Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Распространение и молекулярная диагностика наследственных факторов гиперкоагуляции в азербайджанской популяции
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Распространение и молекулярная диагностика наследственных факторов гиперкоагуляции в азербайджанской популяции"
На правах рукописи
ДЖАФАРОВ Тогрул Ахверди оглы
РАСПРОСТРАНЕНИЕ И МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННЫХ ФАКТОРОВ ГИПЕРКОАГУЛЯЦИИ В АЗЕРБАЙДЖАНСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ
03.00.15 — генетика
АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва — 2003
Работа выполнена в научно-исследовательских институтах: Молекулярной биологии и биотехнологии; Физиологии Азербайджанской Национальной Академии Наук, Гематологии и Трансфузиология Министерства Здравоохранения Азербайджанской Республики и в подразделении исследований ДНК отделения педиатрической гематологии медицинского факультета Университета Хаджет-тепе, Турция.
Научный руководитель: доктор медицинских наук,
профессор, Р.Ш.Рустамов
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, А.В.Поляков
доктор медицинских наук, профессор Васильев С.А.
Ведущая организация:
Университет Дружбы Народов РФ
Защита диссертации состоится «/?"» г. в //час, на заседании
Диссертационного Совета Д 001.016.01 при ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН по адресу 115478 Москва, ул. Москворечье, 1.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Медико-генетического научного центра РАМН.
Автореферат диссертации разослан « октября 2003 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор
Л.Ф.Курило
2$ з г/
з
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Изучение роли наследственных факторов в системе свертывания крови представляет большой интерес для современной биологии и медицины.
Многочисленные исследования последних лет посвящены выяснению роли таких наследственных дефектов, как аномалия фактора V (Лейденовская мутация) системы свертывания крови (FVL); гипергомоцистеинемия, вызываемая мутацией 677С-Т гена фермента метипен-тетрапщрофолатредуктазы (MTHFR); мутация 20210G-A фактора П (РП) системы свертывания крови, в предрасположенности к коагулопатиям (Bertina et al., 1994, 1997; Brown et al.,1997; Castoldi et al2000; Franco et al., 1997, 1998, 1999; Frosst et al.,1995; Poort et al 1996).
В последние годы мутации по указанным генам обнаружены во всех основных популяциях Европы, Азии, Америки и Индии (Arruda et al., 1997; Andreotti et al., 2000; Braun et al ., 1996; Dahlback et al., 1996,1998 ; Franco et al., 1998; Kodaira et al .,1997; Lane et al., 2000; McAndrew et al1997; Mercier et al., 2001; Pepe et ai ., 1997; Rees et al., 1995, 1999; Rosendaal et al., 1998 и др.) По имеющимся данным частота встречаемости мутаций FVL, MTHFR и РП наиболее высока во всех основных популяциях Европы, а также у жителей стран Средиземного моря и американцев европейского происхождения.
Исследования, проведенные за последнею декаду, продемонстрировали, что мутации генов FVL и РП системы свертывания крови являются серьезными факторами риска развития тромбозов (Bertina et al., 1994,1997; Brown et al.,1997; Castoldi et al ., 2000; Franco et al 1997, 1999; Poort et al ., 1996; Ridker et al ., 1995, Rosendaal et al ., 1997,1998,1999; Selingsohn et al., 1999 и др.)
Первые данные о существовании наследственных факторов, вызывающих склонность к гиперкоагуляции, были представлены Egeberg et al. в 1965 г. В дальнейшем исследования в этом направлении развивались в работах таких исследователей как :Bertina et al.,1994; Dahlback et al.,1994; Franco et al.,1998; Pepe et al.,1997; Poort et al.,1996; Rees et al.,1996; Rosendaal et al., 1999; и др., которые выявили FVL, MTHFR и Fil
м}ашии\иирМ1йть*14» БИБЛИОТЕКА xCItetcptypr
юпочению о том, что указанные мутации являются потенциальными факторами риска развитая венозных тромбозов (ВТ) и обнаруживаются у более, чем 50% больных с ВТ.
Многие исследователи сообщают, что частота встречаемост данных наследственных факторов риска в различных популяциях значительно варьирует, что, несомненно, сказывается на степени их участия в патологическом nponecce(Markus et al .,1996;Bro\vn et al., 1997; Gregg et al .,1997., Liang ei al .,1998., De Stefano et al.., 1999).
В связи с этим проведение исследований, направленных как на определение частот носителей мутаций генов FVL, MTHFR и И, так и на изучение их взаимосвязи с венозными и артериальными тромбозами приобретает особую важность для осуществления профилактических мероприятий, и в первую очередь для ранней диагностики тромбозов и определения групп риска.
В Азербайджане до настоящего исследования работ по изучению особенностей распространения мутаций в гендх FVL, MTHFR и РП не проводили. Вместе с тем, сведения о частоте встречаемости данных мутаций среди населения Азербайджана в целом и у больных с тромбозами позволят определить степень риска развития патологии гемостаза и разработать профилактические и лечебные мероприятия по борьбе с тромбозами.
Результаты сравнения частот встречаемости мутаций генов FV, FH и MTHFR в Азербайджане и других странах позволят подтвердить или опровергнуть имеющиеся предположения об ареале возникновения и миграции данных мутаций.
Результаты исследования могут послужить основой для дальнейших, более детальных исследований системы свертывания крови, как среди узкоспециализированных групп патологий, так и на уровне популяций и национальных меньшинств в Азербайджане и Закавказье.
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы являлось изучение частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FD (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) и их роли как фактора риска развитая ВТ в Азербайджане. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
- определить частоты распространения данных мутаций в азербайджанской популяции в целом;
- выяснить различия в распределении частот данных мутаций среди этнических групп, населяющих Азербайджан;
- определить частоты вышеуказанных мутаций у больных с венозными и артериальными тромбозами в Азербайджане;
- разработать модификацию метода комплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для одновременного определения F1I и FVL мутаций в минимальном количестве исследуемого материала
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В данной работе впервые установлены частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FT! (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) в Азербайджане, как в контрольной группе, так и в группах риска (венозные тромбозы и сердечнососудистые заболевания).
Показано, что данные мутации встречаются в Азербайджане с частотами: FVL - 4-12,5%, FE (20210G-A) - 1,25-3,3%, MTHFR (677Т-Т) - 2 - 4,3%. По сравнению с другими популяциями частоты данных мутаций в Азербайджане отличаются: частота FVL мутации увеличена до 2 раз, в 3-4 раза снижена частота гомозигот по мутации MTHFR (677С-Т), при практически идентичной частоте носительства мутации FII-2%-3%.
Достоверных различий в частоте распространения FV (Leiden 169IG-А), FII (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) мутаций у этнических групп, населяющих Азербайджан, не наблюдали.
На основании данных, полученных нами, установлено, что мутации в генах FVL и F1I являются значимыми факторами риска развития ВТ, и что совместно они могут встречаться практически у 50% больных с ВТ. Также продемонстрировано, что мутация FVL является более значимым фактором риска, чем мутация F1I. Вместе с тем показано, что мутация MTHFR (677С-Т) не является самостоятельным фактором риска данной патологии.
Установлено, что мутации FVL, MTHFR или FII не являются существенными факторами риска артериальных тромбозов.
Впервые разработана модификация метода комплексной ПЦР для одновременного определения мутаций FII и FVL в минимальном количестве исследуемого материала.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Демонстрация существенной роли генетических факторов риска в предрасположенности к ВТ в Азербайджане и сведения об их частоте среди здорового населения и больных позволит вносить изменения в терапевтические мероприятия при ВТ. Несомненно, что в случаях с отягощенным анамнезом по ВТ целесообразно определение как FVL, так и FII мутаций для корректировки терапии антикоагулянтами. Разработанный молекулярно-генетический метод для диагностики наследственно обусловленных форм ВТ основывается на модификации метода комплексной ПЦР и позволяет за 8-10 часов провести точную диагностику совместного носительства FVL/FII мутаций при наличии минимального количества исследуемого материала (10-50 мкл крови, взятой на любом антикоагулянте).
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследований были представлены и обсуждены на заседаниях научных семинаров и Ученых Советов научно-исследовательских институтов: Молекулярной биологии и биотехнологии и Физиологии Азербайджанской Национальной Академии Наук (12 марта 1999, 3 апреля 2001), подразделения исследований ДНК отделения педиатрической гематологии медицинского факультета Университета Хаджет-тепе, Турция (20 августа 1999;), а также на Республиканской научной конференции по гематологии (25 мая 2001) и на Зем ежегодном научном собрании гематологического общества Австралии и Новой Зеландии (3rd Arnual Scientific Meeting of the Haemotology Society of Australia and New Zealand 21 -24 October 2001).
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 7 работ в журналах, сборниках и материалах конференций и симпозиумов
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературных источников. Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 10 рисунков, 16 таблиц. Список использованной лг.тературы включает 201 наименование, в числе из которых 200 работ иностранных авторов.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. Определена частота носителей мутации генов РУЬ, РП, МТНРЯ в Азербайджане в популяции в целом и по сравнению с популяциями других стран.
2. Установлены частоты распространения мутации ИУЬ, РН и МТНРЯ и частоты их аллелей БУЬ 1691 О, 1691 А, 7П 20010 в, МТНРЯ 677 С и МТНРЯ 677 Т в основных этнических выборках, населяющих территорию Азербайджана - азербайджанцев, лезгинов, талышей и курдов.
3. Исследована роль мутаций ИУЬ, РН и МТНРЯ как факторов риска в возникновении венозных и артериальных тромбозов .
4.Разработаны и внедрены в практическую медицину модификации высокочувствительного молекулярно-генетического метода, позволяющего одновременное диагностирование РУЬ, РИ мутации при минимальном количестве исследуемого материала и приводящего к сокращению времени проведения реакции, а также к экономии дорогостоящих реактивов.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ..В соответствии с поставленной целью, исследовали частоту распространения РУЦ Р П, МТНРЯ мутаций в Азербайджане. Наши исследования проводились на территории Азербайджана, как среди азербайджанцев, так и среди основных этнических групп, населяющих этот регион - лезгинов, тальтшей и курдов.
Обследуемых разделили на три группы: первая (контрольная) группа азербайджанцев состояла из 80 предположительно здоровых доноров крови, средний возраст 41 год, соотношение полов (мужской/женский) - 7/3.
Вторая группа (группа риска) включала две подгруппы. В первую подгруппу входили 60 азербайджанцев с ВТ различной локализации, средний возраст 48 лет; во вторую - 30 азербайджанцев в возрасте около 54 лет с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями (инфаркт миокарда, ИБС, ишемический кардиосклероз, стенокардия, тромбоэмболия).
Третья группа - предположительно здоровые и не родственные представители лезгин, талышей и курдов. Выборка лезгин состояла из 60 доноров, талышей из 50 доноров, курдов из
45 доноров. Средний возраст доноров всех этнических групп составлял 35 легг, соотношение полов (мужской/женский) - 6/4.
Молекулярно-генешческое исследование
Вьщеление ДНК. Источником ДНК для поиска FVL G-A1691, F П 20210 G-A и MTHFR 677С-Т мутаций среди исследуемых групп являлись лимфоциты человека, выделенные из периферической крови. Для выделения ДНК использовали 5 мл венозной крови, обработанной 0.1 М ЭДГА в пропорции 10/1 .С учетом количества имеющейся в наличии крови, ДНК для поиска мутаций выделяли из цельной крови макро - и микро методом с помощью модификации стандартной фенол - хлороформной экстракции или методом высаливания . Выделенные и очищенные образцы ДНК растворяли в воде или ТЭ буфере, и для оценки степени чистоты образцов проводили измерение их оптических плотностей при 260 и 280 нм, а затем их использовали для поиска вышеупомянутых мутаций.
Методы определения мутаций. Определение FVL мутации проводили по метолу PCR-RFLP. ПЦР реакцию выполняли на амгошфикаторе DNA Thermal Cycler 480 (Peridn Elmer) или мануально. Участок гена FVL длиной 267 пар нуклетвдов (п.н) амплифицировали по протоколу Gomez et al .,1997 на амгошфикаторе Perkin Elmer 480 с помощью прайм еров; А-5' -TGGC ATCTCCTCTGTCCTAAC-3' и B-5'-TCTTGAACCCnTGCC-CAGTTAC-3'.
Определение 20210G-A мутации FU проводили методом PCR-RFLP. ПЦР реакцию проводили на амплификаторе DNA Thermal Cycler 480 (Peridn Elmer) или мануально с праймера-ми А (5'-ТСТ AGA ААС AGT TGC CTG GC-3') и В (5'- ATA GCA CTG GGA GCA TTG AAG С - 3). Концевой праймер содержал нуклеотидную вставку AAG на праймере В, при помощи, которой при наличии G20210A мутации создавался искусственный сайг расщепления A/AGCTT для Hind Ш рестрикгазы.
Мутацию MTHFR 677С-Т также определяли методом PCR-RFLP. Для амплификации использовали следующие праймеры; (A>5'-TGAAGGAGAAGGTGTC-TGCGGGA-3, (В}-5'-AGGACGGTGCGGTAGAGTG-3.
Определение длин фрагментов рестрикции проводили путем электрофореза на 2-4%-ном на агарозном или 8-12%-ном акриламидном геле с помощью ДНК маркеров,с последующим окрашиванием бромистым эгидием. Подтверждение присутствия мутаций осущест-
вляли путем секвестрования в лаборатории кафедры Молекулярной биологии университета Хаджег-тепе в Турции.
Для быстрой одновременной и более экономичной диагностики мутаций FII/FVL нами был разработан экспресс метод, позволяющий обойти этап выделения ДНК и использовать одну рестрикгазу Hind Ш.
Для оптимизации данной модификации мы использовали мутагенные праймеры как для FVL, так и для F П с особой нуклеотидной вставкой, которые, при наличии замены нуклеотида гуанина на аденин - G-A в определенной позиции приводили к образованию сайга расщепления для рестрикгазы Hind Ш -A/AGCTT.
Также мы использовали комбинацию ряда модификаций проведения ПЦР реакции непосредственно на крови (10-50 мкл), не вьщеляя ДНК, так как это значительно удешевляет и ускоряет процедуру.
Результаты эксперимента по одновременному определению FVL и F П мутации представлены на фото 1.
__ _ 345 пн
пн—322 пн
200 пн^^ИЕЯ^Н^И^НН^^НН*— 143 пн
100 111 пн
Фоню 1. Полоса 1 -ДНКмаркер. Полоса 2- FVL нормальный аллель (143 пн). Полоса 3 FVL- гомозигота (111 пн) Полоса б- негативный контроль. Полосы 4,5,7-продукты совместной амплификации, где полоса 4 - FVL (143пн) и FII (345пн) без мутаций, полосы 5,7- мутантам FVL (143/111 пн) и FI1 стели (345/322 пн).
Частоты генотипов и аллелей определяли по формулам Харди - Вайнберга и Бернштейна. Зависимость между изучаемыми мутациями и венозными и артериальными тромбозами и оценку достоверности по распределению частот мутаций определяли по следующим параметрам: сЫ-2 Пирсона с поправкой Иейтса, Odds Ratio с 95% интервалом достоверности, RR с
95% интервалом достоверности - относительный риск, р по двухстороннему варианту точного критерия Фишера - P.(f). Использовали также пакет статистической программы SPSS для Windows 2000 ХР.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Разработка метода одновременной диагностики FVL и FII мутаций. Известно, что FVL и F II мутации могут быть у 30-60% (в зависимости от выборки) больных с ВТ, а клинико-лабораторные методы анализа имеют слабые стороны, и порой не могут выявить различие между гомозиготами и гетерозиготами по мутациям FVL/FII. Считается, что степень погрешности пороговых значений рутинных клинико-лабораторных методов составляет около 5-10%. Еще одним слабым местом как коагуляционного, так и ELISA тестов является то, что малейшее наличие гемолиза в крови и хранение плазмы более 3 дней (без замораживания) практически делают тест невыполнимым.
Для констатации присутствия мутаций и точной диагностики FVL и FII мутаций используют молекулярно-генетические методы. На сегодняшний день описано несколько методов и их модификаций, и практически все они базируются на проведении комплексной ПЦР. Наиболее широко употребляемый вариант представляет собой комплексную амплификацию сразу двух фрагментов различных генов в одной пробирке с последующей обработкой их различными рестриктазами и разделением фрагментов рестрикции в ага-розном или полиакриламидном геле. В случае с мутациями FVL/FII используют рестриктазы Mnll и Hind III. Положительной стороной данной модификации является сравнительная техническая простота, а отрицательной - тот факт, что рестриктаза Mnll крайне дорога и необходимо разделять процедуры для FVL и FII.
Для достаточно дешевого, но и технологически простого скрининг-метода определения FVL/FII мутаций мы разработали собственную модификацию метода полураздельной ПЦР с последующим рестрикционным анализом лишь
одной, дешевой эндонуклеазы - HindIII. При проведении модификации мы использовали как для FVL, так и для FII, мутагенные праймеры с особой нук-леотидной вставкой, которая при наличии замены нуклеотида гуанина на аденин в определенной позиции приводила к образованию сайта расщепления для рестриктазы HindIII - A/AGCTT. Праймеры были следующие; для FVL -А (5'-TGC CCA GTG СТТ AAC AAG ACC A-3') и В (5'-GGT TAC TTC AAG GAC AAA ATA CCT GTA AAG CT-3') и для мутации FII: А (5'-ТСТ AGA AAC AGT TGC CTG GC-3') и В (5'- ATA GCA CTG GGA GCA TTG AAG С -3'). Мы также использовали комбинацию нескольких модификаций проведения ПЦР непосредственно на гемолизате крови, не выделяя ДНК, так как это значительно удешевляет и ускоряет процедуру.
Нами применялся метод полураздельной амплификации с плавным повышением температуры отжига праймеров. При такой тактике в течение первых 10 циклов происходило амплифицирование и накопление FII амплифициро-ванных фрагментов, а позже, когда в среду вносили праймеры для гена FV, уже существовал некий пул FII фрагментов. Полученные фрагменты длиной в 345 п.н. для FII и 143 п.н. для FVL содержали мутагенную нуклеотидную вставку AAG на 322 нуклеотиде для FII и 111 для FVL и, соответственно, сайт рестрикции для HindIII. После рестрикции могли образоваться как фрагменты длиной в 322 и 23 п.н. для FII, так и 111 и 32 п.н. для FVL генов. При отсутствии соответствующей мутации, рестрикции не происходит. Данная модификация позволяет проводить определение мутаций FVL и FII в одной пробе за 6-10 часов.
Распространение FVL мутации у жителей Азербайджана среди здоровых и больных с венознымн тромбозами и сердечно-сосудистыми заболеваниями.
Для достижения поставленных задач мы провели исследование по определению частоты Лейденской мутации гена FV у населения Азербайджана как в контроле (здоровые доноры), так и у больных из групп риска (пациенты с венозными и артериальными тромбозами). Хотя в качестве контрольной группы использовали группу доноров азербайджанской национальности, мы учитывали тот факт, что на террито-
рии Азербайджана помимо азербайджанцев проживают представители других этнических групп. В связи с этим мы провели исследование также в группах доноров лезгинской, курдской и тапышской национальности.
Результаты нашего исследования продемонстрировали присутствие носителей РУЬ мутации среди доноров азербайджанской, курдской, лезгинской и тапышской выборки.
Данные о частоте носительства мутации РУЬ 169Ю-А у азербайджанцев и представителей других этнических групп представлены в таблице 1.
В ходе проведенных исследований в группе из 80 доноров азербайджанской национальности было выявлено 10 гетерозигот по мутации РУЬ,что составило
12,5% от всей выборки. Гомозигот по данной мутации выявлено не было. Из 10 гетерозигот 6 были мужчинами и 4 женщинами, средний возраст доноров составил 31 год. Частота нормального аллеля РУ 169Ю была 0,937, а мутантного аллеля РУЬ 1691А равнялась 0,063.
В то же время у 60 доноров лезгинов нами было выявлено 7 гетерозигот по данной мутации, что составило 11,5%. В этой группе гомозигот по данной мутации также не было выявлено. Из 7 носителей мутантного гена 4 были мужчинами, 3 женщинами. Средний возраст выявленных носителей 36 лет. Частота нормального аллеля РУ 1691 в была 0,942, а мутантного алелля РУЬ 1691А - 0,058.
Близкие частоты мы также наблюдали в курдской подгруппе. Так, из 45 доноров мы выявили 4-х гетерозигот по мутации РУЬ, что составило 10%, и ни одной гомозиготы по мутации РУЬ. Из 4 носителей мутантного гена - 3 мужчины, 1 женщина. Средний возраст выявленных носителей был 36 лет. Частота нормального аллеля РУ 169Ш равнялась 0,955, а мутантного аллеля РУЬ 1691А - 0,045.
В то же время в подгруппе из 50 доноров талышей нами было выявлено только 2 гетерозиготы по мутации РУЬ, что составило 4%. Гомозигот по мутации в этой группе также не было выявлено. Оба носителя мутантного гена были мужчинами. Средний возраст выявленных носителей составлял 36 лет. Частота нормального аллеля РУЬ 169Ю-0,98, а мутантного аллеля РУЬ 1691А - 0,02.
Разброс частоты мутации ИУЬ и частоты носителей среди обследованных этнических групп был незначительным. Частота носительства ИУЬ мутации, за исключением талышской выборки (4%), была в пределах 10-12,5%, и разница в частоте му-тантного генотипа не превышала р (0 = 0,6-0,8 и сЫ-2 = 0,1-0,09. Разница в частотах мутантного генотипа РУЬ между азербайджанской и талышской выборкой хотя и была выше, чем между остальными выборками, но статистически не подтверждалась: р (1) = 0,13 и сЫ-2 = 1,7. Таким образом, очевидно, что мутация РУЬ распространена среди этнических групп, населяющих Азербайджан, и частота ее встречаемости сходна во всех исследованных выборках.
Далее было показано, что мутация РУЬ является серьезным фактором риска венозных тромбозов. Среди 60 больных с различными формами ВТ было выявлено 23 носителя РУЬ мутации -4 гомозиготы и 19 гетерозигот. Из 19 гетерозигот 13 были мужчинами и 6 женщинами. Средний возраст больных - гетерозигот по данной мутации в этой группе составлял 56 лет.
Нами было выявлено, что в группе больных страдающих венозными тромбозами мутация РУЬ присутствует с частотой одной из самых высоких из опубликованных ,так как 32% больных являлись гетерозиготами.а 7% гомозиготами по РУЬ мутации. Доля носителей РУЬ мутации среди больных составила 39%.Частоты аллелей были следующие: РУЬ 169Ю -0.775 и РУЬ 1691А -0.225. Ожидаемые частоты генотипов были следующие РУЬ 169100-36.03, РУЬ 1691 С-А 20.9, РУЬ 1691 АА-3.06. Суммарная погрешность между ожидаемыми и наблюдаемыми частотами генотипов составила £сЬ-2=0.56, р (^>0.8. При сравнении наблюдаемых генотипов в группе у больных ВТ с данными контрольной группы (азербайджанская выборка) мы получили следующие данные: ОЯ-4.4 (95% С1 1.8-11) и Ш1-2.1 (1.4-2.7) и СЫ-2= 11.3 и р (0 (по тесту Фишера)-0.0008
Как видно из приведенных данных, мутация РУЬ 1691 в-А является значительным фактором риска ВТ. Среди больных носителей мутации РУЬ было выявлено три случая сочетанного носительства других наследственных факторов риска: 2 случая РУЬ/РИ гетерозигот, что составило 3% от общего числа больных и один случай РУЬ/МТНРЯ 677ТТ-1,4%.
В то же время среди 30 больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, мы обнаружили 4 гетерозигот по БУЬ мутации, что составило 13%. Из 4 больных, 3 были мужчинами (средний возраст больных был 57лет) и одна женщина в возрасте 59 лет. В этой группе гомозигот по данной мутации нами не было выявлено. Частота 1691 в нормального аллеля = 0,933, частота мутантного аллеля =1691А-0.066.
Ожидаемое количество генотипов £Р/Ы691АА-0.13, £РУЬ1691С-А-3.7, £РУ1Л69ЮО-26.11 Суммарная погрешность между ожидаемыми и полученными частотами £ сЫ-2=0.16.
Таблица 1. Распространение мутации РУ1Л69Ю-А в Азербайджане.
Выборки Доноры Больные тромбозами, азербайджанцы
Азербайд жанцы Курды Лезгины Талыши Венозные тромбозы Артериальные тромбозы
Количество обследованных 80 45 60 50 60 30
Количество
гомозигот 0 0 0 0 4 0
1691АА
Количество
гетерозигот 1691 С-А 10 4 7 2 19 4
Частота носителей % 12,5 10 11,5 4 39 13
Частота аллелей
169Ю 0.937 0.955 0.942 0.98 0.775 0.933
1691А 0.063 0.04 5 0.058 0.020 0.225 0.066
Ожидаемое
количество
генотипов
169ЮО 69.99 41.04 53.04 48.02 36.03 26.11
169ЮА 10.01 3.96 6.96 1.98 20.9 3.7
1691АА 3.06 0.13
СШ-2,р ЕсЫ-2=0.56 ЕсЫ-2=0.16
169Ю 0.00024 0.0004 0.0064 0.003
1691А 0.0003 0.0005 0.0002 0.0025
ХсЫ-2=ЕЮ-Е12 Е Гр>0.9 £р>0.9 £р>0.8 5>0.8
Частота носителей данной мутации в Азербайджане 10-12.5% и, соответственно, соотношение между контрольной и исследуемой группами - ОЯ составляет около 1-1,3. Такое соотношение не демонстрирует статистически достоверного увеличения частоты РУЬ мутации в данной выборке. Так, для РУЬ 011-1.1 (95% С1 0.26-4.1 )и ЯЯ-
1.05 (0.3-2.5) и Chi-2= 0.02 и р (по тесту Фишера) -1. Как видно, ни один из параметров не указывал на возможную взаимосвязь между FVL мутацией и предрасположенностью к сердечно-сосудистым заболеваниям.
Согласно литературным данным, частота распространения FVL мутации варьирует не только в различных странах, но и в различных субпопуляциях в пределах одной страны. В странах Европы частота носителей этой мутации находится в пределах от 1 до 14%, но в основном, характеризуется величиной 4-7% (Akar et al., 1997; Antoniadi et al., 1999; Andreotti et al., 2000; Lane et.al, 2000; Mercier et al., 2001 и др.)
Таблица 2 Сравнение частот носнтсльства мутации FVL в азербайджанской выборке н выборках стран Западной Европы и Америки
Выборки Количество мутант-ных Генотипов Количество нормальных генотипов Частота носительства % OR(95% Cl) Chi-2 P(f)
Азербайджан / Нидерланды 10/14 70/460 12.5/2,9 4,7(1,9-11,8) 12,0 0,008
Азербайджан / Германия 10/13 70/173 12.5/6,5 1,9 (0,8-4,6) 1,52 0,155
Азербайджан / Италия 10/22 70/409 12.5/5,1 2,6 (1,2-6,0) 5,2 0,02
Азербайджан / Великобритания 10/5 10/219 12.5/2,2 6,2 (1,9-21) 11,0 0,001
Азербайджан / Испания 10/10 10/192 12.5/4,9 2,7 (1,0-7,4) 3,84 0,036
Азербайджан / Аргентина (представители белой расы) 10/6 10/194 12.5/3,0 4.6 (1,7-15) 7,8 0,0038
Азербайджан / США 10/7 10/178 12.5/3,9 3,8(1,7-11,2) 6,2 0,01
Мы провели сравнение частот носительства мутации в азербайджанской выборке с данными сходных исследований, проведенных как в странах Европы, так и Америки. Полученные результаты свидетельствуют о том, что мутация РУЬ присутствует у населения Азербайджана с частотой сравнимой или даже
более высокой, чем среди населения многих исследованных в этом отношении стран. Сравнение частот распространения FVL в Азербайджане и в других странах дается в таблице 2.
Таблица 2 и таблица 6 составлены на основе результатов сходных с исследованиями проведенными в ряде стран Европы и Америки (Налу et al., 2000; Grossmann et al., 2002; Amitrano et al., 2000; McColl et al., 1999; Iniesta et al., 2001; Varela et al., 2001;Hessner et al.,1999;)
Первоначально, до 1997 года, когда появились данные по Греции и Турции, вопрос о происхождении мутации FVL 1691G-A был решен в пользу теории о возникновении данной мутации в неолитическом периоде на территории современной северо-западной Европы в одной из популяций, которая впоследствии мигрировала к югу. Полученные нами данные скорее поддерживают теорию о происхождении мутации FVL на территории стран Средиземного моря или в районе Ближнего Востока и продвижении ее к северу, т.к. налицо существование протяженной области, где уровень распространения мутации равномерно высок и даже выше, чем в большинстве стран Европы ( Antoniadi et al., 1999;Gurgey et al., 1997, 1998; Mercier et al., 2001 ; Meyer-Michel et al., 1999; Ridker et al., 1997). Наше предположение в значительной степени подтверждается данными о 12-15% частоте носительства мутации FVL среди ливийцев, йеменцев и оманцев (Hakime-Iraki N et al., 2000).
Как видно из приведенных нами данных (таблицы 1 и 2) мутация FVL является очень существенным фактором риска развития ВТ в Азербайджане. Опыты по моделированию функционального эффекта мутации FVL in vitro показали, что наличие мутантного аллеля (гетеро-зиготы) может в 5-10 раз замедлить расщепление фактора V протеином С. Хотя, как мы упомянули выше, относительная степень риска ВТ при мутации FVL увеличивается в 5-10 раз для гетерозигот и 60-80 для гомозигот, в абсолютных значениях мутация FVL в Азербайджане более значимый фактор развития ВТ, чем во многих странах. Частота носителей мутации FVL среди больных с ВТ в Азербайджане в 1.5-2 раза выше, чем в выборках большинства стран. Мы полагаем, что частота распространения мутации FVL среди больных групп риска находится в зависимости от частоты мутации в популяции. В странах, где частота мутации FVL в популяции близка к наблюдаемой нами в Азербайджане, частота FVL среди больных групп риска также не сильно отличается от наблюдаемых нами значений..
То, что мутация Б VI, является фактором риска для ВТ уже продемонстрировано с 1994 года, однако роль мутации РУЬ в предрасположенности к артериальным тромбозам до сих пор не определена
Таблица 3.Распределение Е\'Ь мутации в контрольной выборке н у больных с венозными тромбозами в различных странах
Выборки Частота но-сительства FVL у больных ВТ (%) Частота носи-тельства FVL в контроле(%) OR (95%CI 1-...) Р
Азербайджанская 39,0 12,5 4,4 <0,05
Турецкая 35,0 7,1 4,5 <0,05
Австрийская 27,0 - 30,0 5,0 4,0 - 4,7 <0,05
Итальянская 21,0-24,0 3,2-5,0 3,0 - 6,0 <0,05
Французская 19,5-22,0 3,5-5,0 4,0 - 5,5 <0,05
Немецкая 22,0 - 30,0 6,0 - 8,0 3,0-5,0 <0,05
Английская 17,0-26,0 2,2 - 7,0 3,0 - 5,0 <0,05
Северная Америка 14,0-20,0 3,0-4,0 2,5 - 4,0 <0,05
Северная Африка 0 0 0 >0,05
Японская 0 0 0 >0,05
СевероАмериканские аборигены 0 0 0 >0,05
Основное количество работ, за исключением ряда сообщений, не выявило связи между мутацией FVL и артериальными тромбозами в не специализированной выборке больных. (Dimino et al., 1997; Doggen et al., 1998; Hultin et a!., 1999;Indaletal., 1999; Lane et al., 2000и др.) Наше исследование также не обнаружило увеличения частоты носителей FVL среди больных с артериальными тромбозами.
Подводя итог, можно сказать, что мутация FVL присутствует в Азербайджане, и частота ее распространения является одной из самых высоких среди известных на сегодняшний день.
Распространение РII мутации у жителей Азербайджана среди здоровых и больных с венозными тромбозами и сердечно-сосудистыми заболеваниями.
В ходе проведенной работы по определению частоты мутации в гене Р П нами было показано, что данная мутация присутствует во всех обследованных этнических группах и является фактором риска ВТ.
Частота Р П среди исследованных этнических групп варьировала незначительно. Так, нами была выявлена 1 гетерозигота в группе из 80 доноров азербайджанцев. В лезгинской выборке нами было выявлено 2 гетерозиготы. В выборках из талышей и курдов было выявлено по одной гетерозиготе. Гомозигот по данной мутации выявлено не было. Случаев сочетанно-го носительства РП/РУЬ или Б П / МТНШ также не было выявлено. Мутация 20210(3-гена ГО является од ним из серьезнейших наследственных факторов риска развития ВТ, выявленных в течение последних лет. Принимая во внимание значение мутации РП как фактора риска коа-гулопатий, мы провели исследование по определению частоты носительства данной мутации в группе из 60 больных с ВТ.
В ходе исследования среди больных с венозными тромбозами, нами было выявлено 6 ге-терозигот по Р П мутации, что составило 10% . Гомозигот по Р П мутации в данной группе больных нами не было выявлено. Среди выявленных носителей было обнаружено 3 случая сочеганных мутаций; один случай сочетания Р П/МТНП1677С-Т и два случая сочетания по Р П/РУЬ, что суммарно составило 5%.Частоты аллелей И1 в данной группе были следующие: нормальный аллель РП20210С-0.95, мутшгтный аллель ГО20210А-0.05. Количество ожидаемых генотипов было следующим РП2021000-54.15, РП20210 О-А-5.7, ГО 20210 АА-0.15. Суммарная погрешность между наблюдаемыми и ожидаемыми значениями X сЫ-2=0.2 и р (О теста Фишера >0.9. Полученные данные находятся в соответствии с распределением Харда- Вайнберга.
Сравнение частот генотипов РП 2021000 и РП 202100-А в контрольной группе и группе больных с ВТ показало, что данная мутация является фактором риска развития ВТ. Так, для мутации РП- 011-8.8 (95% С11-190) и Ш1-2.1 (95% С11-2.5) и СЫ-2= 3.85 ирф -(0.04). В то же время если обратил, внимание на значения СЫ-2= 3.85 и р (1) (-0.04), а также степень разброса 95% интервала достоверности, то очевидно, что данная мутация не столь значимый фактор риска как мутация Р/Ь.
Однако результаты исследования среди больных с артериальными тромбозами отличались от группы с ВТ. В ходе проведенного исследования среди 30 больных обнаружено 2 ге-терозиготы по данной мутации - частота встречаемости 6,6%. Оба носителя были мужчины -средний возраст 62 года. Случаев сочетанного носительства по FII/FVL и F1I/MTHFR677TT нами не было выявлено. Частота муташного аллеля FII20210А составила 0.03. Частота нормального аллеля 20210 G равнялась 0,97. Ожидаемое количество генотипов S F020210AA-0.027. £ FH20210GA-1.92., I FII20210G-27.9. Суммарная погрешность между ожидаемыми и полученными частотами £ chi-2=0.032. OR для данной группы составил 5.6 (0.5-31.64), RR 2.5 (0.5-3.9), chi-2=1.3, р (f) тест Фишера составил 0.18. Как видно из приведенных данных, основные статистические параметры указывают на то, что FII мутация навряд ли может быть непосредственным фактором риска. Частоты носителей мутации FIL 20210 G-A и аллелей как среди этнических групп и групп риска представлены в таблице 4.
Мутация FI1 вызывает повышение уровня протромбина в плазме, однако, по различным литературным источникам пенетрантность и экспрессивность данной мутации неодинакова и степень риска зависит как от физиологических параметров организма, так и возможной комбинации факторов риска. Как показывают исследования, свыше 50-70% всех больных с ВТ имеют, по крайне мере, один из генетических факторов риска, а порой и их сочетание. Частота носителей мутаций FVL/FÏÏ, и FD/MTHFR 677С-Т в нашей группе больных составила 5%. Примечательно, что сочетание FVL/FU мутаций не было выявлено ни у одного из обследованных доноров во всех этнических группах. При сравнении частот мы получили следующие данные: 2 носителя FVL/FII из 60 больных и 0 из 235 здоровых доноров- р (f) теста Фише-ра=0,04, chi-2=3,85.
Из 60 обследованных больных 16 страдали осложнениями и тяжелыми формами ВТ (тромбофлебитом и тромбоэмболиями, постромбофлебическим синдромом и др.).
Из данных 16 .больных 3 являлись носителями FII мутации, а один из них имел сочетанное носительство по FII и FVL мутациям. До 28% больных с тромбофлебитами и тромбоэмболиями имели генотипа FII 20210G-A, что не превышает средние данные по другим популяциям, где проводились исследования среди групп больных с осложненной клиникой ВТ.
Таблица 4. Распространение мутации FII 20210 G>A в Азербайджане.
Выборки Доноры Больные тромбозами, азербайджанцы
Азе рбай-джанцы Ку рды Лезгины Та-лыши Венозные тромбозы Артериальные тромбозы
Количество обследованных 80 45 60 50 60 30
Количество гомозигот 1691АА 0 0 0 0 0 0
Количество гете-розигот69Ю-А 1 7 2 1 6 2
Частота Носителей % 1.25 2.5 3.3 2 10 6.6
Частота аллелей 1691 О 1691 А 0.994 0.006 0.978 0.022 0.984 0.016 0.98 0.02 0.95 0.05 0.97 0.03
Ожидаемое количество генотипов 1691 Св 1691 6А 1691 АА 79.04 0.96 43.02 1.98 58.01 1.99 48.02 1.98 54.15 5.7 0.15 27.9 1.92 0.027
СЫ-2, р 16910 1691А 7 сЫ-2= у, (Р-Е)2 Е 0.0002 0.002 I Р>0.9 0.021 0.49 £Р>0.5 0.00017 0.003 I р>0.9 0.02 0.45 Z р>0.5 £ chi-2=0.2 р(0>0.9 £ chi-2=0.032
Мы показали выше, что частота носителей мутации FVL в азербайджанской выборке больных с ВТ превышает частоту носительства мутантных генотипов в других странах. В то же время сравнение частот носителей мутантных генотипов FII у больных с ВТ в азербайджанской выборке и в ряде стран не показало достоверного отли- Р чия в частотах носителей и аллелей.
Роль данной мутации как фактора риска развития ВТ, меняется от популяции к -4 популяции и может варьировать от 2 до 7 кратного увеличения степени риска [Вег-tina et al 1994,1997; Lane et al., 2000; Lensing et al., 1999; Poort et al., 1996; Rosendaal et al., 1997,1998,1999; Rinnel et al., 2000; Selingsohn et al., 1999; Zivelin et al., 1998, 1999 и др.]. Для нашей популяции эта величина составила 2,1, что находится в пределах значений, опубликованных ранее. В таблицах 5. и 6 приведены частоты носи-
тельства мутации РИ у больных с тромбозами в различных популяциях и сравнение частот по данным ряда работ из различных выборок.
Как видно из таблиц 4,5 и 6 частота распространения РП мутации и статистических показателей в выборке бальных с ВТ в Азербайджане незначительно отличается от аналогичных параметров, наблюдаемых в других популяциях.
Таблица ЛЧасгота иоснтельства мутации П1 у больных с тромбозами в различных популяциях.
Выборки Частота носителей FII среди больных с ВТ (V.) Частота носителей FII в контроле (%) OR Р
Азербайджанская 10 1,25 8.8 <0,05
Турецкая 9-11 2,2 4 <0,05
Еврейская 13-10 2,5-3,5 6,5-4 <0,01
Французская 7-10,2 2-4,8 2,1-7 <0,05
Английская 6-11 1,8-2,8 3,5-4,1 <0,03
Немецкая 6,8-11 1,7-3 4-7 <0,01
Итальянская 9-12 2,5-4 1,8-5 <0,05
Северная Америка 4-10 2,5-4 2,3-4 <0,05
Таблица б. Сравнение частот иоснтельства мутащш FII в выборке больных с ВТ в Азербайджане и в других странах.
Выборки Количество носителей FII мутации. Количество больных без мутаций. Частота носителей FII мутации % OR (95%) cli ¡-2 Р (0
Азербайджанская / Аргентинская 6/12 54/182 10/6.3 1.6(0.5-5) 0.5 0.4
Азербайджанская / Испанская 6/14 54/108 10/9.5 0.9(0.3-2.6) 0.01 1
Азербайджанская / Турецкая 6/16 54/129 10/11 1.2(0.3-2.5) 0.004 1
Азербайджанская Английская 6/28 54/129 10/11 1.1 (0.2-13) 1.5 0.2
Азербайджанская / Североамериканская 6/29 54/381 10/5 2.1(0.7-6) 1.6 0.15
Несмотря на то, что мы выявили роль мутации FII в предрасположенности к ВТ, нам не удалось показать значимость мутации FII в развитии артериального тромбоза, хотя мы наблюдали некоторое увеличение частоты носителей. Вопрос о возможной роли мутации FII как фактора риска инфаркта миокарда и артериальных тромбозов до сих пор не решен однозначно.
Результаты исследований из разных стран порой бывают достаточно противоречивы, хотя практически во всех работах сообщается о повышении частоты носительства мутации FEI среди интересующего нас контингента больных - от незначительного до 4-5 кратного. Значительное количество работ демонстрирует как некоторую взаимосвязь между данной мутацией и сердечно-сосудистыми заболеваниями, так и некоторую популяционную избирательность (Andreotti et al ., 2000; Arruda et al., 1997; Dimino et al., 1997; Doggen et al ., 1998; Franco et al., 1999 и др.).
Подводя итог, мы можем утверждать, что данная мутация присутствует в Азербайджане с частотой, практически идентичной, приводимой ранее для других популяций, и ее роль в качестве фактора риска развития ВТ подтверждена статистически.
Распространение MTHFR 677С-Т у жителей Азербайджана среди здоровых и больных с венозными тромбозами и сердечно-сосудистыми заболеваниями.
В ходе исследования мы выявили гетерозигот MTHFR 677С-Т и гомозигот MTHFR 677ГТ во всех обследованных выборках. От 2 до 43 % доноров в этнических группах являлись гомозиготами, но различия не были статистически достоверными (р>0,05). Наши результаты также не подтверждают предположения о склонностях гомозигот или гетерозигот по мутации MTHFR 677С-Т к развитию венозных или артериальных тромбозов.
В группе больных с ВТ было выявлено 5 гомозигот 67 /11, что составило 8.4%. Из 5 гомозигот, 4 были мужчины, и 1 была женщиной. Было также выявлено 27 гетерозигот- 677С-Т, из которых- 11 были женщины и 16 были мужчины. Гетерозиготы по MTHFR 677С-Т в этой груше составила 45%. В общей сложности выявлено 53% носителей этой мутации в исследуемой группе. Среди 27 носителей мутации 677С-Т обнаружены один гомозиготный и один гетерозиготный носители FVL мутации.
Частота нормального аллеля MTHFR 677СЮ.69, частота мугантного аллеля MTHFR 677Т=0.31. Количество ожидаемых генотипов было следующим: MTHFR 677СС- 28.56, MTHFR 677С-Т - 22.84, MTHFR 67/11-5.77. Суммарная степень погрешности между наблюдаемыми и ожидаемыми генотипами X chi-2 равнялась 0.2 и соответственно, р (f) - теста Фишера >0.85. Наблюдаемые генотипы находились в соответствии с распределением закона Харди-Вайнберга. Сравнение наблюдаемых генотипов среди больных с ВТ и в контрольной выборке (азербайджанские доноры) показало, что данная мутация не может являться значимым фактором риска ВТ так как chi-2 = 2.08, p(f) теста Фишера равняется -0.3 при 2 степенях свободы. При сравнении только гомозигот между контрольной и исследуемой выборкой мы получили схожие данные :OR-2.3 (95% CI 0.5-13) и RR-1.5 (0.6-2.25.) и Chi-2= 1.4 и р (f-одна степень свободы) -0.28. Ни один из статистических критериев не подтверждает роли мугантного аллеля MTHFR 677Т или же гомозигот MTHFR 67 /11 в предрасположенности к ВТ. Из 60 больных с ВТ, 16 страдали от различных форм осложнений (обширные тромбофлебиты и тромбоэмболии, постромбофлебитические синдромы) и среди них были выявлены 2 гомозиготы. У одного пациента гомозиготное состояние сочеталось с носительством FVL мутации. Частота гомозигот MTHFR 67/1 Г среди этих больных была около 13%. Если мы сравним частоты гомозигот в этой подгруппе больных и контрольной выборке, то мы получим следующие данные- Chi-2= 2.2, Р (f-одна степень свободы) - 0.18, что опять не достигает статистически достоверного порога.
Схожие выкладки мы получили в группе больных с артериальными тромбозами. Мы обнаружили 2 гомозиготы по MTHFR 677ТТ мутации среди 30 пациентов данной группы, что составило 6,6%. Оба были мужчинами. Было также выявлено 14 гетерозигот, из которых 5 были женщины и 9 мужчинами. Частота гетерозигот составила 48%. Суммарная частота но-сительства мутации MTHFR 677Т в этой группе составила 55%.
Частота нормального аллеля MTHFR 67700.71, частота мугантного аллеля MTHFR 677Т=0.29, количество ожидаемых генотипов было следующим: MTHFR 677СС- 15.12, MTHFR 677С-Т-12.32, MTHFR 677ТТ-2.569. Суммарная степень погрешности между наблюдаемыми и ожидаемыми генотипами £ chi-2 равнялась 0.5 и соответственно, р (f) - теста Фишера >0.7. Наблюдаемые генотипы находились в соответствии с распределением закона Харди-Вайнберга. Сравнение частоты наблюдаемых генотипов среди больных с артериальными
тромбозами и в контрольной выборке (азербайджанские доноры) показало, что данная мутация не может являться значимым фактором риска артериальных тромбозов так как chi-2 = 12, p(f) теста Фишера равняется -0.56 при 2 степенях свободы. При сравнении только гомозигот между контрольной и исследуемой выборкой мы получили схожие данные OR-O.5 (95% CI 0.06-4.5) и RR-0.7 (0.3-3.4.) и СЫ-2= 0.4 и Р (f-одна степень свободы) (по тесту точности Фишера) -0.8. Статистические критерии не подтверждает роли мугантного аллеля MTHFR 677Т или же гомозигот MTHFR 67 /I I в предрасположенности к артериальным тромбозам. Сравнение статистических параметров больных в группе с венозными и артериальными тромбозами демонстрирует, что повышение частоты мугантного аллеля MTHFR 677Т у больных с артериальными тромбозами еще слабее выражено, чем у таковых с ВТ. В таблице 7 мы представили данные по распространению мутации MTHFR 677С-Т в Азербайд жане.
Таблица 7. Распространение мутации MTHFR677C-T в Азербайджане.
Выборки Доноры Больные тромбозами, азербайджанцы
Азербайджанцы Курды Лезгины Талы-ши Венозные тромбозы Артериальные тромбозы
Количество обследованных 80 45 60 50 60 30
Количество гомозигот 677ТТ 3 2 2 1 5 2
Количество гетерозигот 677С>Т 32 21 27 17 27 14
Частота Носителей % 44 57 46 36 53 55
Частота аллелей 677С 677Т 0.76 0.24 0.72 0.28 0.74 0.26 0.81 0.19 0.69 0.31 0.71 0.29
Ожидаемое количество генотипов 677СС 677>Т 677ТТ 46.2 29.2 4.6 23.38 18.1 3.52 32.85 23.08 4.07 32.8 18.46 2.18 28.15 5.77 15.12 12.32 2.6
СЫ-2, р 677СС 677С>Т 677ТТ I сЫ-2= 2 Ю-Е)2 Е 0.031 0.26 0.55 1р>0.6 0.08 0.46 0.65 1р>0.54 0.1 0.665 1.05 I р>0.4 0.02 0.14 0.64 1р>0.8 Z chi-2=0.2 2 chi-2=0.52
Частота носигельства мутации МТНЖ 677С-Т и особенно МТНРЯ 67711 варьирует от популяции к популяции. Наше исследование выявило присутствие данной мутации среди на-
селения Азербайджана, и частота ее распространения в регионе ниже, как среди больных, так и в здоровой выборке, чем в раде европейских стран. В таблице 8 представлено сравнение частот встречаемости гомозигот МЮТЯ 677Т-Т на основе данных ряда работ из различных стран Европы и Америки и в азербайджанской выборке.
Таблица 8 Распространите МТНБК 677Т-Т мутации у больных с венозными тромбозами в
различных выборках.
Выборки Частота гомозигот у больных (%) Частота гомозигот в контроле(%) OR(95% CI) Р
Азербайджанская 8,4 3,5 2,3 <0,05
Итальянская 22,0 - 13,0 9,0- 17,0 1,2-3,0 < =>0,05
Турецкая 12,0 6,0 2,5 =>0,05
Еврейская 13,0 12,0 1,1 >0,05
Английская 7,0-15,0 8,0-15,0 1,0-1,5 >0,05
Французская 12,7-19,0 12,0-17,0 1,1-2,0 >0,05
Австрийская 24,0 11,0 2,3 <=>0,05
Результаты исследований проведенных среди больных с ВТ о роли мутации гена фермента MTHFR в процессе развития и отягощения клиники ВТ и сердечно-сосудистой патологии демонстрируют противоположные результаты даже в пределах одной страны. В отличие от мутаций FVL и РП, фенотипическое проявление MTHFR мутации зависит от наличия целой комбинации внешних и внутренних факторов риска Результаты нашего исследования поддерживают предположение о второстепенной роли данной мутации в патогенезе ВТ и сосудистых заболеваний. Однако в ряде европейских популяций (французская, турецкая, английская и др.), где высока частота встречаемости 677Т-Т мутации MTHFR, и такого серьезного фактора риска, как мутация FVL (5-10%), имеется высокая вероятность их сочетанного носительст-ва, и, соответственно, повышен риск развитая тех или иных патологий (Alhene-gelas et al ., 1999; Amitrano et al ., 2000; Antoniadi et al ., 1999; Brown et al ., 1997; Raziel et al ., 2001; Schneider et al., 1998; Sykes et al., 2000; Talmon et al ., 1997). В ряде работ содержатся данные, что OR для FVL/MTHFR 677С-Т носителей находится в пределах 4-6 при достоверном 95% интервале (Adams et al., 1998; Alhene-gelas et al., 1999; Amitrano et al ., 2000; Brown et al., 1997; Den Heijer et al., 1997; Kluijtsman et al., 1998)
Таким образом, мы можем констатировать, что мутация МТНРЯ С677Т присутствует в Азербайджане и не является значительным фактором риска венозных и артериальных тромбозов.
Заключение.
До недавнего времени, механизм предрасположенности к развитию ВТ был неясен. Однако уже к середине 80-х годов было выявлено 3 наследственно обусловленных фактора риска
- дефициты ашшромбина Ш, свободного протеина 8 и протеина С. В сумме эта факторы мо-1ут был. ассоциированы с 10-15% случаями венозных тромбозов. За последнее десятилетие выявлено несколько наследственных факторов, предрасполагающих к развитию ВТ а, также сердечно сосудистых заболеваний.
К таким дефектам относится точковая мутация 169 Ю- А гена 5 плазменного фактора системы свертывания крови точковая мутация 677С-Т в гене фермента МТШ-К, точечная мутация 202100-А в 3; - нетранскрибируемом участке гена плазменного фактора 2 системы свертывания крови -протромбина.
Большинство зарубежных авторов полагают, что вышеназванные мутации крайне редки за пределами Европы и Северной Америки, и их роль в развитие ВТ и других патологических состояний незначительна Поскольку аналогичных работ в Азербайджане не было проведено, настоящее исследование было направлено на изучение частоты и роли данных мутаций в развитии венозного тромбоза в нашей республике.
Результаты проведенного исследования показали присутствие всех трех изучаемых мутаций в Азербайджане, различную степень их участия в развитие ВТ сердечно-сосудистой патологии и артериальных тромбозов в неселективной группе больных. Результаты исследования могут быть использованы для формирования групп риска, с целью профилактики ВТ и сердечно-сосудистых нарушений, предотвращения клинических осложнений и рецидивов имеющихся состояний.
ВЫВОДЫ
1. Обнаружены мутации Р/Ь, РП и МТНРЯ во всех обследованных этнических выборках
- азербайджанской, лезгинской, курдской, талышской со следующими частотами:
а) в азербайджанской выборке частота распространения мутации Р/Ь - 12,5%, частота аллеля Р/Ь 169Ю - 0,937, БУЬ 1691А - 0063, частота распространения мутации М -1,25%,
частота аллеля FII 20210G - 0,994, FIT 2021 OA - 0,006; частота распространения мутации MTHFR - 44%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,76, MTHFR 677Т - 0,24;
b) в лезгинской выборке частота распространения мутации FVL - 11,5%, частота аллеля FVL 1691G- 0,942, FVL 1691А - 0,058; частота распространения мутации FII - 3,3%, частота аллеля FII 20210G - 0,984, FU 20210А - 0,016; частота распространен мутации MTHFR -46%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74, MTHFR 677Т - 0,26;
c) в курдской выборке частота распространения мутации FVL -10%, частота аллеля FVL 1691G-0,955, FVL 1691 А- 0,045, частота распространения мутации FII - 2,5%, частота аллеля FH 20210G - 0,978, FIT 20210А - 0,022; частота распространения мутации MIHFR 57%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74-0,72, MTHFR 677Т-0.28;
d) в талышской выборке частота распространения мутации FVL - 4%, частота аллеля FVL 1691G - 0,98, FVL 1691А - 0,020; частота распространения мутации FII - 2%, частота аллеля F1120210G - 0,98, частота аллеля FII20210А - 0,02, частота распространения мутации MTHFR - 36%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,81, MTHFR 677Т - 0,19.
2. Обнаружено, что разница в частоте носительсгва мутаций FVL, FIT, MTHFR и частоте аллелей между азербайджанской и остальными обследованными выборками из этнических групп незначительна.
3. Показано, что частота носительсгва FVL мутации в Азербайджане выше, чем во многих странах. В то же время частота гомозигот по MTHFR мутации в Азербайджане значительно ниже, чем в других странах. Процент носителей и частота аллеля FII в Азербайджане соответствуют среднеевропейским частотам.
4. Установлено, что в обследованной выборке азербайджанских бальных мутации FVL и FII являются факторами риска возникновения ВТ. Мутация FII является менее значимым фактором риска, чем мутация FVL. Статистически достоверного повышения частоты гомозигот по мутации MTHFR среди больных не обнаружено.
5. Показано, что сочетанное носительство мутаций FVL/FQ и FVL/MTHFR в большей степени увеличивает риск развития ВТ, чем наличие каждой мутации в отдельности. Риск развития заболевания у носителей FVL/FII гораздо выше, чем у носителей FVL/MTHFR,
6. Установлено, что ни одна из изученных мутаций не является фактором риска развития артериальных тромбозов в выборке азербайджанцев. Некоторое повышение частоты носительсгва мутации FH у больных с артериальными тромбозами статистически не достоверно.
7. Разработана и внедрена в практику модификация метода Multiplex PCR - RFLP, позволяющая одновременно определять мутации FVL и FIT при минимальном количестве исследуемого материала (до 10 мкл крови) и приводящая к сокращению времени проведения реакции и экономии дорогостоящих реактивов.
СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
1. Джафаров.Т, Рустамов Р, Гюргей А, Алтай С // Распространение наследственных факторов гиперкоагуляции- мутация G1691A фактора V Leiden и мутации 20210G-A фактора II протромбина в азербайджанской популяции. Сборник научных трудов НИИ Гематологии и Трансфузиологии, Баку, 1999. Стр179-188.
2. Jafarov Т, Rustamov R//"Prevalence of the G20210A mutation in Azerbaijan ". British Joumai of Haemotology 2000. Vol 108. P 887-888.
3. Джафаров T, Рустамов PII Одновременное определение мутаций 1691-G-A гена фактора V свертывания крови и 20210-G-A гена кодирующего протромбин посредством комплексной ПЦР из цельной крови с применением одной рестреказы (HIND Ш).Молекулярная Биология 2000.Том 34, N3. Cip 34-36
4. Рустамов Р, Джафаров.Т, ЛОруджева //Разработка усовершенсвенного метода для одновременного определения мутаций FVL и FU методом комплексной ПЦР на цельной крови// Сборник научных трудов НИИ Гематологии и Трансфузиологии, Баку, 2001. Стр 156-164.
5. Jafarov Т., Bagirov I., Rustamov R. Venous thrombosis risk factors - FVL, FII AND MTHFR C677T in Azerbaijan.(abstract). Joint Annual Scientific Meeting of Haematology Society of Australia and New Zeland. 21-24,October 2001 "
6. Рустамов P, Багиров И., Джафаров Т. Наследственная предрасположенность к развитию тромбозов.(методические рекомендации). МинЗдравохранения Азербайджана и НИИ Гематологии и Трансфузиологии. Баку 2001,45стр.
7. Рустамов Р, Джафаров Т, Багиров И, Оруджева ЛУ/ Влияние различных наследственных факторов риска на развитие венозных и артериальных тромбозов // Сборник научных трудов,НИИ Гематологии и Трансфузиологии,Баку, 2001.Стр.92-107
Служба множительной техники ГУ РОНЦ им H.H. Блохина РАМН
Заказ 204 Тираж 100 зкэ.
г <-
РЫБ Русский фонд
2006-4 28381
2 О ОНТ 2003
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Джафаров, Торгул Ахверди оглы
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. АКТУАЛЬНОСТЬ
ПРОБЛЕМЫ.!.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Венозный тромбоз как мультифакторная патология.
1.2. Плазменный фактор V системы свертывания крови и мутация гена FVL,ассоциированная с развитием венозного тромбоза.
1.3. Плазменный фактор II системы свертывания крови и мутация гена FII как фактор риска развития венозного тромбоза.
1.4. Термолабильный вариант метилентетрагидрофолат редуктазы как фактор риска развития венозных тромбозов и сердечнососудистых заболеваний.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1 Материалы и объекты исследования.
2.2 Методы исследования.
2.2.1. Выделение ДНК из лимфоцитов крови человека.
2.2.2. Определение Лейденской мутации гена FV.
2.2.3. Определение мутации 20210G-A гена FII.
2.2.4. Определение мутации 677С-Т гена MTHF.
2.3. Статистическая обработка результатов.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Разработка метода одновременной диагностики FVL и FII мутаций.
3.2. Лейденская мутация гена FV.
3.2.1. Распространение FVL мутации у жителей Азербайджана.
3.2.2. Частота носительства FVL мутации у больных с венозными тромбозами.
3.2.3. Мутация FVL как возможный фактор риска развития сердечнососудистых заболеваний.
3.3. Мутация 20210G-A гена FII.
3.3.1. Распространение мутации FII в Азербайджане.
3.3.2. Частота носительства мутации FII у больных с венозными тромбозами.
3.3.3. Мутация 20210G-A гена FII как фактор риска развития сердечно-сосудистых заболеваний.
3.4. Мутации 677С-Т гена MTHFR.
3.4.1. Распространение мутации 677С-Т гена MTHFR в Азербайджане.
3.4.2. Частота носительства мутации 677С-Т гена MTHFR в группах риска в Азербайджане.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Распространение и молекулярная диагностика наследственных факторов гиперкоагуляции в азербайджанской популяции"
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
Изучение роли наследственных факторов в системе свертывания крови представляет большой интерес для современной биологии и медицины.
Многочисленные исследования последних лет посвящены выяснению роли таких наследственных дефектов, как аномалия фактора V (Лейденовская мутация) системы свертывания крови (FVL); гипергомоцистеинемия, вызываемая мутацией 677С-Т гена фермента метилентетрагадрофолатредуктазы (MTHFR); мутация 20210G-А фактора П (FIT) системы свертывания крови, в предрасположенности к коагулопатиям (18 Д7,30,61,62,6366,154).
В последние годы мутации по указанным генам обнаружены во всех основных популяциях Европы, Азии, Америки и Индии
10,12,24,40,41,62,111,116,134,136,152,158,159,167.) По имеющимся данным частота встречаемости мутаций FVL, MTHFR и FD наиболее высока во всех основных популяциях Европы, а также у жителей стран Средиземного моря и американцев европейского происхождения (9,11,31,3 3,68,81,8 5,88,100,134,192) Исследования, проведенные за последнею декаду, продемонстрировали, что мутации генов FVL и FII системы свертывания крови являются серьезными факторами риска развития тромбозов( 18,19,27,30,36,47,48,61,62,154,161,166,167,168,176) Первые данные о существовании наследственных факторов, вызывающих склонность к гаперкоагуляции, были представлены Egeberg et al. в 1965 г. В дальнейшем исследования в этом направлении развивались в работах таких исследователей как : Bertina etal.,1994; Dahlback et al.,1994; Franco et al.,1998; Pepe et al.,1997; Poort et al.,1996; Rees et al.,1996; Rosendaal et al.,1999; и др., которые выявили FVL, MTHFR и FD мутации и пришли к заключению о том, что указанные мутации являются потенциальными факторами риска развития венозных тромбозов (ВТ) и обнаруживаются у более, чем 50% больных с ВТ.
Многие исследователи сообщают, что частота встречаемости данных наследственных факторов риска в различных популяциях значительно варьирует, что, несомненно, сказывается на степени их участия в патологическом процессе(27,50,81Д1129).
В связи с этим проведение исследований, направленных как на определение частот носителей мутаций генов FVL, MTHFR и FIT, так и на изучение их взаимосвязи с венозными и артериальными тромбозами приобретает особую важность для осуществления профилактических мероприятий, и в первую очередь для ранней диагностики тромбозов и определения групп риска.
В Азербайджане до настоящего исследования работ по изучению особенностей распространения мутаций в генах FVL, MTHFR и FII не проводили. Вместе с тем, сведения о частоте встречаемости данных мутаций среди населения Азербайджана в целом и у больных с тромбозами позволят определить степень риска развития патологии гемостаза и разработать профилактические и лечебные мероприятия по борьбе с тромбозами.
Результаты сравнения частот встречаемости мутаций генов FV, F13 и MTHFR в Азербайджане и других странах позволят подтвердить или опровергнуть имеющиеся предположения об ареале возникновения и миграции данных мутаций.
Результаты исследования могут послужить основой для дальнейших, более детальных исследований системы свертывания крови, как среди узкоспециализированных групп патологий, так и на уровне популяций и национальных меньшинств в Азербайджане и Закавказье.
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Целью настоящей работы являлось изучение частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FII (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) и их роли как фактора риска развития ВТ в Азербайджане. В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:
- определить частоты распространения данных мутаций в азербайджанской популяции в целом;
- выяснить различия в распределении частот данных мутаций среди этнических групп, населяющих Азербайджан;
- определить частоты вышеуказанных мутаций у больных с венозными и артериальными тромбозами в Азербайджане;
- разработать модификацию метода комплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для одновременного определения FII и FVL мутаций в минимальном количестве исследуемого материала.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.
В данной работе впервые установлены частоты распространения мутаций генов FV (Leiden 1691G-A), FII (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) в Азербайджане, как в контрольной группе, так и в группах риска (венозные тромбозы и сердечно-сосудистые заболевания).
Показано, что данные мутации встречаются в Азербайджане с частотами: FVL -4-12,5%, Fn (20210G-A) - 1,25-3,3%, MTHFR (677Т-Т) - 2 - 4,3%. По сравнению с другими популяциями частоты данных мутаций в Азербайджане отличаются: частота FVL мутации увеличена до 2 раз, в 3-4 раза снижена частота гомозигот по мутации MTHFR (677С-Т), при практически идентичной частоте носительства мутации ЕП-2%-3%.
Достоверных различий в частоте распространения FV (Leiden 1691G-A), FII (20210G-A) и MTHFR (677С-Т) мутаций у этнических групп, населяющих Азербайджан, не наблюдали.
На основании данных, полученных нами, установлено, что мутации в генах FVL и FII являются значимыми факторами риска развития ВТ, и что совместно они могут встречаться практически у 50% больных с ВТ. Также продемонстрировано, что мутация FVL является более значимым фактором риска, чем мутация FTI. Вместе с тем показано, что мутация MTHFR (677С-Т) не является самостоятельным фактором риска данной патологии.
Установлено, что мутации FVL, MTHFR или FII не являются существенными факторами риска артериальных тромбозов.
Впервые разработана модификация метода комплексной ПЦР для одновременного определения мутаций FII и FVL в минимальном количестве исследуемого материала.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.
Демонстрация существенной роли генетических факторов риска в предрасположенности к ВТ в Азербайджане и сведения об их частоте среди здорового населения и больных позволит вносить изменения в терапевтические мероприятия при ВТ. Несомненно, что в случаях с отягощенным анамнезом по ВТ целесообразно определение как FVL, так и FII мутаций для корректировки терапии антикоагулянтами. Разработанный молекулярно-генетический метод для диагностики наследственно обусловленных форм ВТ основывается на модификации метода комплексной ПЦР и позволяет за 8-10 часов провести точную диагностику совместного носительства FVL/FII мутаций при наличии минимального количества исследуемого материала (10-50 мкл крови, взятой на любом антикоагулянте).
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. Определена частота носителей мутации генов FVL, FII, MTHFR в Азербайджане в популяции в целом и по сравнению с популяциями других стран.
2. Установлены частоты распространения мутации FVL, FII и MTHFR и частоты их аллелей FVL 1691 G, 1691 A, FII 20010 G, MTHFR 677 С и MTHFR 677 Т в основных этнических выборках, населяющих территорию Азербайджана - азербайджанцев, лезгинов, талышей и курдов.
3. Исследована роль мутаций FVL, FII и MTHFR как факторов риска в возникновении венозных и артериальных тромбозов .
4.Разработаны и внедрены в практическую медицину модификации высокочувствительного молекулярно-генетического метода, позволяющего одновременное диагностирование FVL, FII мутации при минимальном количестве исследуемого материала и приводящего к сокращению времени проведения реакции, а также к экономии дорогостоящих реактивов.
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Джафаров, Торгул Ахверди оглы
выводы
1. Обнаружены мутации FVL, FII и MTHFR во всех обследованных этнических выборках - азербайджанской, лезгинской, курдской, талышской со следующими частотами: a) в азербайджанской выборке частота распространения мутации FVL — 12,5%, частота аллеля FVL 1691G - 0,937, FVL 1691А - 0063, частота распространения мутации FII - 1,25%, частота аллеля FП 20210G - 0,994, FII 20210А - 0,006; частота распространения мутации MTHFR - 44%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,76, MTHFR 677Т-0,24; b) в лезгинской выборке частота распространения мутации FVL — 11,5%, частота аллеля FVL 1691G - 0,942, FVL 1691А - 0,058; частота распространения мутации FH -3,3%, частота аллеля FII 20210G - 0,984, FII 20210А - 0,016; частота распространения мутации MTHFR - 46%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74, MTHFR 677Т - 0,26; c) в курдской выборке частота распространения мутации FVL - 10%, частота аллеля FVL 1691G -0,955, FVL 1691А - 0,045, частота распространения мутации FII -2,5%, частота аллеля FII 20210G - 0,978, FH 20210А - 0,022; частота распространения мутации MTHFR 57%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,74-0,72, MTHFR 677Т - 0,28; d) в талышской выборке частота распространения мутации FVL - 4%, частота аллеля FVL 1691G - 0,98, FVL 1691А - 0,020; частота распространения мутации FU -2%, частота аллеля FII 20210G - 0,98, частота аллеля FII 20210А - 0,02, частота распространения мутации MTHFR - 36%, частота аллеля MTHFR 677С - 0,81, MTHFR 677Т-0Д9.
2. Обнаружено, что разница в частоте носительства мутаций FVL, FIT, MTHFR и частоте аллелей между азербайджанской и остальными обследованными выборками из этнических групп незначительна
3. Показано, что частота носительства FVL мутации в Азербайджане выше, чем во многих странах. В то же время частота гомозигот по MTHFR мутации в
Азербайджане значительно ниже, чем в других странах. Процент носителей и частота аллеля FII в Азербайджане соответствуют среднеевропейским частотам.
4. Установлено, что в обследованной выборке азербайджанских больных мутации FVL и FII являются факторами риска возникновения ВТ. Мутация FI3 является менее значимым фактором риска, чем мутация FVL. Статистически достоверного повышения частоты гомозигот по мутации MTHFR среди больных не обнаружено.
5. Показано, что сочетанное носительство мутаций FVL/FII и FVL/MTHFR в большей степени увеличивает риск развития ВТ, чем наличие каждой мутации в отдельности. Риск развития заболевания у носителей FVL/FII гораздо выше, чем у носителей FVL/MTHFR
6. Установлено, что' ни одна из изученных мутаций не является фактором риска развития артериальных тромбозов в выборке азербайджанцев. Некоторое повышение частоты носительства мутации FII у больных с артериальными тромбозами статистически не достоверно.
7. Разработана и внедрена в практику модификация метода Multiplex PCR - RFLP, позволяющая одновременно определять мутации FVL и FII при минимальном количестве исследуемого материала (до 10 мкл крови) и приводящая к сокращению времени проведения реакции и экономии дорогостоящих реактивов.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Джафаров, Торгул Ахверди оглы, Баку
1. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М., Медицина. 1988.
2. Шифман Ф. Патофизиология крови. Binom publiushers. 2000.
3. Снэлл Д., Доссе Ж., Нэтенсон С. Совместимость тканей. Мир, М., 1979.
4. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. Мир, М., 1986, т. 3, стр. 181184.
5. Adams М., Smith P. D., Martin D., Thompson J. R., Lodwick D., Samani N. J. Genetic analysis of thermolabile methylene-tetrahydrofolate reductase as a risk factor for myocardial infarction. Quart. J."Med., 1998, v. 89, p. 437-444.
6. Adrresino P., Mannucci P., Duca F., Corral J. Prothrombotic Genetic Risk Factors in Young Survivors of Myocardial Infarction. Blood, 1995, v. 94, p. 46-51.
7. Allaart C. F., Poort S. R., Rosendaal F. R., Reitsma P. H., Bertina R.M. Increased risk of venous thrombosis in carriers of hereditary protein С deficiency defect. Lancet, 1993, v. 341, p. 134-138.
8. Alhene-gelas M., Arnaud E., Nicaud V. Venous thromboembolic disease and the prothrombin, methylene tetrahydrofolate reductase and factor V genes. Thromb. Haemost., 1999, v. 81, p. 506-510.
9. Akar N., Akar E., Dalgin Sozuoz A., Omurliu K. Frequency of Factor V Leiden (1691G-A) mutation in Turkish population.Thromb. Haemost., 1997, v. 78, p. 1527-1528.
10. Arruda V., Siquiera L., Chiapariani L., Coelho O., Mansur.A. Prevalence of the prothrombin gene variant 20210 G-A with venous thrombosis and arterial disease. Blood, 1997, v.651, p. 960-961.
11. H.Bancroft J., Schaefer L., Degen S. Characterization of the Alu- rich 5'- flanking region of the human prothrombin-encoding gene: Identification of a positive cis-acting element that regulates liver-specific expression.Gene, 1990, v. 95, p. 253 -264.
12. Banfield D. K., MacGillivra T. A. Partial characterization of vertebrate prothrombin cDNAs: amplification and sequence analysis of the В chain of thrombin from nine different species. Proc. Nac. Acad. Sci., 1992, v.89, p. 27792783.
13. Bertina R.M., Briet E., Veltkamp J J. Variants of vitamin К dependent coagulation factors. Acta Haemotologica, 1979, v. 62, p. 1-3.
14. Bertina M. Hereditary protein S deficiency. Haemostasis, 1985, v. 15, p. 241-245.
15. Bertina R., Koeleman В., Koster Т., Rosendaal F., Dirven R., de Ronde H., van der Velden P., Reitsma P. Mutation in Blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C. Nature, 1994, v.369, p.64-67.
16. Bertina R.M., Rosendaal F. R. Venous thrombosis the interaction of genes and environment.New Eng. J. Med., 1997, v.338, p. 1840-1841.
17. Blajchman M. A., Austin R. C., Fernandez-Rachubinski F., Sheffield W. P. Molecular basis of inherited human antithrombin deficiency. Blood,1992, v.80, p. 2159-2171.
18. Board P. G., Coggan M., Pidcock M. E. Genetic heterogeneity of human prothrombin (FII). Ann. Hum. Genet., 1982, v. 46, p. 1-9.
19. Bock S.C., Prochownik Е. V. Molecular genetic survey of 16 kindreds with hereditary antithrombin III deficiency. Blood, 1987, v. 70, p. 1273-1278.
20. Boers G. Hyperhomocysteinemia as a risk factor for arterial and venous disease: of incidence and relevance. Thromb. Haemost.,1997, v.78, p. 520-522.
21. Braun A., Muller В., Rosche A. A. Population study of the G1691A mutation (R506Q, FV Leiden) in the human factor V gene that is associated with resistance to activated protein C. Hum. Genet., 1996, v. 97, p. 263-264.
22. Brey R. L., Coull В. M. Cerebral Venous Thrombosis: Role of Activated Protein С Resistance and Factor V Gene Mutation. Stroke, 1996, v. 27, p. 1719-1720.
23. Broekmans A. W., Veltkamp J. J., Bertina R. M. Congenital protein С deficiency and venous thromboembolism: a study of three Dutch families. New Eng. J. Med., 1983, v. 309, p. 340-344.
24. Brown В. K., Luddington R., Williamson D., Baker P. Riskof venous thromboembolism associated with a G to A transition at position 20210 in the 3'— untranslated region of the prothrombin gene. Brit. J. Haemotology, 1997, v. 98, p. 907-911.
25. Bykowska K., Vertun-Baranowska В., Windyga J. and Lopaciuk S. Prevalence of G20210A prothrombin gene mutation in Poland. Pol. Arch.Med. Wewn., 2002, v. 104(5), p. 729-733.
26. Chaida C., Gialeraki A., Tsoukala C., Mandalaki T. Prevalence of FVQ 506 mutation in the Hellenic population. Thromb Haemost., 1996, v. 76, p. 127-131.
27. Chan W. P., Lee С. K., Kwong Y. L., Lam С. K., Liang R. A novel mutation of arg306 of factor V gene in Hong Kong Chinese. Blood, 1998, v. 191, p. 11351139.
28. Corral J., Zuaro-Jausoro J., Rivera R., Gonzalez-Conejero F. Clinical and analytical relevance of the combination of prothrombin 20210 A/A and factor V Leiden : results from large family. Brit. J. Haemotology, 1999, v. 105, p. 560563.
29. Cosgriff Т. M., Bishop D. Т., Hershgold E. J., Skolnick M. H., Martin B. A., Baty B. J., Carlson K. S. Familial antithrombin III deficiency: its natural history, genetics, diagnosis and treatment. Medicine, 1983, v. 62, p. 209-220.
30. Couturaud F., Oger E., Abalain J.H., Chenu E., Guias В., Floch H.H., Mercier В., Mottier D. and Leroyer C. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T genotype and venous thromboembolic disease. Respiration, 2000 , v. 67(6), p. 657-661.
31. Cumming A., Keeney S., Salden A., Bhavani M.The prothrombin gene 20210 G-A : Prevalence in a U.K anticoagulant clinic population. Brit. J. Haemotology, 1997, v. 98, p. 566-569.
32. Dahlback В., Stenflo J. Binding ov bovine coagulation factor Xa to platelets. Biochemistry, 1978, v. 117, p. 4948-4951.
33. Dahlback В., Hildebrand B. Inherited resistance to activated protein С is corrected by anticoagulant cofactor activity found to be a property of factor V. Proc. Nat. Acad. Sci., 1994, v. 91, p. 1396-1400.
34. Dahlback В., Hansson С., Islam M., Szpirer J., Szpirer C,. Lundwall A., Levan
35. G.Assignment of gene for coagulation factor V to chromosome 1 in man and to chromosome 13 in rat. Somat. Cell Molec. Genet., 1998, v. 14, p 509-514.
36. De Bruijn S., Stam J., Koopman M., Vandenbroucke J. Case-control study of risk of cerebral sinus thrombosis in oral contraceptive users who are carriers of hereditary prothrombotic conditions. Brit. Med. J., 1998, v. 316, p. 589-592.
37. Debus O., Koch H., Kurlemann G., StraterR., Vielhaber H., Weber P., Nowak-Gottl U. Factor V Leiden and genetic defects of thrombophilia in childhood porencephaly. Arch. Dis. Child (Fetal Neonatal Ed.), 1998, v. 78, p. 121-124.
38. Degen S. F., MacGillivray R. Т., Davie E. W. Characterization of the complementary deoxyribonucleic acid and gene coding for human prothrombin. Biochemistry, 1983, v. 22, p. 2087-2097.
39. De Maat M., Bladbjerg E., Johansen L., Gram J., Jesperson .J. Absence of prothrombin mutation in Inuit. Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p. 882- 883.
40. Den Heijer M., Blom H., Gerrits W., Rosendaal F., Haak H., Wijermans P., Bos
41. H. Is hyperhomocysteinaemia a risk factor for reccurent venous thrombosis?. Lancet, 1995, v. 345, p. 882-885.
42. Den Heijer M., Koster Т., Blom H., Bos H., Reitsma P., Rosendaal F. Hyperhomocysteinemia as a risk factor for deep-vein thrombosis. N. Eng. J. Med., 1997, v. 334, p. 759-762.
43. De Stefano V., Leone G.Antithrombin III congenital defects: revising classification system. Thromb. Haemost., 1989, v. 62, p. 820-821.
44. Dimino G., Grandone E., Margaglione M .Clinical relevance of polymorfic markers of arterial thrombosis. Thromb. Haemost., 1997, v.78, p. 462-463.
45. Eekhoff EM, Rosendaal FR, Vandenbroucke JP Minor events and the risk of deep venous thrombosis. Thromb Haemost., 2000, v. 83, p. 408-411.
46. Egan Robert. Prothrombic and vascular risk factors in NAION. Ophthalmology,2000, v. 107, p: 2116-2117.
47. Egeberg O.Thrombophilia caused by inheritable deficiency of Blood antithrombin. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 1965, v.17, p. 92-93.
48. Engbersen A., Franken D., Boers G., Stevens E., Trijbels F., Blom
49. H. Thermo labile 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase as a cause of mild hyperhomocysteinemia. Am. J. Hum. Genet., 1995, v. 56, p. 142-150.
50. Fassett MJ, Bohn YC, Wing DA Longitudinal evaluation of activated protein С resistance among normal pregnancies of Hispanic women. Am J Obstet Gynecol 2000 Jun 182:6 1433-6.
51. Fletcher O., Kessling A. MTHFR association wiTh arteriosclerotic vascular disease? Hum. Genet., 1998, v. 103, p. 11-21.
52. Franco R.F,. Santos S.E., Elion J., TavellaM.H., Zago F.Prevalence of the G20210A Polymorphism in the 3-Untranslated Region of the Prothrombin Gene in Different Human Populations. Acta Haemotologica, 1998, v.100, p. 9-12.
53. Franco R., Araujo A., Zago M., Elion. Analysis of the C677T mutation of the methylentetra hydrofolate reductase gene in different ethnic groups. Thromb and Haemost., 1998, v. 79,p. 119-121.
54. Freeman J. M., Finkelstein J. D., Mudd S. H., Uhlendorf B. W. Homocystinuria presenting as reversible 'schizophrenia': a new defect in methionine metabolism with reduced methylene-tetrahydrofolate-reductase activity. Pediat. Res., 1972, v. 6, p. 423.
55. Friedline JA., Ahmad E.,Garcia D., Blue DD., CenizaN., Mattson JC. and Crisan D. Combined factor V Leiden and prothrombin genotyping in patients presenting with thromboembolic episodes. Arch. Pathol. Lab. Med., 2001, v. 125(1), p. 105-111.
56. Gallus A. S. Familial venous thromboembolism and inherited abnormalities of the Blood clotting system. Aust. New Zeal. J. Med., 1984, v. 14, p. 807-810.
57. Garsia-Gala J., AlvarezV., Pinto C., Soto I. Factor V Leiden (R506Q) and risk of venous thromboembolism: a case control study based on the Spanish population. Clin Genet., 1997, v. 152, p. 206-207.
58. Gerhard A., Scharf R.E., Struve S., Zotz R.B. Prothrombin and factor V mutations in women with a history of thrombosis during pregnancy and the puerperium. New. Engl. J. Med., 2000, v. 342, p. 374-380.
59. Glueck C. J., Glueck H. I., Greenfield D., Freiberg R., Kahn A., Hamer Т., Stroop D., Tracy T. Protein С and S deficiency, thrombophilia, and hypofibrinolysis: pathophysiologic causes of Legg-Perthes disease. Pediat. Res., 1994, v. 35, p. 383-388.
60. Gomez E., Sonja C.Rapid Simultaneous Screening Of Factor V Leiden and G20210A Prothrombin Variant by Multiplex Polymerase Chain Reaction on Whole Blood. Blood, 1997, v. 91, p. 2210-2211.
61. Goyette P., Sumner J. S., Milos R., Duncan A. M. V, Rosenblat D. S., Matthews R. G., Rozen R. Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification. Nature Genet., 1994, v. 7, p. 195-200.
62. Goyette P,. Christensen В., Rosenblatt D. S., Rozen R. Severe and mild mutations in cis for the methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene, and description of five novel mutations in MTHFR. Am. J. Hum. Genet., 1995, v. 59, p. 12681275.
63. Goyette P., Pai A., Milos R., Frosst P.,Tran P., Chen Z., Chan M., Rozen R.Gene structure of human and mouse methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR). Mammalian Genome, 1998, v. 9, p. 652-656.
64. Griffin J., Evat В., Zimmerman Т., Kleiss J., Wideman C. Deficiency of protein С in congenital thrombotic disease. J. Clin. Invest., 1981, v. 68, p. 1370-1373.
65. Greer,A. The challenge of thrombophilia in maternal-fetal medicine. New Eng. J. Med., 2000, v. 342, p. 424-425.
66. Greengard J., Sun X., Xu X., Fernandez J., Griffin J., Evatt B. Activated protein С resistance caused by arg506gln mutation in factor Va. Lancet, 1994, v. 343, p. 1361-1362.
67. Greengard J., Eichinger S., Griffin J., Bauer K. Variability of thrombosis amonghomozygous siblings with resistance to activated protein С due to an arg-to-gln mutation in the gene for factor V. New Eng. J. Med., 1994, v. 331, p. 1559-1562.
68. Gregg J. P., Yamane A. J., Grody W. W. Prevalence of the factor V-Leiden mutation in four distinct American ethnic populations. Am. J. Med. Genet., 1997, v. 73, p. 334-336.
69. Griffin A., Griffin H. Rapid DNA isolation.Current Innovations and Future., 1995, v. 32,p. 341-350.
70. Gruenberg J. C., Smallridge R. C., Rosenberg R. D. Inherited antithrombin III deficiency causing mesenteric venous infarction: a new clinical entity. Ann. Surg., 1975, v. 181, p. 791-794.
71. Grundy С. В., Holding S., Millar D. S., Kakkar V. V., Cooper D. N. A novel missense mutation in the antithrombin III gene (ser349-to-pro) causing recurrent venous thrombosis. Hum. Genet., 1992, v. 88, p. 707-708.
72. Gurgey A., Mesci L. The prevalence of factor V Leiden mutation in Turkish population. Turk. J. Pediat., 1997, v.39, p. 37-39.
73. Gurgey A., Balta G. and Boyvat A. Factor V Leiden mutations and PAI-1 gene 4G/5G genotype in thrombotic patients with Behcet's disease. Blood Coagul. Fibrinolysis, 2003, v. 14(2), p. 121-124.
74. Gurgey A., Hicsonmez G., Parlak H., Balta G. Prothrombin Gene 20210 G-A mutation in Turkish Patients with Thrombosis. Am.J.Haemotology, 1998, v. 89, p. 179-200.
75. Gyde О. H., Middleton M. D.,Vaughan G. R., Fletcher D. J.Antithrombin III deficiency, hypertriglyceridaemia, and venous thrombosis. Brit. Med. J., 1978, v. l,p. 621-622.
76. Hillarp A je Zaller В., Svrensson P.,. Dahlback B. The 20210 G-A allele of the prothrombin gene is a common risk factor among Swidish outpatients with verified deep vein thrombosis. Thromb Haemost., 1997, v. 78, p. 990-996.
77. Ho ward Т.Е., Marusa M., Channell C., Duncan A. A patient homozygous for a mutation in the prothrombin gene 3-untranslated region associated with massive thrombosis. Blood Coagul Fibrinolysis., 1997, v. 8, p. 316.
78. Hultin M. В., Grimson R. C., Doggen С. M., Rosendaal F. R., Cats V. M., Bertina R. M. Factor V Leiden, Prothrombin 20210 Gene Variant, and Risk of Myocardial Infarction. Circulation, 1999, v. 99, p. 457-460.
79. Humpert P. M., Isermann В., Rudofsky G., Ziegler R., Bierhaus A., Ritz E., Nawroth P. P. The 20210 G to A prothrombin polymorphism and late complications in type 1 diabetes mellitus.Thromb. Haemost., 1999, v. 81, No. 164, p. 64-67.
80. Jenny R., Pittman D., Toole J., Kriz R., Aldape R., Hewick R., Kaufman R., Mann K. Complete cDNA and derived amino acid sequence of human factor V. Proc. Nac. Acad. Sci., 1987, v. 84, p. 4846-4850.
81. Johnson E. J., Prentice С. M., Parapia L. A. Premature arterial disease associated with familial antithrombin III deficiency. Thromb. Haemost., 1990, v. 63, p. 13-15.
82. Juul, Tybjasrg-Hansen, Steffensen R., Kofoed S., Jensen G., and Nordestgaard. Factor Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 meta-analyses. Blood, 2002, v. 100, No. 1, p. 3-10.
83. Kalafatis M., Rand M., Mann К. The mechanism of inactivation of human factor V and human factor Va by activated protein C. J.Biol.Chem., 1994, v. 269, p. 31869-31874.
84. Kang S.-S., Wong P. K., Bock H.-G. O., Horwitz A., Grix A. Intermediate hyperhomocysteinemia resulting from compound heterozygosity of methylenetetrahydrofolate reductase mutations. Am. J. Hum. Genet., 1991, v.48, p. 546-551.
85. Kang S.-S., Wong P. K., Susmano A., Sora J.,Norusis M., Ruggie N. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase: an inherited risk factor for coronary artery disease. Am. J. Hum. Genet., 1991, v. 48, p. 536-545.
86. Kluijtsman L., den Heijer M., Reitsma P., Heil S., Blom H., Rosendaal F. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase and factor V Leiden in the risk of deep-vein thrombosis.Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p, 254-258.
87. Kodaira H., Ishida F., Shimodaira S., Takamiya.O., Furihata K., Kitano K. Resistance to Activated Protein С and Arg 506 Gin Factor V Mutation are Uncommon in Eastern Asian Population. Acta Haemotologica, 1997, v. 981, p. 22-25.
88. Koeleman B, Reitsma P, Allaart C, Bertina R. Activated protein С resistance as an additional risk factor for thrombosis in protein C-deficient families. Blood, 1994, v. 84, p. 1031-1035.
89. Kupferminc M., Eldor A., Steinman N., Many A., Bar-Am A., Jaffa A., Fait G., Lessing. Increased frequency of genetic thrombophilia in women with complications of pregnancy. New Eng. J. Med., 1999, v. 340, p. 9-12.
90. Lane D.A., Olds R. J., Thein S. L. Antithrombin III: summary of first database update. Nucleic Acids Res., 1994, v. 22, p. 3556-3559.
91. Lane D. A., Grant P. J. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease. Blood, 2000, v. 95, p. 1517-1532.
92. Lanchantin G. F., Hart D. W., Friedmann J. A., Saavedra N. V., Mehl J. W. Amino acid composition of human plasma prothrombin. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, p. 5479-5485.
93. Lalouchek W., Aull W., Zeiler K. The Prothrombin G2021 OA Mutation and Factor V Leiden Mutation In Patients with Cerebrovaskular Disease.Blood., 1997, v. 87, p. 704-705.
94. Lensen R.P., Bertina R. M. de Ronde H.,Vandenbroucke J.P. and Rosendaal F.R. Venous thrombotic risk in family members of unselected individuals with factor V Leiden. Thromb. Haemost., 2000, v. 83 (6), p. 817-821.
95. Lensing A., Prandoni P., Prints M., Buller H. Deep-vein thrombosis. Lancet, 1999, v. 353, p. 479-485.
96. Liang R., Lee С. K., Wat M. S., Kwong Y. L., Lam С. K., Liu H. W. Clinical significance of arg306 mutations of factor V gene. Blood, 1998, v. 92, p. 25992600.
97. Lin J., She M., Tsay W.The mutation at position in the 3'-untraslated region is extremely rare in Taiwanese Chinese patients with venous thrombophilia. Thromb. Haemost., 1998, v. 80, p. 343.
98. Lindqvist P., Svensson P., Dahlback В., Marsal K. Factor V Q-506 mutation (activated protein С resistance) associated with reduced intrapartum Blood loss: a possible evolutionary selection mechanism. Thromb. Haemost., 1998, v. 79, p. 69-73.
99. Mahmoud A., Elias E., Beauchamp N., WildeJ.Prevalence of the factor V Leiden mutation in hepatic and portal vein thrombosis. Gut., 1997, v. 40, p. 798800.
100. Maly J, Dulicek P, Safarova M Risk of thrombosis in patients homozygous and heterozygous for factor V Leiden in the East Bohemian region. Clin. Appl. Thromb. Hemost., 2000, v. 6, No. 2, p. 87-89.
101. Marciniak E., Farley С. H., DeSimone P. A. Familial thrombosis due to antithrombin III deficiency. Blood, 1974, v. 43, p. 219-231.
102. Margaglione M., D'Andrea G., Giuliani N., Brancaccio V., De Lucia D., Grandone E., De Stefano V., Tonali P. A., Di Minno G. Inherited Prothrombotic
103. Conditions and Premature Ischemic Stroke : Sex Difference in the Association With Factor V Leiden. Arterioscler Thromb. Vase. Biol., 1999, v.19, p. 17511756.
104. Markus H., Zhang Y., Jeffeiy S. Screening for the Factor-V Arg 506 Gin Mutation in Patients with TIA and Stroke. Cerebrovascular Diseases, 1996, v. 6, p. 360-362.
105. Marlar R. A. Protein С in thromboembolic disease. Semin. Thromb. Hemost., 1986, v. 11, p. 387-393.
106. Martinelli I., Sacchi E., Landi G., Taiol E., Duca F., Mannucci P. M. High risk of cerebral-vein thrombosis in carriers of a prothrombin-gene mutation and in users of oral contraceptives. New Eng. J. Med., 1998, v.338, p. 1793-1797.
107. Meinardi J.R., Pelsma P.M., Koning H., and van der Meer J.Double-Homozygosity for FactorV Leiden and the Prothrombin Gene G20210A Variant in a Young patient With idiopathic Venous Thrombosis. Blood, 1999, v. 94, No. 5, p. 1828-1829.
108. McAndrew P., Brandt J., Pearl D., Prior T.The incidence of the gene for thermolabile methylene tetrahydrofolate reductase in African Americans. Thromb. Res., 1996, v. 83, p. 195-198.
109. Meinardi J. R., Pelsma P. M., Koning H., van der Meer J., Hamulyak K. Double-Homozygosity for Factor V Leiden and the Prothrombin Gene G20210A Variant in a Young Patient With Idiopathic Venous Thrombosis. Blood, 1999, v. 94, p. 1828-1829.
110. Mercier G, Lucotte G. Population genetics of factor v leiden in Europe. Am. J. Reprod. Immunol., 2001, v. 45, p. 65-71
111. Meyer M., Kutscher G., Vogel G. Simultaneous genotyping for factor V Leiden and prothrombin G20210A variant by a multiplex PCR-SSCP assay on whole Blood. Thromb. Haemost., 1999, v. 81, p. 162-163.
112. Meyer-Michel S., Gerotziafas G., Conard J., Marie-Helene Horellou., Elalamy. Clinical Aspects and Laboratory Problems in Hereditary Thrombophilia. Haemostasis, 1999, v. 29, p. 76-99.
113. Miyata Т., Kawasaki Т., Fujimura H., Uchida K., Tsushima M. The prothrombin gene G20210 mutation is not found among Japanese patients with thrombosis and healthy individuals. Blood Coagulation and Fibrinolysis, 1998, v. 9, p. 451-452.
114. Motulsky A. G. Nutritional ecogenetics: homocysteine-related arteriosclerotic vascular disease, neural tube defects, and folic acid. Am. J. Hum. Genet., 1996, v. 58, p. 17-20.
115. Nagayama Т., Nagayama M., Tsuda M., Yoshii F., Shinohara.Y.Low Prevalence of Activated Protein С Resistance and Factor V Leiden in Ischemic Stroke in Japan. Cerebrovascular Diseases, 1996, v. 6, p. 356-359.
116. Nishio H., Lee M., Fujii M., Kario K., Kayaba K., Shimada K., Matsuo M., Sumino K.A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase gene among the Japanese population Jpn. J. Hum. Genet., 1996, v. 41, p. 247-251.
117. Oner A. F., Arslan S., Caksen H., Ceylan A. Budd-Chiari syndrome in a patient heterozygous for both factor V Leiden and the G20210A mutation on the prothrombin gene. Thromb. Haemost., 1999, v. 82, p. 1366-1367.
118. Ozbek N., Atac F.B., Verdi H. and Kayiran S.M. Purpura fulminans in a child with combined heterozygous prothrombin G20210A and factor V Leiden mutations. Ann. Hematol. 2003, v. 82, p. 118-120.
119. Ozbek U., Tangun Y. Freguency of Factor V Leiden in Turkey. Br. J. Haemot., 1997, v. 97, p.504-505.
120. Penick G. D. Blood states that predispose to thrombosis.In: Sherry S.; Brinkhous К. M., Genton E., Stengle J. M. Thrombosis. Washington, D. C.: National Academy of Sciences (pub.) 1969.
121. Pepe G., Riccards O., CamachoV., BrunneliT. Prevalence of factor V Leiden in Non-European populations. Thromb Haemost., 1997, v. 77, p .329-331.
122. Perry D. J., Carrell R. W. Molecular genetics of human antithrombin deficiency. Hum. Mut., 1996, v. 7, p. 7-22.
123. Prondiznski C., Wermes G., Sykora R. The prothrombin G20210 mutation detected by a PCR-based method in Patients with thrombosis. Conn Med., 1998, v. 62, p. 519-525.
124. Ranguelov RD., Rosenthal N., Bromley C. and Vasef M.A. Detection of factor V Leiden and prothrombin gene mutations in patients who died with thrombotic events. Arch. Pathol. Lab. Med., 2002, v. 126(10), p. 1193-1996.
125. Raziel A, Kornberg Y, Friedler S, Schachter M, Sela В A, Ron-El R. Hypercoagulable thrombophilic defects and hyperhomocysteinemia in patients with recurrent pregnancy loss. Am. J. Reprod. Immunol. Microbiol., 2001, v. 45, p. 62-71.
126. Rees D.C., Cox M., Clegg J. World distribution of factor V Leiden. Lancet, 1995, v. 348, p. 1133-1134.
127. Rees D. C., Chapman N. H., Webster M. Т., Guerreiro J. F., Rochette J., Clegg J. B. Born to clot: the European burden. Brit. J. Haemat., 1999, v. 105, p. 564566.
128. Ridker P., Miletich J., Stampfer M., Goldhaber S., Lindpaintner K., Hennekens C. Factor V Leiden and risks of recurrent idiopathic venous thromboembolism. Circulation, 1995, v. 92, p. 2800-2802.
129. Ridker P., Miletich J., Hennekens C., Buring J. Ethnic Distrebution of Factor V Leiden in 4047 Men and Women. JAMA., 1997, v. 277, p. 1305-1308.
130. Rosendaal F., Siscovick D., Schwatrz R., Reitsma P. Factror V Leiden increases the risk of venous and artherial thrombosis in young women. Blood, 1997, v. 89, p. 2817-2818.
131. Rosendaal F. R. Venous Thrombosis: Prevalence and Interaction of Risk Factors. Haemostasis, 1999, v. 29, p. 1-9.
132. Rosendaal F.Venous Thrombosis: a multicausal disease. Lancet, 1999, v. 353, p. 1167-1173.
133. Rosing J., Hoekema L., Nicolaes G. Effects or protein S and factor Xa and factor Va and factor Var506q by activated protein C. J. Biol.Chem., 1995, v. 270, p. 27852-27855.
134. Royle N. J., Irwin D. M., Koschinsky M. L., MacGillivray R. T. A., Hamerton, J. L.Human genes encoding prothrombin and ceruloplasmin map to llpll-ql2 and 3q21-24, respectively. Somat. Cell Molec. Genet., 1987, v. 13, p. 285-292.
135. Sarasin F., Bounameaux H. Decision analysis model of prolonged oral anticoagulant treatment in factor V Leiden carriers with first episode of deep vein thrombosis. Brit. Med. J., 1998, v. 316, p. 95-99.
136. Schafer A. I.Venous thrombosis as a chronic disease. New Eng. J. Med., 1999, v. 340, p. 955-956.
137. Schneider J. A., Rees D. C., Liu Y.-T., Clegg J. B. Worldwide distribution of a common methylenetetrahydrofolate reductase mutation. Am. J. Hum. Genet., 1998, v. 62, p. 1258-1260.
138. Selingsohn U., Zavelin A. Thrombophilia as a multigenic disorder. Thromb. Haemost., 1997, v. 79, p. 297-301.
139. Shen L., Dahlberg B. Factor V and protein S as synergistic cofactors to activated protein С in degradation of factor Villa. J. Biol. Chem., 1994, v. 269, p. 18735-18736.
140. Sorja J,. Almasy L., Tirado L., Borell M. Linkage analysis demonstrates that the prothrombin G20210A mutation jointly influences plasma prothrombin levels and risk of thrombosis. Blood, 2000, v.95, p. 2780-2785.
141. Svensson J., Dahlback B. Resistance to activated protein С as a basis for venous thrombosis. New Eng. J. Med., 1994, v. 330, p. 517-522.
142. Sun X., Evatt В., Griffin J. Blood coagulation factor Va abnormality associated with resistance to activated protein С in venous thrombophilia. Blood, 1994, v. 83, p. 3120-3125.
143. Sykes T.F., Fegan C., Mosquera D. Thrombophilia, polymorphisms, and vascular disease. Mol. Pathol., 2000, v. 53, p. 300-306.
144. Talmon Т., Scharf J., Mayer E., Lanir N., Miller В., Brenner B. Retinal arterial occlusion in a child with factor V Leiden and thermolabile methylene tetrahydrofolate reductase mutations. Am. J. Ophthal., 1997, v. 124, p. 689-691.
145. Thorelli E., Kaufman R., Dahlberg B.Cleavege requirment for activation factor V by factor Xa. Eur. J. Biochemistry, 1997, v. 247, p. 12.
146. Thorelli E., Kaufman R., Dahlback B. The C-terminal region of the FV B-domain is crucial for the anticoagulation for the anticoagulant activity of FV. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 169148-169155.
147. Thorelli E., Randal J., Kaufman R., Dahlback B. Cleavege of Factor V at Arg 506 by Activated Protein С and the protein S. ССЫЛКА
148. Tripodi A., Chantarangkul V., Mannucci P. Hyperprothrombinemia may result in acquired activated protein С resistance. Blood, 2000, v. 96, p. 3295-3296.
149. Voorberg J., Roelse J., Koopman R., Buller H., Berends F., ten Cate J., Mertens K., van Mourik A. Association of idiopathic venous thromboembolismwith single point-mutation at arg506 of factor V. Lancet, 1994, v. 343, p. 1535153624.
150. Wang H., Riddel D., Guinto E., MacGillivray R., Hamerton J. Localization of the gene encoding human factor V to chromosome lq21-25. Genomics, 1998, v. 2, p. 324-328.
151. Wendel U., Bremer H. J. Betaine in the treatment of homocystinuria due to 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase deficiency. Europ. J. Pediat., 1984, v. 142, p. 147-150.
152. Westendorp R., Reitsma P., Bertina R. Inherited prethrombotic disorders and infectious purpura. Thromb. Haemost., 1996, v. 75, p. 899-901.
153. Williamson.D., Brown. K., Luddington R., Baglin C., Baglin T. Factor V Cambridge: a new mutation (arg306-to-thr) associated with resistance to activated protein C. Blood, 1998, v. 91, p. 1140-1144.
154. Winter J. H., Fenech A., Ridley W., Bennett В., Cumming A. M., Mackie M., Douglas A. S. Familial antithrombin III deficiency. Quart. J. Med., 1982, v. 51, p. 373-395.
155. Zandra R., Lesly R., Chilcot I.The C677T MTHFRgene mutation is not predictive of risk for recurrent fetal loss. Brit. J. Haemotology., 1999, v. 1, p. 98-101.
156. Zimmerman H., Cameron A., Fisher L.Myocardial infarction in young adults:Angiographic characterization, risk factors and prognosis.H. Am. Coll. Cardiol., 1995, v. 26, p. 654-655.
157. Zivelin A., Rosenberg N., Faier S., Kornbrot N., Peretz H. Mannhalter C,. Horellou M. H.,Seligsohn U.A single genetic origin for the common prothrombotic G2021 OA polymorphism in the prothrombin gene. Blood, 1998, v. 92, p. 1119-1124.
158. Zivelin A., Griffin H., Samama M., Eldor A. A single genetic origin for a common Caucasian risk Factor for venous thrombosis. Blood, 1997, v. 89, p. 397-401.
159. Zoller В., Dahlback В. Linkage between inherited resistance to activated protein С and factor V gene mutation in venous thrombosis. Lancet, 1994, v. 343, p. 1536-1538.
160. Zoller В., Svensson P., He X., Dahlback B. Identification of the same factor V gene mutation in 47 out of 50 thrombosis-prone families with inherited resistance to activated protein C. J. Clin. Invest., 1994, v. 94, p. 2521-2524.
-
Джафаров, Торгул Ахверди оглы
-
кандидата биологических наук
-
Баку, 2003
-
ВАК 03.00.15
- Динамика распределенности наследственной патологии в Томской обл.
- Молекулярно генетический анализ генов факторов VIII и IX в некоторых популяциях и семьях с гемофилией А и В
- Генетические факторы развития преэклампсии в популяциях различного этнического происхождения
- Медико- и популяционно-генетическое изучение населения Республики Удмуртия
- Комплексное медико - и популяционно-генетическое изучение населения республики Башкортостан
