Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка биологических препаратов для повышения питательности и эффективности использования кормов
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология
Автореферат диссертации по теме "Разработка биологических препаратов для повышения питательности и эффективности использования кормов"
На правах рукописи
Лаптев Георгий Юрьевич
РАЗРАБОТКА БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
КОРМОВ
03.00.23. - Биотехнология 06.02.02. - Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Дубровицы Московской области 2009 г.
003489237
Работа выполнена в лаборатории зоологической микробиологии Государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Россельхозакадемии»
Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук, профессор
академик Россельхозакадемии Лев Константинович Эрнст.
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук Ирина Александровна Архипченко,
доктор биологических наук Тимур Яшэрович Вахитов,
доктор сельскохозяйственных наук Николай Григорьевич Первое.
Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных Российской академии сельскохозяйственных наук»
Защита состоится « » 009 года, в 10 час., на заседании Совета по
защите докторских и кандидатских диссертаций Д.006.013.01 при Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук»
Адрес института: 142132, Московская обл. Подольский район, п. Дубровицы, ВНИИЖ, т/факс (4967)65-11-01.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИ животноводства Россельхозакадемии.
Автореферат разослан « /о »
2009 г.
Учёный секретарь Совета Д 006.013.ffl ^¿/^ В.ПЛ убанова
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ
Актуальность темы
Современное состояние отечественного животноводства определяется состоянием кормовой базы и особенно качеством кормов. Экономические исследования и практический опыт показывают, что именно этот показатель определяет успех производства животноводческой продукции.
Повышение качества кормов, их переваримости, рационального использования являются самой насущной задачей практики современного животноводства. Возможности повышения продуктивности различных видов животных, птицы и аквакультуры на основе повышения усвоения питательных веществ кормов могут быть реализованы за счет использования новых биологически активных препаратов. Разработка таких препаратов заключается в выделении и изучении новых штаммов микроорганизмов, генетико-селекционной работе с ними, а также исследованиях, в ходе которых подбираются наиболее эффективные режимы культивирования данных штаммов, что завершается созданием конкретной препарата.
Наиболее эффективными путями использования микробиологических препаратов в животноводстве является создание препаратов-пробиотиков на основе микроорганизмов, чаще всего выделенных из желудочно-кишечного тракта животных или разработка препаратов для консервирования кормов.
Основой эффективного применения микробиологических препаратов на основе живых микроорганизмов можно считать интродукцию микроорганизмов в естественные экосистемы (силос, рубец жвачных животных, кишечник мокогастричных и жвачных животных). Именно состояние экосистемы определяет эффективность применения того или иного препарата, поскольку интродуцируемый микроорганизм может быть легко потерян в результате конкуренции или естественного отбора.
Исходя из важной биологической роли симбиотических взаимодействий, возникших в ходе эволюции, следует считать неоценимым вклад микроорганизмов желудочно-кишечного тракта в систему пищеварения, с осуществлением ими ферментативной переработки труднодоступных комплексов кормов, наряду с осуществлением защиты организма животного-хозяина от патогенных микроорганизмов. Роль симбиотической микрофлоры велика и как дополнительного источника высокоценных комплексов липопротеидов, витаминов, других биологически активных соединений для организма животного-хозяина (Hungate, 1966, Fuller, 1989).
К настоящему времени установлено, что по эффективности применения пробиотики не уступают антибиотикам кормового и ветеринарного назначения, не оказывая при этом побочного действия на организм животного и микрофлору желудочно-кишечного тракта, являясь экологически чистыми (Панин, Малик, 1999).
Цель и задачи исследований
Целью настоящей работы являлось получение современных препаратов ферментно-пробиотического действия и биоконсервантов кормов, использование которых в цепочке корм —»пищеварительный тракт —»организм может способствовать повышению интенсивности производства животноводческой продукции. Для выполнения поставленной цели было необходимым
\
теоретические основы интродукции бактерий в естественные экосистемы, которые являются частью организма сельскохозяйственного животного-хозяина или кормовыми источниками для животных. В задачи исследований входило:
- обоснование физиологических и биохимических последствий интродукции;
- создание коллекции бактерий и изучение их свойств с целью их дальнейшего использования как основы биопрепаратов для биоконсервантов и ферментативных пробиотиков;
проведение экспериментального поиска полезных штаммов микроорганизмов, имеющих высокую целлюлозолитическую активность, разработка технологии промышленного культивирования микроорганизмов, с целью производства биопрепаратов, получения опытных партий препаратов и проведения их испытаний и практического использования;
научно-производственная апробация препаратов ферментно-пробиотического действия целлобактерина и целлобактерина-Т на жвачных и моногастричных животных, птицах, рыбах; поиск, апробирование и производственное использование биоконсервантов силоса, кормов из подвяленных трав, зерносенажа, плющеного зерна на основе высокоэффективных штаммов гомо- и гетероферментативцых молочнокислых бактерий,
- по результатам комплексных исследований, полученных в опытах на различных видах животных, определить наиболее эффективные и технологичные штаммы и оптимальные нормы ввода препаратов, созданных на их основе;
- определить экономическую эффективность использования полученных препаратов;
- на основании материалов, полученных в экспериментах, разработать и предложить производству рекомендации, наставления по" рациональному и эффективному использованию изученных нами препаратов.
Научная новизна
Научная новизна исследований заключается в разработке теоретических и практических основ использования современных технологичных препаратов ферментно-пробиотического действия и консервантов кормов с определением оптимальных норм их ввода.
Впервые сформулировано положение о том, что у клинически здоровых животных, вследствие конкуренции между целлюлозолитическими микроорганизмами рубца, переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз в рубце.
Впервые разработаны и внедрены в производство ферментативные препараты на основе бактериальных целлюлаз, механизм действия и параметры которых принципиально отличаются от целлюлаз грибного происхождения. Установлена возможность существования синергетических взаимодействий между целлюлазами грибного и бактериального происхождения, что важно в связи со стратегией применения ферментов в животноводстве.
Впервые за счет использования спорообразующих бактерий-продуцентов целлюлаз разработаны приемы введения ферментативной активности в гранулируемые и экспандируемые корма.
Впервые разработан биологический препарат для консервирования кормов (Биотроф-111) не на основе молочнокислых бактерий, а на основе спорообразующих аэробных бацилл.
Впервые при применении целлюлаз разработаны комбикорма для форели без включения в них рыбной муки.
Установлено биологическое влияние указанных выше препаратов на переваримость и использование питательных веществ кормов, эффективность их использования животными, особенности обмена веществ по ряду биохимических показателей крови, и продуктивность.
Автором получены 4 патента на изобретения по разработке препаратов для консервирования зеленых кормов и использованию микробных препаратов в животноводстве.
Практическая ценность
Практическая значимость выполненной работы заключается в том, что на основании проведенных исследований разработаны, теоретически и практически обоснованы и предложены производству новые технологии силосования зеленых кормов с применением новых биологических, экологически чистых препаратов микробного происхождения. Их использование в рационах животных, птицы, аквакультуры (рыбы) способствует улучшению использования питательных веществ, позволяет повысить их продуктивность, снизить затраты кормов на единицу продукции.
Созданы коллекции целлюлозолитических микроорганизмов из рубца крупного рогатого скота, лосей, овцебыков, верблюдов, коллекции гомоферментативных и гетсроферментативных молочнокислых бактерий. Из этих коллекций отобраны наиболее перспективные штаммы, которые были использованы для создания препаратов. Изучение характеристик и биохимических свойств этих штаммов позволило в дальнейшем отработать оптимальные режимы производства препаратов. Составлена научно-техническая документация (лабораторные и технологические регламенты, технические условия и наставления по применению), утвержденная в установленном порядке (Целлобактерин -ТУ 9291-007-50932298-2997, Целлобактерин-Т - ТУ 9384-004-50932298-05, Биотроф -ТУ 9291-002-50932298-04, Биотроф-600 - ТУ 9291 50932298, Биотроф-111 - ТУ 9291 006-50932298-2007).
Реализация результатов исследований
Материалы исследований использованы при разработке научно-технической документации для выпуска указанных препаратов (технологические регламенты, технические условия и наставления по применению), а также методических рекомендаций и инструкций по применению микробиологических штаммов и препаратов в кормлении сельскохозяйственных животных и птицы и рыб, по применению их в силосовании кормов.
Кроме того, полученные результаты были использованы при проектировании производства ООО «Биотроф». По данному проекту в 2008 г. было построено и было введено в эксплуатацию предприятие, которое в настоящее время вышло на проектную мощность.
Апробация. Материалы диссертационной работы были доложены Всероссийских и международных конференциях, проводимых РАН, РАСХН, а также в ГНУ ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии, ГНУ ВНИИЖ, научно-производственных семинарах ООО «Биотроф», производственно-экономических совещаниях сельхозпредприятий России.
Внедрение. Результаты исследований врвдрены в практику силосования кормов и кормления крупного рогатого скота и свиней, птицы и рыб в
специализированных хозяйствах Ленинградской, Московской, Брянской областей, Татарстана и других регионов России. Исследования послужили основанием для включения препарата целлобактерина в комбикорма для сельскохозяйственных животных, птицы и рыбы.
Основные положения, выносимые на защиту.
- положение о том, что у клинически здоровых животных вследствие конкурентных отношений между целлюлозолитическими микроорганизмами рубца, переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз в рубце;
- обоснование эффективности и экономической целесообразности использования в животноводстве; современных высокоэффективных препаратов: ферментативных пробиотиков с целлюлазной активностью - целлобактерина и целлобакгерина-Т;
обоснование эффективности и экономической целесообразности использования в кормопроизводстве; современных высокоэффективных биопрепаратов для консервирования кормов:- Биотроф, Биотроф-111 и Биотроф-600;
- рекомендации для внедрения в сельскохозяйственное производство разработанных, апробированных в экспериментах рецептов и доз препаратов.
Публикации. Результаты исследований опубликованы в периодических центральных журналах, трудах и научных выпусках, сборниках конференций, симпозиумов по применению микробных препаратов для силосования кормов и их использованию в животноводстве и птицеводстве. Всего по теме диссертации опубликовано более 70 публикаций.
Объем и структура диссертации. Основной текст диссертация изложен на 35-1 странице компьютерной верстки и состоит из введения, обзора литературы и его заключения, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, обсуждения, выводов, предложений производству и списка литературы. В диссертации 145 таблиц, 29 рисунков и графиков. Список использованной литературы включает 219 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Экспериментальная работа по диссертационной схеме была одной из разделов тематического плана ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии Россельхозакадемии в период 1982- 2008 гг.
Микробиологические, биохимические, гематологические и другие лабораторные исследования с различными штаммами микроорганизмов в лабораториях ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии проводились одновременно с проведением испытаний и научно-хозяйственными опытами на животных крупного рогатого скота, свиней, овец, птицы и рыбы.
Материалом для проведения микробиологических исследований служили штаммы бактерий Lactobacillus plantariim и L. buchneri, Bacillus pantothenticus и В. subtilis, целлюлозолитические ассоциации бактерий, выделенные из естественных источников (содержимое рубца и кишечника животных, силоса, плющеного зерна, эпифитной микрофлоры растений). Также в работе использованы в качестве тест-объектов штаммы микроорганизмов, главным образом, из коллекции ГНУ ВНИИСХМ, а также из некоторых других коллекций.
В экспериментах по определению токсигенных и патогенных свойств
изучаемых штаммов были использованы лабораторные животные - белые мыши из питомника РАМН «Рапполово» Ленинградской области.
Для определения количества жизнеспособных микроорганизмов в твёрдых и жидких средах, пользовались стандартным методом высева десятикратных разведеиий исследуемого материала на плотные питательные среды (метод Коха) («Практикум по микробиологии», 1976).
Морфологию изолятов бактерий изучали в суточных культурах, полученных на средах, при помощи светового микроскопа, в препарате «раздавленная капля», определяя при этом подвижность микроорганизмов, и их размеры. Кроме этого проводили окрашивание фиксированных нагреванием мазков по Граму.
Рост штаммов изучали на таких питательных средах, как мясопептонный бульон, мясопептонный агар, целлюлозный агар Омелянского №19.
О способности микроорганизмов ферментировать глюкозу и сахара длинного диагностического ряда судили по изменению цвета питательных сред с индикатором, а также по образованию газа.
Полученные данные использовали для проведения родовой идентификации отобранного штамма, при этом пользовались определителем бактерий Берги (под ред. Дж. Хоуггга, 9-е изд., 1997). Вид определяли, руководствуясь частотной матрицей и методикой, предложенными Беркли с соавт. (Berkeley et al., 1984).
Целлюлозолитическую активность штаммов, отобранных из коллекции ГНУ ВНИИСХМ, определяли по методу Хендерсона, Хорвата и Блока в модификации Чюрлиса (Чюрлис, 1958; Тараканов, 1977). Показателем целлюлозолитической активности тест-штаммов служила величина изменения веса целлюлозы, выражаемая в процентах от её исходного значения.
Полученные результаты обрабатывали методами стандартной статистики, в результате чего находили наиболее вероятное значение количества микроорганизмов, содержащихся в 1,0 г исходного субстрата, при уровне достоверности Ро 95. (Лакин, 1980).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Исследования и научно-хозяйственные опыты были проведены в соответствие со схемой.
3.1. Разработка методов контроля за интродуцируемыми штаммами в условиях естественной экосистемы.
Необходимой частью работы было выявление интродуцируемых штаммов в экосистеме желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных и надежный и быстрый метод, позволяющий отличать интродуцируемые штаммы от резидентных бактерий того же вида. Эти вопросы были отработаны на модельном объекте - кишечной палочке - Escherichia coli К12, которая используется в исследованиях по генетике и является обитателем кишечника теплокровных животных. Кроме того, во ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов были созданы штаммы кишечной палочки, продуцирующие незаменимые аминокислоты треонин и лизин.
Для быстрого выделения клеток интродуцируемых штаммов, продуцирующих треонин , VL492 и VL658 были получены спонтанные мутанты, обозначенные нами как соответственно ЗМ1 и ЗМ2, которые отличались от
исходных штаммов устойчивостью к налидиксовой кислоте (уровень устойчивости 20 мкг/мл). Такая мутация не распространена среди грамотрицательньк бактерий и не связана с плазмидами. Низкий уровень мутирования кишечной палочки к устойчивости к налидиксовой кислоте обеспечивает эффективное обнаружение одной устойчивой клетки из J08-109 чувствительных клеток.
Суспензию клеток выращенной культуры данного штамма на селективной среде клеток выпаивали поросятам в возрасте от 1 недели до 40 дней. Через каждые сутки, после однократного выпаивания, исследовали образцы экскрементов на наличие там клеток штамма ЗМ1. Определение числа клеток штамма ЗМ1 в экскрементах проводили по устойчивости клеток данного штамма к налидиксовой кислоте. О наличии плазмиды pYN7 с генами синтеза треонина судили по устойчивости выделенных клеток к ампициллину или пенициллину. Через сутки после скармливания поросятам культуры ЗМ1, устанавливали появление в экскрементах клеток Е. coli, устойчивых к налидиксовой кислоте. Определенная часть клеток несла устойчивость к ампициллину, которая контролируется плазмидой pYN7. Доля клеток штамма ЗМ1 в экскрементах составляла в первый день до 20% от общего количества клеток кишечной палочки. В последующие дни количество клеток ЗМ1 быстро снижалось и после 3-4 суток их не удавалось обнаружить. Таким образом, уже в опытах на свиньях подтверждается тот факт, что штамм ЗМ1, как и другие штаммы Е. coli К12, не способны длительное время размножаться в условиях кишечника.
В работе также был использован штамм Escherichia coli KI2, продуцирующий лизин VL613, полученный во ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов. У этого штамма был получен такой же мутант, и он был обозначен как ЗМ4. Изучение выживаемости клеток в кишечнике поросят различных возрастов показало, что штамм ЗМ; может сравнительно долго существовать в кишечнике поросят в достаточно высоких концентрациях по сравнению с другими штаммами.
В связи с этим было изучено действие этого штамма на организм поросят в условиях рациона, дефицитного по лизину. Для проведения эксперимента на основе этого штамма были наработаны опытные партии препарата. Титр препарата составлял 2,2 млрд. кл/мл. Препарат характеризовался- сухое вещество - 2,31%, сырой протеин в сухом веществе - 58,4%, в том числе лизин -2,5%.
Опыты по кормлению поросят были проведены в учебно-опытном хозяйстве Юленурме Эстонской сельскохозяйственной академии (г.Тарту, Эстония). Опытные группы были укомплектованы из 3-месячных поросят со средней живой массой 25 кг по принципу аналогов. Рационы животных были составлены по сравнению с нормой кормления, с дефицитом 20% сырого протеина и 20-25% лизина. Для покрытия дефицита в лизине поросятам 1 группы давали 5 мл препарата. Рацион поросят 2 группы был аналогичен рациону поросят 1 группы, но дефицит в лизине был покрыт за счет концентрата промышленного лизина. Рацион свиней 3 группы был сбалансирован рыбной
ОБЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ
Создание биологических препаратов для повышения качеств:! н переваримости кормов
Полек эффективных штаммов микроорганизмов для сельскохозяйственных животных и птицы, а также для консервирования кормой
растительного происхождения
Организм животных и птицы
Модельные опиты
Научно-хозяйственные опыты
Микробиология пи шеварктсльиого тракта
Физиологические исследования по переваримости и усвоению питательных веществ вЖКТ
Биохимические показатели крови
Контрольный забой
Продуктивность и качество продукции
Экономическая эффективность
Производственная лнрш'еншм
Консервирование корма*
Лабораторные опыты
Иаучно-хозяйствснныс опыты
Лросикодстиеннан апробичпи
Экономическая эффективность
Рекомендуем (.1С 11111 см 1.1 ненпль »шн» пня »ффектниных шгяммов мнкрооргишпмон и кормлен ии и кнрмопршпнолово
мукой. После периода адаптации на второй месяц опыта среднесуточный прирост свиней 1 группы превышал прирост свиней 2 группы, но был ниже, чем в 3 группе.
Аналогично и на третий месяц опыта среднесуточный прирост свиней в 1 группе был больше, чем во 2 группе (+35 г), но меньше, чем в третьей группе (-25 г). В среднем за опыт (92 кормодня) в 1 группе (добавление ЗМ4) среднесуточный прирост составил 498 г.,
при затратах 4,7 кормовых единиц и 407,6 г переваримого протеина на 1 кг прироста. Во 2 группе (добавление лизина) среднесуточный прирост живой массы составил 480,0 г, на 1 кг прироста было затрачено 4,9 к. ед. и 422,4 г переваримого протеина.
Зоотехническая эффективность этого же штамма в составе полнорационного комбикорма для поросят (с 60 до 90 дневного возраста) была изучена в экспериментальном хозяйстве ВНИИ животноводства РАСХН «Кленово-Чегодаево».
Поисковый научно-хозяйственный опыт был проведен на поросятах-отьемышах, сформированных по принципу аналогов в 2 группы по 6 голов в каждой. Поросята контрольной группы получали комбикорм с премиксом, рекомендуемым для данной возрастной группы поросят. Животным опытной группы скармливали в составе того же комбикорма премикс того же состава, но обогащенный сухой бактериальной культурой ЗМ4 из расчета 20 мг сухой бактериальной культуры нам голову в сутки или 13 г на тонну комбикорма.
В течение опыта поросятам обеих групп скармливали одинаковое количество комбикорма. Однако содержание лизина находилось на самом нижнем уровне его нормы, предусмотренном ОСТ-8-20-77 на постстартерные комбикорма для поросят. Условия кормления и содержания животных были одинаковыми, среднесуточное потребление комбикормов было практически одинаковым (контроль - 1,45, в опытной групп е - 1.48 кг на голову)
Среднесуточный прирост поросят контрольной группы, получавших комбикорм без добавки, составил 550 г; при скармливании того же комбикорма, обогащенного испытуемым препаратом на основе штамма, продуцирующего лизин, среднесуточный прирост у поросят опытной группы возрос до 623 г или увеличился на 13,3% по сравнению с приростами поросят контрольной группы.
Более высокая интенсивность роста поросят опытной группы обусловлена лучшим использованием животными опытной группы комбикорма. Так, у животных контрольной группы затраты комбикорма на I кг прироста живой массы составили 2,64 кг, у поросят опытной группы - 2,38, или на 9,8% меньше, чем в контрольной, при 100% сохранности. Проведенные исследования показали, что обогащение полнорационного комбикорма для поросят послеотьемного периода выращивания препаратом на основе штамма VL613, продуцирующего лизин, повышает его продуктивное действие, при снижении затрат корма на единицу прироста.
Таким образом, результаты эксперимента показывают, что используя штамм ЗМ4, как производное Е. coli VL613, можно компенсировать 20-25% дефицита лизина в рационе. Однако неясно, является ли это следствием того, что этот штамм действительно синтезирует лизин в кишечнике или же это следствие его неспецифического воздействия на микрофлору.
3.2. Интродукция микроорганизмов в естественную экосистему рубца - способ повышения эффективности использования кормов.
3.2.1.Анализ целлюлазной активности содержимого рубца КРС.
Целлюлозолитические микроорганизмы рубца представлены как бактериями, так и грибами-хигридиомицегами. При лабораторном изучении переваривания целлюлозосодержащих субстратов (фильтровальной бумаги и ячменной соломы) было установлено, что нативная рубцовая жидкость разлагала значительное количество навески субстрата. В табл.1 приведены результаты изучения действия популяций микроорганизмов рубцовой жидкости на микробиологическое разложение фильтровальной бумаги и соломы без антибиотиков и с антибиотиками.
Из таблицы следует, что добавление пенициллина и стрептомицина привело к снижению переваривания обоих субстратов. Вместе с тем добавление нистатина не сказалось на разложении фильтровальной бумаги, тогда как количество переваренной соломы в этом случае было значительно ниже, чем в случае без добавления антибиотиков. Совместное добавление всех трех антибиотиков прекращало переваривание обоих субстратов, что свидетельствовало об отсутствии активности целлюлаз каких либо других организмов.
Таблица 1.
Действие Ruminococcus albus 1-33 на разложение субстратов популяциями бактерий и
грибов рубца
Вариант опыта Разложено субстрата в % к массе исходной навески
Фильтрованы! ая бумага Солома
Рубцовая жидкость 26,8±1,15 33,3±2,00
Рубцовая жидкость + R. Albus 1-33 32,6±2,15 28,0±4,0
Рубцовая жидкость + пенициллин и стрептомицин 20,0±0,00 28,0±0,00
Рубцовая жидкость + нистатин 31,0±1,15 22,0±2,00
Рубцовая жидкость + нистатин + R. albus 1-33 38,4±2,42 22,0±2,15
Рубцовая жидкость + пенициллин, стрептомицин и нистатин 0 0
Из таблицы 1 также видно, что вклад грибов в переваривание соломы значительно выше, чем в переваривание фильтровальной бумаги. Суммарное количество субстрата, разложенное бактериями (вариант с добавлением нистатина) и грибами (вариант с добавлением пенициллина) было достоверно выше количества субстрата, переваренного нативной рубцовой жидкостью (вариант без добавления антибиотиков, (Р< 0,99). Таким образом, каждая группа целлюлозолитиков утилизирует больше субстрата в отсутствие другой группы. Следует отметить, что в экологии увеличение потребления субстрата популяцией одного вида в отсутствие популяции другого вида считается одним из признаков конкурентных отношений между ними (Соппе1, 1983, БсЬоепег, 1983).
Конкурентные отношения, безусловно, затрудняют прямое определение доли субстрата перевариваемого бактериями или грибами в естественных условиях. Использование двухфакгорного дисперсионного анализа позволяет вычислить силу действия популяций бактерий или грибов на переваривание субстрата (рис. !)■
Нами изучен вопрос о том, как влияет добавление к рубцовой жидкости дополнительного количества целлюлозолитических бактерий Ruminococcus albus. входящих в состав целлюлозолитической ассоциации 1-33. К исходному содержимому рубца, которое включало 3 млн/мл клеток бактерий-целлюлозолитиков, была добавлена культура с содержанием R. albus 0,45 млрд/мл.
Фильтровальная бумага 0,21t.,»—.....
йУ
□ бактерии В грибы
□ взаимодейст вие
0 118^ Овсяная солома
0,439
Рис. 1 Доля бактерий и грибов рубца в переваривании целлюлозосодержащих субстратов.
Таким образом, численность целлюлозолитических бактерий была увеличена более чем в 100 раз. Из таблицы 1 видно, что добавление бактерий повысило целлюлазную активность (определяемую по разложению фильтровальной бумаги), но не увеличило количество переваренной соломы. Даже при подавлении грибов не происходило увеличения перевариваемого субстрата. Таким образом, увеличение численности целлюлозолитических микроорганизмов не привело к увеличению переваримости
Мы предположили, существование конкурентных отношений между популяциями бактерий и грибов рубца. В классической математической экологии для описания конкурирующих популяций используется система из двух дифференциальных уравнений - уравнения Лотки-Вольтерра:
Кг - N1 - N2(112
_ = г5М,_
А К,
¿N2 К2 - N2 - N,02,
_ = г2Ы2_
А К2
где N1 _ плотность популяций грибов, N2 — плотность популяций бактерий, К, -плотность насыщения популяции грибов при подавлении бактерий, К2 _ плотность насыщения популяций бактерий при подавлении грибов, г, и г2 - максимальные удельные скорости увеличения популяций, а,2 - коэффициент конкуренции, характеристика популяции бактерий. Отражающая меру ее конкурентного давления на популяции грибов, а21 - аналогичная величина для популяций грибов.
Поскольку в работе изучали популяции микроорганизмов, значительно различающиеся друг от друга по своим размерам, жизненным циклам, активности, то был введен дополнительный коэффициент к, который не только переводит
численность популяций в соизмеримые единицы, но и учитывает различные способы определения численности популяций (определение титра бактерий и подсчет спорангиев на субстрате при микроскопировании).
Было рассчитано значение этого коэффициента для бумаги (к = 4,2 х 106) и соломы (к = 6,5 х J О6). Он означает, что к 48 часам 6,5 х 106 бактерий переваривают такое же количество сухого вещества соломы, что и грибы, при численности, равной одному спорангию, обнаруживаемому при микроскопировании. Данный коэффициент позволяет приравнивать численность бактерий к численности грибов. Были экспериментально определены для фильтровальной бумаги К| = 4,0, К2 = 3,1 х 107, N| = 2,1, N2 = 2,0 х 107. Для соломы эти значения составили Ki = 10,0, К2 = 6,5 х 107, Nt = 5,4, N2 = 3,5 х 107. Существует способ определения а)2 и а2!, разработанный Г.Ф.Гаузе (Гаузс, 1967) и основанный на том, что при достижении насыщающих концентраций популяций (то сеть при прекращении их роста) К] - Nj _ N2at2 = 0 и К2 - N2 _ Nia2i = 0. Было рассчитано, что для первого субстрата а12 = 0,377, а21 = 1,138. и для второго субстрата а12 = 0,460, а21 = 0,462.
Таким образом, а,2 показывает степень подавляющего действия бактерий на грибы, а a21 степень подавляющего действия грибов на бактерий. Эти коэффициенты не равны нулю, что свидетельствует о существовании конкурентных отношений между целлюлозолитическими бактериями и грибами в рубце. Конкуренция отмечена в 527 экспериментах с 215 видами, или же в 90% экосистем ей подвержено 76% видов (Connel, 1983, Schoener, 1983). По-видимому, рубец жвачных не является исключением в этом отношении, и они возможны между целлюлозолитическими микроорганизмами рубца. Это позволяет объяснить данные, приведенные в табл. 1. Понятно, что введение дополнительного количества целлюлозолитических бактерий не приводит к увеличению переваривания соломы.
На основании соотношений коэффициентов можно прогнозировать исход конкуренции вытекающей из уравнения Лотки-Вольтерра в зависимости от соотношения величин ai2 и a2i.
На рис. 2. приведен пример, когда К]/ а)2> К2 и Ку а21> Ki. Он приводит к следующему исходу: ни одна популяция не может сдерживать развитие другой -происходит устойчивое сосуществование популяций.
По оси абсцисс (N,) отложена численность популяций грибов, выраженная в количестве спорангиев. По оси ординат (N2) - численность популяций бактерий, выраженная в условных единицах (в пересчете на соответствующее количество спорангиев грибов через коэффициент к). Графики представляют собой геометрическое место точек, соответствующие равновесным состояниям популяций грибов и бактерий. Точка пересечения графиков говорит о возможности устойчивого сосуществования грибов и бактерий в содержимом рубца жвачных.
Понимая сложность применения уравнений Лотки-Вольтерра к естественным экосистемам, следует учитывать, что эти уравнения содержат ряд допущений. Однако в нашем случае данггая модель основана на экспериментальных результатах, полученных в наших исследованиях, и была подтверждена в дальнейших эксперимеш-ах по скармливанию ассоциации 1-33.
Известно, что клетчатка корма в рубце переваривается не полностью. Ранее это увязывали с дефицитом целлюлаз. Исходя из полученных нами данных, а также данных других авторов (Akin, Rigsby, 1995), можно скорее говорить об определенном «избытке» потенциальной целлюлазной активности в рубце.
Сделанный нами вывод позволяет рекомендовать способ повышения переваримости клетчатки рациона у взрослых животных не путем использования ферментных препаратов на основе целлюлаз, а проводя технологическую обработку пеллюлозосодержащих субстратов, повышая доступность целлюлозы для действия целлюлаз. Другим путем повышения переваримости клетчатки может быть создание препаратов, стимулирующих рост и развитие популяций целлюлозолитических микроорганизмов.
Рис. 2. Анализ возможности устойчивого сосуществования популяций грибов и бакгерий в содержимом рубца на основе экспериментальных коэффициентов, рассчитанных согласно модели Лотки-Вольтерра.
2.2. Изучение целлюлазной активность ассоциации 1-33.
Было отобрано 5 наиболее активных ассоциаций 1-33, у которых сравнительно высокая скорость разложения клетчатки сочеталась с высокой целлюлазной активностью. Эти пять ассоциаций были подвергнуты более детальному микробиологическому исследованию и все они, при высеве, характеризовались наличием двух компонентов:
1.Клетки имеют форму кокков от 0,7 до 2,0 мк в диаметре. Единичные или в коротких цепочках. Спор нет. Грампозитивны. На МПА и МПБ не растут. Сбраживают целлюлозу, глюкозу, целлобиозу, лактозу, целлобиозу, фруктозу. Не сбраживают сахарозу, арабинозу, маннит, сорбит, мальтозу, рамнозу, дульцит. Растут на молоке и молоке с NaCl. Лакмусовое молоко через 24 ч восстанавливают, через 48 ч — подкисляют. Обладают целлюлазной активностью. Изолят был определен, как Ruminococvs albus.
2. Клетки имеют форму коротких палочек, которые встречаются поодиночке или собраны в короткие и длинные цепочки-нити, подвижны. Грампозитивны. Рост на МПА и МПБ отсутствует. Спор нет. Сбраживают глюкозу, арабинозу, целлобиозу, сахарозу, маннит, галактозу, мальтозу, раффинозу, фруктозу. Не сбраживают сорбит, дульцит и рамнозу. Каталазу не образуют. Растут на молоке и на молоке с добавлением 4-6% NaCl, желчи (20%, 40%), фенола (0,4%), лакмусовое молоко подкисляют. Они были определены как Lactobacillus acidophilus.
Один из вариантов, обозначенный нами как 3-7, выделенный из рубца лося и превосходящий ассоциацию 1-33 по целлюлазной активности был использован
для наработки опытных партий целлобактерина с целью проведения производственных испытаний.
Предварительное изучение влияния pH на скорость гидролиза растворимой КМ-целлюлозы под действием внеклеточных целлюлаз R. albus 1-33 показало, что оптимум pH реакции соответствует 6,4 - 6,6 и рН-профиль целлюлазной активности имеет достаточно симметричный колоколообразный вид (рис.3). (Условия: 40°С, 0,1М уксусно-ацегатный буфер, pH 4,0-6,4, 0,1М фосфатный буфер, pH 6,4-8,0, концентрация КМЦ — 4 г/л. Активность (А) дана в условных единицах). Следует отметить, что для большинства целлюлаз аэробных грибов pH сдвинут в кислую сторону 1,5-2 единицы. Все дальнейшие эксперименты проводили при pH 6,6. Активность бактериальных целлюлаз нормальным образом увеличивается с ростом температуры, и при 40 °С (близкой к температуре в рубце жвачных равной 39 °С) она в 7,2 раза выше, чем при 20° С. При повышении температуры происходит заметная инактивация целлюлаз, поэтому все последующие опыты, кроме тех в которых температуру варьировали, проводили при 40° С.
о.ю 0,08 -0,06 -0.04 -0,02 -о.оо -
4
Рис. 3. Влияние pH на скорость гидролиза растворимой карбоксиметилцеллюлозы под действием эндоглюканазы R. albus 1-33.
Активность, %
10О »0 «О 40
20 О
О 20 40 60
t. МИН
- Т lrfl.fi -------Н. а!Ьи*1-М
Рис. 4. Необратимая инактивация эндоглюканазы R. albus 1-33 при 60°С: при pH 6,6 активность определялась вискозиметрически по отношению к гидролизу КМЦ. Активность дана в %.
Целлюлазная (эндоглюканазная) активность культуралыюй жидкости ассоциации 1-33 оказалась низкой, значительно ниже активности культуральной жидкости аэробных грибов. Если активность внеклеточных целлюлаз Т. reesei
составляет 10-30 ед/м. культуральной жидкости, то активность кулмуральной жидкости ассоциации 1-33 после центрифугирования в течение 30 мин при 13 тыс. об/мин равнялась 0,098±0,003 ед/мл. После более скоростного центрифугирования (2 ч. при 30 тыс. об/мин ) она практически не изменилась, составляя 0,095+0,003 ед/мл. Активность же самих бактериальных клеток, отмытых буферным раствором при рН 6,4 на холоде составила 30 ед/г в расчете не массу сухих клеток, что соответствует активности промышленных продуцентов.
t, мин
1"5 "С - 2-12 'С. пвремеш.
---- 2-12 "С ------- 4-37'С
Рис.5. Влияние температуры на скорость выхода целлюлаз R. albus I -33 в среду при инкубации в фосфатном буфере (0,1М, рН6,6).
Из полученных результатов следует, что штаммы целлюлозолитического компонента ассоциации не секретирует целлюлаз в культуральную среду.
На рис. 4. показана кривая термоинактивации КМЦ-активности целлюлазного комплекса Я albus 1-33 при 60°С. Для сравнения приведена соответствующая зависимость эндоглюканазы Т. reesei. Из полученных результатов следует, что целлюлазы R. albus не отличаются высокой термостабильностью.
Изучение зависимости выхода целлюлаз из клеток в культуральную среду от температуры приведено на рис. 5. Установлено, что при инкубации клеток R. albus на холоде в течение 12 ч в ацетатном буфере с pH 6,6 в раствор переходит до 57% целлюлаз, тогда как при 37°С в течение 1,% ч - до 97%. Если «экстракция» целлюлаз сопряжена с разрывом ковалентных химических связей (как при автолизе), то энергия активации составляет 12-20 ккал/моль (скорость процесса возрастает в 2-3 раза при повышении температуры на каждые ЮС". Если же выход целлюлаз связан с простой диффузией, то энергия активации составит 1-6 ккал/моль (скорость процесса возрастает в 1,06-1,4 раза при повышении температуры на каждые 10°С). Полученные результаты свидетельствуют о том, что «вымывание» целлюлаз буферным раствором, вероятно, обеспечивается диффузией. Тот факт, что при перемешивании процесс ускоряется, подтверждает предположение, что целлюлазы прикреплены к внешней поверхности клеточной стенки бактерий. Эти результаты соответствуют общепринятому положению, что у бактерий, в том числе и у R. albus целлюлазы объединены в целлюлосому -структуру, расположенную на поверхности клеток.
Свойства целлюлаз, выделенных из других бактериальных изолятов были схожи с описанной выше целлюлазой.
3.3. Использование целлобактерина для молодняка крупного рогатого скота.
Проведены исследования по интродукции целлюлозолитической бактерии в рубец телят. В табл. 2. приведена схема эксперимента по применению целлобактерина телятам эстонской красной породы в опытном хозяйстве «Тарту» Института животноводства и ветеринарии (республика Эстония, Тарту). Результаты других опытов представлены в таблице 3. Результаты опытов (табл.3.) свидетельствуют о том, что действие препарата зависело от возраста телят. Статистически достоверное увеличение среднесуточных привесов по сравнению с контрольными вариантами (без скармливания препарата) были получены только во втором опыте - на телятах в возрасте 2,5 мес.
Таблица 2.
Схема опытов по скармливанию целлобактерина телятам в различном ___возрасте_
№ Возраст Группы Число Кормление в учетном периоде
опыта телят, мес. телят
1 1 1 7 Основной рацион-1 (ОР-1)
2 7 ОР-1 + целлобактерин
2 2,5 3 7 ОР-2
4 7 ОР-2 + целлобактерин
3 4 5 10 ОР-3
6 10 ОР-3 + целлобактерин
Статистически достоверных различий не было обнаружено в опытах 1 и 3 - на телятах в возрасте 1 и 4 мес. Мы полагаем, что именно в период 2-4 месяца происходит формирование микрофлоры рубца, и животное становится способным к эффективному усвоению клетчатки.
Таблица 3.
Затраты кормов и питательных веществ на одного теленка и среднесуточный
Группы Показатели
Живая масса в начале учетного периода, кг Живая масса в конце учетного периода, кг Среднесуточный прирост, г
1 47,9 ±7,9 109,3±11,1 675
2 46,4±5,4 106,9±8,9 664
3 70,4±7,98 117,3±13,83 710
4 69,3±8,30 127,0±14,46 874
5 128,7±11,58 196,5±15,65 969
6 130,1±15,36 200,8±20,25 1010
В табл. 4 приведены результаты изучения переваримости клетчатки теленком в этот период. Как видно из таблицы, у животных, получавших препарат, практически все показатели, связанные с перевариванием клетчатки были выше. Отсутствие эффекта у животных в 1 опыте можно объяснить недостаточным развитием рубца в анатомо-гистологическом и физиологическом отношениях, не связанных с заселением рубца микроорганизмами. Как известно, основные структурные преобразования рубца, сетки и книжки в постнатальном онтогенезе завершаются лишь к концу третьего месяца.
В более старшем возрасте, на одних и тех же животных, были поставлены две серии опытов: первая - на животных в возрасте 3,5 мес., вторая - 4,5 мес. Основной рацион телят в первой серии состоял из комбикорма (1,8 кг) и сена лугового (2,5 кг), во второй серии - сена в том же количестве и кукурузного силоса (5,0 кг). Контрольная группа получала комбикорм в количестве 1,95 кг, опытная - 1,8 кг, для сбалансирования рациона по общей питательности и протеину. Добавление препарата приводило к статистически достоверному увеличению количества ЛЖК в рубце. Однако эффект был более четко выражен у животных младшего возраста (1 серия). Через 2 часа после кормления статистически достоверные различия между опытом и контролем были только в 1 серии опытов.
Полученные на телятах результаты подтверждают ранее сделанные заключения о целесообразности интродукции целлюлозолитических бактерий в период формирования экосистемы рубца (табл. 4).
Таблица 4.
Влияние целлобакгерина на переваримость клетчатки у телят.
Показатели Группы
Контрольная опытная
Целлюлозолитическая 20,0±0,0 30,5±1,7*
активность,%
Потреблено, г 406,4±86,5 515,0+7,8
Переварено в 284,5+10,2 377,0+7,8*
желудке, г
Прошло в 121,9+10,2 128,1±1,61
дуоденальном
химусе, г
Переварено в 5,2+0,8 5,9±1,0
кишечнике, г
Выделено с калом, г 116,6+28,8 132,2±35,0
Переварено, г 289,9+58,5 382,9±27,2*
Коэффициент 71,3 74,3
переваримости
* Р > 0,999
3.4. Использование целпобактерина в свиноводстве
Для испытания целлобактерина в свиноводстве было проведено два производственных опыта: 1-й - на поросятах-сосунах породы ландрас со дня рождения до отьема (42 дней), 2-й - на помесных поросятах (крупная белая х
лаядрас) в возрасте от 2,5 до 4.5 мес. Результаты первого опыта представлены в табл. 5.
Таблица 5.
Влияние целлобакгерина на рост поросят-сосунов_
Группа Средняя живая масса Прирост живой массы, кг Среднесуточн ый прирост живой массы, г
При рождении При отъеме
Контрольная 1,1010,09 7,54±0,70 6,44+1,04 153,3+25,7
Опытная + целлобактерил: 1,07+0,08 8,53+0,81 7,46+0,90 177,6±26,3
Результаты опыта показали, что среднесуточный прирост живой массы у животных, получавших препарат, был достоверно выше (Р>0,95), препарат также способствовал лучшей сохранности поросят. Результаты второго опыта представлены в таблице 6.
Взвешивание проводили в начале и в конце опыта, а также один раз в месяц в середине опыта Животные получали корма по типовым рационам хозяйства. Анализ рационов проведен на основании детализированных норм кормления сельскохозяйственных животных.
Таблица 6.
Схема опыта по испытанию целлобакгерина на поросятах _ в возрасте от 2,5 до 4,5 мес.__
Группа Число животных в группе Кормление в учетном периоде
I 27 Основной рацион (ОР)
2 27 ОР + 3 г препарата на голову в сутки в течение первых трех суток, далее - 15 г на голову 1 раз в 5 суток
3 27 ОР + 5 г препарата на голову в сутки, далее - по 25 г на голову 1 раз в 5 суток
Результаты производственного опыта на 70 поросятах старшего возраста приведены в табл.7.
Таблица 7.
Показатели Группы
1 2 3
Живая масса в начале опыта, кг 17,3±3,43 17,15+3,16 17,52+3,57
Живая .масса в конце Опыта, кг 35,66+5,51 41,45±7,23 42,72±6,13
Прирост живой массы, кг 18,36 24,30 25,20
Среднесуточный прирост, г 306,0±55,0 405,0+65,0 420,0+64,0
Оплата корма, к.е. 5,85 4,42 4,26
Данные опыта показывают, что применение препарата оказало положительное действие на животных. Во всех группах (2 и 3) среднесуточные приросты живой массы были достоверно выше чем, в контроле (Р>0,95), но при этом максимальные приросты были в 3 группе. Следует отметить, что при проведении опыта поросята всех групп были здоровы, хорошо поедали корма.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой биологической эффективности препарата на поросятах и о целесообразности его применения в свиноводстве. Последующие исследования по использованию целлобактерина подтвердили полученные нами результаты.
5.5. Использование целлобактерина в птицеводстве.
Эффективность скармливания целлобактерина молодняку кур яичного направления (кросс Родонит) изучали на птицефабрике "Заводская" Ленинградской области (табл.8). Препарат вводили с кормом курочкам опытной группы с 1 по 60 день в количестве 1 г на голову 1 раз в 5 суток. Контрольная группа птицы не получала пробиотик. Поголовье курочек опытной группы составляло 26700, контрольной — 21755.
После 60-дневного возраста скармливание препарата прекратили до перевода птицы в цех промышленной несушки. В период перевода в рацион был включен целлобактерин в качестве антистрессового препарата Полученные в ходе опыта результаты представлены в табл. 8.
Таблица 8.
Основные результаты опыта на курочках кросса Родонит
Возраст 1-16 недель ] Возраст 17-28 недель
' ' Сохран- Средне ; Затраты
; Группы • ность суточный : корма на 1;! Яйце- Затраты корма, поголовья, прирост жг прироста! носкость, шт. : кг/10 пгг. % массы, г ; массы, кг
Контрольная 96,9 10.8 ; ~ 4,8 к 124,2 1.51
Опытная : 97,9 11,3 4,5 136,7 ; 1,41
Скармливание целлобактерина способствовало повышению среднесуточных привесов и сохранности курочек в раннем возрасте, а в последующем, также увеличению яйценоскости кур на 10 %, при снижении расхода кормов на каждые 10 яиц на 6,6 % в первые шесть месяцев продуктивности.
Опыт, проведенный в экспериментальном хозяйстве ВНИИ генетики и разведения сельскохозяйственных животных на бройлерах кросса ИЗА с суточного до 6-недельного возраста показал эффективность применения целлобактерина в кормлении бройлеров (табл.9). Цыплята контрольной и опытной групп получали основной рацион (ОР), зерновую основу которого составляла пшеница (более 50 %). В основной рацион цыплят опытной группы вводили целлобактерин по 1 г на голову 1 раз в пять суток (по 8 г да голову за весь период выращивания). Поголовье было одинаковым в контрольной и опытной группах - по 1050 цыплят. Анализ данных, представленных в табл. 8 показывает, что введение в корм цыплят-бройлеров целлобактерина способствовало увеличению сохранности поголовья в опытной группе по сравнению с контрольной на 2,5 %, среднесуточного привеса — на 10 % и снижению затрат корма на 6,7 %.
Таблица 9.
Основные результаты опыта на бройлерах
; Сохран- ; ... 1 Средне Затраты корма :
_ • Живая масса в ; суточный ! .
Группы носгь , ' на 1 кг
' 6 недель, г прирост массы,
^ ': прироста, кг
;.„..._„,....,..........
;; Контрольная ; 92,5 3745 37,7 ( 2,38
Опытная
В опыте, проведенном в ГППЗ "Большевик" на растущих курочках плимутрок с суточного до 7-неделыюго возраста, изучали действие целлобактерина на рост и выравненность поголовья. Введение препарата в количестве 1 г на голову 1 раз в пять суток в течение 6 недель привело к увеличению живой массы курочек опытной группы на 7,7 % и лучшей выравненное™ поголовья (91,1 % в опытной и 73,3 % в контрольной группах).
Таким образом, использование целлобактерина при выращивании и откорме цыплят позволяет повысить эффективность производства — увеличить привесы, снизить отход молодняка, снизить затраты корма, повысить однородность поголовья.
Дальнейшие исследования, проведенные совместно с учеными ВНИТИП подтвердили целесообразность использования препарата в птицеводстве.
З.б. Использование целлобактерина в рыбоводстве.
В опытах с рыбой препарат вводили в кормовую смесь в количестве 1 и 2%, из которой методом сухого прессования на лабораторном грануляторе изготавливали гранулированные корма.
Скармливание целлобактерина в количестве 1% в гранулированных кормах, с содержанием 5,6 и 6,9% клетчатки способствоволо увеличению конечной массы сеголеток карпа, соответственно, на 14 и 7%. Корм с содержанием 2% целлобактерина вызвал меньшую стимуляцию роста (5%) по сравнению с кормом того же состава, но без препарата.
О благоприятном действии целлобактерина свидетельствуют и более низкие затраты кормов на единицу прироста. Наибольший эффект роста был получен в период увеличения массы от 10 до 50 г. В этот период на кормах с 1% целлобактерина и содержанием клетчатки 5,9 % прирост молоди оказался выше на 26,5%, а с содержанием клетчатки 6,9% - на 12% по сравнению с контролем (без биопрепарата).
Положительные результаты от включения целлобактерина в корма были получены и при выращивании двухлеток карпа. Во всех вариантах при замене пшеницы на шроты и отруби и повышении при этом содержания клетчатки до 8,3-10,7% включение 1% целлобактерина вызывало повышение интенсивности роста, что отразилось на конечной индивидуальной навеске и на общей ихтиомассе рыб. Показатели крови и содержание жира в теле рыб колебались в пределах
нормы. Включение 2% целлобактерина в рацион либо не оказало улучшения результатов в сравнении с 1% биопрепарата, либо даже ухудшало их.
Аналогичные результаты были получены и на форели. Проведенные опыты показали также возможность производить замену более дорогой пшеницы на менее дефицитные растительные компоненты в составе кормов карпа и радужной форели, а также замену значительной части рыбной муки высокобелковым продуктом микробиологического синтеза гаприном в составе кормов форели.
3.7. Препарат целлобактерин-Т.
После изучения целлюлозолитической активности некоторых штаммов коллекции, а также их способности переносить нагревание, дальнейшую работу решено было продолжить с изолятом №1-85. На жидкой питательной среде №7 получили суточную культуру штамма №1-85. Её световое микроскопирование показало, что клетки подвижны и имеют форму палочек, различной длины. Измерение при помощи окуляр-микрометра позволило установить, что размеры вегетативных клеток лежат в пределах 1,8-2,0x5,0-9,Ор. При окраске по Граму клетки окрашивались положительно. При изучении 5-7 суточных культур отмечено образование спор эллиптической формы. Споры термостойкие, что подтверждается классической пастеризацией (прогреванием при 80°С в течение 10 минут).
По отношению к кислороду культура является факультативным анаэробом. Температурный оптимум роста 37°-38°С..Характерным признаком является рост на целлюлозном агаре Омелянского с добавлением рубновой жидкости. На этой среде в течение 2-х, 3-х суток образуются поверхностные мелкие белые и глубокие чечевицеобразные колонии с зоной просветления (расщепления целлюлозы).
Установлено также, что изолят № 1-85 восстанавливает лакмусовое молоко, гидролизует крахмал, даёт положительную каталазную реакцию.
В соответствии с определителем бактерий Берги, по изученным морфологическим и культурально-биохимическим свойствам, штамм из коллекции группы зоотехнической микробилогии ГНУ ВНИИСХМ был отнесён ко второй группе рода Bacillus, («Определитель бактерий Берги», 1997). Дальнейшую идентификацию изолята проводили с использованием частотной матрицы для определения видовой принадлежности микроорганизмов р. Bacillus (Berkeley et al., 1984). С долей вероятности 97% штамм №1-85 был идентифицирован как Bacillus pantoihenticus.
Как видно из рис.6., В. pantothenlicus 1-85, при термической обработке (гранулирование и экспандирование, выдерживала высокие температуры. Как показали испытания, проведенные на птицах, препарат перенесший термическую обработку, обладал той же биологической эффективностью, как и не подвергавшийся обработке. Опыты, проведенные на птицах и крупном рогатом скоте подтвердили высокую эффективность препарата Целлобактерин-Т.
оптимальны титр бактери
Г
jP
.¿Г
0 Экспандирование ШГранулирование
Температура, °с
Рисунок 6. Влияние термообработки комбикормов на сохранность в них Bacillus pantothenticus
3.8. Препарат«Биотроф» для силосования зеленой массы трав.
Одной из проблем интродукции микроорганизмов в естественные системы является проблема конкурентоспособности интродуцированных бактерий, поскольку в этих условиях они сталкиваются с присутствующими местными штаммами бактерий. Если штамм-интродуцент превосходит резидентные штаммы по целевому признаку, то последние могут превосходить его по скорости роста и своей приспособленностью к условиям обитания. Создание специальных условий для более быстрого развития интродуцированного штамма не всегда возможно. Широкое использование технологии консервирования подвяленных трав целесообразно в связи с уменьшением потерь при силосовании, а также с возможностью создания повышенного осмотического давления в силосуемой массе.
Такое повышенное осмотическое давление создает селективное премущество для осмотолерантных штаммов, интродуцированных массу подвяленных трав. У производственного штамма ЬасюЪасШпз р!ап1атт 52 был получен осмотолераятный спонтанный мутант, обозначенный нами как ЬЬ 60. У этого мутанта был также получен спонтанный мутант, устойчивый к антибиотику рифампицину (с целью быстрого его обнаружения его в силосе). Как следует из рис. 7 в подвяленной массе действительно содержание клеток осмотолерантного штамма ЬЬ 60 п? выше, чем в пеподвяленной массе.
сутки
-— На среде с САМ Неподвяленая масса
----На среде с САМ с пГ
I, сутки
Подвяленая масса
Рисунок 7. Численность молочнокислых бактерий в силосуемой массе
Проверка эффективности силосования провяленных трав с добавкой препарата, полученного на осмотолерантном штамме Ь. р1стШгит 60 (далее препарат Биотроф) была проведена в производственных условиях ЭСХ «Дятьково» Брянской области (Опытное хозяйство ВНИИ кормов им.В.Р.Вильямса РАСХН) сотрудниками этого института Ю.А.Победновым и В.В.Худокормовым В качестве сырья для силосования использовали злаково-клеверную смесь второго укоса (30 дней роста), провяленную в течение 1-2 суток до содержания сухого вещества 35-40%. В одну траншею был заложен обычный силос, в другую - с добавкой препарата «Биотроф». Спустя 4 месяца была проведена органолептическая оценка полученного корма и определено его качество по продуктам брожения. Тот и другой силос имели хорошие органолептические показатели и высокое качество (низкое содержание аммиака и хорошее соотношение продуктов брожения (табл. 10).
Таблица 10
Качество контрольного и опытного силоса по продуктам брожения
Силос Содержание сухого вещества, % РН Содержание в сухом веществе, %
аммиака органических кислот
молочной уксусной масляной
Без добавок 33,1±4,24 4,62±0,12 0,27±0,05 9,75+0,71 2,84+1,43 0,05±0,08
С Биотроф 38,67±3,24 4,41+0,16 0,1б±0,02 11,98±2,32 1,65±0,22 0,00±0,00
Следует отмстить, что опытный силос характеризовался более высокой активной кислотностью, несмотря на несколько более высокое содержание в нем сухого вещества. В результате более быстрого подкисления в нем быстрее снизилась жизнедеятельность нежелательной микрофлоры, о чем свидетельствовало резкое (в 1,7 раза) сокращение образования аммиака и уксусной кислоты, при полном отсутствии масляной кислоты (Табл. 10).
Для выявления кормового достоинства оба полученных корма скармливали в научно-хозяйственных опытах лактирующим коровам, телкам и откормочным бычкам черно-пестрой породы. В учетный период (93-94 дня) рацион всех животных состоял из силоса (контрольного или опытного), который в опытах на телках скармливался с добавкой зерновых концентратов (2,7 кг/животное в сутки), а в опытах на коровах и бычках - с добавкой зерновых и белковых концентратов (соответственно 5,9-6,0 и 2,1 кг/животное в сутки и 1,2 и 1,0 кг/животное сутки). Дополнительно рацион балансировался минеральными добавками.
Результаты опыта показали, что поедаемость коровами сухого вещества опытного рациона возросла на 0,5 кг. Это обусловлено лучшим потреблением силоса, приготовленного с добавкой препарата Биотроф. В таблице 11 приведена молочная продуктивность и изменение живой массы коров в учетный период.
Среднесуточный удой у коров, потреблявших в рационе опытный силос, был на 1,5 кг или 8,1% выше, чем у животных контрольной группы.
Таблица 11
Показатели Группы коров
Контрольная опытная
Среднесуточный удой молока, кг 18,5±1,54 20,0±3,20
Жирность молока, % 3,97±0,46 3,97±0,36
Среднесуточный удой 4% молока 18,4±2,46 19,8±3,32
Среднесуточный прирост живой массы, г 291,0±214,0 133,0±210,4
Переваримость сухого вещества рационов контрольной и опытной группы была практически одинаковой и составила, соответственно, 67,03 и 67,73%. Отмечена высокая переваримость протеина опытного рациона в сравнении с контрольным 69,2 и 61,7%. Хотя концентрация обменной энергии в сухом веществе возросла незначительно (с 10,14 до 10,29 МДж), эффективность
использования ее возросла на с 57,4 МДж до 60,1 МДж. Это сказалось на величине затрат на питательных веществ, используемых на синтез 1 л молока. Как следует из табл. 12, включение в рацион коров силоса, с добавкой препарата Биотроф, привело к
заметному сокращению расхода сухого вещества, обменной энергии, сырого протеина и зерновых концентратов в расчете на 1 л молока.
Таблица 12
Показатели Группы коров
Контрольная опытная
Сухого вещества, кг 0.86 0,82
Обменной энергии, МДж 8,7 8,4
Сырого протеина, г 122,0 116,0
Ячменной дерти,кг 0,32 0,30
Подсолнечного жмыха, кг 0,11 0,11
Значительное увеличение продуктивного действия силоса с добавкой препарата Биотроф подучено и в опытах на молодняке крупного рогатого скота. Из данных табл. 13 видно, что включение в рацион телок такого силоса при выращивании и бычков при откорме, способствовало заметному увеличению их среднесуточного прироста в течение 93 дней опыта.
Экономическая оценка эффективности силосования провяленной злаково-клеверной смеси с добавкой препарата Биотроф показала (табл.14.), что все дополнительные затраты, связанные с внесением указанного препарата полностью окупаются за счет повышения сохранности корма и его энергетической питательности. Исходя из того, что затраты связанные с расходом концентратов и содержанием животных, в той и другой группе были одинаковыми, дополнительная прибыль от использования препарата Биотроф при силосовании целиком определялась стоимостью дополнительно полученного молока и составила 84,6 тыс. руб в расчете на 100 га площади посевов трав. В пересчете на 1
л препарата (15 т силоса) экономическая эффективность составила 2300 р. По этим же данным экономическая эффективность 1 л препарата при заготовке силоса для бычков на откорме составила 3700 р.
Таблица 13
. Изменение живой массы и среднесуточного прироста молодняка крупного рогатого
скота
Показатели Пол и группы животных
Телки бычки
Контрольная опытная контрольная опытная
Живая масса в начале учетного периода, кг 322,3±25,00 308,3±26,10 205,0±15,14 204,0±17,67
Живая масса в конце учетного периода, кг 405,0±24,70 400,0±26,30 279,0±14,55 296,0±18,24
Среднесуточный прирост живой массы, г/животное и % 884,0±95,70 100,0 986,0±120,10 111,1 793,0±145,12 100,0 979,0±123,37 123,4
Таблица 14
Экономическая эффективность силосования злаково-клеверной смеси с добавкой
Показатели Варианты силосования
Без добавок + препарат Биотроф
Заготовлено силосуемой массы, т 552,0 552,0
Заготовлено сухого вещества, т 219,4 219,4
Сохранность сухого вещества, % 90,1 96,2
Выход сухого вещества, т 197,7 211,1
Выход обменной энергии, ГДж 1818,8 2047,7
Прямые затраты на заготовку силоса, руб 55043,0 59850,0
Затраты на заготовку 1 т сухого вещества, руб 278,4 283,5
Затраты на 1 МДж обменной энергии, коп 3,42 3,40
Произведено молока, т 430,3 444,4
Стоимость молока (6 руб/кг) тыс. руб 2581,8 2666,4
Дополнительная прибыль, тыс. руб - 84,6
В отличие от химических консервантов, силосные закваски являются полностью безопасными для персонала, проводящего силосование, поскольку не содержат токсичных и пахнущих компонентов. Они не являются химически агрессивными и не приводят к коррозии аппаратуры, используемой для их внесения в силос. Полученный силос является экологически чистым, он не содержит консервантов и продуктов их распада. Силос, полученный с биологической закваской Биотроф, не уступает по качеству силосу, приготовленному с химическим консервантом, при этом затраты на закваску Биотроф в 10-15 раз ниже, чем на химический консервант.
3.9. Препарат для консервирования плющеного зерна «Биотроф-600»
Консервирование плющеного зерна ранних стадий спелости является исключительно перспективным направлением в кормопроизводстве. Высокие производственные показатели молочных хозяйств Ленинградской области во многом обусловлены применением данной технологии.
Более широкое применение технологии в какой-то степени сдерживается высокой стоимостью химических консервантов. Муравьиная кислота, составляющая основу консерванта небезопасна для человека. В реальной жизни сельскохозяйственного предприятия заготовку зачастую проводят в замкнутых помещениях. В этих условиях пары муравьиной кислоты могут приводить к отравлениям персонала.
Известно, что микробиологические процессы при консервировании силоса принципиально отличаются от таковых, при консервирования зерна. Трава, как правило, содержит достаточно много Сахаров. На траве содержится много спонтанных молочнокислых бактерий. Они быстро размножаются в силосе и синтезируют молочную кислоту. Именно поэтому хозяйства иногда получают качественный силос, не применяя ни заквасок, ни химических консервантов. Зерно, однако, не содержит достаточного количества Сахаров.
Изучение микрофлоры зерна показало, что при отсутствии консервантов в зерне очень быстро развиваются плесневые грибы родов Aspergillus и Penicillum. В связи с этим был проведен скрининг изолятов, способных подавлять рост грибов. Наиболее активный изолят (№600) был определен нами как Lactobacillus buchneri.
Клетки имеют форму коротких палочек, одиночные или в цепочках. Грамположительные, каталазоотрицательные. Колонии на МПА с глюкозой мелкие, точечные, глубинные. Желатину не разжижают, казеин не расщепляют. Обладают слабой амилазной активностью. Штамм обладает антагонистической активностью к грибам рода Pénicillium, Aspergillus niger и A. flavus, дрожжам родов Torula, Pichia и Saccharomyces.
Образуют газ из глюкозы и глюконата. Оптимум роста - 25-37°С. Растут при 15°С, не растут при 45°С. Растут в присутствии 6% NaCl. Сбраживают сахара: арабинозу, фруктозу, глюкозу, мальтозу, рибозу, ксилозу, слабо сбраживают раффинозу. Не сбраживают: целлобиозу, рамнозу, сорбит, маннит, галактозу, мальтозу, сахарозу, лактозу.
Для выявления способности штамма L. buchneri 600 оказывать ингибирующее влияние на развитие плесневых и фитопатогенных грибов была протестирована его антифунгальная активность против F. graminearum, F. oxysporum и F. solani. Живая культура лактобацилл подавляла рост мицелия, и зоны ингибирования составляли в среднем 15 мм, в зависимости от вида гриба. Анализ антифунгальной активности неразделенного на фракции этилацетатного экстракта культуралыюй жидкости бактерий, выращенных на картофельной среде, показал наличие высокой антифунгальной активности - зона ингибирования роста мицелия F. graminearum составляла 50 ± 10 мм.
Хроматографический анализ полученного экстракта культуральной жидкости обнаружил наличие группы интенсивных пиков с временем удержания 3-26 мин (рис.8).
! nAll
mi
4МН
200!
AI
"V,
VA
II ! 1
ПКГ
Рис. 8. HPLC анализ этилацетатного экстракта культуральной жидкости штамма Lactobacillus buchneri 600. 1 - масляная кислота; 2 - неидентифицированный антифунгальный метаболит; 3 — валериановая кислота.
Анализ антифунгальной активности соединений, соответствующих пикам, зарегистрированным в пробе, показал наличие ингибирующего влияния на рост мицелия К graminearum соединение 1 (зона 56 ± 8 мм) и 2 (зона 10 ± 2 мм), активность соединения 3 была незначительна. Эффект метаболита 3 был скорее фунгистатическим (наблюдалась задержка прорастания спор), тогда как фракции I и 2 полностью подавляли развитие гриба. Сравнение времен удержания веществ в стандартной смеси предельных карбоновых кислот жирного ряда и пиков в анализируемом экстракте показало, что соединение 1 соответствует масляной, а соединение 3 - валериановой кислотам (рис. 8). Концентрация масляной кислоты в культуральной жидкости достигала 1360 ± 200 нМ, а концентрация валериановой кислоты - 61.7 ± 9.8 нМ. Метаболит, соответствующий фракции 2 не был идентифицирован.
40гТ 35 30 25 20 15 10
5
О-ЙМ-
ВВлажность%
Я Протеин,0/«
I Клетчатка,%
¡Обменная энергия, МДж/кг
ЬЬбОО
консервант
Рис.9. Результаты производственных испытаний препарата Биотроф-600 в АОЗТ «Родина» Сланцевского района Ленинградской области.
Производственные опыты по испытанию нового препарата «Биотроф-600» были проведены в АОЗТ «Родина» Ленишрадской области, в которых были заложены партии зерна с препаратом и с химическим консервантом. Результаты анализа зерна приведены на рис. 9. Результаты широких производственных испытаний убедили в целесообразности использования препаратов на основе Ь. Ьис/теп для консервирования влажного плющеного зерна Все опытные партии заготовленные с биопрепаратом, были не хуже, заготовленных с химическими консервантами , как по содержанию сырого протеина, так и по обменной энергии.
Производственные испытания препарата проводились не только в Ленинградской области, но и в Московской, Белгородской областях, Татарстане и Белоруссии.
3.10. Препарат Биотроф-111
Для гарантированного повышения качества силоса и его сохранности крайне желательно, чтобы интродуцируемый в силосуемую массу штамма бактерий обладат как бактерицидными, так и фунгицидными свойствами. Исходя из данных
литературы, этими свойствами обладают бактерии рода Bacillus. Из нескольких изолятов был отобран штамм В. subtilis 111, у которого способность подавлять дрожжи, плесневые грибы и бактерии кишечной группы была выше, чем у других изолятов. Размер зон подавления тест-штаммов приведен в табл.15.
Таблица 15
Антагонистическая активность штамма Bacillus subtilis- 111 по отношению к
Тестовые микроорганизмы Зона подавления роста тестовых м/о в присутствии штамма №111 в мм
.1. Torula 5
2. Pichia 10
3. Sacharomyces 7
4. Pénicillium 35
5. Aspergillus 24
6. Fusarium 37
7. Escherichia coli 15
Результаты полученные совместно с сотрудниками ВНИИ кормов Ю.А.Победновым, А.А.Мамаевым и Н.Н.Щукиным, показали, что использование штамма с высокой антагонистической активности как против бактерий, так и против плесневых грибов и дрожжей, в качестве инокудянта для силоса привело к получению качественного корма, при этом потери сухого вещества были невелики (табл.16)
Таблица 16.
Эффективность консервирования несилосующихся трав препаратами Биотроф 111 и АИВ-3 плюс
Варианты консервирования Объем газов, л/кг рн Содержание в сухом веществе ко рма, %
аммиака Органических кислот Сахара
молочной 1 масляной
Козлятник восточный (20,6% СВ, сахаро-буферное отношение 0,6)
Без добавок 55,8 5,92 1,57 11,85 3,79 0,14
С Биоторф 111 23,8 6,06 0,94 8,86 2,65 0,17
С АИВ-3 плюс 1,2 4,20 0,29 8,54 0,00 1,18
Люцерно-злаковая смесь
Без добавок 17,3 4,65 1,10 14,98 0,98 0,20
С Биоторф 111 16,8 4,60 0,58 14,84 0,41 0,15
С АИВ-3 плюс 12,4 4,08 0,56 14,32 0,00 0,95
Производственные испытания показали, что привесы бычков, получавших силос, приготовленный с использованием В. subtilis 111, статистически не отличались от силоса, приготовленного с таким качественным химическим консервантом, как АИВ-3 плюс (табл.17). Более того, препарат Биотроф-111 более надежно устранял маслянокислое брожение.
Таблица 17.
Живая масса и среднесуточный прирост животных в учетный период опыта
Показатели Варианты опыта
Биотроф 111 | АИВ-3 плюс
Живая масса бычков, кг
В начале учетного периода 246,1±3,02 251,1±4,87
В конце учетного периода 308,9±4,13 313,1±5,56
Среднесуточный прирост живой массы, г/животное 1031,0±41,9 1018±46,3
4. Выводы
1. Исследованиями установлено, что в рубце клинически здоровых животных неполное переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз. Итродукция целлюлозолитических микроорганизмов целесообразна в случае дисбаланса микрофлоры при смене рационов или нарушений нормальной физиологии рубца.
2.Изучение свойства целлюлаз Я albus и Bacillus pantothenticus показало, что целлюлазные комплексы этих бактерий расположены на поверхности бактериальных клеток, как это имеет место у целлюлосомоподобных структур.
3. Разработан ферментативный препарат-пробиотик целлобактерин. У телят целлобактерин способствует ускоренному развитию рубцовой микрофлоры и нормализует работу пищеварительной системы. Наибольший эффект достигается при скармливании препарата телятам в возрасте от 2-х до 4-х месяцев. Применение в более раннем возрасте также возможно и целесообразно.
4. Использование целлобактерина в рационах телят повышает их жизнеспособность и аппетит, повышает среднесуточные привесы в сравнении с контролем на 10-20%. Целлобактерин способствует поддержанию нормальной микрофлоры рубца у коров, что обеспечивает увеличение продуктивности и улучшение качественных характеристик молока.
4. Скармливание целлобактеринв рационах бройлеров увеличивет среднесуточные привесы на 3-10% и снижает затраты корма на единицу привеса на 915% у бройлеров, у яичных молодок улучшает выравнениость стада к началу продуктивного периода, что обеспечивает повышение яйценоскости на 8-12% и уменьшение затрат корма на продукцию на 5-7%. Включение целлобактерина удешевляет рацион для несушек за счет более широкого использования подсолнечного шрота (до 20-30%) и отрубей, а также повысить устойчивость птицы к стрессам.
5. Поросятам рекомендуется давать целлобактерин с первых дней жизни. В подсосный период целлобактерин ускоряет рост и повышает сохранность. После отъема целлобактерин компенсирует недостаток собственных пищеварительных ферментов у поросят, облегчая переход к концентратному кормлению.
Увеличение привесов поросят до постановки на откорм благодаря действию препарата может составлять до 30%. В период откорма свиней целлобактерин позволяет существенно снизить стоимость рационов за счет большего включения шротов и отрубей, уменьшить затраты корма на привес и повысить сохранность.
6. Разработан препарат целлобактерин-T, который отличается от целлобактерина и других ферментативных и пробиотических препаратов уникальной
термостабильносгью. Целлобактерин-Т выдерживает не только обычное гранулирование, но также экспандирование и экструдирование при температуре до 105°С.
7. На основе осмотолерантного штамма (L. plantarum 60) разработан препарат для консервирования подвяленных трав. Приготовленный силос с закваской Биотроф лучше поедается животными и оказывает положительное влияние на их продуктивность. При скармливании силоса, приготовленного с закваской Биотроф лаетирующим коровам, удои молока повышаются на 5-7%, процент жира в молоке - на 0,1%, снижается кислотность молока (на 1%).
8. На основе гетероферментативной бактерии Lactobacillus buchneri 600 разработан безопасный препарат для консервирования плющеного зерна Биотроф-600.
9. На основе В. subtilis 111 разработан препарат для консервирования корма с высокой влажностью (Биотроф-111). Экспериментально доказана возможность эффективного использования препарата при силосовании несилосующихся трав (с сахаро-буферным отношением менее 1,0), но при условии их обязательного провяливания до содержания сухого вещества не менее 35%.
Предложения производству
1. Рекомендуем использовать препарат целлобактерина в кормах:
- телятам в возрасте 2-4 мес. в дозах: 2 г/гол. ежедневно, или 10 г/гол один раз в 5
суток;
- для коров дозировка: 10-25 г/гол ежедневно или 50-125 г/гол один раз в 5 суток. Коровам дойного стада следует скармливать целлобактерин, в первую очередь, в стойловый период. Особенно важно применять препарат при переходах от пастбищного к стойловому содержанию и обратно;
- поросятам-сосунам рекомендуем дозу целлобактерина - 1 г/гол/сутки, для других возрастных групп - 1 кг на тонну комбикорма;
- при выращивании цыплят следует в основной рацион вводить целлобактерин в дозе 1 г на голову 1 раз в пять суток;
- вводить целобактерин для рыбы в количестве 1% на тонну комбикорма.
2. При силосовании вносить в зеленую массу трав препарат Биотроф и Биотроф-111 в количестве 1 л на 15т зеленой массы, препарат Биотроф-600 - 0,5 л на 1 т плющеного зерна.
Лаптевым Г.Ю. по теме диссертации опубликовано 65 научных работ, основными из которых являются:
В рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ:
1. Эрнст Л.К., Дебабов В.Г., Лившиц В.А., Лаптев Г.Ю. Жизнеспособность Escherichia coli К-12 в кишечнике свиней//Доклады ВАСХНИЛ,- 1984. - №8. - С. 21-22.
2. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю, Дебабов В.Г., Лившиц В.А. Влияние антибиотиков на выживаемость штамма Е. coli К12, продуцирующего треонин, в кишечнике цыплят// Вестник сельскохозяйственной науки. 1986.- №11.-С. 108-110.
3. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю, Бараболя М.А. Анаэробные грибы в рубце крупного рогатого скота// Вестник сельскохозяйственной науки. - 1990. - № 3. - С. 43-45.
4. Лаптев Г.Ю. Анаэробные грибы-хитридиомицеты в рубце жвачных животных // Микология и фитопатология. - 1990. - Т. 24. - Вып. 4. - С. 372.
5. Лаптев Г.Ю., Эрнст Л.К., Солдатова В.В. Интродукция целлюлозолитической бактерии в рубец крупного рогатого скота для повышения переваримости клетчатки//Сельскохозяйсгвенная биология - 1994. - № 4. - С. 34-39.
6. Эрнст Л.К., Остроумова И.Н., Тимошина Л.А. Мосейчук К.Б., Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В., Бараболя М.А., Прокопьева В.И., Смирнова Л.В. Рост и физиологические показатели карпа и 2. радужной форели под влиянием микробного биопрепарата целлобактерина// Сельскохозяйственная биология. - 1995. - № 6. - С.94-103.
7. Лаптев Г.Ю. Взаимоотношения между популяциями целлюлолитических микроорганизмов при переваривании клетчатки содержимым рубца жвачных// Прикладная биохимия и микробиология. - 1995. - Т. 31. - № 4. - С. 441-446.
8. Лаптев Г., Солдатова В., Сансц В. Сравнение способов консервирования корма// Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - №2. - С.18-19.
9. С.М. Кислюк, Н.И. Новикова, Г.Ю. Лаптев Целлобактерин-многофункциональная кормовая добавка//Свиноводство. - 2004. - №3. - С. 34.
10. Лаптев Г., Новикова Н., Кислюк С., Имангулов Ш., Игнатова Г., Первова А. Ферментативный пробиотик: два в одном//Птицеводство. - 2004. - №7. - С. 1С-1Г
11. Имангулов Ш., Игнатова Г., Кислюк С., Лаптев Г., Новикова Н. Удвоенная норма пивной дробины в рационе кур//Птицеводство. - 2005. - №8. С. 7-8.
12. Лаптев Г., Полуляшная С., Некрасов Р., Кирнос И. Фактор повышения молочной продуктивности коров в период раздоя//3оотехния. - 2008. - №10. - С. 20-21.
13. Лаптев Г., Бедный С. Ферментативный пробиотик целлобактерин в комбикормах для свиней на откорме//Свиноводство. - 2008. - № 5. - С. 17-19.
Патенты
14. Лаптев, Г.Ю., Патент на изобретение № 2168909, 2001. Штамм бактерий Lactobacillus plantarum для силосования кормов// Грудинина Т.Н., Лаптев Г.Ю., Прокопьева Е.И., Солдатова В.В./
15. Лаптев, Г.Ю. Патент на изобретение № 2171037, 2001. Способ кормления цыплят и способ получения препарата для цыплят/ Грудинина Т.Н., Лаптев Г.Ю., Прокопьева Е.И., Солдатова В.В./
16. Лаптев, Г.Ю. Патент на изобретение № 2235772, 2004. Штамм бактерий Bacillus pantothenticus 1-85 для использования в гранулированных кормах/ Грудинина Т.Н., Лаптев Г.Ю., Прокопьева Е.И., Солдатова В.В., Проворов Е.Л./
17. Лаптев, Г.Ю., Патент на изобретение № 2243999, 2005. Штамм бактерий Lactobacillus buchneri для силосования зеленой массы кукурузы и консервирования плющеного зерна/ Грудинина Т.Н., Лаптев ПО., Прокопьева Е.И., Солдатова В.В./
В монографиях и концепциях
18. Азманов Н.Р., Алексеев Ю.В., Алексеева Н.И., Лаптев Г.Ю. и др. Региональная целевая комплексная программа интенсификации кормопроизводства «Корма» Ленинградской области на 2000-2005 гг./ Санкт-Петербург. - СЗНИИМЭСХ. - 2000. -133 с.
19. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю., Использование рекомбинантных и нерекомбипантных микроорганизмов для оптимизации микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных/ Москва. - 2002,- 67 с.
20. Тихонович И.А., Кожемяков А.П., Чеботарь В.К., Круглов Ю.В., Кандыбин Н.В., Лаптев Г.Ю./ Биопрепараты в сельском хозяйстве. - Москва. - 2005. - 154 с.
В сборниках научных трудов и периодической печати
21. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю. Разработка методов управления экосистемой желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных, В сб. Биоценоз в природе и промышленных условиях. АН СССР, Научный центр биологических исследований, Пущино. - 1987.
22. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю. Роль анаэробных грибов рубца в переваривании клетчатки. Бюллетень ВНИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животных. - 1991. - №1, С. 2125.
23. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В., Калдмяэ X., Вали М. Новый комплексный препарат-пробиотик для стимуляции процессов пищеварения. В сб. Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных. - 1991. - Боровск. -ВНИИФБиП. - С. 137-141.
24. Калдмяэ X., Вади М., Солдатова В.В., Лаптев Г.Ю./Новый биопрепарат в рационах телят.// Сб. трудов Эстонского института животноводства и ветеринарии. — Таллинн. -1992.-Т. 63. - С. 57-65.
25. Киселева Н., Лаптев Г., Солдатова В. Использование целлобактерина в птицеводстве// Комбикорма - 2000. - №5. - С. 39.
26. Киселева Н., Лаптев Г., Мудрова 10. Подсолнечниковый шрот в кормлении бройлеров// Животноводство России. - 2001. - №9. - С. 43.
27. Богомолов В.В. Лаптев Г.Ю. Новая закваска для силосования кормов// РацВетИнформ. - 2002. - №5. - С. 27.
28. Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В., Брянцев С.С., Веселое A.B. Методические рекомендации по применению силосной закваски/ Санкт-Петербург. - 2001.
29. Лаптев Г.Ю., Цой Л.А. Новая закваска для силосования кормов/ Сельскохозяйственные вести. - 2001. - №2. - С. 12.
30. Лаптев Г., Солдатова В., Баранихин А., Винокурова Т. Целлобактерин® — пробиотик, повышающий удои //Животноводство России. - 2003. - №10. - С. 18, 19.
31. Лаптев Г., Солдатова В., Варакина С., Новикова Н. Качественный силос - с закваской Биотроф// Животноводство России. - 2002. - №4. - С. 40.
32. Лаптев Г.Ю. Консервирование кормов с использованием биологической закваски. В кн.: Современные проблемы увеличения производства кормов и повышения их питательной ценности в условиях Северо-Западного региона РФ// Санкт-Петербург -Петрозаводск. - 2002. - С. 51-53.
33. Лаптев Г.Ю., Солдатова В.В., Трокова Е.Ю. Биотроф повышает качество зерносенажа //Животноводство России. - 2006. - № 4. - С. 37.
34. Эрнст Л.К., Лаптев Г.Ю. Ферменты улучшают переваривание клетчатки // Животноводство России. - 2006.- № 10. - С.36-37.
35. Лаптев Г.Ю. Лактатный ацидоз? Причина - в рационе// Животноводство России. -2007. - №4.-С. 41-42.
36. Лаптев Г.Ю. Биотроф-111 повышает качество силоса из бобовых трав // Животноводство России. - 2007. - № 9. - С. 41.
37. Лаптев Г.Ю. Проблемы консервирования влажного силоса//Животноводство России.
- 2007. - № 9. - С.65.
38. Лаптев Г.Ю. Качество силоса и ферменты // Животноводство России. - 2008. - №4.
- С. 64-65.
39. Никонов И., Большаков В., Лаптев Г. Консервирование пивной дробины// Животноводство России. - 2008. - Ks 2. - С.67.
40. Лаптев Г.Ю. Проблемы консервирования влажного силосаУ/Животноводство России. -2009.-Xa3.-C. 27.
41. Романов В., Полуляшная С., Лаптев Г. Целлобактерин повышает молочную продуктивность стада // Животноводство России. Спецвыпуск. - 2008. - С.2-3.
42. Лаптев Г.Ю., Кислюк С.М. Подбор кормовых добавок для конкретного рациона в настоящем и будущем / В сб. Достижения в современном птицеводстве. Исследования и инновации. ВНАП. Российское отделение, Сергиев Посад. 2009.
Подписано к печати 3.11.09 г. Формат 60x90"|б. П. л. 2. Тираж ¡50 Заказ 230
Отпечатано в типографии Санкт-Петербургского государственного аграрного университета г. Пушкин, ул. Садовая д. 14
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Лаптев, Георгий Юрьевич
Общая характеристика работы.
1. Обзор литературы.
1 .Теоретические основы использования микроорганизмов в сельскохозяйственном производстве.
1.1. Роль микрофлоры в пищеварении сельскохозяйственных животных и птицы.
1.2 Микрофлора и ее участие в биохимических процессах в организме.
1.3. Классификация кишечных микроорганизмов.
2. Пробиотики в кормления сельскохозяйственных животных и птицы.
2.1. Жвачные животные: крупный рогатый скот, овцы.
2.2. Применение пробиотиков в свиноводстве.
2.3. Использование пробиотиков для сельскохозяйственной птицы.
3. Применение культур бактерий для консервировании кормов.
3.1. Микробиология консервирования растительного сырья.
3.2. Эффективность использования консервир. кормов в рационах.
3.3. Особенность микробиологических процессов при сенажировании.
4. Изыскание новых биологических консервантов.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка биологических препаратов для повышения питательности и эффективности использования кормов"
Актуальность темы. Современное состояние практически всех подотраслей отечественного животноводства, как правило, определяется состоянием кормовой базы и, особенно, качеством кормов. Экономические исследования и практический опыт показывают, что именно этот показатель определяет успешность бизнеса в сельском хозяйстве.
Повышение качества кормов и их переваримости является самой насущной задачей практики современного животноводства. Возможности повышения продуктивности различных видов животных, птицы, рыбы на основе повышения усвоения питательных веществ кормов могут быть реализованы за счет использования новых биологических препаратов. Разработка таких препаратов заключается в выделении и изучении новых штаммов микроорганизмов, генетико-селекционной работе с ними, а также технологических исследованиях, в ходе которых подбираются наиболее эффективные режимы культивирования данных штаммов, что завершается созданием конкретной препаративной формы препарата (Л.К.Эрнст, Н.А.Зиновьева, 2008).
Наиболее эффективными путями использования микробиологических препаратов в животноводстве является создание препаратов-пробиотиков на основе микроорганизмов, чаще всего выделенных из желудочно-кишечного тракта животных (А.Н.Панин, Н.И.Малик,1998). Другим путем является создание препаратов для консервирования кормов.
Основой эффективного применения микробиологических препаратов на основе живых микроорганизмов можно считать теорию интродукции микроорганизмов в естественные экосистемы (силос, рубец жвачных животных, кишечник моногастричных и жвачных животных). Именно состояние экосистемы определяет эффективность применения того или иного препарата, поскольку интродуцируемый микроорганизм может быть легко элиминирован в результате естественного отбора. С другой стороны даже успешная интродукция может не привести к физиологическому эффекту или повышению качества корма, если это не приведет к повышению ферментативной активности в экосистеме или появлению какого-то нового свойства. Возможен и вариант, когда в результате интродукции экосистема приобретает новые свойства, но эти свойства не влияют на продуктивность животного-хозяина.
Крайне важно отметить, что разработанные препараты должны обладать свойствами, позволяющими их использовать в современном интенсивном животноводстве, быть совместимыми с современными технологиями кормления и приготовления кормов.
Исходя из важной биологической роли симбиотических взаимодействий, возникших в ходе эволюции, следует считать неоценимым вклад микроорганизмов желудочно-кишечного тракта в систему пищеварения, с осуществлением ими ферментативной переработки труднодоступных комплексов кормов, наряду с осуществлением защиты организма животного-хозяина от патогенных микроорганизмов. Велика роль симбиотической микрофлоры и как дополнительного источник высокоценных комплексов липопротеидов, витаминов, других физиологически активных соединений для организма животного-хозяина (К.Е.Ниг^а1е, 1966, Я^иПег, 1989).
К настоящему времени установлено, что по эффективности применения пробиотики не уступают антибиотикам (кормового и ветеринарного назначения), не оказывая при этом побочного действия на организм животного и микрофлору желудочно-кишечного тракта, являясь экологически чистыми (Панин А.Н., Малик Н.И.,1999)
Цель и задачи исследований. Целью исследований являлось получение современных препаратов ферментно-пробиотического действия и биоконсервантов кормов, использование которых в цепочке корм —►пищеварительный тракт —»организм может способствовать повышению интенсивности производства животноводческой продукции. В связи с этим были поставлены следующие задачи: обоснование физиологических и биохимических последствий интродукции,
- создание коллекции бактерий и изучение их свойств (как физиолого-биохимических, так и биотехнологических) с целью их дальнейшего использования как основы биопрепаратов для биоконсервантов и ферментативных пробиотиков, проведение экспериментального поиска полезных штаммов микроорганизмов, имеющих высокую целлюлозолитическую активность, для последующего технологического их применения в зоотехнии;
- проведение скрининга микроорганизмов с высокой антагонистической активностью против других микроорганизмов с целью их использования для создания биоконсервантов, разработка технологии промышленного культивирования микроорганизмов, выбранных для производства биопрепаратов, создание научно-технической документации для производства биопрепаратов (технологические регламенты, технические условия и наставления по применению), научно-производственная апробация препаратов ферментно-пробиотического действия Целлобактерина и Целлобактерина-Т на жвачных и моногастричных животных, птицах, рыбах и последующее эффективное применение пробиотиков в зоотехнической практике; поиск, апробирование и производственное использование биоконсервантов силоса, корма из подвяленных трав, зерносенажа, плющеного зерна на основе высокоэффективных штаммов гомо- и гетероферментативных молочнокислых бактерий,
- по результатам комплексных исследований, полученных в опытах на различных видах животных, определить наиболее эффективные и технологичные штаммы и оптимальные нормы ввода препаратов, созданных на их основе;
- определить экономическую эффективность использования полученных препаратов;
- на основании материалов, полученных в экспериментах, разработать и предложить производству рекомендации, наставления по рациональному и эффективному использованию изученных нами препаратов.
Научная новизна. Научная новизна исследований заключается в разработке теоретическиих практических основ использования современных технологичных препаратов ферментно-пробиотического действия и консервантов кормов. Определены оптимальные нормы их ввода.
Впервые сформулировано положение о том, что у клинически здоровых животных вследствие конкурентных отношений между целлюлозолитическими микроорганизмами рубца неполное переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз в рубце.
Впервые разработаны и внедрены в производство ферментативные препараты на основе бактериальных целлюлаз, механизм действия и параметры принципиально отличаются от целлюлаз грибного происхождения. Установлена возможность существования синергетических взаимодействий между целлюлазами грибного и бактериального происхождения, что принципиально важно в связи со стратегией применения ферментов в животноводстве.
Впервые, вследствие применения целлюлаз разработаны рационы для рыбы форели без включения в них рыбной муки.
Впервые за счет использования спорообразующих бактерий-продуцентов целлюлаз разработаны приемы введения ферментативной активности в гранулируемые и экспандируемые корма.
Впервые разработан биологический препарат для консервирования кормов (Биотроф-111) на основе спорообразующих аэробных бацилл.
Установлено биологическое влияние указанных выше препаратов на переваримость и использование питательных веществ кормов, эффективность Pix использования животными, особенности обмена веществ по ряду биохимических показателей крови, и продуктивность.
Автором получены 4 патента на изобретения по получению штаммов бактерий для силосования и консервирования зеленых кормов и использованию микробных препаратов в животноводстве.
Практическая ценность работы заключается в том, что на основании проведенных исследований разработаны, практически обоснованы и предложены производству пути и методы повышения эффективности использования питательных веществ, содержащихся в кормах. Это повышение обусловлено применением экологически чистых препаратов микробиологического происхождения, использование которых в зоотехнии позволяет повысить продуктивность сельскохозяйственных животных, птицы, рыб при снижении затрат кормов на единицу продукции.
В результате проведенной работы созданы коллекции целлюлозолитических микроорганизмов из рубца крупного рогатого скота, лосей, овцебыков, верблюдов. Созданы коллекции гомоферментативных и гетероферментативных молочнокислых бактерий. Из этих коллекций отобраны наиболее перспективные штаммы, которые были использованы для создания препаратов. Изучение физиологических и биохимических свойств этих штаммов позволило в дальнейшем отработать оптимальные режимы производства препаратов. Составлена научно-техническая документация (Лабораторные и технологические регламенты, технические условия и наставления по применению). Эта документация утверждена в установленном порядке.
Реализация результатов исследований. Материалы исследований использованы при разработке научно-технической документации для выпуска указанных препаратов (технологические регламенты, технические условия и наставления по применению), а также методических рекомендаций, разработанных с участием автора.
Кроме того, полученные результаты были использованы при 9 проектировании производства ООО «Биотроф». По данному проекту было построено сооружение и в 2008 г. оно было введено в эксплуатацию. В настоящее время производство вышло на проектную мощность.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены, обсуждены на более чем 20 конференциях в Москве. Санкт-Петербурге, Пущино-на Оке, Алма-Ате и др.
Основные положения, выносимые на защиту:
- положение о том, что у клинически здоровых животных вследствие конкурентных отношений между целлюлозолитическими микроорганизмами рубца, переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз в рубце; современные высокоэффективные препараты: ферментативные пробиотики с целлюлазной активностью — Целлобактерин и Целлобактерин-Т, биопрепараты для консервирования кормов —Биотроф, Биотроф-111 и Биотроф-600.
- - научное обоснование эффективности и экономической целесообразности использования изученных препаратов;
- рекомендации для внедрения в сельскохозяйственное производство разработанных, апробированных в экспериментах рецептов и доз.
Публикации. По материалам исследований опубликовано более 70 научных работ в центральных журналах, сборниках совещаний и конференций.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 351 страницах компьютерной верстки и состоит из введения, обзора литературы и его заключения, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, обсуждения, выводов, предложений производству.
Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Лаптев, Георгий Юрьевич
Выводы
1. Исследованиями установлено, что в рубце клинически здоровых животных неполное переваривание клетчатки не связано с дефицитом целлюлаз. Интродукция целлюлозолитических микроорганизмов целесообразна в случае дисбаланса микрофлоры при смене рационов или нарушений нормальной физиологии рубца.
2.Изучение свойства целлюлаз R. albus и Bacillus pantothenticus показало, что целлюлазные комплексы этих бактерий расположены на поверхности бактериальных клеток, как это имеет место у целлюлосомоподобных структур.
3. Разработан ферментативный препарат-пробиотик целлобактерин. У телят целлобактерин способствует ускоренному развитию рубцовой микрофлоры и нормализует работу пищеварительной системы. Наибольший эффект достигается при скармливании препарата телятам в возрасте от 2-х до 4-х месяцев. Применение в более раннем возрасте также возможно и целесообразно.
4. Использование целлобактерина в рационах телят повышает их жизнеспособность и аппетит, повышает среднесуточные привесы в сравнении с контролем на 10-20%. Целлобактерин способствует поддержанию нормальной микрофлоры рубца у коров, что обеспечивает увеличение продуктивности и улучшение качественных характеристик молока.
5. Скармливание целлобактерина в рационах бройлеров увеличивет среднесуточные привесы на 3-10% и снижает затраты корма на единицу привеса на 9-15% у бройлеров, у яичных молодок улучшает выравненность стада к началу продуктивного периода, что обеспечивает повышение яйценоскости на 8-12% и уменьшение затрат корма на продукцию на 5-7%. Включение целлобактерина удешевляет рацион для несушек за счет более широкого использования подсолнечного шрота (до 20-30%) и отрубей, а также повысить устойчивость птицы к стрессам.
6. Поросятам рекомендуется давать целлобактерин с первых дней жизни. В подсосный период целлобактерин ускоряет рост и повышает сохранность. После отъема целлобактерин компенсирует недостаток собственных пищеварительных ферментов у поросят, облегчая переход к концентратному кормлению.
Увеличение привесов поросят до постановки на откорм благодаря действию препарата может составлять до 30%. В период откорма свиней целлобактерин позволяет существенно снизить стоимость рационов за счет большего включения шротов и отрубей, уменьшить затраты корма на привес и повысить сохранность.
7. Разработан препарат целлобактерин-Т, который отличается от целлобактерина и других ферментативных и пробиотических препаратов уникальной термостабильностыо. Целлобактерин-Т выдерживает не только обычное гранулирование, но также экспандирование и экструдирование при температуре до 105°С.
8. На основе осмотолерантного штамма (Ь. р1аШагит 60) разработан препарат для консервирования подвяленных трав. Приготовленный силос с закваской Биотроф лучше поедается животными и оказывает положительное влияние на их продуктивность. При скармливании силоса, приготовленного с закваской Биотроф лактируюгцим коровам, удои молока повышаются на 57%, процент жира в молоке - на 0,1%, снижается кислотность молока (на 1%).
9. На основе гетероферментативной бактерии Lactobacillus buchieri 600 разработан безопасный препарат для консервирования плющеного зерна Биотроф-600.
10. На основе В. subtil is 111 разработан препарат для консервирования корма с высокой влажностью (Биотроф-111). Экспериментально доказана возможность эффективного использования препарата при силосовании несилосующихся трав (с сахаро-буферным отношением менее 1,0), но при условии их обязательного провяливания до содержания сухого вещества не менее 35%.
Предложения производству
1. Рекомендуем использовать препарат целлобактерина в кормах:
- телятам в возрасте 2-4 мес. в дозах: 2 г/гол. ежедневно, или 10 г/гол один раз в 5 суток;
- для коров дозировка: 10-25 г/гол ежедневно или 50-125 г/гол один раз в 5 суток. Коровам дойного стада следует скармливать целлобактерин, в первую очередь, в стойловый период. Особенно важно применять препарат при переходах от пастбищного к стойловому содержанию и обратно;
- поросятам-сосунам рекомендуем дозу целлобактерина - 1 г/гол/сутки, для других возрастных групп - 1 кг на тонну комбикорма;
- при выращивании цыплят следует в основной рацион вводить целлобактерин в дозе 1 г на голову 1 раз в пять суток;
- вводить целобактерин для рыбы в количестве 1% на тонну комбикорма.
2. При силосовании вносить в зеленую массу трав препарат Биотроф и Биотроф-111 в количестве 1 л на 15 т зеленой массы, препарат Биотроф-600 - 0,5 л на 1 т плющеного зерна.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В научно обоснованной системе кормления сельскохозяйственных животных и кормопризводстве испотльзование различных культур микроорганизмов признано одним из необходимых факторов, улучшающих рацтоны и способствующих повышению продуктивности животноводства.
Вопросы применения пробиотиков и микробных культур, в основном в свиноводстве, птицеводстве и скогтоводстве достаточно хорошо освещены. В то же время мало данных представлено об изыскании культур микроорганизмов для этих целей и выяснения механизма их действия.
Наши исследования по изысканию новых микробных культур, изучению их свойств, разработке научных основ использования современных технологических препаратов ферментно-пробиотического действия и консервантов кормов были одними из первых в нашей стране и проводились независимо от исследований за рубежом.
Свои исследования и эксперименты мы начинали с поисков эффективных препаратов пробиотиков и микробных консервантов, изучения их оптимальных дозировок, безопасных для человека и животных, изыскания наиболее экономичных их форм.
Изложенный экспериментальный материал по поиску новых штаммов микроорганизма для животноводства, выделению интродуцируемых штаммов и их приживляесости, выживаемости и стабильности, отбору штаммов, способных существовать в условиях кишечника, созданию коллекции целлюлозолитических бактерий для разработки препаратов пробиотиков, изучению свойств отобранных штаммов микроорганизмов и их жизнеспособности позволил нам полойти к разработке пробиотиков и консервантов кормов для практики животноводства и кормопроизводства.
С момента рождения желудочно-кишечный тракт животных и птиц заселяется различными микроорганизмами. Постепенно между ними складываются сложные симбиотические взаимодействия. Нормальная кишечная микрофлора оказывает влияние на активность физиологических процессов животного-хозяина, регулирует его взаимоотношения с окружающей средой. В зависимости от типа питания макроорганизма меняется качественный и количественный состав его микрофлоры.
В условиях интенсивного промышленного содержания животные и птицы подвергаются систематическим стрессовым воздействиям. Это отрицательно сказывается на их здоровье и продуктивности. Рациональное кормление является одним из ведущих факторов на пути к получению качественных и недорогих продуктов животноводства. Использование рационов, содержащих большое количество легкодоступных питательных веществ, экономически неоправданно, а также приводит к нежелательным сдвигам в составе микробного населения кишечника, что может явиться причиной высокой заболеваемости поголовья. С другой стороны, кормление животных и птицы кормами, богатыми клетчаткой и другими труднопереваримыми растительными полимерами не позволяет получить от них достаточного количества продукции.
Основным подходом, направленным на решение возникающих противоречий является использование разнообразных добавок, корректирующих процессы пищеварения.
Наши исследования были направлены на создание микробного препарата на основе целлюлозолитических микроорганизмов, предназначенного для коррекции микробиоценоза желудочно-кишечного тракта животных.
В связи с тем, что большинство комбикормов в настоящее время подвергается различным видам термообработки (экспандированию) и выпускается в форме гранул, основным требованием, предъявляемым к целлюлозолитическим бактериям, наряду с высокой ферментативной активностью, была их способность выдерживать нагревание. Такие биологические особенности штамма позволят включать его в состав комбикормов при их изготовлении и тем самым оптимизировать процесс дозировки препарата и снизить затраты труда на производстве.
В кормлении животных и птицы применяется препарат пробиотик целлобактерин, созданный сотрудниками ГНУ ВНИИСХМ, на основе ассоциации целлюлозолитических бактерий, выделенных из рубца жвачных животных. На первом этапе работы в лабораторных и производственных экспериментах была изучена способность препарата переносить нагревание. Полученные результаты показали, что его использование оправдано в тех случаях, когда температура кормовой смеси не превышает 75°С. При дальнейшем нагревании была отмечена массовая гибель микроорганизмов. В производственных условиях корма чаще всего экспандируются при 90° и а следовательно, включение в их состав целлобактерина не представляется нам целесообразным.
Полученные данные явились предпосылкой для поиска целлюлозолитических бактерий, обладающих высокой ферментативной активностью и способных выдерживать значительное повышение температуры. Нами был проведён анализ имеющихся в лаборатории сведений об активности изолятов целлюлозолитических бактерий из коллекции ГНУ ВНИИСХМ. На его основе было отобрано 6 наиболее активных штаммов и проведена сравнительная характеристика их способности лизировать натуральную целлюлозу, а также переносить нагревание. По совокупности этих свойств лучшим был признан штамм под № 1-85, выделенный из рубца крупного рогатого скота.
Следующий этап работы был посвящен изучению культурально-морфологических свойств бактерий штамма № 1-85. По их совокупности, при помощи определителя бактерий Берги («Определитель бактерий Берги», 1997) и частотной матрицы, предложенной Беркли с соавт. (Berkeley et al., 1984), исследуемый штамм с вероятностью 97% был идентифицирован как Bacillus pantothenticus № 1-85.
Штамм был отобран, по ряду признаков перспективности для дальнейшей работы. Однако, прежде чем изучать технологические аспекты его культивирования, необходимо было убедиться в отсутствии у него патогенности и способности к образованию токсинов. С этой целью был проведён ряд экспериментов на табельных лабораторных животных - белых мышах. Суть их заключалась в подкожном и внутрибрюшинном заражении мышей разными количествами микробных тел штамма №1-85, а также в парентеральном введении им бесклеточного фильтрата 2-х недельной бульонной культуры Bacillus pantothenticus №1-85. В результате опытов не было обнаружено патогенности штамма Bacillus pantothenticus №1-85, и его способности продуцировать токсины.
Для того чтобы включать заданное количество бактерий в рационы животных и птицы, необходимо было отработать технологию культивирования штамма на дешёвой питательной среде, а затем перевести микробные клетки в состояние, обеспечивающее сохранение их жизнеспособности в течение определённого времени. Нами были изучены параметры роста Bacillus pantothenticus № 1-85 на лабораторной и производственных питательных средах и составлены кривые роста штамма. Наиболее приемлемой для культивирования бактерий в промышленных условиях оказалась минерально-шротовая производственная среда. Такие моменты, как непродолжительная лаг-фаза, последующий затем интенсивный рост, обеспечивающий высокий титр бактерий в начале стационарной фазы, делают её наиболее привлекательной для использования. Показано, что временем культивирования штамма Bacillus pantothenticus № 1-85 на этой среде, необходимым для начала спорообразования, является 18 часов, а уже к 24 часам количество термостойких спор составляет 4,63 lgKOE/мл. Дальнейшее продолжение инкубирования представляется нам нецелесообразным, так как заметного увеличения количества термостабильных спор при этом не происходит.
При изучении особенностей высушивания 24-часовой культуры Bacillus pantothenticus № 1-85, на трёх субстратах растительного происхождения, наиболее подходящими были признаны подсолнечниковый шрот и пшеничные отруби. Независимо от метода сушки (конвекционная или сушка в кипящем слое) удавалось добиться высокого содержания жизнеспособных спор в конечном продукте - около 8 IgKOE/r, что сопоставимо с титром культуральной жидкости. В то же время её десятиминутное прогревание показало, что к 24 часам термостойкие споры составляют лишь 4,63 lgKOE/мл от общего количества клеток. Следовательно, вторую половину клеточного урожая составляют незрелые и неустойчивые к нагреванию споры и вегетативные клетки на разных стадиях дифференцировки. Однако процессы сушки не оказывали на них губительного воздействия.
Сведения о параметрах культивирования и высушивания штамма Bacillus pantothenticus № 1-85 легли в основу разработки технического регламента на производство нового препарата.
Изначально при скрининге штаммов целлюлозолитических бактерий учитывали их способность переносить нагревание. Такое свойство некоторых микроорганизмов приобретает значение при необходимости их использования в условиях связанных со значительным повышением температуры окружающей среды. В нашем случае необходимо было изучить выживаемость Bacillus pantothenticus № 1-85 при их включении в состав кормовых смесей, подвергаемых различным видам термообработки. Ряд опытов, проведённых на Белгородском экспериментальном заводе комбикормов показал, что при экспандировании и гранулировании кормов, проводимом в температурном диапазоне от 70° до 105°С, количество Bacillus pantothenticus № 1-85 не опускается ниже 4 IgKOE/r. Такие потери являются вполне приемлемыми с точки зрения обеспечения оптимального содержания микроорганизмов в рационе птицы, и позволяют использовать штамм в производстве гранулированных кормовых смесей.
За месячный период хранения комбикорма, регламентируемый ГОСТ Р 51850, численность бактерий штамма №1-85 снижается относительно исходной величины в пределах среднестатистической ошибки, следовательно хранение кормов не оказывает отрицательного воздействия на сохранность в них бактерий штамма № 1-85.
Результаты настоящей работы легли в основу разработки технологии производства и применения ферментативного пробиотика целлобактерин-Т, повышающего продуктивность бройлеров и пригодного для включения в состав гранулированных кормовых смесей. Новый препарат прошёл этап регистрации в Департаменте Ветеринарии при Министерстве сельского хозяйства Российской Федерации и находится в стадии широких производственных испытаний.
Научно-производственные эксперименты, выполненные на цыплятах-бройлерах, получавших низкопитательный рацион с повышенным содержанием растительной клетчатки, позволили выявить положительное влияние изучаемого штамма на показатели продуктивности птицы. Оказалось, что наиболее эффективно усваивают корма цыплята, в рационе которых содержатся бактерии штамма Bacillus pantothenticus № 1-85 в количестве 4,24 lgKOE/r. Статистически достоверное увеличение эффективности использования кормов в таких опытных группах по сравнению с контрольными колеблется от 7 до 22%. Отмечено также, что такие группы птиц отличаются набольшей сохранностью поголовья (100%).
В эксперименте на бройлерах провели сравнительную оценку влияния Bacillus pantothenticus № 1-85, ферментного и микробиологического препаратов на показатели переваримости и использования питательных веществ рациона. Птицы, получавшие в качестве добавки бактерии штамма № 1-85 лучше всего переваривали протеин и сухое вещество, а кроме того, имели самую высокую живую массу в конце опыта, что говорит об эффективном использовании валовой энергии. Интересно, что высокие показатели переваримости протеина, зафиксированы у них на фоне среднего значения переваримости клетчатки, по сравнению с другими группами. Возможно, наряду с целлюлазами Bacillus pantothenticus № 1-85 продуцирует ряд ферментов вторичного метаболизма, способствующих повышению доступности питательных веществ рациона для животных с однокамерным желудком.
Использование пробиотика Целлбактерина в рациона кур-несушек проказало увеличения яйценосткости и сохранности кур молодок.
В опыте на бычках было изучено действие пробиотических препаратов Целлобактерина-Т и Целлобактерина-8 на процессы желудочно-кишечного пищеварения, переваримость, использование питательных веществ рационов, биохимический статус крови.
В основу физиологических исследований положена методика комплексного изучения процессов питания, разработанная в лаборатории физиологии пищеварения сельскохозяйственных животных ВИЖа. Опыт включал 20 дней предварительного периода, 7 дней учётного.
Проводимый в течение опыта учет заданных кормов и их остатков показал, что при введении в рацион целлобактерина-8 и целлобактерина-Т набшодалос повышение потребления сухого вещества на 2,1 и 15, 5%, соответственно, что связано с более высокой поедаемостью силоса опытными животными.
Действие препаратов целлобактерина-8 и целлобактерина-Т проявилось в более интенсивной деятельности микрофлоры рубца, использующей аммиак в синтетических процессах. Образование летучих жирных кислот микрофлорой рубца повышается, достигая своего максимума ко второму-третьему часу после начала кормления, концентрация ЛЖК в рубце опытных животных была более высокой, чем в контроле. Это свидетельствует о более интенсивном протекании гидролиза углеводов у опытных животных. Причем, более интенсивно эти процессы происходили при скармливании бычкам Целлобактерина - Т.
С вводом в рационы откармливаемых бычков целлобактерина-8 и -Т в рубце животных создавалась более благоприятная среда для роста микроорганизмов. Использование Целлобактерина-8 и Целлобактерина-Т сопровождалось увеличением содержания инфузорий в рубце опытных животных. Изучение эвакуации химуса в дуоденальном отделе кишечника показало, что количество химуса у животных, которым скармливали целлобактерин-Э было на 17,5 л или 34,6%, а которым скармливали целлобактерин-Т на 21,5 л или 50 % больше, чем в контроле.
Данные по количеству переваренных и переваримости питательных веществ рационов свидетельствуют о том, что у бычков, получавших в составе комбикорма препараты отмечается общая тенденция к повышению переваримости всех питательных веществ, кроме БЭВ. Следует обратить особое внимание на повышение переваримости сырой клетчатки при скармливании бычкам целлобактерина - Т. Вероятно, это является следствием увеличением концентрации биомассы бактерий в рубце и создания наиболее благоприятных условий для их жизнедеятельности при скармливании животным целлобактерина-Т. Данный факт свидетельствует о направленном действии препарата в переваривании клетчатой.
Данные опыта показывают, что переваривание массы, поступившей в кишечник, было выше у животных опытных групп, нежели в контроле. Баланс и использование азота подопытными животными, которым скармливали целлобактерин-Т, был более высоким, чем в контроле, у них же и наблюдаются более низкие показатели содержания азота в кале. При скармливании животным целлобактерина-Т, наблюдается повышение потребления сухого вещества корма, что способствовало усилению моторной деятельности пищеварительных органов и более быстрому прохождению корма по пищеварительному тракту, идет также увеличение доли переваривания питательных веществ в кишечнике и соответственно возрастает доля энергии в общем ее объеме за счет питательных веществ, переваренных в кишечнике.
Таким образом, введение в рацион откармливаемых бычков целлобактерина-Э и целлобактерина-Т способствует оптимизации процессов рубцового пищеварения, повышению количества дуоденального химуса, переваримости питательных веществ рациона и снижению количества переваренных питательных веществ в сложном желудке.
Откорм бычков с использованием целлобактерина-Т обеспечивает получение полноценной говядины, при достоверно большей массе парной туши (на 8,4 %), содержания в мясе сухого вещества, в том числе протеина и жира, а следовательно и большей его калорийности на 3,5%.
Скармливание коровам препаратов Целлобактерина-Т и Целлобактерина-Б в зимне-стойловый и летний периоды способствовало увеличению валового удоя молока 4%-ной жирности у животных на 6,6% -10,0% (Р<0,01) по сравнению с контрольной группой животных.
Использование этих препаратов не повлияло на биохимические показатели крови подопытных животных, которые находились в пределах физиологических норм, а имевшиеся тенденции изменения направленности межуточного обмена соответствовали повышению уровня продуктивности коров.
Результаты научно-хозяйственных опытов подтвердили экономическую целесообразность использования ферментативно-пробиотических препаратов. В частности, при производственной апробации, валовой удой молока 4%-ной жирности у животных опытной группы, получавшей препарат Целлобактерин-Т, за период опыта была получена дополнительная чистая прибыль в опытной группе животных.
Включение в рацион растущего молодняка овец пробиотика Целлобактерина-Т способствовало увеличению прироста живой массы по сравнению с контролем за счет повышения переваримости и использования питательных веществ рациона. Отмечена тенденция к увеличению переваримости сухого и органического вещества, сырого протеина, сырого жира и БЭВ. Достоверно (р<0,05) возросла переваримость сырой клетчатки — на 3,6% по сравнению с контрольной группой. Положительный баланс, лучшее использование азота и серы, кальция и фосфора установлены у баранчиков опытных групп, потреблявших препарат. Баранчики опытных групп во 2-м опыте лучше использовали.
В свиноводстве один из первых опытов был проведен на поросятах-отъемышах с целью изучения эффективности препарата Целлобактерина. Животные контрольной и опытных групп получали один и тот же рацион, но опытные поросята получали в комбикорме дополнительно препарат Целлобактерин в разном режиме: 1-я группа - 3 г препарата на голову в сутки в течение первых трех дней, далее - 15 г на голову 1 раз в 5 дней, 2-я группа -5 г препарата на голову в сутки, далее - по 25 г на голову 1 раз в 5 суток.
Результаты опыта показали, что применение препарата оказало положительное действие на животных. Во всех опытных группах среднесуточные приросты живой массы были достоверно значительно выше чем, в контроле (контроль-306 г, вопытных группах - 405 и 420 г (Р>0,95), при меньших затратах корма на единицу прироста.
Последующие производственные испытания препарата Целлобактерина на поросятах-отьемышах в возрасте 2,5-4,5 месяцев в хозяйствах Республики Татарстан показали, что добавление в рацион поросят опытных групп Целлобактерина, способствовало повышению среднесуточных приростов живой массы поросят, в среднем, на 23% и снижению затрат кормов на единицу прироста на 24% в сравнении с поросятами контрольных групп. Более высокий эффект от применения Целлобактерина наблюдался особенно во второй месяц использования препарата, что обусловлено, вероятно, развитием популяций микроорганизмов, характерных видовому составу препарата, оказывающих положительное влияние на пищеварительные процессы.
Эффективность применения Целлобактерина растущим поросятам выразилась и в дополнительных прибылях.
В последующем были прведены ряд опытов по откорму свиней, результаты которых доказали, что при введении в рацион свиней на откорме препарата Целлобактерина, скорость роста у животных увеличивалась на 10,1%, а затраты корма на 1 кг прироста снижались на 14,5%.
Таким образом, производственные испытания препаратов-пробиотиков показали, что их использование в рационах животных и птицы способствует увеличению среднесуточных приростов молодняка крупного рогатого скота, свиней, овец и птицы, яйценоскости кур-несушек, удоев у коров, при снижении затрат корма на единицу продукции, повышении качества конечной продукции, и повышении сохранности молодняка животных и птицы.
На основе штаммов Lactobacillus plantarum разработан консерант кормов под названием Биотроф, штамма Lactobacillus buchneri - Биотроф-600, Bacillus subtilis - Биотроф 111. Указанные препараты весьма эффективны при силосовании зеленых кормов, подавляя жинедеятельность нежелательных микроорганизмов и маслянокислое брожение. Например, Bacillus subtilis обладает высокой анагонистической активностью, как против бактерий, так и против плесневелых грибов и дрожжей.
Производственные испытания показали, скармливание силоса, консервированного указанными консервантами коровам, молодняку крупного рогатого скота способствовало повышению молочной продуктивности коров, среднесуточных приростов при выращивании и откорме молодняка крупного рогатого скота, снижению затрат корма на единицу продукции. Сравнительные опыты также показали, что продуктивность животных, получавших силос, приготовленный с использование штаммов микроорганизмов, не отличался от силоса, приготовленного с химическими консервантами, например, таким, как АИВ-3 плюс. Более того, препарат Биотроф 111 более эффективно устранял маслянокислое брожение.
В условиях промышленного производства животноводческих продуктов, при высокой концентрации поголовья животных и птицы на крупных комплексах и фермах применение пробиотиков не только как стимуляторов роста молодняка и продуктивностиживотных и птицы, но и как профилактических средств против заболеваний и нарушения пищеварения животных, приобретает важное значение.
Использование биологических препаратов на основе микроорганизмов для консервирования кормов также является необходимым мероприятием для повышения качества кормов и, следовательно, продуктивности животных. В этой связи проблема использования пробиотиков и консервантов становится одним из экономических факторов, способствующих увеличению в стране продуктов животноводства.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Лаптев, Георгий Юрьевич, Санкт-Петербург
1. Алиев, A.A. О развитии представлений и основных функциях пищеварительных органов у жвачных / A.A. Алиев // Проблемы биологии продуктивных животных,- 2008.- №2.- С.73-84.
2. Алиев A.A. Современные концепции пищеварения. Энтеральный гомеостаз и плазмоформирующая функция пищеварительной системы. Роль желудочно-кишечного тракта в межуточном обмене веществ. Сб. научных трудов ВНИИФБиП, т. XXX (отв. ред. A.A. Алиев), 1985.
3. Алиев A.A. Обмен веществ у жвачных животных. М.: «Инженер», 1997, 480 с.
4. Антипов, В.А. Биологические препараты симбионтных микроорганизмов и их применение в ветеринарии// Сельское хозяйство за рубежом. 1981. - №2. - С.43-47.
5. Антипов, В.А. Использование пробиотиков в животноводстве// Ветеринария. 1991. - №4. - С.55-56.
6. Антипов, В.А. Перспективы использования пробиотиков / В.А. Антипов, Т.И. Ермакова //Фармакология и токсикология новых лек. средств и кормовых добавок в ветеринарии.- Л., 1989.- С.173-175.
7. Антипов, В.А. Эффективность и перспективы применения пробиотиков / В.А. Антипов, В.М. Субботин //Ветеринария.- 1980,- №12.3201. С.55-57.
8. Бабин, В.Н. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры/ В.Н. Бабин, И.В. Домарадский, A.B. Дубинин и др.// Российский химический журнал. М., 1994. - №6. - С.66-78.
9. Бадаева Д.М. Целловиридин г-20 в кормлении цыплят-бройлеров с повышенным содержанием ячменя. Сб Новое в приготовлении и использовании комбикормов и балансирующих добавок . Материалы научно-практической конференции. Дубровицы, 2001, стр.97-98.
10. Барнет, А.Дж. Процессы брожения в силосе. М.: издат. иностранной литературы, 1955. - 275с.
11. Бойко, И.И. Консервирование кормов. М.: Россельхозиздат, 1980,- С.86-92.
12. Бондарев, В.А. Приемы повышения качества кормов //Кормопроизводство,- 1996.- №1,- С.33-37.
13. Бондарев, В.А. Заготовка сенажа в любую погоду //Животноводство России.- 2006,- №3.- С.58-59.
14. Бондарев, В.А. Закваска Биотроф для получения качественного силоса //Сельскохозяйственные вести.- 2002,- №1, С.11.
15. Бондарев, В.А. Решение проблем заготовки кормов / В.А.
16. Бондарев, В.М. Соколков, С.А. Строшко, Н.Д. Шариков321
17. Кормопроизводство,- 1997,- №1-2.- С.52-55.
18. Бочарова, М.И. Силосование клевера с использованием биологических консервантов //Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных, Боровск,-1987,- С.60-64.
19. Вальдман, А.Р. Питание животных и микрофлора// Биохимия и физиология питания животных. Рига. «Зинатне», 1972.- С.47-66.
20. Ветеринарная лабораторная практика/ Под ред. И.Г.Усачёва и А.М.Ярных, Том 1.-М. 1963 С.567.
21. ГаппоеваВ.С. Использование Каротинбактерина в рационах цыплят-бройлеров. Автореферат, п. Дубровицы Московской обл., 1994 г.
22. Гамко, В. Природные регуляторы / В. Гамко, И. Баладжаев //Свиноводство,- 1992,-№2-3,- С.9-10.
23. Ганина, В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии,- М.: МГУПБ, 2001.- 128 с.
24. Гвызин, O.JI. Пищеварительные, обменные и защитные функции ЖКТ поросят-отъемышей при введении в их рацион пробиотиков: Автореф. дис. . канд. биол. наук/ ВИЖ.- Дубровицы, 1996.- 22 с.
25. Гвызин, O.JI. Применение пробиотика энтерацида при выращивании поросят //Зоотехния,- №2.- 1995.- С.17.
26. Георгиевский, В.В. Физиология сельскохозяйственных животных,-М.: Агропромиздат,- 1990.- 505 с.
27. Гончарова, Г.И. Микробная экология в норме и патологии/ Г.И. Гончарова, В.Г. Дорофейчук, A.B. Смолянская, К.Я. Соколова/ Антибиотики и химиотерапия. 1989. - №6. - С.462-466.
28. ГОСТ 13496.2-91 Метод определения сырой клетчатки
29. ГОСТ 13496.3-92 Методы определения влаги
30. ГОСТ 13496.15-97 Методы определения содержания сырого жира
31. ГОСТ 23327-98 Определения общего белка методом Кьельдаля (молоко и молочные продукты)
32. ГОСТ 23453-90 Метод определения количество соматических клеток в молоке визуальным способом (молоко и молочные продукты)
33. ГОСТ 23638-79. Издание официальное. Метод определения органических кислот. Взамен ГОСТ 7636-85; введ. 1987-01-07. -М.: Издательство стандартов, 1987.-12 с.
34. ГОСТ 26226-95 Методы определения сырой золы
35. ГОСТ 3624-92 Метод определения кислотности (молоко и молочные продукты)
36. ГОСТ 3625-84 Метод определения плотности (молоко и молочные продукты)
37. ГОСТ Р 51417-99 Определение массовой доли азота и вычисление массовой доли сырого протеина. Метод Кьельдаля.
38. ГОСТ 5867-90 Методы определения жира (молоко и молочные продукты)
39. Горлов, И.Ф. Методические рекомендации по ресурсосберегающим технологиям силосования кормов / И.Ф. Горлов, В.М. Куликов.- Волгоград, 1998.- 46с.
40. Данилевская, H.H. Влияние пробиотика Лактобифадол на продуктивность поросят мясных пород на подсосе и доращивании / H.H. Данилевская, P.C. Кудинкин //Ветеринария и кормление.- 2005,- №3.- С. 1516.
41. Данилевская, Н.В. Пробиотики в рационах телят: здоровье животных и безопасность продукции для человека / Н.В. Данилевская, В.В. Субботин // Молоко&Корма. Менеджмент,- 2008,- №2(19).- С. 16-20.
42. Денисов, Н.И. Кормление высокопродуктивных коров,- М.: Россельхозиздат, 1982,- 120с.
43. Дмитроченко А.П. Руководство к практическим занятиям по кормлению сельскохозяйственных животных. M.-JL: с.-х. изд-во, 1936. 15 с.
44. Дубинин, A.B. Трофические связи кишечной микрофлоры и макроорганизма/ A.B. Дубинин, В.Н. Бабин, П.М. Раевский// Клиническая медицина. 1991. -№7. -С.24-25.
45. Духин, И.П. Становление желудочно-кишечного пищеварения у телят при раннем переводе их на растительные корма / И.П. Духин // Бюл. науч. работ / ВНИИ животноводства.- 1988,- Вып. 90.- С.3-5.
46. Егошин, И. Пробиотики в комплексной профилактике незаразных диарей новорожденных животных / И. Егошин, В. Митрофанов, Э. Алиев //Сельское хозяйство Киргизии.- 1984.- №6.- С.22-23.
47. Жукова, М.Д. Микрофлора животного организма / в кн.: Ветеринарная энциклопедия,- М 1973,- т. 4.- С.98-103
48. Задорожная, В.Н. Концептуальные подходы к разработке технологии приготовления кормовых добавок нового поколения / В.Н. Задорожная, В.И. Трухачев, М.А. Воронин, В.Ф. Филенко, Т.П. Стародубцева
49. Материалы III научно-практической конференции. Современные технологические и селекционные аспекты развития животноводства России. -Дубровицы, 2005,- Т.2.- С.19-20.
50. Зафрен, С.Я. Технология приготовления кормов.- М.: Колос, 1977.-С.26-27.
51. Зубрилин, A.A. Силос / A.A. Зубрилин, E.H. Мишустин, В.А. Харченко,- М., 1950.
52. Каленюк, В.Ф. Влияние молочнокислых бактерий на некоторые биохимические и морфологические показатели органов и тканей поросят / В.Ф. Каленюк, С.П. Куприй //С.- х. биология. Сер.: биол. животных.- 1992.-№2,- С.81-87.
53. Киселёва, Н. Использование Целлобактерина в птицеводстве / Н. Киселёва, Г. Лаптев, В. Солдатова // Комбикорма. 2000. - №5. - С.39.
54. Кислюк., С.М. Как подобрать добавки для повышения эффективности усвоения корма / С.М. Кислюк, Г.Ю. Лаптев, Н.И. Новикова //Сельскохозяйственный вестник (Беларусь).- 2002.- №10-11.- С.9.
55. Кислюк, С.М. Микробиологический подход к оптимизации использования растительного сырья в кормлении животных //РацВетИнформ.-2005,-№2.- С.18.
56. Кислюк, С.М. Многофункциональный пробиотик Целлобакгерин325позволяет оптимизировать набор кормовых добавок для свиней С.М. Кислюк, Г. Лаптев //Сельскохозяйственные вести.- 2002.- №4.- С.35.
57. Кислюк, С.М. Опыт применения целлобактерина на свинокомплексе ОАО «Ильиногорское» Нижегородской области /С.М. Кислюк, А.Г. Миронов, C.B. Малов //РацВетИнформ.- 2004,- №10.- С.25.
58. Кислюк, С.М. Целлобактерин в свиноводстве: опыт применения на отъеме и доращивании / С.М. Кислюк, А.Г. Миронов, C.B. Малов // Сельскохозяйственные вести,- 2004,- №4.- С.36.
59. Клабукова, Л.Н. Целлобактерин эффективная кормовая добавка при выращивании поросят / Л.Н. Клабукова, Б.В. Тараканов //Биол. наука на службе животноводства: Тез. докл.- Калуга, 1998,- С.32-34.
60. Клабукова, Л.Н. Эффективность использования пробиотика на основе молочнокислых бактерий в рационе поросят / Л.Н. Клабукова, Н.Г. Макарцев, П.А. Волобуева //Бюлл. ВНИИФБИП с.-х. ж.-х.- 1991.-Вып.1(100).- С.40-45.
61. Коваленко, Н.К. Бактерициногенная и лизоцимсинтезирующая активность молочно-кислых бактерий//Микробиологический журнал. 1999. - №6. - С.42.
62. Коваленко, Н.К. Влияние продуктов метаболического метаболизма молочнокислых бактерий на организм с.-х. животных/ Н.К. Коваленко, С.А. Касумова, Л.Н. Немировская. Боровск, 1990. - 4.2. - С. 121-122.
63. Коло дина, E.H. Симбиотические свойства тококарина и каротинобактерина при совместном применении с дигидрокверцитином в обогащении подкисленного молока для телят.: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- 03.00.13 / ВИЖ.- Дубровицы,- 2008,- 20 с.
64. Комиссаров, И.М. Использование пробиотиков с адаптогенами для стимуляции приростов у поросят-отъемышей //Селекционно-генетические методы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных.: Сб. науч. тр. / ГНУ ВНИИГРЖ,- СПб., 2004.- С.95-98.
65. Комкова, Е.Е. Обогащение кукурузного силоса биомассой слизистых микроорганизмов /Е.Е. Комкова, Т.А. Николичева //Зоотехния.-1999.- №10,- С.17-19.
66. Коршунов, В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника// Микробиологический журнал. 1995. -№3. - С.48-55.
67. Коршунов, В.М. Изучение антагонистической активности бифидобактерий in vitro с использованием гнотобиологической технологии/ В.М. Коршунов, З.А. Уртаева, В.В. Смеянов // Микробиологический журнал. 1999. - №5. - С.72-74.
68. Коштоянц, Х.С. Основы сравнительной физиологии / Х.С. Коштоянц.- JL: 1951.- 420 с.
69. Куваева, И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. М., 1976.-248 с.
70. Куприй, С.П. Влияние пробиотика суисбактолактина на продуктивность и обмен азотистых веществ в организме свиней: Автореферат дис. канд. биол. наук ВНИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. ж.-х. Боровск, 1995,- 27 с.
71. Куприй, С.П. Пробиотики в кормлении поросят промышленных комплексов. Актуальные проблемы в животноводстве.- М., 1998,- С.41-46.
72. Курилов, Н.В. Физиология и пищеварение жвачных / Н.В. Курилов, А.П. Кроткова,- М.: Колос.- 1971,- 430с.
73. Курцин, И.Т. Механорецепторы желудка и работа пищеварительного аппарата / И.Т. Курцин.- Л.: 1952 351 с.
74. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологическихисследований. М.: Медицина, 1972 310 с.81 .Лакин Г.Ф., Биометрия, Высшая школа, 1985.
75. Лаптев, Г.Ю. Ингородукция целлюлолитических бактерий в рубец крупного рогатого скота для повышения переваримости клетчатки Г.Ю. Лаптев, Л.К. Эрнст, В.В. Солдатова // Сельскохозяйственная биология. -1994. №4.- С.34.
76. Лаптев, Г. Как ленинградские свиноводы снижают затраты на корма / Г. Лаптев, В. Смирнов, В. Суровцев //Животноводство России,- 2004.-№4,- С.41.
77. Лаптев, Г.Ю. Факторы повышения молочной продуктивности коров в период раздоя / Г.Ю. Лаптев, C.B. Полуляшная, Р.В. Некрасов, В.Н. Романов, И.О. Кирнос // Зоотехния.- 2008,- №10,- С. 10-11.
78. Лаптев Г.Ю., Ферментативный термостабильный пробиотик / Г.Ю.Лаптев, Е.Л. Проворов, Г.С. Головлёва // Животновод для всех. 2004. -№4. - С.78.
79. Лаптев, Г. Целлобактерин пробиотик, повышающий удои / Г. Лаптев, В. Солдатова, А. Баранихин, Т. Винокурова // Животноводство России,- 2003.- №10,- С.23.
80. Лушников, К.В. Альтернатива кормовым антибиотикам / К.В. Лушников, C.B. Желамский //Eurofarmer.- 2005,- №1-2,- С.33-35.
81. Мак-Дональд, П. Биохимия силоса. М.: Агропромиздат, 1985.-С.159-160.
82. Методические указания о проведении опытов по силосованию кормов / С.Я. Зафрен, Н.В. Колесников, В.А. Бондарев В.А. и др. -М., 1968.-32 с.
83. Миронов, А.Г. Если поросята отстают в росте. Опыт применения целлобактерина на отъеме и доращивании / А.Г. Миронов, C.B. Малов, С.М. Кислюк //Промышленное и племенное свиноводство.- 2004.- №4.- С.47.
84. Миронов, А.Г. Использование ферментативного пробиотика целлобактерина / А.Г. Миронов, С. Малов //Свиноводство.- №2,- 2004,- С.30.
85. Мишурнова, Н.В. Современные представления о роли нормальной микрофлоры пищеварительного тракта/ Н.В. Мишурнова, Ф.С. Киржаев// Ветеринария. 1993. - №6. - С.30-33.
86. Мишустин, E.H. Микробиологические процессы при силосовании кормов. Силосование и технология кормов. / Под редакцией Зубрилина A.A. -М., 1964.
87. Мулинов, Р.В. Обоснование эффективности применения бактериотерапии в молочном скотоводстве / Р.В. Мулинов, В. А. Блинов /Саратовский ЦНТИ (Информационньш листок).- 2003,- №35.
88. Неминущая Л.А., Еремец В.И., Зуев И., Калугин B.C., Салеева И.П., Сб.материалов международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синобиотики и функциональные продукты питания.
89. Современное состояние и перспективы. Москва, Россия 2-4 июня 2004 г., стр.153.
90. Николичева, Т.А., Изучение биоценоза пищеварительного тракта поросят при включении в рацион Bacillus muciluginosus. / Т.А. Николичева, Б .В. Тараканов //Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. ж.-х.- 2(94).- 1989,- С.31-35.
91. Новиков, П.С. Бактериальная флора наземных растений.- Киев, 1963.- С.89.
92. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справочное пособие / Под ред. А.П. Калашникова, В.И. Фисинина, В.В. Щеглова, Н.И. Клейменова.- М., 2003.- 456с.
93. Овсянников, А.И. Основы опытного дела в животноводстве.- М.: Колос, 1976,- 303с.
94. Павлов, И.П. Полное собрание сочинений / И.П. Павлов.- М.: 1951. Т.2. кн. 1-2. С.592.
95. Пивняк, И.Г. Микробиология пищеварения жвачных / И.Г.330
96. Пивняк, Б.В. Тараканов.- М.: Колос,- 1982,- 247 с.
97. Пнвняк, И.Г. Пробиотнкн в животноводстве //Микроорганизмы в кормопроизводстве.-Кишинев: Штинитца, 1990.- С.135-142.
98. Пивняк, И.Г. Эффективность использования нового пробиотика каротинобактерина в рационах поросят / И.Г. Пивняк, В.А. Заболоцкий, Р. Шайдуллина //Науч. тр. ВИЖа.- 1995,- Вып.57.- С.94-97.
99. Плохинский, H.A. Алгоритмы биометрии / Под ред. и с предисл. Б.В. Гнеденко.- Изд.2-ое, перераб. и доп. М.: МГУ, 1980.- 150с.
100. Победнов, Ю.А. Новое в использовании молочнокислых бактерий при силосовании трав / Ю.А. Победнов, Ф. Вайсбах, Г. Палов //Кормопроизводство.- 1997,- № 8.
101. Победнов, Ю.А. Современная теория силосования подвяленных трав / В ich.: Адаптивное кормопроизводство: проблемы и решения.- М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2002.- С.456-468.
102. Практикум по микробиологии/ Под ред. М.С. Егорова. М. 1976.
103. Приготовление объемистых кормов с использованием консервантов различной природы (Рекомендации) / В.М. Дуборезов, В.Н. Виноградов, А.И. Евстратов, И.О. Кирнос, C.B. Суслова и др.- Дубровицы, 2005,- 20с.
104. Приставкин, Н.Я. Силосование эспарцета с применением бактериальной закваски / Н.Я. Приставкин, Н.К. Чуканов //Сельское хозяйство Киргизии, 1975 №8,- С.37-41.
105. Пробиотики //Биотехнология.- 2001,- №2,- С. 48-56.
106. Прокоп, В. Исследование эффективности пробиотиков в питаниипоросят / В. Прокоп, Е. Зобочева //Материалы 4-го совещания спец.331
107. Алиментарное влияние антибиотиков и биостимуляторов на продуктивность ж.-х.».- Краков, 1983,- С. 136-144.
108. Прокопеня, Е.И. Опыт применения пробиотиков в свиноводческих хозяйствах / Е.И. Прокопеня, JI.A. Козырева, Д.В. Вахрушева //Сб. науч. тр./ УрГСХА.- 2000,- Т 1,- С.280-288.
109. Профилактика нарушений обмена веществ у сельскохозяйственных животных / Пер. со словац. К.С. Богданова, Г.А. Терентьевой; под ред. A.A. Алиева,- М.: Агропромиздат.- 1986.- 384 с.
110. Раецкая, Ю.И. Методика зоотехнического и биохимического анализа кормов, продуктов обмена и животноводческой продукции // Ю.И. Раецкая, В.Н. Сухарева. Дубровицы: ОНТИ, 1970.- 128 с.
111. Редько, Н.В. Современные проблемы использования биологических консервантов для силосования кормов / Н.В. Редько, Г.И. Ковалева//Матер, науч.-произв. конф., посвященной 150-летию образования Белорусской СХА,- Горки, 1992,- С.81-83.
112. Редько, Н.В. Эффективность использования химического консерванта и бакзакваски ВНИИМС-ИНБИ при силосовании зеленой массы клевера лугового / Н.В. Редько, Г.И. Ковалева //Интенсификация лугового кормопроизводства.- Горки, 1986,- С.16-21.
113. Роль микроорганизмов в питании жвачных,- М.: ВНиТИ.- 1968.168с.
114. Романе, И.А. Оценка качества, поедаемости и переваримости травяного силоса, полученного с применением бактериальных заквасок. Микробиология и биотехнология производства кормов.- 1990,- С.72-85.
115. Романов, В.Н. Оптимизация питания и оздоровления высокопродуктивных жвачных животных / В.Н. Романов, Р.В. Некрасов,
116. B.В. Пузанова // Сб. науч. тр. Межд. науч.-практ. конф. «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных»,- Краснодар.-2008,-Ч.2.- С.111-113.
117. Росляков, Л.А. Консервирование подвяленной люцерны с использованием молочнокислых бактерий //Изв. АН Каз. ССР,- 1976,- №3,1. C.79-85.
118. Рыбин Н.И. (2006). Консервирование зеленой массы кукурузы в фазе молочной и молочно-восковой спелости зерна химическими и биологическими препаратами. Автореферат. Нижний Новгород-2006). 25 стр.
119. Самофалова, Е. Практика применения Лактоамиловарина / Е. Самофалова // Животноводство России.- 2004.- №8.- С. 39.
120. Сборник методик по изучению состава крови, молока и кормов.-Л., 1969,- 86с.
121. Сидоров, М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками/ М.А. Сидоров, В.В. Субботин, Н.В. Данилевская// Ветеринария. -№11.- 2000. С. 17-22.
122. Сидорчук, И.И. Микроорганизмы кишечника и естественная резистентность поросят/ И.И. Сидорчук, И.М. Павлюк, Е.И. Тищенко// Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных: Мат. междунар. конф. Боровск, 1990. - С. 131-132.
123. Сизова, A.B. Значение микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных и использование бактерий-симбионтов в животноводстве// М., 1974. С.39-74.
124. Синещеков А.Д. Биология питания с.-х. животных. М.: «Колос», 1965, 399 с.
125. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии -продуценты биологически активных веществ/ В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. Киев: Наукова думка, 1982. - 280 с.
126. Соколов, П.И. Амилолитические бактерии в силосовании кормов. Автореф. дисс. к.б. н., Алма-Ата, 1965,- С.22.
127. Соловьев, A.M. Влияние препарата «Биосил» на ферментацию клеверозлаковой смеси //Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных,- Боровск,- 1989.-2(94).- С.62-65.
128. Соловьев, A.M. Использование силоса с использованием пентозосбраживающей и молочнокислой закваской в кормлении овец //Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных.- Боровск,- 1986,- 3(82).- С.46-49.
129. Степаненко, П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов,- М., 2003,- 415 с.
130. Субботин, В.В. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения/ В.В. Субботин, М.А. Сидоров// Аграрная наука. 1998. - №3. -С.20-21.
131. Субботин, В.В. Желудочно-кишечные болезни поросят с симптомокомплексом диареи: причины, профилактика и терапия //Ветеринария и кормление,- 2005,- №3,- С.2-3.
132. Тарабрина, Н.П. Взаимодействие лактобацилл со слизистой оболочкой кишечника// Микробиология. 1980. - №2. - С.89-93.
133. Тараканов Б.В., Долгов И.А., Николичева Т.А., Изучениемикрофлоры преджелудков у жвачных. Методические рекомендации, Боровск, 1977.
134. Тараканов, Б.В. Биологические эффекты пробиотиков// Современные проблемы биотехнологии и биологии продуктивных животных: Сб. науч. тр. Том XXXVIII.- Боровск, 1999.- С.78-86.
135. Тараканов, Б.В. Биология целшололитических бактерий, используемых для приготовления пробиотика целлобактерина/ Б.В. Тараканов, Т.А. Николичева// доклады РАСХН. 2000. - №3. - С.42-44.
136. Тараканов, Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве, ВНИИФБиП с.-х. животных,- Калуга,- 1998,- С.5-6.
137. Тараканов, Б.В. Лактоамиловорин надежный помощник животноводов //Животноводство России.- №4.- 2004.- С.42.
138. Тараканов, Б.В. Состояние и перспективы использования пробиотиков в животноводстве / Б.В. Тараканов //Проблемы кормления с.-х. ж.-х. в соврем, условиях развития животноводства.- Дубровицы, ВИЖ, 2003.-С.106.
139. Тараканов, Б.В. Эффективность использования нового пробиотика лактоамиловорина при выращивании поросят / Б.В. Тараканов, Л.Н. Клабукова //Биол. наука на службе животноводства: Тез. докл.- Калуга. -1998,- С.34-36.
140. Таранов, М.Т. Химическое консервирование кормов.- М.: Колос, 1964,- 198с.
141. Тимошко, М.А. Бактериоценоз пищеварительного тракта поросят/ М.А. Тимошко, В.Г. Холмецкая, И.Ф. Бурсук Кишинев: «Штиинца», 1983. -56 с.
142. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева.- М.: Колос, 1993.- 149 с.
143. Тихомирова, А. Использование бифидобактерий в свиноводстве / А. Тихомирова, Б. Устинников, Г. Ермакова и др. //Свиноводство.- 1993.-№4.- С.26-27.
144. Тишенков, П.И. Продуктивность и показатели обмена веществ у коров при скармливании клеверного силоса, приготовленного с биологическим консервантом //Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных.- Боровск.-1989,- 1(93).-С. 12-15.
145. Трухачев В.И., Филенко В.Ф., Чабаев М.Г., Храмцов А.Г. Бифидогенные кормовые добавки в кормлении молодняка сельскохозяйственных животных и птицы. Методические указания. Ставрополь, 2004. 16 стр.
146. Томмэ, М.Ф. Методика взятия образцов для химического анализа.- М., 1969,- 34 с.
147. Томмэ, М.Ф. Переваримость кормов / М.Ф. Томмэ, Р.В. Мартыненко, К. Неринг, Н.И. Платиканов.- М.: Колос, 1970.- 463с.166. Трухачев В.И. идр.
148. Уголев, A.M. Физиология мембранного (пристеночного) пищеварения. Физиология пищеварения. A.M. Уголев, H.H. Иезуитова, Н.М. Тимофеева,-Л.: 1974 С.542.
149. Фомичев, Ю.П. Эффективность обогащенного молока при выращивании телят / Ю.П. Фомичев, E.H. Колодина, O.A. Артемьева // Молочное и мясное скотоводство.- 2008,- №3,- С.32-33.
150. Хоулт Дж., Краткий определитель бактерий Берги, Москваю Мир, 1980
151. Чахмахчев, Р.С Обмен веществ и продуктивность свиней при применении закваски Леснова, лактоамиловорина и цеолитов: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Казань, 2000.- 22 с.
152. Чахмахчев, P.C. Применение пробиотика лактоамиловорина для лечения диспепсии поросят //В сб.: Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии.-Казань, 1999,- С.98-99.
153. Чернушенко, E.B. Использование Целлобактерина в кормлении телят: Дис. . канд. биол. наук,- 03.00.13 /ВИЖ.- Дубровицы.- 1988,- 107 с.
154. Чуканов, Н.К. Микробиология консервирования трудносилосуемых растений / Н.К. Чуканов, А.К. Попенко.- Алма-Ата: Наука, 1986,- С.5-88.
155. Фундуй, Ф.И. Стратегия создания адаптивной системы промышленного животноводства / Ф.И. Фундуй, В.П. Федоряка, С.Х. Хайдарлиу и др. Кишинев, 1987. - 188 с.
156. Шайдуллина Р.Г. Новые пробиотические препараты для животноводства / Р.Г. Шайдуллина, И.Г. Пивняк, В.А. Заболоцкий, JI.H. Стукалова, Т.В. Чинина, В.М. Михеенко //Аграрная Россия,- 2000.-№5.-С.64-69.
157. Шаршунов, В.А. Внутриобъемное внесение жидких консервантов при закладке сенажа и силоса / В.А. Шаршунов, A.B. Кузьмицкий, В.А. Дремук //Достижения науки и техники.- 1999,- № 7.- С.27-29.
158. Шендеров, Б.А. Нормальная микрофлора кишечника и некоторые вопросы микроэкологической экологии// Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - №3. - С. 164-170.
159. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание// Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: Сб. мат. междунар. конф. -М., 2004. С. 12-14.
160. Эрнст, JI.K. Биотехнологии в животноводстве: современное состояние и перспективы //Современные достижения и проблемыбиотехнологии сельскохозяйственных животных.- Дубровицы, 2003.- С.7-17.338
161. Эрнст, JI.К. Биотехнологии в животноводстве: современное состояние и перспективы //Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных,- Дубровицы, 2003,- С.7-17.
162. Эрнст, Л.К. Биотехнология в животноводстве / Л.К. Эрнст, H.A. Зиновьева.-Москва,- 2008.-510с.
163. Эрнст, Л.К. Использование рекомбинантных и нерекомбинантных микроорганизмов для оптимизации микрофлоры желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных / Л.К. Эрнст, Г.Ю. Лаптев.- М., 2002,- 68 с.
164. Эрнст, Л.К. Лизинсинтезирующий пробиотик в составе постстартерных комбикормов для поросят / Л.К. Эрнст, М.П. Кирилов, Г.Ю. Лаптев //Перспективные направления в производстве и использовании комбикормов и балансирующих добавок.- Дубровицы, 2003.- С.7-8.
165. Эрнст, Л.К. Проблемы долголетнего использования высокопродуктивных коров / Л.К. Эрнст, В.Т. Самохин, В.Н. Виноградов, М.П. Кирилов, К.Е. Маркова и др.- Издание 2-е доп.- Дубровицы: ВИЖ.-2008.- 205с.
166. Эрнст, Л.К. Проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных,- М., 1995.- 360 с.
167. Юкна, В. Применение пробиотиков в кормлении свиней. Привесы быстрее, мясо - лучше / В. Юкна, А. Шимкус //Eurofarmer.- 2005.- №1-2,-С.36-39.
168. Яшков, Е. Применение сухого ацидофилина / Е. Янпсов, А. Черный //Свиноводство,- 1982,- №9,- С.37-38.
169. Baird G.D., Symonds H.W., Ash R. Some observations on metabolite production and utilization in vivo by the gut and liver of adult dairy cows. // J. Agric. Sci., 1975, 85: 281-296.
170. Bergman E.N. Production and utilization of metabolites by the alimentary tract. In: Digeston and Metabolism in the Ruminant (I.W. McDonald, A.C.I. Warner, eds), New England Publishing Unit, Armidale, Australia, 1975: 292-305.
171. Binder A. Bacteriologische Untersuchungen zum Verkommen gramnegative vor Anaerobe im kot von Schweinen: Inaug// Diss.Hannover. 1982. -135 s.
172. BloksmaN., Ettekoven H. Et al. Effects of lactobacilli on parameters of non-specific resistance of micelle// Med. Microbiol. Immunol. -1981. 170. -P.45-53.
173. Burnett G.S., Neil E.L. A note on the effect of probioticum feed, additive on the live-weight gain, feed conversion and carcass quality of bacon pigs.- Anim. Product. 1977,- vol.25.- P.I.- p.95-98.
174. Danek P. Zmeny fekalni mikroflory selat behem aplikace Streptococcus faecium M-74 (Lactiferm) v krmne smesi // Zivocisna Vyroba. 1986. R.31, c.ll. S.1019-1027.
175. Danek P. Sledovani ucinnosti microbiotika Lactiferm (StreptococcusVfaecium M-74) ve smesi pro rany odstav selat. Zivoc. Vyr., 31, 1986, c. 9, s. 857863.
176. Driehuis F, Elferink SJ, Spoelstra SF.J Anaerobic lactic acid degradation during ensilage of whole crop maize inoculated with lactobacillus buchneri inhibits yeast growth and improves aerobic stability // Appl Microbiol. -1999.-V. 87(4).-P. 583-94.V
177. Dvorak J., Sumbera F. Probiotika ve vyzive monogastrickych zvirat. Veterinaistvi,ХХХ1П, 1983, c.ll, s. 485-487.
178. Dubos R. Normal bacterial populations of the intestine and their relation to intestinal function// The New England Journal of Medicine. 1964. -V.270. - №14. - P.938-945.
179. Dubos R. The microbiota of the gastrointestinal tr act// Gastroenterology. 1966 - V.51. - №5. P.868.
180. Fisher, L.I. et al. The effect of additive "Silogen" on the intake and degistibiliti of grass silage. Can. J. Anim. Sci., 1984,64,3: 709-715.
181. Fuller R. Probiotics in man and animals// J. Of appl. Bacteriol. 1989. V. 66.-P. 365-378.
182. Hackstein, J. Genetic and evolutionary constraints for the symbiosys between animals and methanogenic bacteria // J. Hackstein, P. Langer, J. Rosenberg Environmental Monitoring and Assessment. 1996. - Vol.42. P.39.
183. Hungate, R.E. The rumen and its microbes. New York, Academic press, ed.3., 1966.
184. Gilliiand, S.E. Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus / S.E. Gilliiand, C.R. Nelson et al. // Appl. environ, microbial.- 1985,- 49.- 2:377381.
185. Goblin, B.R. The effect of milk and lactobacillus feeding on human intestinal bacterial enzyme activity / B.R. Goblin, S.L. Gorbach // Amer. J. clin. nutr.- 1984.- 39:756-761.
186. Gorden C.H. and oth. The use of acidifying salts in high moisture hay crop silage. Dairy Sei., 1954, 37,6.
187. Jouany J.P., Yiannikouris A., Bertin G., 2005. How yeast cell wall components can alleviate mycotoxicasis in animal production and improve the safety of edible animal products. J. Anim. Feed Sci. 14, Supl. 1,171-190.
188. Kelly D., 1998. Probiotics in young and newborn animals. J. Anim. Feed Sei. 7, Suppl. 1, 15-23.
189. Kmet V., Flint H.J., Wallace R.J., 1993. Probiotics and manipulation of rumen development and function. Arch. Anim. Nutrition 44, 1-10.
190. McGillard, M.L.,and C.C.Stern.1998. Increase in milk yield of commercial dairy herds fed amicrobial and enzyme supplement. J.Dairy Sei.81:1353-1375.
191. Mican, P.: Anwendung von Microbiotika bei Schweinezucht und Mästung. Versuchsbericht der Testation SVS-SVP Hustopece. 1976, c. 8.
192. Mican, P., J. Bouska, J. Kukla. Pouziti mikrobiotik pfi odehovu a vykrmu prasat. Krmivärstvi, 12, 1976, 180-183.
193. Mitsuoka T. Verleichende Untersuchungen über die Lactobacillez aus der Faects von Menschen, Schweinen und Hühnern // Zbl.f.Bact., Parasiten und Hyg. 1969. Bd. 210. №1. - S.32-51.
194. Nagaraja, T.G. J. Anim. Sei. / T.G. Nagaraja, M.M. Chengappa.- 1998,-Vol.76.-P.287.
195. Ngugen T.H., Dupperay J., Eckenfeloier B. e. a. Qguelgus probiotigues Jacteurs deeraissance Rev. Aliment Anim., 1988, 415: 31-37.
196. Owens, F.D. J. Animal. Sei. / F.D. Owens, D.S. Secrist, W.J. Hill, D.R. Gill.- 1998. Vol.76.-P.275.
197. Palilow, G., Honig H. Wirkungsweise und Einsatzgrenzen von Silage aus Milchsaurebacterien. Wirtschaftseigene Futter, 1986, 32 l.S.20-35.
198. Pollman, D.S. Probiotics in pig diets. Rev. Adv. in Anim. Nutrit. Londons, 1968; 193-205.
199. Rüssel, J.B. J. Dairy Sei. / J.B. Rüssel, D.B. Wilso.- 1996,- Vol.79.-P.1503.
200. Rüssel, J.B. Factors That Alter Rumen Microbial Ecology / J.B. Rüssel, J.L. Rychlik // Science.- 2001.- Vol.292. P.1119.
201. Savage D.C. Mechanisms by which indicenous microorganisms colonize gastrointestinal epitelial surfaces// Prog. Fd.Nutr. Sc.-V.7.- 1983,- P. 6574.
202. Schleifer K.H., Kilpper-Balz R., Kraus J. und mitrab. Classificacion of streptococci// Zbl. Bacterid., und Hug. 1986. - A 262. - №2. - S.275.
203. Scheunert A., SchieblichM. Arb. dtsch. Landw. Ges., 1926, 145-205.
204. Simon G.L., Gorbach S.L. Intestinal microflora. Med. Clin. North Amer., 1982, v. 66, P. 557-547.
205. Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promotion // Microbiol. Sc. V. 5. - №1. - 1988. - P. 4-8.
206. Virtanen A.J. The AIV metod of preserving fresh fodder. J. Experimental agriculture, 1933, 1,2.
207. Vofisék K. Probiotika a gastroentinalni microflora.- Praha.- 1989,111s.
208. Watkins B.A., Kratzer F.H. Effect of oral-gosing of Lactobacillus strains on gut colonisation and liver biotion in broiler chics// Poultru Sc. 1983. V.62. - №1. - P.2088-2094.
209. Weissbach F., Schmidt L., Hein E. // Proc. 12th Grassl. Conf., Moscow. 1974. V. 3.P. 663.
210. Wictora J. Vliv pouziti probiotic béhem rastu prasat na slozeni jejich tela / Wictora J., Komenda V., Dvofák Z., Prokop V. // Zivocisna Vyroba. 1989. R.34, c.3. S.227-236.
211. Yoon I.R. and M.D. Stern. 1995. Influence of direct-fed microbials jn ruminal microbial fermentation and performance of ruminants: A review. Austral. Asian J. Anim. Sci. 8:533-555.
-
Лаптев, Георгий Юрьевич
-
доктора биологических наук
-
Санкт-Петербург, 2009
-
ВАК 03.00.23
- Разработка и совершенствование технологий силосования зеленой массы кормовых культур с использованием химических и биологических препаратов
- Эффективность биологических препаратов при консервировании многолетних трав
- Научное обоснование и разработка эффективных способов повышения энергетической и протеиновой питательности силоса и сенажа из трав
- Физиологическое обоснование методов повышения энергетической и протеиновой обеспеченности лактирующих коров и молодняка крупного рогатого скота
- Эффективность консервирования провяленных трав препаратом Биотроф и использования полученного корма в рационах крупного рогатого скота
