Разработка и совершенствование способов повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости крупного рогатого скота

Кузнецов, Григорий Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Разработка и совершенствование способов повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости крупного рогатого скота
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Разработка и совершенствование способов повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости крупного рогатого скота"

На правах рукописи КУЗНЕЦОВ ГРИГОРИЙ НИКОЛАЕВИЧ

РАЗРАБОТКА И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПОСОБОВ ПОВЫШЕНИЯ СПЕРМОПРОДУКТИВНОСТИ И ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.01 - разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Курск-2004

Работа выполнена в Институте животноводства Украинской академии аграрных наук, опытно-конструкторских, проектно-технологических организациях, промышленных предприятиях и производственных объединениях по племенной работе в животноводстве России и Украины.

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор, академик УААН Осташко Ф.И.

Официальные оппоненты:

- доктор сельскохозяйственных наук, профессор Жеребилов Николай Иванович

- доктор биологических наук, профессор Ерохин Анатолий Сергеевич

- доктор сельскохозяйственных наук, профессор Храмцов Виталий Васильевич

Ведущая организация: Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства.

Защита состоится « // » тгярря 2004 г. в ^^час, на заседании диссертационного совета Д.220.040.04. в Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова по адресу: 305021 г. Курск ул. Карла Маркса, д 70 КГСХА

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И, Иванова

Автореферат разослан « 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

Кибкало Л.И.

ни ж

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблемы, связанные с размножением животных были и остаются одними из наиболее сложных, актуальных и значимых проблем теоретической биологии. Постоянный интерес к ним не исчерпывается чисто теоретическим направлением исследований, поскольку все достижения в данной области непосредственно связаны с кардинальными вопросами развития животноводства и постоянно находят прямой и эффективный выход в практику.

Выдающийся ученый биолог, профессор Илья Иванович Иванов [1907, 1910] по праву признан основоположником и разработчиком метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, позволившего использовать наиболее ценных в племенном отношении самцов и получать от них в сотни раз больше потомства, чем при естественном спаривании.

Величайшее открытие XX века В ,К.Миловановым, КИ.Соколовской и И.В.Смирновым [1947] свойства спермиев млекопитающих в течение неограниченно длительного времени сохранять свою жизнеспособность и генетическую информацию в условиях криогенных температур дало возможность получения нужных человеку генетических комбинаций родительских пар независимо от времени существования и от места нахождения в мировом пространстве мужских и женских особей. В наше время практически все страны мира широко используют это открытие в сельском хозяйстве, биологии и медицине. Благодаря этому открытию создано и развито новое научное направление - сельскохозяйственная криобиология, что принципиально изменило характер научных исследований в области репродуктологии животных и темпы крупномасштабной селекции в животноводстве.

Повышение эффективности репродукционного процесса является решающим фактором повышения продуктивности молочного скотоводства без дополнительных капиталовложений и производственных затрат. В связи с этим во всём мире разрабатываются и внедряются в практику высокоэффективные биотехнологические приёмы, обеспечивающие повышение спермопродукции высокоценных самцов и оплодотворяемости самок.

Разносторонние исследования по асептическому получению, оценке, разбавлению и расфасовке спермы по закрытой системе, разработке аппаратуры и оборудования для её замораживания, хранения и транспортировки проведены в Институте животноводства УААН коллективом учёных под руководством профессора, академика УААН Ф.И.Осташко [1960-1978]. Однако требовали дальнейшего глубокого изучения вопросы асептического взятия, оценки, разбавления, расфасовки спермы по закрытой системе, криоконсервации, хранения и введения спермы в половые пути самок, что было важно не только для дальнейшего развития теории метода искусственного осеменения, но и внедрения в широкую практику новых способов, устройств, аппаратуры и инструментария.

Цель и задачи исследований. Цель наших исследований состояла в изучении выдвинутых практикой направлений повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости КРС, разработке новых и усовершенствовании существующих способов, технологических приёмов,' оборудования, аппаратуры и инстру-

ментария для получения, криоконсервации и использования спермы быков-производителей, а также широком внедрении новых разработок в практику искусственного осеменения животных.

Для достижения намеченной цели на разрешение были поставлены вытекающие из неё задачи:

1) изучить стереотип реакций и проявление условных рефлексов быков при получении от них спермы с использованием различных устройств и оборудования, установить коррелятивную зависимость интенсивности движения спер-миев с результатами дальнейшего замораживания, определить влияние на спермин биофизических факторов, возникающих в технологическом процессе получения, оценки, криоконсервации и использования спермы быков; влияние на биологические показатели спермы новых полимерных материалов; факторов, возникающих при дегерметизации спермодоз; влияние условий адаптации половых клеток на их биологические показатели после замораживания;

2) изучить физиологическую реакцию самок на манипуляции искусственного осеменения, изменение основных параметров полового тракта и его моторики, определить пути микробного загрязнения полового тракта самок и его предотвращения.

3) на основании научных исследований разработать:

- новые способы, технологические решения и устройства для получения, криоконсервации и использования спермы в облицованных гранулах и модернизированный вариант технологической линии;

- технологию искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания и устройства для её осуществления.

Научная новизна.

- Изучен динамический стереотип реакций и проявление половых рефлексов при получении спермы от быков с использованием различных способов и устройств. Установлены факторы, снижающие спермопродуктивность производителей.

- Впервые изучено влияние на спермии экстремальных биофизических факторов, возникающих при получении, оценке, криоконсервации спермы, а также при дегерметизации и использовании спермодоз, выявлен механизм их воздействия на спермии и на основании комплексных исследований разработаны способы предотвращения негативного влияния этих факторов.

- Установлена коррелятивная зависимость интенсивности движения спер-миев и их качественных показателей после криоконсервации.

- Разработаны новые способы и технологические решения в технологии криоконсервации спермы быков-производителей в облицованных гранулах, устройства и оборудование для технологической линии.

- Разработан режим замораживания спермы в новой упаковке (ТУУ 14057860.001-98).

- В результате физиологических исследований впервые предложены асептический способ и устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных герметичных капсулах (а.с. СССР № 1543598).

- Предложена новая методика и изучена физиологическая реакция коров и тёлок на манипуляции искусственного осеменения, изменение моторики полового тракта, а также предложен ряд новых и усовершенствованных устройств и полимерных одноразовых инструментов для искусственного осеменения самок.

Теоретическая и практическая значимость.

Теоретически обоснованы и разработаны биолого-технологические методы повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости КРС, способы и устройства для асептического получения, оценки, разбавления, дозирования и расфасовки спермы по закрытой системе, ее герметизации, идентификации и крио-консервации в облицованных гранулах, а также прогнозирования криостойкости спермы.

Теоретически обоснованы, разработаны и предложены новые методические подходы, способы и устройства для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения, исследования моторики полового тракта, контроля качества деконсервированной спермы в герметичных спермодозах и ее асептического введения в половые пути самок. Эти разработки являются ие только вкладом в теорию репродукции животных, но имеют и большую практическую значимость

За годы внедрения и использования наших разработок на племпредприяти-ях России и Украины ежегодно заготавливалось более 40 млн. спермодоз в облицованных гранулах. При этом повысился выход качественной спермопродук-ции и её санитарный уровень, повысилась культура производства, безопасность труда персонала занятого на работах с жидким азотом. Десятки миллионов доз спермы заложены в криобанки на период оценки быков по качеству потомства. При этом спермопродукция в облицованных гранулах гарантированно защищена от микробного загрязнения и снижения её биологического качества.

За счёт высокого санитарного и биологического качества спермопродукция, заготовленной в облицованных гранулах, повысилась оплодотворяемость маточного поголовья, снизился вдвое расход спермы на одно плодотворное осеменение, снизилась заболеваемость самок генитальными болезнями. Ежегодное осеменение коров и тёлок по этой технологии превышало 2,5 млн. голов.

Результаты научных исследований, новых конструкторско-технологических решений, разработанных диссертантом способов, устройств, аппаратуры и инструментария были включены во всесоюзные инструкции, ГОСТы, методические рекомендации, наставления, рекламные проспекты, плаката и информационные листки для племенных предприятий и пунктов искусственного осеменения, которые изданы массовыми тиражами.

Большую практическую значимость имеет способ, устройство и техника асептического введения спермы, эмбрионов и других биопрепаратов в половые пути самок. Высокая эффективность этого способа при незначительных материальных затратах обеспечили, в кратчайшие сроки, внедрение его во многих зарубежных странах с высокоразвитым животноводством. Разработанные соискателем способ асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и других биопрепаратов и универсальный термостатированный комплект инструментов и материалов позволили создать технологию искусственного осемене-

ния животных в местах содержания, обеспечивающую выполнение всех физиологических, санитарно-гигиенических и технологических требований, повышение ошюдотворяемости самок на 25-30% и эффективности маршруте о-кольцевого метода осеменения чем практически снимает необходимость строительства типовых пунктов искусственного осеменения как на крупных фермах, так и для фермерского и частного сектора. Эта технология одобрена на заседании секции производства и переработки продуктов животноводства научно-технического совета Министерства аграрной политики Украины (протокол № 4 от 22 декабря 2000 года).

Основные положения, выносимые иа защиту:

• Влияние биолого-технологических факторов на спермопродуктивность быков; теоретическое обоснование, разработка новых и усовершенствование существующих способов и устройств для получения, оценки, разбавления, дозирования и расфасовки спермы по закрытой системе, ее криоконсервации в облицованных гранулах; модернизированный вариант комплекта оборудования, инструментария и устройств технологической линии.

• Новая методика, способ и устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения; новый методический подход исследования моторики полового тракта самок и ее взаимосвязи с огогодотворяе-мостью; методики, способы и устройства для контроля качества деконсервнро-ванной спермы в герметичной упаковке и ее асептического введения в половые пути самок; универсальный термостатированный портативный комплект для работы оператора по воспроизводству (КОИТ-2); технология искусственного осеменения самок КРС в местах их непосредственного содержания.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации доложены и представлены на:

ученых Советах и научно-практических конференциях Института животноводства УААН, Харьков, 1976 -1992 тт. и Харьковского биотехяолошческсго центра УААН (1998-2003 гг.);

научно-практической конференции «Пути интенсификации производства молока и говядины на Украине», Харьков, 1985;

республиканской научной конференции «Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве», Харьков, 1988;

научно-производственной конференции «Новые методы селекции и биотехнологии в животноводстве. Разведение, популяционная генетика и биотехнология», Киев, 1991;

ВДНХ СССР (Отмечены серебряной медалью.-1991) ежегодных Международных выставках «Arpo 1996-2003»; ежегодных государственных конкурсах операторов по воспроизведению животных:

Советско-американском семинаре по физиологии воспроизведения сельскохозяйственных животных, Харьков, 1977;

Советско-французском семинаре по вопросам овотрансплантации, Харьков, 1979;

9-м (Мадрид, 1980) и 10-м (Иллинойс, США, 1984) Международных конгрессах по воспроизведению и искусственному осеменению животных.

Основные разработай диссертационной работы являются частью комплексной работы «Разработка и внедрение в производство новейших биотехнологий воспроизведения, размножения и улучшения сельскохозяйственных животных», которая выдвинута на соискание Государственной премии Украины 2004 года в области науки и техники.

Дубликадия результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 6 методических рекомендаций, 5 пособий, 7 информационных листков, 76 статей, из них 5 в материалах международных конференций, симпозиумов и конгрессов, 3 рекламных проспекта, 3 инструкции, 2 ГОСТа, 5 технических условий, 4 наставления, 12 плакатов.

По теме диссертации имеется 9 патентов и 5 авторских свидетельств СССР, России и Украины.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, предложений производству, списка использованной литературы и приложений.

Диссертационная работа изложена на 346 страницах, содержит 54 таблицы и 35 рисунков. Список литературы насчитывает 658 источников, из которых 210 иностранных, приложения - в отдельном томе.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в соответствии с Государственными планами научно-исследовательских работ Института животноводства УААН темы 03 «Разработать вопросы теории и создать новые биотехнологии воспроизведения животных, которые обеспечивают ускорение темпов крупномасштабной селекции» в период с 1973 по 1999 год в отделе биологии размножения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных Института животноводства УААН, его опытных хозяйствах, племпредприятиях России и Украины, хозяйствах зоны их обслуживания, опытно-конструкторских и проектно-технологических учреждениях многих министерств и ведомств.

Основным объектом исследований была сперма быков. Быки были клинически здоровы, содержались в типовых постройках, обеспечены хорошими кормами согласно рационам и были в состоянии заводской упитанности. Сперму получали один раз в неделю от молодых быков по два эякулята, а от взрослых -по три эякулята [Ф.И.Остаппсо, И.С.Вакуленко, 1970].

Массу эякулята в граммах определяли взвешиванием на весах типа ВЛКТ-200 или ВЖТ-500 [Ф.И.Осташко, В.А. Шинкаренко, 1972]. Активность спермиев определяли визуально под микроскопом при увеличении в 140-200 раз при температуре +38°С по десятибалльной шкале. Выживаемость спермиев также определяли под микроскопом через каждый час при таком же увеличении и такой же температуре и затем вычисляли абсолютный показатель выживаемости (Sa) по формуле, предложенной В.К.Миловановым и О.А.Селивановой [1952]. Он состоит из суммы произведений активности в баллах и переживаемости в часах.

Концентрацию половых клеток определяли фотоэлектроколориметрически [Ф.И.Осташко и Г.С.Гайворонский, 1960, 1963] и путём подсчёта спермиев в счётной камере Горяева для форменных элементов крови. Для исследований использовали свежеполученные эякуляты с активностью не менее 8 баллов и концентрацией спермиев не менее 800 млн. в 1 мл.

Для определения активности и переживаемости пробы спермы помещали в термостат с постоянной температурой +38 - +40°С. Активность спермиев определяли перед постановкой в термостат, а затем через каждый час до полной гибели половых клеток.

Снижение температуры в сперме при её замораживании контролировали с помощью градуированных термопар (медь х константан), помещаемых в центр спермодозы. Термопары присоединяли к милливольтмикроамперметру М-198/3.

Используя градуировочную кривую и таблицы перевода показаний гальванометра в градусы Цельсия, результаты заносили на график.

При изучении и разработке оптимального режима замораживания спермы в трубках диаметром 3,8 мм мы сконструировали специальное устройство, которое состоит из закрепленных на штативе сеточек, медь-константановой термопары и заполненного на 20-25 см жидким азотом сосуда Дьюара «Харьков-31».

При изучении влияния на качество спермы различных физико-механических факторов сперму консервировали в виде облицованных гранул по Харьковской технологии.

Для оценки качества замороженно-оттаянной спермы по оплодотворяющей способности коров и тёлок в опытную и контрольную группы подбирали по принципу аналогов. Все подопытные животные до осеменения подвергались клиническому осмотру и ректо-вагинальным исследованиям. В опыт включали только клинически здоровых животных с нормальной функцией половых органов. В опытах использовалась сперма с активностью после размораживания не менее 4 баллов и содержанием в дозе 5-25 млн. активных спермиев.

Охоту у коров и тёлок выявляли общепринятыми методами. Выбор оптимального времени осеменения коров и тёлок осуществляли методом контроля за созреванием фолликула.

Общая схема проведения исследований и разработок приведена на рис. 1.

Эффективность перистальтических сокращений определяли по всасывающей способности жидкости из пипетки, введенной в шейку матки самок по усовершенствованной нами методике.

Исследование токсичного действия полимеров на сперму проводили по методике Ф.И.Осташко и В.А.Чиркова [1966].

Исследования по изучению влияния на качество спермы некоторых экстремальных факторов, действующих при дегерметизации спермодоз, разработка способа предотвращения их отрицательного влияния на спермин и конструирование инструментов для введения в половые пути самок спермы проведены по оригинальным методикам изложенным в соответствующих разделах собственных исследований.

Цифровой материал, обработан биометрически по Н.А.Плохинскому [1969].

Достоверность различий показана: - Р<0,05; - Р< 0,01; -Р<0,001.

Снермопродуктнвность быков-производителей

Оплодотворяемость самок

Изучение стереотип,1 реакций быков при получении от них спермы существовавшими способами с помощью применяемых ранее устройств

Совершенствован не устройства для садки быков

Подбор полимерных материалов

Изучен«' физиологической реакции самок на манипуляции искусственного осеменения существовавшими способами, технологиями и инструментарием

Модернизация искусственной вагины

Разработка конструкции спермоприемннка

Совершенствование оценки и прогнозирования качества спермы

Разработка упаковка спермодоз к режима замораживания

Совершенствование техпроцесса кршжонсерйащш спермы

и устройств для расфасовки, маркировки, контроля герметичности, экввлибрации и замораживания спермодоз

Разработка способа оценки качества спермы в герметичной спермодозе

Разрабет ка устройства и технологии изготовления пленочных изделий и инструментария для и.о. самок

Разработка способов стерилизации полимерных инструментов и материалов

Разработка способа и устройства для контроля санитврно-гипк нического уровня искусственного осеменения

Конструирование новых моделей санитарных, гигиенических, защитных перчаток и усовершенствование технологии их изготовления

Разработка способа и устройства для асептического введения спермы

Конструирование универсального термостатированного комплекта инструментов и материалов (микролаборатория) для осеменения самок в местах их содержания

Разработка способа и устройства для дегерметизации спермодоз

Шквтвый поиск на научную новизну и оформление заявок на изобретение

Ангорское сопровождение внедрения разработок

Усовершенствованная тсхнолвгаа асептического получении, оценки, разбавления, расфасовки и крио-каасервашга спермы быков в облицованных гранулах

Лабораторные и научно-производственные испытания

Постановка на производств и организация выпуска аппаратуры и инструментария

Внедрение разработок в широкую производственную практик)

Авторский надзор выполнения требований научно-технических решений

Обобщение результатов внедрения и их экономическая эффективность

Техаологаа искусственного оссммкааа корю и телек ■ масти ах содержит* асептическим спосвбем с аспалиоваансм универсального комплек-гя КОИТ-2

Рис. 1 Общая схема проведения исследований и разработок

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение стереотипа реакций и проявления условных рефлексов при получения спермы от быков в зависимости от используемых способов и разработка для эш целей новых устройств и аппаратуры

Ряд существенных недостатков, применяемых ранее устройств для садки быков (манекенов), приводивших к стрессовым состояниям у быков и возникновению длительного торможения половых рефлексов вызвала необходимость совершенствования устройства для садки быков. Усовершенствованная модель была названа в соответствии с ЕСКД - устройство для садки быков малогабаритное амортизирующее - УСМА (рис. 2).

В нём были применены все новые технические решения по созданию наиболее благоприятных физиологических условий для отдачи спермы быком. Результаты испытания УСМА показали, что у быков время подготовки до момента проявления обнимательного рефлекса и эякуляции укорачиваются, а процесс завершающего сбора эякулята удлиняется, что свидетельствует об отсутствии торможения половых рефлексов у быков. Результаты спермопродукции быков при получении её на устройствах различной конструкции приведены в таблице 1.

Улучшение показателей спермы, полученной с помощью модернизированного нами станка, объясняется тем, что быки отдавали сперму в условиях, наиболее приближенным к физиологическим, что дало им возможность наиболее полно осуществить всю цепь половых рефлексов.

С момента изобретения искусственной вагины в начале тридцатых годов прошлого столетия [Н.В. Комисаров, В.И.Липатов, И.М.Родин, 1931; В.К.Мило-ванов, 1931; Н.А. Кузнецова, 1931] прошло более полувека, а принципиальная конструкция вагины оставалась прежней. В ней имитируется три фактора: температура, гидростатическое давление и скользкая поверхность эластичной резиновой камеры внутри корпуса вагины.

Рис.2. Усовершенствованная модель устройства для садки быков -УСМА-2

1. Спермопродукция быков при получении её на устройствах _ (манекенах) различной конструкции_

о § Показатели, М±т

Устройство для взятия спермы V с п а я Активность (баллы) Объем эякулята (мл) Количество спермиев (млрд/ил) Количество спермиев в эякуляте (млрд)

Ранее существующее (контроль) 67 4,82±0,17 5,03±0,17 1,13±0,04 5,29±0Д6

Модернизированное (опыт) 64 4,86±0,04" 5,85±0,05* 1,14±0,04" 5,52±0Д4"

Все имитирующие факторы должны максимально приближаться к таковым естественного влагалища самок, а нарушение хотя бы одного из них приводит к тому, что во время садки возникает болевое раздражение нервных окончаний пениса, а иногда и повреждение слизистой оболочки и самцы отказываются от садок на искусственную вагину.

Перед нами стояла цель усовершенствовать искусственную вагину и устранить конструктивные недостатки всех предыдущих её вариантов. Методом биологического моделирования была разработана конструкция модернизированной искусственной вагины. Для её испытания по признакам аналогов были подобраны 2 группы быков-производителей: опытная и контрольная.

В опыте учитывали объем эякулята, активность и концентрацию спермиев, общее количество спермиев в эякуляте и микробную загрязненность. Результаты исследований приведены в табл.2.

2. Характеристика спермы, полученной на вагины разной конструкции _(быков п-5, эякуляговп-15)_

Показатель Образец искусственной вагины

существующий (контроль) модернизированный

Объем эякулята, мл 3,66±0,13 4,26*0,17"

Активность спермиев, баллы 7,55±0,06 8,03±0,05"

Концентрация спермиев, млдр/мл 1,14±0Д6 1,40±0Д1"

Общее количество спермиев в одном эякуляте, млрд 4,17±0,7 5,96±0,4"

Микробная загрязненность, м.т./мл 56 18

В результате исследований было установлено, что у быков опытной группы средний объём эякулята увеличился на 0,6 мл по сравнению с контролем. Средняя активность спермиев и их концентрация в эякулятах по опытной группе превысили эти показатели контрольной группы на 0,48 балла и 0,28 млрд/мл, соответственно. Причем, у одних быков опытной группы наблюдалась стабильность

концентрации спермиев во всех эякулятах, а у других - увеличение концентрации спермиев в последнем эякуляте.

Среднемесячное количество спермы, полученной от одного быка на модернизированную искусственную вагину, составляет 68,7 мл и превышает на 7-9 мл объём спермы, полученной на искусственную вагину по базовому варианту.

Результаты применения модернизированной искусственной вагины в условиях ллемпредприятий свидетельствуют о высокой эксплуатационной надёжности вагины, а также целом ряде конструктивно-технических преимуществ, обеспечивающих выполнение анатомо-физиологических, санитарно-гигиенических и технологических требований.

Для получения свободной от микрофлоры спермы нами был усовершенствован спермоприёмник к искусственной вагине.

Характерной особенностью сконструированного спермоприёмника является то, что при отделении пробирки с пробой спермы лезвие ножниц не контактирует со спермой, находящейся во внутреннем канале спермоприёмника. Такое конструктивное решение исключает микробное загрязнение спермы при отборе проб и позволяет фиксировать пробирку со спермой на конус микропипетки при отборе пробы для оценки спермы.

Коническое сужение соединительного устройства позволяет перефасо-вывать сперму по закрытой системе из спермоприёмника в полиэтиленовые трубки различного диаметра при изготовлении облицованных гранул.

Таким образом, сконструированный нами спермоприёмник с соединительным устройством обеспечивает возможность перефасовки эякулята в трубки различного диаметра без дополнительного использования специальных переходников, позволяет предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора проб, разбавления и перефасовки, упростить данную технологическую операцию, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермы.

«Спермоприёмник к искусственной вагине» признан изобретением и защищен авторским свидетельством № 1072861. Серийное производство спермоприёмника организовано на Ялтинском УПП УТОС. ТУУ 14057860.001-98. Их выпуск превысил 30 млн. штук.

3.2. Применение метода определения концентрации спермиев по оптической плотности для изучения интенсивности их движения и прогнозирования качественных показателей после криоковсервации

Фотоэлектрический способ начал применяться, прежде всего, для определения концентрации спермиев. Для этой цели использовали серийный прибор -фотоэлектроколориметр (ФЭК). Чем большее количество спермиев было в эякуляте, тем большую оптическую плотность они создавали в кювете и которая объективно фиксировалась прибором.

Разность плотностей фиксировалась стрелочным прибором фотоколориметра. По градуировочной кривой определяли истинную концентрацию спермиев в эякуляте.

В развитие метода определения концентрации спермиев по оптической плотности была предложена модификация этого способа для определения активности движения спермиев [Rikmenspoel R., 1997; Van Dam G.S., 1958; Вишневский В.И., 1975]. Модификация заключалась в том, что к стандартной кювете ФЭК'а подпаивали в нижней её части дозирующее устройство, которое является нижней крышкой (дном) для кюветы, в которой измеряется оптическая плотность при помощи ФЭК'а. По мере движения спермы вверх оптическая плотность раствора увеличивается со скоростью, пропорциональной скорости движения спермиев. Время, за которое сперма создает определенную плотность, характеризует истинную активность и интенсивность движения спермиев.

Результаты измерения времени достижения оптической плотности 0,05 и 0,1 при температуре 38°С для спермы трёх быков с начальной активностью 8,0

Рис.3. Изменение оптической плотности при различной оценке активности

спермиев

Полученные данные свидетельствуют о том, что хотя сперма разных быков по глазомерной оценке имела одинаковую активность, в разных эякулятах она двигалась с существенной разницей, что свидетельствует о различии энергетических резервов, необходимых при оплодотворении.

В дальнейших исследованиях установлено, что спермин, которые имеют более интенсивное поступательное движение лучше переносят дальнейшую криоконсервацию.

Эти исследования свидетельствуют о том, что одинаково высокая начальная активность спермиев еще не свидетельствует об одинаково высокой длительности интенсивности их движения в искусственной среде. Фотоэлектроко-лориметрическое измерение интенсивности движения спермиев более объективно характеризует их потенциальные энергетические возможности.

3.3. Изучение влияния на качественные показатели спермы быков биофизических технологических факторов и разработка упаковок спермодоз, аппаратуры и оборудования для криоконсервации спермы

На основании проведенного анализа данных литературы мы изучили основные характеристики и подобрали полимеры, наиболее отвечающие требованиям для производства инструментов для получения, обработки, криоконсервации, хранения и введения спермы в половые пути самок. Так упаковка должна обеспечивать равномерное замораживание и оттаивание спермы, сохранять при этом герметичность.

В результате проведенных исследований мы пришли к заключению, что для упаковок спермодоз наиболее технологично использовать тонкостенные полимерные трубки. Для их изготовления наиболее приемлемы пластикат медицинский унифицированный (ПМ-1/42-У) и полиэтилен высокого давления (ВД), таблица 3.

3. Влияние на биологические показа 1 ели спермы оболочек спермодоз, изготов-_ ленных из различных полимеров, п=19_

Качественные показатели спермы Свеждеразбавленная сперма при температуре Замороженно-отгаянная сперма при температуре +38°С

+38°С +2 - +5°С ПМ-1/42-У ПЭВД

мп-1/42-у пэвд пм-1/42-у пэвд

Первоначальная активность (в баллах) 8,1 8,1 8,13 8,10* 3,92 ±0,16 3,81±0,17*

Переживаемостъ (в часах) 23,36±0,73 23Д1±0,71 378,1 388,1* 8,71±0,42 8,15±0,38**

Абсолютный показатель выживаемости (За) «4,28±3,53 63,02±4,12* 979,33 1915^3" 11,58 ±0,69 9,б±0,60**

Из данных таблицы 3 видно, что оболочка упаковки из пластиката ПМ-1/42-У не оказывает отрицательного влияния на качество замороженноотгаян-ной спермы при температуре +38° С.

Герметичность гранул определяли с помощью разработанной нами установки для контроля герметичности спермодоз [1990].

Результаты специальных исследований показали очень высокую, почти 100%, герметичность гранул после их длительного хранения и транспортировки. Установлено, что по физико-механическим свойствам пластикат ПМ-1/42-У вполне пригоден для изготовления тонкостенной трубки.

3.4. Разработка оптимальных параметров и режима замораживания при криоконсервации облицованных гранул диаметром 3,8 мм

Размеры и форма спермодоз должны обеспечивать равномерное замораживание и оттаивание спермы, сохраняя при этом герметичность. Все необходимые сведения должны размещаться на спермодозе при поточной маркировке.

Важно, чтобы размеры гранул не требовали громоздкого инструмента для их введения в половые пути самок, а потери спермы были бы минимальны.

В исследованиях установлен оптимальный диаметр трубок для изготовления упаковок спермодоз в пределах 4 мм (3,8±0,2), который и был заложен в технические условия.

В соответствии с Постановлением ЦК КПСС и Совета Министров СССР № 1472 «О мерах по повышению эффективности и улучшению организации племенного дела в животноводстве» Минхимпрому СССР поручено выпуск тонкостенной прозрачной трубки диаметром 3,8 мм для облицованных гранул.

Многие авторы, в частности, Г.А.Семаков [1977], Ф.И.Осташко [1968, 1978] указывают, что для каждой геометрической формы спермодоз необходимо опытным путём устанавливать оптимальный режим замораживания. Вполне вероятно, что геометрическая форма упаковки гранул может быть причиной изменения качества спермы в процессе её криоконсервации и размораживания за счёт изменения скорости падения температуры в суспензии клеток.

Для изучения и разработки оптимального режима замораживания спермы в трубках диаметром 3,8 мм] мы сконструировали специальное устройство и с его помощью установили оптимальный режим замораживания в парах жидкого азота (табл. 4).

Из данных таблицы видно, что лучшие показатели качества спермы были в гранулах, замороженных на уровне 10 см над поверхностью жидкого азота (активность 4,1 балла, выживаемость 13,8 часа и ва - 23,0). Эти показатели взяты в качестве контроля. На уровне 5-10 см от жидкого азота скорость падения температуры от 0°С до -70"С была в пределах 30-35°С в минуту.

4. Влияние на биологические показатели спермы расстояния от поверхности жидкого азота до спермодоз при замораживании с различной скоростью _снижения температуры (п=11)_

Качественные показатели спермы Расстояние от поверхности жидкого азота до спермодоз, см

1 М±т 5 М±т 10 М±т 15 М±т 20 М±т 25 М±т 28 №ш

Активность спермиев после замораживания (баллы) 4,0 ±0,15* 4,1 ±0,06 4,1 ±0,17 3,9 ±0,24* 3,5 ±0,17*? 3,1 ±0,27*** 2,5 ±0,22***

Выживаемость (часы) 13,8 ±1,11* 13,8 ±1,04 13,8 ±1,07 13,1 ±1,15* 12,0 ±0,15* 10,8 ±1,06* 9,6 ±0,90**

Абсолютный показатель выживаемости (8а) 21,7 ±2,51* 22,0 ±2,34* 23,0 ±3,04 20,2 ±2,75* 16,6 ±2,92* 13,8 ±3,09** 10,9 ±1,97***

Достоверной разницы в качественных показателях спермы, замороженной на уровне от 1 до 20 см, не было (Р > 0,1), несмотря на то, что скорость падения температуры на этих уровнях колебалась от 50 до 20 градусов в минуту.

В сперме, замороженной на уровне выше 20 см, происходило достоверное снижение ев качества (Р < 0,01-0,001).

Установлено, что для облицованных гранул диаметром 3,8 мм оптимальный режим замораживания обеспечивается при скорости снижения температуры от 30 до 20 градусов в минуту. Такой режим создан в тонкостенном металлическом контейнере, используемом при криоконсервации спермы по Харьковской технологии.

3.5. Совершенствование способа изготовления упаковок спермодоз для их криоконсервации и разработка устройств для расфасовки ■ маркировки спермодоз

Одним из важных элементов Харьковской технологии является расфасовка спермы в облицованные гранулы и одновременная их идентификация. Поэтому совершенствованию способа и аппарата для расфасовки спермы и маркировки спермодоз придавалось особо важное значение.

Усовершенствованный полуавтомат получил название ПРЖ-2 (рис. 4).

Параллельно с совершенствованием ПРЖ-1 велись и разработки композиций нетоксичной быстросохнущей краски низкой вязкости с адгезией к неактивному полиэтилену. При этом адгезия краски к полиэтиленовой трубке при маркировке спермодоз составила 2-3 балла, что отвечает требованиям технологического процесса обработки и использования спермы. Краска легко смывалась спиртовым тампоном перед осеменением самок.

Проведены исследования по изучению влияния краски на качество спермы после её криоконсервации в герметических упаковках.

Рис.4. Полуавтомат расфасовки жидкости (ПРЖ-2) для дозирования, расфасовки, герметизации и маркировки спермодоз

Установлено отсутствие достоверной разницы активности и переживаемо-сти спермы между опытной и контрольной частями спермы, то есть краска была не токсичной для спермиев (табл. 5).

5. Влияние идентификации герметической упаковки на качественные показатели спермы, (п=118)

Качественные показатели спермиев Контроль М±т Опыт М±т

Активность (баллы) 4,30±а,07 4,32±0,07*

Выживаемость (час) 11,0±0*15 10,7±0,18*

Sa 20,4±020 19,9±0,17*

Полуавтомат ПРЖ-2 в составе комплекта аппаратуры Харьковской технологии прошел длительную производственную апробацию, согласно приказу ВНПО по племделу в животноводстве № 120 от 2.09.1987 года, на Калужском племпредприятии, хорошо показал себя в работе и был рекомендован для серийного производства. Разработано наставление «Технология маркировки спермо-доз при облицованном гранулировании спермы».

3.5.1. Влияние условий адаптации спермиев иа их биологические показатели и усовершенствование устройства для эквилибрации и замораживания спермы

Перевод половых клеток в состояние глубокого анабиоза должен предотвратить повреждение тонких цитоструктур путём применения специальных кри-опротекторов и режимов охлаждения, исключающих внутриклеточную кристаллизацию воды и возникновение резких осмотических перепадов при фазовых переходах их цитоплазмы.

Однако при всех известных способах замораживания спермы быков-производителей погибает 30-40% половых клеток. Кроме того при замораживании спермы большими партиями имела место разнокачественность спермы в спер-модозах, полученных из одного эякулята. В предыдущий период было установлено, что при замораживании спермы в контейнерах спермодозы во время крио-консервации попадают в разные температурные условия, что приводит к изменению режима их охлаждения и, как следствие, снижению качества спермы после замораживания.

Усовершенствованная конструкция контейнера в сочетании с устройством для эквилибрации и замораживания спермы (ЭКЗ-2), [рис 5 ] обеспечивает достоверное улучшение сохранения биологической полноценности спермы в процессе криоконсервации и стабилизирует режим замораживания спермы в каждой спермодозе, независимо от местоположения их внутри контейнера

С августа по сентябрь 1987 года комплект аппаратуры криоконсервации спермы производителей по Харьковской технологии модернизированного варианта прошёл предварительные испытания на Калужском племпредприятии и был рекомендован Государственной комиссией Госагропрома и Минприбора СССР для проведения межведомственных испытаний, в результате которых было предложено: рекомендовать комплект оборудования технологической линии

Рис. 5. Устройство ЭКЗ-2 в сборе

криоконсервации спермы производителей для работы племенных предприятий по модернизированной Харьковской технологии; рекомендовать комплект оборудования к присвоению высшей категории качества; - передать откорректированную техническую документацию заводу-изготовителю.

На основании предложения Государственной комиссии на Московском опытном заводе «Темп» было организовано серийное производство комплекта аппаратуры и оборудования. В 1988 году новые комплекты были поставлены и внедрены на Калужском, Белгородском, Тамбовском, Ярославском, Ленинградском, Воронежском, Курском, Барнаульском, Татарском, Липецком предприятиях, а также на опытной станции Института животноводства УААН. Следующая партия технологических линий направлена на Сахалинское, Омское, Томское и Кемеровское племпредприятия, а также в несколько областей Украины.

В результате широкого производственного опыта применения Харьковской технологии модернизированного варианта на Калужском племпредприятии были получены следующие результаты: потери спермы при расфасовке составили 0,15%; потери спермы от растрескивания спермодоз составили 0,07%; санитарный брак на конец 1987 года составил 3,9%; потери спермы по биологическим показателям по оттаиванию 1,7%; исключены потери спермопродукции при хранении.

Оборудование и аппаратура технологической линии криоконсервации спермы производителей технологичны, работают надёжно и устойчиво. Производительность работы технологической линии увеличилась на 10-16%.

3.6. Разработка и совершенствование способов оценки качества спермы в герметичной спермодозе

Оценка активности спермиев общепринятым способом в раздавленной покровным стеклом капле, нанесенной на предметное стекло, неприемлема для

Харьковской технологии ввиду того, что весь комплекс асептических мер при получении спермы, обработке, криоконсервации, хранении, транспортировке и введении её в половые пути самок сводится на нет. Разгерметизация спермодозы влечёт за собой целый ряд отрицательных последствий и не гарантирует объективности оценки качества спермы.

Разработанный нами способ позволил производить оценку качества спермы в герметичной спермодозе через её оболочку.

Сравнительная характеристика качества спермы, установленная общепринятым способом и через оболочку спермодозы, приведена в таблице 6.

6. Оценка качества спермы быков различными способами, (п=12)

Качественные показатели спермы Общепринятый способ (кондэоль) Через оболочку герметичной спермодозы ®

Активность спермиев после размораживания (в баллах) 4,4±0,15 4,3±0,16*

Выживаемость спермиев при температуре +38-40°С (в часах) 10,8*0,705 13,8±1,18**

Абсолютный показатель выживаемости ($а) 17,48±1,739 27,44±4,01**

Результаты проведенных исследований дают основание заключить, что предложенный интактный способ оценки качества спермы через прозрачную оболочку спермодозы имеет ряд преимуществ перед общепринятым, прежде всего, в исключении возможности микробного загрязнения спермодоз и экономии 6-8% спермы, а также в снижении затрат на приобретение предметных и покровных стекол, флаконов, стеклянных палочек, пипеток, цитрата натрия и в экономии времени на выполнение многих технологических операций.

Для широкого внедрения в практику этого способа было сконструировано специальное устройство (а.с. № 1543598).

3.7. Влияние на сперму физико-механических факторов, возникающих при дегерметизации спермодоз и разработка способа их предотвращения

В соответствии с Харьковской технологией перед осеменением спермо-дозу вкладывали в зоошприц, наконечник которого вводится в цервикальный канал, при определенном давлении на шток оболочка спермодозы прорывается и сперма впрыскивается в цервикальный канал с большой скоростью, что отрицательно влияло на её качество в результате механического повреждения сперми-ев. Для изучения этого явления нами [Кузнецов Г.Н., 1980] были проведены специальные исследования по изучению влияния на качество спермы предварительной дегерметизации спермодоз проколом иглы через выходное отверстие зоошприца. Результаты исследования приводятся в таблице 7.

7. Качество спермы после дегерметизации спермодоз _различными способами, п - 5_

Качественные показатели спермы Способы дегерметизации

контроль (вскрытие ножницами) разрыв оболочки спермодозы под давлением штока предварительное прокалывание оболочки спермодозы иглой

А1стивность (в баллах) 4,3±0,33 1,0 - 0,29* 4,0±0,26***

Выживаемость (в часах) 10,0±0,58 4,0±1,0* 10,3±0,33 ***

Абсолютный показатель выживаемости (Ба) 14,7±2,59 1,7 - 0,4* 12,56±0,04**

3.8. Изучение анатомо-физиологических параметров полового тракта самок и разработка устройств для введения спермы

На основании изучения анатомо-физиологических параметров полового тракта самок нами проанализированы преимущества и недостатки существовавших инструментов для введения спермы в половые пути коров и телок и разработано устройство, обеспечивающее асептичность этого процесса и выполнение всех анатомо-физиологических и технологических требований.

Важной конструктивной особенностью устройства является укороченный чехол, функцией которого является предотвращение микробного загрязнения не только самого устройства, но и цервикального канала самок, за счёт возможности расчехлить наконечник устройства после прохождения всех загрязненных микробами зон окружающей среды и полового тракта, т.е. дает возможность асептически ввести наконечник в цервикальный канал самок (рис 6).

■4-

Рис 6. Устройство для асептического введения спермы и эмбрионов в половые пути самок.

1. Устройство подготовленное для манипуляций.

2. Начало прорыва чехла. 3. Расчехление наконечника устройства при введении в цервикальный канал.

Лёгкое прорывание герметичного конца чехла при освобождении стерильного наконечника происходит за счёт V-образной впадины, глубина которой относится к радиусу наконечника как 1:1.

Описанное устройство позволяет предотвратить микротравмирование слизистой оболочки половых путей и на 100% гарантировать асептичность осеменения самок в любых производственно-хозяйственных условиях. Оно защищено а.с. № 1831330A3, а его серийный выпуск организован в НПФ «Эмбрион».

В медицине, а также в биотехнологии воспроизведения сельскохозяйственных животных для искусственного осеменения, ректального исследования на стельность коров и оказания помощи при отёлах применяются гигиенические защитные перчатки, которые изготавливаются из резины и различных полимеров [Осташко Ф.И., Чирков В.А., 1965].

По нашему мнению физиологическое обоснование ректального метода исследований органов размножения базируется на экстраполяции информации тактильных анализаторов (механорецепторов) на аналитические и синтетические процессы в коре головного мозга исследователя.

В результате изучения технологических особенностей одноразовых перчаток для искусственного осеменения животных, выпускаемых ведущими зарубежными и отечественными изготовителями, с целью разработки наиболее близкой по функционально-конструкторской приспособленности, универсальности, технологичности при использовании, а также экономии материалов, нами предложено несколько вариантов гигиенических защитных перчаток из плёночного материала (рис.7), конструктивные особенности которых подробно описаны в диссертации и патентах.

а- пятипалых, б - четырехпалых.

Для изучения тактильной чувствительности специалиста при манипуляциях в органах размножения с использованием полимерных перчаток был проведен специальный опыт на 500 коровах при гинекологической диспансеризации. После окончания диспансеризации было выбраковано 40 коров (гинекологический брак), которые затем были забиты. При убое с участием этих же специалистов, исследовавших животных, сравнивали результаты диагностики, полученные с использованием опытной и контрольной перчатки (табл. 8).

8. Результаты клинико-гинекологической диспансеризации животных с использованием перчаток одноразового и многократного использования

Вид используемых перчаток Показатели При диагностическом убое

количество исследованных животных совпадение диагноза убито животных совпадение диагноза

гол. % гол. %

Одноразовые полимерные перчатки (опыт) 250 238 95,2 20 18 90

Перчатки многократного использования (контроль) 250 184 73,6 20 14 70

Из таблицы видно, что при использовании опытных и контрольных перчаток у исследователей наблюдалось различное совпадение объективных данных о состоянии половых органов животных. Разница в пользу опыта составила 21,6%. При уточнении диагноза методом убоя разница в пользу опыта составила 20%.

Нами разработан и рекомендован режим стерилизации полиэтиленовых перчаток ультрафиолетовым облучением непосредственно в лаборатории воспроизводства сельскохозяйственных животных.

Проведенными исследованиями установлено, что оптимальным режимом стерилизации полиэтиленовых перчаток ультрафиолетовым облучением является 40 мин., 20 мин.на одну и 20 минут на другую сторону на расстоянии 40 см при мощности облучателя 40 ват. При более длительной экспозиции наблюдается деструкция и образование складок, перчатки становятся непригодными для использования.

В настоящее время дополнительная стерилизация полиэтиленовых перчаток широко практикуется в производственных условиях.

Нами также установлено, что наиболее объективная информация о состоянии яичников и проведении саногенеза достигается при использовании полимерных перчаток с толщиной стенки 5-20 мкм.

В разработанных моделях одноразовых полимерных перчаток (патенты России № 46280 и 46281, Украины № 890 и 891) наиболее полно учтены анато-мо-физиологические, технологические и санитарно-гигиенические требования, предъявляемые при искусственном осеменении коров и тёлок.

В доступной нам литературе и при патентном поиске не было найдено сведений о возможности поточного непрерывного изготовления плёночных изделий больших размеров и сложной конфигурации.

Предложенное нами устройство для сварки термопластического материала при изготовлении изделий для искусственного осеменения позволяет производить непрерывную сварку изделий больших размеров и сложной конфигурации, любые формы и модификации перчаток для искусственного осеменения, спер-моприёмников, эмбриоприёмников и других изделий для биотехнологии воспроизведения животных.

Основными контролируемыми показателями были герметичность сварных швов, изготавливаемых изделий, отсутствие на них шероховатостей, микроне-

ровностей, острых выступов и облоев, которые могли бы стать причиной искажения объективных данных о состоянии органов размножения или вызвать раздражение и микротравмы их слизистой.

При поиске по патентной и научно-технической литературе не выявлены устройства для сварки термопластичного материала с отличительными признаками разработанного технического решения, что подтверждает его новизну и изобретательский уровень.

3.9. Изучение и разработка приёмов предотвращения и контроля микробного загрязнения половых путей самок при введении спермы

Разработанная модель «искусственного цервикса» является очень удобным и простым макетом для осуществления зоотехнической экспертизы санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения, новых инструментов, оборудования, выпускаемого для биотехнологии воспроизводства, может использоваться в лабораториях государственных учреждений ветеринарного надзора по воспроизводству и служить учебно-методическим пособием при подготовке и переподготовке специалистов биотехнологов.

Устройство представляет собой эластичный прозрачный полимерный корпус (1) цилиндрической формы длиной 40 см, в который с обеих сторон плотно вставлены пробки (2 и 3) с отверстиями по центру (4) для введения инструментов, линия герметизации проб 5 (рис.8).

Рис.8. Устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения «искусственный цервикс»

При использовании этой модели и осуществлении имитации осеменения мы исследовали эффективность предотвращения микробного загрязнения половых путей самок при введении спермы разработанным нами асептическим способом и устройством для его осуществления (опыт). Контролем служило ранее применяемое устройство для искусственного осеменения самок спермой в облицованных гранулах (табл. 8).

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что применение предложенного асептического способа и устройства полностью предотвращает или снижает в десятки миллионов раз перенос микроорганизмов в цервикальный канал из окружающей внешней среды, наружных половых органов и влагалища в процессе введения устройства даже в условиях высокой степени загрязненности их микроорганизмами.

8. Сравнительная оценка санитарно-гигиенического уровня опытного

и контрольного устройств при имитации (моделировании) _искусственного осеменения_

№ исследований Микробная загрязненность поролоновой пробки входной части модели, мт/мл Количество микробов, перенесенных устройствами в стерильную пробку модели, мт/мл Микробная загрязненность удлинителя устройств после имитации осеменения, мт/мл

опыт контроль опыт контроль

1 20-Ю6 15 10-10" 0 4-10"

2 15-10" 10 10-10" 0 5-10"

3 225-10" 5 130-10" 0 2110"

4 360-106 - 115-10" 0 5,5-10"

5 190-10" 10 5-106 0 38,5-10"

6 35-10" - 25-10" 0 3,5-10"

7 120-Ю6 10 30-Ю6 0 6,5-10"

8 200-10" 20 50-10" 0 6-10"

9 135-10" ь 40 40-10" 0 4,5-10"

10 85-10" 10 55-10" 0 6,5-10"

И 11010" 15 65-10" 0 3-10"

12 25-10" 10 5-10" 0 10,5-10"

13 100-Ю" 15 5-10" 0 1,5-10"

14 50-106 25 25-10" 0 2-10"

Среднее 113,1-Ю6 13,2 40,7-106 0 8,4-106

Новизна полученных научных данных с использованием устройства для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения подтверждена авторским свидетельством на изобретение № 1463277.

Поскольку инструменты изготавливаются из полимерных материалов, являющихся термолабильными, стерилизация их при помощи высоких температур невозможна. Поэтому возникла необходимость разработки более приемлемой для этой цели стерилизации другими методами, которые не оказывали бы негативного влияния на спермин, на организм животного и человека.

С этой целью был испытан химический метод обработки инструментов с применением хлорамина «Б», который обладает мощным бактерицидным действием и широко используется в медицине для стерилизации и дезинфекции.

При химическом способе обработки инструментов были использованы растворы хлорамина "Б" в концентрациях 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 1%. Результаты исследований приведены в таблице 9.

Оптимальной оказалась концентрация хлорамина 0,3-0,5% с выдержкой инструментов в этих растворах не менее 20 минут.

9. Эффективность стерилизации хлорамином «Б» инструментов после их

использования

Время экспозиции Количество исследованных проб Наличие роста на МТТА (в чашках), колоний

Бактериальный фон до стерилизации концентрация хлорамина, %

0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 1,0

20 минут 10 ДО 2000 200 130 - - - -

6-7 часов 10 150 100 - - - -

12-16 часов 10 50 ед.р - - - -

С целью проверки на токсичность для спермы остаточных дезинфицирующих веществ необходимо было провести исследования на выживаемость за-мороженно-отгаянной спермы после контакта с простерилизованным инструментом.

В опыте использовали инструменты после повторной их стерилизации хлорамином, а в контроле - инструменты, не бывшие в употреблении (табл. 10).

10. Влияние обработки инструментов раствором хлорамина на выживае-

мость замороженно-оттаянной спермы быков, М*ш (п =5 )

Вид стерилизации Активность спермы перед замораживанием (баллы) Активность спермы после оттаивания (баллы) Показатель абсолютной выживаемости (ва) Выживаемость (в часах)

Обработка 03% раствором хлорамина (опыт) 7,2±0,2 4,3±0,1 11,99*1,1* 6,4*0,5*

Заводская стерилизация (контроль) 7,5*0,2 4,3*0,2 12,39*1,3 6,4*0,5

Этими исследованиями установлено, что стерилизация инструментов раствором хлорамина «Б» в указанных концентрациях не оказывает токсического действия на сперму при её введении в половые пути самок.

На основании проведенной работы, нами разработано и утверждено Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 28 ноября 1982 г. (№ 115-6.2) «Временное наставление по повггорной стерилизации инструментов для искусственного осеменения (приложение).

Кроме химического метода стерилизации нами был применен и физический метод обработки полимерных инструментов (зоошприцов) ультрафиолетовым облучением по аналогичной методике.

Стерилизацию ультрафиолетовым облучением инструментов, бывших в употреблении после предварительной очистки и мойки проводили лампами типа БУВ-30 ли ПРК-2 в режимах, разработанных ранее при стерилизации новых инструментов.

Контролем служили инструменты, не бывшие в употреблении, а в опыте инструменты перед стерилизацией обсеменяли культурами микроорганизмов (Е. coli, Staph. Aureus, B.Subtilis, Asp. Fumigatus) разной степени разведения (не разбавленные и в разведении 1:10 и 1:100).

Полимерные инструменты располагали на расстоянии 10; 15 и 20 см от лампы и облучали их ультрафиолетовыми лучами в течение 10, 15 и 20 минут. Затем производили смывы с контрольных и опытных инструментов и делали посев на мясо-пептонный агар в чашках Петри и на агар Сабуро. Подсчёт колоний проводили после суточной инкубации в термостате при температуре 37°С.

Установлено, что для стерилизации инструментов, используемых при искусственном осеменении животных, оптимальным режимом облучения является экспозиция в 20 минут на расстоянии 20 см от лампы БУВ-30.

Для исследований по изучению эффективности стерилизации полимерных инструментов на ускорителях типа ЛУЭ-300 при помощи ускоренных электронов были взяты полиэтиленовые ампулы, зоошприцы, катетеры, чехлы, а также перчатки, применяемые при различных способах искусственного осеменения коров и тёлок.

Исследованиями установлено, что полная стерилизация инструментов наступала при облучении в дозе 10 кГр.

Такой уровень энергии ускоренных электронов согласуется с правилами по радиационной стерилизации медицинских инструментов, систем переливания крови и оборудования, рекомендованных международными организациями ФАО, МАГАТЭ и ВОЗ.

Эффективность стерилизации облучением этих партий полимерных инструментов была подтверждена исследованиями Харьковской областной научно-производственной ветбаклаборатории и Украинского НИИ экспериментальной ветеринарии.

3.10. Изучение физиологической реакции самок аа манипуляции искусственного осеменения я разработка технологии его проведения в местах содержания животных

Во всех инструкциях, наставлениях и рекомендациях по искусственному осеменению коров и телок указано, что пункт искусственного осеменения является основным местом, где проводят работу по воспроизводству стада [1982,2001 ].Однако в силу ряда организационно-хозяйственных причин во многих хозяйствах, даже имеющих хорошо оборудованные пункты искусственного осеменения и лаборатории по воспроизводству животных, часто прибегают к осеменению животных непосредственно в стойловых помещениях или в летних лагерях.

В исследованиях установлено, что доставка эстралъньгх животных на пункты искусственного осеменения вызывает у них повышенное психоэмоциональное напряжение и в различной степени нарушает моторную функцию полового аппарата [Никитченко И.Н., Плященко С.И. и др., 1988; Кузнецов Г.Н., 2001].

В связи с этим мы провели специальные исследования по изучению взаимосвязи оплодотворяемости коров с всасывающими сокращениями матки в условиях пунктов искусственного осеменения (табл. 11).

И. Оплодотворяемость коров в зависимости от всасывающей _способности матки. ( п=100 )__

Время наступления всасы- Количество Из них оплодо- % оплодотворе-

вания спермы, с голов творилось ния

35-45 15 12 80,0

46-90 36 31 86,1

91-120 15 13 86,7

121-150 И 9 81,8

Не наступило 23 2 8,7

Данные исследования показали коррелятивную зависимость всасывающей моторики полового тракта коров и их опяодотворяемостью и негативное влияние процесса доставки коров в охоте из мест постоянного их содержания на пункты искусственного осеменения или в лаборатории по воспроизводству животных.

Несмотря на более результативное осеменение животных в местах их содержания, требовалась разработка методов и устройств для обеспечения ветери-нарно-санитарных и технологических требований.

В связи с этим возникла необходимость изучения эффективности искусственного осеменения коров и тёлок разработанными способом и устройством в различных местах: на пунктах искусственного осеменения, микропунктах и стойловых помещениях разработанным нами устройством для асептического введения спермы. Результаты исследований приведены в таблице 12.

12. Эффективность осеменения коров в зависимости от места осеменения

Место осеменения Устройство для асептического введения спермы (опыт) Обычная конструкция (контроль)

осеменено, голов оплодотворилось осеменено, голов оплодотворилось

голов % голов %

Манеж пунктов искусственного осеменения 280 230 80,2±7,4 580 340 58,7±6,4*"

Микропункты 370 280 75,6±3,3 370 210 57,0±8,7""

Стойловые помещения 860 650 75,5±4,7 410 230 56,0±7,7"

Данные таблицы 12 свидетельствуют о том, что оплодотворяемость коров при осеменении устройством для асептического введения спермы на 17-23% больше в сравнении с оплодотворяемостью, полученной при применении устройства обычной конструкции. Причем, в опыте оплодотворяемость была до-

вольно высокой при осеменении в любых организационно-хозяйственных условиях (75,5 - 80,2%).

Для широкого применения в практике асептического способа введения спермы возникла необходимость разработки технологии осеменения животных в местах их содержания, создания портативного комплекта со всем необходимым инструментарием, растворами и материалами.

Было изготовлено несколько вариантов макетов термостатированных емкостей (контейнеров). Разработана техническая документация и изготовлены опытные образцы контейнеров из ударопрочных пластмасс. Уточнен перечень и количество инструментов, реактивов и материалов. Изучен режим термостати-рования при различной длительности транспортировки.

Исследования показали, что наиболее удачным вариантом термостатированной емкости оказался контейнер с горизонтальным разъёмом и постоянным вертикальным расположением емкостей с растворами (рис.9).

Инструменты и материалы, необходимые для обработки рук оператора по искусственному осеменению и наружных половых органов осеменяемых животных размещаются в углублениях, вьшрессованных на внутренней поверхности откидывающейся верхней части контейнера. Открытая в рабочем положении верхняя часть контейнера фиксируется и служит частью рабочего столика. В ней имеется отсек для использованных инструментов. Нижний отсек контейнера термостатирован, закрывается рабочей крышкой, служащей как для предохранения от перепадов температуры, так и частью рабочего столика. В термостатированном отсеке размещаются инструменты, подготовленные для введения спермы асептическим способом, раствор фурацилина и физраствор, влагалищные зеркала и кружка Эсмарха.

Изучен режим термостатирования инструментов и растворов при различной длительности транспортировки в пределах производственного под-

Рис.9. Общий вид КОИТ-2

разделения. Исследования показали, что транспортировка комплекта при температуре окружающей среды -20°С в течение 15 минут и при начальной температуре растворов +20°С вызывает охлаждение на 1,5°С в минуту. Портативный комплект обеспечивает надежную термоизоляцию комплектующих в течение 10 минут. При более длительном периоде переноса комплекта требуется помещение в его термостатированный отсек дополнительного термостабилизатора.

Исследованиями установлено, что стерилизующий эффект достигается после 20-и минутной обработки 2-х, 3-х и 5-и процентными растворами хлорамина Б.

Предложенная технология искусственного осеменения коров и телок в местах их непосредственного содержания с использованием асептического способа и портативного комплекта КОИТ-2 исключает воздействие на животных комплекса экстремальных факторов, которые оказывают отрицательное влияние на моторику полового тракта и обеспечивает повышение оплодотворяемости самок на 25-30%.

Технология искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания одобрена на заседании секции производства и переработки продуктов животноводства научно-технического совета Министерства аграрной политики Украины (Протокол № 4 от 22 декабря 2000 года).

Экономический эффект достигается за счёт использования новых технологических приёмов и автоматизации процессов взятия, криоконсервации, улучшения способов сохранения качества спермы, снижения санитарного брака и повышения оплодотворяемости коров и тёлок после первого осеменения.

В основу расчётов экономической эффективности взяты показатели: стоимость упаковки спермодоз; стоимость санитарного брака; стоимость хранения спермы.

Расчёт проведен на 1 млн. спермодоз при криоконсервации спермы в облицованных гранулах по Харьковской технологии в сравнении с использованием для криоконсервации спермы полиэтиленовых ампул, которые широко использовались в практике ранее.

Разница в сравнении с базовым вариантом составляет:

153900 руб. - 18500 руб. = 135400 руб.

Общая стоимость затрат на хранение 1 млн. спермодоз при базовом варианте составляет 7313 руб.

При использовании внедрённого варианта общая стоимость затрат на хранение 1 млн. спермодоз составляет 2193,9 рублей.

Разница в стоимости хранения спермы составляет 5119,1 рублей на каждый млн ./спермодоз.

Элементы экономического эффекта за счет обеспечения оптимальных физиологических условий и ветеринарно-санитарных требований при осеменении самок в любых производственно-хозяйственных условиях, упрощение и облегчение труда техников-осеменаторов, повышения оплодотворяемости животных, снижение гинекологических заболеваний, не поддаются точному учёту и возможности выражения этого эффекта в денежной сумме годовой экономии. Поэтому в основу расчёта взяты лишь элементы экономического эффекта от с ни-

жения затрат на инструментарий и предотвращение потерь спермы при искусственном осеменении самок с использованием изобретений. Расчёты проведены согласно «Инструкции по определению годового экономического эффекта, получаемого в сельскохозяйственном производстве от внедрения результатов научно-исследовательских и проектно-конструкторских работ».

Экономический эффект, получаемый в результате внедрения технологической оснастки для производства осеменительного инструмента составляет 302,6 тыс.руб.

Экономия на инструментарии при новом варианте составляет 59 коп. на одно осеменение или на каждом инструменте.

Кроме удорожания стоимости инструмента на одно осеменение, использование устройства по базовому варианту приводило к повышенным (по сравнению с новым вариантом) потерям спермы в оболочке спермодозы и зоошприце при осеменении.

Д оя нанесения пробы спермы на предметное стекло для микроскопического анализа расходуется 0,016 мл размороженной спермы, что составляет 6,4% от общего объёма спермодозы (0Д5 мл). При себестоимости спермодозы 90 коп. стоимость потерь спермы на оценку составляет 5,76 коп. Эти потери исключаются при использовании разработанного нами способа оценки качества спермы в герметичной спермодозе.

Потери спермы в оболочке спермодоз и зоошприце при осеменении животных в базовом варианте составляют 11,9%, что в стоимостном выражении равно 10,8 коп. За счёт конструктивного усовершенствования устройства для искусственного осеменения животных по авторскому свидетельству 895428 потери спермы в оболочке спермодозы и корпусе-наконечнике составляют 8,1% или в денежном выражении 7,2 коп.

Стоимость общих потерь спермы на одно осеменение при новом варианте составляет 12,96 коп., а при базовом - 16,56 коп, экономия затрат на инструментарий и стоимости потерь спермы на одно осеменение составляет 4,19 коп.

В соответствии с данными Ялтинского VIII1 УТОС за период с 1980 по 2003 год выпущено 154 млн. штук устройств для искусственного осеменения животных по авторскому свидетельству 895428 (справка в приложениях).

Исходя из приведенного выше расчёта общий экономический эффект от использования изобретений за 25 лет (с 1978 по 2003 годы) составляет 88.078.900 рублей.

ВЫВОДЫ

В результате теоретических исследований, патентного поиска, биологического моделирования, опытно-конструкторских работ, научно-производственных'испытаний разработаны новые методические подходы, способы, устройства и технологии, обеспечивающие повышение спермопродуктивности и огогодо-творяемости КРС, позволившие материализовать теоретические разработки репродукции животйых, ускорить темпы крупномасштабной селекции в скотоводстве имеющей важнейшее народно-хозяйственное значение для решения продовольственной проблемы народонаселения.

1. В результате экспериментальных исследований динамического стереотипа реакции быков установлено, что при получении спермы, на модернизированное устройство (УСМА-2), по сравнению с контрольным обеспечиваются оптимальные физиологические условия для проявления и закрепления половых рефлексов быков-производителей: время рефлекса полового влечения и подготовки до момента проявления обнимательного рефлекса укорачивается (-0,3 с и -0,1 с), а процесс эякуляции удлиняется (+0,3 с) и общее количество спермиев в эякуляте увеличивается (с 5,29 до 5,52 млрд).

2. Методом биологического моделирования усовершенствована конструкция искусственной вагины, в которой воссозданы оптимальные физиологически приближенные к естественным условия для протекания половых рефлексов совокупления и эякуляции, что способствовало по сравнению с базовым вариантом сокращению времени реакции до эякуляции на 34 секунды, при этом средняя активность спермиев и их концентрация возрастали на 0,48 балла и 0,28 млрд/мл соответственно, причем наблюдалась тенденция увеличения концентрации спермиев в последнем эякуляте.

3. Применение одноразового спермоприёмника с соединительным устройством (а.с. № 1072861), сконструированного методом биологического моделирования, обеспечивает возможность перефасовки эякулята по закрытой системе в трубки различного диаметра без контакта с внешней средой и дополнительного использования специальных переходников, а также позволяет предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора проб, упростить технологическую операцию разбавления и перефасовки спермы, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермопродукции.

4. Динамика нарастания оптической плотности спермиев в искусственных средах при равных стартовых условиях объективно характеризует их потенциальные энергетические возможности и коррелирует с качественными показателями спермы после консервации прогнозируя ее криоустойчивоста.

5. Экспериментальными исследованиями установлено, что по физико-механическим и оптическим свойствам для изготовления упаковок спермодоз наиболее отвечают физиологическим, токсикологическим, криобиологическим и технологическим требованиям унифицированный пластикат медицинский ПМ-1/42-У и полиэтилен высокого давления (ВД) марки 15802-020. Эти полимеры обеспечивают герметичность спермодоз и стойкость к криогенным факторам в процессе длительного хранения и транспортировки.

6. На основании проведенных исследований оптимальными параметрами упаковки спермодоз объемом 0,25 мл установлен диаметр - 4 мм (3,8±0,2 мм), длина - 32-35 мм, толщина стенки - 80±10 мкм. Оптимальный режим замораживания спермы в таких упаковках достигается при скорости падения температуры в диапазоне от 0°С до -70°С в пределах 30-35"С в минуту. При этом обеспечивается активность 4,1 балла, выживаемость при 38°С - 13,8 часа, абсолютный показатель выживаемости спермиев (Ба) - 23,0.

ботана технология нанесения на поверхность спермодоз всех необходимых сведений о них. Подобран состав красителя не оказывающего отрицательного влияния на спермин и обеспечивающего высокую адгезию отпечатка в процессе криоконсервации и хранения спермодоз в жидком азоте. Это устройство в составе комплекта аппаратуры Харьковской технологии асептического получения, криоконсервации, длительного хранения и использования спермы быков с положительными результатами прошло длительную производственную апробацию и было рекомендовано для серийного производства, организован их выпуск и поставка племпредприятиям.

8. Усовершенствованное устройство для эквилибрации и замораживания спермы (ЭКЗ-2), обеспечивает сохранение биологической полноценности спермы в процессе криоконсервации, равномерную адаптацию всех спермиев, стабилизацию режима замораживания спермы в каждой спермодозе.

9. Впервые в практике искусственного осеменения разработан интактный способ оценки качества спермы в герметичной спермодозе (а.с. № 1543598), он имеет ряд преимуществ перед общепринятым способом - исключение микробного загрязнения спермодоз и экономии 6-8% спермы, достижение объективности оценки, а также в снижении затрат н в экономии времени на выполнение технологических операций. Для практической реализации этого способа нами разработано специальное устройство, организован его серийный выпуск и поставка племпредприятиям и хозяйствам.

10. Для предотвращения повреждения спермиев при дегерметизации облицованных спермодоз в осеменительном инструменте разработан и предложен способ их предварительной разгерметизации специальной стерильной иглой через выходное отверстие наконечника инструмента.

И. Разработанный способ и устройство (а.с. № 1831330 АЗ), обеспечивает полную асептичность осеменения, выполнение анатомо-физиологических и технологических требований, предотвращает гравматизацию слизистой оболочки половых путей, способствует повышению оплодотворяемосш самок на 25-30%. Организован его серийный выпуск и поставка потребителям.

12. Разработанные модели одноразовых защитных гигиенических перчаток (патенты России № 46280 и № 46281, Украины № 890 и № 891) наиболее полно отвечают анатомо-физиологическим, технологическим и санитарно-гигиеническим требованиям, предъявляемым при искусственном осеменении коров и тёлок, организовано их серийное производство с ежегодным выпуском превышающим 12 млн. штук.

13. Разработанное устройство для изготовления изделий, применяемых при искусственном осеменении животных, позволяет производить непрерывную сварку и разделение изделий больших размеров и сложной конфигурации, любые формы и модификации перчаток для искусственного осеменения, спермо-приёмников, эмбриоприёмников и других изделий для биотехнологии воспроизведения животных (патенты Российской Федерации № 2098328, Украины № 9704). Оно более 12 лет продуктивно работает на производстве, обеспечивая выпуск высококачественных изделий.

14. Разработанные способ и устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения (искусственный цервикс) обеспечивают достоверный контроль микробного загрязнения половых путей коров и тёлок и установление источника занесения микрофлоры в цервикальный канал при искусственном осеменении самок и позволяет повысить результативность воспроизводства животных, а также служит учебно-методическим приёмом при подготовке и переподготовке специалистов по биотехнологии воспроизводства и при зооветеринарной экспертизе этого процесса непосредственно в хозяйствах. Его новизна подтверждена авторским свидетельством № 1463277.

15. Разработанный регламент стерилизации полимерных инструментов для искусственного осеменения раствором хлорамина «Б», ультрафиолетовым облучением, энергиями ускоренных электронов и «Временное наставление по повторной стерилизации инструментов для искусственного осеменения», утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР и широко применяются в практике.

16. Соблюдение всех физиологических, технологических и санитарно-гигиенических требований при искусственном осеменении и трансплантации эмбрионов достигается при использовании разработанного нами специального термостатированного комплекта материалов и инструментов КОИТ-2 (патент Украины А162384А по заявке 2003032219 от 15.09.2003г.). Изучен и предложен режим термостатирования инструментов и растворов при различной длительности транспортировки и температуре окружающей среды. Разработан регламент обеззараживания футляра контейнера портативного комплекта (КОИТ-2), обеспечивающий надёжный стерилизующий эффект.

17. Физиологические, криобиологические и технологические исследования позволили разработать и усовершенствовать устройства, инструменты и оборудование для технологии искусственного осеменения коров и тёлок в местах их содержания асептическим способом с использованием портативного комплекта КОИТ-2 (микролаборатории), применение которой исключает воздействие на самок комплекса экстремальных факторов, снижающих моторную функцию полового аппарата у 65,3% самок при доставке их на пункты искусственного осеменения и обеспечивает повышение оплодотворяемости самок на 25-30%, её применение обеспечивает высокий санитарный уровень и культуру производства независимо от места проведения искусственного осеменения.

18. Разработанные способы повышения спермопродуктивности быков и оплодотворяемости самок отличаются новизной и высокой эффективностью, успешно прошли научно-производственную апробацию и внедрены в широкую производственную практику России и Украины, а способ асептического введения в половые пути самок спермы, эмбриопов и других биопрепаратов - во многих зарубежных странах с высокоразвитым животноводством.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

В результате научных исследований, опытно-конструкторских и технологических разработок, их широких производственных испытаний и организации

серийного выпуска, производству предложены и многие годы успешно используются:

1. Модернизированный комплект устройств, аппаратуры и оборудования для асептического взятия, оценки и криоконсервации спермы быков в облицованных гранулах включающий:

- Усовершенствованную модель устройства для садки быков при взятии от них спермы (УСМА-2), обеспечивающую возможность наиболее полно проявить половые рефлексы, повысить выход качественной спермопродукции.

- Модернизированную искусственную вагину, обеспечивающую оптимальные условия для протекания половых рефлексов совокупления и эякуляции.

- Спермоприёмник к искусственной вагине (а.с. № 1072861), позволяющий предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора, разбавления и перефасовки, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермы.

- Упаковку спермодоз и оптимальный режим замораживания в ней спермы.

- Установку для контроля герметичности спермодоз, которая обеспечивает высокую точность проверки герметичности спермодоз.

- Усовершенствованный полуавтомат расфасовки жидкости (ПРЖ-2) с совмещённым маркировочным узлом (УМ-1).

- Композицию быстросохнущей краски с высокой адгезионной способностью и безвредной для спермиев, наставление «Технология маркировки спермодоз при облицованном гранулировании спермы».

- Усовершенствованное устройство для эквилибрации и замораживания спермы животных (ЭКЗ-2), обеспечивающее условия равномерного охлаждения всех спермодоз, улучшая биологические показатели спермы после замораживания.

2. Способ и устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в герметичных эластичных капсулах позволяющие объективно оценить качество спермы, сократить расход спермы, затраты времени и средств (а.с. № 1543598).

3. Способ и устройство для искусственного осеменения животных, обеспечивающее выполнение всех физиологических, технологических и санитарно-гигиенических требований и повышение оплодотворяемости самок (а.с. № 18З1ЗЗОАЗ). Организован его серийный выпуск.

4. Способы обеспечения комплекса анатомо-физиологических, технологических и санитарно-гигиенических требований путём использования разработанных нами различных моделей защитных гигиенических перчаток (патенты Российской Федерации № 46280 и № 46281, Украины № 890 и 891).

5. Устройство для сварки термопластичного материала при изготовлении изделий для биотехнологий воспроизведения животных (патенты РФ № 2098328, Украины № 9704).

6. Способ и устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения (а.с. № 1463277).

7. Комплект для искусственного осеменения и трансплантации эмбрионов КОИТ-2, который позволяет проводить осеменение самок крупного рогатого скота в местах их содержания (патент Украины № 62384 А от 15.09. 2003 г.).

8. Способ исключения воздействия на животных комплекса экстремальных факторов при искусственном осеменении применением разработанной нами технологии искусственного осеменения животных непосредственно в местах их содержания асептическим методом с использованием универсального термостатированного комплекта (КОИТ-2).

Результаты теоретических исследований и разработок рекомендуем включить в справочные, учебно-методические руководства и практику преподавания биотехнологии сельскохозяйственных животных в ВУЗах соответствующих профилей и в научных учреждениях при разработке биотехнологическнх методов воспроизводства.

Список основных работ, опубликованных автором по теме диссертации

1. Влияние Р-глюкуронидазы на качественные показатели спермы производителей/ Ф.И.Осташко, В.М.Строна, Г.Н.Кузнецов//Животноводство. -1974. -№ 4. - С.53-54.

2. Методические рекомендации по Харьковской технологии взятия, консервирования и использования спермы производителей/ Ф ЛОсташко, М.П.Павленко, Г.Н.Кузнецов, И.М.Величко и др. Белгород, 1976.30 с.

3. Влияние фермента бета-глюкуронидазы на биологические свойства спермы быков-производителей// Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных. Материалы Советско-американского семинара. - Харьков, 1977.-С.67-71.

4. Рекомендации по глубокому замораживанию и использованию спермы быков-производителей/ ФЛОсташко, Г.Н.Кузнецов, Б.А.Бренман и др.- Киев, 1977.-69 с.

5. Рекомендации по взятию, обработке и глубокому замораживанию спермы быков-производителей/ Ф.И.Осташко, Г.Н.Кузнецов, М.ГШавленко,

B.И.Канцедал и да. - Киев: Урожай, 1977. - 76 с.

6.Харьковская технология асептического взятия, криоконсервации и использования спермы производителей сельскохозяйственных животных/ Ф.И.Осташко, Г.Н.Кузнецов, М.П.Павленко// Иттформ.сб. «Наука и передовой опыт на выполнение решений 25 съезда КПСС по переводу животноводства на промышленную основу». - Ленинград, 1977. - С.41-45.

7.Технология криоконсервации спермы быков в облицованных гранулах/ ФЛОсташко, Г Л Кузнецов, МЛПавленко// Животноводство. -1978. - № 11. -

C.54-56.

РОС. >, ; „ОПАЛЬНАЯ Г,'., т 1(01 ЕКА г • , с^5ург 200 Г *

8. Способ и техника асептического введения биологических жидкостей в половые пути самокУ/Материалы Советско-французского семинара по вопросам овотрансплантации. - Харьков, 1979. - С.39-43.

9. A.c. 745045 СССР, МКЛ2 A61D 7/02. Среда для криоконсервации спермы/ Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, Г.Н. Кузнецов,ЛН.Павленко, 1980.

10. Technology of aseptic removal, cryoconservation and use of breeder sperm acc, to Kharkov method / F.I.Ostashko, G.N.Kuznetsov, M.PJPavlenko, I.M.Velichko// 9th Internation congress of animal Reproduction and artificial insemination. 16-20 June, Madrid, 1980,- Vol.5.- P. 352-355.

11. A.c. 895428 СССР, МКИ3 A61D 7/02. Устройство для искусственного осеменения животных/ Ф.И.Осташко. Г.Н.Кузнецов, М.П.Павленко.

12. Методика стерилизации зоошприцов с целью повторного их использования/ Ф.И.Осташко, Г.Н.Кузнецов, А.В.Марющенко //НТБ № 34 / НИИЖ ЛиП УССР. - Харьков, 1982. - С. 40-44.

13. Новый способ упаковки спермодоэ при криоконсервации биоматериала (на рус. и англ. языках) / ФЛОсташко, Кузнецов Г.Н., М.П.Павленко// Ж. «Crio-leters» Европейского общества криобиологов, Великобритания, 1983,3 с.

14. A.c. 1072861 СССР, МКИ3 A61D 7/02. Спермоприёмник к искусственной вагине животных/ ФЛОсташко, Г.Н.Кузнецов, М.П. Павленко, 1983.

15. Aseptic method of female artificial insemination/ F.I.Ostashko, G.N.Kuznetsov, M.P.PavIenko // 10th Internation congress of animal Reproduction and artificial insemination.-Illinois, USA.- 1984.-Vol.3.-P.376-378.

16. Multifactor theory of spermatozoid injury with deep freesing / F.I.Ostashko, A.D.Bugrov, G.N.Kuznetsov, I.I. Katkov, M.P.Pavlenko.

17. Санитарная оценка осеменения животных с помощью универсального устройства/' ФЛОсташко, Г.Н.Кузнецов, МТШавленко, И.М.Величко// Молочное и мясное скотоводство, 1985. - № 1. - С.32.

18. A.c. 1463277 СССР, МКИ4 A61D 7/02. Устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения/ /Ф.И.Осташко, Г.Н.Кузнецов, М.П.Павленко, И.М.Величко, 1988.

19. A.c. 1543598 СССР, МКИ5 A61D 19/02. Устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных капсулах/ Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, ЛНЛавленко, Г.Н.Кузнецов, 1989.

20. Пути повышения санитарно-гигиенического уровня и результативности биотехнологии воспроизведения животных// Научно-технический бюллетень НИИЖ ЛиП УССР. - Харьков, 1990. - С.38.

21. Харьковская технология асептического взятия и криоконсервации спермы быков-производителей/ ФЛОсташко, ПШСузнецов, МТШавленко и др.// Методические рекомендации: Научно-производственная система «Эмбрион», -Харьков 1990. - 48 с.

22. Организация искусственного осеменения коров и тёлок по Харьковской технологии: Наставления/ Ф.И.Осташко, Г.Н.Кузнецов, М.П.Павленко,

B.И.Мирошниченко// Научно-произвдственная система «Эмбрион», - Харьков 1990.-73 с.

23. Портативный комплект для асептического осеменения коров и тёлок в местах содержания/ Г.ШСузнецов, М.П.Павленко, В.И.Мирошниченко// Научно-технический бюллетень НИИЖ ЛиП УССР. - Харьков. - 1991. - № 57. - С.72.

24. Патент 1831330 СССРЮ МКИ5 А6Ш 19/02. Устройство для искусственного осеменения животных/ Г.Н.Кузнецов, В.Ф.Дихтяренко, АГ.Кузнецов, 1992.

25. Наш! розробки виробництву// Тваринництво УкраТни. -1994. - № 4. -

C.16-17.

26. Патента 890-891 Украши на промисловий зразок. Ппешчна захисна рукавичка/ Г.М.Кузнецов, О.Г.Кузнецов, М.Г.Кузнецов, 1995.

27. Науково-виробнича ф1рма "Ембрюн" пропонуе виробництву нов! розробки// Тваринництво Украши. - 1997. - № 1. - С.32-35.

28. Патент 1867 Украши, МКИ5 А6Ш 19/02. ПристрШ для штучного за-типднення тварин/ Г.М.Кузнецов, В.Ф.Дхтяренко, О.Г.Кузнецов, 1997.

29. Патент 2098328 России, МКИ6 В6В 1/10. Устройство для сварки термопластичного материала/ Г.Н.Кузнецов, В.А.Подкопаев, А.Г.Кузнецов, Н.Г.Кузнецов, 1997.

30. Патенты 46280-46281 России на промышленный образец. Гигиеническая защитная перчатка/ Г.Н.Кузнецов, А.Г.Кузнецов, НТ.Кузнецов. 1999.

31. Новые возможности и резервы повышения эффективности искусственного осеменения животных// Сб. научных трудов, посвященный 150-летию со дня основания Харьковского зооветеринарного института. - Харьков, 2001. -Вып. 9 (33). - 4.2. - С. 186-189.

32. Декларацшний патент 62384 Украши, МПК7 А6Ш 19/02. Портативний комплект оператора по штучному оЫметнню 1 трансплантацп ембрюшв. -15.12.2003.

33. Фиизиологическое обоснование искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания// Научно-технический бюллетень № 83.- Харьков: Институт животноводства Украинской академии аграрных наук, 2003-С.66-70.

34. Особенности технологии искусственного осеменения крупного рогатого скота// Вестник аграрной науки. - 2003. - № 8. - С.41-45.

35. Полимерные защитные перчатки для искусственного осеменения животных //Зоотехния. - 2004. - № 2. - С.27-28.

36. Прогнозирование качественных показателей спермиев быков при криоконсервации//Научно-технический бюллетень № 86. - Харков. - 2004. -С.56-59.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

МАПУ - Министерство аграрной политики Украины.

УААН - Украинская академия аграрных наук.

МНПА - Международная научно-производственная ассоциация.

НПФ - Научно-производственная фирма.

УПП УТОС - Учебно-производственное предприятие Украинского

товарищества общества слепых. ОКТБ УНИИМЭСХ - Опытно-конструкторское технологическое бюро Украин-

ского НИИ механизации и электрификации сельского хозяйства.

ЕСКД - Единая система конструкторской документации.

НТС - Научно-технический совет.

ХТКС - Харьковская технология криоконсервации спермы.

УСМА - Установка садки быков малогабаритная амортизирующая.

ПРЖ - Полуавтомат расфасовки жидкости.

ЭКЗ - Эквилибратор-замораживатель спермы.

КОИТ - Комплект оператора искусственного осеменения и трансплантации эмбрионов.

УАР - Устройство для асептического разбавления спермы.

УМ - Установка маркировки спермодоз.

УР - Условный рефлекс.

Э.Эф. - Экономический эффект,

о/х • опытное хозяйство.

Подписано в печать 07.09.2004. Формат 60x80/16. Гарнитура Times. Усл. пл. 2 Тираж 100 экз. Заказ № 101 Издательство оперативной печати

1г устряйегм дла шп быков ишмабцшюе с партою^

2- подучеяяи» эдсудот на укорочен муж аамрттарртатуао м^инишу» нгану с одаорпоаым «мрымрясшппам;

3-1ЧК1шпм<«а1мт

4- ирдаитг «Сии зялулж/л ( во массе);

5- отмкяж чпонр(цп;

6- атвор яро< ляа определит акгмиостн н «сомчежтроци* с перми» в эякуляте;

7- разбшкапм эякуляте тершоеппиромино* срсаок ЛI;

в- миерапса эякулят* до ятичаняя его оценки;

9- дюгапшт рибаяллше эякулята средЫ! №1;

(в-лерефмаяка рпЬмоиМ сперны я пштрц» трубку;

11-юготмлеяне я маркнроака спермод»! аяпарятам ПРЖ- 2;

12- затрут юеримп ■ тубы к отправка во пясямояочте я слсрмоСайк;

13- аерефасоака спсрищя> я контейнеры устровстяа ЭКЗ-2;

14- амятааяа- эпяляфрааяа;

15- никря имие «ершик» я устряйстяе ЭЮ-2;

16- оттаямяае;

17- яепшмаамяе трио при

■ираякалышм метаем; К-асямыманае спермы ток Гтмкрншшяшапиш.

Схема Харьковской технологии асептического получения, кршжонсервирования длительного хранения и использования спермы производителей сельскохозяйственных животных

РНБ Русский фонд

2006-4 3535

?7СЕН2СМ ■ \

. ?

Содержание диссертации, доктора сельскохозяйственных наук, Кузнецов, Григорий Николаевич

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ. 1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Основные направления совершенствования способов, технологических приёмов и устройств для получения спермы.

2.2. Характеристика методов и технических средств криоконсервации спермы производителей.

2.2.1. Основные этапы совершенствования метода криоконсервации спермы.

2.2.2. Характеристика основных полимеров, применяемых для ф изготовления инструментария, материалов и изделий, используемых в искусственном осеменении.

2.3. Методы оценки качества спермы.

2.4. Влияние на спермии некоторых экстремальных факторов.

2.5. Влияние микробного загрязнения спермы на результативность осеменения.

2.6. Методы стерилизации материалов и инструментария для искусственного осеменения и профилактики микробного загрязнения спермы и половых путей самок.

2.7. Анатомо-физиологические особенности и основные направления совершенствования методов и способов искусственного осеменения.

3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Изучение стереотипа реакций и проявления условных | рефлексов при получении спермы от быков в зависимости от используемых способов и разработка для этих целей новых устройств и аппаратуры.

4.1.1. Влияние на протекание половых рефлексов быков конструктивных элементов устройств для садки быков при взятии от них спермы.

4.1.2. Изменение биологических показателей спермы быков и ^ протекание рефлексов отдачи спермы при использовании искусственной вагины различных конструкций.

4.1.3. Совершенствование способа получения спермы и разработка конструкции спермоприёмника для асептического взятия спермы.

4.1.4. Применение метода определения концентрации сперми-# ев по оптической плотности для изучения интенсивности их движения и прогнозирования качественных показателей после криоконсервации.

4.2. Изучение влияния на качественные показатели спермы быков биофизических технологических факторов и разработка упаковок спермодоз, аппаратуры и оборудования для криоконсервации спермы.

4.2.1. Влияние на качество спермы новых полимерных материалов.

4.2.2. Разработка оптимальных параметров упаковок спермодоз при их криоконсервации.

4.2.3. Изучение и разработка режима замораживания спермы в полимерных упаковках диаметром 3,8 мм.

4.2.4. Совершенствование способа изготовления упаковок спермодоз для их криоконсервации и разработка устройств для расфасовки и маркировки спермодоз.

4.2.5. Влияние седиментации спермиев на их биологические показатели и усовершенствование устройства для экви-либрации и замораживания спермы.

4.3. Разработка способа оценки качественных показателей спермы в герметичной упаковке.

4.3.1. Особенности интактного способа оценки качества спермы.

4.3.2. Технологичсеские особенности разработанного устройства для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных герметичных упаковках.

4.4. Влияние на спермии физико-механических факторов, возникающих при дегерметизации спермодоз и разработка способа их предотвращения. 4.5. Изучение анатомо-физиологических параметров полового тракта самок и разработка устройств для введения спермы. 1 ^

4.5.1. Разработка способа и устройства для искусственного осеменения животных.

4.5.2. Изучение анатомо-физиологических параметров поло- вого тракта самок и разработка новых моделей и техно™ логии изготовления гигиенических защитных перчаток.

4.5.3. Изучение способов обеспечения анатомо-физиологиче-ских требований и разработка устройства для изготовления плёночных изделий для искусственного осеменения животных.

4.6. Изучение и разработка приёмов предотвращения и контроля микробного загрязнения половых путей самок при введении спермы.

4.6.1. Разработка способа и устройства для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения животных.

4.6.2. Способы и технологические приёмы стерилизации полимерных инструментов для искусственного осеменения животных.

4.7. Изучение физиологической реакции самок на мани- пуляции искусственного осеменения и разработка технологии его проведения в местах содержания животных.

4.7.1. Физиологические особенности проведения искусственного осеменения коров и тёлок в местах их содержания.

4.7.2. Изучение возможности обеспечения физиологических и технологических требований при искусственном осеменении коров и тёлок с использованием универсального термостатированного комплекта материалов и инструментов (микролаборатории) для осеменения животных в местах их содержания.

4.8. Экономическая эффективность внедрения разработанных способов и технологических приёмов Харьковской технологии асептического взятия, криокон-сервации и использования спермы быков-производителей.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка и совершенствование способов повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости крупного рогатого скота"

Проблемы, связанные с размножением животных были и остаются одними из наиболее сложных, актуальных и значимых проблем теоретической биологии. Постоянный интерес к ним не исчерпывается чисто теоретическим направлением исследований, поскольку все достижения в данной области непосредственно связаны с кардинальными вопросами развития животноводства и постоянно находят прямой и эффективный выход в практику.

Выдающийся ученый биолог, профессор Илья Иванович Иванов [1907, 1910] по праву признан основоположником и разработчиком метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. Важнейшее значение искусственного осеменения сельскохозяйственных животных он усматривал в том, что спермой, полученной от одной садки производителя, путём дробления и разбавления эякулята можно осеменить большое поголовье маток. Это даёт возможность значительно уменьшить количество производителей, использовать для осеменения наиболее ценных в племенном отношении самцов и получать от них в сотни раз больше потомства, чем при естественном спаривании.

Величайшее открытие XX века В.К.Миловановым, И.И.Соколовской и И.В.Смирновым свойства спермиев млекопитающих в течение неограниченно длительного времени сохранять свою жизнеспособность и генетическую информацию в условиях криогенных температур дало возможность получения нужных человеку генетических комбинаций родительских пар независимо от времени существования и от места нахождения в мировом пространстве мужских и женских особей. В наше время практически все страны мира широко используют это открытие в сельском хозяйстве, биологии и медицине. Благодаря этому открытию создано и развито новое научное направление - сельскохозяйственная криобиология, что принципиально изменило характер научных исследований в области репродуктологии животных и темпы крупномасштабной селекции в животноводстве.

Актуальность темы. Учёными [O.Rocmelle,1927; В.К.Милованов, 1931, 1936, 1940; Н.А.Кузнецова, 1913; F.Miller, E.Eyans,1934; П.А.Волосков, 1935; Х.И.Животков, 1952; О.Д. Наумов, 1955; Л.В.Гусев, 1958; А.В.Квасницкий, 1961; В.М. Сопельник, 1965; И.С.Вакуленко, 1970; Ф.И.Осташко, 1959-1972; С.А. Аракенян, 1991 и др.] разработано ряд методов и способов получения спермы.

Однако возросшие технологические и санитарно-гигиенические требования вызвали необходимость дальнейшего совершенствования способа и устройств для получения, криоконсервации, хранения и использования спермы животных.

Не менее важной задачей являлась разработка способов длительного хранения спермы от ценных быков-производителей, что открывает возможности для реализации крупномасштабной генетической селекции.

Большой вклад в разработку теории и внедрение в практику метода замораживания спермы внесли ученые И.В.Смирнов [1948-1974], A.U. Smith, C.Polge, [1950[, L.Rowson [1956], Х.Х.Хабибуллин [1957-1960], В.Ф.Турбин, , [1966,1968], Ф.И.Осташко [1960-1978], В.К.Милованов [1968,1972], И.И. Соколовская [1975, 1976], Б.Г.Пронин [1981], П.Й. Пакенас [1985].

Разносторонние исследования по асептическому получению спермы от быков, разработке аппаратуры и оборудования для её замораживания, хранения и транспортировки проведены в Институте животноводства УААН коллективом учёных под руководством профессора академика УААН Ф.И. Ос-ташко [Ф.И. Осташко и др., 1960-1978; А.Д. Бугров, 1965, 1968; В.А. Шин-каренко, 1972].

Большое значение имело дальнейшее совершенствование Харьковской технологии получения, фасовки, криоконсервации и использования спермы в облицованных гранулах в направлении усовершенствования способов и устройств для получения спермы, оценки её биологических показателей и прогнозирование их сохранения после криоконсервации, упаковки спермодоз, повышения их термостойкости оптических и механических свойств с обеспечением высокого качества спермы и эффективности её использования.

Требовали дальнейшего изучения вопросы асептического взятия, крио-консервации, хранения и введения спермы в половые пути самки, совершенствование устройств, инструментария и методов контроля качества спермы, технологических приёмов искусственного осеменения самок.

Работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ Института животноводства УААН и является составной частью научно-технических программ «Технологии в молочном и мясном скотоводстве», «ГТродовольствие-95» проект «Молоко» темы 03 «Разработать вопросы теории и создать новые биотехнологии воспроизведения животных, которые обеспечивают ускорение темпов крупномасштабной селекции».

Цель и задачи исследований. Цель наших исследований состояла в изучении выдвинутых практикой направлений повышения спермопродуктивно-сти быков и оплодотворяемости самок КРС, разработке новых и усовершенствовании существующих способов, технологических приёмов, оборудования, аппаратуры и инструментария для получения, криоконсервации и использования спермы быков-производителей, а также широком внедрении новых разработок в практику искусственного осеменения животных.

Для достижения намеченной цели на разрешение были поставлены вытекающие из неё задачи:

- изучить стереотип реакций и проявление условных рефлексов быков при получении от них спермы с использованием различных способов, устройств и оборудования;

- установить коррелятивную зависимость интенсивности движения спер-миев с результатами дальнейшего замораживания;

- определить влияние на спермии биофизических факторов, возникающих в технологическом процессе получения, оценки, криоконсервации и исполь-зования^спёрмы быков: влияние на биологические показатели спермы новых полимерных материалов; факторов, возникающих при дегерметизации спермодоз; влияние условий адаптации половых клеток на их биологические показатели после замораживания;

- изучить физиологическую реакцию самок на манипуляции искусственного осеменения, изменение основных параметров полового тракта и его моторики;

- определить пути микробного загрязнения полового тракта самок и его предотвращения.

На основании научных исследований разработать:

- новые способы, технологические решения и устройства для получения, криоконсервации и использования спермы в облицованных гранулах и способы оценки в них её качественных показателей;

- новый тип упаковки для криоконсервации спермы быков-производителей и режим замораживания спермы в этой упаковке;

- методику деконсервации, асептический способ и устройство для контроля качества спермы;

- способ, устройство и технику асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и препаратов;

- аппаратуру, устройства и инструментарий для искусственного осеменения животных;

- способ контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения;

- модернизированный вариант технологической линии асептического получения, оценки, криоконсервации, длительного хранения и использования спермы быков-производителей в облицованных гранулах;

- технологию искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания;

Основные положения, выносимые на защиту: • новые способы и технологические решения в технологии получения, оценки, криоконсервации и использования спермы быков в облицованных гранулах, включающие:

- модернизированный вариант технологической линии асептического получения, оценки, криоконсервации, длительного хранения и использования спермы быков; модернизированную искусственную вагину; спермоприёмник к искусственной вагине животных (а.с. СССР № 1463277);

- полимерную упаковку облицованных гранул, режим замораживания в ней спермы;

- неразрушающий способ, устройство и технику контроля качества спермы в герметичных капсулах (а.с. № 1543598).

• Технология искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания, включающая:

- способ, устройство и технику асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и препаратов (а.с. СССР № 895428);

- устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения животных (а.с. СССР № 1463277);

- несколько модификаций санитарных гигиенических перчаток (патенты РФ № 46280, № 46281, патенты Украины № 890, № 891);

- устройство для сварки термопластического материала при изготовлении инструментария для искусственного осеменения животных (патент РФ № 2098328, патент Украины № 9704);

- универсальный термостатированный портативный комплект биотехнолога по воспроизводству животных (патент Украины № 62384 А от 15.09.2003 г.

Научная новизна работы

1. Изучен динамический стереотип реакций и проявление половых рефлексов при получении спермы от быков с использованием различных способов и устройств. Установлены факторы, снижающие спермопродуктив-ность производителей.

2. Впервые изучено влияние на спермии экстремальных биофизических факторов, возникающих при получении, оценке, криоконсервации спермы, а также при дегерметизации и использовании спермодоз, выявлен механизм их воздействия на спермии и на основании комплексных исследований разработаны способы предотвращения негативного влияния этих факторов.

3. Установлена коррелятивная зависимость интенсивности движения спермиев и их качественных показателей после криоконсервации.

4. Предложены новые способы и технологические решения в технологии криоконсервации спермы быков-производителей в облицованных гранулах, разработанные и усовершенствованные устройства и оборудование для технологической линии.

5. Разработан режим замораживания спермы в предложенной нами в со-авторстве)новой упаковке (ТУУ 14057860.001-98).

6. В результате физиологических исследований впервые предложены методика деконсервации, асептический способ и устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных капсулах (а.с. СССР № 1543598), внедрение которых снижает потери спермопродукции, обеспечивает более упрощённую и ускоренную подготовку препарата к микроскопированию и повышает объективность исследований.

Изучена физиологическая реакция коров и тёлок на манипуляции искусственного осеменения, изменение основных параметров полового тракта и его моторики. Установлено, что доставка животных на пункты искусственного осеменения в разной степени вызывает у них повышенное психоэмоциональное напряжение, блокирование моторики полового тракта и снижение оплодотворяемости.

7. Как результат научных исследований и опытно-конструкторских разработок предложен ряд новых и усовершенствованных устройств и полимерных одноразовых инструментов для искусственного осеменения животных, в частности:

• Усовершенствованная модель устройства для садки быков при взятии от них спермы (УСМА-2) обеспечивающая возможность наиболее полно проявить половые рефлексы и повысить выход качественной спермопродукции.

• Модернизированная искусственная вагина, обеспечивающая оптимальные условия для протекания рефлексов совокупления и эякуляции у быков.

• «Спермоприёмник к искусственной вагине» (а.с. № 1072861) позволяющий предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора проб, разбавления и перефасовки, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермы.

• Установка для контроля герметичности спермодоз, которая обеспечивает высокую точность определения герметичности спермодоз.

• Усовершенствованный полуавтомат расфасовки жидкости (ПРЖ-2) с совмещённым маркировочным узлом (УМ-1).

• Композиция быстросохнущей краски с высокой адгезионной способностью и безвредной для спермиев.

• Усовершенствованное устройство для эквилибрации и замораживания спермы животных (ЭКЗ-2), которое обеспечивает условия равномерного охлаждения, устраняет седиментацию спермы, улучшает взаимодействие половых клеток с окружающей их искусственной средой, улучшает биологические показатели спермы после замораживания.

• Устройство для сварки термопластичного материала (патент Российской Федерации № 2098328, патент Украины № 9704) при изготовлении инструментария для искусственного осеменения животных, которое предотвращает растяжение, перекос, облои, заусеницы и складчатость свариваемого материала, что повышает качество сварки и в целом изделий из термопластичного материала.

• Устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения (а.с. СССР № 1463277), позволяющее получать стабильные достоверные результаты и может использоваться как новый методический подход при ветеринарно-санитарной и зоотехнической экспертизе научных данных, а также в учебном процессе при подготовке и переподготовке специалистов по воспроизводству.

• Несколько модификаций одноразовых гигиенических защитных перчаток из плёночного материала, обеспечивающих выполнение физиологических и санитарно-гигиенических требований, а также обеспечение технологичности и универсальности их использования (патенты РФ № 46280, № 46281, Украины № 890 и № 891).

• Устройство для имитации искусственного осеменения, которое используется для научно-исследовательских работ в НИИ и специализированных лабораториях (а.с. СССР № 1463277).

• Портативный комплект инструментов и материалов для искусственного осеменения коров и тёлок (микролаборатория) в местах их непосредственного содержания (патент Украины 62384 А).

Практическая значимость работы

На основании проведенных научных исследований, опытно-конструкторских работ и технологических разработок нами как самостоятельно так и в соавторстве разработаны новые способы, технологические приёмы, устройства, оборудование и инструментарий для асептического получения, оценки, криоконсервации и использования спермы быков в облицованных гранулах.

Для организации серийного производства новых разработок совместно с научными, опытно-конструкторскими, проектно-технологическими учреждениями и племпредприятиями России и Украины, разрабатывались технические задания, технические условия и другая необходимая нормативно-технологическая документация, изготавливались и испытывались в производственных условиях опытные образцы, проводились межведомственные испытания и обязательно следовало проведение работ по постановке на производство разработанных нами устройств, аппаратуры, инструментария и материалов.

Согласно приказу ВНПО по племделу в животноводстве № 120 от 2.09.1987 года опытный образец модернизированного комплекта технологической линии асептического получения, оценки, криоконсервации и использования спермы быков в облицованных гранулах по Харьковской технологии прошёл длительную производственную апробацию на Калужском племпред-приятии и был рекомендован Государственной комиссией Госагропрома СССР и Минприбора СССР для серийного производства.

В соответствии с Постановлением ЦК КПСС и Совета Министров СССР № 1472 «О мерах по повышению эффективности и улучшению организации племенного дела в животноводстве» соответствующим министерствам и ведомствам было доведено задание по выпуску аппаратуры, оборудования, материалов и инструментария для поставки предприятиям Госагропрома СССР.

Серийное производство модернизированных технологических линий получения, оценки и криоконсервации спермы быков в облицованных гранулах было поручено опытному заводу Московского НПО «Темп» Минприбора СССР. Всего было выпущено и поставлено племпредприятиям России, Украины и других республик бывшего СССР 250 комплектов технологических линий.

Выпуск тонкостенной прозрачной полимерной трубки диаметром 3,8 мм для изготовления упаковки спермодоз и диаметром 8 мм для изготовления защитных чехлов был поручен Минхимпрому СССР. Ежегодный выпуск и поставка её племпредприятиям превышала 350000 метров.

Серийное производство инструментария и расходуемых материалов было поручено Министерству соцобеспечения. Ялтинским УПП УТОС было выпущено более 154 млн. устройств для искусственного осеменения коров мано-цервикальным способом (зоошприц тип-2), свыше 2,3 млн. наконечников устройств для искусственного осеменения коров и тёлок визо- и ректо-цервикальным способом, более 12 млн. спермоприёмников для асептического получения спермы.

При непосредственном участии соискателя комплексно проводились работы, связанные с постановкой на производство новых и усовершенствованных устройств, аппаратуры, оборудования, инструментария и материалов.

Диссертантом проведена также большая работа по подготовке и переподготовке биотехнологов и зооветспециалистов племпредприятий для работы по новой технологии.

Результаты научных исследований, новых конструкторско-технологи-ческих решений, разработанных диссертантом, способов, устройств, аппаратуры и инструментария были включены во всесоюзные инструкции, ГОСТы, методические рекомендации, наставления, рекламные проспекты, плакаты и информационные листки для племенных предприятий и пунктов искусственного осеменения, которые изданы массовыми тиражами.

Кроме модернизированных технологических линий для асептического получения, оценки и криоконсервации спермы быков большую практическую значимость имеет способ, устройство и техника асептического введения спермы, эмбрионов и других биопрепаратов в половые пути самок. Высокая эффективность этого способа при незначительных материальных затратах обеспечили, в кратчайшие сроки, внедрение его во многих зарубежных странах с высокоразвитым животноводством. С небольшой модификацией французские фирмы «Кассу», «Стерцик», WBM, немецкая фирма «Ми-нитюб», американская фирма «Континенталь-пластик» и многие другие уже многие годы используют этот способ при искусственном осеменении и трансплантации эмбрионов животных. Разработанная на основе этого способа технология искусственного осеменения коров и тёлок в местах их непосредственного содержания одобрена на заседании секции производства и переработки продуктов животноводства научно-технического совета Министерства аграрной политики Украины (протокол № 4 от 22 декабря 2000 года). За годы внедрения и использования наших разработок на племпредприя-тиях России и Украины ежегодно заготавливалось более 40 млн. спермодоз в облицованных гранулах. При этом повысился выход качественной спермо-продукции и её санитарный уровень, повысилась культура производства, безопасность труда персонала занятого на работах с жидким азотом. Десятки миллионов доз спермы заложены в криобанки на период оценки быков по качеству потомства. При этом спермопродукция в облицованных гранулах гарантировано защищена от микробного загрязнения и снижения её биологического качества.

За счёт высокого санитарного и биологического качества спермопро-дукции, заготовленной в облицованных гранулах, повысилась оплодотворяе-мость маточного поголовья, снизился вдвое расход спермы на одно плодотворное осеменение, снизилась заболеваемость самок генитальными болезнями. Ежегодное осеменение коров и тёлок по этой технологии превышало 2,5 млн. голов.

Разработанные соискателем способ асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и других биопрепаратов и универсальный термостатированный комплект инструментов и материалов позволили создать технологию искусственного осеменения животных в местах содержания, обеспечивающую выполнение всех физиологических, санитарно-гигиенических и технологических требований, повышение оплодотворяемости самок на 25-30% и эффективности маршрутно-кольцевого метода осеменения чем практически снимает необходимость строительства типовых пунктов искусственного осеменения как на крупных фермах, так и для фермерского и частного сектора.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации представлены на: ученых Советах Института животноводства Украинской академии аграрных наук (ИЖ УААН, Харьков, 1976 - 1992 гг.) и Харьковского биотехнологического центра УААН (1998-2003 гг.), научно-практических конференциях ИЖ УААН; научно-технической конференции «Пути интенсификации производства молока и говядины на Украине», Харьков, 1985; республиканской научной конференции «Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве», Харьков, 1988; научно-производственной конференции «Новые методы селекции и биотехнологии в животноводстве. Разведение, популяционная генетика и биотехнология», Киев, 1991; ежегодных Международных выставках «Агро 1996-2003»; ежегодных государственных конкурсах операторов по воспроизведению животных.

На Международных конференциях, семинарах и конгрессах:

Советско-американском семинаре по физиологии воспроизведения сельскохозяйственных животных, Харьков, 1977;

Советско-французском семинаре по вопросам овотрансплантации, Харьков, 1979;

9-м (Мадрид) и 10-м (Иллинойс, США) Международных конгрессах по воспроизведению и искусственному осеменению животных, 1980, 1984;

Основные разработки диссертационной работы являются частью комплексной работы «Разработка и внедрение в производство новейших биотехнологий воспроизведения, размножения и улучшения сельскохозяйственных животных», которая выдвинута на соискание Государственной премии Украины 2004 года в области науки техники.

Личный вклад соискателя. Соискатель провёл все теоретические исследования и большую часть экспериментов самостоятельно. Научно-производственные испытания проведены совместно с сотрудниками ИЖ УААН на базе экспериментально-методической станции искусственного осеменения опытного хозяйства «Украинка», Харьковского и других племобъединений Украины и Российской федерации и Международной научно-производственной ассоциации «Эмбрион». Из общих научных экспериментов и публикаций диссертант использовал только свою часть результатов.

Соискатель принимал активное участие в организации Международной научно-производственной ассоциации «Эмбрион», длительное время был заместителем директора, а в настоящее время является её руководителем.

С тех пор как 5 мая 1966 года Харьковским зооветеринарным институтом автору присвоена квалификация инструктора по искусственному осемеv нению коров, овей, кобыл и свиней, всю дальнейшую жизнь он посвятил этому направлению.

За высокие результаты, прогрессивную организацию искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, подготовку и активное участие в проведении районных, областных и республиканских конкурсов техников искусственного осеменения и биотехнологов по воспроизводству животных автор награждён орденом Трудового Красного Знамени, медалью «За доблестный труд. В ознаменование 100-летия со дня рождения В.И.Ленина», се-ребрянной медалью и грамотами ВДНХ СССР, знаками: «Победитель Всесоюзного социалистического соревнования», «Ударник Всесоюзного социалистического соревнования», многими почётными грамотами Министерства аграрной политики Украины, областных и районных госадминистраций.

Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 6 методических рекомендаций, 5 пособий, 7 информационных листков, 76 статей, 3 рекламных проспекта, 3 инструкции, 4 наставления, 12 плакатов, 5 материалов международных конференций.

По теме диссертации имеется 6 патентов и 9 авторских свидетельств.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, предложений производству, списка используемой литературы и приложений.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Кузнецов, Григорий Николаевич

4.10. ВЫВОДЫ

1. В результате исследования динамического стереотипа реакции быков при получении от них спермы, экспериментальных и опытно-конструкторских работ предложено модернизированное устройство для получения спермы (УСМА-2), по сравнению с известным оно обеспечивает оптимальные условия для проявления половых рефлексов быков-производителей, его применение в большей степени отвечает анатомо-физиологическим особенностям быков-производителей: время рефлекса полового влечения и подготовки до момента проявления обнимательного рефлекса и эякуляции укорачивается (-0,3 с и -0,1 с), а процесс завершающего сбора эякулята удлиняется (+0,3 с) и общее количество спермиев в эякуляте увеличивается (с 5,29 до 5,52 млрд).

2. Методом биологического моделирования усовершенствована конструкция модернизированной искусственной вагины, в которой воссозданы оптимальные условия для протекания половых рефлексов совокупления и эякуляции. По сравнению с базовым вариантом время реакции до эякуляции сокращалось на 34 секунды, средняя активность спермиев и их концентрация возрастали на 0,48 балла и 0,28 млрд/мл соответственно, причем наблюдалась тенденция увеличения концентрации спермиев в последнем эякуляте.

3. Применение одноразового спермоприёмника с соединительным устройством по а.с. № 1072861, сконструированного методом биологического моделирования, обеспечивает возможность перефасовки эякулята по закрытой системе в трубки различного диаметра без дополнительного использования специальных переходников, позволяет предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора проб, упростить технологическую операцию разбавления и перефасовки разбавленной спермы, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермопродукции, что позволило организовать их серийное производство (выпущено более 12 млн. штук).

4. Динамика распространения спермиев в искусственных средах, вызывающая изменение их оптической плотности, объективно характеризует потенциальные энергетические возможности спермиев, коррелирует с их выживаемостью после криоконсервации и может применяться для прогнозирования криоустойчивости спермы.

5. Установлено, что по физико-механическим и оптическим свойствам для изготовления упаковок спермодоз наиболее отвечают физиологическим, криобиологическим и технологическим требованиям унифицированный пластикат медицинский ПМ-1/42-У и полиэтилен высокого давления (ВД) марки 15802-020. Эти полимеры не оказывают на спермии токсического влияния, обеспечивают герметичность спермодоз и её сохранение в процессе криоконсервации, длительного хранения и транспортировки.

6. На основании проведенных исследований оптимальными параметрами упаковки спермодоз объемом 0,25 мл установлен диаметр - 4 мм (3,8±0,2 мм), длина - 32-35 мм, толщина стенки - 80±10 мкм. Оптимальный режим замораживания спермы в таких упаковках достигается при скорости падения температуры в диапазоне от 0°С до -70°С в пределах 30-35°С в минуту. При этом обеспечивается активность 4,1 балла, выживаемость при 38°С - 13,8 часа, абсолютный показатель выживаемости спермиев (Sa) - 23,0.

7. Для поточного изготовления упаковок спермодоз и их идентификации усовершенствована конструкция полуавтомата расфасовки и дозировки жидкости с совмещенным маркировочным узлом (ПРЖ-2), разработан способ и отработана технология нанесения на поверхность спермодоз всех необходимых сведений о них. Это устройство в составе комплекта аппаратуры Харьковской технологии асептического получения, криоконсервации, длительного хранения и использования спермы быков с положительными результатами прошло длительную производственную апробацию и было рекомендовано для серийного производства, организован их выпуск и поставка п л ем предприятиям. Подобран состав красителя не оказывающего отрицательного влияния на спермии и обеспечивающего высокую адгезию отпечатка в процессе криоконсервации и хранения спермодоз в жидком азоте.

8. Применение усовершенствованного устройства для эквилибрации и замораживания спермы (ЭКЗ-2), обеспечивает сохранение биологической полноценности спермы в процессе криоконсервации, равномерную адаптацию и эквилибрацию всех спермиев, стабилизацию режима замораживания спермы в каждой спермодозе.

9. Разработанный нами, впервые в практике искусственного осеменения, интактный способ оценки качества спермы в герметичной спермодозе признан изобретением и защищен авторским свидетельством № 1543598, имеет ряд преимуществ перед общепринятым способом - исключение микробного загрязнения спермодоз и экономии 6-8% спермы, достижение объективности оценки, а также в снижении затрат и в экономии времени на выполнение многих технологических операций. Для практической реализации этого способа нами разработано специальное устройство, организован его серийный выпуск и поставка племпредприятиям и хозяйствам.

10. Для предотвращения снижения качества спермы при дегерметизации облицованных спермодоз в осеменительном инструменте предложен способ их предварительной дегерметизации специальной стерильной иглой через выходное отверстие наконечника инструмента.

11. Обеспечение анатомо-физиологических, санитарно-гигиенических и технологических требований при введении спермы в половые пути самок достигается применением разработанного нами способа и устройства (авторское свидетельство № 1831330 A3), обеспечивающих полную асептичность осеменения, практическую возможность выполнения анатомо-физиологических и технологических требований, предотвращает травмирование слизистой оболочки половых путей, способствует повышению оплодотворяемости самок на 25-30%. Организован его серийный выпуск и поставка потребителям.

12. В разработанных нами моделях одноразовых защитных гигиенических перчаток (патенты России № 46280 и № 46281, Украины № 890 и № 891) наиболее полно учтены анатомо-физиологические, технологические и санитарно-гигиенические требования, предъявляемые при искусственном осеменении коров и тёлок, организовано их серийное производство с ежегодным выпуском превышающим 12 млн. штук.

13. Разработанное устройство для изготовления изделий, применяемых при искусственном осеменении животных, позволяет производить непрерывную сварку и разделение изделий больших размеров и сложной конфигурации, любые формы и модификации перчаток для искусственного осеменения, спермоприёмников, эмбриоприёмников и других изделий для биотехнологии воспроизведения животных (патенты Российской Федерации № 2098328, Украины № 9704). Оно более 12 лет продуктивно работает на производстве, обеспечивая выпуск высококачественных изделий.

14. Разработанные способ и устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения (искусственный цервикс) обеспечивают достоверный контроль микробного загрязнения половых путей коров и тёлок и установление источника занесения микрофлоры в цервикальный канал при искусственном осеменении самок в производственных условиях и позволяет повысить результативность воспроизводства животных. Его новизна подтверждена авторским свидетельством № 1463277. Методический подход имитации искусственного осеменения животных с использованием данного устройства может служить учебно-методическим приёмом при подготовке и переподготовке специалистов по биотехнологии воспроизводства, а также при зооветеринарной экспертизе этого процесса непосредственно в хозяйствах.

16. Соблюдение всех физиологических, технологических и санитарно-гигиенических требований при искусственном осеменении и трансплантации эмбрионов достигается при использовании разработанного и предложенного нами специального термостатированного комплекта материалов и инструментов КОИТ-2. Изучен и предложен режим термостатирования инструментов и растворов при различной длительности транспортировки и температуре окружающей среды. Разработан регламент обеззараживания футляра контейнера портативного комплекта (КОИТ-2), обеспечивающий надёжный стерилизующий эффект (патент Украины на изобретение №62384А по заявке 2003032219 от 15.09.2003 г.).

17. Физиологические, криобиологические и технологические исследования позволили разработать и усовершенствовать устройства, инструменты и оборудование для технологии искусственного осеменения коров и тёлок в местах их содержания асептическим способом с использованием портативного комплекта КОИТ-2 (микролаборатории), применение которой исключает воздействие на самок комплекса экстремальных факторов, снижающих моторную функцию полового аппарата у 65,3% самок при доставке их на пункты искусственного осеменения и обеспечивает повышение оплодотворяемо-сти самок на 25-30%, её применение обеспечивает высокий санитарный уровень и культуру производства независимо от места проведения искусственного осеменения.

18. На основании физиологических, криобиологических, санитарно-гигиенических и технологических исследований разработаны способы повышения спермопродуктивности быков и оплодотворяемости самок, которые отличаются новизной и высокой эффективностью, успешно прошли научно-производственную апробацию и внедрены в широкую производственную практику России и Украины, а способ асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов других биопрепаратов - во многих зарубежных странах с высокоразвитым животноводством.

4.11. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Как результат научных исследований, опытно-конструкторских и технологических разработок, их широкого производственного испытания, производству предложены и многие годы успешно используются:

- Спермоприёмник к искусственной вагине (а.с. № 1072861), позволяющий предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора, разбавления и перефасовки по закрытой системе, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермы.

- Упаковку спермодоз и оптимальный режим замораживания в ней спермы.

- Усовершенствованный полуавтомат расфасовки жидкости (ПРЖ-2) с совмещённым маркировочным узлом (УМ-1).

- Усовершенствованное устройство для эквилибрации и замораживания спермы животных (ЭКЗ-2), обеспечивающее условия равномерного охлаждения, устраняя седиментацию спермы, улучшая взаимодействие половых клеток с окружающей их искусственной средой, улучшая биологические показатели спермы после замораживания.

6. Способ и устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения (а.с. № 1463277).

4.9. Заключение

Приоритетным направлением развития молочного скотоводства на ближайшую перспективу следует считать повышение продуктивности животных и снижение затрат. Одним из важнейших направлений решения этой задачи является улучшение племенного дела, создание технических и технологических средств, отвечающих современным требованиям.

С целью усовершенствования существующих и разработки новых способов инструментов, оборудования и технологических приёмов получения, фасовки, криоконсервации и использования спермы быков-производителей, а также широкого их внедрения в практику нами и были проведены лабораторные исследования, научно-хозяйственные опыты и конструкторско-техно-логические разработки совместно с научными, опытно-конструкторскими, проектно-технологическими учреждениями и племпредприятями Российской Федерации.

В работе приведены только завершающие материалы исследований и разработок. Поисковые и промежуточные материалы составляют огромный объём и приведены в наших отчётах НИР и ОКР.

Основным объектом исследований были сперма и быки симментальской, красной степной, чёрно-пёстрой, лебединской, монбельярдской и айр-ширской пород, а также маточное поголовье.

На основании проведенных научных исследований и конструкторско-технологических разработок нами было усовершенствовано устройство для садки быков при взятии от них спермы. Усовершенствованная модель (УСМА-2) способствует созданию наиболее благоприятных физиологических условий для отдачи спермы быком, даёт возможность быку наиболее полно проявить половые рефлексы, значительно снижает шум движущихся частей станка во время садки быка, увеличивает рычаг сопротивления садочной подушки боковым ударам животного.

После проведения экспериментальных исследований модернизированный нами станок внедрён в производство и является составной частью технологической линии асептического взятия и криоконсервации спермы быков-производителей и является дальнейшим совершенствованием всех технологических разработок Осташко Ф.И., Вакуленко И.С. [1968, 1969]; Белокож-кина В. [1977]; Кругляка А., Зорина В. [1980] и других авторов.

Для проявления полноценной эякуляции большое значение имеет имитация анатомо-физиологических условий влагалища в искусственной вагине.

Методом биотехнологического моделирования была усовершенствована конструкция искусственной вагины, которая обеспечивает более надёжную фиксацию краника для подачи воздуха и препятствует его продвижению во внутреннюю полость вагины. В результате проведенных исследований установлено, что модернизированная искусственная вагина обеспечивает достаточную эксплуатационную надёжность крепления основных узлов, стабильность гидростатического давления в межстенном пространстве, его автоматическое регулирование во внутренней и наружной полостях и оптимальные условия для протекания рефлексов совокупления и эякуляции у быков. При разработке новой конструкции искусственной вагины нами были использованы исследования и разработки Родина И.М. [1931]; Милованова В.К. [1936, 1940]; Родина Щ1961]; Сопельника В.М.[1965]; Raclavssca О. [1975] и др.

Нами разработана технологическая оснастка и организовано промышленное производство корпусов усовершенствованных искусственных вагин и обеспечение ими племпредприятий.

Используемый ранее спермоприёмник также имел ряд недостатков. Прежде всего, не обеспечивал асептику спермы при отборе проб, так как сперма неизбежно контактировала с лезвием ножниц при отделении чехла-пробирки с отрезком, герметически соединённой с ней трубки. Кроме того, перефасовка спермы в трубки разного диаметра была невозможна без дополнительных переходников специальной конструкции, что вело к дополнительным затратам.

Сконструированный нами спермоприёмник обеспечивает возможность перефасовки эякулята в трубки различного диаметра, позволяет предотвратить потери спермы и её микробное загрязнение в момент отбора проб, разбавления и перефасовки, упростить данную технологическую операцию, повысить санитарный уровень заготавливаемой спермы.

Спермоприёмник к искусственной вагине» признан изобретением и защшцён авторским свидетельством № 1072861. Его серийное производство организовано нами на Ялтинском УПП УТОС. ТУУ 14057860.001-98. Их выпуск превысил 12 млн. штук и в течение многих лет они успешно используются на племпредприятиях и не нуждаются в каком-либо усовершенствовании.

Нами проведены исследования по дальнейшему совершенствованию упаковок спермодоз. Упаковка должна обеспечивать равномерное замораживание и оттаивание спермы, сохранять при этом герметичность. На упаковке должно быть достаточно места для её маркировки. Размеры её должны быть такими, чтобы для введения в половые пути самок, не требовался громоздкий инструмент и потери спермы были минимальны.

На основании проведенных лабораторных исследований нами установлено, что поливинилхлоридный пластикат ПМ-1/42 наиболее технологичен для изготовления тонкостенных полимерных трубок и по физико-химическим свойствам не уступал полиэтилену высокого давления (ВД), не оказывал отрицательного влияния на качество спермы, а по оптическим свойствам обеспечивал возможность контроля качества спермы в герметичной спермодозе. Установлено, что по физико-механическим свойствам пластикат ПМ-1/42-У оказался вполне пригодным для изготовления тонкостенной трубки.

Нами (в соавторстве) разработана установка для контроля герметичности спермодоз, которая обеспечивает высокую точность определения герметичности спермодоз.

По результатам исследований режимов замораживания нами установлен оптимальный диаметр спермодоз — 4 мм (3,8±0,2 мм). Эти параметры были заложены в технические условия на изготовление тонкостенных полимерных трубок.

Для изучения и разработки оптимального режима замораживания спермы в трубках диаметром 3,8 мм мы сконструировали специальное устройство, с помощью которого установили, что для облицованных гранул диаметром 3,8 мм оптимальный режим замораживания находится на уровне от 1 до 20 см над поверхностью жидкого азота со скоростью снижения температуры от 30 до 20 градусов в минуту, что согласуется с исследованиями П.И. Паке-наса [1963]; H.Nagase, E.Graham, T.Niva, 1964; Г.В.Фрорипа, 1969; Е.Ф. Гре-хем, 1977; Л.М.Глубокова, 1988].

Одним из важнейших элементов Харьковской технологии является расфасовка спермы в облицованные гранулы и одновременная их идентификация. Нами усовершенствован полуавтомат расфасовки жидкости ПРЖ-1, главной отличительной особенностью которого является профильный нагревательный элемент ножа, благодаря которому достигается более качественная пайка сварочных швов, улучшена работа расфасовочного узла, усовершенствована принципиальная схема полуавтомата ПРЖ-2. Усовершенствован также маркировочный узел (УМ-1), который имеет наборную кассу (шрифт) из 10 знаков и обеспечивает замену любого из них.

Параллельно с исследованиями по совершенствованию маркировочного устройства нами проводились разработки композиций быстросохнущей краски низкой вязкости с адгезией к неактивированному полиэтилену. Изучена степень сохранения адгезивных свойств подготовленной к работе краски в процессе хранения. Установлено, что краска сохраняет свои адгезивные свойства без изменения в течение 20 суток.

Согласно приказу ВНПО по племделу в животноводстве № 120 от 2.09.1987 года полуавтомат ПРЖ-2 и маркировочное устройство УМ-1 в составе комплекта аппаратуры Харьковской технологии прошли длительную производственную апробацию.

На основании проведенных исследований, с целью улучшения биологической полноценности спермы в процессе криоконсервации, нами в соавторстве разработано устройство для эквилибрации и замораживания спермы животных ЭКЗ-2, которое обеспечивает условия равномерного охлаждения, устраняет седиментацию спермы, улучшает взаимодействие половых клеток с окружающей их искусственной средой, снижает затраты ручного труда.

Комплект модернизированной аппаратуры для криоконсервации и использования спермы по Харьковской технологии в 1987 году прошёл предварительные испытания на Калужском племпредприятии и был рекомендован Государственной комиссией Госагропрома СССР и Минприбора СССР для проведения межведомственных испытаний.На основании предложения Государственной комиссии на опытном заводе МНПО «Темп» в 1988 году было организовано серийное производство модернизированного комплекта аппаратуры и оборудования.

Учитывая исключительную важность вопроса оценки качества спермы, нами (в соавторстве) после долгих поисков и многократного биологического моделирования, разработан способ и сконструировано устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных упаковках, которое обеспечивает упрощение подготовки препарата к микроскопированию, повышение чёткости изображения спермиев, объективности их оценки и снижение затрат времени на выполнение всех операций.

Разработанное устройство признано изобретением и защищено авторским свидетельством № 1543598. Нами организовано его серийное производство.

В связи с различными физико-химическими, физико-механическими и другими свойствами полимерных материалов, которые используются для изготовления оболочек спермодоз, мы изучали их влияние на качество спермы при дегерметизации спермодоз. Установлено, что главными причинами снижения качества спермы при дегерметизации спермодоз является механическое повреждение спермиев. С увеличением толщины полимерной облицовки спермодозы при её дегерметизации наблюдается тенденция к снижению качества спермы. Размер диаметра гранул не оказал существенного влияния на качество спермы после дегерметизации.

Снижение качества спермы после дегерметизации спермодозы происходит во время мгновенного прохождения её содержимого через образовавшееся отверстие с большой скоростью и перепадом давления. Этого можно избежать путём предварительной разгерметизации спермодозы проколом специальной иглы через выходное отверстие зоошприца. В это время происходит равномерное вытекание спермы, спермии не повреждаются и качество их не ухудшается. Эту манипуляцию мы включили в Харьковскую технологию искусственного осеменения крупного рогатого скота.

Анализируя результаты исследований основных параметров полового тракта самок, преимущества и недостатки существовавших инструментов для введения спермы в половые пути самок нами разработано и предложено несколько моделей инструментов для введения облицованных гранул диаметром 3,8 мм в цервикальный канал. Это явилось важным этапом по усовершенствованию технологического процесса искусственного осеменения.

Однако разработанные устройства и инструменты всё ещё имели ряд недостатков. Главным из них было отсутствие возможности асептического введения его в половые пути самок.

Нами разработаны способ и более совершенное устройство для искусственного осеменения коров и тёлок, обеспечивающее выполнение анатомо-физиологических требований, асептичность осеменения в любых производственно-хозяйственных условиях, и повышает оплодотворяемость самок.

Незначительные затраты и высокая технологическая и экономическая эффективность и быстрая окупаемость способствовали внедрению разработанного нами способа асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и других биологических и лекарственных препаратов практически во всех странах с высокоразвитым животноводством. С небольшой технологической модификацией этот способ в кратчайшие сроки внедрили французские фирмы «Кассу», «Стерцик», ИВМ, немецкая фирма «Минитюб», американская фирма «Континенталышастик» и многие другие. Описанное устройство защищено авторским свидетельством № 1831330A3. Организован его серийный выпуск и поставка потребителям.

Существенное практическое значение имеет разработка нескольких вариантов гигиенических защитных перчаток из плёночного материала и технология их изготовления. Предложенная нами перчатка не затрудняет движения пальцев, не уменьшает их осязательную способность, обеспечивает защиту руки не только до локтя, но и до плеча.

На гигиенические защитные перчатки получены патенты России № 46280 и 46281, Украины № 890 и № 891. Организован их серийный выпуск и поставка хозяйствам всех форм собственности.

Предложенное нами устройство для сварки термопластического материала при изготовлении изделий для искусственного осеменения позволяет производить непрерывную сварку изделий больших размеров и сложной конфигурации, любые формы и модификации перчаток для искусственного осеменения, спермоприёмников, эмбриоприёмников и других изделий для биотехнологии воспроизведения животных. На устройство получен патент № 2098328 (Российская Федерация), внедрено в МНПА «Эмбрион».

Теоретически обоснованы и разработаны способ и приёмы предотвращения микробного загрязнения половых путей самок с применением предложенного нами устройства, что полностью предотвращает или снижает в десятки миллионов раз перенос микроорганизмов в цервикальный канал из окружающей среды, наружных половых органов и влагалища в процессе введения устройства, даже в условиях высокой степени загрязненности их микроорганизмами.

Попытки решения проблемы предотвращения заноса патогенной микрофлоры в репродуктивный тракт коров и тёлок путём применения различных чехлов были предприняты Ю.Катарчки, Г.С.Гайворонским [1984], которые акцентировали на важности исследований в этом направлении.

Разработанные нами способы контроля санитарно-гигиенического уровня искусственного осеменения на молочно-товарных фермах и устройства для его осуществления, обеспечивают надёжный контроль асептики введения спермы в половые пути самок, способствует повышению оплодот-вряемости и снижению заболевания половых органов коров и тёлок.

Новизна полученных научных данных с использованием устройства дня контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения и его конструктивные особенности признаны изобретением и подтверждены авторским свидетельством № 1463277.

Методический подход имитации осеменения с использованием данного устройства может применяться при ветеринарно-санитарной и зоотехнической экспертизе научных данных, а также в учебном процессе при подготовке и переподготовке специалистов по воспроизводству.

Изучение физиологической реакции самок во время их доставки в места искусственного осеменения показало, что стрессы, связанные с перемещением животных, вызывают у них повышенное психоэмоциональное напряжение, нарушают моторную функцию полового аппарата, что оказывает негативное влияние на оплодотворяемость самок.

Установлено, что перемещение самок на пункт искусственного осеменения, расположенный за 200 м от места постоянного содержания, вызывает снижение моторики половых путей у 65,3% животных, а у 21,5% самок она полностью блокируется, что отрицательно сказывается на оплодотворяемо-сти самок. Эти данные согласуются с исследованиями В.К.Милованова, И.И.Соколовской [1964], В.А.Чиркова [1978] и др.

С целью разработки эффективной технологии искусственного осеменения животных в местах их содержания нами создан портативный комплект со всем необходимым инструментарием, растворами и материалами КОИТ-2. Изучен режим термостатирования инструментов и растворов при различной длительности транспортировки в пределах производственного подразделения. Изысканы реактивы, их концентрации и экспозиции, обеспечивающие надёжную дезинфекцию футляра контейнера портативного комплекта.

Разработанная технология искусственного осеменения крупного рогатого скота в местах их содержания с применением комплекта КОИТ-2 и усовершенствованных нами инструментов одобрена на заседании секции производства и переработки продуктов животноводства научно-технического совета Министерства аграрной политики Украины (протокол № 4 от 22 декабря 2000 года).

Расчёты экономической эффективности приведенные в работе показывают, что внедрение результатов исследований и новых технологических разработок позволило сэкономить 145539,1 руб. в расчёте на 1 млн. спермодоз, а также в результате снижения затрат спермы на оценку её качественных показателей, повышения результативности искусственного осеменения, общий экономический эффект от использования разработок за 25 лет (с 1978 по 2003 годы) составляет 88.078.900 рублей.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора сельскохозяйственных наук, Кузнецов, Григорий Николаевич, Харьков

1. Федеральный Закон о племенном животноводстве. Принят Госдумой РФ 12 июля 1995 г.

2. Закон Украши "Про племшну справу у тваринництвГ № 3691-XII вщ 15.12.93.-Кит.

3. Постановление ЦК КПСС и Совета Министров СССР № 1472 "О мерах по повышению эффективности и улучшению организации племенного дела в животноводстве». Москва, Кремль, 11.12.1986.

4. Постановление ЦК КПУ и Совета Министров УССР № 9 «О мерах по повышению эффективности и улучшению организации племенного дела в животноводстве. Киев, 13.01.1987.

5. Распоряжение Министерства приборостроения, средств автоматизации и систем управления СССР № 19-2/10-22/1424 «О производстве и поставке Госагропрому СССР оборудования для облицовки гранул». Москва, 05.05.82.

6. Временное наставление Главного управления ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР № 115-60 «По повторному использованию зоошприцев при искусственном осеменении животных». Москва, 28. 01.82.

7. Айрапетьянц Э.Ш., Крижановская Е.Ф. К физиологии интерацепции матки. Хемотерапия, предварительное сообщение // Сб научных трудов Центрального института акушерства и гинекологии. Экспериментальные исследования, 1947.- Т. 10,- С.33.

8. Андр1евський В.Я., Смирнов I.B. Ветеринарне акушерство, пнеко-лопя й штучне оЫмешння. Поабник для техткум1в. К.: Урожай, 1965. -411 с.

9. Акопян В.Б., Мирзоев Э.Б., Рыбакова А.А. Определение качества спермы методом ультразвуковой цитолизометрии // Докл. ВАСХНИЛ . -1991. № 4.- С.53.

10. Ала-Уд-Дин. Замораживание спермы быков в ампулах // Матер, науч. конференции по вопросам ветеринарии. М., 1971.- С. 15-16.

11. Александров В.Я. Влияние тяжелой воды на устойчивость растительных и животных клеток, клеточных моделей и белка к некоторым дена-рутационным воздействиям. Цитология .- 1959. - С. 672-691.

12. Александров В.Я. Изучение изменения устойчивости растительных клеток к действию различных агентов в связи с задачами цитологии. Клетка и температура среды// Труды международного симпозиума по цитологии. М,-Л„ 1964.- С.98-104.

13. Анисов А.А., Костив С.И. Влияние половых рефлексов на качество спермы быков // Зоотехния. № 8.- С. 11.

14. Арронет Н.И. Повреждающее действие на клетки мерцательного эпителия высокого гидростатического давления и нагрева и защитное влияние глицерина//Цитология,- 1964. № 6. - С. 432-442.

15. Асланян М.М. Способ быстрого определения живучести живчиков барана// Сб. Новое в биологии размножения сельскохозяйственных животных. М., 1961. — С.340-344.

16. Атаманов Н. Оплодотворяющая способность семени быка, замороженного в гранулах различными способами// Пути интенсификации кормопроизводства и животноводства в центральном районе нечерноземной зоны. М., 1979. С.107-111.

17. Ауслендер В.П., Салимов Р.А. Ускорители электронов Института ядерной физики АН СССР для народного хозяйства. М.: Атомная энергия, 1978,- Т.44,- Вып.5.- С.112-114.

18. Афанасенко В.Ю. Вплив року та сезону отелення на репродуктивш якоси молочно! худоби // М1жвщ. темат. наук. зб. "Розведення i генетика тварин" / К.: Науковий свп\ 2002. - Вип. 36. - С. 19.

19. Бажинов А.Г., Полонская Л.Б., Зуева Л.Д. Стерилизация ферментативных препаратов бета-пропиолактоном// Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1967,- № 7,- С.53-56.

20. Балашов Н.Г., Родина В.Н., Эвсюков М.Е. Стерилизация гама-лучами пластмассовых инструментов для искусственного осеменения животных// Лечебно-профилактические и стимулирующие средства при незаразных болезнях животных. 1982. - С. 109-115.

21. Барамбойм Н.К. Механохимия полимеров/ Изд. научно-технической литературы.-М., 1961.- 25 с.

22. Бахитов К.И. Некоторые аспекты физиологических взаимодействий между функцией лактации и воспроизводства высокопродуктивных коров // Доклады Россельхозакадемии. 1999. - № 6. - С.218.

23. Бегма А. А. Новий cnoci6 ощнки якосп спер ми буга1в. Hoei методи селекцп i вщтворення високопродуктивних порщ i тшпв тварин// Матер1али наук.вироб.конф. 29-30.05.1966. Кшв. - С. 355.

24. Безуглий М.Д., Осташко Ф.1., Медведовський О.В., Льоля В.В., Суш-ко О.Б., Звозчик М.Г., Цибульник В.Т. Штучне оамешння велико!' рогато! худоби. 1нструкщя (регюнальне видання). X., 2001. - 32 с.

25. Белоус A.M., Щраго М.И., Пушкарь Н.С. Криоконсерванты,- К.: Наукова думка. 1979.- 199 с.

26. Белоус A.M., Бондаренко В.А., Бондаренко Т.П. Молекулярные механизмы криоповреждений биомембран // Итоги науки и техники. 1978. -№9,- С. 80-113.

27. Белоножкин В. Использование быков-производителей как подставных животных и качество их спермы// Молочное и мясное скотоводство, 1977. -№ 1.-С. 29-30.

28. Берилло И.М., Пухальский JI.X. Длительное хранение спермы быка и барана //Проблемы животноводства,- № 10.- 1936.- С.38-40.

29. Берилло И.М., Пухальский JI.X. Вопросы длительного хранения спермы быка и барана // Проблемы животноводства. — 1936. № 1.- С.21-22.

30. Берлин А.А. Исследования в области механохимии полимеров/ О некоторых биологических проблемах механохимии полимеров,- Биофизика, № 8. 1963,- С.28-33.

31. Беродиня У.В., Макода Н.Г. Спещальна пшетка для оЫмешння Kopie // Сощалютичне твариншштво.- 1962.- № 2.- С. 3-5.

32. Бондарь А.А. Использование показателей поведения животных для совершенствования технологии содержания молочного скота: Дис.канд. с.-х. наук. -X., 1990.- 237 с.

33. Бренман Б.А. Ампула-катетер для введения сперми //Сощатстичне тваринницгво. № 11. - 1962. - С. 7.

34. Бренман Б.А., Спиваков А.С. Влияние некоторых синтетических материалов на выживаемость спермиев быков// Тез. Докл. к 3-й Респ. науч. конф. по физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных. Львов, 1964.- С.42-43.

35. Бугров А.Д. Усовершенствование аппаратуры для замораживания спермы производителей// Сб. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. Харьков, 1963,- С. 81-83.

36. Бугров А.Д. Усовершенствование аппаратуры для замораживания спермы производителей / В кн.: «Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных». Харьков, 1963.- С. 84.

37. Бугров А.Д. Некоторые вопросы теории совершенствования метода глубокого замораживания спермы быков-производителей: Канд. дис. Харьков, 1965.

38. Бугров А.Д. Способ оттаивания замороженной спермы быков в различной упаковке//Животноводство. 1976.-№ 12.-С.57-59.

39. Бугров А.Д., Олексенко Т.И. Устройство для искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. А. с. № 528092 1977.

40. Бугров А.Д. Влияние формы упаковки на скорость оттаивания и качество спермы// Сб. Физиология воспроизводства сельскохозяйственных животных/ Материалы советско-американского семинара. Харьков, 1977. -С.220-224.

41. Бугров А.Д. Разработка теории и практики криоконсервации спермы быков-производителей: Автореферат докт. диссерт. Харьков, 1983,- 25 с.

42. Бугров А.Д., Сопельник В.М., Иванов B.C., Вознюк В.А. А.с. 381346 СССР. Искусственная вагина для с.-х. животных, МКИ3, А 61 7/02. Опубл. в Б.И. 1971, №32.

43. Бугров А.Д., Канцедал В.И. Организация воспроизводства в условиях промышленного животноводства/ В кн. Осташко Ф.И. и др. Воспроизводство стада в промышленном скотоводстве,- К.: Урожай, 1982. С. 118-130.

44. Бугров А.Д., Канцедал В.И. Половой цикл/В кн.: Воспроизводство стада в промышленном скотоводстве. К.: Урожай, 1982. - С. 118-123.

45. Бугров А.Д., Медведовский А.В., Субота А.В. Выявление и выборка коров и тёлок в охоте. Харьков, 2002. - 47 с.

46. Буркат В.П., Кузнецов В.Е., Елизарова И.Б. Биотехнологические методы оценки и прогнозирования оплодотворяющей способности сперматозоидов быков// Вюник аграрног науки. 1992. - № 11.- С.32-34.

47. Буров В.А. Дозування крашн сперми// Тваринництво Украши. № 11, 1969.-С.З-5.

48. Буров В., Мовчан Т. Объективная характеристика воспроизводительной способности коров и тёлок //Молочное и мясное скотоводство. -1975.-№4.

49. Буров В.А., Карякина JI.B. Экспресс-метод определения выживаемости семени быков// Животноводство. 1985.- № 7.- С. 43.

50. Быков К.М. Кора головного мозга и внутренние органы. Изд. 2, М.-JI.: Медгиз. - 1947,- 143 с.

51. Вакуленко И.С. Исследование воспроизводительной способности и совершенствование технологии получения спермы у быков-производителей: Дисс. канд. биол. наук. X., 1970. - 164 с.

52. Варнавский А.Н. Микробное загрязнение семени сельскохозяйственных животных и меры его устранения// Животноводство.- 1963.- 3.- С. 10.

53. Васильев B.C. Совершенствование методов интерференциальной микроскопии для изучения спермы в зависимости от породы, возраста и плодовитости быков: Автореф.дисс. канд. биол.наук.- X., 1978.- 24 с.

54. Васильев B.C. Компьютерная диагностика качества спермы и состояние репродуктивной системы производителей сельскохозяйственных животных.// Науч.техн.бюлл.- X., ИЖ УААН. 2000,- № 77.- С.8-10.

55. Вашков В.И., Серебрякова E.K. Обезвреживание ультрафиолетовыми лучами поверхностей, инфицированных споровыми видами микробов// Труды Центрального научно-исследовательского дезинфекционного института.- М.: Медицина, I960.- С.З.

56. Вашков В.И. Химические стерилизующие средства // Труды Всесоюзного Научно-исследовательского института дезинфекции и стерилизации, 1971,- С.21-31.

57. Верещинский И.В., Пикаев А.К. Введение в радиационную химию. -М.: Академия наук СССР. 1968. - С. 15-19.

58. Вишневский В.И. Электрометрия биофизических процессов в сперме быков-производителей при замораживании: Автореф. канд. диссер., Харьков, 1970. 27 с.

59. Вишневский В.И. Термодинамика выхода воды из спермиев при за-мораживании//Науч.-техн. бюл. НИИЖ ЛиП УССР, 1974.- С. 13-21.

60. Волосевич О.П. Вплив екстракту им'яниюв на переживашсть глибо-козаморожено!' сперми бугая i статевий склад потомства // Вкник сшьсько-господарсько! науки. 1972. - № 7. - С.90-93.

61. Воробьёв И.Н. Эмбриональная смертность в промышленном овцеводстве // Вестник с.-х. науки. 1985. - № 1. - С. 124.

62. Галкин Ю.В. Активность аспартатаминотрансферазы сыворотки крови и спермы баранов и её связь с оплодотворяемостью овец// Бюллетень научных работ ВИЖа, 1976,- Вып.48,- С.87-88.

63. Гамбашидзе С.К. Материалы к физиологии интероцепторов половой сферы.-Грузмедиздат. 1951,- 21*гс.

64. Герасимов В.I., Пронь О.В. Привчання кнур1в-плщншав до взяття вщ них сперми на штучну вапну i виб1р умов ix утримання// Науково-техшчний бюллетень.- X., IT УААН. 2001,- № 80. - С.23-27.

65. Горохов Л.Н., Колобаев А., Прохоров Ю. Микробная загрязненность влагалища коров при разных методах искусственного осеменения //Молочное и мясное скотоводство. № 11.- 1965.- С. 37-41.

66. Горохов Л.Н., Варнавский А.Н. Методы предотвращения микробной загрязненности семени быков и половых путей коров / В кн.: Технологии искусственного осеменения и биологии воспроизведения сельскохозяйственных животных. -М.: Колос. 1972. — С. 136-139.

67. Гршценко В.И., Юрченко Г.Г., Крамар М.Й., Васильев B.C. Морфо-функциональные свойства спермиев, полученных из эякулятов ликвидаторов аварии на ЧАЭС/ Бесплодие. Вспомогательные репродуктивные технологии// Сб.науч.тр. К.: 1995. - С. 82-83.

68. Губаревич Л.Г. Акушерство, гинекология и основы искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. Сельхозгиз, 1948.- С.87.

69. Гуль В.Е., Дьяконова В.П. Физико-химические основы производства полимерных плёнок. М.: Высшая школа, 1978.- 117 с.

70. Гладуктова Е.Ф. Влияние резких понижений температуры на переживание сперматозоидов// Сб. Успехи зоотехнической науки, 1937,- Т.IV. -С.56.

71. Глубокое Л.М. Замораживание спермы в облицованных гранулах на медных пластинах // Зоотехния. 1988. - № 6.- С.40.

72. Гордиенко Е.А., Бронштейн B.JI. К вопросу о причине и механизме температурного шока / В кн.: Применение радиофизики и электроники в биофизических исследованиях . Харьков, 1973.- С. 112.

73. Гордиенко Е.А., Бронштейн B.JI. К механизму лизиса. Математическая модель/ В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. -Киев: Наукова думка, 1974,- С. 13.

74. Грехем Е.Ф. Криоконсервация и оценка спермы быков и баранов/ В кн.: Физиология воспроизведения с.-х. животных (материалы Советско-Американского семинара), Харьков, 1977. С.25.

75. Гуськов A.M., Пузина Г.И. Влияние стресс-факторов на репродуктивную функцию животных. //Зоотехния. 1994. - № 5. - С.22.

76. Гуричева З.Г. Санитарно-химический анализ пластмасс. -JL: Химия, 1977.-87 с.

77. Деревинский В., Фоломеев В. Связь качества спермы с активностью аминотрансфераз. //Свиноводство. 1975. - № 7.- С 24-25.

78. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир, 1966. - 814 с.

79. Деряженцев В.И., Гачабский А.Ш., Болбасов Е.Ф., Лепехов А.И. А.с. 1692573 СССР Мки5 А 61 Д 19/02. Искусственная вагина для получения спермы от баранов, 1991.

80. Дмитриев Н. Подогревание инструментов перед осеменением повышает оплодотворяемость коров // Молочное и мясное скотоводство. 1961. -№ 9,- С.37-38.

81. Докудовский Е.Г. Собирание семени в искусственную вагину на чучеле// Скотоводство, 1933. № 5-6.

82. Докудовский Е.Г. Итоги трёхлетней работы Сапожковского пункта искусственного осеменения по КРС / Искусственное осеменение с.-х. животных,-М.: Сельхозгиз, 1935,-С.141-144.

83. Душейко О.И. Исследование защитного действия криопротектантов в связи с длительным хранением спермы быков-производителей: Автореф. дисс. канд. биол.наук. Харьков, 1972,- 30 с.

84. Ерохин А.С., Деряжинцев В.И. Антибиотики при осеменении замороженной спермой// Овцеводство. 1991. - С.21-22.

85. Еськов А.П. Методические рекомендации по объективной оценке семени быков и прогнозирование результатов искусственного осеменения. -ВИЖ, 1973.

86. Еськов А.П., Турбин В.Ф., Гурилов О.М., Арифьев И.М. Методика объективной оценки качества спермы крупного рогатого скота// Докл. ВАСХНИЛ, 1988. № 12. - С.27-29.

87. Жариков И.С., Карышева А.Ф., Кушель Э.К., Афанасьев Н.В., Германович И.Н. Использование ультразвуковых колебаний для разрушения микроорганизмов и гельминтов// Ветеринария. -1974. № 12. - С. 40-41.

88. Жильцов Н.З., Жучков В.К. Влияние активности некоторых ферментов в семени животных на переживаемость спермы вне организма// Сельскохозяйственная биология,- 1973. Вып.8. - № 6. - С.933-934.

89. Жмурин Л.М. Морфологические изменения сперматозоидов под влиянием замораживания //Сб. Физиологические и биохимические основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных,- Боровск.-Вып.1, 1965.-С. 89-93.

90. Завертяев Б.П. Биотехнология в воспроизведении и селекции крупного рогатого скота. Л.: Агропромиздат., 1989. - 255 с.

91. Зальцман А.А. Упрощенный способ искусственного осеменения коров //Молочное и мясное скотоводство,- 1958. № 6.- С. 18-21.

92. Заянчковский И.Ф. Искусственное осеменение коров на фермах// Молочное и мясное скотоводство. 1961. - № 2.- С.38-42.

93. Зверев В.В. Быстрое замораживание семени быков/ В кн.: Биология воспроизведения и искусственное осеменение с.-х. животных.- М.: ВИЖ. -1966.- № 3.- С.95-98.

94. Зверев В.В. О сроках хранения глубокозамороженного семени быков/Животноводство. -1978,- № 2,- С.59-62.

95. Зверев В., Успенский А. Влияние сроков хранения глубокозаморо-женного семени быков на его качество. Передовые методы профилактики и лечения сельскохозяйственных животных// Тр. Горьковского СХИ, 1980. -Т. 149,- С.15-18.

96. Зверева Г.В., Герасимов I.B., 1вашин A.I. Пластмасовий пневмока-тетер для оЫменшня Kopie// Сощагпстичне тваринництво. № 6. - 1960,- С.36.

97. Зверева Г.В., Черномаз JI.A. Новое в племенном деле и искусственном осеменении с.-х. животных // Сб.изд. с.-х. литературы журн. и плак.- М., 1963.- С.56-59.

98. Зверева Г.В., Черномаз JI.A. Некоторые вопросы морфологии спермиев быка //Сб. Новое в племенном деле и искусственном осеменении сельскохозяйственных животных. Сельхозгиз, 1963.- С.378-388.

99. Зверева Г.В., Черномаз JI.A., Чухрий Б.М., Петрук Е.И., Посивайко В.И., Миляк М.С., Лесько С.М. Результата дослщжень сперми при заморо-жуванш// Тваринницгво Украши № 9,- С. 30-31.

100. Зверева Г.В. Роль грибов в эмбринальной смертности у коров// Доклады советских ученых к VI международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных. М.: Колос, 1968,- С.53-55.

101. Зверева Г.В., ЧухршБ.М. Ферментативна актившсть сперми 6yrai'b i заплщнююча здатшсть спермив// Науков1 пращ. Науково-дослщний шститут землеробства i тваринницгва захцщих райошв УРСР. 1971.- Вип. 17. - С. 325-329.

102. Зверева Г.В., Чухрий Б.Н., Клевец Л.А. Взаимосвязь активности окислительных ферментов в сперме быков с физиологическими показателями спермиев // Докл. ВАСХНИЛ.- 1978, № 4. - С.24-26.

103. Знаменский C.B. Консервация тканей действием низких температур в условиях, устраняющих образование льда // Сб. Врачебное дело. 1955.- № 3,- С.307-310.

104. Зорин В.М. Стерилизация и длительное хранение разбавителя для спермы быков// Молочно-мясное скотоводство.- К.: Урожай, 1971. В. 26. -С.7-13.

105. Зорш В.М., Вишневський B.I. До питания стерщпзацй i тривалого зберйання глюкозо-цитратно-хелато-жовткового розрщжувача для сперми буга1в // Плем1нна справа i бюлопя розмноження сшьськогосподарських тва-рин. К., 1973. - Вип. 4. - С.50-54.

106. Зорш В.М., Скорняков Б.О. Вивчення впливу високого тиску на ви-живання спермпв при низьких температурах без утворення льоду // Молочно-м'ясне скотарство. К., 1971. - Вип. 26. - С.26-31.

107. Зорин В.М. Усовершенствование способа консервирования спермы быков: Автореф. дис. канд.биол.наук.- Харьков, 1974,- 30 с.

108. Зубець М.В., Буркат В.П. Про радикальний перегляд теорп селек-ци // Вюн. с.-г. науки. 1987.- № 7. - С. 80-82.

109. Зубець М., Гузеватий О. Молекулярна генетика i бютехнологш в се-лекцп тварин// Тваринницгво Украши. -1994. № 5. - С. 10-11.

110. Зубец М.В., Шаран П.И., Сирацкий И.З. Экономическая оценка эффективности разведения крупного рогатого скота разных пород. К.: Урожай. - 1996. - 117 с.

111. Зубец М.В., Буркат В.П., Мельник Ю.Ф. и др. Генетика, селекция и биотехнология в скотоводстве. К.: «БМТ», 1997. 722 с.

112. Зубец М.В., Карасик В.П., Буркат В.П. Преобразование генофонда пород.К.: Урожай, 1990,- 123 с.

113. Избасаров У.К. Ферментативная активность спермы каракульских баранов-производителей// Сб. Каракулеводство.- Ташкент, 1973,- Вып. 3. -С. 383-385.

114. Ильина А.И. Симптомология и патоморфология изменений при хронических эндометритах у коров: Автореферат диссертации. Л., 1950.-25 с.

115. Инструкция по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. -М : Колос, 1981.-С. 159.

116. Инструкция по искусственному осеменению коров и тёлок (третье доп. изд.) . М.: Колос, 1982. - 76 с.126. 1нструкщя 3i штучного оЫменшня KopiB i телиць К.: 2001. - 40 с.

117. Кагорчин Ю.А., Гайворонский Г.С. Эластичный чехол для осемени-тельного инструмента// Животноводство. 1980.- № 7,- С.37-38.

118. Казанцева B.C., Кашинский С.Я.//Биохимия.-1956.- Вып. 5.- С. 528.

119. Капланский С.Я., Акопян Ж.И.//Биохимия. 1966. -Т.31.- Вып.2.-С.266.

120. Капрельянц Н.Т., Осташко Ф.И. Устройство для садки быков при взятии спермы.Авторское свидетельство № 1371699 СССР, МКИ4А61 D 7/02, 1986.

121. Караваева Е.А. Феромоны в воспроизводство крупного рогатого скота/ Пробл. хим. коммуникации животных// Институт эволюции, морфол. и экол,- М., 1991,- С.355-363.

122. Караваева Е.А., Янышевский Л.В. Пат. 2045178, Россия, МКИ6 А 01 К 67/02. Способ стимуляции воспроизводительной функции крупного рогатого скота, 1995.

123. Караваева Е.А., Парамонов Д.В., Зинкевич Э.П. Стимулирование воспроизводительной функции коров искусственным феромоном в условияхпромышленной фермы// Пробл. хим. коммуникации животных АН СССР.-Институт эволюции морфол. и экол.- М., 1991.- С. 369-374.

124. Карташов I.I., Шарапа I.C. Штучне оаменшня сшьськогоспо-дарських тварин з основами акушерства/ Навч. поЫбник. К.: Вшца школа, 1989.-303 с.

125. Карышева А.Ф., Кушель Э.К., Сапотько К.В., Линник С.А., Ерхан Д.К. Дезинтеграция легггоспирозных бактерий в ультразвуковом поле // Тез. докладов 7-й Всесоюзной конф. по лептоспирозам. К., 1979. - С.46-47.

126. Касумов Ф.М. Микрофлора семени быков и методы борьбы с загрязнением эякулятов микроорганизмами// Животноводство .- 1963. № 4,-С.32.

127. Катков И.И., Осташко Ф.И. Роль механических напряжений при криоповреждениях мембран спермиев сельскохозяйственных животных и человека// Тез. II Всесоюзн. конф. по криобиологии и криомедицине. Харьков, 1984.-Т.2.- С. 229.

128. Квасницкий А.В. О некоторых вопросах искусственного осеменения коров// 6-й международный конгресс по размножению и искусственному осеменению животных. Париж, 22-26 июля 1968. - Т. 2. - С. 286-289.

129. Киреева В.А., Осташко Ф.И., Бугров А.Д. и др. Способ увеличения генетического потенциала лучших быков-производителей на племпред-приятиях// Информ. листок № 170-84/ НИИЖ ЛиП УССР. 1983. - 3 с.

130. Киреева В.А., Осташко Ф.И., Бугров А.Д., Звозчик А.Д., Звозчик Н.Г. Способ увеличения генетического потенциала лучших быков-производителей на племпредприятиях / Информ.листок ЦНТИ № 170-84, серия 33. -Харьков, 1984.- 4 с.

131. Киреев В.А. Курс физической химии,- М.: Химия, 1975. 776 с.

132. Ковалёв П.Ф., Завертяев Б.П., Галиева Л.Д. и др. Культивирование ооцитов коров в присутствии гонадотропных гормонов/ Воспроизводство сельскохозяйственных животных и криоконсервация гамет и эмбрионов// Сб. науч. труд. 1986. - С. 84-86.

133. Козло Н.Е. Искусственное осеменение крупного рогатого скота на основе длительного хранения семени высокоценных быков-производителей: Автореф. канд. дисс. Дубровицы, 1967.- 27 с.

134. Кононов В.П., Нурахметов Ж.Ж. А.с. 1 666102 СССР, МКИ5 А 61 Д 19/02. Способ получения половых феромонов,- 1991.

135. Коротков А.И. Хранение семени быков-производителей при температуре -20° и оплодотворяемость коров// НТИ бюлл. НИИЖ Лесостепи и Полесья УССР, 1957.-С.31.

136. Коротков А.И. и др. Изменение активности и переживаемости спермы быков и баранов в связи с действием каталазы// Труды Молдавского НИИ животноводства и ветеринарии 1970. - Том 5. - С. 176-181.

137. Король Н.В., Коновалов Н.Г. Возможность химической стерилизации расширителей из полиметилметакрилата// Технология искусственного осеменения и биология воспроизводства сельскохозяйственных животных. -М.: Колос, 1972,- С.37-41.

138. Корытин С.А. Запахи в жизни зверей. М.: Знание. - 1978,- 247 с.

139. Крехова М.А. Метод приготовления фермента p-глюкуронидазы из говяжей печени и определение 17-оксикортикостероидов в моче// Проблемы эндокринологии и гормонотерапии, 1960. -Вып.2. -Т. VI. С. 87.

140. Кругляк А.П., Бойко Е.В. Оценка качества спермы по морфологическим показателям/ Hoei методи селекцп i вщтворення високопродуктивних пор!д i тишв тварин// Матер1али науково-виробничо! конференцп. 29-30 мая 1966, Кшв. С.355.

141. Кругляк А., Зорин В. Механическая установка для получения спермы у быков// Молочное и мясное скотоводство. 1980. - № 11. - С.29-30.

142. Кругляк А. Сравнительная эффективность различных способов получения спермы у быков// Молочное и мясное скотоводство. 1981. - № 1. -С. 27-28.

143. Кругляк А.П., Бруенко А.Е., Пасечник В.А. //Методические рекомендации по применению прогрессивных методов искусственного осеменения коров и тёлок К., 1992. - 64 с.

144. Крыжановская Е.Ф. Изменение токов действия матки беременных животных при термическом раздражении кожи плода/ В кн.: Рефлекторные реакции во взаимоотношениях материнского организма и плода.- М., 1954,-С. 36-42.

145. Кузин A.M. Радиационная биохимия. М.: Академия наук СССР. -1962.-С.335.

146. Кузин A.M., Каушанский Д.А. Прикладная радиобиология. М.: Энергоиздат. - 1981. -С.224.

147. Кузнецов Г.Н. Влияние p-глюкуронидазы на качественные показатели спермы производителей/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, В.М.Строна// Животноводство. 1974. - № 4. - С.53-54.

148. Кузнецов Г.Н. Методические рекомендации по Харьковской технологии взятия, консервирования и использования спермы производителей/ Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, И.М.Величко и др.- Белгород, 1976. -30 с.

149. Кузнецов Г.Н. Влияние фермента бета-глюкуронидазы на биологические свойства спермы быков-производителей/ Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животны. Материалы Советско-американского семинара. Харьков, 1977. - С.67-71.

150. Кузнецов Г.Н. Замена полиэтиленовых ампул на облицовку из тонкостенной полимерной трубки. Рационализаторское предложение № 50676 от 17.08.77 МСХ УССР.

151. Кузнецов Г.Н. Рекомендации по глубокому замораживанию и использованию спермы быков-производителей/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, Б.А.Бренман. Киев, 1977. - 69 с.

152. Кузнецов Г.Н. Рекомендации по взятию, обработке и глубокому замораживанию спермы быков-производителей /Г.Н.Кузнецов, В.И.Канцедал. Киев: Урожай, 1977. - 76 с.

153. Кузнецов Г.Н. Использование глубокозамороженной спермы быков-производителей в облицованных гранулах/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И Осташко, М.П Павленко. Информ. листок. Харьков, 1977. - 4 с.

154. Кузнецов Г.Н. Трубки полимерные тонкостенные/ Г.Н.Кузнецов, А.А.Дранов, Ф.И.Осташко и др. // Технические условия ТУ 64-2-109-77. -Харьков, 1977.

155. Кузнецов Г.Н. Технология криоконсервации спермы быков в облицованных гранулах/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко// Животноводство. 1978. - № 11. - С.54-56.

156. Кузнецов Г.Н. Способ и техника асептического введения биологических жидкостей в половые пути самок/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко// Материалы Советско-французского семинара по вопросам овотрансплантации. Харьков, 1979. - С.39-43.

157. Кузнецов Г.Н. Совершенствуйте работу племпредприятий/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко: Плакат. Москва: Колос, 1980.

158. Кузнецов Г.Н. Усовершенствование способа криоконсервации и использования спермы быков. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук,- Харьков, 1980. 215 с.

159. Кузнецов Г.Н. А.с. 745045 СССР, МКЛ2 A61D 7/02. Среда для криоконсервации спермы/ Г.Н. Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, Л.Н.Павленко. Опубл. 07.03.80.

160. Кузнецов Г.Н. А.с. 895428 СССР, МКИ3 A61D 7/02. Устройство для искусственного осеменения животных/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко. Опубл. 07.09.81.

161. Кузнецов Г.Н. Методические рекомендации по организации воспроизводства стада на молочных фермах/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, А.Д.Бугров, В.И.Канцедал. Харьков. 1982. - 32 с.

162. Кузнецов Г.Н. Харьковская технология криоконсервации спермы животных (на рус. и англ. языках): Рекламный проспект. Москва: Лицен-зинторг, 1982. - 8 с.

163. Кузнецов Г.Н. Методика стерилизации зоошприцов с целью повторного их использования/Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, А.В.Марющенко //НТБ № 34 / НИИЖ ЛиП УССР. Харьков, 1982. - С. 40-44.

164. Кузнецов Г.Н. Памятка по исследованию глубокозамороженной спермы быков-производителей, законсервированной в облицованных гранулах/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко и др. Орел: Росплемобъе-динение, 1982. — 5 с.

165. Кузнецов Г.Н. А.с. 1072861 СССР, МКИ3 A61D 7/02. Спермоприёмник к искусственной вагине животных/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П. Павленко. Опубл. 15.10.83.

166. Кузнецов Г.Н. Упаковка спермодоз из оптически прозрачной тонкостенной полимерной трубки. Рационализаторское предложение № 70211 от 5.07.83 МСХ УССР.

167. Кузнецов Г.Н. ГОСТ 26030-83. Сперма бпсов замороженная. Технические условия/ Г.Н.Кузнецов, Т.Г.Джапаридзе, Д.Ф.Осидзе и др.

168. Кузнецов Г.Н. Удлинитель для искусственного осеменения животных спермой в облицованных гранулах/Г.Н.Кузнецов, В.И.Рожков, В.И. Кук-сов и др.//Технические условия ТУ46-23-208-84: Изменения № 2. МСХ СССР, 1974.

169. Кузнецов Г.Н. Асептический способ искусственного осеменения коров и тёлок/Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко. Информ. листок ХЦНТИ № 202-84.

170. Кузнецов Г.Н. Санитарная оценка осеменения животных с помощью универсального устройства/Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, И.М.Величко// Молочное и мясное скотоводство, 1985.- № 1. С.32.

171. Кузнецов Г.Н. Методические рекомендации по организации искусственного осеменения крупного рогатого скота/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И. Осташко, В.И.Канцедал, В.В.Воронцов/ НИИЖ ЛиП УССР. Харьков, 1986. - 32 с.

172. Кузнецов Г.Н. А.с. 1463277 СССР, МКИ4 A61D 7/02. Устройство для контроля санитарно-гигиенического уровня инструмента для искусственного осеменения/ Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, Н.М. Величко. Опубл. 08.11.88.

173. Кузнецов Г.Н., Осташко Ф.И., Павленко М.П., Безуглый Н.Д. Искусственное осеменение — основа крупномасштабной селекции животных/ НТБ НИИЖ ЛиП УССР, № 22. Харьков, 1989. - С.22-24.

174. Кузнецов Г.Н. А.с. 1543598 СССР, МКИ5 A61D 19/02. Устройство для микроскопии спермы и эмбрионов в эластичных капсулах/Г.Н.Кузнецов, Ф.И.Осташко, М.П.Павленко, Л.Н.Павленко. Опубл. 15.10.89.

175. Кузнецов Г.Н. Пути повышения санитарно-гигиенического уровня и результативности биотехнологии воспроизведения животных/ Г.Н. Кузнецов, М.П.Павленко// Научно-технический бюллетень НИИЖ ЛиП УССР. -Харьков, 1990.- С.38.

176. Кузнецов Г.Н. Харьковская технология асептического взятия и криоконсервации спермы быков-производителей /Г.Н.Кузнецов, Ф.И. Осташко, М.П.Павленко и др.// Методические рекомендаци.- Харьков: Научно-производственная система «Эмбрион», 1990. — 48 с.

177. Кузнецов Г.Н. Организация искусственного осеменения коров и тёлок по Харьковской технологии: Наставления /Г.Н.Кузнецов, Ф.И. Осташко, М.П.Павленко, В.И.Мирошниченко.-Харьков: Научно-производственная система «Эмбрион», 1990. 73 с.

178. Кузнецов Г.Н. Способ асептического введения в половые пути самок спермы, эмбрионов и препаратов/Г.Н.Кузнецов, Ф.И. Осташко, М.П.Павленко// Теоретические и прикладные аспекты биотехнологии:Сб. научи, ст. УААН. К., 1991.- С. 35-37.

179. Кузнецов Г.Н. Харьковская технология криоконсервации спермы животных/ Г.К.Кузнецов, Ф.И. Осташко, М.П.Павленко// Теоретические и прикладные аспекты биотехнологии: Сб. научн.ст. УААН. К,- 1991. - С.32-34.

180. Кузнецов Г.Н. Универсальный термостатированный портативный комплект для искусственного асептического осеменения коров и тёлок в местах их содержания: Буклет. Новоград-Волынск, 1991.-1,5 п.л.

181. Кузнецов Г.Н. Портативный комплект для асептического осеменения коров и тёлок в местах содержания/ Г.Н.Кузнецов, М.П.Павленко, В.И.Мирошниченко// Научно-технический бюллетень НИИЖ ЛиП УССР. -Харьков. -1991. № 57,- С.72.

182. Кузнецов Г.Н. Патент 1831330 СССРЮ МКИ5 A61D 19/02. Устройство для искусственного осеменения животных/ Г.Н.Кузнецов, В.Ф.Дихтяренко, А.Г.Кузнецов. Опубл. 13.10.92.

183. Кузнецов Г.М. Hauii розробки виробництву// Тваринництво У крайни. 1994,-№4.-С. 16-17.

184. Кузнецов Г.М. Патент 890 Украши на промисловш зразок. riri€Hi-чна захисна рукавичка/ Г.М.Кузнецов, О.Г.Кузнецов, М.Г.Кузнецов. -30.06.95.

185. Кузнецов Г.М. Патент 891 Украши на промисловий зразок. Tirie-шчна захисна рукавичка/ Г.М.Кузнецов, О.Г.Кузнецов, М.Г.Кузнецов. -30.06.95.

186. Кузнецов Г.М. Науково-виробнича ф1рма "Ембрюн" пропонуе ви-робницгву нов1 розробки /Тваринництво Украши. 1997. - № 1.- С.32-35.

187. Кузнецов Г.М. Патент 15867 Украши, МКИ5 A61D 19/02. При-стрш для штучного загииднення тварин/ Г.М.Кузнецов, В.Ф.Д1хтяренко, О.Г.Кузнецов. Опубл. 30.06.97.

188. Кузнецов Г.Н. Патент 2098328 РФ, МКИ6 В65В 51/10. Устройство для сварки термопластичного материала/Г.Н.Кузнецов, В.А.Подкопаев, А.Г.Кузнецов, Н.Г.Кузнецов. Опубл. 10.12.97.

189. Кузнецов Г.Н. Патент 46280 РФ на промышленный образец. Гигиеническая защитная перчатка/ Г.Н.Кузнецов, А.Г.Кузнецов, Н.Г.Кузнецов. -Опубл. 16.11.99.

190. Кузнецов Г.Н. Патент 46281 РФ на промышленный образец. Гигиеническая защитная перчатка/ Г.Н.Кузнецов, А.Г.Кузнецов, Н.Г.Кузнецов. -Опубл. 16.11.99.

191. Кузнецов Г.Н. Новые возможности и резервы повышения эффективности искусственного осеменения животных// 36. наукових праць, при-свячений 150-р1ччю вщ дня заснування Харювського зооветеринарного ш-ституту. Харюв, 2001. -Вип.9 (33).-Ч.2,- С. 186-189.

192. Кузнецов Г.М. Декларацшний патент 62384 Украши, МПК7 A61D 19/02. Портативний комплект оператора по штучному оаменшню i транс-плантацп ембрюшв. -15.12.03.

193. Кузнецов Г.М.Система стабшьного виробництва корм1в та ефек-тивного 1х використання у молочному скотарств1: Науково-практичш реко-мендащ!/ Г.М.Кузнецов, Е.К.Кравцов, ВЛ.Гноевий та ш,- Харк1в: IT УААН, 2003. 20 с.

194. Кузнецов Г.М. Рекомендаци по заптвл1, збер1ганню, шдготовщ та ращональному використанню корм1в в екстремальних погодних умовах 2003 року: Метод.реком./Г.М.Кузнецов, ВЛ.Гноевий, О.ВЛльченко та ш,- Харюв: IT УААН, 2003. 16 с.

195. Кузнецов Г.Н. Физиологичекское обоснование искусственного осеменения самок крупного рогатого скота в местах их содержания// Науко-во-технычний бюллетень № 83. Харюв: 1нститут тваринницгва Украшсько! академн аграрних наук, 2003. - С. 66-70.

196. Кузнецов Г.М. Особливосп технологи штучного оаменшня велико! рогато1 худоби// В1сник аграрно! науки. 2003. - № 8. - С.41-45.

197. Кузнецов Г.Н. Полимерные защитные перчатки для искусственного осеменения животных// Зоотехния. — 2004.- № 2. С.27-28.

198. Кузнецов Г.М. Прогнозування яюсних показншав спермй'в буга'хв при крюконсервацп// Науково-техшчний бюллетень № 86. — XapKiB. 2004. -С.56-59.

199. Курило Ю.Г. Активность альдолазы в свежей и храненной сперме хряка// Свиноводство. 1968,- Вып.7.- С.44-51.

200. Кушшр В.М., Марченко О.Н., Кушшр В.М. Удосконалений cnoci6 обробки i крюконсервацн сперми буга!в у вщкритих гранулах i герметичних упаковках.-К.: Нива. 1996.

201. Кэмпбелл Дж. Р., Маршалл Р.Т. Производство молока. М.: Колос. -1980.-670 с.

202. Левант М.Л. Атомная и ядерная физика и её применение в сельском хозяйстве// Методическое пособие. Новосибирск, 1984. - 75 с.

203. Логвинов Д.Д., Плугатырёв В.П., Харута Г.Г., Миллер А.К. Санитарная оценка методов введения спермы быков коровам и тёлкам// Тезисы докладов рес. науч.конф. /Состояние биотехнологии в животноводстве.-Харьков, 1989.- С. 217.

204. Лось В. Глубокий цервикальный метод осеменения //Сельскохозяйственное производство Поволжья. № 8. - 1961.- С.57.

205. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Способ замораживания семени без глицерина// Животноводство. 1972.- № 6.- С.72-74.

206. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Совершенствование технологии замораживания спермы быков-производителей // Животноводство. 1973.- № П.- С. 84-87.

207. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Замораживание семени в среде без глицерина// Животноводство.- 1974,-№7.-С. 63.

208. Мазурова Л.П. Бета-пропиолактон как дезинфицирующее и стерилизующее средство: Автореферат дис.канд.мед. наук, М., 1968. 28 с.

209. Максимов Ю.Я. Биологические и зоотехнические основы рационального использования быков.- Белгород, 1972,- 57 с.

210. Максимов Ю.Я. Влияние андрогенов на продукцию и живучесть семени быков //Доклады советских учёных к V международному конгрессу по биологии размножения,- М., 1964.- С. 22-25.

211. Малкина В.М. Изыскание оптимальных режимов стерилизации сыворотки крови и кровозамещающих растворов в поле ультразвука/ Проблемы гематологии и переливания крови, 1962. № 6. - С. 40-43.

212. Мальков Ф. Хороший пример // Молочное и мясное скотоводство.-№ 12,- 1962,-С. 37-38.

213. Мартыненко Н.А. Эмбриональная смертность сельскохозяйственных животных и её предупреждение. К.: Урожай.- 1971.- 187 с.

214. Марющенко А.В. Влияние физических полей на клетки и среды для криоконсервации спермы быков-производителей: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Харьков, 1985. - 217 с.

215. Масенко 1.П. Асептичне одержання сперми// Сощашстичне тварин-ництво. 1963. - № 1.- С. 56-58.

216. Методические рекомендации по асептическому взятию, обработке и использованию спермы производителей (Харьковская технология) /НИИЖ ЛиП УССР/ Осташко Ф.И., Величко И.М., Сопельник В.М., Павленко М.П., Федотов А.Г. Харьков, 1974. - 20 с.

217. Методические рекомендации по организации воспроизведения на молочных фермах/ Осташко Ф.И., Сопельник В.М., Канцедал В.И. и др./ НИИЖ ЛиП УССР. Харьков, 1982. - 30 с.

218. Методические рекомендации по организации отбора коров и тёлок для искусственного осеменения/ Укр. НИИ разв. и иск. осеменения КРС. -Киев-Борисполь, 1983. 12 с.

219. Милованов В.К., Комаров Н.И., Селиванова О.А., Кузнецов М.П., Нагаев В.Д. Применение чучела самки в практике искусственного осеменения и научно-исследовательской работе// Скотоводство. 1932. - № 5,- С. 137.

220. Милованов В.К., Селиванова О.А. Разбавители для спермы с.-х. животных// Проблемы животноводства. 1933,- № 2.- С.75.

221. Милованов В.К., Хабибуллин Х.Х. Анабиоз сперматозоидов и его использование в социалистическом животноводстве// Проблемы животноводства." 1933. № 5. - С.83.

222. Милованов В.К. Основы искусственного осеменения,- М.: Сельхоз-гиз. 1934,- С.86-89.

223. Милованов В.К. Итоги научно-исследовательской работы по искусственному осеменению /Учение о типах естественного осеменения// Сб Искусственное осеменение. -М.: Сельхозгиз, 1935.- С. 176.

224. Милованов В.К. Влияние окислительно-восстановительного режима на жизнеспособность сперматозоидов сельскохозяйственных животных// Труды лаборатории искусственного осеменения ВИЖа. 1940.- С. 5.

225. Милованов В.К., Паршутин Г.В., Соколовская И.И., Ожин Ф.В., Цитович Е.В. Альбом по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. -М.: МСХ РСФСР, 1960. 136 с.

226. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение животных. М.: Колос, 1962. - 696 с.

227. Милованов В.К., Соколовская И.И. Причины эмбриональной смертности и новые возможности улучшения воспроизводства стад // Животноводство. № 6.- 1963,- С.75-82.

228. Милованов В.К. Одноразовые инструменты прогрессивная техника искусственного осеменения животных// Животноводство. - № 3.- 1963.- С. 79-82.

229. Милованов В. К. Имплантаторы новый класс синтетических сред для разбавителей семени сельскохозяйственных животных// Доклады советских ученых к V международному конгрессу по биологи воспроизводства. М., 1964,- С.7-9.

230. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих// Докл. ВАСХНИЛ, 1969.- № 8,- С. 44.

231. Милованов В.К. Современный этап в научной разработке и практическом применении замораживания семени быков //Животноводство.- 1968.-№ 10.- С.61-65.

232. Милованов В.К., Варнавский А.Н., Наук В.А. //Вестник сельскохозяйственных наук. 1970. - № 10.- С. 87-93.

233. Милованов Н.Н., Чистяков И.Я., Муртазян Б. Условно-патогенная микрофлора и воспроизводительная функция //Ветеринария. -1970. № 12. -. -С. 74-75.

234. Милованов В.К. Сравнение трёх способов хранения глубокозамо-роженного семени быка //Сельское хозяйство за рубежом,- 1972. № 7.- С.43.

235. Милованов В.К., Баранов Ф.А., Жильцова Д.С. Влияние скорости охлаждения при замораживании на восстановление подвижности живчиков хряка/ В кн.: Направление и новые результаты исследования по биологии воспроизведения. Дубровицы. - ВИЖ, 1974. - С.45.

236. Милованов В.К., Голубь B.C., Жильцов Н.З. Лизофосфатиды и их значение в технологии хранения семени // Докл. ВАСХНИЛ. 1975. - № 1. -С.24.

237. Милованов В.К. Теория и технология длительного сохранения семени барана и хряка. «Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных»// Материалы советско-американского семинара. Харьков, 1977.-С. 12-24.

238. Милованов В.К., Кононов В.П., Азизова О.А. Физические свойства мембранных липидов и устойчивость живчиков при глубоком замораживании // Вестн. с.-х. наук. — 1984. № 2. - С. 9-10.

239. Милованов В.К., Парамонова Л.И., Лизунков А.Ф., Дмитровский А.А. Использование каротиноидов при криоконсервации спермы// Докл. ВАСХНИЛ, 1988. -№ 11.-С.ЗЗ.

240. Милованов В.К. Влияние стрессов и феромонов на результативность осеменения //Зоотехния,- 1991. № 1. - С. 50.

241. Мингазов Т.А. Предотвращение эмбриональной смертности у животных //Животноводство. 1988. - № 5. — С.49.

242. Михайлов Н.Н., Чистяков И.Я., Зудилин В.А. Роль условно-патогенной микрофлоры в этиологии нарушения репродуктивной функции у животных/ В кн.: Профилактика бесплодия сельскохозяйственных животных на Северном Кавказе. Новочеркасск, 1974,-С.87.

243. Могилевич М.М. Окислительная полимеризация в процессах план-кообразования.- Л.: Химия, 1977,- 74 с.

244. Морозов В.А. Объективное определение активности спермы// Сб. научно-исследовательских работ/ Труды Сиб.НИИЖ, 1938,- Том 1 С. 33-38.

245. Морозов В.А. Длительное хранение спермы быка// Тр. Сибирского НИИЖ. 1938. -Вып. 2,- С. 138.

246. Москаленко Б. Эффективность ректо-цервикального метода осеменения коров// Животноводство, 1985 . № 5.- С.83.

247. Муртазин Б. Способ профилактики эмбриональной смертности крупного рогатого скота. А. с. 1813441, СССР, 1993.

248. Мышкин Н.Ф. Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. М.: ОГИЗ, Сельхозгиз, 1937.

249. Нарыжный А.Г. Стимуляция феромонами воспроизводительных функций свинок// Зоотехния. 1991. -.№ 11. - С.63.

250. Наук В., Делеу В., Дарий Г. Новая синтетическая среда для размораживания спермы быков в полимерных соломинках// Молочное и мясное скотоводство. 1995. - № 5. - С.47.

251. Наук В.А. Структурно-функциональные особенности сперматозоидов сельскохозяйственных животных при консервировании и разработке эффективных способов их длительного хранения: Автореф. докт. диссер. Харьков, 1987,- 117 с.

252. Недава JI.B., Нагорна А.В., Пщнебесна В.П., Власюк М.Г., Плико М.Т., Люовенко А.С. Токсилопчна оцшка гуми, що використовуеться у ве-теринарн// Вюник сшьськогосподарсько! науки. 1987. - № 8.- С.89.

253. Нейман О.Ф. Искусственное осеменение коров. М.: Сельхозгиз, 1938.-86 с.

254. Никитченко И.Н., Плященко С.И., Зеньков А.С. Адаптация, стрессы и продуктивность сельскохозяйственных животных. Минск: Ураджай, 1988.-199 с.

255. Николаев В.М., Комар В.Г. Линейные ускорители электронов для стерилизации и радиационной химии// Всесоюзное научно-техническое совещание по использованию ускорителей в народном хозяйстве и медицине. Л., 1971.-С. 82-84.

256. Нурахметов Ж. Ж. Половые феромоны в воспроизведении крупного рогатого скота// Докл. ВАСХНИЛ, № 1988,-№11.-С. 39.

257. Ожин Ф.В., Родин И.И., Смирнов-Угрюмов Д.В. Искусственное осеменение коров. М.: Сельхозгиз, 1953.- 187 с.

258. Осетров А.А., Осташко Ф.И., Чирков В.А., Подгородецкий И. О микробной загрязненности влагалища коров при искусственном осеменении// Ветеринария, 1968. № 3. - С. 31.

259. Осетров А.А. Бесплодие, восстановление и стимуляция воспроизводительной функции коров и тёлок: Автореф. докт. диссер., Львов, 1985.

260. Осетров А.А., Харченко Н.И. Микробное загрязнение органов размножения при искусственном осеменении и бесплодии крупного рогатогоскота// Новое в методах зоотехнических исследований. Харьков, 1992.- Ч. 1.-С. 125.

261. Осташко Ф.1. Тривале збер1гання сперми буга1в при температур! -183°С// Сощалютичне твариншштво. 1959. - № 11. - С.36.

262. Осташко Ф.И., Гайворонский Г.С. Применение фотоэлектроколо-риметра для определения концентрации сперматозоидов// Молочное и мясное скотоводство. I960,- № 2.- С.43-45.

263. Осташко Ф.И., Вишневский В.И. Биофизические процессы при замораживании спермы быков/ Актуальные вопросы криобиологии и криоме-дицины// Материалы симпозиума. Харьков, 1974,- С. 137.

264. Осташко Ф.И., Шинкаренко В.А., Павленко М.П., Величко И.М. Спермоприёмник к искусственной вагине животных. А.с. 505420 (СССР). МКИ А 67 Д 7/42. Заявл. 9.11.72. Опубл. В Б.И. 1977.- № 17.

265. Осташко Ф.И. Харьковская технология получения, криоконсервиро-вания и использования спермы производителей // Физиология воспроизведения с.-х. животных: (Материалы советско-американского семинара) / НИИЖ ЛиП УССР.-Харьков, 1977.-С. 121-125.

266. Осташко Ф.1. Штучне оаменшня Kopie i телиць / Довщник з пле-мшно! справи. К.: Урожай, 1978. - С. 87-94.

267. Осташко Ф.И., Шинкаренко В.А., Федотов А.Г. Устройство для искусственного осеменения животноводства/ Изобретения и рационализаторские предложения, рекомендуемые МСХ СССР для внедрения в производство. М., 1978. - С. 41.

268. Осташко Ф.И., Бугров А.Д., Олексенко Т.И. Сверхбыстрое оттаивание спермы быков-производителей// Молочное и мясное скотоводство. -1978. -№ 12. -С. 24-25.

269. Осташко Ф.И., Бугров А.Д., Канцедал В.И. Штучне ос1мешння на великих фермах// Тваринництво Укршни. 1978. - № 11.- С.40-45.

270. Осташко Ф.И. Система интенсивного животноводства: Организация и техника искусственного осеменения животных / Научные основы ведения сельского хозяйства зоны Лесостепи УССР в системе агропромышленного комплекса. К.: Урожай, 1982. - С. 278-282.

271. Осташко Ф.И., Дибиров М.К. Влияние сроков осеменения на воспроизводительную способность коров// НТБ № 34 /НИИЖ ЛиП УССР. -Харьков, 1982.-С.9-12.

272. Осташко Ф.И., Чирков В.А., Бугров А.Д. и др. Воспроизводство стада в промышленном скотоводстве. К.: Урожай, 1982. - 210 с.

273. Осташко Ф.И., Северин Н.Ф., Величко И.М., Горенко А.Ф., Ма-рющенко А.В. Стерилизация ускоренными электронами полимерных инструментов для искусственного осеменения // Вшник сшьськогосподарсько! науки. 1986. - № 2. - С. 47-49.

274. Осташко Ф.И. Совершенствование системы организации крупномасштабной селекции в скотоводстве// В1сник с.-г. науки. — 1987. № 7. - С. 67-71.

275. Осташко Ф.И., Григорьев А.Я., Катков ИИ., Чернецов О.А. Пороговый кондуктометрический способ определения концентрации спермиев быков-производителей//Молочно-мясное скотоводство.- Киев,- 1989.- № 75. С.8-11.

276. Осташко Ф.И. Харьковская технология асептического взятия и криоконсервации спермы быков-производителей// Международный агропромышленный журнал. 1992. - № 2.

277. Осташко Ф.И. Новые инструменты для искусственного осеменения// Молочное и мясное скотоводство. 1997. - № 5. - С.27-28.

278. Осташко Ф.1., Кузнецов Г.М. та ш. Держстандарт Укра'ши. Сперма буга!в нативна. Техшчш умови,- К.: Держстандарт, 1998. 12 с.

279. Осташко Ф.1., Павленко М.П., Белжов А.А. Теор1я i практика бю-логп розмноження та штучного оЫменшня сшьськогосподарських тварин// Зб1рник наукових праць / 1нститут тваринництва У А АН. Харюв, 1999. -Вип. ХХХХ.-С. 38-43.

280. Осташко Ф., Ивченко Н., Сивопляс В. Влияние колебания температуры в диапазоне -196° -90°С на биологические свойства замороженной спермы быков // XIV ICAR.- Стокгольм. 2000. - С.421-424.

281. Пабат В.О. Основи штучного ос1мешння i ветеринарно-зоотех-шчного контролю вщтворення стада. Кшв, 1997. - 58 с.

282. Павлов Г.Н. Влияние температуры на сперматозоиды// Русский физиологический журнал, 1927, X,- 3-4,- С.291.

283. Павлов И.П. Условный рефлекс// Полное собрание трудов. M.-JI., 1949. -С.З.

284. Павлов В.А. Физиология воспроизводства крупного рогатого скота. М., Россельхозиздат, 1976.- С. 205.

285. Пакенас П.И., Пакенас А.С. Определение концентрации живчиков фотоэлектрическим колориметром //Животноводство I960.- № 9 - С. 69-70.

286. Панасенко Ф.Т. Определение концентрации спермиев при помощи электрофотоэкспонометра//Свиноводство. 1963. -№10. - С.38-39.

287. Пакенас П.И., Гинкявичус Р.А. Об оптимальном режиме замораживания семени быка.//Животноводство. 1973. - № 10.- С. 84-86.

288. Пакенас П.И., Гинкявичус Р.А., Петрушин B.JI. Влияние различных капилляров на сперматозоиды при их замораживании //Животноводство. -1973.- № 2. С.80.

289. Пакенас П.И., Гинкявичус Р.А. Байсагальская технология взятия, замораживания и использования семени быков// Бюлл. научно-технической информации. Вильнюс, Литовский НИИ животноводства,- №2.-1975.-С. 966.

290. Пакенас П. и др. Новая технология взятия, замораживания и использования семени быков //Животноводство. 1979,- № 3. — С. 63-64.

291. Пакенас П.И. Байсагальская технология криоконсервации семени быка//Животноводство. 1985.- № 1. - С. 16-18.

292. Паныч А.П. Функциональная активность шейки матки коров в стадии возбуждения и при воздействии некоторых внешних факторов: Автореферат на соиск. уч. ст. канд. вет. наук. Львов, 1987. — 16 с.

293. Панышева М.В., Козенко Т.М. О рациональной конструкции искусственной вагины для хряка// Труды лаборатории искусственного осеменения ВИЖа, 1940.-Т.1.-С. 73-76.

294. Паршутин Г.В. О переживаемости сперматозоидов в матке кобыл// Коневодство. № 9. - 1952. - С. 12-19.

295. Пивень А.Н. и др. Теплофизические свойства полимерных материалов. М.: Высшая школа, 1976.- С. 126-143.

296. Пиккет Б. О максимальной эффективности воспроизводства при использовании замороженного семени быка// Сельское хозяйство за рубежом. -1971.-№ 12,-С. 13-29.

297. Платов Е.М., Сааб Фарео Аби Сааб. Замораживание семени быков в соломинках //Животноводство. 1976.- № 3. — С. 60-65.

298. Платов Е.М., Малиновский П.Т. Необходимо учитывать скорость движения спермиев //Животноводство. 1986. - № 4. - С. 9.-11.

299. Плященко С.И., Сидоров В.Т. Стрессы у сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1987. - 192 с.

300. Половцева В.В. Опыт искусственного осеменения сперматозоидами, сохранявшимися вне организма в течение нескольких дней// Тр. 1-го Всероссийского вет.научно-организационного съезда в 1926 г., т.1.- М., 1927. -С. 255.

301. Полянцев Н.И. Практические советы по борьбе с яловостью коров. -М.: Россельхозиздат, 1986. -.174 с.1. Me с V^n V ; ; /м". ; .

302. Посковатский А., Хабибуллин X. Замораживание спермы по упрощенной методике// Молочное и мясное скотоводство. -1968 .- № 3 — С. 27-28.

303. Поспелов А.И., Попов С.И., Миронов И.И. Применение стрептомицина и пенициллина при искусственном осеменении коров// Сб. работ,- Вып. XXIV, Ленинград, ветинститут, 1962,- С. 82-86.

304. Преображенский О.Н. Предельные разбавления эякулятов быков// Зоотехния. 1994. - № 8,- С.47-48.

305. Пронин Б.Г. Рекомендации по низкотемпературному замораживанию спермы быков и мано-цервикальному способу искусственного осеменения коров / В кн.: «Система ведения животноводства ТА ССР». Казань, 1983.-26 с.

306. Пронин Б.Г. Криоконсервация спермы быков-производителей и система организации воспроизводства крупного рогатого скота: Докт. дис-серт., Харьков, 1990.-С.112-118.

307. Просандеев В.К. Эндометриты: решение проблемы// Вюник аграр-Hoi науки. 1991. - № 2,- С.62-67.

308. Протасова Т.Н. Гормональная регуляция активности ферментов.-М.: Медицина, 1975.-С. 147-153.

309. Прохоров A.M. Физика-медицине. В кн.: Фундаментальные науки - медицине. - М.: Наука, 1981. -С. 87-100.

310. Пушкарь Н.С., Исаченко Е.Ф., Осташко Ф.И. Устройство для консервирования спермы производителей. Авторское свидетельство СССР №1393415 А1 Кл.А 61 D 7/02, 1985.

311. Радченков В.П., Стоянов В.К. Возможность передачи инфекции со спермой быков//Зоотехния. 1992,- № 5-6. - С. 35-38.

312. Радченков В.П., Радкевич С.А., Стоянов В.К. Условно-патогенная микрофлора в сперме быков//Зоотехния. 1993.- № 9.- С.24-27.

313. Радченков В.П., Стоянов В.К. Иммунологический способ предупреждения эмбриональных потерь// Зоотехния. 1995. - № 8.- С.36-39.

314. Радченков В.П., Стоянов В.К. Иммунопрофилактика эмбрональных потерь у крупного рогатого скота// Докл. Рос.акад. с.-х. наук,1995 №3.- С. 40.

315. Регельсон А.В. Переносной термостат для искусственного осеменения с.-х. животных. А.с. № 1678356, СССР.

316. Рекомендации по организации искусственного осеменения и улучшению уровня воспроизводства крупного рогатого скота /Рубан С.Ю., Павленко JI.H., Афанасенко В.Ю. и др., ИЖ, Харьков 2002,- 39 с.

317. Стернберг М. От клеток к атомам: Иллюстрированное введение в биологию. -М.: Мир, 1988. 144 с.

318. Робертис Э., Новинский В., Сазе Ф. Биология клетки. М., 1973. 1X2 с.

319. Родин И.М., Липатов В.И., Комиссаров Н.В. Проблемы искусственного осеменения свиней// Ветеринарный специалист на социалистической стройке.- 1931,- № 10. С.24-29.

320. Родин И. Способы искусственного осеменения коров// Животно-водств. 1980. - № 7. -С. 19-20.

321. Рубан С.Ю. Методология и система селекции животных украинской красно-пёстрой молочной породы.: Дис. докт. с.-х. наук/ 1нститут тварин-ництва. Харюв, 1999. - С. 45-49.

322. Рустенев А.Р., Прокопцев В.М., Ланда С.Б., Лебедев А.Д. Прогнозирование оплодотворяющей способности спермы сельскохозяйственных животных с помощью лазерной спектроскопии// Бюлл. ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных, 1989,- № 16,- С. 3-7.

323. Рэнби В. Фотодеструкция, фотоокисление, фотостабилизация полимеров,- М.: Мир. 1978,- 116 с.

324. Садыков Р.Э., Пузий А.Д. Активность некоторых ферментов плазмы и спермы быков-производителей алатауской породы// Труды Киргизского НИИ животноводства и ветеринарии, 1971, вып. 19 С. 73-83.

325. Савельев С.И. Окись этилена для стерилизации тканевых препаратов трансплантантов/ Ортопедия, травматология и протезирование. М.: Медицина.- 1966,- № 9,- С.29-31.

326. Сахно В.Ф. Предупреждение бактериальной загрязнённости спермы хряка// Животноводство.- 1962.- № 3.- С.37-39.

327. Сеглинь А.К. Эффективный метод осеменения коров//Животно-водство. № 7,- 1964. - С. 60-65.

328. Сеин О.Б., Колупаев А.Д., Фурман Ю.В., Петкевич И.В. Влияние феромонов хряка на становление половой функции ремонтных свинок// Ветеринария, 1993. № 3. - С.34-37.

329. Семаков Г.В. Некоторые из окислительно-восстановительных ферментов в семени быка// Доклады советских ученых к V Международному конгрессу по биологии воспроизводства. М., 1964.- С. 35-39.

330. Семенченко Н.А. Зависимость оплодотворения тёлок от возраста их осеменения // Вюн. с.-г. науки. 1978. - № 10. - С. 111-112.

331. Семенченко Н.А. Оптимальные сроки осеменения тёлок и факторы, способствующие их оплодотворению: Автореф. дисс. канд. биол. н. /Харьков, 1979. -24 с.

332. Сефершаев М.А., Зорина Е.М. Микробная загрязненность свода влагалища коров при искусственном осеменении// Сб. Биологические основы размножения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, Пушкино. -1968,- Вып. 12,-Т. 11,-С.137-141.

333. Сетлоу Р. Молекулярная биофизика. — М.: Мир. 1964. - 264 с.

334. Сидашова С.А. Рациональне використання заморожено! сперми бу-гаш-тпдншав: Автореф. дис. канд. с.-г. наук. Харюв, 1992. - 16 с.

335. Сидор В.И. Техника и практика искусственного осеменения без применения влагалищного зеркала и спирта//Животноводство.- № 4.- 1961. -С.68-69.

336. Скаткин Н.П. Температурный шок сперматозоидов жеребца// Докл. ВАСХНИЛ, 1940. № 8. - С.29-33.

337. Скорняков Б.А. Изучение повреждений спермиев быка при их низкотемпературной консервации: Автореф. канд. диссерт. Харьков, 1973.-16 с.

338. Смирнов И.В. Сохранение семени сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения//Советская зоотехния.- 1949.- № 4,- С.43.

339. Смирнов И.В. Глубокое охлаждение семени сельскохозяйственных животных/Юбщая биология,- 1950. XL- № 3.- С.47-49.

340. Смирнов И.В. Сохранение семени сельскохозяйственных животных при температуре 78-183° //Социалистическое животноводство,- 1951,- № 1,-С.11-13.

341. Смирнов И.В. Техника глубокого охлаждения семени сельскохозяйственных животных в замороженном состоянии// Бюлл. науч.-техн. информ. НИИЖ ЛиП УССР, 1957. С.63-67.

342. Смирнов И.В. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. К.: Госсельхозиздат УССР, 1962. - 291 с.

343. Смирнов И.В. Разработка теоретических основ и технологии искусственного осеменения животных: Автореферат докт. дис., Киев, 1964.

344. Смирнов И.В. О режиме оттаивания замороженной спермы быков// Молочное и мясное скотоводство. 1971. -№ 11.-С. 37-38.

345. Смирнов И.В. О сроках хранения спермы в жидком азоте// Молочное и мясное скотоводство. 1973. - № 9. - С.39-40.

346. Смирнов И.В. К теории глубокого охлаждения спермы// Животноводство. 1974. - № 11. -С.65-70.

347. Смирнов И.В. Теоретические основы глубокого охлаждения спермы/ В кн.: Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур.- К.: Наукова думка, 1977. С.28.

348. Смирнов Б.Т. Влияние тканевых экстрактов на выживаемость спермиев быков// Труды ВНИИ ветеринарных препаратов, 1977.- Т. 23,- С. 155160.

349. Смирнова В.В. Переживаемость спермы быков вне организма в средах с тканевыми препаратами/ В кн.: Пути повышения продуктивности сельскохозяйственных животных, 1971. С.94-96.

350. Собко А.И., Кластова З.С. Проблемы неинфекционной патологии воспроизводства животных//Вюник аграрно! науки. 1994. - № 4,- С.56-57.

351. Соклакова О.В., Сушко О.В., Осташко Ф.1. Вплив бюгенних стимулятор! в на життездатшсть статевих юнтин буга1в// Вюник Полтавського ДСГУ. 2001. - № 2-3.- С. 17-18.

352. Соклакова О.В., Осташко Ф.1., М1рошшков A.M. Вплив бюгенних стимулятор1в на життездатшсть статевих юнтин буга'1'в// Зб1рник наукових праць/ Луганський ДАУ. 2001. - № 13. -С. 170 - 172.

353. Соколовская И.И. Гиалоронидаза сохраненного семени// Сб. Новое в биологии размножения сельскохозяйственных животных. -М., 1951. -С.257-264.

354. Соколовская И.И. Влияние сохранения семени на процессы оплодотворения маток и развитие потомства// Сб.: Новое в биологии размножения сельскохозяйственных животных. -М., 1951-С.253-258.

355. Соколовская И.И., Кершулис А., Сахно В.Ф. Асептика взятия и обработки семени//Животноводство. 1961. - № 12. - С.27-29.

356. Соколовская И.И. Новый способ оттаивания глубокоохлажденного семени животных//Животноводство,- 1975,- № 12,- С.55-57.

357. Соколовская И.И. Новая модель оттаивания спермы животных// Молочное и мясное скотоводство. 1976.- № 1,- С.29-33.

358. Солсбери Г.У., Ван Демарк H.JI. Теория и практика искусственного осеменения коров в США. М.: Колос, 1966. - 441 с.

359. Сопельник В.М. Модефшована штучна вапна для бугат// 36. праць НД1Т Л1П УРСР/ Розведення i утримання сшьськогосподарських тварин. -К.: Урожай, № 5,- 1965. С.81-83.

360. Стамм Г.У. Искусственное осеменение и улучшение сельскохозяйственных животных.- М.: Изд. иностранной литературы,- 1958.- С. 123-126.

361. Степанов Н.А. Индивидуальные особенности поведения крупного рогатого скота// Докл. Рос. акад. с.-х. наук. 1993. - № 3,- С.43-47.

362. Столбов В.М., Ершов В.И. Повышение оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы быков путём добавки в разбавитель биостимуляторов// Сб. научных трудов ВНИИ разведения и генетики сельскохозяйственных животных, 1978. -Вып. 24. — С. 158-162.

363. Студенцов А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология. -М.: Сельхозиздат, 1949.-431 с.

364. Студенцов А.П. К учению о половом цыкле у сельскохозяйственных животных//Советская зоотехния. 1953. № 4,- С.69-78.

365. Студенцов А.П., Шипилов B.C., Субботина Л.Г., Преображенский О.Н. Ветеринарное акушерство и гинекология (6-е изд.). М.: Агропромиз-дат, 1986.-480 с.

366. Сушко О.Б., Медведовський О.В., Соклакова О.В., Новшов О.О., Таран С.П. Сучасш технологи заплтвш, крюконсервацп та використання сперми жеребщв-тшдниюв// Наук.техн.бюл. IT УААН. X., 2002,- № 82.-С.103-108.

367. Сысоев А. А. Методы оценки санитарно-гигиенического состояния полового аппарата у животных// Животноводство. 1962. - № 11.- С.52-53.

368. Сысоев А.А. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1980. - 148 с.

369. Таранчук JI.A., Караваева Е.А., Зинкевич Э.П. Проблемы хим. коммуникации животных (АН СССР)/ Институт эволюц. морфол. и экологии.-М.- 1991. -С.374-380.

370. Тихонова JI.B. Использование витамина Е для профилактики гибели эмбрионов у коров/ HoBi методи селекцп i вщтворення високопродуктивних порщ i тип1в тварин// Матер1али наук.вироб.конф. Кшв, 29-30.05.1966,-С.391-394.

371. Трофимов Ю.Н. Спермоприёмник к искусственной вагине. А.с. 256163 (СССР). МКИ 300 6/01 (А 61). Заявл. 27.11.67. Опубл. В Б.И., 1970, №5.

372. Трофимов Ю.Н. Искусственная вагина для с.-х. животных. А.с. 360084 (СССР). МКИ А 61 7/2. Заявл. 17.03.70. Опубл. в Б.И., 1971, № 27.

373. Трофимов Ю.Н., Лякишева З.В., Шкунков JI.C. Усовершенствованная искусственная вагина для баранов// Овцеводство. 1972,- № 10 - С. 3637.

374. Трофимов Ю.Н. Искусственная вагина для сельскохозяйственных животных. А.с. 422415 (СССР). МКИ А 61 7/2,- Заявл. 10.09.69. Опубл. в Б.И., 1974, № 22.

375. Трубкина Г.Д., Шергин Н.П., Шевцова А.А. Искусственное осеменение с.-х. животных. М.: Сельхозгиз, 1961.- 286 с.

376. Трутнев Е.И. Влияние добавления некоторых препаратов к разбавителю на выживаемость спермиев быков// Труды Казанского ветеринарного института, 1971.-III.-С. 128-132.

377. Тутиков Н. Мой метод//Молочное и мясное скотоводство. № 4. -1964,- С.25-26.

378. Турбин В.Ф. Методы быстрого замораживания семени быков-производителей//Животноводство. 1966.-№ 10. -С.70-75.

379. Турбин В.Ф. Быстрый метод замораживания семени быков в ампулах и полистироловых пипетках/ Материалы конференции молодых ученых ВИЖа // Сб. научных работ, 1967,- С. 19-21.

380. Турбин В.Ф. Современные методы замораживания семени быка// Животноводство. 1968,- № 3. - С.87-89.

381. Тюпич М.М. Биологическое обоснование цервикального метода искусственного осеменения коров /Новое в биологии размножения сельскохозяйственных животных. М., 1951.- С.328-335.

382. Тюпич М.М. Нужен ли цервикальный метод осеменения коров// Животноводство. № 4. -1957. -С.66-69.

383. Успенский А.Н. Замораживание семени быка в полистироловых пипетках //Животноводство. 1965.- № 3. - С.74-75.

384. Успенский А.Н. Усовершенствование метода замораживания семени быка с применением одноразовых полистироловых пипеток: Автореф. канд. дисс. М., ВИЖ, 1966. 18 с.

385. Устинов А.Д. Стресс-факторы в промышленном животноводстве. -М.: Россельхозиздат, 1976. 166 с.

386. Федеренкова Н.И. Морфологические изменения спермиев барана при хранении/ Научно-производственная конференция по биологии воспроизведения и искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. Аскания-Нова, 1970. С. 31-32.

387. Финеан Дж., Колиэн Р., Мичелл Р. Мембраны и их функции в клетке. -М.: Мир, 1977,-С. 163-164.

388. Фишман К.Е., Хрузин Н.А. Производство капронового шёлка. Гос-химиздат, М., 1961.- С.87-89.

389. Фрей-Висслинг А. Сравнительная органеллография цитоплазмы. -М.:ИН, 1976.- С.63-67.

390. Фрорип Г. Сперма в каплях-драже- на сухом льду //Молочное и мясное скотоводство.- 1968. № 9. - С.29-30.

391. Фрорип Г.В. Сперма в каплях драже на сухом льду//Молочное и мясное скотоводство. 1969.- № 7. - С.29-31.

392. Фрорип Г.В. Использование спермы, замороженной в виде капель драже//Молочное и мясное скотоводство,- 1969.- № 7. С.29-33.

393. Фрорип Г.В. Организация глубокого замораживания спермы в Эстонской ССР. //Молочное и мясное скотоводство. 1975,- № 11.- С.29-30.

394. Хабибуллин И.Х. Одновременное определение концентрации и активности семени сельскохозяйственных животных// Сб. аспирантских работ. ВИЖ, 1968,- Вып. 2 (5). - С.82-84.

395. Хабибуллин Х.Х. Сохранение и перевозка семени при низких температурах //Молочное и мясное скотоводство. 1957, № 5.- С.51-53.

396. Хабибуллин Х.Х. Длительное хранение семени быка в замороженном состоянии //Молочное и мясное скотоводство. 1958.- № 2,- С.39-41.

397. Хабибулин X., Кудряшова Е. Опыт использования полимеров при хранении семени быков //Молочное и мясное скотоводство. — 1961. № 1,-С.46-48.

398. Хабибулин И.Х. Новое в технологии замораживания спермы быков-производигелей// Тез. докл. науч. конф. Башк. НИИСХ, Уфа, 1972.- С. 102104.

399. Хавизон Л., Шавкун В., Оленяч Л., Юминка В. Действие биологически активных веществ на воспроизводительную функцию хряков// Свиноводство. 1978. -№ 3,- С.26-27.

400. Харута Г.Г., Волков С.С., Краевський A.I. Штучне оспменшня KOpiB i телиць// Рекомендацн для техшюв штучного оаменшня. Бша Церква, 1999.-46 с.

401. Хватов Б.П. Строение и физиологические изменения половой системы самок домашних животных. -Симферополь: Крымиздат, 1955. 176 с.

402. Чирков В.А. Обоснование и производственное испытание мано-цервикального метода искусственного осеменения коров// Сб. Молочно-мясное скотоводство,- К.: Урожай, 1965 а,- Вып. 3.- С.4-12.

403. Чирков В.А., Моторика матки коров при осеменении //Ветеринария. 1965 б,-№ 7,-С.72-74.

404. Чирков В.А., Шинкаренко В.А. Производственное применение ма-но-цервикального метода искусственного осеменения коров// Сб. Молочно-мясное скотоводство. К.: Урожай, 1966,- Вып. 7,- С.59-62.

405. Чирков В.А. Экспериментальное изучение моторики шейки матки коровы// Тез. докл. к науч.-произв. конф. по теории и практике воспроизводства сельскохозяйственных животных. Харьков, 1972.- С.47-49.

406. Чухрий Б.Н. Фосфатидная активность спермы быков и её влияние на оплодотворяющую способность спермиев: Автореферат канд. дисс., Львов, 1964,- С.87-89.

407. Чухрш Б.М., Клевець Л.О. Об'ективний cnoci6 ощнки сперми бу-га!в. Hoei методи селекцп i вщгворення високопродуктивних порщ i тишв тварин// Матер1али наук, виробничо! конференцй".- Кшв, 29-30.05.1996.-С.395.

408. Шаборот Н.Е. Особенности воспроизводства и онтогенеза собак при кампилобактериозной патологии в условиях питомников/ Особенности плем.работы с с.-х. животными. Моск. вет. акад. М., 1991,- С. 131-133.

409. ШаралаГ.С. Нешпдшсть та боротьба з нею. К.: Урожай, 1988. -134 с.

410. Шергин Н.П. Дыхание спермы. В кн.: Искусственное осеменение с.-х. животных// Тр. лабор. искусственного осеменения животных, М.: ВАСХНИЛ, 1940. Т. 1,- С.207-208.

411. Шергин Н.П. Аминокислотный состав и изменение белка и других компонентов семени быка и барана в процессе хранения при низких температурах// Тр. ВИЖ'а, 1959.- XXIII. С. 191-193.

412. Шипилов B.C. Время овуляции у коров и тёлок в течение суток// Известия РСХА.-М., 1954. -№ 2. С.14-15.

413. Шипилов B.C. Как выявить охоту у коров// Молочное и мясное скотоводство. -М., 1966. № 2. - С. 35-57.

414. Шипилов B.C., Чирков В.А. Послеродовая стимуляция половой функции у коров. К.: Урожай, 1987. - 182 с.

415. Шредер В.Н. Физиология и биохимия возникновения и регуляции пола потомства.- М.: Наука, 1965. С. 138-141.

416. Шулимов А.Г. Оценка спермы и техника осеменения сельскохозяйственных животных.-Изд. Прапор, Харьков, 1967,- С.31-33.

417. Эйснер Ф.Ф., Омельяненко А.А., Шаповалов Ю.Д. Воспроизводство стада на молочных фермах индустриального типа. М.: Колос, 1978. - 181 с.

418. Ющенко Н., Семаков В., Левин К. Замораживание спермы быков в гранулах без применения сухого льда // Молочное и мясное скотоводство. 1968 а.-№5.-С.36-37.

419. Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. Гранулирование спермы быков с применением жидкого азота// Докл. советск. ученых к Международному конгрессу по размножению и искусственному осеменению животных.-М., 1968 б.- С.145-147.

420. Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. Влияние режима оттаивания на подвижность замороженного семени //Животноводство. 1972. - № 7. - С.81-82.

421. Ющенко Н.П. Восстановление активности семени быка при различных способах оттаивания. Науч. труды НИИСХ центр, районов нечерноземной зоны. -М., Колос,- 1973,- № 39. С. 124-125.

422. Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. Температурные режимы при замораживании семени быков//Вестник сельскохозяйственной науки. -1975.-№ 2,- С.63-66.

423. Ющенко Н. Замораживание семени быка в гранулах жидким азотом / Пути интенсификации кормопроизводства и животноводства в центральном районе нечерноземной зоны. М.- 1979,- С. 100-103.

424. Adam М., Hamelin A., Berge P., Goffaux М. Possible application of the technique of inelastik diffusion of light to the study of bull sperm viability //Annals. Biol. Anim. Biochim. Biophis/ 1969.- 9 . - P. 651-655.

425. Adler H.C., Deep freezing of bovine semen in cellophane straws and storage in liquid air // Arsberetning, Den kgl. Vet. og Landbohojskoles Sterili-tetsforskh. - 1960. - 243 p.

426. Adler H. et al. VI-e Congr. Intern. Reprod. Anim. Insem. Artif., Paris, 1968.-V.4.

427. Almquist J., Wiggin H. Effect of different combinations of freezing and thawing rates upon survival of bull spermatozoa in U.S. plastic strams. A.I.Dig.-1973.-21.-9,-P.10-11.

428. Almquist J.O., Wiggin H.B. Survival of bull spermatozoa in U.S. plastic strams. A.I. Dig., 1973.-V.21.-N 9.-P.10.

429. Amann R.P., Seidel G.E. Prospect for Sexing Mammalian Sperm. Boulder: Colorado Associated University Press, 1982.

430. Almquist J. Dairy Cattle // Perry E. The Artificial Insemination of Farm Animals: New Jersey: Rut. Univers. Press, 1968.

431. Bartlett E., Larson L., Parker G., Howard H. Specific pathogen-free (SPF) frozen bovine semen: a goal? // Proc. Sixth Techn. Conferenc. on A. I. A. R., NAAB, Columbia, 1976. P. 11-12.

432. Bayon D., Med R.A., Galicia C. Ovarian cysts induced by plant oestro-gens // Br. Vet. J. 1983. - 139, N 1,- P. 38.

433. Bhattacharya B.C. Pre-determination of sex in animal reproduction // VII- ICAR a. A.I., Krakov, 1976, IV, 876-879.

434. Bhattacharya B.C., Shorn P., Gunter A.N., Evans B.M. Successful separation of X and Y spermatozoa in human and bull semen // Int. J. Fertil. 1977. -N22.-P. 30-35.

435. Blot E. Problems related to the hygienic duality of bull semen as it is used in A.I. // Zootechn. e Veterin, 1955, 10, 11.

436. Brackett B.G., Oh Y.K., Evans J.F., Donawick W.J. In vitro fertilization of cow ova// Theriogenology. 1978. -N 9. - P. 89.

437. Boccart C., Mermillod P., Delecoeviellerie C., Dessey F. Bovine oviduct cell monolayers for supporting the blastocyst formation of bovine embryos // Theriogenology. 1991. -N35. - P. 35-187.

438. Bogart R., Mayer D. The effects of egg yolk on the various physical and chemical factors detrimental to spermatozoon viability // J. Animal Sci. 1950. -9, N2,-P. 143-152.

439. Blissit M.J., Bland K.P., Cotrelt D.F. Discrimination between the odours of fresh estrous and non-estrous ewe urine by rams // Appl. Anim. Behav. Sci, 1990.-N 1-2,-P.51-59.

440. Blot E. The gules capititis as part of the acrosome cap in the bull sperm // Prog.5-th internat. Congr. Reprod. Fertil., 6-13 Semtember, 1964, 4,- P.655-566.

441. Boland M.P., Crosby T.F., Gordon I. When pregnancy in cattle established by non-surgical egg transfer // Brit. Vet. J. 1981. - 131. - P. 738-740.

442. Boland M.P., Kennedy L., Crosby T.F., Gordon I. Superovulation in the cow using PMSG or HAP // Theriogenology. 1981. - N 15. - P. 110.

443. Bonadonna Т., Kaan I. Fekondita dell bovine e numego dei nemaspermi supposti vivenfi per u di materiale spermatico ed usato per la fecondazione artifici-ale.Veterinaria Italia, 1955, 2, 6.

444. Bonadonna.T. Nozioni di fisijpatologia della riproducione e di fecon-dacijne artificiale degli animali domestici, 1857, 495.

445. Booth M.D. Boar pheromones a model for the integration of endocrinology and exocrinology // J. Endocrinol., 123.-Suppl, c.9.

446. Bratanow. К. Осеменяване на селскостопанските животни. Земиздат, София, 1958.

447. Bratton R.W., Foote R.H., Cruthers J.С. Preliminary fertility results with frozen bovine spermatozoa // J. Dairy Sci. 1955. - N 38. - P. 40-46.

448. Brock D., Brock M.J., Bolt Т.К., Edwards M.K. Microbial life at 90°C, the sulfur bacteria of Boulder // J.Bacteriol, 1971.-V. 107.- N 1.- P.303.

449. Brown D.H.S., Morsland D.A. The viscosity of amoeba at high hidrostatic pressure // J. Cell. Сотр. Physiol., 1936,- vol.8.- P. 159-165.

450. Callagan B.D., King G.J. Determination of the fertilization rate of A.I. sires // Theriogenology. 1980. -N 14. - P. 403-410.

451. Danielli F„ Davson H. // J. Cell. Сотр. Phisiol. 1935. - N 5. - P. 4.

452. Cassou R. La methode des paillettes en plastique adaptee a la generalisation de la congelation // V-ICAR a. A.I., Italia, Trento, 1964, IV. P. 540-546.

453. Chatzidakis I., Katraakili K., Krambovitis E. Development of enzyme immunoassay kits for steroiod hormones // The IMBB report. Heraklion, Greece. - 1990.-P. 62.

454. CoffauxM. VIе Congr. Intern. Reprod. Anim. Insem. Artif. Paris, 1968,-V.II.- P. 1041-1045.

455. Crombach I.I. M.L. Some aspects of the behavior of dairy bulls. The effects of stimulation on the ejaculate // Z.Tierzucht und Ztichtungsbiol., 1961, 75, 4.

456. Curtis J.L., Elsden R.P., Seidel G.E. Non-sugrical transfer of bovine embryos //Theriogenology. 1981. -N 15. - P. 124.

457. Darrin-Bennet A., Poulos A., White I.G. A re-examination of the role of phospholipids as energy substances during incubation of ram spermatozoa // J. Re-prod. Fertil. 1973. - N 34. - P. 543-546.

458. Darrin-Bennet A., Poulos A., White I.G. The phospholipids and phos-pholipid-bound fatty acids and aldehydes of dog and fowl spermatozoa // J. Re-prod. Fertil. 1974. -N41. - P. 471-474.

459. Deminatus. F. Forschritte in der Sperma tiefkuhl Technik (-79°C) ein halbautomatische Einfriergerat. Dach. Tierarztl. Wachr., 1959.-66,- N 17.-P.480.

460. Desnyers P., Репе J.L., Larquetoux J.L. Sterilization par l'oxyde d'ethylene.- Anim. Compagn., 1979, vol. 14, № 6, p. 547-550.

461. Docke F., Eiadler O. Biophysikalische Mexhode zum Messung der Spermienaktivitat. // Ziichtung. Fort-pfl und Benandl. a. Haustiere, I960,- Bd.4.-H.5.-S.285.

462. Dov. D.J. Factors influencing metabolite concentration of bull spermatozoa. III. // J.Dairy Sci., 1957.-Vol.40.- P.1343-1349.

463. Dovgopol V.F., Ostashko F.I., Isachenko V.V. New preparation for prolongation of pituitary gonadotrophins effect // XII-ICAR, Hague, Netherland. -1992.-N 1-P. 199-201.

464. Dow R.B. Mathews J.E. The disintegration of erythroocytes and denatu-ration of hemoglobin by high pressure // Pnilosoph. Magazin, 1939,- Vol., 21.-P.637-639.

465. Duijn C. Van Jr. Kinetics of fertility of semen // V-ICAR a. A.I., Trento, 1964, IV.-P. 313-322.

466. Dunn H.O., Hafs C. Extenders and technique for freezing bovine spermatozoa//J. Dairy Sci. 1935. -N 36. - P. 577.

467. Edwards I., Walton A. A new service crate. Ewp. I. Expt. Agr., № 6, p.206.

468. Elam L. Marking tailheads helps them detect heat // Hoards Dairyman.-1976,-N 10.-P.845.

469. Ellington J.E., Carney E.W., Farrel P.B., Simkin M.E., Foote R.H. Bovine 1-2-cell development using a simple medium in three oviduct epithelial cell co-culture systems // Biol. Reprod. 1990. -N 43. - P. 97-104.

470. Ellington J.E., Farrel P.B., Foote R.H. Comparison of six-day bovine embryo development in uterine (oviduct) epithelial cell co-culture versus in vivo development in the cow // Theriogenology. 1990. - N 34. - P. 837-844.

471. Elsden R.P., Nelson L.D., Seidel G.E. Superovulation cows with fol-licule stimulating hormone and pregnant mare serum gonadotrophin // Therioge-nology. 1978. -9, N 1. - P. 17-26.

472. Emborg C. Equipment for preservation of blood and blood transfusion. -Manual on Radiation Sterilization of Medical and Biological Materials. International Atomic Energy Agency, Vienna, Technical reports series, 1973, Vol. 149, P. 191-198.

473. Erichson W.E., Granam E.E., Frederick E.C. Tne effect of antibiotics, level of glycerol and rates of freezing on revival rate of bovine spermatozoa in yolk citrate and milk extenders // J. Dairy Sci., 1954,- V.37.- P.651.

474. Eyestone W.H., First N.L. Co-culture of early cattle embryos to the blastocyst stage with oviductal tissue or in conditioned medium // J. Reprod. Fertil. 1989.-N86.-P. 715-720.

475. Foote R.H., Dunn H.O. Buffers, extenders and methods for freezing semen // Routine Lab. Procedure, Cornell Univ. 1955. - 11 p.

476. Foulkes J. // J. Reprod. Fertil. 1977. - 49, - N 2. - P. 277.

477. Foulkes J., Stewart D. //J. Reprod. Fertil.- 1977,- 51, -N 12. -P. 175.

478. Fukui Y. Effects of sera and hormones on development of bovine oocytes matured and fertilized in vitro and co-cultured with bovine oviduct epithelial cell Hi. Anim. Sci. 1989.-N 67.-P. 1318-1323.

479. Fulka J. Konservace spermatu hlubokym chlazenim a jho pratiche paititt // Nas. Chov.- 1957,- 16.-P. 445.

480. Gonzatel-Mariscal G., Chirino R., Hudson R. Prolactin stimulates emission of nipple pheromone in ovariectomized New Zealand white rabbits // Biol. Reprod., 1994.-50.-N 2,-P. 373.

481. Gordon I., Lu K.H. Production of embryos in vitro and its impact on livestock production //Theriogenology.- 1990.-V.33, N 1,- P.77-89.

482. Graham E.F., Marion G.B. A technique of freezing and factors affecting the revival of bovine spermatozoa // J. Dairy Sci. 1953. - 36.- P.597.

483. Grave B.H., Dovning R.C. The longevity and winning ability of spermatozoa // J.Exp. Zool., 1928,- P 51.

484. Greve Т., Madison V., Avery B. et al. In vitro production of bovine embryos: a progress report and the consequences on the genetis upgrading of cattle population // Animal Reproduction Science.- 1993.- V.33, N 4.- P.51-69.

485. Groot B. Die Phisiologie des Tiefrierens beim Bullensamen // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr.- 1956.-V.-63.-P.7-8.

486. Grund S. et al Phasen bei der carfare Konservierung von Bullensperma // Zuchtgygiene.- 1979.-14,-N 2,-P. 81-82.

487. Goosen D. J., Dormehl I., Maree M., Van Der Watt Y.Y.- In vivo nuclear techniques in veterinary medicine // J. S. Afr. Vet. Assos., vol. 1980, 51, № 4. P. 209-212.

488. Hafs N.D. Elliott F.J. Effect of thawing temperatures and extender cot-position on the fertility of frozen bull semen // J.Anim.Sci., 1954,- V. 13.- P.968.

489. Hafs H.D., Elliott F.I. The effect of methods of adding egg yolk and monosacharides on the survival of frozen bull spermatozoa // J. Dairy Sci, 1981. -N53.-P. 1693-1696.

490. Halsey. D. Every morning Ed Fletcher locks'em up and chalks'em // Dairy Herd Manag.- 1978,- V. 15,- N 9.- P.20-24.

491. Handlos V. Sterilization by e-beam // Radiation. Phys. Chem., 1981, Vol. 18, № 1-2, P. 175-182.

492. Hahn J., Hahn R. Experiences with non-surgical transfer techniques // L.E.A. Commision of the European "Egg Transfer in Cattle". Luxemburg, 1976. -P. 199-204.

493. Haslor J.F., Baven R.A. Nelson L.D., Seidel G.E. Serum progesterone concentrations in cows receiving embrio transfers // J. Reprod. Fertil. 1980, - N 58.-P. 71-77.

494. Heale V.P., Barbara J. Changes in the ultrastructure of chinchilla spermatozoa in different diluents // J.Reprod and Fertil., 1970,- Vol. 21,- P.191-193.

495. Henle J., Little En.A. Studies of metabolism of bovine epididymal spermatozoa // Amer. J. Physiol., 1942,- Vol. 136,- P. 70-78.

496. Herrick J. Storage of semen at low temperatures // N. Amer. Veteri-narien, 1954,- V.35.- N 4,- P. 273.

497. Hill J.R. et al. Effect of glycerol equilibration time, glycerol level and rate of temperature descent on the freezing of rat spermatozoa // J. Anim.Sci. -1959. -V.18. P.2.

498. Hiroshi M., Nishikawa Y. // J. Zool. Sci. 1972,- 433, N 8. - P. 413423.

499. Hosie S., Fucada H. Искусственное осеменение животных. Изд-во, Фуминага До Кабусики Кайся, 1965 (Япония).

500. Jacguet J. et al. Surla conservation de jonguc duree des spermatozoides de taurean // Bull Acacl. Veter. Fr.- 1979,- V. 12,- N 2.- P.283-287.

501. Jondet R. Methode simplitifiee de congelation du sperme de taureau conditionne en pailettes de matiere plastique // C.R. Acad. Agric. 1964 a. - 27 Mai.-P. 811-820.

502. Jondet R. Quatre annees de congelation rapide du sperme de taureau // VI-ICAR a. A.I. Paris. - 1968. -N 11. - P. 1057-1059.

503. Jondet R. Contribution а Г amelioration de la technologie du sperme be taureas // Universite de Rennes U.E.R. de Sc. Biologiqes (pour obtenir le grande de Docteur es Sc.). Rennes, 1980.

504. Johnson L.A. Gender preselection in domestic animals using flow cy-tometrically sorted sperm // J. Anim. Sci. N 70/2. - P. 8-18.

505. Jondet R. et al. Resistence des spermatozoides de tauredu aux basses temperatures: observations sur la variabilite du comportement des ejaculate. Bull. Acad. Er.- 1981,- V.54, N 1,- P. 125-130.

506. Jones W.M. et al. The effect of glycerol and level rate of freezing for various extenders on the survival of spermatozoa frozen and stored at 79°C // J. Dairy Sci.- 1956,- V. 39,- P. 1574.

507. Kagy B.W. Sire housing outside lots // Proc. 6 Techn. Conference on A.I. & Reprod. NAAB. - Columbia, 1976. - P. 106-107.

508. Kasai M., Hamaguchi Y., Miyake Т., Sakurai Т., Machida Y. High survival of rabbit morulae after vitrification in an ethylene glycol-based solution by a simple method // Biol. Reprod. 1992. - N 46. - P. 1042-1046.

509. Kelly J., Hurst V. Evaluation of frozen bovine semen packaged in glass and plastic ampules for 3 methods of storage and shipping // Amer. J. Vet. Res. -1964.-25, N 108,-P. 1446-1450.

510. Kelsev J. C. Sterilization by ethylene oxide // J. Clin. Path., 1961, Vol. 14, P.59.

511. Knoop C.E., Pounden W.D. Artificial insemination in cattle. Ohio. Agr. Expt. Sta. Bull., 1943, 64 .

512. Kichev J. Protein-glycolipoprotein complexes in diluted semen (a new physical-chemical theory for deep freezing semen) V1II-ICAR a A.I. Krakow, 1976.-4.-P. 815.

513. Kocford-Jonsen H.H. Corvikalcenret son selcktivt filter for abnormo sperma formen. Harsberent Inst. Sterilitetsforuch. Kg 1. Vet oglandi., 1971, Sr. 15.

514. Kochler J.K. Fine structure observations in frozen-etched bovine spermatozoa // J. Ultrastr. Res., 1966, Vol. 16, N 3-4,- P. 359-375.

515. Koskull В., Hemnell J. // VI-е Congr. Intern. Reprod. Anat. Insem. Artif. Paris.- 1968,-V.-ll.-P. 1065-1067.

516. Kuznetsov G.N. Technology of aseptic removal, cryoconservation anduse of breeder sperm acc, to Kharkov method / F.I.Ostashko, G.N.Kuznetsov,th

517. M.P.Pavlenko, I.M.Velichko // 9 Internation congress of animal Reproduction and artificial insemination. 16-20 June, Madrid, 1980.- Vol.5.- P. 352-355.

518. Kuznetsov G.N. Aseptic method of female artificial insemination/ G.N.Kuznetsov, F.I.Ostashko, M.P.Pavlenko // 10th Internation congress of animal Reproduction and artificial insemination.-Illinois, USA.- 1984.-Vol.3.-P.376-378.

519. Kuznetsov G.N. Multifactor theory of spermatozoid injury with deep freesing / G.N.Kuznetsov, F.I.Ostashko, A.D.Bugrov, I.I. Katkov, M.P.Pavlenko.

520. Landau J.V. et al. Temperature-pressure experiments on amoebae proteus plasmagel structure in relation to form and movement // J. Cell, and Сотр. Physiol., 1954, Vol. 44,- P. 211-232.

521. Landau J.V., Thiodean L. The microphlora of amoeba proteus auring pressure-induced changes in the solgel cycle // Exper. Cell Res., 1962, Vol. 27, P. 591-594.

522. Landau J.V., Beabod V. Endogenous adenosine triphosphate levels in human amnion cells during application of high hydrostatic pressure // Exper. Cell Res., 1963, Vol. 28.

523. Landa C.A., Almguist J.O. Effect of freezing large numbers of straws of bovine spermatozoa in an automatic on post-thaw motillity and acrosomal retention // J. Anim. Sci.- 1979,- V. 49, N 5.- P. 1190-1194.

524. Lasli J.F., Lasiiv Y.T. et al. A staining method for the differentiation of live and dead spermatozoa // Anat. Rec., 1942, Vol. 82, p. 167.

525. Ley T. J. The effect of ionizing radiation on bacteria.- Manual on Radiation Sterilization of Medical and Biological Materials. International Atomic Energy Agency, Vienna, Tehnical reports series, 1973, vol.149, p. 37-63.

526. Libbus B.L., Johnson L.A. The creeping vole, Microtus oregoni: karyotype and sex-chromosome differences between two geographical population // Cytogenet. Cenet., 1988, 47. P. 181-184.

527. Lovelock J.E., Polge C. The immobilization of spermatozoa by freezing and thawing and the protection of glycerol // Biochem. J.- 1954,- V. 58, N 4,- P. 618-622.

528. Luyet B.J., Keane J.A. A critical temperature range apparently characterized by sensitivity of bull semen to high freezing velocity // Biodynamica, 1955, N7, p. 281.

529. Mackle N. Ursachen mangel hafter Besamungs Ergebnisse beim Rind // Tierartzl. Praxis, 1981.- V. 1, N 3,- P. 309-315.

530. Marquant В., Le Guienne B, Humblot P., Gullon N., Gerard O., Thibier M. In vitro fertilization as a tool to evaluate fertility inthe bovine // 12 -ICAR,

531. Hague, Netherlands 1992. - 2. - P. 662-664.

532. Martinez P., Martinez M., Lose J. Evalucion de diferentes fluidos corporals de La Vaca, como inductores all reflejo de Flemen en foros Holstein. Olivera Lopez Jorge 1, Vet, Мех, 1993, 24, N 1, p. 27.

533. Massip A., Van Der Zwalmen P., Ectors F. Pregnancies following transfer of cattle embryos preserved by vitrification // Cryoletters. 1986.- N 7. - P. 270-273.

534. Mercil E., Salisbury C.W. Effect of techniques of preparing semen smears for staining on the morphology of bull spermatozoa // J. Amin. Sci., 1946, Vol. 6,N1.

535. Mc Kenzic. A method for the collection of boar semen // J.Amer. Vet. Med. Assoc.-1931,- № 2. P. 224.

536. Miller D.M., Johnson W.J., Cates W.E., Mapletoft R.T. Superovulation studies in heifers to determine fertilization rates of bulls with high level of certainsperm defects // Theriogenology. 1981.- N 15/ - P. 112.

537. Miller W.J., Van Demark N.L. The influence of glycerol level, various temperature aspects and certain other factors on the survival of bull spermatozoa at subzero temperatures // J. Dairy Sci., 1954, V. 37,- P. 45.

538. Mixner S.P. Processing storing and shipping frozen bull semen // Zire. N.V. Agris. Exp. Stat, N 573, 1955, p. 3.

539. Miymoto H., Nichikawa V. Supercooling in the deep freezing bull semen // Japan, J. Zootchn. Sc.-1979, V. 50, N 4,- P. 205-210.

540. Morales J R ., Cancio O.D., Resultados de 20 anos de insemination artificial bovina en Cuba (1962-1982) // ACPA (Asociacion Cubana de Produccion Animal).-1984.-4.-P. 51-57.

541. Mortimer R. et al. Influence of glycerol concentration and freezing rate on post-thaw motility of bovine spermatozoa in continental straws // J. Dairy Sci.-1977,- V. 59, N 12,- P. 2134-2137.

542. Moruzzi J.F. Selecting a mammalian species for the separation of X and Y-chromoosome-bearing spermatozoa // J. Reprod. Fertil. 1979, - N 57. - P. 319.

543. Munoz C.E., Tejon Tejon D. // Catalogo de razas Autoctonas Espanolas 1-especies ovina у caprina, Ministerio de agricultura. Madrid, 1980. - P. 174.

544. Nagase H., Craham E.F. Pelleted semen // V-ICAR a. A.l.-Trento, 1964.-4.-P. 387-319.

545. Nagase H. et al // 5-th Inter. Congr. Anim. Reprod., Fecond. Artif., Trento 1964. - P. 503-506.

546. Nagase H., Niwa T. Studies on deep freezing technique for bull semen // J. Anim. Reprod.- 1963. -N 9. P. 73.

547. Nagase H., Craham E.F., Niwa T. Pelleted semen // V-ICAR a. A.I.

548. Trento, 1964. 4. - P. 404-409.

549. Nagase H., Niwa Т. Deep freezing bull semen in concentrated pellet form I, II, III // V-ICAR a. A.I., Italia, Trento, 1964. 4. - P. 498-503.

550. Nagase H., Niwa Т., Yamashita S., Irie S. Deep freezing bull semen in concentrated form. Fertility // V-ICAR a. A.I.- Trento, 1964. 4. - P. 503-506.

551. Nagase H., Yamashita S., Irie S. Protective effects of sugars against freezing injury to bull spermatozoa // VI-ICAR a. A.I.- Paris, 1968. 11. - P. 1111-1113.

552. Neil A., Masters C. Metabolism of fatty acids by bovine spermatozoa // Biochem. J. 1972. -N 127. - P. 375.

553. Nibart M., Kohen G., Espasito L., Baudo P., Thuard J., Desmettre P., Thibier M. Rapid bovine embryo sexing by DNA probe: field results // Proc. XII-ICAR, Hague. Netherland, 1992. - 2. - P. 727.

554. Nicolai I.N., Larry R. Prewitt High records are made during the dry period // Hoards Dairyman. July 25, 1976. - P. 1241.

555. O'Dell W.T., Almaquist J.O. Freezing bovine semen. I. Techniques for freezing bovine spermatozoa in milk diluent // J. Dairy Sci.- 1957. 40, N 12. - P. 1534-1541.

556. O'Dell W.T. et al. Freezing bovine semen. Effect of freezing rate on bovine spermatozoa frozen and stored at 79°C // J. Dairy Sci.- 1958.- V. 41,- P. 1.

557. Olar T.T. et al. Effect of thawing rate and cold post-thaw temperatures on bovine semen packaged in glass samples // J. Anim. Sci.- 1977.- V. 44, N 1,-P. 95-101.

558. Olds D. 12-month calvinng within every dairyman's reach // Dairy Heard Manag.- 1976,-V. 13. N 66.-P. 30-33.

559. Ostashko F.I. Aparatura pentru congelarea spermei // An. Rumino-Soviet. Agricult.-zootechn. 1962. -N 6. - P. 132-137.

560. Ostashko F.I. Deep semen freezing // V-ICAR a . A.I., Italia, Trento, 1964.-4.-P. 139-143.

561. Ostashko F.I., Lopatko M.I. Le choc de temperature sur les spermatozoi-des du Belier || 6th Congres de Reproduction Animale Atificielle.-Paris, 1968.-Vol. II,-P. 1623-1626.

562. Ostashko F.I., Tshourkov V.A. Manual-cervical technique of artificial insemination of the cow || 6th Congres de Reproduction Animale Artificielle.-Paris, 1968,-Vol. II.-P. 124-127.

563. Ostashko F.I., Kalugin I. V., Glusman M.K., Dashevskaja B.I. Bull spern freezing technique in medium containing polyethylene oxyde || VI Congres de Reproduction Ahimale Artificielle.- Paris, 1968.- Vol. II.-P. 1129-1132.

564. Ostashko F.l. Zagadnienia teorii i praktiki konserwacji nasienia zwierzat w niskich temperaturach // Zeszyty problemowe postepow rolniczych. 1971. - N 124.-P. 405-417.

565. Ostashko F.I., Pavlenko M.P. New method of sperm cryoconservation || VIII International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination. -Krakow, 1976.- Vol. IV. P. 846-849.

566. Ostashko F.I., Kantsedal V.I. The influence of B-glucuronidase on survival and fertilizing ability of frozen ram semen || VIII International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination. Krakow, 1976,- Vol. IV. -P. 1038-1040.

567. Ostashko F.I., Dibirov M.K. E srtuctura у permiabilidad de la membrana citoplasmatica // 9-ICAR a. A.I.- Madrid, 1980. 5. - P. 106-109.

568. Ostashko F.I., Bugrov A.D., Katkov L.I., Kuznetsov G.N., Pavlenko M.P. Multi-factor theory of spermatozoid injury with deep freezing || 10th International Congress on Animal Reproduction and A.I. Illinois, USA, 1984.- V.I.-P.211.

569. Ostashko F.I., Kuznetsov G.N., Pavlenko M.P. Aseptic methods of female artificial insemination || 10th International Congress on Animal Reproduction and A.I. Illinois, USA, 1984,- V.3.-P.376-378.

570. Ostashko F.I., Bezugly N.D., Pesotsky V.V., Gordienko N.A., Volkova E.G. The Kharkov Technology of Cattle Embryo Cryopreservation // Cryobiology. 1988. - 25, N 6. - P. 563-568.

571. Paleologou A. A study of the cervico-vaginal secretions of cows during the different phases of the estrus cycle // J. Inst. Anim. Technicians, 1979,- V. 30, N2,-P. 83-94.

572. Parrish J.S., Parrish J.K., Fust N.L. Effect of swim-up separation and heparin pretreatment of frozen-thawed spermatozoa on in vitro fertilization of bovine oocytes // Biol. Reprod.- 1984,- 30 (Suppl. I).- P. 112.

573. Pellerzi A., Cantoni M. La conservabilita dello sperma bobino congelate a- 196°C //Riv. Zooteen. E vet.- 1975,- N 1.- P. 89-94.

574. Petersen F., Nordlind H. Survival of bull spermatozoa after exposure to 150 atmspheres for 15 days // Experientia, 1958, Vol. 14., p. 233-225; Anim. Proc. Abstr. 1958, Vol. 26, N 4, p. 339.

575. Pharr J.W., Treats P. В. X- ray intensifying screen technology for improving veterinary field radiography // J. Amer. Vet. Med. Assos., 1979, Vol. 75, № 10, P. 1103-1105.

576. Phillips P.H. //J. Biol. Chern.- 1939. 130,- P. 415.

577. Phillips P.H., Lardy H.A. A yolk-buffer pabulum for the preservation of bull semen // J.Dairy Sci.- 1940,- N 23,- P. 399-401.

578. Phillips C. Medicines and pharmaceutical basis materials // IAEA, Techn. Rep. Ser., Vienna, 1973, 145, p. 207-230.

579. Picket B.W., Hull R.C., Lucas J. J., Yilson E.W. Investigation of thawing frozen bovine spermatozoa // Fertil. and Steril., 1965, V. 16, N 5,- P. 642.

580. Pilen J. et al. Jakose nasienia buhaja przechowu wandgo przez lat w niskich temperaturuach // Med. Weter.- 1982,- V. 38, N 8-9.- P. 434-436.

581. Polge C., Smith A., Parkes A.S. Revival of spermatozoa after vitrification and dehydratation at low temperatures // Nature (London).- 1949.- 164.- P. 666.

582. Polge C., Rowson L. Fertilizing capacity of bull spermatozoa after freezing at -79°C // Nature (London). 1952. - 169.- P. 626-627.

583. Polge C. The storage of bull semen at low temperatures // Vet. Rec., 1953, V. 65, p. 557.

584. Polge C. Low temperature storage of mammalian spermatozoa/ Proc. Roy. Soc., 1957, 147, p. 498.

585. Polge C., Jakobsen K. Technicques for freezing bull semen // Veter. Rec.- 1959,- V. H, N 44,- P. 928-932.

586. Pollard J.W., Plante C., King W. A., Hansen P.J., Betteridge K.J., Suarez S.S. Fertilizing capacity of bovine sperm may be maintained by binding to ovi-ductal epithelial cells // Biol. Reprod.- 1991.-N 44.- P. 102-107.

587. Prachoff R., Petkoff A. Untersuchung der Kontraktilfahigkeit des Uterus bei den Stute im Diostrum, Ostrum und Puerperium // Zuchthygiane, Fortpflan-zungsstorungen und Besamung der Haustiere.- 1959,- N 3.

588. Quigley J. Young calf growth depends on dry feed // Hoard's Dairyman. -1994,- April 25.-P.333.

589. Rajamahnen A.H.J. A method of packaging the straw // Proc. Third NAAB Techn. Conf. Artif. Insem, Reprod., 1970, p. 49.

590. Rail W. F., Fahy G.M. Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196°C by vitrification //Nature (London). 1985. - 313. - P. 573-575.

591. Robbins R.K., Saaeke R.Y., Chandler P.T. Influence of freeze rate, thaw rate and glycerol level on acrosomal retention and survival of bovine spermatozoa frozen in French straws // J. Anim. Sci. 1976.- V. 42, N 1,- P. 145-154.

592. Robertis E., Nowiinski W., Saez F. // General Cytology Phil. - Lond., 1960.

593. Rowson L.E.A. The low-temperature preservation of germinal cells. Proc. Ill Int. Congr. Anim. Reprod., Cambridge, Plenary papers, 1956,- P. 75-80.

594. Saacke R., Lineweaver J. Procedures for handing frozen semen // Conf. on artificial insemination of beef cattle 12 (Proceed.), 1978,- P. 46-61.

595. Salisbury G.W., Willet E.L., Ijunsolus J.C. // Rec. Amer. Soc. Anim. Prod., 1939, 32, 210.

596. Schnaider H.S., Castleberry R. S., Grinffin J.L. Commercial aspects of bovine embryo transfer// Theriogenology.- 1980. -N13 (1). P. 73-85.

597. Schwerdtner H. Uber die Beziehungen zoieschen Keiwflora und Be-fruchtungsfahigkeit fur Besamungsbullen // Fortpflanzungsstor., Zuchthyg. und Besam. Haustiere, 1961, 5,5.

598. Seidel G.L., Elsden R. P., Nelson L.D., Bowen R.A. Superovulation of cattle with pregnant mare's serum gonadotrophs and follicule stimulating hormon // EES-seminar "Control of Reproduction in the cow». -Galway, 1978,- P. 159168.

599. Seidel G. E., Larson L.L., Foote R. H. Effect of age and gonadotrophin treatment on superovulation in the calf // J. Anim. Sci. 1971. N 33. - P. 617.

600. Seidel G. E., Larson L.L., Spilman C.H., Hahn S., Foote R. H. Transfer of superovulated calf ova // J.Anim. Sci. 1970. - N 31.- P. 230.

601. Semex Canada. Newsletter. 1985. - 4, N 2. - P. 10.

602. Signoret J.P. Sexual pheromones in the domestic sheep: importance and limits in the regulation of reproductive physiology // J. Steroid Biochem and Mol, Biol., 1991, 39, N 48, p. 639-645.

603. Simanowski K., Polten Sigrid, Huhn U. Ein Beitrag zur Stimulation-swirkung des synthetischen Abferkelrate bei ferminorientiert besamten Zuchtsauen // Tierzucht, 1989, 43, N 12, p. 588.

604. Simmet L. // VII Intern. Kongr. fur tierische Fortpflanzung und Haust-ierbesamung. Munchen, 1972,- P. 267.

605. Simmer L. Ein vollautomatisches Verfahren zur Konfektionierung von Bullensperma in Kunststoffrohrchen nach der Landshuter Methode // VII-ICAR a. A.I.Munchen, 1972,- 11.-P. 1357-1362.

606. Smith A.U., Polge C. Storage of bull spermatozoa at low temperatures // Veterin. Rec.- 1950.-P. 62.

607. Sreenan J.M., Beehan D., Mulvehill F. Egg transfer in the cow: factors affecting pregnancy and twinning rates following unilateral transfers // J.Reprod. Fert. 1975,- N 44,- P.77-85.

608. Stein M. Jung- und Altsauen mit Eberpheromonen stimulieren // Schweinewelt, 1991, N 6, p. 22-23.

609. Stower J. The storage of bull semen at low temperatures. Veterin. Rec.-1953.-V. 65, N35.-P. 650-651.

610. Sullivan J.J. Effects of storage temperature and length of storage time upon the post-thawing motility and metabolic activity of frozen bull semen // J.Dairy Sci. 1963,- N 46.- P. 850-853.

611. Terstra J.J. // Bull. Off. Int Epizoot., 1963, 60, N 1, p. 313.

612. Thibault C. La culture in vitro de Poeuf de vache // Ann. Biol. Anim. Biochem. Biophis. 1966. -N 15,- P. 159-164.

613. Thibier M. Conditions d'aplication du sexage d'embryons en ferme // Seminare UNCEIA. Paris, 1986.

614. Trimberger Y.W. Ovarian functions intervals between estrus and conception rates in dairy cattle. Animal Breeding Abstracts, M. 24, N 3.- 1956.

615. Van-DemarckN.L., Kinney W.C. Freezability of bull sperma affected by interaction of glycerol levels, rates of freezing and subzero temperature // J. Animal. Sci.- 1954.-V. 13,-P. 1034.

616. Vroom D.A. Electron beam sterilization an alternative to sterilization // Med. Derice Daign. Ind., 1980, Vol. 2 (11), № 45-7, P. 61-62.

617. Wachter S., Nakamura D., Wachtel G., Felton W., Kent M., Laswaney V. Sex selection with monoclonal H-Y antibody // Fertility and Sterlity 1988. -50, N2.-P. 355-360.

618. Watson P.// J. Repr. Fert. 1975,- 42, N 1. - P. 105-111.

619. Weida В., Yill S.J. Pressure effects on deoxyribonucleic acid transition. Biochim. etbiophys. acta, 1966, Vol. 12, P. 179-182.

620. Whitmore H. et al. Early postpartum breeding in dairy cattle // J. Am. Anim. Vet. Med. Assn.- 1973,- V. 162, N 4,- P. 290.

621. Whitmore H. et al. Effect of early postpartum breeding in dairy cattle // Am. Anim. Sc.-1974.- V. 38, N 2,- P. 339-346.

622. Whittingham D.J., Leido S.P., Masur P. Survival of mouse embryos frozen to 196 . - 269°C // Science. - 1972. - 178- P.411-414.

623. Wild P., Bertsemnger H.J. Raster und Transmission elektronenmikro-skopische Untersuchungen von diploiden bovinen Spermiens // Zuchthygiene.-1978,-V. 13, N3,-P. 107-112.

624. Willett E.L., Ohms J.I. Influens of seminal plasma and maturity of bovine spermatozoa upon their freezability // J.Dairy Sci. 1958.- N 41,- P. 90-95.

625. Williams B.L. Impact site of inseminates deposition and lever mental factors that influence reproduction of dairy cattle // J. Dairy Sc., 1988, N 71, p. 810.

626. Wood A. K. W. Is gonadal shielding of any practical value in veterinary radiology //Austral. Adv. Vet. Sci., 1979, Townsille, p. 84-85.

627. Wrignt R.W., Bondioli K.R. Aspects of in vitro fertilization and embryo culture in domestic animal // J.Anim. Sci. 1981,- N 53,- P. 707.

Информация о работе

Кузнецов, Григорий Николаевич
доктора сельскохозяйственных наук
Харьков, 2004
ВАК 06.02.01

Диссертация

Разработка и совершенствование способов повышения спермопродуктивности и оплодотворяемости крупного рогатого скота - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы