Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ЦИСТИЦЕРКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА СРЕДНЕМ УРАЛЕ

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "РАСПРОСТРАНЕНИЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ЦИСТИЦЕРКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА СРЕДНЕМ УРАЛЕ"

На правах рукописи

Кульиевская Марина Николаевна

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ЦИСТИЦЕРКОЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА СРЕДНЕМ УРАЛЕ

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2007

Рабата выполнена' во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им. К. И. Скрябина (ВИГИС).

Научный руководитель:. доктор ветеринарных наук, профессор-

Александр Витальевич Успенский;

Официальные оппоненты: доктор биологических, наук, профессор

Владимир Васильевич Горохов (ВИГИС),

кандидат ветеринарных наук, доцент Светлана-Александровна Шемякова (МГАВМиБт)

Ведущая организация - Вятская Государственная:

сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится «11» апреля 2007 г, в 11 часов на' заседании диссертационного совета Д 006.011.01 при -Всероссийском научно - исследовательском институте гельминтологии ; имени К. И. Скрябина (ВИГИС),

Адрес: 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан «6» марта 2007 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, доктор биологических наук

Бережко В; К.

з

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы,

№ данных отечественной и зарубежной литературы известно, что только с конца 70-х годов XIX столетия впервые начали применяться научно обоснованные меры по охране человека от заражения тениаринхотом, а крупного рогатого скота нистицеркозом. В период экономических реформ в агропромышленном комплексе появилась тенденция роста зараженности сельскохозяйственных животных циетицеркозом. Так, из каждого миллиона голов крупного рогатого скота убіггого в Российской Федерации в 1993 году, 955 животных были заражены финнами бычьего цепня. В 1994 году этот показатель увеличился на 11,3 %., а в 1995 году - на 9,2 % (относительно 1993г.). Результаты ветерннарно-санитарной экспертизы в 2001 году по РФ показали, что средний показатель по цистицеркозу крупного рогатого скота составил 0,09 % к числу экспертиз, в 2002 и 2003 годах соответственно 0,036 и 0,085 %.

В эндемически неблагополучных по тениидозам субъектах Федерации зараженность животных цистицеркозом практически постоянно превышает средне российский уровень. Заболевания животных, вызываемые лярвальными гельмиитозамн, в том числе н цистицеркозом крупного рогатого скота, представляют серьезную проблему для сельского хозяйства и для медицины. Связана эта проблема с экономикой сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности, кроме того, имеет большое социальное значение. Социальный ущерб оценивается степенью отрицательного воздействия на здоровье и общественную жизнь человека.

Принимая во внимание напряженную эпизоотическую ситуацию по цистицеркозу крупного рогатого скота, представляющую, как уже было отмечено, серьезную экономическую и социальную проблемы необходимо дальнейшее изучение особенностей распространения инвазии, усовершенствован не ветерннарно-санитарной экспертизы и разработка эффективных мер борьбы. Данная проблема остается актуальной, имеет важное народно-хозяйственное и социально - экономическое значение, в том числе и на территории Уральского Прикамья.

РГАУ-МСХА имечн К,А. Тимирязева ЦК5 имени Н.К. Железное*

Фоча пяэ

Цели н задачи исследований.

Цель наших исследований заключалась- в изучении эпизоотологнческой ситуации по цистнцеркозу крупного рогатого скота, особенностей экіидемиологии тениидоза и усовершенствованин мер борьбы с данным гельминтозом в Уральском Прикамье. Для достижения посташіенной цели решались следующие задачи:

1. Изучить эпизоотологнческую ситуацию по цистнцеркозу крупного рогатого скота на территории Уральского Прикамья,

2. Изучить эпидемиологическую ситуацию по тениаринхозу в регионе,

3.0 преде лить основные факторы, обуславливающие распространение инвазии.

4, Определить фактический экономический ущерб от цистицеркоза крупного рогатого скота.

3.Усовершенствовать ветеринарно-езнитарную экспертизу туш крупного рогатого скота на цистицеркоз.

6.Лпробнровать прижизненную диагностику цистицеркоза крупного рогатого скота методом определения фагоцитарной активности иейтрофнлов крови.

7.Разработать комплекс ветеринарно-сашггарных мероприятий по профилактике цистицеркоза крупного рогатого скота в условиях Уральского Прикамья.

Научная новизна.

- Впервые в Уральском Прикамье выполнен комплекс исследований но изучению эпизоотологнческой и эпидемиологической стуации по цистнцеркозу- тениаринхозу с учетом различных уровней развития и ведения животноводства, а также особенностей быта населения.

- Определены основные факторы передачи инвазии в различных административных районах региона.

- Выявлены некоторые закономерности расселения цистицерков в отдельных органах и группах мышц при спонтанном заражении и слабой интенсивности инвазии у крупного рогатого скота в Уральском Прикамье.

- Впервые применен для прижизненной диагностики цистицеркоза: крупного рогатого скота метод определения фагоцитарной активности нейтрофнлов крови.

- На основании проведенных исследований разработаны основные положения профилактики цистицеркоза крупного рогатого скота на территории Уральского Прикамья.

Практическая значимость.

Результаты исследований использованы при разработке плана мероприятий по профилактике цистицеркоза крупного рогатого скота в Пермском крае на 2007 - 2012 годы, утвержденного управлением ветеринарии министерства сельского хозяйства Пермского края №0512/529 28 декабря 2006 г.

Материалы исследований включены в курс лекций и лабораторно-практических занятий по дисциплинам «Ветеринарная паразитология» и «Ветеринарио-санитарная экспертиза» для студентов факультета ветеринарной медицины Пермской ГСХА имени Н. П. Прянишникова и факультета ветеринарной медицины Вятской ГСХА,

Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены на: Международной 57-й научно-практической конференции «Актуальные проблемы науки в АПК» (Кострома, 3 февраля 2006 г.).

Международной 57-й научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Троицк, 15-16 марта 2006 г.). '

Всероссийской научно-практической конференции ученых и специалистов, посвященной 140-летию со дня рождения ак, Д. II. Прянишникова (Пермь, 18-19 апреля 2006 г.),

Осиовиые положения, выносимые на защиту: Эпизоотологическая и эпидемиологическая ситуация по цистицеркозу-тениаринхозу в регионе. Основные факторы передачи инвазии.

Эффективность прижизненной диагностики цистицеркоза крупного рогатого скота методом определения фагоцитарной активности нейтрофилов крови.

Усовершенствование ветеринарио-санитарных мероприятий, и основные положения профилактики цистицеркоза крупного рогатого скота на территории Уральского Прикамья.

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на 132 страницах компьютерного текста. Состоят из обшей характеристики работы, обзора данных литературы, семи глав собственных исследований, выводов,

практических предложений, приложения и списка литературы. Список литературы включает 156 источников, в том числе 109 отечественных и 47 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 12 рисунками.

ОБЗОР ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ

В данной главе проанализированы и обобщены имеющиеся в литературе данные по изучению эпизоотологии и эпидемиологии цистицеркоза-теннаринхоза в разные годы в разных регионах страны и за рубежом. Представлен анализ послеубойной и прижизненной диагностики цистішерксш крупного рогатого скота (С. bovis), а так же возможный экономический ущерб от данного зооноза. Проведен анализ различных методов прижизненной диагностики цистнцеркоза крупного рогатого скота.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Эшпоотолопгческая и эпидемиологическая ситуация по цистицеркозу крупного рогатого скота и теннаринхозу населенна в Уральском Прикамье

1.1. Материалы и методы

Исследования проводили с 1999 по 2004 годы. С целью уточнения эпгооотологической обстановки по цистицеркозу крупного рогатого скота в регионе использовали данные материалов ветеринарной отчётности по форме 5-вет и данные собственных исследований. Особенности эпидемиологической сиіуации изучали по данным материалов отчётности санэпидемстанций городов и районов региона, собственных исследований. Типизацию очагов распространения цистнцеркоза крупного рогатого скота проводили с учётом параметров: экстенсивность инвазии и показатель заболеваемости на 100 000 экспертиз. Типизацию очагов тениаринхоза проводили по следующим параметрам: - уровню пораженности населения тениаринхозом на 100 000 населения, интенсивности передачи инвазии, определяемой по количеству свежих случаев заражения населения за год. Для определения социально-экономических предпосылок ■ распространения цистицеркоза-тениаринхоза изучались истории болезни с диагнозом «тениарикхоз», проводился анализ социально-хозяйственных и бытовых факторов, таких как характер сельского хозяйства, уровень развития животноводства,

степень термической обработки мяса и санитарное состояние населенных пунктов.

1.2. Общая характеристика региона

С учетом темы диссертации дана краткая климато-ландшафтиая характеристика Уральского Прикамья. Приведены данные о расположении и размерах территории региона, его природно-хозяйсгвеином делении, дана характеристика сельского хозяйства, наличие сельскохозяйственных угодий (пастбища, пашни, сенокосы) и их использование в народном хозяйстве, особенно в животноводстве. В необходимой мере сообщается о климате и ландшафте отдельных природных и хозяйственных зон.

13. Результаты исследований и их обсуждение

За период с 1999 по 2004 годы в регионе подвергнуто убою 991 088 голов крупного рогатого скота. По результатам проведенной ветеринарно-санитарной экспертизы выявлено 3014 случаев финноза, что составило 0,3 % к числу проведенных экспертиз, а показатель на 100 000 экспертиз соответственно составил - 304,1. Цистицеркоз крупного рогатого скота зарегистрирован в 30 из 38 административных районов региона. Уровень зараженности крупного рогатого скота нистицеркозом за период с 1999 по 2004 годы снизился в 1,5 раза или на 31,3 %, однако темпы снижения оставались незначительными и нестабильными (рис. 1).

Согласно полученным данным выделены 4 типа очагов, характеризующихся разной степенью напряженности эпизоотического процесса (рис.3). .

Рис. I Динамика заболеваемости Рнс.2 Динамика заболеваемости населения

крупного рогатого скота тениаринхозом с 1999 по 2004 гг.

цистицеркозом с 1999 по 2004 гг. (показатель на 100 ООО населения) (показатель на 100 000 экспертиз)

- широко {от 1000 до 5000) ЕуЩ - значительно (от 500 до 1000) ^Т7] - умеренно (от 100 до 500) І - слаб» (от 0 до 100)

Рис. З Распространенность цистицеркоза крупного рогатого скота на территории Уральского Прикамья с 1999 по 2004 гг. (показатель на 100 000 экспертиз).

За период исследований на территории Уральского Прикамья зарегистрировано 195 случаев тениаринхоза. При этом случаи заболевания регистрировались в 26 из 38 районов региона. Динамика заболеваемости жителей Уральского Прикамья тениаринхозом в период с 1999 по 2004 год отражена на рисунке 2,

С 1999 по 2004 уровень пораженности населения Уральского Прикамья тениаринхозом снизился в 2,5 раза, однако в раде районов ещё остается на достаточно высоком уровне. На основании полученных данных нами выделены 4 типа очагов, отражающих уровень напряженности эпидемического процесса в регионе (рис. 4).

На территории Уральского Прикамья установлено повсеместное формирование функционирующих очагов тениаринхоза. Макро- и микроочаги тениаринхоза населения и цистицеркоза крупного рогатого скота на территории региона имеют пространственно-мозаичное распределение, сосредоточены близко друг к другу, что наряду с другими факторами обеспечивает неблагополучие региона по данному зоонозу.

| -высокий уровень (от 7 до11)

- Средний уровень SJ (от 4 до 7)

□

-уровень выше среднего {

(от I до 4) I

- ниже среднего, низкий уровень

0до !> 'ФР^Ш^РЗ

Рис. 4 Распространенность тениаринхоза на •■: ."> •

территории Уральского Прикамья с 1999 по 2004 гг. (показатель на 100 ООО населения)

Для определения предпосылок распространения тениаринхоза па территории Уральского Прикамья был проведен анализ 111 историй болезни. В результате чего была установлена различная восприимчивость людей к тениаринхозу в зависимости от возраста, что отражено в таблице 1.

Таблица 1

Восприимчивость людей к тениаринхозу в зависимости от возрасти

Возраст Количество человек (%)

До 10 лет 3 2,7

До 20 лет 12 ■ 10,8

До 30 лет 16 14,4

До 40 лет 24 21,6

До 50 лет 25 22,5

До 60 лет 16 14,4

До 70 лет и старше 15 13,5

ИТОГО 111 100

В течение 6 лет (1999 - 2004 гг.) диагноз тениаринхоз был зарегистрирован у 13 детей дошкольного и школьного возраста (один ребёнок в возрасте до 1 года), что следует рассматривать как показатель ухудшения эпидемиологической ситуации в регионе. Наиболее восприимчива к тениаринхозу возрастная группа люден от 41

до 50 лет, что составляет 22,5% от общего числа больных. Среди взрослых (от 21 до 70 лет) возрастных групп наиболее инвазированы теннаринхозом женщины - 62,1 % и менее мужчины - 37,9 %, что, скорее всего, объясняется тем, что женщины чаще готовят н во время приготовления пробуют фарш или мясное блюдо.

При анализе отдельных профессиональных и социальных групп населения было подтверждено, что тениаринхоз как профессиональное заболевание встречается редко (Бессонов А, С., 1999) в Уральском Прикамье. Устойчивости вредной привычки или потребности употреблять в пищу сырой мясной фарш или сырое мясо способствует низкий уровень знаний населения по профилактике гельминтозов и отсутствие эффективной санитарно-просветительной работы в этом направлении органов здравоохранения. Большинство опрошенного населения не имеют представления, как происходит заражение теннаринхозом и как можно от него уберечься.

Таблица 2

Восприимчивость к теннарпихозу отдельных профессиональных п

социальных групп населения

Социальные и профессиональные Количество %

группы населения: человек

Дошкольники 4 3,6

Учащиеся 9 8,1

Работники С/Х 12 10,8

Пенсионеры,инвалиды 22 19,8

Неработающие граждане 26 23,4

Рабочие 23 20,7

Продавцы п повара 10 9,0

Работники Д/С и школ 5 4,5

ИТОГО 111 100

2. ПОСЛЕУБОЙНАЯ ДИАГНОСТИКА ЦИСТИЦЕРКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

2.1. Материалы и методы

Послеубойную диагностику на цистнцеркоз крупного рогатого скота проводили методом осмотра согласно действующих «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветерннарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов». Исследования проводили на ОАО «Пермский Мясокомбинат» с 4.01.05 по 5.01.06 гг. у животных со

спонтанной инвазией. Обнаруженных цисти церков извлекали из пораженных органов и вели подсчет в каждой группе мышц.

2.2. Результаты исследований

За период с 4.01.05 по 5.01.06 гг. на ОАО «Пермский мясокомбинат» было исследовано 164 туши крупного рогатого скота, спонтанно зараженного С. bovis. Во всех случаях была отмечена слабая интенсивность инвазии. В связи с этим нами рассматривалась степень заселения мышц и органов с позиции экстенсивности. Исследуемые мышцы сводили согласно анатомической классификации. В сравнительной картине по заселению цнетицерками мышц не использовался прием подсчета цистицерков на определенную единицу массы мышц (Агульннк М. А., 1940; Kozakiewicz, 1979; Бессонов А. С., 1980) поскольку не было такой возможности.

Таблица 3

Степень поражения отдельных органов н групп мышц крупного рогатого скота при спонтанном заражении С. bovis

Мышцы и органы Всего голо» Э, И, % И. И„ кол-во Кол-во цистицерков При этом другие группы мышц пораженные цистицерками (кол-во случаев)

Без видимых изменен. С дегенерат изменен.

Язык 54 32,92 1-6 35 19 Сердце - 1, массетеры - 2, м. тазобедр, суст. - I, глуб. поясничные—1.

Сердце 53 32,31 1-3 32 21 Язык-1, массет. -4, м.тазобедр. суст. -1, пищевод-1.

Массетер 50 30,48 1-3 31 19 Язык-1, сердце -4, глубок, пояеннч,- 2, пишевод -1.

Тазобедр. сустава 3 1,83 1 2 1 Язык-1, сердце -1,

Глубокие поясним. 2 1,22 1 1 1 Сердце -2.

Пищевод 2 1,22 1 2 Сердце-!, массетеры -1.

164 103 61

Полученные данные ещё раз доказывают, что при слабой интенсивности инвазии локализация цнстицерков в туше не является строго определенной и обнаружение цистицерков возможно лишь при тщательной и в полном объеме проведенной ветсанэкспертизы.

3. ЭКОНОМИЧЕСКИЙ УЩЕРБ ОТ ЦИСТИЦЕРКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

3.1. Материалы н методы

Экономический ущерб, причиняемый цистицеркозом крупного рогатого скота, складывается из снижения качества продукции и браковки пораженных туш. Экономический ущерб определяли на ОАО «Пермский мясокомбинат» за период с 2001 по 2004 годы.

Экономический ущерб от снижения качества продукции вычисляли коформуле: Уб = Вр*(Цз-Цб)

где Вр - количество реализованной продукции пониженного качества,

Цз - цена реализации единицы продукции от здоровых животных, руб.;

Цб - цена реализации единицы продукции от больных животных,

руб.;

Экономический ущерб от браковки пораженных туш вычисляли по формуле: У7 = Вб * Ц - Сф,

где Вб-количество выбракованной продукции и сырья, кг; Ц - цена продукции и сырья стандартного качества, руб.; Сф - стоимость продукции и сырья, полученных после переработки, руб.

Общий экономический ущерб определяли как сумму всех видов ущерба: Уо = Уб + У7.

3.2. Результаты исследований

На АОА «Пермский мясокомбинат» за период с 2001 по 2004 гг. было подвергнуто ветеринарно-санитарной экспертизе 29829 туш крупного рогатого скота. Средняя живая масса одной головы крупного рогатого скота составила в 2001 году - 167,5 кг; 2002 - 177,4 кг; 2003 -190,5 кг; 2004 - 168,6. Убойный выход мяса в среднем по Пермской области составлял для взрослого крупного рогатого скота 43,5 % к живому весу, а молодняка 44,3 %. Средняя закупочная цена мяса крупного рогатого скота за 1 кг живой массы составляла: 2001 - 38,66 руб.; 2002 - 44,18 руб.; 2003 - 40,6 руб.; 2004 -45,96 руб. Экономический

ущерб, причиняемый цнстицеркозом крупного рогатого скота на АОА «Пермский мясокомбинат» представлен в таблице 4.

Таблица 4

Экономический ущерб от цистпцеркоза крупного рогатого скота на ЛОЛ «Пермский мясокомбинат» за период с 2001 по 2004 гг.

Годы Выявлено случаев ціістицеркоза Утилизировано туш (гол/кг) Обезврежено туш (гол/кг) Эконом, ущерб Уо (руб.)

2001 35 35/5863 56695,2

2002 94 1/139 93/16542 188836,99

2003 125 3/543 122/23274 257913,09

2004 162 4/485 158/26842 . 330380,15

Итого 416 8/1J 67 408/72521 833825,43

4. ИЗУЧЕНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ РЕАКЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ЦИСПЩЕРКОЗЕ

4.1. Материалы н методы

Получение цисти церков. Цистнцерков отбирали из туши крупного рогатого скота, спонтанно заражённой С. bovis, затем не менее 4-х раз отмывали в стерильном физрастворе с добавлением антибиотиков. После чего цистицерки ампул провали н лиофилизировали. До лиофилизации материал хранили при температуре -20°С, затем при температуре + 4°С.

Получение антнгена-жстрага из С. bovis. Экстракт из цистнцерков готовили по методу Walther (1979) с модификациями (Белозеров С. Н., 1999). Антиген готовили в отделении лидазы на Пермском НПО «Биомед». Полученный антиген-экстракт разливали в ампулы но 0,5 мл и лиофилизировали. Рефрактометрическом методом было установлено содержание 62,3 г/л общего белка в антиген-экстракте из С. bovis.

Объем забираемой крови п концентрация нейтрофнлов.

Нами бьш использован метод, разработанный на кафедре патофизиологии Пермской государственной медицинской академии, позволяющий уменьшить необходимые для определения ФАН объемы крови и диагности кум о в в 10-20 раз. Для этого 0,1 мл крови забирали непосредственно в полиэтиленовую пробирку для микропроб, куда заранее был внесен раствор «Глюгицира» в объеме 0,1 мл. Капли крови

легко перемешивались с консервантом, причем одновременно происходило разведение плазмы в два раза, что, как правило, способствует быстрому (за 1,5-2 часа) оседанию форменных элементов крови. Затем применили щадящий микрометод концентрации лейкоцитов, позволяющий увеличить их концентрацию в смеси крови с объектами фагоцитоза в 3-5 раз.

Метод подготовки объектов фагоцитоза. В связи с тем, что в работе использована модификация способа определения ФАН в отношении аптигена-экстрата из С. bovis, при проведении исследования со смесью специфического и контрольного диагностикумов значительное внимание было уделено подготовке объектов фагоцитоза. Специфический и контрольный эритроцитарные диагпостикумы соответственно были окрашены в голубой и черный цвета анилиновым красителем с целью микроскопического различия специфических и контрольных объектов фагоцитоза.

Метод изготовления мазков. С целью совершенствования процесса изготовления и обработки мазков и повышения производительности и экономичности исследований мы применяли «Устройство для изготовления мазков» (Каплин В. Н., Самоделкин Е. И. а. с. № 1292732, 1986), позволяющее одномоментно или поочередно изготовить на одном предметном стекле 10 узких параллельных мазков из различных проб крови.

Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов.

Исследование ФАН проводили исключительно в микрообъемах. Необходимое количество проб исследуемой крови помещали в термостат на 15 минут при температуре 37°С. В это время готовили равную смесь 1% специфических и контрольных эритроцитарных диагностикумов, приготовленных по общепринятой методике (Boyden, 1951). Затем 0,01 мл этой смеси вносили в пробы крови непосредственно в термостате, чтобы не нарушать температурный режим. Пробы тщательно перемешивали. После чего готовили микромазкн, нанося капли исследуемых проб крови на предметное стекло микропипеткой на 1 мкл. Мазки высушивали, фиксировали и окрашивали по Романовскому-Гимзе. В мазках производили сопряженный подсчет фагоцитоза обоих объектов в 100 изолированных нейтрофилах. Для количественной характеристики фагоцитоза использовали показатель - фагоцитарное число. Определение соотношения фагоцитоза двух объектов позволило установить унифицированный количественный критерий в форме индекса специфического изменения фагоцитоза, выражающего

кратность прироста фагоцитоза специфического объекта над контрольной величиной.

С этой целью фагоцитоз специфического и контрольного объектов выражали в процентах к соответствующему показателю исходного фона в исследованиях в эксперименте и вычисляли отношение уровней:

ИСФ =

F

несп

где F01l - величина фагоцитоза специфического объекта в % к показателю исходного фона,

Fl1K[l - величина фагоцитоза неспецифического объекта в % к показателю исходного фона.

4.1. Результаты исследований н их обсуждение

В наших исследованиях для прижизненной диагностики цистицеркоза крупного рогатого скота была сделана попытка применить метод диагностического исследования ФАН при острых вирусных инфекциях, разработанный на кафедре патофизиологии Пермской государственной медицинской академии.

Исследования фагоцитарной реакции нейтрофилов крови на антиген-экстракт из С. bovis in vitro проводили с кровью клинически здоровых животных (58 голов крупного рогатого скота) и людей (27 человек). Специфическую фагоцитарную реакцию нейтрофилов крови исследовали у животных спонтанно инвазированных С. bovis с низкой и высокой интенсивностью инвазии, у животных со смешанной инвазией (бовисный цистицеркоз и фасциолёз) и животных, инвазированных другими видами гельминтов.

С целью определения дозы антигена-экстракта из С. bovis, вызывающей изменения фагоцитарной реакции нейтрофилов, нами были проведены специальные исследования. В контрольную пробу к 10 мкл крови клинически здорового животного добавляли I мкл физраствора. Во вторую пробу - I мкл рабочего раствора антигена-экстракта из С. bovis (конечная концентрация антигена 1:10), в третью - I мкл рабочего раствора антигена, разбавленного в 10 раз физраствором (конечная концентрация антигена 1:100). В четвертой пробе конечная концентрация антигена составила 1:1000, в пятой — 1:10000. Все пробы помещали в термостат при температуре 37 *С на 20 минут при периодическом перемешивании. Затем во все пробы вносили 10 мкл равной смеси 1%-ных взвесей специфического и контрольного диагноста кумов, тщательно

lui легировал и, вновь помещали в термостат на 20 минут при периодическом перемешивании. Результаты представлены в таблице 5.

Таблица 5

Фагоцитарная активность неГггрофилов крови крупного рогатого скота по отношению к специфическим (в числителе) и неспецифическим (в знаменателе) объектам фагоцитоза при взаимодействии in vitro с антиген-экстрактом из С. bovis

1 Указатели Исходный фон, М±т После контакта с антиген-экстрактом из С. bovis, М±га разностное

Дозы антигена-экстракта из С. bovis

1:10 1:100 1:1000 1:10000

Фагоцитариое ЧИСЛО 0,21 ±0,01 0,18 ±0,01 0,15 ±0,01 0,11 ±0,01 0,19 ±0,02 0,13 ±0,01 0,23 ±0,02 0,12 ±0,01 0,22 ±0,02 0,13 ±0,0!

% к исходному фону ill 71(67-105) 90(66-156) 110(63-187) 105(64-191)

61(60-123) 72(34-95) 66(52-91) 72(61-94)

ИСФ и пределы колебаний 1,00 ±0,03 (0,87-1,24) 1,16 ±0,09 (0,62-2,03) 1,25 + 0,14 (0,92-2,35) 1,66 ±0,10 (0,47 - 2,23) 1,40 ±0,12 Пермь (0,68—2,35)

Кол- во проб с повышением ИСФ 0 17 38 49 37

Кол - во проб со снижением ИСФ 0 29 2 S 5

Кол - во проб без значит, колебания ИСФ 0 1 г 13 1 6

Как видно из таблицы 5, при исследовании фагоцитарных, показателей уровни фагоцитоза специфического и контрольного объектов при контакте крови с эритроцитарными днагностикумами значительно варьируют. Величина фагоцитарного числа специфического объекта в среднем по группе составила 0,21±0,01, Величина фагоцитарного числа неспецифического объекта при средней по группе составила 0,18 ± 0,01. Соответственно этому индексы соотношения фагоцитоза специфического и неспецифического объектов близки к единице и колеблются в небольших пределах от 0,87 до 1,24 при средней

величине 1,00+0,03. Поэтому крайние величины индексов можно взять как границы специфического изменения показателей.

Воздействие антигена-экстракта из С. bovis в дозе 1:10 привело в целом к достоверному снижению уровня фагоцитоза специфического и контрольного объектов.

Доза антигена-экстракта из С. bovis 1:100 незначительно изменила фагоцитоз специфического объекта, однако уровень фагоцитоза неспецифического объекта достоверно снизился, что привело к достоверному повышению ИСФ в 38 пробах. Антиген в разведении 1:1000 вызвал повышение фагоцитоза специфического объекта на фоне достоверного снижения фагоцитоза неспецифического объекта^ Воздействие антигена-экстракта из С. bovis в разведении 1:10000 незначительно повысило фагоцитоз специфического объекта и достоверно снизило фагоцитоз контрольного объекта. Оптимальное повышение ИСФ наблюдали в разведенки антигена 1:1000.

Повышение ИСФ достигается при различном соотношении уровней специфического и неспецнфического объектов фагоцитоза. Так нами было выявлено шесть вариантов различного соотношения уровней.

В целом достоверное повышение ИСФ наблюдалось в 141 пробе (60,77 %), что является показателем чувствительности метода определения ФАН в данных исследованиях. Достоверное снижение ИСФ установлено в 44 пробах (18,96 %) и в остальных 47 пробах (20,25 %) достоверных изменений ИСФ выявить не удалось.

ФОН 1 2 3 4 5 6

В уровень фагоцитоза специфического объекта Dуровень фагоцитоза контрольного объекта

Рис.5 Оценка ИСФ при разном соотношении уровней фагошгкш специфического и неспецнфического объектов. (Величины ИСФ указаны над столбиками)

Диагностика тениарннхоза базируется на клинико-эпидемиологическнх, лабораторных данных и копроовоскопичсских методах. В наших исследованиях была предпринята попытка определить фагоцитарную активность нейтрофилов крови клинически здоровых людей (от 20 до 40 лет) путем контакта in vitro клеток крови с антиген-экстрактом из С. bovis. Оценку фагоцитарной активности нейтрофилов определяли путем вычисления индекса специфического изменения фагощпЪза. Для определения чувствительности клеток крови людей к дозе антигена-экстракта из С. bovis, вызывающей изменения фагоцитарной реакции нейтрофилов, были проведены аналогичные исследования, что и при проведении исследований с кровью крупного рогатого скота. В целом достоверное повышение ИСФ отмечали в 65 пробах, чю составило 60,18% и явилось показателем чувствительности в данных исследованиях. Достоверное снижение ИСФ отмечали в 20 пробах (18,51%) и в 23 пробах (21,29%) достоверных изменений ИСФ не установлено. Результаты исследований позволяют предположить, что данный метод диагностики может быть применим для выявления больных тсниаринхозом людей, особенно в начальной стадии заболевания, когда характерных клинических признаков (активное отхожденис члеников) не наблюдается. Однако данный метод требует дальнейшего изучения и последующей апробации в достаточно широких масштабах.

Для обоснования адекватности диагностического критерия была обследована контрольная группа клинически здоровых животных -58 голов и инвазированных С. bovis - 4 головы. В ходе исследований было установлено, что индексы соотношения фагоцитоза специфического и неспецифического объектов у животных контрольной группы близки к единице и колеблются в пределах - от 0,67 до 1,50. Эти величины и были взяты в качестве крайних значений ИСФ. Поэтому величина ИСФ, выходящая за указанные пределы, свидетельствовала о специфических изменениях фагоцитарной реакции нейтрофилов.

Результаты диагностического исследования фагоцитарной реакции нейтрофилов крови инвазированных животных представлены в таблице 6.

У животных первой группы инвазированных С. bovis с низкой интенсивностью инвазии уровень фагоцитоза специфического объекта достоверно превышает уровень фагоцитоза специфического объекта контрольных животных. Уровень фагоцитоза неспецифического объекта достоверно ниже фагоцитоза неспецифического объекта контрольных животных. Величина ИСФ у всех больных животных достоверно выше ее предельного контрольного значения и составляет от 1,55 до 2,16.

Таблица б

Фагоцитарная активность нейтрофилов по отношению к специфическим (в числ!пеле) и неспецифическим

(в знаменателе) объектам фагоцитоза у больных животных и в контрольной группе _-_(М±ш разностное и в скобках прсдгды колебаний)_

Группа ишшнрованных животных Фагоцитарное число Величина ИСФ

У живот контрольн. группы У больных ЖИВОТНЫХ % к показателям контроля

I 2 3 4 1 2 3 4 I 2 3 4

1 С низкой интенсивностью инвазии (цвстицср коз) С£1±0,02 (ЦЩ01 (409-039) (0,09-0^9 «S 0,14 (Ut 0,12 одо 0.11 167 77 148 67 55 61 2,16 2Д0 1,55

II с висок интенсива ИИШИИИ (цистицеркоз) одном 0,18 ±0,02 (0,09-0,20) (0,08-0,29) 0.49 0Д4- 233 89 2,61

III со смешан, инвазией (цистицеркоз и фасцнолй) 0Л±0,01 0j8±0,02 озо 0,17' 0,29 0,19 142 94 138 106 UI 1,30

IV с другими вшами инвазии* 0,21 ±0,01 0,18 ±0,02 (0,09 - 0,30) (0,09 -0,24) lili Cl23±Q0l СЦ9±0,02 ДО9-СЮ <pí>8-Q3 <127*001 суадо! «OWffi 021 023 104 94 109 106 1(9 83 100 127 1,10 1,02 U3 0,78

* 1 - фасциолсз (7 животных), 2 - дикроцелноз (4 животных), 3 - эхннокоюсоз (3 жнэоткых), 4 - сстарвоз (¡животное).

Во второй группе животных с высокой интенсивностью инвазии изменения ФАН представлены в виде значительного превышения уровня фагоцитоза специфического объекта над нсспецифическим и сопровождалось достоверно значимым повышением ИСФдо 2,61.

В третей группе животных со смешанной инвазией в одном случае наблюдается превышение уровня фагоцитоза специфического объекта над неспецифическим, что определило высокое значение ИСФ (1,51). Во втором случае величина ИСФ соответствует индексам соотношения фагоцитоза специфического VI неспецифического объектов у животных контрольной группы (1,30).

В четвертой группе животных, и »Базированных другими видами гсльмнатоь в 100 % случаен специфической реакции, в виде достоверного превышения значения ИСФ не выявлено. В данной группе животных отмечено значительное снижение величины ИСФ от 1,33 у животных с эхинококкозом и до 0,78 у животных больных сетариозом.

Таким образом, у больных животных выявлены специфические изменения ФАН преимущественно в форме повышения фагоцитоза специфического объекта и снижения фагоцитоза контрольного объекта. Специфичность данного метода в наших исследованиях составила 83,3%, Кроме того, метод диагностики цистицеркоза ФАН оказался прост в выполнении, не требует использования дорогостоящего оборудования, не требует особых технических навыков, для выполнения данного теста необходимо минимальное количество исходного материала, диагностикумов, а так же исследуемого материала, поскольку все опыты проводили в микрообъемах.

5. Профилактика цистицеркоза крупного рогатого скота

Определение особенностей эпизоотологии и эпидемиологии цистицеркоза крупного рогатого скота позволили разработать план мероприятий по профилактике данного зооноза в Пермском крае на 2007-2012 гг. План мероприятий по профилактике цистицеркоза крупного рогатого скота в Пермском крае на 2007-2012 гг. утвержден управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Пермского края №0512/529 28 декабря 2006 года. 4 ■

ВЫВОДЫ

i .Цистицеркоз крупного рогатого скота широко распространен на территории Уральского Прикамья, что связано со степенью развития животноводства, уровнем культуры, привычками местного населения и с разнообразием ландшафтных зон региона.

2. За период с 1999 по 2004 гг. цистицеркоз крупного рогатого скота ежегодно регистрировался в 30 из 3$ административных районов Уральского Прикамья. Экстенсивность инвазии составила 0,3%.

3. Показатель заболеваемости тениаринхозом населения региона за период с 1999 по 2004 гг. составил 1,1 (на 100000 населения), Тениаринхоз регистрировался в 26 из 38 районов. Макро- и микроочагн тсниаринхоза населения и цнстицеркоза крупного рогатого скота имеют пространственно-мозаичное распределение, сосредоточены близко друг к другу, что наряду с другим» факторами обеспечивает неблагополучие региона поданному зооншу.

4.Установлено, что у крупного рогатого скота со спонтанной н низкой интенсивностью инвазии в Уральском Прикамье основным местом локализации цнстицерков являются мышцы языка, сердца, и жевательные мышцы. Что важно для повышения эффективности ветеринарно-санитарной экспертизы при цистицеркозе.

5. С целью прижизненной диагностики цнстицеркоза крупного рогатого скота применен метод определения фагоцитарной активности нейтрофилов крови (ФАН), Разработаны оптимальные параметры выполнения фагоцитарного теста с использованием в качестве объектов фагоцитоза эритроцитарных антигенных диагностикумов, позволяющие объективно регистрировать ранние специфические реакции клеток крови на паразитарные антигены.

6. Установлены и изучены основные закономерности возникновения н развития экстренной специфической фзгоцитарной реакции in vitro нейтрофилов крови здоровых животных и людей под воздействием паразитарных антигенов, а именно антигена-экстракта из С. bovis.

7. Фагоцитарная активность нейтрофилов зависит от дозы антигена. Под воздействием большой дозы (1:10) наблюдается снижение уровня фагоцитоза специфического и контрольного объектов. Малые дозы (1:1000 и 1:10 000) ведут к стимуляции фагоцитоза специфического объекта на фоне торможения фагоцитоза контрольного объекта.

8. Показана высокая диагностическая эффективность фагоцитарного метода. Разработанные фагоцитарные тесты экспресс-диагностики позволили диагностировать цистицеркоз крупного рогатого скота у 83,4%

животных. Чувствительность метода в исследованиях in vitro с кровью животных составила 60,77%, с кровью людей 60,18%.

9. Комплекс профилактических мероприятий при цистицеркозе крупного рогатого скота должен осуществляться на основе ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, а также применении в диагностике заболевания метода определения фагоцитарной реакции нейтрофшюв крови (ФАН).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. На осиопэлнп анализа эпизоотической ситуации по цистицеркозу крупного рогатого скота разработан комплексный план по борьбе и профилактике заболевания в масштабах всего региона.

2. Данные мониторинга заболеваемости тениаринхозом различных социальных и профессиональных групп целесообразно использовать при планировании санитарно-эпидемиологических мероприятий в целях профилактики тениаринхоза.

3. Проведение. мероприятий по профилактике и ликвидации цистицеркота-тениаринхоза строить планово с учетом выявленных неблагополучных зон региона.

4. Практическим работникам рекомендуем при проверке говяжьих туш особое внимание уделять исследованию языка, сердца и жевательных мышц, поскольку, согласно нашим исследованиям, у животных со спонтанной и низкой степенью инвазии основным местом локализации являются данные органы и мышцы.

5. Рекомендуем для прижизненной диагностики цистицеркоза крупного рогатого скота применять метод исследования фагоцитарной активности нейтрофилов с целью определения эпизоотологической ситуации в районах неблагополучных по данному зоонозу, т.к. данный, метод диагностики отличается простотой и доступностью выполнения.

6. В неблагополучных по цистицеркозу и тениаринхозу районах региона усилить саннтарно-просветительную работу среди местного населения по данному зоонозу. .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Кульневская М. Н: Ситуация по цистицеркозу крупного рогатого скота в Уральском Прикамье // Матер. 5-го Сибир. международ, вет. конгресса «Актуальные проблемы вет. медицины». - Новосибирск -2005.- С. 72-74.

2. Кульневская М. Н. Особенности эпизоотологии и эпидемиологии ; цистнцеркоза крупного рогатого скота в Уральском Прикамье// Матер.57-й международ, научно-практич. конф. «Актуальные проблемы науки в агропромышленном комплексе» - Кострома. - 2006. -

т.З - С.63-64.

3. Кульневская М. Н. Проблема тениаринхоза-цистицеркоза на территории Уральского Прикамья. // Материалы международ, научно-практич. конф. «Актуальн. вопросы ветеринарной медицины» - Троицк. -2006.- С. 68-72.

4. Кульневская М. Н; Распространение цистнцеркоза крупного рогатого скота в Уральском Прикамье // Сборн. научных трудов^ Всероссийской науч.-практич. конфер. ученых и спец., посвящен. 140-летию со дня рождения ак. Д. Н. Прянишникова - Пермь- 2006. -С. 288-291.

5. Кульневская М; Н; К вопросу о локализации цистицерков у крупного рогатого скота при спонтанном заражении // Материалы Всеросс. научн-пракгич конференции - Казань - 2006. - С. 26-28.

6. ГоровицЭ; С., Кульневская М; Н., Самоделкин Е. И. Изменения фагоцитарной активности нейтрофилов крови лабораторных животных под влиянием, вирусных антигенов // Материалы международ, научно-произв. конф., посвящ. 100-летию со дня рожд. проф. Авророва A.A. «Актуальные: проблемы ветеринарной патологии и: морфологии животных» - Воронеж - 2006. - С.424- 428.

7. Кульневская- М. Н„ Самоделкин Е. И, Изучение, фагоцитарной' реакции нейтрофилов крови крупного рогатого ската при цистицеркозе // Труды ВИГИС -М. - 2006. - т. 44.-СЛ 08-115.

Отпечатано ь ООО «Форвдрд-С» г. Пермь, ул. Куйбышева, 118, т.ф.: (342) 249-t7-20,249-47-40; e-mail:forwai d-s@mail.ru. Д ата выхода 24,01.07. г. Тираж 70 экз. заказ № 0034