Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Регенерация глазного щупальца у улитки ACHATINA FULICA и ее регуляция

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Автореферат диссертации по теме "Регенерация глазного щупальца у улитки ACHATINA FULICA и ее регуляция"

Санкт-Петербургский государственный университет

На правах рукописи

СИДЕЛЬНИКОВ Александр Павлович

РЕГЕНЕРАЦИЯ ГЛАЗНОГО ЩУПАЛЬЦА У УЛИТКИ АСНATINA FULICA И ЕЕ РЕГУЛЯЦИЯ

03.00.11 - эмбриология, гистология и цитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических hsvk

Санкт-Петербург 1997

Работа выполнена в лаборатории онтогенеза Биологического научно-исследовательского института Санкт-Петербургского государственного университета.

Научный руководитель: кандидат биологических наук С.М.Ефремова.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Е. И. Чумасов

Ведущее учреждение:

доктор биологических наук, профессор Б. Н. Кудрявцев

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины (НИИЭМ РАМН)

Защита диссертации состоится " / /^ " (Х/с/й^-йЛ. 1997 г

час. СО _мин. на заседании специализированного диссертационного Совета Д-063.57.22 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук в Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034 Санкт-Петербург, Университетская набережная, 7/9, биолого-почвенный факультет, аудитория 133.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке имени А. М. Горького Санкт-Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан " / 3 " .¿ССС^/ЭАгМ. 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета доцент

Д. К. Обухов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В опытах использовано около 1000 улиток Achatina fúlica, выращенных в лабораторных условиях. Животных содержали в террариумах с влажным песком в помещении с постоянной температурой 26-27°С и относительной влажностью 80-90%. Световой суточный цикл составлял 12:12 часов. Улиток кормили 3 раза в неделю картофелем, яблоками, морковью и комбикормом ПК-1. В террариуме постоянно находился мел и чашки Петри с водой.

Для гистологического исследования процесса регенерации у улиток, выращенных из одной кладки, отрезали с помощью специально изготовленного приспособления дистальную половину правого глазного щупальца у свободно ползающего животного в момент наибольшего вытягивания щупальца. Через 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7 недель после ампутации регенераты фиксировали в жидкости Буэна, проводили через ряд спиртов возрастающей концентрации, хлороформ и заливали в парафин. Серийные срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином Майера с эозином.

С целью выяснения полноты функционального восстановления зрительной системы был исследован отрицательный фототаксис в условиях градиента освещенности у интактных улиток, у тех же животных с ампутированными глазными щупальцами и после регенерации у них глаз. Каждые 30 минут на протяжении 4,5 часов отмечали активность улиток и их нахождение в освещенной или затененной половине экспериментального террариума. Количественный анализ динамики перемещения улиток в затененную половину террариума и переход в состояние покоя на протяжении времени наблюдения проводили с помощью регрессионного анализа.

Апалиа динамики пролисреративнои активности проводили как во время нормального хода регенерации глазного щупальца, так и после модуляции этого процесса инъецированием гуморальных факторов гемолимфы регенерирующих улиток. В каждой группе доноров и реципиентов было не менее 10-12 улиток, выращенных из одной кладки. Через различные сроки после ампутации дистальной половины правого глазного щупальца регенераты фиксировали в 4% формалине на 0,1 М фосфатном буфере. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивали по Фельгену и подсчитывали число митозов в раневом эпителии, приходящееся на 3-4 тысячи клеток. Вычисляли митотический индекс (МИ) в процентах. Перед фиксацией у этих улиток забирали гемолимфу из цефало-

педального синуса и вводили ее реципиентам в объеме 100 мкл также в цефа-лопедальный синус.

В специальной серии экспериментов у доноров перед фиксацией не только забирали часть гемолимфы, но и вырезали церебральные ганглии на 14-й, 16-й, 18-й, 21-й, 23-й дни регенерации. Гомогенаты ганглиев готовили на физиологическом растворе для улиток (Pawson, Chase, 1988), центрифугировали и супернатант инъецировали по 100 мкл, что составляло эквивалент одного ганглия на улитку-реципиента. У всех реципиентов за два дня до инъекции ампутировали дистальную половину правого глазного щупальца. На 7-й день регенерации реципиентов гемолимфы и реципиентов гомогенатов церебральных ганглиев забивали и регенерирующие щупальца фиксировали. На окрашенных по Фельгену срезах подсчитывали митотический индекс.

Использование митотического индекса в качестве критерия пролифера-тивной активности не всегда правомерно, поскольку относительное увеличение количества митозов может быть обусловлено увеличением длительности самого митоза (Дондуа, Ефремов, 1974). Поэтому были проведены дополнительные эксперименты по определению интенсивности синтеза ДНК и корреляции этого показателя с величиной митотического индекса. Для цитоФотометрического исследования парафиновые срезы регенерирующих щупалец толщиной 5 мкм окрашивали по Фельгену и измеряли оптическую плотность клеточных ядер раневого эпидермиса в режиме сканирования на цитофотометре IBAS-1. Для каждого препарата подсчитывали общий процент ядер с содержанием ДНК более 2с. Для компенсации различия толщины срезов использовали 3-4 среза. На этих же препаратах подсчитывали митотический индекс. Для калибровки прибора использовали сперматоциты первого и второго порядков, оптическую плотность ядер которых измеряли на срезах гермафродитной железы улитки. Рассчитывали коэффициент корреляции и коэффициенты линейной регрессии.

Для авторадиографического исследования реципиентам митогенной и инги-бирующей гемолимфы регенерирующих доноров, реципиентам гемолимфы ин-тактных доноров и контрольной группе улиток на седьмой день регенерации инъецировали 3Н-тимидин в дозе 5 микрокюри на 1 грамм веса тела улитки. Через 3 часа после инъекции регенерирующие щупальца фиксировали. Срезы, толщиной 5 мкм, окрашивали по Фельгену, покрывали эмульсией и экспонировали 3 недели. После проявления и заключения в канадский бальзам на препа-

ратах подсчитывали число меченных ядер и количество митозов, приходящееся на 3 тыс. клеток раневого эпителия.

Для определения молекулярной массы активных гуморальных факторов гемолимфа, взятая от интактных и регенерирующих доноров, была разделена на отдельные фракции с помощью молекулярных фильтров Centricon microconcentrators фирмы Amicon Div.(CLUA). Набор фильтров обеспечивал разделение на фракции в диапазонах свыше 67 тыс. дальтон, 67-12 тыс. дальтон, 12-3,5 тыс. дальтон, менее 3,5 тыс. дальтон. Отдельным группам реципиентов были введены соответствующие фракции в объеме 100 мкл на улитку на третий день после ампутации щупальца. Через 5 дней после инъекции регенераты фиксировали. Критерием пролиферативной активности служил митотический индекс.

Для статистического анализа результатов во всех выборках предварительно удаляли "выскакивающие" значения с помощью критерия исключения резко выделяющихся наблюдений по ранжированному ряду (Мюллер, Нойман, Шторм, 1982), после чего сравнивали средние значения МИ с помощью t-крите-рия Стьюдента, непараметрических критериев Вилкоксона-Манна-Уитни, Ван дер Вардена и Колмогорова-Смирнова. Все расчеты производили на ПК PC AT 486DX2.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

Морфология регенерирующих щупалец.

После ампутации дистальной половины остаток глазного щупальца разделяется на две части: наружную, представляющую собой остаток эпителиально-мышечной оболочки щупат-иа м - сстати* мускула-ретрактора с заключенными внутри него проксимальными частями щупальцевого и глазного нервов, щупальцевой артерии (рис. 1 А и Б). Внутренняя часть располагается возле церебральных ганглиев. Основания обеих частей щупальца связаны соединительнотканным тяжем, состоящим из везикулярных клеток. Внутри тяжа от церебрального ганглия почти параллельно друг другу идут два фронтальных нерва (Ghose, 1962).

Начальные этапы регенерации протекают в обеих частях щупальца независимо друг от друга. В апикальной части оболочки щупальца образуется скопление амебоцитов, формирующих амебоцитарную пробку. На поверхность амебоцитар-ной пробки от краев раны начинают наползать эпителиоциты, которые

приобретают уплощенную форму. Через 3-4 дня после ампутации эпителизация раны завершается. К 7-му дню регенерации в результате миграции клеток внутренней части и втягивания внутрь головы наружной части ампутированного щупальца происходит объединение этих частей в единое целое (рис. 1 В). В образовавшийся мост из клеток, которые можно назвать бластемой, врастают щупальцевый нерв и щупальцевая артерия, берущая свое начало от остатка ин-тактной.

Рис. 1. Схема строения глазного щупальца улитки АФаИпа (иНса.

А - интакгное щупальце в вытянутом состоянии; Б - щупальце сразу после ампутации дистальной половины; В - щупальце через 7 дней регенерации;

а - а - уровень ампутации щупальца; б - бластема; Г - глаз; ГН - глазной нерв; МР - мускул-ретракгор; РЭ - раневой эпителий; СТ - соединительнотканный тяж; ФН - фронтальные нервы; ЩГ - щупальцевый ганглий; ЩН - щупальцевый нерв; ЭМО - эпителиально-мышечная оболочка щупальца.

Щупальцевый нерв достигает дистальной части регенерата к 3-ей неделе регенерации. К этому времени в эпителии образуется чувствительная пластинка - участок эпителия, состоящий из высоких цилиндрических клеток. В чувствительной пластинке наблюдается высокая митотическая активность. Многочисленные концевые ответвления щупальцевого нерва окружены нейробластами. Под чувствительной пластинкой располагаются группы чувствительных нейронов. Эпителий образует несколько впячиваний - зачатки глаз. Сами глаза появляются через 4 недели регенерации и имеют в своем составе хрусталик, сетчатку, пигментные клетки. Как правило, образуется два-три глаза, размеры которых значительно меньше, чем у интактного глаза. К моменту регенерации глаз щупальце приобретает способность втягиваться и вытягиваться в результате восстановления мускула-ретрактора.

Через 5 недель после ампутации регенерирующие щупальца напоминают по своей структуре интакгные. Щупальцевый нерв сильно расширен в своей дистальной части. Заметно крупнее становятся его отростки. Увеличиваются размеры чувствительной почки и глаз. Через 6-7 недель регенерации полностью восстанавливаются щупальцевый ганглий и его отростки. Глаза не достигают размеров интакгных. Не удается обнаружить глазной нерв. Длина и окраска щупальца восстанавливаются через 2,5-3 месяца.

Функциональный анализ зрительной системы интактных и регенерирующих улиток продемонстрировал достоверное ослабление отрицательного фототаксиса у улиток с ампутированными и регенерировавшими глазами по сравнению с интактными.

Исследование пролиферативной активности клеток регенерирующего щупальиа АсИаНпа Ь/Нса гомпетельстпугт с закономбрпим изменении темпов пролиферации в течение регенерации. В течение первых двух недель после ампутации значения митотического индекса практически не изменяется. На 21-ый день регенерации митотическая активность дает всплеск, так что МИ возрастает почти в 3,5 раза по сравнению с МИ 7-го и 14-го дней (р<0,001). В дальнейшем митотическая активность начинает снижаться. На 28-ой день регенерации величина МИ достоверно ниже (р<0,02) значений индекса на 21-ый день регенерации, но все же превышает МИ 1-ой и 2-ой недель регенерации (р<0,05). На 35-ый день регенерации величина МИ снижается до уровня первых двух недель регенерации. Далее митотическая активность продолжает падать

и на 42-ой день достигает значения достоверно меньшего всех наблюдавшихся на предшествующих сроках (рис. 2).

и 1.60 —

«1 1.50 —

я I 1.40 —

I 1.30 —

« 1 1. го -

* 0 1.Ю -

ф 7 х.оо —

I Ь 0.90 —

0 н 0.80 —

X Е 0.70 —

О.бО —

О.ЗО —

□ . 40 —

О.ЗО —

0.20 —

О.Ю -

12 3 4 5 6

Рис. 2. Динамика величины митотического индекса в процессе регенерации глазного щупальца у доноров-регенерантов. По оси абсцисс: срок регенерации в неделях. По оси ординат: величина митотического индекса в процентах. Вертикальные линии на столбиках - стандартная ошибка среднего значения.

1-3 р=0,0004; 1-4 р=0,01; 1-6 р=0,009; 2-3 р=0,0005; 2-4 р=0,03;

2-6 р=0,048; 3-4 р=0,014; 3-5 р=0,0005; 3-6 р=0,0001; 4-5 р=0,012; 4-6 р=0,0009; 5-6 р<0,0001.

На рис. 3 представлены результаты влияния инъекций гемолимфы регенерирующих доноров на митотическую активность раневого эпителия реципиентов. Активность митогенного фактора выявлена через две недели после начала регенерации. Появление этого фактора в гемолимфе несколько опережает вспышку митотической активности, наблюдаемую у доноров-регенерантов на 21-й день регенерации щупальца. На последующих сроках регенерации ми-тогенная активность гемолимфы больше не выявляется. Через 6 недель после начала регенерации в гемолимфе обнаруживается активность ингибирующего пролиферацию фактора.

Рис. 3. Митотический индекс у реципиентов гемолимфы доноров, изъятой на различных сроках регенерации.

1 - контрольная группа без инъекций; 2 - реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 7-ой день их регенерации; 3 - реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 14-ый день их регенерации; 4 -реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 21-ый день их регенерации; 5 - реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 28-ой день их регенерации; 6 - реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 35-ый день их регенерации; 7 - реципиенты гемолимфы, взятой от доноров на 42-ой день их регенерации. По оси ординат: величина митотического индекса в процентах. Вертикальные линии на столбиках - стандартная ошибка среднего значения.

1-3 р=0,035; 1-7 р=0,0002; 2-3 р=0,022; 2-7 р=0,038; 3-4 р=0,053; 3-6 р=0,011; 3-7 р=0,0002; 5-6 р=0,035; 5-7 р=0,00001; 6-7 р=0,0028

Многочисленные исследования регенерации глазных щупа-

лец гастропод от центральной нервной системы (ЦНС) заставляют сделать вывод, что наиболее вероятными источниками рострегулирующих факторов у гастропод, как впрочем и у других беспозвоночных, являются церебральные ганглии (см. Короткова, 1997; Moffett, Austin, 1981; Le Gall, 1983; Le Gall et al., 1987). В поисках источников гуморальных рострегулирующих факторов, обнаруженных в гемолимфе ахатин на определенных стадиях регенерации, исследовали влияние гомогенатов церебральных ганглиев на митотическую активность клеток раневого эпителия реципиентов. Гомогенаты церебральных ганглиев ин-такгных животных не оказали достоверного влияния на пролиферацию клеток.

Эти данные свидетельствуют об отсутствии стимулирующих и ингибирующих факторов в ЦНС интактных улиток.

Результаты влияния гомогенатов церебральных ганглиев регенерирующих улиток на величину МИ реципиентов представлены на рис. 4.

9-"Ъ

Рис. 4. Относительные изменения величины митотического индекса (МИ) эпидермиса регенерирующего щупальца у доноров и реципиентов гемолимфы и гомогенатов церебральных ганглиев. I - относительные изменения МИ у реципиентов гомогенатов церебральных ганглиев, взятых на 14-й - 23-й дни регенерации доноров. За нулевой уровень принята величина МИ улиток, инъецированных физиологическим раствором. II - относительные изменения МИ у реципиентов гемолимфы, взятой на 14-й - 28-й дни регенерации доноров. За нулевой уровень принята величина МИ улиток, не получавших никаких инъеций. Ill - относительные изменения МИ у доноров на 14-й - 28-й дни их регенерации. За нулевой уровень принята величина МИ улиток на 14-й день регенерации. * - достоверное отличие от контроля.

По оси абсцисс - дни регенерации доноров; по оси ординат -значения митотического индекса в процентах относительно нулевого уровня.

Гомогенаты ганглиев с 14-го по 21-ый дни регенерации доноров достоверно (р<0,05) снижали величину митотического индекса. Гомогенат ганглиев, взятых на 23-ий день регенерации, не изменял величину митотического индекса по сравнению с контрольной группой улиток. Учитывая, что тормозящий эффект гемолимфы был обнаружен на 23-й день регенерации, когда гомогенаты церебральных ганглиев уже не оказывали ингибирующего эффекта, можно предположить, что фактор, ингибирующий деление клеток, вначале был синтезирован в церебральных ганглиях, а позднее выделялся в гемолимфу (ломаная линия, соединяющая столбцы на графиках I и II рис. 4). Обращает внимание, что момент появления ингибирующей активности в гемолимфе (23 день, II, рис. 4) совпадает с максимальной митотической активностью в регенерирующем щупальце доноров (23 день, III, рис. 4). Таким образом, появление ингибирующей активности в гемолимфе опережает снижение митотической активности в регенерате. Появление митогенного фактора в гемолимфе также опережает всплеск максимальной митотической активности в регенерирующем щупальце (ломанные линии, соединяющие столбцы на графиках II и III, рис.4).

В результате цитофотометрического исследования была обнаружена достоверная корреляция (R=0.947, р<0.01) между величиной митотического индекса и процентным количеством ядер эпителиоцитов с содержанием ДНК свыше 2с. Параметры линейной модели приняли значения: Y=0.5438+15.98X, где X -значения митотического индекса, Y - процент клеток с содержанием ДНК свыше 2с. Таким образом, митотический индекс линейно коррелирует с интенсивностью синтеза ДНК и может использоваться как индикатор пролиферативной активности клеток регенерирующего щупальца Achatina fúlica. Результаты автопя-л;:огм5^инаского исследования также подтвердили истинную стимуляцию и ин-гибирование пролиферации клеток регенерирующего щупальца гуморальными факторами гемолимфы. МИ и индекс меченых ядер (ИМЯ) оказались достоверно выше в группе улиток, получивших инъекцию митогенной гемолимфы, по сравнению с контрольной группой (р<0,05), не получавшей никаких инъекций, и с группой, инъецированной гемолимфой интактных доноров (р<0,03). Гемолимфа, взятая у доноров на 42-й день их регенерации и обладающая ингибирую-щими митозы свойствами, достоверно снижала величины МИ и ИМЯ по сравнению с контролем (р<0,05). Инъекция гемолимфы интактных улиток не оказала достоверного влияния на величину МИ и ИМЯ реципиентов.

Результаты фракционирования гемолимфы показали, что у интактных улиток ни цельная гемолимфа, ни одна из ее фракций не изменяли достоверно величину МИ реципиентов по сравнению с контролем.

Напротив, цельной гемолимфе регенерантов 18-го дня оказался присущ митогенный эффект: МИ был увеличен до 162% по сравнению с контрольной группой без инъекций. Этот же эффект обеспечила фракция 67-12 кД (р<0,05). Цельная гемолимфа, взятая на 22-й день регенерации доноров, достоверно снизила величину МИ реципиентов до 63% от значения в контрольной группе (р<0,01). Этот эффект был обусловлен фракцией, содержащей вещества с молекулярной массой свыше 67 кД и снизившей митотический индекс даже до 42%. Остальные из исследованных фракций достоверных эффектов не оказали.

ОБСУЖДЕНИЕ

Процесс восстановления глазного щупальца у A. fúlica сходен с таковым других стебельчатоглазых пульмонат (Chetail, 1964; Flores, Pellegrino de Iraldi, 1980). Амебоцитарная пробка, образующаяся уже в первые часы после ампутации щупальца, наряду с сокращением мышц предотвращает вытекание гемолимфы из раны и служит субстратом для эпителиоцитов при эпителизации раны. Имеются сведения об образовании амебоцитами фибробластов и, по-видимому, миобластов (Сатдыкова, Старостин, Хрущев 1978; Sminia, Borghart-Reinders, van de Linde, 1974).

Основную роль в восстановлении целостности щупальца играют клетки мускула-ретрактора, мигрирующие по соединительнотканному тяжу. Этот тяж одновременно служит и субстратом для перемещения клеток, и "путеводной нитью" для них. Нельзя, конечно, исключить и наличие химических стимулов, привлекающих клетки к раневому эпителию. Мост из дедифференцированных клеток, связывающий обе части регенерирующего щупальца, можно назвать бластемой. Сама модель регенерации глазного щупальца стебельчатоглазых пульмонат подразумевает образование вновь формирующихся структур за счет трансдифференцировки клеток, остающихся после ампутации тканей (Карлсон, 1986). Однако, о происхождении бластемы в процессе регенерации щупальца стебельчатоглазых гастропод нет единого мнения. Большинство исследователей полагают, что чувствительная пластинка образует все сенсорные структуры щупальца - чувствительный эпителий, чувствительные нейроны, щупальце-

вый ганглий и глаза. Бластема, соединяющая обе части регенерирующего щупальца, дает начало остальным тентакулярным тканям (Flores et al., 1992).

Результаты нашего исследования свидетельствуют об аномальной регенерации зрительной системы ахатин. Образуются, как правило, два-три глаза. Кроме того, не удается обнаружить в регенерировавшем щупальце глазной нерв. Анализ поведения улиток в условиях градиента освещенности также свидетельствует о функциональной несостоятельности регенерировавших глаз как фоторецепторных органов.

Динамика митотической активности в регенерирующем щупальце Achatina fúlica сходна с таковой для других видов животных (Карлсон, 1986), в том числе для стебельчатоглазых пульмонат. Размножение клеток в регенерирующем щупальце находится под контролем стимулирующих и ингибирующих митотиче-скую активность эндогенных гуморальных факторов. Нами обнаружено, что эти рострегулирующие факторы появляются только во время регенерации и отсутствуют как в гемолимфе, так и в центральной нервной системе интактных улиток. Причем появление этих факторов приурочено к определенным этапам восстановительного процесса.

Митогенный фактор появляется в гемолимфе на третьей неделе регенерации (рис. 4). Его появление несколько опережает по времени всплеск максимальной митотической активности в регенерате, а период действия составляет 3-4 дня. Молекулярная масса митогенного фактора гемолимфы регенерирующих улиток находится в диапазоне от 12 «Да до 67 кДа. Результаты цитофото-метрического и авторадиографического исследований наводят на мысль, что митогенный фактор гемолимфы регенерирующих улиток влияет на переход клеток и? гЬя-»1-1 G ; 2 S фазу.

В настоящем исследовании впервые была обнаружена быстрая, в течение 3-4 дней, смена митогенной активности гемолимфы на ингибирующую, причем последняя проявляет свое действие не дольше 4-5 дней (рис. 4). Затем этот ингибитор, по-видимому, исчезает или инактивируется. Молекулярная масса ингибитора превышает 67 кДа. Поскольку гомогенаты церебральных ганглиев регенерирующих улиток с 14-го по 21-ый дни регенерации ингибировали пролиферацию, а на 23-й день регенерации, когда гомогенаты церебральных ганглиев уже такого эффекта не оказывали, проявлялся тормозящий эффект гемолимфы, можно сделать вывод, что тормозящий фактор вначале был синтезиро-

ван в церебральных ганглиях, а позднее выделялся в гемолимфу и гуморальным путем достигал регенерирующего щупальца. Таким образом, нами впервые обнаружено, что церебральный ганглий является источником тормозящего пролиферацию фактора. Вероятно, появление ингибитора в момент наивысшей митотической активности является необходимым условием предотвращения избыточной пролиферации. Совпадение по времени появления ингибитора пролиферации в крови и начала дифференцировки клеток регенерирующего щупальца, по-видимому, указывает на существенную роль ингибитора в процессе переключения пролиферации клеток на процессы клеточной дифференцировки.

В конце регенерации в гемолимфе вновь появляется ингибирующая митозы активность, которая по своей интенсивности значительно превышает инги-бирующий эффект гемолимфы на 22-ой - 23-ий дни регенерации. Нами впервые обнаружено существование у моллюсков факторов, тормозящих пролиферацию в процессе регенерации.

Авторадиографическое исследование показало, что возможным механизмом действия этого ингибитора является блокировка перехода клеток в фазу синтеза ДНК и, как следствие, снижение количества делящихся клеток. Появление ингибитора на этом этапе восстановительного процесса должно обеспечивать максимальную остановку пролиферации. Таким образом, завершение регенерации и ее остановка есть не просто ослабление секреции стимулирующего начала, а активный процесс, связанный с продуцированием самостоятельного ингибирующего пролиферацию фактора (факторов). Это означает, что в живом организме заложены очень мощные и эффективные механизмы, не допускающие чрезмерную, избыточную регенерацию, что повлекло бы за собой нарушение функции регенерирующего органа или ткани.

Нашими исследованиями впервые показано, что темпы деления клеток в регенерирующем щупальце Achatina fúlica находятся под контролем как стимулирующих, так и ингибирующих факторов, закономерно появляющихся в гемолимфе в определенные сроки восстановительного процесса. Это представление о регуляции пролиферации как активном взаимодействии ее стимуляторов и ингибиторов согласуется с исследованиями, проведенными на млекопитающих (Бабаева, 1985, 1989).