Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка методов быстрой диагностики герпетической инфекции и типирования ее возбудителя

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Разработка методов быстрой диагностики герпетической инфекции и типирования ее возбудителя"

Россяйсісая академия медицинских наук Институт полношэлига и вирусных энцефалитов

на правах рукописи

ДИОРДЩА Соргой Викторович

РАЗРАБОТКА МЗГ0Д0В БЫСТРОЙ ДШНОСЮТ ГЗИЕТИЧЗСКОИ ИШКЦИИ II ТІШИРОВАШШ ЕЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ

(03.00.06 - вирусология)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата шдвдішскшг каугс

і.ісскпа 1933 Г.

Работа Биролшца в Шучно-исслидовагольском институте вируснш препаратов РАШ

Научний. руководитель: доктор исдшршсшх наук ІШіЩІВА IIЛІ. Официальные оипонанты:

члон-корросповденг РАЕІІ, доктор мєднщшоісих паук ,

профеооор С.С.ЦАЙШШКОШ . доктор медицинских наук К.А.ТКАШіКО

Вздущао учреждение: Государственный научно-исследовательский Институт стандартизации и контроля медицинских сіиологичаскш: препаратов ви. Л.А.Тарааевяча Минздрава Роосіш

_ , С£

Защита состоится "Vі Н'йЗь^ 1993 г, в /() часов

на заседании специализированного совета Д. 001.27.01 при Инстиъуго полиомиелита и вируснш: знцофалитов РАШ по адрасу: 142782 Московская область, Лашщскиіі раіісц, п/о Институт полиомиелита

С диссертацией моішо ознакомиться в библиотека Института полиомиелита и внруснцх энцефалитов РАШ

Автореферат разослан О'^їо^ЬЯ 1393 г.

УченцЦ секретарь специализированного совета

{шндидат биологических наук ' О.А.ШДВЕДОЩ

Вводоішо '

^ ‘Актуальность проблеми

Разработка новых высокочувствительных и специфичных методов быстрой диагностики вируса горпоса простого (ВІГІ) является одним из направлений медицинской вирусологии,которое в послоднпо года активно развивается. Это обусловлено следующими факторами. В уо-ловиях ухудоавдсііся шгалогнчпской ситуации значительно возросла

• заболеваемость горлоссі.м. ¡Іо данным БОЗ ( Негревуігив Infection, ІУ9І)> горпос по распространенности занимает третье место после гриппа и гепатита. Проявления герпетической ішфоісшпі варьируют от логких (¡¡ор,1,прото;сшхцс: без суиествегашх наруиеїшй общвго состояния пациента, до тя£олцх,сопрово;:давіц!іхся нарушением функции ВДС (герпетический энцефалит) или органов зрения (герпетичео-ішй кератохонъшкткшт). Летальность при герпетическом энцефалита сосгал.таот 35-50 % ,а герпетическим кератит з большпістве процентов случаев приводит к слепоте (ЕарішскнЛ И.<5., 1986;

ІСоломиец Л.Г., 19Э2; Dorougler ,1985; Whltloy ,1986).

Кроно того, ВГП обладает тератогенной активностью. Алтивация ' латентного вируса являотея одной из наиболее частых причин летального исхрда у болышх с различными ишунсдофицитамк, (ЯЩрм.при снкологнчзских ьаболозанилх.при пересадке органов. В то ко время клиничоская диагностика герпеса,особенно случаев, при которых отсутствуют характерные висапанпя на когг.е или слизистых оболочках, затруднена. Вместе с тем, быстрая и надегиая расшифровка этиологии горпосподсошх заболевший приобретает особую актуальность в связи с появившіїся в последние годы возможностью прове- • дешія этиотропной торапни. .' '

ІСласспчесюте метода лабораторной диагноетшш герпеса - выделение вируса н культуро клеток и ишунофлюоресценция, несмотря

на ux високую чувствительность п специфичность, не отвечает одному из суцсствошіш: требовании, нрад-ълвляе.мпх і: сопронешшм методам - бистрото ішлучаиі.юго ответа. Значительно болоэ перспективніш дли быстрой диагностики ьирусних ш^окцнл является раарайотаїшіьі в конце 'jQ-'Л гг. метод іи.ї.іуиоії.ерг.іеіп'-иого анализа (ІііА), особснно "его пюрдофазни-; вариант ( Voiler л, ,1983}. В настоящее вромл атот tout широко прпмешша ся для вішшюіаія антител различит ісласоов іс 'различии;.! пшаи ВГІІ, а таіа:о для обпаруаюшш вирусного антигена. Ü многочисленнее публикациях доказана ого шсскал чувствительность я специфичность (Шльцова И.ІІ. ,190?; Зорахщэе Л.К., i960;

Вов,1986; Middeldorp, I9b7 J. Имеете с тим остается ища ряд проблем.енлзшших с шшользоыишои ПЛ. Путается в долышйаем совершенствовании м.гуноТер.ментная тост-опстиии для вилвлошш антигена ВГН и его титрования. Потребность в отлх-препаратах постоянно возрастает, таї: ка;: полилііитсл новые хшиопропарати, чувствительность к котором Гіі'ІІ-I и ВП1-2 мозшт бить различней ( в® Clerque ,1982}. Использование ыоношюшльних антител (LL'iA), роагируццих с тпноешцк.рн-чесшли антигенними детерминантами,создиот реальшо предпосылки для создаїиш препаратов да: бистрого тшірошиюі вирусных изолятов. В отношвшш другого метода бистров диагностики герпеса, основанного на вшшлошш шрусспециупчосша иммуноглобулинов IJ, в литературе имеются лииь единичный сообщения (ve.n ¿ооп, IS89). Отсутствуют дашшо о преимуществах использования для этой доля того или иного варианта USA, а также п диагностической ценности получиомих-результатов. И, наконец, ецо одним-перспективним подходом для совориоиствоьа-"ния диагностики герпетической инфекции яшшетсл виявлеіша

в клпшічосшл ¡пт-сриала ггослодопатолыюстеи иуглснновцх ¡шслот мотодоп поло;:улярноГі гпбрлдпзаииш, Но ллторатурнцм дашпш итот метод шеот значительно большую чувствительность и споШгІг.і’шость, чсіг.ї ’хыунойерпонттШ анализ и ншуиофлюорео-цєнцня (і’воиоіе, 1891). Однако для широкого шедрошш этого метода в практику необходимо было проведение исследовании по получешт пиеокочувствптилытх и специфічних ДС(~

- зондез " их оценке на материалах, от Солышх ерцшштолыю с другш.ш испельэусмют для отих целой метода;,і:і. •

, Цели і! задачи исследования. Цольи.иас-шпцого исслодо-ванші являлась разработка и сііошса препаратов для быстрой диаглосгюаі іт^ігиЛ, вцзіятсг.шл различим,пі типами ВШ. Для дости:.:сн;и поставленной цеди необходимо било: получить и изучить моиокленальше антитела (ХЛ), налравлошшо к тігпо- я группоспзц!гТ.::чвО!зм антигешіш детормннантам различных бол-і:оп БІТІ—І п ІГІІ-2; разработать на осново ІИЛ препарати для бистрого выявлении її гигліроваїиш антигеноз ВГП-І и ЗПІ-2, используя цммуио^ормелтшй анатаз н моїод ишунодлтзсросцонціш; с помощью клсшгроианил вирусного генома получить и оценлть ДЩ-зоїцш доі виявлення ДК ВІ’Л б клинических образцах; отработать ог.тнмалышо условии постановки рестрнктазного анализа ДК ВГП-І и ДЕС ВГП-2, которпо позволяли би пр:імепять этот метод з практичесіпх лабораториях; разработать и оценить на клиническом материала ІйЛ тест-систему для виявлення иммуноглобулинов и к ВИ.

. Научная ноппзна. С помецьп сгоцнальио подобранной панели !<КА к іЗГІІ-І л к ВГП-2 полутон ряд ношх научных' данных. Установлено, что на молекула;: поверхностных гдпкопретецдов в3 и пиетчя как т;шо-, та:; и грулпоспешфпеские антиген-

ниє дотериішаитц, которцо, по дашіии кош-.уриіітнсго ИОА.раопо-

лохаїш в иепорокриващцхся областях..

/ - « -Показано, что, хотя по шешцшса литературной дашшм

"paiuuie"IgM антитела к ЖП нарабатываются, в основном, к нуклаокапсиду шруса, использование шчошшх пероксндазоЛ препаратов нуклеокалсада по даот ізшігриша в чувствительности іи.іх.іуііофорх.іоіігноіі tûot-ciiotqhu для вшшлошш IgM антител к ВГД по сравнению о мочешшш ішроксвдазоі: препаратами очищенного вируса. ■

Било танка установлено,что для тшшрсшаїшн вируспих изолятов достаточно использовать одну ростриктазу - хьаі применение которой для расщшідеїшя /ЩІС ВІН различии;; лабораторних штатов ВГП-І її Ж’ІІ-2 позволяло читко даффоршвдіровать І и 2 типи ВГП. .

. Практическая значшаств.Усоноріаенетвзвана імлуноа.ер-ментная тост-'система для вшшгашш антигона ШТІ на осново смеси кроличьих мфусопоциіііичасшіх поліислонашшх антптол іс БШ-І и к ВТП-2. Результати апробаціях зтоіі тест-смстош на различном клшичоском маторнало логлн в основу методичес- ' ких рекомендаций "Диагностика н ііршцшш торапіпі герпотичос-ких поралиішл донтральиоіі нервнзіі система", утьорздошшх заместителем министра БСССР ії ЛІ. Степаненко 10 ноября I99U г. На основе Т1Ш0специфических 1ЛКА ккЕ ВГП-І и тиноспещ^ичос-ких ШСА к ВГЛ-2 были приготовленії йИТЦ-копыагати для тппіі-роваїшя кзолятов ВГП-і їх ВГГІ—2. lia осново отих исследований разработшш штодачеокиа рекомендации "Получение п ирш.іоію-лив (ЙІТЦ-коньюгатов на осново моноклональных антител для титрования изолятов ВГН-І и ВГ1І-2", утиорздешшо Ученш Сово- ' том НШІВП РЛШІ. (Протокол й 5 от 23 мая 1991 г) Получена пред-

ставитольнач паноль ¡.Ь01, реагирующих с тип о- или груииоопе-цифичесинш апгпгспни;.;!! детерминантами поверхностных глико-протоидоп п нуклсспсансэдних балкой. Некоторые ш(Л. били использованы с целью хонструировання препаратов для выявления и тишгровашш антигена ВГД. Кроме того, эта панель ¡.КА мо;:;ет бить использовала для решения'вопросов, касающихся, в частности, роли различных вирусных белков в формировании иммунного отлета к Ш’П, механизме развития ин^одеции в глотке. Получен высокочувствительна'! и специфичны;! ДК-зонд на основе ВапН1 т 1 фрагмента ДЕС 13111—1, использование которого для диагностики герпстичеснь: энцефалитов обосиочквает больти! процент полоштольных результатов по сравношга с биологическим методом. Определены условия эффективного использова- •

щтя метода роогри;;газиого анализа для тппирования вирусных изолятов, что делает ьезмогдип применение отот метода с указанной долью в любой прггтическоЛ лаборатории.

ХщсСсиглл тзаости. .'.'атерпали диссертационнои работ были доло:.:с1ш на конференциях "Современные направления создания медицински:: дпагностиг.умов" 14.12.1288 г. и 05.I2.IS9u г.' (г.Уосква;. Результаты исследслашс! отрагеш в Ь печатных ‘ работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 253 страницах моципсписнсго текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, семи глав собственных исследовании, обсуждения результатов и выводов. Список испсльзованлол литературы включает 327 источников, из них 297 зарубеппах. Работа иллюстрировала 18 таблицами и 30 рисунками.

б

ІІ'.Т.УІШііі II ШТОДЦ ІШМДОШШ-И '

Работа била виполисша с пснользовашюи слодувдк шгру-і ' ' coa и юташов: вирус горішса простого І тіша (иіташ Jfi.VRj,

НІ), вирує гсрпоса простого 2 типа (иташи ИЗ , Н—2;, цито-шгаловпруо (иташ ¿¿109), вирус штршш.і оспи (иташ !,ШІ).

В ігсслодсшаїшд сіиші вішочеш наторкали от (Зольних: биологические жидкости (спшшо-иозговал ;лідкость,слша, возш:улярная падкость и корки с ¡ласт поранення) - 420 образцов u сиво- ,

ротки от ооліінк с различішш іишшічасісиш проявлениями гор-патичаокоіі і2і.$о:аиш, находишься под наблвдоншл в лочой-тх учро;:у;2ші.с: г.і.Іоскви. В процоссо работи применялись раз-лячнио кірусолопгшошю, опопімпчосіше, шлунологичосшгс и серологические моголи исслодовагніп: а^ншіш.гронато гравші, анализ белков в полиакриламидном гало, ішуиоблотішг, радаошмуцо--процшштация, лолучошю пороксвдасішх конъюгатов антител л вирусных антигенов, твордофазішіі пшупоформентшй анализ, ш-мунофліооросцаїїцил, реакция нейтрализации, поцученио мопоісло-нальншс аптігтсл ь поликлональное сивороток швотішх ¡¡ цоліЛі рад других общепринятых штодов. Статистическую обработку результатов проводили общопршштшлп 'criooot3ai.ni.

РЕЗУЛЬТАТЫ ПОСІЙ,ЦОБАШи И иІХ'УдП/ІІШ ' ■

і. иозучзшвз и ьшшнюшгА шжшоналшх ашиюл к

РАіШШШ ШІКЛ'.І ВИРУСА ИЗРІІиСЛ ПРОСТОГО X II ü HUIA

Для получении продставительнои пшшли Ш!А, направлошшх к Timo- и группоспецн^ическим антигошшм детерминантам болков ВГД-І и ВШ-2, шіііоіі лиштЕагь/о ишуиизлровали различішш впдаш шрусішх препаратов (цитоплазматический анти- ^ ген, одорнші антиген, очиїцоїшиіі. вирус J ИГЛ-1 и ВГ1І-2. В результата проводошіш: апспорішонтов Сило получено I59Ü гиб-

ридшх клопа, из ксторік I5G, по даіиіш.і скрншінга в ЮЛ, про' дущтровалн вирусспещфпесгаю ІЯСА. Срздп них 32 гибрішоми продуцировали ШСЛ іс тшіоспоідорірюсипл детерминантам ВПІ-І,

17 - к типссіюцифічосімм дотермшантач Ш 1-2 и і07 бшш направлены к группоспецнфичоскш детерминантам ІіПІ-1 її ВПІ-2. Наибольший процент вшеода гибридом наблюдался в групно ;лшсг-шіх, лммуїшзированнцх очіщопчшят гтропараташ НГІІ-1 и БПІ-2. При этом вс о тппоспсцііфичосшо гибридомц бшш получеїш о ответ на иммуїшзацшз вирусом гомологичного тппа.

Из полученной палили гнорядом для конструирования диаг-ностичосг.;к препаратов біілл отобраш 7, которио отлнчашгоь гасокод активностью продуцируема: пм;і антител, били направлены как к тііпо— .так н к грушоспецп^псским детерминантам ВГП и обладали способностью роагиреэать со Dco:.ni нмеаицыпся в на-йіоїл распоряг.инкл итаїлмамп БШ-І и ВПІ-2. • .

' Больпкисїю гибридсм'продуцировали антитела, относящиеся к различны;.! подклассам иммуноглобулинов Gt<t (i.Ctt IHI88, IH225, 2H2C8) и Gs^CM'A IIHIO її IH97). Только одна гибрэдома 2HI4I продуцировала п.ї.іуноглбулпш М.

Результата изучения напразлоішоста отобрашш: MCA к ' вирусным белкам показали, что три гибркдоми -ІНЗО, ІІИІ0 и Ш88 реагировали с гликоэцлпрозашшм белком, имеющим Ш 105--І20К, что соотвотствуег повер;сностному глжеопротеццу gB .

( Baiachandren , 1982). Принадлежность отого бели зс глико-зилированнш белкам вирускоН оболочш была подтверждена в опитах радаоим.іуногірецппитащпі с использованном для мотки вируса ^ С-гликозошша. При этом І.Ш. Ш38 її ІІІІіО реагировали только с препарата-.!!! вируса І типа, MKA IHI88 било направ-

леїш к грушюснощї'їлїчйсшьм антигенним доторм.шаїіїіш, расиоло-

геїшш.і иа шлокулах бояка g в DI1I-I и ІіГІІ-2. Вторую группу і •" * составили дпа ЇШ. - 111225. ц 211208, когорио родщроважі с ан-

тигошшг.ш датор.кианташ, раснолоишнишг на поверхности гли-коаилирсшашого йоліса с Ш СОК, что сооїьоїокіуег болісу 6d НГП ( Poi-elra L., ISC2). _

Одно из отих LLÎA - 2U2ÛÛ роагаровала только с їішоогюціі-фичоошш салтс.м gD ЇШЛ-2, При этом,ка:с показали результати исследовании, ота шгаїгашал доторі.інналта оказалась лабильной к даиатурнрунціш условіш.і ишуиоблотшіта u била вшшйна только с помощью мої ода радаош.і'.гунопроциїїіітацші. jÿyrou 1IÎA этой прути - 111225 било иапраїшсшо к групиосиолдїичоскои -щшігаїщоіі дотсрмшаито болка єа BTÎ1-I її ЇЙ’і 1-2, что подт-верздалоог ншш'шои на радиоавтографах с ироиарата-ли ВГП-І н ВГП-2 отчотлнвік полос, лодалнауюціїксл п области глиг.оз::лл-ровашшх белков с Ш Güiî. Апгагеншш саііт, к которому било направлено 1.ІХЛ ІН225, таїшо оказался лабилиіиг.і і; донагури-Ціш. Третью группу составили два I.liiA - 11197 и 2111-11 , при исслс-. доващш которых цд -блотах с црсцараташ ВГП-Lu Ш1-2 заре—

■ гиотрировшш отчемнвие полови, локализувдюся иа уровне ; балка о МЛ 15U'iC. Этот Салок, кии известно, янлнетсл иакорпим балком нуіслаокапсп^а р!50 ( ?,Weig ,1079), .

Дополнительное изучений дшіаиики синтеза вируешк бол-х;ов на прш.юре Г.йСА ІНІЮ и 2И203 полностью подтвердило ра- -зультати иссладовашііі направленности отих І.ЕІА мотодаш imy-нойлотинга и радиошиуширеццштаціш, В повторних зкепирц-мантах било установлено,что ¡рпорвш отчетливая полоса про-ципитацпп Оалка с М.1 120 К I gB ) в случао 1ЖА 111X10 била .

зарегистрирована чероз 12-18 часов после ліфчігирошння. В случае ІШ. <¡11200 полоса преципитации впервие била вштлогш чорез 12 часов посла инфицирования и локализовалась в области Солка с 1.11 СОК ( gD) * В опитане ішмуноолоктрошюіі микроскопии при окраске очзщошых цирконов БГП-І и ВГП-2, обработанных , последовательно пшослецийлче&аш ¡.КА ІІПІО или -ИІ2С8, конъюгатом аптишиигих антотал с коллоцшшм золотом, частицы коллоидного зелота биіи обнару;;:еііи только на вирусных оболочках гомологичного длл кавдого ¡.ПІЛ вируса. ГГри наруиошш целостности вирусных оболочек с помощью обработіш препаратов Тритоном Х-100 частицы коллоидного золота практически от-

♦ ’ -

сутствовалн.

• їашл образом, бшпі разработшш условия получения моноклональных антител, обладающие направленностью к различным типо- и группоспоцивичесгам антигенным детерминантам. ВҐЛ. В результате оцстсл полученной паиелл гибридом били отобраны 7 из них, которые по направленности к отделышгл вирусным белкам (типо- и группоспецпдігческш,! антигенним детермшантам), активности и шіракому спектру реагирования с различными итам-мамя ВГП могли представлять определенный шггерес для кон- ' струировашм на их основе дкаї’нсстнческнх препаратов.

' '¿. ШЖЩШШЯ НО ШіиШІІРОВЛІПЮ кт<ый.1лгаюл

тзст-слсзшы дл віітзмш лнжкм віер/сл киесл

• ПРОСТОГО . ■

В настсяцсы разделе представлены результаты исследова-_ • ‘ * ней по разработке иг.ыуисдормснтной тэст-систсш для вылвлешш антигена ВГП с использованием различных .сочетании впрусспецп-фіїческпх ІЖА, а такко комбинированного примснеіиіт Г-ПСЛ п кроличьих поликлональных антигсрпетпческих антител. Для создания

этого препарата бил испаЛьзован вариант "Сондаича даогашх антител" IDA. . ..

Поскольку при разраоогко препарата для сравнительной ОЦОШСЛ IIOOCS-vOJUU.SO било ш.югь тшунсформентную ТеСТ-СИСТОЦу, которая по чуьсгвнгальностн и специфичности но отличается от нирових аналогов, нообходишм предварцтолышм этапом работы било усовариопзтвоиашт разработанной раноо цшунофзриоит-lioii тест-систош, осноаанноП на пришиатш поликлоналышх igG антител, вцдолошшх из сиворотки кроликов, шммунизп-

роващгих ВГЛ-1 (Эбралццзо Л.К., 1D60J. Оцозша итого препарата на разлнчшх лабораторнцх ыташах ШИ и ВГЛ-2 показала, что. по чувствительности к iffi'l-i (iO нг/ш) он но отличаотся от рада мирових аналогов (фир'.ш Ortho Diagnostic, Du Pont). В то ха вромя евджлшповть использования этого препарата по отношении к шта.шам ВГП-2 била значительно ша» и составила 100 нг/мл. С цольы-усоворшонствовапия отого пропарата для создания твордофазного шлулосорбонта.и порокевдазних конъюгатов били использовали IgG антитела кроликов, пмг.г/пл-аировашшх только ВГИ-I, только Ш’Л-2 или антитела, полу-чешшо в результате чередования.циклов иммунизации,антиганаш! ВШ-1 1гЖ'Л-2. Еидо показано, что спектр н направлеиость . сшгезпруа.шх в организме здшотних аитптол к ВИ-1 и ВГП-2 поллостыо онродаляотся типом вируса, использованного при грувдишушзацци для ииокуллции на роговицу глаза, В то so вромя, оуфект последующих впутриаишшх нводениН антигенов вируса другого типа сводился к опшуллции продукции антител, направленных к порокростно роагируьацш дотерлпнантам вируса, использованного при нервоИ шлуншатш. Учитывая полученные дашшо, с целью конструирования_ ишуноформепгнол теат-системи

• 11 ;

для выявления антигена БІТІ попользовала сиось антител, полу-чеішін а розультато иммунизации кролшсои ВГ1І-І іші ВГіІ-2. Б срашштолышх повторних опитах, в ноторик соотноиоіиш антител к ВІН—І її і: ВГЛ-и варьировало (4:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:4; было устансілоио.что соотноиошіе аитптол і: І обоспочмаот максймалінуи охотую чуястшігбльность к вирусам обоих типов 10 иг/і.1.1 вирусного бо:л:а, что. соотогстпуот 10^ ТЦГ^о/мл.

- _ С цолью конструирования лммуиоуериоитиоЛ тост-систсміі

для шяилешш антигена ВІТІ на осново і.5ІЛ из ішовлоііся панолн бши отобрали 4 «КА.котсрио отличались направленностью і: разгачнш вирусным Оол::а\; п обладали способность» виявлять

$ ■

грушісспецлфіческие антнгсніше дотср:.і:;на;іти Ш1І. .Два ;,КЛ (111188 ц ІН2ІІ5; реагировали с ангпгоинт.п даіерг.г.шанташ поворхностішх гляїсопратєпдов gB я бВ,:;отсрие цгриат решавшую роль в развитии ¡іспоспріпімчииосгп организма к іпі‘£сі:цші ( ГиХІег, 1589). Два других І.КЛ (11157 її ЙІІІ4І) били направлен» к иоисрекривавщіїмся зіпотопап иаг.орнсго белгл нук-лекапсада рІ50. Зибор отих ¡.ПСА для конструйованім пропара-та был обусловлен том, что нукліокаїсидішо беякп ВГІІ участвуют в иеивищш иммунного отвага на рашик итапах инфекции. ‘ Этот феномен был та;с:;о оп::сан для раді других влруспих инфекция (і:орь, паротит, и др.). .

Учалтая папразлонность ІХСА к сдноіі влрусноіі детор/.шан-тэ для повшяония чувствительности конструируемого препарата были использованы разлячішо ссчотаїптя І.ЇСА, а такяе нх комбшіа-ц!ш с кроличьими пслшуіональїшг.п антпталаг.ііі к ВГіІ-І и к ВШ-2, взятыми в соотноаеннл 1:1. Оценка подученных 24 экспериментальных соркіі ишунсйормонтніїх тсст-снстєіл показала, 'что нан-висшая чувствительность препарата (70 нг/ыл вирусного <?елка).

к

била достигнута при использовании твордси^азного ш.іг.іуііосорбен-та на сснош смисл кроличьих поликлональных антител к ШІ-І . < '

И к ІШІ-2 (1:1) н гіероксидазлого конъюгата на осново сыоон ІЛІА ЛИБО и II122G, направленных к вирусный гликопротевдам, Нашошлал чуистштольность (lÛOü нг/мл) была ьарогнетрирова-на в случаях, когда для создания ншуносорбшіта использо- ' ..

вали I.ECil, налравлошшо к нуклоокалеццу вируса, а лороксидаз- . ' Huli конъюгат на осново лишь одного Г.КА виз зависимости 01 ôro направленности к тоиу или иному вирусному белку.

Таким образом, било показано, что использование ЫКА. с целью конструирования препарата дал виявлення антигена BTIÎ не давала преимуществ ло сравношпо с ш. іу номері,юлтн он тест-оисгемои на осново лолшаоналышх антител к ИГП. Эти наши н'аблюдашш полностью согласуются с дшшиші литература как на модели гсрпотпчесісоїі ИНфоКЩЩ ( Hllheden , ÏS89), так и других вирусных заболевании ( feteroon,1990).

■ 3. ТШПІРОМШ ИЗОЫТОВ ВГІІ-І И ІіГП-2 МОДО РЗСЇККТАЗ-

ІІОГО А11ЛІШ2А ■ ■ .

Одной из задач диссертационной работц била моктиловая диЙоранцналия иаолятов ВГП. Исследовашя в этом направлении били начати с шбора рестриктаз, использование которых позволяло би четко виявлять можишошо различия и структуре ДНК ВГД-І и БГП-2. - ’ ’

v На основании анализа литературішх дашшх t Looker H,, 1979) были оценани дво реогрнктази x^ai и Hindin3T0 исследование было проведено на 4 лабораторных штаммах и 8 клини- '

ческііх изолятах ШЇІ-І, и на 3 лабораторних штаммах и 12 кли-ішческіи изодятих ШІ-2, находящихся на различных уровнях пас-сировашш (от 2-3 до 30-45).

Установлено,что при расщаплсшш ростршстазоп Хь»Х про-паратов Д1Ш, видельпкш: ]?з раздшчлизс яанon Jil'Ii-X, п голо видны 7 фрагментов рестрикции о ¡11 Sb,G; 28,9; 21,7; 18,5;

18; 15,5; и 7,id ые .¡Ip:i расщоплеппи роотриктаэон хье-1 iiJLii ВГП-2 типа било зарегистрировано 10'фрагментов рестрикции с Ш 53,4; 50,5; 45,0; 2G,5; 2U.4; 17,5; 12,0; U.4;,' Ъ,5 л *

4.4 md.B случао использования росгриктазиHincIiu на виявлоно различил иоаду штиглаш ВШ-1 и 2 тина по количоству fipar-монтов рестрикции. 3 обоих случаи:: обнаружено 15 фрагментов рострикщш. Имзсто о тем Бзан.морааполо;.хщно фрагментов рэс-гршещш JJIK Щ1-1 п J3Li Jl’II-S ¡io'jBojiiRo четко дпф1:еро!Ш}гро- ' вать цташи 1 и 2 типов. При расщошютш ДК ВГ; 1—1 aroii рео-трнктазоп фрагмента рострлвдм мошо било, раздобыть на 5 групп. Первую группу составил;! фрагмента о Ш 27,0; 2С,5; 22,7; 10,0; 17,4; п 13,1 г'о.ьторуп - фрагмента с ¡Г.! 9,0; U,-1; 7,8 л 7,ti;.li)./JpeTLD - фрагменты с МЛ G,0 ; 4,7 и 3,МШ .Четвертая

и пятая группу бил:: прадстаглоли Фр^г.шгапп о .’.1.1 3,0 н I.8MD соответственно. Б отлично от профиля рострнкцпп JJLI ПШ-1 при соработг.о рестриктазол Hiwiiui ДЦ ill'ii-2 паб.адаопио фрагмент ;.:c:i3io било разделив на Л группи: дна фрагмента с ;Х1 23,3 и 20,21.1В -норная группа, В орагшнтоп о M.l ib,8; J3,3; 12,3 11,9 ; II/A’JD -вторая группа, 5 фрагментов о I.J.I 7,0; G,8;

6.5 и 5,5 HD. трагъя группа и ^отвергая группа состояла

кз двух прагмантов с Ш I,G и 1,2 MD. ,

. Необходимо отмстить, что при иселсдоьашш .ряда лайора-торних штаи.юл БГП-I и ИГП-2 в случае использования росгошс-тази Hiudni зарегистрированы иташовие .различия - изменение

. и

подашкности кшщоцш: "полутляршсс" фрагментов, a Tai:;-o появление дополнительних шш отсутствие некоторых сайтов рестрикции, что затрудняло шгесрпрогащт результатов.

Тазш.1 образом, для практических целой мо:.:от бить реко-иоддовапо использовать ростриатазу Xbel,которая легко позволяла дофйеровдгровать иташи Bill 1 н 2 тпнсш по характер- . ному для каждого тппа прокшю фрагментов рестришш. Кроме того, при использовании этой рестршстази на наблюдалось внутритпгшпцх штаммоси:: различий. - -

4. цсаздажш по констг/жй/лш 12хяюй^к1ашш .

ИСГ-С:КЕЛ т СШ!2Р0ВЛ1Б1Л ПБОШГОД ШШ7СХ ' .

1Ж^СЛ ПРОСТОГО I И 2 ПЛОВ. • , •

■ С ноль» создания шхлуисфорнсш’но;; тест-с2ото.\ш Для ткшгрованпд лзолятов ВП1-1 к hïïl-X балл использовали .'.¡¡¡Л Ш1й i: I.LÎA 211208, направленные к тппоспоцп^ичсазш алтпгон-шй! детерминантам белка ЕзЗШ-1 и белка gD ЛИ-2, соотвот-'

СТБОШЮ • '

Билс разработало два варианта ¡¡¿Л, различающиеся по ‘составу шлуносорбента: - а первом варианте исследуемые ан-ткгени сорбировали непосредственно на твердую Сазу, а во ' второй варианта сорбировала смесь ¡срсличънх полкклошушшх антигерпетичоыснх антител к НГП-1 и к ЕП1-2, взятш: в соотношении 1:1. Еширование фиксированного на твердой фазе антигена ЗГИ осуществляли с поглоцш перокепдазного конъюгата на сспсво ишомгсцнфнчесгпх MU: ' 4

' Всего было подучено G аксперимеагалышх cepiii пороксн-дазпих ¡сонъюгатоз на основе »’lui ПНЮ и 3 экспорта! талыше сорнп конъюгатов на основа 1.КЛ 2K2G8. В ;:одо исслсдовашй били определены оатииалыше условия получения активных пероксэдазншс

конъюгатов на осново ІІХЛ. Еило установлено, что мшиїмалишіі титр антитол в ш.гутисдачіческік здідксстях дожюн üuïl hg шка 1:8000, а концентрация итігол для мотки нэ нішо 5-

- 10 ііг/ш, Лктншосгь прцгогсачинних серпії копьигитоп составляла 1:200 - 1:50р. Разрасіотишіш препарати йилл апроіінро-вшш па клішичоском материала от ¿оділіих горнотіїчсоной ниТ.ик-цнаіі (возтсулпрнаїг ;лдкость, С1.Е, слюна), Показано, чти уровень чувствительности oóoiDc вариантов тост-снсіои для нитрования антигена Ill'll (Iü° ТЦІ^/мл шлвллимиго вируса) ни ciu;i адоішаттім для проводити йГ^ектітиоіі днагийичі-.^л r.a-ua пиа-кой концентрации шздеа (іі'Л-ІО ТІІІ'^/мл) й скшшистшз où-следовании::: маториалов, а таїсш присутствия в пп.; слиаи и клеточного даиріїоа. Ьначлтслілю лучшла роїзулі.татн бшш полу-чзіш, сели до исследования в ПІД. прождалось иг.ода»р:ичшліоо обогащений вируса в течению I2-IU часов в чувствительно" куль- , туро ¡¡лоток. Рсоулі/гати типлроватт 47 ипш;і'іие:аі;; паияятов ШІ (ЗІ паолят ШЇ1-І, іи шо.№’ов ИШ-2) нокпиа.тл ілісо.су;,) чувсгвитольїіость її cne’jpîiijmoci’b іісслодоюіші, а таїгзв по.'пюо совгіадшшо розультатов odoœ: тряшг.чяі ихфпс&дооятш: тсст--снстом її рострактазпоги ацаліша JJI.'Î, щдолсіиюіі «з їй опитом.

! 5. иослДіАраліБШ по потліш лгонюштта даі т;ш-

ГОШПЬІ Aimi’iilIA ВШУСА 1УЛШСА ПРОСТОТО ї II 2 'ДШОй.

Для получоїіііа -їїГіі;—попаиі'атоп сішш ігсполььо:ішш илосптшда-ческио ША к ШІ-Ї (311IÍC) и к Ш1І-2 (21120)3). Лрл атом оптимальная концентрация антител, виліт для цотіаі составила 10 мг/мл, а нагрузка антнтол красцталом - 15 мг/нл. Сиециоілч:- _ ность всох получоїших cúpiü цоігиогатов в отношении тшюсіїс.чи-фичоешк антигенных детермінант ВПІ-І и ВГїї-2„<!ила іщсокоД.

'Тзшосдоилу.пческп!; конъюгат на основе ¡,IÚA IÍLLI0 реагировал только с ВГП-1 я но реагировал с ВП1-2. В то ;¿o время типо-oneiyiSmociwtil конъюгат на основе IZíA 2K2G8 реагировал только о Ш'Л-2 н но реагировал с ШИ-1. В окрашошшх препаратах наблюдалось ярко-золопоо гомогенное пли мелкозернистое своче-шй, локализующееся и окололдорно;! зоне. По било виявлоно различии в лараитере наблдцаег.юго свочешш ;.;о;:ду й1ТЦ-кокъю-гатон на oáiioBo MOV IIUIO н ¡.КЛ 2II2C8. . .

Дальнейший опиташ по испытании тшюсиоцвдичоспк ' бКТЦччОПъпгатсз на клшшуоских материалах бш;н полностью ■ подтверждали ллтсратурпно дашшо о непригодности ыотода ишуно-6raoopooi;G:u5Gi для исследования различии* материалов от боль-шх (коряи,везикулярная хздасость) баз предварительного обо-.

’ гаценля d нультуро улего:: по-за нсспецилпчсспогс окрашивания фориоциых элементов крови и слизи ( lier-rkar ,1930).

С по;.!сц’.а тнпоспощгТглосщк ИТЦ-кспьвгатов било проведено типпроса'пе 34 нзолягов ВГП от больше: с различниг.и форткам;: герпетической ннОокцш;. Свсчаниа вирусного антигена при 6в-рас:® йГГЦ-коньюгатоп на основе J.KA ffillü Силс выявлено в 27 случая;;, в 7 случая:: бил выявлен антиген, роагируащШ с ШЩ-коикэгатом на’оспоъе типоспсдиупческх '..luí 21120o. При тшшро ваиля го;; ;;;з 34 изоллтов BTii методом реетриктазного ' анализа било получено полное совпадите результатов.

. 6. ксслддоалша по поэтапно як-зондов злуса киеса.

ПРОСТОГО И ИХ ШШОЛЪЕОВАШЕ) №í В;йШ^:ЕИ ВИКУСНОл ДгК ..IÍTOÁOM МОШйСУйТРНО^! ПШР/Щ15А15Ы Дне получения ДЕК-зондов BTU била использована ДЕС, виде ленная из штамма VR^BUT-i. В результате проведенных экспериментов было получена 18 клопов - рекомбинантов B.coli

,(ыташ Jti -10У), оодйр;.;ащл:: ро;;оі.ібішшшіую плазшда pbü-iy со вставка;.),; .адіпі ([рагоонгов вирусной ЛІК. Из i¿vz b клопов реагировала тсліл'.о с шруаисЛ ШС, З іаона даваші порокроотнуп poaicujm icait o ілгруснол, так і; с іуюто’шоіі ДіІК. Чуастаатолыюстъ ДцК-зоіщоб прпгст'оалеппш'.' на осново іслошрошшшх <дзагшнтоі> жірусиоіі ДійС,ш-дслйшюіі из 5 Гіцрі'сспоци^ичосцііх клопои, ааріліропала от 500 до 1U ш7(.ш. Лла исследований Оил виоран палсіолео шсічшшЛ

¡oran, с пс.исщш которого удаиа;:осі> шшиїлть до 10 пг/мл ДК.иццо-ле'шіоіі аа разлшш шташои Г1ГП-І и до СО пі’/ші ДЩС ВП1-2. Результати идонтііиЕіі:ац;:и отого зонда лоїшзшш, что ou соотвстетауот Ьшипі !• сдаишиау lillí—I, разиороа 3,0 г.п.п. В тасіїшцо I обоб-

щены результаты изучошш метода молекулярной гкбридлоацш с другн-'ЛІ тостам;, пр:шои::о;.!а;ш длл длагцоегчгш горнслічосіїс;; ішуоулрш.

Тагілица I.

злыиап: олщ гашквдщ с дгэтлш wemi jtalopa-

ГСИ1С1І ЕШЇЮСУШ КГіУСЛ ГДШОА ПРОСТОГО

Іродполаг; ілл^л шічлчллл;.; д:ытиои - 1Í-EO исісла- довашал;: оолніил ' ' " ! дол-ш иоломгголыш:: ДОЛ-Ш ебе^едвкшшк нсо;;одиГіац;ш методом : результатов, болиш:: при

’ .. ДО-Жі гайрідо заи,:ді ; ;!іщ;іі;аіі.ал ГДіашошю ¡ ній а і-уліА'у-і-а'лтиі'аиа “ : ро ідіоток ! jJl'il и клішії і истодом IDA !чоо;;ом ма! тошало u í Ük-A тост! . іслстсшх _.

ерПО'ГІР’ОСГЛІЛ пда^мЛіга II. 9/ІІ 6/II 4/і ї

енорх'щзоваииа^ . орпотачссная ифакіг.ія Ь 5/5 5/5 4/5

зішталілшіі герпео 34 33/34 33/34 ÍÍ9/34

зрпоо-лаблалпе 5 5/5 5/5 4/5

ЗрПОИІЧйСКИИ сопатпт ■ 4 4/4 - 4/4 2/4

Ж) їй (1СЮ £) 5G (34,9 :>) 03 СГ.9,ІЗ;Ї) 43 (72,ВЙ)

Как видно из представлешшх датшх,эффок?лвность использования метода молэкуляригш гибридизации для исследования различицх клинических материалов била шае, чом ПиД. и метода выделения вируса э чувствительной культуре глоток. Из трех сравниваемых

і.іогодов метод молекулярной гпбриднзацші оказался едішственнии, • с помощью которого удалось в 3 случаях расшифровать горпотичео-кую природу, аіщефалити. У этих 3 большее при дгаїашчоскоі.і серологическом обслодованш било выявлено болео, чом 4-кратноо нарасташю тигра антител к ВГЛ как в сиворотко, так и в С.Е. По-вядтшу, присутствии алтптел к ВГЛ в СТ.,2 могло бить обіяс-ноішеїл отрицательных результатов видслошія ві.руса в культуре клеток. ■ '

’ Таїаи,і. образом, результати проведайте: исследований по-

казали, что на основе клонированного ЛвшНі тфрагмента ЯК ЕЛІ—X полно сконструировать високочувствнтольїиіц и сивіщфичшн ДЕК-зокд, использовашю которого для бистроЛ даагностлглі герпетической шіфоїщс: весила перспиістішк«. . ■

~ 7. ііосеіуршмт по ішстЕпггоЗіиш кіотосзкектно;; тзет--СЗСТ2.Ы дня Вияшіп-и і;.;.июг;;окгл2іоз і,і к вгп.

С целыз конструирования иммунойерг.зитноЛ тест-спстсмн • ч для виявлення Ія-і антител к ИЛІ на основашш обзора лдчератур-

• них даншх бил попользован вариант "захвата" ЖА, при котором • "захватывающий" антителами, сорбировашшш на твердо;! сїазо .были Iва антитела к І&“ человека, а детекторная система представляла ссбоії-иечошшо перокездазоіі'вітрумше антигени. Для оценки этого препарата был разработан непрямой-вариант П£>Л, предусматривающий для виявлення вирусспещі^нчоскік ід.антптел, использование пероксидазного коньигата на’осново і^к І^.І человека.

В ходе проведенных зіхпоріьмоптов били определены ептнмаль-

- ішо условия конструирования таердэдазного иимуиосороепта и оиишиэлроваш услоьш иосгановш самого тоота. В счашштоль-іш:: повторних икспоршонтах ¿ило установлено, -ми д,И1 дии-шлз-ніш максимальной чувствительности и специфичности тост-слсто-ш па лунку пообходило сорбировать по ыоное 3-5 шсг/100 шел бета igG аитнтол к j*-uon;j.i JB-i чоло вока в случав ис'пользова-11ш поликлонального препарата и О,b mcr/Iüü тел -'при использовании моноклоналших аішгеол. При сравнении чувствительности и специфичности тост-спстом, в которих в качество дотекторнон системи использовали .мочошшо шрокевдазоп антигени ДТП различной гомогенности, било вшшюно нропмущоство ОЧШ'[ОНИОГО вируса по сравнению с aimirouo:i вирусного нуклоокаиедца. Хромо того, било установлено, что онтшилыша показатели бшш получена прл кмкубадин сиворотці от пациента в точенпо 1-У часов при 37 °0 п п:;рус1!сго иорсксвдазного конгмгата в тО'іе-

- ішо почи Ирл -1 °0‘. Uojr.i.T иксперписнтов била посныцопа отработке с;іс"кли учета рчтуликааа, С ото:; цолю па раэраоотлшюЯ

ii.M;.iyuüöüp:.icuvucu тсст-т.ктоио оили ассладопшш УО сивороток

• здоровш: допоров с разлояш ишуіш:ш статусом в отношении, гэрпотлчосш.! инфекции: 1-1 - содержали *gG антитела г; ІІІ'П,. и 6 пациентов оилл ссрои-.л’ативпгюг. І’озультаги нроводошіш; исследовании показали,- что еродиш араротическая 011^ прл не—’ следовании отих сивороток составила 0,125. С учетом 3-кратноГо ісвддратіїчнога отклонения ( «** —0,04J било-установлено, что аначэнш ОП^д^, разгранпчшащее нолоиїтолишо и отрицательные) сиваротісп, состав/лот 0,‘<£> o.g. Эти результаты били в последующем подтизртденц несло,цовашюи Хь«поло;.пітольнш: сивороток как о впруеїшм, тик ц о контрольним антигеном (нопн^лщп-ровшшш глотка) .ночей;-!!! і иогакепдавои по тоіі ;.;е їо:аюлогіш,что

и шруснші коныэгаг. ІІіг в одном случае но било шявлено лс;;;-Но-пологзітольньк результатов.

Оценка разработанной ¡іммунофор'.ісигнсіі тосг-с;ісїшц длл ваявло-шш-і»« антител і: ВГІІ по сравнению с препаратом на основа непрямого ПіЛ (табл.2) показала преимущества первого как по чувствительности, так и по специфичности. При этом больиа;т. чувствительность варианта "запззата" біта отчотлнбо виявлена пр;і ебелодева- ■ нші сивороток,получошіш: от болших в стадгпі рскеншлосцопціш, когда концентрация іє‘"> антптол начинает сшс.;а?ьсл, а такг.с при рецидиве заболеванияЛіри использовании варианта "захвата" по било зарегистрировано іш одного лоїліо-ііолоілітєльногз результата.. В то . ке время при исследованы сивороток с? больше: с ауїолдауіпші.к заболоюшіїш с помоцью непрямого варианта ¡¡>Л в 29,4 ^ бшді по-

лучоїш ло;:аіо-поло;літольіше розультаги. '

' , Таблица 4. '

ощга. рлзгштшюй тда-снскш м,і ктлиги igu • АПТЖл л uni 1IHÎ ЇШ^ОВЛІШ рле;лчш& паді ЛОДіі

Обсдсдоваїшаї группа І Осдцос ! Вариант ;і*Л OjUOnp.T! ¡ОН

1 число ! 11сго.'гьзован;!-;ваопант

;сипо-в ! ом noDûi с;щаз і! L-Л

. * :роток ! ного І'.оп ъпга-!

і , та на основе !

і очхшішого !

І вга і

! Г.-ЕС по- ! /3’ !л—во

1 ЛОГ.ИІТ, ! . і.сшзо-

! CUBODOT. ! ¡лоток

Болышо ПСОВІПШОІ острая 36 36 ICC 36 100 -

гирпстїїческсіі ІШ- стад:ш

фекциой . рекопва- лесцеи

щія зе 36 IUC 32 89,0

Еольнио • реи;ідіт;і- острал 33 18 4Є,Й 14 35,0

руїощеіі-форглоіі Ш1- стадія

йОВДЦІ роїсоква- лссцеп- 39 ' IU 25,6 6 15,0

ЗдороЕиз ладисо- • ЦШ

догл;сакціо IeG ангитола

к ІіГй ■ . 40 0 0 G 15,0

Здороше ЛІ0ДІ1,ІІЄ СО-

дотацію feG аігаїтсда

і: ВГП ІО 0 0 2 æ

Голыше с аутолммуи- і 7 0 0 5 ■¿о

пш;і саболоваші:^, ТІ

¿1 .

Устзноышшшз в цааи иссладоиашшх прониущосгва варианта "захвата" по срашопш* с нопрямш вариантом 1Г-ЗЛ при создании тост-систомц для шявлешш г.шулигииоулинои /Л к ВГЛ имеют icait теоретическое объяснение, так и подпшредощ результатами последователен прл использовании лроларатов для диагностики различных ви-руоних ¡пфзкцл;; ( Van Loon,IS89). .

■ ишсиш . '

X. Усовершенствована снсгииа tSudpoii диагностики заболонашШ, вц-зиваомих различншди тинам.! влруса горнаса простого (БГП). Иа основе цоноилоналышх антител л ДПС-зовдов созданц оригинальные препараты, ксторш позволяет не только повислть достоверность [^агностического лсслодованил, но и проводить тишфолашга вируса, зиэвавыого зайоловашю. ■

2. Разработана условия, получения ^оноююнаяьних антител, иаирав-юшшх к разллчнга типе- н груштсподафлчоцклм антлтешшм дотерт, юкатам ВГП-I и ВГП-2. Получена п охарактеризована панель из 7 гибридом, из ксторшс: 3 реагировали с тииоолоццфичосюш дотор-шнанЕши поверхностная глшеопротоидов ВЛ1-1 и ВГГ1-2, 4-е труппоспещфпесшми детерминантами, раснолошшшш на молекулах ;ак обслочачних белков (¡}B,gD ), так и на мажорном нуклоокап-¡ндно.м бэлко р!50 Ш1-1 и БЕЛ-2, , ,

1. Разработали и оцолопц 24 варианта тЕлунсфориопгншс тест-систем да вшгалення вурусноги антигена на осново различных комбинации . группослецифнч-ескпх меиотслоиачищ антител и их сочетаний с олнклональнши кроличыши иммуноглобулинами к ВШ-1 и ВГЛ-2., станошоно.что чувствительность этлх тесг-сиотом варьировала от 50 до 1000 мг/мл выявляемого вкусного балка, что минимум 9'

5 раз 6u.no ни;;;о чувствительности препарата на осново только ¡ю-шукшалышх кроличьих иммуноглобулинов к ВГП-I и хс ВГП-2.

4. Для тшшровашш вирусных изолягов с использованием типоспо-

цифічесіан моноклоналыщх антител сЗилії разработали два варианта ш.юупоферыентнш: тест-систем и получшш ¿ІГЩ-коні-п-гаїи. Оценка полученных препаратов б сравнении с методом ростриктазного анализа, провйденная на лабораторию: штаммах ВГП-І и ВГіІ-2, а также па'47 клинических изолятах, показала зйс шсокуи чувствительностью специфичность. '

5. С использованием глоїшровашюго ВатНі т(з,25 т.пгн.) фрагмента ДЦК ВГИ-І был получен високочувствиюлышп

О' і

, и специфичный дНК-зонд, мэчошшЛ Р. Чувствительность , метода молекулярной гибридизации с использованием полученного зовда составила 10 пг/мл ДИ ВГІІ-І и 50 пг/мл ЫГП-2. При оценке скопструировашюга зонда на 5Э материалах; от большее с различными формами герпетической іш&ощіт било установлено, что по чувствительности и специфичности метод молекулярной . гибридизации превосходит шиунофорг.іинтші; анализ и мотод ввделеїші вируса в чувстві'тольноіі культуро клеток. Процент выявления инфекции составляэг 94,9 %; 72,8 г/3; 69,2 ;2 соответственно.

6., Для быстрой диагностики герпотичес:;о;і шіфоіисіи разработали и одеиэны две имлунофермантше тест-системи.для выявления к ВПІ.' Установлено, что гесг-спстсма, основанная на принципе "захвата", предусмагризавдат использование 1^ к |А -цепям ІгИ человека и детекторную систему на основа порокси-дазяого конъюгата очищенного вируса обеспечивает получение болеэ чувствительного и специфичного препарата по сравнению с тест-системой, основаниоЛ на "непрямой” варианте жиуиобермонт-ного анализа. Чувствительность первого препарата составлю-

ла 100 % при первичной форма ааболовахша л 46 ',!> при роцвдшо по сраыюшш с 94 % и ¿¡ü ,J соотизтсгцопно> при нснолъзованш: "нолрямсго" варианта. Специфичность -сравшшаешх tûcï-ciicïom составила ICO £ и ¡'¡.

СПИСОК СНУJü.lK0i3AiüiUÀ PALÛÏ 110 ï’ii'ü ДИССЕРТАЦИИ

1. Лиордаца G.B., Обралидзо Л.K., Зайцев 11.3..Нолучонио J4IK-зондсв ьпруса герпеса простого и их использований ц диагностике) ii3pnùïii4üCKo:i инфшицш. В cö. :"Coupor.;Qiuiuo направлении создания мидищшоких дпахчюетшеунов"". 1.1., 1980 г., с. 104.

2. Диирдицfi C.B., Мальцева H.H., Нагаева О.Г. Лотте В.Д. "Моноклснилыши. антнголи к Birpycy горное а простого ц их использование для ндадтафииац.::! и тшнрошшш вирусных лоолстов”.

У сб.: "(Joiip-üi.iuiiüuo направлении создания модицшюшсс диагностику! юн". М., ji/jü г., о.'

ü. Днордпца С.В’. И'ищсса 11.11., Нагиева й.Г,, brypenù A.A. ’иошжлшшшшо антитела к группо- а тапосиоциЗкчвскш анга-лшши Ar»4-cjinuyu7£i!j гллиоиротеида gi) вируса герпеса простого”. В cö..: Торпосвируопио инфекции (диашшепша и лоче-1Ио)". Ï9!)0 !•., о.35-Ю. • ■

1. Днордпца O.li., &ыцоа U.U., Малх-цтеа H.H. Оораллдзи jùK. ‘Випнлетт вируса vepnooa простого исходам ДК-ДНа гибридизации” ■.юликулярлал rciiOTiiica, микробиология, и вирусология .

:9‘Л г., S 10, C.I3-IÜ.

>. Дпордици G.B., Мальцева 11.11., J,'ottû В.Д., Нагиеиа ф.Г.

'Получон.ю и характеристика моноклональных. антител к различим öüjiicajj вируса l’opimca простого l-iiuoа I л 2". Вопросы щрусолопш. Ï99H г., it 4, с,139-204.