Разработка ускоренного иммунологического метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах

Стрелков, Алексей Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка ускоренного иммунологического метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах
ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Разработка ускоренного иммунологического метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах"

На правах рукописи

Стрелков Алексей Александрович

РАЗРАБОТКА УСКОРЕННОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИНДИКАЦИИ САЛЬМОНЕЛЛ В ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ И КОРМАХ

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2011

1 6 ИЮН 2011

4849769

Работа выполнена в лаборатории санитарной микробиологии Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии).

Научный руководитель:

Кандидат биологических наук, доцент

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

Кононенко Анна Борисовна (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Бутко Михаил Павлович (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Доктор биологических наук, профессор Селянинов Юрий Олегович

(ВНИИВВиМ)

Ведущая организации: ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» (г. Москва, ул. Талалихина, д.ЗЗ)

Защита состоится

<Ж N 2011 г. в /Л часов на заседании диссертационного совета Д 006.008.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии по адресу: 123005, Москва, Звенигородское шоссе, д. 5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Автореферат разослан <</Ж 2ОН г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор ветеринарных наук, профессор /fj^ /ГЛ Долгов В.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Проблема качества и безопасности продовольственного сырья и кормов животного происхождения в последние годы приобрела острый и весьма актуальный характер. В большинстве стран мира продовольственный аспект национальной безопасности признается одним из наиболее приоритетных направлений государственной политики и законотворческой деятельности.

В большинстве стран мира на протяжении истекших десятилетий зарегистрировано значительное увеличение распространенности заболеваний, вызываемых микроорганизмами, контаминирующими продукты питания, сырье животного происхождения и корма. К числу таких микроорганизмов относятся Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Escherichia coli и др. Ежегодно в среднем у 30% населения промышленно развитых стран регистрируют токсико-пищевые инфекции. В силу этого обеспечение безопасности пищевых продуктов и продовольственного сырья является приоритетной задачей современной науки и практики [Питание и здоровье в Европе: новая основа для действий: резюме // Дания, 2003].

Значительному распространению токсико-пищевых инфекций способствует широко развитая международная торговля кормами животного происхождения (мясная, рыбная, костная, мясо-костная мука), нередко инфицированными разнообразными серотипами бактерий рода Salmonella, что определяет основную эпидемиологическую цепь — «животные корма -животные - животные пищевые продукты - человек» [Шур В.И., 1980; Пак С.П., 1989; Шустер Б.Ю. и др., 1989].

В 2008 г. в результате проверок не было допущено в реализацию около 10% осмотренной продукции на основании оценки ее безопасности [Информационный бюллетень Федерального центра по сальмонеллезам 2008,2009].

Изучению эпизоотических и экологических аспектов сальмонеллезов, совершенствованию методов индикации возбудителей, разработке мер профилактики и борьбы с заболеванием уделяется пристальное внимание [Бутко М.П., 1979, 1983, 1995; Черкасский Б.Л., 1994, 1995; Куликовский

A.В., 2004, 2011; Смирнов A.M., 2003; Рожнова С.Ш., 2009; Бритова С.В, 1995; Кононенко А.Б., 1999; Булатов А.С., 1999; Ленченко Е.М., 2000; Зуев

B.C., 2004; Павлова И.Б., 2004; Михалева Л.П., Серегик И.Г., 2004].

Современный уровень требовашш к качеству и безопасности продуктов пищевой, кормовой промышленности, экологическому состоянию окружающей среды выдвигает необходимость создания быстрых и надежных методов обнаружения в них условно-патогенных и патогенных бактерий, в частности бактерий рода Salmonella.

Система контроля качества и безопасности сырья и продуктов животного происхождения предусматривает комплексный контроль по всей технологической цепочке непосредственно от животных до готовой продукции. Особого внимания требуют те случаи, когда внешне клинически здоровые животные являются носителями опасных для здоровья человека возбудителей инфекционных и инвазионных заболеваний.

Классические бактериологические методы, используемые в ветери-нарно-санитарном контроле в отношении сальмонелл, длительны, трудоемки и не всегда адекватны из-за высокой фенотипической изменчивости бактерий.

Все более широкое применение в практике лабораторий находит использование современных иммунологических, молекулярно-генетических и других методов. Но, несмотря на достигнутые успехи, не все лаборатории, занятые в сфере анализа продовольственного сырья и кормов, а также пищевой продукции, имеют возможность использовать в своей практике дорогостоящие методы анализа (ПНР, радиоиммунный анализ, масс-спектромектрия и др.). Поэтому перед современной наукой стоит задача

оснастить специалистов, занятых в области обеспечения безопасности сырья животного происхождения и кормов, более доступными, но не менее точными методами.

Таким образом, исследования, направленные на разработку ускоренных иммунологических методов индикации бактерий рода Salmonella в сырье животного происхождения и кормах, являются весьма актуальными.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась разработка метода ускоренной индикации бактерий рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах, основанного на сочетании иммуно-магнитной сепарации, иммунохроматографического или иммуно-ферментного анализов.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- дать оценку эффективности метода иммуномагнитосорбции при индикации бактерий рода Salmonella в различных видах продовольственного сырья и кормов;

- определить культурально-морфологические особенности популяции бактерий рода Salmonella при воздействии магнитного ноля в процессе иммуномагнитной сепарации;

- провести анализ чувствительности и специфичности тест-систем для индикации бакгерий рода Salmonella методами иммунохроматографического и иммуноферментного анализов;

- изучить влияние компонентов питательных сред, продовольственного сырья и кормов на достоверность результатов иммунохроматографического анализа;

- разработать метод индикации бактерий рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах, основанный на иммуно-магнитосорбции, иммунохроматографическом и иммуноферментном анализах;

- провести испытание разработанного метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах.

Научная новизна. Разработан метод для ускоренной индикации бактерий рода Salmonella с последовательным использованием иммуно-магнитосорбции, иммунохроматографического или иммуноферментного анализов, позволяющий в течение 2 суток (с учетом обогащения материала) обнаружить сальмонеллы в исследуемом образце при их первоначальном содержании не менее 102 микробных клеток.

С помощью световой и сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) изучена пространственная конфигурация парамагнитных частиц, их форма и размеры. Впервые при помощи СЭМ изучены биологические особенности популяции сальмонелл, адсорбированных на иммуномагнитном носителе.

Изучено влияние состава продовольственного сырья животного происхождения и кормов, селективных питательных сред на ход иммунохроматографического анализа и предложены методические приемы, повышающие специфичность метода.

Практическая ценность работы. Материалы диссертации использованы при разработке следующих документов:

- «Методические рекомендации по применению индикаторных имму-но-хроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора», п.1,2,3 (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.09.2009);

- «Методические рекомендации по применению метода иммуно-магнитосорбции при индикации сальмонелл и листерий в продовольственном сырье, продуктах питания и кормах», п.2,3 (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 08.10.2010);

- «Методические рекомендации по ускоренному определению микробиологических показателей безопасности животноводческого сырья, про-

дуктов питания и кормов на основе иммунологических и генно-инженерных методов», п.3,4,6 (утв. Отделением ветеринарной медицины PACXII 08.10.2010).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ (2008,2009,2010 гг.);

- Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (Москва, 2008 г);

- Международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии (Самара, 2009 г.).

Публикации. Материалы диссертации отражены в четырех научных статьях, две из которых опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений, приложений и списка литературы, включающего 232 источника. Работа содержит 16 таблиц, 11 фотографий и рисунков.

Основные положения, выносимые на защиту. Метод ускоренной индикации сальмонелл на основе последовательного использования им-муномагнитосорбции, иммунохроматографического или иммуно-ферментного анализов. Влияние компонентов питательных сред, сырья животного происхождения и кормов на специфичность иммунохроматографического анализа. Изучение пространственной конфигурации парамагнитных частиц и особенности процесса адсорбции на них бактериальных клеток. Культурально-морфологические особенности популяции

бактерий рода Salmonella, подвергшихся влиянию постоянного магнитного поля в процессе иммуно-магнитной сепарации.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Работа проводилась в течение 2007-2010 гг. в лаборатории санитарной микробиологии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии РАСХН.

В работе использовались следующие культуры микроорганизмов из коллекции лаборатории санитарной микробиологии ГНУ ВПИИВСГЭ: Salmonella typhimurium № 371, Salmonella typhimurium №47/26, Salmonella enteritidis № 7, Salmonella gallinarum-pullorum St 353, Salmonella enteritidis №893, Salmonella london 7(2), Salmonella anatum № 33/36, Salmonella anatum 295, Salmonella virhov, Salmonella infantis 517, Yersinia enterocolitica, Y.pseudotuberculosis, Escherichia coli, Escherichia coli 0157, Proteus vulgaris, P.mirabilis, Morganella morganii, Citrobacter freundi, Enterobacter, Listeria monocytogenes 9-72, Listeria innocua 6-06, Staphylococcus aureus P 209.

В экспериментах использовали тест-систему для иммуномагнитной сепарации (ИМС) «Salmonella А-Beads» (производство «Aureon Biosystems», Австрия, предоставленную ООО «Стайлаб»), индикаторные иммунохроматографические элементы для выявления сальмонелл серо-группы В (производство ФГУП «ГосНИИ биологического приборостроения»), LOCATE® Salmonella для ИФА (производство R-Biopharm Rone Ltd, Германия, предоставленную ООО «Стайлаб»).

В качестве питательных сред для индикации бактерий рода Salmonella были использованы хлористо-магниевая среда, мясо-пептонный агар (МПА), висмут-сульфит агар (ВСА).

Чувствительность тест-систем на основе иммуномагнитосорбции (ИМС), иммуноферментного (ИФА) и иммунохроматографического (ИХА) анализов определяли в опытах с суспензиями суточных культур

сальмонелл с концентрацией от 10 до 1х108 м.к./мл. Контролем служил посев микробной взвеси на висмут-сульфит агар с последующим учетом характерного роста колоний бактерий рода Salmonella.

Для оценки специфичности тест-систем использовали гетерологичные культуры микроорганизмов различных родов и видов. При этом концентрация бактериальных клеток в суспензиях составляла 1ХЮ8 м.к./мл.

Принцип иммуномагнитной сепарации основан на физическом выделении бактерий рода Salmonella из матрицы образца. На первой стадии выделения аликвоту образца инкубировали с суспензией Salmonella А-Beads. В процессе инкубации образуется иммунохимический комплекс «бактерия <-» магнитная частичка», который выделяли из исследуемой пробы под действием магнитного поля, используя специальный магнитный штатив.

Иммунохроматографический анализ (ИХА) осуществлялся с использованием иммуно-индикаторных элементов в виде тест-полосок. Аликвоту суспензии исследуемого образца наносили на тест-полоску. Жидкая исследуемая проба перемещалась вдоль сборки мембран, реагируя с антителами, конъюгированными с коллоидным золотом. В результате образовывался окрашенный комплекс. Полученный иммунный комплекс под действием капиллярных сил перемещался по нитроцеллюлозной мембране и достигал аналитической зоны, где происходила его иммобилизация за счет связывания с антителами аналитической зоны. В этой зоне образовывался ярко окрашенный «сэндвич» коньюгата коллоидного золота, связанного с антигеном микробных клеток, и антител, иммобилизованных на мембране. Часть жидкой пробы продолжала перемещение по нитроцеллюлозной мембране, связываясь с антивидовыми антителами контрольной зоны. Образование на иммуноиндикаторном элементе двух окрашенных полос говорило о наличии в пробе искомого антигена, присутствие окраски лишь в

контрольной зоне - о его отсутствии. Окраска в контрольной зоне служила контролем пригодности тест-полоски для использования.

Процедура иммуноферментного анализа с помощью тест-системы LOCATE® Salmonella включала обогащение исследуемых проб в соответствующих жидких селективных средах, последующую термическую дезактивацию смешанных культур и постановку ИФА в планшетах. Визуальную регистрацию результатов проводили по окраске содержимого лунок. При этом ставились положительный и отрицательный контроли.

Оценку эффективности ускоренного метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах проводили в опытах с искусственно контаминированными объектами. Для этого в образцы мяса, рыбы, мидий, молока, комбикормов (масса 25 и 50 г) вносили по 1 мл суточной культуры сальмонелл с концентрацией бактерий от 10 до 107м.к./мл. Дальнейшее исследование образцов проводили разработанным методом в сравнении с классическим бактериологическим анализом.

Биохимические свойства сальмонелл определяли с использованием микротест-системы МТС-М-12Е (производство ФГУП НПО «Микроген», Россия). Система позволяет определить следующие биохимические свойства: утилизацию цитрата натрия, малоната натрия, глюкозы, лактозы, маннита, мальтозы, образование индола, сероводорода, наличие уреазы, р-галактозидазы, декарбоксилазы лизина, дезаминазы фенилаланина.

Для изучения морфологических свойств мазки культур микроорганизмов окрашивали по Граму и исследовали с помощью морфомстриче-ского анализатора «NOTIK» (производство Франции) методом световой микроскопии при увеличении ><400 (работа осуществлялась в ГНУ ВНИМП им. В.МГорбатова при содействии доктора биологических наук Кузнецовой Т.Г).

При исследовании иммуномагнитных частиц, а также морфологических особенностей популяции бактерий в результате воздействия магнит-

ного поля использовали метод сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). Работа проводилась при содействии и по методике профессора Павловой И.Б. (лаборатория санитарной микробиологии ГНУ ВНИИВС-ГЭ). Взвесь изучаемой культуры с первоначальной концентрацией 1 х 102 и 1х103 м.к./мл после проведения иммуномагнитной сепарации наносили на мембранные фильтры с размером пор 0,45 мкм, расположенные на поверхности висмут-сульфит агара в чашках Петри, и на предметные стекла. Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 ч. Колонии, выросшие на фильтрах, и объекты, находящиеся на стекле, фиксировали парами 25%-ного глутарового альдегида и 2% раствором осмиевой кислоты, обезвоживали парами пропиленоксида. Полученные таким способом препараты помещали на медные подложки и напыляли ионами золота на установке «Hitachi Е-102», затем исследовали на электронном микроскопе «Hitachi-800» со сканирующей приставкой «Hitachi-8010» при ускоряющем напряжении 75 кВ и инструментальном увеличении 1-10000. Исследования сопровождались фотосъемкой объектов. В качестве контроля использовали культуру того же штамма сальмонелл, но без каких-либо предварительных воздействий на нее.

Одновременно изучали культуральные, морфологические и биохимические свойства опытных и контрольных культур сальмонелл.

При анализе и обобщении результатов исследований были использованы методы, описанные в руководстве И.П.Ашмарина, А.А.Воробьева (1962).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Оценка эффективности иммуно-магнитосорбции при индикации бактерий рода Salmonella в различных видах сырья животного происхождения и кормах

На первом этапе исследований проведено изучение иммобилизованных магнитоуправляемых частиц, составляющих тест-систему «Salmonella А-Beads». Они представляют собой ферромагнитные частицы с иммобилизованными на поверхности специфичными антителами к О- и Н- антигену бактерий рода Salmonella.

Для изучения способности магнитных частиц адсорбировать на своей поверхности бактериальные клетки или их части нами были проведены опыты с суспензиями суточных культур S.enteritidis №893, S.infantis 517, S.typhimurium №47/26. Концентрацию бактериальных клеток в суспензиях устанавливали по стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича в размере 1х109 м.к./мл, а затем делали десятикратные разведения от 1*105 до 10 м.к./мл. С разведениями культур сальмонелл осуществляли процедуру им-муномагнитной сепарации. После проведения всех этапов, предусмотренных методикой, осадок и супернатант высевали на висмут-сульфит агар в количестве 0,1 мл. Посевы инкубировали 24 ч при температуре 37 °С. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Адсорбционная способность иммуно-магнитных частиц

Концентрация, М.К./МЛ Количество колоний на висмут-сульфит агаре, КОЕ

Осадок Супернатант

S.enteritidis №893 S.infantis 517 S.typhimurium №47/26 S.enteritidis №893 S.infantis 517 S.typhimurium №47/26

1 2 3 4 5 6 7

1х105 Сплошной рост Сплошной рост Сплошной рост 12±1 14±2 12±1

lxlO4 Сплошной рост Сплошной рост Сплошной рост 0 0 0

1 2 3 4 5 6 7

1х103 232±6 456±1 312±8 0 0 0

IxlO2 25±3 38±3 28±4 0 0 0

lxlO1 6±1 4±1 3±2 0 0 0

Примечание: результат учитывали визуально путем подсчета количества колоний.

Из данных, представленных в таблице, видно, что суспензия клеток сальмонелл с концентрацией до 1x105 м.к./мл практически полностью сорбировалась на магнитных частицах. При этом в супернатанте оставались лишь единичные клетки.

На ВСА сальмонеллы образовывали типичные черные колонии с характерным металлическим блеском и пигментированием среды под колониями. При микроскопии окрашенных по Граму мазков были выявлены типичные для сальмонелл клетки, имеющие форму палочек с закругленными концами. Таким образом, сальмонеллы, адсорбированные на имму-номагнитных частицах, сохраняли характерные для данного возбудителя культурально-морфологические свойства.

Изучение биохимических свойств культур с ВСА проводили с использованием микротест-системы МТС-М-12Е. Определение биохимических свойств популяции сальмонелл после иммуномагнитосорбции позволило установить отклонение в способностях утилизировать манит и ферментировать уреазу, что может приводить к нарушению синтеза клеточной стенки. Такие изменения в биохимической активности сальмонелл, приводящие к гетероморфизму с различными проявлениями L-трансформации, отмечаются при воздействии и ряда других абиотических и биотических факторов [Павлова И.Б, Зуев B.C. 2004, Булатов А.С., 1999].

Определение специфичности иммуномагнитных частиц проводили на гетерологичных культурах, представленных различными родами и видами. Для этого после процесса иммуномагнитной сепарации производили высев осадка и супернатанта на мясо-пептонный агар. Посевы инкубировали при 37е С в течение 24 часов и учитывали рост.

Результаты опытов показали строгую специфичность тест-системы «Salmonella А-Beads». В посевах из осадков гетерологичных культур рост отсутствовал, в то время как посев супернатантов давал на МПА практически сплошной рост бактериальных культур.

Тест-система для иммуномагнитосорбции продемонстрировала способность в течение 10 минут в условиях магнитного поля выделить, адсорбируя на своей поверхности строго специфично до 105 бактериальных клеток. Высокая адсорбционная способность иммуномагнитных частиц делает перспективным их использование в целях концентрации и выделения бактериальных клеток из смешанных жидких культур микроорганизмов.

Определение культурально-морфологических особенностей популяции бактерий рода Salmonella при воздействии магнитного поля в процессе иммуномагнитной сепарации Для определения особенностей морфологии популяций сальмонелл после воздействия на них магнитного поля были использованы методы световой и сканирующей электронной микроскопии. Световая микроскопия проводилась на морфометрическом анализаторе «NOTIK» производства Франции. В качестве тест-культуры использовали культуру S.infantis.

Первым этапом исследований явилось изучение непосредственно ферромагнитных частиц с помощью световой микроскопии (рис. 1). На рисунке видно, что частицы представляют собой образования различной пространственной конфигурации и размера.

С*

Jf -

*" %

6» ЛА *

Л "

Рис. 1. Ферромагнитные частицы. Световая микроскопиях400.

При изучении в световом микроскопе осадка, полученного после проведения иммуномагнитосорбции с культурой сальмонелл, видно, что вокруг парамагнитных частиц происходит концентрирование бактериальных клеток вследствие взаимодействия структур, обеспечивающих антигенную связь сальмонелл с иммобилизованными на магнитных частичках антителами (рис. 2).

Рис. 2. Парамагнитные частицы с осажденными на них S.infantis. Световая микроскопия х400.

Определенный интерес представляло изучение в сканирующем электронном микроскопе магнитных частиц, на которых происходит адсорбирование бактериальных клеток. Проведенные исследования структуры парамагнитных частиц тест-системы Salmonella A-Beads показали, что микроструктура магнитных частиц имеет однородную сплошную гладкую поверхность с небольшими по размерам выступами неправильной формы (рис. 3).

Рис. 3. Электронная микроскопия парамагнитных частиц. СЭМ.

На сканограммах, где показаны парамагнитные частицы после адсорбирования сальмонелл, видно, что на поверхности частиц располагаются прикрепленные бактериальные клетки. При этом почти вся поверхность частицы покрыта адсорбированными клетками (рис. 4).

Рис. 4. Электронная микроскопия парамагнитных частиц с адсорбированными клетками S.infantis. СЭМ.

Производители тест-системы для иммуномагнитной сепарации рекомендуют дальнейшую индикацию сальмонелл проводить путем высева на селективные питательные среды, поэтому интерес представляло изучение состояния популяции сальмонелл после воздействия магнитного поля в процессе иммуномагнитосорбции. Следующим этапом исследований явилось изучение при помощи СЭМ популяции сальмонелл после проведения с ними иммуномагнитного осаждения и без него.

На сканограмме, где представлена культура сальмонелл без каких-либо предварительных влияний на неё (контроль), видно, что популяция представлена однородными клетками, находящимися в S-форме. Клетки имели типичную для сальмонелл морфологию - удлиненную форму и закругленные концы, объединены межклеточным матриксом и частично закрыты наружным покровом (рис. 5, 6). После проведения всех этапов, предусмотренных методикой ИМС, осадок, состоящий из магнитных частиц с адсорбированными бактериальными клетками, был высеян на мембранные фильтры в количестве 50 мкл, которые затем были помещены на

поверхность висмут-сульфит агара в чашки Петри. Посевы инкубировали 48 ч при температуре 37°С. Колонии, выросшие на фильтрах, фиксировали согласно методике подготовки препаратов для электронной микроскопии, описанной выше.

Рис. 5, 6. Фрагменты популяции S.infantis. СЭМ.

На сканограммах видно, что популяция была представлена гетеро-морфными клетками, находящимися на разных стадиях L-трансформации. Основную часть популяции составляли шаровидные клетки различного размера, нередко объединенные в тяжи, представляющие собой скопления сферопластов (рис.7). В отдельных участках можно было наблюдать развитие очень мелких извитых форм - клеток-ревертантов, что свидетельствовало о происходящих в популяции процессах реверсии гетероморфных форм в бактериальные клетки. Кроме того, заметны отдельные достаточно обширные фрагменты популяции, где клетки привычной бактериальной морфологии закрыты наружным покровом, продуцируемым полноценными клеточными стенками.

Рис. 7. Фрагменты популяции сальмонелл после проведения иммуно-магнптной сепарации (СЭМ) (гетероморфизм сальмонелл: А-реверсирующие клетки, Б-сферопласты)

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что воздействие магнитного поля на популяцию сальмонелл приводит к частичному гетероморфизму с образованием клеток с измененной морфологии - сферопластов, и мелких форм на различных стадиях L-трансформации. Процессы гетероморфного роста в данном случае являются обратимыми, что подтверждается присутствием в популяции клеток-ревертантов и палочковидных клеток под покровами. Полученные результаты помогают объяснить в ряде случаев отрицательный результат бактериологического исследования после воздействия на культуру клеток различных абиотических факторов, в частности постоянного магнитного поля.

Оценка чувствительности и специфичности тест-системы для индикации бактерий рода Salmonella методом иммунохроматографии

В качестве индикаторных тест-систем использовали опытные образцы индикаторных иммунохроматографических элементов (ИИХЭ) производства ГНЦ ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения».

Испытания ИИХЭ для выявления сальмонелл включали определение их чувствительности, специфичности и эффективности при индикации патогена в продовольственном сырье животного происхождения и кормах. В опытах использовали культуры сальмонелл группы В, в частности S.heidelberg, S.paratyphi В, S.typhimurium, с заранее известными концентрациями клеток (от 103 до 107 м.к./мл). В контроле производили высев культур на ВСА, инкубировали в течение 24 ч при 37°С и учитывали рост характерных колоний.

Результаты опытов показали, что чувствительность ИИХЭ составила 1х106 м.к./мл. При этом ИИХЭ были строго специфичны, выявляя сальмонеллы, принадлежащие к группе В и не реагируя с гетерологичными куль-

турами микроорганизмов различных родов, а также сальмонеллами, принадлежащими к серогруппам С, Д, Е.

Так как предполагалось проводить иммупохроматографический анализ со смешанными культурами, полученными в средах обогащения, то было изучено влияние компонентов питательных сред и продовольственного сырья и кормов на результат анализа. Результаты опытов по определению влияния компонентов питательных сред на ход иммунохромато-графического анализа показали, что компоненты хлористо-мапшевой среды вызывают проявление «тестовой» полосы, что даст ложноположитель-ный результат.

При разведении хлористо-мапшевой среды до 1:10 «тестовая» полоса не проявлялась. Но данный методический прием нежелателен, т.к. при этом снижается концентрация искомых бактерий. Последующие испытания показали, что центрифугирование позволяет избавиться от влияния компонентов среды обогащения и повысить объективность иммуно-хроматографического анализа.

Компоненты сырья животного происхождения (мясо, молоко, рыба, морепродукты) и комбикормов не оказывали влияния на достоверность результатов иммунохроматографического анализа.

Разработка метода индикации бактерий рода Salmonella с помощью иммуномагнитной сепарации, иммунохроматографического и цммуноферментного анализов

Ускорить и упростить индикацию и идентификацию микроорганизмов позволяют иммунологические методы.

На первом этапе с суточными бактериальными суспензиями сальмонелл с заранее известными концентрациями клеток (от 103 до 107 м.к./мл) осуществлялась процедура иммуномагнитной сепарации. Полученный в магнитном поле осадок, состоящий из иммуномагнитных частиц с осажденными на них бактериальными клетками, наносили на иммунохромато-

графические полоски. Результаты исследований показали, что чувствительность метода составила 1 х 104 м.к./мл, что в 100 раз повышает чувствительность ИИХЭ при индикации сальмонелл. В качестве отрицательного контроля использовали суспензию чистых магнитных частиц. Отсутствие тестовой полосы на иммунохроматографической полоске показывает, что магнитные частицы не оказывают влияния на ход анализа и достоверность его результатов.

В лабораторной практике широкое применение нашел метод иммму-ноферментного анализа, предлагается целый арсенал соответствующих тест-систем. В связи с этим нами была изучена возможность использования ИФА для конечной индикации сальмонелл после процедуры иммуно-магнитосорбции с помощью LOCATE® Salmonella. Изучение включало определение ее чувствительности, специфичности и эффективности использования для индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах.

Результаты, полученные на примере культуры S. typhimurium, показали, что чувствительность тест-системы LOCATE® Salmonella составляет 106 м.к./мл. Специфичность тест-системы LOCATE® Salmonella была подтверждена в опытах с широким спектром культур микроорганизмов: Salmonella typhimurium № 371, S.typhimurium №47/26, S.enteritidis № 7, S. gallinarum-pullorum St 353, S.enteritidis №893, S.london 7(2), S.anatum № 33/36, S.anatum 295, S.virhov, S.infantis 517, Yersinia enterocolitica, Y.pseudotuberculosis, Escherichia coli, E. coli 0157, Proteus vulgaris, P.mirabilis, Morganella morganii, Citrobacter freundi, Enterobacter, L. monocytogenes 9-72, L.innocua 6-06, Staphylococcus aureus P 209. Положительный результат ИФА отмечен со всеми исследованными культурами сальмонелл, при этом с культурами других родов результат анализа был отрицательный. Последовательное проведение иммуномагнитной сепарации и иммуноферментного анализа показало, что чувствительность такого мето-

да индикации сальмонелл составила 1><105 м.к./мл, что в 10 раз повышает чувствительность тест-системы.

На следующем этапе была проведена сравнительная оценка чувствительности обоих вариантов разработанного метода на примере искусственно контаминированных различными дозами сальмонелл образцов продовольственного сырья. Результаты опытов представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Чувствительность разработанного метода индикации сальмонелл

Количество сальмонелл в одной дозе Мясной фарш Молоко Рыбный фарш

ИМС+ ИФА ИМС+ ИХА Бак. анализ 1 ИМС+ ИФА ИМС+ ИХА Бак. анализ §1 3 s ИМС+ ИХА Бак. анализ

10 - - - - - - - - -

1С + + + + + + + + +

10* + + + + + + + + +

ю4 + + + + + + + + +

105 + + + + + + + + +

10" + + + + + + + 4- +

10' + + + + + + + + +

10" + + + + + + + + +

В модельных опытах на искусственно контаминированных образцах продовольственного сырья методом последовательной постановки имму-номагнитной сепарации, иммунохроматографического или иммунофер-ментного анализов сальмонеллы были выявлены при первоначальном содержании их не менее 102 клеток в пробе массой 25 г.

Процедура иммуномагнитной сепарации позволяет сконцентрировать микробные клетки, чем достигается повышение их количества в исследуемой пробе. При этом удаляется посторонняя микрофлора, что важно при постановке иммунологических тестов, учитывая общность антигенов различных микроорганизмов и в соответствии с этим перекрестные реакции. Метод иммуномапштосорбции позволяет на конечном этапе индикации

использовать как классический бактериологический анализ, так и иммунологические методы.

Схема исследования материала на наличие сальмонелл с помощью разработанного метода включает предварительное обогащение в жидких средах, процедуру иммуномагнитосорбции и индикацию бактерий методами иммуноферментного или иммунохроматографического анализов. При этом сокращается время исследования и затраты на его осуществление по сравнению с бактериологическим анализом (рис.8)

Рис. 8 Схема ускоренного иммунологического метода индикации бактерий рода Salmonella

В целях апробации разработанного метода нами было исследовано 170 образцов мяса, рыбы, молока и комбикормов для различных видов животных (таблица 3).

Таблица 3.

Результаты исследований продовольственного сырья и комбикормов на наличие бактерий рода Salmonella

Наименование Количество исследованных образцов Количество образцов, в которых обнаружены сальмонеллы

образца Предлагаемый Бактериологиче-

метод ский анализ

Мясо 60 5 5

Рыба 40 0 0

Морепродукты 2.5 0 0

Молоко-сырье 30 0 0

Комбикорма 15 1 1

Таким образом, при проведении исследований нами было установлено наличие сальмонелл в пробах мяса птицы, свинины и комбикорма для свиней, что было подтверждено результатами бактериологического анализа согласно ГОСТ Р 52814-2007 и «Правилами бактериологического исследования кормов»( 1975).

ВЫВОДЫ

1. Метод иммуномагнитосорбции позволяет строго специфично выделить бактерии рода Salmonella из смешанных культур при исследовании образцов продовольственного сырья и кормов.

2. Методами световой и сканирующей электронной микроскопии показано, что парамагнитные частицы тест-системы для иммуномагнитосорбции имеют однородную гладкую поверхность (с небольшими выступами неправильной формы) и способны в течение 10 минут в условиях магнитного поля адсорбировать не менее 105 бактериальных клеток.

3. Установлено, что воздействие постоянного магнитного поля влияет на культуралыше и биохимические свойства сальмонелл, в

частности на способность популяции утилизировать манит и ферментировать уреазу, что приводит к дефектности клеточной стенки.

4. Методом сканирующей электронной микроскопии доказательно выявлено, что воздействие постоянного магнитного поля влияет на морфологию сальмонелл, в результате чего образуются гетероморфные клетки, способные к реверсии.

5. Разработанный метод ускоренной индикации сальмонелл с последовательным использованием иммуномагнитосорбции и иммуно-хроматографии или иммуно-ферментного анализа позволяет в течение 2 суток выявить наличие бактерий рода Salmonella в количестве 102 м.к. в 25 г образца продовольственного сырья животного происхождения или в 50 г кормов.

6. При проведении исследований продовольственного сырья и кормов с использованием разработанного ускоренного метода индикации бактерий рода Salmonella установлена возможность его практического применения и показана корреляция с классическим бактериологическим анализом.

Практические предложения

Материалы диссертации вошли в следующие документы, применимые в научно-исследоватсльских учреждениях и лабораториях, занимающихся вопросами безопасности сырья животного происхождения и кормов: «Методические рекомендации по применению индикаторных иммуно-хроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора», п. 1,2,3 (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.09.2009); «Методические рекомендации по применению метода иммуномагнитосорбции при индикации сальмонелл и листерий в продовольственном сырье, продуктах питания и кормах», п.2,3 (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 08.10.2010);

«Методические рекомендации по ускоренному определению микробиологических показателей безопасности животноводческого сырья, продуктов питания и кормов на основе иммунологических и генно-инженерных методов», п.3,4,6 (утверждены Отделением ветеринарной медицины РЛСХН 08.10.2010).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Стрелков А.А. Применение метода иммуно-хроматографического анализа для выявления сальмонелл // Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания: материалы Международной конференции студентов и молодых ученых. — М., 2009. — С. 270-271.

2. Стрелков А.А. Усовершенствование пробонодготовки образцов различной продукции при индикации микробиологических контаминантов (сальмонелл, листерий и др.) / А.Б.Кононенко, С.В.Бритова, А.А.Стрелков, О.В.Светличкин, А.В.Галкин // Материалы Международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии, - Самара, 2009.-С. 212-213.

3. Стрелков А.А. Тест-системы и технические средства ускоренного контроля безопасности и качества объектов ветеринарного надзора / А.Б.Кононенко, В.В.Светличкин, А.А.Стрелков [и др.] // Проблемы ветеринарной санитарии. - М. - 2010. - №1. - С. 26-33.

4. Стрелков А.А. Влияние иммуно-магнитосорбции на морфологию популяции сальмонелл // Ветеринария. - 2010. -№9. - С. 40-42.

ВНИИВСГЭ, 2011 г., г. Москва, Звенигородское шоссе, д.5 Заказ 380/3, тираж 80 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Стрелков, Алексей Александрович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Экология и эпизоотология сальмонелл.

1.2. Биологическая характеристика микроорганизмов рода Salmonella.

1.3. Бактерии рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах.

1.4. Методы индикации бактерий рода Salmonella.

1.4.1. Бактериологический анализ.

1.4.2. Иммунологические методы.

1.4.3. Молекулярно-генетические методы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы.

2.2. Результаты собственных исследований.

2.2.1. Оценка эффективности иммуномагнитосорбции при индикации бактерий рода Salmonella в различных видах сырья животного происхождения и кормах.

2.2.2. Определение культурально-морфологических особенностей популяции бактерий рода Salmonella при воздействии магнитного поля в процессе иммуномагнитной сепарации.

2.2.3. Оценка чувствительности и специфичности тест-системы для индикации бактерий рода Salmonella методом иммунохроматографии.

2.2.4. Разработка метода индикации бактерий рода Salmonella с помощью иммуномагнитной сепарации, иммунохроматографического и иммуноферментного анализов.

2.2.5. Проведение мониторинговых исследований при обнаружении бактерий рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах.

2.2.6. Обсуждение результатов исследования.

3. ВЫВОДЫ.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка ускоренного иммунологического метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах"

Актуальность работы. Проблема качества и безопасности продовольственного сырья и кормов в последние годы приобрела острый и весьма актуальный характер. В большинстве стран мира продовольственный аспект национальной безопасности признается

I I одним из наиболее приоритетных направлений государственной политики и законотворческой деятельности.

В большинстве стран мира на протяжении истекших десятилетий зарегистрировано значительное увеличение распространенности заболеваний, вызываемых микроорганизмами, контаминирующими продукты питания, сырье животного происхождения и корма. К числу таких микроорганизмов относят Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Escherichia coli и др. Ежегодно в среднем у 30% населения промышленно развитых стран регистрируют токсико-пищевые инфекции. В силу этого обеспечение безопасности пищевых продуктов и продовольственного сырья является приоритетной задачей современной науки и практики [126].

Несомненное «лидерство» в списке пищевых зоонозов занимают сальмонеллезы. Так, в США ежегодно официально регистрируется около 40000 случаев сальмонеллеза человека. Полагают, что данная инфекция в США вызывает госпитализацию более чем 18000 человек при смертности около 500 человек ежегодно. Годовой ущерб, наносимый сальмонеллезной инфекцией в США, оценивается в 1,2 млрд. долларов.

Значительному распространению токсико-пищевых инфекций способствует широко развитая международная торговля кормами животного происхождения (мясная, рыбная, костная, мясокостная мука), нередко инфицированными разнообразными серотипами бактерий рода Salmonella, что определяет основную эпидемиологическую цепь — «животные корма — животные — животные пищевые продукты - человек» [94,156,157].

В 2008 г. в результате проверок не было допущено в реализацию около 10% осмотренной продукции на основании оценки ее безопасности [69,70].

I I

Современный уровень требований к качеству и безопасности продуктов пищевой, кормовой промышленности, экологическому состоянию окружающей среды выдвигает необходимость создания быстрых и надежных методов обнаружения в них условно-патогенных и патогенных бактерий, в частности бактерий рода Salmonella.

Классические бактериологические методы, используемые в ветеринарно-санитарном контроле в отношении сальмонелл, длительны, трудоемки и не всегда адекватны из-за высокой фенотипической изменчивости бактерий.

Все более широкое применение в практике лабораторий находит использование современных иммунологических, молекулярно-генетичёских и других методов. Но, несмотря на достигнутые успехи, не все лаборатории, занятые в сфере анализа продовольственного сырья и кормов, а также пищевой продукции, имеют возможность использовать в своей практике дорогостоящие методы анализа (ПЦР, радиоиммунный анализ, масс-спектрометрия и др.). Поэтому перед современной наукой стоит задача оснастить специалистов, занятых в области обеспечения безопасности сырья животного происхождения и кормов, более доступными, но не менее точными методами.

I I

Целью настоящей работы явилась разработка метода ускоренной индикации бактерий рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах, основанного на сочетании иммуномагнитной сепарации, иммунохроматографического или иммуноферментного анализов.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- определить культурально-морфологические особенности популяции бактерий рода Salmonella при воздействии магнитного поля в процессе иммуномагнитной сепарации;

- провести анализ чувствительности и специфичности тест-систем для индикации бактерий рода Salmonella методами иммунохроматографического и иммуноферментного анализов;

- разработать метод индикации бактерий рода Salmonella в продовольственном сырье и кормах, основанный на иммуномагнитосорбции, иммунохроматографическом и иммуноферментном анализах;

- провести испытание разработанного метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах.

Научная новизна. Разработан метод для ускоренной индикации i i бактерий рода Salmonella с последовательным использованием иммуномагнитосорбции, иммунохроматографического или иммуноферментного анализов, позволяющий в течение 2 суток (с учетом обогащения материала) обнаружить сальмонеллы в исследуемом образце при их первоначальном содержании не менее 10 микробных клеток.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ (2008, 2009, 2010 гг.);

Международной конференции, посвященной 80-летию Самарской НИВС Россельхозакадемии (Самара, 2009 г.).

Практические предложения. Материалы диссертации использованы при разработке следующих документов:

I I

- «Методические рекомендации по применению индикаторных иммунохроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора», п.1,2,3 (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.09.2009);

- «Методические рекомендации по ускоренному определению микробиологических показателей безопасности животноводческого сырья, продуктов питания и кормов на основе иммунологических и генно-инженерных методов», п.3,4,6 (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 08.10.2010).

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Стрелков, Алексей Александрович

ВЫВОДЫ

I I

3. Установлено, что воздействие постоянного магнитного поля влияет на культуральные и биохимические свойства сальмонелл, в частности на способность популяции утилизировать маннит и ферментировать уреазу, что приводит к дефектности клеточной стенки.

5. Разработанный метод ускоренной индикации сальмонелл с последовательным использованием иммуномагнитосорбции и иммунохроматографии или иммуноферментного анализа позволяет в течение 2 суток выявить наличие бактерий рода Salmonella в количестве 102 м.к. в 25 г образца продовольственного сырья животного происхождения или в 50 г кормов.

Практические предложения

Материалы диссертации учтены при разработке следующих

I I документов, которые применимы для проведения скрининговых исследований: «Методические рекомендации по применению индикаторных иммуно-хроматографических элементов для выявления возбудителей инфекционных заболеваний в объектах ветеринарного надзора» (утверждено Отделением ветеринарной медицины РАСХН

30.09.2009) п. 1,2,3; «Методические рекомендации по применению метода иммуно-магнитосорбции при индикации сальмонелл и листерий в продовольственном сырье, продуктах питания и кормах» п.2,3 (утверждено Отделением ветеринарной медицины РАСХН

08.10.2010), «Методические рекомендации по ускоренному определению микробиологических показателей безопасности животноводческого сырья, продуктов питания и кормов на основе иммунологических и генно-инженерных методов» п.3,4,6 (утверждено Отделением ветеринарной медицины РАСХН 08.10.2010) .

2.Материалы, изложенные в методических рекомендациях, могут быть использованы в производственных условиях при лабораторном анализе мясного сырья и кормов на наличие бактерий рода Salmonella.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Стрелков, Алексей Александрович, Москва

1. Авцын А.И., Пархоменко Ю.И., Емельяненко И.И. Энтеротоксины сальмонелл и молекулярные механизмы их действия // Успехи совр. биологии. -1987. Вып.1. Т.1-3. С.18-30.1.I

2. Авылов Ч.К., Алтухов Н.М., Бойко В.Д., Кунаков A.A. Справочник ветеринарного врача//.- М.: Колосс. 2006. 736с.

3. Акимкин В.Г. Сальмонеллез как самостоятельная нозологическая форма инфекционной патологии человека. // ЖМЭИ. 1998. N4. С. 104-110.

4. Актуальные проблемы сальмонеллезов: научн.обзор. // М.: 1989. С.137.

5. Андреева З.М., Щобухова Т.С., Янкина Н.Ф. Иммуноферментный анализ для определения антител к сальмонеллам // Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине, М.: 1983. С.62-64

6. Архангельский И.И., Караваев Ю.Д., Сидорчук A.A. Экспресс-метод диагностики сальмонеллезов овец// Ветеринария. 1976. №4. С.108-109.

7. Ахмедов A.M. Сальмонеллезы (паратифы) молодняка // М.: Колос. 1971. С. 9-18.

8. Ахмедов A.M. Сальмонеллезы молодняка // М.: Колос. 1983. 238 с.

9. Белая М.Ф. Данилкин В.К. Реакция коагглютинацин в диагностике пищевых токсикоинфекций // Сов. медицина. 1984. №10. С.91-93.

10. Белоусов В.И. Средства специфической профилактики и диагностики хдамидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных // Автореф. дисс. докт. вет. наук. -М.: 1997.41 с.

11. Болоцкий М.Н. Изучение воздействия на популяцию бактерий рода Listeria низких температур (сканирующая электронная микроскопия)// Актуальные проблемы современной науки, №.6. 2007г. С.42-47

12. Бондаренко В.М. "Острова" патогенности бактерий // Журн. микробиол. 2001. №4. С.67-69.

13. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса. Журн. микробиол. 1999, №5, С.34-39.

14. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях. Журн. микробиол., 1997. №4. С.20-26.

15. Борисенко Н.Е., Кроневальд О.В. К ветсанэкспертизе мяса больных животных// Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции. Тезисыдокладов научно-практической конференции 12-15 декабря 1995 г. М.: МГУГТБ. 1995. 120с.

16. Борьба с сальмонеллезом: роль ветеринарии и пищевой гигиены. // Докл. комитета экспертов ВОЗ N774 Женева, ВОЗ. 1995. 83 с.

17. Брайнина Х.З., Козицина А.Н., Глазырина Ю.А. Способы определения патогенных микроорганизмов // пат. 2397243 Россия, МПК C12N 1/02, В82В 1/00, УрГЭУ, ООО НПВП Ива, Опубл. 20.08.2010 с.1-5

18. Блюгер А.Ф., Новицкий И.Л., Теребкова З.Ф. Сальмонеллез // Рига, Знание, 1975. 330 с.

19. Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н.Практическая гепатология // Рига, 1984.406 с.

20. Булатов A.C. Биологические особенности сальмонелл, выделенных во внешней среде птицефабрик и пути снижения ее контаминации // Автореф. дисс. канд. вет. наук. -М., 1999. 23с.

21. Бутко М.П., Мазур Н.И. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса // Учебное пособие. Киев, ИПК Минпищепрома УССР. 1983.64 с.

22. Бутко М.П. Ветеринарно-санитарные мероприятия при сальмонеллезе животных// Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. Сборник научных трудов. Том 99 М: Всероссийский НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, 1995. С. 6784.

23. Бутко М.П., Лаврунова С.А. Ускоренная индикация сальмонелл в мясе методами диффузной преципитации в агаре и непрямой иммунофлюоресценции //Сб. научн. тр. ВНИИВСГЭ.-1979.-С.7-14.

24. Бутко М.П. Ветеринарно-санитарная экспертиза пищевых продуктов в связи с интенсификацией сельскохозяйственного производства и расширения международной торговли// Сб. научн. тр. ВНИИВСГЭ.-т.47- 1973.-С.119-128.

25. Буянов A.A., Лаковников Е.А., Парфенов А.Ф. Патологоанатомическая характеристика органов у поросят при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhimyrium //Актуальные проблемы ветеринарной медициньксб. науч. тр. №134. СПб ГАВМ. 2002. С. 33-35.

26. Бычкова И.Б., Ефимочкина Н.Р. Сравнение эффективности молекулярно-биологических и культуральных методов при контроле качества пищевых продуктов // Свиноферма. 2006. № 6. С. 45.

27. Ведерников В.А, Погталев П.С., Землянова В.И. Сальмонеллезы и листериоз сельскохозяйственных животных в РФ //Межд. симпоз. «Пищевые зоонозы», 1-3 марта 1995 г., М.: Россия. С.35.

28. Веселов А.Я., Плотникова Н.И. О чувствительности сальмонелл к антибиотикам. // Антибиотики. 1974.N2. С.137-138.

29. Верхивкер Я.Г. Экспресс-методы контроля качества готовых пищевых продуктов // Пиво и напитки. — 2005. № 2. — С. 102103.

30. Воробьев A.A., Бондаренко В.М., Лабанова H.A., Фиалкина C.B. ПЦР тест-системы для геноиндикации энтерогеморрагических эшерихий. //Журн. микробиол., 2000. №6. С.90-94.

31. Владимирский М.А., Шипина Л.К., Филипов В.И. Матрица иммуносорбента //Патент РФ. 1998. №2140084.

32. Владимцева И.В., Ефременко В.И. Пушкарь В.Г. Иммунофлуоресцентный метод обнаружения холерного энтеротоксина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986. № 12. С.62-65.

33. Владимцева И.В., Ефременко В.И., Климова И.М. Оценка иммунохимической активности лигандов, иммобилизованных на микрогранулированных сорбентах // Лабораторное дело. 1988. № 7. С.53-55.

34. Владимцева И.В., Плеханова Н.Г., Смирнова В.И., Закревский В.И. Конструирование диагностической тест-системы на основе магносорбентов и липосом // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1990. № 10. С. 103-106.

35. Владимцева И.В., Самыгин В.М., Стёпин A.A., Колотова О.В. Использование магнитоуправляемых иммобилизованных систем для глубинного культивирования. I. Влияние электромагнитного поля на бактериальные клетки // Биотехнология. 2001. № 4. С.74-78.

36. Воложанцев Н.Я., Светоч Э.А., Барзилов A.C. Получение вакцинных штаммов сальмонелл с помощью инсерционного мутагенеза // Ветеринария. -1997.-№ 9.-С. 20-24.

37. Гавриш В.Г., Сидоркин В.А. Современный справочник врача ветеринарной медицины // Изд-е 8-е, испр. и доп.- Ростов н/Д.: Феникс. 2007. 608с.

38. Галкин A.B., Комаров В.Н., Иванова Е.А. Иммуноферментный метод экспресс контроля продовольственного сырь'я и пищевых продуктов на содержание потенциально опасных химических соединений // Хранение и переработка сельхозсырья. 1998. № 5. С. 21-24.

39. Гаджиев К.Ш., Халилов А.Г. Сальмонеллез у цыплят// Ветеринария. М.: 1989. №4.С. 62-63.

40. Гинцбург A.JI. Генодиагностика инфекционных заболеваний. Журн. микробиол. 1998. С:86-95.

41. Государственный доклад "О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2001 году". М.: 2002. С. 1226

42. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов — Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. СанПиН 2.3.2.1078-01. М.: Минздрав России. 2002.

43. ГОСТ Р 51705.1-2001. Системы качества. Управление качеством пищевых продуктов на основе принципов ХАССП. М.: Издательство стандартов. 2001. С. 1 -15

44. ГОСТ 9958-81 Колбасные изделия и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа // М.: Издательство стандартов. 1981. С.1-14

45. ГОСТ 25311-82 Мука кормовая животного происхождения. Методы бактериологического анализа // М.: Издательство стандартов, 1982. С. 1-14

46. Дереза А.Ф. Сальмонеллез // В кн.: Профилактика инфекционных болезней животных. Минск: Ураджай, 1998. С.65-68.

47. Долгов В. А., Бойков Ю.И. Концепция ветеринарно-санитарного обеспечения продуктов животноводства высокого санитарного качества. //Сб. научн. тр. ВНИИВСГЭ. 1994. Т. 95. С. 96.

48. Долгов В.А., Лавина С.А. Методические аспекты оценки качества и безопасности пищевой продукции и продовольственного сырья // Здоровое питание населения России: материалы 7-го всероссийского конгресса. М.: 2003. С. 162.

49. Доля Е.А. Разработка тест-системы ускоренной индикации и идентификации сальмонелл в объектах ветеринарно-санитарного и экологического контроля на основе генных зондов// Автореф. на соиск. степ.канд. биол.наук., М.: 1997. С. 1-25

50. Дружинина Г.Ю. Попова JI.M. Вспышки сальмонеллезной инфекции за рубежом // Остр. киш. инфек. 1995. Вып.9. С.60-68.

51. Ефимочкина Н.Р. Эмерджентные бактериальные патогенны в пищевой микробиологии // М.:Издательство РАМН, 2008. 255 С.

52. Ефременко В.И., Львов Д.К., Дерябин П.Г. и др. Экспериментальные данные по выявлению вируса гриппа птиц с помощью магнитных иммуносорбентов //Вопросы вирусологии. 2008. С.43-45

53. Донченко Л.В., Надыкта В.Д. Безопасность пищевой продукции // М.: Пищепромиздат, 2001. С.525.

54. Житенко П.В., Боровков М.Ф. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животноводства: Справочник. М.: Колосс. 1998. 335с.

55. Захарова Н.Е., Суханова С.М., Голубенко И.А. Использование тест-системы "НоваСтрик" для ускоренного анализа загрязнения микроорганизмами пищевых продуктов // Вопр. питания. 2008. № 1. с. 48-51.

56. Зарицкий A.M. Сальмонеллезы. // Киев.- Здоровье. 1988. 160 с.

57. Загаевский И.С. Паратиф уток // М.: Сельхозгиз. 1951. 72 с.

58. Зуев B.C. Факторы выживания популяций сальмонелл в водной среде (электронно-микроскопическое исследование) // II

59. Международная научная конференция студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения»-М.: МГУПБ. 2003. С. 148-150.

60. Зуев B.C. Выживание сальмонелл в водной среде привзаимодействии с дафниями//Проблемы ветеринарной санитариии экологии. Сб. науч. трудов ВНИИВСГЭ. М.: 2003. Т.115.- С.79-85.

61. Иванкин А.Н., Кузнецова Т.Г. Современные методы оценки качества и безопасности мясного сырья и мясопродуктов // Все о мясе. 2005. - № 4. - С. 26-30.

62. Информационный бюллетень Всесоюзного центра по сальмонеллам. М., 1990. 67 с.

63. Информационный бюллетень Федерального центра по сальмонеллезам №20 // М.: Федеральный центр по сальмонеллезам ФГУН Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора. 2008. С. 1-56.

64. Информационный бюллетень референс-центра по мониторингу за сальмонеллезами №21 // М.- Референс центр по мониторингу за сальмонеллезами ФГУН Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора. 2009. С.1-58.

65. Капускина Ю.В. Разработка и применение непрямого варианта ИФА для выявления антител к бактериям рода Salmonella серогрупп В и D в сыворотках крови кур при тестировании сывороток в одном разведении // БИО. 2009. №4. С. 15-16.

66. Капускина Ю.В., Прунтов О.В., Ручнова О.И. Получение специфических компонентов бактерий Salmonella enteric subspecies enteric для иммуноферментного анализа // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. 2008. T.VI. С.258-266.

67. Каральник Б.В. Ли В.П., Денисов Г.И. Определение при помощи реакции пассивной гемагглютинации антигенов S.tuphimiirium в выделениях детей, больных сальмонеллезом //Микробиология. 1988. № 8. С.39-43.

68. Кац Л.Н. L-формы бактерий.//Успехи микробиологии. -1980. -Т. 15. С.180-196.

69. Кафтырева Л.А. Эпидемиологические и микробиологические особенности сальмонеллезов в России. // В кн. Актуальныепроблемы инфекционной патологии. 4.1 Кишечные и респираторные инфекции.- С-Петербург. 1993. С.30.

70. Кириллов А.К. Сальмонеллез кроликов/Кролиководство и звероводство №5 2004 сентябрь-октябрь Двухмесячный научно-прбизводственный журнал. М.: 32с. '

71. Козак С.С. Борьба с сальмонеллезом на перерабатывающих предприятиях // Птицеводство Научно-производственный журнал 2001. №6. С. 31-32.

72. Корнелаева Р.П., Степаненко П.П., Павлова Е.В. Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения // Учебник для вузов М.: МГУПБ. 2006. 407с.

73. Костенко Ю.Г. Ветеринарно-санитарный осмотр продуктов убоя животных. Ветеринарные методические указания (ВМУ). М.: «Издательство Гном и Д», 2000.112с.

74. Костенко Ю.Г. Ветеринарно-санитарный осмотр продуктов убоя крупного рогатого скота (рекомендации). М.: ВО «Агропромиздат», 1989. 39с.

75. Килессо В.А. Род Сальмонелла. // В кн. Энтеробактерии. 1985.I

76. Киржаев Ф. С. Персов А. С., Соловьян H.A. Рекомендации по оздоровлению хозяйств от сальмонелла тифимуриум инфекции. // Л. 1986.

77. Котова A.A., Кондратовская С.А. Бактерионосительство сальмонелл и биологическая характеристика возбудителя. // Ж. гигиены, эпидемиол.микробиол.и иммунолог.(ЧССР). 1988. N1. С.73-80.

78. Кочемасова З.Н., Ефремова С.А, Рыбакова A.M. Санитарная микробиология и вирусология. // М.: "Медицина". 1987. 352 с.

79. Кругляков Г.Н., Круглякова Г.В. Товароведение мясных и яичных товаров. Товароведение молочных товаров и пищевых концентратов//. М.: Маркетинг, 2001. С. 203-220.

80. Крылова Н.И., Лесковская Ю.Н. Физико-химические методы исследования продуктов животного происхождения // М.: Пищевая промышленность. 1968. 316 с.

81. Кудряшова A.A., Преснякова О.И. Продовольственная безопасность: показатели, критерии, категории и масштабы. // Хлебопекарное производство. 2006. № 5. С. 53-57.

82. Куликовский A.B. Актуальность проблемы сальмонеллеза // Вопросы питания. 1991. № 2. С.75-76.

83. Куликовский A.B. Эмержентные инфекции//М., Изд. Крафт+, 2004. 176 с.

84. Куликовский A.B. Эмержентные пищевые зоонозы/ Тезисы докладов 4-ой международной научно-течнический конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции// М.: 2002. С.12-13.

85. Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных. Обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды. Методические рекомендации //М.: 1991.

86. Лаковников Е.А. Патологоанатомическая диагностика сальмонеллеза поросят//Свиноводство №2 март, апрель 2005 Двухмесячный научно-производственный журнал. Москва, С. 3132.

87. Лягоскин И.В., Анохина Е.Г., Селянинов Ю.О. Видоспецифические антигены спор представителей группы B.cereus//Hay4Hbie основы производства ветеринарных биологических препаратов:материалы Междунар.науч.-прак. конф.-Щелково, 2007. С.245-249.

88. Магомедов A.A., Шарипов К.О., Кебиров М.Г., Раджабов М.Д., Саидов СМ. Сальмонеллез овец проблема не решена./УВестник ветеринарии 1996. №2. Ставрополь. С.96.

89. Мохаммад Аль Равашдех Раад Создание системы менеджмента безопасности продукции и процессов ' на птицеперерабатывающем предприятии в Иордании// Автореферат, 2007. 26с.

90. Малявин А.Д., Аганина JI.C., Казеев P.C. и др. Сальмонеллезы и бактерионосительство //Ветеринария. 1972. №11. С.50-51.

91. Максимович В.В. Сальмонеллез свиней. Автореферат диссертации (монографии) на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук. Белорусский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. С. Н. Вышелесского. Минск, 1995. С. 14-27.

92. Мамаев М.А. Ускоренный анализ микробных контаминаций в мясе с использованием биотинилированных ДНК / Сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ. М.: 1999. Т.107. С. 72-77.

93. Мамлеева Д.А. Индикация и идентификация бактерий рода Salmonella с использованием иммунохроматографическогоэкспресс-теста SinglePath Salmonella в пищевых продуктах и продовольственном сырье // Ветпрактика 2007.№24. С.69.

94. Метод выявления и определения бактерий ponaSalmonella и Listeria monocytogenes на основе гибридизационного ДНК-РНК анализа. МУК 4.2.1955-05. М.:,2005.

95. Муранова Ю.Л. Система НАССР гарантия стабильного выпуска качественной и безопасной продукции // Вестник «Аромарос-М», 2005. - № 4. С. 6-7.

96. Митрофанов Н.С. «Микробиология охлажденного мяса птицы// Мясная индустрия 2006.№ 3. С.35

97. Омаров М.О., Матвеенко Б.А. Профилактика сальмонеллезов -важнейшая ветеринарная и медико-биологическая проблема.//Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана №5 1990 Ежемесячный научно-теоретический журнал. Алма-Ата. С. 78-79.

98. ПЗ.Онищенко Г.Г. Контроль и ликвидация инфекционных заболеваний стратегическое направление здравоохранения // Журн. микробиол. 2002. С. 3-16.

99. Орлов A.B. Разработка и модификация приборных методов определения безопасности объектов ветеринарно-санитарного контроля//Автореф. на соиск.канд.биол.наук. М.: 2001.23с.

100. Орлова К.А., Мазепа В.Н., Махова М.А. Выявление генов факторов патогенности в клинических изолятах энтеробактерий методом ПЦР // В сборнике «Генодиагностика инфекционных болезней» М.: 2004.Т.2. С. 96-98.

101. Осами Марино. Санитария и безопасность. // Koshu.eisei=Public Helth Pract. 1998. - N7. - с.285-289.

102. Павлова И.Б. Морфология колоний бактерий в процессе развития в среде обитания (электронно-микроскопическоеисследования). // Тез.доклада. МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, М.: 1999. С. 62-67

103. Павлова И.Б., Куликовский A.B. Электронно-микроскопическое исследования бактерий в колониях. Гетероморфный рост бактерий в' процессе естестественного развития популяции// М.: 1990

104. Павлова И.Б., Ленченко Е.М., Банникова Д.А. Атлас морфологии популяции патогенных бактерий // М.: Колосс. 2007.178 с.

105. Павлова И.Б., Зуев B.C. Факторы выживания популяций Salmonella typhimurium в воде (сканирующая электронная микроскопия)//Ветеринарная патология. 2004. т.1. М.: Ветеринарный консультант.

106. Панъевропейская конференция по безопасности и качеству пищевых продуктов, Венгрия, Будапешт, 2002. С.59-63

107. Программа ВОЗ по надзору за сальмонеллезами. Изоляция, идентификация и лекарственная устойчивость Salmonella. Издание 3. 2002.

108. Питание и здоровье в Европе: новая основа для действий, Резюме// Дания, 2003. 34с. '

109. Полякова И.Н., Чиков С.С. Небольшая вспышка сальмонеллеза, вызванная S.enteritidis // ЖМЭИ. 1996. N6.C.116.

110. Попова М.М., Ременцова М.М., Ким A.A. Экология сальмонелл и эпидемиология сальмонеллезов // Алма-Ата.-1987.-128 с.

111. Пухлякова Г.Л. Экология сальмонелл на объектах ветеринарно-санитарного надзора// Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. Сборник научных трудов. Том 93/часть II. М.: Всероссийский НИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, 1994.С.48-52.

112. Родькина Л.А. Микробиологический мониторинг пищевых продуктов в системе эпидемиологического надзора за сальмонеллёзами / Автореф. дис. канд. мед. наук // Омск.: 2007.

113. Романишина В.Н. Некоторые аспекты переработки условно-годного сырья // Актуальные проблемы ветеринарно-санитарногоконтроля сельскохозяйственной продукции. Тезисы докладов научно-практической конференции 12-15 декабря 1995 г. М.: МГУГГБ, 1995. с. 7-8.

114. Савицкая К.И., Миронов А.Ю., Аваш Ю.Б. Мониторинг возбудителей острых кишечных инфекций в регионе Московской области // Журн. микробиол. 2002. №6 с. 10-13.

115. Солодовников Ю.П., Волкова H.A., Зайцев Б.Е. Динамика нозологической структуры эпидемических вспышек кишечных инфекций в Москве в последние годы //. Журн.микробиол. 2001, С: 120-122.

116. Светличкин В.В. Совершенствование контроля качества и безопасности продуктов животного происхождения в соответствии с требованиями Федерального закона «О техническом регулировании» // Сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ. М., 2005. Т. 117. С.134-139.

117. Светличкин В.В. Определение вегетативных и L-форм бактерий в объектах ветеринарно-санитарного контроля (Вода и вареная колбаса)// Ветеринария, 2002. № 7. С. 45-47.

118. Салаутин В.В. Дифференциальная диагностика сальмонеллеза птиц//Ветеринария №2, 2004 Ежемесячный теоретический и научно-практический журнал. С. 22-23.

119. Серегин И.Г., Михалева Л.П., Яцюта А.Л. Ветеринарно-санитарный контроль при заготовке, транспортировке и переработке животных: Учебное пособие//, -М.: МГУПБ, 2006. 200с.

120. Сергевнин В.И., Пегушина Э.А., Поздеева Н.Д. Антибиотикорезистентность и биохимические свойства S. typhlmurlum и S. enteritidls, выделенных из разных источников // Ж.микробиол.,эпидемиол. и иммунолог,- 1993.- ч.З.- С.583-589.

121. Селянинов Ю.О., Лягоскин И.В. Перспективы применения иммуномагнитной сепарации в экспресс индикации патогенов// Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов:материалы Междунар.науч.-прак. конф. Щелково,2006. С. 160-162

122. Скурихина И.М., Тутельян В.А. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов //. М.: Брандес, 1998. 232 с.

123. Сэме P.A. Переработка мяса птицы // СПб.: Профессия,2007.-432 с.

124. Тазетдинова P.A., Макаев Х.Н. Сальмонеллез поросят, вызванный Salmonella еп1епйсИз//Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных (Тезисы докладов) Всероссийская научная конференция. М.: 1996. 113с.

125. Тарасов С.А., Папанов А.П., Буянов A.A. Патоморфологическая дифференциальная диагностика поражений мезентериальных лимфатических узлов у свиней//Морфология сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. Т. 93. Ленинградский вет. ин-т, JL: 1987. 131 с.

126. Угарова H.H., Бровко Л.Ю., Кутузова Г.Д. Биолюминесценция и биолюминесцентный анализ (Обзор) // Биохимия. 1993, 58 (9): 1352-1372.

127. Чумак P.M. Иммуноферментный анализ и рекомбинантные антигены// Лаб. диагност. 1999. № 3. С. 3-6.

128. Шур И.В. Заболевания сальмонеллезной этиологии. -2-е изд. перераб. и доп. -М.: Медицина. 1979. 304 с.

129. Шур И.В. Пищевые токсикоинфекции паратифозного характера//М.: Сельхозгиз. 1953.

130. Шукюрова Э. Некоторые аспекты эпидемиологии пищевых1.lтоксикоинфекций// Эпидемиолог, и вакцинопрофилакт., 2010. №4. С. 57-59

131. Ярков С.П., Третьяков С.И., Башарова JI.A., Злобин В.Н. Индикация опасных патогенов на основе иммунохроматографии с 'видеоцифровой регистрацией // Молекулярная медицина и биобезопасность: Тезисы II Международной конф. М. 2005. 295 с.

132. Ярков С.П., Третьяков С.И., Злобин В.Н. Индикация опасных патогенов на основе иммунохроматографии с видеоцифровой регистрацией // Тезисы II межд. Конф. М.: 2005. С.295

133. Яковлев С.С. Эпизоотическая ситуация по сальмонеллезам птиц в России // Ветеринария. 2006. №6. С.58.

134. Ярков С .Я., Бызова H.A., Злобин В.И. Разработка иммунохроматографического экспресс-теста для выявления микроальбуминурии// Физиол. и патол. иммун. сист. 2005; 9 (8): 41-45.

135. Ярных B.C., Кононенко А.Б. Ускоренная индикация и идентификация сальмонелл в объектах внешней среды, кормах и патологическом материале при помощи реакции коагглютинации: Метод. Рекомендации // Рос. акад. с.-х. наук,

136. Всерос. НИИ вет. санитарии, гигиены и экологии/М.: РАСХН. 1993. с.1-5.

137. Anderson, J.C., Cheng, Е., Roeske, М., Marchildon, P., Peacock, J., and Shaw, R.D. Detection of serum antibodies to Helicobacter pylori by an immunochromatographic method. Am.J.Gastroenterol. 92:11351139, 1997. c.23-27.

138. Ayaz Nairn Deniz Rapid detection of Listeria monocytogenes in chicken carcasses by IMS-PCR//Ann. Microbiol. 2009. 59, № 4, p.741-744.

139. Bastian, L.A., Nanda, K., Hasselblad, V., and Simel, D.L. Diagnostic efficiency of home pregnancy test kits. A meta-analysis. Arch.Fam.Med. 7:465-469, 1998.

140. Bahme G.,Kuhn H., Tschape H. Lur Epidemiologigie der salmonelloses // Z.gesamte Hyg.und Grenzgeb. 1989. - Vol.35. - Nil. -p.638-640.

141. BittnerT., Webb R., Healy M. Identification of Salmonella serovars by automated Rep-PCR. Washington, American Society of Microbiology, 2003.

142. Blais B.W., Booth R.A., Philippe L. et al. Polymacron™ Enzyme Immunoassay system for detection of Escherichia coli 0157 inoculated into foods // J. Food Protection. 1997, 60: 98-101.

143. Busch U., Nitschko H. Methods for the differentiation of microorganisms. // J. Chromatgr. B., 1999, 722, № 1-26 б p. 263-278.

144. Coons, S.J. A look at the purchase and use of home pregnancy-test kits. Am.Pharm. NS29:46-48, 1989.

145. Chen K.T., Chen C.J., Chiu J.P. A school waterborne outbreak involving both Shigella sonnei and Entamoeba histolytica. J Environ. Health. 2001,64(4):9-13.

146. Codita I., Popesku C. Rapid test for the detection of methionine-resistance of staphylococci by ATP-dependent , bioluminescence. Roum. Arch. Microbiol. Immunol. 1996, 55(4):323-331.

147. Corbitt A.J.JBennion N.,Forsythe S.J. Adenylate kinase amplification of ATP bioluminescence for hygiene monitoring in the food and beverage industry.Lett.Appl.Microbiol.2000,30(6) :443-447.

148. Donaldson C.,Mapp Т., Ryan M. Estimating the economic bene-'fits of avoiding food-bone risk: Is willingness to pay feasible? // Epidemiol, and Infec. 1996. - N3. - с 285-294.

149. Drexel, H. et al. 1983 Myoglobinaemia in the early diagnosis of acute myocradial infarction. A m. Heart J. 105: 642-651.

150. Euzeby J. Les Salmonelles et les salmonelloses aviaires dues aux serovars ubiquistes. // Rev.med.vet. 1997. - N1. - p. 61-76.

151. Edmund C. Tramont. Traponema pallidum (Syphilis). In Mandell, Douglas and Bennett's Principles and Practice of infectious Diseases. G.L. Mandell, J.E. Bennett, P. Dolin, eds. Churchill Livingston New York, 1995.

152. Fierer J, Guiney D. Разные характерные вирулентные качества, сопутствующие различным клиническим исходам сальмонеллезной инфекции // The Journal of Clinical Investigation, April 2001, Volume 107, Number 7, p. 775-779.

153. Fehlhaber K., Kruger A. Untersuchungen zun Salmonella Vorkommen bei tauglich beurteilten Schlachtschweinen. // Fleischwirtschaft. -1996. N11. - p.l 167-1196.

154. Fris C A retrospective case-control study of risk factors associated1 with Salmonella enteritidis subsp. enterica serovar Ente-ritidlsinfection on Datch broiler breeder farms. // Avian Pathol. -1995. N2. - p.255-272.

155. Fukata T., Tsutsui H. Population of Salmonella serovar typhi-murium in the cecum of gnotobiotic chickens with E.coli and intestinal bacteria. // Journal Vet.Med.Sci. 1991. - V.53. - N2. -p.229-232.

156. Gibson J.R., Sutherland K., Owen RJ. Inhibition of DNAse activity in PFGE analysis of DNA from Campylobacter jejuni. Lett.Appl. Microbiol. 1994, 19:357-358.

157. Gericke B., Liesegang A., Reissbrodt R. Analysis of foodborne Shigella sonnei outbreak in Northern Europe by conventional and molecular methods. Med.Microbiol.Lett. 1995, 4:165-172.

158. Girotti S., Ferri E., Cascione M.L.et al. Methodological problems of direct bioluminescent ATP assay in platelets and erythrocytes. Analyt. Biochem. 1991,192:350-357.

159. Gracia E.,Fernandez A.,Conchello P. et al. In vitro development of S.aureus biofilms using slime-producing variant and ATP-bioluminescence for automatic bacterial quantification.Luminescence. 1999,14(1):23-31.

160. Grif K., Diench M.P., Allerberge, F. Dynabeads plus 3M petrifilm HEC versus Vitek immunomagnetic assay system for detection of E. coli 0157 in minced meat. Lett.Appl. Microbiol. 1998, 26: 199-204.

161. Gomes T.S., Motarjemi Y.J. Foodbone Salmonellesis. // Wold Heath Statist. Quart. 1997. N1-2. - p.81-89.

162. Grenardier, E., Keidar, S., Kahana, L., Alpan, G., Marmur, A., Palant, A. 1983 The roles of serum myoclobin, total CPK, and CK-MB isoenzyme in the acute phase of myocardial infarctionl Am. Heart J. 105:408-416.

163. Huang G.,. Lin T. Bacterial L-forms reseach in China. // Clin.Med.J. 1996. - N1. - p. 18-20. 31. Hensel Michael, Salmonella Pathogenicity Island 2 // Mol. Microbiol. — 2000. - 36, №5.-С 1015-1023.

164. Herniation G. T. In: Bioconjugate techniques. New York: Academic Press Inc.; 1966. 593-604.

165. Highly sensitive flow-injection immunoassay system for rapid detection of bacteria / Abdel-Hamid Ihab, ivnitski Dmitri, Atanasov Plamen, Wilkins Ebtisam // Anal. chim. acta. — 1999. — 399, № 1-2. С 99-108.

166. Identification of Salmonella : Пат. 6368817 США, МПК7 C12Q 1/02 / Репу John David. Ford Michael: Newcastle Upon Tvne Hospitals Nat. Health service Trust. № 09/355066: Заявл. 04.06.98: Опубл. 09.04.02: НПК 435/29.

167. James С Charity, Michelle M Costante-Hamm, Emmy L Balon, Dana H Boyd, Eric J Rubin, and Simon L Dove. Twin RNA Polymerase-Associated Proteins Control Virulence Gene Expression in Francisella tularensis // PLoS Pathog. 2007 June; 3(6): e84.

168. Kelly W.R. Some epidemiological aspects of salmonellosis in relatin to animal and human health. // J.Irich.Med.Assoc. 1979.-V01.72.-N31.-p. 327-332.

169. Kottwitz L.B.M., Back A., Leao J.A., Alcocer I., CO. Koran M.f Oliveira T.C.R.M. Salmonella contamination In an th- egg production chain of a laying hens integration // Arq. Brasil per; Med. veter. Zootecn.-2008.-Vol.60,N 2.-P. 496-498.

170. Koulikovskii A.V., Pavlova I.B., Kasiyanenko A.I. Ecology of ' some foodborne pathogens in the environment. // 3-rd Wold Congress Foodbonrne Infecction and Intoxications. Berlin, Germany. - 1992.p.462-466.

171. Krishnamurthy Thaiya, Rajamani Uma, Ross Philip L., Jabbour Radih, Nair Hari, Eng Jimm,y, Yates John, Davis Michael T., Stahl Douglas C, Lee Terry D. Mass spectral investigations on microorganisms. // J. Toxicol. Toxin Rev. 2000. - 19, № 1. - C 95117.

172. Kurowski P. Brett. Traub-Dargatz Josie L. Morley Paul S., Gentry-Weeks Claudia R. Detection of Salmonella spp in fecal specimens by use of real-time polymerase chain reaction assay // Amer. J. Vet. Res. 2002. - 63, № 9. - 1265-1268.

173. Latman, N.S. and Bruot, B.C. Evaluation of home pregnancy test kits. Biomed.Instrum.Technol. 23:144-149, 1989.

174. Lee Kyoung G., Pillai Shreekumar JR., Singh Shree J\., Willing Gerold A.The investigation of Protein A and Salmonella antibody adsorption onto biosensor surfaces by atomic force microscopy. BiotechnoL and Bioeng. 2008. 99, № 4, c 949-959.

175. Lein, M., Jung, K., Schnorr, D., Henke, W., Brüx, B., and Loening, S.A. Rapid screening of PSA: evaluation of an immunochemical membrane strip test letter., Clin.Chem. 41:1545-1547, 1995.

176. Loncarevic S., Jorgensen H. J., Lovseth A., Mathisen Т. Rorvik L.M. Diversity of Staphylococcus aureus enterotoxin types within single samples /of raw milk and raw milk products. // Appl. Microbiol.,2005., 98, № 2, p. 344-350.

177. Method for detecting presence of microorganisms, and quantities of microorganisms : Пат. 6855514 США, МПК7 C12Q 1/04 / Ogawa Hiroyuki. № 09/897105: Заявл. 03.07.01: Опубл. 15.02.05: Приор. 18.12.97. № 9-365342 (Япония): НПК 435/34

178. Method for the rapid determination of bacteria : Заявка 0957175 ЕПВ, МПК6 C12Q 1/68, C12Q 1/04; Academisch Ziekenhuis Groningen, Rijksuniversiteit te Groningen. — № 98201253.6; Заявл. 20.04.98; Опубл. 17.11.99, Бюл. № 99/46

179. Matsumoto M., Suzuki Y., Saito M. et al. Epidemiologic study of Shigella sonnei from sequential outbreaks and sporadic cases using different typing techniques. Microbiol.Immunol.1998, 42(4):259-264.

180. Novelli A.B. Bacillus subtilis spores as a natural pro-host oral agent. Preliminary date In children. // Chemloterapla. 1984.-Vol.3. -N3. - p. 152-155.

181. Nurml E., Rantala M. New aspects of Salmonella infection in broiler production. // Nature ( London ). 1973. - V.241.p.210-211.

182. Nursey I. Salmonellen kontrollieren. // Kraftfuttler. 1997. N10. -p.415-420.

183. Oberg J., de Jong B., Svenungsson B. Outbreak of salmonellosis in a restaurant in Stockholm, Sweden. September October 2006. Eurosurveillance. 2007. 12, IMs 10-12, c. 368-370.

184. Poisson D.M., Rakotondrazaka M., Thual M.C. Salmonella agona saccharosepositive. Problems poses par son isolement et son Identification // Feulll.blol. 1988. - Vol.29.- N 163. - P. 13-17.

185. Roszak D.B., Grimes D.J., Colwell R.R. Viable but nonrecove-rable stage of Salmonella enteritidis in aquatic systems. // Can. /Microbiol.-1984.-V. 30.- P. 334-338.

186. Sato, K., Ichiyama, S., Iinuma, Y., Nada, T., Shimokata, K., and Nakashima, N. Evaluation of immunochromatographic assay systems for rapid detection of hepatitis B surface antigen and antibody,

187. Dainascreen HBsAg and Dainascreen Ausab. J.Clin.Microbiol. 34:1420-1422, 1996.

188. Savage D.C. Introduction to mechanisms of association of indigenous microbes. // Amer. J. Clin.Nutr. 1979. - Vol.32. - N1. -p. 113-118. ' '

189. Schrier, W.H., Schoengold, R.J., Baker, J.T., Norell, J.L., Jaseph, C.L., Okin, Y., Doe, J.Y., and Chandler, H. Development of FlexSure HP—an immunochromatographic method to detect antibodies against Helicobacter pylori. Clin.Chem. 44:293-298, 1998.

190. Scuderi G., Fantasia M. Foodborne outbreaks caused by salmonella in Italy, 1991-1994. //Epidemiol, and Infec. 1996. - N3. -p.257-265.

191. Simko S. Vyskyt salmonel u kur domacich na slovensku v rokoch 1971-1980. //Veter.Med. (Prah29 1984-N2-p.l 13-119.

192. Smith H.W. J. Pathology and Bacteriology.- 1965.- Vol. 85.- pY 95 122.

193. Torlesse, H., Wurie, I.M., and Hodges, M. The use of immunochromatography test cards in the diagnosis of hepatitis В surface antigen among pregnant women in West Africa. Br.J.Biomed.Sci. 54:256-259, 1997.

194. Thomas A. Isenbarger, Michael Finney, Carlos Rios-Velazquez, Jo Handelsman, and Gary Ruvkun. Miniprimer PCR, a New Lens for Viewing the Microbial World // Appl Environ Microbiol. 2008 February; 74(3): 840-849.

195. Trafny E. A., Kozlowska K., Szpakowska M. A novel multiplex PCR assay for the detection of Salmonella enterica serovar Enteritidis in human faeces. // Lett. Appl. Microbiol. 2006. 43, N2 6, с 673-684.

196. Wennig R, Moeller MR, Haguenoer JM et al. (1998) Development and evaluation of immunochromatographic rapid tests for screening of cannabinoids, cocaine, and opiates in urine // J. Anal. Toxicol. V.22 -P.148-155.

197. Wray C, Jones Y. Salmonella typhimurium DT 104: Is there anothe global pandemic ? // Abstr. 175-th Meet Pathol.Soc.Gr.Brit, and Irel.Sheffield, 2-4 July, 1997. Y.Med.Mecrobiol. - 1997. - N12. -p. 10'53-1059.

198. Yanbin L., Slavik M. Pre-chill spray of chicken carcasses to reduce Salmonella typhimurium. // J.Eood Sci. 1997. - N3. p.605-607.

199. Zivkovic J., Jaksis S. Salmonella serovars in chiken meat and chiken meat products in Zagreb, Croatia. // Vet.arh. 1997. - N4. -p. 169-175.I

Информация о работе

Стрелков, Алексей Александрович
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.05

Диссертация

Разработка ускоренного иммунологического метода индикации сальмонелл в продовольственном сырье и кормах - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы