Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза

Алиева, Елена Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза"

На правах рукописи

003^1460 1G

АЛИЕВА Елена Васильевна

РАЗРАБОТКА ЛАБОРАТОРНЫХ ЭКСПРЕСС-МЕТОДОВ И ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЛИСТЕРИОЗА И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА

03.00.07 - Микробиология 03.00.23 - Биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

2 2 СЕН Ш3

Москва - 2008

003446816

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Роспотребнадзора

Научный консультант:

доктор медицинских наук,

профессор Тюменцева Ирина Степановна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Ильин Вячеслав Константинович

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Митрохин Сергей Дмитриевич

Владимцева Ирина Владимировна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московская медицинская академия им И М Сеченова Росздрава

Защита состоится «. _2008 г в часов на заседании

диссертационного совета Д 208 046 01 при Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г Н Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по адресу 125212, г Москва, ул Адмирала Макарова, д 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН «Московский научно - исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г Н Габричевского»

Автореферат разослан « / » I

008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор биологических наук

С Ю Комбарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Структура инфекционной патологии человека за последние десятилетия претерпела существенные изменения, обусловленные как открытием целого ряда неизвестных ранее инфекционных агентов (возбудители ВИЧ-инфекции, гепатитов В, С и Д, геморрагических и арбовирусных лихорадок, легионеллеза и т д), так и изменением роли и удельного веса хорошо известных возбудителей Ко второй группе наряду с возбудителями туберкулеза, условно патогенными бактериями широкого спектра, вызывающими гнойно-септические заболевания и пневмонии, в полной мере можно отнести кампилобактерии и листерии (Тартаковский И С, Малеев В В , Ермолаева С А , 2002, Покровский В И и др , 2004) Хотя упомянутые микроорганизмы давно известны, в последние годы заметно расширился удельный вес вызываемых ими инфекций, равно как и спектр их клинических проявлений

Кампилобактериоз (вибриоз) - инфекционная болезнь животных и человека, вызываемая патогенными микроорганизмами рода Campylobacter, которые интенсивно циркулируют во внешней среде (вода, домашние и дикие животные) Анализ данных литературы показывает, что кампилобактериоз довольно широко распространен на всех континентах и во многих странах мира Вследствие довольно широкого географического распространения, циркуляции среди животных и людей, у которых это заболевание протекает чаще всего как ток-сикоинфекция, кампилобактериоз приобретает существенное социально-экономическое значение

Листериоз относится к числу природно-очаговых инфекций Возбудителем листериоза является грамположительная аспорогенная бактерия Listeria monocytogenes Листериоз у людей проявляется спорадически, но также описаны многочисленные вспышки пищевого листериоза и внутрибольничные заболевания в родильных домах Заражение в основном происходит при употреблении в пищу инфицированных продуктов животного и растительного происхождения

Внимание к листериозу возросло после расшифровки в конце 80-х годов прошлого столетия вспышек пищевого листериоза у людей с летальностью до 33 % в США, Канаде, Мексике, Швейцарии, Великобритании, то есть в странах с традиционно высоким уровнем здравоохранения и технологий приготовления продуктов питания

Анализ состояния лабораторной диагностики как кампилобактериоза, так и листериоза позволяет предположить, что зарегистрированный уровень заболе-

ваемости представляет лишь «вершину айсберга» и при совершенствовании организационных и методических вопросов лабораторной диагностики число зарегистрированных больных может значительно возрасти

Ранняя лабораторная диагностика, те своевременное выявление источника инфекции занимают основное место в системе прогивоинфекционных мероприятий Современная микробиология характеризуется развитием диагностических технологий, основанных на глубоких фундаментальных знаниях биологии микроорганизмов и передовых инженерно-технических решениях задач автоматизации и повышения эффективности анализа (Онищенко Г Г с соавг, 2003) В связи с этим возникает необходимость в совершенствовании имеющихся иммунобиологических методов, создании новых экспресс-методов диагностики и индикации, направленных на сокращение времени проведения анализа, его упрощение при одновременном увеличении надежности и легкости интерпретации полученных результатов при высокой чувствительности и специфичности

Цель исследования: научная разработка экспресс-методов лабораторной диагностики возбудителей кампилобактериоза, листериоза и создание технологии производства медицинских иммунобиологических диагностических препаратов

Основные задачи исследования:

1 Разработать транспортную, селективные и накопительные питательные среды для возбудителей кампилобактериоза и листериоза

2 Подобрать эффективный метод извлечения специфических антигенов белковой природы из микробных масс возбудителей кампилобактериоза и листериоза для использования их при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов

3 Разработать производственные схемы получения иммунных сывороток с высокими титрами агглютининов и преципитинов и провести сравнительную оценку методов выделения из них иммуноглобулинов для дальнейшего их применения в качестве биологического сырья при производстве иммунобиологических препаратов

4 Определить оптимальные параметры биотехнологии производства иммуноферментных и иммунофлуоресцентных кампилобактериозных и листе-риозных иммуноглобулиновых конъюгатов

5 Разработать биотехнологию аффинных сорбентов с магнитными свойствами и на их основе создать тест-системы магноиммуносорбентные, а также методики их применения в экспресс-методах лабораторного анализа

6 Определить параметры единого режима сублимации биополимеров (биологического сырья и МИБП) с целью сохранения их исходных свойств,

7 Оценить эффективность применения разработанных диагностикумов на экспериментальном, клиническом и полевом материале

Научная новизна работы. Унифицирована питательная основа для транспортной, селективных, накопительных питательных сред, которые позволяют успешно выделять Campylobacter jejuni и Listeria monocytogenes от людей, животных, из пищевых продуктов, объектов внешней среды

Подобраны эффективные методы, дающие возможность получения натив-ных специфических водорастворимых антигенных комплексов белковой природы из биомассы кампилобактерий и листерий

Разработаны новые, высокоэффективные схемы иммунизации кроликов для получения специфических агглютинирующих и гипериммунных сывороток с высокими титрами

Впервые осуществлена научно-методическая разработка биотехнологии производства кампилобактериозных и листериозных микрогранулированных органок-ремнеземных иммуносорбентов с магнитными свойствами, обладающих высокой сорбционной емкостью, стабильностью, чувствительностью, специфичностью

Впервые сконструированы кампилобактериозные и листериозные магно-иммуносорбентные тест-системы для иммуноферментного (ИФА) и количественного иммунофлуоресцентного (КИФА) анализов, позволяющие исследовать пробы из внешней среды с высокой степенью загрязнения неограниченного объема, низкой концентрацией патогена, с чувствительностью, в 1000 и более раз превышающей традиционные

Материалы выполненных исследований легли в основу двух патентов РФ на изобретение № 2135210 от 27 08 1999 г «Способ получения диагностической сыворотки» , № 2290641 от 27 12 2006 г «Способ проведения иммуноферментного анализа (ИФА)»

Практическая значимость работы.

Разработаны накопительные питательные среды с соответствующими добавками для наращивания биомасс кампилобактерий и листерий

Подобраны эффективные методы и приемы по извлечению антигенного материала, получению иммунных сывороток и выделению иммуноглобулинов

Оптимизация параметров конъюгации лигандов и маркеров позволили унифицировать биотехнологию производства ряда МИБП для экспресс-

диагностики кампилобактериоза и листериоза, индикации их возбудителей (эритроцитарные, иммуноферментные, иммунофлуоресцентные), стабильно отвечающие общим медико-биологическим требованиям (ОМБТ), предъявляемым к индикационным препаратам

Разработан единый ускоренный экономичный режим стабилизации биологического сырья и МИБП методом сублимации, позволяющий сохранять их исходные свойства длительное время

Таким образом, создан алгоритм технологического процесса получения диагностических препаратов для индикации и идентификации возбудителей кампилобактериоза и листериоза, включающий в себя все этапы производства от накопления биомассы на питательной среде до стабилизации полученных диагностических препаратов методом сублимационной сушки Внедрение результатов в практику.

Методики применения разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП изложены в «Методических рекомендациях по лабораторной диагностике листериоза у людей», «Методических рекомендациях по лабораторной диагностике кампилобактериоза у людей», «Методических рекомендациях «Магноим-муносорбенты в микробиологических и клинических исследованиях»

На диагностикумы листериозные эритроцитарные, флуоресцирующие, магноиммуносорбентные кампилобактериозные и листериозные для ИФА и КИФА составлена первичная нормативная документация (регламенты производства, фармакопейные статьи предприятия, инструкции по применению), прошедшая экспертизу в ОБТК СтавНИПЧИ, одобренная Ученым советом (протоколы №2 от 28 02 2002 г , №6 от 26 06 2003 г , № 2 от 28 02 2007 г) и утвержденная директором института

Материалы диссертации используются в лекциях и практических занятиях на курсах по повышению первичной специализации врачей по особо опасным инфекциям при СтавНИПЧИ, семинарах для практических врачей и научных работников МЗ РФ по экспресс-диагностике инфекционных заболеваний и применению магноиммуносорбентных препаратов в мониторинге инфекционных агентов

Основные положения, выносимые на защиту

1 Предложены научно-методические подходы к получению биологического сырья (антигенов и антител) для производства кампилобактериозных и листериозных МИБП, которые дают возможность повысить их качество

2 Разработаны методические приемы конструирования эритроцитар-ных, иммуноферментных, иммунофлуоресцентных диагностикумов, обеспечивающие высокую эффективность обнаружения антигенов кампилобактерий и листерий и антител к ним

3 Создана биотехнология изготовления кампилобактериозных и лис-териозных твердофазных микрогранулированных композиционных аффинных органоминеральных магноиммуносорбентов, тест-системы магноиммуносор-бентные для экспрессных методов иммуноанализа (ИФА, КИФА) позволяют максимально концентрировать патоген в исследуемом материале, что дает возможность повысить разрешающуюся способность экспересс-методов

4 Результаты практического применения разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП, демонстрирующие повышение эффективности лабораторных исследований клинического и полевого материала

Апробация работы. Диссертация обсуждена и одобрена на заседании Ученого совета ФГУЗ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Роспотребнадзора, протокол № 3 от 15 мая 2007 года Основные результаты диссертационной работы были представлены на научной конференции «Проблемы биологии и химии на Северном Кавказе», посвященной 70-летию биолого-химического факультета СГУ (Ставрополь, 2001), научной конференции Ставропольской медицинской академии (Ставрополь, 2002), международной научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России», 21-24 октября 2003 г (Ставрополь-Пятигорск), научно-практической конференции «Опыт работы учреждений Роспотребнадзора в Ставропольском крае по обеспечению санэпидблагополучия и защите прав потребителей (Ставрополь, 2005), II съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации на базе Военно-медицинской академии им С М Кирова 15-17 ноября 2006 г (Санкт-Петербург)

Основное содержание диссертации, выполненной в рамках 3 НИР, отражено в 38 научных публикациях

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, приложений

Она изложена на 245 страницах, содержит 24 таблицы и 28 рисунков Список литературы включает 295 отечественных и 196 зарубежных литературных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы. В работе использованы 33 штамма микроорганизмов II, III, IV групп патогенности родов Campylobacter, Listeria, Yersinia, Salmonella, Vibrio, Staphylococcus, Escherichia

Использованы 35 кроликов породы «Шиншилла» При выполнении работы обследовано 800 человек (от них 920 проб), исследованы 931 проба от животных и птиц, 1005 проб из объектов внешней среды, в том числе 275 - пищевых продуктов, 280 - воды, 200 - почвы, 20 - сточных вод птицефабрик, 50 смывов с технологического оборудования и 20 проб промывных вод сырного производства

Антигены микроорганизмов изолировали водно-солевой экстракцией с последующей ультразвуковой дезинтеграцией микробных клеток Дезинтегрирование осуществляли на аппарате УЗДН -2Т (Россия)

Иммунизацию животных проводили с применением иммунокорректоров тималина, циклофосфана и тимогена Контроль титра специфических антител в сыворотках определяли в непрямой реакции иммунофлуоресценции по ТН Weller, АН Coons (1954) Для осаждения белков использовали сульфатный метод (Русанов В М , Скобелев JIИ , 1980), метод фракционирования белковых смесей с использованием высокомолекулярного, незаряженного, линейного полимера - полиэтиленгликоля - 6000 (ПЭГ) по A Poison и др (1964) Иммуноглобулины также преципитировали каприловой (октановой) кислотой (Steibuch G , Andran R, 1969)

Количественное определение белка проводили по методу О Warburg и W Christian (1941) сравнением поглощения белков при 280 и 260 нм на спектрофотометре СФ-46 (Практическая химия белка, 1989)

Специфическую активность антигенов микроорганизмов и полученных иммунных сывороток определяли в реакции иммунодиффузии в 1 % агаровом геле (Difco, USA) по О Ouchterlony (1949)

Конъюгацию иммуноглобулинов, фракционированных каприловой кислотой (Steibuch G, Andran R, 1974), с флуоресцеином изотиоцианатом (ФИТЦ) фирмы «Sigma» проводили по X Шторц (Stortz, 1987) Прямой метод

окраски препаратов осуществляли по А Н Coons, М Н Kaplan (1950) Очистку конъюгатов от непрореагировавшего флуорохрома осуществляли методом восходящей хроматографии на бумаге (Носков Ф С , 1985)

Иммунопероксидазные конъюгаты получали методом перйодатного окисления по Р KNakane, A Kawaoi (1974) в модификации Е А Ткаченко с со-авт (1982) Рабочий титр и специфическую активность конъюгатов определяли по методике М Clark и A Adams (1977) в "сэндвич"- варианте ИФА Очистку конъюгатов от несвязавшихся иммуноглобулинов и фермента проводили на хроматографической колонке фирмы LKB, используя сефадекс G-100

Микроструктуру поверхности магносорбентов (MC) определяли на сканирующем электронном микроскопе (1М2-Т3000, Япония) по методу, описанному в работе Д Фрайфелдера (1980), удельную поверхность MC - по методу А А Клячко-Гурвича (1961), основанному на низкотемпературной адсорбции азота Суммарный объем и радиус пор определяли по методу Н В Кельцева (1984) Количественный иммунофлуоресцентный анализ проводили по методу К Г Стоева, В А Чибисовой, К J1 Шаханиной (1981)

Сублимацию проводили в камерах TG-5 (Германия) и LZ-9c (Чехия) Математическую обработку результатов экспериментов осуществляли на компьютере (программа EXCEL) Для подтверждения достоверности результатов, полученных при исследовании, применяли статистические методы (Там-бовцев Е П , Ахметкапиев С Г , Пятницкий Н П , 1969, Скуч Д, Уэст Д , 1979)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Конструирование питательных сред для кампилобактерий и листерий

зированную кровь барана или лошади (7 %) и аэротолерантную добавку (железо сернокислое, железо закисное, натрий пировинограднокислый по 0,025 %)

Для изготовления накопительных сред (для наращивания биомасс микроорганизмов) взята рецептура селективных сред без антимикробной добавки, в которую введен стимулятор роста - «ЭСРМ» (7±1) мг/л Этот универсальный стимулятор роста был разработан и с успехом применен при наращивании биомассы L monocytogenes штамма АУФ при производстве листериозной вакцины (Панова Н В, 2006) В препарате использовано сочетание биологических потенций куриного яйца и эмбриональной ткани, которые имеют наличие широкого набора составных частей, обладающих положительным катализирующим действием на метаболизм бактерий

В сериях опытов при засеве 100 мк Cjejuni 1/NCTC 11168, Ccoli 602, L monocytogenes сероваров l/2a и 4a на контрольных (глюкозо-глицериновый агар - для листерий, железоэритритный кровяной агар (ЖЭКА) - для кампило-бактерий) при инкубации листерий при 37 °С через 24-48 часов, а кампилобак-терий - при 42 °С в микроаэрофильных условиях через 48-72 часа наблюдался рост, типичный для каждого вида микроорганизмов Количество выросших колоний на селективных средах при вычислении среднего показателя равнялось (85,3±1,4), а на накопительных - (93,8±1,83), в то время как в контролях среднее количество выросших колоний не превышало (73,2±2,1) На накопительных питательных средах показатель прироста бактериальной массы, вычесленный по формуле Э М Олиферовой (1998), в среднем составил (1,55±0,27) г/л, в то же время на контрольных средах он был ниже на глюкозо-глицериновом агаре - (0,68±0,06), на ЖЭКА - (0,82±0,11) (таблица 1)

Консервирующую способность транспортной среды изучали в условиях комнатной температуры (22±2) °С и холодильной камеры (4°С) При 4 °С культуры кампилобактерий и листерий сохраняли жизнеспособность в течение 4 -6 суток, а при (22±2) °С - 3-4 суток Достоинством этой среды является ее пригодность для сохранения как кампилобактеров, так и листерий, что позволяет вести поиск этих микроорганизмов в одной и той же пробе

Разработанные среды позволили успешно выделять патогены из материала от больных людей, животных, птицы, объектов внешней среды, а также для получения антигенов наращивать биомассы кампилобактерий и листерий в количествах, достаточных для этих целей

Таблица 1. Сравнительное изучение ростовых свойств опытных и контрольных питательных сред

Вид питательной среды Количество колоний выросших при посеве 100 м к (М±ш)

L monocytogenes 1 Campylobacter

Серии питательных сред

1 3 5 2 3 5

Селективные питательные среды 83,7 ± 1,4 84,5 ± 1.2 84,7 ± 1,3 88,2 ± 4,7 86,7 ± 3,2 84,5 ± 2,8

Накопительные питательные среды 91,2 ±2,3 96,9 ±42 93,7 ±3,1 95,8 ± 2,4 94,5 ± 3,2 91,2 ± 1,9

Глюкозо- глицериновый агар 70,7 ± 1,08 68,9 ±2,71 71,1 ± 1,92

Железоэрит-ритный кровяной агар 71,8 ± 1 8 73 2 ±2,1 72,9 ± 1 92

♦Примечание - статистически достоверные результаты (от Р<0,001 до Р<0Д) Использование доступного, дешевого, непродовольственного сырья в качестве основы позволило значительно снизить себестоимость питательных сред и ускорить процедуру их приготовления, так как отпала необходимость проведения гидролиза продуктов животного происхождения, традиционно используемого при приготовлении сред

Разработка биотехнологии получения листериозных и кампилобактериозных диагностикумов для реакции агглютинации и реакции непрямой гемагглютинации Одним из доступных и простых методов индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний является реакция агглютинации Качество агглютинирующей сыворотки зависит от высокоактивной схемы специфической иммунизации животных Проведена серия экспериментов по отработке оптимальной схемы иммунизации с варьированием концентрации антигенов, способов, кратности и периодичности их введения Для иммунизации животных использовали обеззараженные 1 % раствором формалина с последующим кипячением в течение одного часа двухсуточные агаровые культуры L monocytogenes сероваров 1/2а, 1/2в, За, 4а, 4в, 5, 7, доведенные до концентрации 1хЮ9 мк/мл по оптическому стандарту мутности ОСО 42-28-59-85, взятые в равных долях Корпускулярным кампилобакгериозым полигрупповым антигеном служили объединенные в равных пропорциях бакмассы из С jejuni 1/NCTC 1168, 33291, С coll 602, С fetus 322, обработанные при 100°С в течение одного часа с добавлением 1 % раствора формалина, доведенные до концентрации 1x109 м кУмл

Наиболее результативной оказалась схема иммунизации, предусматривающая три способа введения антигена внутривенный, в подушечки лап, в лимфатические узлы Важным достоинством этой схемы является непродолжительность периода

иммунизации кроликов-продуцентов, который составляет 17-18 дней, атравматич-ность для них, получение высоких титров специфических антител - до 1 3200 1 6400 Кампилобактериозные полигрупповые сыворотки для РА оказались высокоспецифичными, в то же время полученные лисгериозные агглютинирующие сыворотки давали в низких титрах перекрестные реакции с гетерологичными культурами (сальмонеллами, шигеллами, стафилококками) Специфичные полигрупповые листериозные сыворотки удалось получить после проведения иммуносорбции с помощью твердофазных ПААГ - сорбентов (таблица 2)

Традиционным и эффективным методом диагностики инфекционных заболеваний является реакция агглютинации с применением корпускулярного диагностикума При окраске микробных клеток анилиновыми или другими

Таблица 2. Результаты сравнительного изучения специфической активности и специфичности полигрупповых агглютинирующих адсорбирован-

ных листериозных и кампилобактериозных сывороток

№ пп Наименование штаммов микроорганизмов Листериозные сыворотки Кампилооактериозные сы-вопотки

Схемы иммунизации

I 11 III 1 II III

1 2 3 4 5 6 7 8

1 L monocytogenes 1/2а 1 6400 1 3200 1 6400 Специфическая агглютинация отсутствует

2 L monocytogenes 1/2в 1 3200 1 3200 1 6400

3 L monocytogenes За 1 3200 1 3200 1 6400

4 L monocytogenes 4а 1 3200 1 6400 1 6400

5 L monocytogenes 4в 1 3200 1 3200 1 6400

6 L monocytogenes 5 1 3200 1 6400 1 3200

7 L monocytogenes 7 1 6400 1 6400 1 6400

8 Campylobacter jquni 1/NCTC Специфическая агглютинация отсутствует 1 6400 1 3200 1 6400

9 С leium 33291 1 3200 1 6400 1 6400

10 С coli 602 1 3200 1 3200 1 3200

11 С fetus 322 1 3200 1 3200 1 3200

12-14 Yersinia enterocolitica 178,64,383(9) Специфическая агглютинация отсутствует

15-17 Shigella dusenteriae 1954, Sh flexnen 1250, Sh. Sonnei 396

1В Vibrio cholerae eltor 5695, Ogawa

19 V cholerae cholerae M-143, Ogawa

20-21 Salmonella typhi 818,4446

22-23 Staphylococcus epidermidis, Staph ACCT 25923

24 Salmonella typhimurium 25M

25 Salm typhiabdominalis 7407

26-27 Escherichia coli 010,011

28-33 Yersinia pseudotuberculosis 1-6 серотипы

красителями реакция становится наиболее наглядной Нами разработана био-

технология изготовления полигрупповых диагностикумов цветных листериоз-

ного и кампилобактериозного для реакции агглютинации Из 12 испытанных красителей (малахитовый зеленый, бромкрезоловый синий, бромфеноловый синий, метилен виолет, фуксин кислый, фуксин основной, кристалл виолет, феноловый красный, тиомин синий, трепан синий, метилен синий, бриллиантовый зеленый) наиболее пригодным оказался бромфеноловый синий Диагно-стикумы, окрашенные этим красителем, выявляли агглютинины в полигрупповых сыворотках для РА в разведении 1 1600 - 1 3200, при этом оптимальная концентрация микробной взвеси в нем - ЗхЮ9 м к /мл (таблица 3)

При изучении специфичности использовали коммерческие агглютинирующие сыворотки сальмонеллезную поливалентную основных (АВСДЕ) групп, туляремийную агглютинирующую сухую, холерную «О», шигеллезную дизентерийную поливалетную, бруцеллезную поливалентную

Таблица 3. Результаты объемной реакции агглютинации цветных диагностикумов в зависимости от использованного красителя

м» п/п Наименование красителя Разведения полигрупповых аг ной и качпилобакте пютинирующих шстериоз-риозной сывороток

1 100 1 200 1 400 1 800 1 1600 1 3200

1 Малахитовый зеленый 3+ отр отр отр отр отр

2 Бромкрезоловый пурпурный 4+ 4+ отр отр отр отр

3 Ф\ксин основной 4+ 4+ 4+ 2+ отр отр

4 Бриллиантовый зеленый 3+ 3+ 3+ отр отр отр

5 Бромфеноловый синий 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 2+

6 Метилен виолет 2+ 2+ отр отр отр отр

7 Ф\ксин кислый 4+ 4+ 4+ 3+ отр отр

8 Кристалл виолет 4+ 4+ 2+ отр отр отр

9 Феноловый красный 4+ 2+ отр отр отр отр

10 Тиомин синий 4+ 3+ 3+ 3+ отр отр

11 Трепан синий 4+ 4+ 4+ отр отр отр

12 Метилен синий 4+ 4+ 4+ отр отр отр

Со всеми перечисленными сыворотками реакция агглютинации была отрицательная

растворимых антигенов листерий и кампилобактерий мы сочли целесообразным использовать режим ультразвуковой дезинтеграции микробных клеток в сочетании с водно-солевой экстракцией и последующим осаждением белка (Афанасьев Е Н , 1984) Экстракция осадка 5% раствором хлористого натрия и выделение второго супернатанта позволяют в максимальной степени извлечь антигены из бактериальной массы, а фракционирование антигенов из суперна-тантов сульфатом аммония, помимо концентрирования и очистки, приводит к стабилизации белков (рисунок 1)

В связи с тем, что у всех серотипов кампилобактерий имеется общий белковый антиген, содержащийся в жгутиках, а одним из важнейших поверхностных антигенов является кислоторастворимая белковая фракция (Ющук Н Д, Венгеров Ю Я , 1999), дополнительно в вышеназванную схему при получении кампилобактериозного полигруппового антигена мы ввели этап экстрагирования раствором соляной кислоты При этом антигеный комплекс изолировали из биомасс кампилобактерий подвидов jejuni, coli, fetus

Полигрупповые антигены иммобилизовали на поверхности эритроцитов барана, формализованных по методу М ИЛеви с соавт (1962), при этом активацию их поверхности проводили 2 % раствором вторичного апкилсульфата натрия Оптимальная нагрузка лигандов равнялась 1 ООО мкг/мл по белку при следующих условиях конъюгации концентрация эритроцитов -20 %, температура их связывания с сенситином - 45°С, pH раствора - 5,0 в течение (18 ±2) часов

При контроле полученных серий эритроцитарных антигенных листери-озного и кампилобактериозного диагностикумов титры специфических антител в РИГА выявлялись в разведениях 1 5120 - 1 10240 При изучении специфичности на коммерческих агглютинирующих сыворотках перекрестных реакций не наблюдалось

Конструирование листериозных и кампилобактериозных полигрупповых иммуноглобулиновых флуоресцирующих и иммунопероксидазных коньюгатов.

Для экспресс-индикации возбудителей кампилобактериоза и листериоза нами изготовлены полигрупповые флуоресцирующие и иммунопероксидазные конъюгаты При их получении было необходимо иметь высококачественное сырье - высокоспецифичную и высокоактивную гипериммунную сыворотку

Рисунок 1. Схема получения полигрупповых антигенных комплексов

С учетом накопленного опыта и теоретических предпосылок ранее мы предложили и экспериментально обосновали схему иммунизации животных-продуцентов гипериммунных сывороток антигенный материал пятикратно вводили внутривенно, одновременно внутримышечно в качестве иммуномоду-лятора инъецировали тималин, в третью инъекцию дополнительно вводили внутримышечно циклофосфан (Ы1- бис/р-хлорэтил)- 1Ч'-0-триметиловый эфир диамида фосфорной кислоты) (таблица 4)

Таблица 4. Схема иммунизации кроликов с применением иммуномодуля-торов тималина и циклофосфана

№ инъекции Интервал между инъекциями сутки Количество вводимого антигена, мкг Способ введения антигена Иммуномодуляторы

Тималин Циклофосфан

Листе-риозный Кампи-лобакте риозный Доза, мг Способ введения Доза, мг Способ введения

1 - 1000 1000 в/в 5 в/м - -

2 6-7 1250 1250 в/в 5 в/м - -

3 6-7 1500 1500 в/в 5 в/м 100 в//м

4 6-7 1750 1750 в/в 5 в/м - -

5 6-7 2000 2000 в/в 5 в/м - -

Использование в качестве иммуномодулятора тималина способствует значительному повышению титров специфических сывороток антител за счет увеличения числа антителообразующих клеток в результате стимуляции функции макрофагов и хелперных Т-кпеток Циклофосфан, являясь классическим имму-носупрессором, также активизирует макрофаги, стимулируя фагоцитарную, цитотоксическую и супрессивную (в отношении главным образом Т- лимфоцитов) функции (Лазарева ДН, Алехин ЕК, 1985) Такая избирательность в действии иммуностимулятора, с одной стороны, и определенная селективность в действии иммуносупрессора - с другой, служат оптимальной комбинацией препаратов обеих групп и режимов их использования для активации одних механизмов иммунитета и выключения других

При данном способе продолжительность цикла иммунизации составляла 31-35 дней, расход антигенного материала - 7550 мкг на одного кролика Титры специфических антител в сыворотках животных-продуцентов при определении в РИД достигали показателей 1 15,4 ± 1, 25 - 1 28,8 ± 2,5, а в НРИФ - не ниже 1 13926,4 ± 1372,16

Такие характеристики соответствовали требованиям оценки сырья для производства иммунобиологических препаратов Материалы защищены патен-

том РФ на изобретение № 2135210 «Способ получения диагностической сыворотки» (Бюл №24 от 27 08 99)

Дальнейшее проведение исследований позволило нам предложить новую схему гипериммунизации кроликов с одним иммунокорректором - тимогеном, при этом удалось значительно снизить антигенную нагрузку при иммунизации

Применение тимогена сопровождается мобилизацией регуляторных и эффек-торных механизмов адаптации организма к воздействию ксенобиотических факторов Эффекты препарата на клеточном уровне включают в себя специфическое связывание с мембраной лимфоцитов, активацию систем вторичных посредников и регуляцию функционального состояния лимфоидных клеток через цАМР-зависимые протеикиназы Важно отметить, что доза тимогена, при которой наблюдается усиление процессов дифференцировки лимфоидных клеток и экспрессия рецепторов на лимфоцитах, в 10-1000 раз меньше, чем в природных препаратах вилочковой железы, в том числе и тималина (Хавинсон В X, Морозов В Г, 1982, Демидов С В , Костромин А П, Чернушенко Е Ф и др, 1990, Морозов В Г, 1990)

Схема иммунизации состояла из следующих манипуляций кроликам-продуцентам вводили внутривенно каждые пять дней водорастворимые полигрупповые антигенные комплексы листерий и кампилобактерий в увеличивающихся дозах В эти же сроки внутримышечно инъецировали по 10 мкг тимогена На 7-10 день после последнего введения иммуногена животных кровопускали (таблица 5)

Активность гипериммунных сывороток, полученных по этой схеме, в РИД составляла 1 28,8 ±2,5-1 53,3 ± 5,01, в НРИФ - 1 13926,4 ± 1372,16 - 1 24576 ±2744,32

Таблица 5. Схема иммунизации кроликов с применением тимогена

№ инъекции Интервал между инъекциями, сутки Количество вводимого антигена, мкг Способ введения антигена Тимоген

Листериозный Кампило-бактериоз-ный Доза, мкг Способ введения

1 - 30 30 в/в 10 в/м

2 5 60 60 в/в 10 в/м

3 5 120 120 в/в 10 в/м

4 5 240 240 в/в 10 в/м

Благодаря применению иммунокорректора тимогена, обладающему полифункциональным действием, значительно сокращены дозировки вводимого антигенного материала (с 7550 мкг до 450 мкг), иммунокорректора - в 500 раз, длительность процесса иммунизации с 35 дней до 22 дней, при этом повышен

выход целевого продукта за счет увеличения антителообразования у животных-продуцентов с одновременным уменьшением трудозатрат

При сравнительном анализе методов выделения специфических иммуноглобулинов класса G (сульфатом аммония, каприловой кислотой, полиэти-ленгликолем - 6000) и дальнейшей их метке флуорохромом и ферментом оказалось, что наиболее активные флуоресцирующие конъюгаты были получены при использовании IgG, выделенные каприловой кислотой, а энзиммеченные -IgG - полиэтиленгликолем При этом для повышения специфичности листери-озных полигрупповых иммуноглобулиновых конъюгатов были использованы F(aB)2 - фрагменты, выделенные из соответствующих IgG ферментативным гидролизом в кислой среде Разработанные биотехнологии позволили получать высокоактивные, чувствительные и специфичные диагностические препараты, отвечающие ОМБТ, предъявляемым к подобным диагностикумам

Разработка тест-систем магноиммуносорбентных для экспресс-диагностики кампилобактериоза и листериоза в иммуноферментном анализе и количественной реакции иммунофлуоресценции

Эффективность ряда методов индикации и выделения возбудителей инфекционных заболеваний и их антигенов может быть значительно увеличена после предварительного концентрирования микробов и антигенов с отделением их от контаминирующей микрофлоры и примесей Эта цель может быть достигнута путем применения методов иммуносорбции, особое место среди которых занимают методы с использованием сорбентов с магнитными свойствами Магноиммуносор-бенты служат в качестве твердой фазы для селективного концентрирования на их поверхности патогенов (Брыкалов АВ, Жарникова ИВ, 1995, Тюменцева ИС, 1996, Ефременко В И, 1996, Афанасьев Е Н, 2000, Yu Н, 1998, Jaykus Lee, 2000)

Нами впервые разработаны кампилобактериозные и листериозные магноиммуносорбенты на основе органокремнезема - алюмосиликата, модифицирование поверхности которого осуществляли в присутствии полимера - дек-страна и поверхностно-активного вещества - вторичного алкилсульфата натрия Для придания сорбенту магнитных свойств в его состав вводили оксид железа Для оптимизации структурных характеристик МС проведены исследования по варьированию состава компонентов синтеза (алюмосиликат, полиглю-кин, F2O3), а также изучено влияние времени гелеобразования и рН среды на величину удельной поверхности сорбента, объем и размер пор (таблица 6)

Таблица 6. Структурные характеристики МС в зависимости от количества Ре2Оз и времени гелеобразования

Массовое соотношение компонентов синтеза Время гелеобразования, ч Удельная поверхность, м2/г Объем пор, см3/г Радиус пор, им

А1 - БЮг декстран Ре20з

2,5 2,5 0,5 2 25,6±0,5 1,23±0,08 95,3±0,08

8 27,6±0,49 1,23±0,008 93,3±0,06

2,5 2,5 1,0 2 24,8±0,64 1,23±0,005 97,6±0,49

8 28,5±0,51 1,23±0,007 95,7±0,12

2,5 2,5 1,5 2 24,3±0,48 1,21 ±0,008 101,6±0,12

8 31,5±0,74 1,22±0,006 99,6±0,1

2,5 2,5 2,0 2 22,6±0,49 1,21±0,006 105Д±0,06

8 32,3±0,25 1,21 ±0,003 99,7±0,08

2,5 2,5 2,5 2 18,5±0,51 1,19±0,008 126,4±0,1

8 33,8±0,15 1,19±0,008 101,7±0,1

2,5 2,5 5,0 2 17,5±0,51 1,18±0,009 132,3±0,1

8 34,6±0,25 1,18±0,01 103Д±0,08

На основе проведенных исследований рекомендованы следующие оптимальные условия получения алюмосиликатных МС соотношение компонентов синтеза

1 1 2, соответственно алюмосиликат, декстран, Р203, время гелеобразования -

2 часа, рН гелеобразования - 7,0 Исследование удельной поверхности показало, что сорбент, не содержащий в своем составе Р203, имеет удельную поверхность - 58 м2/г, объем пор - 1,70 см3/г, радиус - 42,5 нм Введение оксида железа в структуру кремнеземного сорбента изменяет его структурные характеристики удельная поверхность имеет значение 18 м2/г, объем пор - 1,19 см3/г, радиус пор - 132,2 нм

Аффинность сорбенту придавали белковые специфические лиганды, которыми при конструировании кампилобактериозных МИС служили иммуноглобулины из гипериммунных полигрупповых сывороток, выделенные полиэти-ленгликолем, а для листериозных МИС - Р(аЬ)2 - фрагменты иммуноглобулинов листериозных

Исследования показали, что концентрация белка лигандов 2,5-3 мг/мл является оптимальной для полного насыщения сорбента в объеме 0,4 мл 10 % взвеси МИС При использовании белка с концентрацией больше 2,5 мг/мл адсорбционная емкость МИС снижалась При изучении кинетики процесса иммобилизации и оценке связывания белковых лигандов с сорбентом установлено, что для полного насыщения МС белком достаточно 2 часов при значении рН раствора белка 6-7 и температуре от 22 до 37°С Полученные магно-иммуносорбенты характеризуются стандартностью структурных характеристик, механической, химической, микробиологической устойчивостью, не подвержены набуханию Принципиальная схема получения МИС представлена на рисунке 2

Способность магноиммуносорбентов прочно (на уровне реакций антиген-антитело) фиксировать не своей поверхности искомый патоген дает возможность исследовать широкий диапазон проб, в том числе и сильно загрязненных, и их объемов (от нескольких микролитров до многих кубических метров жидкости), осуществлять тщательную промывку проб от загрязнений, мешающих проведению индикационных реакций, тем самым повышая достоверность как положительных, так и отрицательных результатов

Рисунок 2. Принципиальная схема получения МИС

Все разработанные нами МИБП, а также биологическое сырье для их производства нуждались в стабилизации исходных свойств В настоящее время наилучшим методом для сохранения свойств биополимеров является лиофиль-ное высушивание препаратов В связи с тем, что названные выше диагностические препараты и сырье для них имеют свой порог биодеградации, необходимо было отработать единый, оптимальный, экономичный режим их высушивания При сублимации мы использовали различные криозащитные среды, подобранные нами для каждого биообъекта Сублимацию проводили на установке для сублимационной сушки (Ъ2-9С или ТС -5) с использованием двух режимов «умеренного» (длительность удаления свободной воды - (12,5±1) час, связанной влаги - (10,5±1) час, конечная температура подогрева - (25±1) °С) и «жесткого» (длительность периода сублимации и изотермического отторжения влаги в течение 6 часов с подогревом материала до (45 ±2,5 )°С, общая длительность процесса сушки - 16 часов) После лиофилизации «умеренным» и «жестким» режимами, а также через 5 лет хранения (срок наблюдения) показатели контроля специфической активности и чувствительности всех медицинских иммунобиологических препаратов, разработанных нами, а также биологического сырья для их производства оставались на уровне исходных Результаты этих экспериментов позволяют рекомендовать довольно жесткий экономичный режим сублимации при производстве диагностических препаратов

В итоге проведенных исследований составлена принципиальная схема производства, которая складывается из последовательных стадий и операций, характерных для каждого конкретного препарата, определены критические контрольные точки на этапах производства (рисунок 3)

Диагностическую ценность разработанных нами МИБП подтвердили многочисленные лабораторные и полевые испытания Так, например, возбудители кампилобактериоза (К) и листериоза (Л) были выделены от 6,7% и 3,8% больных с диагнозом ОКИ соответственно Наличие этих возбудителей определены в 14,1% (К) и 19,7 % (Л) пищевых продуктов, 56,7 % (К) и 6,7 % (Л) смывов с рук ветеринарных работников, 9 % (К) и 12,5% (Л) проб почвы, 25 % (К) и 24,3 % (Л) проб воды, 23,3 % (К) и 16,7 % (Л) у диких птиц, 1,3 % (К) и 15 % (Л) у грызунов Результаты бактериологических и серологических исследований материала от людей, животных, домашних и диких птиц, грызунов, пищевых продуктов, воды водоемов, сточных вод, почвы и других объектов показали многообразие резервуаров и источников листериозной и кампилобакгериозной

Рисунок 3. Алгоритм процесса производства и контроля различных иммунобиологических диагностических препаратов

Обозначения К-К5 - критические контрольные точки К- входной контроль К| - контроль чистоты культуры К> -контроль специфичной стерильности К3 - количественный контроль 1С» - контроль специфичности К5 - контроль специфической активности и чувствительности В - внутренний контроль ОБТК -контроль, производимый отделом биологического и технологического контроля предприятия

инфекций и свидетельствуют о широком распространении Campylobfcter jejuni и L mjnocytogenes и о совпадающих путях циркуляции и передачи этих возбудителей (рисунок 4)

Дикие животные, грызуны, хищные парнокопытные

Почва

Овощехранилища

Переработка продуктов животноводства и птицеводства

Вода Стоячие Реки Море

питьевая водоемы (океан)

Хладокомбинаты холодильники

Человек

Речные и морские продукты

\ < г

Продукты (молоко

сыр, масло, птица и

тд)

Человек

Рисунок 4. Схема циркуляции возбудителей листериоза и кампилобак-териоза во внешней среде и пути заражения человека и животных

Таким образом, нами создан алгоритм технологического процесса производства диагностических препаратов для индикации и идентификации возбудителей кампилобактериоза и листериоза, который в дальнейшем позволит унифицировать схему лабораторной диагностики этих инфекций

ВЫВОДЫ

1 Разработаны транспортная, селективные и накопительные питательные среды для возбудителей кампипобактериоза и листериоза

2 Определены методические приемы и их последовательность для извлечения специфических антигенов белковой природы из микробных масс возбудителей кампилобактериоза и листериоза для использования их при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов

3 Разработаны эффективные производственные схемы получения полигрупповых кампилобактриозных и листериозных иммунных сывороток с использованием иммунокорректора - тимогена и проведена сравнительная оценка методов выделения из них иммуноглобулинов для дальнейшего их применения в качестве биологического сырья при производстве иммубиологических препаратов

4 Определены оптимальные параметры биотехнологии производства им-муноферментных и иммунофлуоресцентных кампилобактериозных и листериозных иммуноглобулиновых конъюгатов

5 Впервые сконструированы кампилобактериозные и листериозные магно-иммуносорбентные тест - системы для иммуноферментного и количественного иммунофлуоресцентного анализов, позволяющие исследовать пробы из внешней среды с высокой степенью загрязнения неограниченного объема, низкой концентрацией патогена, с чувствительностью в 1000 и более раз превышающей традиционные, что значительно повышает достоверность как положительных, так и отрицательных результатов Применение магнитоуправляемых твердофазных аффинных сорбентов позволило повысить выявляемость возбудителей кампилобактериоза и листериоза в объектах внешней среды на 9,4 - 11,8 %

6 Определены оптимальные параметры лиофильного высушивания МИБП и биологического сырья для их производства при сокращении времени сублимации с 24 до 16 часов, позволяющие одномоментно лиофилизировать биополимеры с различными характеристиками при сохранении их исходных свойств

7 Лабораторные, клинические и полевые испытания разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП показали их высокую специфичность, чувствительность, экспрессность, информативность, что в совокупности повышает эффективность лабораторной диагностики и свидетельствует о перспективности их использования в лабораториях практического здравоохранения

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Тюменцева, И С Способ получения диагностической сыворотки / И С Тюменцева, А Е Афанасьев, В И Ефременко, И А Базиков, Е В Алиева //Патент на изобретение №2135210 Зарегестрировано в Гос Реестре изобретение РФ 27 августа 1999 г Бюл № 24 от 27 08 1999

2 Алиева, Е В Проблемы листериоза на территории Ставропольского края /ЕВ Алиева, Т И Егшатян // Сборник научных трудов Здоровье (проблемы теории и практики) УДК 61 157 7 (3) ISBN - 5 - 89822 -029 - 1 Ставрополь,2001, с 472-473

3 Егшатян, Т И Циркуляция возбудителя листериоза в экологической системе /Т И Егшатян, Е Н Афанасьев, И С Тюменцева, Е В Алиева //Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт - Ставрополь, 2001 -7с Депонировано в ВИНИТИ 07 01 № 1668-В2001

4 Егшатян, Т И Биотехнология приготовления эритроцитарного, антигенного, листериозного диагностикума / Т И Егшатян, Е В Жданова И С Тюменцева, Е Н Афанасьев, Е В Алиева // Проблемы биологии и химии на Северном Кавказе Материалы научной конференции посвященной 70-летию биолого-химического факультета СГУ Ставрополь, 2001 -С 39

5 Алиева, Е В Некоторые аспекты современного состояния эпидемиологии и лабораторной диагностики кампилобактериоза /ЕВ Алиева // Материалы научной конференции Ставропольской государственной медицинской академии Ставрополь, 2002 - С 135-136

6 Алиева, Е В Магнитоуправляемая тест-система при диагностике листериоза /Е В Алиева // Известия высших учебных заведений СевероКавказский регион Естественные науки Приложение - №2(2) - Ростов-н/Д, 2003 -С 43-45

7 Алиева, Е В Опыт применения новых препаратов для экспресс-индикации возбудителей кишечных инфекций в условиях чрезвычайных ситуаций/ЕВ Алиева //ЖМЭИ -2003 -Приложение - С 86-88

8 Алиева, Е В Технология получения Fab-фрагментов IgG из полигрупповых листериозных сывороток /Е В Алиева // Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России Материалы международной научно-практической конференции (22-24октября,2003 г)-Ставрополь-Пятигорск,2003 - 4 1 -С 21-24

9 Алиева, Е В Основные причины возникновения острых кишечных инфекций на территории Ставропольского края /Е В Алиева, Е В Гурнович //11 итоговая (межвузовская) конференция студентов и молодых ученых - Ставрополь, 2003, С 278-279

10 Афанасьев, Е Н Л истериоз и некоторые аспекты распространения и диагностики / Е Н Афанасьев, И С Тюменцева, Е В Алиева, Т И Егшатян // Вестник ветеренарии - Ставрополь, 2003 - №3 С 4-7

11 Жарникова, И В Магноиммуносорбентные методы диагностики / И В Жарникова, Е В Алиева, М Н Касторная // Известия высших учебных заведений Северо-Кавказский регион Естественные науки - Приложение - №2(2) - Ростов-н/Д, 2003 С 51-53

12 Алиева, Е В Кампилобактериоз Лабораторная диагностика (Обзор литературы) /ЕВ Алиева // Ставрополь, 2004 - Деп в ВИНИТИ 15 07 2004, № 1227 -В2004

13 Алиева, Е В Разработка кампилобактериозных аффинных магно-сорбентов для обследования объектов внешней среды /Е В Алиева // Вестник СГУ Вып 42 - Ставрополь, 2005 -С 163-166

14 Алиева Е В Совершенствование методов экспресс-диагностики кампилобактериоза /Е В Алиева // Материалы научно-практической конференции «Опыт работы учреждений Роспотребнадзора в Ставропольском крае по обеспечению санэпидблагополучия и защите прав потребителей» 9-я ежегодная Неделя медицины Ставрополья Ставрополь, 2005 -С 180-183

15 Алиева, Е В Анализ заболеваемости и состояния лабораторной диагностики острых кишечных инфекций на территории Ставропольского края /Е В Алиева // Ставрополь, 2006 - 11 с - Деп в ВИНИТИ 21 08 2006, №1084 -В2006

16 Алиева, Е В Получение диагностикумов полигрупповых цветных листериозного и кампилобактериозного для реакции агглютинации / Е В Алиева, Е Н Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г, Оболенск, Московская обл) /Под ред Академика РАМН Г Г Онищенко, члена корреспондента РАМН В В Кутырева, доктора мед наук, профессора И А Дятлова -Протвино А - ПРИНТ ЗАО, 2006 - С 172-173

17 Алиева, Е В Получение диагностических поливалентных агглютинирующих сывороток /ЕВ Алиева, Е Н Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г, Оболенск, Московская обл ) /Под ред Академика РАМН Г Г Онищенко, члена корреспондента РАМН В В Кутырева, доктора мед наук, профессора И А Дятлова -Протвино А - ПРИНТ ЗАО, 2006 -С 171-172

18 Алиева, Е В Разработка биотехнологии приготовления эритро-цитарных листериозного и кампилобактериозного диагностикумов /Е В Алиева, Е Н Афанасьев // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г, Оболенск, Московская обл ) /Под ред Академика РАМН Г Г Онищенко, члена корреспондента РАМН В В Кутырева, доктора мед наук, профессора И А Дятлова -Протвино А - ПРИНТ ЗАО, 2006 -С 170-171

19 Алиева, ЕВ Экология возбудителей кампилобактериоза и листе-риоза / Е В Алиева, Е Н Афанасьев //Ставрополь, 2006 - 13 с - Деп в ВИНИТИ 09 11 2006 - № 1352 - В2006

20 Алиева, Е В Новое в диагностике кампилобактериоза и листериоза /ЕВ Алиева, Е Н Афанасьев, И С Тюменцева // Вестник Российской военно-медицинской академии -СПб,2006 -Приложение 1(15) - С221

21 Алиева, Е В Получение высокоактивных антигенных фракций из бакмасс возбудителя кампилобактериоза /Е В Алиева, И В Жарникова, Е В Жданова, И В Юркина, С А Курчева //Естествознание и гуманизм Сборник науч работ - Т 3, №1 - Томск, 2006 - С 86-87

22 Алиева, Е В Современное состояние изученности и лабораторной диагностики возбудителя листериоза (обзор литературы) / ЕВ Алиева, И В Ковальчук //Ставрополь, 2006 - 24 с Деп в ВИНИТИ, 09 11 2006 -№1351-В2006

23 Алиева, Е В Унификация и разработка тест-систем диагностических для мониторинга возбудителей бактериальной (кампилобактериоз, туляремия, лептоспироз) и вирусной (лихорадка Западного Нила) природы /Е В Алиева, А В Таран, Е Н Афанасьева, С А Курчева, Т В Жарникова, И С Тюменцева,

И В Самарина // Вестник Ставропольского государственного университета -Вып 47 - Ставрополь, 2006 - С 292-298

24 Алиева, Е В Острые кишечные инфекции на территории Ставропольского края /ЕВ Алиева, И В Ковальчук // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении и санитарная охрана территории государств-участников СНГ Материалы седьмой межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ (3-5-октября 2006 г, Оболенск, Московская обл )/Под ред Академика РАМН Г Г Онищенко, члена корреспондента РАМН В В Кутырева, доктора мед наук, профессора И А Дятлова -Протвино А - ПРИНТ ЗАО, 2006 - С 12-13

25 Алиева, Е В Конструирование и характеристика листериозных и кампилобактериозных полигрупповых иммуноглобулиновых конъюгатов /ЕВ Алиева, И С Тюменцева // Ставрополь, 2006 - 28 с - Деп в ВИНИТИ 21 08 2006, №1085 -В2006

26 Алиева, Е В Разработка биотехнологии получения листериозных и кампилобактериозных антигенных диагностических иммунобиологических препаратов /ЕВ Алиева, И С Тюменцева // Ставрополь, 2006 - 26 с - Деп в ВИНИТИ 21 08 2006, №1083 - В2006

27 Алиева, Е В Разработка и получение и получение питательных сред для культивирования кампилобактерий и листерий /ЕВ Алиева, И С Тюменцева //Ставрополь, 2006 - 14 с - Деп в ВИНИТИ №09 11 2006 -№1353 - В 2006

28 Алиева, Е В Питательные среды для культивирования кампилобактерий и листерий /ЕВ Алиева, И С Тюменцева, Е Н Афанасьев // Вестник Российской военно-медицинской академии - СПб, 2006 - Приложение 1(15) - С 482-483

29 Алиева, Е В Разработка схем иммунизации животных кампило-бактериозными и листериозными антигенами /ЕВ Алиева, И С Тюменцева, Е Н Афанасьев //Вестник Российской военно-медицинской академии - СПб , 2006 -Приложение 1(15) - С 192

30 Алиева, Е В Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза и листериоза /Е В Алиева, И С Тюменцева, И В Жарникова и др //Медицинский вестник Северного Кавказа - Ставрополь,2006 -№1 -С 12-14

31 Алиева, Е В Выделение кампилобактериозного водорастворимого антигенного комплекса белковой природы /Е В Алиева, И С Тюменцева, И В Жарникова // Холера и патогенные для человека вибрионы Сборник материалов проблемной комиссии Научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации - Вып № 19 -Ростов-на-Дону -2006 - С 89-91

32 Афанасьев, Е Н Кампилобактериоз и листериоз /Е Н Афанасьев, Е В Алиева, И В Ковальчук //Вестник Российской военно-медицинской академии -СПб, 2006 - Приложение 1(15) - С 483-485

33 Ефременко, Д В Способ проведения иммуноферментного анализа (ИФА) / Д В Ефременко, И В Жарникова, А А Ефременко, И В Гаркуша, Е В Жданова, И В Юркина, Е В Алиева, Е Е Афанасьева //Патент РФ на изобретение № 2290641, опубл 27 12 2006 Бюл №36 - 5 с

34 Жарникова, И В Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителя кампилобакте-риоза, лептоспироза /ИВ Жарникова, И С Тюменцева, Е В Алиева, А В Таран, Е В Жданова, И В Юркина //Медицинский вестник Северного Кавказа - Ставрополь, 2006 -С 12-14

35 Алиева, Е В Аффинные сорбенты для экспресс-диагностики различных заболеваний / ЕВ Алиева, И С Тюменцева, Е Н Афанасьев, Н Е Афанасьев, М П Лаврешин, Е Е Афанасьева, Т Н Орлова //Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье» -2008 -№1 -С 5-9

36 Алиева, Е В Опыт получения иммунных сывороток для производства диагностических препаратов / ЕВ Алиева, И С Тюменцева, Е Н Афанасьев, М П Лаврешин, Н Е Афанасьев, Е А Горобец, А А Семирчева // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье» - 2008 - №1 -С 10-13

37 Алиева, Е В Опыт применения твердофазных иммобилизованных систем с магнитными свойствами в экспрессных иммуноанализах некоторых заболеваний инфекционной и неинфекционной природы / ЕВ Алиева, И С Тюменцева, Е Н Афанасьева, М П Лаврешин, Е Н Афанасьев, Т Н Орлова // «Технологии живых систем» - 2008 - № 2-3 - том 5 -С 47-45

38 Алиева, Е В Проблема диагностики кишечных инфекций неясной этиологии и перспективы ее решения /Е В Алиева //Проблемы социальной гигиены, здравоохранения и истории медицины - 2008 - №4 - С 20-22

Набрано и сверстано в Ставропольстате Печать офсетная Бумага офсетная Формат 60x84/16 Физ печ л -2,1 Уел печ л - 1,97

Заказ - 25 Тираж - 100

Отпечатано в оперативной полиграфии отдела информации и региональной статистики Ставропольстата г Ставрополь, ул Пушкина,4

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Алиева, Елена Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. КИШЕЧНЫЕ ЗООАНТРОПОНОЗЫ:

КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ И ЛИСТЕРИОЗ -СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ (обзор литературы).

1.1. Кампилобактериоз и кампилобактерии.

1.2. Листериоз и листерии.

1.3. Экология кампилобактерий и листерий и пути их передачи.

1.4. Современное состояние лабораторной диагностики листериоза и кампилобактериоза и её особенности

1.5. Заболеваемость острыми кишечными инфекциями и листериозом на территории Ставропольского края.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Штаммы микроорганизмов, использованные в опытах.

2.2. Питательные среды.

2.3. Химические реактивы, использованные в опытах

2.4. Аппаратное оснащение исследований.

2.5. Объекты исследований.

2.6. Лабораторные животные, использованные в экспериментах

2.7. Методы контроля антигенов и сывороток.

2.8. Выделение иммуноглобулинов.

2.9. Получение и контроль иммунофлуоресцирующих конъюгатов.

2.10. Получение и контроль иммуноферментных конъюгатов.

2.11. Физико-химические методы.

2.12. Лиофилизация биологического материала.

2.13. Характеристика реагентов, используемых для получения магноиммуносорбентов.

2.14. Методы математической и статистической обработки материалов.

Глава 3. РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА

И ЛИСТЕРИОЗА.

Глава 4. РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИСТЕРИОЗНЫХ И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗНЫХ

ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ РЕАКЦИИ

АГГЛЮТИНАЦИИ (РА) И РЕАКЦИИ 83 ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РИГА)

4.1. Получение диагностических поливалентных агглютинирующих сывороток.

4.2. Получение диагностикумов полигрупповых цветных листериозного и кампилобактериозного для реакции агглютинации.

4.3. Разработка биотехнологии приготовления эрит-роцитарных листериозного и кампилобактериозного диагностикумов.

Глава 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИСТЕРИОЗНЫХ И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗНЫХ ПОЛИГРУППОВЫХ ИММУ-НОГЛОБУЛИНОВЫХ КОНЪЮГАТОВ

5.1. Получение гипериммунных сывороток и специфических иммуноглобулинов.

5.2. Получение диагностических флуоресцирующих иммуноглобулинов.

5.3. Получение диагностических иммуноглобулинов для иммуноферментного анализа.

Глава 6. РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМ МАГНОИМ-МУНОСОРБЕНТНЫХ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА И ЛИСТЕРИОЗА В ИММУНОФЕРМЕНТ-НОМ АНАЛИЗЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ РЕАКЦИИИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

6.1. Разработка биотехнологии кампилобактериозных и листериозных магноиммуносорбентов.

6.2. Конструирование магноиммуносорбентных тест-систем для ИФА.

6.3. Разработка метода селективного концентрирования возбудителей кампилобактериоза и ли стервоза на магноиммуносорбенте с последующей постановкой количественного иммунофлуоресцент-ного анализа (КИФА).

Глава 7. СТАБИЛИЗАЦИЯ СВОЙСТВ БИОЛОГИЧЕСКОГО СЫРЬЯ И ИММУНОГЛОБУЛИНО-ВЫХ ПРЕПАРАТОВ. РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СЫРЬЯ И ГОТОВОЙ ПРОДУКЦИИ. ИЗУЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ МИБП

7.1. Сублимация «.Иммунобиологических препаратов и биологического сырья для их производства

7.2. Разработка системы контроля качества сырья и готовой продукции при производстве МИБП.

7.3. Изучение диагностической ценности сконструированных МИБП.^.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза"

Актуальность проблемы. Структура инфекционной патологии человека за последние десятилетия претерпела существенные изменения, обусловленные как открытием целого ряда неизвестных ранее инфекционных агентов (возбудители ВИЧ-инфекции; гепатитов В, С и Д; геморрагических и арбовирусных лихорадок; легионеллеза и т.д.), так и изменением роли и удельного веса хорошо известных возбудителей. Ко второй группе наряду с возбудителями туберкулеза, условно патогенными бактериями широкого спектра, вызывающими гнойно-септические заболевания и пневмонии, в полной мере можно отнести кампилобактерии и листерии (Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А., 2002; Покровский В.И. и др., 2004). Хотя упомянутые микроорганизмы давно известны, в последние годы заметно расширился удельный вес вызываемых ими инфекций, равно как и спектр их клинических проявлений.

Кампилобактериоз (вибриоз) — инфекционная болезнь животных и человека, вызываемая патогенными микроорганизмами рода Campylobacter, которые интенсивно циркулируют во внешней среде (вода, домашние и дикие животные). Анализ данных литературы показывает, что кампилобактериоз довольно широко распространен на всех континентах и во многих странах мира. Вследствие довольно широкого географического распространения, циркуляции среди животных и людей, у которых, это заболевание протекает, чаще всего как ток-сикоинфекция, кампилобактериоз приобретает существенное социально-экономическое значение.

Листериоз относится к числу природно-очаговых инфекций. Возбудителем листериоза является грамположительная аспорогенная бактерия Listeria monocytogenes. Листериоз у людей проявляется спорадически, но также описаны многочисленные вспышки пищевого листериоза и внутрпбольничные заболевания в родильных домах. Заражение в основном происходит при употреблении в пищу инфицированных продуктов животного и растительного происхождения.

Анализ состояния лабораторной диагностики как кампилобактериоза, так и листериоза позволяет предположить, что зарегистрированный уровень заболеваемости представляет лишь «вершину айсберга» и при совершенствовании организационных и методических вопросов лабораторной диагностики число зарегистрированных больных может значительно возрасти.

Ранняя лабораторная диагностика, т.е. своевременное выявление источника инфекции занимают основное место в системе противоинфекционных мероприятий. Современная микробиология характеризуется развитием диагностических технологий, основанных на глубоких фундаментальных знаниях биологии микроорганизмов и передовых инженерно-технических решениях задач автоматизации и повышения эффективности анализа (Онищенко Г.Г. с соавт., 2003). В связи с этим возникает необходимость в совершенствовании имеющихся иммунобиологических методов, создании новых экспресс-методов диагностики и индикации, направленных на сокращение времени проведения анализа, его упрощение при одновременном увеличении надежности и легкости интерпретации полученных результатов при высокой чувствительности и специфичности.

Основные задачи исследования:

1. Разработать транспортную, селективные и накопительные питательные среды для возбудителей кампилобактериоза и листериоза.

2. Подобрать эффективный метод извлечения специфических антигенов белковой природы из микробных масс возбудителей кампилобактериоза и лис-териоза для использования их при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов.

3. Разработать производственные схемы получения иммунных сывороток с высокими титрами агглютининов и преципитинов и провести сравнительную оценку методов выделения из них иммуноглобулинов для дальнейшего их применения в качестве биологического сырья при производстве иммунобиологических препаратов.

4. Определить оптимальные параметры биотехнологии производства им-муноферментных и иммунофлуоресцентных кампилобактериозных и листери-озных иммуноглобулиновых конъюгатов.

5. Разработать биотехнологию аффинных сорбентов с магнитными свойствами и на их основе создать тест-системы магноиммуносорбентные, а также методики их применения в экспресс-методах лабораторного анализа.

6. Определить параметры единого режима сублимации биополимеров (биологического сырья и МИБП) с целью сохранения их исходных свойств.

7. Оценить эффективность применения разработанных диагностикумов на экспериментальном, клиническом и полевом материале.

Разработаны новые, высокоэффективные схемы иммунизации кроликов для получения специфических агглютинирующих и гипериммунных сывороток с высокими титрами.

Впервые осуществлена научно-методическая разработка биотехнологии производства кампилобактериозных и листериозных микрогранулированных органокремнеземных иммуносорбентов с магнитными свойствами, обладающих высокой сорбционной емкостью, стабильностью, чувствительностью, специфичностью.

Материалы выполненных исследований легли в основу двух патентов РФ на изобретение № 2135210 от 27.08.1999 г. «Способ получения диагностической сыворотки»; № 2290641 от 27.12.2006 г. «Способ проведения иммуноферментного анализа (ИФА)». •

Практическая значимость работы. !

Разработаны накопительные питательные среды с соответствующими добавками для наращивания биомасс кампилобактерий и листерий.

Подобраны эффективные методы и приемы по извлечению антигенного материала, получению иммунных сывороток и выделению иммуноглобулинов.

Оптимизация параметров конъюгации лигандов и маркеров позволили унифицировать биотехнологию производства ряда МИБП для экспресс-диагностики кампилобактериоза и листериоза, индикации их возбудителей (эритроцитарные, иммуноферментные, иммунофлуоресцентные), стабильно отвечающие общим медико-биологическим требованиям (ОМБТ), предъявляемым к индикационным препаратам.

Разработан единый ускоренный экономичный режим стабилизации биологического сырья и МИБП методом сублимации, позволяющий сохранять их исходные свойства длительное время.

Таким образом, создан алгоритм технологического процесса получения диагностических препаратов для индикации и идентификации возбудителей кампилобактериоза и листериоза, включающий в себя все этапы производства: от накопления биомассы на питательной среде до стабилизации полученных диагностических препаратов методом сублимационной сушки.

Внедрение результатов в практику.

Методики применения разработанных кампилобактериозных и листериоз-ных МИБП изложены в «Методических рекомендациях по лабораторной диагностике листериоза у людей»; «Методических рекомендациях по лабораторной диагностике кампилобактериоза у людей»; «Методических рекомендациях «Магноиммуносорбенты в микробиологических и клинических исследованиях».

На диагностикумы листериозные эритроцитарные, флуоресцирующие, магноимму носорбентные кампилобактериозные и листериозные для ИФА и КИФА составлена первичная нормативная документация (регламенты производства, фармакопейные статьи предприятия, инструкции по применению), прошедшая экспертизу в ОБТК СтавНИПЧИ, одобренная Ученым советом (протоколы № 2 от 28.02.2002 г.; №6 от 26.06.2003 г.; № 2 от 28.02.2007 г.) и утвержденная директором института.

Материалы диссертации используются в лекциях и практических занятиях на курсах первичной специализации и повышения квалификации врачей по особо опасным инфекциям при СтавНИПЧИ, семинарах для практических врачей и научных работников МЗ РФ по экспресс-диагностике инфекционных заболеваний и применению магноиммуносорбентных препаратов в мониторинге инфекционных агентов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Предложены научно-методические подходы к получению питательных сред и биологического сырья (антигенов и антител) для производства кампилобактериозных и листериозных МИБП, которые дают возможность повысить их качество.

2. Разработаны методические приемы конструирования эритроцитар-ных, иммуноферментных, иммунофлуоресцентных диагностикумов, обеспечивающие высокую эффективность обнаружения антигенов кампилобактерий и листерий и антител к ним.

3. Создана биотехнология изготовления кампилобактериозных и листериозных твердофазных микрогранулированных композиционных аффинных органоминеральных магноиммуносорбентов; тест-системы магноиммуносор-бентные для экспрессных методов иммуноанализа (ИФА, КИФА) позволяют максимально концентрировать патоген в исследуемом материале, что дает возможность повысить разрешающуюся способность экспересс-методов.

4. Результаты практического применения разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП, демонстрирующие повышение эффективности лабораторных исследований клинического и полевого материала.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на научной конференции «Проблемы биологии и химии на Северном Кавказе», посвященной 70-летию биолого-химического факультета СГУ (Ставрополь, 2001); научной конференции Ставропольской медицинской академии (Ставрополь, 2002); 11-ой итоговой межвузовской конференции студентов и молодых ученых (Ставрополь, 2003); международной научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации Юга России», 21-24 октября 2003 г. (Ставрополь-Пятигорск); научно-практической конференции «Опыт работы учреждений Роспотребнадзора в Ставропольском крае по обеспечению санэпидблагополучия и защите прав потребителей (Ставрополь, 2005); на Проблемной комиссии Научного Совета по санитарно-эпидемиологической охране территории России (Ростов-на-Дону, 2006); II съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил

Российской Федерации на базе Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова 15-17 ноября 2006 г. (Санкт-Петербург).

Основное содержание диссертации, выполненной в рамках 3 НИР, отражено в опубликованных работах -38 (в ведущих научных журналах, рекомендуемых ВАК — 9 статей, депонированных — 8, 2 патентах РФ на изобретение, в материалах Международных, Всероссийских научных конференций - 19 публикаций), а также в 3 методических рекомендациях и 4 нормативных документах (регламентах производства, фармакопейных статьях предприятия).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Алиева, Елена Васильевна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны транспортная, селективные и накопительные питательные среды для возбудителей кампилобактериоза и листериоза.

2. Определены методические приемы и их последовательность для извлечения специфических антигенов белковой природы из микробных масс возбудителей кампилобактериоза и листериоза для использования их при конструировании медицинских иммунобиологических препаратов.

3. Разработаны эффективные производственные схемы получения полигрупповых кампилобактриозных и листериозных иммунных сывороток с использованием иммунокорректора - тимогена и проведена сравнительная оценка методов выделения из них иммуноглобулинов для дальнейшего их применения в качестве биологического сырья при производстве иммубиоло-гических препаратов.

4. Определены оптимальные параметры биотехнологии производства иммуноферментных и иммунофлуоресцентных кампилобактериозных и листериозных иммуноглобулиновых коныогатов.

5. Впервые сконструированы кампилобактериозные и листериозные магноиммуносорбентные тест - системы для иммуноферментного и количественного иммунофлуоресцентного анализов, позволяющие исследовать пробы из внешней среды с высокой степенью загрязнения неограниченного объема, низкой концентрацией патогена, с чувствительностью в 1000 и более раз превышающей традиционные, что значительно повышает достоверность как положительных, так и отрицательных результатов. Применение магнито-управляемых твердофазных аффинных сорбентов позволило повысить выяв-ляемость возбудителей кампилобактериоза и листериоза в объектах внешней среды на 9,4 - 11,8 %.

6. Определены оптимальные параметры лиофильного высушивания МИБП и биологического сырья для их производства при сокращении времени сублимации с 24 до 16 часов, позволяющие одномоментно лиофилизировать биополимеры с различными характеристиками при сохранении их исходных свойств.

7. Лабораторные, клинические и полевые испытания разработанных кампилобактериозных и листериозных МИБП показали их высокую специфичность, чувствительность, экспрессность, информативность, что в совокупности повышает эффективность лабораторной диагностики и свидетельствует о перспективности их использования в лабораториях практического здравоохранения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Существенный прогресс в области лабораторной и клинической диагностики, с одной стороны, с другой стороны - антропогенная трансформация внешней среды, повлиявшая на условия репродукции возбудителей, пути передачи инфекции и восприимчивость к ним групп риска человеческой популяции, прежде всего с различными видами иммунодефицитов, способствовали значительному увеличению удельного веса инфекций, ранее не поддававшихся эпидемиологической расшифровке или проходивших «под маской» других нозологии. К таким заболеваниям в полной мере можно отнести кампилобактериоз и листериоз.

Листериоз с 80-х годов 20-го столетия заявил о себе, как пищевая инфекция, т.к. заболевания людей часто связаны с употреблением инфицированных возбудителем продуктов питания, таких как овощные, молочные, мясные, морепродукты (Бакулов И.А., Васильев Д.А., 1995; Котляров В.М.,1999; Онищенко Г.Г., Монисов А.А., Гульченко Л.П., Федоров Ю.М., 1999). Для решения этой проблемы требуется оперативная информация об эпидемической и эпизоотической ситуации в экологической системе «человек - животное - окружающая среда». При этом главная роль принадлежит постоянному лабораторному контролю этой системы, учитывая, что возбудитель листериоза имеет уникальную способность репродуцироваться при транспортировании и хранении контаминированных продуктов даже при строгом соблюдении «холодовой цепи» (Зыкин Л.Ф., Савельева Л.В., Касьян И. А., 1999).

Представители рода Campylobacter являются одними из основных этиологических агентов диарей пищевого и водного происхождения (Чайка Н.А., Хазенсон Л.Ю., Бутцлер Ж.-П., 1988). Интерес к кампилобактериозу обусловлен его повсеместным географическим распространением, интенсивной циркуляцией возбудителя среди людей, животных и во внешней среде, высокими показателями заболеваемости и большим социальноэкономическим ущербом от этой инфекции. Кампилобактериозная инфекция, широко распространенная во всем мире и по частоте возникновения сопоставимая с сальмонеллезом, в России в практических лабораториях почти не диагностируется. Анализ эпидемической и эпизоотологической ситуации в мире и России показал, что кампилобактериоз и листериоз - это медико-ветеринарная проблема, актуальная более, чем в 80 странах мира и особенно в Европейской его части, где эти заболевания приобрели широкое распространение и признаки природной очаговости (Гершун В.И., 1988; Дородни-ков А.И., 1988; Кузьмин Ю.А., Мекка-Меченко Т.О., 1988; Шабловская Е.А., Кирик Д.Л.ДСролевецкая Н.М., 1991; Бакулов И.А., Котляров В.М., Шарма Р.К.,1997; Книзе А.В., Бузун А.И., 1999; Котляров В.М., 1999; Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А., 2002; Warner D.R., Bryner J.H., Beran G.W.,1986; Lorber В, 1997; Fenlon D.K.,1999 и др.). Сопоставление работ многих исследователей по эпидемиологии, эпиозотологии, экологии и т.п. привело к заключению, что листериоз и кампилобактериоз и их возбудители имеют много совпадений, общих свойств и параллелей: природные резервуары, пути распространения в природе и заражения человека и животных и т.д. Опираясь на литературные данные и собственные исследования, мы составили условную схему этих процессов (рисунок 28).

Изучение уровня заболеваемости ОКИ по Ставропольскому краю в 2002 году выявило, что он превысил общероссийский на 39,4 %. При этом большой проблемой является низкий процент, который составляют острые кишечные инфекции установленной этиологии от общей суммы ОКИ. В период с 1995 по 2005 гг. этот показатель в среднем составил 22-25 %. Бактериологическое подтверждение клиническому диагнозу получают только при бактериальной дизентерии и то в - 15-20 % случаев; при пищевых токснко-инфекциях - в 10-12 %. А диагноз «кампилобактериоз» не ставится вообще, так как лабораторная диагностика отсутствует. Такое же положение и по листериозу. В связи с этим, кишечные зооантропонозы кампилобактериоз и

Рисунок 28. Схема циркуляции возбудителей листериоза и кампилобактериоза во внешней среде и пути заражения человека и животных листериоз чаще всего попадают в раздел « инфекции неустановленной этиологии».

Вышесказанное свидетельствует о необходимости расширения арсенала медицинских иммунобиологических препаратов для диагностики листе-риоза и кампилобактериоза и индикации их возбудителей.

Взяв за питательную основу мелассу свекловичную, мы сконструировали транспортную, селективные и накопительные питательные среды, в которых учтены биологические особенности кампил о бактерий и листерий. Транспортная среда для кампилобактерий и листерий представляет собой основу, содержащую 0, 05% тиогликолята натрия и 0,025 % цистеина. Селективная среда для листерий, кроме основы, содержит агар-агар микробиологический (15 г/л), дрожжевой экстракт ( 5 г/л ), глюкозу ( 1 г/л ), глицерин безводный (10,0 г/л), лецитин соевый (1,0 г/л) и антимикробную добавку: полимексин М ( 3 мг/л ), амфоглюкамин В ( 5 м/г ), цефазолин ( 30 мг/л ), ко-лимицин (30 мг/л). Селективная среда для кампилобактерий дополнительно содержит эритрит, гемолизированную кровь барана или лошади (7 %) и аэротолерантную добавку (железо сернокислое, железо закисное, натрий пиро-винограднокислый, натрий сернокислый по 0,025 %). Для изготовления накопительных сред (для наращивания биомасс микроорганизмов) взята рецептура селективных сред без антимикробной добавки, в которую введен стимулятор роста — «ЭСРМ». Разработанные среды позволили успешно выделять патогены из материала от больных людей, животных, птицы, объектов внешней среды, а также для получения антигенов наращивать биомассы кампилобактерий и листерий в количествах, достаточных для этих целей. Использование доступного, дешевого, непродовольственного сырья в качестве основы позволило значительно снизить себестоимость питательных сред и ускорить процедуру их приготовления, так как отпала необходимость проведения гидролиза продуктов животного происхождения, традиционно используемого при приготовлении сред.

Одним из доступных и простых методов индикации и идентификации возбудителей инфекционных заболеваний является реакция агглютинации. Качество агглютинирующей сыворотки в значительной степени зависит от высокоэффективной схемы специфической иммунизации животных. Проведена серия экспериментов по отработке оптимальной схемы иммунизации с варьированием концентрации антигенов, способов, кратности и периодичности их введения. Для иммунизации животных использовали обеззараженные 1 % раствором формалина с последующим кипячением в течение одного часа двухсуточные агаровые культуры L.monocytogenes сероваров 1/2а, 1/2в, За, 4а, 4в, 5, 7, доведенные до концентрации 1x109 м.к./мл по оптическому стандарту мутности ОСО 42-28-59-85, взятые в равных долях. Корпускулярным кампилобактериозным полигрупповым антигеном служили объединенные в равных пропорциях бакмассы из С. jejuni 1/NCTC 1168, 33291, С. coli 602, С. fetus 322, обработанные при 100°С в течение одного часа с добавлением 1 % раствора формалина, доведенные до концентрации 1x109 м.к./мл.

Наиболее результативной оказалась схема иммунизации, предусматривающая три способа введения антигена: внутривенный, в подушечки лап, в лимфатические узлы. Важным достоинством этой схемы является непродолжительность периода иммунизации кроликов-продуцентов, который составляет 17-18 дней, атравматичность для них, получение высоких титров специфических антител - до 1:3200 — 1:6400. Кампилобактериозные полигрупповые сыворотки для РА были высокоспецифичными, в то же время полученные листериозные агглютинирующие сыворотки давали в низких титрах перекрестные реакции с гетерологичными культурами (сальмонеллами, ши-геллами, стафилококками). Специфичные полигрупповые листериозные сыворотки удалось получить после проведения иммуносорбции с помощью твердофазных ПААГ — сорбентов.

Традиционным и эффективным методом диагностики инфекционных заболеваний является реакция агглютинации с применением корпускулярного диагностикума. При окраске микробных клеток анилиновыми или другими красителями реакция становится наиболее наглядной. Нами разработана биотехнология изготовления полигрупповых диагностикумов цветных лис-териозного и кампилобактериозного для реакции агглютинации. Из 12 испытанных красителей (малахитовый зеленый, бромкрезоловый синий, бромфе-ноловый синий, метилен виолет, фуксин кислый, фуксин основной, кристалл виолет, феноловый красный, тиомин синий, трепан синий, метилен синий, бриллиантовый зеленый) наиболее пригодным оказался бромфеноловый синий. Диагностикумы, окрашенные этим красителем, выявляли специфические агглютинины в полигрупповых сыворотках для РА в разведении 1:1600 - 1:3200, при этом оптимальная концентрация микробной взвеси в них — 3x109 м.к./мл.

При изучении специфичности использовали коммерческие агглютинирующие сыворотки: сальмонеллезную поливалентную основных (АВСДЕ) групп, туляремийную агглютинирующую сухую, холерную «О», шигеллез-ную дизентерийную поливалетную, бруцеллезную поливалентную. Со всеми перечисленными сыворотками реакция агглютинации была отрицательная.

До сих пор остаются актуальными и широко используются простые, достаточно чувствительные, не требующие применения специальной аппаратуры и потому общедоступные серологические тесты и, в частности, РНГА. При отработке биотехнологии изготовления эритроцитарных антигенных диагностикумов было необходимо решить следующие задачи: подобрать эффективную методику извлечения специфического лиганда из микробных клеток; отработать условия формалинизации эритроцитов барана; подобрать условия сенсибилизации эритроцитов специфическими антигенами. Для извлечения нативных водорастворимых антигенов листерий и кампилобактерий мы сочли целесообразным использовать дезинтеграцию микробных клеток с помощью ультразвуковых колебаний (УЗДН2Т) в сочетании с водно-солевой экстракцией и последующим осаждением белка (Афанасьев Е.Н., 1984; Афанасьев Е.Н., 1986). Экстракция осадка 5% раствором хлористого натрия и выделение второго супернатанта позволяют в максимальной степени извлечь антигены из бактериальной массы, а фракционирование антигенов из супернатантов сульфатом аммония, помимо концентрирования и очистки, приводит к стабилизации белков.

В связи с тем, что у всех серотипов кампилобактерий имеется общий белковый антиген, содержащийся в жгутиках, а одним из важнейших поверхностных антигенов является кислоторастворимая белковая фракция (Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999), дополнительно в вышеназванную схему при получении кампилобактериозного полигруппового антигена мы ввели этап экстрагирования 0,05 N раствором соляной кислоты. При этом антигенный комплекс изолировали из биомасс кампилобактерий подвидов jejuni, coli, fetus.

Полигрупповые антигены иммобилизировали на поверхности эритроцитов барана, формалинизированных по методу М.И.Леви с соавт. (1962), при этом активацию их поверхности проводили 2 % раствором вторичного алкилсульфата натрия. Оптимальная нагрузка лигандов равнялась 1000 мкг/мл по белку при следующих условиях конъюгации: концентрация эритроцитов -20 %; температура их связывания с сенситином — 45°С; рН раствора - 5,0 в течение (18 ±2) часов.

При контроле полученных серий эритроцитарных антигенных листериозного и кампилобактериозного диагностикумов титры специфических антител в РНГА выявлялись в разведениях 1:5120 - 1:10240. При изучении специфичности на коммерческих агглютинирующих сыворотках перекрестных реакций не наблюдалось.

Для экспресс-индикации возбудителей кампилобактериоза и листе-риоза нами изготовлены полигрупповые флуоресцирующие и иммуноперок-сидазные конъюгаты. При их получении было необходимо иметь высококачественное сырье — высокоспецифичную и высокоактивную гипериммунную сыворотку, которую удалось получить при гипериммунизации кроликов водорастворимыми антигенами при использовании иммунокорректора - тимогена.

Схема иммунизации состояла из следующих манипуляций: кроликам-продуцентам вводили внутривенно каждые пять дней водорастворимые полигрупповые антигенные комплексы листерий и кампилобактерий в увеличивающихся дозах. В эти же сроки внутримышечно инъецировали по 10 мкг тимогена. На 7-10 день после последнего введения иммуногена животных кровопускали. Активность гипериммунных сывороток, полученных по этой схеме, в РИД составляла 1:28,8*2,5 - 1:53,3±5,01, в НРИФ -1:13926,4±1372,16 - 1:24576±2744,32.

Таким образом, новая схема иммунизации позволила значительно снизить дозировки вводимых антигенов (в 17,9 раза), иммуномодулятора (в 500 раз), в 1,6 раза сократить время иммунизации, получить специфический иммунный ответ практически у 100 % животных, при этом уменьшить материальные и трудозатраты.

При сравнительном анализе методов выделения специфических иммуноглобулинов класса G (сульфатом аммония, каприловой кислотой, полиэти-ленгликолем - 6000) и дальнейшей их метке флуорохромом и ферментом оказалось, что наиболее активные флуоресцирующие конъюгаты были получены при использовании IgG, выделенные каприловой кислотой, а энзимме-ченные - IgG - полиэтиленгликолем. При этом для повышения специфичности листериозных полигрупповых иммуноглобулиновых конъюгатов были использованы F(aB)2 — фрагменты, выделенные из соответствующих IgG ферментативным гидролизом в кислой среде. Разработанные биотехнологии позволили получать высокоактивные, чувствительные и специфичные диагностические препараты, отвечающие ОМБТ, предъявляемым к подобным ди-агностикумам.

Эффективность ряда методов индикации и выделения возбудителей инфекционных заболеваний и их антигенов может быть значительно увеличена после предварительного концентрирования микробов или их антигенов с отделением их от контаминирующей микрофлоры и примесей. Эта цель может быть достигнута путем применения методов иммуносорбции, особое место среди которых занимают методы с использованием сорбентов с магнитными свойствами. Магноиммуносорбенты служат в качестве твердой фазы для селективного концентрирования на их поверхности патогенов (Тю-менцева И.С., 1996; Ефременко В.И., 1997; Афанасьев Е.Н., 2000).

Нами впервые разработаны кампилобактериозные и листериозные магноиммуносорбенты на основе органокремнезема — алюмосиликата, модифицирование поверхности которого осуществляли в присутствии полимера -декстрана и поверхностно-активного вещества — вторичного алкилсульфата натрия. Для придания сорбенту магнитных свойств в его состав вводили оксид железа.

Для оптимизации структурных характеристик МС проведены исследования по варьированию состава компонентов синтеза (алюмосиликат, по-лиглюкин, F203), а также изучено влияние времени гелеобразования и рН среды на величину удельной поверхности сорбента, объем и размер пор.

На основе проведенных исследований рекомендованы следующие параметры и условия получения алюмосиликатных МС: соотношение компонентов синтеза 1:1:2, соответственно алюмосиликат, декстран, F203; время гелеобразования - 2 часа, рН гелеобразования - 7,0.

Исследование удельной поверхности показало, что сорбент, не содержащий в своем составе F203, имеет удельную поверхность - 58 м /г, объем пор - 1,7 см3/г, радиус - 42,5 нм. Введение оксида железа в структуру кремнеземного сорбента изменяло его структурные характеристики: удель2 ная поверхность имела значение 18 м /г, объем пор - 1,19 см /г, радиус пор -132,2 нм.

Аффинность сорбенту придавали белковые специфические лиганды, которыми при конструировании кампилобактериозных МИС служили иммуноглобулины из гипериммунных полигрупповых сывороток, выделенные по-лиэтиленгликолем, а для листериозных МИС - F(ab)2 - фрагменты иммуноглобулинов листериозных.

Исследования показали, что концентрация белка лигандов 2,5-3 мг/мл являлась оптимальной для полного насыщения сорбента в объеме 0,4 мл 10 % взвеси МИС. При использовании белка с концентрацией больше 2,5мг/мл адсорбционная емкость МИС снижалась. При изучении кинетики процесса иммобилизации и оценке связывания белковых лигандов с сорбентом установлено, что для полного насыщения МС белком достаточно 2 часов при значении рН раствора белка 6-7 и температуре от 22 до 37°С. Полученные магноиммуносорбенты характеризовались стандартностью структурных характеристик, механической, химической, микробиологической устойчивостью, не подвержены набуханию.

На основе МИС нами впервые сконструированы диагностические тест-системы для проведения сочетанного метода индикации возбудителей кампилобактериоза и листериоза МИС+ИФА, подобраны условия постановки ИФА с МИС. При использовании МИС в ИФА для проведения реакции не требовались полистероловые планшеты, сокращалось время сенсибилизации твердой фазы в 15 раз, значительно увеличивался срок хранения сенсибилизированной твердой фазы ( с 20 дней до 5 лет) время проведения анализа сокращалось в 1,5 раза, а чувствительность повышалась на несколько порядков по сравнению с общепринятым ИФА.

Нами также впервые сконструированы магноиммуносорбентные диагностические тест-системы для проведения сочетанного метода детекции возбудителей кампилобактериоза и листериоза в количественном имму-нофлуоресцентном анализе, оптимизированы варианты постановки КИ-ФА.Сочетанный метод обладал высокой чувствительностью (1x10 м.к./пробе), значительно превышающей чувствительность традиционного иммунофлуоресцентного анализа, специфичностью, быстротой постановки реакции (50-60 мин), возможностью учитывать реакцию не только визуально, но и инструментально ( в условных единицах по показаниям вольтметра), при этом отпадала необходимость приготовления мазков и их фиксации.

Способность магнонммуносорбентов прочно (на уровне реакции антиген-антитело) фиксировать на своей поверхности искомый патоген дает возможность исследовать широкий диапазон проб, в том числе и сильно загрязненных, и их объемов (от нескольких микролитров до многих кубических метров жидкости и более (в проточном режиме)), осуществлять тщательную промывку проб от загрязнений, мешающих проведению индикационных реакций, тем самым повышая достоверность как положительных, так и отрицательных результатов.

Все разработанные нами МИБП, а также биологическое сырье для их производства нуждались в стабилизации исходных свойств. В настоящее время наилучшим методом для сохранения (можно хранить в жидком азоте) свойств биополимеров является лиофильное высушивание препаратов. Высушенные биопрепараты довольно просто хранить и транспортировать , т.к. они выдерживают значительные колебания температуры внешней среды (от минусовых 30-40 °С). В связи с тем, что названные выше диагностические препараты и сырье для них имели свой порог биодеградации, необходимо было отработать единый, оптимальный, экономичный режим их высушивания. При лиофилизации мы использовали различные криозащитные среды, подобранные нами для каждого биообъекта. Лиофилизацию проводили на установке для сублимационной сушки (LZ-9C или TG -5) с использованием двух режимов: «умеренный» (длительность удаления свободной воды -(12,5±1) час, связанной влаги - (10,5±1) час, конечная температура подогрева - (25±1) °С) и «жесткий» (длительность периода сублимации и изотермического отторжения влаги в течение 6 часов с подогревом материала до (45 ± 1)°С, общая длительность процесса сушки - (16±2) часа). После лиофилизации «умеренным» и «жестким» режимами, а также через 5 лет хранения (срок наблюдения) показатели контроля специфической активности и чувствительности всех медицинских иммунобиологических препаратов, разработанных нами, а также биологического сырья для их производства оставались на уровне исходных. Результаты этих экспериментов позволяют рекомендовать довольно «жесткий» экономичный режим сублимации в производстве диагностических препаратов.

Диагностическую ценность разработанных нами МИБП подтвердили многочисленные лабораторные и полевые испытания. Результаты бактериологических и серологических исследований материала от людей, животных, домашних и диких птиц, грызунов, пищевых продуктов, воды водоемов, сточных вод, почвы и других объектов показали многообразие резервуаров и источников листериозной и кампилобактериозной инфекций и свидетельствуют о совпадающих путях циркуляции и передачи этих возбудителей.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Алиева, Елена Васильевна, Москва

1. Абидов А. А. Кампилобактериоз (обзор) //Мед. Журн. Узбекистана.- 1986. №6.-С. 51-53.

2. Аграновская Е.Н., Карпенкова Н.И. Вопросы прикладной иммунологии. Ленинград,- 1967.- С.144-157.

3. Азаренок К.С. К возможности обнаружения токсина в крови больного ботулизмом при помощи реакции пассивной гемагглютинации //Журн. микробиол. 1970. - № 7. - С.112.

4. Алесковский В.В., Юффа А.Я. Модифицирование поверхности неорганическими соединениями // Журнал Всес. хим. общ. Им. Д.И.Менделеева.-1989.- № 3,- С.317-324.

5. Алиева Е.В. Некоторые аспекты современного состояния эпидемиологии и лабораторной диагностики кампилобактериоза // Материалы научной конференции Ставропольской государственной медицинской академии. Ставрополь, 2002.- С.135-136

6. Алиева Е.В. Магнитоуправляемая тест-система при диагностике листериоза // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. Приложение. №2(2) - Ростов-н/Д, 2003. -С. 43-45.

7. Алиева Е.В. Опыт применения новых препаратов для экспресс-индикации возбудителей кишечных инфекций в условиях чрезвычайных ситуаций // Журн. микробиол. 2003а. —№ 6. - Приложение. - С.86-88.

8. Алиева Е.В. Анализ заболеваемости и состояния лабораторной диагностики острых кишечных инфекций на территории Ставропольскогокрая // Ставрополь, 2004. 11 с. - Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006, №1084. -В2006.

9. Алиева Е.В. Кампилобактерио+з. Лабораторная диагностика (Обзор литературы) // Ставрополь, 2004а. Деп. в ВИНИТИ 15.07.2004, №1227. - В2004.

10. Алиева Е.В. Разработка кампилобактериозных аффинных магно-сорбентов для обследования объектов внешней среды // Вестник СГУ. Вып. 42.- Ставрополь, 2005.-С.163-166.

11. Алиева Е.В., Афанасьев Е.Н. Экология возбудителей кампило-бактериоза и листериоза //Ставрополь, 2006в. 13 с. - Деп. в ВИНИТИ 09.11.2006.-№ 1352 — В2006.

12. Алиева Е.В., Афанасьев Е.Н., Тюменцева И.С. Новое в диагностике кампнлобактериоза и листериоза // Вестник Российской военно-медицинской академии. СПб., 2006. - Приложение 1(15). - С.221.

13. Алиева Е.В., Гурнович Е.В. Основные причины возникновенияострых кишечных инфекций на территории Ставропольского края //11 итоговая (межвузовская) конференция студентов и молодых ученых Ставрополь, 2003, С. 278-279.

14. Алиева Е.В., Егшатян Т.И. Проблемы листериоза на территории Ставропольского края. Сборник научных трудов. Здоровье (проблемы теории и практики) УДК 61:157.7 (3) ISBN 5 - 89822 -029 - 1. Ставрополь,2001, с. 472-473.

15. Алиева Е.В., Жарникова И.В., Жданова Е.В., Юркина И.В., Кур-чева С.А. Получение высокоактивных антигенных фракций из бакмасс возбудителя кампнлобактериоза // Естествознание и гуманизм. Сборник научн. Работ Т.З, №1. - Томск, 2006. - С.86-87.

16. Алиева Е.В., Ковальчук И.В. Современное состояние изученности и лабораторной диагностики возбудителя листериоза (обзор литературы) //Ставрополь, 2006. 24 с. Деп. в ВИНИТИ, 09.11.2006. - №1351-В2006.

17. Алиева Е.В., Тюменцева И.С. Конструирование и характеристика листериозных и кампилобактериозных полигрупповых иммуноглобулиновых конъюгатов // Ставрополь, 2006.-28 с. Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006, №1085. -В2006.

18. Алиева Е.В., Тюменцева И.С. Разработка биотехнологии получения листериозных и кампилобактериозных антигенных диагностических иммунобиологических препаратов // Ставрополь, 2004. — 26 с. Деп. в ВИНИТИ 21.08.2006а, №1083. - В2006.

19. Алиева Е.В., Тюменцева И.С. Разработка и получение и получение питательных сред для культивирования кампилобактерий и листерий

20. Ставрополь, 20066. 14 с. - Деп. в ВИНИТИ №09.11.2006. - №1353. -В.2006.

21. Алиева Е.В., Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н. Питательные среды для культивирования кампилобактерий и листерий // Вестник Российской военно-медицинской академии. СПб., 2006. - Приложение 1(15). — С.482-483.

22. Алиева Е.В., Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н. Разработка схем иммунизации животных кампилобактериозными и листериозными антигенами //Вестник Российской военно-медицинской академии. СПб., 2006а. -Приложение 1(15). - С.192.

23. Алиева Е.В., Тюменцева И.С., Жарникова и др. Разработка иприменение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителей кампилобактериоза и листериоза // Медицинский вестник Северного Кавказа.- Ставрополь,2006. №1. - С. 12-14.

24. Алюшин М.Т., Астахова М.Н. Аэросил и его применение вфармацевтической практике //Фармация. 1971 - N6. - С.73-77.

25. Андреев С.В. Система анализов рисков и определения критических контрольных точек (ХАССП). Государственные стандарты США и России //М., 2004. 595с.

26. Афанасьев Е.Н. Научно-методические аспекты экспресс-диагностики возбудителей особо опасных зоонозных инфекций (чума, бруцеллез, сибирская язва): Автореф. дис. . докт. мед. наук. — Ростов, 2000. -45с.

27. Афанасьев Е.Н., Таран И.Ф., Тюменцева И.С. Антигенная структура бруцелл. 1 Сравнительная оценка методов выделения водорастворимых антигенов бруцелл //ВИНИТИ 12. 09. 86 г, № 6635-В.

28. Афанасьев Е.Н., Тюменцева И.С., Егшатян Т.И. и др. К вопросу люминесцентно-серологической идентификации возбудителей листериоза // Листериоз на рубеже тысячелетий //Материалы междун. симпозиума. Покров, 1999 - С.90-91.

29. Бакулов И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей //Материалы Междунар. симпозиума: «Листерии на рубеже тысячилетий». 18-20 мая 1999. - ВНИИВВиМ. - Покров, 1999. - С.43-47.

30. Бакулов И.А. Основные вехи истории изучения листериоза животных и людей. //Матер, международн. симпозиума по листериозу. "Листериоз на рубеже тысячелетий". Покров, 1999.-С.-43

31. Бакулов И.А., Васильев Д.А., Белоусов В.Е., Цыганов А.А., Кот-ляров В.М. Биологические свойства компонентов листериозной клетки //Ветеринария. 1988. - № 4. - С. 26-29.

32. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Листериоз как пищевая инфекция: Вопросы диагностики и профилактики. Ульяновск, 1991.- 156 с.

33. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Листериоз как пищевая инфекция: Учебное пособие. Вопросы диагностики и профилактики. Ульяновск, 1991.78 с.

34. Бакулов И.А., Васильев Д.А. Пищевой листериоз новое проявление известной болезни (обзор литературы) //Вестник РАСХН. - 1995. - № 2 - С.69-72.

35. Бакулов И.А., Котляров В.М., Кольпикова Т.И., Дмитриенко И.В., Ведерников В.А., Пыталев П.Н. Листериоз животных в России: эпизоотическая ситуация. "Медико-ветеринарные аспекты листериоза", науч. произв. конф. 23-26 ноября 1993. Покров, 1993. - С. 9-10.

36. Бакулов И.А., Котляров В.М., Шестиперова Т.П. Эпидемиологические и эпизоотологические аспекты листериоза //ЖМЭИ. 1994. - № 5,- с. 100-105.

37. Барашкова Л.Н., Карцева Н.А, Коржуева Н.А, Шестакова Т.П. Разработка и испытание эритроцитарных диагностикумов из чистых антител. Сб. науч. трудов под ред. академика АМН СССР проф. И.И. Блохииой. -Горький, 1986. С. 131.

38. Басюк В.А. Иммобилизация азотсодержащих соединений на поверхности дисперсных кремнеземов //Дис. . канд. хим. наук. Киев,1986. -138 с.

39. Белоусов В.И. Требования к питательным средам для ветеринарных целей //Междунар. науч.-практ. конф. «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными экзот. и зооантропоноз. болезнями животных»: Сб. ст. Покров, 2000. - С.230-232.

40. Вельская Н.А, Митина B.C., Вейнблат В.И. Микрометод фракционирования и идентификации белков бактерий //Материалы СевероКавказской биохим. конф. Махачкала, 1970. - С. 270-271.

41. Вельская Н.А., Митина B.C., Вейнблат В.И. Микрометод фракционирования и идентификация белков //Лаб. дело. 1972. - №10. - С. 514616.

42. Белякова И.Н., Полонская Т.П., Калатуша В.А. и др. Сорбенты для хроматографии на основе кремнеземов с химически закрепленными кислород», азот- и серосодержащими лигандами //Тез. докл. (Рига, 1984). М., 1984.-С.116-117.

43. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. -М.: МГУ, 1976. Т.1. - С.106-113.

44. Березин И.В., Мартынек К.М. Введение в прикладную энзимоло-гию. М.:МГУ, 1982. - С.26-100.

45. Бернгоф Ф.Г., Скрыпник П.И. Упрощенный способ приготовления специфических агглютинирующих тифо-паратифных сывороток //ЖМЭИ. 1937. - Т. 19, №2. - С.226-235.

46. Благовещенский В.А., Степанченок-Рудник Г.И., Жулина Л.В. Изучение химческого состава экстрактов культур Б.Ц.Ж., подвергшихся обработке ультразвуком, и выделение из них растворимого антигена //ЖМЭИ. -1961. №3. — С.17-22.

47. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии.- М.- 1961,- С. 57-60, 86-87.

48. Богомаз В.И. Синтез, свойства и применение новых видов модифицированных пирогенных кремнеземов. Автореф. дис. . канд. хим. наук. - Киев, 1982. - 21 с.

49. Богоявленская Л.Б. Стандартизация диагностических реагентов модели О-сальмонеллезных сывороток: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1973.-23 с.

50. Бойцов А. Г., Порин А. А., Бадеева А. Г., Шабанова JI. А. Выделение C.jejuni от детей с диарейным синдромом // Острые кишечные инфекции: Респ.сб.науч. трудов // Лен. НИИ эпидемиол. и микробиол. 1988. - вып. 12. -С. 149-151

51. Бойцов А.Г., Порин А.А., Чайка Н.А. и др. Выявление кампило-бактеров в смывах с куриных тушек и оборудования птицефабрики //Острые кишечные инфекции. Респл. Сб. науч. тр. Л., 1990. - Вып.13. - С.72-79.

52. Брыкалов А.В. Сорбенты на основе кремнеземов и активированных углей в биотехнологии и медицине // Материалы конф. химиков Сев.Кавказа.- Нальчик, 1991.- С. 185-186.

53. Брыкалов А.В., Воробьева О.В. Новые композиционные носители для иммобилизации ферментов //Современные достижения биотехнологии: Материалы Всерос. конф.- Ставрополь, 1996. С.279.

54. Бутова Т.А. Антигенные свойства Campilobacter jejuni выделенного от животных и птиц. — Автореф. дис. . канд. биол. наук. -М., 198918 с.

55. Бычварова Я., Терзийски Г. Распространение на Campilobacter и телята. Сообщение 1 //Ветеринар. Сб. 1987. - Т. 86, №2. - С.28-29.

56. Бюллетень ВОЗ. М.: Медицина, 1988. Т - 71. - № 2. - С.87-167.

57. Бюллетень нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. М., Минздрав России, 2003. - Вып. 3(13), сентябрь. - 144 с.

58. Ванеева Н.П, Цветкова Н.В., Гудкова Р.Г., Дерябин П.Н. Диагностика стафилококковых заболеваний с помощью иммуноферментной реакции //ЖМЭИ. 1984. - №6. - С.61-64.

59. Васильев Н.В., Луцюк Н.Б. Палий Г.К., Смирнова О.В. Биохимия и иммунология микробных полисахаридов. — Томск, 1984. 174 с.

60. Васильев Д.А., Барышников П.И. Использование иммуноферментного анализа для диагностики листериоза //Ветеринария. № 4. 1989. -С. 60-62.

61. Васильев Д.А. Роль пищевых продуктов в распространении листериоза//Ветеринария 1992. - № 4.- С.46-48.

62. Вейнблат В.И. Антигены Y.Pestis (биохимические и иммунологические аспекты): Дисс.: . д-ра мед. наук. Саратов, 1974. - С. 324.

63. Вейнблат В.И., Каминский В.В., Орлова Л.С. Иммунодискэлек-трофорез антигенов чумного микроба //Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1972. Вып. 4 (26). - С. 196-200.

64. Виноградова И.Н. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней /Под ред. К.И.Матвеева. — М.:Медицина, 1973.- С.96-110.

65. Владимцева И.В., Храпова Н.П., Ефременко В.И. и др. Изучение моноклонального сапного магноиммуносорбента методом количественной иммунофлуоресценции // Сб. науч. работ. Волгоград, 1989. - Вып.4. - С.206-209.

66. Волина Е.Г., Быченко Б.Д., Бочарова Н.Г. Применение реакции энзим-меченых антител для диагностики лептоспироза //ЖМЭИ. 1981.

67. Волохович Т. Т., Яний В. В., Грубова Е.А. и др. Сравнительная эпидемиологическая характеристика ротавирусной инфекции и кампилобактериоза //Зравоохр. РФ. -1992. №11/12. - С. 23-25.

68. Воротынцева Н. В., Горелов А. В. и др. Кампилобактериоз у детей //Вопр. охраны материнства и детства. -1989. №3. - С. 8-12

69. Воротынцева Н. В., Горелов А. В. Клинические особенности кампилобактериоза у детей // Педиатрия. 1991. - №3. - С. 11-15.

70. Ворошилова О.И., Киселев А.В., Никитин Ю.С. Синтез и исследование кремнеземистых носителей с поверхностью, модифицированной гамма-аминопропильными группами //Коллоидный журн. 1980. - Т.42. - N 2. - С. 223-229.

71. Гайдамович С.Я., Клисенко Г.А., Шаноян Н.К. Реакция агглютинации сенсибилизированных антителами эритроцитов вирусом колорадской клещевой лихорадки //Вопросы вирусологии. 1974. - №2. - С.169.

72. Галатович Ш. Чистые помещения 2013г. //Чистые помещения и технологические среды. 2003, №4. - С.4-8.

73. Герберт У.Д. Классификация по иммунологическим данным //В кн.: Ветеринария иммунология. М., 1974. - С.31-46.

74. Гершун В.И. Листериоз сельскохозяйственных животных. Алма-Ата, 1981.- 145 с.

75. Гершун В.И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге //В сб.: Экология возбудителей сапронозов,- М. -1988. С.80-84.

76. Гинзбург P.M., Воронкин В.Е., Едименко Л.И. Диагностика кампилобактериоза (Сообщение 1) //Лабораторное дело. 1991. - №9. -С.60-61.

77. Голиков А.В., Зенин И.В., Зенин Г.В. Исследования диких кабанов на носительство кампил о бактерий и Fr.Hyodysenteriae //Бюл. ВИЭВ. — 1985.-Вып. 60. С.47-50.

78. Горелов А. В. Клиника, вопросы патогенеза и этиотропной терапии кампилобактериоза у детей. Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1989. -28 с.

79. Горелов А. В., Воротынцева Н. В., Домарадская Т. И. и др. Эн-теротоксигенная активность изолятов Campylobacter, выделенных при острых кишечных заболеваниях у детей, и её клиническая оценка //ЖМЭИ. -1994. №4.-С. 7-10

80. Горелов А.В., Воротынцева Н.В. Клинические проявления кампилобактериоза у детей // Эпидемиология и инфекционные болезни.-1997.-№3.- С.37-40.

81. Горелов А.В., Жуховицкий В.Г., Головинова М.А. Рецидивы кампилобактериоза у детей // Клиника, диагностика и патогенез инфекционных заболеваний у детей: Сб. трудов под редакцией Н.В. Воротынцевой, М., 1990.-С.23-25.

82. ГОСТ РИСО 901-2001 Системы менджмента качества. Требования. Госстандарт России. Москва.

83. Гофман И.Л. Опыт производственного изготовления сывороток к типовым и групповым антигенам шигелл Флекснера //Кишечные и воздуш-нокапельные инфекции. М., 1969. - С.511-518.

84. Грачёва Н. М., Партии О. С., Щербаков И. Т. и др. Химиотерапия кампилобактериоза //Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т.37, №6. -С. 31-35

85. Грачева Н.М., Пожалостина Л.В., Леонтьева Н.И. и др. Клинико-лабораторная оценка значения реакции коагглютинации при кампилобакте-риозе //Эпидемиол. и инфекционные болезни. 2002. - №4. - С.63-64.

86. Григорьева Г.И. Мембраны и мембранные белки в сравнительной характеристике стафиллококков. Автореф. дис. . канд. биол. наук. - Пу-щино, 1980.- 19с.

87. Дайтер А.Б., Цепева Г.Я., Семенович В.Н. Зооантропонозные инфекции в животноводческих комплексах северо-западного региона //Болезни с природной очаговостью. Л.:Медицина, 1983. - С.39-50.

88. Данилина Г.П., Кошелева Р.А., Зеленков Е.Ю. Активность и специфичность листериозной диагностической сыворотки //Специфическая профилактика и диагностика инфекционных болезней животных. Сборник научных трудов М., 1986. - С. 54-56.

89. Демидов С.В., Костромин А.П., Чернушенко Е.Ф. и др. Влияние тимических иммуномодуляторов на систему циклических нуклеотидов Тлимфоцитов селезенки при вакцинации БЦЖ //Проблемы туберкулеза. -1990. №10. - С.63-65.

90. Демина Н.С., Лысенко С.В. Действие дегидратации на микроорганизмы //Биол. науки. 1987. - №8. - С.50-52.

91. Дзантиев Б.Б., Егоров A.M. Современное состояние перспективы развития иммуноферментного анализа//Журн. Всесоюзн. хим. об-ва. 1982. -27. - № 4.- С.442-447.

92. Дзантиев Б.Б., Канатникова А.Н., Парбузин B.C. Основные закономерности конкурентного иммуноферментого анализа //В кн.: Методы иммуноферментного анализа в биологии и медицине: Сб. тр. Моск. НИИВС им. И.И. Мечникова.-М, 1983,- С. 37-51.

93. Дмитриева Т.Б. Состояние здоровья населения Российской Федерации и задачи органов и учреждений здравоохранения //ЖМЭИ. 1996. -№ 6. - С. 3-6.

94. Долинов К.Е. Основы технологии сухих препаратов. — М., «Медицина», 1969. С.8-40; 97-152.113. .Дородников А.И. Гигиенические аспекты загрязнения водных объектов кампилобактериями //Гигиена и санитария. 1988. - №8. — С.59-63.

95. Ермаченко В.А., Григорьева Г.И, Джемухадзе Г.К., Харатьян Е.Ф., Дегтярева Г.К., Лукоянова М.А., Рудзит Э.А. Получение мембранных стафиллококков и их ферментативная и белковая характеристика. М.- 1978 г. С.74.

96. Егшатян Т.И., Афанасьев Е.Н., Тюменцева И.С., Алиева Е.В. Циркуляция возбудителя листериоза в экологической системе // Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Ставрополь, 2001.-7 с. Деп. в ВИНИТИ 12.07.2001 г, № 1668-В2001.

97. Ермолаева С.А., Белый Ю.Ф., Тартаковский И.С. и др. Клонирование и экспрессия фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы С L.monocytogenes //Мол. Ген. Микробиол. Вирусол. 1995. - №1. - С.3-10.

98. Ефременко В.И. Магнитоуправляемые иммобилизованные системы в микробиологическом мониторинге природных очагов и объектов внешней среды на наличие возбудителей опасных инфекционных болезней //Журн. микробиол. 1997. - №2. - С. 102-106.

99. Ефременко Д.В., Жарникова И.В., Ефременко А.А., Гаркуша И.В., Жданова Е.В., Юркина И.В., Алиева Е.В., Афанасбева Е.Е. Способ проведения иммуноферментного анализа (ИФА) //Патент РФ на изобретение № 2290641, опубл. 27.12.2006 Бюл. №36. 5 с.

100. Жарникова И.В. Методологические подходы и разработка биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей. Автореф. дис. . доктора биол. наук. - Ставрополь, 2004. - 39 с.

101. Жарникова И.В., Алиева Е.В., Касторная М.Н. Магноиммуносор-бентные методы диагностики //Известия высших учебных заведений, Северо

102. Кавказский регион. Естественные науки. Приложение №2(2). - Ростов-и/Д, 2003. - С.51-53.

103. Жарникова И.В., Тюменцева И.С., Алиева Е.В. и др. Разработка и применение иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих для выявления возбудителя кампилобактериоза, лептоспироза //Медицинский вестник Северного Кавказа. Ставрополь, 2006. - С. 12-14.

104. Жданова Л.Г., Перс И.Ф. Действия ультразвука на биологические свойства бактерий кишечной группы. Сооб. 1 Дезинтегрирующее действие ультразвука //ЖМЭИ. 1961. - № 11. - С. 73-79.

105. Журавлева Г.В., Демина А.А. Повышение стандартизации имму-ноферментного анализа для диагностики менингококковых инфекций //ЖМЭИ. 1985. - №4. -С.63-66.

106. Зайцева Е.А., Бузолева Л.С., Терехова В.Е. и др. Изоляция Listeria monocytogenes из различных объектов в Приморском крае и их биологические свойства //Эпидемиол. и инфекционные болезни. 2002. - №1. — С. 47-49.

107. Заугольников С.Д., Коганов М.Н., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ // М.: Медицина, 1978. 184 с.

108. Калашник И.А. Стимулирующая терапия в ветеринарии. Кн.: Урожай, 1990.- 160 с.

109. Кантеева Е.А. Оптимизация этапов приготовления чумных, туля-ремийных, бруцеллезных иммунобиологических препаратов //Автореф. дис. канд. мед. наук. Ставрополь. 1996 —25 с.

110. Каральник Б.В. О режиме сенсибилизации эритроцитов Vi-антигенами S.typhi //ЖМЭИ. 1963. - № 8. - С. 140.

111. Каральник Б.В. Диагностика бактерий кишечных инфекций и энтеровирусов //М. 1965.- С.34-36.

112. Каральник Б.В. Количественный анализ процесса взаимодействия эритроцитов и бактериальных антигенов. Сообщение III. Зависимость процесса от температуры //ЖМЭИ. 1967.- № 9.- С. 121-126.

113. Каральник Б.В., Шамардин В.А., Шмутер М.Ф. О влиянии тани-зации на процесс сенсибилизации эритроцитов бактериальными антигенами небелковой прирды //Материалы 10-й науч. практ. конф. Казахск. ИЭМ. — Алма-Ата. - 1969. - С.119.

114. Каральник Б.В. Научные основы изготовления эритроцитарных диагностикумов //ЖМЭИ. 1977 . - №4 - С.29.

115. Каральник Б.В, Царевский Ю.П., Шамардин В.А. Эритроцитар-ные белковые диагностикумы Изд. "Наука".- 1982. С.127-134.

116. Карликанова Н.Р., Куваева И.Б., Карликанова Н.С. Листерии в молоке и молочных продуктах Москва- Углич, 1999. - 102 с.

117. Карпенко В.В., Сачков В.И. Обезболивание животных в эксперименте: Метод, рек. М., 1985. — 53 с.

118. Картель Н.Т., Молюк Е.Д., Шор-Чудновский М.Е. Новые критерии оценки свойств сорбентов медицинского назначения /ЛУ Республ. конф. "Сорбенты медназначения .". Донецк, 1988. - С. 14-15.

119. Катунина JI.С. Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба //Дис. . канд. биол. наук Ставрополь, 2002. - 164 с.

120. Кельцев Н.В. Основы адсорбционной техники .-М: Химия, 1984.- С. 280.

121. Кирик Д. Л., Шабловская Е. А, Пинчук И. В. и др. Изучение роли молочного фактора передачи кампилобактериозной инфекции // ЖМЭИ.- 1997.-№3.- С. 30-33

122. Кирик Д. Л., Шабловская Е. А., Васильченко А. Л. и др. Некоторые современные параметры эпидемиологического процесса кампилобактериоза//ЖМЭИ. -1996. №5. - С. 29-32

123. Кирик Д. Л., Шабловская Е. А., Кролевецкая Н. М. и др. Эпидемиологические и клинические особенности кампилобактериоза на Украине // Врач.дело.-1993. №5-6. - С. 92-94

124. Книзе А.В., Бузун А.И. Эпизоотическая ситуация по листериозу в странах мира и России. // В сб.: Листериоз на рубеже тысячелетий. Покров, 1999.-С.118.

125. Клячко-Гурвич А.А. Методы определения удельной поверхности //Из-во АН СССР. 1964. - № 10. - С.1885.

126. Коваленко Г.А, Комова О.В. Симаков А.В. и др. Углеродсодер-жащие макроструктурированные керамические носители для адсорбционной иммобилизации ферментов и микроорганизмов // Биотехнология. 2002. -№3. - С.55-66.

127. Коваленко Г.А., Перминова Л.В., Комова О.В. и др. Гетерогенный биокатализатор для непрерывного гидролиза крахмала // Биотехнология- состояние и перспективы развития: Материалы 1-го междун. Конгресса.-М., 2003. С.230.

128. Козлов В.И., Буйлин В.А., Самойлов Н.Г., Марков И.И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии /Под ред O.K. Скобелкина Самара-Киев, 1993. - С.13-22.

129. Колиснык А.В. Иммуноглобулиновая природа преципити-рующих антител к основным антигенам холерного вибриона //Иммунология и иммунопрофилактика чумы и холеры. Саратов, 1980. - С.198-201.

130. Колиснык А.В. Иммуноглобулиновый спектр и серологическая активность специфических антител к некоторым антигенам холерного вибриона: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Саратов, 1981. - 23 с.

131. Кольпикова Т.И., Бакулов И.А., Котляров В.М. Перспективы практического применения листериозных бактериофагов "Вопросы вет. вирус. микроб, и эпизоот. ч. 2 Покров, 1992. - С. 211.

132. Костенко Ю.Г., Шагова Т.С., Янковский К.С. Листерии критерий безопасности мясных продуктов //Мясн. Индустрия. - 1997. - №3. -С.23-24.

133. Котляров В.М. Проблема листериоза на рубеже тысячелетий // В сб. Листериоз на рубеже тысячелетий". Покров, 1999. - С.48-52.

134. Котляров В.М., Бакулов И.А., Макеева Л.В. Обнаружение ком-плементсвязывающих антител при листериозе // «Листериоз на рубеже тысячелетий»: Материалы междунар. симпозиума. 18-20 мая, 1999. - Покров, 1999.-С.88-89.

135. Котова А. Л., Кондратская С. А., Черкасский Б. Л. Методические рекомендации по лабораторной диагностике и эпидемиологии кампилобактериоза. Алма-Ата, 1990. — 17 с.

136. Кудрявцев Г.В., Староверов С.М. Структура модифицированных кремнеземов //Журн. Всесоюз. хим. общ-ва им. Д.И.Менделеева. 1989. -N 3. - С.300-316.

137. Кузьмин В.А., Бойцов А.Г., Иванов В.П., Порин А.А. Кампило-бактериальная инфекция в Северо-Западной зоне РСФСР //Сб. науч. тр. Ле-нингр. ветеринарного ин-та. — 1988. — Т.95. С.53-60.

138. Кузьмин Ю.А., Мека-Меченко Т.О. Эритроцитарные листериозные диагностикумы //Материалы науч. практ. конф., посвященной 100-летию организации противочум. службы России (16-18 сент. 1997). - Саратов, 1997-Т.2.-С.264.

139. Куфлина С.А., Павлова Т.Н. Эвтаназия экспериментальных животных: Метод, рек. по выведению животных для экспериментов. М., 1985. -9 с.

140. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований /А.С.Лабинская М.: Медицина», 1078. - 304 с.

141. Лабораторная диагностика листериоза животных и людей, меры борьбы и профилактика. Госагропром МЗ СССР. - М., 1987. - 27 с.

142. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина, 1985.-255 с.

143. Леви М.И., Орлова Г.М, Сучков Ю.Г. Серологические исследования при чуме //Труды Азерб. противочумн. станции. 1962. - Т.З. - С.281.

144. Лиманский А.П. Идентификация гипервариабельных и консервативных фрагментов генома листерий. ЖМЭИ № 5.-2001.- С. 62-65.

145. Лисичкин Г.В. Достижения, проблемы и перспективы химического модифицирования поверхности минеральных веществ // Журн. Всесо-юз. хим. общества им.Менделеева. -1989.-Т.34, № 3. С. 291-297.

146. Листериоз. Методические рекомендации (№11) комитета здравоохранения г. Москвы. - 2001.

147. Луцюк Н.Б., Чуйко А.А., Богомаз В.И и соавт. Медико-биологические свойства полисорбов //Кремнеземы в медицине и биологии. СБ. науч. трудов под ред. академика А.Н. Украины А.А.Чуйко. Киев-Ставрополь, 1993. - С.89-97.

148. Маевский М.П., Гальцева Т.В., Малай В.И. и др. Сухие питательные среды для культивирования и выделения листерий //"Листериоз на рубеже тысячелетий": Материалы международн. симпозиума по листериозу 1820 мая 1999 г. Покров, 1999. - С. 100-102.

149. Маруяма М. Инфекция, вызываемая L.monocytogenes при употреблении пищевых продуктов // Bull. Inst. Publ. Health. 1992. - T.41. - № 2. -С. -204-205.

150. Маракуша Б.И., Дарвиш Н.А., Тартаровский И.С. Молекулярно-биологические методы в эпидемиологическом анализе листериозной инфекции. Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов микробиологов и паразитологов. М.,- 1997. С.82-83.

151. Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. М., «Медицина». - 2003. - С. 52.

152. Мейнелл Э., Мейнелл Дж. Экспериментальная микробиология (теория и практика): Пер. с англ. М.: Мир, 1967.- 347 с.

153. Мельницкая Е.В., Бернасовская Е.П., Кондрашенко В.Н. Разработка и оценка лептоспирозного, поливалентного, антигенного эритроцитар-ного диагностикума //ЖМЭИ. 1995. - № 6. - С.79-80.

154. Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирус ов /ВНИИ эксперим. Ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. — М., 1986.-69 с.

155. Милютина JI. М., Горелов А. В., Воротынцева Н. В. Дифференциальная диагностика кампилобактериоза у детей // Педиатрия. -1990. №8. - С. 65-70

156. Минаев В.И., Александрова Н.З., Кузьмина Л.И., Комнова Т.Д. Случай кампилобактериоза у новорожденного //ЖМЭИ. 1989. - №3. -С.115-117.

157. Минаев В. И., Вафакулов С. X., Холиеров Ш. П. и др. Эпидемиологические аспекты кампилобактериоза у детей в аридной зоне //ЖМЭИ. -1991.-№12.-С. 25-28

158. Минаев В. И., Николаева Т. Н., Смирнов В. Н. и др. Эпидемиологические характеристики единичных заболеваний кампилобактериозом городских жителей //ЖМЭИ. -1994. №4. - С. 32-34

159. Минаев В.И., Николаева Т.Н., Смирнов В.Н. и др. Эпидемиологические характеристики единичных заболеваний кампилобактериозом городских жителей //ЖМЭИ. 1994. - №4. - С.32-35.

160. Минаев В. И., Черкасский Б. Д., Минаева Н. 3. Лабораторная диагностика кампилобактериоза в современных условиях//ЖМЭИ. -1991. №8. -С. 18-21.

161. Минаев В. И., Черкасский Б. Л., Волохович Т. Т. и др. Ведущие пути и факторы передачи возбудителя кампилобактериоза в современных условиях//ЖМЭИ. -1992. №11-12.- С. 32-34.

162. Минаев В. И., Черкасский Б. Л., Волохович Т. Т. и др. Ведущие пути и факторы передачи возбудителей кампилобактериоза в современных условиях //ЖМЭИ. -1995. №2. - С. 39-41

163. Минаева Н.З. Внутривидовое типирование кампи лоб актеров как элемент эпидемиологического надзора за кампилобактериозом: Автореф. дисс. канд.мед. наук.- М., 1992.

164. Минаева Н. 3., Черкасский Б. Л., Минаев В. И. Эпидемиологическое маркирование штаммов термофильных кампилобактеров // Тез. докл. 6-го Всеросс. съезда микробиологов, эпидемиологов, паразитологов, г. Н. Новгород.-1991 .-Т. 1 .-С. 110-111

165. Морозов В.Г. Роль пептидных биорегуляторов тимуса в патогенез иммунодефицитов. — Автореф. Дис. . докт. мед. наук. — Ташкент, 1990.

166. Мусатов Ю.С., Днепровская Л.Г., Дейкова Е.З., Пахомов Ю.О.

167. Случай выделения листерий от новорожденного ребенка. Актуальные проблемы ОО и природно-очаговых инфекц. болезней. Тезисы докладов науч. конф., посвященной 60-летию Иркутского противочумного института, октябрь 1994г. Иркутск, 1994.-С. 116-117.

168. Надлежащая практика производства медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.3.2.1288-03. МЗ и соц.развития РФ. М., 2003. - 80с.

169. Носков Ф.С. Очистка конъюгатов от непрореагировавшего флюорохрома //Иммунологическая диагностика вирусных инфекций /Под. ред. Т.В.Перадзе, П.Халонена. М., 1985. - С.254.

170. Обгольц А.А., Березкина Т.В., Иванова И.А. идр.Природно-очаговые болезни человека: Республиканский сб. науч. работ Омск, 1990. -С.123-126.

171. Овсова Л.М. и соавт. Влияние различных аминокислот и солей аммония в составе синтетической питательной среды на продукцию холерного энтеротоксина //Журнал микробиол. 2003. - №4. - С. 108-110.

172. Олсуфьев Н.Г. Листериоз. Лабораторная диагностика особо опасных и молоизвестных бактерильных инфекций. Ростов-на-Дону, 1963. -С.336.

173. Олсуфьев Н.Г. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней /Под редакцией К.И.Матвеева М.:Медицина, 1973. - С.531-547.

174. Онищенко Г.Г., Монисов А.А., Гульченко Л.П., Федоров Ю.М. Заболеваемость зооантропонозными и природноочаговыми инфекциями и меры по их профилактике //ЖМЭИ. 1999. - №4. С.14-18.

175. Панова Н.В. Разработка нового стимулятора роста микроорганизмов и изучение его влияния на их биологические свойства на примере некоторых вакцинных штаммов бактерий //Дис. . канд. биол. наук. Ставрополь, 2006.- 173 с.

176. Печникова И.В., Тинкер А.И. Влияние сред высушивания на способность чумной вакцины ЕВ вызывать продукцию антител в организме экспериментальных животных //Проблемы особо опасных инфекций. Иммунол., микробиол. Саратов, 1977. - Вып. 3. - С. 32-34.

177. Пищевые зоонозы в России в 1990-1991 гг. : Информационный бюллетень ЦНИИЭ №1 ( под редакцией Б.Л. Черкасского ) М., 1994. 117 с.

178. Подзолкова Г.Г., Климова И.М, Ефременко В.И. и др. Применение количественной иммунофлуоресценции для определения адсорбционной способности магнитных иммуносорбентов // Журн. микробиол. 1988. -№ 5. - С.56-58.

179. Попов А.Ю. Система анализов рисков. Как наиболее эффективно соответствовать требованиям GMP? // Чистые помещения и технологические среды. 2005, №5. - С.26-30.

180. Порин А. А. Совершенствование методов выделения бактерий рода Campylobacter. Автореф. дис. . канд. мед. наук. Л., 1990. - 28 с.

181. Практическая химия белка. -М.: Мир, 1989. С.22-23.

182. Пригода А.С., Муратов B.C. Современное состояние и перспективы получения и использования питательных сред. Обзор. Информ. /ВНИИ систем. Упр., эконом, исслед. и НТИ. М., 1989. - 55 с.

183. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения. Москва, 1983.

184. Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н., Литвин В.Ю. и др. Патогенные листерии в почве и в ассоциации с водорослями: обратимый переход в некульти виру емное состояние //ЖМЭИ. 1997. - №3. - С.3-10.

185. Пшеничная Л.П., Тукачинский С.Е. Влияние частичной модификации сывороточного альбумина на его конформацию и комплексообразую-щую активность //ЖМЭИ. 1977. - №3. - С. 115.

186. Радчук Н.А., Дунаев Г.В., Колычев Н.М. и др. Ветеринарная микробиология и иммунология. М.:Агропромиздат, 1991. - 383 с.

187. Родина Л.В., Маненкова Г.М., Тимошкова В.В. Факторы и пути заражения листериозом населения Москвы //Эпидемиол. и инфекционные болезни. 2002. - №4. - С.48-50.

188. Салова Н.Я., Голованова Н.П., Шестеперова Т.И. и др. Современное состояние лабораторной диагностики листериоза в санэпидслужбе г.Москвы //В сб. Листериоз на рубеже тысячилетий. — Покров. 1999. -С.68-71.

189. Сапроненков Д. М., Арсеньев Ф. В., Сафонова Н. В. Кампилобактериоз в клинической практике // Клин, медицина. -1991. №12. - С. 3-6.

190. Сафонова Т. Б., Спирина Т. С., Тараненко JI. А., Соболев В. Р. Кампилобактериоз у людей ( обзор литературы ) // Лаб. дело. -1988. №6. -С. 41-44.

191. Сафонова Н. В., Хазенсон Л. Б., Матвеева 3. Н. и др. Лабораторная диагностика кампилобактериоза. Л., 1987. — 127 с.

192. Сафонова Н. В., Хазенсон Л. Б., Матвеева 3. Н. и др. Этиология, клиника и диагностика кампилобактериоза : Метод, рекомендации. Л., 1988. -58 с.

193. Сахаров П.П., Гудкова Е.И. Листериозная инфекция. М. Мед гиз, 1959.-С.10-11.

194. Скуч Д., Уэст Д. Основы аналитической химии. М: Мир, 1979. - Т.1. - С.71-73.

195. Смирнов В.В., Чаплинский В.Я., Андреева З.М., Богоявленская Л.Б. Научные основы производства диагностических препаратов (сыворотки для идентификации энтеробактерий). Киев: Наукова Думка, 1980. 195с.

196. Соммер Л. Стереохимия и механим реакций кремнеорганиче-ских соединений.- М.: Мир, 1966. 192 с.

197. Сомов Г.П., Беленева И.А., Бузолева Л.С., Дзадзиева М.Ф., Бе-седнов А.А. Экологические аспекты листериоза в Приморском крае. //ЖМЭИ. 1997. - № 5. - С. 78-82.

198. Сотирова П., Александрова Ст. Въерху разпространението на Campilobacter jejuni в телята и вхранителни продукта от животински произ-ход //Эпидемиол. Микробиол. и инфекц. Болести. 1989. - Т.266, №1. - С.35-38.

199. Станиславский Е.С. Бактериальные структуры и их антигенность. -М.: Медицина, 1971.-220 с.

200. Стоев К.Г., Чибисова В.А., Шаханина К.А. и др. Новый количественный иммунофлуоресцентный метод определения IgE с помощью специфического сефарозного иммуносорбента и люминесцентного микроскопа // Журн. иммунология. М, 1981. - N1. - С.85-88.

201. Сучков Ю.Г., Канатов Ю.В. Сенсибилизация формалинизиро-ванных эритроцитов иммунными гамма-глобулинами //ЖМЭИ. 1970. - №7. - С.112.

202. Табаков П.К., Чибрикова Е.В., Шуркина И.И. и соавт. Быстрый способ получения меченных флуоресцентными красителями антител //Журн. микробиол. 1962. - Т. 10. - С.26-30.

203. Тамбовцев Е.П., Ахметкалиев С.Г., Пятницкий Н.П. Методы статистической обработки результатов серологических реакций // Журн. микробиол. 1969.- №10.-С.26-31.

204. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. М.: «Медицина для всех». - 2002. - 195 с.

205. Тертых В.А. Особенности хемосорбции спиртов на поверхности кремнеземов//Адсорбция и адсорбенты. 1983. - В.11. -С.3-11.

206. Тертых В.А. Химические реакции с участием поверхности кремнезема //Кремнеземы в медицине и биологии . Сб. науч. тр.- Киев-Ставрополь, 1993. С.41-51.

207. Терехова В.Е., Бузолева Л.С., Айздайгер Н.А. и соавт. Окраинные моря северо-западной части Тихого океана как среда обитания Listeria monocytogenes и эпидемиологическое значение этого явления //Эпидемиол и инфекционные болезни. 2002. - №1. - С. 43-46.

208. Тимченко Н.Ф., Булганов В.П., Булах Е.В, Яснецкая Е.Г., Журавлев Ю.Н. Взаимодействие Yersinia, Listeria, Salmonella с растительными клетками //ЖМЭИ. № 1. - 2000. - С. 6-9.

209. Ткаченко Е. И., Маковичук А. М., Белик В. В., Владимирова Н. Н. О кампилобактериозе человека, вызванном С. fetus // Клин, медицина. -1992. -№2. -С.1-73.

210. Тропина Т.Д., Хашимова П.Р., Кондратьева Л.А. Биологическая активность аллергена, выделение из листерий // Проблемы краевой инфекционной патологии и гигиены. Душанбе, 1984. - С. 105-107.

211. Тюменцева И.С. Научно-методические основы конструирования и усовершенствования производства диагностических тест-систем для выявления возбудителей особо опасных и других инфекций: Дисс. . доктора мед. наук. Ставрополь, 1996. - 327с.

212. Тюменцева И. С., Афанасьев Е. Н., Ефременко В.И., Базиков И. А., Алиева Е.В. Способ получения диагностической сыворотки // Патент на изобретение № 2135210. Зарегистрирован в Гос. реестре изобретений РФ 27 августа 1999 г. Бюл. № 24 от 27.08.1999.

213. Урбах В.Ю. Статистические методы в биологических и медицинских исследованиях. — М.:Медицина, 1975. 296 с.

214. Фадеева Л.Л., Халецкая Э.В., Селеднева А.Ю. Консервация вирусов различных групп для целей длительного хранения //Методы исследования в молекулярной, общей и медицинской вирусологии. -М., 1987. С.66-73.

215. Фармакопейная статья ФС 42-344ВС-90. Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов. 2000. - 77с.

216. Фихте Б.А. Дезинтеграция микроорганизмов. Задачи и перспективы //В Сб.: Дезинтеграция микроорганизмов: Матер. Всесоюзн. конф. по дезинтеграции микрорганизмов (25-27 окт., 1972 г.) Пущино-на-Оке, 1972. -С. 5-14.

217. Фонталин Л.Н., Певницкий Л.А. Иммунологическая толерантность. -М., 1978.-282 с.

218. Фрайфельдер Д. Физическая биохимия. М.: Мир, 1980.- 73 с.

219. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Тималин иммуномодулирующий препарат из тимуса //Тимус и его влияние на организм. Томск: изд-во Томского университета, 1982. - С.201-203.

220. Хазенсон Л.Б., Сафонова Н.В., Матвеева З.Н. и др. Выделение и идентификация кампилобактериозов из материала от людей, сельскохозяйственных животных и птиц //Острые кишечные инфекции. 1985. - Вып. 9. -С.120-121.

221. Хазенсон Л.Б., Сафонова Н.В., Матвеева З.Н. и др. О распространении и резервуарах кампилобактериоза //Сб. тез. докл. V респ. Съезда эпидемиологов, микробиологов, инфекционистов и гигиенистов ЭССР. Таллин, 1987. - С.50-61.

222. Хашимова П.Р., Кондратьева Л.А., Тропина Т.Д. Изучение антигенов листерий и выделенных из них белковых фракций //ЖМЭИ.- 1988 -№9.-С. 16-19.

223. Цыбанова Л.Я., Колбасов Д.В., Котляров В.И., Цыбанов С.Ж. Исследование листерий с помощью праймеров, комплементарных ACTA гену //«Листериоз на рубеже тысячелетий»: Материалы междунар. симпозиума. -18-20 мая, 1999. Покров, 1999. - С.86-88.

224. Цыбанов С.Ж., Котляров В.М. Использование метода анализа генома для идентификации патогенных листерий //«Листериоз на рубеже тысячелетий»: Материалы междунар. симпозиума. 18-20 мая, 1999. - Покров, 1999. - С.83-84.

225. Цыбин Б.П. , Таран И.Ф. Оценка диагностических свойств бруцеллезного антигенного эритроцитарного диагностикума //Проблемы особо опасных и малоизвестных бактериальных инфекций. Ростов-на Дону, 1976. -С.336.

226. Чайка Н.А., Хазенсон Л.Б., Бутцлер Ж.-П. Кампилобактериоз. - М.:Медицина, 1988.- 351 с.

227. Чард Т. Радиоиммунологические методы. М.:Мир, 1981. - 246с.

228. Чевелева Т.С.,Цыбанова Л.Я., Котляров В.М., Цыбанов С.Ж. Ге-нотипирование хромосомной ДНК различных штаммов листерий с помощью ПТTP //«Листериоз на рубеже тысячелетий»: Материалы междунар. симпозиума. 18-20 мая, 1999. - Покров, 1999. - С.84-86.

229. Черепахина И.Я., Козловский В.Н., Ефапова Е.А. Динамика образования антител к вакцинному штамму Francisella tularensis при различных схемам иммунизации // Микробиол. журн. 1990. - Т.52, № 2. - С.89-93.

230. Черкасский Б. Л., Воротынцева Н. В., Ющук Н. Д. и др. Эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика кампилобактериоза. Информационное письмо МЗ СССР. М., 1989. 25 с.

231. Черкасский Б. Л., Воротынцева Н. В., Ющук Н. Д. и др. Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза. М., 1989а.-40 с.

232. Черкасский Б. Л., Котова А. Л., Минаев В. И. Факторы риска и пути передачи возбудителей кампилобактериоза на промышленных птицекомплексах//ЖМЭИ.-1991. -№12.-С. 28-31

233. Черкасский Б. Л., Минаев В. И., Александрова Н. 3. и др. Клинико-эпидемиологические аспекты кампнлобактериоза в Москве и Московской обл. //ЖМЭИ. -1989. №8. - С. 40-43

234. Черкасский Б.Л., Амиреев С.Н., Кноп А.Г. Эпидемиологический надзор за зоонозами. Алма-Ата, 1999. - 120 с.

235. Черкес Ф.К. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям /Ф.К.Черкес. М.: Медицина, 1974. - 221 с.

236. Черномор дик А. Б., Озерянская Н. М. Диски для определения чувствительности бактерий к фуразолидону // Лаб. дело.-1982.- №6,- С.41-43

237. Честнова Т.В. Диагностика листериоза у новорожденных. //Эпид. и инф. болезни.- 2001.- № 3,- С.45-47.

238. Чуйко А.А. Химия поверхности Si02, природа и роль активных центров кремнезема в адсорбционных и химосорбционных процессах. Автореф. дис. доктора хим. наук. - Киев, 1971. - 28 с.

239. Чуйко А.А., Горлов Ю.И. Строение поверхности пирогенного кремнезема, природа его активных центров и механизмы сорбционных процессов //Кремнеземы в медицине и биологии: Сб. науч. трудов. Киев-Ставрополь, 1993. - С.4-41.

240. Шабловская Е.А., Кирик Д.Л., Кролевецкая Н.М. Современные аспекты эпидемиологии кампнлобактериоза (Обзор литературы) //Кишечные инфекции. Респ. межведомст. сб. Киев: «Здоровья», 1991. - Вып. 22. - С.62-70.

241. Шамардин В.А., Каральник Б.В. Способ получения эритроцитар-ного диагностикума. АС СССР, №634749 от 11.07.77, Б.И. №44, 1978.

242. Шарма Р.К. Обнаружение листерий в продуктах морей и океанов //В е.: Листериоз на рубеже тысячилетий. — Покров, 1999. — С.97-99.

243. Швалко А. Д., Швалко О. Г. Кампилобактериоз у детей // Вопр. охраны материнства и детства. -1987. №4. - С. 66-70.

244. Шварцман Я.С., Сйницын В.А. Реакция непрямой гемагглютина-ции (Обзор литературы) //ЖМЭИ.- 1961. № 9.- С. 97-102.

245. Шин Н.Г., Ременцева М.М., Еремин Ю.П., Федосеенко В.М. Ультразвуковая дезинтеграция бруцелл //Изв. А.Н.Каз. ССР. Сер. биол., 1973.-№ 1.-С. 68-71.

246. Шумилов К.В., Скляров О.Д., Каравайчик A.JL, Белик В.В. Кампилобактериоз собак //Ветеринария. 2001. - №10. - С.46-51.

247. Ющук Н.О., Венгеров Ю.Я. Кампилобактериоз //Лекции по инфекционным болезням. М., 1999. - СЛ85-193.

248. Эльпинер И.Е. О механизме действия ультразвуковых волн на микроорганизмы //Микробиология,- 1955.- Т. 24. В.З. - С. 371-381.

249. Якубов Ш.Х., Абидов А.А., Бахдырова У.А. Острые кишечные заболевания, обусловленные кампилобактериями //Тез. XVII съезда Всесоюз. об-ва эпидемиол., микробиол и паразитол (г.Алма-Ата, сент., 1989 г.) М.,1989. Т.1. - С.192-194.

250. Якубов Ш. X., Абидов А. А., Махкамова О. И. Изучение кампи-лобактериозной инфекции в Узбекистане // Мед. журнал Узбекистана.1990.-№10.-С.58-59

251. Якубов Ш. X., Абидов А. А., АтабековН С., Бахадырова У. А. Влияние кампилобактерии на этиологию острых кишечных инфекций // Мед. журн. Узбекистана. 1991. - №7. - С. 9-12

252. Anders В.J., Lauer В.A., Paisley J.W. Campylobacter gastroenteritis in neonetes //Amer. J. Dis. Child.-1981,-V. 135, №19.- P.900-902

253. Annan-Prah A., Jane M. The mod of spread of Campylobacter jeju-ni/coli to briler flocks//J. veterMed. Ser. B. -1988.-V. 35, N1. -P.l 1-18.

254. Avrameas S.M., Ureal J. Methode de marquage d antigene et d anti-corps avec des enzymes et sons application en immunodiffusion //C.R. Acad. Sci. (D). 1966. - Vol. 2. - № 26. - P. 2543-2545.

255. Avrames S.M. Coupling of enzymes to proteins with glutaraldehyde: use of the conjugates for detections of antibodies //Immunochemistry. 1969.-Vol.6.- № 1.- P. 43-52.

256. Bannerman E., Yersin M-N.and Bille J. Evalution of Organon -Teknika Micro-ID Listeria system: Applied and Environmental Microbiology. -1992, 58,2011-1015.

257. Barret T.J., Blace D.A., Brown S.L., Hoffman L., Lort J.M., Feeley J.C. Enzyme-linked immunosorbent assay for human antibodies to Salmonella thuphi Vi antigen //J. Clin., Microbiol. 1983. -V. 17. - № 4. P. 625-627.

258. Bascom W.D., Timmons R.B. Hydrolysis of triethyletho- xysilane at the silica-carbon tetrachloride interface //J.Phys., Chem, 1972. V.76. - N 22. -P.3192-3200.

259. Belland R., Trust T. Deoxyribonucleic acid sequence related-ness between thermophilic members of the genus Campylobacter // J. Gen. Microbiol.-1982.-V. 128,-P. 2515-2522v v

260. Belyi Y.F. Intracellular parasitism of microorganisms 1996. -Springer-Verlag Gmb&Co.KG. -P.19-24

261. Berrang M.E., Bracket R.E., Beuchat L.R. Growth of Listeria mono-cytogenes on fresh vegetables stored under controlled atmosphere //J.Food. Prot/ -1989.- V.52.-P.702-705.

262. Berry J.T., Hugdahl M.B., Dayle M.P. Colonization of gastrointestinal tructs of chicks by Campilobacter jejuni // Appl. And Environ Microbiol. 1988. -V.53, N 10. — P.2365-2370.

263. Berthier A.M., Soustrey V. Listeria, listeriose //Techn. et Biol.1988.-14, №3.-P. 112-117.

264. Beumer R.R., Giffel M.C., Doornik P.C., and Cox LJ. The isolation of Listeria monocytogenes from food and environmental samples using enhanced haemolisis agar: In Book of Abstracts Isopol XI, 1992, 23-24.

265. Bille, J., Catimal, В., Bannerman, E., Jaquet, C., Yersin, M-N, Ca-niaux, L, Moget, D. and Rocourt, J. API Listeria, a new and promissing one-day system to identify Listeria isolates; Applied and Environmental Microbiology. 1992, 58, 1857-1860.

266. Bing G.V., Weyaland J.G.M., Stavitski A.B. Proc. soc. Exp. Biol. Med. 1967.-Y.124.-P.1166.

267. Blake M.S., Gotschlich E.C. Purification and partial characterization of thi major onter membrane protein of Neisseria gonorrhoeae //Infect. Immun. -1982. Vol.36, N 1. - P.277-283.

268. Blaser M. Campylobacter fetus ssp. jeuni: a laboratory manual //Int. Centre for diarrhoeal disease research, Bangladesh, 1980, special publ. J.7.

269. Blaser M.J. C. fetus ssp. jejuni: a labor manual // Intern, centre for diarhoeal disease research, Bangladesh.-1980.- №7. P. 118-119.

270. Bochm Y., Schneider M. Uber die Hydroxylgruppen an der Oberfla-chen des amprphen Siliciumdioxyds "Aerosil" und ihre Reactionen //Zahargah undallem. Chem. 1959. -301. № 5-6. - S.326-335.

271. Bokkenheuser V., Koornhof H.J. //Nature. 1959.-V.184,- P.109.

272. Bolton F., Robertson L. A selective medium for isolation Cam-pyiobacter jejuni / coli // J. Clin. Pathology.-1982.-V. 35.- P. 462-467

273. Boyden S.V. The adsorption of protein on erythrocyes treated with tannic acid and subsequent hemaggutination by antiprotein sera //J. Exp. Med.-1951.-N93.- P.107-120.

274. Bradbury W., Marco M., Hennessy J., Penner J. Occurrence of piasmid DMA in serologically defined strains of C. jejuni and C. coli // Infect. Immun. 1983.- V.40, №2.- P. 460-463.

275. Breer С., Schopfer К. Listeria and food // Laucet. 1988. - N 11. - P.

276. Butzler J.-P., Skirrow M. B.Campylobacter enteritis// Clin. Gastroenterol.-1979.- V. 8.- P. 737-765.

277. Butzler J.-P., Boeck M., Goossens H. New selective medium for isolation of Campylobacter jejuni from faecal specimens // Lancet.- 1983.-V. 1.- №8328.-P. 818

278. Butzler J.-P. Campylobacter Infection in Man and Animals, 1984.1. P. 280.

279. Cacho J., Aguire P., Hernanz A. et al. Evaluation of a disk method for detection of hippurate hydrolisis by Campylobacter spp. // J. Clin. Microbiol.- 1989.- V.27.- №2.- P. 359-360

280. Campylobacter 2: Proceedings of the Second International Workshopon Campylobacter infections // Ed. by Pearson A., Skirrow M., Rowe B. e.a.London: Public Health Laboratory Service, 1983.- 200 p.

281. Campylobacter: epidemiology, pathogenesis and biochemistry.- Lancaster е. a., PMTP Press, 1982. 117 p.

282. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the microplate method of enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of plant virus // J. Gen. Virol. 1977. - Vol.36, N 3. - P. 475-483.

283. Colomina J., Villar J., Buesa J., Borras R. Enzymatic activities in Campylobacter jejuni. Camoylobacter coli and Campylobacter lari // Re-vista Argentina de Microbiologna. 1997.- V. 29. - P. 300-305.

284. Coons A.H., Kaplan M.H. Localisation of antigen in tissue cells // J. Exp. Med. 1950.-V.91,N 1.-P.81-89.

285. Corrigan P.J., Seneviratna P. Pesticide residues in Australian meat /Veter. Rec., 1989. T,125. -N8. - P. 18-184.

286. Cossart Pascale, Kocks Christine. The actin based motility of the facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes //Mol. Microbiol. -1994.- 13, №3.-P. 395-402.

287. Costas M., Owen R. The classification and identification of Campylobacters using total protein profiles // Campyiobacter 2.- London, 1983.- P. 40.

288. Cox , L.J., Kleiss, Т., Cordier , J. L., Cordellana C., Koncel, P., Pe-drassi, C., Beumer , R.R. and Seibenga , A. Listeria spp. In food processing , non food and domestic environments: Food Microbiology. 1989, 6, 49-61.

289. Deitrich F.M., Frichkneett H. //Nature. 1968. - V. 217. - P.265.

290. Dekeyser P., Gossuin-Detrain M., Butzler J.-P., Sternon J. Acute enteritis due to related vibrio: first positive stool cultures // J Infect. Dis.-1972.-V.125.- P.390-392

291. Desheng Lu, Zhixin Chen, В dun Wang Age distribution of diarrhoea! and healthy children infected with Campylobacter jejuni // J. Trop. Med. and Hyg.-1992.-V. 95, №3.- P. 218-220

292. Doru P., Krabisch P., Altmeyer M., Bohel-Nickel E. Ineportance and distribution of Campyiobacter and Listeria infections in poultry // Lesz. nauk AR Wrocmawin Wet.-1992.- №52.- P. 85-102.

293. Dykes G.A., Geornaros I., Papathanasopoulos M.A., Holy A. Von. Plasmid profiles of Listeria species associated with poultry processing //Food. Microbiol. 1994. - 11, № 6. - P. 519-523.

294. Eieybe I. Campylobacter infections: domestic cows as a possible source of infection in Nigeria//Med. Lab. Sci.-1983.-V. 40.-N22.-P. 145-147

295. ElharrifZ., Megrand F. Enzymatic profiles of thermophilic Campylobacters // Campylobacter 2. London, 1983.- P. 44

296. Farber J.M., Peterkin P.I. Listeria monocytogenes, a food-borne paty-hogen //Microbiol. 1991. - Rev.55. - P.479-511.

297. Fenlou D.K. Listeria monocytogenes in nlie natural environment /Лп: E.T. Ryser and E.H. Marth (de) Listeria, listeriosis and food satety 2nd ed/ Marcel Dekker Inc. New York, NY. - 1999. - P.21-37.

298. Fennel C.L., Totten P.A., Quinn T.C. et al. Characterization of Campylobacter-like organisms isolated from homosexual man // J. Inf. Dis.-1984.-V. 149.-N21.-P.5 8-66

299. Fey H., Pfister M., Ruegg O. Comparative evalution of different en-zyme-linced immunosorbent systems for the detection of staphylococcal entero-toxins А, В, С and D //J. clin. Microbiol.- 1984. Vol. 19. -№1. P. 34-38.

300. Finch M., Blake P. Foodborne outbreaks of Campylobacteriosis // Amer.J. Epidemiol.-1985.- V. 122,- P. 262-268

301. Fleming M.P. Association of Campylobacter jejuni with enteritis in dogs and cats // Vet. Res.- 1983,- V. 113- P.372-374.

302. Fliming B. Listeria monocytogenes Anvendelseat gen probe test tie hurting identification of Listeria monocytogenes //Dan veterinartidsskr. 1993 -76, №23.-P. 1023-1025.

303. Fuchs R.S., Surendran P.K. Incidence of Listeria in tropical fish and fishery products //Lett Appl. Microbiol. 1989. -N 3. - P.49-51.

304. Fujisana Т., Mori M. Evalution of media for determining hemolitic activity and thate of API Listeria system for identifying strains Listeria monocytogenes: Journal of Clinical Microbiology.-1994 V. 32 - P.l 127-1129.

305. Fulthorpe A.J. //J.Hyg.-1957.- V.55, N 3.- P.382-401.

306. Fumarola D., Miragliotta G., Jirillo E. Endotoxin-like activity associated with heat-killed organisms of the genus Campylobacter // Campylobacter: epidemiology, pathogenesis and biochemistry.- Lancaster e. a., 1982.- P. 185-187.

307. Galsnothys В. Role of the cell surface in virulence of Listeria monocytogenes. "Ann. Inst. Pasteur. Microbiol", 1987, 138, № 2, 273-276.

308. George H., Hoffman P., Smibert R. et al. Improved medis for growth and aerotolerance of Campylobacter fetus // J. Clin. Microbiol.-1978.- Ne8.-P. 36-41.

309. Glass R., Stoll В., Huq M. et al. Epidemiologic and clinical features of epidemic Campylobacter jejuni infection in Bangladesh // J. Infect. Dis.- 1983.-V. 148,N22.-P. 292-296.

310. Grados O., Bravo N., Black R.E., Butzler J.P. Paediatric campilibacter diarhoea from household exposure to live chickens in Lima, Peru // Bull. Woid Health Organ. 1988. - V.66, N 3. - P.369-374.

311. Gray M.L., Stafseth H.J., Thorp F. et al. A new technique for isolating listerellae from bivine brai // 1948. V. 55. - P. 471-476.

312. Greenwood M.H. Roberts D., Burden P. The occurrence of Listeria species in milk and dairy products: a national survey in England and Wales // Int. J. Food. Microbiol. -1991.-N12. P.197-206

313. Gubitz G., Mihellyes S. Direct separation of 2-hydroxy acid enantio-mers dy high performance liquid chromatography on chemically bonded chiral phases // Chromatographya. 1984. - V. 19. - P. 257-259.

314. Gurtis G.D.W., Mitchell R.G., King A.F., Griftin E.J. A selective differential medium for the isolation of Listeria monocytogenes // Lett. Appl. Microbiol. 1989. - V. 8. - 95-98.

315. Hao D. Y.-Y., Beuchat L.R., Brackett R.E. Comparison of media and methods for detecting and enumerating. Listeria monocytogenes in refrierated cal-bage. "Appl. And Environ. Microbiol". 1987. - V. 53, N 5. - P. 955-957.

316. Harmayani, E., Sofos J.N., and Schmidt G.R. Fate of Listeria monocytogenes in raw and cookeed ground beef with meat processing additives. International Journal of Food Microbiology. 1993. - N 18. - P. 223-232.

317. Harvey S., Greenwood J.Relationships among catalase-positive campyiobacters determined by deoxyribonucleic acid- deoxyribonucleic acid hybridization // Inf. J. Syst. Bacteriol.-1983.-V. 33, N 2.- P. 275-284.

318. Healing T. D., Greenwood M. H., Pearson A. D. Campylobacters and enteritis // Rev. Med. Microbiol.-1992.- V. 3, Ns3.- P. 159-167

319. Hebert C.A., Hollis D.C., Weaver K.E. 30 years of Campylobacters: biochemical characteristics and a biotyping proposal to for Campylobacter jejuni //J.Clinic. Microbiol.-1982.-V. 15,Ns6.-P. 1065-1073

320. Hof H., Hefner P. Pathogenicity of Listeria monocytogenes in comparison to other Listeria species. "Infection". 1988.- Vol. 16, N2. - P. 141-144.

321. Hum B.A.L., Chantler S.M. Production of reagent antibodies // Methods in Enzymology. 1980. - V.70, N 5. - P.104-142.

322. Inoue Yuichi, Ohtsubo Takakazu, Mori Norihiko et al. A case of meningitis caused by Campylobacter fetus spp. fetus // J. Jap. Assoc. Infec. Dis. 1993. - Vol. 67, N 21. - P.66-70.

323. Istre G., Blaser M., Shillam P. Campylobacter enteritidis associated with undercooked barbecued chicken // Amer. J. Publ. Hlth.- 1984.- V. 74.-№11.-P. 1265-1267

324. Jemmi T. Actual knowledge of Listeria in meat and fish products //Mitt. Ged. Lebens mittelunters Hyg. 1990. - V.31. -P. 144-157.

325. Jimenez A., Velazquez J. В., Rodrigues J. et al. Biotyping of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in Spain // J. Infect.- 1994.- V. 29.-P.305-310

326. Johnson R., Lior H. Toxinenisity of C. jejuni and C. coli, associated with human enteritis // Campylobacter 2.- London, 1983.- P. 126.

327. Jonson, J. L., Doule, M.P., and Cassens, R.G. (1990) Listeria spp. in meat and meat products. Areview. Journal of Food Protection. 1953. - P. 8191.

328. Johnson R., Lior H. Toxin produced by C. jejuni and C. coli // Lancet-1983.- V. 1. -N 28370. P. 229-230.

329. Johnson W.M., Lior H. Cytotoxic and cytotonic factors produced by Campylobacter jejuni, C. coli and C. laridis // J. Clin. Microb.- 1986.-V.27, №2,- P.275-281.

330. Jones D. M., Eldridge J. Lipopolysaccharides as target antigens for bactericidal antibodies to Campylobacter jejuni // J. Med. Microbiol.-1983.-V. 17, №3.-P. 4.

331. Jones D. M., Sutcliffe E. M., Rios R. et al. Campylobacter jejuni adapts to aerobic metabolism in the environment // J. Med. Microbiol.- 1993.- V. 38, №2,- P,145-150.

332. Kampelmacher E.H., van Noorle Hansen L. Listeriosis in human and animals in the Netherlands (1958-1977) //Zentrbl. Bakt. Tly. I Abt. Orig. 1980. V. 246.- P.211-227.

333. Kaneuchi С., Ashihara M., Suigiyama G., Imaizumi T. Antimicrobial susceptibilyti of Campilibacter jejuni, Campilobacter coli, dogs, piga, and seagulls // Jap. Vet. Sci. 1988. - V.50, N3. - P.685-691.

334. Kaufman Stefan H.E. Listeriosis findinds current concerh //Microb. Pathog. - 1988.- 5, № 4. - P. 225-23l.Khan M. Altaf. Amino acid requga // Zbl. Bakteriol. - 1989. - 271, N 2. - P. 146-152.

335. Khan M. Altaf. Amino acid requga // Zbl. Bakteriol. 1989. - 271, N 2. - P.146-152.

336. Kip J., Van-Haperen P., Kraak J.C. R-N-(pentafluorobenzoyl)-phenylglycine as a chiral stationary phase for the separation of enantiomers by highperfomance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1986. - V. 356, № 3. — P. 423-427.

337. Klinger J.D. Isolation of Listeria: a review of procedures and future perspectives // J. Infection. 1988. - V. 16. - P.89-105.

338. Kuschner R.A., Trofa A.F., Thomas R.J. et al. Use of azithromycin for the treatment of Campylobacter enteritis in- travelers to Thailand, an area where ciprofloxacin resistance is prevalent // Clin. Infect. Dis.-1995.- V.21, №3.-P.536-542.

339. Lafong A.C., Bamford K.B. Low incidence of Campylobacter enteritis in Northern Ireland // J. Hyg.- л986.- V.97, Na3.- P.479-482.

340. Lantz P. G., Hahn-Hagerdal B. and Radstrom P. Sample preparation methods in PCR based detection of food pathogens: Trends in Food Science and Technology, 5, 1994, 384-389.

341. Leasor S.B., Foegeding P.M. Listeria spp. in commercially broken raw liquid whole eggs //J. Food Prot 1989. - V. 52. - P. 777-780.

342. Lennon D., Lewis В., Mantell C., Beckroft D. et al. Epidemic perinatal listeriosis //Pediatr Infect. Dis. 1984. - N 3. - P. 30-34.

343. Levitt J. The role of "SH" and "SS" in the resistance of cells to high and low temperature //The cell and environmental temperature /Ed. A. S. Iroschin. London Pergamon Press. 1967. - P. 269-274.

344. Lim Y. S., Tay L. . A one-year study of enteric Campylobacter infections in Singapore//.!. Trop. Med. and Hyg.- 1992.-V. 95, №2.- P. 119-123

345. Lindsay D.G. Monitoring abdtesting for residues of therapeutics in meat. / Veter. Rec., 1983. V.l 12, N 20. - P.469-471.

346. Lior H., Woodward D., Edgar J. et al. Serotyping of Campylobacter jejuni by slide agglutination based on heat- labile antigenic factors // J. Clin. Microb.- 1982.-V. 15, N25.-P.761-762

347. Lorber B. Listeriosis //Clin. Infect. Dis. 1997. - V.24. - P.l-11.

348. Lovett J. Isolation and identification of Listeria monocytogenes in daily products//J. Assoc. Off Anal. Chem.- 1988.-V/71.-P.658-660.

349. Low J.C. Donachie W. A review of Listeria monocytogenes and lbsteriosis //J. Vet. -1997. -V. 153. P. 9-29.

350. Luechtefeld N., Reller L., Blaser M., Wang W.-Z. Comparison of atmospheres of incubation for primary isolation of Campylobacter fetus subsp. jejuni from animal specimens: 5% oxygen versus candle jar//J. Clin. Mi-crobiol.-1982.-V. 15, №1.-P. 53-57

351. Luechtefeld N., Wang W. Hippurate hydrolisis by and TTC tolerance of Campylobacter fetus//J. Clin. Microbiol.-1982,-V. 15.-Nal.-P. 137-140.

352. Mac. Donald, F. and Sutherland , A. D. Impotant differences beetwen the generation times of Listeria monocytogenes and Listeria innocua in two Listeria enrichment broths : Journal of Dairy Research 1994, 61, 433-436.

353. Mascart-Lemone F. et al. // Campylobacter 2,- London, 1983.- P. 7172.

354. McCardell W., Modden J., Stanfield J. Effect of iron concentration ontoxin production in C. jejuni and C. coli // Can. J. Microb.-1986.- V. 32.- P. 395-401

355. McCarthy S.A. Listeria in the environment /Яп A.J.Miller, J.L.Smith, G.A.Somkuti (ed), Food listeriosis Elsevier, New York, NY, 1990. P.25-29.

356. McFadyen J., Stockman S. Report of the Depart mental Committee Appointed by the Board of Agriculture and Fisheries to Inguire into Epizootic Abortion //Her Majesty's Stationery Office, London IU, Appendix D.-1909.- P. 156.

357. Megraud F. Isolation of Campylobacter spp. from pigeon feces by a combined enrichment-filtration technique // Appi. Environ. Microbiol.-1987.- V. 53.-N26.-P. 1394-1395.

358. Michel J., Rogol M. Serotype and biotype distribution of erithro-mycine and tetracyciine resistant isolates of Campylobacter jejuni in Israel // Campylobacter 2.-London, 1983.-P. 24.

359. Mills S., Bradbury W. Human antibody response to outer membrane proteins of Campylobacter ejuni during infection // Infect Immun.- 1984,- V.43.-N 2.-P. 739-743.

360. Nachamkin I., Blaser M. J., Tompkins L. S. Campylobacter jejuni: Current Status and Future Trends, 1992. P. 207-209.

361. Nachamkin I., Hart A. Western- blot analisis of human anti-bodyresponse to Campylobacter jejuni cellular antigens during gastrointestinal infection // J.Clin.Microbiol.-1985.-V. 21, N l.-P. 33-38.

362. Nakane P.K., Pierce G.B. Enzyme-labelled antibodies: preparation and application for the localization of antigen //J. Histochem. Cytochem. 1966. -Vol. 14. -№ 12 .-P. 1084-1091.

363. Nakane P.K., Kawaoi A. Peroxidase-labelled antibody a new method of conjugation // J.Histochem. Cytochem. 1974. - V.22, N4. - P. 506-508.

364. Neimann J., Engberg J., Molback K., Wegener H.C. Risk factors associated with sporadic campylobacteriosis in Denmark // Proc. 4th World Congress of Foodborne Infections and Intoxications, Berlin. 1998,- V. 1.- P. 298 -303

365. Neter E., Bertram L.F., Zac D.A. et al- J. Exp. Med.- 1952.- V. 96, № 1.- P.l-15.

366. Neter E., Gorzynski E.A., Gino R.M. et al. //Canad. J. Microbiol.-1956.-N 2, 3.-P. 232-24.

367. Newell D. G., Kettley J. M., Feldman R. A. Campylobacters, Helicobacters, and Related Organisms, 1997. P. 17-27.

368. Newell D. G. Campylobacter, Helicobacter and related organisms: speciation and subtyping // Campylobacter IX: Proceedings of the 9th International Workshop on Campylobacter, Helicobacter, and related organisms.-1998.- P. 209 -212.

369. Nolla-Salas J., Plasencia A., Gasser I., Almena M., Coll P., Anto J.M. Estudio clinicoepidemiologico de la listeriosis humana en Barcelona //Med. Clin. -1994,- 103. №2.-P. 41-45.

370. Nossal G.J.V., Szenberg A., Ada G.L. et al. Single cell studies 19S antibody production // J. Exp. Med. 1964. - V.l 19, № 3. - P. 485-502.

371. Ortel S. Phage typing of Listeria //Int.J. food Microbiol. - 1989 -8, № 3, - P. 241-243.

372. Ott A. K., Reed E. Other foodborne pathogensseen in Western Australia: Abstr. // Pathology.-1993.-V. 23, №1.- P. 215

373. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gel. // Arlciv for Kemi. Mineral. О Ged. 1949. - V.261, N 14. -P.l-9.

374. Owen R. J., Fitzgerald C., Sutherland K., Borman P. Flagellin gene polymorfism analysis of Campylobacter jejuni infecting man and other hosts and comparison with biotyping and somatic antigen serotyping // Epidemiol. and Infect. -1994.-V. 113.-P. 221.

375. Pamer Eric G. Direct seguence identification and kinetic analysis of an MHC ciass I restricted Listeria monocytogenes CTL epitope. //J. Immunol. - 1994. - 152. N 2. - P. 686-694.

376. Papageorgiou D.K., Marth E.H. Fate of Listeria monocytogenes during the manufacture, ripening and storage of fetacheese // J. Food Prot. -1989. -V.52.-P. 82-87.

377. Patton C., Barrett Т., Morris G. Serotyping C. jejuni / coii by two systems: the CDC exrerience // Campylobacter 2.- London, 1983.- P. 96-97

378. Patton C., Barrett Т., Morris G. Comparison of the Penner and Lior methods of serotyping Campylobacter spp. // J. Clin. MicrobioL- 1985.- V. 22.-N4.- P.558-565

379. Penner J. L. The Genus Campylobacter: A decade of progress // Clin. MicrobioL Rev.-1988.-V. l.-P. 157

380. Penner J. L., Hennessy J., Goodbody M. Development of a scheme for serotyping Campylobacter jejuni // Campylobacter: epidemiology, pathogenesis and biochemistry.- Lancaster. 1982.- P. 89-92

381. Perez Perez G. I., Blaser M. J. Campylobacter and Helicobacter, 1992.-117 p.

382. Poison A., Potgieter G.M., Largier J.E. The fractionation of protein mixtures by linear polymers of higth molecular weigh //Biochem. Biophis. Acta. -1964. V.82. - P.463-475.

383. Pradel J.M., Battail N, Atrache V. Evalution of an automated immunoassay for the specific detection of L. monocytogenes. XII International symposium on problems of listeriosis Perth Western Australia 2-6 October 1995. P. 465.

384. Rahizan I., Rohani M. Y., Norazah A. Enteric pathogens encounte-redin community acquired diarrhoeal illness in Malaysian patients over a 3 year period 1992-1994 // Intl. Med. J.-1995.- V. 2.- P. 191 -193

385. Rayss K., Ketyi J., Schweiz Z. Allg. Path.- 1958. N 21. - P. 879891.

386. Razi M., Park R., Skirrow M. Two new tests for differentiating between strains of Campylobacter// J. Appl. Bacteriol.-1982.- №50.- P. 55-57

387. Rebier V.F. Epidemie de Listeriose-Franc-Ete 1993. Bilan au 1 erde-cembre 1993 //J. Le Bull.d. Epiter, 1994. - Vol. 7, N 1. - P. 8-11.

388. Redway K.F., Lapage S.P. Effect of carbohydrates and related compounds on the long-term presarvation of treeze-dried bacteria //Cryobiology. -1974.-V. 11, №1.- P. 73-79.

389. Reido F.X., Pinner R.W., de Lourdes Tosca M. et al. A point-source foodborne Listeriosis out break: documented incubation period and possible mild illness //J.Infect. Dis. - 1994. - V.170. - P.693-696.

390. Rice D.N., Wallen S., Nitzel O. Nebraska residue avoidance program report reducing residues in meat and milk /Proceedings, 1984. P.116-120.

391. Ritchie A., Bryner J., Foley J. Phages of thermophilic Campylobacter spp.: isolation, morphology and utility for typing // Campylobacter 2.- London, 1983.- P.101-102.

392. Rodriguez L.D., Vazquez-Boland J.A., Garayazadal J.F. et al. Microplate technique to determine hemolytic activity for routine typing of Listeria strains //J.Clin. Microbiol. 1986. - V. 24. - P. 99-103.

393. Rossetti O.L. AreseA.L. Boschiroli M.L., Cravero S.L. Coloning of Brucella abortus gene and characterization of expressed 26-kilodalton peripasmic protein: potential use for diagnosis //J.Clin. Microbiol. -1996. Vol.34, N 1. — P.165-169.

394. Ruiz-Palacios G.M., Torres J., Escamilla N.I. et al. Cholera-like enterotoxin produced by Campylobacter jejuni: characterization and clinical significance // Lancet.-1983.- P.250-251.

395. Ryser E.T., Marth E.H. Fate of Listeria monocytogenes during the manufacture and ripening of Camambert chees //J.Food Pro. 1987. - V.50. - P. 372-378.

396. Saltield N.J., Pugh E.G. Campylobacter enteritis in young child living in household with puppies //Brit. Med. J. -1987. V. 294. -N 6563/ - H.21-22.

397. Sebald M., Veron M. Teneur en bases de L'ADN et classification des Vibrions//Ann. Inst. Pasteur.-1963.-V. 105.-P.897-910

398. Seeliger H.P.R. Listeriosen Springer-Veriag KG. - Berlin, 1958 —251 p.

399. Seeliger H.P.R. u Langer В.Серологический анализ рода листерий. Его ценность и ограничения. International goumal of Food. Microbiolog. -1989.- P. 245-248.

400. Shmilovitz M., Kretzez B. Campylobacter jejuni as an etiologic agent of diarrheal disease in Israel // Israel J. Med. Sci.-1982.-V. 18.- №9.- P. 935-940

401. Shucheng D., Shunlin W., Weiyu L. et al. Campylobacter enteritis in infants and young children in China // J. Diarrhoeal Dis. Res.-1983.- V. 1, №1.- P. 17-20.

402. Schuchart A., Swaminathan В., Broome C.V. Epidemiology humen listeriosis //Clin. Microbiol Rev. 1991. -N4. -P. 169-183.

403. Sitter Т., Bauer M. F., Held E. Akute Aorteninsuffizienz nach Endokarditis durch Infection mit Campylobacter fetus subspecies fetus // DMW.-1992.-Bd. 117, N236.-S. 1355-1358.

404. Sizmur K., Walker C.W. Listeria in prepacked salads // Lancet. -1988.-P. 1167.

405. Schuster G., Borkhardt H. L. Gehauftes Auqtreten von Listeriose -Erkrankungen in Bezirk Magdeburg im Jahr 1985 //Z. gesamte Hyg. Und Grenz-geb. - 1987.-V. 33, N5.-P. 261-263.

406. Skirrow M. Taxonomy and biotyping. Isolation and detection

407. Campylobacter 2.- London, 1982.- P. 33-38.

408. Skovgaard N., Morgen C.-A. Detection of Listeria spp in faeces fromanimals in feeds, and in raw foods of animal origin. // Int.J. Food Microbiol.1988.-V. 6, N3.-P. 229-242.

409. Stavitsky A.B. Micromethods for the study and antibodies //J. Immu-nol.-1954.- V. 72.-P. 360.

410. Stehr- Green J., Mitchell P., Nicholls C. et al. Campylobacter enteritis -New Zeland, 1990 // Morbid, and Mortal. Weekly Rept: Repts Nat. Cent. Infect.Diseases, Jan. 1990 Dec. 1991. - P. 69.

411. Steibuch G., Andran R. The isolation of IgG from imanalion serra with the acid of caprilic // Arch. Of Biochem. Stray and Biophys. 1969. - V.139. -P. 279-284.

412. Steinbrugge E.G., Maxcy R.B., Liewen M.B. Fate of Listeria mono-cytogenew on ready toserve lettuce // J. Food. Prot. 1988. - V.51. - P.596-599.

413. Stortz H. (Шторц X.) Иммунофлуоресценция //Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987. - С.128-148.

414. Svedhem A., Kaijser В. Campylobacter fetus ssp. jejuni: a com-moncause of diarrhea in Sweden // J. Infect. Dis.-1980.-V. 142.- P. 353-359.

415. Swaminathan В., Hayes P.S. Sampling, isolation and rapid detection In: Isolation and identification of Listeria monocytogenes // US Departament of Health nd Human Services, CDC. Atlanta. -1989. -P 21-37.

416. Tanaka K., Shinoda S., Takai N., Takahashi H., Saito Y. The preparation of mesoporous silica gel and the nature of modification of its suctace with organoalkoxysilane //Bull. Chem. Soc. Jap., 1980. V.53. - N 5. - P.1242-1246.

417. Tay ST., Puthucheaiy S.D., Devi S., Kautner Y. Characterization of ampylobacters from Malaysia // Sing. Med. J.-1991.- V. 36.- P. 282 284.

418. Tay ST., Shamala D., Savithri D.P., Ingrid M.K. Detection of aemolytic activity of Campylobacters by agarose haemolysis and microplate assay//J. Med. Microbiol. -1995.-V. 42.- P. 175 -180.

419. Taylor D., Brown M., McDermott K. Waterborne transmission of ampylobacter enteritis // Microb. Ecol.-1983.- V. 8,- N 4.- P. 347-354.

420. The OXOID manual, 5-th ed. / OXOID Ltd.- London, 1982.- 352 p.

421. Topley W.W.G. An outline of immunity London: Eward, 1933.414 p.

422. Turkson P.K., Lindgvist K.J., Kapperud G. Isolation of Campylobacter spp and Yersinia enterocolitica from domestic animals and human patients in Kenya // Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. A.Pathol. 1988. - V.96, N 7. - P. 141-146.

423. Vazquez-Boland J.A.,KuhnM., Berche F. et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants //Clin. Microbiol. Rev. 2001. N 14. - P. 584-640.

424. Veron M., Chatelain R. Taxonomic study of the genus Campylobacter ebald and Veron and designation of the neotype strain for the type species,

425. С. fetus Smith and Taylor) Sebald and Veron // Inf. J. Sys. Bacterid.-1973.-V.23.-P. 22-134.

426. Vinzent R., Dumas J., Picard N. Septicemic grave au cours de la grossesse due a un vibrion: avortement consecutif // Bull Acad., Natl. Med. (Paris).- 1947.-V. 131.-P.90-92.

427. Wadstrom Т., Baloda S., Krovacek K. et al. Swedish isolates of C. jejuni and coli do not produce cytotonic or cytotoxic enterotoxins 11 Lancet.-1983,-V. 2, N 8355.- P. 911,

428. Walkins J., Sleath K.P. Izolation and enumeration of Listeria monocytogenes from sewage, sewage sludge, and river water //J.Appl. Bacteriol. 1981. -N 50. -P.l-9.

429. Warburg O., Christian W. Isolierung und Kristallisation des Garugs-terments Enolase //Biochem. Z. 1941. - V. 310. - P.384-421.

430. Warner D.R., Bryner J.H., Beran G.W. Epidemiologic study og cam-pylobacteriosis in Iowa cattle an possible role af unpasteurized milk as a vechiccle of infection // Am.J. Veter. Res. 1986. - V.47, N 2. - P.254-258.

431. Weaver R., Hollis D., Hebert G., Blaser M. Biotype characteristics of Campylobacter species with emphasis on strains' isolated in North America //Campylobacter: epidemiology, pathogenesis and biochemistry.- Lancaster. 1982. - P.77-89.

432. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formol behandeiter Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutination. - 2. //Schweiz. Z. Allg. Path.- 1958. -V.21.-P. 1043.

433. Weinbach R. Die Verwendbarkeit formol behandeiter Erythrocyten als Antigentrager in der indirecten Haemagglutination. - 1 //Schweiz. Z. Allg. Path. - 1959. -V.22.-P. 1.

434. Weis J., Seeliger H.P.R. Incidence of Listeria monocytogenes in nature //Appl. Microbiol. 1975. - V.30. - P.29-32.

435. Weller Т.Н., Coons A.H. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro // Proc. Soc. Exp. Biol. 1954. -V.86. - P.789-794.

436. Welshimer HJ. Izolation of Listeria monocytogenes from vegetation //J. Bacteriol. 1968. - V.95. - P. 300-303.

437. Welshimer H.J. Survival of Listeria monocytogenes in soil //J.Bacteripl. 1960. - V.80. - P.316-320.

438. Welshimer H.J., Donker-Voet J. Listeria monocytogenes in nature //Appl. Microbiol. 1971.-V. 21.-P.516-519.

439. Wesley I.V., Pinner R., Schuchart A., Perce K., Broome C.V. Epidemiology of human listeriosis abstr. S-45 // Program Abstr. 30th Interesci. Cont. An-timicrob. Aagents Chemother. ASM. Wachington, D.C. 1990. -P.324.

Информация о работе

Алиева, Елена Васильевна
доктора медицинских наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.07

Диссертация

Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии производства иммунодиагностических препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы