Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка способов регулирования TNF-зависимого апоптоза

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мошникова, Анна Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Исследование спектра свойств фактора некроза опухолей

1.1. Фактор некроза опухолей продуцируется широким рядом клеток

1.2. Структура фактора некроза опухолей

1.3. Плейотропные активности фактора некроза опухолей

1.4. Возможности клинического использования TNF

2. Молекулярные механизмы клеточных сигналов, активируемых при связывании TNF с рецепторами

2.1. Анализ биологических активностей, опосредованных рецепторами TNF

2.2. Рецепторы TNF относятся к семейству рецепторов TNF

2.3. Начальные этапы сигнальных путей, опосредованных TNF-RI

2.4. Начальные этапы сигнальных путей, опосредованных TNF-RII

2.5. Разнообразие молекулярных механизмов, опосредующих передачу внутриклеточных сигналов

3. Способы регуляции клеточного ответа путем модификации белок-белковых взаимодействий

3.1. Использование антител к "рецепторам смерти" при индукции клеточной гибели

3.2. Получение трансфектантов с заданными свойствами

3.3. Использование кросс-линкеров для индукции и(или) модификации клеточной гибели

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Использование цитотоксических анти-Fas антител для регуляции клеточной гибели, индуцированной TNF

2. Регуляция экспрессии белков семейства Вс1-2 как способ модификации TNF-зависимой клеточной гибели

3. Исследование возможностей регулирования TNF-зависимой гибели на этапе активации эндонуклеаз

4. Использование химических кросс-линкеров для индукции апоптоза.

4.1. Гомобифункциональный кросс-линкер DMS как индуктор апоптоза трансформированных клеточных культур.

4.2. Гомобифункциональный кросс-линкер BSOCOP как индуктор апоптоза трансформированных клеточных культур.

4.3. Гетеробифункциональный кросс-линкер EDC как индуктор апоптоза трансформированных клеточных культур.

5. Исследование возможностей модификации TNF-зависимой клеточной гибели химическими кросс-линкерами.

6. Исследование противоопухолевой активности кросс-линкеров в экспериментах in vivo. j

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка способов регулирования TNF-зависимого апоптоза"

Программируемая клеточная гибель (апоптоз) играет важную роль в формировании и функционировании многоклеточных организмов. Она обнаруживается на самых ранних стадиях эмбриогенеза при формировании органов, замене одних тканей на другие, резорбции временных органов и т.д. Во взрослых организмах поддержание гомеостаза в нормальных тканях происходит за счет баланса между клеточной пролиферацией и клеточной смертью. Дефекты генов, которые контролируют апоптоз, могут приводить к возникновению рака и аутоиммунным заболеваниям, если апоптоз супрессируется, или нейродегинеративным болезням и иммунодефициту, если апоптоз стимулируется (Korsmeyer, 1995). Апоптоз могут вызывать как внутриклеточные сигналы, например, повреждения ДНК или активация онкогенов, так и внешние факторы: UV- или у-лучи, температурный шок, окислительный стресс, химиотерапевтические средства, вирусные инфекции, глюкокортикоиды, недостаток специфических ростовых факторов, растворимые или трансмембранные формы цитокинов, таких как TNF или Fas/Apo-1 лиганд, и ряд других факторов (Хансон, 1998).

Среди различных моделей клеточной гибели апоптоз, индуцируемый TNF, исследуется наиболее интенсивно в связи с его большой биологической значимостью (Baker and Reddy, 1998; Wallach et al., 1998). Цитотоксические эффекты TNF представляют особый интерес по нескольким причинам. Во-первых, в отличие от классических картин апоптоза, таких как гибель под действием глюкокортикоидов и у-облучения, где добавление ингибиторов синтеза РНК или белка препятствует развитию цитотоксических процессов (Wyllie et al., 1980; Sellins and Cohen, 1987), TNF-индуцированная гибель не зависит от синтеза белка и РНК de novo, и более того, в ряде случаев требует подавления синтетических процессов (Beutler and Cerami, 1988). Эти данные предполагают существование в клетках суицидного аппарата, совместимого с нормальным клеточным метаболизмом и активируемого при цитотоксическом воздействии. Во-вторых, TNF может вызывать гибель и по типу некроза и по типу апоптоза в зависимости от типа клеток (Laster et al., 1988; Schulze-Osthoff et al., 1992). И, наконец, благодаря интенсивным исследованиям последних лет, механизмы передачи сигналов, опосредованных фактором некроза опухолей, изучены полнее, чем для других физиологических цитотоксических лигандов (Liu et al., 1996; Baker and Reddy, 1998; Wallachetal., 1998).

Известны два рецептора TNF, представляющие собой трансмембранные белки I типа и принадлежащие к суперсемейству рецепторов, имеющих гомологию в экстраклеточных доменах (суперсемейство рецепторов TNF) (Smith et al., 1994). Некоторые члены этого семейства, в том числе рецептор TNF I типа и Fas-антиген, имеют дополнительную гомологичную последовательность в цитоплазматических доменах рецепторов, необходимую для трансдукции цитотоксического сигнала и поэтому названную "доменом смерти" (Ashkenazi and Dixit, 1998). Принципиальная схема передачи цитотоксического сигнала через рецептор TNF I типа к настоящему времени практически установлена. Показано, что начальные этапы передачи опосредованы специальными адапторными белками (Wallach et al., 1998). TNF вызывает тримеризацию TNF-RI при связывании, в результате чего "домены смерти" рецепторов оказываются ассоциированными (Banner et al., 1993; Boldin et al., 1995a; Vandevoorde et al., 1997). Олигомеризация рецептора индуцирует присоединение адапторного белка к "домену смерти" рецептора. Сигнал передается другим адапторным белкам, один из которых связывает проксимальную (ближайшую к месту прикрепления) каспазу, тем самым передавая сигнал апоптоза далее. Активированные каспазы, в свою очередь, расщепляют разнообразные внутриклеточные белки, модифицируя таким образом их функциональные свойства. Совокупность этих изменений, как предполагается, и приводит к гибели клеток по типу апоптоза (Slee, 1999).

При использовании фактора некроза опухолей в качестве терапевтического агента исследователи столкнулись с проблемой, решение которой до сих пор не найдено. Оказалось, что в отличие от животных моделей, регулярные инъекции TNF токсичны для человека. Для преодоления этой проблемы предлагается несколько подходов: применение внутриопухолевых инъекций TNF (Eggermont, 1996; Lienard et al., 1996; Chcialowski et al., 1997); комбинированные инъекции TNF с другими противоопухолевыми агентами (Renard et al., 1994; Yokoyama et al., 2000); использование химерных белков, обеспечивающих доставку TNF в опухоли (Curnis et al., 2000); трансформация опухолевых клеток геном /и/(Shurin et al., 2000); поиск мутантов TNF, не обладающих токсичностью (Berkova et al., 1999; Kuroda et al., 2000). Большинство этих подходов направлено на усиление противоопухолевого действия TNF без повышения токсичности. Тем не менее, несмотря на полученные положительные результаты, поиск новых способов использования противоопухолевого потенциала TNF остается актуальным. 6

Следует отметить, что при лечении ряда аутоиммунных и воспалительных заболеваний, сопровождающихся повышенной экспрессией растворимой формы TNF, появляется необходимость блокирования действия TNF. Использование с этой целью растворимых рецепторов TNF или моноклональных антител не всегда бывает эффективно (Eigler et al., 1997).

Учитывая вышесказанное, мы предприняли поиск способов усиления и ингибирования TNF-зависимой гибели, воздействуя на отдельные этапы передачи цитотоксического сигнала.

Целью данной работы являлась разработка способов регулирования TNF- зависимого апоптоза и изучение роли конкретных белков, участвующих в этом процессе.

Поставленная цель вызвала необходимость решения следующих задач:

1. Исследование возможности регулирования TNF-зависимого апоптоза путем активации Fas-антигена.

2. Модификация TNF-зависимой гибели путем регуляции экспрессии белков семейства Вс1-2.

3. Изучение нуклеазных активностей, изменяющихся при реализации TNF-зависимого апоптоза и возможности регулирования клеточной гибели на этапе активации эндонуклеаз.

4. Исследование возможности модификации TNF-зависимой гибели химическими кросс-линкерами.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Мошникова, Анна Борисовна

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено, что активация Fas-антигена ингибирует TNF-зависимую гибель. Полученные данные указывают на то, что TNF-зависимый и Fas-опосредованный цитотоксические пути используют общие этапы передачи цитотоксического сигнала. Скорость передачи сигнала до первого общего этапа через рецепторы TNF и Fas-антиген различна.

2. Показано, что повышенная экспрессия генов bcl-Xi и bcl-2 ингибирует, а гена box резко усиливает апоптоз клеток L929, индуцированный фактором некроза опухолей, что указывает на возможность регулирования TNF-зависимого апоптоза путем изменения уровня экспрессии белков семейства Вс1-2.

3. Установлено, что деградация ДНК при реализации TNF-зависимой гибели сопровождается последовательной стимуляцией двух различных эндонуклеазных активностей - топоизомераза Ii-подобной и Ca2 7Мо2~-зависимой, коррелирующей с активацией каспазы-3. Блокирование топоизомераза И-подобной активности не предотвращает активацию Са2+/Мд2+-зависимой эндонуклеазы и не влияет на реализацию TNF-зависимой гибели клеток U937.

4. Обнаружено, что предобработка клеток кросс-линкерами DMS и EDC приводит к повышению чувствительности к цитотоксическому эффекту TNF. Полученные результаты подтверждают возможность модификации TNF-зависимой гибели клеток химическими кросс-линкерами.

5. Впервые показано, что кросс-линкеры способны индуцировать апоптоз некоторых трансформированных клеточных культур за счет образования сшивок минорных фракций белков.

6. Показано, что кросс-линкер EDC обладает противоопухолевой активностью, вызывая увеличение продолжительности жизни животных с экспериментальными опухолями.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование способов регулирования TNF-зависимого апоптоза представляет собой важную задачу. Во-первых, с практической точки зрения, полученные данные могут быть использованы как при разработке новых подходов к применению TNF в качестве противоопухолевого агента, так и для подавления активности TNF при аутоиммунных заболеваниях. Во-вторых, результаты, представленные в данной работе, позволяют углубить наши представления о молекулярных механизмах клеточной гибели, индуцированной TNF.

Предложенные способы регулирования TNF-зависимой гибели основываются на модификации отдельных этапов передачи цитотоксического сигнала рецептором TNF I типа (Liu et al., 1996; Baker and Reddy, 1998; Wallach et al., 1998).

Мы показали, что предобработка клеток U937 цитотоксическими анти-Fas антителами ингибирует цитотоксическое действие фактора некроза опухолей. Следовательно, существует возможность регулирования TNF-индуцированного апоптоза, воздействуя на молекулярные пути, опосредованные Fas-антигеном. Полученные данные позволяют заключить, во-первых, что TNF-зависимый и Fas-опосредованный цитотоксические пути, по-видимому, используют общие этапы передачи цитотоксического сигнала, и во-вторых, скорость передачи сигнала до первого общего этапа через рецепторы TNF и Fas-антиген различна. Можно предположить, что взаимосвязь между TNF- и Fas-зависимыми цитотоксическими путями осуществляется на уровне рецепторов и/или белков, ассоциированных с рецепторами. Принципиальная возможность физического взаимодействия "доменов смерти" во внутриклеточной части TNF-R1 и Fas-антигена была показана ранее в экспериментах in vitro (Boldin et al., 1995a). Наиболее вероятными кандидатами на роль рецептор-ассоциированных белков, способных передавать цитотоксический сигнал между TNF-R1 и Fas-антигеном, являются адапторные белки, FADD и REP (Boldin et al., 1995b; Stanger et al., 1995; Chinnaiyan et al., 1996; Varfolomeev et al., 1996), хотя не исключено участие и других, неизвестных на сегодняшний день, белков.

По-видимому, общие этапы передачи цитотоксического сигнала могут существовать не только для рецептора TNF I типа и Fas-антигена, но и для других рецепторов, содержащих во внутриклеточной части "домены смерти". В таком случае для ингибирования TNF-зависимого апоптоза могут быть использованы не только Fas-лиганд или цитотоксические анти-Fas антитела, но и другие лиганды, например TRAIL или

TWEAK (Ashkenazi and Dixit, 1998; Baker and Reddy, 1998). Однако схемы передачи сигналов, индуцированных этими лигандами, малоизучены по сравнению с TNF и Fas-лигандом, и их возможная роль в регулировании TNF-зависимого апоптоза требует дальнейшего исследования.

Изучение возможностей модификации TNF-зависимой гибели за счет изменения уровней экспрессии митохондриальных белков продемонстрировало, что повышенная экспрессия генов bclXi и bcl-2 ингибирует, a box резко усиливает алоптоз, индуцированный TNF в клетках L929. Следовательно, как минимум три члена белков семейства Bcl-2: Вах, Вс1-2 и Bc1-Xl могут принимать участие в передаче TNF-индуцированного сигнала в клетках L929. Повышенная экспрессия bcl-2 и bcl-XL снижает эффективность цитотоксического действия TNF, по-видимому, из-за ингибирования каспаз и/или стабилизации мембранного потенциала митохондрий, определяющего их устойчивость к индукции неспецифической проницаемости (Decaudin et al., 1997; Clem et al., 1998). В случае клеток, трансфицированных геном box, возможным объяснением усиления TNF-зависимого апоптоза могут быть активация каспаз и повышение чувствительности митохондрий к индукции неспецифической проницаемости (Shimizu et al., 1999).

Известно, что повышение жизнеспособности опухолевых клеток при онкологических заболеваниях сопровождается нарушениями регуляции апоптоза, обусловленными, в частности, гиперэкспрессией белков-ингибиторов апоптоза, таких как Bcl-2 (Kornblau et al., 1999). Представленные в работе данные подтверждают гипотезу (Kroemer, 1997), что повышение экспрессии других белков семейства Bcl-2, таких как Вах, Bad и Bid, способных взаимодействовать с Bcl-2, усиливает чувствительность клеток к апоптотическим факторам, в частности к TNF, что может приводить в конечном счете к снижению лекарственной устойчивости опухолевых клеток.

При исследовании возможностей регулирования TNF-зависимого апоптоза на стадии активации эндонуклеаз было обнаружено, что фрагментация ДНК при TNF-зависимой гибели клеток U937 обусловлена активацией по крайней мере трех ферментативных активностей - каспаза-3-подобной, активностей топоизомеразы П и Са2+/М£2+-зависимой нуклеазы. Ранее было показано, что одним из ключевых событий реализации апоптоза является активация каспазы-3, расщепляющей различные внутриклеточные белки, что в конечном счете ведет к проявлению морфологических и биохимических признаков апоптоза (Liu et al., 1997; Wolf et al., 1999; Mundle et al., 1999). Полученные нами данные подтверждают, что при реализации TNF-индуцированной гибели активация каспазы-3 предшествует появлению межнуклеосомных фрагментов ДНК. Однако литературные данные о конкретных эндонуклеазах, ответственных за деградацию ДНК, и путях регуляции этих ферментативных активностей в погибающих клетках фрагментарны. При выяснении природы эндонуклеазы, осуществляющей деградацию ДНК в клетках различных типов были выявлены различные эндонуклеазные активности: DFF40/CPAN (Liu et al., 1997; Halenbeck et al., 1998), NUC70 (Urbano et al., 1998), зависящие от двухвалентных ионов нейтральная (Wyllie et al., 1980) и кислая (Torriglia et al., 1998) эндонуклеазы, Ca2+ -и Mg -зависимые эндонуклеазы (Nikonova et al., 1993; Yakovlev et al., 2000), ДНК-аза-l (Peitsch et al., 1994). Мы обнаружили, что на ранних этапах TNF-индуцированной клеточной гибели активируется топоизомераза Ii-подобная активность. Tono Ii-подобная активность имела временный характер и снижалась практически до контрольных значений ко времени появления межнуклеосомных фрагментов ДНК в погибающих клетках. В отличие от топо И-подобной активности, активация Ca2+/Mg2+-зависимой нуклеазы совпадала по времени с началом межнуклеосомной фрагментации хроматина и коррелировала с активностью каспазы-3. Полученные результаты дают основание полагать, что именно Са2+ЛУ^+-зависимая нуклеаза вызывает межнуклеосомную деградацию ДНК в погибающих под действием TNF клетках U937.

Наши результаты показывают, что добавление к клеткам ингибитора топоизомеразы II этопозида, блокирующего топо Ii-подобную активность, не влияет на интенсивность реализации TNF-зависимой гибели. По-видимому, для ингибирования TNF-зависимой

2+ 2+ гибели на стадии активации эндонуклеаз необходимо блокировать активность С a /Mg -зависимой нуклеазы. Роль топо Ii-подобной активности в апоптозе, индуцированном TNF, остается непонятной и требует дальнейших исследований.

При изучении возможностей модификации TNF-зависимой гибели с помощью химических кросс-линкеров было обнаружено, что сшивка минорных фракций белков может приводить к индукции цитотоксического сигнала. Используемые в данной работе кросс-линкеры DMS, BSOCOP и EDC вызывали апоптотическую клеточную гибель некоторых трансформированных клеточных культур. Наличие различной "специфичности к мишеням" используемых кросс-линкеров, анализ кинетических зависимостей гибели клеточных культур и изменений в распределении клеток по фазам клеточного цикла, наблюдаемые отличия в экспрессии генов семейства bcl-2, позволяют сделать вывод о различных путях реализации DMS-, EDC- и BSOCOP-индуцированного апоптоза.

Хотя конкретные молекулярные мишени кросс-линкеров не были идентифицированы, можно утверждать, что индукция DMS-, BSOCOP- и EDC-зависимой гибели представляет собой строго специфическое событие, сравнимое с активацией цитокин-зависимой гибели. Во-первых, апоптоз клеток-мишеней запускается только при кросс-сшивке строго определенных молекулярных мишеней. Это предположение основывается, в частности, на том, что среди многочисленных препаратов антител, узнающих мембранные белки, лишь единичные, направленные против небольшого числа конкретных белков, вызывают тот или иной клеточный ответ (Trauth et al., 1989; Yonehara et al., 1989; Engelmann et al., 1990). Далее, известно, что активация известных рецепторов индуцирует клеточную гибель путем передачи конформационных изменений (Wallach et al., 1998), поэтому индукция апоптоза кросс-линкерами должна определяться такого рода сшивкой, которая приводит к возникновению необходимой для запуска клеточной гибели конформационной перестройки. И наконец, реакция, индуцирующая апоптоз, должна заключаться во взаимодействии кросс-линкера, по крайней мере, с двумя доступными аминокислотами, находящимися друг от друга на расстоянии, не превышающем длину спейсера конкретного кросс-линкера. Таким образом, учитывая вышесказанное можно заключить, что связывание двух определенных мишеней кросс-линкером, приводящее к клеточной гибели, должно представлять собой строго специфическое событие, зависящее от структурно-функциональных свойств как кросс-линкера, так и конкретных молекулярных мишеней в опухолевых клетках.

В ходе работы были выявлены два кросс-линкера - DMS и EDC, способные не только индуцировать апоптоз, но и усиливать TNF-зависимую гибель клеток U937. Полученные данные впервые указывают на возможность модификации TNF-зависимой гибели химическими кросс-линкерами.

Особый интерес представляет способность DMS усиливать TNF-зависимую и ингибировать Fas-опосредованную гибель клеток. Усиление TNF-зависимого апоптоза путем предобработки клеток DMS позволяет предполагать, что DMS 1) образует сшивки, активируя рецепторы TNF (Engelmann et al., 1990); 2) способствует связыванию TNF с рецептором TNF I типа (Tartaglia et al., 1993a; Pinckard et al., 1997); 3) сшивает рецепторы у-интерферона, активация которых, как известно, резко усиливает TNF-зависимую гибель (Shinagawa et al., 1991) и 4) оказывает действие, аналогичное ингибиторам синтеза белка (Beutler, Cerami, 1988). Однако в последних двух случаях следовало бы ожидать отсутствие ингибирующего эффекта MAI и усиление Fas-опосредованного апоптоза. Взаимодействие DMS с рецепторами TNF представляется наиболее вероятным вариантом объяснения наблюдаемых эффектов, хотя нельзя исключить возможность

125 того, что влияние DMS на TNF-зависимую и Fas-опосредованную гибель клеток осуществляется с использованием новых, еще неизвестных механизмов.

Мы предполагаем, что одними из мишеней для кросс-линкера "нулевой длины" EDC также могут быть рецепторы TNF, представленные в виде олигомерных комплексов на поверхности клеток (Chan et al., 2000). Данные комплексы образованны за счет межмолекулярных связей между цистеинами CRD1-доменов рецепторов. В то же время показано, что в образование активированных тримеров TNF-Rl, TNF-R2 и Fas вовлечены CRD2 и CRD3 (Banner et al., 1993). Можно предположить, что обработка клеток кросс-линкером "нулевой длины" EDC приводит к фиксации электростатических взаимодействий, существующих между CRD2 и CRD3 доменами, и, как следствие, к активации рецепторов. В то же время, поскольку полученные данные демонстрируют, что противоопухолевая активность EDC связана с нарушением регуляции клеточного цикла на стадии цитокинеза, то кажется вероятным существование других молекулярных мишеней для EDC, в качестве которых могут выступать, например, белки цитоскелета, необратимая сшивка и (или) модификация которых может приводить к дисрегуляции цитокинеза (Jordan, Wilson, 1998; Atencia et al., 2000). Для окончательного ответа на вопрос о возможных механизмах EDC-индуцированной гибели необходимо проведение дальнейших исследований.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мошникова, Анна Борисовна, Пущино

1. Андреева Л.И., Иванова Л.И., Титова М.В., Петрова B.C. Биохимические механизмы апоптоза. В кн. "Программируемая клеточная гибель" под ред. Новикова B.C., 1996, Санкт-Петербург, "Наука", стр. 51-72.

2. Белецкий И.П., Сорокина О.В., Никонова Л.В. (1999) Генная терапия на основе системы Fas-антиген Fas-лиганд. Вопр. Биол. Мед. Фарм. Химии, № 4, стр. 40-49.

3. Горман К. Высокоэффективный перенос генов в клетки млекопитающих. В кн.: Клонирование ДНК. Методы, под ред. Гловера Д., 1988, Москва, "Мир", стр. 420-422.

4. Кетлинский С.А., Белова Л.А., Селезнева Л.А., Пасечник В.А. (1989) Фактор некроза опухоли и лимфотоксин эндогенные противоопухолевые антибиотики. Успехи современной биологии, т. 107, вып. 1, стр. 79-91.

5. Куцый М.П., Кузнецова Е.А., Газиев А.И. (1999) Участие протеаз в апоптозе. Биохимия, т. 64, стр. 149-163.

6. Свердлов Е.Д. (1997) Очерки современной молекулярной генетики. Генная терапия и медицина XXI века. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, № 2, стр. 328.

7. Северин С.У. "Биохимия и медицина новые подходы и достижения", 1998, Москва, Издательский дом "Русский врач"; Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова, 95стр.

8. Пальцев М.А., Иванов A.A. "Межклеточные взаимодействия", 1995, Москва, "Медицина", 254 стр.

9. Хансон К.П. (1998) Апоптоз: современное состояние проблемы. Известия АН. Серия биологическая, №2, стр. 134-141.

10. Фельдман Н.Б., Киселев С.М., Гукасова Н.В., Посыпанова Г.А. Луценко C.B., Северин С.Е. (2000) Противоопухолевая активность коньюгата а-фетопротеина с доксорубицином in vitro и in vivo. Биохимия, т. 65, вып. 8, стр. 1140-1145.

11. Adam-Klages, S., Adam, D., Wiegmann, К., Struve, S., Kolanus, W., Schneider-Mergener, J., Kroenke, M. (1996) FAN, a novel WD-repeat protein, couples the p55 TNF-receptor to neutral sphingomyelinase. Cell, v. 86, p. 937-947.

12. Adams, J.M., Cory, S. (1998) The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival. Science, v. 281, p. 1322-1326.

13. Afanas'ev, V.N., Korol, B.A., Mantsygin, Yu.A., Nelipovich, P.A., Pechatnikov, V.A., Umansky, S.R. (1986) Flow cytometry and biochemical analysis of DNA degradation characteristic of two types of cell death. FEBS Lett., v. 194, № 2, p. 47-350.

14. Aggarwal, B.B., Pandita, R. (1994) Both type I and type II interferons down-regulate human tumor necrosis factor receptors in human hepatocellular carcinoma cell line HEP G2: role of protein kinase C. FEBS Lett., v. 337, № 1, p. 99-102.

15. Aggarwal, B.B., Natarajan, K. (1996) Tumor necrosis factors: Developments during the last decade. Eur. Cytokine Netw., v. 7, № 2, p. 93-124.y

16. Alderson, M.R., Tough, T.W., Braddy, S., Davis-Smith, T., Roux, E., Schooley, K., Miler, R.E., Lynch, D.H. (1994) Regulation of apoptosis and T cell activation by Fas-specific mAb. International Immunol., v. 6, p. 1789-1806.

17. Ashkenazi, A., Dixit, V.M. (1998) Death receptors: signaling and modulation. Science, v. 281, №5381, p. 1305-1308.

18. Atencia, R., Asumendi, A., Garcia-Sanz, M. (2000) Role of cytoskeleton in apoptosis. Vitam. Horm., v. 58, p. 267-297.

19. Ausubel, F.M., Brent, R., Kingston, R.E. et al., Eds., In: Short protocols in molecular biology. 1992a. John Wiley & Sons, New York, pp. 2-4 2-9.

20. Ausubel, F.M., Brent, R., Kingston, R.E. et al., Eds., In: Short protocols in molecular biology. 1992b. John Wiley & Sons, New York, pp. 4-5 4-6.

21. Baker, S.J., Reddy, E.P. (1998) Modulation of life and death by the TNF receptor superfamily. Oncogene, v. 17, № 25, p. 3261-3270.

22. Bakker, T.R., Reed, D., Renno, T., Jongeneel, C.V. (1999) Efficient adenoviral transfer of NF-kappaB inhibitor sensitizes melanoma to tumor necrosis factor-mediated apoptosis. Int. J. Cancer, v. 80, № 2, p. 320-323.

23. Benedict, M.A., Hu, Y., Inohara, N., Nunez, G. (2000) Expression and functional analysis of apaf-1 isoforms. Extra Wd-40 repeat is required for cytochrome c binding and regulated activation of procaspase-9. J. Biol. Chem., v. 275, № 12, p. 8461-8468.

24. Bergenwald, C., Westermark, G., Sander, B. (1997) Variable expression of tumor necrosis factor alpha in human malignant melanoma localized by in situ hybridization for mRNA. Cancer Immunol. Immunother., v. 44, № 6, p. 335-340.

25. Berkova, N., Lemay, A., Korobko, V., Shingarova, L., Sagaidak, L., Goupil, S. (1999) Tumor necrosis factor mutants with selective cytotoxic activity. Cancer Detect. Prev., v. 23, № 1, p. 17.

26. Beutler, B., Greenwald, D., Hulmes, J.D., Chang, M., Pan, Y.-C., Mathison, J., Ulevitch, R., Cerami, A. (1985) Identity of tumor necrosis factor and the macrophage-secreted factor cachectin. Nature, v. 316, p. 552-554.

27. Beutler, B., Cerami, A. (1986) Cachectin and tumour necrosis factor as two side of the same biological coin. Nature, v. 320, № 6063, p. 584-588.

28. Bigda, J., Beletsky, I., Brakebusch, C., Varfolomeev, Y., Engelmann, H., Bigda, J., Holtmann, H., Wallach, D. (1994) Dual role of the p75 tumor necrosis factor (TNF) receptor in TNF cytotoxicity. J. Exp. Med., v. 180, p. 445-460.

29. Bodmer, M.W. (1996) Clinical development of an emgineered human anti-TNF antibody. Eur. Cyt. Net., v. 7, № 2, p.285.

30. Boldin, M.P., Varfolomeev, E.E., Pancer, Z., Mett, I.L., Camonis, J.H., Wallach, D. (1995b) A novel protein that interact with the death domain of Fas/APOl contain a sequence motif related to the death domain. J. Biol. Chem., v. 270, p. 7795-7798.

31. Boldin, M.P., Mett, I.L., Wallach, D. (1995c) A protein related to a proteasomal subunit binds to the intracellular domain of the p55 TNF receptor upstream to its 'death domain'. FEBS Lett., v. 367, № l,p. 39-44.

32. Boldin, M.P., Goncharov, T.M., Goltsev, Y.V., Wallach, D. (1996) Involvement of MACH, a novel MORTl/FADD-interacting protease, in Fas/APO-1- and TNF receptor-induced cell death. Cell, v. 85, № 6, p. 803-815.

33. Brach, M.A., Gruss, H.J., Sott, C., Herrmann, F. (1993) The mitogen responce to tumor necrosis factor alpha requires c-jun/AP-1. Mol. Cell. Biol., v. 13, № 7, p. 4284-4290.

34. Bradford, M.M. (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem., v. 72, p. 248-254.j

35. Bratton, S.B., Walker, G., Srinivasula, S.M., Sun, X.M., Butterworth, M., Alnemri, E.S., Cohen, G.M. (2001) Recruitment, activation and retention of caspases-9 and -3 by Apaf-1 apoptosome and associated XIAP complexes. EMBO J., v. 20, № 5, p. 998-1009.

36. Brink, R., Lodish, H.F. (1998) Tumor necrosis factor receptor (TNFR)-associated factor 2A (TRAF2A), a TRAF2 splice variant with an extended RING finger domain that inhibits TNFR2-mediated NF-kappaB activation. J. Biol. Chem., v. 273, p. 4129-4134.

37. Carpentier, I., Beyaert, R. (1999) TRAF1 is a TNF inducible regulator ofNF-kappaB activation. FEBS Lett., v. 460, № 2, p. 246-250.

38. Catsoulacos, P., Camoutsis, C., Papageorgiou, A., Adamiak-Margariti, E. (1992) Cytostatic Effect of homo-aza-steroidal esters in vivo and in vitro. Structure-activity relationships. Anticancer Res., v. 12, p. 1617-1620.

39. Chan, F.K.-M., Chun, H.J., Zheng, L., Siegel, R.M., Bui, K.L., and Lenardo, M.J. (2000a) A domain in TNF receptors that mediates ligand-independent receptor assembly and signaling. Science, v. 288, p. 2351-2354.

40. Chan, F.K., Lenardo, M.J. (2000b) A crucial role for p80 TNF-R2 in amplifying p60 TNF-R1 apoptosis signals in T lymphocytes. Eur. J. Immunol., v. 30, № 2, p. 652-660.

41. Chcialowski, A., Plusa, T., Szczylik, C., Mamelka, B., Bajera, I., Targowski, T., Dudko, S., Wcislo, G. (1997) Local treatment with tumor necrosis factor alpha in a patient with lung cancer. Pol. Merkuriusz Lek., v. 2/ № 12, p. 382-384.

42. Cheng, G., Baltimore, D. (1996) TANK, a co-inducer with TRAF2 of TNF- and CD40L-mediated NF-kB activation. Genes Dev., v. 10, p. 963-973.

43. Chinnaiyan, A.M., O'Rourke, K., Lane, B.R., Dixit, V.M. (1997) Interaction of CED-4 with CED-3 and CED-9: a molecular framework for cell death. Science, v. 275, p. 1122-1126.

44. Chou, J.J., Li, H., Salvesen, G.S., Yuan, J., Wagner, G. (1999) Solution structure of BID, an intracellular amplifier of apoptotic signaling. Cell, v. 96, № 5, p. 615-624.

45. Cohen, J.M. (1997) Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem., v. 326, p. 1-15.

46. Crowe, P.D., Walter, B.N., Möhler, K.M., Otten-Evans, C„ Black, R.A., Ware, C.F. (1995) A metalloprotease inhibitor block shedding of the 80-kD TNF receptor and TNF processing in T lymphocytes. J. Exp. Med., v. 181, № 3, p. 1205-1210.

47. Curnis, F., Sacchi, A., Borgna, L., Magni, F., Gasparri, A., Corti, A. (2000) Enhancement of tumor necrosis factor alpha antitumor immunotherapeutic properties by targeted delivery to aminopeptidase N (CD 13). Nat. Biotechnol. v. 18, № 11, p. 1185-1190.

48. Dai, C., and Krantz, S.B. (1999) Interferon gamma induces upregulation and activation of caspases 1, 3, and 8 to produce apoptosis in human erythroid progenitor cells. Blood, v. 93, p. 3309-3316.

49. Darnay, B.G., Reddy, S.A., Aggarwal, B.B (1994b) Identification of a protein kinase associated with the cytoplasmic domain of p60 tumor necrosis factor receptor. J. Biol. Chem., v. 269, p. 20299-20304.

50. Darnay, B.G., Singh, S., Aggarwal, B.B. (1997) The p80 TNF receptor-associated kinase (p80TRAK) associated with residues 354-397 of the p80 cytoplasmic domain: similarity to casein kinase. FEBS Lett., v. 406, p. 101-105.

51. Darzynkiewicz, Z., Carter, S. P., Old, L. J. (1987) Effect of recombinant tumor necrosis factor on HL-60 cells: cell-cycle specificity and synergism with actinomycin D. J. Cell Physiol., v. 130, p. 328-335.

52. Dean,R.T., Fu, S., Stockr, R., Davies, M.J. (1997) Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation. Biochem. J., v. 324, p. 1-18.

53. Declercq, W., Denecker, G., Fiers, W., Vandenabele, P (1998) Cooperation of both TNF receptors in inducing apoptosis: involvement of the TNF Receptor-Associated Factor binding domain of the TNF receptor 75. J. Immunol., v. 161, p. 390-399.

54. Dizdaroglu, M. (1992) Oxidative damage to DNA in mammalian chromatin. Mutation Res., v. 275, p. 331-341.

55. Dri, P., Haas, E., Cramer, R., Menegazzi, R., Gasparini, C., Martinelli, R., Scheurich, P., Patriarca, P. (1999) Role of the 75-kDa TNF receptor in TNF-induced activation of neutrophil respiratory burst. J. Immunol, v. 162, p. 460-466.

56. Duan, H., Dixit, V.M. (1997) RAIDD is a new 'death' adaptor molecule. Nature, v. 385, p. 8689.

57. Eggermont, A.M.M. (1996) Regional application of TNF-a in the treatment of cancer: lessons from an interactive clinical-preclinical programme. Eur. Cyt. Net., v. 7, № 2, p. 286.

58. Eigler, A., Sinha, B., Hartmann, G., Endres, S. (1997) Taming ETAto restrain this proinflammatory cytokine. Immunol. Today, v. 18, p. 487-492.

59. Enari, M., Hug, H., Nagata, S. (1995) Invoxvement of an ICE-like protease in Fas-mediated apoptosis. Nature, v. 375, p. 78-81.

60. Enari, M., Sakahiera, H., Yokoyama, H., Okawa, K., Iwamatsu, A., Nagata, S. (1998) A caspase-activated Dnase that degrades DNA during apoptosis, and its inhibitor ICAD, Nature, v. 391, p. 43-50.

61. Eskes, R., Desagher, S., Antonsson, B., Martinou, J.C. (2000) Bid induces the oligomerization and insertion of Bax into the outer mitochondrial membrane. Mol. Cell Biol., v. 20, № 3, p. 929-935.

62. Fadeel, B., Thorpe, C.J., Yonehara, S., Chiodi, F. (1997) Anti-Fas IgGl antibodies recognizing the same epitope of Fas/APO-1 mediate different biological effects in vitro. Int Immunol., v. 9, p.201-209.

63. Fadeel, B., Lindberg, J., Achour, A., Chiodi, F. (1998) A three-dimensional model of the Fas/APO-1 molecule: cross-reactivity of anti-Fas antibodies explained by structural mimicry of antigenic sites. Int. Immunol., v. 10, p. 131-140.

64. Fisch, H., Gifford, G.E. (1983) In vitro production of rabbit macrophage tumor cell cytotoxin. Int. J. Cancer, v. 32, p. 105-112.

65. Freiberg, R.A., Spencer, D.M., Choate, K.A., Duh, H.J., Schreiber, S.L., Crabtree, G.R., Khavari, P.A. (1997) Fas signal transduction triggers either proliferation or apoptosis in human fibroblasts. J. Invest. Dermatol., v. 108, p. 215-219.

66. Garswell, E.A., Old, L.J., Kassel, R.L., Green, S., Fiore, N.,Williamson, B. (1975) An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 72, p.3666-3670.

67. Goppelt-Struebe, M., Reiser, C.O.A., Schneider, N., Grell, M. (1996) Modulation of tumor necrosis factor (TNF) receptor expression during monocytic differentiation by glucocorticoidslnflamm. Res., v. 45, p. 503-507.

68. Grell, M., Becke, F.M., Wajant, H., Mannel, D.N., Scheurich, P. (1998a) TNF receptor type 2 mediates thymocyte proliferation independently of TNF receptor type 1. Eur. J. Immunol., v. 28, № 1, p. 257-263.

69. Grell, M., Wajant, H., Zimmermann, G., Scheurich, P. (1998b) The type 1 receptor (CD 120a) is the high-affinity receptor for soluble tumor necrosis factor. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 95, p. 570-575.

70. Gross, A., Jockel, J., Wei, M.C., Korsmeyer, S.J. (1998) Enforced dimerization of BAX results in its translocation, mitochondrial dysfunction and apoptosis. EMBO J., v. 17. p. 3878-3885.

71. Gruss, H.-J., Dower, S.K. (1995) Tumor necrosis factor ligand superfamily: involvement in the pathology of malignant lymphomas. Blood, v. 85, p. 3378-3404.

72. Gupta, S., Campbell, D., Derijard, B., Davis, R.J., (1995) Transcription factor ATF2 regulation by the JNK signal transduction pathway. Science, v. 267, p. 389-3930.

73. Haas, J.G., Thiel, C., Blomer, K., Weiss, E.H., Riethmuller, G., Ziegler-Heitbrock, H.W. (1989) Downregulation of tumor necrosis factor expression in the human Mono-Mac-6 cell line by lipopolysaccharide. J. Leukoc. Biol., v. 46, p. 11-14.

74. Hagimoto, N. Kuwano, K., Miyazaki, H., Kunitake, R., Fujita, M., Kawasaki, M., Kaneko, Y., Hara, N. (1997) Induction of apoptosis and pulmonary fibrosis in mice in response to ligation of Fas antigen. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., v. 17, p. 272-278.

75. Halenbeck, R., MacDonald, H., Roulston, A., Chen, T.T., Conroy, L., Williams, L.T. (1998) CPAN, a human nuclease regulated by the caspase-sensitive inhibitor DFF45. Curr. Biol., v. 8, p. 537-540.

76. Hallahan, D.E., Viradachalam, S., Kuchibhotla, J., Kufe, D.W., Weichselbaum, R.R. (1994) Membrane-derived second messenger regulates x-ray mediated tumor necrosis factor a gene induction. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 9i, p. 4897-4901.

77. Haridas, V., Darnay, B.G., Natarajan. K., Heller, R., Aggarwal, B.B. (1998) Overexpression of the p80 TNF receptor leads to TNF-dependent apoptosis, nuclear factor-kappa B activation, and c-Jun kinase activation. J. Immunol., v. 160, p. 3152-3162.

78. Heller, R.A., Song, K., Fan, N., Chang, D.J. (1992) The p70 tumor necrosis factor receptor mediates cytotoxicity. Cell, v. 70, № 1, p. 47-56.

79. Higuchi, M., Aggarwal, B.B. (1994) Tumor necrosis factor induced internalization of the p60 receptor and shedding of the p80 receptor. J. Immunol, v. 152, № 7, p. 3550-3558.

80. Hildt, E., Oess, S. (1999) Identification of Grb2 as a novel binding partner of tumor necrosis factor (TNF) receptor I. J. Exp. Med., v. 189, № 11, p. 1707-1714.

81. Hofmann, K., Bucher, P., Tschopp, J. (1997) A new apoptotic signalling motif. Trends Biochem. Sci., v. 22, p. 155-156.

82. Hsu, H., Xiong, J., Goeddel, D.V. (1995) The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-kB activation. Cell, v.81, p. 495-504.

83. Hsu, H., Huang, J., Shu, H.B., Baichwal, V., Goeddel, D.V. (1996) TNF-dependent recruitment of the protein kinase RIP to the TNF receptor-1 signaling complex. Immunity, v. 4, p. 387-396.

84. Jaattela, M., Wissing, D., Bauer, P.A., Li, G.C. (1992) Major heat shock protein hsp70 protects tumor cells from tumor necrosis factor cytotoxicity. EMBO J., v. 11, p. 3507-3512.

85. Jaattela, M., Benedict M., Tewari M., Shayman J.A., Dixit V.M. (1995) Bcl-x and Bcl-2 inhibit TNF and Fas-induced apoptosis and activation of phospholipase A2 in breast carcinoma cells. Oncogene, v. 10, № 12, p. 2297-2305.

86. Jiang, Y., Woronicz, J.D., Liu, W., Goeddel, D.V. (1999) Prevention of constitutive TNF receptor 1 signaling by silencer of death domains. Science, v. 283, № 5401, p. 543-546.

87. Johnson, D.G., Walker, C.L. (1999) Cyclins and cell cycle checkpoints. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., v. 39, p. 295-312.

88. Jones, E.Y., Stuart, D.I., Walker, N.P.C. (1989) Structure of tumor necrosis factor. Nature, v. 338, p. 225-228.

89. Jordan, M.A., Wilson, L. (1998) Microtubules and actin filaments: dynamic targets for cancer chemotherapy. Curr. Opin. Cell. Biol., v. 10, № 1, p. 123-130.

90. Karsan, A., Yee, E., Harlan, J.M. (1996) Endothelial cell death induced by tumor necrosis factor-a is inhibited by the Bcl-2 family member, Al. J. Biol. Chem., v. 271, p. 27201-27204.

91. Kawase, E., Yamamoto, Y., Hashimoto, K., Nakatsuji, N. (1994) Tumor necrosis factor-a (TNF-a) stimulates proliferation of mouse primordial germ cells in culture. Dev. Biol., v. 161, p. 91-95.

92. Kim, K.U., Kwon, O.J., Jue, D.M. (1993) Pro-tumor necrosis factor cleavage enzyme in macrophages membrane/particulate. Immunology, v. 80, p. 134-139.

93. Kircheis, R., Milleck, J., Korobko, V.G., Shingarova, L.N., Behnke, D., Schmidt, H.E. (1992) Biological activity of mutants of human necrosis factor-alpha. Immunology, v. 76, p. 433-438.

94. Komada, Y., Inaba, H., Li, Q.S., Azuma, E., Zhou, Y.W., Yamamoto, H., Sakurai, M. (1999) Epitopes and functional responses defined by a panel of anti-Fas (CD95) monoclonal antibodies. Hybridoma, v. 18, p. 391-398.

95. Kondo, S. Ishizaka, Y., Okada, T., Kondo/Y., Hitomi, M., Tanaka, Y., Haqqi, T., Barnett, G.H., Barna, B.P. (1998) FADD gene therapy for malignant gliomas in vitro and in vivo. Hum. GeneTher., v. 9, № 11, p. 1599-1608.

96. Korsmeyer, S.J. (1995) Regulators of cell death. Trends Genet., v. 11, № 3, p. 101-105.

97. Korsmeyer, S.J. (1999) Bcl-2 gene family and the regulation of programmed cell death. Cancer Res., v. 59, p. 1693-1700.

98. Kroemer, G. (1997) The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis. Nature Med., v. 3,№ 6, p. 614-620.

99. Kumar, S. (1999) Mechanisms mediating caspase activation in cell death. Cell Death Differ., v. 6, №11, p. 1060-1066.

100. Macchia, D., Almerigogna F., Parronchi, P., Ravina, A., Maggi, E., Romagnani, S. (1993) Membrane tumor necrosis factor-a is involved in the polyclonal B-cell activation induced by HIV-infected human T-cells. Nature, v. 363, p. 464-466.

101. MacCorcle, R.A., Freeman, K.W., Spencer, D.M. (1998) Synthetic activation of caspases: Artificial death switches. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 95, p. 3655-3660.

102. Malinin, N.L., Boldin, M.P., Kovalenko, A.V., Wallach, D. (1997) MAP3K-related kinase involved in NF-kappaB induction by TNF, CD95 and IL-1. Nature, v. 385, № 6616, p. 540-544.

103. Martinon, F., Holler, N., Richard, C., Tschopp, J. (2000) Activation of. a pro-apoptotic amplification loop through inhibition of NF-kappaB-dependent survival signals by caspase-mediated inactivation of RIP. FEBS Lett., v. 468, № 2-3, p. 134-136.

104. McCarthy, J.V., Ni, J., Dixit, V.M. (1998) RIP2 is a novel NF-kappaB-activating and cell death-inducing kinase. J. Biol. Chem., v. 273, p. 16968-16975.

105. Meager, A., Sampson, L.E., Grell, M., Scheurich, P. (1993) Development of resistance to tumor necrosis factor (TNF-a) in KYM-1 cells involves both TNF receptors. Cytokine, v. 5, № 6, p. 556-563.

106. Medema, R.H., Klompmaker, R., Smits, V.A., Rijksen, G. (1998) p21wafl can block cells at two points in the cell cycle, but does not interfere with processive DNA-replication or stress-activated kinases. Oncogene, v. 16, № 4, p. 431-441.

107. Menon, S.A., Hou, J., Moreno, M.B., Zacharchuk, C.M. (1998) Apoptosis induced by a chimeric Fas/FLICE receptor: lack of requirement for Fas- or FADD-binding protein. J. Immunol., v. 160, № 5, p. 2046-2049.

108. Micheau, O., Solary, E., Hammann, F., Dimanche-Boitrel, M.-T. (1999) Fas-ligand independent, FADD-mediated activation of the Fas death pathway by anticancer drugs. J. Biol. Chem., v. 274, № 2, p. 7987-7992.

109. Minn A.J., Velez P., Schendel S.L., Liang H., Muchmore S.W., Fesik S.W., Fill M., Thompson C.B. (1997) Bcl-x(L) forms an ion channel in synthetic lipid membranes. Nature, v. 385, № 6614, p. 353-357.

110. Mosmann, T. (1983) Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Methods, v. 65, p. 55-63.

111. Mullberg, J., Durie, F., Otten-Evans, C., Alderson, M.R., Roselohn, S., Cosman, D., Black, R.A., Mohler, K.M. (1995) A metalloprotease inhibitor block shedding of the IL-6 receptor and the p60 TNF receptor. J. Immunol., v. 155, № 11, p. 5198-5205.

112. Muzio, M., Salvesen, G.S., Dixit, V.M. (1997) FLICE induced apoptosis in cell-free system. Cleavage of caspase zymogens. J. Biol. Chem., v. 272, p. 2952-2956.

113. Muzio, M., Stockwell, B.R., Stennicke, H.R., Salvesen, G.S., Dixit, V.M. (1998) An induced proximity model for caspase-8 activation. J. Biol. Chem., v. 273, № 5, p. 2926-2930.

114. Neilson, D.G. in: The Chemistry of Amidines and Imidates (Patai S., Ed) (1975) Interscience, New York, pp. 385-489.

115. Nikonova, L.V., Beletsky, I.P., Umansky, S.R. (1993) Properties of some nuclear nucleases of rat thymocytes and their changes in radiation-induced apoptosis. Eur. J. Biochem., v. 215, p. 893-901.

116. Nishitoh, H., Saitoh, M., Mochida, Y., Takeda, K., Nakano, H., Rothe, M., Miyazono, K., Ichijo, H. (1998) ASK1 is essential for JNK/SAPK activation by TRAF2. Mol. Cell, v. 2, № 3, p. 389-395.

117. Nunez, G., Benedict, M.A., Hu, Y., Inohara, N. (1998) Caspases: the proteases of the apoptotic pathway. Oncogene, v. 17, № 25, p. 3237-3245.

118. Orth, K, Chinnaiyan, A.M., Garg, M., Froelich, C.J., Dixit, V.M. (1996) The CED-3/ICE-like protease Mch2 is activated during apoptosis and cleaves the death substrate lamin A. J. Biol. Chem., v. 271, p. 16443-16446.

119. Pampfer, S., Wuu, Y.D., Vanderheyden, I., De Hertogh, R. (1994) Expression tumor necrosis factor-a (TNF-a) receptors and selective effect of TNF-a on the inner cell mass in mouse blastocysts. Endocrinology, v. 134, p. 206-212.

120. Pan, G., Humke, E.W., Dixit, V.M. (1998) Activation of caspases triggered by cytochrome c in vitro. FEBS Lett., v. 426, № 1, p. 151-154.

121. Park, Y.C., Burkitt, V., Villa, A.R., Tong, L., Wu, H. (1999) Structural basis for self-association and receptor recognition of human TRAF2. Nature, v. 398, p. 533-538.

122. Peck, R., Brockhaus, M., Frey, J.R. (1989) Cell Surface Tumor Necrosis Factor (TNF) Accounts for Monocyte- and Lymphocyte-Mediated Killing of TNF-Resistant Target Cells. Cell. Immunol., v. 122, p. 1-10.

123. Peitsch, M.C., Mannherz, H.G., Tschopp, J. (1994) Characterization of the endogenous deoxyribonuclease involved in nuclear DNA degradation during apoptosis. Trends Cell Biol., v. 4, p. 37-41.

124. Pennica, D., Hayflick, J.S., Bringman, T.S., Palladino, M.A., Goeddel, D.V. (1985) Cloning and expression in Escherichia coli of the cDNA for murine tumor necrosis factor. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 82, p. 6060-6064.

125. Pennica, D., Goeddel, D.V. (1987) Cloning and Characterization of the Genes for Human and Murine Tumor Necrosis Factors. Lymphokines, v. 13, p. 163-180.

126. Perez C., Albert, I., DeFay, K., Zachariades, N., Gooding, L., Kriegler, M. (1990) A nonsecretable cell surface mutant of tumor necrosis factor (TNF) kills by cell-co-cell contact. Cell, v. 63, p. 251-258.

127. Pinckard, J.K., Sheehan, K.C., Schreiber, R.D. (1997) Ligand-induced formation of p55 and p75 tumor necrosis factor receptor heterocomplexes on intact cells. J. Biol. Chem., v. 272, p. 10784-10789.

128. Reinhard, C., Shamoon, B., Shyamala, V., Williams, L.T. (1997) Tumor necrosis factor alpha-induced activation of c-jun N-terminal kinase is mediated by TRAF2. EMBO J., v. 16, № 5, p. 1080-1092.

129. Rosse, T., Olivier, R., Monney, L., Rager, M., Conus, S., Fellay, I., Janser, B., Borner, C. (1998) Bcl-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome C. Nature, v. 391, p. 496-499.

130. Rothe, M., Wong, S.C., Henzel, W.J., Goeddel, D.V. (1994) A novel family of putative signal transducers associated with the cytoplasmic domain of the 75 kDa tumor necrosis factor receptor. Cell, v. 78, № 4, p. 681-692.

131. Rothe, M., Sarma, V., Dixit, V.M., Goeddel, D.V. (1995) TRAF2-mediated activation of NF-kB by TNF receptor 2 and CD40. Science, v. 269, p. 1424-1427.

132. Rothe, M., Xiong, J., Shu, H.-B., Williamson, K„ Goddord, A., Goeddel, D.V. (1996) I-TRAF is a novel TRAF-interacting protein that regulates TRAF-mediated signal transudation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 93, p. 8241-8246.

133. Roy, N., Deveraux, Q.L., Takahashi, R., Salvesen, G.S., Reed, J.C. (1997) The c-IAP-1 and c-IAP-2 proteins are direct inhibitors of specific caspases. EMBO J., v. 16, № 23, p. 6914-6925.

134. Salvesen, G.S., Dixit, V.M. (1997) Caspases: intracellular signaling by proteolysis. Cell, v. 91, № 4, p. 443-446.

135. Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T., Eds., In: Molecular cloning. A laboratory manual. 1989a. N-Y. Cold Spring Harbor Laboratory, v. 1, pp. 6.9-6.19.

136. Sambrook, J., Fritsch, E.F., Maniatis, T., Eds., In: Molecular cloning. A laboratory manual. 1989b. N-Y. Cold Spring Harbor Laboratory, v. 2, pp. 14.5-14.20.

137. Sanz, L., Sanchez, P., Lallena, M.J., Diaz-Meco, M.T., Moscat, J. (1999) The interaction of p62 with RIP links the atypical PKCs to NF-kappaB activation. EMBO J., v. 18, № 11, p. 30443053.

138. Scaffidi, C., Fulda, S., Srinivasan, A., Friesen, C., Li, F„ Tomaselli, K.J., Debatin, K.M., Krammer, P.H., Peter, M.E. (1998) Two CD95 (APO-l/Fas) signaling pathways. EMBO J., v. 17, №6, p. 1675-1687.

139. Schievella, A.R., Chen, J.H., Graham, J.R., Lin, L.L. (1997) MADD, a novel death domain protein that interacts with the type 1 tumor necrosis factor receptor and activates mitogen-activated protein kinase. J. Biol. Chem., v. 272, № 18, p. 12069-12075.

140. Sheikh, M.S., Rochefort, H., Garcia, M. (1995) Overexpression of p21WAFl/CIPl induces growth arrest, giant cell formation and apoptosis in human breast carcinoma cell lines. Oncogene, v. 11. № 9, p. 1899-1905.

141. Schulze-Osthoff K., Krammer P.H., Droge W. (1994) Divergent signalling via APO-l/Fas and the TNF receptor, two homologous molecules involved in physiological cell death. EMBO J., v. 13, p. 4587-4596.

142. Schulze-Osthoff, K., Ferrari, D., Los, M., Wesselborg, S., Peter, M.E. (1998) Apoptosis signaling by death receptors. Eur. J. Biochem.', v. 254, № 3, p. 439-459.

143. Sedlak, T.W., Oltvai, Z.N., Yang, E., Wang, K., Boise, L.N., Thompson, C.B., Korsmeyer, S.J. (1995) Multiple Bcl-2 family members demonstrate selective dimerization with Bax. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 92, p. 7834-7838.

144. Sellins, K.S., Cohen, J.J. (1987) Gene induction by gamma-irradiation leads to DNA fragmentation in lymphocytes. J. Immunol., v. 139, p. 3199-3206.

145. Shimizu, S., Narita, M., Tsujimoto, Y. (1999) Bcl-2 family proteins regulate the release of apoptogenic cytochrome c by the mitochondrial channel VDAC. Nature, v. 399, № 6735, p. 483-487.

146. Shinagawa, T., Yoshioka, K., Kakumu, S., Wakita, T., Ishikawa, T., Itoh, Y., Takayanagi, M. (1991) Apoptosis in cultured rat hepatocytes: the effects of tumour necrosis factor alpha and interferon gamma. J. Pathol., v. 165, p. 247-253.

147. Shoji,Y., Uedono, Y., Ishikura, H., Takeyama, N., Tanaka, T. (1995) DNA damage induced by tumour necrosis factor-a in L929 cells is mediated by mitochondrial oxygen radical formation. Immunol., v. 84, p. 543-548.

148. Shurin, M.R., Kirkwood, J.M., Esche, C. (2000) Cytokine-based therapy for melanoma: preclinical studies. Forum (Genova), v. 10, № 3, p. 204-226.

149. Smith, C.A., Farrah, T., Goodwin, R.G. (1994) The TNF receptor superfamily of cellular and viral proteins: activation, costimulation, and death. Cell, v.16, № 6, p. 959-962.

150. Song, H.Y., Rothe, M., Goeddel, D.V. (1996) The tumor necrosis factor-inducible zinc finger protein A20 interacts with TRAF1/TRAF2 and inhibits NF-kB activation. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A., v. 93, p. 6721-6725.

151. Spector, M.S., Desnoyers, S., Hoeppner, D.J., Hengartner, M.O. (1997) Interaction between the C. elegans cell-death regulators CED-9 and CED-4. Nature, v. 385, № 6617, p. 653-656.

152. Spencer, D.M., Wandless, T.J., Schreiber, S.L., Crabtree, G.R. (1993) Controlling signal transduction with synthetic ligands. Science, v. 262, p. 1019-1024.

153. Spencer, D.M., Belshaw, P.J., Chen, L., Ho, S.N., Randazzo, F., Crabtree, G.R., Schreiber, S.L. (1996) Functional analysis of Fas signaling in vivo using synthetic inducers of dimerization. Current Biol., v. 6, p. 839-847.

154. St Clair, E.W. (1999) Therapy of rheumatoid arthritis: new developments and trends. Curr. Rheumatol. Rep., v. 1, № 2, p. 149-156.

155. Stanger, B.Z., Leder, P., Lee, T.H., Kim, E., Seed, B. (1995) RIP: a novel protein containing a death domain that interacts with Fas/APO-1 (CD95) in yeast and causes cell death. Cell, v. 81, №4, p. 513-523.

156. Strasser, A., Newton, K. (1999) FADD/MORT1, a signal transducer that can promote cell death or cell growth. Int. J. Biochem. Cell. Biol., v. 31, p. 533-537.

157. Su, X., Zhou, T., Yang, P., Edwards, C.K., Mountz, J.D. (1998) Reduction of arthritis and pneumonitis in motheaten mice by soluble tumor necrosis factor receptor. Arthritis Rheum., v. 41, № l,p. 139-149.

158. Sun, X., Lee, J., Navas, T., Baldwin, D.T., Stewart, T.A., Dixit, V.M. (1999) RIP3, a novel apoptosis-inducing kinase. J. Biol. Chem., v. 274, p. 16871-16875.

159. Takayama, S., Sato, T., Krajewski, S., Kochel, K., Irie, S., Millan, J.A., Reed, J. (1995) Cloning and functional analysis of BAG-1: a novel Bcl-2-binding protein with anti-cell death activity. Cell, v. 80, № 2, p. 279-284.

160. Takeda, K., Iwamoto, S., Sugimoto, H., Takuma, T., Kawatani, N., Noda, M., Masaki, A., Morise, H., Arimura, H., Konno, K. (1986) Identity of differentiation inducing factor and tumor necrosis factor. Nature, v. 323, p. 338-340.

161. Tartaglia, L.A., Weber, R.F., Figari, I.S., Reynolds, C., Palladino, M.A., Goeddel, D.V. (1991) The two different receptors for tumor necrosis factor mediate distinct cellular responses. Immunol., v. 88, p. 9292-9296.

162. Tartaglia, L.A., Pennica, D., Goeddel, D.V. (1993a) Ligand passing: the 75-kDa tumor necrosis factor (TNF) receptor recruits TNF for signaling by the 55-kDa TNF receptor. J. Biol. Chem., v. 268, p. 18542-18548.

163. Tartaglia, L.A., Ayres, T.M., Wong, G.H., Goeddel, D.V. (1993b) A novel domain within the 55 kd TNF receptor signals cell death. Cell, v. 74, № 5, p. 845-853.

164. Thome, M., Hofmann, K., Burns, K., Martinon, F., Bodmer, J.L., Mattmann, C., Tschopp, J. (1998) Identification of CARDIAK, a RIP-like kinase that associates with caspase-1. Curr. Biol., v. 16, p. 885-888.

165. Trauth, B.C., Klas, S., Peters, A.M.J., Matzku, S., Moller, P., Falk, W., Debatin, K.-M., Krammer, P.H. (1989) Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis. Science, v. 245, p. 301-305.

166. Tschopp, J., Martinon, F., Hofmann, K. (1999) Apoptosis: Silencing the death receptors. Current Biol., v. 9, p. 381-384.

167. Urbano, A., McCaffrey, R., Foss, F. (1998) Isolation and characterization of NUC70, a cytoplasmic, hematopoietic apoptotic endonuclease. J. Biol. Chem., v. 273, № 52, p. 3482034827.

168. Utsumi, T., Levitan, A., Hung, M.C., Klostergaard, J. (1993) Effects of truncation of human pro-tumor necrosis factor transmembrane domain on cellular targeting. J. Biol. Chem., v. 268, p. 9511-9516.

169. Van Antwerp, D.J., Martin, S.J., Verma, I.M., Green, D.R. (1998) Ingibition of TNF-induced apoptosis by NF-kB. Trends Cell Biol., v. 8, p. 107-111.

170. Van Ostade, X., Vandenabeele, P., Everaerdt, B., Loetscher, H., Gentz, R., Brockhause, M., Lesslauer, W., Tavernier, J., Brouckaert, P., Fiers, W. (1993) Human TNF mutants with selective activity on the p55 receptor. Nature, v. 361, № 6409, p. 266-269.

171. Vander Heiden, M.G., Chandel, N.S., Williamson, E.K., Schumacker, P.T., Thompson, C.G. (1997) BcI-xl reguetes the membrane potential and volume homeostasis of mitochondria. Cell, v. 91, p. 627-637.

172. Vercammen, D., Vandenabeele, P., Beyaert, R., Declercq, W., Fiers, W. (1997) Tumour necrosis factor-induced necrosis versus anti-Fas-induced apoptosis in L929 cells. Cytokine, v. 9, № 11, p. 801-808.

173. Verma, I.M., Stevenson, J. (1997) IkB kinase: Beginning, not the end. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., v. 94, p. 11758-11760.

174. Voelkel-Johnson, C., Entingh, A.J., Wold, W.S.M., Gooding, L.R., Laster, S.M. (1995) Activation of intracellular proteases is an early event in TNF-induced apoptosis. J. Immunol., v. 154, p. 1707-1716.

175. Wallach, D. (1984) Preparations of lymphotoxin induce resistance to their own cytotoxic effect. J. Immunol., v.132, p. 2464-2469.

176. Wallach, D. (1996) A decade of accumulated knowledge and emerging answers. Eur. Cytokine Netw., v. 7, №4, p. 713-724.

177. Wallach, D., Kovalenko, A.V., Varfolomeev, E.E., Boldin, M.P. (1998) Death-inducing functions of ligands of the tumor necrosis factor family: a Sanhedrin verdict. Curr. Opin. Immunol., v. 10, p. 279-288.

178. Wang, C.Y., Mayo, M.W., Korneluk, R.G., Goeddel, D.V., Baldwin, A.S. Jr. (1998) NF-kappaB antiapoptosis: induction of TRAF1 and TRAF2 and c-IAPl and c-IAP2 to suppress caspase-8 activation. Science, v. 281, № 5383, p. 1680-1683.

179. Wang, C.Y., Cusack, J.C. Jr., Liu, R., Baldwin, A.S. Jr. (1999) Control of inducible chemoresistance: enhanced anti-tumor therapy through increased apoptosis by inhibition of NF-kappaB. Nat. Med., v. 5, № 4, p. 412-417.

180. Wang, K„ Yin, X.M., Chao, D.T., Milliman, C.L., Korsmeyer, S.J. (1996) BID: a novel BH3 domain-only death agonist. Genes Dev., v. 10, № 22, p. 2859-2869.

181. Wolf, B.B., Schuler, M., Echeverri, F., Green, D.R. (1999) Caspase-3 is the primary activator of apoptotic DNA fragmentation via DNA fragmentation factor-45/inhibitor of caspase-activated DNase inactivation. J. Biol. Chem., v. 274, p.30651-30656.

182. Wu, D., Wallen, H.D., Nunez, G. (1997) Interaction and regulation of subcellular localization of CED-4 by CED-9. Science, v. 275, № 5303, p. 1126-1129.

183. Wyllie, A.H., Kerr, J.F.R., Currie, A.R. (1980) Cell death: the significance of apoptosis. Int. Rev. Cytol., v. 68, p. 251-306.

184. Yonehara, S., Ishii, A., Yonehara, M. (1989) A cell-killing monoclonal antibody (anti-Fas) to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor. J. Exp. Med., v. 169, p. 1747-1756.

185. Yu, P.W., Huang, B.C., Shen, M„ Quast, J., Chan, E., Xu, X., Nolan, G.P., Payan, D.G., Luo, Y. (1999) Identification of RIP3, a RIP-like kinase that activates apoptosis and and NFkappaB. Curr. Biol., v. 9., p. 539-542.

186. Zhang, L., Aggarwal, B.B. (1994) Role of sulfhydryl groups in induction of cell surface down-modulation and shedding of extracellular domain of TNF receptors in human histiocytic lymphoma U937 cells. J. Immunol., v. 153, № 8, p. 3745-3754.149

187. Zhou, T., Song, L., Tang, P., Wang, Z.,Lui, D., Jopi, R.S. (1999) Bisindolylmaleimide VIII facilitates Fas-mediated apoptosis and inhibits T cell-mediated autoimmune diseases. Nature Med., v. 5, p. 42-48.

188. Zou, H., Henzel, W.J., Liu, X., Lutschg, A., Wang, X. (1997) Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. Cell, v. 90, № 3, p. 405-413.

189. Zou, H., Li, Y., Liu, X., Wang, X. (1999) An APAF-1-cytochrome c multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase-9. J. Biol. Chem. v. 274, № 17, p. 1154911556.