказывая прямое воздействие на ряд физиологических и биохимических функций. Кроме того, выявлены экстраиерархические влияния на продукцию других РП и самый высокий уровень пептидной иерархии, контролирующий продукцию гипоталамических РП (Ашмарин, Обухова, 1994).

Особый интерес представляет изучение молекулярного механизма действия и определение места в многоуровневой системе иерархии РП ДСИП. Присутствие его не только в ЦНС, но и практически во всех периферических органах, тканях и жидких средах организма различных животных подчёркивает причастность ДСИП к регуляторным функциям (Прудченко, Михалёва, 1994). Современная концепция РП свидетельствует о том, что действие РП на процессы, происходящие в организме, может не проявляться на фоне оптимального функционирования физиологической или биохимической системы, но наиболее выражено при сдвигах функционального состояния этих систем, например, под влиянием экстремальных факторов среды. Воздействие на организм стресс-факторов биологической, химической или физической природы характеризуется активацией СРП, ведущих к повреждению структуры биомембран, снижению ёмкости и эффективности АОС. В связи с этим весьма перспективным является изучение характера и интенсивности ЛПО, сдвигов проок-сидантно-антиоксидантного равновесия, определяющего АО статус организма, а также структурного состояния клеточных мембран под влиянием ДСИП, понимание молекулярных механизмов действия которого представляет фундаментальный интерес для медицины и фармакологии в плане разработки наиболее эффективных лекарственных средств, способов профилактики и лечения многих заболеваний.

Нами выявлены некоторые особенности протекания ПОЛ и его регуляции в разных тканях, а также отличительные черты действия ДСИП на этот процесс в организме интакт-ных животных и содержащихся в условиях действия низкой температуры среды.

Согласно результатам проведённого нами исследования, экзогенный ДСИП в дозе 12 мкг/100 г массы животного, введённый внутрибрюшинно, однократно, оказывает существенное влияние на систему СРП, выступающую ключевым метаболическим звеном и маркером функционального состояния организма (рис.28, 30).

Важно отметить зарегистрированное нами снижение интенсивности СРП, определяемое по содержанию молекулярных продуктов ПОЛ - ДК и ШО, уже при введении ДСИП интактным животным. В мозге и печени крыс экзогенный ДСИП эффективно подавляет цепные свободнорадикальные реакции как на начальных, так, и в ещё большей степени, на конечных этапах. В эритроцитах действие пептида направлено на обрыв цепи, главным образом, на стадии образования ДК, а затем и ШО. В этом, по-видимому, заключается определённая биологическая роль ДСИП.

Действие ДСИП, вероятно, можно объяснить угнетением прооксидантной и/или активацией антиоксидантной систем организма. Введение ДСИП интактным животным не приводит к достоверному изменению активности прооксидантного фермента КО в головном мозге и печени. Нами установлено, что одним из механизмов действия ДСИП у интактных животных является активация фагоцитарного звена иммунитета, проявляющаяся в увеличении активности МПО в нейтрофилах крови.

Ферментативные антиоксиданты - СОД и каталаза являются первым звеном внутриклеточной защиты от активных кислородных соединений. На фоне введения ДСИП интактным крысам отмечается повышение активности СОД и каталазы в мозге, печени и эритроцитах, при этом в тканях активность СОД возрастает в большей степени, чем активность каталазы, а в эритроцитах происходит идентичное увеличение активности обоих ферментов, что указывает на сопряжённое их функционирование в системе СОД-каталаза.

ГПО-система, включающая активность ГПО, ГР и ВГ, выступает вторым звеном внутриклеточной защиты организма от окислительного поражения. Под влиянием ДСИП в мозге и печени интактных крыс активность ГПО повышается в той же степени, что и активность каталазы. Это свидетельствует о равной значимости данных антиперекисных ферментов в тканях, тогда как в эритроцитах превалирует активность каталазы, активность ГПО увеличивается незначительно. Данный факт является подтверждением определённой специфичности в механизме реализации биологической активности ДСИП в эритроцитах, связанной с более мощной защитой таковых от высоких токсичных концентраций перекисей, т.е изменения к контролю (интактным животным)

1 м ы 4 1 ^ 1 :

3(1

И £ к

4 * и *

Ц V 9

У 1 2'

13 а

5 5 ? и

Р 1 1 н *

И

А с в 1

1 р. п и

1 I

Диеновые конъюгаты Шиффовы основания Ксантиноксидаза М иелопероксидаза Супероксиддисмутаза Каталаза Глутатионпероксидаза

Глутатионредуктаза

Восстановленный глутатион

Церулоплазмин Е 254 нм

Е 280 нм К=Е280 / Е254 Мочевина

Мочевая кислота

Холестерин и А □ п ■ ■ э I а э г ф тз Ф о

П 5 ^ Ч

2 тз тз х

0) О О 0"

4 1 ч деятельностью каталазы. Вместе с тем обращает на себя внимание и другая очень важная для нормального функционирования организма особенность действия ДСИП, направленного на увеличение активности ГР в тканях и эритроцитах, и, как следствие, весьма значительное повышение концентрации ВГ - неферментативного компонента ГПО-системы, главным образом, в мозге, а также в печени и эритроцитах. Столь существенное повышение активности ГПО-системы в тканях, особенно в мозге, при введении ДСИП является важным звеном в механизме АО действия данного РП.

Установленное нами увеличение активности ферментативной АОС тканей мозга, печени и эритроцитов интактных животных под влиянием ДСИП может быть следствием активации синтеза пептидом дельта-сна исследуемых соединений как непосредственно, где ДСИП может выступать в роли регулятора транскрипции генов специфических областей ДНК, ответственных за образование АО ферментов, так и опосредованно через гормональную систему. Возможно и непосредственное влияние ДСИП на активность ферментов АОС в качестве «прямого эффектора».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шустанова, Татьяна Анатольевна, Ростов-на-Дону

1. Альперович Д.В., Вербицкий Е.В., Ускова Н.И., Лысенко A.B., Менджериций А.М. Нейрохимические механизмы поведенческих эффектов дельта-сон индуцирующего пептида // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 271-272.

2. Альперович Д.В., Кесельман Э.В., Шепелев А.П., Чернавская Л.Н. // Свободнорадикаль-ный механизм антимикробного действия ксантиноксидазы и лактопероксидазы // Бюл.эксп.биол. и мед. 1992. - № 9. - С. 272-274.

3. Альперович Д.В., Лысенко A.B., Михалёва И.И. Перспективы использования дельта-сон индуцирующего пептида для коррекции сдвигов в системе перекисного окисления липи-дов при гипокинезии // В мат. Межд.симп.«Биоантиоксидант», Тюмень, 1997. С. 181-183.

4. Амчеславский В.Г., Демчук М.Л., Сировский Э.Б., Левченко Л.И., Габриэлян Н.И., Бра-гина H.H., Промыслов М.Ш. Уровень средних молекул при эндогенной интоксикации у нейрохирургических больных // Вопр.нейрохирургии. 1989. - № 3. - С. 36-39.

5. Ананьев В.Н., Сосин Д.Г., Жвавый П.Н., Ананьева О.В., Орлов С.А., Чешуина И.А., Со-сина И.Э., Муравьёва И.С. Рецепторные механизмы адаптации к холоду // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 435.

6. Ананян A.A. Биохимические показатели холодового стресса и адаптации и адаптогенная роль мочевины и аргинина// Дис. . канд.биол.наук, 1982. 182 с.

7. Ардашев A.A., Семикина В.В., Мосин А.Ф. Функциональная активность надпочечников крыс при воздействии холода // Нейроэндокринные корреляции. Владивосток : ДВНЦ ВШ, 1978. - С. 77-84.

8. Архангельская М.И., Драхотова Д.А. Повышение электрической стабильности сердца при совместном действии пептида, вызывающего дельта-сон, и флунитразепама // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 4. - С. 342-345.

9. Афанасьев И.Б. Кислородные радикалы в биологических процессах (обзор) // Химико-фармацевтич.журн. 1985. - Т. 19, № 1. - С. 11-22.

10. Ю.Ахрем A.A., Галактионов С.Г., Голубович В.П., Кирнарский Л.И. Теоретический кон-формационный анализ нейропептида, индуцирующего дельта-сон // Биофизика. 1982. -Т. 27, № 2. - С. 324-325.

11. П.Ашмарин И.П. Перспективы практического применения и некоторых фундаментальныхисследований малых регуляторных пептидов //Вопр. мед.химии.-1984. Т.30, № 3,- С.2-7.

12. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды сильного и быстрого действия // Пат.физиол. -1988. -№3. С. 3-8.

13. Ашмарин И.П., Доведова E.JI. Влияние пептида дельта-сна на активность ацетилхолинэ-стеразы и моноаминооксидаз в синаптосомах и митохондриях мозга кролика in vitro // Доклады АН СССР. 1980. - Т.255, № 6. - С. 1501-1503.

14. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Современное состояние гипотезы о функциональном континууме регуляторных пептидов // Вестник РАМН. 1994. - № 10. - С. 28-34.

15. Ашмарин И.П., Обухова М.Ф., Соколова H.A. Функциональный континуум регуляторных пептидов // В мат. XVTI Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 402.

16. Баева Е.Б., Бабарэ Г.М. Стресс и иммунная система // Механизмы развития стресса. Кишинёв, Штиинца, 1987. 222 с.

17. Баженов Ю.И., Баженова А.Ф., Горбачева JI.P., Лукьянов И.Ю., Зарипов В Н. Адренерги-ческая регуляция температурного гомеостаза при адаптации организма к различным факторам среды // В мат. ХУЛ Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 80.

18. Бакуев М.М., Саидов М.З., Бутаков A.A. Особенности секреции миелопероксидазы и хе-милюминесцентного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различной природы //Иммунология. -1991. № 1. - С. 15-16.

19. Балицкий К.П., Шмалько Ю.П. Стресс и метастазирование злокачественных опухолей // Киев, Наукова думка, 1987. С. 167-171, 201-205.

20. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов // Успехи со-врем.биол. 1991. - Т. 111, №6. - С. 923-931.

21. Барбараш H.A. Периодическое действие холода и устойчивость организма // Успехи фи-зиол.наук. 1996. - Т.27, № 4. - С. 116-132.

22. Беляков H.A., Соловьёва И.Е., Мешкова М.Е. Регуляторные пептиды в лёгком // Успехи физиол.наук. 1992. - Т.23, № 2. - С. 74-85.

23. Белякова Е.И., Ерёмина С.А., Колмакова Т.С. Реакция гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы на острый и хронический стресс у крыс // Ред.ж. Пат.физиол. и эксп.терапия, М., 1995. Деп. в ВИНИТИ 31.01.1995, № 272-В 95.

24. Биленко М.В., Каган В.Е., Велиханова Д.М., Комаров П.Г. Защитное действие антиокси-дантов и индукторов микросомальных монооксигеназ при ишемическом и реоксигенаци-онном повреждении печени // Бюл.эксп.биол. и мед. 1983. - № 4. - С. 30-32.

25. Болдырев A.A. Двойственная роль свободнорадикальных форм кислорода в ишемическом мозге (обзор) // Нейрохимия. 1995. - Т. 12, № 3. - С. 3-13.

26. Бондаренко Т.И. Метаболизм гомокарнозина в мозгу животных разного возраста и в экстремальных условиях среды// Дис. . докт.биол.наук, 1990. 391 с.

27. Бондаренко Т.И., Грищенко Е.С., Кричевская A.A. Влияние пептида дельта-сна на интенсивность автолитического расщепления белков в мозгу крыс // Нейрохимия. 1988. - Т. 77, № 1. - с. 153-154.

28. Бондаренко Т.И., Кричевская A.A., Кощий Г.Н. Гомокарнозин в головном мозгу крыс при холодовой адаптации // Физиол.журн.СССР. 1989. - Т. 71, № 3. - С. 333-335.

29. Бондаренко Т.И., Кричевская A.A., Крупенникова Е.Ю., Михалёва И.И. Влияние пептида дельта-сна на состояние мембран эритроцитов при действии низкой температуры // Физиол.журн.СССР. 1985. - Т. 71, № 3. - С. 279-282.

30. Бондаренко Т.И., Кричевская A.A., Шейкина И.В., Кирюхина Е.В. Влияние пептида дельта-сна на содержание адреналина в тканях крыс в норме и при действии холодового стресса// Укр.биохим.журн. 1990. - Т.62, № 5. - С. 34-38.

31. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Михалёва И.И., Носкова Г.В. Молекулярные механизмы действия антиоксидантов природных олигопептидов // В мат. Межд.симпоз. «Биоантиоксидант», Тюмень, 1997. - С. 17.

32. Бондаренко Т.И., Милютина Н.П., Михалёва И.И., Шустанова Т.А. Молекулярные механизмы антиоксидантного действия дельта-сон индуцирующего пептида при стрессе // В мат. УМежд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 114.

33. Бондаренко Т.Н., Милютина Н.П., Михалёва И.И., Шустанова Т.А. Молекулярные механизмы действия дельта-сон индуцирующего пептида при стрессе // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 403.

34. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты вчера, сегодня, завтра . // В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 1.

35. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты : новые идеи и повторение пройденного // В мат. Межд.симпоз. «Биоантиоксидант», Тюмень, 1997. С. 3-4.

36. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Керимов Р.Ф. Взаимосвязь между содержанием природных антиоксидантов и вязкостью липидов в мембранах органелл в норме // Бюл.эксп.биол. и мед. 1986. - № 4. - С. 431-433.

37. Буров Ю.В., Юхананов З.Ю., Майский А.И. Содержание пептида, индуцирующего дельта-сон, в мозге крыс с различным уровнем алкогольной мотивации // Бюл.эксп.биол. и мед. 1982. - Т.94, № 9. - С. 67-70.

38. Быкова Л.П., Жукова Т.П. Действие этанола и лимонтара в антенатальном периоде развития на перекисное окисление липидов и ферменты антиоксидантной защиты в ткани мозга и печени потомства крыс // Бюл.эксп.биол. и мед. 1994. - № 1. - С. 41-44.

39. Вальдман Б.М., Волчегорский И.А., Пужевский A.C. Среднемолекулярные пептиды крови как эндогенные регуляторы перекисного окисления липидов в норме и при термических ожогах//Вопр.мед.химии. 1991. - Т.37, №1. - С. 23-26.

40. Вальдман Б.М., Пушкарев В.П., Скобелева H.A., Лившиц Р.И. Влияние среднемолекуляр-ных пептидов, выделенных из крови интактных и обожжённых собак, на протеолиз в тканях мышей // Вопр.мед.химии. 1992. - № 3. - С. 60-62.

41. Верболович В.П., Подгорный Ю.К., Теплова Л.Л., Куркаев P.A. Экстракция липидов для комплексной количественной оценки свободнорадикального окисления // Лаб.дело. -1989. № 12. - С. 57-59.

42. Вельтищев Ю.Е., Юрьева Э.А., Воздвиженская Е.С. Биологически активные метаболиты мембранных глицерофосфолипидов в норме и при патологии // Вопр.мед.химии. 1987. -№ 2. - С. 2-9.

43. Виглинская И.В., Салимов P.M., Майский А.И. Влияние пептида дельта-сна на электрофизиологические параметры сна крыс в период алкогольной абстиненции // Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - Т.110, № 9. - С. 281-282.

44. Виноградов А.Ю. Свободнорадикальные процессы и продукты азотистого катаболизма в крови при гипоксии и гипероксии//Дис. . канд.биол.наук, 1994. 158 с.

45. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1989. - № 4. - С. 7-18.

46. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран //Биофизика. 1987. - Т.32, № 5. - С. 830-843.

47. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика, М., 1991. -Т.29. -252 с.

48. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., Наука, 1972. 250 с.

49. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М., Наука, 1980. 320 с.

50. Власова С.Н., Шабунина Е.И., Переслегина И.А. Активность глутатионзависимых ферментов эритроцитов при хронических заболеваниях печени у детей // Лаб.дело. 1990. -№8.-С. 19-21.

51. Волжина-Атабегова Н.Г. Гликолитические процессы в головном мозгу при прерывной и непрерывной адаптации к низким температурам // Биол.науки. 1978. - № 5. - С. 32-36.

52. Волчегорский И.А., Вальдман Б.М., Скобелева H.A., Яровинский В.Г., Лившиц Р.И., Зу-рочка A.B. О патогенетическом значении антиоксидантных свойств среднемолекулярных пептидов при термических ожогах // Вопр.мед.химии. 1991. - Т.37, № 2. - С. 28-32.

53. Волчегорский И.А., Власов A.B., Лившиц Г.Е., Ахкямов Э.М., Скобелева H.A., Лифшиц Р.И., Эберт Л .Я. «Средние молекулы» как неспецифические регуляторы активности фагоцитов // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 2. - С. 159-162.

54. Габриэлян Н.И., Липатова В.И. Опыт использования показателя средних молекул в крови для диагностики нефрологических заболеваний у детей // Лаб.дело.-1984.-№ З.-С. 138-140.

55. Гаврилова А.Р., Хмара Н.Ф. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата // Лаб.дело. 1986. - № 2. - С. 721-723.

56. Галанцев В.П., Жекалов А.Н., Коваленко Р.И., Молчанов A.A., Одинак М.М., Попов Е.А., Январева И.Н. Эпифизарные пептиды с антиоксидантными свойствами в терапии астенических состояний человека//В мат. УМежд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 121.

57. Гершанович А.Д., Потоцкий И.В. Особенности экскреции азота у рыб // Успехи совр.биол. 1994. - Т. 114, № 4. - С. 441-448.

58. Гершенович З.С. Мочевина в живых организмах. Ростов-на-Дону, РГУ, 1970. 84 с.

59. Говорова Н.Ю., Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Окислительное повреждение эритроцитов миелопероксидазой. Защитное действие сывороточных белков // Бюл.эксп.биол. и мед. -1989. № 4. - С. 428-430.

60. Гомазков O.A. Роль ферментных систем в регуляции «триггерной» функции физиологически активных пептидов (обзор) // Вопр.мед.химии. 1988. - № 1. - С. 12-18.

61. Гомазков O.A. Функциональная биохимия регуляторных пептидов. М.,Наука, 1992.-160 с.

62. Гонский Я.И., Корда М.М., Клищ И.Н., Фира Л.С. Роль антиоксидантной системы в патогенезе токсического гепатита // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1996. - № 2. - С. 43-45.

63. Горбенко Г.П. Изменение параметров связывания флуоресцентных зондов 1-анилинонафталин-8-сульфоната и 4-(п-диметиламиностирил)-1-метил-пиридиний п-толуолсульфоната с липосомами при воздействии радиации // Биофизика. 1996. - Т.41,2. С. 363-368.

64. Горбенко Г.П., Дюбко Т.С. Изучение индуцированного радиацией изменения структуры мембран с помощью флуоресцентного зонда // Укр.биохим.журн. 1995. - Т.67, № 1. -С. 100-105.

65. Горошинская И.А., Виноградов А.Ю., Лукаш А.И. Влияние пиразидола на содержание молекул средней массы при разных режимах гипобарической гипоксии // Вопр.мед.химии. 1994. - Т. 40, № 4. - С. 19-21.

66. Горошинская И.А., Могильницкая Л.В. Интенсивность перекисного окисления липидов при периодической гипоксии и защитном действии пиразидола // Биохимия. 1994. -Т. 59, № 7. - С. 974-982.

67. Гречко А.Т. Физиологические механизмы адаптации и её фармакологическая коррекция «быстродействующими адаптогенами» //Межд.мед.обзоры,- 1994.- Т.2, № 5. С. 330-333.

68. Громова Е.А., Бобкова Н.В., Плакхинас Л.А., Дейгин В.И., Ярова Е.П., Михалёва И.И. Роль моноаминергических систем мозга в противоалкогольном действии дерморфина и пептида дельта-сна // Физиол.журн.СССР. 1989. - Т. 75, № 5. - С. 633-637.

69. Губский Ю.И., Болдескул А.Е., Примак Р.Г., Задорина О.В. Влияние а-токоферола и ио-нола на физическую структуру мембран микросом печени крыс в условиях антиоксидант-ной недостаточности // Укр.биохим.журн. 1989. - Т.61, № 4. - С. 94-99.

70. Гулевский А.К., Рязанцев В.В., Белоус А.М. Структурные перестройки липидов и белков мембран эритроцитов при действии низких температур // Б иол. науки.-1990.-№ 5.-С.29-36.

71. Гуляева Н.В. Ингибирование свободнорадикального окисления липидов в механизмах срочной и долговременной адаптации к стрессу // Биол.науки. 1989. - № 4. - С. 5-14.

72. Гуляева Н.В., Бикбулатова Л.С., Обидин А.Б., Айрапетянц М.Г., Кругликов Р.И. Длительное снижение перекисного окисления липидов в мозгу крыс при введении нейропептидов //Нейрохимия. 1989. - Т.8, № 1. - С. 95-100.

73. Гуревич B.C., Конторщикова К.Н., Шаталина Л.В. Сравнительный анализ двух методов определения активности супероксиддисмутазы // Лаб.дело. 1990. - № 4. - С. 44-47.

74. Гусейнов Т.М., Насибов Э.М., Джафаров А.И. Участие селена в регуляции перекисного окисления липидов биомембран и активность глутатионпероксидазы // Биохимия. 1990. - Т.55, № 3. - С. 499-508.

75. Гуськов Е.П., Лукаш А.И. Избыточность фенотипа, оксигенный мутагенез и концепция буферного катаболизма. М.,1987. 20 с. - Деп.в ВИНИТИ № 95143.

76. Деев А.И., Еремина Т.В., Спиричев В.Б. Влияние ретинола на перекисное окисление в фосфолипидных мембранах // Вопр.мед.химии. 1978. - Т.24, № 6. - С. 795-798.

77. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М., Наука, 1989. 277 с.81 .Добродеева JI.K. Апоптоз иммунокомпетентных клеток // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 436.

78. Доведова Е.Л. К механизму действия пептида дельта-сна на фоне введения L-ДОФА // Бюл.эксп.биол. и мед. 1989. - № 4. - С. 440-442.

79. Доведова Е.Л., Попова Н.С., Качалова Л.М. Действие пептида дельта-сна на активность моноаминооксидаз, ацетилхолинэстеразы и биоэлектрическую активность двигательных структур головного мозга // Нейрохимия. 1983. - Т.2, № 2. - С. 138-147.

80. Долгих В.Т., Захаров И.В., Иванов С.Р. Влияние естественного антиоксиданта карнозина на метаболизм головного мозга при черепно-мозговой травме у крыс // В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 126-127.

81. Дремина Е.С., Шаров B.C., Владимиров Ю.А. Определение антиоксидантной активности биологических и лекарственных препаратов : методологические аспекты (обзор) // Пульмонология. 1995.- № 1.- С. 73-75.

82. Држевецкая И.А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы. М., Высш.школа, 1994. 256 с.

83. Дубинина Е.Е. Характеристика внеклеточной супероксиддисмутазы // Вопр.мед.химии. -1995. № 6. - С. 8-12.

84. Дубинина Е.Е., Ефимова Л.Ф., Сафронова Л.Н., Геронилиус А.Л. Сравнительный анализ активности супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов и цельной крови у новорожденных детей при хронической гипоксии // Лаб.дело. 1988. - № 8. - С. 16-19.

85. Дудкин С.И. Металлосодержащие белки плазмы крови при гипероксии. Дис. . канд. биол. наук, 1983. 180 с.

86. Душкин М.И. Биологическая роль окисленных производных холестерина в клетках млекопитающих // Успехи совр.биол. 1991. - Т. 111, № 6. - С. 845-856.

87. Егуткин Г.Г., Якубовский С.М., Гацко Г.Г. Физико-химическое состояние плазматических мембран жировой ткани и печени крыс в отдалённые сроки после у-облучения в дозе 1 Гр. Структурное изменение мембран //Радиобиология. 1993. - Т.ЗЗ, № 1. - С. 61-65.

88. Ерин А.Н., Гуляева Н.В., Никушкин Е.В. Свободнорадикальные механизмы в церебральных патологиях// Бюл.эксп.биол. и мед. 1994. - № 10. - С. 343-348.

89. Жихарева А.И., Жецкая H.H. Влияние охлаждения на аминокислотный состав сыворотки крови и уровень фосфолипидов печени. Тюмень, 1981. 8 с. - Деп.в ВИНИТИ № 14982.

90. ЮО.Зиматкин С.М. Метаболизм этанола в мозге // Нейрохимия. 1995. - Т. 12, № 1.- С. 19-26.

91. Иванов В.Т. Иммуноактивные пептиды // Вопр.мед.химии. 1984. - № 3. - С. 23-31.

92. Иванова B.C., Гудим В.И. Среднемолекулярные токсины в угнетении эритропоэза // Ге-матол.и трансфузиол. 1986. - № 4. - С. 9-12.

93. ЮЗ.Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Липидный бислой биологических мембран. М., Наука, 1982. 224 с.

94. Иноуэ Ш., Кимура-Такеучи М., Ковальзон В Н., Чуркина С.И. Действие некоторых аналогов ДСИП на сон крыс при внутрижелудочковой инфузии // Бюл.эксп.биол. и мед. -1994. -№ 1. С. 56-58.

95. Ю5.Йодова Г.В. Нейромедиаторы в психонейроиммуномодуляции : стресс и иммунитет // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 370.

96. Юб.Казаков И.В., Тимохов B.C. Уремические токсины среднемолекулярной массы и выведение их при гемофильтрации (обзор) // Урол.-нефрол. -1991. № 1. - С. 67-73.

97. Ю7.Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации. Новосибирск, Наука, 1980. 189 с.

98. Ю8.Калмыкова Ю.А., Бондаренко Т.И., Рябикина Е.В., Шустанова Т.А. Перспективы использования регуляторных пептидов в панкреатологии // Рос.журн.гастроэнтерол., гепа-тол., колопроктол. 1998. - Т.8, № 5. - С. 32.

99. Каракашов A.B. Вичев Е.П. Микрометоды в клинической лаборатории. София : Медицина и физкультура, 1973. 256 с.

100. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи совр.биол. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 456-470.

101. ПЗ.Ковальзон В.М. Гуморальная регуляция сна // Итоги науки и техники. Сер. Физиол. человека и животных, 1986. Т. 31. - С. 3-58.

102. Н.Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии (обзор) // Вопр.мед.химии. 1985. - № 5. - С. 2-7.

103. Кожемякин Л.А., Антонов В.Г., Каликанов С.А., Бондаренко И.Г., Пастушенков В.Л. Обнаружение ксантиноксидазной активности в мононуклеарных клетках крови человека // Бюл.эксп.биол. и мед. 1992. - № 2. - С. 138-139.

104. Козырева Т.В., Елисеева Л.С. Влияние различных типов охлаждения на формирование иммунного ответа//В мат.ХУП Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998.-С. 437.

105. П.Козырева Т.В., Ткаченко Е.Я., Козарук В.П. Роль динамической активности холодовых рецепторов кожи в формировании реакции на охлаждение // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 436-437.

106. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клин.химии. Минск, Беларусь, 1982. -328 с.

107. Колесникова Л.В. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на активность глутамин-синтетазы // Успехи физиол.наук. 1994. - Т. 25, № 3. - С. 46.

108. Колесниченко Л.С., Кулинский В.И. Глутатионтрансферазы // Успехи совр.биол. 1989. - Т. 107, № 2. - С. 179-194.

109. Комов В.П., Иванова Е.Ю. Гормональная регуляция оборота супероксиддисмутазы в печени крыс // Вопр.мед.химии. 1983. - № 5. - С. 79-82.

110. Конвай В.Д., Лукошкин A.B., Поспелов B.C. Нарушение обмена глутатиона в печени реанимированных крыс и его коррекция // Вопр.мед.химии. 1988. - № 1. - С. 65-68.

111. Коплик Е.В., Ведяев Д.Ф., Михалёва И.И., Саргсян A.C., Иванов В.Т., Судаков К.В. Пептид дельта-сна как фактор, повышающий устойчивость животных к эмоциональному стрессу // Докл. АН СССР. 1982. - Т. 267, № 1. - С. 230-232.

112. Коплик Е.В., Судаков К.В. Восстановление эмоциональных стрессорных реакций у крыс с разрушенными лимбическими структурами мозга пептидом, вызывающим дельта-сон. // Рос.физиол.журн. 1997. - Т. 83, № 11-12. - С. 29-38.

113. Копытова Т.В., Добротина H.A., Боровков H.H., Четвёркина О.В. Значение среднемоле-кулярных пептидов сыворотки крови при острых формах ишемической болезни сердца // Лаб.дело. -1991. № 10. - С. 18-21.

114. Корниенко И.В. Состояние процессов свободнорадикального окисления липидов при экспериментальной сальмонеллёзной инфекции. Дис. канд.биол.наук, 1997. 179 с.

115. Коробко В.Г., Добрынин В.Н., Северцова И.В., Власов В.П., Колосов М.Н. Полностью синтетические искусственные гены брадикинина и пептида дельта-сна // Биоорган.химия. -1981. Т.7, № 12. - С. 1881-1884.

116. Коробов В.Н., Крысько О.М., Сибирная H.A., Климишин Н.И., Мирошниченко Л.В. Антиокислительная и эритропоэтинстимулирующая роль карнозина в условиях гипоксиче-ского стресса //В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 142-143.

117. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб.дело. 1988. - № 1. - С. 16-19.

118. Костецкий ЭЛ., Кушнарова Н.Р., Ильенко Л.А. Влияние сезонных факторов на фосфо-липидный состав крови доноров. Владивосток, 1980. 17 с. - Деп.в ВИНИТИ № 446580.

119. Крайнев С.И. О формах каталазы в эритроцитах человека // Биохимия. 1970. - Т. 35, № 4. - С. 662-667.

120. Крамарова Л.И., Колаева С.Г., Пастухов Ю.Ф. Рожанец В.В., Юхананов Р.Ю. О роли нейропептидов в индукции состояния зимней спячки // Журн.общ.биол. 1984. - Т.45, № 3. С. 400-409.

121. Красавина Н.П., Катюхин Л.Н., Луценко М.Т., Целуйко С.С. Гистофизиология эритроцитов периферической крови при воздействии на организм низкой температуры // Физи-ол.и патол.адаптации к природным факторам среды. Фрунзе: Илим, 1977. С. 73.

122. Красновская И.А., Тавровская Т.В., Состояние некоторых центров гипоталамуса в условиях кратковременного охлаждения крыс // Бюл.эксп.биол. и мед. 1980. - Т.80, № 2. - С. 228-230.

123. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран.Эволюция липидов мозга. Адаптационная функция липидов. Л., Наука, 1981. 339 с.

124. Кржановский Г.Н., Шандра A.A., Годлевский Л.С., Михалёва И.И. Явления паркинсони-ческого синдрома при введении дельта-сон индуцирующего пептида в чёрную субстанцию крыс // Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - № 2. - С. 119-121.

125. Кричевская A.A., Бондаренко Т.Н., Горошинская И.А., Крупенникова Е.Ю., Михалева И.И., Ходакова A.A. Антистрессорный эффект пептида дельта-сна // В мат. Стресс, адаптация и функциональные нарушения. Кишинёв, Штиинца, 1984. С.343.

126. Кричевская A.A., Бондаренко Т.И., Крупенникова Е.Ю., Михалева И.И. Влияние пептида дельта-сна на состояние мембран мозга при действии холодового стресса // Физи-ол.журн.СССР. 1986. - № 6. - С. 843-845.

127. Кричевская A.A., Лукаш А.И., Броновицкая З.Г. Биохимические механизмы кислородной интоксикации. РГУ, 1980. 120 с.

128. Кричевская A.A., Лукаш А.И., Шугалей B.C., Бондаренко Т.И. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма. РГУ, 1983. 112 с.

129. Крупенникова Е.Ю. Метаболические эффекты пептида дельта-сна при холодовом стрессе. Дис. . канд.биол.наук, 1985. 205 с.

130. Крупенникова Е.Ю., Юхананов Р.Ю., Михалева И.И., Бондаренко Т.И. Содержание пептид дельта-сна-подобного материала в головном мозгу крыс в норме и при холодовом стрессе // Нейрохимия. 1986. - Т. 5, № 2. - С. 190-193.

131. Куликов В.Ю., Семенюк A.B., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и хо-лодовой фактор. Новосибирск : Наука, 1988. 192 с.

132. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи совр.биол. 1990. - Т. 110, № 1 (4). - С. 20-32.

133. Кураев Г.А., Менджерицкий A.M., Повилайтите П.Э. Влияние пептида дельта-сна на ультраструктурные особенности сенсомоторной коры головного мозга крыс // Цитология и генетика. 1991. Т. 25, № 2. - С. 13-16.

134. Кухта В.К., Морозкина Т.С. Ферментативная система инициации и защиты от перекис-ного окисления липидов в печени и крови крыс при гипокинезии // Вопр.мед.химии. -1988. -№ 1. с. 19-22.

135. Ланкин В.З., Гуревич С.М., Котелевцева Н.В., Тихазе А.К., Герасимова E.H. Роль перекисей липидов в патогенезе атеросклероза. Детоксикация липоперекисей глутатионперок-сидазной системой в аорте // Вопр.мед.химии. 1976. - № 3. - С. 392-395.

136. Логинов A.C., Матюшин Б.Н. Цитотоксическое действие активных форм кислорода и механизмы развития хронического процесса в печени при её патологии // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1996. - № 4. - С. 3-5.

137. Ломакина Л.В. Влияние низкой температуры на перекисное окисление липидов и интенсивность протеолиза в тканях мозга и печени крыс // Укр.биохим.журн. 1980. - Т.52, № 3. - С. 305-308.

138. Лукаш А.И., Карташев И.П., Антипина Т.В. Торможение мочевиной перекисного окисления липидов в тканях // Известия СКНЦ ВШ. Естеств.науки. 1980. - № 1. - С. 102-105.

139. Луценко Н.В., Ценлуйко С.С. Морфофункциональная характеристика гипоталамуса при воздействии на организм низких температур // Физиол.и патол. адаптации к природным факторам среды. Фрунзе : Илим, 1977. С. 78-79.

140. Лызлова С.Н. Лизосомальные белки нейтрофилов факторы антимикробной защиты клеток // Вопр.мед.химии. - 1987. - № 5. - С. 43-48.

141. Лысенко A.B., Менджерицкий А.М. Изменение активности Са2+-зависимых протеиназ и АТФаз при коррекции функционального состояния дельта-сон индуцирующим пептидом // Успехи физиол.наук. 1994. - Т. 25, № 3. - С. 87-90.

142. Лысенко A.B., Менджерицкий A.M. Свойства и механизмы реализации биологических эффектов пептида, индуцирующего дельта-сон // Успехи совр.биол. 1995. - Т.115, № 6. -С. 729-738.

143. Львова С П., Горбунова Т.Ф., Абаева Е.М. Влияние гипотермии и даларгина на перекис-ное окисление липидов в тканях крыс //Вопр.мед.химии. 1993. - № 3. - С. 21-24.

144. Майстрах Е.В. Неспецифические сенсорные и эндокринные механизмы терморегуляции при остром охлаждении организма// Физиол.журн.СССР. 1979. - Т. 65, № 11. - С. 15821591.

145. Макаров В.Л., Кузнецов С.Р., Чурина С.К., Соколова А.И. Транспорт одновалентных катионов в эритроцитах кроликов с экспериментальной гиперхолестеринемией : корреляции с холестерином плазмы // Биохимия. 1994. - Т. 59, № 7. - С. 1011-1019.

146. Малышев В.В., Васильева Л.С., Белогоров С.Б., Нефедова Т.В. Адаптация к высотной гипоксии позволяет ограничить активацию перекисного окисления липидов при воспалении и стрессе // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 6. - С. 590-593.

147. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота // Биохимия. 1998. - Т. 63, №7. - С. 992-1006.

148. Малышенко Н.М., Елисеев A.B. Нейрофизиологический анализ механизмов нейроэн-докринной регуляции при стрессе и антистрессовом действии пептида дельта-сна // Успехи физиол.наук. 1993. - Т. 24, № 4. - С. 29-46.

149. Малышенко Н.М., Попова Н.С. Гормоны и нейропептиды в интегративных процессах // Успехи физиол.наук. 1990. - Т. 21, № 2. - С. 94-110.

150. Марьянович А.Т., Поляков Е.Л. Нейропептиды и гематоэнцефалический барьер // Успехи физиол.наук. 1991. - Т. 22, № 2. - С. 33-49.

151. Маслова М.Н. Активность мембранных ферментов эритроцитов при различных стрес-сорных воздействиях //Рос.физиол.журн. 1994. - Т. 80, № 7. - С. 76-80.

152. Матюшин Б.Н., Логинов A.C. Активные формы кислорода : цитотоксическое действие и методические подходы к лабораторному контролю при поражении печени (обзор) // Клин.лаб.диагностика. 1996. - № 4. - С. 51-53.

153. Матюшин Б.Н., Логинов A.C., Ткачев В.Д. Цитохром P-450-зависимое гидроксилирование и активность глутатионзависимых ферментов печени при её хроническом поражении // Вопр.мед.химии. 1997. - Т. 43, № 4. - С. 256-160.

154. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л., Чеботарь И.В. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза // Журн.мед.эксп.иммунологии. 1987. - № 7. - С. 109-115.

155. Медведева И.А., Маслова М.Н., Панов A.A. Влияние гипотермического стресса на активность Na, К-АТФазы в эритроцитах крыс // Рос.физиол.журн. 1992. - Т. 78, № 11. -С. 119-123.

156. Меерсон Ф.З., Долгих В.Т., Мержинский В.Е. Активация перекисного окисления липи-дов и её предупреждение ионолом при механической асфиксии и последующей реанимации // Бюл.эксп.биол. и мед. 1983. - № 11. - С. 33-35.

157. Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю. Феномен адаптационной стабилизации структур и защита сердца. М., Наука, 1993. 159 с.

158. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М., Медицина, 1988. 256 с.

159. Менджерицкий А.М., Кураев Г.А., Михалёва И.И., Повилайтите П.Э. Морфометриче-ские доказательства активации аксо-соматических синапсов при введении дельта-сон индуцирующего пептида//Бюл.эксп.биол. и мед. 1992. - № 2. - С. 202-203.

160. Менджерицкий A.M., Лысенко A.B., Ускова Н.И. Протеолитические процессы в мозге и сыворотке крови крыс при гипокинезии и адаптивном влиянии дельта-сон индуцирующего пептида // Биохимия. 1995. - Т. 60, № 4. - С. 585-591.

161. Менджерицкий A.M., Маклецова М.Г., Карпухина И.Ю. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на содержание ГАМК, глутамата и активность глутаматдекарбоксилазыв отделах мозга крыс // Нейрохимия. 1987. - Т. 6, № 3. - С. 422-425.

162. Менджерицкий А.М., Ускова Н.И., Чораян И.О., Михалёва И И. Хронобиологический эффект дельта-сон индуцирующего пептида и система ГАМК в мозгу крысы // Нейрохимия. 1990. - Т. 9, № 2. - С. 253-258.

163. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М., 1987. 350 с.

164. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Успехи совр.биол. 1993. - Т. 113, № 4. - С. 442-445.

165. Меныцикова Е.Б., Зенков Н.К. Окислительный стресс при воспалении // Успехи совр.биол. 1997. - Т. 117, № 2. - С. 155-171.

166. Микашинович З.И. Механизмы адаптивной перестройки энергетического обмена эритроцитов при острой кровопотере//Пат.физиол. и эксп.терапия. 1984. - № 2. - С. 12-15.

167. Микаэлян Э.М., Карагезян К.Г., Овакимян С.С. Динамика количественных изменений суммарных и индивидуальных фосфолипидов мембран эритроцитов белых крыс в различные стадии стрессорной реакции организма // Вопр.мед.химии. 1988. - Т. 34, № 2. -С. 64-68.

168. Милютина Н.П., Ананян A.A., Шугалей B.C. Антирадикальный и антиоксидантный эффект аргинина и его влияние на активность перекисного окисления липидов при гипоксии // Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - №> 9. - С. 263-265.

169. Михайлов В.П., Смирнов Л.Д., Курыгин Г.В., Золотов H.H. Влияние антиоксиданта эмоксипина на липидный обмен в лёгких при развитии их отёка // Бюл.эксп.биол. и мед. -1992. -№ 2. С. 139-141.

170. Михалёва И.И., Саргсян A.C., Балашова Т А., Дешко Т.Н., Набиев И.Р., Ефремов Е.С., Иванов В.Т. Структурно-функциональное исследование пептида дельта-сна и его аналогов // В мат.Всес.симп.по целенапр.изысканию физиол.актив.веществ, Рига, 1981. С. 5.

171. Могильницкая Л.В., Фан Ан, Баранова Н.Ю., Шугалей B.C. Влияние аргинина на свойства эритроцитарных мембран в условиях гипоксии // Бюл.эксп.биол. и мед. 1992. - № 5.- С. 497-498.

172. Могильницкая Л.В., Шугалей B.C. Протеолитические процессы в головном мозгу и печени крыс при адаптации к холоду // Физиол.журн.СССР. 1978. - Т. 54, № 7. - С. 10351038.

173. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионперок-сидазы в эритроцитах // Лаб.дело. 1986. - № 12. - С. 724-727.

174. Монцевичуте-Эрингене Е.В. Упрощённые математическо-статистические методы в медицинской исследовательской работе//Пат.физиол. и эксп.терапия.-1964,- № 4,- С. 71-78.

175. Морозов В.И., Цыпленков П.В., Кокряков В Н., Волков К.Н., Виноградова H.A. Выделение и характеристика миелопероксидазы лейкоцитов перитонеального эксудата крысы //Биохимия. 1997. - Т. 62, № 6. - С. 729-737.

176. Мураневич Только ли через рецепторы осуществляется модулирующее действие нейро-пептидов ? // Рос.физиол.журн. 1993. - Т. 79, № 4. - С. 9-29.

177. Наглер Л.Г., Макарова О.В., Замчук Л.А., Вартанян Л.С., Рашба Ю.А., Кашо В.Н. Су-пероксиддисмутаза при ишемии печени // Биохимия. 1991. - Т. 56, № 4. - С. 674-680.

178. Николайчик В.В., Кирковский В.В., Моин В.М., Лобачёва Г.А., Мазур Л.И. «Средние молекулы» образование и способы определения // Лаб.дело. - 1989. - № 8. - С. 31-33.

179. Николайчик В.В., Моин В.М., Кирковский В В., Мазур Л.И., Лобачёва Г.А., Бычко Т.Н. Способ определения «средних молекул» // Лаб.дело. -1991. № 10. - С. 13-18.

180. Осипов А.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол.химии. 1990. - Т.31. - С. 180-208.

181. Пабиев И.Р., Саргсян A.C., Ефремов Е.С., Михалёва И.И., Иванов В Т. Пространственная структура пептида дельта-сна и его аналогов. Лазерные спектры комбинационного рассеяния // Биоорг.химия. 1982. - Т.8, № 7. - С. 900-904.

182. Павлов И.Ю. Структурно-функциональные изменения в коре головного мозга крыс при действии нейропептидов в условиях гипотермии. Дис. . канд.биол.наук, 1998. 152 с.

183. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса. Новосибирск : Наука, 1983. 233 с.

184. Пастухов Ю.Ф., Хаскин В В. Адренергический контроль термогенеза при экспериментальной и природной адаптации животных к холоду // Успехи физиол.наук. 1979. - Т. 10, №3. - С. 121-142.

185. Петков В.В., Стоянковски Д., Петков В.Д., Выгленова Ю. Изменения перекисного окисления липидов в мозге при фетальном алкогольном синдроме // Бюл.эксп.биол. и мед. -1992.- № 5.- С. 500-502.

186. Пирожков C.B., Панченко Л.Ф. Внутриклеточные перекисные процессы при хронической алкогольной интоксикации (обзор) // Укр.биохим.журн. 1989. - Т.61, № 4. - С. 3-15.

187. Пичугин A.B., Бутаков A.A., Щельцина Т.Л., Пинегин Б.В. Сравнение результатов определения функциональной активности фагоцитирующих клеток методом люминолзависимой хемилюминесценции // Иммунология. 1993. - № 2. - С. 59-62.

188. Платонов И.А., Яснецов В.В. Влияние пептида, вызывающего дельта-сон, на развитиетоксического отёка-набухания головного мозга // Бюл.эксп.биол. и мед. 1992. - № 11 - С. 463-464.

189. Повилайтите П.Э., Ускова Н.И. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на ГАМК-ергическую систему при стрессе // Успехи физиол.наук. 1994. - Т. 25, № 4. - С. 17-19.

190. Попова Н.С., Доведова Е Л. Амфетаминовая гиперфункция дофаминергической системы и пептид дельта-сна//Рос.физиол.журн. 1998. - Т. 84, № 1-2. - С. 24-29.

191. Прохорчик Е.В., Михнева Л.М., Калвиньш И.Я. Мембранотропные эффекты пептидов группы «средних молекул» и соединения-протекторы // В мат.Всес.межун.конф. «Биология клетки». Тбилиси, 1987. С. 120-122.

192. Прудченко И.А., Михалёва И.И. Проблема эндогенности пептида дельта-сна // Успехи совр.биол. 1994. - Т. 114, № 6. - С. 728-740.

193. Пучкова Л.В., Сасина Л.К., Алейникова Т.Д., Гайцхоки B.C. Взаимодействие церулоплазмина с рецепторами плазматической мембраны клеток СV-1 и его регуляция по типу обратной связи // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 4. - С. 417-420.

194. Рихирева Г.Т., Голубев И.Н., Копыловский С.А., Прудченко И.А., Михалёва И.И. Взаимодействие дельта-сон индуцирующего пептида с клеточными мембранами in vitro // Био-орг.химия. 1999. - № 5. - С. 328-345.

195. Руководство по клинической лабораторной диагностике. Клиническая биохимия // Под ред. Базарновой М.А., Гегге З.П., Кальновой Л.И. Киев, Вища школа, 1986. Т.З. - 279 с.

196. Рыбальченко В.К., Могилевич Б.Р., Островская Г.В. Роль липидного матрикса плазматической мембраны в процессе передачи информации регуляторными пептидами // Бюл.эксп.биол. и мед. 1993. - № 5. - С. 477-478.

197. Рясина Т.В., Кошелев В.Б., Васин М.В. Нейропротекторные свойства антиоксидантов, некоторых регуляторных пептидов и фосфолипидов при экспериментальной ишемии мозга // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 480.

198. Садекова С.И. Влияние гипоксии, гипербарической оксигенации и их последовательного действия на микросомальное окисление и состояние мембран микросом. Дис. . канд.биол.наук, 1991. 140 с.

199. Саенко Е.Л., Скоробогатько О.В., Ярополов А.И. Защитное действие церулоплазмина при лизисе эритроцитов человека, индуцированном ионами железа // Биохимия. 1990. -Т. 55, №9. - С. 1563-1569.

200. Саидов М.З., Пинегин Б.В. Спектрофотометрический способ определения активности миелопероксидазы в фагоцитирующих клетках // Лаб.дело. 1991. - № 3. - С. 56-60.

201. Салиева P.M., Коплик Е.В., Каменов З.А., Полетаев А.Б. Влияние (3-эндорфина и пептида, вызывающего дельта-сон, на устойчивость к эмоциональному стрессу // Бюл.эксп.биол. и мед. 1989. - Т.108, № 10. - С. 464-465.

202. Салиева P.M., Яновский К., Ратсак Р., Трофимова Я.П. Пептид, вызывающий дельта-сон, как фактор, повышающий содержание вещества Р в гипоталамусе и устойчивость крыс к эмоциональному стрессу // Журн.высш.нервн.деят.- 1991. Т.41, № 3. - С. 558-563.

203. Самецкий Е.А. Пластичность нейрональных структур при действии пирацетама и дельта-сон индуцирующего пептида в условиях гипероксии. Дис. . канд.биол.наук, 1996. -151 с.

204. Самойленко С.Г., Калер Т В., Аксенцев С.Л., Конев С В. Влияние температуры на распределение пирена в липосомах из фосфатидилхолина // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 4. -С. 649-653.

205. Санина О.Л., Берлинских Н.К. Биологическая роль церулоплазмина и возможности его клинического применения (обзор) //Вопр.мед.химии. 1986. - № 5. - С. 7-14.

206. Сапожников В.М. Перекисное окисление липидов и состояние мембран эритроцитов и микросом при многократном длительном действии факторов гипербарической гелиокис-лородной среды. Дис. . канд.биол.наук, 1992. 160 с.

207. Селевич М.И., Ларин Ф.С., Лелевич В В. Липидный спектр печени и головного мозга крыс после введения пиразола // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1997. - № 1. - С. 15-17.

208. Селье Г. На уровне целого организма. М., Наука, 1972. 122 с.

209. Серебренникова Э.Г., Векслер Я.И. Жирнокислотный состав липидов лёгких и печени белых крыс, адаптированных к холоду //Биол.науки. 1977. - № 3. - С. 34-37.

210. Серебренникова Э.Г., Мамаев А.Т., Ахмедов И.Г. Особенности процессов перекисного окисления и антиоксидантной активности липидов белых крыс при глубоком многократном переохлаждении // Вопр.мед.химии. 1992. - № 3. - С. 28-30.

211. Серебров В.Ю., Тимин O.A. Изменение состава и скорости перекисного окисления липидов ткани головного мозга в условиях дефицита тимусных гормонов // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1995. - № 4. - С. 10-12.

212. Сидорик Е.П., Баглей Е.А., Данко М.И. Биохемилюминесценция клеток при опухолевых процессах. Киев, Наукова думка, 1989. 216 с.

213. Скулачёв В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций//Биохимия. 1998. - Т. 63, № 12. - С. 1691-1694.

214. Слоним А.Д. Об интеграции теплообразования при адаптации организма к холоду // Фи-зиол.адаптаций к природным факторам высоких широт. Фрунзе : Илим, 1974. С. 7-20.

215. Смолиговец Е.О., Федоров H.A., Малыхина Л.С. Определение люминолзависимой хе-милюминесценции гранулоциов // Лаб.дело. 1989. - № 2. - С. 23-26.

216. Соболева И.Н. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов крыс при различных режимах действия низкой температуры на организм // Важн.теор.и практ.пробл.терморегуляции. Новосибирск, 1982. С. 76-77.

217. Соколовский В.В. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний // Межд.мед.обзоры. 1993. - Т.1, № 1. . С. 11-14.

218. Соколовский В.В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифической реакции организма на экстремальное воздействие (обзор) // Вопр.мед.химии. 1988.- № 6. С. 2-11.

219. Сорокина Л.В., Лупандин Ю.В. Влияние функции щитовидной железы на терморегуляционную активность двигательных единиц адаптированных к холоду крыс // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 439.

220. Спирин М.М., Белевич Г.В., Галимов A.A. К вопросу о механизме действия анестетиков- производных кетамина на фосфолипидные мембраны // Бюл.эксп.биол. и мед., 1988. -№4.-С. 429-431.

221. Стальная И.Д. Современные методы в биохимии. М., Медицина, 1977. С. 63-64.

222. Судаков К.В. Антистрессорные эффекты пептида, вызывающего дельта-сон // Рос.физиол.журн. -1991. Т. 77, № 3. - С. 1-13.

223. Судаков К.В. Новые акценты классической концепции стресса // Бюл.эксп.биол. и мед., 1997. Т. 123, №2. - С. 124-130.

224. Судаков К В., Кохлан Д.П., Котов Л.В., Салиева P.M., Полынцев Ю.В., Коплик Е.В. Каскадное последействие при введении пептида, вызывающего дельта-сон // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 1. - С. 6-9.

225. Сутковой Д.А., Педаченко Е.Г., Гук А.П., Коробов В.Н., Теплицкий М.Г., Глущенко Н.В., Федосенко Т.Н. Антиокислительное действие карнозина при черепномозговой травме // В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 178.

226. Тапяпина В.Г., Ордан М.Э., Пивин С.Г., Ракицкая В.В. Нейроэндокринные механизмы формирования адаптивного поведения // Рос.физиол.журн.- 1995. Т. 81, № 8. - С. 94-100.

227. Твердохлиб В.П., Коновалова Г.Г., Ланкин В.З., Меерсон Ф.З. Влияние адаптации к гипоксии на активность антиоксидантных ферментов в печени животных, перенёсших стресс // Бюл.эксп.биол. и мед. 1988. -№ 11. - С. 528-529.

228. Тендитная Л.В. Некоторые показатели сезонных изменений газообмена и основного обмена у детей коренных жителей Крайнего Севера // Физиол.и патол. адаптация человека в условиях Крайнего Севера. Новосибирск, 1977. - С. 139.

229. Теплый Д.Л., Горст H.A., Нестеров Ю.В., Горст В.Р. Типы изменений сурфактантной системы и перекисного окисления липидов в лёгких при стресс-индуцированных воздействиях // В мат. XVII Съезда физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998. С. 61.

230. Терехова С.Ф. Являются ли продукты окисления холестерина антиоксидантами ? // В мат. V Межд.конф. «Биоантиоксидант», М., 1998. С. 87.

231. Теселкин Ю.О., Бабаенкова И.В., Любицкий О.Б., Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А. Ин-гибирование сывороточными антиоксидантами окисления люминола в присутствии гемоглобина и пероксида водорода // Вопр.мед.химии. 1997. - Т. 43, № 2. - С. 87-93.

232. Тимошенко A.B., Бовин Н.В., Шиян С.Д., Вахрушев С.Ю., Андре С., Габиус Г.- И. Модификация функциональной активности нейтрофилов под действием белков острой фазы воспалительного ответа//Биохимия. 1998. - Т. 63, № 5. - С. 646-651.

233. Ткачёв A.B., Беруль И В. Влияние холода на структуру и функцию щитовидной железы // Нейроэндокринные корреляции. Владивосток, 1978, С. 52-64.

234. Ткачук В.А. Физиология эндокринной системы // Успехи физиол.наук. 1994. - Т. 25, № 2. - С. 47-56.

235. Туликова З.Н. Влияние молекул средней массы, выделенных из сыворотки крови обожжённых, на процессы перекисного окисления липидов // Вопр.мед.химии. 1983. - № 3. -С. 108-111.

236. Турков М.И. Супероксиддисмутаза : свойства и функции // Успехи совр.биол. 1976. -Т.81, № 3. - С. 341-353.

237. Туряница И.М., Мишанич ИИ., Ростока Л.М. Среднемолекулярный спектр сыворотки крови больных непрерывно прогредиентной параноидной формой шизофрении, находящихся на лечении // Журн.невропатол.и психиатр. 1988. - Т.88, № 5. - С. 109-111.

238. Ульянинский Л.С., Звягинцева М.А., Кошарская И.Л. Пептид дельта-сна как модулятор действия медиаторов на сердце // Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - № 5. - С. 419-420.

239. Усик C.B. Содержание мочевины в крови и органах при мышечной деятельности // Фи-зиол.журн.СССР. 1976. -№ 1. - С. 115-121.

240. Филаретов A.A., Подвигина Т.Т., Филаретова Л.П. Адаптация как функция гипофизар-но-адренокортикальной системы. СПб : Наука, 1994. 131 с.

241. Филатова Г.Ф., Кузнецова Г.А., Бобков Ю Г. Изменение содержания катехоламинов в тканях крыс после холодового воздействия // Пат.физиол.и эксп.терапия. 1987. - № 4. -С. 48-50.

242. Фурдуй Ф.И. Современные представления о физиологических механизмах развития стресса // Механизмы развития стресса. Кишинёв, Штиинца, 1987. 222 с.

243. Хайдарлиу С.Х. Медиаторные механизмы стресса // Механизмы развития стресса. Кишинёв, Штиинца, 1987. 222 с.

244. Хаскин В.В. Биохимические механизмы адаптации к холоду // Физиол.терморегуляции. Л., 1984. С. 237-266.

245. Хватова Е.М., Гайнуллин М.Р., Михалёва И.И. Влияние пептида, индуцирующего дельта-сон, на каталитические свойства митохондриальной малатдегидрогеназы мозга // Бюл.эксп.биол. и мед. 1995. - № 2. - С. 141-143.

246. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарных мембран. М., Наука, 1981. -216 с.

247. Шандра A.A., Годлевский JI.C., Вастьянов P.C., Брусенцов А.Н., Моалла Н., Минель Б.А. Роль дельта-сон индуцирующего пептида в формировании нейропатологических синдромов // Рос.физиол.журн. 1995. - Т. 81, № 9. - С. 13-24.

248. Шарапов В.И., Грек O.P., Зыков A.A. Структурные перестройки липидного компонента мембран эндоплазматического ретикулума в ранние и отдалённые периоды после ишемии печени // Вопр.мед.химии. 1988. - № 1. - С. 25-29.

249. Шарапов В.И., Зыков A.A., Грек O.P. Изменение жирнокислотного состава и активность перекисного окисления липидов микросомальных мембран печени при экспериментальном инфаркте миокарда//Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - № 8. - С. 159-161.

250. Шаронов Б.П., Говорова Н.Ю., Лызлова С.Н. Антиокислительные свойства и деградация белков сыворотки активными формами кислорода, генерируемыми стимулированными нейтрофилами // Биохимия. 1988. - Т.53, № 5. - С. 816-825.

251. Шепотиновский В.И. Обменные процессы в эритроцитах при стрессе и экстремальных воздействиях // Пат.физиол. и эксп.терапия. 1984. - № 2. - С. 70-74.

252. Шерстнёв М.П. Аденилатциклазная система регуляции хемилюминесцентного ответа фагоцитов //Вопр.хемилюминесценции. Ежекварт.научно-практ.журн. M., 1990. С. 1-7.

253. Шмалько Ю.П., Михалёва И.И. Влияние синтетических аналогов дельта-сон индуцирующего пептида на факторы антиметастатической резистентности у мышей с карциномой Льюис // Эксп.онкол. 1993. - Т. 15, № 1. - С. 76-78.

254. Шугалей B.C. Система аргинин-аргиназа-мочевина мозга и печени при действии повышенного давления кислорода и низкой температуры. Дис. . докт.биол.наук, 1980. 321 с.

255. Шугалей B.C., Ананян A.A., Могильницкая Л.В., Горошинская И.А. Биохимическая диагностика и пути коррекции состояния холодового стресса и холодовой адаптации // В мат. Стресс, адаптация и функциональные нарушения. Кишинёв, Штиинца, 1984. С. 312.

256. Шугалей B.C., Цветненко Е.З. Полиамины мозга и печени при длительном охлажденииживотных // Известия СКНЦ ВШ. Естеств.науки. 1979. - № 1. - С. 86-88.

257. Шустанова Т.А., Мартыненко Н.А. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на резистентность мембран эритроцитов крыс при остром панкреатите // Известия высш.учебн.заведений.Сев-Кавк.регион. Естест.науки. 1997. - Т.99, № 3 . - С. 79-83.

258. Щеглова А.И. Особенности температурной адаптации у некоторых грызунов // Физи-ол.адаптации к теплу и холоду. Л. : Наука, 1969. С. 70-77.

259. Щеголева Т.Ю., Колесников В.Г. Изменение гидратного окружения эритроцитов при гормональной стимуляции // Биофизика. 1996. - Т. 41, № 5. - С. 1082-1086.

260. Юсупова Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов // Лаб.дело. 1989. - № 4. - С. 19-21.

261. Юхананов Р.Ю., Рожанец В В., Михалёва И.И., Майский А.И. Анализ механизма стресс-протективного действия пептида, индуцирующего дельта-фазу сна // Бюл.эксп.биол. и мед. 1990. - № 1. - С. 46-47.

262. Янковский О.Ю., Говорова Н.Ю., Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Выделение и очистка миелопероксидазы из лейкоцитов периферической крови и костного мозга // Вестник ЛГУ. Сер. Биология. 1988. - вып.1, № 3. - С. 71-77.

263. Abhiram S., Satya К. Delta-sleep inducing peptide (DSIP) stimulates LH release in steroid -primed ovariectomized rats // Lifi Sci. 1987. - V. 40, № 12. - P. 1201-1206.

264. Alican I., Toker F., Arbak S., Yegen B.C., Yalcin A.S., Oktay S. Gastric lipid peroxydation, glutathione and calcium channel blockers in the stress-induced ulcer model in rats // Pharmacol. Research. 1994. - V.30, № 2. - P. 123-135.

265. Ames B.N., Cathcart R., Schwiers E., Hochstein P. Uric acid provides an antioxidant defense in humans against oxidant and radical-caused aging and cancer : A hypothesis // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 1981. -V. 78, № Ц. - p. 6858-6862.

266. A1-Moutairy AR. Tariq M. Effect of vitamin E and selenium on hypothermic restraint stress and chemically-induced ulcers // Digestive Diseases & Sciences. 1996. - V. 41, № 6. P. 1165-1171.

267. Alperovich D.V., Lysenko A.V., Mendzeritskaya L.G., Uskova N.I. The correction of exercise-induced metabolic disorders with DSIP in rats // J. Neurochem. 1998. - V. 71., Suppl. - P. S46.

268. Arduini A., Stern A., Storto S., Beffigio M., Mancinelli G. Effect of oxidative stress on membrane phospholipid and protein organization in human erythrocytes // Arch.Biochem.and Biophys.- 1989. V.273,№ 1. - P. 112-120.

269. Aricioglu A., Oz E., Erbas D., Gokcora N. Effects of EGF and allopurinol on prostaglandin and lipid peroxide levels in mucosa of stomach in restraint cold stress // Prostaglandins Leukotrienes & Essential Fatty Acids. 1996. - V. 54, № 4. - P. 285-288.

270. Augustijns PF., Borchardt RT. Transport and metabolism of DSIP in cultured human intestinal epithelial cell monolayers // Drug Metabolism & Disposition.- 1995.-V. 23, № 12. P. 1372-1378.

271. Avis P.G., Bergel F., Bray R.C. Cellular constituents. The chemistry of xanthine oxidase. Part 1. The preparation of crystalline oxidase from cow's milk // J.Chem.Sos.-1955.- № 4,- P. 1100-1212.

272. Banks W.A., Kastin A.J., Coy D.H. DSIP crosses the blood-brain barrier in dogs : some correlations with protein binding // Pharmacol.Biochem.Behav.- 1982,- V. 17, № 5,- P. 1009-1014.

273. Benson B., Gregory U., Schoenenberger G.A. Acute reduction of LH and hypothalamic norepinephrine turnover by DSEP // Endocrinol. 1985. - Sympos. Suppl. - P. 257.

274. Beppn M., Takanashi M., Murakami K, Kato T., Kikugawa K. Modification of glycophorin A during oxidation of erythrocyte membrane // Biochem.and Biophys.acta., Biomembranes. 1990. -V. 1023, №3,- P. 413-420.

275. Bidlack W.R., Tappel A.L. Fluorescent products of phospholipids during lipid peroxidation // Lipids. 1973. - V.8, № 4. - P. 203-209.

276. Bligh E., Dyer W.G. Rapid methods of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Physiol. 1959. - V.37, № g. - P. 911-917.

277. Bondarenko T.I., Goroshinskaya I.A., Mikhaleva 1.1., Shustanova T.A. Molecular effects of delta-sleep inducing peptide under stress // J.Pathophysiol. 1998. - Suppl. 1, № 5. - P. 203.

278. Bondarenko T.I., Mikhaleva I.I. The influence of DSIP upon the hipophysis-adrenal cortex system in rats under normal and cold stress conditions // In. : Delta-sleep inducing peptide. Theoretical and applied aspects. Rostov-on-Don, 1992. P. 6-7.

279. Borman S. Peptide spontaneously assembles into membrane // Chem.and Eng.News. 1993. -V.71, № 18. - P. 45-46.

280. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand. J.Clin. Invest. -1968. V.21, Suppl. 97. - P. 77-89.

281. Bugas N., Belfraissy J.- F., Tardien M. Immune regulatory role of nitric oxide within the central nervous system//Res.Immunol. 1995. - V. 146, № 9. - P. 707-710.

282. Bukowiecki L.J. Energy balance and diabetes. The effects of cold exposure, exercise trainingand diet composition on glucose tolerance and glucose metabolism in rat peripheral tissues 11 Can. J. Physiol. Pharmacol. 1989. - V.87, № 4. - P. 382-393.

283. Charnay Y., Leger L., Golaz I. Immunohistochemical mapping of DSIP in the cat brain and hypophysis. Relationships with the LHGH system and corticotropes // J.Chem. Neuroanatom. -1990. -№3. P. 397.

284. Cheng I.W., Zhang L.P., Li F. Hemin-promoted peroxidation of erythrocyte membranes // Blood. 1991. - V. 78, № 10. - P. 404 a.

285. Chin D.T.Y., Cheng K.K. Circulatory changes in cold-acclimation and cold stress // Clin.and Exp. Pharmacol.and Physiol. 1976. - V.3, № 5. - P. 449-452.

286. Cools A.R., Van Dongen P., Janssen N.J., Megens A. Functional antagonism between dopamine and noradrenaline within the caudate nucleus of cats : a phenomenon of rhythmically changed susceptibility // Psychopharmacol. 1978. - V. 59, № 1. - P. 231-142.

287. Das D., Bandyopadhyay D., Bhattachaijee M., Baneijee RK. Hydroxyl radical is the major causative factor in stress-induced gastric ulceration // Free Radical Biol. & Med. 1997. - V.23, № 1. - P. 8-18.

288. Davies K.I.A. Protein damage and degradation by oxygen radicals.General aspects // J. BioLchem. 1987. - V. 262. - P. 9895-9901.

289. Davies K.I.A., Sevanian A., Muakkas-Sah-Kelly S.F., Hochtein P. Uric acid-iron complexes. A new aspect of the antioxidant functions of uric acid // Biochem.J.-1986.-V.235, № 3,- P. 747-754.

290. Dick P., Costa C., Zayolle K. DSIP in the treatment of withdrawal syndroms from alhogol and opiates // Europ. Neurol. 1984. - V. 23, № 2. - P. 364-371.

291. Ekman R., Bjartell A., Ehlad E., Sundler F. Immunoreactive delta sleep-inducing peptide in pituitary adrenocorticotropin/alpha-melanotropin cells and adrenal medullary cells of the pig // Neuroendocr. 1987. - V.45, № 4. - P. 298-304.

292. Ekman R., Larson I., Malmquist M., Thorell J.I. Radioimmunoassay of DSIP resing an iodinated p-hydroxyphenylpropionic acid derivative as tracer // Regul. Pept. -1983. -V.6, № 4. P.371-378.

293. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups // Arch. Biochem. Biophys. 1959. - V. 82. - P. 70-77.

294. Eriksson A.M., Lundgren B., Andersson K. Is the cytosolic catalase induced by peroxisome proliferators in rat liver on its way to the peroxisomes ? // J.Basic and Clin.Physiol. and Pharmacol. 1992. - V.3., Suppl. - P. 296.

295. Erin N., Yegen B.C., Oktay S. The role of 5-HT3 receptors in the anti-ulcer effect of calcitonin

296. Gen. Pharmacol. 1994. - V.25, № 8. - P. 1599-1605.

297. Fried R. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dismutase // Biochem. 1975. -V.57, № 5. - P. 657-660.

298. Friedman T.C., Garcia-Borreguero D., Hardwick D., Akuete C.N., Doppman J.L., Dorn L.D., Barker C.N. Decreased delta-sleep and plasma DSEP in patients with Cushing syndrome // Neuroendocrinol. 1994. - V.60, № 6. P. 626-634.

299. Furuhara T., Ono J., Kawauchi M., Asari S., OhmotoT. Expression of Cu, Zn superoxide dismutase m-RNA after cold and conntusion injury in the rat brain // Neurosci. Lett. - 1995. - V. 193, №2. - P. 133-136.

300. Goglia F., Liverini G., De Leo T., Barletta A. Thyroid state and mitochondrial population during cold exposure // Pflugers Arch. 1983. - V.396, № 1. - P. 49-53.

301. Goubern M., Portet R. Circadian rhytm and hormonal sensitivity of lipoprotein lipase activity in cold acclimated rats // Hormone and Metab. Res. -1981. V.13, № 2. - P. 73-77.

302. Goundasheva D., Andonova M., Ivanov V. Changes in some parameters of the immune response in rats after cold stress // J. Vet. Med. B. 1994. - V.41, № 10. - P. 670-674.

303. Graf M.V., Baumann J.B., Girard J., Tobler H.I., Schoenenberger G.A. DSIP-induced changes of the daily concentrations of brain neurotransmitters and plasma proteins in rats // Pharmacol. Biochem.and Behav. 1982. - V.17, № 3. - P. 511-517.

304. Graf M.V., Kastin A.J. Delta-sleep inducing peptide : occurence in different forms // Soc. Neurosci. Abstr. 1983. - V.9, № 2. - P. 138.

305. Graf M.V., Kastin A.J. DSIP-like material exists in peripheral organs of rats in large dissociable forms // Proc. Soc. Biol.and Med. 1984. - V.177, № 1. - P. 197-204.

306. Graf M.V., Kastin A.J. Delta-sleep inducing peptide (DSIP) : an update // Peptides. 1986. -V.7.-P. 1165-1187.

307. Graf M.V., Kastin A.J., Fischman A.J. DSIP occurs in free form in mammalian plasma, human CSF and urine // Pharmacol. Biochem.and Behav. 1984. - V.21, № 5. - P. 761-766.

308. Graf M.V., Lorez H.P., Gillessen D., Tobler H.I., Schoenenberger G.A. Distribution andspecific bindung of 3H-DSIP // Experientia. 1981. - V.37, № 6. - P. 625-627.

309. Graf M.V., Saegesser B., Schoenenberger G.A. Degradation and aggregation of DSIP and two analogs in plasma and serum // Peptides. 1987. - V.8, № 4. - P. 599-603.

310. Granger D.N., Hollwarth M.E., Parks D.A. Ischemia reperfusion injury : role of oxygen -derived free radicals // Acta Physiol. Scand. - 1986. - V. 126., Suppl. 548. - P. 47-63.

311. Gray R.A., Vander Velde D.G., Burke C.J., Manning M.C., Middaugh C.R., Borchardt R.T. Delta-sleep-inducing peptide : solution conformational studies of a membrane-permeable peptide //Biochem. 1994. - V.33, № 6. - P. 1323-1331.

312. Gutteridge J.M.C., Wilkins S. Copper salt-dependent hydroxyl radical formation damage to proteins acting as antioxidants // Biochem.and Biophys. Acta. 1983. - V. 759. - P. 38-41.

313. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. The antioxidants of human extracellular fluids. Invited paper // Arch, of Biochem. and Biophys. 1990. - V.280, № 1. - P. 1-8.

314. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. The importance of free radicals and catalytic metal ions in human diseases // Molec. Aspects Med. 1985. - № 8. - P. 89-193.

315. Hears D.J., Manning A.S., Downey J.M., Yellon D.M. Xanthine oxidase : a critical mediator of myocardial injury during ishemia and reperfusion ? // Acta Physiol. Scand. 1986. - V.126, Suppl.548. - P.65-78.

316. Heilig M., Sjogren M., Blennow K., Ekman R., Wallin A. Cerebrospinal fluid neuropeptides in Alzheimer's disease and vascular dementia // Biol. Psychiatry. 1995. - V.38, № 4. - P. 210-216.

317. Heritier A.G., Stettler O., Dubois P.M. Induction of pituitary cell type differentiation by delta sleep-inducing peptide // Neuroendocrinol. 1994. - V.59, № 5. - P. 477-482.

318. Hoesli E., Schoenenberger G.A., Hoesli E. Autoradiographic localization of finding sites for the 3H-DSIP on neurons of cultured rat brainstem // Brain.Res. 1983. - V. 279, № 3. - P. 374-376.

319. Holeckova E., Baudysova M. Stimulation of DNA synthesis in rat liver and kidney by cold acclimation // Physiol.bohemosl. 1975. -V.24, № 4. - P. 311-313.

320. Iyer K.S., Marks G.A., Kastin A.I. Evidence for a role of DSIP in the slow wave sleep and sleep-related growth hormone release in the rat // Neuroendocrinol. 1987. - V.46, № 1. - P. 93.

321. Kafi B., Cespuglio R, Leger L., Marinesco S. Is the nucleus raphe dorsalis a target for the peptides possessing hypnogenic properties? // Brain Research.-1994.-V.637, № 1-2. P. 211-221.

322. Kastin A.J., Olson G.A., Schally A.V., Coy D.A. DSIP-more than a sleep peptide ? // Trends Neurol. Sci. 1980. - V.3, № 7. p. 163-165.

323. Kastin A.J., Gastellanos P.F., Banks W.A. Radioimmunoassay of DSIP-like material in human blood : possible protein binding // Pharmacol.Biochem.and Behav.-1981.-V.15, № 5,- P. 969-974.

324. Kastin A.J., Gastellanos P.F., Fischman A.J., Proffitt J.K., Graf M.V. Evidence for peptide aggregation // Pharmacol. Biochem.and Behav. 1984. - V.21, № 6. - P. 969-973.

325. Kamata K. Pharmacological studies on the interrelation between the dopaminergic, GABAergic and opioid peptidergic system in the central nervous system of the rat // Jap. J. Pharmacol. 1987.- V.45, № 2. P. 439-447.

326. Kawaguchi T., Shimode M., Matsushita H., Nagase S. Sex differences in the effect of uric acid on the survival of analbuminemic rats exposed to cold : effects of gonadae hormones and uric acid // J.Physiol. 1987. - Y.37, № 5. - P. 941-945.

327. Khvatova E.M., Rubanova N.A., Prudchenko I.A., Mikhaleva I.I. Effects of DSEP and some analogues on the activity of monoamine oxidase type A in rat brain under hypoxia stress // FEBS Letters. 1995. - V.368, № 2. - P. 367-369.

328. Khvatova E.M., Samartsev V.M., Sagoskin P.P., Semenova T.S. Peptide regulation of brain mitochondria energetic state and creatinkinase activity under hypoxic stress // J.Neurochem. -1998. Suppl., Vol. 71. - P. S 42.

329. Klichkhanov N.K., Khalilov R., Khaldun Awadh Obad, Saidov M. Effect of dalargin on intensity of lipid peroxidation in brain at hypothermia// J. Neurochem. 1998. - Suppl., Vol. 71. - P. S 45.

330. Kovalzon V.M. Neurochemistry of the DSEP // J.Neurochem.-1998. Suppl., Vol. 71. - P. S 46.

331. Kovalzon V.M., Alfoldi P., Mikhaleva I.I., Prudchenko I.A. Effects of DSIP and some of its analogues on rat sleep // J. Neurochem. 1995. - V.12, № 1. - P.52-57.

332. Krueger J.M., Pappenheimer J.R., Karnovsky M.L. The composition of sleep-promoting factor isolated from human urine // J. Biol. Chem. 1982. - V.257, № 4. p. 1664-1669.

333. Li Pei-Feng Modification oxidative of Cu, Zn superoxide dismutase induced by oxygen - derived free radicals // Progr. Physiol. Sci. - 1995. - V.26, № 1. - P. 50-52.

334. Lichtstein D., Rodburd D. A second look at the second messenger hypothesis // Life Sci. 1987.- V.40, № 21. P. 2041-2051.

335. Lin S., Yang E., Huestis W.H. Relation ship of phospholipid distribution to shape change in Ca2+-crenated and recovered human erythrocytes // Biochem.-1994.- V.33, № 23. P.7337-7344.

336. Li-Xul Z., Kunihiko I., Kazuhisa T., Masana O. Inhibitory effect of a-tocopherol on methemo-globin formation by nitric oxide in normal and acatalasemic mouse hemolysates // Physiol.Chem.and Phys. and Med.NMR. 1993. - V.25, № 4. - P. 253-260.

337. Lovstad R.A. Fatty acid induced hemolysis. Protective action of ceruloplasmin, albumins, thiols and vitamin C // Int. J. Biochem. 1986. - V. 18, № 9. - P. 771-775.

338. Lowry O.H., Rosenbrough N.I., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with folin phenol reagent // J. Biol.Chem. 1951. - V.193, № 1. - P. 265-275.

339. Lysenko A., Pavlov I., Aiperovich D., Mendzeritsky A. DSIP and neokiotorphin influence on abody temperature and rat brain monoaminergic system under hypothermia and autowarming // J. Neurochem. 1998. - Suppl., Vol. 71. - P. S 47.

340. Maples K.R., Mason R.P. Free radical metabolite of uric acid // J. Biol. Chem. 1987. - V. 263, №4. - P. 1709-1712.

341. Mendzheritskii A.M., Lysenko A.V, Uskova N.I., Sametskii E.A. Studies of the mechanism of the anticonvulsant effect of DSIP in conditions of increased oxygen tension // Neurosci. Behav. Physiol. 1997. - V.27, № 6. - P. 714-717.

342. Mendzheritskii A.M., Mkhaleva I.I., Matsionis A.E., Povilaitite P.E. DSIP as a modulator of the ultrastructure of synapses //Neurosci. Behav. Physiol. 1996. - V.26, № 3. - P. 207-212.

343. Nakamura A., Nakashima M., Kanemoto H., Sugao T., Fukumura Y. Potent antinociceptive effect of centrally administered DSIP // Eur. J. Pharmacol. 1988. - V. 155, № 3. - P. 247-253.

344. Nakamura A., Nakashima M., Sakai K., Niwa M., Nozaki M., Shiomi H. Delta sleep-inducing peptide (DSIP) stimulated the release of immunoreactive Met-enkephalin from rat lower brainstem slices in vitro // Brain Res. 1989. - V.481, № 1. - P. 165-168.

345. Packer J.E., Kettle A. J. Free radical research and the society from radical research // Chem. N.Z. 1994. - V.58, № 4. - P. 14.

346. Parks D.A., Granger D.N. Xanthine oxidase : biochemistry distribution and physiology // Acta Physiol. Scand. 1986. - V.126, Suppl. 548. - P. 87-99.

347. Pavlovic D.D., Uzunova P., Galabova T. Polyamines as modulators of lipoperoxidation // Gen. Physiol.and Biophys. 1992. - V. 11, № 2. - P. 203-211.

348. Peterson S.L., Stevenson P.M. Changes in catalase activity and concentration during ovarian development and differentation // Biochem.and Biophys.acta. Mol.Cell.Res. 1992. - V. 1135, №2. P. 207-214.

349. Petrovic V.M., Rajcic O., Vrbaski M., Milic B. Adaptation to cold and liver protein synthesis in the rat // Bull. Acad. Serb.sci et arts. 1979. - V.66, № 18. - P. 19-25.

350. Pole P., Schneeberger I., Naefely W. Effects of the delta sleep-inducing peptide (DSIP) on the sleep-wakefulnese cycle of cat //Neurosci. Lett. 1978. - V.9, № 11. - P. 33-36.

351. Pradhan D., Weiser M., Lumley-Sapanski K. Peroxidation-induced perturbation of erythrocyte lipid organization // Biochem.and Biophys.acta. Biomembranes.-1990. V.1023, № 3.-P.398-404.

352. Qiu B.S., Pfeiffer C.J., Wu W., Cho C.H. Tungstic acid reduction of cold-resistant stress-induced ulceration in rats // J.Gastroenterol. & Hepatol. 1997. - V. 12, № 1. - P. 19-23.

353. Radi R., Tan S., Prodanov E., Evans R.A. Inhibition of xanthine oxidase by uric acid and its influence on superoxide radical production // Biochemand Biophys.acta. Protein Struct.and Mol. Enzymol. 1992. - V. 1122, №2. - P. 178-182.

354. Raeissi S., Audus K.L. In vitro characterization of blood-brain barrier permeability to delta sleep-inducing peptide // Reprod.dev. 1989. - V.29, № 6. - P. 689-702.

355. Rank H., Chirico S., Grootveld M., Halliwell B. UMC acid «an endogenous marker probe» for generation of reactive oxygen species ? //Free Radic. Biol.and Med. 1990. - V.5, № 1. - P. 190.

356. Rappoport I., Holzhutter H.G., Drung I. Quantification of the main metabolic pathways in human erythrocytes at low temperature // Biol. Chem. 1992. - V.373, № 9. - P. 813-814.

357. Robert A., Leung F.W., Kaiser D.C., Guth P.N. Potentiation of as pirin lesion by exposure to cold // Gastroenterol. 1989. - V.97, № 5. - P. 1147-1158.

358. Savill P. J., Halliman T., Gor J. ATP and glutathione mediated inhibition of lipid peroxidation in rat liver systems // Biochem. Soc. Trans. 1992. - V.20, № 2. - P. 127-129.

359. Scherschlicht R., Aeppli L., Pole P., Haefely W. Some pharmacological effects of delta sleep-inducing peptide (DSIP) // J. Biol. 1984. - V. 23, № 2. - P. 346-352.

360. Schoenenberger G.A. Characterisation, properties and multivariate functions of delta sleep-inducing peptide // Eur. Neurol. 1984. - V.23. - P. 912-921.

361. Schoenenberger G.A., Monnier M. Studies on the delta sleep-inducing peptide // Med.Chem. IV. Proc. 6 th Int. Symp., Brighton, 1978. Main Iect. Forest Grove Ore., 1979. P. 101-116.

362. Schoenenberger G.A., Schneider-Helmert D. Psychophysiological functions of delta sleep-inducing peptide // Trends Pharmacol. Sci. 1983. - V.4, № 1. - P. 307-310.

363. Schulz P., Lustenberger S., Degli Agosti R., Rivest R.W. Plasma concentration of ninehormones and neurotransmitters during usual activities or constant bed rest for 34 H // Chronobiol. Intern. 1994. - V.ll, № 6. - P. 367-380.

364. Schuman E.M., Madison D.V. Nitric oxide and synaptic function // Annu.Rev.Neurosci. 1994. - V.17. - P. 153-183.

365. Sevanian A., Davies K.J.A., Hochstein P. Serum urate as an antioxidant for ascorbic acid // Amer. J. Clin. Nutr. 1991. - V.54. - P. S1129-S1134.

366. Shandra A.A., Godlevskii R.S., Mazarati A.M., Oleshko A.A., Mikhaleva I.I. The influence of the DSIP on convulsive activity //Neurosci & Behav.Physiol. 1993. - V.23, № 5. - P. 480-485.

367. Skagerberg G., Bjartell A., Vallet P.G., Chranay Y. Immunocytochemical demonstration of DSIP-like immunoreactivity in the hypothalamus of the rat // Peptides. 1991. - V.12, № 5. - P. 1155-1159.

368. Spath-Schwalbe E., Schafer A., Uthgenannt D., Born J., Fehm H.L. DSIP does not affect CRH and meal-induced ACTH and Cortisol secretion // Psychoneuroendocrinol. 1995. - V.20, № 3. -P. 231-237.

369. Staffas L., Ellis E.M., Hayes J.D., Lundgren B., Pierre J.W.D. Growth hormone and testosterone-dependent regulation of glutathione transferase subunit A5 in rat liver // Biochem. J. 1998. -V. 332. - P. 763-768.

370. StafFon J.M., Merrenknecht K., Schulre C., Smales C., Rubin L.L. Signal tranduction at the blood-brain barrier//Biochem. Soc. Trans. 1995. - V.23, № 3. - P. 475-479.

371. Sudakov K.V., Coghlan J.P., Kotov A.V., Salieva R.M., Polyntsev Yu.V., Koplik E.V. DSIP sequels in the mechanisms of resistance to emotional stress // Annals of the N.Y. Acad. Sci. -1995. V.771. - P. 240-251,

372. Sullivan S.G., Stern A. Independence of hemoglobin, catalase and hexose monophosphate shunt in red blood cells exposed to oxidative agents // Biochem.Pharmacol. 1980. - V.29, № 17. - P. 2351-2359.

373. Tappel A.L. Lipid peroxidation damage to cell components // Fed. Proc. 1973. - V.32, № 8. -P. 1870-1874.

374. Thayer W.S. Evaluation of tissue indicators of oxidative stress in rats treated chronically with adriamycin // Biochem. Pharmacol. 1988. - V.37, № 11. - P. 2189-2194.

375. Tissot R. Recepteurs de Fopium et sommeil. Effects de microinjections de DSIP dans le thalamus median, la substance orise centrale periaqueducale et le noyau du tractus solitaire du lapin // Neuropsychobiol. 1981. - V.7, № 3. p. 321-325.

376. Tsunashima K., Kato N., Masui A., Takahashi K. The effect of DSIP on the changes of body temperature induced by serotonergic agonists in rats // Peptides. 1994. - V. 15, № 1.- P. 61-65.

377. Umetsu H., Hishinuma K., Wake H., Takeuchi M., Ichishima E. Action of serine carboxypepti-dase from Paecilomyces caraeus on oligopeptides containing carboxy-terminally amidated peptides // Curr Microbiol. 1998. - V.36, № 1. - P. 41-44.

378. Vallet P.G., Charnay Y., Boura C., Kiss J.Z. Colocalization of DSIP and luteinizin-hormone-releasing hormone in neurosecretory vesicles in rat median-eminence // Neuroendocrinol. 1991. -V. 53, № 1. - P. 103-106.

379. Vgontzas A.N., Friedman T.C., Chrousos G.P., Bixler E.O., Vela-Bueno A., Kales A. Delta sleep-inducing peptide in normal humans and in patients with sleep apnea and narcolepsy // Peptides. 1995. - V.16, № 6. - P. 1153-1156.

380. Weiss S. Oxygen, ischemia and inflammation // Acta Physiol. Scand. 1986. - V.126, Suppl.548. - P.9-37.

381. Wilson W.G., Kirkman H.N., Clemons E.N. Regulation of glucose-6-phosphate dehydrogenase.197

382. Released rat cell ghosts // J.Lab.and Clin.Med. 1980. - V.95, № 6. - P. 888-896.

383. Yanagawa Y., Abe T., Satake M. A novel sodium channel inhibitor from Conus Geographus : purification, structure and pharmacological properties // Biochem. 1988. - V.27, № 17. - P. 6256-6260.

384. Yayaraman S., Kumar K.R.A., Rao M.V.R. Di-2-ethylphtalate induced peroxidative stress in rat liver // Bull.Contam.Toxicol. -1988. V.41. - P. 360-364.

385. Yehuda S., Carasso R.L. DSEP a tool for investigating the sleep onset mechanism : a review // Intern. J. Neurosci. 1988. - V.38, № 2. - P. 345-353.

386. Yehuda S., Mostofsky D.I. Circadian effects of beta-endorphin, melatonin, DSIP, and amphetamine on pentylenetetrazol-induced seizures // Peptides.- 1993. V. 14, № 2. - P. 203-205.

387. Yon L., Fenilloley M., Charnay Y., Vandry H. Immunohistochemical localization of DSIP-like immunoreactivity in the central nervous system and pituitary of the frog Rana Riolibunda // Neurosci. 1992. - V.42, № 1. - P. 221-225.

388. Young A.M., Key B.J. Antagonism of the effects of DSEP by nalaxone in rats // Neuropharma-col. 1985. - V.23. - P. 1347-1350.

389. Zlokovic B.V., Segal M.B., Davson H., Jankov R.M. Passage of DSIP across the blood-cerebrospinal fluid barrier // Peptides. 1988. - V.9, № 3. - P. 533-538.