Распространенность и биологические особенности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa

Николаева, Нина Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Распространенность и биологические особенности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Распространенность и биологические особенности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa"

На правах рукописи

НИКОЛАЕВА Нина Владимировна

РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НОЗОКОМИАЛЬНЫХ ШТАММОВ PSEUDOMONAS AERUGINOSA

03.02.03 Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 О НОЯ 2011

Пермь-2011

4859074

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Министерства здравоохранения и социального развития РФ, Пермь

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карпунина Тамара Исаковна Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Октябрьский Олег Николаевич доктор медицинских наук Зубарева Надежда Анатольевна

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии наук Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН, Оренбург

заседании диссертационного совета ДМ 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, Пермь, ул. Голева, 13. Факс: (342) 280 92 11

Автореферат диссертации размещен на официальном сайте Министерства образования и науки РФ (http://vak.ed.gov.ru) и сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http://www.iegm.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии

и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Автореферат разослан « » 2011 г.

Защита состоится

часов на

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук ■ Максимова Юлия Геннадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) распространена повсеместно, чему способствует высокая устойчивость этих бактерий к неблагоприятным условиям внешней среды, выраженная антагонистическая активность и резистентность к широкому спектру природных биологически активных веществ и антимикробных средств, применяемых в медицинской практике [Veesenmeyer, 2009; Пруцаков, 2011]. Для человека синегнойная палочка считается условно патогенной, так как далеко не во всех случаях при ее попадании в организм развивается заболевание. Вероятность инфекции значительно повышается при большом количестве возбудителя, попавшего в организм, а также в случае иммунодепрессии или иммунодефицита у ослабленных, истощенных людей, на фоне влияния стрессовых факторов, сопровождающих травмы, ожоги, различные хирургические вмешательства и тяжелую соматическую патологию. С учетом этих двух составляющих, а также высокой резистентности P. aeruginosae к противомикробным препаратам, заражение человека чаще всего может произойти во время пребывания именно в лечебном учреждении. Во всем мире прослеживается тенденция к увеличению удельного веса заболеваний, вызванных синегнойной палочкой, в общей структуре внутригоспитальных гнойно-септических инфекций [Mesaros, 2007; Голубкова, 2011; Свистунов, 2011]. Устойчивость Р. aeruginosae во внешней среде, непритязательность к условиям питания, наличие мощных факторов вирулентности, природная резистентность к соединениям с антибиотической активностью определяют широту ее распространения и формирования госпитальных штаммов, что зачастую превращает стационар в «эпидемический очаг» синегнойной инфекции [Азолов, 1999; Komolafe, 2003; Шагинян, 2005; Покровский, 2006; Туркутюков, 2006; Коршунова, 2007; Nemec, 2010]. Инфекционные осложнения, возникающие у госпитализированных больных, отягощают течение основного заболевания, увеличивают длительность стационарного

лечения и повышают число неблагоприятных исходов [Руднов, 2002; Азолов, 2004; Сидоренко, 2005]. Широкое распространение (до 75%) атипичных форм возбудителя затрудняет постановку диагноза, препятствует своевременному проведению лечебных и противоэпидемических мероприятий [Мороз, 1988; Зубков, 2003; Пыж, 2011]. Все это обусловливает необходимость поиска информативных методов диагностики синегнойной инфекции с вычленением тестов, способствующих дифференциации госпитальных и внебольничных штаммов.

Нерешенность проблемы борьбы с госпитальной синегнойной инфекцией с помощью химиотерапевтических препаратов побуждает проводить поиск дополнительных методов и средств, повышающих ее эффективность. В последние годы разрабатываются и внедряются новые технологии, способные, с одной стороны, подавлять вирулентность госпитальной микрофлоры, с другой - нивелировать ее устойчивость к антибиотикам. В этом плане возрастает интерес к озонотерапии. Обладая высоким окислительным потенциалом, озон проявляет бактерицидные свойства. Однако сведения о влиянии небактерицидных концентраций озона в физиологическом растворе, применяемых для парентеральной озонотерапии инфекционных осложнений, на патогенные свойства Р. aeшginosae, в том числе на ее пленкообразующую активность и антибиотикочувствительность, весьма немногочисленны. Вместе с тем технология системного использования озона, концентрация которого в физиологическом растворе не превышает 10 мг/л, существенно расширяет спектр его лечебных возможностей, в частности, при инфекционных осложнениях, за счет оптимизации нарушенного кислородного гомеостаза организма больного [ИвсЫнйег, 2000; Белых, 2004; Кувакина, 2006; Фисталь, 2006; Бокерия, 2007; Верхулецкий, 2007; Стручков, 2007; Уметалиев, 2007; Винник, 2008; Водякова, 2009; Дмитриева, 2009; Ви^авв^ 2009].

Цель исследования - изучение фенотипических особенностей нозокомиальных штаммов, как основы для оптимизации микробиологической диагностики и способов воздействия на Р. aeruginosa.

Основные задачи исследования:

1. На основании ретроспективного анализа (5 лет) установить частоту встречаемости Р. aeruginosa в стационарах различного профиля.

2. Изучить основные биологические свойства Р. aeruginosa, определяющие патогенный потенциал изолируемых штаммов.

3. Определить наиболее распространенные фенотипы антибиотикорезистентности в сочетании с экспресируемыми факторами патогенности изолятов Р. aeruginosa.

4. Разработать и усовершенствовать дифференцирующие тесты, позволяющие с большей эффективностью определять природу штаммов Р. aeruginosa, изолируемых в ЛПУ.

5. Оценить влияние абиотических и микробных факторов на уровень пленкообразующей активности штаммов Р. aeruginosa в условиях эксперимента.

Научная новизна. Впервые охарактеризована динамика распространенности Р. aeruginosa и инфицированности пациентов ЛПУ г.Перми в 2006-2010 гг. Определены типичные фенотипы Р. aeruginosa с учетом спектров их антибиотикочувствительности. Предложен и экспериментально обоснован набор биологических характеристик, способствующих дифференцировке госпитальных и внебольничных эковаров Р. aeruginosa. В условиях эксперимента впервые показана неоднозначность действия озонированного физиологического раствора с различным содержанием озона на планктонные и сесильные формы синегнойной палочки, его способность потенцировать бактерицидный эффект антибиотиков различных классов. Подтверждена высокая антагонистическая активность нозокомиальных культур Р. aeruginosa и предложен способ оценки характера их взаимоотношений при формировании бипленок с

наиболее часто встречающимися ассоциантами (приоритетная справка № 2010127885 от 06.07.2010).

Теоретическая и практическая значимость работы. Определение основных фенотипов в комплексе с антибиотикорезистентностью штаммов Р.ае^тоБа, циркулирующих в стационарах различного профиля, будет способствовать оптимизации в них эмпирической антибиотикотерапии и проведению противоэпидемических мероприятий, как в конкретном отделении, так и в ЛПУ в целом. Выявленные биологические особенности, в том числе способность к пленкообразованию изолируемых штаммов, предложенные оригинальные и модифицированные диагностические тесты (рацпредложение № 2549 от 07.06.2011 г.) позволят рационализировать методические подходы к оценке антибиотикочувствительности и принадлежности изолятов к госпитальным либо внебольничным эковарам. Установленные эффекты озонированного физиологического раствора на планктонные и структурированные в биопленки формы Р.аегщтоза (патент на изобретение №2425888 от 22.08.2011 г. «Способ оценки антибактериального действия озонированного физиологического раствора»), а также его сочетаний с антибиотиками различных классов демонстрируют целесообразность использования озона в комплексной терапии внутрибольничной синегнойной инфекции с учетом индивидуальных особенностей изолируемых штаммов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В многолетней динамике (2006—2010 гг.) наблюдается тенденция к росту инфицированное™ пациентов стационаров различного профиля представителями Р.аегщтова, среди которых доминируют штаммы, полирезистентные к регламентированному набору антисинегнойных препаратов.

2. Проявление биологических свойств штаммами Р.аегщтоха, изолируемыми в различных стационарах, в значительной степени варьирует. Преимуществом при колонизации любых экологических ниш с

последующим закреплением и распространением в стационаре обладают изоляты, отличающиеся высокой пленкообразующей способностью, антибиотикорезистентностью, антагонистической активностью и широким набором факторов вирулентности.

3. Пленкообразующая способность P.aeruginosa в контексте нозокомиальной синегнойной инфекции может рассматриваться как возможная мишень и средство оценки эффективности мер воздействия различных факторов на нозокомиальные штаммы.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: краевой конференции «Проблема синегнойной инфекции в реанимационных отделениях ЛПУ» (Пермь, 2009), VI Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2009), V Молодежной школе-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» (Москва, 2009), научной сессии ПГМА (Пермь, 2010), XIII Международном конгрессе по антимикробной терапии MAKMAX/ESCMID (Москва, 2011), 4th Congress of European Microbiologists FEMS (Geneva, Switzerland, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение в практику. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами, врачами-интернами на кафедрах микробиологии и вирусологии, общей хирургии Пермской государственной медицинской академии, а также в клинической практике ГКБ №4.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с общим планом НИР ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава, номер государственной регистрации 01.2.00709668.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы,

описания объектов и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 21 рисунком. Список литературы включает 322 работы отечественных и зарубежных авторов.

Автор выражает искреннюю признательность главному бактериологу г. Перми Н.С. Авдеевой, врачу-бактериологу ГКБ №7 И.П. Новоселовой, зав. лаб. ГКБ №4 М.И. Еремеевой, врачу-бактериологу О.Е. Ямлихановой, а также заведующей лабораторией водной микробиологии д.м.н. Н.В.Немцевой (Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН, г. Оренбург), к.м.н. С.М. Розановой и врачу-бактериологу В.П. Панюшову (Лаборатория микробиологии МУ «Клинико-диагностический центр», Екатеринбург), начальнику отдела учебно-методического и научного обеспечения ГБОУ ВПО ПГМА к.б.н. Н.В. Чемурзиевой за оказанное содействие и участие в работе. Отдельная благодарность директору ИЭГМ УрО РАН чл.-корр. РАН, профессору, д.м.н. В.А. Демакову, а также к.м.н. JI.M. Лемкиной и к.б.н. М.В.Кузнецовой за предоставленную возможность и содействие в выполнении работы.

Список сокращений. ГСИ - гнойно-септические инфекции, ЛПУ -лечебно-профилактическое учреждение, МПК - минимальная подавляющая концентрация, НОФР - неозонированный физиологический раствор, ОП -оптическая плотность, ОРИТ - отделение реанимации и интенсивной терапии, ОФР - озонированный физиологический раствор.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучено 204 штамма Pseudomonas aeruginosa, выделенных в 20082010 гг. от больных хирургических, акушерских и детских стационаров г. Перми, г. Екатеринбурга и г. Оренбурга. В качестве контрольного использовали референс-штамм P. aeruginosa АТСС 27853. Повторную идентификацию предоставленных клиническими лабораториями микробных

культур проводили с использованием НЕФЕРМ-тест 24 Лахема Микро-Ла-Тест (MIKRO-LA-TEST, Чехия).

При проведении исследований P. aeruginosa культивировали в аэробных условиях при температуре 37°С в течение 18-24 часов на жидкой и агаризованной среде Лурия-Бертани, ацетамидном агаре. Продукцию пиоционина оценивали согласно Е. Deziel (2001). Фосфолипазную активность изучали на желточном агаре [Лабинская, 2004]. Качественную оценку гемолитической активности проводили на кровяном агаре, количественную - по D. Dacheux (2001) с использованием эритроцитов барана и человека. Для изучения пленкообразующей активности за основу была взята методика O'Toole G.F. (2000). Гидрофобность клеток оценивали по их относительному распределению между водной фазой и фазой органического растворителя гексадекана [Rosenberg, 1980; Коваленко, 1998]. Чувствительность к антибиотикам определяли на Мюллер-Хинтон агаре в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». Для получения экзометаболитов тест-штаммов культуральную жидкость 18-часовых тест-культур отделяли фильтрованием через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм.

При оценке характера взаимного влияния изучаемых штаммов P. aeruginosa и других распространенных возбудителей ГСИ были использованы тест-культуры соименных видов из государственной коллекции патогенных микроорганизмов ГИСК им. Л. А. Тарасевича с типичными морфологическими и биохимическими свойствами (Е. coli №25922 АТСС, К. pneumoniae №49619 АТСС, S. aureus №25923 АТСС, S. haemolyticus ССМ №2737, С. albicans №24433 АТСС). Результаты оценивали по оригинальной методике, изучая формирование моно- и смешанных биопленок. Если наблюдали аддитивный эффект, т.е. показатель смешанной биопленки (ОПт1Х) достоверно не отличался от суммы показателей каждого тестируемого штамма (ОП1+ОП2), - регистрировали

нейтральный характер, если показатель ОПтк>ОП|+ОП2 - синергический характер, если показатель ОП т;х<ОП1+ОП2 - антагонистический характер в межмикробном взаимодействии.

Действие озонированного физиологического раствора на рост, пленкообразующую способность и антибиотикорезистентность изолятов, а также разрушение биопленок, сформированных P. aeruginosae, под влиянием озона изучали по оригинальной методике (Патент №2425888 от 22.08.2011 г). Для получения озонированного физиологического раствора использовали медицинский озонатор с широким диапазоном регулирования концентрации озонокислородной смеси. Физиологический раствор озонировали путем барботажа до получения необходимой концентрации.

Статистическую обработку данных и графическое изображение результатов проводили с использованием программ Statistica 6,0 и Excel 2003, а также авторского пакета прикладных электронных таблиц «Stat2000» [Шелудько, 2001]. Различие показателей оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента. Для оценки связи двух признаков рассчитывали величину статистического критерия у2. Силу связи признаков измеряли коэффициентом сопряженности (информативности) Пирсона. Выравнивание динамического ряда производили с использованием метода наименьших квадратов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Динамическая характеристика частоты встречаемости Р. aeruginosa среди микробных культур, изолируемых от пациентов различных ЛПУ г. Перми. Согласно сводным статистическим данным бактериологической службы г. Перми в 2006-2010 гг. был обследован 471291 пациент, из клинического материала обследованных изолировано 434362 бактериальных и грибковых культуры, в том числе 1,62 ±0,038% Р. aeruginosae, при среднемноголетнем уровне инфицированности 15,16 ±0,354 на 1000 обследованных. Выравнивание динамического ряда показателей, оценка соотношения фактических данных и прямолинейной

тенденции показали, что направленность пятилетней динамики инфицированности P. aeruginosa характеризовалась общей тенденцией к увеличению с темпом прироста 6,2% (рис.1). За 5 лет темп прироста данного показателя составил 28,35%.

X I 17

СО

о 16

ч о 15

1С

о 14

о 13

X 12

Рис. 1. Прямолинейная тенденция инфицированности P. aeruginosa.

В динамике обсемененности разного клинического материала наблюдали существенные колебания. На фоне увеличения инфицированности такие биологические среды, как раневое отделяемое, моча и мокрота, сохраняли свою приоритетную значимость в контексте выделения возбудителей и распространения синегнойной инфекции, оставаясь наиболее актуальным клиническим материалом (рис. 2).

□ Отделяемое ран В Моча

■ БАЛЖ

0 Отделяемое уха

□ Другой материал

1 Мокрота

3 Отделяемое зева и носа I Отделяемое полостей 3 Секционный материал

Рис. 2. Структура исследуемого материала, наиболее часто служившего источником P. aeruginosa (среднее за 2006-2010 гг.).

Одним из характерных биологических признаков, отличающих синегнойную палочку от других микроорганизмов, является способность синтезировать водорастворимый пигмент - пиоцианин, регистрация которого используется в рутинной практике при идентификации P. aeruginosa. Хотя при первичном высеве на плотные среды атипичные беспигментные колонии встретились в нашем исследовании лишь в 4,4 % случаев, количественная оценка пигментообразования разными штаммами выявила существенные различия его интенсивности. Следовательно, только факт наличия этого признака, подлежащий учету при традиционном бактериологическом анализе, не позволяет оценить его вклад в патогенный потенциал изолированной культуры.

В клинических лабораториях особое внимание уделяется гемолитической активности P. aeruginosa, которая определяется при посеве на кровяной агар, в лучшем случае, с определением величины зоны гемолиза (просветления среды) вокруг колонии, появление которой исследователи связывают, главным образом, с действием фосфолипазы С, устойчивой к инактивации белками плазмы крови. Между тем, хорошо известно, что многие секретируемые субстанции, в том числе и пигменты синегнойной палочки, обладают гемолитическими свойствами. Для получения более полного представления о гемолитической активности и гемолизинах изучаемого изолята рутинную методику нельзя назвать исчерпывающей. При изучении данного признака за основу была взята количественная методика Dacheux D. (2001), модифицированная нами с учетом повышения эффективности сравнительного анализа изучаемых культур. Поскольку гемолизины синегнойной палочки различаются по устойчивости к температуре, дополнительно оценивали результаты «стандартного» и «терморезистентного» гемолиза. В сравнительном плане оценивали также информативность и целесообразность использования эритроцитов барана либо человека в проводимых тестах. Статистический, в том числе, корреляционный, анализ полученных результатов (табл. 1) позволил

заключить, что для изучения данного признака у нозокомиальных штаммов следует использовать эритроциты человека, так как они оказались более чувствительными к действию гемолизинов клинических изолятов P. aeruginosa. Продление времени экспозиции эритроцитов с супернатантами бактериальных культур до 3 часов обеспечивает большую информативность получаемых результатов. Сравнение результатов, полученных при высеве культур на кровяной агар и при 3-часовой экспозиции взвеси эритроцитов с их нативными метаболитами, выявило умеренную положительную корреляцию зарегистрированных при этом показателей (г = 0,52). После кипячения и инактивации термолабильных гемолизинов, прежде всего фосфолипазы С, связь уровня гемолитической активности супернатантов с результатами традиционного метода практически утрачивалась (г = -0,27). В то же время, было установлено, что как минимум у трети культур гемолиз обеспечивали терморезистентные фракции. Это лишний раз указывает на то, что используемый в лабораторной практике качественный метод оценки гемолитической активности не позволяет проводить корректный сравнительный анализ степени ее выраженности у разных штаммов, так как не выявляет действие значительной части компонентов.

Развитие прикрепленных сообществ - одна из основных стратегий выживания бактерий и в окружающей среде, и в организмах инфицируемых хозяев [Ильина, 2006]. Показано, что пленкообразующим было большинство штаммов P. aeruginosa, выделенных как в (ОРИТ) (75,5%), так и в других отделениях (76,8%) всех ЛПУ, но «реанимационная» группа чаще проявляла высокий уровень способности к пленкообразованию. Высокая пленкообразующая активность обеспечивает конкурентоспособность штаммов и, по-видимому, может служить одним из маркеров внутрибольничных изолятов. Установлено, что максимальное усиление пленкообразующей активности при 20°С отличало непленкообразующие штаммы. Ответные реакции отдельных изолятов со средней и высокой пленкообразующей активностью существенно различались по степени

Таблица 1.

Показатели лизиса эритроцитов человека и барана штаммами P. aeruginosa и их метаболитами

в различных экспериментальных условиях

ЭРИТРОЦИТЫ ЧЕЛОВЕКА ЭРИТРОЦИТЫ БАРАНА

% лизиса % снижения % лизиса % снижения

ШТАММ Экспозиция Экспозиция После показателя ГА Экспозиция Экспозиция После показателя ГА

1 с метабо- с метабо- термо- после термо- 1 с метабо- с метабо- термо- после термо-

литами литами обработки обработки литами литами обработки обработки

1 час 3 часа 1 час 3 часа

P.aeruginosa 801 1,40 48,54 48,84 41,72 14,6 0,62 36,93 47,49* 32,24 32,1

P.aeruginosa 27853 1,78 58,07 58,08 8,91 84,7 1,94 70,16 71,03 7,31 89,7

P.aeruginosa 117p 1,10 5,80 44,50* 6,99 84,3 1,30 5,03 27,54* 5,38 80,5

P.aeruginosa 5 1,47 56,56 57,63 2,15 96,3 1,70 40,84 55,14* 2,54 95,4

P.aeruginosa 3-7 2,48 20,99 95,44* 10,29 89,2 2,40 12,77 99,90* 8,18 91,8

P.aeruginosa 2459 1,51 5,97 9,13* 8,12 11,1 1,52 3,29 5,43* 4,83 11,0

P.aeruginosa 63 2,39 22,51 22,91 0,46 98,0 1,06 32,34 36,34 0,73 98,0

P.aeruginosa БАЛ Ж 1,81 57,23 56,10 53,93 3,9 1,81 36,87 54,62* 51,93 4,9

P.aeruginosa мокр 3,04 15,18 79,09* 18,78 76,3 1,50 34,53 67,59* 10,97 83,8

P.aeruginosa 9-3 1,10 54,32 63,22 61,12 3,3 1,61 47,06 70,64* 56,27 20,3

P.aeruginosa дренаж 2,10 68,88 67,58 1,18 98,3 1,50 61,62 77,35 0,26 99,7

P.aeruginosa 29a 1,00 28,87 29,32 0,73 97,5 1,10 21,90 27,39* 0,76 97,2

P.aeruginosa ИТТ 1,82 67,30 69,16 8,92 87,1 2,18 49,81 80,06* 8,48 89,4

P.aeruginosa 8-4 1,40 10,97 19,78* 17,01 14,0 1,70 2,95 7,06* 7,33 -3,8

P.aeruginosa 565 1,22 7,19 21,42* 0,21 99,0 1,64 2,62 7,76* 6,07 21,8

1 — Отношение диаметра зоны гемолиза к диаметру колонии; * —различия достоверны при сравнении с 1-часовой экспозицией, р<0,05.

выраженности, что позволяет рассматривать этот показатель в качестве прогностически значимого маркера при формировании госпитального штамма. К тому же, многие исследователи связывают формирование биопленок с образованием штаммами альгината (мукоида) - значимого фактора патогенности, продукция которого усиливается при комнатной температуре. По результатам нашего исследования, более 40 % культур было отнесено к мукоидным.

В значительном проценте случаев изолированные культуры оказались полирезистентными, их доля составила 79,4 %, при этом 22,8 % из них были устойчивы к действию всех антибиотиков взятого спектра, т.е. характеризовались панрезистентностью. Особого внимания заслуживает прослеженный нами высокий процент устойчивости к меропенему (46,6 %) и имипенему (78,4 %) у штаммов Р. aeruginosa, изолированных в разных стационарах г. Перми, хотя еще в 90-х годах в многоцентровом клиническом исследовании, проведенном в России, 92 % изолятов Р. aeruginosa от больных с тяжелыми инфекциями в ОРИТ были чувствительны к карбопенемам, в частности, меропенему [Яковлев, 1998].

В стационарах селективное воздействие антибиотиков ускоряет процесс эволюции Р. aeruginosa, где формируются полирезистентные бактериальные популяции [Сидоренко, 2005]. Именно поэтому чаще всего о госпитальной природе возбудителя ГСИ судят по его устойчивости к антибактериальным средствам. Однако, тот факт, что, как внутри-, так и внебольничные варианты синегнойной палочки оказывались полирезистентными, свидетельствует о том, что этот традиционный маркер госпитальности зачастую недостаточен для достоверной оценки природы выделенного штамма, так как для Р. aeruginosa характерна природная устойчивость к различным соединениям с антибактериальной активностью. Учитывая тот факт, что гены лекарственной устойчивости часто обнаруживаются в ассоциациях с детерминантами факторов патогенности, полирезистентные бактерии обычно более вирулентны и обладают

значительной способностью к распространению [Васина, 2008]. В этой связи, основной раздел нашей работы был посвящен изучению биологических особенностей нозокомиальных штаммов и совершенствованию диагностических подходов к их дифференциации.

Пленкообразующая активность и полирезистентность к антибактериальным препаратам у P. aeruginosa не являются взаимообусловленными признаками, однако образование биопленок, как известно, значительно снижает эффективность антибиотикотерапии и результативность антисептических мероприятий. Тот факт, что способность к пленкообразованию в большинстве случаев сочетается с продукцией альгината и высокой антибиотикорезистентностью, вполне логичен и укладывается в существующие представления о персистентных свойствах бактерий. На основании изучения антибиотикограмм изолятов многопрофильных стационаров был выявлен наиболее распространенный антибиотикофенотип (А), характеризующийся устойчивостью к цефтазидиму, цефепиму, имипенему, гентамицину, амикацину и ципрофлоксацину (табл. 2). С учетом панрезистентных вариантов, резистентность к этому набору антибиотиков была свойственна более чем 40% изученных культур, большинство из которых обладали схожим набором факторов патогенности, отличаясь не более чем по одному признаку.

Таблица 2.

Наиболее распространенные фенотипы антибиотикорезистентности

изученных штаммов P. aeruginosa

Фенотипы антибиотикорезистентности Число штаммов %

Цефтазидим + цефепим + имипенем + гентамицин + амикацин + ципрофлоксацин (фенотип А) 52 25,5

Панрезистентные штаммы (фенотип В) 37 18,1

Цефепим + имипенем + гентамицин + ципрофлоксацин (фенотип С) 19 9,3

Цефтазидим (фенотип О) 12 5,9

Цефтазидим + имипенем + гентамицин + амикацин + ципрофлоксацин (фенотип Е) 11 5,4

Данные штаммы, в основном, были выделены в ОРИТ, однако присутствовали и в материале из других отделений, что характеризует отделение реанимации, как возможное место возникновения и источник распространения госпитальных штаммов P. aeruginosa. Более того, штаммы, изолированные из ОРИТ всех ЛПУ, наряду с выраженной множественной лекарственной устойчивостью характеризуются наиболее широким набором экспрессируемых факторов патогенности. С одной стороны, в этом проявляется определенное противоречие, так как защитные реакции организма у пациентов этих отделений в большинстве случаев снижены, и микроорганизмам нет необходимости проявлять патогенный потенциал в полной мере. С другой стороны, условия и средства оказания помощи, контингента больных именно в отделениях реанимации становятся мощным провоцирующим и селективным фактором, способствующим изменению свойств бактерий. Характерная выраженность факторов патогенности и устойчивости к антибактериальным препаратам наблюдается и в отделениях с близким ОРИТ «статусом». Сочетание устойчивости к антибиотикам широкого набора факторов вирулентности с высокой степенью пленкообразующей способности указывает на то, что в условиях стационара, и прежде всего ОРИТ, именно в пленках накапливается высокий патогенный потенциал, вследствие чего пленкообразующие штаммы нередко становятся возбудителями острых инфекций. В целом полученные результаты по изучению особенностей формирования биопленок внутрибольничными штаммами P. aeruginosa указывают на то, что данный признак может служить одним из маркеров госпитальности, а выявление изолятов с высокой степенью пленкообразования требует новых подходов к организации и проведению дезинфекционных мероприятий по элиминации возбудителя.

предположили, что характер межмикробных взаимоотношений с участием Р. aeruginosa целесообразно определять при сравнительном анализе сформированных ассоциантами моно- и бипленок. (заявка на изобретение №2010127885 от 06.07.2010). Использование в качестве тест-культур штаммов микроорганизмов, наиболее часто выделяемых в ассоциации с синегнойной палочкой, позволило выявить нейтральный, синергический и антагонистический типы взаимодействия. При этом установлено, что при совместном культивировании Р. aeruginosa с грамположительными бактериями, развиваются все три типа взаимодействия, а определяющее значение имеют клеточные компоненты тест-культур, в то время как с грамотрицательными бактериями и их метаболитами - в большинстве случаев наблюдается однонаправленный эффект, ингибирующий пленкообразование. Очевидно, что при формировании смешанных биопленок могут складываться разнообразные метаболические взаимоотношения между ассоциантами, усугубляющие инфекционный процесс либо препятствующие его развитию.

Нами предложена и апробирована модификация диско-диффузионного метода определения антибиотикочувствительности, основанная на отсроченном выкладывании дисков на бактериальный газон и имитирующая воздействие на сформированную биопленку. После предлагаемой 10-часовой отсрочки у штаммов с различной степенью чувствительности исчезновение зоны задержки роста зафиксировано у 88,4% исследованных штаммов. При этом обнаружена сильная зависимость (Кп=0,94) между исчезновением зоны и способностью штамма к пленкообразованию. Такой подход дополняет регламентированную методику и решает две задачи: во-первых, он может способствовать более корректному выбору антибактериального средства с учетом пленкообразующей способности штамма, во-вторых, позволяет сделать вывод о степени выраженности последней (рацпредложение №2549 от 07.06.2011).

В клинической практике все чаще возникает проблема появления штаммов бактерий, резистентных к наиболее распространенным антибактериальным препаратам, что ограничивает возможности антибиотикотерапии. Поэтому одно из важнейших направлений развития современной медицины - создание альтернативных противомикробных средств и методов лечения, обладающих, наряду с высокой эффективностью, хорошей переносимостью и простотой в применении. Лечение воспалительных процессов с помощью озона - один из таких методов. Исследователи связывают его эффективность с выраженными детоксикационными, иммуностимулирующими, регенерирующими свойствами. Приводимые в литературе данные по поводу прямого воздействия терапевтических концентраций озона на бактериальную флору довольно противоречивы. Нами установлено, что обработка культур ОФР с концентрацией озона 2,5 и 5 мг/л в течение 10-минутной экспозиции стимулировала накопление биомассы, при этом для каждого третьего штамма различия с контролем были достоверны (р<0,05). Концентрация озона 7,5 мг/л значимо замедляла этот процесс.

Наибольшее снижение пленкообразующей способности наблюдали также при концентрации 7,5 мг/л: ОП580 элюата уменьшалась в среднем с 1,009±0,079 до 0,770±0,090. Массивность пленки при концентрации 2,5 мг/л либо значимо не изменялась, либо достоверно увеличивалась. Повышение содержания озона до 5 мг/л усиливало пленкообразование у половины исследуемых штаммов Р. aeruginosae в среднем с 1,837±0,098 до 1,998±0,055 ЕД ОП580, в остальных случаях оно либо значимо не изменялось, либо достоверно снижалось (рис. 3).

Обработка сформированных биопленок ОФР разных концентраций приводила к их частичному (при содержании озона 2,5-5 мг/л) или практически полному разрушению (при 7,5 мг/л). Пленки подвергались деструктивному воздействию озона независимо от того, как «откликались» на него планктонные формы образующих их штаммов (рис.4). Очевидно, что

□ НОФР

И ОФР 2,5 мг/л

■ ОФР 5 мг/л

■ ОФР 7,5 мг/л

«г ¿г

<у <нг

г- я-

if _ -f _ iF . &

я-

f я-

я■ я-

■f

я-

f f я-

Рис. 3.

Изменение пленкообразующей активности бактериальных культур под влиянием ОФР разных концентраций (показатели оптической плотности элюата).

□ НОФР я ОФР 2,5 мг/л И ОФР 5 мг/л ■ ОФР 7,5 мг/л

^ ¿ft

^ еГ ^ ^

ЧГ Ф <!Г "¿Р

Я- Я- Я- Я-

я-

я- я- я- я-

Рис. 4. Разрушение биопленок, сформированных бактериальными культурами, под влиянием ОФР разных концентраций.

при окислительном стрессе слабой интенсивности может наблюдаться стимуляция роста и пленкообразующей активности госпитальных штаммов P. aeruginosa, что необходимо учитывать при назначении озонотерапии.

Наиболее существенным эффектом, прослеженным при воздействии озона in vitro, явилось снижение МПК антибактериальных препаратов после обработки штаммов ОФР. При этом чем выше была концентрация озона, тем восприимчивее становился микроорганизм. В то же время концентрации препаратов, отмеченные ранее как минимальные подавляющие, помимо роста бактерий ингибировали их пленкообразование до уровня контроля.

Тот факт, что озон вызывает деструкцию сформированных биопленок и под влиянием ОФР повышается чувствительность к антибиотикам как планктонных, так и сесильных форм, указывает на целесообразность его использования в клинической практике. Однако для выработки конкретных рекомендаций необходимо проведение углубленных исследований, раскрывающих механизмы такого влияния.

ВЫВОДЫ

1. Среднемноголетний показатель инфицированности P. aeruginosa за период 2006-2010 гг. составил 15,16 ±0,354 на 1000 обследованных. Расчет границ достоверности прямолинейной тенденции указывает на значимый рост инфицированности в период наблюдений с темпом прироста 28,35%.

2. Установлено, что подавляющее большинство изолятов (79,4 %,) отличала множественная лекарственная устойчивость, при этом 43,6 % штаммов были резистентны к следующему набору антибиотиков: цефтазидим, цефепим, имипенем, гентамицин, амикацин, ципрофлоксацин.

3. Более половины изолятов (53,1 %) с широким спектром антибиотикоустойчивости образовывали пигмент, гидролизовали эскулин, проявляли гемолитическую, фосфолипазную, пленкообразующую активность. При этом подавляющее большинство эскулинпозитивных изолятов (85,4%) оказались полирезистентными, а 41,5% -панрезистентными.

4. При определении госпитальной природы штаммов P. aeruginosa необходим комплексный подход, включающий определение фенотипа

антибиотикорезистентности, способности к гидролизу эскулина, а также «терморезистентного» гемолиза, пигментообразования и пленкообразующей способности с обязательной количественной оценкой степени их выраженности.

5. Модифицированный диско-диффузионный метод дополняет регламентированную методику определения антибиотикочувствительности, отражая ее изменение в зависимости от пленкообразующей способности штамма. Предложенная методика оценки взаимного влияния Р. aeruginosa и микрооргазизмов-ассоциантов позволяет установить характер взаимодействия между ними (нейтрализм, антагонизм, синергизм) и прогнозировать развитие микст-инфекции.

6. Установлено, что ОФР низкой концентрации (2,5 мг/л и 5 мг/л) может оказывать стимулирующее воздействие на бактериальные клетки и дозозависимо влиять на повышение чувствительности к антибактериальным препаратам как планктонных, так и структурированных в биопленку форм.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ

1. Карпунина Т.И., Николаева Н.В., Кузнецова М.В., Демаков В.А. Сравнительный анализ фенотипов Pseudomonas aeruginosa, изолированных в многопрофильном хирургическом стационаре // Вестник РУДН. Серия Медицина. - 2009. - № 4. - С. 489-492.

2. Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Касатов А.В., Карпунина Т.И. Фенотипические характеристики штаммов Pseudomonas aeruginosa, изолированных в стационарах хирургического профиля // Уральский медицинский журнал. - 2009. - № 9 (63). - С. 103-107.

3. Карпунина Т.И., Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Демаков В.А. Эпидемиологические аспекты нозокомиальной синегнойной инфекции в многопрофильном хирургическом стационаре // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - Т. 24. - № 4 (1). - С. 70-73.

4. Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Розанова С.М., Карпунина Т.И. Формирование биопленок нозокомиальными штаммами Pseudomonas aeruginosa II Журн. микробиол. - 2011. - № 4. - С. 8-14.

Публикации в других журналах и сборниках

5. Николаева Н.В., Кузнецова М.В. Сравнение профилей антибиотикорезистентности Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter baumannii, циркулирующих в многопрофильном стационаре // Матер. V молодежной школы-конф. с междунар. участием «Актуальные аспекты современной микробиологии», Москва. - 2009. - С.44-45.

6. Николаева Н.В., Белякова Т.Б. Влияние озона на биопленки бактерий, изолированных от больных с панкреонекрозом // Матер. IV Междунар. научной конференции молодых ученых-медиков, Курск. - 2010. -Т. 2.-С. 349-351.

7. Николаева, Н.В. Формирование и разрушение биопленок под влиянием озонированного физиологического раствора // Матер. XV Всерос.

научно-практической конф. с междунар. участием «Молодые ученые в медицине», Казань. - 2010. - С. 96.

8. Демаков В.А., Кузнецова М.В., Карпунина Т.И., Николаева Н.В. Гидрофобные свойства и пленкообразующая способность штаммов рода Pseudomonas, изолированных из разных экологических ниш // Вестник Пермского университета. Серия Биология. - 2010. - Вып. 1. - С. 55-58.

9. Николаева Н.В., Дробкова В.А., Кузнецова М.В., Карпунина Т.И. Изучение межмикробных взаимодействий нозокомиальных штаммов в биопленках in vitro // Современные проблемы инфекционной патологии человека: сб. науч. трудов. - Минск, 2010. - Вып. 3. - С. 213-218.

10. Карпунина Т.И., Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Демаков В.А. Распространенность карбапенемоустойчивых штаммов Pseudomonas aeruginosa в стационарах г. Перми // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2010. - № 2 (12). - С. 32.

11. Самарцев В.А., Карпунина Т.И., Николаева Н.В., Осокин A.C., Соснин Д.Ю. Особенности озонотерапии пленкообразующей бактериальной флоры при панкреонекрозе // Тезисы докладов XVII междунар. конгресса хирургов-гепатологов России и стран СНГ «Актуальные проблемы хирургической гепатологии». - Уфа, 2010. - С. 102-103.

12. Карпунина Т.И., Николаева Н.В, Осокин A.C., Сампрцев В.А. Изменение чувствительности к антибиотикам Pseudomonas aeruginosae под влиянием озонированного физиологического раствора // Журн. инфектологии. - 2010. - Т. 2. - № 4. - С. 72.

13. Кузнецова М.В., Карпунина Т.И., Николаева Н.В., Розанова С.М., Панюшов В.П., Демаков В.А. Устойчивость к карбапенемам штаммов Pseudomonas aeruginosa, циркулирующих в хирургических стационарах Перми и Екатеринбурга // Материалы XIII Международного конгресса по антимикробной терапии MAKMAX/ESCMID, КМАХ. -Москва, 2011. - Т. 13. - №2, приложение 1. - С. 22-23.

14. Karpunina T.I., Kuznetsova M.V., Maslennikova I.L., Nikolaeva N.V., Nesterova L.Ju. Evaluation of antagonistic activity of Pseudomonas aeruginosa nosocomial strains by bioluminescent technique // Abstracts of 4th FEMS Congress of European Microbiologists. - Switzerland, Geneva, 2011.

15. Nikolaeva N.V., Karpunina T.I., Kuznetsova M.V. Oxidative stress and biofilm formation of Pseudomonas aeruginosa nosocomial strains // Abstracts of Internatinal Union of Microbiological Societies Congress. - Japan, Sapporo, 2011. - P-BA19-8.

Патенты и рацпредложения:

1. Карпунина Т.Н., Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Сампрцев В.А., Еремеева М.И., Осокин A.C., Кирилова Т.А. Способ оценки антибактериального действия озонированного физиологического раствора // Патент RU 2425888 С 1 от 10.08.2011.

2. Карпунина Т.И., Николаева Н.В., Коколева A.C. Способ определения степени антибиотикочувствительности микробных культур // Рацпредложение № 2549 от 07.06.2011.

НИКОЛАЕВА Нина Владимировна

РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НОЗОКОМИАЛЬНЫХ ШТАММОВ PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Автореферат

Подписано в печать 21.10.2011. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,5 Формат 60x84/16. Набор компьютерный. Заказ № 2268/2011

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии издательства Пермского национального исследовательского политехнического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29, к. 113. Тел.:(342)219-80-33

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Николаева, Нина Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 ' Результаты микробиологического мониторинга нозокомиальной синегнойной инфекции.

1.2 Основные биологические свойства P. aeruginosa.

1.3 Отношение к антибактериальным препаратам планктонных и сесильных форм P. aeruginosa.

1.4 Влияние озона на бактериальные клетки.

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования.

2.2 Методы исследования.

2.3 Изучение взаимного влияния микробных культур.

2.4 Изучение влияние абиотических факторов.

2.5 Методы статистической обработки.

ГЛАВА III АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ И

БИОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ НОЗОКОМИАЛЬНЫХ

ШТАММОВ Р. AERUGINOSA

3.1 Многолетняя динамика инфицированности пациентов ЛПУ

Р. aeruginosa.

3.2 Динамика уровня обсемененности различного клинического материала.

3.3 Основные биологические особенности изученных штаммов

Р. aeruginosa.

3.3.1 Изучение морфо-функциональных характеристик.

3.3.2 Спектры антибиотикочувствительности штаммов, изолированных в отделениях разного профиля.

3.3.3 Изучение сочетания свойств у выделенных штаммов.

ГЛАВА IV ПЛЕНКООБРАЗУЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ

ШТАММОВ P. AERUGINOSA КАК ВОЗМОЖНАЯ МИШЕНЬ И

СРЕДСТВО ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ

4.1 Изучение взаимного влияния микробных культур.

4.2 ' Сравнение эффективности действия антибиотиков на структурированные и планктонные формы бактерий.

4.3 Изменение численности, пленкообразующей активности и чувствительности к антибиотикам штаммов P. aeruginosa под влиянием озона.

4.3.1 Выбор времени экспозиции.

4.3.2 Выбор концентрации озонированного физиологического раствора.

4.3.3 Изменение чувствительности к антибиотикам под влиянием ОФР. 89 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 97 ВЫВОДЫ 106 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЬВ среда Лурия-Бертани,

ББЗ додецилсульфат натрия,

АФК активные формы кислорода,

БАЛЖ жидкость бронхоальвеолярного лаважа,

ВБИ внутрибольничные инфекции,

ГА гемолитическая активность,

ГКБ городская клиническая больница,

ГСИ гнойно-септические инфекции,

ДКБ детская клиническая больница,

ИС институт сердца,

ККБ краевая клиническая больница,

КОЕ колониеобразующая единица,

ЛКБ Лобановская клиническая больница,

ЛПУ лечебно-профилактическое учреждение,

МПА мясопептонный агар,

МПБ мясопептонный бульон,

МПК минимальная подавляющая концентрация,

МФ МакФарланд,

НИЦФ научно-исследовательский центр фармакотерапии,

НОФР неозонированный физиологический раствор,

ОП оптическая плотность,

ОРИТ отделение реанимации и интенсивной терапии,

ОССХ отделение сердечно-сосудистой хирургии,

ОФР озонированный физиологический раствор,

РД родильный дом,

РО реабилитационное отделение,

ТХО торакальное хирургическое отделение,

ФГУН Федеральное государственное учреждение науки,

ЭХО отделение экстренной хирургии.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Распространенность и биологические особенности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa"

Актуальность проблемы. Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) распространена повсеместно, чему способствует высокая устойчивость этих бактерий к неблагоприятным условиям внешней среды, выраженная антагонистическая активность и резистентность к широкому спектру природных биологически активных веществ и антимикробных средств, применяемых в медицинской практике [Veesenmeyer, 2009; Пруцаков, 2011]. Для человека синегнойная палочка считается условно патогенной, так как далеко не во всех случаях при ее попадании в организм развивается заболевание. Вероятность инфекции значительно повышается при большом количестве возбудителя, попавшего в организм, а также в случае иммунодепрессии или иммунодефицита у ослабленных, истощенных людей, на фоне влияния стрессовых факторов, сопровождающих травмы, ожоги, различные хирургические вмешательства и тяжелую соматическую патологию. С учетом этих двух составляющих, а также высокой резистентности P. aeruginosae к противомикробным препаратам,, заражение человека чаще всего может произойти во время пребывания именно в лечебном учреждении. Во всем мире прослеживается тенденция к увеличению удельного веса заболеваний, вызванных синегнойной палочкой, в общей структуре внутригоспитальных гнойно-септических инфекций [Mesaros, 2007; Голубкова, 2011; Свистунов, 2011]. Устойчивость Р. aeruginosae во внешней среде, непритязательность к условиям питания, наличие мощных факторов вирулентности, природная резистентность к соединениям с антибиотической активностью определяют широту ее распространения и формирования госпитальных штаммов, что зачастую превращает стационар в «эпидемический очаг» синегнойной инфекции [Азолов, 1999; Komolafe, 2003; Шагинян, 2005; Покровский, 2006; Туртюков, 2006; Коршунова, 2007; Nemec, 2010]. Инфекционные осложнения, возникающие у госпитализированных больных, отягощают течение основного заболевания, увеличивают длительность стационарного лечения и повышают число неблагоприятных исходов [Руднов, 2002; Азолов, 2004; Сидоренко, 2005]. Широкое распространение (до 75%) атипичных форм возбудителя затрудняет постановку диагноза, препятствует своевременному проведению лечебных и противоэпидемических мероприятий [Мороз, 1988; Зубков, 2003; Пыж, 2011]. Все это обусловливает необходимость поиска информативных методов диагностики синегнойной инфекции с вычленением тестов, способствующих дифференциации госпитальных и внебольничных штаммов.

Нерешенность проблемы борьбы с госпитальной синегнойной инфекцией с помощью химиотерапевтических препаратов побуждает проводить поиск дополнительных методов и средств, повышающих ее эффективность. В последние годы разрабатываются и внедряются новые технологии, способные, с одной? стороны, подавлять вирулентность госпитальной микрофлоры, с другой» - нивелировать ее устойчивость к антибиотикам. В этом плане возрастает интерес к озонотерапии. Обладая высоким окислительным потенциалом, озон проявляет бактерицидные свойства. Однако, сведения о влиянии небактерицидных концентраций озона в физиологическом растворе, применяемых для парентеральной озонотерапии инфекционных осложнений, на патогенные свойства Р. aeruginosae, в том числе, на ее пленкообразующую активность и антибиотикочувствительность, весьма немногочисленны. Вместе с тем, технология системного использования озона, концентрация которого в физиологическом растворе не превышает 10 мг/л, существенно расширяет спектр его лечебных возможностей, в частности, при инфекционных осложнениях, за счет оптимизации нарушенного кислородного гомеостаза организма больного [ШвсЫ^ег, 2000; Белых, 2004; Кувакина, 2006; Фисталь, 2006; Бокерия, 2007; Верхулецкий, 2007; Стручков, 2007; Уметалиев, 2007; Винник, 2008; Водякова, 2009; Дмитриева, 2009; Ви^авв^ 2009].

Цель исследования - изучение фенотипических особенностей нозокомиальных штаммов, как основы для оптимизации микробиологической диагностики и способов воздействия на P. aeruginosa.

Основные задачи исследования:

1. На основании ретроспективного анализа (5 лет) установить частоту встречаемости P. aeruginosa в стационарах различного профиля.

2. Изучить основные биологические свойства P. aeruginosa, определяющие патогенный потенциал изолируемых штаммов.

3. Определить наиболее распространенные фенотипы антибиотикорезистентности в сочетании с экспрессируемыми факторами патогенности изолятов Р, aeruginosa.

4. Разработать и усовершенствовать дифференцирующие тесты, позволяющие с большей эффективностью определять природу штаммов P. aeruginosa, изолируемых в ЛПУ.

5. Оценить влияние абиотических и микробных факторов на уровень пленкообразующей активности штаммов P. aeruginosa в условиях эксперимента.

Научная новизна. Впервые охарактеризована динамика распространенности P. aeruginosa и инфицированности пациентов ЛПУ г.Перми в 2006-2010 гг. Определены типичные фенотипы P. aeruginosa с учетом спектров их антибиотикочувствительности. Предложен и экспериментально обоснован набор биологических характеристик, способствующих дифференцировке госпитальных и внебольничных эковаров P. aeruginosa. В условиях эксперимента впервые показана неоднозначность действия озонированного физиологического раствора с различным содержанием озона на планктонные и сесильные формы синегнойной палочки, его способность потенцировать бактерицидный эффект антибиотиков различных классов. Подтверждена высокая антагонистическая активность нозокомиальных культур P. aeruginosa и предложен способ оценки характера их взаимоотношений при формировании бипленок с наиболее часто встречающимися ассоциантами (приоритетная справка №2010127885 от 06.07.2010).

Теоретическая и практическая значимость работы. Определение основных фенотипов в комплексе с антибиотикорезистентностью штаммов P.aeruginosa, циркулирующих в стационарах различного профиля, будет способствовать оптимизации в них эмпирической антибиотикотерапии и проведению противоэпидемических мероприятий, как в конкретном отделении, так и в ЛПУ в целом. Выявленные биологические особенности, в том числе, способность к пленкообразованию изолируемых штаммов, предложенные оригинальные и модифицированные диагностические тесты (рацпредложение № 2549 от 07.06.2011 г.) позволят рационализировать методические подходы к оценке антибиотикочувствительности и принадлежности изолятов к госпитальным либо внебольничным эковарам. Установленные эффекты озонированного физиологического раствора на планктонные и структурированные в биопленки формы P.aeruginosa (патент на изобретение №2425888 от 22.08.2011 г. «Способ оценки антибактериального действия озонированного физиологического раствора»), а также его сочетаний с антибиотиками различных классов, демонстрируют целесообразность использования озона в комплексной терапии внутрибольничной синегнойной- инфекции с учетом индивидуальных особенностей изолируемых штаммов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В многолетней динамике (2006-2010 гг.) наблюдается тенденция к росту инфицированности' пациентов стационаров различного профиля представителями P. aeruginosa, среди которых доминируют штаммы, полирезистентные к регламентированному набору антисинегнойных препаратов.

• 2. Проявление биологических свойств штаммами P.aeruginosa, изолируемыми в различных стационарах, в значительной степени варьирует. Преимуществом при колонизации любых экологических ниш с последующим закреплением и распространением в стационаре обладают изоляты, отличающиеся высокой пленкообразующей способностью, антибиотикорезистентностью, антагонистической активностью и широким набором факторов вирулентности.

• 3. Пленкообразующая ~ способность P. aeruginosa в контексте нозокомиальной синегнойной инфекции может рассматриваться как возможная мишень и средство оценки эффективности мер воздействия различных факторов на нозокомиальные штаммы.

Работа выполнена: на кафедре микробиологии и вирусологии государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального; образования' Пермская государственная: медицинская академияшм: ак. Е.А.;Вагнера-Министерства здравоохранения и? социального развития РФ.

Апробация работы;. Материалы • диссертации! были представлены, наг-краевой конференции «Проблема синегнойной инфекции в реанимационных отделениях ЛПУ» (Пермь,. 2009)- VI Российской научной конференции. «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2009), V Молодежной школе-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной. микробиологии» (Москва, 2009), научной сессии ПГМА (Пермь, 2010), XIII Международном конгрессе по антимикробной терапии MAKMAX/ESCMID (Москва, 2011), 4th Congress of European Microbiologists FEMS (Geneva, Switzerland, 2011):

Публикации: По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение в . практику. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами, врачами-интернами на кафедрах микробиологии и вирусологии, общей хирургии Пермской государственной медицинской академии, а также в клинической практике ГКБ №4.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания • объектов и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 21 рисунком. Список литературы включает 323 работы отечественных и зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Николаева, Нина Владимировна

выводы

1. Среднемноголетний показатель инфицированности Р. aeruginosa за период 2006-2010 гг. составил 15,16 ±0,354 на 1000 обследованных. Расчет границ достоверности прямолинейной тенденции указывает на значимый рост инфицированности в период наблюдений с темпом прироста 28,35%.

2. Установлено, что подавляющее большинство изолятов (79,4 %,) отличала множественная лекарственная устойчивость,' при этом 43,6 % штаммов были резистентны к следующему набору антибиотиков: цефтазидим, цефепим, имипенем, гентамицин, амикацин, ципрофлоксацин.

3. Более половины изолятов (53,1 %) с широким спектром антибиотикоустойчивости образовывали пигмент, гидролизовали эскулин, проявляли гемолитическую, фосфолипазную,' пленкообразующую активность. При этом подавляющее большинство эскулинпозитивных изолятов (85,4%) оказались полирезистентными, а 41,5% — панрезистентными.

4. При определении госпитальной природы штаммов Р. aeruginosa необходим комплексный подход, включающий определение фенотипа антибиотикорезистентности, способности "К гидролизу эскулина, а также «терморезистентного» гемолиза, пигментообразования и пленкообразующей способности с обязательной количественной оценкой степени их выраженности.

5. Модифицированный диско-диффузионный • метод дополняет регламентированную методику определения антибиотикочувствительности, отражая ее изменение в зависимости от пленкообразующей способности штамма. Предложенная методика оценки взаимного влияния Р. aeruginosa и микрооргазизмов-ассоциантов позволяет установить характер взаимодействия между ними (нейтрализм, антагонизм, синергизм) и прогнозировать развитие микст-инфекции. .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на многолетнюю историю изучения, P. aeruginosa по-прежнему привлекает внимание широкого круга исследователей и клиницистов. В современных условиях особую актуальность приобретают исследования патогенного потенциала этих бактерий, хотя до последнего времени считается, что псевдомонады — это гетеротрофные бактерии со слабовыраженной вирулентностью. Именно такими характеристиками обладают штаммы", изолируемые из природной4 среды. Однако, лечебные учреждения, характеризующиеся особенными условиями обитания, индуцируют проявление и способствуют закреплению целого спектра свойств, обеспечивающих инфицирование госпитализированных больных и длительную персистенцию микроорганизмов в стационарах различного профиля. Первое описание раневой инфекции, вызванной синегнойной палочкой, принадлежит Люке (1862); который отметил характерное сине-зелёное окрашивание перевязочного материала. Первая вспышка госпитальной инфекции была зарегистрирована еще в 1897 г., а начиная с 70-х * годов XX века, P. aeruginosa - один из основных возбудителей локальных и системных гнойно-воспалительных процессов, вызывающая до 15-20% всех внутрибольничных инфекций.

Выполненный* нами ретроспективный анализ данных микробиологического мониторинга, регистрирующего случаи выявления P. aeruginosa в стационарах г. Перми, позволил установить следующее. За период наблюдений (2006-2010 гг.) доля P. aeruginosa среди изолированных микробных культур составила 1,62 ± 0,038 % при среднемноголетнем уровне инфицированности 15,16 ±0,354 на 1000 обследованных. В анализируемый период определилась выраженная, тенденция к его увеличению, а расчет границ достоверности прямолинейной тенденции (р < 0,05) показал среднегодовой темп прироста уровня инфицированности 6,2%. За 5 лет темп прироста данного показателя составил 28,35%.

На фоне увеличения инфицированности такие материалы, как раневое отделяемое, моча и мокрота сохраняли свою приоритетную значимость в контексте выделения возбудителей и распространения синегнойной инфекции, оставаясь наиболее актуальным клиническим материалом.

Одним из характерных биологических признаков, отличающих синегнойную палочку от других микроорганизмов, является способность синтезировать водорастворимый пигмент - пиоцианин, регистрация которого используется в рутинной практике при идентификации Р. aeruginosa. Хотя при первичном высеве на плотные среды атипичные беспигментные колонии встретились в нашем исследовании лишь в 4,4 % случаев, количественная оценка пигментообразования разными штаммами выявила существенные различия его интенсивности. Следовательно, только факт наличия этого признака, подлежащий учету при традиционном бактериологическом анализе,, не позволяет оценить его вклад в патогенный потенциал изолированной культуры.

- В клинических лабораториях' особое внимание уделяется гемолитической активности Р. aeruginosa, которая' определяется при посеве на кровяной агар, в лучшем случае, с определением величины зоны гемолиза (просветления среды) вокруг колонии, появление которой исследователи связывают, главным образом, с действием фосфолипазы С, устойчивой к инактивации белками плазмы крови. Между тем, хорошо известно, что многие секретируемые субстанции, в том числе и пигменты синегнойной палочки, обладают гемолитическими свойствами. Для получения более полного представления о гемолитической активности и гемолизинах изучаемого изолята рутинную методику нельзя назвать исчерпывающей. При изучении данного признака за основу была взята количественная методика DacheuxD. (2001), модифицированная нами с учетом повышения, эффективности сравнительного анализа изучаемых культур. Поскольку гемолизины синегнойной палочки различаются- по устойчивости к температуре, дополнительно оценивали" результаты «стандартного» и терКюрезистентного» гемолиза. В сравнительном плане оценивали также информативность и целесообразность использования эритроцитов барана либо человека в проводимых тестах. Статистический, в том числе, корреляционный, анализ полученных результатов позволил заключить, что для изучения данного признака у нозокомиальных штаммов следует использовать эритроциты человека, так как они оказались более чувствительными к действию гемолизинов клинических изолятов P. aeruginosa. Продление времени экспозиции эритроцитов с супернатантами бактериальных культур до 3 часов обеспечивает большую информативность получаемых результатов. Сравнение результатов, полученных при высеве культур на кровяной агар и при 3-часовой экспозиции взвеси эритроцитов с их нативными метаболитами, выявило умеренную положительную корреляцию зарегистрированных при этом показателей (г = 0,52). После кипячения и инактивации термолабильных гемолизинов, прежде всего фосфолипазы С, связь уровня гемолитической, активности супернатантов с результатами традиционного метода практически утрачивалась- (г = -0,27). В» то же время, было установлено, что, как минимум, у трети культур гемолиз обеспечивали терморезистентные фракции. Это лишний раз указывает на то, что используемый в лабораторной практике качественный метод оценки гемолитической активности не позволяет проводить корректный сравнительный анализ степени ее выраженности у разных штаммов, так как не выявляет действие значительной части компонентов.

Развитие прикрепленных сообществ - одна из основных стратегий выживания бактерий и в окружающей среде и в организмах инфицируемых хозяев [Ильина, 2006]. Показано, что пленкообразующим было большинство штаммов P. aeruginosa, выделенных как в (ОРИТ) (75,5%), так и в других отделениях (76,8%) всех ЛПУ, но «реанимационная» группа чаще проявляла высокий уровень способности к пленкообразованию. Высокая пленкообразующая активность обеспечивает конкурентоспособность штаммов и, по-видимому, может служить одним из маркеров внутрибольничных изолятов. Установлено, что максимальное усиление пленкообразующей активности при 20°С отличало непленкообразующие штаммы. Ответные реакции отдельных изолятов со средней и высокой пленкообразующей активностью существенно различались по степени выраженности, что позволяет рассматривать этот показатель в; качестве прогностически .значимого маркера при формировании госпитального штамма. К тому же, многие исследователи связывают формирование биопленок с образованием, штаммами альгината (мукоида) - значимого фактора патогенности, продукция которого усиливается, при комнатной температуре. По результатам нашего исследования, более 40 % культур было отнесено к мукоидным.

В: значительном: проценте случаев изолированные культуры оказались полирезистентными, их доля составила 79,4 %, при этом 22,8 % из них были устойчивы к действию всех антибиотиков взятого спектра, т.е. характеризовались панрезистентностью. Особого- внимания заслуживает прослеженный нами высокий, процент устойчивости к меропенему (46,6 %) и имипенему (78,4 %) у штаммов Р. aeruginosa, изолированных в разных стационарах г. Перми, хотя еще в 90-х годах в многоцентровом клиническом исследовании, проведенном в России, 92 % изолятов Р. aeruginosa от больных с тяжелыми инфекциями в ОРИТ были чувствительны к карбопенемам, в частности, меропенему [Яковлев, 1998].

В стационарах селективное воздействие антибиотиков ускоряет процесс эволюции\ Р. aeruginosa, где формируются полирезистентные бактериальные популяции [Сидоренко, 2005], Именно поэтому чаще-всего о госпитальной природе возбудителя ГСИ судят по его устойчивости к антибактериальным- средствам. Однако, тот факт, что, как внутри-, так и внебольничные варианты синегнойной палочки оказывались полирезистентными, свидетельствует о том, что этот традиционный маркер госпйтальности зачастую недостаточен для достоверной оценки природы выделенного штамма, так как для Р. aeruginosa характерна природная устойчивость к различным соединениям с антибактериальной активностью. Учитывая тот факт, что гены лекарственной устойчивости часто обнаруживаются в ассоциациях с детерминантами факторов патогенности, полирезистентные бактерии обычно более вирулентны и обладают значительной способностью к распространению [Васина, 2008]. В этой связи, основной раздел нашей работы был посвящен изучению биологических особенностей нозокомиальных штаммов и совершенствованию диагностических подходов к их дифференциации. - Пленкообразующая активность и полирезистентность к антибактериальным препаратам у Р: aeruginosa не являются взаимообусловленными признаками, однако, образование биопленок, как известно, значительно снижает эффективность антибиотикотерапии и результативность антисептических мероприятий. Тот факт, что способность к пленкообразованию в большинстве случаев сочетается с продукцией альгината и высокой' антибиотикорезистентностью, вполне- логичен и укладывается в существующие представления о персистентных свойствах бактерий. На основании изучения антибиотикограмм изолятов многопрофильных стационаров был выявлен наиболее распространенный антибиотикофенотип (А), характеризующийся устойчивостью к цефтазидиму, цефепиму, имипенему, гентамицину, амикацину и ципрофлоксацину. С учетом панрезистентных вариантов, резистентность к этому набору антибиотиков была свойственна более чем 40 % изученных культур, большинство из которых обладали- схожим набором факторов патогенности, отличаясь не более чем по одному признаку.

Данные штаммы, в основном, были, выделены в ОРИТ, однако, присутствовали и в материале из других отделений, что характеризует отделение реанимации, как возможное место возникновения и источник распространения госпитальных штаммов P. aeruginosa. Более того, штаммы; изолированные из ОРИТ всех ЛПУ, наряду с выраженной множественной лекарственной устойчивостью характеризуются наиболее широким набором экспрессируемых факторов патогенности. С одной стороны, в этом проявляется определенное противоречие, так как защитные реакции организма у пациентов этих отделений в большинстве случаев снижены, и микроорганизмам нет необходимости проявлять патогенный потенциал в полной мере. С другой стороны, условия и средства оказания помощи, контингенты больных именно в отделениях реанимации становятся мощным провоцирующим и селективным фактором, способствующим изменению свойств бактерий. Характерная выраженность факторов патогенности и устойчивости к антибактериальным препаратам наблюдается и в отделениях с близким ОРИТ «статусом». Сочетание устойчивости к антибиотикам широкого набора факторов вирулентности с высокой степенью пленкообразующей способности указывает на то, что в условиях стационара, и прежде всего ОРИТ, именно в пленках накапливается высокий патогенный, потенциал, вследствие чего пленкообразующие штаммы нередко становятся возбудителями острых инфекций. В целом, полученные результаты по изучению особенностей формирования биопленок внутрибольничными штаммами P. aeruginosa указывают на то, что данный признак может служить одним из маркеров госпитальности, а выявление изолятов с высокой степенью пленкообразования требует новых подходов к организации и проведению дезинфекционных мероприятий по элиминации возбудителя.

Пленкообразующая способность может играть решающую роль и при развитии ГСИ, обусловленных двух-, трех- и более компонентными ассоциациями условно патогенных микроорганизмов, которые, как правило, характеризуются длительным и малосимптомным течением. Мы предположили, что характер межмикробных взаимоотношений с участием P. aeruginosa целесообразно определять при сравнительном анализе сформированных ассоциантами моно- и бипленок. (заявка на изобретение №2010127885 от 06.07.2010). Использование в качестве тест-культур штаммов микроорганизмов, наиболее часто выделяемых в ассоциации с синегнойной палочкой, позволило выявить нейтральный, синергический и антагонистический типы взаимодействия. При этом установлено, что при совместном культивировании. P. aeruginosa с грамположительными бактёриями, развиваются все три типа взаимодействия, а определяющее значение имеют клеточные компоненты тест-культур, в то время как с грамотрицательными бактериями и их метаболитами — в большинстве случаев ; наблюдается однонаправленный эффект, ингибирующий пленкообразование: Очевидно, что;при формировании смешанных биопленок могут складываться разнообразные метаболические: взаимоотношения между ассоциантами, усугубляющие инфекционный процесс, либо препятствующие его развитию. >

Нами предложена и апробирована модификация диско-диффузионного метода определения?, антибиотикочувствительности, основанная на отсроченном; выкладывании дисков на бактериальный : газон и. имитирующая воздействие на сформированную биопленку: ПослепредлагаемойГО-часовой-отсрочки у штаммов с различной степенью; чувствительности; исчезновение: зоны: задержки роста зафиксировано у 88,4% исследованных штаммов. При этом .обнаружена' сильная> зависимость. (Кп=0,94) между исчезновением зоны и способностью штамма к пленкообразованию., Такой подход дополняет регламентированную методику и решает две задачи: во-первых, он может способствовать более корректному выбору антибактериального средства с учетом пленкообразующей; способности; штамма, во-вторых, позволяет сделать вывод о степени выраженности последней (рацпредложение №2549 от 07.06.2011).

В клинической практике все чаще возникает проблема появления; штаммов •• бактерий, резистентных к наиболее распространенным антибактериальным; препаратам, что ограничивает возможности антибиотикотерапии. Поэтому одно из важнейших направлений развития современной медицины, - создание альтернативных противомикробных средств и методов лечения, обладающих, наряду с высокой эффективностью, хорошей переносимостью и простотой в применении. Лечение воспалительных процессов с помощью озона — один из таких методов. Исследователи связывают его эффективность с выраженными детоксикационными, иммуностимулирующими, регенерирующими свойствами. Приводимые в литературе данные по поводу прямого воздействия терапевтических концентраций озона на бактериальную флору довольно противоречивы. Нами установлено, что обработка культур ОФР с концентрацией озона 2,5 и 5 мг/л в течение 10-минутной экспозиции стимулировала накопление биомассы, при этом для каждого третьего штамма различия с контролем были достоверны (р<0,05). Концентрация озона 7,5 мг/л значимо замедляла этот процесс.

Наибольшее снижение пленкообразующей способности наблюдали также при концентрации 7,5 мг/л: ОП580 элюата уменьшалась в среднем с 1,009±0,079 до 0,770±0,090. Массивность пленки при концентрации 2,5 мг/л либо-значимо не изменялась, либо достоверно увеличивалась. Повышение содержания озона до- 5 мг/л усиливало^ пленкообразование у половины исследуемых штаммов P. aeruginosae в среднем с 1,837±0,098 до 1,998±0,055 ЕД ОП58о, в остальных случаях оно либо значимо не изменялось, либо достоверно снижалось.

Обработка сформированных биопленок ОФР разных концентраций приводила к их частичному (при содержании озона 2,5-5 мг/л) или практически полному разрушению (при - 7,5 мг/л). Пленки подвергались деструктивному воздействию озона, независимо от того, как «откликались» на него планктонные формы образующих их штаммов. Очевидно, что при окислительном стрессе слабой интенсивности может наблюдаться стимуляция роста и пленкообразующей активности госпитальных штаммов Р: aeruginosa, что необходимо учитывать при назначении озонотерапии.

Наиболее существенным эффектом, прослеженным при воздействии озона in vitro, явилось снижение МПК антибактериальных препаратов после обработки штаммов ОФР. При этом, чем выше была концентрация озона, тем восприимчивее становился микроорганизм. В то же время, концентрации препаратов, отмеченные ранее как минимальные подавляющие, помимо роста бактерий ингибировали их пленкообразование до уровня контроля.

Тот факт, что озон вызывает деструкцию сформированных биопленок и под влиянием ОФР повышается чувствительность к антибиотикам как планктонных, так и сесильных форм, указывает на целесообразность его использования в клинической практике. Однако, для выработки конкретных рекомендаций необходимо проведение углубленных исследований, раскрывающих механизмы такого влияния.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Николаева, Нина Владимировна, Пермь

1. Адарченко A.A., Красильников А.П., Собещук О.П. Методика определения чувствительности-устойчивости бактерий к антисептикам: методические рекомендации. Минск, 1989. - 19 с.

2. Азизов И.С., Якубенко A.B., Канатчикова В.А. Изучение структуры и фенотипов антибиотикорезистентности Pseudomonas aeruginosa II Вестник инфектол. паразитол. 2006. - С. 17-18.

3. Андреева A.C. Особенности выбора антибактериальных препаратов при нозокомиальных инфекциях, вызванных Pseudomonas aeruginosa, в стационарах России : диссертация . кандидата медицинских наук : 14.00.25. Курск. - 2007. - 144 с.

4. Андреева И.В., Стецюк О.У., Дорипенем.- новый карбапенем на фармацевтическом рынке России // Фарматека. 2008. — №20. - С. 39-44.

5. Афифи Ф., Эйзен С. Статистический анализ: подход с использованием ЭВМ // Пер: с англ. М. : Мир, 1982. - 488 с.

6. Безбородов A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука, 1984. - 70 с.

7. Белобородова Н.В., Байрамов И.Т. Роль микробных сообществ или биопленок в кардиохирургии // Антиб. химиотер. — 2008. С. 11-12.

8. Белоусов Ю.Б., Шатунов С.М. Антибактериальная химиотерапия: Справочное руководство для врачей. М.: Ремедиум, 2001. - 473 с.

9. Белых И.А. Влияние озонированных сред' инкубирования и культивирования на кинетику роста и отмирания периодической культуры

10. Escherichia coli IУ Актуальные проблемы медицины и биологии. 2004. - №1.- С. 397-402.

11. Белых И.А., Зинченко В.Д., Высеканцев И.П. Стимулирующее действие малых доз озона на рост микроорганизмов // Проблемы криобиологии. 2004. - №4. - С. 41-45.

12. Беляков В.Д., Ряпис Л.А., Илюхин В.И. Псевдомонады и псевдомонозы. М. : Медицина, 1990. - 2 24 с.

13. Белянин И.И. Биологические ш лечебные свойства озона: Авториз. аналитический обзор. — Москва. 1998. — 17 с.

14. Божкова С. А., Афиногенов Г.Е. Госпитальные инфекции мочевыводящих путей: мониторинг микрофлоры как средство выбора эффективной терапии // Клин, микробиол. Антимикр. химиотер. 2005. -Т.7. —№2. Прил.1. —С. 16.

15. Бойцов А.Г., Рищук С.В., Ильясов Ю.Ю., Гречанинова Т.А. Адгезия лактобактерий к клеткам вагинального и буккального эпителия // Вестник Санкт-Петербургской Медицинской академии им. И.И. Мечникова.- 2004. №4 (5) - С. 191-193.

16. Бороздина И.Б. Сравнительное изучение питательных сред для выделения P. aeruginosa с поверхности филлоплана // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. — 2011. №4 (78). - С. 43-48.

17. Бразоль М.А., Карабельская И.В., Колбин А.С. Роль кандидозной биопленки при резистентной к антимикотикам кандидемии // Consilium Medicum. 2008. - T.l0. - №1. - С. 53-56

18. Брусина, Е.Б. Внутрибольничные гнойно-септические инфекции и экологические аспекты хирургического стационара // Главная медицинская сестра. 2008. - №3. - С. 137-142.

19. Бухарин О.В., Гинцбург A.JL, Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И. Механизмы выживания бактерий. — М.: Медицина, 2005. — 367 с.

20. Бухарин О.В., Лобакова Е.С., Немцева Н.В., Черкасов С.В. Ассоциативный симбиоз // Екатеринбург: УрО РАН, 2007. — 246 с.

21. Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В. Активные формы кислорода как фактор, регулирующий, поверхностные свойства- бактерий // Журн. микробиол. 2008. - №4. - С. 3-6.

22. Вакуленко С.Б. Бактериальные ферменты, инактивирующие аминогликозидные антибиотики и кодирующие их гены // Антибиотики. -1992.-№4.-С. 49-54.

23. Васильев И.Т., Марков И.Н., Мумладзе Р.Б. Антибактериальное и иммунокорригирующее действие озонотерапии при перитоните // Вестник хирургии. 1995. - Т.54. -№3. - С. 56-60.

24. Васина Т.А., Свирская Л.М., Белопольский А.А. и др. Гнойно-воспалительные осложнения у больных с сочетанной травмой в период лечения их в отделениях реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ) // Профилактика и лечение. 2008. - № 2 (8). - С. 33-41.

25. Вахитов Т.Я. Регуляторные функции бактериальных экзометаболитов на внутрипопуляционном и межвидовых уровнях // Дисс. . докт. биол. наук. СПб, 2007. - 286 с.

26. Верхулецкий И.Е., Вороной А.Л., Верхулецкий Е.И., Осипов А.Г. Значение озона в профилактике спайкообра зования в брюшной полости // Харківська хірургічна школа. 2007. - №4 (27). - С. 30-33.

27. Викторов Д.В. Молекулярные механизмы формирования множественной лекарственной резистентности у Burkholderia pseudomallei иблизкородственных видов микроорганизмов : автореф. дис.канд. биол.

28. Наук 03.00.07. Волгоград, 2009. - 49 с.

29. Водякова A.B. Патогенетическое обоснование примененияозонотерапии при токсическом зобе : автореф. дис.канд. мед. наук14.00:16 / A.B. Водякова. Саранск, 2009. - 19 с.

30. Габриелян Н.И., Арефьева Л.И. Горская Е.М. и др. Угроза синегнойной инфекции для хирургического стационара // Стерилизация и госпйтальные инфекции. 2007. - №3 (5). - С. 24-29.

31. Галкин Д.В. Карбапенемы через 20 лет после открытия: современные микробиологические и клинические аспекты // КМАХ. 2007. -Т. 9.-№2.-С. 133-152.

32. Гланц С.А. Медико-биологическая статиститка // пер. с англ. М. : Практика, 1998.-459 с.

33. Горбунов В.А., Титов Л.П., Ермакова Т.С. Многоцентровое исследование антибиотикорезистентности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa в Республике Беларусь // Здравоохранение. 2007. -№1. - С. 28-31.

34. Гостев В.В., Сидоренко С.В. Бактериальные биопленки и инфекции // Журнал инфектологии. 2010. - Т.2. - №3. - С. 4-15.

35. Гречко В.Н., Решетников А.С., Борискина Е.В. Изменение антилизоцимной активности раневой микрофлоры по влиянием газообразного озона // Медицинский альманах. Хирургия. -2009. - №3 (8). -С. 57-59.

36. Дмитриева Н.А., Зырянова Н.В., Григорьян А.С., Василишина С.Ю. Динамика микрофлоры гнойной раны кожи у крыс при воздействии нанее аппликаций озонированного перфторана // Стоматология. 2009. - №4. -С. 14-16. ••

37. Дурново Е.А. Обоснование использования озона в комплексномлечении флегмон лица и шеи : автореф. дис.канд. мед. Наук 03.00.07 /

38. Е.А. Дурново. М., 1998. - 36 с.

39. Ждан-Пушкина С.М. Основы роста культур микроорганизмов. -Ленинград : Изд-во ЛГУ, 1983. 94 с.

40. Заславская Н.В., Артеменко Н.К., Чижевская М.М., Тец В.В. Особенности выживаемости бактерий в микробных сообществах // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2000. - №2. - С. 2-19.

41. Зубарева H.A., Авдеева Н.С., Горовиц Э.С. и др.Микробиологическая характеристика гнойных заболеваний мягких тканей и послеоперационной раневой инфекции // Клинич. микроб, и антимикроб, терапия. 2002. - Т. 4. — Приложение 1. - С. 24.

42. Зубарева H.A., Еремеева М.И., Бородулин Б.А. и др. Динамика резистентности к ципрофлоксацину возбудителей нозокомиальной инфекции в отделении реанимации // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотер. -2005: Т. 7. - № 2. - Приложение 1. - С. 27.

43. Зубков М.Н. Диагностика и антимикробная терапия катетер-ассоциированных инфекций кровотока // Хирургия. — 2008. — №1. С. 18-22.

44. Зубков М.Н. Неферментирующие бактерии: классификация, общая характеристика, роль в патологии человека. Идентификация Pseudomonas spp. и сходных микроорганизмов // Инфекц. и антимикроб, тер. 2003. - Т.5. - №1. - С. 170-177.

45. Зубков М.Н. Роль карбапенемов в условиях эскалации антибиотикорезистентности грамотрицательных бактерий // РМЖ. — 2008. — Т.16. — №2. — С.106-116.

46. Иванов Д.В., Крапивина И:В. Этиология внутрибольничных хирургических инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, и профиль их антибиотикорезистентности // ЖМЭИ. — 2007. — №5. С. 90-93.

47. Ившина И.Б. Бактерии рода Rhodococcus: биоразнообразие, детекция, иммунодиагностика // Дис. . докт. биол. наук. Пермь, 1997. -298 с.

48. Ильина В.Н. Микробиологические аспекты терапии вентилятор-ассоциированной пневмонии, обусловленной Pseudomonas aeruginosa у детей раннего возраста с врожденными-пороками сердца // Патол. кровообращ. кардиохирургия. 2011. - №2. - С. 59-63.

49. Илюкевич Г.В., Смирнов В.М., Левшина H.H. Антибиотикорезистентность грамотрицательных возбудителей госпитальных инфекций в ОИТР многопрофильных стационаров г. Минска // Антибиотики и химиотерапия. 2009. — №11. — С. 25-31.

50. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Петрова Н.В. Муковисцидоз. Достижения и проблемы на современном этапе // Медицинская генетика. -2004,-№9.-С.398-412.

51. Капранов Н.И., Пухальский А.Л., Радионович A.M. и др. Клиническое значение современных макролидов в рациональной антибиотикотерапии хронической бронхолегочной инфекции P. aeruginosa у больных муковисцидозом // Педиатрия. 2003. - №5. - С. 19-27.

52. Кафарская Л.И., Шуникова М.Л:, Голубцова Ю.М. и др. К вопросу об этиологии пневмоний у недоношенных новорожденных в ОРИТН // Материалы V Ежегодного Конгресса специалистов перинатальной медицины. Москва. - 2010. - С. 29-30.

53. Коваленко Г.А., Кузнецова Е.В., Ленская В.М. Углеродминеральные носители для адсорбционной иммобилизации нерастущих бактериальных клеток // Биотехнология. 1998. - №1. — С. 47— 56.

54. Козлов В.К. Сепсис: этиология, иммунопатогенез, концепция современной иммунотерапии. СПб.: Диалект, 2006. - 304 с.

55. Козлов P.C., Стецюк О.У., Андреева И.В. Современные тенденции антибиотикорезистентности возбудителей нозокомиальных инфекций в ОРИТ России: что нас ждет дальше? // Интенсивная Терапия. -2007. №4. - С. 22-29.

56. Кондратенко О.В., Жестков A.B., Лямин A.B., Иванов М.Ф. Этиологическое значение неферментирующих грамотрицательных микроорганизмов при муковисцидозе // Сборник научных трудов. Современный мир, природа и человек. Томск. 2009. - С.68-69.

57. Королёв Д.В. Комбинированное применение комплексной озонотерапии и магнито-инфракрасно-лазерного излучения в лечении больных с синдромом диабетической стопы : автореф. дис. . канд. мед. наук 14.00.27. Нижний Новгород, 2007. - 21 с.

58. Коршунова Г.С. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекциями в Российской Федерации // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. 2007. - №1 (32). - С.4-5.

59. Кувакина Н.А. Влияние озонированного физиологического раствора на вирулентность синегнойных бактерий : автореф. дис. . канд. мед. наук : 03.00;07. — Нижний Новгород., 2006. 21 с.

60. Кузнецова М.В., Карпунина Т.И., Маркович Н.И. и др. Изучение фено- и генотипов Pseudomonas aeruginosa, циркулирующих в отделении реанимации и интенсивной терапии новорожденных // Вестник РУДН. -2008г.-№6-С. 268-271.

61. Куюкина М.С. Биосурфактанты актин обактери й рода Rhodococcus: индуцированный ^ биосинтез, свойства, применение // Дис. . докт. биол. наук :.03.00.07. Пермь, 2006. - 295 с.

62. Лившиц МШ^, Брусина'Е1Б:,Еоспитальные инфекции: проблемы и пути решения // Журн микробиол. 1992. - №1. - С. 22-24.

63. Лямин, А.В. Особенности биологических свойств и факторов патогенности штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из разных источников // Аспирантский вестник Поволжья: 2010; - №3. - С.220-222.

64. Малахов В;А., . Джанелидзе Т.Т. Озонотерапия в неврологии электроннышресурс.'//Международный?неврологический журнал. 2008. -№2(18). - http://neurologv.mif-ua.com/archive/issue-5218/article-5315

65. Масленников О.В., Конторщикова К.Н. Практическая озонотерапия: пособие. Н.Новгород, 2006. - 156 с

66. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. Нижний Новгород: НГМА, 1999. — 394 с.

67. Методические указания МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 4 марта 2004 г.). — 158 с.

68. Милько Е.С., Егоров Н.С. Гидрофильно-гидрофобные и адгезивные свойства диссоциантов Rhodococcus riibropertinctus H Микробиология. 1994. - Т.64. - Вып. 2. - С. 382-284.

69. Милько Е.С., Мартынкина Л.П. Морфологические и физиолого-биохимические особенности диссоциантов Pseudomonas aeruginosae II Микробиология. 1996. - T. 65. - №3. - С. 352-356.

70. Миронов А.Ю. Основы клинической микробиологии и иммунологии. М., 1997. - 160 с.

71. Митрохин* С.Д. Значение синегнойной палочки в инфекционной патологии человека // Инфекции и антимикробная терапия. 2004. - Т.6. — №3. — С. 96-97.

72. Мороз А.Ф., Анциферова Н.Г., Баскакова Н.В. Синегнойная инфекция // под ред. А.Ф. Мороз. М. : Медицина. - 1988. - 256 е.: ил. ISBN-5-225-00117-3.

73. Мошарова И.В. Экология бактерий, трансформирующих полихлорированные бифенилы, и их место в составе морского гетеротрофного бактериопланктона: дис.канд. биол. наук 03.00.16. -Москва, 2008. 194 с.

74. Мошкевич И.Р. Микробные биопленки при смешанных инфекциях : автореф. дис. . канд. мед. наук : защищена 03.06.2007 : утв. 06.11.2007. Санкт-Петербургский гос. мед. ун-т. СПб., 2007. - 22 с.

75. Нестерова Л.Ю., Ткаченко А.Г., Караваева Е.А. Полиамины как регуляторы биопленкообразования природных изолятов Escherichia coli с разной степенью устойчивости к фторхинолонам // Вестник МУ. Биология. -2011.-Вып. 2.-С. 32-37. •

76. Никитин Д.И. Порядок эубактерии (.Eubacteriales) // Жизнь растений. Бактерии и актиномицеты. — М. : Просвещение, 1974. — 487 с.

77. Николаев Ю.А., Плакунов В.К. Биопленка «город микробов» или аналог многоклеточного организма? // Микробиология. - 2007. —Т. 76. -№2. -С. 149-163.

78. Николаев Ю.А., Проссер Дж.И., Виттли Р.И. Регуляция прилипания клеток Pseudomonas fluorescens к стеклу летучими соединениями, выделяемыми культурой // Микробиология. 2000. - Т.69. -№3.-С. 352-355.

79. Нилова Н.Ю. Характеристика ' условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза толстого кишечника : автореф. дис. . канд. мед. наук : 03.00.07. СПб., 2009. - 24 с.

80. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований / Под ред. A.C. Лабинской. М.: Медицина, 2004. - 575 с.

81. Овнанян К.О. Ультраструктурная архитектоника межклеточных контактов в биопленках бактерий in vitro и in vivo II Национальная академия наук Армении. Микробиология. 2009. - Т.109. - №1. - С. 78-85.

82. Овчинникова 0:Е., Сидоренко Н.Б., Емельянова И.В. и др. Рациональная антимикробная терапия нозокомиальных инфекций нижних дыхательных путей // Клиническая микробиологи и антимикробная химиотерапия. 2005. - Т.7. - №2. - С. 47.

83. Октябрьский О.Н., Смирнова Г.В. Редокс-регуляция клеточных функций. Обзор // Биохимия. 2007. - Т.72. - Вып.2. - С. 158-174.

84. Олескин, A.B., Кировская Т.А. Сетевая структура в микробиологии // Вестник Российской Академии Наук. 2007. - Т.77. - №2, -С. 139-148.

85. Онищенко Г.Г. О состоянии заболеваемости внутрибольничными инфекционными болезнями // Стерилизауия и госпитальные инфекции. -2006. -№ 1.-С. 5-7.

86. Основы эпидемиологии и эпидемиологическая диагностика неинфекционных болезней. Учебно-методическое пособие для врачей // под ред. проф. Л.И. Шляхтенко. СПб., 1994. - С. 170.

87. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов: общие закономерности. М. : Наука, 1982. — 206 с.

88. Пархисенко Ю.А., Рлухов A.A., Мошуров И.П. Использование озонированного раствора в комплексном лечении больных с панкреатонекрозом // Нижнегород. Мед. журн. Приложение Озонотерапия. -2005.-С. 149-150:

89. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии:' задачи, терминология, логика, компьютерные методы. М. : РАМН, 2000. — 50 с.

90. Покровский В.И., Семина H.A., Ковалева Е.П., Акимкин В.Г. Эпидемиология и профилактика внутрибольничных инфекций в Российской Федерации // Стерилизация и госпитальные инфекции. 2006. - № 1. - С. 8-11.

91. Пхакадзе Т.Я., Окропиридзе Г.Г., Вабищевич Н.К.Организация и проведение микробиологического мониторинга в травматологии и ортопедии: Лекция Текст. // Вестник травматологии и ортопедии имени H.H. Приорова. 2005. - №3. - С. 77-82.

92. Пыж А.Э., Никандров В.Н. Вклад сине-зеленых пигментов Pseudomonas aeruginosa в гемолитическую активность культуральной жидкости // Журн. микробиол. 2011. - № 1. - С. 19-25.

93. Резистентность возбудителей ИППП к антибактериальным препаратам. Информационный бюллетень "2008 год. — М. : ООО «ДЭКС-ПРЕСС», 2008.-40 с.

94. Решедько Г.К., Рябкова Е.Л., Фаращук А.Н., Страчунский Л.С. Неферментирующие грамотрицательные возбудители нозокомиальных инфекций в ОРИТ России: проблемы антибиотикорезистентности // КМАХ. -2006. Т.8. - №3. - С. 243-259.

95. Родоман Г.В., Лаберко Л.А., Оболенский В.Н., Коротаев А.Л. и др. Способы повышения эффективности методов озонотерапии в клинике хирургических болезней // Сб. научн. трудов «Современные проблемы практической хирургии». М. - 2000. - С. 32-38.

96. Руднов В.А. Антибиотикотерапия госпитальных инфекций, вызванных Pseudomonas aeruginosa II Русский медицинский журн. 2005. -Т.13. — №7. - С. 485-490.

97. Руднов В.А. Современное клиническое значение синегнойной инфекции и возможности ее терапии у пациентов отделений реанимации // Инф. антимикроб, тер. -2002. №4 (6). - С. 170-177.

98. Селькова Е.П., Чижов А.И., Гренкова Т.А., Храпунова И. Ai Эпидемиологически е проблемы/ предупреждения инфекционных заболеваний при. гибкой эндоскопии // Эпидемиология и вакцинопрофилактика; 2006; — №5;,-С. 36-42;.

99. Сивец Н.Ф. Инфекции области, хирургического вмешательства в неотложной абдоминальной хирургии. Минск: БГМУ, 2007. - 251 с.

100. Сиволодский Е.П: Чувствительность к антибиотикам и свойства эскулинпозитивного биоъара- Pseudomonas aeruginosa // Антиб. химиотер. -2000. №8. - С. 17-20:

101. Сидоренко C.B. Клиническое значение резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам // Российские медицинские вести. 1998.-№1.-С. 28-34.

102. Сидоренко C.B. Роль бактериальных биопленок в патологии человека // Инфекции в хирургии. 2004. - №2 (3). - С. 16-20.

103. Сидоренко C.B., Колупаев В.Б. Антибиотикограмма. Диско-диффузионный метод. Интерпретация результатов." М. : Изд. Группа "Арина", 1999.-52 с.

104. Сидоренко C.B., Резван С.П., Еремина C.B. и др. Этиология тяжелых госпитальных инфекций в отделениях реанимации и антибиотикорезистентность .среди их возбудителей // Антиб. химиотер. -2005. Т.50. - №2-3". - С. 33-41.

105. Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. 3-е изд. - М.: Вуз. кн., 2010. - 375 с.

106. Супотницкий М.В. Протективные свойства порообразующих белков патогенных бактерий // Вестник РАМН. 1996. - №8. — С. 18-22.

107. Тец В.В. Микроорганизмы и антибиотики. Инфекции кожи, мягких тканей, костей и суставов. — СПб.: КЛЕ-Т, 2006. — 128 с.

108. Тец В.В., Заславская Н.В. Эффективность действия антибиотиков на бактерии в биопленках // ЖМЭИ. 2005. - №5. - С. 24-26.

109. Тец В.В., Кнорринг Г.Ю., Артеменко Н.К. и др. Влияние экзогенных протеолитических ферментов на бактерии // Антиб. химиотер. -2004. Т.49. - №12. - С. 9-13.

110. Торхова О.А. Роль антиоксидантных систем в ответе бактерий Escherichia coli на действие антибиотиков и ацетамидофенола : Дис. . канд. биол. наук : 03.00.07. Пермь, 2004. - 162 с.

111. Туркутюков В.Б., Шуматов В.Б., Слабенко Э.В., Терех А.П. Эпидемиология внутрибольничных пневмоний у пациентов с черепно-мозговыми травмами в отделениях реанимации и интенсивной терапии И Pacufic Medical J. 2006. - №3. - С. 85-88.

112. Уметалиев Т.М. Эффективность инфузионной озонотерапии в комплексном лечении больных желчекаменной болезнью : автореф. дис. . .канд. мед. Наук 14.00.27. Бишкек, 2007. - 20 с.

113. Фадеев С.Б., Немцева Н.В., Перунова Н.Б., Тарасенко B.C., Бухарин О.В. Способность возбудителей флегмон мягких тканей формировать биопленки // Инфекции в хирургии. — 2009. — №2. С. 41-45.

114. Федорович В.В., Калюжный С.В., Мирен П. Ваедер и др. Разработка феноменологической модели кинетики бактериальной адсорбции на низкоэнергетических поверхностях // Вестник МГУ. — Сер 2. 2002. — Т. 43.-№6.-С. 417-419.

115. Фисталь Э.Я., Носенко Е.М., Макиенко В.В. и др. Медицинский озон в комбустиологии Текст. // Мистецтво лшування. 2006. - №12. -С. 56-62.-151. Флуер Ф.С. Бактериальные фосфолипазы типа С // ЖЭМИ. -2008.-№6.-С. 5-11.

116. Фурсова П.В., Милько Е.С., Левин А.П. Культивирование диссоциантов Pseudomonas aeruginosa в условиях заданного лимитирования // Микробиология. 2008. - Т.77. - №1. - С. 1-6.

117. Фурсова П.В., Милько Е.С., Левин А.П. Лимитирующие ресурсы и состав сообщества бактерий: эксперименты и модельный анализ. М: ГЕОС, 2009. - 162 с.

118. Хабибуллин С.С. Популяционная вариабельность микроорганизмов : автореф. дис. . канд. биол. наук : 03.00.23. — М., 2007. -24 с."

119. Ханина Е.А. Антигемоглобиновая активность микроорганизмов : автореф. дис. . канд. биол. наук : 03.00.07. Оренбург, 2006. - 22 с.

120. Хуснутдинова Л.М. Модификация биологических свойств бактерий в условиях ассоциации индигенной и потогенной микрофлоры // Вестник ОГУ. 2006. - №12. -С. 11-15.

121. Чурадзе Б.Т. Госпитальные инфекции в отделении интенсивной терапии многопрфильной больницы: микробиологическая структура и обоснование тактики антимикробной терапии : автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.37. М., 2008. - 27 с.

122. Шагинян, И.А. Роль и место молекулярно-генетических методов в эпидемиологическом анализе внутрибольничной инфекции // Клинич. микробиол. антимикроб, химиотер. — 2000. Т.2. — №3. — С. 82-95.

123. Шевченко О.В., Эйделыптейн М.В., Степанова М.Н. Металло-бета-лактамазы: значение и методы выявления у грамотрицательных неферментирующих бактериш // Клин, микробиол. антимикр. химиотер. -2007.-ЖЗ.-С. 211-218.

124. Шелудько B.C., Подлужная М.Я. Теоретические основы медицинской статистики: методические рекомендации. — Пермь, 2001. — 36 с.

125. Шестаков А.Г. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas aeruginosa : дис.канд. биол. наук 03.02.03. Саратов, 2010. - 155 с.

126. Шилова В.П., Розанова С.М., Перевалова Е.Ю., Руднов В.А. Распространение полирезистентных штаммов Р. aeruginosa II Клинич. микробиол. антимикроб, химиотер. 2005. - Т.7. - №2. - С. 55.

127. Юдина Н.А., Курочкина А.Ю. Контроль биопленки в современной стратегии профилактики и лечения стоматологических заболеваний // Стоматология. 2009. - №3. - С. 77-80.

128. Яковлев C.B. Устойчивость Pseudomonas aeruginosa к карбапенемам: уроки исследования MYSTIC // Фарматека. 2007. - №8/9. -С. 67-70. . .

129. Яковлев C.B., Яковлев В.П., Деревянко И.И. и др. Многоцентровое открытое рандомизированное исследование меропенема в сравнении с комбинацией цефтазидима и амикацина при тяжелых госпитальных инфекциях // Антиб. химиотер. 1998. - Т.43. - №1. - С. 15-23.

130. Abdel-Mawgoud A.M., Lepine F., Deziel E. Rhamnolipids: diversity of structures, microbial origins and.roles // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2010. -№86."-P. 1323-1336.

131. Albesa I., Becerra M.C., Battân P.C., Pâez PX. Oxidative stress involved in the antibacterial action of different antibiotics // Biochem. Biophys. Res. Commun.-2004.-№317(2).-P. 605-609.

132. Allen J.I., Allen M.O., Olson M.M. et al. Pseudomonas infection of the biliary system resulting from use of a contaminated endoscope // Gastroenterology. 1987. - №92. - P. 759-63.

133. Allison D.G. Community structure and Co-operation in biofilms. -Cambridge University Press, 2000. 365 p.

134. Allison D.G., Ruiz В., SanJose C. Extracellular products as mediators of the formation and detachment of Pseudomonas fluorescens biofilms // FEMS Microbiol. Lett. 1998. -№167. - P. 179-184.

135. Al-Mutairi, D., Kilty S.J. Bacterial biofilms and the pathophysiology of chronic rhinosinusitis // Curr. Opin. Allergy. Clin. Immunol. 2011. -№ 1 l'(l). — PI 18-23.

136. Alves E., Carvalho C.M., Tomé J.P. et al. Photodynamic inactivation of recombinant bioluminescent Escherichia coli by cationic porphyrins underartificial and solar irradiation // J. Ind. Microbiol. Bioteclinol. 2008. - №35(11). -P. 1-447-1454.

137. Anwar H., Strap J.L., Costerton J.W. Eradication of biofilm cells of Staphylococcus aureus with tobramycin and cephalexin // Can. J. Microbiol. -1992. -№38(7). -P. 618-625.

138. Aparna M.S., Yadav S. Biofilms: microbes and disease // Braz. J. Infect. Dis. 2008/. r №12 (6). - P. 526-530.

139. Arakawa Y., Shibata N., Shibayama K. et al. Convenient test for screening metallo-b-lactamase-producing gram-negative bacteria by using thiol compounds // J. Clin. Microbiol. 2000. - №38. - P. 40-43.

140. Bacteriology // Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. 9th ed., 1999. - V.2. Available from: URL: -http://www.topleyandwilson.com

141. Balaban N.Q., Merrin J., Chait R. et al. Bacterial persistence as a phenotypic switch // Science. 2004. - №305(5690). - P: 1622-1625.

142. Bandara H.M.H.N., Yau J.Y.Y., Watt R.M., Jin L.J., Samaranayake L.P. Pseudomonas aeruginosa inhibits in-vitro Candida biofilm development // BMC Microbiology. 2010. - №10. - P. 125-133.

143. Barbier M., Oliver A., Rao J. Novel phosphorylcholine-containing protein of Pseudomonas aeruginosa chronic infection isolates interacts with airway epithelial cells // J. Infect. Dis. 2008. - №197(3). - P. 465-^73.

144. Barraud N., Hassett D.J., Hwang S.H. Involvement of nitric oxide in biofilm dispersal of Pseudomonas aeruginosa II J. Bacteriol. 2006. - Vol.188. -№21.-P. 7344-7353.

145. Bertrand X., Thouverez M., Talon D. et al. Endemicity, molecular diversity and colonization routes of P. aeruginosa in ICU // Intensive Care Med. -2001.-V.27.-P. 1263-1268.

146. Bondarenko O., Rahman P.K., Rahman TJ. et al. Effects of rhamnolipids from Pseudomonas aeruginosa DS10-129 on luminescent bacteria:toxicity and modulation of cadmium bioavailability // Microb. Ecol. 2010. -№59(3).-P; 588-600.

147. Burgassi, S., Zanardi I., Travagli V., Montomoli E. and Bocci V How much ozone bactericidal activity is. compromised by plasma components? // J. Appl. Microbiol. 2009. - №106. - P: 1715-1721.

148. Busscher Y.S., Geertsema-Doornbusch G.G., van der Mei H.C. Adhesion to silicone rubber of yeast-and bacteria isolated from voice prostheses: influence of salivary conditioning films.// J; Biomed. Mat. Res. 1997. - №34. -P. 201-209;

149. Carpentier B., Ccrf O. A review: Biofilms and their consequences, with particular reference to hygiene in the food industry // J. Applied. Bacteriol. -1993.-№75.-P. 499-511. .

150. Carteau D., Soum-Soutera E., Fay F. et al. Monohalogenated maleimides as potential agents for the inhibition of Pseudomonas aeruginosa biofilm // Biofouling. 2010. - №26(3). - P. 3-79-385.

151. Chastre J., Fagon J.Y. Ventilator-associated pneumonia // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. - №165. - P. 867-903.

152. Christensen B.E. The role of extracellular polysaccharides in biofilms // J. Biotechnol. 1989. - №10. - P. 181-202

153. Chuard C., Vaudaux P., Waldvogel F.A., Lew D.P. Susceptibility of Staphylococcus aureus growing on- fibronectin-coated surfaces to bactericidal antibiotics // Antimicrob. Agents Chemother. 1993. -№37(4). - P. 625-632.

154. Corne P., Godreuil S. Unusual implication of biopsy forceps in outbreaks of Pseudomonas aeruginosa infections and pseudo-infections related to bronchoscopy // J. Hosp. Infect. 2005. - №61(1). - P. 20-26.

155. Costerton J.W., Cheng K.-J., Geesey G.G. et al. Bacterial biofilms in nature and disease // Annu. Rev. Microbiol. 1987. - №41. - P. 435-464.

156. Costerton J.W., Stewart P.S., Greenberg E.P. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections // Science. 1999. - Vol.284. - P. 13181322.

157. Dacheux D., Attree I., Toussaint B. Expression of ExsA in trans confers type III secretion system-dependent cytotoxicity on noncytotoxic Pseudomonas aeruginosa cystic fibrosis isolates // Infect. Immun. 2001. -№69(1).-P. 538-542.

158. Davey M.E., Caiazza N.C., O'Toole G.A. Rhamnolipid Surfactant Production Affects Biofilm Architecture in Pseudomonas aeruginosa PAOl // J. Bacterid.-2003.- Vol. 185.-№3.-P. 1027-1036.

159. Davey M.E., O'Toole G.A. Microbial biofilms: from ecology to molecular genetics // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - Vol.64. - P. 847-867.

160. Del Pozo J.L., Rouse M.S., Patel R. Bioelectric effect and bacterial biofilms. A systematic review // Int. J. Artif. Organs. 2008. - №31(9). - P. 78695.

161. Delden C., Iglewski B. Cell-to-cell signaling and Pseudomonas aeruginosa infections // Emerg. Infect. Dis. 1998. - №4. - P.' 551-560

162. Diggle S.P. Microbial communication and virulence: lessons from evolutionary theory // Microbiology. 2010. - №156. - P. 3503-3512.

163. Donlan R.M., Costerton J.W. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms // Clin. Microbiol. Reviews. 2002. - V.15. -№2.-P. 167-193.

164. Drenkard E. Antimicrobial resistance of Pseudomonas aeruginosa biofilms // Microbes Infect. 2003. - №5 (13). - P. 1213-1219.

165. Dubern J.F., Diggle S.P. Quorum sensing by 2-alkyl-4-quinolones in Pseudomonas aeruginosa and other bacterial species // Mol. Biosyst. — 2008. -№4.-P. 882-888.

166. Dunne W.M. Jr., Mason E.O. Jr., Kaplan S.L. Diffusion of rifampin and vancomycin through a Staphylococcus epidermidis biofilm // Antimicrob. Agents Chemother. 1993. - №37(12). - P. 2522-2526.

167. Eldika N., Sethi S. Role of nontypeable Haemophilus influenzae in exacerbations and progression of chronic obstructive pulmonary disease // Curr. Opin. Pulm. Med. 2006. - №12. - P. 118-124.

168. Elford W.J., van den Ende J. An investigation of the merits of ozone as an aerial disinfectant // J. Hygiene. 1942. - № 42. - P. 240-265.

169. Elkins J.G., Hassett D.J, Stewart P.S., Schweizer H.P. Protective role of catalase in Pseudomonas aeruginosa biofilm resistance to hydrogen peroxide // Appl. Environ. Microbiol. 1999. - №65(10). - P. 4594-4600.

170. Farber B.F., Kaplan M.H., Clogston A.G. Staphylococcus epidermidis extracted slime inhibits the antimicrobial action of glycopeptide antibiotics // J. Infect. Dis. 1990. - №161(1). - P. 37-40.

171. Favre-Bonte S., Kohler T., Van Delden C. Biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa: role of the C4-HSL cell-to-cell signal and inhibition by azithromycin // J. Antimicrob. Chemother. 2003. - № 52. P. 598-604.

172. Fridovich I. Superoxide radicals, superoxide dismutases and the aerobic lifestyle // Photochem. Photobiol. 1978. - №28(4). - P. 733-741.

173. Fu W., Forster T., Mayer O. et al. Bacteriophage cocktail for the prevention of biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa on catheters in an in vitro model system // Antimicrob. Agents Chemother. 2010. - №54(1). - P. 397404.

174. Garcez A.S., Ribeiro M.S., Tegos G.P. et al. Antimicrobial photodynamic therapy combined with conventional .endodontic treatment to eliminate root canal biofilm infection // Lasers Surg. Med. 2007. - №39(1). -P. 59-66.

175. George M., Pierce G., Gabriel M. et al. Effects of quorum sensing molecules of Pseudomonas aeruginosa on organism growth, elastase B production, and primary adhesion to hydrogel contact lenses I I Eye Contact Lens. 2005. -№31(2).-P. 54-61.

176. Gillis R.J., Iglewski B.H. Azithromycin retards Pseudomonas aeruginosa biofilm formation // J. Glin. Microbiol. 2004. - № 42 (12). - P. 58425845.

177. Greiner L.L., Watanabe H., Phillips N.J. et al. Nontypeable Haemophilus influenzae strain2019 produces a biofilm containing N-acetylneuraminic acid that may mimic sialylated O-linked glycans // Infect. Immun. 2004. - № 72. - P. 4249-4260.

178. Harmsen Mi,, Yang? L., Pamp S.J.,; Tolker-Nielsen T. An update on Pseudomonas aeruginosa biofilm: formation,* tolerance; and- dispersal; //• FEMS Immunol. Med; Microbiol: 2010. — №59(3); - P. 253-268:

179. Hassett D.Ji, Sutton M.D., Schurr M.J. et all Pseudomonas aeruginosa hypoxic or anaerobic biofilm infections within cystic fibrosis airways // Trends Microbiol.-2009.-№17(3).-P. 130-138. . .

180. Hatch R.A., Schiller N.L. Alginate lyase promotes diffusion of aminoglycosides through the extracellular polysaccharide of mucoid Pseudomonas aeruginosa II Antimicrob. Agents Chemother. 1998; - №42(4). - P. 974-977.

181. Henle E.S., Linn S.J: Formation, prevention, and repair of DNA damage by iron/hydrogen peroxide // BioL Chem. 1997. - №272(31). -P. 19095-8.

182. Hoffman L.R., D'Argenio D.A., MacCoss M.J. et al. Aminoglycoside antibiotics induce bacterial biofilm formation // Nature. 2005. - Vol.436. -P. 1171-1175.

183. Holcombe L.J., McAlester G., Munro C.A. et al. Pseudomonas aeruginosa secreted factors impair biofilm development in Candida albicans II Microbiology. 2010. - №156(5). - P. 1476-1486.

184. Howe R.A., Spencer R.C. Macrolides for the treatment of Pseudomonas aeruginosa infections? // J. Antimicrob. Chemother. — 1997. № 40. -P. 153-155.

185. Hoyle B.D., Wong C.K., Costerton J.W. Disparate efficacy of tobramycin on Ca(2+)-, Mg(2+)-, and HEPES-treated Pseudomonas aeruginosa biofilms // Can. J. Microbiol. 1992. - №38(11). - P. 1214-1218.

186. Huang Y.F., Liu P.Y., Pan C.Y. et al. Change of antimicrobial prophylaxis with anti-biofilm azithromycin for prevention of ventilator-associated pneumonia (VAP) in pediatric cardiac surgery,// Am. J. Respir. Crit. Care. Med. -2010. -№ 181.-P. 3235.

187. Inglis R.F., Gardner A., Cornelis P., Buckling A. Spite and virulence in the bacterium Pseudomonas aeruginosa I I Proc. Natl. Acad. Sei. USA. — 2009. -№106.-P. 5703-5707.

188. Jackson A.L., Newcomb T.G., Loeb L.A. Origin of multiple mutations in human cancers // Drug. Metab. Rev. 1998. - №30(2). - P. 285-304.

189. Kadurugamuwa J.L., Francis K.P. Bioluminescent imaging of bacterial biofilm infections in vivo // Methods Mol Biol. 2008. - №431. -P. 225-239.

190. Kaplan J.B. Therapeutic potential of biofilm-dispersing // Int. J; Artif. Organs.- 2009. №32(9). - P. 545-554.

191. Kerr J.R. Suppression of fungal-growth exhibited by Pseudomonas Aeruginosa H J. Clin: Microbiol. 1994;.- №32(2). - P. 525-527.

192. Kohlenberg A., Weitzel-Kage D;, van der Linden P. et al. Outbreak of carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa infection in a surgical intensive care unit-// J. Hosp. Infect. 2010. - №74 (4). - P. 350-7.

193. Köhler T., Buckling A., van Delden C. Cooperation and virulence of clinical Pseudomonas aeruginosa populations // Proc Natl Acad Sei USA. — 2009. -№1.06.-P. 6339-6344.

194. Komolafe O.O., James J., Kalongolera L. et al. Bacteriology of byrns at the Queen Elizabeth Central Hospital, Blantyre, Malawe // Burns. 2003. - V. 29. - №3. - P. 235-238.

195. Leitao J.H., Fialho A.M., Correia I.S. Effects of growth temperature on alginate synthesis and enzymes in Pseudomonas aeruginosa variants // J. Gen. Microbiol. 1992. - №138. - P. 605-610.

196. Lepper P.M., Grusa E., Reichl H. et al. Consumption of imipenem correlates with beta-lactam resistant in Pseudomonas aeruginosa II Antimicrob. Agents Chemother. 2002. - Vol.46. - P. 2920-2925. .

197. Lewis K. Riddle of biofilm .resistance // Antimicrob. Agents Chermother. 2001. - № 45 (4). - P. 999-1007.

198. Maira-Liträn T., Allison D.G., Gilbert P. Expression of the multiple antibiotic resistance operon (mar) during growth of Escherichia coli as a biofilm // J. Appl. Microbiol. 2000. - №88(2). - P. 243-247.

199. Markova Yu.A., Romanenko A.S., Shafikova T.N. Mechanisms of bacterial polyhostality // J. Stress Physiol. Biochem. 2007. - Vol. 3. - №. 2. - P. 15-23.

200. McClellan S.A., Zhang Y., Barrett R.P., Hazlett L.D. Substance P promotes susceptibility to Pseudomonas aeruginosa keratitis in resistant mice: anti-inflammatory mediators downregulated // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. -2008.-№49(4).-P. 1502-1511.

201. Mesaros N., Glupczynski Y., Avrain L. et al. A combined phenotypic and genotypic method5 for the detection of Mex efflux pumps in Pseudomonas aeruginosa II J. Antimicrob. Chemother. 2007. - №59. - P. 378-386.

202. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically, 8th ed. Approved standard M7-A8 // Clinical and Laboratory Standards Institute. 2009.

203. Miller G.H. and aminoglycoside resistance study groups. Resistance to aminoglycosides in Pseudomonas II Trends Microb. 1994. — №2. - P. 347353.

204. Möker N., Dean C.R., Tao J. Pseudomonas aeruginosa increases formation of multidrug-tolerant persister cells in response to quorum-sensing signaling molecules II J. Bacteriol. 2010. - №192(7). - P. 1946-1955.

205. Möker N., Dean C.R., Tao J. Pseudomonas aeruginosa increases formation of multidrug-tolerant persister cells in response to quorum-sensing signaling molecules // J. Bacteriol. -2010. №192 (7). - P. 1946-1955.

206. Morgan R., Kohn S., Hwang S.H. et al. BdlA, a Chemotaxis regulator essential for biofilm dispersion in Pseudomonas aeruginosa II J. Bacteriol. 2006. -Vol.188.-№21.-P. 7335-7343.

207. Moskowitz S.M., Foster J.M., Emerson J., Burns J.L. Clinically feasible biofilm susceptibility assay for isolates of Pseudomonas aeruginosa from patients with cystic fibrosis II J. Clin. Microbiol. 2004. - № 42. - P. 1915-22.

208. Murga R., Miller J.M., Donlan R.M. Biofilm formation by gramnegative bacteria on central venous catheter connectors: effect of conditioning films in a laboratory model // J. Clin. Microbiol. 2001. - №39. - P. 2294-2297.

209. Naves P., del Prado G., Huelves L. et al. Correlation between virulence factors and in vitro biofilm formation by Escherichia coli strains // Microb. Pathogenesis. 2008. - Vol.45. - P. 86-91.

210. Nemec A., Krizova L., Maixnerova M., Musilek M. Multidrug-resistant epidemic clones among bloodstream isolates of Pseudomonas aeruginosa in the Czech Republic // Res. Microbiol. 2010. - №161(3). - P. 234-42.

211. Nestorovich E.M., Sugawara E., Nikaido- H., Bezrukov S.M. Pseudomonas aeruginosa porin OprF: properties of the channel // J. Biol. Chem. — 2006.-№281(24).-P. 16230-16237.

212. Nichols W.W., Evans M.J., Slack M.P., Walmsley H.L. The penetration^ of antibiotics into aggregates of mucoid and non-mucoid Pseudomonas aeruginosa II J. Gen. Microbiol. 1989. - №135(5).-P. 1291-1303.

213. Ochsner U.A., Reiser J., Fiechter. A., Witholt B. // Production of Pseudomonas aeruginosa rhamnolipid- biosurfactants in heterologous hosts Appl. Environ. Microbiol. 1995. -№61(9). -P. 3503-3506.

214. Parsek M.R., Singh P.K. Bacterial biofilms: an emerging link to disease pathogenesis // Annu. Rev. Microbiol. — 2003. № 57. - P. 677-701.

215. Parveen A., Smith G., Salisbury V., Nelson S.M. Biofilm culture of Pseudomonas aeruginosa expressing lux genes as a model to study susceptibility to antimicrobials // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - №199(1). - P. 115-8.

216. Percival S.L., Bowler P.G. MPhil biofilms and their, potential in wound healing // Wounds. 2004. - №16 (7): - P. 234-240.

217. Pierce G.E. Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, and devicerelated nosocomial infections: implications, trends, and potential approaches for control // J. Ind. Microbiol: Biotechnol. 2005. - №32(7). - P. 309-318.

218. Piritucci J.P., Corno S.,~ Garotta' M. Biofilms and infections of the upper respiratory tract // Eur. Rev. Med: Pharmacol* ScL 2010. - № 14 (8). - P. 683-90.

219. Rischbieter E., Stein H., Schumpe A. Ozone solubilities in water, and aqueous salt solutions // Ji Chem. Eng. Data. 2000. - №45. -P. 338-340.

220. Romeo T. When the party is" over: a; signal for dispersal of Pseudomonas aeruginosa biofilms // J: Bacteriol. 2006. - V.188: - №21. -P. 7325-7327.

221. Rosenberg M., Gutnik D:, Rosenberg E. Adherence of bacteria to hydrocarbons: A simple method for measuring cell surface hydrophobicity // FEMS Microbiol. Lett. 1980.- V.9;-P. 29-33.

222. Rossignol G., A., Guerillon J. et al. Involvement of a phospholipase С in the hemolytic activity of a clinical strain of Pseudomonas fluorescens Merieau // BMC Microbiol.-2008.-№8.-P. 189.

223. Rumbaugh K.P., Diggle S.P., Watters C.M. et al. Quorum sensing and the social evolution of bacterial virulence // Curr. Biol. — 2009. №19. - P. 341345.

224. Shah P.M. Parenteral carbapenems // Clin. Microbiol. Infect. 2008. -V.14(l). - P. 175-180.

225. Shin D.H., Choi Y.S., Cho Y.H. Unusual properties of catalase A (KatA) of Pseudomonas aeruginosa PA 14 are associated with its biofilm peroxide resistance // J. Bacteriol. 2008. - №190(8). - P. 2663-2670.

226. Sillankorva S., Neubauer P., Azeredo J. Phage control of dual species biofilms of Pseudomonas fluorescens and Staphylococcus lentus // Biofouling. -2010. V.26. -№5. — P. 567-575.

227. Singh P.K., Parsek M.R., Greenberg E.P. et al. A component of innate immunity prevents bacterial biofilms development // Nature. 2002. — №417. -P. 552-555.

228. Souli M., Giamarellou H.Effects of slime produced by clinical isolates of coagulase-negative Staphylococci on activities of various antimicrobial agents // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - №42. - P. 939-941.

229. Stanley P.M. Factors affecting the irreversible attachment of Pseudomonas aeruginosa to stainless steel // Can. J. Microbiol. 1983. - №29. -P. 1493-1499.

230. Stewart P.S. Theoretical aspects of antibiotic diffusion into microbial biofilms // Antimicrob. Agents Chemother. 1996. - №40(11). - P. 2517-2522.

231. Storti A., Pizzolitto A.C., Pizzolitto E.L. Detection of mixed microbial biofilms on central venous catheters removed from intensive care unit patients // Brazil. J. Microbiol. 2005. - №36. - P. 275-280.

232. Storz G., Imlay J.A. Oxidative stress // Curr. Opin. Microbiol. 1999. -№2".-P. 188-194.

233. Storz G., Tartaglia L.A., Farr S.B., Ames B.N. Bacterial defenses against oxidative stress // Trends Genet. 1990. - №6(11). - P. 363-368.

234. Suci P.A., Mittelman M.W., Yu F.P., Geesey G.G. Investigation of ciprofloxacin penetration into Pseudomonas aeruginosa biofilms // Antimicrob. Agents*Ghemother. 1994. - №38(9). - P. 2125-2133. •

235. Tashiro Y., Ichikawa S., Shimizu M. et al. Variation of physiochemical properties and cell association activity of membrane vesicles with growth phase in Pseudomonas aeruginosa II Appl. Environ. Microbiol. — 2010. — №76(11):-P. 3732-3739.

236. Tashiro, Y. Toyofiiku M., Nakajima-Kambe T. et al. Bicyclic compounds repress membrane vesicle production and? Pseudomonas quinolone signal synthesis in Pseudomonas aeruginosa II FEMS Microbiol. Lett. 2010. — №304(2).-P. 123-130.

237. Tetz V.V., Rybaichenko O.V., Savkova G.A. Ultrastructure of surface film of bacterial colonies // J. Gen. Microbiol. 1993. - V. 137. - P. 1081-1086.

238. Tsakris A., Pournaras S., Woodford N., Palepou M.F. et al. Outbreak of infections caused by Pseudomonas aeruginosa producing VIM-1 carbapenemase in Greece II J. Clin. Microbiol. 2000. - V.38. - P. 1290-1292.

239. Vedel G. Simple method to determine b-lactam resistance phenotypes in Pseudomonas aeruginosa using the disc agar diffusion test // J. Antimicrob. Chemother. 2005. - №56. - P. 657 - 664.

240. Veesenmeyer J.L., Hauser A.R., Lisboa T. Pseudomonas aeruginosa virulence and therapy: evolving translational strategies // J. Crit. Care Med. 2009. -№37(5).-P. 1777-1786.

241. Vettoretti L. Plésiat P., Muller C. et al. Efflux unbalance in Pseudomonas aeruginosa isolates from cystic fibrosis patients // Antimicrob Agents Chemother. -2009. -№53(5). P. 1987-1997.

242. Watnick P., Kolter R. Biofilm, city of microbes // J. Bacteriol. 2000. - V.182. - №.10. - P. 2675-2679.

243. Webb J., Thompson L., James S. et al. Cell death in Pseudomonas aeruginosa biofilm development //J. Bacteriol. 2003. - №185 (15). -P. 4585.4592.

244. Whitmore P.M., Cass G.R., Druzik J.R. The ozone fading of traditional natural organic colorants on paper // J. Amer. Inst. Conserv. 1987. -V.26. - № 1.-P. 45-58.

245. Williams B.J., Dehnbostel J., Blackwell T.S. Pseudomonas aeruginosa: host defence in lung diseases I I Respirology. 2010. - №15 (7). -P. 1037-1056.

246. Williams P. Quorum sensing, communication and cross-kingdom signalling in the bacterial world // Microbiol. 2007. - №153. - P. 3923-3938.

247. Williams P., Cámara M. Quorum sensing and environmental adaptation in Pseudomonas aeruginosa: a tale of regulatory networks and multifunctional signal molecules // Curr. Opin. Microbiol. 2009. - №12(2). -P. 182-191.

248. Wolfaardt G.M., Lawrence J.R., Roberts R.D. et al. Multicellular organization in a degradative biofilm community // Appl. Environ. Microbiol. -1994. №60. - P. 434-446. C^

Информация о работе

Николаева, Нина Владимировна
кандидата биологических наук
Пермь, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Распространенность и биологические особенности нозокомиальных штаммов Pseudomonas aeruginosa - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы