Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разнообразие и функциональная активность метилотрофного сообщества гидротерм восточного побережья озера Байкал

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Разнообразие и функциональная активность метилотрофного сообщества гидротерм восточного побережья озера Байкал"

00346771

На правах рукописи

ЗЕЛЕНКИНА Татьяна Савельевна

РАЗНООБРАЗИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МЕТИЛОТРОФНОГО СООБЩЕСТВА ГИДРОТЕРМ ВОСТОЧНОГО ПОБЕРЕЖЬЯ ОЗЕРА БАЙКАЛ

03.00.16 - экология 03.00.07- микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ 2009

о

003467719

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Дагурова Ольга Павловна

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Троценко Юрий Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Ивановский Руслан Николаевич

кандидат биологических наук Матюгина Евгения Борисовна

Ведущая организация: Институт микробиологии им. С.Н. Ви-

ноградского РАН

Защита состоится «14» мая 2009 г. в //-ч. на заседании Диссертационного совета Д 212.022.03 в Бурятском государственном университете по адресу: 670000, Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а, биолого-географический факультет, конференц-зал

Факс: (3012) 210588, E-mail: d21202203@mail.ru

tatiana-zelenkina@rambler.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеках Бурятского научного центра СО РАН и Бурятского государственного университета.

Автореферат разослан « 13» апреля 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Н.А. Шорноева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Метанотрофы и метилобактерии - физиологически и биохимически специализированные подгруппы аэробных прокариот, использующих С i-субстраты в качестве источников углерода и энергии. Метанотрофы и метилобактерии образуют биофильтр, препятствующий поступлению Ci-соединений в окружающую среду (Гальченко, 2001). В последние полвека весьма основательно исследованы процессы метанокисления и состав мети-лотрофных сообществ пресноводных, почвенных и морских экосистем (Hanson, Hanson, 1996; Doronina et al., 2000; Гальченко, 2001; Кравченко и др., 2005; Пименов и др., 2006). Менее изучены метанотрофы и метилобактерии биотопов с высокими значениями температуры (Троценко, Хмеленина, 2002).

Термальные источники являются экстремальными экосистемами, микробные сообщества которых представляют значительный интерес, как для фундаментальных исследований, так и для практического применения (Brock et al., 1971). Ранее из гидротерм Венгрии и Японии были выделены термофильные метанотрофы и изучены их свойства (Bodrossy et al., 1997, 1999; Tsubota et al., 2005). В гидротермах Байкальской рифтовой зоны активность и состав метано-трофного сообщества были исследованы эпизодически (Цыренжа-пова и др., 2007). Разнообразие и биология метилобактерий в гидротермальных экосистемах до сих пор не изучались. В связи с этим актуален анализ состава и активности метилотрофного сообщества гидротерм восточного побережья озера Байкал.

Цель и задачи исследования. Цель работы - исследование разнообразия и активности аэробных метанотрофов и метилобактерий в гидротермах восточного побережья озера Байкал. Для достижения этой цели были поставлены и решались следующие задачи:

1. Охарактеризовать условия среды обитания микроорганизмов;

2. Определить общую численность бактерий в грунтах гидротерм;

3. Определить скорости потребления метана в грунтах гидротерм;

4. Изучить разнообразие метилотрофных сообществ исследуемых гидротерм;

5. Выделить чистые культуры метилобактерий и определить их

филогенетическое положение.

Научная новизна. Впервые в гидротермах Бурятии исследовано разнообразие и активность аэробных метилотрофных сообществ. На основе сравнительного анализа гена ртоА, методом денатурирующего гель-градиент электрофореза, а также методом флуоресцентной in situ гибридизации установлено, что культивируемое метило-трофное сообщество представлено преимущественно метанотрофа-ми II типа, среди которых преобладают представители рода Methy-locystis и Methylosinus. Кроме того, выделены и таксономически охарактеризованы чистые культуры метилобактерий. Установлено, что метилобактерии изученных гидротерм относятся в основном к алкалофильным и нейтрофильным мезофилам рода Bacillus.

Практическая значимость. Полученные данные расширяют наши знания о таксономическом составе метилотрофных сообществ термальных экосистем и создают основу для сравнительных исследований микробных сообществ. Способность выделенных метилобактерий использовать широкий спектр органических соединений может найти применение в биологических способах очистки вод. Результаты данной работы могут быть использованы для оценки экологического состояния гидротерм, а также в учебном процессе при изучении микробиологии и экологии водоемов.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на X Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология -наука XXI века» (Пущино, 2007); конференции «Экология в современном мире: взгляд научной молодежи» (Улан-Удэ, 2007), II Летнем симпозиуме "НОЦ "Байкал" - стратегия развития"; международной конференции молодых ученых «Современные проблемы микробиологии и биотехнологии» (Одесса, 2007), IV Верещагинской Байкальской конференции (Иркутск, 2007), молодежной конференции «Актуальные аспекты современной микробиологии» (Москва, 2008).

Публикации. По результатам исследования опубликованы 2 статьи и 7 тезисов, 2 статьи находятся в печати.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на_страницах, включая_таблиц и_рисунков. Диссертация состоит из разделов "Введение", «Обзор литературы», «Методы исследований», «Результаты исследований и их обсуждение", "Заключение", "Выводы" и "Список литературы"(_наименований).

Место проведения работы. Работа выполнена в лаборатории микробиологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН и в лаборатории радиоактивных изотопов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю - к.б.н. О.П. Дагуровой, научному консультанту - зав. лабораторией метилотрофии, д.б.н., проф. Ю.А. Троценко, зав. лабораторией микробиологии ИОЭБ СО РАН, д.б.н., проф. Б.Б. Намсараеву.

Автор признателен сотрудникам лаборатории метилотрофии ИБФМ РАН к.б.н Б.Ц. Ешинимаеву, д.б.н. В.Н. Хмелениной, к.б.н Н.Е. Сузиной за помощь в работе и доброжелательное отношение. Автор благодарен к.б.н. С.П. Бурюхаеву за помощь в работе, а также всем сотрудникам лаборатории микробиологии ИОЭБ СО РАН.

Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 08-04-98018 и 07-04-90814 моб_ст, Программы Президиума СО РАН № 17.9, Минобразования РФ № РНП 2.1.1/2165 и НОЦ «Байкал».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

Змеиный

Горячинск и Сухая, расположенные на восточном побережье озера Байкал (рис.1). Выходы этих гидротерм приурочены к тектоническим разломам Байкальской рифтовой зоны. Они относятся к низкоминерализованным щелочным термам. В газовом составе гидротерм Змеиная и Горячинск преобладает азот, в гидротерме Сухая - метан.

Объекты исследования.

Объектами исследования являлись гидротермы Змеиная,

Рис.1. Местоположение исследованных гидротерм восточного побережья озера Байкал

Изученные гидротермы характеризуются наличием минеральных ручьев, изливающихся на выходах источников и впадающих в Байкал. Пробы грунтов для исследования отбирали по течению ручья каждого источника в летние периоды 2006 - 2008 гг.

Методы исследования. В местах отбора проб температуру воды измеряли с помощью сенсорного электротермометра Prima (Португалия). рН среды определяли потенциометрически при помощи полевого рН-метра рНер (Португалия). Значение общей минерализации воды определяли портативным тестер-кондуктометром TDS-4 (Сингапур). Концентрацию гидрокарбонатов и карбонатов определяли титриметрическими методами. Содержание сульфатов в воде определяли турбидиметрически, сульфидов - колориметрически (Алекин, 1973; Кузнецов, Дубинина, 1989).

Общую численность микроорганизмов в грунтах определяли путем подсчета бактерий на мембранных фильтрах (Романенко, Кузнецов, 1974) с диаметром пор 0,22 мкм («Millipore»).

Потенциальную скорость потребления метана в грунтах определяли радиоизотопным методом. В стерильные флаконы вносили по 1 см3 грунтов, заливали 2 мл среды "П" (Гальченко, 2001), разбавленной в два раза («0.5П»), и вносили ИСН4 (0.5-2.0 мкКи, В/О "Изотоп"). Флаконы инкубировали 10 суток при температуре, близкой к температуре in situ. Процесс останавливали добавлением 0.5 мл 10% NaOH. Дальнейшую обработку проб проводили согласно известной методике (Беляев и др., 1975; Sokolov, Trotsenko, 1995).

Численность метанотрофов определяли методом десятикратных разведений, высевая пробы грунтов в жидкую среду «0.5П», с последующей инкубацией с радиоактивно меченным метаном в течение 6-10 дней. О наличии и активности метанотрофов судили по потреблению 14СН4.

Метанотрофные бактерии выращивали на минеральной среде «0.5 П» следующего состава (в г/л): Na2HP04 - 0.3; КН2Р04 - 0.14; KN03 - 1.0; MgS04-7 Н20- 0.2; СаС12 - 0.02; (в мг/л): ЭДТА Na2 - 5; FeS04-7H20 - 2; (в мкг/л): ZnS04-7H20 - 100; МпС12-4Н20 - 30; СиС12-5Н20 - 10; СоС12-6Н20 - 200; NiCl2-6 Н20 - 20; Na2Mo04 - 30; Н3ВО3 - 30; вода дистиллированная. Культуры выращивали при 29°С, 37°С и 45°С.

Культуры метанотрофов выделяли методом истощающего посева. Чистоту культур контролировали микроскопически.

Для получения накопительных культур аэробных метилобакте-

рий использовали среду «М» (Doronina, Darmaeva, 2003) с добавлением 0.2-0.5% NaCl, содержащую (г/л): КН2Р04 - 1.0; KN03 - 1.0; MgS04-7H20 - 0.2 и 1 мл/л раствора микроэлементов (мг): FeNH4-цитрат - 300; СаС12-2Н20 - 300; МпС124Н20 - 50; ZnS04-7H20 - 50; CuS04-5H20 - 5; Н20 - 100 мл. После стерилизации в среды вносили 0.5% (об./об.) метанола как источник углерода и 0.05% (об./об.) дрожжевого автолизата в качестве источника витаминов. Культивирование проводили при 29°С, 37°С и 45°С в течение 1-2 недель.

ДНК экстрагировали по методу Мармура (Marmur, 1961), дальнейшую фенольную очистку ДНК проводили, как описано Маниа-тисом с соавт. (1984). ПЦР-амплификацию проводили на ДНК тер-моциклере Hybaid (Великобритания) в режиме: 1 цикл - 95°С, 2 мин; 25 циклов - 94°С, 40 с; 56°С (ртоА) и 60°С (16S рДНК), 40 с; 72°С, 40 с; последний цикл - 72°С, 4 мин. Полученные ПЦР-продукты гена ртоА разделяли в полиакриламидном геле с градиентом 35-80% на приборе Dcode, Bio-Rad (США). Нуклеотидные последовательности ПЦР-продуктов определяли на автоматическом секвенаторе CEQ 2000XL Beckman Coulter (США) с использованием набора BigDye Terminator Cycle Sequencing kit («Perkin Elmer», США), согласно инструкциям фирмы-производителя. Транслированные аминокислотные последовательности участков генов ртоА (460 п.н.) и 16S рРНК сравнивали с последовательностями из GenBank, используя программы NCBI BLAST (http//www. n cb i, n 1 m. n i h. go v/B last), для выравнивания последовательностей использовали программу Clustal W (версия 1.6). Филогенетическое дерево было построено с использованием программы Treecon W (версия 1.3).

Статистическая обработка данных произведена с помощью программы Microsoft Excel 2003.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Характеристика исследуемых гидротерм

Температура воды уменьшалась по течению ручьев гидротерм: в Змеиной - от 45°С на изливе до 19°С, в Горячинске - от 51 °С на изливе до 16°С, в Сухой - от 41 °С на изливе до 19 °С (табл.1).

Воды гидротерм имеют щелочную реакцию. Значения pH на из-ливах составляли 9.0-9.4. Окислительно-восстановительный потен-

циал воды на изливах гидротерм характеризовался отрицательными значениями. Во всех исследованных гидротермах вниз по течению ручья значение рН уменьшалось, тогда как значение ЕЬ увеличивалось.

Таблица 1

Места отбора проб и физико-химическая характеристика гидротерм

Гидротерма Станция и место отбора проб х, °С рн Общая минерализация, г/дм3 ЕЬ, мВ

Змеиная Ъ\ (излив) 45 9.4 0.3 -100

ЪЪ (5 м от излива) 40 8.1 0.3 -22

26 (зона смешения с водами озера) 19 7.6 0.1 +32

Горячинск в 1 (излив) 51 9.1 0.4 -0.63

(пруд) 19 8.0 .0.3 +35

Об (зона смешения с водами озера) 16 7.5 0.2 +103

Сухая СЗ (излив) 41 9.0 0.6 -95

С4 (2 м от излива) 38 8.9 0.5 -66

С5 (пруд) 19 8.8 0.5 +137

Термальные воды являются слабоминерализованными (<0.6 г/л). Минимальные концентрации минеральных солей отмечены в источнике Змеиная (0.3 г/л).

По газовому составу гидротермы Горячинск и Змеиная являются азотными термами, а гидротерма Сухая относится к метановым термам (Борисенко, Замана, 1978; Пиннекер, 1980).

В исследованных гидротермах преобладали гидрокарбонаты, максимальное содержание которых отмечено на выходе источника Сухая - 396.2 мг/дм3, минимальное - на выходе гидротермы Горячинск - 88.5 мг/дм3 (табл. 2). Преобладающее содержание гидрокарбонат-ионов характерно для сульфидных вод (Борисенко, Замана, 1978). Содержание карбонат-иона в источниках Змеиная и Горячинск уменьшалось по течению ручья, а в гидротерме Сухая - увеличивалось.

Таблица 2

Гидрохимический состав воды гидротерм

Гидротерма Место отбора проб НСОз", мг/ дм3 С03-, мг/дм3 мг/дм3 БОЛ мг/дм3 СН4, мл/ дм3; растворенный

Змеиная Ъ\ 91.5 66 45.5 59.7 0.02

ЪЪ 85.4 48 35.4 31.4 0.03

гь 61.4 24 15.8 11.3 0.05

Горячинск С1 88.5 6 5.9 83.6 0.009

04 76.3 6 1.1 24.7 0.07

ЪЬ 54.9 0 0.7 8.1 0.04

Сухая СЗ 396.5 36 40.9 37.3 3.5

С4 375.1 39 37.2 42.5 3.2

С5 286.7 72 6.3 44.5 0.8

Во всех гидротермах отмечено присутствие растворенного сероводорода, содержание которого варьировало на изливах от 5.9 до 45.5 мг/дм3. Максимальное количество сероводорода выявлено в гидротерме Змеиная. Концентрация сульфатов в гидротермах варьировала от 37.3 до 59.7 мг/дм3. Максимальное содержание сульфатов (83.6 мг/дм3) отмечено в гидротерме Горячинск. По ручью концентрация сероводорода и сульфатов в гидротермах Змеиная и Горячинск снижалась. В гидротерме Сухая по течению ручья отмечено снижение содержания сероводорода и увеличение концентрации сульфатов.

. Концентрация растворенного метана в гидротермах Горячинск и Змеиная составляла 0.009 мл/дм3 и 0.02 мл/дм3 соответственно. В гидротермах Горячинск и Змеиная по течению ручья с понижением температуры увеличивается концентрация метана, что связано с повышением растворимости СН4. В гидротерме Горячинск наибольшая концентрация метана отмечена на станции С4.

Грунты из гидротермы Сухая характеризовались высоким содержанием растворенного метана, которое составляло 3.5 мл/дм3 на выходе источника (на два порядка выше, чем в других гидротермах), что обусловлено поступлением метана с вулканогенными

флюидами на изливе источника. По течению ручья данного источника концентрация СН4- уменьшалась до 0.8 мл/дм3, так как по руслу ручья не происходит глубинного подтока СН4 и, вероятно, часть метана потребляется метанотрофным сообществом.

Общее содержание органического углерода в грунтах исследованных гидротерм варьировало в пределах от 0.3% до 19.6% и зависело от типа грунта. Максимальные значения (15.4 и 19.6%) были отмечены в черных илах гидротермы Сухая, минимальные (0.3 и 0.6%) - в песках станций Х6 и вб соответственно, где происходит смешение вод источников с водами Байкала. В гидротермах Змеиная и Горячинск наблюдалось снижение содержания Сорг по течению ручья. В гидротерме Сухая содержание Сорг увеличивалось по изливу, что, вероятно, связано с продукционной деятельностью высших растений в пруду источника.

2. Численность микроорганизмов в грунтах исследованных гидротерм

В грунтах гидротерм была определена общая численность микроорганизмов и численность жизнеспособных микроорганизмов различных физиологических групп, входящих в гетеротрофное микробное сообщество.

Общая численность микроорганизмов в грунтах изученных источников была одного порядка (109 клеток в см3). Максимальное количество бактерий было обнаружено в грунтах гидротермы Горячинск и составляло 3.7-109 клеток/см3.

Примечательно, что общая численность микроорганизмов в грунтах исследованных гидротерм на порядок выше, чем в грунтах других гидротерм Байкальской рифтовой зоны, где максимальное количество бактерий достигало 7,5-107 клеток/см3 (Бабасанова, 2007). Полученные нами значения сопоставимы с общей численностью микроорганизмов в донных отложениях Южного Байкала (Максимова и др., 1991). По нашим данным, в донных осадках глубоководных районов озера Байкал численность бактерий достигала 1,6-108 клеток/см3, что на порядок ниже их численности в гидротермах.

Определена динамика общей численности микроорганизмов в грунтах гидротерм по течению минеральных ручьев (рис. 2).

О)

с; и 5 У

7,5 7,4 7,3 7,2 7,1 7 6,9 6,8 6,7

Змеиная

\

3,5 3

2-5 о 2

и

1-5°" 1 " 0,5 0

г\ 23 станция

гв

Горячинск

<34 Об станция'

Сухая

СЗ С4 С5 станция

I I численность

микроорганизмов —»— Сорг, %

Рнс. 2. Изменение общей численности микроорганизмов по течению ручьев в грунтах гидротерм

Общая численность микроорганизмов во всех гидротермах коррелирует с содержанием органического вещества (г=0.9). В грунтах гидротермы Змеиная эти показатели снижались по течению ручья. В гидротерме Горячинск максимальная численность микроорганизмов была обнаружена на станции 04, где образуется пруд. В источнике Сухая количество микроорганизмов увеличивалось по течению ручья. Таким образом, динамика изменения численности микроорганизмов по течению ручьев изученных гидротерм была различной и зависела от литологии грунта и содержания органического вещества.

3. Потенциальная скорость потребления метана

Аэробные метанотрофы обнаружены нами во всех образцах грунтов, в большинстве из которых численность составляла 103-104 клеток/см3 (табл. 3). Наибольшая численность метанотрофов (108 клеток/см3) отмечена в источнике Сухая. Полученные значения численности метанотрофов значительно выше, чем в глубоководных осадках озера Байкал, которые составляют 102-103 клеток/см3 (Гайнутдинова и др., 2005).

Потенциальная скорость потребления метана в грунтах изученных источников варьировала от 0.6 до 7.7 нмоль СН4/(см3 сут) (табл. 3).

Таблица 3

Численность метанотрофных бактерий и потенциальная скорость потребления метана в грунтах гидротерм

Гидротермы Станция Численность метанотрофов, клеток/см3 Потребление сн4, нмоль/(см3'сут) Ассимиляция в БЭ*, %

Змеиная Ъ\ 10' 0.84 25

ЪЪ 103 0.83 50

16 ю4 1.0 60

Горячинск 101 0.62 33

ю4 0.84 43

вб 103 0.71 37

Сухая СЗ ю4 0.87 37

С4 ю8 7.73 56

С5 10> 0.75 86

*- биомасса и экзометаболиты

Наибольшая скорость потребления метана, как и численность метанотрофов, была отмечена в гидротерме Сухая. Потребление метана было одного порядка с интенсивностью процесса в других гидротермах Бурятии (Алла, Кучигер, Сея), но превышало метано-кисление в глубоководных донных осадках озера Байкал (Гайнутдинова и др., 2005; Цыренжапова и др., 2007). В гидротермах Кам-

ры (до 92°С), интенсивность потребления метана ниже (Цыренжа-пова и др., 2007).

При включении ИСН4 значительная часть радиоуглерода (от 25 до 86%) переходила в биомассу клеток и внеклеточные метаболиты. В глубоководных донных осадках озера Байкал метан в основном окислялся до С02. В местах дополнительной разгрузки метана и подтока минерализованных вод, где создавались более благоприятные условия для развития метанотрофов, доля радиоуглерода в биомассе и метаболитах увеличивалась (Гайнутдинова и др., 2005). Можно заключить, что обстановка в термальных источниках довольно благоприятна для существования метанотрофов.

Исследовали динамику численности метанотрофов и потребления метана по течению ручьев гидротерм (рцс. 3).

Змеиная

21 73 26

станция

Горячинск

в4 вб станция

1

Сухая

Ль \

10 • &

+81

СЗ С4 С5 станция

—■— численность метанотрофов

—•— потребление метана

Рис. 3. Динамика численности метанотрофов и потребления метана по течению ручьев гидротерм

На изливах гидротерм Горячинск и Змеиная, где отмечены высокие температуры, наблюдали небольшие значения численности ме-танотрофов и потребления метана, что, вероятно, лимитируется невысокой концентрацией метана в этих точках и обусловлено низкой растворимостью метана при высоких температурах. Далее, по течению термальных ручьев, с понижением температуры эти показатели увеличивались.

На изливе гидротермы Змеиная, где наблюдается высокая концентрация сероводорода, метанотрофное сообщество проявляет невысокую активность, а значения общей численности микроорганизмов, напротив, высоки. Численность и активность метанотрофов зависят от концентрации метана (г = 0.9) и сероводорода (г = -0.8), в отличие от общей численности микроорганизмов, которая зависит от концентрации органического вещества в грунтах (г = 0.9). Максимальные значения численности и активности метанотрофов наблюдались в зоне смешения с водами Байкала, где увеличивалась концентрация метана, и сероводород не оказывал ингибирующего действия.

В гидротерме Горячинск максимальная численность метанотрофов и интенсивность потребления метана были обнаружены в илах станции 04, богатых органическим веществом, где выявлена повышенная концентрация метана.

Гидротерма Сухая является метановой и характеризуется высокими концентрациями метана, а также сероводорода. Неудивительно, что на изливе гидротермы Сухая отмечены низкая численность бактерий и интенсивность потребления метана, так как рост метанотрофов подавлялся высокими уровнями СН4 и Н28. Максимальное количество метанотрофов и интенсивности потребления метана были обнаружены на станции С4, где образуется заводь с илом, богатым органическим веществом. Концентрация метана (3.2 мл/дм3) оказалась оптимальной для развития метанотрофов и, хотя концентрация сероводорода оставалась довольно высокой, метанотрофное сообщество активно функционировало.

Таким образом, развитие метанотрофных сообществ гидротерм зависит от конкретной экологической обстановки. Выявлено, что на их функционирование существенное влияние оказывают концентрация СН4, Н28, температура и, в первую очередь, содержание метана.

4. Культивируемые метанотрофные сообщества грунтов прибрежных гидротерм

Для характеристики метанотрофных сообществ из проб грунтов прибрежных гидротерм было выделено 9 первичных накопительных культур. Все культуры представляли собой трудноразделимые ассоциации метанотрофов и их гетеротрофных спутников. При микроскопировании наблюдали в основном изогнутые формы.

На ультратонких срезах клеток накопительных культур выявлены периферические внутрицитоплазматические мембраны (ВЦМ), характерные для метанотрофов II морфотипа. В накопительных культурах, выделенных из источников Горячинск и Змеиная, преобладали метанотрофы II типа, близкие по ультраструктурной организации Ме1\\у1осу$И$ есЫпо1<1е$ 2 (рис. 4).

Рис.4. Ультраструктура клеток некоторых накопительных культур метанотрофов: а - С5, б - С4, в - 01, г - ЪЪ. Длина шкалы 1 мкм.

Выделенные культуры были проанализированы на наличие генов мембрансвязанной метанмонооксигеназы. ПЦР-амплификация гена ртоА, кодирующего а-субъединицу мембрансвязанной метанмонооксигеназы, дала положительный результат в ДНК всех накопительных культур. Полученные ампликоны анализировали методом денатурирующего гель-градиент электрофореза (ДГГЭ).

Сравнение секвенированных продуктов с последовательностями из ОепЬапк выявило доминирование представителей метанотрофов II типа. Построенное филогенетическое дерево транслированных аминокислотных последовательностей гена ртоА указывает на близость метанотрофов в накопительных культурах к родам МеИху1осу5-и МеЛуЬйтиь (рис. 5).

по г- МсМу/ояагста рШздиНагшп 61Гл—ШШу1о$ж1пг> Мт№ -ШФуШШоЫшп вМзит

-ШвгуЬтотз тЫЬтжа

Шгаососаш оссапиз

МсМу/огтсгоЫит Ьигуа1сп$с Ш-меШуЮтаъЫигп «рЛОЗ

,-М»ту1Ыт1вг туаЬюрЫЬи

Э-КШууктжюШшп роЩкит

Ь2гМеШу>осшМит дгасйе .13~^-МсФу1осЫс111т ¡ерШит

ШШуЮсоссиа сар$иШт Мо1Ьу',оЬа!оЫит сптсспяа МЫНуЫЬвгтт ?р. 923 Ме1Ьу1отегтиа $р НВ 9? ШШуЫЪфгтиз 1ШтвИ$

дггэ_т7. к;шщрз с5 Меи>у1о51пиз Ш1ю$ропит 9А~~ДГГЗ Т1 РПДГГЗ Т4 'Ж 1ДГГ0, Т5

Мейу/оз/л./г т,рог ¡от Ш ДГГЭ„Тб I ШДГГЭД2

' М$Шу!0Су$!)$ ССМоЫМ г

Культура ог Кушпург 611 МвН1у!осуЫ<& есМтЫ'М$ Ш!Ьу1осу$Иг> рагииг,

дггз„тз

ар, М

У КувмщзИт Культура С4т Мстуюсориэ ааШрЬИа

Рис.5. Филогенетическое дерево, построенное на основании транслированных аминокислотных последовательностей фрагмента гена ртоА монокультур метанотрофов и последовательностей, полученных для первичных накопительных культур методом ДГГЭ.

Напротив, в накопительной культуре, выделенной из источника Сухая, был обнаружен метанотроф, уровень сходства которого с Methylococcus capsulatus Bath при сравнении 140 аминокислот составлял не более 80%, что косвенно свидетельствует о принадлежности изолята к новому таксону метанотрофов.

Гибридизация клеток из накопительных культур с флуоресцентно - меченными группоспецифичными олигонуклеотидными зондами (метод FISH) выявила в составе метанотрофных сообществ гидротерм Змеиная, Сухая и Горячинск доминирование представителей трех родов метанотрофов II типа: Methylocystis, Methylosinus и Ме-thylocapsa.

Наибольший процент (до 99%) от общей численности метанотрофов II типа составляли представители рода Methylocystis. Меньшее количество клеток приходилось'на долю метанотрофов рода Methylosinus (до 8%). Наименьшим количеством были представлены метанотрофы рода Methylocapsa (до 5%) (табл. 4).

Таблица 4

Соотношение метанотрофов в накопительных культурах, выявленных методом флуоресцентной in situ гибридизации

% клеток

№ Methylosinus trichosporium (зонд Msint-1268) Methylocystis sp. (зонд Mcy st-1432) Methylocapsa sp. (зонд Mcaps-1032) Methylocella sp. (зонд Mcell-1026) I тип (зонд M84)

ZI 0 99 1 0 0

Z6 0 0 0 0 0

С4 7 92 1 0 0

С5 5 92 1 0 2

Gl 2 90 5 0 1

G6 8 65 2 0 0

Метанотрофы I типа были найдены только в двух культурах, выделенных из источников Горячинск и Сухая, где их численность не превышала 2% от общей численности метанотрофных бактерий, обнаруженных в накопительных культурах.

В дальнейшем из первичных накопительных культур удалось выделить 5 монокультур, каждая из которых состояла из одного вида метанотрофов, ассоциированного с гетеротрофными спутниками (табл. 5).

Таблица 5

Характеристика монокультур метанотрофов из грунтов гидротерм восточного побережья озера Байкал

Культуры Источник выделения Окраска колонии Преобладающий морфотип Тип метано трофа

С5 Сухая желтая вибриоиды I

G11 Горячинск розовая бобовидные клетки II

G12 Горячинск розовая округлые клетки II

G4m Горячинск желтая вибриоиды П

Zlm Змеиный желтая вибриоиды II

Филогенетический анализ гена ртоА в ДНК четырех монокультур показал их принадлежность к роду Methylocystis. Одна монокультура С5, выделенная из гидротермы Сухая, отнесена к метано-трофам I типа.

Таким образом, для исследования накопительных и монокультур метанотрофов были использованы 3 различных метода молекулярной экологии (ДГГЭ, FISH, анализ гена ртоА). Всеми этими методами было показано преобладание во всех культурах метанотрофов II типа. Методом ДГТЭ в первичных накопительных культурах был обнаружен метанотроф I типа, в последующем идентифицированный и в монокультуре с использованием ПЦР-анализа гена ртоА. Состав метанотрофных сообществ, определенный методом ДГГЭ, включал бактерии родов Meíhylosinus и Methylocystis. Методом FISH, помимо перечисленных родов, в накопительных культурах был обнаружен род Methylocapsa. При анализе разнообразия моно-

культур метанотрофов на основании последовательностей гена ртоА был детектирован только род МеЛу/ЬсуяИя. Полученные данные позволяют судить об эффективности применения метода ДГГЭ для оценки разнообразия метанотрофного сообщества в накопительных культурах, без трудоемкого выделения чистых культур. Использование нескольких методов позволяет получить более достоверную информацию о разнообразии метанотрофных сообществ, что также было показано на примере сравнения серологических и молекулярных методов (Слободова и др., 2006).

5. Культивируемые сообщества метилобактерий грунтов гидротерм

Из проб грунтов исследуемых источников нами выделены 6 штаммов аэробных факультативных метилобактерий, 5 из которых представлены грамположительными подвижными спорообразую-щими палочками, а штамм вб - подвижными грамположительными палочками, не образующими спор (табл. 6).

Таблица 6

Характеристика выделенных штаммов аэробных метилобактерий

Штамм Гидротерма Спорообра- Подвиж- Окраска

зование ность по Граму

С2 Сухая + + +

г\ Змеиный + + +

гъ Змеиный + + +

01 Горячинск + + +

04Ь Горячинск + + +

вб Горячинск - + +

Исследование экофизиологии метилобактерий, выделенных из гидротерм, показало, что они способны расти в диапазоне от 4°С до 54°С. Оптимальный рост наблюдался при 29°С - 37°С. Все штаммы являются мезофилами. Рост наблюдали в широком диапазоне значений рН - от 6.0 до 10.0, наиболее активный - при рН 7.5-9.0. Штаммы С2, 7Л и 01 являются алкалофильными мезофилами, штаммы ЪЪ, 04Ь, Об - нейтрофильными мезофилами. Все культуры

растут при содержании NaCl от 0 до 5%, наилучший рост наблюдался при 2% NaCl. Для роста культур Gl и Z1 оптимум солености составляет 2% и 5%, соответственно.

Все изоляты способны утилизировать многие органические соединения, наиболее активно использовались углеводы группы гек-соз, особенно сахароза и мальтоза. Рост отсутствовал на дульците, саркозине и глицерине. Все штаммы использовали широкий спектр трудноразлагаемых ароматических соединений, только штаммы G6 и G4b не разлагали фенол.

Филогенетический анализ 16S рДНК показал, что штаммы Z1 и Z3 наиболее близки к Bacillus cohnii (94 и 100% сходства соответственно), штаммы Gl и С5 отнесены к Bacillus halodurans (100% сходства) (рис. 6). Известна способность представителей этого рода к метилотрофии. Наиболее детально изучен термотолерангный ме-тилотроф Bacillus methanolicus (Arfrnan et al., 2006).

o.i

Штамм C2

Bacillus melhanolis

1001

Bacillus pseutlojirrmts dsm8715

Exixuobacterium aurcmtlacunt dsm6703

Рис. 6. Филогенетическое дерево, построенное на основании нуклеотидных последовательностей фрагментов гена 16Э рРНК

Изолят G6 был идентифицирован как Exiguobacterium aurantia-сит (100% сходства). Важно отметить, что нами впервые установлена способность данного вида к метилотрофии.

Таким образом, выделенные из грунтов гидротерм Бурятии ме-тилобактерии представлены алкалофильными и нейтрофильными мезофилами и в основном относятся к роду Bacillus. Они являются факультативными метилобактериями, использующими широкий спектр субстратов, что представляет интерес для биоремедиации загрязненных экосистем.

ВЫВОДЫ

1. Общая численность микроорганизмов в грунтах гидротерм восточного побережья озера Байкал колеблется от 0.4*109 до 3.7*109 клеток/см3. Численность микроорганизмов зависит от литологии грунта и содержания органического вещества.

2. В грунтах изученных гидротерм потенциальные скорости потребления метана варьируют от 0.6 до 7.7 нмоль СН4/(см3*сут) и коррелируют с численностью метанотрофов. Наиболее интенсивное потребление метана выявлено в метановой гидротерме Сухая.

3. На функционирование метанотрофных сообществ гидротерм существенное влияние оказывают концентрация СН4> H2S, температура и, в первую очередь, содержание метана.

4. Методами молекулярной экологии (ДГГЭ, FISH, анализ фрагмента гена ртоА) в накопительных культурах и монокультурах показано преобладание метанотрофов II типа, относящихся к родам Methylocystis и Methylosinus.

5. Выделено 6 штаммов факультативно-аэробных метилобакте-рий. Выделенные метилобактерии относятся к алкалофильным и нейтрофильным мезофилам и в основном принадлежат к роду Bacillus. Один штамм был идентифицирован как Exiguobacterium aurantiacum. Впервые установлена способность этого вида к росту на метаноле.

Список публикаций по теме диссертации:

Статьи

1. Зеленкина Т.С., Дагурова О.П. Общая численность микроорганизмов в донных осадках озера Байкал // Вестник БГУ. Сер. 2. Биология. - Вып.8. - Улан-Удэ, 2006. - С.88-89.

2. Зеленкина Т.С., Гайнутдинова Е.А., Дагурова О.П. Прибрежные гидротермы как геохимическая барьерная зона озера Байкал // Вестник БГУ. Сер. Химия, физика. - Улан-Удэ, 2008. - Вып.З. -С.32-36.

3. Зеленкина Т.С., Ешинимаев Б.Ц., Дагурова О.П., Намсараев Б.Б., Троценко Ю.А. Аэробные метанотрофы прибрежных гидротерм озера Байкал // Микробиология. - 2009. - Т.78. - №4 (в печати).

4. Зеленкина Т.С., Ешинимаев Б.Ц., Дагурова О.П. Аэробные метилобактерии прибрежных гидротерм озера Байкал // Вестник БГУ. Сер. Биология. - Улан-Удэ, 2009. С.88-91.

Тезисы

1. Зеленкина Т.С, Дагурова О.П. Бактериальное окисление метана в прибрежных гидротермах озера Байкал // Биоразнообразие экосистем внутренней Азии: тез. конф. - Улан-Удэ, 2006. Т.2. - С.46.

2. Зеленкина Т.С, Дагурова О.П. Распространение микроорганизмов в прибрежных гидротермах озера Байкал // Биология - наука XXI века: материалы X Пущинской школы-конференции молодых ученых. - Пущино, 2006. - С. 29-30.

3. Зеленкина Т.С, Ешинимаев Б.Ц, Дагурова О.П. Потребление метана в грунтах прибрежных гидротерм озера Байкал // Экология в современном мире: взгляд научной молодежи: материалы конференции. - Улан-Удэ, 2007. - С.161.

4. Зеленкина Т.С, Ешинимаев Б.Ц. Разнообразие метанотрофов и метилобактерий в грунтах прибрежных гидротерм озера Байкал // Современные проблемы микробиологии и биотехнологии: материалы междунар. конф. молодых ученых - Одесса, 2007. - С.37.

5. Зеленкина Т.С, Ешинимаев Б.Ц. Разнообразие метанотрофов и метилобактерий в грунтах прибрежных гидротерм озера Байкал // Актуальные аспекты современной биологии: тез. междунар. школы-конференции. - М.: ИНМИ РАН, 2007. - С.37.

6. Зеленкина Т.С, Ешинимаев Б.Ц, Дагурова О.П. Аэробные ме-танотрофы и метилобактерии прибрежных гидротерм озера Байкал // Тезисы IV Верещагинской конференции. - Иркутск, 2007. - С. 1517.

7. Зеленкина Т.С, Ешинимаев Б.Ц. Метилобактерии в гидротермах Бурятии // Актуальные аспекты современной микробиологии: Материалы IV Молодежной школа-конференции. - М.: ИНМИ РАН, 2008. - С.34.

Св-во РПУ-У №1020300970106 от 08.10.02.

Подписано в печать13.04.09.Формат60><841/16. Усл.-печ. л. 1,4. Тираж 100. Заказ 390.

Издательство Бурятского госуниверситета 670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24 а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зеленкина, Татьяна Савельевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика щелочных гидротерм.

1.2. Микробные сообщества щелочных гидротерм.

1.3. Метан в водоемах.

1.3.1. Изотопный состав углерода метана различного происхождения.

1.4. Метилотрофное сообщество.

1.4.1. Интенсивность окисления метана в водоемах.

1.4.2. Особенности биологии метанотрофных бактерий.

1.4.3. Систематика метанотрофных бактерий.

1.4.4. Экология метанотрофных бактерий.

1.4.5. Особенности биологии аэробных метилобактерий.

1.4.6. Экология аэробных метилобактерий.

1.5. Молекулярно-биологические методы исследования 35 метанотрофов.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение физико-химических параметров среды 43 обитания.

2.2.2. Определение концентрации метана в воде.

2.2.3. Методы учета численности микроорганизмов.

2.2.4. Определение потенциальной скорости потребления метана

2.2.5. Выделение накопительных культур метанотрофов.

2.2.6. Выделение накопительных и чистых культур 47 метилобактерий.

2.2.7. Изучение физиолого-биохимических свойств культур.

2.2.8. Молекулярно-генетические методы.

2.2.9. Статистические методы.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Характеристика исследуемых гидротерм.

3.2. Численность микроорганизмов в грунтах исследуемых 58 гидротерм.

3.3. Потенциальная скорость потребления метана.

3.4. Культивируемые метанотрофные сообщества грунтов гидротерм.

3.5. Культивируемые сообщества метилобактерий грунтов гидротерм.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разнообразие и функциональная активность метилотрофного сообщества гидротерм восточного побережья озера Байкал"

Актуальность темы. Метанотрофы и метилобактерии — физиологически и биохимически специализированные подгруппы аэробных прокариот, использующих Сгсубстраты в качестве источников углерода и энергии. Метанотрофы и метилобактерии образуют биофильтр, препятствующий поступлению С i-соединений в окружающую среду (Гальченко, 2001). В последние полвека весьма основательно исследованы процессы метанокисления и состав метилотрофных сообществ пресноводных, почвенных и морских экосистем (Hanson, Hanson, 1996; Doronina et al., 2000; Гальченко, 2001; Кравченко и др., 2005; Пименов и др., 2006). Менее изучены метанотрофы и метилобактерии биотопов с высокими значениями температуры (Троценко, Хмеленина, 2002).

Термальные источники являются экстремальными экосистемами, микробные сообщества которых представляют значительный интерес, как для фундаментальных исследований, так и для практического применения (Brock et al., 1971). Ранее из гидротерм Венгрии и Японии были выделены термофильные метанотрофы и изучены их свойства (Bodrossy et al., 1995, 1997, 1999; Tsubota et al., 2005). В гидотермах Байкальской рифтовой зоны активность и состав метанотрофного сообщества были исследованы эпизодически (Цыренжапова и др., 2007). Разнообразие и биология метилобактерий в гидротермальных экосистемах до сих пор не изучались. В связи с этим актуален анализ состава и активности метилотрофного сообщества гидротерм восточного побережья озера Байкал.

Цель й задачи исследования. Цель работы — исследование разнообразия и активности аэробных метанотрофов и метилобактерий в гидротермах восточного побережья озера Байкал. Для достижения этой цели были поставлены и решались следующие задачи:

1. Охарактеризовать условия среды обитания микроорганизмов;

2. Определить общую численность бактерий в грунтах гидротерм;

3. Определить скорости потребления метана в грунтах гидротерм; 3

4. Изучить разнообразие метилотрофных сообществ исследуемых гидротерм;

5. Выделить чистые культуры метилобактерий и определить их филогенетическое положение.

Научная новизна. Впервые в гидротермах Бурятии исследовано разнообразие и активность аэробных метилотрофных сообществ. На основе сравнительного анализа гена ртоА, методом денатурирующего гель-градиент электрофореза, а также методом флуоресцентной in situ гибридизации установлено, что культивируемое метилотрофное сообщество представлено преимущественно метанотрофами II типа, среди которых преобладают представители рода Methylocystis и Methylosinus. Кроме того, выделены и таксономически охарактеризованы чистые культуры метилобактерий. Установлено, что метилобактерии изученных гидротерм относятся в основном к алкалофильным и нейтрофильным мезофилам рода Bacillus.

Практическая значимость. Полученные данные расширяют наши знания о таксономическом составе метилотрофных сообществ термальных экосистем и создают основу для сравнительных исследований микробных сообществ. Способность выделенных метилобактерий использовать широкий спектр органических соединений может найти применение в биологических способах очистки вод. Результаты данной работы могут быть использованы для оценки экологического состояния гидротерм, а также в учебном процессе при изучении микробиологии и экологии водоемов.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Зеленкина, Татьяна Савельевна

выводы

1. Общая численность микроорганизмов в грунтах гидротерм восточного побережья озера Байкал колеблется от 0.4* 109 до 3.7* 109 клеток/см. Численность микроорганизмов зависит от литологии грунта и содержания органического вещества.

2. В грунтах изученных гидротерм потенциальные скорости потребления метана варьируют от 0.6 до 7.7 нмоль СН4/(см3*сут) и коррелируют с численностью метанотрофов. Наиболее интенсивное потребление метана выявлено в метановой гидротерме Сухая.

3. На функционирование метанотрофных сообществ гидротерм существенное влияние оказывают концентрация СН4, H2S, температура и, в первую очередь, содержание метана.

4. Методами молекулярной экологии (ДГГЭ, FISH, анализ фрагмента гена ртоА) в накопительных культурах и монокультурах показано преобладание метанотрофов II типа, относящихся к родам Methylocystis и Methylosinus.

5. Выделено 6 штаммов факультативно-аэробных метилобактерий. Выделенные метилобактерии относятся к алкалофильным и нейтрофильным мезофилам и в основном принадлежат к роду Bacillus. Один штамм был идентифицирован как Exiguobacterium aurantiacum. Впервые установлена способность этого вида к росту на метаноле.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что метанотрофы широко распространены в различных экосистемах, где их присутствие определено наличием метана и кислорода. Чаще всего это водные экосистемы, в донных отложениях которых происходит интенсивное бактериальное образование метана (Гальченко, 2001). Вероятно, что и в гидротермах, которые формируются в местах активного вулканизма, где наблюдается подток метана с вулканогенными флюидами, можно ожидать активного развития метанотрофного сообщества.

Аэробные метанотрофные бактерии были обнаружены во всех изученных гидротермах. Доля метанотрофов от общей численности микроорганизмов колебалась от 0.0001% (в азотных термах) до 10% (в метановой терме). Активность метанотрофов была достаточно высокой, потребление метана превышало метанокисление в глубоководных осадках олиготрофного озера Байкал. Большая часть окисленного метана (до 86%) переходила в органическое вещество. Таким образом, обстановка в термальных источниках довольно благоприятна для существования метанотрофов. Наиболее высокая активность метанотрофов, при высокой концентрации метана, наблюдаются в гидротерме Сухая (таблица). Средние значения этих показателей на порядок превышали значения, полученные для гидротерм Горячинск и Змеиная. В Сухой также отмечена максимальная численность и больший спектр разнообразия метанотрофных бактерий.

Известно, что развитие и активность микробного сообщества зависит от экологических условий среды. Распространение и активность микроорганизмов изучено в микробных матах гидротерм и установлено, что наибольшее влияние на их развитие оказывает температура (Горленко и др., 1985). В щелочных гидротермах развитие микробного сообщества зависит, также от содержания сульфидов и значения рН (Намсараев и др., 2006). По результатам нашего исследования, в гидротермах восточного побережья озера Байкал - Змеиная, Горячинск и Сухая - развитие и активность метанотрофных сообществ гидротерм тесно связаны с экологической обстановкой. Установлена зависимость функционирования метанотрофного сообщества гидротерм от таких физико-химических показателей, как концентрация H2S, температура и, в первую очередь, содержание метана.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зеленкина, Татьяна Савельевна, Улан-Удэ

1. Абрамочкина Ф.Н., Безрукова JI.B., Кошелев А.В., Гальченко В.Ф., Иванов М.В. Микробиологическое окисление метана в пресноводных водоемах // Микробиология. 1987. - Т.56. - №1. - С.464-471.

2. Андреев Л.В., Гальченко В.Ф. Жирнокислотный состав и идентификация метанотрофных бактерий // Доклады АН СССР. 1978. - Т. 239.- №6.-С. 1465-1468.

3. Алекин О.А., Семенов А.Д., Скопинцев Б.А. Руководство по химическому анализу вод суши. Л.: Гидрометеоиздат, 1973. 269С.

4. Барабанов Л.Н., Дислер В.Н. Азотные термы СССР/ Отв. Ред. Д.г-м.н. В.В.Иванов. -М: Геоминвод ЦНИИ КиФ, 1968.-120с.

5. Бархутова Д.Д. Влияние экологических условий на распространение и активность бактерий-деструкторов в сероводородных источниках Прибайкалья: Автореф. дис. канд. биол. наук. Улан-Удэ, 2000. -23 с.

6. Бабасанова О.Б. Аэробные органотрофные бактерии щелочных гидротерм Байкальского региона. Автореф. дис. канд. биол. наук. Улан-Удэ, 2007. - 21 с.

7. Беляев А.С., Черных Н.А., Гальченко В.Ф., Иванов М.В. Детекция метилотрофов в природных образцах методом амплификации фрагмента moxF-TQiidL I/ Микробиология. 1995. - Т. - 64. - № 6. - С.788-791.

8. Беляев С.С. Геохимическая деятельность метанобразующих бактерий // Экология и геохимическая деятельность микроорганизмов. Пущино, 1976. С.139-152.

9. Беляев С.С. Микробиологическое образование СН4 в различных экосистемах // Роль микроорганизмов в круговороте газов в природе. М.: Наука, 1979. С.125-137.

10. Беляев С.С., Иванов М.В. Радиоизотопный метод определения интенсивности бактериального метанобразования // Микробиология. -1975 -Т.44. Вып.1. - С.

11. Беляев С.С., Лауринавичус К.С., Иванов М.В. Определение интенсивности процесса микробиологического окисления метана с использованием 14СН4 // Микробиология. 1975. - Т. XLIV. - Вып. 3. - С. 542545.

12. Большаков A.M., Егоров А.В. Об использовании методики фазово-равновесной дегазации при газометрических исследованиях в акваториях // Океанология. 1987. - Т.27. - №5. - С. 861-862.

13. Бонч-Осмоловская Е.А., Горленко В.М., Карпов Г.А., Старынин Д.А. Анаэробная деструкция органического вещества микробных матов источника Термофильного (кальдера Узон, Камчатка) // Микробиология. 1987. Т.56. №6. С. 1022-1028.

14. Бонч-Осмоловская Е.А. Экстремофильные микроорганизмы. С.49-60. / Экология микроорганизмов. Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия, 2004.-272 с.

15. Брянская А.В. Намсараев З.Б., Калашникова О.М., Бархутова Д.Д., Намсараев Б.Б., Горленко В.М. Биогеохимические процессы в альгобактериальных матах щелочного термального Уринского источника // Микробиология. 2006. Т.75.- С. 702-712.

16. Борисенко И.М., Замана Л.В. Минеральные воды Бурятской АССР. -Улан-Удэ: Бурятское книжное изд-во. 1978. С.162 .

17. Гайнутдинова Е.А., Ешинимаев Б.Ц., Цыренжапова И.С., Дагурова О.П., Сузина Н.Е., Хмеленина В.Н., Намсараев Б.Б., Троценко Ю.А. Аэробное метанотрофное сообщество донных осадков озера Байкал // Микробиология. 2005. Т. 74. № 4. С. 562-571.

18. Гальченко В.Ф., Шишкина В.Н., Сузина Н.Г., Троценко Ю.А. Выделение и свойства новых штаммов облигатных метанотрофов // Микробиология. 1977. Т.46. № 5. С.890-897.

19. Голубев В. А. Тепловые и химические характеристики гидротермальных систем Байкальской рифтовой зоны // Сов. геология. 1982. №10. С.100-108.

20. Горленко В.М., Бонч-Осмоловская Е.А. Формирование микробныхматов в горячих источниках и активность продукционных и деструкционных процессов / Кальдерные микроорганизмы. М: Наука, 1989. С. 56-59.

21. Горленко В.М., Компанцева Е.И., Пучкова Н.Н. Влияние температуры на распространение фототрофных бактерий в термальных источниках//Микробиология. 1985. Т. 54. №5. С. 848.

22. Горленко В.М., Старынин Д.А., Бонч-Осмоловская Е.А., Качалкин В.И. Продукционные процессы в микробных сообществах горячего источника Термофильного // Микробиология. 1987. Т. 56. Вып. 5. С. 872878.

23. Дедыш С.Н. Метанотрофные бактерии кислых сфагновых болот // Микробиология. 2002.Т.71. №6. С.741-754.

24. Дедыш С.Н. Дедыш С.Н. (2004). Ацидофильные метанотрофные бактерии. Труды Института микробиологии РАН. М: Наука, 2004. С. 109125

25. Доронина Н.В., Говорухина Н.И., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Анализ ДНК-ДНК гомологий у облигатно-метилотрофных бактерий // Микробиология. 1988. Т.57. № 4. С.629-633.

26. Доронина Н.В., Иванова Е.Г., Сузина Н.Г., Троценко Ю.А. Метанотрофы и метилобактерии обнаружены в тканях древесных растений в зимний период //Микробиология. 2004. Т.73. №6. - С.817-824.

27. Заварзин Г.А. Бактерии и состав атмосферы. М.: Наука, 1984.199 с.

28. Заварзин Г.А., Бонч-Осмоловская Е.А. Синтрофные взаимодействия в сообществах микроорганизмов // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1981. - №2. -С. 165-173.

29. Заварзин Г.А., Колотилова Н.Н. Введение в природоведеческую микробиологию. М.: Книжный дом «Университет», 2001. 256 с.

30. Калюжная М.Г., Хмеленина В.Н., Старостина Н.Г., Баранова С.В., Сузина Н.Е., Троценко Ю.А. Новый умеренно галофильный метанотроф рода Methylobacter // Микробиология. 1998. Т. 67. № 4. С. 532-539.

31. Калюжная М.Г., Хмеленина В.Н., Сузина Н.Е., Лысенко A.M., Троценко Ю.А. Новые метанотрофные изоляты из щелочных озер Южного Забайкалья // Микробиология. 1999. №5. С. 689-697.

32. Калашникова О.М. Продукция и состав органического вещества циано-бактериальных матов щелочных водных экосистем Забайкалья. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Улан-Удэ, 2006. — 20 с.

33. Кашнер Д. Жизнь микробов в экстремальных условиях. М.: Изд-во Мир, 1981.- 520 с.

34. Компанцева Е.И., Горленко. В.М. Фототрофные сообщества в некоторых термальных источниках озера Байкал // Микробиология. 1988. Т. 57. №5. С. 841-846.

35. Крайнов С.Р., Швец В.М. Основы геохимии подземных вод. М.: Недра, 1980.

36. Крайча Я. Газы в подземных водах. М.: "Недра", 1980.

37. Кузнецов С. И. Роль микроорганизмов в круговороте веществ в озерах. М.: Изд-во АН СССР.- 1952. 300 с.

38. Куликов Г.В., Жевлаков А.В., Бондаренко С.С. Минеральные лечебные воды СССР: справочник.- М.: Недра, 1991. 399 с.

39. Кашнер Д. Жизнь микробов в экстремальных условиях. М.: Изд. "Мир", 1981. 520с.

40. Малашенко Ю.Р., Романовская В.А., Лялько В.И. Участие микроорганизмов, окисляющих газообразные углеводороды, в круговороте углерода биосферы // Изв. АН СССР. Серия биол. №5. 1975. С.682-693.

41. Малашенко Ю.Р., Романовская В.А., Троценко Ю.А. Метанокисляющие микроорганизмы. М.: "Наука". 1978. 198 с.

42. Малашенко Ю.Р., Хайер Ю., Бергер У., Романовская В.А., Мучник Ф.В. Биология метанобразующих и метанокисляющих микроорганизмов. Киев: "Наукова думка", 1993 -255 с.

43. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984.-480 с.

44. Методы общей бактериологии. Под ред. Ф. Герхардта и др. М.: Изд. "Мир", 1983. Т.П. С.340-366.

45. Намсараев З.Б., Горленко В.М., Намсараев Б.Б., Бархутова Д.Д. Микробные сообщества щелочных гидротерм.- Новосибирск: Изд-во СО РАН, 2006. 111 с.

46. Намсараев З.Б., Горленко В.М., Намсараев Б.Б., Бурюхаев С.П., Юрков В.В. Структура и биогеохимическая активность фототрофных сообществ щелочного Большереченского термального источника // Микробиология. 2003.- Т.72.- С. 228-238.

47. Нестеров А.И., Иванов М.В. Экология метанотрофных бактерий / Успехи микробиологии. 1983. Т. 18. С.3-18.

48. Панкратов Т. А., Белова С.Э. Оценка филогенетического разнообразия прокариотных микроорганизмов в сфагновых болотах с использованием метода FISH//Микробиология. 2005. Т. 74. № 6. С. 832-833.

49. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: "Мир", 1978.-332 с.

50. Пиннекер Е.В., Писарский С.И., Ломоносов И.С. и др. Гидрогеология Прибайкалья. М.: Наука, 1980. 168 с.

51. Романовская В.А., Столяр С.М., Малашенко Ю.Р. Систематика метилотрофных бактерий. Киев: "Hayкова думка". 1991. 212 с.

52. Соколов И.Г., Романовская В. А. Механизмы облигатной метилотрофии//Микробиол. журнал, 1992. Т.54. № 5. С. 87-104.

53. Соколов А.П., Троценко Ю.А. Циклический путь окисления формальдегида у Pseudomonas oleovorans // Микробиология. 1977. Т. 46. № 6. С. 1119-1121.

54. Слободова Н.В., Колганова Т.В., Булыгина Е.С., Кузнецов Б.Б., Турова Т.П., Кравченко И.К. Сравнительная характеристика метанотрофных накопительных культур с помощью серологических и молекулярных методов //Микробиология. 2006. Т.75. № 3. С.397-403.

55. Сузина Н.Е., Фихте Б. А. Ультраструктурная организация метанотрофных бактерий. Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1986. 85 с.

56. Троценко Ю.А., Доронина Н.В., Хмеленина В.Н. Биотехнологический потенциал аэробных метилотрофных бактерий: настоящее и будущее // Прикл. биохимия и микробиология. 2005. Т.41. № 5. -С. 495-503.

57. Троценко Ю.А., Четина Е.В. Энергетический метаболизм метилотрофных бактерий / Успехи микробиологии. 1988. Т.22. С.3-34.

58. Хмеленина В.Н., Калюжная М.Г., Троценко Ю.А. Физиолого-' биохимические особенности галоалкалотолерантного метанотрофа II Микробиология. 1997. Т.66. №4. С.447-453.

59. Хмеленина В.Н., Троценко Ю.А. Особенности метаболизма облигатных метанотрофов / Труды Института микробиологии им. С.Н. Виноградского РАН. Вып. 13: к 100 летию открытия метанотрофии отв. ред. В.Ф.Гальченко. - М: Наука, 2006. - С. 24-44.

60. Храпцова Г.И., Цаплина И.А., Серегина Л.М., Логинова Л.Г. Термофильные бактерии горячих источников Бурятии // Микробиология. 1984. Т.53. Вып.1. СЛ37-141. ;

61. Цыренжапова И.С., Ешинимаев Б.Ц., Хмеленина В.Н., Осипов Г.А., Троценко Ю.А. Новый термотолерантный аэробный метанотроф из термального источника Бурятии // Микробиология. 2007. Т. 76. № 1. С. 132135.

62. Anthony C. Bacterial oxidation of methane and methanol.// Adv. Microb. Physiol. 1986. V.27. P.l 13-210.

63. Anthony C. Assimilation of carbon in methylotrophs. In: Biology of methylotrophs (eds. Goldberg I. and Rokem J.S.), 1991. P.79-109. Butterworth-Heinemann, Stoneham, Mass.

64. Auman A.J., Stolyar S., Costello A.M., Lidstrom M.E. Molecular characterization of methanotrophic isolates from freshwater lake sediment // Appl. Environ. Microbiol. 2000. V. 66. № 12. P. 5259-5266.

65. Auman AJ., Speake C.C., Lidstrom M.E. nifH sequence and nitrogen fixation in type I and type II methanotrophs // Appl. Environ. Microbiol. V.67. №9. 2001. P.4009-4016.

66. Anthony С., Zatman L.J. The microbial oxidation of methanol. The methanol-oxidizing enzyme of Pseudomonas sp. M27 I I Biochem. J. 1964. V.92. P.614-621.

67. Attwood M.M., Quayle J.R. Formaldehyde as a central intermediary metabolite of methylotrophic metabolism. Microbial growth on Cpcompounds. / Eds Crawford R.L., R. S. Hanson. Amer. Soc. Microbiol. 1984. Washington D.C. P.315-323.

68. Benstead J., King G.M. Response of methanotrophic activity in forest soil to methane availability // FEMS Microbiol. Ecol. 1997. V.23. P.333-340.

69. Bodrossy L., Kovacs K.L., McDonald I.R., Murrell J.C. A novel thermophilic methane-oxidising y-Proteobacterium // FEMS Microbiol. Lett., V.170. 1999. №2, P.335-341.

70. Bodrossy L., Murrell J.C., Dalton H., Kalman M., Puskas L.G., Kovacs K.L. Heat-tolerant methanotrophic bacteria from the hot-water effluent of a natural-gas field. //Appl. Environ. Microbiol. 1995. V.61. P.3549-3555.

71. Bourne, D.G., Holmes, A.J., Iverson, N., Murrell J.C. Fluorescent oligonucleotide rDNA probes for specific detection of methane oxidizing bacteria // FEMS Microbiol Ecol. 2000. V.31. P.29-38

72. Bowman J.P., Sly L.I., Stackebrandt E. The phylogenetic position of family Methylococcaceae // Int. J. Syst. Bacteriol. 1995. 45. № 1. P.182-185.

73. Brock T.D. Biology of Microorganisms. 9th ed. Prentice-Hall International London, UK, 2000.

74. Bruins M.E., Janssen A.M., Boom R. M. Thermozymes and their applications//Appl. Biochem. Biotechnol. 2001. V.90. P.155-185.

75. Bussmann I., Pester M., Brune A., Schink B. Preferential cultivation of type II methanotrophic bacteria from littoral sediments (Lake Constance) // FEMS Microbiol. Ecol. 2004. V. 147. № 1. P. 179-189.

76. Carini S., Bano N., LeCleir G., Joye S.B. Aerobic methane oxidation and methanotroph community composition during seasonal stratification in Mono Lake, California (USA)//Environ Microbiol. 2005. V.7. P.l 127-1138.

77. Chan S.I., Chen K.H.C., Yu S.S.F., Chen C.L., Kuo S.S.J. Toward delineating the structure and function of the particulate methane monooxygenase from methanotrophic bacteria. Biochemistry. 2004. V.43. P. 4421-4430

78. Dalton H. The Leeuwenhoek Lecture 2000 the natural and unnatural history of methane-oxidizing bacteria. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2005. V.360. P. 1207-1222.

79. Dedysh S.N., Knief C., Dunfield P.F. Methylocella species are facultatively methanotrophic. // J. Bacteriol. 2005. V.187. P.4665-4670.

80. Doronina N.V., Darmaeva Ts., Trotsenko Y.A. Methylofaga alcalica sp.nov., a new alcaliphilic and moderately halophilic, obligately methylotrophic bacterium from the East Mongolian saline soda lake // Int. J.Syst. Evol. Microbiol. 2003. V.53.P.223-229.

81. Dunfield. P.F., Khmelenina V.N., Suzina N.E., Trotsenko Y.A., Dedysh S.N. Methylocella silvestris sp. nov., a novel methanotroph isolated from an acidic forest cambisol // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2003. V.53. P. 1231-1239.

82. Gilbert В., McDonald I.R., Finch R., Stafford G.P., Nielsen A.K., * Murrell J.C. Molecular analysis of the pmo (Particulate Methane Monooxygenase) operons from two type II methanotrophs // Appl. Environ. Microbiol. 2000. V.66. P.966-975.

83. Graham D. W., Chaudhary J. A., Hanson R. S., Arnold R. G. Factors affecting competition between type I and type II methanotrophs in continuous-flow reactors //Microb. Ecol. 1993. V.25. P.l-17.

84. Hanson R.S. and Hanson Т.Е. Methanotrophic bacteria // Microbiol. Rev. 1996. V.60. №2. P.439-471.

85. Jannash h.W., Wirsen C.O. Morphological survey of microbial mats near deep-sea thermal vents // Appl. Environ. Microbiol. 1981. V.41. P.528-538.

86. Jonkers H.M., Ludwig R., R. de Wit, Pringault O., Muyzer G., Niemann

87. H., Finke N., D. de Beer. Structural and functional analysis of microbial mat ecosystem from a unique permanent inland lake: 'La Salada de Chiprana' (NE Spain) // FEMS Microbiology Ecology. 2003. V. 44. P. 175-189.

88. Khmelenina V.N., Kalyuzhnaya M.G., Starostina N.G., Suzina N.E., Trotsenko Y.A. Isolation and characterization of halotolerant alkaliphilic methanotrophic bacteria from Tuva soda lakes // Curr. Microbiol. 1997. V. 35. № 5. P. 257-261.

89. Khmelenina, V.N., Kalyuzhnaya, M.G., Sakharovsky, V.G., Suzina, N.E., Trotsenko, Y.A., Gottschalk G. Osmoadaptation in halophilic and alkaliphilic methanotrophs //Arch. Microbiol. 1999. V.172. №5. P.321-329.

90. Marmur J.A. A procedure for the isolation of deoxyribonucleic acid from microorganisms // J. Mol. Biol. 1961. V.3. P.208-214.

91. Madigan M.T., Oren A. Thermophilic and halophilic extremophiles. Curr. Opin. Microbiol. 1999. V.2. P.265-269.

92. McDonald I.R., Murell J.C. The methanol dehydrogenase structural gene mxaF and its use as a functional gene probe for methanotrophs and methylotrophs II Appl. Environ. Microbiol. 1997. V.63. № 8. P.3218-3224.

93. McDonald I.R., Upton M., Hall G., Pickup R,W., Edwards C., Saunders J.R., Ritchie D.A., Murrell J.C. Molecular ecological analysis of methanogens and methanotrophs in blanket bog peat // Microbiol. Ecol. 1999. V.38. P. 225-233.

94. McDonald I.R., Bodrossy L., Chen Y., Murrell J.C. Molecular techniques for the study of aerobic methanotrophs // Appl. Environ. Microbiol. 2008. V. 74. P. 1305-1315.

95. Murrell J.C., Gilbert В., McDonald I.R. Molecular biology and regulation of methane monooxygenase // Arch. Microbiol. 2000a.V.173'. P.325-332.

96. Murrell J.C., McDonald I.R., Bourne D.G. Molecular methods for the study of methanotroph ecology. FEMS Microbiol. Ecol. 1998. V.27. P. 103-114.

97. Murrell J.C., McDonald I.R., Gilbert B. Regulation of expression of methane monooxygenases by copper ions. Trends in Microbiology.2000b. V.8. P.221-225.

98. Semrau J.D., DiSpirito A.A., Murrell J.C. Life in the extreme: thermoacidophilic methanotrophy // Trends Microbiol. 2008. V. 16. № 5. P. 190193.

99. Theisen A.R., Murrell J.C. Facultative methanotrophs revisited. J. Bacteriol. 2005. 187(13): 4303-4305.

100. Trotsenko Y.A., Doronina N.Y., Govorukhina N.I. Metabolism of non-motile obligately methylotrophic bacteria // FEMS Microbiol. Lett. 1986. V.33. P.293-297.

101. Trotsenko Y.A., Khmelenina V.N., Beschastny A.P. The ribulose monophosphate (Quayle) cycle: news and views // "Microbial growth on Crcompounds" / Eds Lidstrom M.E., Tabita R. Kluwer Publishers. Dordrecht. 1996. P. 4-8.

102. Trotsenko Y.A., Khmelenina V.N. Biology of extremophilic and extremotolerant methanotrophs // Arch. Microbiol. 2002. V. 177. P.123-131.

103. Trotsenko Y.A., Khmelenina V.N. Aerobic methanotrophic bacteria of cold ecosystems // FEMS Microbiol. Ecol. 2005. V.53. P.15-26.

104. Trotsenko Yu. A., Murrell J. C. Metabolic aspects of aerobic obligate methanotrophy // Adv. Appl. Microbiol. 2008. V. 63. Chapter 5. P. 183-229.

105. Theisen A.R., Murrell, J.C. Facultative methanotrophs revisited // J. Bacteriol. 2005. V.187. P. 4303-4305.

106. Toukdarian A.E., Lidstrom M.E. Nitrogen metabolism in a new obligate methanotroph 'Methylosinus' strain 6 // J. Gen. Microbiol. 1984. V.130. P.1827-1837.

107. Tokuda H., Unemoto T. Characterization of the respiration-dependent Na+ pump in the marine bacterium Vibrio alginolyticus II J. Biol. Chem. 1982. V.257. P.10007-10014.

108. Tokuda H., Unemoto T. Na+ is translocated at NADH: quinone oxidoreductase segment in the respiratoiy chain of Vibrio alginolyticus 11 J. Biol. Chem. 1984. V.258. P.7785-7790.

109. Trotsenko Y.A. Metabolic features of methane- and methanol-utilizingbacteria II Acta Bacteriol. 1983. V.3. № 3. P.301-304.t

110. Trotsenko Y.A., Doronina N.V., Govorukhina N.I. Metabolism of non-motile obligately methylotrophic bacteria 11 FEMS Microbiol. Lett. 1986. V.33. P.293-297.

111. Trotsenko Y.A., Khmelenina V.N., Beschastny A.P. The ribulose monophosphate (Quayle) cycle: news and views // "Microbial growth on Cj-compounds" / Eds Lidstrom M.E., Tabita R. Kluwer Publishers. Dordrecht. 1996. P. 4-8.

112. Trotsenko Y.A., Khmelenina V.N. Aerobic methanotrophic bacteria of cold ecosystems // FEMS Microbiol. Ecol. 2005. V.53. P.15-26.

113. Trotsenko Y.A., Shishkina V.N., Govorukhina N.I., Sokolov A.P. Biochemical basis for obligate methylotrophy and obligate autotrophy: comparative aspects. Winogradsky Symp. on Lithoautotrophy. 1987. P.26.

114. Trotsenko Y.A., Shishkina V.A. Studies on phosphate metabolism in obligate methylotrophs //FEMS Microbiol. Lett. 1990. V.87. P.267-271.

115. Trotsenko Yu. A., Murrell J. C. Metabolic aspects of aerobic obligate methanotrophy // Adv. Appl. Microbiol. 2008. V. 63. Chapter 5. P. 183-229.

116. McDonald I.R., Bodrossy L., Chen Y., Murrell J.C. Molecular techniques for the study of aerobic methanotrophs // Appl. Environ. Microbiol. 2008. V. 74. P. 1305-1315.

117. Ventosa A., Nieto J.J., Oren A. Biology of moderately halophilic aerobic bacteria // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. Y.62. № 2. P.504-544.

118. Vorholt J.A. Cofactor-dependent pathways of formaldehyde oxidation in methylotrophic bacteria // Arch. Microbiol. 2002. V.178. P.239-249.

119. Vorholt J.A., Chistoserdova L., Lidstrom M.E., Thauer R.K. The NADP-dependent methylene tetrahydromethanopterin dehydrogenase in Methylobacterium extorquens AMI // J.Bacteriol. 1998. Y.180. № 20. P.5351-5356.

120. Ward D.M. Thermophilic methanogenesis in a hot spring algal-bacterial mat (71-30°C) // Appl. Environ. Microbiol. 1978. V.35. P. 1019-1026.

121. Wartiainen I., Hestnes A.G., McDonald I.R., Svenning M.M. Methylobacter tundripaludum sp. nov., a methane-oxidising bacterium from arctic wetland soil on the Svalbard islands, Norway (78°N) // Int. J. Syst. Evol. Microbiol.2006. V.56. P.109-113.

122. Wartiainen I., Hestnes A.G., McDonald I.R., Svenning M.M. Methylocystis rosea sp. nov., a novel methanotrophic bacterium from Arcticwetland soil, Svalbard, Norway (78° N) // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2006. V.56: 541-547

123. Ward B.B., Martino P.P., Diarz M.C., Joe S.B. Analysis of ammonia-oxidizing bacteria from hypersaline Mono Lake, California, on the basis of 16S RNA sequences // Appl. Environ. Microbiol. 2000. V.66. № 7. P.2873-2884.

124. Whittenbury R., Davies S.L., Dawey J.F. Exospores and cysts formed by methane-utilizing bacteria // J. Gen. Microbiol. 1970. V.61. P.219- 225.

125. Whittenbury R., Krieg N. Methylococcaceae fam. noy. In Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 1984. Vol. 1. P. 256-262. Williams and Wilkins, Baltimore.

126. Wise M.G., McArthur J.V., Shimkets L.J. Methylosarcina fibrata gen. nov., sp.nov. and Methylosarcina quisquiliarum sp. nov., novel type I methanotrophs //Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001. V.51. P.611-621.

127. Wood W.A. Assay of enzymes representative of metabolic pathways. Methods Microbiol. 1971. V.6A. P.421.

128. Wosten, M.M.S.M. Eubacterial sigma-factors // FEMS Microbiol. Rev. 1998. V.22. P.127-150.

129. Xin J-Y., Cui J-R., Ни X-X, Li S-B, Xia C-G., Zhu L-M., Wang Y-Q. Particulate methane monooxygenase from Methylosinus trichosporium is a copper-containing enzyme. Biochem. Biophys. Res. Comm. 2002. V.295. P.182-186.

130. Yasueda H., Kawahara Y., Sugimoto S. Bacillus subtilis yckG andyckF encode two key enzymes of the ribulose monophosphate pathway used by methylotrophs, and ускН is required for their expression // J. Bacterid. 1999. V.181. P.7154—7160.

131. Yoch D.C., Chen Y.P., Hardin M.G. Formate dehydrogenase from the methane oxidizer Methylosinus trichosporium OB3b // J. Bacterid. 1990. Y.172. № 8. P.4456-4463.

132. Yurimoto H., Hirai R., Yasueda H., Mitsui R., Sakai Y., Kato N. The ribulose monophosphate pathway operon encoding formaldehyde fixation in a thermotolerant methylotroph, Bacillus brevis SI // FEMS Microbiol. Lett. 2002. V.214. P.189-193.

133. Yumoto I., Yamasaki K., Sawabe Т., Nakano K., Kawasaki K., Ezura Y and Shinano H. Bacillus horti sp. nov., a new gram-negative alkaliphilic bacillus // Int. J. Syst. Bacteriol. 1998. V.48. P.565-571.4

134. Zahn J.A., Bergmann D.J., Boyd J.M., Kunz R.C., Dispirito A.A. Membrane-associated quinoprotein formaldehyde dehydrogenase from Methylococcus capsulatus Bath. 2001. V. 183. P. 6832-6840.

135. Zahn J. A., DiSpirito A. A. Membrane-associated methane9monooxygenase from Methylococcus capsulatus (Bath) // J. Bacteriol. 1996. Y.178. P.1018-1029.

136. Zhilina T.N., Zavarzin G.A. Alkaliphilic anaerobic community at pH 10. Curr. Microbiol. 1994. V.29. P.109-112.1. БЛАГОДАРНОСТИ

137. Работа выполнена при поддержке грантов РФФИ 05-04-97215, 08-0498018, Президиума СО РАН №17.9, Минобразования РФ № РНП 2.1.1/2165 и НОЦ «Байкал», грантом мобст 07-04-90814.