Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка тест-системы для идентификации вируса арктического бешенства на основе методов анализа генома

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Цыбанов, Ярали Содномович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общая характеристика вируса бешенства.

2.2. Антигенные свойства вируса бешенства.

2.3.География распространения бешенства.

2.4. Эпизоотическая обстановка по бешенству в России.

2.5. Эпизоотология арктического бешенства.

2.6. Диагностика бешенства.

2.7. Филогенетический анализ генома лиссавирусов.

2.7.1. Филогенетический анализ изолятов первого генотипа вируса бешенства.

2.7.2.Филогенетический анализ изолятов вируса бешенства Европейских летучих мышей.

2.7.3. Филогенетический анализ изолятов вируса арктического бешенства.

2.7.4. Филогенетический анализ вакцинных штаммов вируса бешенства.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка тест-системы для идентификации вируса арктического бешенства на основе методов анализа генома"

В настоящее время природные очаги рабической инфекции выявлены в тундровой и лесо-тундровой зонах, которые связаны с арктическим вариантом вируса бешенства (вирусом дикования), циркулирующего в популяциях песцов, волков, лис, медведей, северных оленей и др. животных [3, 6, 33].

Современная эпизоотическая ситуация по бешенству характеризуется снижением роли собак как источника инфекции и значительным распространением этого заболевания среди диких плотоядных. Установлено, что высокий уровень поддержания и распространения эпизоотии бешенства среди диких плотоядных появляется прежде всего на территориях с массовым распространением грызунов и других источников корма для них [6, 15,35].

У диких плотоядных (лисицы, волки, песцы, куницы и др.) болезнь часто протекает в хронической форме, обеспечивая персистенцию вируса в организме животных в естественных условиях [21].

В последнее время установлено, что одновременно с вирусом дикования среди диких животных приполярной зоны циркулирует вирус классического бешенства. В связи с возможностью одновременной циркуляции вирусов арктического и классического бешенства как у диких, так и у домашних животных возникает проблема их дифференциации [7, 13].

Поэтому необходимость дальнейшего изучения природы возбудителя с целью совершенствования имеющихся и разработки новых более эффективных средств диагностики и профилактики данного заболевания является актуальной задачей [5, 9].

В настоящее время для диагностики бешенства используются следующие методы: микроскопия мазков-отпечатков для обнаружения телец

Бабеша-Негри, МФА, ИФА, РН и биопроба на мышах [1, 23, 28, 44].

Однако, в некоторых случаях эти методы анализа недостаточно эффективны, из-за сложности дифференциации различных изолятов, трудоемкости, длительности и невысокой чувствительности.

Применение существующих методов лабораторной диагностики , в которых используют поликлональные антитела, не всегда позволяет проводить дифференциацию вакцинных и вирулентных штаммов вируса.

Научные разработки последних лет отечественных и зарубежных авторов показали, что использование панели моноклональных антител, а также избирательная амплификация участков вирусного генома с помощью полимеразной цепной реакции, дополняя серологические методы, открывает новые возможности для обнаружения вируса бешенства в клинических образцах [26, 28, 63, 67].

Одним из перспективных направлений является использование метода ПЦР с последующим рестрикционным анализом и секвенированием продукта ПЦР [60, 63].

Определение и сравнительный анализ первичной структуры фрагментов генома вируса бешенства , характеризующихся максимальной вариабельностью , позволяет найти штаммо- и группоспецифические генетические маркеры, способствующие дифференциации вакцинных штаммов и полевых изолятов [71, 83, 101].

Подбор специфичных праймеров, фланкирующих вариабельный фрагмент генома, позволяет разработать тест-систему для индикации и штаммовой дифференциации вируса бешенства [26, 104, 150].

Контроль за распространением бешенства продолжает оставаться актуальной проблемой во всем мире. Хотя диагностика бешенства за последние несколько десятилетий значительно усовершенствовалась, она все еще нуждается в разработке новых, более чувствительных, лабораторных методов. Внутримозговое заражение мышей остается наиболее широко применяемым методом в диагностике бешенства. Однако, главным недостатком биопробы остается длительный инкубационный период уличного бешенства у мышей (7-18 суток) [30, 45].

Одним из эффективных методов быстрой диагностики бешенства является иммуноферментный метод определения вирусных антигенов с использованием поликлональных и моноклональных антител. Метод ИФА позволяет выявлять рабический антиген с титром инфекционного вируса не менее 3,3 МЛД50/МЛ и процент выявления вируса бешенства составляет 94,2%. Следует отметить, что основным недостатком серологических методов и биопробы является то, что они не позволяют работать с деградированным патологическим материалом [2, 28, 42].

В последние годы, в связи с широким распространением арктического бешенства за пределы полярного круга, возрастает актуальность этой проблемы. А. Д. Ботвинкиным с сотрудниками с помощью набора моноклональных антител была исследована антигенная вариабельность изолятов вируса бешенства, выделенных от животных и человека с 1969 по 1991 гг. из различных ландшафтно-географических зон России [4].

Изоляты вируса бешенства первого серотипа были классифицированы на 9 антигенных вариантов, большинство которых связано с определенной территорией. Изоляты вируса бешенства, циркулирующего на северо-востоке нашей страны, имели общие эпитопы с изолятами с Аляски и северо-западных территорий Канады. Изоляты, имеющие маркер арктического варианта вируса бешенства, впервые были обнаружены в умеренных широтах России в виде отдельных очагов, наиболее крупный из которых находится в Прибалтийском регионе [4, 11, 38, 67].

В Азиатской части Российской Федерации арктический вариант вируса бешенства обнаружен в горных районах (Забайкалье, Тува, Якутия) на удалении до 1700 км от Северного полярного круга, в северо-западных районах России (Калининградская, Псковская, Ленинградская области), в Прибалтике и Белорусии до 1000 км [4, 18, 53].

На американском континенте вирус арктического бешенства также обнаружен не только на Аляске, Северо-Западных территориях Канады, но и в умеренных широтах - в штатах Онтарио, Квебек, Нью-Йорк, то есть до 50° северной широты [126, 149, 182].

Хотя вирус арктического бешенства не патогенен для человека, однако, дифференциация штаммов и изолятов классического и арктического бешенства, а также поиск генетических маркеров является важной задачей [29, 53, 167].

Анализ данных литературы показывает, что несмотря на все преимущества традиционных методов диагностики бешенства, во многих лабораториях за рубежом и в нашей стране все шире и шире для лабораторной диагностики используются методы молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции. Преимуществом этих методов является их высокая чувствительность, специфичность, быстрота и безопасность [26, 177].

В настоящее время ГЩР-технологию применяют в комбинации с секвенированием, что делает ее незаменимым, очень чувствительным методом идентификации вируса и определения его родства в отношении других штаммов. Для сравнительной характеристики геномов штаммов вирусов также проводят рестрикционный анализ ПЦР продуктов.

Исходя из вышесказанного, целью данной работы являлась разработка тест-системы для идентификации вирусов классического и арктического бешенства на основе анализа генома.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- подобрать специфичные праймеры для амплификации различных участков генома вируса бешенства, оптимизировать условия проведения ПЦР и отработать методы подготовки проб;

- определить специфичность и чувствительность метода полимеразной цепной реакции для идентификации вирусов классического и арктического бешенства;

- провести дифференциацию вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса бешенства на основе рестрикционного анализа ПНР продуктов;

- определить первичную последовательность фрагментов генома вакцинного штамма «ТС-80» и гена нуклеопротеина вируса арктического бешенства с целью установления генетического родства.

Научная новизна работы:

Определена нуклеотидная последовательность фрагментов гена нуклеопротеина и псевдогена размерами 398 и 310 п.о. вакцинного штамма «ТС-80». При сравнении нуклеотидных и аминокислотных последовательностей этих участков генома с другими вакцинными штаммами вируса бешенства установлено, что штаммы «ТС-80» и «SAD В19» имеют 98% гомологии.

Впервые определена нуклеотидная последовательность гена нуклеопротеина двух изолятов вируса арктического бешенства, выделенных на территории Якутии. Установлена высокая однородность нуклеотидных последовательностей якутских изолятов и изолятов арктической зоны Канады и Гренландии , а также последовательностей изолятов, выделенных в районе залива Гудзон (Канада), и изолята из Красноярского края (Россия).

Создан банк данных нуклеотидных и соответствующих им аминокислотных последовательностей генома вируса арктического бешенства.

Проведена дифференциация изолятов вируса арктического бешенства, выделенных в Республике Якутия, от полевых изолятов возбудителя классического бешенства методом рестрикционного анализа продуктов ПЦР.

Практическая значимость. Практическая ценность работы состоит в том, что на основании экспериментальных данных разработан «Набор препаратов для выявления РНК вируса бешенства методом ПЦР», который прошел комиссионные испытания, одобрен ученым советом и утвержден директором ВНИИВВиМ (протокол № 8 от 11.09. 2001 г.). «Набор препаратов.» рекомендован для включения в схему лабораторных исследований при диагностике болезни.

Предложен способ дифференциации вакцинных штаммов и полевых изолятов вирусов арктического и классического бешенства на основе рестрикционного анализа ПЦР продукта, который может быть использован для паспортизации производственных штаммов и идентификации полевых изолятов вирусов арктического и классического бешенства.

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты разработки «Набора препаратов .» на основе полимеразной цепной реакции для выявления РНК вируса бешенства с использованием праймеров, комплементарных консервативной и вариабельной областям генома;

- результаты исследований арктических изолятов вируса бешенства, выделенных из патологических материалов, и дифференциации их от вакцинных штаммов,а также полевых изолятов классического вируса бешенства методом ПЦР и рестрикционного анализа;

- результаты секвенирования фрагментов генома вакцинного штамма «ТС-80» и полевых изолятов вируса арктического бешенства.

12

Исследования по диссертационной работе выполнены в 1999-2001 г.г. во ВНИИВВиМ в соответствии с утвержденными плановыми заданиями (темы: 01.01.02., 01.03.02.).

Апробация результатов исследований. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: заседаниях ученого совета ВНИИВВиМ (1999, 2000, 2001 г.г.); научных конференциях ВНИИВВиМ (1999, 2001 г.г.), ВНИТИБП (2000 г.); материалах международных конференций- XI-th Inter. Congress of Virology, Sidnay,1999; V-th Inter. Congress Europ. Society for Vet. Virology, Italy, 2000.

Публикации по работе. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ в материалах научных конференций.

В выполнении отдельных разделов работы оказали помощь: младший научный сотрудник, кандидат биологических наук Наумкина М.А., научный сотрудник , кандидат биологических наук Пантюшенко М.С., старший научный сотрудник, кандидат ветеринарных наук Недосеков В.В., зав. отделом Республиканской ветеринарной лаборатории Саха (Якутия), кандидат ветеринарных наук Романова У.Н., которым автор выражает искреннюю признательность.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Цыбанов, Ярали Содномович

6. ВЫВОДЫ

6.1. Отработаны оптимальные условия постановки полимеразной цепной реакции с использованием праймеров, комплементарных вариа-бельным и консервативным участкам нуклеотидной последовательности гена нуклеопротеина, позволяющие при температуре отжига 50° С (для «наружных» праймеров) и 55° С (для «внутренних» праймеров) выявлять РНК полевых изолятов вируса арктического и классического бешенства.

6.2. Разработанный «Набор препаратов для выявления РНК вируса бешенства методом ПЦР» обеспечивает максимальную чувствительность 10 МЛД50/см3 вируса в пробах головного мозга. Сравнительная оценка диагностической ценности методов МФА, ОТ-ПЦР и биопробы при исследовании проб патматериала составила 100%.

6.3. Рестрикционный анализ ПЦР продукта гена нуклеопротеина эндонуклеазами рестрикции позволяет выявить различия между геномами полевых изолятов вируса арктического, классического бешенства, а также вакцинных штаммов (ТС-80, Внуково-32, SAD, РБ-71, Щелково-51, PV) и дает возможность использования его для дифференциации вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса бешенства.

6.4. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов генов нуклеопротеина и псевдогена, размерами 39В и 310 п.о. вакцинного штамма «ТС-80» показал, что исследованный штамм имеет 98 и 99% гомологии с вакцинным штаммом «SAD».

6.5.Определены нуклеотидные и соответствующие им аминокислотные последовательности гена нуклеопротеина (размер 1320 п.о.) двух изолятов вируса арктического бешенства, выделенных от песца и оленя, вошедшие в

113 банк данных нуклеотидных последовательностей вируса арктического бешенства, циркулирующего на территории Якутии б.б.Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов гена нуклеопротеина арктических изолятов из Якутии показал, что они формируют обособленный кластер, имеющий высокий уровень гомологии (96%) с изолятами, выделенными в Красноярском крае, Канаде и Гренландии.

114

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

4.1. Разработанные нами методы идентификации и дифференциации вакцинных штаммов и полевых изолятов вирусов арктического и классического бешенства на основе полимеразной цепной реакции могут быть рекомендованы для включения в схему и порядок лабораторных исследований при диагностике болезни.

4.2. Предложенный метод рестрикционного анализа вариабельного участка гена нуклеопротеина генома вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса бешенства может быть использован для их дифференциации и паспортизации производственных штаммов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Цыбанов, Ярали Содномович, Покров

1. Ботвинкин А.Д., Чернов С.М., Грибанова Л. Я. Обнаружение вируса бешенства в головном мозге и слюнных железах животных с помощью иммуноферментного метода. // Вопросы вирусологии. 1987. - N -6 - с. 747-750.

2. Ботвинкин А.Д., Наволокин О.Ц. Обнаружение антител к вирусу бешенства с помощью ELISA в пробах крови, собранных на бумажные диски. // Лаб. дело. 1988.- N 3. - с. 73-74.

3. Ботвинкин А.Д., Грибанова Л.Я., Чернявский В.Ф., Барашков А.Н., Селимов М.А. Антигенные варианты вируса бешенства в Якутии. // Вопросы региональной гигиены, санитарии и эпидемиологии. Якутск.-1990.- с. 160-161

4. Ботвинкин А.Д. Особенности эпидемиологии гидрофобии и экология вируса бешенства в условиях преобладания очагов природного типа: Дис. . д-ра мед. наук в форме научного доклада: 14.00.30. Москва, 1992.

5. Быков В.П., Таршис М.Г. Ситуация по бешенству в регионе Нижней Волги.//Ветеринария.- 1996.- №7.-с. 19-20

6. Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В. Бешенство животных -М.: Колос, 1974.- с. 112.

7. Ведерников В.А., Седов В.А. Современные особенности эпизоотологии бешенства. // Ветеринария.-1976.- N 8.- с. 57-61.

8. Ведерников В.А., Юрик С.А. Прогноз распространения бешенства в Сибири и на Дальнем Востоке. // Сб. науч. тр. ИЭВС и ДВ «Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных. Новосибирск.- 1997.-с. 41-42.

9. Вишняков И.Ф, Никишин И.В., Недосеков В.В, Горшкова Т.Ф., Жестерев В.И., Шевченко A.A., Зуев В.В., Груздев К.Н. Инактивированная культуральная вацина против бешенства животных // Ветеринария,-1998.-№ 1.-с 22-25.

10. Грибанова Л.Я., С. В. Грибенча, Г. Б. Мальков, И.Ф. Баринский. Изучение биологических свойств вариантов уличного вируса бешенства.// Вопросы вирусологии.- 1988.- № 2.- с. 201-206.

11. Грибенча С. В., К. А. Ванаг, И. Ф. Баринский. Получение двух вариантов вируса бешенства из одного штамма. // Вопросы вирусологии.- 1981.- № 3.-с. 315-318.

12. Грибенча С. В., К. А. Ванаг, И. Ф. Баринский. Изучение биологических вариантов популяции ряда штаммов уличного вируса бешенства. // Вопросы вирусологии.- 1982.- № 6.- с. 98-103.

13. Грибенча С. В., Л.Я. Грибанова, Г. Б. Мальков, И.Ф. Баринский. Абортивное и возвратное бешенство у собак, зараженных в мозг уличным вирусом бешенства. // Вопросы вирусологии.- 1989.- № 2.- с. 217-220.

14. Дунаева Т.Н. Природноочаговые болезни на Крайнем Севере //В кн Сообщество Крайнего Севера и человек. М.: 1985.- с. 134-169.

15. Калабеков М.И. Характеристика эпизоотического процесса бешенства животных. // Вестник Российской Академии Сельскохозяйственных Наук.-1998.-№4.-с. 62-64.

16. Kaplan M. М., Hilary Koprowski. Методы лабораторных исследований по бешенству.// ВОЗ.- Женева.: изд. Медицина.- 3-е издание.- 1975.- с.76-89

17. Канторович P.A. О природной очаговости "дикования" на Крайнем Севере // Гигиена, эпидемиология, микробиология, иммунология.- Прага.- 1963.-№7. с. 449-458.

18. Карпов B.C., Чернявский В.Ф., Каратаева Т.Д. Бешенство. В кн.: Основные зооантропонозы в Якутии. Эпизоотология и эпидемиология. -Якутск.- 1997. с.67-114.

19. Колесникова P.C. Природная очаговость дикования и значение животных в его распространении. //В кн.: Материалы по экологии и численности, животных в Якутии.- Якутск.- 1973,-с. 159-170.

20. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству. Восьмой доклад.// ВОЗ.- Женева. -Изд-во Медицина.- 1994.- с.57-76.

21. Маниатис Т., Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. Молекулярное клонирование.// Москва.: Изд-во Мир.- 1984.- с.97-120

22. Наумкина М.А. Разработка методов молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции для идентификации вируса бешенства .// Диссертация кандидата биологических наук.: Покров.- ВНИИВВиМ.- 1999 г.

23. Недосеков В.В., Вишняков И.Ф., Жестерев В.И., Балышев В.М., Горшкова Т.Ф., Груздев К. Н. Титрование антирабических антител с помощью теста ингибиции фокусов флуоресценции // Ветеринария.-1998.-№ 7.- с 28-30.

24. Недосеков В.В. Разработка и совершенствование средств и методов оценки эффективности вакцин против бешенства .// Диссертации кандидата ветеринарных наук.: Покров.- ВНИИВВиМ.-1998 г.

25. Пиле Р. Лиссавирусы. // Вопросы вирусологии.- 1996.- № 1,- с. 2-6.31 .Полюшкина, A.A. Горкунов. Эпизоотическая ситуация по бешенству в Московской области и пути ее улучшения. // Вопросы вирусологии.- 1998.-№ 1.- с. 47-48.

26. Пшенников А.Е. Применение метода флюоресцирующих антител для исследований при «диковании». // Автореферат канд. биолог, наук. -Новосибирск.- 1972. с. 3-22

27. Романова У.Н., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Недосеков В.В., Куриннов В.В. Некоторые особенности проявления рабической инфекции в Республике Саха (Якутия) .//Ветеринария.- 1999.- № 9.- с.33-39.

28. Романова У.Н. Эпизоотологические особенности и диагностика бешенства в Республике Саха (Якутия).// Диссертация канд. ветеринарных, наук.-Покров.- ВНИИВВиМ.- 2000.- с. 3-22

29. Селимов М. А. Бешенство. М.: Медицина. - 1978.- с. 203.

30. Селимов М.А. К эволюции природных очагов рабической инфекции. // Актуал. пробл. вирусол. Тез. докл. Конф.- Москва.: 1985.- с. 164-165.

31. Селимов М.А. Моноклональные антитела и антигенный анализ лиссавирусов. // Серия эпидемиология, вирусология и инфекционные заболевания. Выпуск 4. Современные достижения в области рабиологии. -Москва.- 1987.- с.32-36.

32. Селимов М.А. Идентификация штаммов арктического и сильватического бешенства с помощью моноклональных антител // Вопросы вирусологии.-1983.-№2.- с.243-252

33. Селимов М.А., Ботвинкин А.Д., Хозинский В.В., Грибанова Л.Я. Новые данные о распространении Р-41 положительных штаммов рабического вируса в арктическом и в неарктическом регионах // ЖМЭИ.- 1994.- №2.-с. 53-57.

34. Селимов М.А., Ботвинкин А.Д., Хозинский В.В., Клюева Е.В., Чернявский В.Ф. О вирусе арктического бешенства. //Вопросы региональной гигиены, санитарии и эпидемиологии. Якутск.-1990.- с. 162-163.

35. Строгов А.К. "Дикование" (Вирусный энцефаломиелит тундровых животных). Восточн. Сибирск. кн. изд-во.- Иркутск.- 1971. с. 187.

36. Сологуб Т.В., Вишняков И.Ф., Никишин И.В. Совершенствование МФА для обнаружения антигена вируса бешенства. // Вопросы ветеринарнойвирусологии, микробиологии и эпизоотологии. Материалы научи, конф.-Покров.-ВНИИВВиМ.- 1992а.- с. 260.

37. Сологуб Т.В., Никишин И.В., Вишняков И.Ф. Выявление антител к вирусу бешенства методом ингибирования ТФ ИФА. // В сб.: Вопросы вет. вирус., микробиол. и эпизоотологии. Покров.- 1992b.- с. 261.

38. Сологуб Т.В. Разработка и совершенствование средств и методов диагностики бешенства // Диссертация кандидата биологических наук. Покров.- ВНИИВВиМ.- г. 1993.

39. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных. // Справочник, Москва.: ВО "Агропромиздат".-1991.- с. 254-270.

40. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных.//Москва.- ВНИТИБП.- 1998.- с. 294-319

41. Таршис М.Г., Ковалев H.A., Кузнецов П.П. Бешенство животных. // Минск "Урожай".- 1990.- с. 65-80.

42. Татаров А.Г., Селимов М.А., Кармышева В.Я., Хисматуллина H.A. Экспресс-диагностика бешенства в линии клеток невриомы-Гассенова узла крысы (НГУК-1).// Актуал. пробл. вирусол. Тез. докл. Конф.-Москва.- 1985.-с. 172-173.

43. Харитоненков И. Г. Тенденции развития методов диагностики в вирусологии. // Соврем, методы иммунохим. и молекулярно-биол. диагност, в мед.- АМН СССР.- НИИ вакцин сывороток.- М.- 1992.- с. 1220.

44. Шестопалов A.M., Кисурина М.И., Груздев К.Н. Бешенство и его распространение в мире.// Вопросы вирусологии.- 2001.- №1.- с. 13-22

45. Цетлин Е.М., Волкова Р.А. Отработка оптимальной схемы учета результатов при применении имммуноферментной тест-системы для определения антигенной активности культуральной антирабической вакцины.// Вопросы вирусологии.- 1996.- N1.- с.21

46. Чернявский В.Ф., Егоров И.Я., Тугутов Л.Д., Строева Н.Р., Карпов B.C. Основные результаты изучения бешенства в Якутии.// Актуал. пробл. вирусол. Тез. докл. Конф.- Москва.-1985.- 168-169.

47. Черкасский Б.Л., Кноп А.Г., Ведерников В.А. Эпидемиология и эпизоотология бешенства на территории бывшего СССР //ЖМЭИ.-1995.-№1.- с. 22-27.

48. Черкасский Б.Л. Географические варианты рабического вируса // В кн.: Эпидемиология и профилактика бешенства.- М,- 1985.- с. 18-32.

49. Agchomo И.О., Tomori О., Oduye О.О., Rupprecht С.Е. Detection of Mokola virus neutralizating antibodies in Nigerian dogs. // Res. Vet. Sci.- 1990.- 48.-p. 264

50. Amengyal В., Whitly J.E., King A., Serra Cobo J. and Bourhy H. Evolution of European bat lyssavirusses. //J.Gen. Virology.- 1997.- 78.- p. 2315-2328.

51. Arai Y. Т., К. Yamada, Y. Kameoka, T. Horimoto, K. Yamamoto, S.Yabe, M. Nakayama, and M. Tashiro. Nucleoprotein gene analysis of fixed and street rabies virus variants using RT-PCR. // Arch Virol .-1997.- 142.- p. 1787-1796.

52. Atanasiu P. The immunoperoxidase reaction for demonstration of rabies virus. In Laboratory Techiques in Rabies. (Kaplan M.M., Koprowski H. eds). Geneva: World Health Organization.-1973.- p. 358-60

53. Ballard WB; Krausman PR Occurrence of rabies in wolves of Alaska.// J Wild. Dis.- 1997.- v. 33.- № 2.- p242-245

54. Belak-S Ballagipordany-A. Application of the Polymerase Chain-Reaction (PCR) in Veterinary Diagnostic Virology.// Vet. Res. Comm.- 1993.- Vol. 17.-p. 55-72

55. Benmansour, M. Brahimi, C. Tuffereau, P. Coulon, F. Lafay and A. Flamand. Rapid Sequence Evolution of Street Rabies Glycoprotein is Related to the Highly Heterogeneus of the Viral Population. // Virology.- 1992.- 187.- N1.- p. 33-45.

56. Bilsel P.A., Rowe J.A., Fitch W.M., Nichols S.T. Phosphoprotein and nucleocapsid protein evolution of visicular stomatitis virus New Jersey. // J. Virol.-1990.- 64.- p.2498-2504.

57. Bourhy H.F., Lafon M., Berthonneau M.C., Renner Y., Rollin P.E., Sureau P. Rabies in vaccinated dogs in Gabon. // Veterinary Record.- 1988.- 122.- p. 361362.

58. Bourhy H., Kissi B., Lafon M., Sacramento D. and Tordo N. Antigenic and molecular characterization of bat rabies virus in Europe. // J. Clin. Microbiology.- 1992.- 30.- p.2419-2426.

59. Bourhy-H Kissi-B Tordo-N Taxonomy and Evolutionary Studies on Lyssaviruses with Special Reference to Africa.// Onder. J.Vet.Res.- 1993.-Vol 60.- 4,.- p. 277-282

60. Borhy H., Kissi B., Tordo N. Molecular diversity of the Lyssavirus Genus.// Virology.- 1993.- 194.- p. 70-81;

61. Bourhy-H Kissi-B Tordo-N Badrane-H Sacramento-D Molecular Epidemiologic Tools and Phylogenetic Analysis of Bacteria and Viruses with Special Emphasis on Lyssaviruses.// Prev. Vet. Med.- 1995.- Vol 25.- 2.-p.161-181

62. Botvinkin A.D., Chemyavsky V.F., Egorov J.V. Human Rabies and virus variation in Siberian Subarctis // X International Congress on Circumpolar Health.- Alaska.- 1996.- p.41.

63. Brodsky L.I., Drachev A.L., Gorbalenya A.E. Leontovich A.M., Feranchuk S.I., A novel method of multiple alignment of bio-polymers(MA-Tools module of GeneBee package.// Biosystems.- 1993.- 30.- p.65-79

64. Brodsky L.I., Ivanov V.V., Ya.L. Kalaydzidis,Leontovich A.M., Nikolaev V.K., Feranchuk S.I.,Drachev V.A. GeneBee-NET:Internet-based server for analyzingbiopolymers structure.// Biochemistry.- 1995.- 60.- p.923-928

65. Chariton KM, Webster WA, Casey GA, Rupprecht CE. Skunk rabies.// Rev Infect Dis.- 1988.- 10.- p.626-628

66. Chenik M., Chebli K., Gaudin Y., Blondel D. In vivo interaction of rabies virus phosphoprotein (P) and nucleoprotein (N): existence of two N-binding sites on P protein.//J.Gen. Virol.- 1994.- 75.- p. 2889-2896

67. Coll-JM The Glycoprotein-G of Rhabdoviruses. // Arc. Virology.- 1995.- Vol 140.-5.- p. 827-851

68. Conzelmann K.K., Cox J. H., Schneider L.G., and Thiel H.J. Molecular Cloning and Complete Nucleotide Sequence of the Attenuated Rabies Virus SAD B19. // Virology.- 1990.-175.- p. 485-499.

69. Crepin P., Audry L., Rotivel Y., Gacoin A., Caroff C., Bourhy H. Intravitam diagnosis of human rabies by PCR using saliva and cerebrospinal fluid. // J Clin Microbiol.- 1998.- v. 36.- № 4.- p. 1117-1121

70. Cumming D.H.M. A case history of the spread of rabies in an African country. // S. Afr. J. Sci.- 1982.- 78.- p. 443-447

71. Davis-C Neill-S Raj-P Microwave Fixation of Rabies Specimens for Fluorescent-Antibody Testing.// J.Virol. Methods.- 1997.- Vol 68.- 2.- p. 177182

72. Dietzschold B., Wiktor T.J., Trojanowski J.Q., et al. Differrences in cell-to-cell spread of pathogenic and apatogenic rabies virus in vivo and in vitro. // J. Virol.-1985.- 56.- p.12-18

73. Dietzschold B., Lafon M., Wang H-H., Otvos L JR., Celis E., Wunner WH., Koprowski H. Localozation and immunological characterization of antigenic domain of the rabies virus internal N and NS proteins. // Virus Res.- 1987a.- 8.-p.103-125.

74. Domingo D., Escarmis C., SevillaN., Moya A., Elena S.F., Quer J., Novella I.S., Holland J J. Basic concepts in RNA virus evolution.// Faseb J.- 1996a.- 10.-p. 859-864.

75. Ermine A., Noel Tordo and Henri Tsiang. Rapid diagnosis of rabies infection by means of a dot hybridization assay. // Molecular and Cellular Probes.-1988.- 2.- p. 75-82.

76. Esterhuysen-JJ Prehaud-C Thomson-GR A Liquid-Phase Blocking ELISA for the Detection of Antibodies to Rabies Virus.// J.Virol. Methods.- 1995.-V. 51.- p. 31-42

77. Felsenstein J. PHYLIP: phylogeny inference package, version 3.52c.// University of Washington.- Washington.- 1993.- p.68.

78. Flamand A., Wiktor T.J., Koprowski H. Use of hybridoma monoclonal antibodies in the detection of antigenic differences between rabies and rabies-related virus proteins. II. The glycoprotein. // J.Gen.Virology.- 1980.- 48.-p.105-109.

79. Follmann E.H., Ritter D.G., Beller M. Survey of fox trappers in northern Alaska for rabies antibody // Epidemiol. Infect.- 1994.- v. 113.- № 1.- p 137-141

80. Fodor I., V.I. Grabko, Khozinsky, M.A. Selimov. Nucleotide and deduced amino acid sequences of the glycoprotein gene of rabies virus vaccine strains Vnukovo-32.//Arch. Virol.- 1994.- 135.- n.3-4.- p.451-459.

81. Fu Z.F., Zheng Y., Wunner W.H., Koprowski H., Dietzshold B. Both the N-and the C-terminal domains of the nominal phosphoprotein of rabies virus are invilved in binding to the nucleoprotein.// Virology.- 1994,- 200,- p. 590-597

82. Gamoh-K Senda-M Itoh-0 Muramatsu-M Hirayama-N Koike-R Endoh-YS Minamoto-N Use of ELISA for in-Vitro Potency Test of Rabies Vaccines for Animal Use.// BIOLOGICALS.- 1996.- Vol 24.- Iss 2.- p. 95-101

83. Gaudin Y.H., Rugrok R.H., Tuffereau C., et al. Rabies virus glycoprotein is a trimer.//Virology.- 1992.- 187.- p.627-632

84. Gaudin-Y Raux-H Flamand-A Ruigrok-RWH. Identification of Amino-Acids Controlling the Low-pH-Induced Conformational Change of Rabies Virus Glycoprotein.// J. Virol.- 1996.- Vol 70.- Iss 11.- p. 7371-7378

85. Gorman O. T., Bean W.J., Kawaoka Y., Donatelli L., Guo Y., and Webster R.G. Evolution of influenza A virus nucleoprotein genes: implications for the origin of H 1N1 human and classical swine viruses. // J.Virol.- 1991.- 65.- p. 3704-3714.

86. Gribencha, S.V., Vanag K.A., Barinsky I.F. Separation of two street rabies virus strain population into two biological variants.// Acta Virol.-1981.-25.- p. 168.

87. Gribencha S.V., Gribanova L. Ya., Malkov G.B., and Barinsky I.F. Population structure of some street rabies virus strains.// Arch Virol.-1989.-104.-p. 347-350.

88. Hass L. Molecular Epidemiology of Animal Diseases. // J. Vet. Med.- 1997.-Vol. 44.- p. 257-272.

89. Hamir-AN Moser-G Fu-ZF Dietzschold-B Rupprecht-CE Immunohistochemical Test for Rabies Identification of a Diagnostically Superior Monoclonal-Antibody.// Vet. Rec.- 1995.- Vol 136.- Iss 12.- p. 295-296

90. Heaton-PR Johnstone-P Mcelhinney-LM Cowley-R Osullivan-E Whitby-JE. Heminested PCR Assay for Detection of 6 Genotypes of Rabies and Rabies-Related Viruses. // J.Clin.Micr.- 1997.- Vol 35.- 11.- p. 27622766

91. Heaton P.R., McElhinney L.M., Lowings J.P. Detection and identification of rabies and rabies-related viruses using rapid-cycle PCR. // J Virol Methods.-1999.- v 81.-№ l-2.-p.63-9

92. Higgins D.G., Sharp P.M. Fast and sensitive multiple sequence aligments on a microcomputer.//Cabios.- 1989.-5.-p. 151-153.

93. Hiramatsu K. Mifune K. Mannen K, Nishizono A, Kawano H. lto Y, Kawai A . Mapping of the antigenic determinants recognised by monocional antibodies asainsi; the M2 protein of rabies virus.// Virology.- 1992.- 187.- p. 472—479

94. Hiramatsu K. Mannen K, Mifime K, Nishizono A, Takita-Sonoda Y Comparative sequence analysis of the M gene among rabies virus strains and its expression by recombinant vaccinia virus.// Virus Genes.-1993.- 7.- p. 83-88 .

95. Holland J.J., Torrey J.C., Steinhauer D.A. RNA virus populations an quasispecies. // Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 1992.- 176.- p. 1-20.

96. Hostnik-P Grom-J. An Indirect Immunofluorescent Test for Detection of Rabies Virus-Antibodies in Foxes.// J. WILDLIFE DISEASES.-1997.- Vol 33.- Issl.-p. 143-145

97. Ito Y. Nishizono A. Mannen K. Hiramatsu K. Mifime K. Rabies virus M protein expressed in Eschericlua coli and its regulatory role in virion-associated transcriptase activity.//Arch Virol.- 1996.- 141.- p.671-683

98. Jacson A. C., Dorothy L. Reimer and William H. Wunner. Detection of rabies system of experimentally infected mice using in situ hybridization with RNA probes. // Journal of Virol. Methods.- 1989.- 25.- p. 1-12.

99. Jacson A. C., and William H. Wunner. Detection of Rabies Virus Genomic RNA and mRNA in Mouse and Human Brains by Using In Situ Hybridization. // J. Virology.-1991.- vol. 65.- N6.- p.34-40.

100. Jayakumar-R Nachimuthu-K Padmanaban-VD A Dot Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assay (Dot ELISA) Comparison with Standard Fluorescent-Antibody Test (Fat) for the Diagnosis of Rabies in Animals.//Comp.Immun.Microb.Infec.Dis.- 1995.- V.18.- Iss 4.- p. 269-273

101. Jayakumar-R Thirumurugan-G Nachimuthu-K Padmanaban-VD Detection of Rabies Virus-Antigen in Animals by Avidin- Biotin Dot ELISA. // Zent.Bakter.Inter.J. Med. Mic. Virol. Parasit.Infec. Dis.-1996.- Vol 285.- Iss 1.-p. 82-85

102. Johnson H.N., Emmons R.W. Rabies virus. In Laboratory Diagnosis of viral Infections.// Lennette E.H., eds.- New York.- Basel: Marcel Dekker, Inc.-1985.-p. 425-40

103. Kamolvarin-N Tirawatnpong-T Rattanasiwamoke-R Tirawatnpong-S Panpanich-T Hemachudha-T. Diagnosis of Rabies by Polymerase Chain-Reaction with Nested Primers.//! Infec.Dis.- 1993.- Vol 167.- Iss 1.- p. 207-210

104. Kappeler, A. Bat rabies surveillance in Europe.// Rabies Bulletin Europe.-1989.- 13.-4.-p. 12-13.

105. Katayama S, Yamanaka M, Ota S, Shimizu Y A new quantitative method for rabies virus by detection of nucleoprotein in virion using ELISA // J Vet Med Sci.- 1999.- v. 61, № 4.- p. 411-416

106. Kawano H., Mifune K., Manen K., et al. Protection against rabies in mice by a cytotoxic T cell clone recognizing the glicoprotein of rabies virus. // J. Gen. Virol. -1990.-71.- p. 281-287

107. King, A., Davies, P. & Lawrie, A. The rabies viruses of bats.// Veterinary Microbiology.- 1990.- 23.- p.165-174.

108. King-AA Monoclonal-Antibody Studies on Rabies-Related Viruses.// Onder J. Vet. Res.- 1993.- Vol 60.- Iss 4.- p. 283-287

109. King A. A. African overview and antigenic variation. In: King A (ed) Proceedings of the international conference on epidemiology control and prevention of rabeis in eastern and southern Africa.- Fondation Marcel Merieux.- 1993.-p.65

110. King-AA., Meredith C.D., Thomson G.R. Canid and viverrid rabies viruses in South Africa. // Onderstepoort J. Vet. Res.- 1994.- 60.- p.295-299.

111. Kissi B., TordoN., Bourhy H. Genetic Polymorphim in the Rabies Virus Nucleoprotein Gene. //Virology.- 1995.- 209.- p.526-537.

112. Kumar S., Tamura K., Nei M. MEGA: molecular evolutionary genetics analysis software for microcomputers. // Cabios.- 1994,- 10.- p. 189-191.

113. Kuzmin I.V. An arctic fox rabies virus strain as the cause of human rabies in Russian Siberia. // Arch Virol.- 1999.- v. 144.- № 3.- p 627-629

114. Lafon M., Boruhy H., Sureau P. Immunity against the European bat rabies (Duvenhage) virus induced by rabies vaccines: An experimental study in mice. //Vaccine.- 1988.-6.-362-368.

115. Larson J.K., Wunner W.H. Nucleotide and deduce amino acid sequences of the nominal nonstructural phosphoprotein of the ERA, PM and CVS-11 strain of rabies virus.// Nucleic Acids Res.-1990.- 18.- p. 7172

116. Last-RD Jardine-JE Smit-MME Vanderlugt-JJ Application of Immunoperoxidase Techniques to Formalin-Fixed Brain-Tissue for the Diagnosis of Rabies in Southern Africa.// Onder.J.Vet.Res.- 1994.- Vol 61.- Iss 2,-p. 183-187

117. Lemercier-P Jacob-Y Tordo-N The Complete Mokola Virus Genome Sequence Structure of the RNA-Dependent RNA-Polymerase.// J.Gen. Virol.-1997.-Vol 78.-p. 1571-1576

118. Lentz Thomas. Rabies virus receptors. // Trends Neurosci.- 1985.- 8.- № 8.- p. 360-364.

119. Li W.H., Gojobori T., Nei M. Pseudogenes as a paradigm of neutral evolution. //Nature.- 1981.- 292.- p.237-239.

120. Lodmel D.L., Sumner J.W., Esposito J.J., Bellini W.J., and Ewalt L.C. Raccoon poxivirus recombinants expressing the rabies virus nucleoprotein protect mice against lethal rabies virus infection.// J. Virol.- 1992.- 65.- p.3400-3405;

121. Mannen K., Niramatsu K., Mifune K., Sakamoto S. Conserved nucleotide sequence of rabies virus cDNA encoding the nucleoprotein.// Virus Genes.-1991.-5.- p. 69-73

122. Martinez M.Z., Carrillo C., Gonzalez-Candelas F., Moya A., Domingo E., Sobrino F. Fitness alteration of foot-and-mouth disease virus mutants: measurement of adaptability of viral quasispecies. // J. Virology.- 1991.- 65.- p. 3954-3957.

123. Martinezarends-A Astoul-E Lafage-M Lafon-M Activation of Human Tonsil Lymphocytes by Rabies Virus Nucleocapsid Superantigen.// Clinical Immunology and Immunopathology.- 1995.- Vol 77.- Iss 2.- p. 177-184

124. Martinezarends-A Superantigen Properties of the Rabies Virus Nucleocapsid.// INTERCIENCIA.- 1997.- Vol 22.- Iss 2.- p. 68-72

125. Mccoll-KA Gould-AR Selleck-PW Hooper-PT Westbury-HA Smith-JS. Polymerase Chain-Reaction and Other Laboratory Techniques in the Diagnosis of Long Incubation Rabies in Australia// Aust.Vet.J.- 1993.- Vol 70.- Iss 3.- p. 84-89

126. Mebatsion-T Cox-JH Conzelmann-KK Molecular Analysis of Rabies-Related Viruses from Ethiopia.// Onder.J.Vet. Res.- 1993.- Vol 60.- Iss 4.- p. 289-294

127. Mercier, Y. Jacob and N. Tordo. The complete Mokola virus genome sequence: structure of the RNA-dependent RNA polymerase. // J. Gen. Virology.-1997.- 78.- p. 1571-1576.

128. Meslin F.X., Kaplan M.M., Koprowski H. Laboratory Techniques in Rabies. // World Healf Organization.- 4-th edition, Geneva .- 1996.- p.67

129. Minamoto-N Tanaka-H Hishida-M Goto-H Ito-H Naruse-S Yamamoto-K Sugiyama-M Kinjo-T Mannen-K Mifune-K Linear and Conformation-Dependent Antigenic Sites on the Nucleoprotein of Rabies Virus.// Microb.Immun.- 1994.- Vol 38.- Iss 6.- p. 449-455

130. Montanohirose-JA Lafage-M Weber-P Badrane-H Tordo-N Lafon-M. Protective Activity of a Murine Monoclonal-Antibody Against European Bat Lyssavirus-1 (Ebll) Infection in Mice.// VACCINE.- 1993.-Vol 11.- Iss 12.-p. 1259-1266

131. Montanohirose-JA Lafage-M Lafon-M Measurement of Rabies Virus N-Protein in Rabies Vaccines.// Res. Virology.- 1995.- Vol 146.- Iss 3.- p. 217224

132. Morimoto K., Ohkubo A., Kawai A. Structure and transcription of the glycoprotein gene of attenuated HEP-Flury strain of rabies virus. // Virology.-1989.- 173.- p. 46-477

133. Morimoto K., Ni Y-J., Kawai A. Syncitium formation is induced in the murine neuroblastoma cell cultures which produce pathogenic type G proteins of the rabies virus. // Virology.- 1992.- 189.- p.203-216

134. Morimoto-K Patel-M Corisdeo-S Hooper-DC Fu-ZF Rupprecht-CE Koprowski-H Dietzschold-B Characterization of a Unique Variant of Bat Rabies Virus Responsible for Newly Emerging Human Cases in North-America.// PNAS.- 1996.- Vol 93.- Iss 11.- p. 5653-5658

135. Nadin-Davis S. A., G.A. Casey and Wandeler. Identification of regional variants of the rabies virus within the Canadian of Ontario. // J. Gen. Virology.-1993.-74.-N5.-p. 829-837

136. Nadin-Davis-SA Casey-GA Wandeler-AI A Molecular Epidemiologic-Study of Rabies Virus in Central Ontario and Western Quebec.// J. Gen. Virology.- 1994.- Vol 75.- Iss 10.- p. 2575-2583

137. Nadin-Davis SA Huang-W Wandeler-AI. The Design of Strain-Specific Polymerase Chain-Reactions for Discrimination of the Raccoon Rabies Virus

138. Strain from Indigenous Rabies Viruses of Ontario. // J.Virol.Methods.- 1996.-Vol 57.- Iss 2.- p. 141-156

139. Nadin-Davis S.A., Huang W., Wandeler A. I. Polymorphism of rabies viruses within the phosphoprotein and matrix protein genes. // Arch. Virol.-1997.- 142.-p. 979-992

140. Nel-LH Thomson-GR Vonteichman-BF Molecular Epidemiology of Rabies Virus in South-Africa.// Onder.J.Vet.- 1993.- Vol 60.- Iss 4.- p. 301-306

141. Nikolaev V.K., Leontovich A.M., Drachev V.A., Brodsky L.I., Building multip-le alignment using iterative analyzing biopolymers structure dynamic improvement of the initial motif alignment.// Biochemistry.- 1997.- 62.-p.578-582

142. Perrin P., Rollin P.E., Sureau P. A rapid rabies enzyme immuno-diagnosis (RRIED): a useful and simple technique for the routine diagnosis of rabies. // J. of Biological Standardization.- 1986.- 14.- p. 217-22

143. Poch, 0., Blumberg, B.M., Bougueleret, L. & Tordo, N. Sequence comparison of five polymerases (L proteins) of unsegmented negative-strand RNA viruses: theoretical assignments of functional domains.// J.Gen.Virology.- 1990.- 71.-p.l 153—1162.

144. Rayssiguer C., Livia Cioe, Elizabeth Withers, William H. Wunner and Peter J. Curtis. Cloning of rabies virus matrix protein mRNA and determination of its amino acid sequence. // Vir.Research.- 1986.- 5.- p. 177-190.

145. Rooijakkers-EJM Uittenbogaard-JP Groen-J Osterhaus-ADME. Rabies Vaccine Potency Control Comparison of ELISA Systems for Antigenicity Testing.// J.Vir. Methods.- 1996.- Vol 58.- Iss 1 -2.- p. 111 -119

146. Rosatte R.C. Rabies in Canada: history, epidemiology and control. // Canadian Veterinary Journal.- 1988.- 29.- p. 362-365

147. Rupprecht C.E., Dietzschold B., Wunner W.H., Koprowski H. Antigenc relationships of lyssaviruses. In: Baer G.H. (ed) The natural hystory of rabies, 2nd edn.-1991,- CRC, Boca Raton.- p.78

148. Rupprecht C.E., Dietzschold B., Koprowski H. Lyssaviruses. // SpringerVerlad Berlin Heidelberg, New York, London, Paris, Tokyo, Hong Kong, Barcelona, Budapest.-1994.- p.34-67.

149. Sacramento-D Bourhy-H Tordo-N. PCR Technique as an Alternative Method for Diagnosis and Molecular Epidemiology of Rabies Virus. // Molecular and Cellular probes.- 1991.- Vol 5.- Iss 3.- p. 229-240;

150. Sacramento D., Hassan Badrane, Herve Bourhy and Noel Tordo. Molecular epidemiology of rabies virus in France: comparison with vaccine strains. // J.Gen. Virology.- 1992.- 73.-N5.- p.l 149-1158.

151. Sang-E Farr-RW Fisher-MA Hanna-SD. Antemortem Diagnosis of Human Rabies.// J. Family Practice.- 1996.- Vol 43.- Iss 1.- p. 83-87

152. Selimov, M. A., Tatarov, A. G„ Botvmkin, A. D., Klueva, E. V„ Kulikova, L. G. & Khismatullina, N. A. Rabies-related Yuli virus: identification with a panel of monoclonal antibodies.//Rabies Bulletin Europe.- 1989.- 6.- p. 690-692.

153. Smith J.S. Rabies virus epitopic variation: use in ecologic studies. In Advances in Virus Research (Maramorosch K., Murphy F.A., Shatkin A.J., eds).- San Diego: Academic Press.- 1989.- p. 215-53

154. Smith J.S., Orciari L.A., Yager P., Seedel H.D., Warner C.K., Epidemiologic and historical relationships among 87 rabies virus isolates as determined by limited sequence analysis. // J. Infect. Dis.- 1992.- 166.- p.296-307.

155. Sokol F., Schlumberger H.D., Wiktor T.J., Koprowski H. and Humeler K. Biochemical and biophysical studies on the nucleocapsid and on the RNA of rabies virus.// Virology.- 1969.- 38.- p. 651-665;

156. Tabel H, Corner AH. Webster WA, Casey GA History and epizootiology of rabies in Canada.// Can. Vet. J.- 1974.-15.- p.271-281

157. Thoulouze-MI Lafage-M Montanohirose-JA Lafon-M. Rabies Virus Infects Mouse and Human-Lymphocytes and Induces Apoptosis.// J.Vir.-1997.-Vol 71.- Iss 10.- p. 7372-7380

158. Theberge J.B., Forbes G.J., Barker I.K., Bollinger T. Rabies in wolves of the Great Lakes region // J Wild. Dis. 1994.- v. 30.- № 4.- p 563-566

159. Tordo N., Poch O., Ermine A., Keith G. Primary structure of leader RNA and nucleoprotein genes of the rabies genome: segmented homology with VSV.// Nucleic Acid Res.-1986a.-14.- p.2671-2683

160. Tordo N., Poch O., Ermine A., Keit G., and Rougeon F. Walking along the rabies genome: Is the lage G-L intergenic region a remnant gene.// PNAS.-1986b.- 83.- p.3914-3918;

161. Tordo N., Poch O. Structure of rabies virus. In Rabies (Campbell J.B., Charlton K.M., eds) Boston: Kluwer Academic Publishers.-1988.- p. 25-45.

162. Tordo-N Badrane-H Bourhy-H Sacramento-D. Molecular Epidemiology of Lyssaviruses Focus on the Glycoprotein and Pseudogenes. // OnderJ.Vet.Res.- 1993.- Vol 60.- Iss 4.- p. 315-323

163. Tuffereau C., Leblois H., Benejean J., Coulon P., Lafay F., Flamand A. Arginine of Lisine in position 333 of ERA anl CVS glicoprotein is necessary for rabies virulence in adult mice. // Virology.- 1989.- 172.- № 2.- p. 206-212.

164. Vincent J., Bussereau F., Sureau P. Immunological relationships between rabies virus and rabies-ralated viruses studied with monoclonal antibodies to Mokola virus. // Annals de I'lnstitut Pasteur Virologie.- 1988.- 139.- p.157-73.

165. Vonteichman-BF Thomson-GR Meredith-CD Nel-LH Molecular Epidemiology of Rabies Virus in South-Africa Evidence for 2 Distinct Virus Groups.//J.Gen.Virol.- 1995.- Vol 76.- Iss JAN.- p. 73-82

166. Webster W.A., casey G.A., charlton K.M. Major antigenic groups of rabies virus in Canada determined by antinucleocapsid monoclonal antibodies. // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Diseases.- 1986.- 9.- p.59-69.

167. Weiler GJ; Garner GW; Ritter DG Occurrence of rabies in a wolf population in northeastern Alaska. // J Wildl Dis.- 1995.- v. 31.-№1.- p 79-82

168. Whitby-JE Johnstone-P Sillerozubiri-C. Rabies Virus in the Decomposed Brain of an Ethiopian Wolf Detected by Nested Reverse Transcription-Polymerase Chain-Reaction. J. Wildlife Dis.- 1997.- Vol 33.- Iss 4.- p. 912915

169. Wiktor T.J., Gyorgy E., Schlumberger H.D., Sokol F., Koprowski H. Antigenic properties of rabies virus components. // J. Immunol.- 1973a.- 110.-p.269-276

170. Wiktor T.J., Koprowski H. Monoclonal antibodies against rabies virus produced by somatic cell hybridization: detection of antigenic variants. // PNAS.- 1978.- 75.- p.3938-42.

171. Wiktor T.J., Flamand A., Koprowski H., Use of monoclonal antibodies in diagnosis of rabies virus infection and differentiation of rabies and rabies-related viruses. // J. Virol. Methods.- 1980.- 1.- p. 33-46.

172. Wiktor T.J., and Koprowski H. Antigenic variants of rabies virus. // J. Exp. Med.- 1980.- 152.- p.99-112.

173. Wunner W.H., Larson J.K., Dietzschold B., Smith C.L. The molecular biology of rabies viruses. // Reviews of Infectious Diseases.- 1988.- 10.- p.771-84.

174. Yamamoto K., Yoshikura H. Relation between genomic and capsid structures in RNA viruses.// Nucleic Acids Res.- 1986.- 14.- p.389-396.

175. Yelverton E., Norton B., Obijeski J.F., Geoddel D.V. Rabies virus glycoprotein analogs: biosynthesis in Esherihia coli. // Science.- 1983.- 219.- p. 614-620

176. ОСНОВАНИЕ: Выполнение НИР по теме 01.01.03 и указание директора ВНИЙВВиМ №14 от 27 августа 2001 г.

177. Комиссия в период с 27 августа по 10 сентября 2001 г. провела проверку «Набора препаратов для выявления РНК вируса бешенства методом ПЦР» в соответствии с программой комиссионных испытаний, утвержденной директором ВННИВБиМ от 27 августа 2001 г.

178. Комиссионные испытания проведены на базе лаборатории «Биофизики» и «Диагностики».

179. ЦЕЛЬ ИСПЫТАНИЙ Оценить чувствительность и специфичность «Набора препаратов.» для обнаружения РНК вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса классического и арктического бешенства в пробах головного мозга животных методом ПЦР.

180. Результаты испытаний представлены в прилагаемом протоколе.2. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

181. Бирусспецифические амплифицированные фрагменты при исследовании РНК вируса арктического бешенства из Якутии (олеиь-Тикси, соболь-Томпонский район, колонок- Намский район) имели размеры 290 п.о., отличающиеся от вирусов классического бешенства.

182. При амплификации пробы головного мозга интактных мышей ПЦР продуктов не обнаружено.

183. Чувствительность «Набора препаратов.» для обнаружения РНК вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса классического и арктического бешенства в пробах головного мозга животных составляет 100 МЛД50/мл. ■

184. Основные этапы исследований представлены в проекте «Методических указаний по выявлению РНК вируса бешенства методом полимеразной цепной реакции»1. ПРЕДЛОЖЕНИЯ

185. Предоставить акт комиссионных испытаний "Набора препаратов длявыявления РНК вируса бешенства методом ПЦРН на рассмотрение Ученого совета ВНИИВВиМ и директора института.

186. Провести межведомственные комиссионные испытания "Набора препаратов ." с целью их практического применения в схеме диагностики бешенства.

187. Председатель Члены комиссии:

188. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК-' лI

189. ВСЕРОССИЙСКИЙ ЙАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ I

190. УТВЕРЖДАЮ Директор ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии1. В.М. Котляров ¿001 г.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

191. ПО ВЫЯВЛЕНИЮ РНК ВИРУСА БЕШЕНСТВА МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ1. Покров 2001 г.