Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов"

На правах рукописи

Скорбина Елена Алексаццровна

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ И ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МЕЛАНИНСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ

Специальность: 03.00.23 — Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь — 2005

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор химических наук, профессор

Брыкалов Анатолий Валерьевич

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук

Иванов Виктор Михайлович

доктор биологических наук Жарникова Ирина Викторовна

Ведущая организация: Северо-Кавказский государственный

технический университет

Защита состоится 17 января 2006 г. в 1000 часов на заседании диссертационного совета при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина 1, корпус 2, аудитория 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке СГУ по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина 1.

Автореферат разослан «_»_200_ г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук у Джаццарова Т. И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Важнейшим направлением современной биотехнологии является разработка технологии получения биологически активных веществ, в частности меланинов, которые находят широкое применение в медицине, фармакологии, пищевой и других отраслях промышленности.

В природе распространены меланины животного и микробиологического происхождения, проявляющие высокую биологическую активность, отличающиеся широким разнообразием по химическому составу, физиологическим свойствам.

Актуальным представляется поиск наиболее перспективного сырьевого источника для выделения меланинов и разработка на его основе биотехнологии получения препарата с полифункциональными свойствами и максимальным сохранением комплекса природных соединений.

Анализ литературных источников за последние 20 лет указывает на ограниченное число публикаций по применению меланинсодер-жащих препаратов в качестве активных регуляторов роста растений. В связи с этим возникает необходимость разработки препарата на основе меланинов, а также комплекса исследований данного препарата с оценкой экономической эффективности его применения в растениеводстве.

Цель работы. Разработка технологии получения комплексного препарата с полифункциональным действием на основе природного меланина и пиразолинов, изучение его биологической активности и проведения исследований по применению данного препарата в растениеводстве.

Задачи исследования:

— изучить влияние сырьевого источника на выход меланина и его биологическую активность, исследовать ростостимулирующую и фунгицидную активность синтетических препаратов на основе пиразолинов;

— провести исследования с целью установления оптимального сырьевого источника меланина, оптимальных концентраций компонентов препарата и их соотношение;

— разработать технологию получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, изучить его состав и провести стандартизацию;

— исследовать ростостимулирующие и фунгицидные свойства комплексного препарата и его компонентов в лабораторных услови-

I ^ос. НАЦИОНАЛЬНАЯ !

библиотека .

С.Пет«*т В/ \

ях, изучить действие препарата на продуктивность агрокультуры и его влияние на качество продукции;

— оценить экономическую и энергетическую эффективность, экологическую безопасность разработанной технологии получения комплексного препарата и его применении в растениеводстве.

Научная новизна работы. Впервые установлен эффект ростостиму-лирующей активности природного меланина при действии на семена озимой пшеницы. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Pénicillium по ростостимулирующей активности значительно превосходит активность меланинов растительного происхождения и данный сырьевой источник обеспечивает значительный выход пигмента и его высокую биологическую активность.

Впервые исследованы ростостимулирующая и фунгицидная активности 22-х препаратов на основе пиразолинов, среди которых наибольшую антифунгальную активность проявляют 5 производных пиразолинов.

Впервые разработана технология получения комплексного препарата, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции в щелочной среде меланинов с последующим осаждением продукта и смешиванием с производным пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Осуществлена стандартизация препарата по биологической эффективности, биоантиаксидантной активности, уровню оптической плотности, определены условия сохранения стабильности препарата в течение трех лет.

Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина, который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2—2,5 раза интенсивнее контроля.

Выявлен комплексный положительный эффект действия разработанного комплексного препарата на основе меланина и пиразоли-напрепарата и его компонентов, проявляющийся в стимуляции роста и развития растений, повышении устойчивости растений к заболеваниям при предпосевной обработке семян озимой пшеницы.

Научно-практическая значимость. В ходе исследований были получены экспериментальные данные по оптимизации стадий биотехнологии получения комплексного препарата с полифункциональными свойствами. Препарат стандартизирован по биологической эффективности, установленной проявлением ростостимулирующей активности на се-

мена агрокультур, уровню оптической плотности, биоантиоксидант-ным свойствам.

Проведенные производственные испытания препарата на основе меланина и 4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигадро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислоты показали, что при обработке семян пшеницы препаратом при дозировке 2 л/т наблюдается эффект повышения на 12,3% продуктивности растений, установлено значительное улучшение качественных показателей продукции растениеводства, что подтверждено актом внедрения.

Основные положения диссертации использованы в учебном процессе по курсу «Основы биотехнологии» студентов агрономических специальностей в Ставропольском государственном аграрном университете.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Результаты сравнительных исследований по проявлению росто-стимулирующей активности меланинов микробиологического и растительного происхождения.

2. Синтез препарата на основе пиразолина 4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокисло-та, с установлением его ростостимулирующей активности при действии на растение и фунгицидной активности при действии на споры фитопатогенных грибов.

3. Разработка технологии получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции меланинов в щелочной среде, с последующим осаждением пигмента и смешиванием с производным пиразолина.

4. Результаты исследований по выявлению в комплексном препарате на основе меланина и пиразолина, с усилением ростостимулирующей активности, фунгицидных и биоантиоксидантных свойств, обеспечивающих повышение продуктивности агрокультуры при использовании препарата для предпосевной обработки агрокультуры.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на научно-практических конференциях Ставропольского государственного аграрного университета в 2002, 2003, 2004, 2005 годах; Международной научной конференции «Повестка дня на XXI век: Программа действия — экологическая безопасность и устойчивость развития» (Став-

рополь, 2003); Всероссийской научной конференции «Биотехнология-2003» (Сочи, 2003); научно-методической конференции «Университетская наука — региону» (Ставрополь, 2004); 68-й научно-практической конференции «Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2004); Всероссийской научной практической конференции, посвященной 40-летию факультета защиты растений (Ставрополь, 2004); 50-й научной конференции «Университетская наука — региону» (Ставрополь, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, библиографического списка, примечаний. Работа изложена на 136 страницах, содержит 9 рисунков, 25 таблиц. Библиографический список состоит из 156 наименований.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в 2002—2005 гг. на кафедре химии и защиты растений и в учебно-научной испытательной лаборатории СтГАУ, их производственная апробация осуществлялась в Изобиль-ненском районе Ставропольского края. В качестве сырья для получения меланина использовали растительные объекты: лузгу подсолнечника, кожуру банана и винограда, почвенные грибы родов Pénicillium, Aspergilus и Cladosporium, выделенных в чистые культуры в соответствии с методикой по почвенной микробиологии и биохимии, предложенной Д. Г. Звягинцевым (1980). Идентификацию грибов проводили методом микроскопирования по H. М. Пидопличко (1977).

Стадию ультразвуковой обработки проводили на установке УЗДН 2Т, в диапазоне 44 кГц в течение 30 минут. ИК-спектры снимали на спектрофотометре Specord-75IR (Германия) в диапазоне волновых чисел 500—4000 см1. Идентификацию проводили, используя корреляционную диаграмму отнесения полос поглощения основных ipynn и связей. Элементный состав выделенного препарата был определен на CHNS - анализаторе «Cardo Erba» (Италия) 1106 (t =1000 °С). Электронные спектры поглощения раствора меланина в УФ и видимой областях были отсняты при рН — 7—8 на спектрофотометре СФ-26 в диапазоне волн 250-750 им.

Энергию прорастания, лабораторную всхожесть и особенности прорастания семян устанавливали согласно ГОСТ 10968-6-88. При тестировании препаратов на антифунгальную активность применяли методику, предложенную И. А. Карташовой и Э. С. Давидянц (1998). Фито-

патологическую экспертизу семян озимой пшеницы проводили с требованиями ГОСТ 12044-93 и по методике Н. А. Наумовой (1970). Био-антиоксидантные свойства определяли по степени торможения реакции гидроксилирования анилина до пара-аминофенола с регистрацией продуктов фотометрическим методом. Образование гидроксильных радикалов осуществляли по реакции Фентона.

Оценку влияния препарата на продуктивность и качество агрокультуры озимой пшеницы осуществляли по традиционным методикам и в соответствии с ГОСТ 10987-76, 13586.1-68, 10840-64. Биоэнергетическую эффективность предпосевной обработки оценивали соответственно рекомендациям ВИМ(1989).

Экспериментальные данные статистически обрабатывали в ВЦ СГАУ по программе Г. Н. Зайцева (1991) на персональном компьютере РС Реп(шт-3.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Проведены исследования по выделению и исследованию свойств меланинов различной природы, разработке технологии получения биопрепаратов с полифункциональными свойствами на основе меланинов и пиразолинов и изучению физико-химических показателей выделенного меланина грибного происхождения.

Для выбора меланинсинтезирующего сырья были отобраны мицелии грибов, встречающихся в почвах Ставропольского края и способных при росте образовывать темноокрашенный пигмент и некоторые виды растительного сырья (лузга семян подсолнечника, кожура плодов банана и кожура красных сортов винограда) (рис. 1).

5,12

10 8 6 4 2' 0

подсолнечник башн винограл РепюШшт Оас1(кчропит Лвре^Ниь

Рисунок 1 - Выход меланина из различных биологических источников,

( 8

Ю!Ш1

Н...1 I 1 I 1

Проведены исследования по влиянию меланинов различного происхождения на активность прорастания семян и накопления сухой массы проростками и корешками озимой пшеницы. "

В качестве препаратов для обработки семян использовали щелочной раствор меланинов в концентрации 0,1,0,05 и 0,01%. Результаты исследований свидетельствует о том, что практически все исследуемые препараты на основе природных меланинов проявляют ростостимулирую-щие свойства при действии на семена озимой пшеницы. Однако меланины растительного происхождения проявляют меньшую биологическую активность. Меланин, выделенный из гриба рода Pénicillium с концентрацией 0,1%, превышает показатели контроля по длине проростка на 32%, а по его массе на 39%, тогда как меланин винограда только на 8 и 16% соответственно. Меланин, выделенный из мицелия гриба рода Pénicillium, на 2—4% превосходит по всхожести и энергии прорастания и на 10% по длине корешка и проростка известный регулятор роста растений гиббереллин.

Для проявления полифункционального действия препарата необходимо включение в его состав компонентов, обладающих высоким защитным действием. Осуществлен синтез и исследованы свойства ряда пиразолинов, содержащих 3,5-дихлорпиридильный фрагмент. Выходы целевых продуктов пиразолинов составили 75—90%. Состав и строение 22-х образцов биолошчески активных соединений подтверждены данными элементного анализа, ИК- и ПМР'Н-спектроскопии и масс-спектроско-пии. По данным компьютерного скрининга, по программе PASS, осуществлен прогноз фунгицидной активности с вероятностью 60—95%. Кроме изучения фунгицидной активности, проведены исследования ростосги-мулирующих свойств органических соединений ряда пиразолинов по их влиянию на энергию прорастания и всхожесть семян озимой пшеницы. Использованы растворы пиразолинов в концентрации 0,12%. По результатам исследований выявлены группы пиразолинов, наиболее активные производные которых проявляют биологическую активность при воздействии на семена озимой пшеницы. Препараты на основе пиразолинов увеличили рост корешка на 1,5—1,7 см (12%), проростка на 0,5—1,0 см (5—10%), превысили показатель контроля на 62,5-75,0% по массе корешка и на 7-17% по массе проростка. Анализируя ростостимулирующую и фунгицидную активности препаратов на основе пиразолинов, целесообразно в дальнейшем, в качестве компонента комплексного препарата использовать препарат на основе пиразолина (4-(5-гвдрокси-3-метил-1-фе-нил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфо-кислота).

В задачу следующего раздела входила разработка методов оптимального выделения и очистки различных видов меланина из природных

объектов; разработка технологии получения биологически активных препаратов на основе биохимических и биотехнологических методов.

Для повышения выхода конечного продукта, грибного меланина, были оптимизированы стадии роста мицелия грибов на питательной среде, дезинтеграции мицелия и щелочной экстракции меланинов.

При увеличении срока роста мицелия с 8 до 16 дней, наибольший выход меланина был получен из грибов рода Pénicillium на двенадцатый день роста и составил 5,98% (рис. 2).

ci

- Pénicillium

10 12 14 16

рост мецелия, сутки

—■— Qadosporium —д— Aspergilus

Рисунок 2 - Выход меланина в зависимости от природы и срока роста мицелия

С целью дезинтеграции сырьевого источника дополнительно в технологию была включена стадия ультразвуковой обработки мицелия гриба. На установке УЗДН-2Т, при рН = 5,5 проводили дезинтеграцию объекта в диапазоне 44 кГц, время обработки 30 минут. Установлено, что ультразвуковая обработка мицелия гриба позволяет извлечь в 2 раза больше меланина и конечный выход продукта достигает 10%.

Для оптимизации параметров стадии щелочной экстракции меланина из мицелия гриба был реализован двухфакторный эксперимент. В качестве факторов оптимизации были выбраны продолжительность экстракции и соотношения микробиологического сырья и экстрагена. В качестве выходного параметра использовали выход конечного продукта меланина. В качестве изучаемых факторов были исследованы соотношения сырья и экстрагена (С — 1 : 25, 1 : 50, 1 : 100 мл) и время экстракции (1 — 2,6,10,14,18,22 часа) (рис. 3).

В результате обработки экспериментальных данных было получено адекватное уравнение регрессии

В =2,394-0,01С+0,302/, где В — выход меланина в %.

в, %

90 С, мл

73 х > "" ^ " " " 1-, МЛ 90

Рисунок 3 — Поверхности отклика выхода меланина в экстракции при влиянии соотношения сырья и экстрагеиа (С), времени экстракции (1:)

Анализ уравнения показывает, что фактор времени экстракции оказывает доминирующее влияние на конечный выход меланина. Таким образом, учитывая полученные данные, определены оптимальные режимы экстракции меланина из мицелия грибов. Оптимальное время экстракции составляет 22 часа, а соотношение микробиологического сырья и экстрагена 1 : 25.

Для оптимизации стадии смешивания компонентов при получении комплексного препарата был реализован двухфакторный эксперимент. В качестве выходного параметра использовали ростости-мулирующую активность препаратов. В качестве изучаемых факторов были исследованы: концентрация грибного меланина (С = 0,1; 0,05; 0,01%) и соотношение компонентов препарата меланин : пи-разолин (К=1 : 1; 1 : 0,25; 1 : 0,5 2 : 1) (рис. 4). В результате обработки данных было получено уравнение регрессии:

где V.

Ук=0,65 + 1,02 См + 0,005 К,

к ростостимулирующая активность препарата.

К

Ук, мм/ч

0,66 0,100 0,075 0,050

См, »/о0-025

0,075 0,100

См, %

Рисунок 4 - Поверхности отклика ростостимулирующей активности полифункционального препарата с влиянием концентрации меланина (См) и соотношения компонентов препарата меланин : пиразолин (К).

Анализ уравнения показывает, что на конечную ростостимулиру-ющую активность препарата в большей степени влияет концентрация меланина. В технологии получения комплексного препарата меланин применяли в концентрации 0,1% и в соотношении с пиразоли-ном 1:1.

На основании исследований по оптимизации стадий роста мицелия гриба, а также стадий дезинтеграции сырья, условий щелочной экстракции меланина, разработана технология получения комплексного препарата с полифункциональным действием, схема которой представлена на рисунке 5.

Стадии 1—3 включали в себя подготовку микробиологического мицелия для последующего выделения меланина. Стадии 4—8 — получение меланина путем ультразвуковой обработки мицелия, щелочной экстракции с последующим осаждением пигмента соляной кислотой и растворением в щелочной среде. Стадии 9—10 — приготовление второго компонента препарата за счет химического синтеза, включающего в себя реакции диазотирования п-сульфоанилина, азосочетания и реакцию образования производного пиразола, с дальнейшим разведением полученного соединения водой. Стадия 11, предполагает собой смешивание компонентов в оптимальном соотношении. Стадии 12—14 содержат операции по подготовке разработанного препарата к реализации.

Проведены исследования качественных и количественных показателей препарата, методами УФ- и ИК-спектроскопии. Осуществлена стандартизация препарата на основе грибного меланина по оптическим показателям и качественным реакциям (табл. 1).

Таблица 1 - Качественные и количественные показатели препарата на основе грибного меланина

Наименование показателей Препарат на основе меланина

Цвет Коричневый

Прозрачность Прозрачный

РН 8,1

Оптическая активность Дюолмо нм 0,82

Ростостимулирующая активность, % 96-98

Стерильность Стерильный

Биологическая эффективность, % * 69,8

Примечание, биологическая эффективность представлена по отношению к мицелию гриба рода Tilletia caries.

1. Отбор почвы, очистка от примесей

2. Микробиологический посев почвы

3. Выделение грибов рода Pénicillium в чистую культуру

9. Синтез производного пиразола:

1 Реакция диазотирования п-сульсоанилина,

2 Реакция азосочетания;

3 Реакция образования производного пиразола

4. Обработка мицелия гриба | ультразвуком_

5. Экстракция мицелия гриба 0,1Н№ОН

10. Разведение препарата на | основе пиразолина водой |

6. Обработка экстракта концентрированной НС1

13. Розлив и упаковка ЗГ

Рисунок 5 - Блок-схема алгоритма производства комплексного препарата на основе меланина и пиразолина

Проведены исследования по влиянию препаратов грибного пигмента меланина и пиразолина, а также комплексного препарата на их основе на ростостимулирующую активность семян растений (табл. 2).

Таблица 2 - Ростостимулирующая активность меланина и пиразолина при действии на семена озимой пшеницы сорта Дон-95

А Длина, см Масса, г

Вариант * [ Всхожсст % корешка ростка корешка ростка

Контроль 95 95 8,8±0,46 7,9±0,39 2,4±0,12 4,1 ±0,20

Гиббереллин (эталон) 98 98 9,4+0,47 8,9±0,44 2,9+0,14 4,7±0,23

Препарат на основе грибного меланина 98 98 9,6±0,48 8,9±0,44 3,0±0,15 4,6±0,23

Препарат из пиразолина (4-(5-гидрокси-3-мегил-1-фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-ила ю) беизолсульфокислота) 96 99 9,0±0,45 8,4±0,42 2,2+0,11 4,3+0,21

Комплексный препарат (меланин + + пиразолин (4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро- Ш-пиразол-4-илазо) беизолсульфокислота)) 98 100 9,9±0,49 9,8±0,49 3,7±0,18 5,2±0,26

Результаты экспериментальных исследований по изучению сравнительной биологической активности меланина и пиразолина, их влияния на посевные качества семян показали, что по сравнению с контролем во всех вариантах увеличивается всхожесть и энергия прорастания. Особенно эффективно меланин действует на проростки семян пшеницы, увеличивая их длину и массу на 12,6 и 12,2% соответственно. Поскольку меланины по химической природе близки к гумино-вым кислотам, то в соответствии с этим физиологический эффект их действия на семена озимой пшеницы согласно гипотезе Л. А. Христе-вой обусловлен влиянием на энергетический метаболизм клетки. При этом наблюдается активизация процессов окислительного и фотосинтетического фосфорилирования и усиление белоксинтезирующей системы (Кондрашов, 2002).

При объединении меланина и пиразолина в комплекс наблюдается значительное увеличение ростостимулирующей активности. По нашему мнению, указанное явление усиления биологической активности препарата объясняется за счет эффекта синергизма — взаимовлияния компонентов меланина и пиразолина при смешивании.

Меланин выступает как активный регулятор роста, а пиразолин подавляет развитие внутрисемейной инфекции при прорастании зерна, это позволяет получить 100% всхожесть и увеличивает длину проростка на 24,1%, а массу проростка на 26,8%. Снижение заболеваемости растений, развивающихся из семян с высокими показателями качества, может быть связано и с тем фактом, что к появлению активных стадий патогенов, растения набирают достаточную вегетативную массу.

Для оценки ростовых и синтетических процессов в прорастающих семенах были исследованы показатели абсолютной и удельной скорости роста. Препарат на основе грибного меланина увеличивает абсолютную скорость роста корешков на 0,3 мм/ч и проростков на 0,7 мм/ч по сравнению с контролем, а удельную скорость роста корешков на 25%, проростков на 7%. Разработанный комплексный препарат характеризуется лучшими показателями, определяющими скорость роста. Наблюдается увеличение абсолютной скорости роста корешков на 0,5 мм/ч, проростков на 13 мм/ч по сравнению с контролем. Особенно эффективно препарат влияет на массу растения, повышая удельную скорость роста корешков на 50% по сравнению с контролем и на 20% по сравнению с гиббереллином; проростков на 15 и 5% соответственно.

Исследования биоантиоксидантной активности грибного меланина проводили в сравнении с экстрактами чернозема и биогумуса. Для сравнительного анализа, был приведен коэффициент ингибирования, гидроксильных радикалов, образующихся при реакции Фентона. Полученные данные указывают на то, что антиоксидантная активность меланина в 1,4-1,9 раза выше биоантиоксидантной активности экстрактов биогумуса и чернозема. Несмотря на то, что меланин входит в состав и биогумуса, и почвы, сравнительные исследования показали, что в виде препарата, он проявляет более высокую биоантиоксидант-ную активность.

В последующих исследованиях в условиях in vitro нами было установлено ингибирующее действие изучаемых препаратов на рост мицелия гриба, вызывающего твердую головню пшеницы (Tilletia caries). Результаты свидетельствуют о том, что в комплексе действие препаратов усиливается и мицелий прорастает на 69,8% меньше, чем на контроле.

В дальнейшем условия исследований были изменены: питательный субстрат был исключен из опыта, и споры фитопатогенных грибов родов Penicillum, Aspergillus, Drechslera и Alternaría помещались непос-

редственно в растворы изучаемых препаратов. Необходимо отметить, что при действии растворов исследуемых препаратов споры исследуемых грибов утрачивали способность прорастать полноценной гифой и давать жизнеспособный мицелий, однако морфология спор не изменилась.

Таблица 3 - Биологическая эффективность опытных препаратов в подавлении развития спор фитопатогенных грибов (2002-2005)

Вариант Биологическая эффективность, %

РешсШит Авре^Шиэ ПгоМега АНешапа

« ер. ьр. ер

1 Препарат из грибных меланинов 59,4 27,8 35,4 54,7

ч Препарат из пиразолина (4-(5-гидрокси- 3-метил-1 -фенил-4,5-дш идро-1 Н-пиразол- 4-илазо) бензолсульфокислога) 69,6 45,0 66,2 50,3

Комплексный препарат (меланин + пиразолин (4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бешолсульфокислота)) 84,6 81,3 75,3 61,0

Макромолекула пиразолина и меланина состоит из гидрофобных и гидрофильных частей. Таким образом, часть молекулы проходит сквозь клеточные мембраны, а часть остается на поверхности клетки, образуется своего рода «пробка», тем самым проницаемость мембраны снижается, нарушается нормальный обмен веществ клетки (споры). Спора теряет способность прорастать полноценным мицелием. Комплексный препарат способен подавлять развитие патогена эффективнее меланина и пиразолина в отдельности Его биологическая активность нахо-^ дится на уровне 60—84%. Действие препаратов на споры фитопатогенных грибов исследовалось в течение 3-х лет. На протяжении всего ' времени они проявили способность сохранять свои фунгицидные свой-

ства, что говорит о стабильности соединений в течение длительного периода времени.

Проведены исследования по применению препаратов на основе грибных меланинов и пиразолинов в технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95, на опытных делянках опытной станции СГАУ и ССПК «Путь Ленина» (ст-ца Новотроицкая, Изобильненского района, Ставропольского края) на протяжении вегетационных периодов 2002-2005 годов.

Проведенными исследованиями препаратов на основе грибного меланина и пиразолина в посевах озимой пшеницы установлено, что разработанные препараты обладают фунгицидным действием,

проявляющимся в снижении, как распространенности на 40%, так и степени развития заболеваний на 20% по сравнению контролем.

Проведение фитоэкспертизы семян озимой пшеницы способствовало установлению видового состава микрофлоры и определенного влияния на нее изучаемых препаратов. Фитопатологический анализ зерна, полученного с опытных делянок, показал, что во всех вариантах опыта зерно несет альтернариозную инфекцию. К тому же отмечено большое содержание в зерне грибов рода Fusarium (от 1 до 10%). Заспорение зерна грибами рода Pénicillium составило 1-6%, рода Aspergillus 1—2%. Увеличение процента здоровых зерен на 27% свидетельствует об эффективном подавлении развития фитопатогенной микрофлоры опытными препаратами.

Данные, представленные в таблице 4, показывают, что сочетание положительных качеств обоих исследуемых препаратов в виде комплексного препарата позволяет увеличить практически все показатели структуры урожая и соответственно получить прибавку биологического урожая, равную 10,9 ц/га.

По результатам исследований установлено, что применение опытных препаратов благоприятно повлияло на качество зерна, особенно на стекловидность, она увеличилась на 11% и натуру зерна (увеличение на 20%) по сравнению с контролем, и это экономически обосновывает их применение в растениеводстве.

Таблица 4 — Влияние комплексного препарата на биологическую урожайность озимой пшеницы (2002-2005)

Вариант Биологическая урожайность, ц/га Прибавка, ц/га

Контроль 50,5 -

Эталон (байтан-универсал) 58,2 7,7

Препарат из пираюлина (4-(5-гидрокси-3-метил-I -фенил-4,5-ди! ядро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензол-сульфокислота) 52,5 2,0

Препарат на основе грибного меланина 54,7 4,2

Комплексный препарат (меланин +■ пиразолин (4-(5-гидрокси-3-метип-1 -фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота)) 61,4 10,9

НСР05 0,56

Производственные испытания изучаемых препаратов на основе грибного меланина и пиразолинов выявили положительное влияние на эле-

менты структуры урожая, что обеспечило прибавку урожая 5,7 ц/га по сравнению с контрольным вариантом и 3,7 ц/га по сравнению с эталоном (винцит). Также комплексный препарат оказал положительное влияние на показатели качества продукции, увеличив стекловидность зерна на 15% и количество клейковины 0,7%, что подтверждается актом внедрения.

Проведены расчеты экономической эффективности применения разработанного комплексного препарата на основе меланина и пиразо-лина в технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95, достигнут экономический эффект, который выразился в увеличении чистого дохода с 1 га площади на 1259,9 руб. Затраты, связанные с производством комплексного препарата и его применением окупились в 3,8 раза.

Экономическое обоснование позволяет рекомендовать использование разработанного комплексного препарата на основе меланина и пиразолина для предпосевной обработки семян озимой пшеницы с нормой расхода 2 л/т.

Установлена энергетическая эффективность применения разработанного препарата в технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95 по общепринятой методике. Эффективность энергозатрат на предпосевную обработку семян озимой пшеницы в 3,4 раза превышает показатель контроля. Биоэнергетический коэффициент технологии возрос с 3,44 до 3,60.

Таблица 5 — Экономическая эффективность возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95 (ССПК «Путь Ленина», 2004)

Показатели Вариант

хозяйственный контроль (винцит) комплексный препарат (меланин + пиразолин)

Урожайность, ц/га на сумму, руб. 48,3 16446,2 52,0 17706,0

Прибавка урожая, ц/га на сумму, руб. — 3,7 1259,9

Затраты материально-денежных средств, руб/га в т ч дополнительные 9862,9 10190,5 327,6

Себестоимость 1 ц, руб. 204,2 196,0

Чистый доход, руб/га 6583,3 7515,5

Уровень рентабельности, % 66,7 73,8

Окупаемость дополнительных затрат, раз - 3,8

выводы

1. Проведением системного скрининга природных объектов осуществлен выбор сырья для выделения меланина. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Pénicillium по рос-тостимулирующей активности в 1,5 раза превосходит активность меланина растительного происхождения. Исследован элементный состав меланина, установлены его особенности строения по данным ИК- и УФ-спектроскопии.

2. Осуществлен синтез производных пиразолина и проведены сравнительные исследования их фунгицидной и ростостимулирую-щей активностей. Установлено, что наибольшую фунгицидную активность проявляет препарат (4-(5-гидрокси-3- метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Исследован состав данного биологически активного вещества в сопоставлении с данными ИК- и масс-спектроскопии.

3. Разработана технология получения комплексного препарата, включающая стадии выделения грибов рода Pénicillium в чистую культуру, микробиологического синтеза мицелия, дезинтеграции сырья, получения экстрактов меланинов, смешивания с производным пиразола, стерилизующей фильтрации, розлива и фасовки. Планированием и проведением многофакторного эксперимента оптимизирована стадия экстракции меланинов с получением адекватных уравнений регрессии, указывающих на то, что факторы продолжительности экстракции и соотношение масс сырья и экстрагента оказывают доминирующее влияние на биологическую активность препарата.

4. Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота), который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2-2,5 раза интенсивнее контроля. Механизм физиологического действия меланинов в комплексном препарате на семена озимой пшеницы, возможно, определяется активизацией процессов окислительного и фотосинтетического фосфорилирования и усилением белок-синтезирующей системы.

5. Определены сравнительные биоантиоксидантные свойства грибного меланина, экстракта биогумуса и водной вытяжки из почвы

в реакции торможения гидроксилирования анилина. Установлено, что противорадикальная активность меланина по реакции ингибирования гидроксильных радикалов, образующихся при реакции Фентона, в 1,4-1,9 раза выше активности экстрактов из биогумуса и чернозема. Биоантиоксидантная активность меланина определяется особенностями его строения, полифункциональностью органических групп.

6. По данным экспериментальных исследований выявлено, что комплексный препарат на основе меланина и производного пиразо-лина является активатором прорастания семян зерновой культуры, что обеспечивает повышение уровня продуктивности озимой пшеницы по сравнению с контролем на 12,3% в производственных условиях, а также снижение зараженности зерна инфекцией на 27% эффективнее по сравнению с контролем.

7. Выявлена экономическая и энергетическая эффективность применения разработанного препарата для предпосевной обработки семян озимой пшеницы с увеличением эффективности энергозатрат в 3,4 раза по сравнению с показателем контроля.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В технологии получения меланинсодержащих препаратов в качестве исходного сырья рекомендуем использовать мицелий гриба рода Pénicillium после 14 дней роста, который предварительно дезишегри-руют ультразвуком и далее подвергают экстракции 5% раствором гид-роксида натрия, при массовом соотношении 1: 25-1: 35 с последующим осаждением продукта раствором соляной кислоты, что позволяет получить выход меланина до 10%.

В технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95 рекомендуем предпосевную обработку комплексным препаратом на основе меланина и пиразолина, с нормой расхода 2 л/т, что позволяет получить прибавку биологического урожая озимой пшеницы 3,7-5,7 ц/га.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ:

1. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Исследование ростостиму-лирующей активности экологически безопасных препаратов на основе пиразолинов // Повестка дня на XXI век: программа действия - экологическая безопасность и устойчивость развития : матер, международной научн. конф. — Ставрополь, 2002. - С. 158-160.

2. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Свойства биофунгицидов растительного и микробиологического происхождения // Химизация растениеводства и вопросы экологии : сб. науч. тр. — Ставрополь, 2002. - С. 18-21.

3. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Исследование ростостимулиру-ющей и фунгицидной активности синтетических и природных препаратов на основе пиразолинов и грибных меланинов // Биотехнология —2003: матер, всероссийской науч.-пракгич. конф. — Сочи,

2003. - С. 4-7.

4. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Исследование ростостимули-рующей и фунгицидной активности комплексных природных и синтетических препаратов // Защита и карантин растений : сб. науч. тр. - Ставрополь, 2003. — С. 7—10.

5. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А., Романенко, Е. С. Биологическая активность препаратов на основе пиразолинов и меланинов // Современные достижения в химии, биологии и экономике : сб. науч. тр. — Ставрополь, 2004. — С. 8—11.

6. Скорбина, Е. А. Исследование свойств комплексного препарата на основе пиразолинов и грибных меланинов // Актуальные проблемы современных наук: сб. науч. тр. — Ставрополь, 2004. — С. 158-160.

7. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Технология получения и свойства грибных меланинов // Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе : матер, науч. конф. — Ставрополь,

2004. - С. 34-37.

8. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Технология получения комплексного препарата и его биологическая активность // Матер. Всероссийской научно-практич. конф., посвященной 40-летию факультета защиты растений. - Ставрополь, 2004. — С. 69-72.

9. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Выделение природного меланина и его применение в растениеводстве // Университетская

наука — региону: матер. 50-й науч. конф. — Ставрополь, 2005. -С. 61-62.

10. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Технология получения комплексного препарата с полифункциональными свойствами // Проблемы экологии и защиты растений в сельском хозяйстве : матер. 69-й науч.-практич. конф. — Ставрополь, 2005. — С. 90-93.

11. Брыкалов, А. В., Скорбина, Е. А. Применение комплексного препарата на основе меланина в растениеводстве // Актуальные проблемы современных наук : сб. международной науч.-практич. конф. — Т. 1. — Ставрополь, 2005. — С. 369-372.

Подписано в печать 14.12.2005. Формат 60х84'/16. Бумага офсетная. Гарнигура «Times». Печать офсетная Усл. печ.л. 1,4. Тираж 100 экз. Заказ №802.

Налоговая льгота — Общероссийский классификатор продукции ОК 005-93-953000

Издательство Ставропольского государственного аграрного университета «АГРУС», г.Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12. Тел./факс (8652) 35-06-94. E-mail: agrus@stgau.ru; http://www.agrus.stgau.ru.

Отпечатано в типографии издательско-полиграфического комплекса СтГАУ «АГРУС», г. Ставрополь, ул. Мира, 302.

ч

Ч

Í

W- -251

t

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Скорбина, Елена Александровна

ф Введение

Глава 1. Характеристика меланинсодержащих биологически активных веществ

1.1. Свойства природных меланинов

1.1.1. Источники природных меланинов

1.1.2. Характеристика физико-химических свойств меланинов

1.1.3. Методы выделения меланинов

1.2. Биологическое значение меланинов 22 1.2.1. Роль грибов в почвенных процессах гумусообразования

Глава 2. Методы и объекты исследований

2.1. Методы исследований

2.1.1. Биотехнологический метод получения чистых грибов

2.1.2. Микробиологические методы тестирования препаратов 43 на антифунгальную активность

2.1.3. Метод определения ростостимулирующей активности

2.1.4. Метод оценки биологической эффективности препаратов щ 2.2. Физико-химические методы исследований

2.2.1. Метод определения биоантиоксидантных свойств

2.3. Методика проведения полевых опытов

2.4. Характеристика объектов исследования

Глава 3. Теоретическое обоснование использования меланинов в качестве основного компонента для получения препаратов ^ ^ ^ с полифункциональными свойствами

Глава 4. Разработка технологии получения комплексных биопрепаратов с полифункциональным действием

4.1. Выделение и исследования свойств меланинов различной природы с^у

4.2. Разработка технологии получения биопрепаратов с полифункциональными свойствами на основе меланинов уд и пиразолинов

4.3. Физико-химические показатели выделенного меланина

Л грибного происхождения

Глава 5.Исследование биологической активности препарата из грибного меланина, пиразолина и комплексного препарата на их основе

5.1. Изучение ростостимулирующей активности комплексных препаратов на основе меланина и пиразолина

5.2. Изучение биоантиоксидантной активности препарата на основе меланина

5.3. Исследование влияния препаратов на мицелий и споры фитопатогенных грибов in vitro

5.4. Расчет эффективности производства комплексного препарата и его применения в растениеводстве

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии получения и исследование биологической активности меланинсодержащих препаратов"

Актуальность темы. Важнейшим направлением современной биотехнологии является разработка технологии получения биологически активных веществ, в частности, меланинов, которые находят широкое применение в медицине, фармакологии, пищевой и других отраслях промышленности.

В природе распространены меланины животного и микробиологического происхождения, проявляющие высокую биологическую активность, отличающиеся широким разнообразием по химическому составу, физиологическим свойствам.

Актуальным представляется поиск наиболее перспективного сырьевого источника для выделения меланинов и разработка на его основе биотехнологии получения препарата, с полифункциональными свойствами и с максимальным сохранением комплекса природных соединений.

Анализ литературных источников за последние 20 лет, указывает на ограниченное число публикаций по применению меланинсодержащих препаратов в качестве активных регуляторов роста растений. В связи с этим возникает необходимость разработки препарата на основе меланинов, а также комплекса/ исследований данного препарата с оценкой экономической эффективности^его применения в растениеводстве.

Цель работы - разработка технологии получения комплексного препарата с полифункциональным действием на основе природного меланина и пиразолинов, изучение его биологической активности и проведения исследований по применению данного препарата в растениеводстве.

Задачи исследования: - изучить влияние сырьевого источника на выход меланина, и его биологическую активность, исследовать ростостимулирующую и фунгицидную активность синтетических препаратов на основе пиразолинов;

- провести исследования с целью установления оптимального сырьевого источника меланина, оптимальных концентраций компонентов препарата и их соотношение;

- разработать технологию получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, изучить его состав и провести стандартизацию;

- исследовать ростостимулирующие и фунгицидные свойства комплексного препарата и его компонентов в лабораторных условиях, исследовать действие препарата на продуктивность агрокультуры и его влияние на качество продукции;

- оценить экономическую и энергетическую эффективность, экологическую безопасность разработанной технологии получения комплексного препарата и его применении в растениеводстве.

Научная новизна работы. Впервые установлен эффект ростостимулирующей активности природного меланина при действии на семена озимой пшеницы. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Penicillium по ростостимулирующей активности значительно превосходит активность меланинов растительного происхождения и данный сырьевой источник обеспечивает значительный выход пигмента и его высокую биологическую активность.

Впервые исследованы ростостимулирующая и фунгицидная активности 22-х препаратов на основе пиразолинов, среди которых наибольшую антифунгальную активность проявляют 5 производных пиразолинов.

Впервые разработана технология получения комплексного препарата, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции в щелочной среде меланинов с последующим осаждением продукта и смешиванием с производным пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Осуществлена стандартизация препарата по биологической эффективности, биоантиаксидантной активности, уровню оптической плотности, определены условия сохранения стабильности препарата в течение трех лет.

Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина, который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2-2,5 раза интенсивнее контроля.

Выявлен положительный эффект действия комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, проявляющейся в стимуляции роста и развития растений, повышении устойчивости растений к заболеваниям при предпосевной обработке семян озимой пшеницы.

Научно-практическая значимость. В ходе исследований были получены экспериментальные данные по оптимизации стадий биотехнологии получения комплексного препарата с полифункциональными свойствами. Препарат стандартизирован по биологической эффективности, установленной проявлением ростостимулирующей активности на семена агрокультур, уровню оптической плотности, биоантиоксидантным свойствам.

Проведенные производственные испытания препарата на основе меланина и 4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислоты показали, что при обработке семян пшеницы препаратом при дозировке 2 л/т наблюдается эффект повышения на 12,3% продуктивности растений, установлено значительное улучшение качественных показателей продукции растениеводства, что подтверждено актом внедрения.

Основные положения диссертации использованы в учебном процессе по курсу «Основы биотехнологии» студентов агрономических специальностей в Ставропольском государственном аграрном университете.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительных исследований по проявлению ростостимулирующей активности меланинов микробиологического и растительного происхождения.

2. Синтез препарата на основе пиразолина 4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота, с установлением его ростостимулирующей активности при действии на растение и фунгицидной активности при действии на споры фитопатогенных грибов.

3. Разработка технологии получения комплексного препарата на основе меланина и пиразолина, включающая этапы микробиологического синтеза, дезинтеграции грибного мицелия, экстракции меланинов в щелочной среде, с последующим осаждением пигмента и смешиванием с производным пиразолина.

4. Результаты исследований по выявлению в комплексном препарате на основе меланина и пиразолина, с усилением ростостимулирующей активности, фунгицидных и биоантиоксидантных свойств, обеспечивающих повышение продуктивности агрокультуры при использовании препарата для предпосевной обработки агрокультуры.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на научно-практических конференциях Ставропольского Государственного Аграрного Университета в 2002, 2003, 2004, 2005 годах; Международной научной конференции «Повестка дня на XXI век: Программа действия - экологическая безопасность и устойчивость развития» (Ставрополь, 2003); Всероссийской научной конференции «Биотехнология 2003» (Сочи, 2003); научно-методической конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2004); 68-й научно-практической конференции «Проблемы развития биологии и экологии на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2004); Всероссийской научной практической конференции посвященной 40-летию факультета защиты растений (Ставрополь, 2004); 50-й научной конференции «Университетская наука - региону» (Ставрополь, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, библиографического списка, примечаний. Работа изложена на 136 страницах, содержит 9 рисунков, 25 таблиц. Библиографический список состоит из 156 наименований.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Скорбина, Елена Александровна

Выводы

1. Проведением системного скрининга природных объектов, осуществлен выбор сырья для выделения меланина. Установлено, что меланин грибного происхождения рода Penicillium по ростостимулирующей активности в 1,5 раза превосходит активность меланина растительного происхождения. Исследован элементный состав меланина, установлены его особенности строения по данным ИК- и УФ-спектроскопии.

2. Осуществлен синтез производных пиразолина и проведены сравнительные исследования их фунгицидной и ростостимулирующей активностей. Установлено, что наибольшую фунгицидную активность проявляет препарат (4-(5-гидрокси-3-метил-1 -фенил-4,5-дигидро-1 Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота). Исследован состав данного биологически активного вещества в сопоставлении с данными РЖ- и масс-спектроскопии.

3. Разработана технология получения комплексного препарата, включающая стадии выделения грибов рода Penicillium в чистую культуру, микробиологический синтез мицелия, дезинтеграцию сырья, получения экстрактов меланинов, смешивание с производным пиразола, стерилизующую фильтрацию, розлив и фасовку. Планированием и проведением многофакторного эксперимента, оптимизирована стадия экстракции меланинов с получением адекватных уравнений регрессии, указывающих на то, что факторы продолжительности экстракции и соотношение масс сырья и экстрагента, оказывают доминирующее влияние на биологическую активность препарата.

4. Установлен эффект синергизма в комплексном препарате на основе грибного меланина и пиразолина (4-(5-гидрокси-3-метил-1-фенил-4,5-дигидро-1Н-пиразол-4-илазо) бензолсульфокислота), который проявляется в увеличении всхожести семян озимой пшеницы до 100% и в способности подавлять прорастание спор фитопатогенных грибов в 2-2,5 раза интенсивнее контроля. Механизм физиологического действия меланинов в комплексном препарате на семена озимой пшеницы, возможно, определяется активизацией процессов окислительного и фотосинтетического фосфорилирования и усилением белок-синтезирующей системы.

5. Определены сравнительные биоантиоксидантные свойства грибного меланина, экстракта биогумуса и водной вытяжки из почвы в реакции торможения гидроксилирования анилина. Установлено, что противорадикальная активность меланина по реакции ингибирования гидроксильных радикалов, образующихся при реакции Фентона, в 1,4-1,9 раза выше активности экстрактов из биогумуса и чернозема. Биоантиоксидантная активность меланина определяется особенностями его строения, полифункциональностью органических групп.

6. По данным экспериментальных исследований выявлено, что комплексный препарат на основе меланина и производного пиразолина является активатором прорастания семян зерновой культуры, что обеспечивает повышение уровня продуктивности озимой пшеницы по сравнению с контролем на 12,3% в производственных условиях, а также снижение зараженности зерна инфекцией на 27% эффективнее по сравнению с контролем.

7. Выявлена экономическая и энергетическая эффективность применения разработанного препарата для предпосевной обработки семян озимой пшеницы с увеличением эффективности энергозатрат в 3,4 раза по сравнению с показателем контроля.

Практические рекомендации

В технологии получения меланинсодержащих препаратов, в качестве исходного сырья рекомендуем использовать мицелий гриба рода Penicillium после 14 дней роста, который предварительно дезинтегрируют ультразвуком и далее подвергают экстракции 5% раствором гидроксида натрия, при массовом соотношении 1:25-1:35 с последующим осаждением продукта раствором соляной кислоты, что позволяет получить выход меланина до 10%.

В технологии возделывания озимой пшеницы сорта Дон-95 рекомендуем предпосевную обработку комплексным препаратом на основе меланина и пиразолина, с нормой расхода 2 л/т, что позволяет получить прибавку биологического урожая озимой пшеницы 3,7-5,7 ц/га.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Скорбина, Елена Александровна, Ставрополь

1. Аверьянов, А.А. Влияние меланина на цитотоксичность кислородных радикалов / А.А. Аверьянов, В.П, Лапикова, Г.Г, Петелина// Биохимия. -1987.-Т. 52.-№9.-С. 1539-1546.

2. Агаджанян, А.Е. Водорастворимый меланин микробного происхождения / А.Е. Агаджанян, А.А, Амбарцумян // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. Москва .- 2004. - С. 312.

3. Алиев, С.А. Парамагнетизм и физиологическая активность гумусовых кислот / С.А. Алиев // Тр. 8-го Всесоюз. О-ва почвовед. Новосибирск, 1989.

4. Алиев, С.А. Парамагнитные свойства и физиологическая активность гумусовых кислот / С.А. Алиев // Теория действия физиологически активных веществ: Тр. ДСХИ. Днепропетровск. - 1983. - Т. 8. - С. 7880.

5. Андреев, Л.Н. Активность и изоэнзимный состав пероксидазы листьев пшеницы, пораженных ржавчиной / Л.Н. Андреев, Т.В. Верзилова // Изв. АН СССР Сер. Биология. 1973. - № 4. - С. 481-487.

6. Безрукова, М.В. Гормональный уровень в защитном действии салициловой кислоты на рост проростков пшеницы при водном дефиците / М.В. Безрукова, А.Р. Сахабутдинова // Агрохимия. 2001. -№2.-С. 51-54.

7. Беляева, В.В. Технологические аспекты биологической защиты овощных культур от болезней в защищенном грунте /В.В. Беляева // Вестник с.-х. науки. 1990. - № 1.- С. 26-30.

8. Ю.Бондакенко, Н.В. Биометод в интегрированной защите растений от вредителей и болезней / Бондаренко Н.В. // Сельскохозяйственная биология. 1988. - № 3. - С. 122-136.

9. Воронин, A.M. Биологические препараты на основе псеудомонад / A.M. Воронин, В.В. Кочетков // Агро XXI. 2000. - № 13. - С. 3-5.

10. Борщевская, М.И, Развитие представлений о биохимии и фармакологии меланиновых пигментов / М.И. Борщевская, С.М. Васильева // Вопросы медицинской химии. 1999. - № 1. - С. 24-35.

11. Бриттон, Т. Биохимия природных пигментов / Т. Бриттон. М.: Мир. -1986.-422 с.

12. Брыкалов, А.В. Исследование влияния экстрактов сорных растений на семена зерновых культур / А.В. Брыкалов, Е.М. Головкина // Сб. науч. трудов: защита и карантин растений. Ставрополь. — 2003. — 148 с.

13. Брыкалов, А.В. Получение биопрепаратов на основе методов аффинной сорбции и иммобилизации: Дисс. . д-ра хим. наук / А.В. Брыкалов. С-Пб.-ЗЗОс.

14. Брыкалов, А.В. Получение и исследование биопрепаратов растительного происхождения /А.В. Брыкалов, Л.В. Мазницына // Современныедостижения в химии, биологии и экономике: Сб. науч. тр. Ставрополь, 2004.- С. 14-18.

15. Буга, С.Ф. Биологические средства защиты огурцов от паутинного клеща и мучнистой росы в закрытом грунте / С.ф. Буга, В.И. Сидляревич / Актуальные вопросы защиты растений в БССР. Минск: Урожай. -1974. - С.63-68.

16. Булл, Т.А. XI Междунар. конф. по микробиологии / Т.А. Булл / Тезисы докл. Москва. - 1966. С. 106.

17. Буров, В.Н. Биологически активные вещества в защите растений / В.Н. Буров, А.П. Сазонов // Тр. ВАСХНИЛ. М.: Агропромиздат, 1987. - 197 с.

18. Вакуленко, В.В. Регуляторы роста. Амбол / В.В. Вакуленко, В.М. Успилгов // Защита растений. 1995. - № 12. - С. 38-39.

19. Васецкая, М.Н. БАВ против болезней пшеницы / / М.Н. Васецкая // Защита и карантин растений. 20016. - № 11. - С. 23.

20. Васецкая, М.Н. Эффективный биопрепарат в защите зурновых культур от болезней / М.Н. Васецкая // Агро XXI. 2001а. - № 8. - С. 14-15.

21. Васильченко, В.Ф. Действие актиномицетов на некоторые биохимические процессы в растениях / В.Ф. Васильченко, С.И. Деревянко // Сельскохозяйственная биология. 1971. - вып. 6. - № 1.

22. Великанова, Л.Н. Органическое вещество почвы и процессы его трансформации / Л.Н. Великанова, Ю.П. Сидорова. Л.: Наука, 1980. -380 с.

23. Винаров, А. Ю. Биотехнология пигмента меланина / А. Ю. Винаров, З.Н. Робышева, Е.Н. Дирина // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. Москва .- 2004. - С. 96.

24. Винаров, А.Ю. Микробный меланин. Биотехнология получения и применения / А.Ю. Винаров, Т.Е. Сидоренко, З.Н. робышева // Моск. межд. конгресс: Биотехнология: состояние и перспективы развития. -Москва .-2005.-С. 185.

25. Горовая, А.И. Роль физиологически активных веществ гумусовой природы в повышении устойчивости растений к действию пестицидов / А.И. Горовая // НДВШ Биологические науки. 1988. - № 7. - С. 5-16.

26. Горовая, А.И. Роль физиологически активных гумусовых препаратов в регуляции процессов клеточного цикла / А.И. Горовая, А.Ф. Кулик // Регуляция клеточного цикла. Киев, 1985.- С. 101-109.

27. ГОСТ 10840-64. Зерно. Метод определения натуры. М.: Издательство стандартов, 1994. - 5 с.

28. ГОСТ 10842 76. Зерно. Метод определения массы 1000 зерен. - М.: Издательство стандартов, 1980. - 8 с.

29. ГОСТ 10968-88. Зерно. Метод определения энергии и способности прорастания. М.: Издательство стандартов, 1988. - 5 с.

30. ГОСТ 10987-76. Зерно. Метод определения стекловидности. М.: Издательство стандартов, 1992. - 17 с.

31. ГОСТ 12038 84. Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести. - М.: Издательство стандартов, 1985. - 58 с.

32. ГОСТ 12044 93. Семена сельскохозяйственных культур. Метод определения зараженности болезнями. — Минск, Издательство стандартов, 1995. - 88 с.

33. ГОСТ 1230-01. Упаковка лекарственных препаратов. М.: Издательство стандартов, 1987. - 5 с.

34. ГОСТ 13586-83. Правила приемки и методы отбора проб. М.: Издательство стандартов, 1985. - 58 с.

35. ГОСТ 20290-74. Семена сельскохозяйственных культур. Определение посевных качеств семян. Термины и определения. - М.: Издательство стандартов, 1987. - 24 с.

36. ГОСТ 30405-83. Метод определения длины и массы проростков растений. М.: Издательство стандартов, 1991. - 5 с. ^

37. Гринько, Н.Н. Возможность использования Trichoderma harzianum Rafai в борьбе с патогенами томатов / Н.Н. Гринько, B.JI. Родигин // Биологический метод защиты растений. Минск. - 1990. - С. 203-204.

38. Гришечкина, С.Д. Фунгистатистическая активность различных подвидов Bacillus thuringiensis / С.Д. Гришечкина, О.В. Смирнов, Н.В. Кандыбин // Микология и фитопатология. 2002 - Т. 36. - вып. 1. - С. 58-62. ^

39. Гуминский, С.А. Механизм и условия физиологического действия гумусовых веществ на растительные организмы // С.А. Гуминский / Почвоведение. 1957. - № 12. - С. 72-78.

40. Доспехов, Б.А. Планирование полевого опыта и статистическая обработка его данных / Б.А. Доспехов. М.: Колос, 1972. - 207 с.

41. Дружинина, М.О. Фотозащитное действие меланина^ микробиологического происхождения /М.О. Дружинина, Г.Г. Пухова,

42. H.М. Жданова // Укр. Биохим. Журн. 1994. - № 3. - С. 271-273.

43. Евса, Т.В. противовоспалительная и антиоксидантная активность растительного меланина / Т.В. Евса // Мат. Межд. Пушкинской конф.: Биология наука XXI века. - Пушкино. - 2004. С. 21.

44. Жданова, Н.Н. Меланинсодержащие грибы в экспериментальных ^ условиях / Н.Н. Жданова, А.И. Василевская. Киев: Н.Д. - 1988.- 195 с.

45. Жданова, Н.Н., Походенко В.Д. Изв. АН СССР, серия биол. 1970. - №1.-С. 83.

46. Жданова, Н.Н., Походенко В.Д. Изв. АН СССР, серия биол. 1973. - № 3.-С. 324-333.

47. Зазимко, М.И. Новые препараты для защиты колосовых культур / М.И. Зазимко, Л.Д. Жалиева, Л.В. Маслиенко // Защита и карантин растений. -1999.-№2.-С. 27. 53.Зайцев, Г.Н. Математический анализ биологических данных / Г.Н. Зайцев. М.: Наука, 1991. - 184 с.

48. Запрометова, К.М. О пигментах микроскопических темноокрашенных грибов / К.М. Запрометова // Вест. Моск. ун-та. Сер. биол. почвоведение. 1971. -№З.-С. 61-67.

49. Запрометова, К.М. Пигменты теиноокрашенных грибов и их экологическая роль / К.М. Запрометова, Т.Г. Мирчинк / Микробные метаболиты. -М.: Наука.- 1979. 149 с.

50. Затула, Д.Г. Слабоспицка, А.Т., Свищу к, А. А. Микробиологигеский журнал. 1976. - № 1. - С. 29-32.

51. Звягинцев, Д.Г. Методы почвенной микологии и биохимии /Д.Г.

52. Звягинцев, И.В. Асеева. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980. - 224 с. 58.Звягинцев, Д.Г. О природе гуминовых кислот почв / Д.Г. Звягинцев, Т.Г.

53. Мирчинк // Почвоведение. 1986. - № 5. - С. 39-43. 59.3енков, Н.К. Окислительный стресс / Н.К. Зенков, В.Е. Ланкин, Интерпериодика. - 2001. - 343 с.

54. Иванов, Т.М. О каталитических функциях пероксидазы хлоропластов / Т.М. Иванов, В.А. Рубин // Доклады АН СССР Сер. Биология. 1970. -Т. 190. -№ 1-С. 114-117.

55. Иванова, Е.А. Активность гриба Trichoderma harzianum в отношении сумчатой стадии возбудителя парши яблони Venturia inaequalis (Cke)

56. Wint. в условиях агроценоза плодового сада / Е.А. Иванова // Конф. «Интродукция микроорганизмов в окружающую среду». М., 1994. - С. 46.

57. Карташова, И.А. Оценка антифунгального действия суммы тритерпеновых гликозидов, выделенной из двух видов сильфии / И.А. Карташова, Э.С. Давидянц // Защита и карантин растений: Сб. науч. тр. -Ставрополь, 1998.-С. 17-20.

58. Кефели, В.И. Фитогомоны и природные ингибиторы в процессах роста растений / В.И. Кефели, Биология развития растений. М.: Наука, 1975. -С. 89-110.

59. Кобраков, К.И. Синтез эффективных низкотоксичных фунгицидов, содержащих пиридиновые фрагменты / К.И. Кобраков, И.И. Рыбина / Проблемы экологической безопасности Северо-Кавказского региона: Мат. регион, конф. Ставрополь, 2000. - С. 58-59.

60. Кобылье кий, Г.Н. Регуляторы роста защищают зерновые культуры от болезней / Г.Н. Кобыльский, В.П. Кратенко, М.М. Васецкая // Агро XXI. 2001. - № 1.-С. 12-13.

61. Комисаренко, Н.Ф. Меланин из семян Aesculus hippocastanum / Н.Ф. Комисаренко, А.И. Деркач, А.А, Зинченко // Фармакол. 1995. - № 4. -С. 33-34.

62. Коновова, И.Д. Воздействие гумусовых веществ на рост и развитие растений / И.Д. Кононова, И.А. Панкова // Докл. АН СССР. 1950. - Т. 73.-№ 5.-С. 1069-1071.

63. Коржова, Л.П. Радиопротекторные свойства меланина / Л.П. Коржова, Е.В. Фролова // Биохимия.- 1989. № 6. - С. 992-998. /М.О. Дружинина, Г.Г. Пухова, Н.М. Жданова // Укр. Биохим. Журн. - 1994. - № 3. - С. 271273.

64. Красильников, Н. А. Лучистые грибки и родственные им организмы / Н.А. Красильников. М.-Л.: Изд-во АН СССР. - 1938.

65. Кузнецова, И.Ф. Альтернативы протравливанию нет! / И.Ф. Кузнецова // Защита растений. 1993. - № 7. - С. 44-47.

66. Кунижев, С.М. Катализируемые процессы в биосинтезе меланина / С.М. Кунижев, С.Ф. Аполохлва // Катализ в биотехнологии, химии и химических технологиях: Тез. докл. Всеросс. конф. Тверь, 2000. - С. 14-16.

67. Кутиков, Е.С. Тканевая терапия / Е.С. Кутиков / Тез. докл. науч. конф. -1983.-С. 202-204.

68. Панкин, В. 3. Метаболизм липоперексей в тканях млекопитающих / В.З. Ланкин // Биохимия липидов и роль в обмене веществ. М.: Наука. 1981. - С. 75-78.

69. Ларионов, Г.И. Применение реглятора роста на посевах яровой пшеницы / Г.И. Ларионов, О.Е. Тарасова // Агро XXI. 2001. - № 2. - С. 11.

70. Лебедев, В.Б. Регулятор роста на пшенице в Саратовской области / В.Б. Лебедев, Д.А. Юсупов, Л.М. Кудишова // Агро XXI. 2002. - № 5. - С. 11.

71. Либерсон, М.Н. К вопросу о тепловом повреждении пигментированных тканей лазерным излучением / М.Н. Либерсон / Тез. докл. Всесоюзн. науч. конф.: применение методов средств лазерной техники в биологии и медицыне. Киев. - 1981. - С. 207-211.

72. Лили, В. Физиология грибов / В. Лилли. М.: Изд-во иностр. лит-ры. -1957.-531 с.

73. Линник, Л.И. Сохранение антагонистической активности почвы в условиях многолетней культуры / Л.И. Линник // Тез. докл. науч.-производств. конф. Минск. - 1990. - С. 229-230.

74. Лобанкова, О.Ю. Экологические аспекты защиты ячменя от болезней в зоне неустойчивого увлажнения Ставропольского края / О.Ю. Лобанкова // Автореф. дисс. к.б.н. 2004.

75. Лях, С. П. Микробные меланины / С.П. Лях, Е.А. Рубан. М.: Наука. -1972.-321 с.

76. Лях, С.П. Микробный меланиногенез и его функции / С.П. Лях.- М.: Наука. 1981.-274 с.

77. Макаров, А.А. 40 лет на службе сельскому хозяйству страны / А.А. Макаров // Защита и карантин растений. 1999. - № 3. - С. 16-18.

78. Максимов, И.В. «Хитин-специфичные» пероксидазы в растениях / И.В. Максимов, Е.А. Черепанова // Биохимия. 2003. - Т. 68. - С. 131-136.

79. Максимов, И.В. О природе взаимодействия анионных пероксидаз с хитином \ И.В. Максимов, Е.А. Черепанова // Мат-лы 6-й междунар. конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хитозана» М.: Изл-во ВНИИРО, 2001.-С. 88-91.

80. Максимов, И.В. Функциональная активность хитина и его олигомеров / И.И. Максимов, Л.Г. Яруллина // Агрохимия. 2004. - № 8. - С. 79-82.

81. Малама, А.А. Характеристика гриба Pullularia prototropha, получение из него меланина и полисахарида и влияние данных биополимеров на опухоль Эрлиха / А.А. Малама / Автореф. канд. дисс. Минск. - 1966.

82. Марфенина, Н.П. Фотохимическая деструкция гумусовых кислот / И.П. Марфенина, Т.Г. Мирчинк // Почвоведение. 1973. - № 1. - С. 41-45.

83. Методика оценки энергетической эффективности применения средств защиты растений /ВАСХНИЛ. М., 1991. - 50 с.

84. Методические рекомендации по биоэнергетической оценке севооборотов и технологии выращивания кормовых культур /ВАСХНИЛ. М, 1981 -50 с.

85. Методические рекомендации по оценке фитосанитарного состояния посевов пшеницы при интенсивных технологиях возделывания /ВНИИ ин-т защиты растений. Л., 1985. - 67с.

86. Методические рекомендации сортоиспытания сельскохозяйственных культур. М.: Колос, 1985. - 186 с.

87. Методические указания по определению зараженности семян и проростков злаковых культур грибными болезнями / Потлайчук В.И., Семенов А .Я., Таценко В.П. Л.: ВИЭР, 1976. - 59 с.

88. Методы учета вредных организмов // Защита и карантин растений, 2002 -№3.-С. 51-54.

89. Методы фитоэкспертизы семян и апробации посевов // Рекомендации ВНИИЗРМСХП РФ / Защита и карантин растений. 1999. - №2. - С. 1 -3.

90. Миньков, А.А. Меланин !? / А.А. Миньков // Вокруг пленеты. 2000. -№ 19.-С. 10-11.

91. Мирчинк, Т.Г. Почвенная микология / Т.Г. Мирчинк. М.: МГУ.- 1988. 220 с.

92. Наумова, Н.А, Анализ семян на грибную и бактериальную инфекцию. -М.: Колос, 19780.-208 с.

93. Неферов, К.В. К вопросу о значении гуминово-минеральных соединений как питательной среды для растений / К. В. Неферов // Сельское хозяйство и лесоводство. = 1987. № 1. - С 157-159.

94. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С. Орлов, Е.П. Осипова. М.: Наука, 1990. - 343 с.

95. Пантелеев, А.А. Изучение микробов антагонистов и их метаболитов для борьбы с болезнями растений / А.А. Пантелеев // Биологический метод защиты растений от болезней. - Кишинев, 1986. - С. 29-33.

96. Пивоворов, А.П. О природе физиологической активности гуминовых кислот в связи с их строением / А.П. Пивоваров // Гуминовые удобрения. Киев. - 1962. - Ч. 2. - С. 134-148.

97. Пидопличко, В.Н. Антагонистическое действие бактерий родов Pseudomonas и Bacillus на возбудителя корневой гнили озимой пшеницы / В.Н. Пидопличко, А.Д. Гарагуля // Микология и фитопатология. 1979. -Т. 13.-вып. 1.-С. 53-57.

98. Пидопличко, Н. М. Грибы паразиты культурных растений: Определитель / Н.М. Пидопличко / Т. 2. Грибы несовершенные. - Киев, Изд-во «Наукова Думка». - 1977. - 299 с.

99. Плотникова, С.И. Влияние меланина на мутационный процесс, индуцированный ионизирующей радиацией в половых клетках животных / С.И. Плотникова, И.Б. Моссе / Тез. докл. VI Всесоюзн. симп. По фенольным соединениям. Ташкент. - 1982. - С. 37-38. ^

100. Рубан, Е.А. Действие ультрафиолетовой радиации на клетку / Е.А. Рубан, С.П. Лях / Изв. АН СССР. 1969. - №3. - С. 401.

101. Сазанович, С.В. Силк не конкурент фунгицидам, а помощник / С.В. Сазанович, Н.Г. Власенко // Защита и карантин растений. 2003. - № 2. -С.31.

102. Самерсов, В.Ф. Эколого-экономическая оценка систем защиты^ растений / В.Ф. Самерсов, Л.И. Трепашко // Защита и карантин растений. -2000. № 10.-С. 20-21.

103. Свиридов, Д.А. Эффективный препарат / Д.А. Свиридов // Защита и карантин растений. 2002. - № 2. - С. 30-31.

104. Сидорикс, Е.П., Дружинина, М.О., Бурака, А.П., Данко, М.И. Доклад АН Украины. 1994. - № 9. - С. 174-178. *

105. Тарчевский, И.А. Сигнальные системы клеток растений / И.А. Тарчевский. М.: Наука. - 2002. - 294 с.

106. Третьяков, А.П. В поддержку биометода / А.П. Третьяков // Защита растений. 1995. - № 5. - С. 14.

107. Труфанова, А.Н. Влияние бактерий антагонистов на прорастание1. Щ>выживаемость конидий фитопатогенного гриба Helminthosporium sativum / А.Н. Труфанова // Бюл. ВНИИСХ. М. 1988. - № 49. - С. 13-18.

108. Фатхутдинова, Д.Р. Влияние салициловой кислоты на антиоксидантные ферменты в проростках пшеницы / Д.Р. Фатхутдинова, А.Р. Сахабутдинова, И.В. Максимов// Агрохимия. 2004. - № 8. - С. 27-31.

109. Федореева, Л.И. Влияние продуцента этрела и антиоксиданта (ВНТ) на протеолитический аппарат в колеоптилях проростков пшеницы при сопровождающем ранний онтогенез апоптазе / Л.И. Федореева // Биохимия. 2003. - Т. 68. - № 4. - С. 570-576.

110. Федоринчик, Н.С. Микробиологический метод борьбы с вредителями и болезнями / Н.С. Федоринчик // Биологические средства защиты растений. М., 1974. - С.65-68.

111. Физиология и биохимия покоя / под редакцией А. Кан. М.: Наука, 1981.-С. 75-78.

112. Фрайфельдер, Я. Физическая химия / Я. Фрайфельдер. М.: Мир, 1980. -418с.

113. Христева, Л. А. Роль гуминовой кислоты в питании растений / Л.А. Христева // Тр. Почв, ин-та им. В. В. Докучаева. 1951. - Т. 38. - С. 108184.

114. Христева, Л.А, Влияние гуминовых кислот на рост растений при различном соотношении питательных веществ в начале развития / Л.А. Христева // Докл. ВАСХНИЛ. 1947. - Вып. 10. - С. 23-29.

115. Христева, Л.А. Участие гуминовой кислоты и других органических соединений в питании растений / Л.А. Христева // Почвоведение.- 1953. -№ 10.-С. 54-57.

116. Чершова, Т.С. Обзор материалов симпозиума по вопросам исследования БАВ в защите растений / Т.С. Чертова // Защита и карантин растений. 2000. - № 6. - С. 58-62.

117. Чуков, С.Н. Физиологическая активность ростовых стимуляторов и гуминовых кислот почв / С.Н. Чуков, В. Д. Талашкина, М.А. Надпорожская // Почвоведение. 1995. - № 2. - С 169-174.

118. Чумаков, А.Е. Вредоносность болезней сельскохозяйственных культур / А.Е. Чумаков, Т.И. Захарова. М.: Агропромиздат, 1990. - 127 с.

119. Шакирова, Ф.М. Индукция салициловой кислотой устойчивости пшеницы к засолению среды / Ф.М. Шакирова, М.В. Безрукова // Изв. РАН Серия биология. 1997. - №2. - С. 149-153.

120. Шпаар, Д. Защита растений в экологически и экономически обоснованном сельскохозяйственном землеиспользовании / Д. Шпаар // Аграрная наука. 1993. - С. 21-24.

121. Шпаар, Д. Химическая защита растений и экология / Д. Шпаар // Сельскохозяйственная биология. 1997. - № 3. - С. 15-18.

122. Штейнберг, М.Е. Возбудители грибных болезней подсолнечника и грибы антагонисты некоторых из них / М.Е. Штейнберг, Л.И. Бондаренко. Кишинев, 1986. - С. 31-34.

123. Benitez, Н. Structure, chemistry and biosynthesis of the melanins / H. Benitez. 1976. - p. 521.

124. Blois, M.S. Melanins. In: Photochemistry and photobiology reviews / ed. K. C. Smith / Plenum.- New York. 1978. - p. 115.

125. Boicova, I. Peptdes from Streptomyces for plant protection / I. Boicova // Proc. Of 26thItem. Peptides Simp. Montpellier. 2000. - P. 135-137.

126. Bull, A.T. Arch. Biochem. And Biophys. 1970. - № 2. - P. 345.

127. Dekker, J. Agricultral use of antibiotic / J. Dekker / World Review of Pest Control. 1974. - V. 10. - P. 64-67.

128. Durner, J Salicylic acid is a modulator of tobacco and mammalian catalases / J. Durner // Biol. Chem. 1996. - V. 271. - № 45. - P. 28492-28501.

129. Feeney, L. Investigative Ophalmology and Visual Science. 1978. - № 7. -P. 583-600.

130. Felix, Z. Thermal and spectophotometric analysis of fungal melanins and humic compounds / Z. Felix, J. Semotan // Geoderma. 1979. - № 15.

131. Janda, T. Hydroponic treatment with salicylic acid decreases the effects of chilling injury in maize plants / T. Janda, G. Szalai, I. Tari // Planta/ 1999. -V. 208.-P. 175-180.

132. Lambert, C. Photochemical / C. Lambert, S.R. Sinclair, E. J. Land // Photobiology. 1984. - № 1. - P. 5-10.

133. McCormick, L. Melanins. In: Comparative biochemistry / L. McCormick. -Academic Press. New York and London. - 1970/ - p. 727.

134. Metraux, J.-P. Recent breakthroughs in the study of salicylic acid biosynthesis / J.-P. Metraux // Trends Plant Sci. 2002. - V. 7. - № 8. - P. 331-334.

135. Mishra, A. Effect of salicylic acid induct multiple stress tolerance in bean and tomato plants / A. Mishra // Biol. Plant. 1999. - V. 42 - № 3. - 14091415.

136. Nicolaus, R.A. Melanins / R.A. Nicolaus. Paris, Hermain. - 1968. - p. 241.

137. Novicova, I.I. Alirin В and alirin С new antifungal antibiotics from Bacillus subtilis and Streptomyces felleus / I.I. Novicova, Yu. D. Shenin // 1st Inter. Conf. on Chem. Of Antibiotics and related products. - 1998.

138. Paim, S. Characterization of fungal melanins and soil humic acids by chemical anality of soils/ 1990. - № 10. - P. 10.

139. Parhak, J. P. Phenolic polymers of Stachybotrys atra, Stachybotrys chatarum and Ericoccum nigrum in relation to humic acid formation // Soil Science. 1967. - № 10. - P. 107-109.

140. Pilas, J. T. Polimerization of humic substances in natural environments // Humic substances and their role in the environments. Chichester. - 1979. -p. 307.

141. Prota, G. Endeavour / G. Prota, R.H. Thomson. 1976. - № 124. - P. 32-32.

142. Reisinger, O. A comparison of the alkaline extract of Aspergillus niger with humic acids from three soil / O. Reisinger, G. Kilbertus // Sjil Sciense. 1974. - № 9. - P. 16-20.

143. Rowley, O. Chromatophores and color change: the comparative physiology of animal pigmentation / O. Rowley, P. Pirt. Prentice Hall. - New Jersey. -1972. -p/ 122.

144. Sarna, T. Folia histochemica at cytochemica. 1978. - № 4. - P. 275-286.

145. Sealy, R.C. Free Radical in Biology / R.C. Sealy, C.C. Felix, J. S. Hyde // Photobiol. 1980. - № 4. - P. 209-252.

146. Senaratra, T. Acetyl salicylic acid (Aspirin) and salicylic acid induce multiple stress tolerance in bean and tomato plants / T. Senaratra, E. Bunn, K. Dixon // Plant Growth Regul. 2000. - V. 30. - P. 157-161.

147. Slawinska, D. Physiology. Chemical. / D. Slawinska, J. Slawinski, L. Ciesla // Phys. And Mtd. NMR. 1983. - p. 168.

148. Stepien, K. Acta Polon Pharm. 1988. - № 5. - P. 435-440.

149. Webley, K. Studies on the chemical properties of P-type humic acid / K. Webley, O. Jones // International symposium: Humus et plantar VI. 1971