Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца"

На правах рукописи

КАСАПОВА Евгения Николаевна

Распределение аллелей гена вРШа среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца.

03 00 15 - генетика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□03 158490

Москва 2007

Работа выполнена на кафедре биологии и общей генетики медицинского факультета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор ¡Иткес Александр Веньяминович|

доктор биологических наук, доцент доктор медицинских наук, доцент

Мяндина Галина Ивановна Зотова Татьяна Юрьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор

доктор медицинских наук доцент

Пак Людмила Соломоновна

Асанов Алий Юрьевич

Ведущая организация:

Московский государственный университет им М В Ломоносова, факультет фундаментальной медицины

диссертационного совета Д 212 203 05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу 117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д 8, корп 1

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу 117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д б

Автореферат разослан «. ■У/» 2007г

Защита состоится

часов на заседании

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О Б Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Актуальной проблемой современной медицины является снижение риска осложнений сердечно-сосудистых заболеваний, которые остаются основной причиной смертности (около 1 2 млн. человек ежегодно) и инвалидизации (312 на 10000 человек) в России (Гурвич ИН, 2005) Одним из наиболее важных эндогенных факторов риска развития сердечно-сосудистой патологии, в том числе ишемической болезни сердца (ИБС) и гипертонической болезни (ГБ), являются нарушения липидного обмена Для оценки его нарушений и вероятности развития атеросклероза повсеместно используют определение у больных уровня общего холестерина и триглицеридов сыворотки крови, определение концентраций в сыворотке липопротеидов очень низкой, низкой и высокой плотности (ЛПОНП, ЛПНП, ЛПВП), а также их соотношение, называемое индексом атерогенности (ИА) Процесс атерогенеза начинается, как полагают, при значении НА выше 3 0 (Thompson GR, 1994) В связи с этим, коррекция дислипидемических состояний с целью снижения риска развития осложнений, и уровня смертности от сердечно-сосудистых заболеваний является весьма актуальной проблемой современной терапии

В то же время применение гиполипидемических средств ограничивается высокой стоимостью препаратов этой группы и наличием целого ряда побочных эффектов (Либов И А , Гультикова О С , 2001) С этой точки зрения представляется весьма актуальным использование в клинической практике дополнительных критериев, выделяющих среди больных с дислипидемиями группу риска, первоочередно нуждающуюся в более интенсивном наблюдении и терапии, в том числе с применением гиполипидемических средств

Одним из таких критериев может служить генотипическая характеристика пациентов с дислипидемиями, которая позволяет определить риск развития сердечно-сосудистой патологии задолго до ее появления, а также уменьшить риск возникновения осложнений во время болезни и назначить индивидуальное лечение В последние годы активизировался поиск полиморфных маркеров генов, белковые продукты которых связаны с комплексными патофизиологическими процессами, в том числе с различными звеньями патогенеза сосудистых заболеваний К настоящему времени известно, что причиной генетической предрасположенности к целому ряду заболеваний, в тч коронарному атеросклерозу, ишемической болезни сердца, является наличие дефектных интегриновых рецепторов на поверхности клеток, а так же тромбофилия, обусловленная, в том числе мутациями генов протромбина и коагуляционного фактора V (Etrioni D , 2000, Law R , 1999)

Интегрины, являясь поверхностными рецепторами клетки, обеспечивают взаимодействие клеток с внеклеточным матриксом и друг с другом, а так же участвуют в процессах свертывания крови и перемещения клеток в зону воспаления (Lebran F, 2000) Гликопротеиновая р-субъединица типа Щ, подтипа «а» (GPIIIa) интегринового комплекса тромбоцитов GPIIb/IIIa представлена двумя аллельными формами PLA1 и PLA2 Изменение структуры

гликопротеинового рецептора GPIIIa вследствие мутации сопровождается повышенной агрегацией тромбоцитов Многочисленные исследования показали, что носительство аллеля PLA2 определяет предрасположенность к целому ряду сердечно-сосудистых заболеваний, в числе которых венозные и артериальные тромбозы, коронарный кардиосклероз Частота встречаемости аллеля PLA2 для населения Европы, по данным различных авторов, составляет около 14% (Ridker PN et al, 1997, Simsek S et al, 1993), для населения Москвы нами получена такая же величина Первоначально наличие аллеля PLA2 связывают с нарушениями циркуляции в системе коронарных артерий, ишемической болезнью сердца и инфарктом миокарда (Weiss J et al, 1996)

Генетические полиморфизмы генов системы свертывания крови обусловлены мутациями, которые приводят к тромбоэмболическим и сердечнососудистым заболеваниям Установлено, что полиморфизмы G20210A генов протромбина и G1691А коагуляционного фактора V отвечают за повышение уровня протромбина в плазме и устойчивости к действию регулирующего С-фермента, соответственно (Reny J -L et al, 2003) Однако современные литературные данные относительно влияния полиморфизмов генов коагуляционных факторов II и фактора V на развитие сердечно-сосудистых заболеваний остаются дискуссиоными

Метилентетрагидрофолатредуктаза (MTHFR) играет ключевую роль в метаболизме фолиевой кислоты, необходимой для образования метионина из гомоцистеина и далее - S-аденозилметионина, играющего ключевую роль в процессе метилирования ДНК Нарушения функции фермента MTHFR приводят к гипергомоцистеинемии, которая служит независимым фактором риска развития атеросклероза и атеротромбоза (Monta H et al, 1997) Несмотря на то, что механизм влияния гомоцистеина на атеросклероз полностью не изучен, многие исследования in vitro выявили предполагаемые мишени для действия гомоцистеина Гомоцистеин ингибирует пролиферацию клеток эндотелия и стимулирует пролиферацию гладкомышечных клеток сосудистой стенки, усиливает активность коагуляционного фактора FV, усиливает образование тромбоксана А2 в тромбоцитах, что сопряжено с их активацией Т о гомоцистеин участвует в атеросклеротических и тромботических процессах посредством изменения пролиферации сосудистых клеток и усилением протромботической активности в стенках сосудов

Несмотря на имеющиеся многочисленные сведения о влиянии полиморфизмов вышеперечисленных генов на развитие сердечно-сосудистой патологии, их прогностическая значимость остается дискуссионной, а изучение корреляции проводимой базовой терапией с генотипическими характеристиками пациентов с дислипидемиями не проводилось ни в России, ни за рубежом В связи с этим, изучение ассоциации полиморфизмов указанных генов с развитием осложненного и нестабильного течения ишемической болезни сердца и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями позволит оценить риск развития угрожающих жизни состояний, а также правильно определить способы их лечения и возможности применения тех или иных лекарственных препаратов

Цель исследования. Изучить роль аллельных вариантов генов GPIIIa, MTHFR, коагуляционных факторов II (FII, протромбина) и фактора V (FV) в развитии и осложненном течении ишемической болезни сердца и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями, исследовать согласованность генотипических характеристик пациентов, страдающих дислипидемиями, с проводимой антигипертензивной терапией

Задачи исследования:

1 Провести сравнительный анализ распределения аллельных вариантов гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью

2 Оценить корреляцию генотипа по гену GPIIIa с проводимой антигипертензивной терапией среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ

3 Провести анализ полиморфизма G20210A гена FII протромбина и G1691A гена коагуляционного фактора FV среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью

4 Изучить распределение полиморфизма С677Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы {MTHFR) у больных дислипидемиями

5 Оценить прогностическую значимость полиморфизмов PLA гена GPIIIa, G20210A гена FII протромбина, G1691A фактора FV и С677Т гена MTHFR в развитии осложненного течения ИБС и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями

Научная новизна работы:

Впервые установлено, что для пациентов с дислипидемиями аллель PLA2 гена GPIIIa является генетическим фактором, определяющим предрасположенность к осложненному течению ишемической болезни сердца и нестабильному течению гипертонической болезни, требующему более продолжительной и многокомпонентной терапии

Впервые проведен анализ аллельного распределения генов MTHFR, коагуляционных факторов FII (протромбина) и фактора FV среди пациентов с дислипидемиями в качестве дополнительных критериев в прогнозировании осложненного и нестабильного течения ИБС и ГБ Впервые установлена прогностическая значимость аллеля 677Т гена MTHFR в развитии ИБС у пациентов данной группы

Практическая значимость работы.

Для назначения базовой антигипертензивной терапии больным с дислипидемиями, страдающими ГБ, необходимо учитывать генотип пациента по гену GPIIIa Полученные результаты позволяют рекомендовать в целях профилактики и прогнозирования течения кардиоваскулярной патологии проведение молекулярно-генетических исследований с целью выявления носителей аллеля PLA2 гена GPIIIa и аллеля С677Т гена MTHFR

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы

Апробация работы

Апробация работы проведена на заседании кафедры биологии и общей генетики Российского университета дружбы народов 14 июня 2007 года

Основные положения работы доложены на XII международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва 30-31 января, 2007 года

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на _

страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка использованных сокращений, библиографического списка,

включающего_отечественных и_зарубежных источников Диссертация

иллюстрирована_таблицами и _рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1. Клиническая характеристика исследованных больных

В работе использовалась геномная ДНК, выделенная из клеток периферической крови пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью, и здоровых доноров контрольной группы без сердечно-сосудистых заболеваний

Были обследованы 108 пациентов с дислипидемиями В группу включались пациенты с уровнем общего холестерина выше 5 0 ммоль/л (средний уровень ХС составил 5 87ммоль/л) и/или индексом атерогенности выше 3 0 (ИА средний - 3 42) в возрасте от 34 до 73 лет (средний возраст -53 5 года) В контрольную группу были включены 36 человек без сердечнососудистых заболеваний в возрасте от 35 до 69 лет (средний возраст - 52 года) Из общего числа обследованных 63 пациента составляли женщины и 45 мужчины

Пациенты проходили обследование на базе терапевтического отделения Больницы Центросоюза РФ Диагноз устанавливался на основании биохимических и инструментальных (электрокардиографии, эхокардиографии, суточного Холтеровского ЭКГ-мониторирования, велоэргометрии) исследований

Генотипирование по генам ОРШа, МТНРЯ, протромбина и фактора V проводилось на кафедре биологии и общей генетики РУДН, базе диагностической лаборатории «Диасан» и АТГ-Биотех г Москвы

1. Молекулярно-генетические исследования.

Получение ДНК из клеток периферической крови.

В качестве ДНК-матрицы использовали геномную ДНК, полученную из клеток периферической крови, собранной методом сухой капли на бумажном

носителе (ватман ЗММ, Англия), с использованием набора "Цитолизин" (Россия) по прилагаемой к набору методике

Полимеразная цепная реакция.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили с использованием термоциклера "TrepsonaJ" (Биометра, Германия) и «ДНК-технология» (Россия)

Подбор праймеров для амплификации ДНК-мишени проводили на основе программы «Primer 3» (http //www-genome wi mit edu/cgi-bm/primer3/cgi) с использованием нуклеотидной, последовательности гена GPIIIa (асс М32672), приведенной в базе данных Genbank

GplIIL - 1375 (51) get сса atg tac ggg gta aa

GpIIIR - 1759 (5') ctc ctc aga cct cca cct tg

Концентрацию и температуру отжига синтезированных праймеров определяли по спектру поглощения образцов при длине волны 260 нм с использованием компьютерной программы «Концентрация олигонуклеотидов, учитывающей строение олигонуклеотида» Адрес в Internet http //www humgen siobc ras ru ПЦР проводили по стандартной методике Длина продукта амплфикации полиморфного участка гена GPIIIa составляет 384 пн

Для выявления мутаций G20210A гена протромбина (коагуляционного фактора II) использовались аллель-специфичные праймеры AS-P-WT (5'-ÇÇATAGC ACTGGG AGC ATTG AGG АТС-3 ') и AS-P-MT (5'-

GTTCCGCACGCCTGAATAGCACTGGGAGCATTGAGGGTT-3'). а так же общий праймер P-F (5'-GTTCCGCCTGAAGAAGTGGATACAGAA-3') В результате реакции с праймерами AS-P-WT и P-F образуется продукт длиной 174 п н , а в реакции с праймерами AS-P-MT и P-F - 187 п н

Для выявления мутации G1691A гена коагуляционного фактора FV (мутация Ляйден) использовались аллель-специфичные праймеры AS-L-WT (5"-AATCAAGGACAAAATACCTGTATTCCAC-3 ) и AS-L-MT (5 -GTCTGTCTGTCTCTTC AAGG АС ААААТ ACCTGTATTCGT-3 ' ). а так же общий праймер L-F (5 ' -GGC AGG А АС ААС ACCATG ATCAG-3 ' ) В результате реакции с праймерами AS-L-WT и L-F образуется продукт длиной 233 п н , а в реакции с праймерами AS-L-MT и L-F-245 п н

Для выявления мутации С677Т гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) использовались аллель-специфичные праймеры AS-MTHFR-WT (5'-CCGAAGGTGTCTGCGGGCGC-3 ) и AS-MTHFR-MT (5'-

GAGCTGGATCGTCGAGAAGGTGTCTGCGGGTGT-3 ), а так же общий праймер MTHFR-R (5 -AAGATCCCGGGGACGATGG-3 ' ) В результате реакции с праймерами AS-MTHFR-WT и MTHFR-R образуется продукт длиной 125 п н , а в реакции с праймерами AS-MTHFR-MT и MTHFR-R - 131 п н

Электрофоретический анализ продуктов рестрикции.

Аллели PLAI и PL А 2 гена GPIIIa идентифицировали на основе анализа длин рестрикционных фрагментов ДНК После обработки эндонуклеазой MSPI продукта амплификации участка гена GPIIIa (длина 384 п н ) рестрикционные

фрагменты ДНК аллеля PLAI имеют размер 295 «.п., 83 h.п. и 6 п.н., фрагменты аллеля PLA2 имеют размер 175 п.н,, ¡20 п.н,, 83 п.н. н 6 п.н.

Продукты рестрикции разделяли электрофорезом в 10% ло.шахрнламиднеш геле ШААП по стандартной методике. В качестве маркера использовали плазм иду pUCI8, обработанную рестрипазой Mspl (размер фрагментов ДНК составляет от 501 до 34 п.н.).

При анализе аллелей генов протромбина, кйагуляционного фактора V и XfTHFR разделение продуктов амплификации проводили электрофорезом в горизонтальных пластинах 15 х 20 см 2%-ого агарозног© гсл я. Гели окрашивали раствором бромистого зтидия и фотографировали в ультрафиолетовом свете длиной волны 254 нм. В качестве маркера использовались образцы ДНК, гомозиготные по нормальному аллелю исследуемых гонов. Результаты показаны на рисунке 1.

1 234567 89 10 11

Рис. 1, "Ii[ект-рог|»)регпамма разделения п 2%-ном агарозном геле продуктов АС-ПНР. гыл\чешшх при ana, une vfiTüUHU С677Т я гене мегнлеитетуатдр^олатгхлухталм челпяехв. Фрагменты, подученные в результате испол!,зопания rrpaiíMepois M-N й М-С (дорожки 2. 4. 6, ÍS, 10) н праймеров М-М и М-С (дорожки 3, 5, 7. 9, 11), Приведен анализ образцов -гомозигота мутантная (дорожки 2-3), гомозигота нормальная (4-5) и гетероэигота (6-9). Дорожки 10 и 11 - контроль чистоты реагентов (реакции Щ) добавлении ДНК). Дорожка I маркер длины pUC 1 8/Afspl, фрагменты которого имеют длину (см. сверху вниз) - 501, 404. 331, 242, 190. 14?, II!. 67 п.н. Стрелкой обозначено местоположение на электрофореграмме целевого продукта АС-ГТЦР, длиной 125 п.н.

Статистический анализ результатов.

Проверка наличия связи между носительством того или иного аллеля и частотой заболеваемости проводилась с помощью анализа таблиц сопряженности по критерию //. Достоверность различий оценивали по нспараметрическому критерию «Obs/Exp», достоверными считали различия при р <■ 0,05, Для таблиц 2x2, т.е. два гена на два признака, достоверность отличий рассчитывалась с поправкой Yates. Полученные данные подвергали обработке с использованием пакета программ STATISTICA ó.Q, StatSoft, США.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

X. Анализ аллель и о го распределения гена СРП 1а среди пациентов с Я пели п идемия мВ.

Были обследованы 108 пациентов с дислипедемиями (в группу включались пациенты с уровнем общего холестерина выше 5.0 ммоль/л и,-или индексом

атерогенности выше 3 0) в возрасте от 34 до 73 лет (средний возраст - 53 5 года) В контрольную группу были включены 36 человек без сердечнососудистых заболеваний (средний возраст 52 года)

В данной группе пациентов проводили анализ аллельного распределения гена GPIIIa, а также частоты заболеваемости ишемической болезнью сердца и гипертонической болезнью Выраженность гипертонической болезни оценивалась по максимальным цифрам систолического артериального давления (1 степень 140-160мм рт ст, 2 степень 160-180 ммртст, 3 степень выше 180 мм рт ст), а так же по объему антигипертензивной терапии, применяемой для каждого конкретного пациента

Следует отметить, что многие лекарственные средства способны вызывать появление или обострить уже имеющиеся гиперлипидемические расстройства Учитывая вышесказанное, при подборе антигипертензивной терапии пациентам с дислипидемиями использовались ингибиторы-АПФ (Диротон), антагонисты кальция (ВерапамиД), индапамид и селективный ß-адреноблокатор бисопролол (Конкор) В терапии ишемической болезни сердца использовались по показаниям препараты нитратов (Кардикет)

При исследовании аллельного распределения гена GPIIIa в вышеуказанной группе больных не были выявлены гомозиготы по аллелю PLA2 Частоты гомозиготного генотипа PLA1/A1 и гетерозиготного генотипа PLA1/PLA2 в группе пациентов с дислипидемиями и в контрольной группе соотносились как 63% и 37% и 74% и 26%, соответственно (р>0,05) Т о , при сравнительном анализе распределения частоты аллельных вариантов гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями и здоровых доноров не было выявлено статистически значимых различий Результаты представлены в таблице 1

Таблица 1 Частота аллельных вариантов гена йРШа среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ, здоровых доноров и в популяции

Группа А1/А1 N % А1/А2 N % N Всего % р

Пациенты 68 63% 40 37% 108 100% >0 05

Контроль 27 75% 9 25% 36 100% >0 05

Популяция \А 76% NA 22% NA 100% NA

14- количество человек в группе, Р- достоверность различия меэвду распределением генотипов в группах, НА- неприменимо

Основные клинические показатели для пациентов в зависимости от их генотипа приведены в табл 2

Таблица 2 Основные клинические показатели контингента больных в зависимости от их генотипа по гену ОРШа___

Показатель PLA1/A1 PLA1/A2 х2 Р Наличие связи

1 Средний возраст, (годы) 52 80 54 20

2 Средний уровень ХС (ммоль/л) 6 43 6 38

3. Средний 1 индекс атерогенности 3.48 3.30 1

5-Частота ИБС, чел. (% от общего числа пациентов в группе) 33 (48.5%) 23 (57.5%) 0.81 (0.49) 0,36 (0-4 К) нет

6.Частота осложнении ИБС (ОИМ, МД), чел. (% от обшего чнела больных ИБС в группе) 12 (37%) 16(70%) 5,98 (4.72) 0,0145 (0.0298) да 95

7.ГнЕ1 ер тоническая болезнь, чел, (частота в группе) 56 (82.3%) 40(100%) 7,94 (6,25) 0.0048 (0.0124) да 95

Среди гомозигот по аллелю РЬАI средний уровень общего холестерина крови составил 6.43 ммоль/л, средний индекс атерогенности составил 3.48. Ишемнческая болезнь сердца в данной группе наблюдалась у 33 пациентов (48.5%), в том числе осложненная инфарктом миокарда и/или нарушением ритма по типу мерцательной ари тмии - у 12 (37%). Среди гетероэигот Р1А1/А2 средний уровень общего холестерина крови составляет 6.38 ммоль/л, средний индекс атерогенности - 3.30. Ишемическая болезнь сердца в данной группе наблюдалась у 23 пациентов (5 7.5%), в том числе осложненная инфарктом миокарда и/или нарушением ритма по типу мерцательной аритмии -- у 16 (70%). Таким образом, не выявлено достоверных отличий в частоте заболеваемости ИБС в этих группах больных; в то же время достоверно выше частота возникновения ГБ и осложнений ИБС у носителей мутантного гена РЫ2.

Гипертонической болезнью страдали 56 пациентов (82.3%) в группе гетерозигот РЬА1/А1, из них: гипертония 1 степени - 16 чел (28.6%), гипертония 2 степени - 16 чел (28.6%), гипертония 3 степени - 24 чел (42,8%). В |руппе гетерозигот Р1А1/А2 I ипертоническа* болезнь наблюдалась у 40 человек (100%), в том числе: 1 степени - 9 чел (22.5%), 2 степени - 7 чел (17.5%), 3 степени - 24 чел. (60%). Результаты показаны на рисунке 2.

Рисунок 2: Выраженность гипертонической болезни у гомо- и гетерозигот по гену СРШа.

При подборе антигиперте г пивной терапии достигался уровень артериального давления 5140/90 мм рт ст. С этой целью применялась

монотерапия антигипертензивными препаратами основных групп или, при необходимости, проводилась комбинированная терапия Помимо числа комбинируемых групп препаратов, учитывались применяемые суточные дозировки антигипертензивных средств (в % от максимальной суточной терапевтической дозы) Следует отметить, что анализировались дозы препаратов, используемые на момент выписки из стационара для амбулаторного лечения, т е рассматривался объем антигипертензивной длительной терапии, необходимой для поддержания стабильной гемодинамики на уровне АД<140/90 мм рт ст При этом часть пациентов - с симптоматической пароксизмальной артериальной гипертензией - не нуждалась после выписки из стационара в длительном постоянном приеме антигипертензивных препаратов Результаты представлены в таблицах 3 и 4

Таблииа 3 Объем антигипертензивной базовой терапии (постоянный прием) в процентах от максимальной терапевтической суточной дозы в группах гетеро- и гомозигот по гену GPIIIa

Группа препаратов Пациенты PLA1/A1 ( % от максимальной терапевтической суточной дозы препарата) Пациенты PLA1/A2 (% от максимальной терапевтической суточной дозы препарата) Р

Ингибиторы-АПФ (100%= диротон 10мг/сут) 31,56% 72,44% <0 05

Диуретики (100%= арифон 2 5 мг/сут) 46,05% 84,70% <0 05

/i-блокаторы (100%= конкор Юмг/сут) 14,34% 30,14% <0 05

Блокаторы Са-каналов (100%= верапамил 80мг Зр/сут) 15,14% 7,14% <0 05

Таблииа 4 Количество антигипертензивных препаратов основных групп, используемых в комбинации при подборе базовой терапии ГБ, % от общего числа пациентов в группах гомо- и гетерозигот по гену ОРШа

Число групп препаратов Пациенты PLA1/A1 Группа 68 чел (% от всех в группе) Пациенты PLA1/A2 Группа 40чел (% от всех в группе) X2 р Налич

(по та&л.2), используемых в комбинированной базовой терапии ГБ ие связи

0 (симптоматическая А1, не требующая постоянного приема нтигипертензивных (11 77%) 0

препаратов)

Одна группа антигипертензивных средств 18 (26,40%) 11 (27,5%)

Комбинация двух групп антигипертензивных средств 29 (42,64%) 8 (20,00%)

Комбинация трех групп антигипертензивных средств .....13 (19,11%) 15 (37,5%)

Комбинация четыре групп антигипертензивных средств 0 6 (15%) •

21,У/ 0,0002 да 99

2. Анализ аллельного распределения гена коагуляционного фактора БТ1, протромбина (полиморфизм С20210А) среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ

В той же группе пациентов с дислипидемиями проводилось генотипирование по гену протромбина РИ 020210А Обследован 61 пациент с дислипидемиями и 36 здоровых доноров контрольной группы Результаты показаны в таблице 5

Среди пациентов с дислипидемиями гомозоготы 20210А/А составляют 3 человека (5%), гетерозиготы С202 ¡ОА/О составляют 4 человека (6 5%), гомозиготы по нормальному аллелю 0202100/0 составляют 54 человека (88 5%) Таким образом носителями аляеля 20210А (генотипы А/А и АЛЗ) являются 11 5% пациентов с дислипидемиями, что достоверно не отличается от группы здоровых доноров (11% носителей аллеля 20210А, р>0,05 )

Таблица 5 Основные показатели контингента больных в зависимости от

их генотипа по гену 0202] 0А протромбина

Показатель Гомозиготы по нормально му аллелю 202100/0 Гетерозиготы 20210АЛЗ Гомозогот ы по мутантном у аллелю 20210А/А х2 Р Налич ЫЖ связи

1 Количество пациентов, чел (% от общего числа обследованных=61 чел) 54 (88 5%) 4 (6 5%) (5%)

2 Средний уровень холестерина, (ммоль/л) 6 05 5 29 5 10

3 Средний индекс атерогенности 3 23 3 48 39

4 Частота ИБС, чел (% от числа пациентов в группе) 31 (57%) 3 (75%) 2 (66%) 0,55 0,76 нет

5 Частота осложнений ИБС, чел ( % от общего числа больных ИБС в подгруппе) 14 (45%) 1 (30%) 2 (100%) 2,52 0,28 нет

|

6 Частота 1 Б (% от числа пациентов в группе) 50 (92 5%) 4 L_Î100%) 3 (100%) 0,55 0,76 нет

7 Контрольная группа здоровых доноров, чел (%) 32 (89%) (5,5%) 2 (5,5%)

При сравнении частот развития ИБС и ГБ у носителей мутантного аллеля 20210А гена протромбина (генотипы А/А и A/G) и нормального аллеля (генотип 20210G/G) среди пациентов с дислипидемиями статистически достоверных отличий не выявлено (р>0,05)

Распределение по степеням гипертонической болезни, оцениваемых по выраженности артериальной гипертензии, также несущественно различалось среди носителей мутантного аллеля 20210А (генотипы 2010А/А и 20210A/G) и носителей нормального гена протромбина 20210G/G

3. Анализ аллельного распределения гена коагуляционного фактора V (полиморфизм а 691 А, мутация Ляйден) среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

Следующим шагом в исследовании пациентов с дислипидемиями было проведение анализа аллельного распределения 01691А гена коагуляционного фактора V Было обследовано 62 пациента с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ и 36 здоровых доноров контрольной группы Результаты представлены в табл 6

При анализе генотипов по гену 01691А коагуляционного фактора V выявлена высокая частота гетерозиготного генотипа 169Ю/А (22%) среди пациентов с дислипидемиями, что статистически значимо превышает частоту соответствующего генотипа в контрольной группе здоровых доноров (р<0,05) Гомозиготы по мутантному аллелю 1691 А/А в исследуемой группе больных выявлены не были Частота развития ИБС статистически не отличалась у носителей генотипов 169Ю/й и 169Ю/А (р>0,05) У гетерозигот 169Ю/А чаще выявлялись осложнения ИБС по сравнению с носителями генотипа 169ЮЮ, но вследствие малой выборки пациентов статистически достоверные различия не установлены (р=0,18) Также не выявлено корреляции между носительством мутантного аллеля 1691А и возникновением и интенсивностью развития гипертонической болезни (р=0,46)

Таблица 6 Основные показатели контингента больных с разным

Показатель Гомозиготы по нормальному аллелю 1691G/G Гетерозиготы по аллето 1991G/A х2 Р I Наличие | связи ! i

1 Количество пациентов, (чел) (% от общего числа обследованных) 48 (78%) 14(22%) р<0 05

2 Средний возраст, (годы) 52 3 | 54 6

3 Уровень холестерина, (ммоль/л) 5 44 6 03

4 Индекс атерогенности 3 49 3 24

5 Частота ИБС (% от числа пациентов в группе) 27 (56 25%) 8 (57 1%) 0 0,95 нет

6 Частота осложнений ИБС (ОИМ, МА) (% от общего числа больных ИБС в группе) 22 (45 8%) 8 (100%) 1,73 (0,55) 0,1886 (0,45) нет

7.Гипертоническая болезнь (частота в группе) 41 (91 67%) 13 (92 85%) 0,53 (0,08) 0,465 (0,781) нет

8 Контрольная группа здоровых доноров, чел. (%) 36 (100%) 0 0

4 Анализ аллельного распределения гена С677Т метилентетрагидрофалатредуктазы (МТНРЛ) среди пациентов с дислипндемнями, страдающих ИБС и ГБ.

Следующим этапом в изучении генотипических характеристик пациентов с дислипидемиями было проведение анализа аллельного распределения гена МГНРК (полиморфизм С677Т) Было проведено генотипирование 62 пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ и 36 здоровых доноров контрольной группы Данные этих исследований представлены в таблице 5

При сравнении частот распределения генотипов гена МТНРЯ в группе больных с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью, и здоровых доноров статистически достоверных отличий не выявлено (р>0,05) Для пациентов с дислипидемиями не выявлено корреляции между носительством мутантного аллеля 677Т гена МТНРЯ и частотой возникновения, а так же интенсивностью развития гипертонической болезни (р=0,8) В то же время выявлена корреляционная зависимость между носительством мутантного аллеля и частой развития ИБС в исследуемой группе больных (р=0,01) Для частоты возникновения осложнений ИБС и гипертонической болезни, таких как острый инфаркт миокарда, мерцательная аритмия, острые нарушения мозгового кровообращения, не установлены корреляционные зависимости от генотипа

Данные представлены в таблице 7

Таблииа 7 Основные показатели контингента больных в зависимости от их генотипа по гену МТНРЯ (полиморфизм С677Т)

Показатель Гомозиготы по нормальному аллелю 677 С/С Гетерози-готы по аллелю 677 С/Т Гомозиготы ПО мутавтному аллелю 677 Т/Т X2 Р Наличие связи

1 Количество пациентов, человек в группе, (% от общего числа обследованных =62 чел) 30 (48 3%) 24 (38 7%) 8 (13%)

2 Средний возраст, годы 55 3 54 8 56 1

3 Уровень ХС, ммоль/л 6 16 5 78 5 66

4 Индекс атерогенности 3 17 3 45 3 53

5 Частота ИБС (% от числа пациентов в группе) 16 (53 3%) 21 (87 5%) 7 (87 5%) 8,77 0,0124 да 95*

6 Частота осложнений ИБС (ОИМ, МА) (% от общего числа больных ИБС в группе) 5 (31 25%) 9 (42 8%) 5 (71 4%) 3,21 0,2013 нет

7 Артериальная гипертензия (частота в группе) 15 (93 75%) 20 (95 2%) 7 (100%) 0,44 0,8014 нет

8 Контрольная группа здоровых доноров,чел (50%) 12 (33%) 6 (16%)

Степень выраженности гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями, носителями нормального аллеля С677 и мутантного аллеля 677Т гена МТНРЯ, представлена на рисунке 3 Степень выраженности гипертонической болезни среди пациентов с дислипидемиями несущественно различается для носителей ал теля 677Т (генотипы 677Т/Т и 677С/Т) и носителей генотипа 677С/С гена МТНРЯ (р>0,05)

ВЫВОДЫ

1 Установлено, что носительство аллеля РЬА2 гена гликопротеина ОРШа для пациентов с дислипидемиями является генетическим фактором риска не для развития ишемической болезни сердца и гипертонической болезни как таковых, но определяет предрасположенность к осложненному течению ИБС и нестабильными течению ГБ

2 Установлено, что носители аллеля РЬА2 гена ОРШа представляют собой генетически детерминированную группу больных с дислипидемиями, требующую более активной, продолжительной и многокомпонентной антигипертензивной терапии

3 Выявлена корреляционная зависимость между носительством мутантного аллеля 677Т гена МТНРЯ и частотой развития ИБС у пациентов с

дислипидемиями Не установлена корреляция между генотипами гена MTHFR и частотой возникновения осложнений ИБС, таких как острый инфаркт миокарда и мерцательная аритмия, а также частотой возникновения гипертонической болезни

4. Показано отсутствие корреляционной зависимости между носительством мутантных аллелей 2021OA гена протромбина и 1691А гена коагуляционного фактора V и возникновением и интенсивностью развития гипертонической болезни и ишемической болезнью сердца у пациентов с дислипидемиями

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Для пациентов с дислипидемиями рекомендовано проведение генотипирования по генам GPIIIa и MTHFR в качестве дополнительного критерия в прогнозировании тяжести сердечно-сосудистых заболеваний, в оценке риска возможных осложнений, в решении вопроса об объеме базисной антигипертензивной и кардиотропной терапии, а также целесообразности применения гиполипидемических средств Рекомендовано выявление носителей аллеля PL А 2 гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями с целью прогнозирования и профилактики осложненного и нестабильного течения ИБС и ГБ

Для носителей аллеля PLA2 гена GPIIIa рекомендовано проведение более активной, продолжительной и многокомпонентной антигипертензивной терапии Для пациентов с дислипидемиями, являющихся носителями аллеля PLA2 гена GPIIIa, рекомендовано первоочередное назначение гиполипидемических средств, в том числе статинов, с целью коррекции липидного обмена Для пациентов с дислипидемиями, являющихся носителями генотипа PLA1PLA1, рекомендована менее длительная и малокомпонентная терапия ИБС и гипертонической болезни

Для пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ, рекомендовано проводить генотипирование по гену MTHFR с целью выявления носителей мутантного аллеля 677Т в качестве дополнительного прогностического критерия для выявления группы риска по развитию ИБС с целью профилактики сердечно-сосудистой патологии

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ.

1 Касапова Е Н , Дгебуадзе Н Н , Иткес А В , Зотова Т Ю Определение деффектного аллеля гена GPIIIa у пациентов с дислипидемиями для оценки риска интенсивности развития ишемической болезни сердца и гипертонической болезни //Сборник трудов ЦС РФ - М 2005 - С 193 - 195

2 Касапова Е Н , Иткес А В , Зотова Т Ю Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца //Вестник РУДН Серия Медицина -2006 - №3(35) - С 69-75

3 Зотова Т Ю, Касапова Е Н, Мяндина Г И, Фролов В А Генотипирование по генам GPIIIa и протромбина пациентов с дислипидемиями,

страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца //

Вестник новых медицинских технологий - 2007 - Том XIV - №2 - С 43-45

4 Касапова Е Н, Зотова Т Ю , Мяндина Г И, Иткес А В Использование

генотипирования по гену ОРШа пациентов с дислипидемиями в качестве

дополнительного критерия в прогнозировании осложненного течения

гипертонической болезни и ишемической болезни сердца//Материалы XII

Международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы

адаптации» 30-31 января 2007 г - М ,2007 -С 218-220.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИБС - ишемическая болезнь сердца,

ГБ - гипертоническая болезнь,

МА - мерцательная аритмия,

ОИМ - острый инфаркт миокарда,

МТИРК. - метилентетрагидрофолатредуктаза,

РУ - коагуляционный фактор V,

РН - коагуляционный фактор II (протромбин),

йРШа - гликопротеиновая )3-субъединица типа III,

ХС - холестерин

Касапова Евгения Николаевна (Россия)

«Распределение аллелей гена ОРШа среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца»

Диссертационная работа посвящена изучению возможности использования генотипических характеристик пациентов с дислипидемиями в качестве дополнительного критерия в прогнозировании тяжести течения сердечнососудистой патологии и в решении вопроса об объеме проводимой антигипертензивной и кардиотропной терапии Образцы ДНК пациентов с дислипидемиями были исследованы на наличие аллельных вариантов генов гликопротеина ОРШа, коагуляционных факторов РП и БУ и МТНРК

В результате сравнительного анализа генотипов пациентов с дислипидемиями выявлено прогностическое значение аллеля РЬА2 гена ОРШа в развитии осложненного и нестабильного течения ИБС и ГБ Установлено, что носители аллеля Р1А2 представляют собой генетически детерминированную группу больных с дислипидемиями, требующую более активной, продолжительной и многокомпонентной антигипертензивной терапии Выявлена корреляция аллеля 677Т гена МТНРК с частотой развития ИБС у пациентов с дислипидемиями

Полученные результаты имеют существенное значение для снижения риска осложненного и нестабильного течения сердечно-сосудистых заболеваний у пациентов с дислипидемиями, а также для выбора объема и продолжительности проводимой терапии и целесообразности применения гиполипидемических средств

Kasapova Eugenia Nikolaevna (Russia)

"The distribution of the alleles of gene GPIIIa among dislipidaemia patients with

coronary heart disease and arterial hypertension" The present study was designed to determine the possibility of the application the genotyping of the patients with dislipidaemia as an additional factor for the prediction of the cardiovascular complications The distribution of the polymorphism of the genes GPIIIa, FII, FV and MTHFR among the 108 patients with dislipidaemia was studied These results provide the genetic evidence that PL A 2 allele of the gene GPIIIa correlates with the development of the complications and instability of the coronary heart disease and arterial hypertension for the patients with dislipidaemia. It was demonstrated that more complex and durable antihypertension and cardiotropic therapy must be applicated for the carries of the allele PLA2 among the dislipidaemia patients The correlation of the alleleic variant 677T of the gene MTHFR with the risk of the coronary heart disease among the dishpidemia patients was presented

These data indicate the appreciable role PLA polymorphism of GPIIIa for the decreasing of the cardiovascular complications among the patients with dislipidaemia and for detection the complexity and longevity of the medical treatments

Подписано в печать /Я Формат 60x84/16.

Тираэкз. Усл. печ. л. -/ . Заказ /¿Р-/^

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д. 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Касапова, Евгения Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь, дислипидемия.

2.1.1. Ишемическая болезнь сердца.

2.1.2. Гипертоническая болезнь.

2.1.3. Дислипидемия.

2.2. Молекулы клеточной адгезии. Интегрины. Тромбоцитарный гликопротеин GPIIb-IIIa.

2.2.1. Молекулы клеточной адгезии.

2.2.2. Строение и функции интегринов.

2.2.3. Гликопротеиновый комплекс GPIIIa (интегрин аНЫЗЗ), его роль в процессе агрегации тромбоцитов и развитии атеросклероза.

2.3. Характеристика кандидатных генов ИБС и ГБ.

2.3.1. Аллоантигенная система тромбоцитов PL(A). Ген GPIIIa гликопротеинового комплекса GPIIb-IIIa (интегрина аПЬВЗ).

2.3.2. Гены белков свертывающей системы крови (коагуляционного фактора V и FII - протромбина).

2.3.3. Ген метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR).

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Клиническая характеристика исследованных больных.

2. Молекулярно-генетические исследования.

2.1. Получение ДНК из клеток периферической крови.

2.2. Детекция мутаций гена GPIIIa.

2.3 Детекция мутаций G20210A гена протромбина, мутации

G1691A гена коагуляционного фактора V и мутации С677Т гена

MTHFR методом полимеразной цепной реакции.

3. Статистический анализ результатов исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ.

4.1. Анализ аллельного распределения гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца.

4.1.1 Контингент пациентов.

4.1.2. Изучение распределения полиморфизмов гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

4.1.3. Оценка основных клинических показателей пациентов в разных генотипических группах по гену GPIIIa.

4.2. Анализ аллельного распределения гена протромбина G20210A среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

4.3. Анализ аллельного распределения гена G1691А коагуляционного фактора V (мутация Ляйден) среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

4.4. Анализ аллельного распределения гена С677Т метилентетрагидрофалатредуктазы (MTHFR) среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца"

Актуальность темы. Актуальной проблемой современной медицины является снижение риска осложнений сердечно-сосудистых заболеваний, которые по-прежнему являются основной причиной смертности (около 1.2 млн. человек ежегодно) и инвалидизации (31.2 на 10000 человек) в России [Гурвич И.Н., 2005]. Одним из наиболее важных эндогенных факторов риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) и гипертонической болезни (ГБ) являются нарушения липидного обмена. Для оценки его нарушений и вероятности развития атеросклероза повсеместно используют определение у больных уровня общего холестерина и триглицеридов сыворотки крови, определение концентраций в сыворотке липопротеидов очень низкой, низкой, и высокой плотности (ЛПОНП, ЛПНП, ЛПВП), а так же их соотношение, называемое «индексом атерогенности». Процесс атерогенеза начинается, как полагают, при значении индекса атерогенности выше 3.0 [Tompson G.R., 1994]. Следовательно, коррекция дислипидемических состояний с целью снижения риска развития осложнений и уровня смертности от сердечно-сосудистых заболеваний является весьма актуальной проблемой современной терапии.

В то же время применение гиполипидемических средств в широкой медицинской практике ограничивается высокой стоимостью препаратов этой группы и наличием целого ряда побочных эффектов [Либов И.А., Гультикова О.С., 2001]. С этой точки зрения представляется весьма актуальным использование в клинической практике дополнительных критериев, выделяющих среди больных с дислипидемиями группу риска, в первую очередь нуждающуюся в более интенсивном наблюдении и терапии, в том числе гиполипидемическими средствами.

Одним из таких критериев может служить генотипическая характеристика пациентов с дислипидемиями. Определение генетического статуса пациента позволяет определить риск развития сердечнососудистой патологии задолго до ее появления, а также уменьшить риск развития осложнений во время болезни и назначить индивидуальное лечение.

В настоящее время используется изучение молекулярно-генетических механизмов формирования сложных признаков, в том числе полигенных и мультифакториальных заболеваний, к которым относятся и атеросклероз, гипертоническая болезнь, полиметаболический синдром и др. Возникновение таких заболеваний обусловлено наследственной к ним предрасположенностью, которая в большинстве случаев вызвана точечными нуклеотидными заменами (мутациями) в геномной ДНК [6,8]. Наличие мутации в гомозиготном состоянии, а также доминантной мутации в гетерозиготном состоянии вызывает образование мутантного фенотипа, что обуславливает возникновение патологии или предрасположенности к ней. Для мультифакториальных заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. В патогенез таких заболеваний вовлекается большое количество генов, что обуславливает сложный характер наследования. Генетические особенности индивидуума могут быть как факторами, увеличивающими риск развития болезни, так и факторами, снижающими восприимчивость к заболеванию. Поскольку мутации содержатся в геномной ДНК каждой клетки организма на протяжении всей жизни, то посредством их диагностирования можно узнать о предрасположенности к патологии задолго до ее развития. Таким образом, детекция мутаций в генах, определяющих предрасположенность к наследственным заболеваниям, является одной из важных задач современной медицинской диагностики.

Современные подходы к изучению развития болезней с наследственным предрасположением, в том числе сердечно-сосудистых, основаны на представлении о молекулярных механизмах развития заболеваний и выявлении генов-кандидатов с потенциально наибольшим вкладом в патогенез. Для развития сердечно-сосудистых заболеваний первостепенное значение имеют гены, полиморфизмы которых коррелируют с нарушениями в системе свертывания крови и метаболизма белков плазмы, а также повышенной агрегации тромбоцитов [Ardissino D,1999, Franko R.F, 1997]. С этой точки зрения представляется актуальным изучение связи полиморфизмов генов фибриногенового рецептора тромбоцитов GPIIIa, генов коагуляционных факторов FV и FII (протромбина), а так же гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) с развитием ИБС и гипертонической болезни.

Несмотря на имеющиеся многочисленные сведения о влиянии полиморфизмов вышеперечисленных генов на развитие сердечнососудистой патологии, их прогностическая значимость остается дискуссионной, а изучение корреляции проводимой базовой терапией с генотипическими характеристиками пациентов с дислипидемиями не проводилось ни в России, ни за рубежом. В связи с этим, изучение ассоциации полиморфизмов указанных генов с развитием осложненного и нестабильного течения ишемической болезни сердца и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями позволит оценить риск развития угрожающих жизни состояний, а также правильно определить способы их лечения и возможности применения тех или иных лекарственных препаратов.

Цель исследования. Изучить роль аллельных вариантов генов GPIIIa, MTHFR, коагуляционных факторов FII (протромбина) и фактора FV в развитии и осложненном течении ишемической болезни сердца и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями; исследовать согласованность генотипических характеристик пациентов, страдающих дислипидемиями, с проводимой антигипертензивной терапией.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ распределения аллельных вариантов гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью.

2. Оценить корреляцию генотипа по гену GPIIIa с проводимой антигипертензивной терапией среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ.

3. Провести анализ полиморфизма G20210A гена FII протромбина и G1691А гена коагуляционного фактора FV среди пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и гипертонической болезнью.

4. Изучить распределение полиморфизма С677Т '■ гена метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) у больных дислипидемиями.

5. Оценить прогностическую значимость полиморфизмов PL А гена GPIIIa, G20210A гена FII протромбина, G1691А фактора FV и С677Т гена MTHFR в развитии осложненного течения ИБС и гипертонической болезни у пациентов с дислипидемиями.

Научная новизна работы:

Впервые установлено, что для пациентов с дислипидемиями аллель PLA2 гена GPIIIa является генетическим фактором, определяющим предрасположенность к осложненному течению ишемической болезни сердца и нестабильному течению гипертонической болезни, требующему более продолжительной и многокомпонентной терапии.

Впервые проведен анализ аллельного распределения генов MTHFR, коагуляционных факторов FII (протромбина) и фактора FV среди пациентов с дислипидемиями в качестве дополнительных критериев в прогнозировании осложненного и нестабильного течения ИБС и ГБ. Впервые установлена прогностическая значимость аллеля 677Т гена MTHFR в развитии ИБС у пациентов данной группы.

Практическая значимость работы.

Для назначения базовой антигипертензивной терапии больным с дислипидемиями, страдающим ГБ, необходимо учитывать генотип пациента по гену GPIIIa. Полученные результаты позволяют рекомендовать в целях профилактики и прогнозирования течения кардиоваскулярной патологии проведение молекулярно-генетических исследований с целью выявления носителей аллеля PLA2 гена GPIIIa и аллеля С677Т гена MTHFR.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Апробация работы

Апробация работы проведена на заседании кафедры биологии и общей генетики Российского университета дружбы народов 14 июня 2007 года.

Основные положения работы доложены на XII международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва 3031 января, 2007 года.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Касапова, Евгения Николаевна

6. выводы.

1. Установлено, что носительство аллеля PLA2 гена гликопротеина GPIIIa для пациентов с дислипидемиями является генетическим фактором риска не для развития ишемической болезни сердца и гипертонической болезни как таковых, но определяет предрасположенность к осложненному течению ИБС и нестабильныму течению ГБ.

2. Установлено, что носители аллеля PLA2 гена GPIIIa представляют собой генетически детерминированную группу больных с дислипидемиями, требующую более активной, продолжительной и многокомпонентной антигипертензивной терапии.

3. Выявлена корреляционная зависимость между носительством мутантного аллеля 677Т гена MTHFR и частотой развития ИБС у пациентов с дислипидемиями. Не установлена корреляция между генотипами гена MTHFR и частотой возникновения осложнений ИБС, таких как острый инфаркт миокарда и мерцательная аритмия, а также частотой возникновения гипертонической болезни.

4. Показано отсутствие корреляционной зависимости между носительством мутантных аллелей 2021 OA гена протромбина и 1691А гена коагуляционного фактора V и возникновением и интенсивностью развития гипертонической болезни и ишемической болезнью сердца у пациентов с дислипидемиями.

Практические рекомендации.

Для пациентов с дислипидемиями рекомендовано проведение генотипирования по генам GPIIIa и MTHFR в качестве дополнительного критерия в прогнозировании тяжести сердечно-сосудистых заболеваний, в оценке риска возможных осложнений, в решении вопроса об объеме базисной антигипертензивной и кардиотропной терапии, а также целесообразности применения гиполипидемических средств. Рекомендовано выявление носителей аллеля PLA2 гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями с целью прогнозирования и профилактики осложненного и нестабильного течения ИБС и ГБ.

Для носителей аллеля PLA2 гена GPIIIa рекомендовано проведение более активной, продолжительной и многокомпонентной антигипертензивной терапии. Для пациентов с дислипидемиями, являющихся носителями аллеля PLA2 гена GPIIIa, рекомендовано первоочередное назначение гиполипидемических средств, в том числе статинов, с целью коррекции липидного обмена. Для пациентов с дислипидемиями, являющихся носителями генотипа PLA1PLA1, рекомендована менее длительная и малокомпонентная терапия ИБС и гипертонической болезни.

Для пациентов с дислипидемиями, страдающих ИБС и ГБ, рекомендовано проводить генотипирование по гену MTHFR с целью выявления носителей мутантного аллеля 677Т в качестве дополнительного прогностического критерия для выявления группы риска по развитию ИБС с целью профилактики сердечно-сосудистой патологии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Касапова, Евгения Николаевна, Москва

1. Аптон Г. А. Анализ таблиц сопряженности.//М.-«Финансы и статистика»- 1982.

2. Генерозов Э.В., Торшин И.Ю. Влияние мутаций на риск развития заболеваний.// Брошюра под ред. Третьякова В.Е.- http://www.pynny.ru

3. Гигани О.О., Буянова Н.И. и соавт. Аллельные формы гена В-цепи интегрина как фактор к генетической предрасположенности к некоторым гинекологическим заболеваниям.//Вестник РУДН. -2003.-Т.5(24).- С.23-28.

4. Гурвич И.Н. Состояние здоровья населения России: 1989 2003 гг.// Русский журн. «СПИД, рак и общее здоровье». - 2005. - Т.9. - С.72-83.

5. Касапова Е.Н., Иткес А.В., Зотова Т.Ю. Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца.//Вестник РУДН. Серия Медицина 2006.- №3(35). - С. 69-75.

6. Либов И.А., Гультикова О.С. Некоторые клинические аспекты применения статинов для лечения больных ишемической болезнью сердца и гиперлипидемиями.//Моск. Мед. журнал. 12.2001. - С. 14-15.

7. Мяндина Г.И., Пягай П.Э., Иткес А.В. и др. Аллель PLA2 гена гликопротеина GP3A как фактор генетической предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы.//Вестник РУДН. Серия Медицина. 2006. - №2(34). - С. 14 - 18 .

8. Радзинский В.Е., Иткес А.В. и др. Прогнозирование гестоза и задержки развития плода по генотипам матери и плода.//Акушерство и гинекология. 2003. - №10. - С.23 - 26.

9. Сидоренко Б.А., Грацианский Н.А. Ишемическая болезнь сердца.// ММЭ под ред. Покровского В.И. М. 1991. - т.2. - с. 355.

10. Терещенко С.Н, Акимова О.С. Использование Р-адреноблокаторов у больных с относительными противопоказаниями к их применению.// Сердце. -2002.- Т. 1.- С. 180.

11. Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. Статистический анализ данных на компьютере.//М. «ИНФА». 1998. - глава 9.

12. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. //М. Изд-во АН СССР. - 1963.

13. Фаллер Д.М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки.// М.:БИНОМ Пресс. - 2003. - С.272.

14. Шмолова Т.А. Теория статистики.//М., «Финансы и статистика», 1998. глава 9.

15. Шхвацабая И.К., Богословский В.А. Гипертоническая болезнь.// ММЭ под ред. Покровского В.И., т.1, с. 471, М., 1991.

16. Araki A, Sako Y. Determination of free and total homocysteine in human plasma by high performance liquid chromatography with fluorescence detection.// J Chromatogr.- 1987.-422.- P.43-52.

17. Araujo F., Santos A., Araujo V., et al. Genetic risk factors in acute coronary syndromes.// Haemostasis 1999. - 29. - P.212-228.

18. Ardissino D., Mannucci P., Merlini P., et al. Prothrombotic genetic risk factors in young survivors of myocardial infarction.//Blood 1999. - 94. - P.46-51.

19. Arruda VR, Annichino-Bizzacchi JM, Goncalves MS, Costa FF. Prevalence of the prothrombin gene variant (nt20210A) in venous thrombosis and arterial disease.// Thromb Haemost- 1997- 78- P. 1430-3.

20. Balkau B, Eschwege E, Tichet J, Marre M. Proposed criteria for the diagnosis of diabetes: evidence from a French epidemiological study (D.E.S.I.R.).//Diabetes Metab. 1997.- 23.- P. 428-34.

21. Beer J.H., Pederiva S. Genetics of platelet receptor singlle-nucleotide polymorfism: clinical implications in trombosis.// J. Neural Transm. 2000. — V.107.-P. 266-272.

22. Bertina RM, Koeleman BPC, Koster T, Rosendaal FR, Dirven RJ, de Ronde H, van der Velden PA, Reitsma PH. Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C.//Nature.-1994-369-P. 64-67.

23. Boers GHJ, Smals AGFI, Trijbels FJM, Fowler B, Bakkeren JAJM, Schoonderwaldt HC, Kleijer WJ, Kloppenborg PWC. Heterozygosity for homocystinuria in premature peripheral and cerebral occlusive arterial disease.// N Engl J Med.-1985.-313,- P.709-715.

24. Boneu B, Leger P, Arnaud C. Haemostatic system activation and prediction of vascular events in patients presenting with stable peripheral arterial disease of moderate severity. Royat Study Group.// Blood Coagul Fibrinolysis -1998.- 9,- P. 129-35.

25. Boushey CJ, Beresford SAA, Omenn GS, Motulsky AG. A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease: probable benefits of increasing folic acid intakes. //JAMA -1995.-274.-P. 104957.

26. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow: with special reference to factors with influence and modify sedimentation properties of hematopoietic cells.//Scand J Clin Lab Invest.-1968.-2 l(suppl 97).- P. 1-109.

27. Brattstrom L, Wilcken DEL, O" hrvik J, Brudin L. Common methylenetetrahydrofolate reductase gene mutation leads to hyperhomocysteinemia but not to vascular disease. The results of a metaanalysis.// Circulation- 1998.-98.- P.2520-6.

28. Braunwald E. Shattuck lecture—cardiovascular medicine at the turn of the millennium: triumphs, concerns, and opportunities.// N Engl J Med- 1997.337.- P. 1360-9.

29. Brown К, Luddington R, Williamson D, Baker P, Baglin T. Risk of venous thromboembolism associated with a G to A transition at position 20210 in the 39-untranslated region of the prothrombin gene. //Br J Haematol.- 1997.98.- P. 907-909.

30. CAPRIE Steering Committee. A randomised, blinded, trial of clopidogrel versus aspirin in patients at risk of ischaemic events (CAPRIE).// Lancet-1996.-348.-P. 1329-39.

31. Carter AM, Ossei-Gerning N, Grant PJ. Platelet glycoprotein Ilia Р1л polymorphism in young men with myocardial infarction.//Lancet- 1996.-348.-P.485-6.

32. Clarke R, Daly L, Robinson K, et al. Hyperhomocysteinemia: an independent risk factor for vascular disease.// N Engl J Med-1991.-324.-P.l 1491155.

33. Clarke R, Daly L, Robinson K, Naughten E, Cahalane S, Fowler B, Graham I. Hyperhomocysteinemia: an independent risk factor for vascular disease. N Engl J Med.// 1991.-324.-P.1149-1155.

34. Collet BS. Blockade of platelet GPIIMIIa receptors as an antithrombotic strategy.// Circulation-1995.- 92,- P.2373-80.

35. Coughlin SR. Thrombin signalling and protease-activated receptors.// Nature- 2000.- 407,- P.258-64.

36. Cumming AM, Keeney S, Salden A, Bhavnani M, Shwe KH, Hay CR. The prothrombin gene G20210A variant: prevalence in a UK anticoagulant clinic population.// Br J Haematol. -1997.-98.-P.353-355.

37. Dalery K, Lussier-Cacan S, Selhub J, Davignon J, Latour Y, Genest J Jr. Homocysteine and coronary artery disease in French Canadian subjects: relationship with vitamins B12, B6, pyridoxal phosphate and folate.//Am J Cardiol.- 1995.-75,- P.l 107-1111.

38. Dawson DL, Hiatt WR, Creager MA, Hirsch AT. Peripheral arterial disease: medical care and prevention of complications.// Prev Cardiol -2002.- 5.-P. 119-30.

39. Dufourcq P, Louis H, Moreau C, Daret D, Boisseau MR, Lamaziere JM, Bonnet J. Vitronectin expression and interaction with receptors in smooth muscle cells from human atheromatous plaque.// Arterioscler Thromb Vase Biol -1998.-18.-P.168-76.

40. Engbersen AMT, Franken DG, Boers GHJ, Stevens EMB, Trijbels FJM, Blom HJ. Thermolabile 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase as a cause of mild hyperhomocysteinemia. Am J Hum Genet.//1995.-56.- P. 142-150.

41. Feng D, Lindpaintner K, Larson MG, et al. Increased platelet aggregability associated with platelet GPIIIa Pl^ polymorphism.// Arterioscler Thromb Vase Biol- 1999.-19.-P. 1142-7.

42. Fontana P, Gaussem P, Aiach M, Fiessinger JN, Emmerich J, Reny JL. P2Y12.H2 haplotype is associated with peripheral arterial disease: a case-control study.// Circulation- 2003.- 108.-P. 2971-3.

43. Fowkes FG, Lowe GD, Housley E, Rattray A, Rumley A, Elton RA, MacGregor IR, Dawes J. Cross-linked fibrin degradation products, progression of peripheral arterial disease, and risk of coronary heart disease.// Lancet- 1993.342.- P.84-6.

44. Franco RF, Trip MD, ten Cate H, van den Ende A, Prins MH, Kastelein JJ, Reitsma PH. The 20210 G fi A mutation in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene and the risk for arterial disease. // Atherosclerosis 2004. -163. - P.135-40.

45. Franken DG, Boers GHJ, Blom HJ, Trijbels FJM, Kloppenborg PWC. Treatment of mild hyperhomocysteinemia in vascular disease patients.// Arterioscler Thromb. -1994.-14.- P. 465-470.

46. Frosst P, Blom HJ, Milos R, et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase.// Nat Genet -1995.-10.-P.il 1-113.

47. Genest J Jr, McNamara JR, Salem DN, Wilson PWF, Schaefer EJ, Malinow MR. Plasma homocysteine levels in men with premature coronary artery disease. J Am Coll Cardiol.// 1990.-16.- P.l 114-1119.

48. Genest J Jr, Ordovas JM, McNamara JR, Robbins AM, Meade T, Cohn DS, et al. DNA polymorphisms of the apolipoprotein В gene in patients with premature coronary artery disease.//Atherosclerosis.-1990.-82.- P.7-17.

49. Gershoni-Baruch R., Dagan E., Israeli D. et al. Association of the C677T polymorphism in the MTHFR gene with breast and/or ovarian cancer risk in jewish women. //Eur. J. Cancer.-2000,- Vol. 36, N.18. P.2313-2316.

50. Giles WH, Croft JB, Keenan NL, Lane MJ, Wheeler FC. The validity of self-reported hypertension and correlates of hypertension awareness among blacks and whites within the stroke belt.// Am J Prev Med- 1995.- 1.-P. 163-9.

51. Glueck CJ, Shaw P, Lang JE, et al. Evidence that homocysteine is an independent risk factor for atherosclerosis in hyperlipidemic patients.// Am J Cardiol- 1995.-75.-P.132-6.

52. Goldschmidt-Clermont PJ, Roos CM, Cooke GE. Platelet PI*2 polymorphism and thromboembolic events: from inherited risk to pharmacogenetics. //J Thromb Thrombol -1999.-8.-P.89-103.

53. Goldstein JL, Hobbs HH, Brown MS. Familial hypercholesterolemia. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, editors. The metabolic and molecular bases of inherited disease.//7th ed. New York, NY:McGraw-Hill-1995.- P.1981-2030.

54. Goodall AH, Curzen N, Panesar M, Hurd C, Knight CJ, Ouwehand WH, Fox KM. Increased binding of fibrinogen to glycoprotein IIIa-proline33 (HPA-lb, P1A2, Zwb) positive platelets in patients with cardiovascular disease.// Eur Heart J- 1999.-20.-P.742-7.

55. Goyette P, Frosst P, Rosenblatt DS, Rozen R. Seven novel mutations in the methylenetetrahydrofolate reductase gene and genotype/phenotypecorrelations in severe methylenetetrahydrofolate reductase deficiency.//Am J Hum Genet.- 1995.-56,- P. 1052-1059.

56. Goyette P, Sumner JS, Milos R, Duncan AMV, Rosenblatt DS, Matthews RG, Rozen R. Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification.//Nat Genet.-l994.-7.-P. 195-200.

57. Hanson SR, Harker LA. Interruption of acute platelet-dependent thrombosis by the synthetic antithrombin D-phenylalanyl-L-prolyl-Larginyl chloromethyl ketone. //Proc Natl Acad Sci USA -1988.- 85.- P.3184-8.

58. Harker LA, Hanson SR, Runge MS. Thrombin hypothesis of thrombus generation and vascular lesion formation.// Am J Cardiol 1995- 75.- 12B-17B.

59. Hegele RA. SNP judgments and freedom of association.//Arterioscler Thromb Vase Biol -2002.- 22.- P.1058-61.

60. Herren T, Strieker H, Haeberli A, Do DD, Straub PW. Fibrin formation and degradation in patients with arteriosclerotic disease.// Circulation -1994.90.- P.2679-86.

61. Herrmann S-M, Poirier O, Marques-Vidal P, et al. The Leu33/ Pro polymorphism (Pl^/Pl^) of the glycoprotein Ilia (GPIIIa) receptor is not related to myocardial infarction in the ECTIM study.//Thromb Haemost -1997.-77.-P.l 179-81.

62. Hiatt WR. Medical treatment of peripheral arterial disease and claudication.// N Engl J Med -2001,- 344.- P. 1608-21.

63. Hill JS, Hayden MR, Frohlich J, Pritchard PH. Genetic and environmental factors affecting the incidence of coronary artery disease. // Atherosclerosis-2005-179-P. 333-338

64. Hillarp A, Zoller B, Svensson PJ, Dahlback B. The 20210 A allele of the prothrombin gene is a common risk factor among Swedish outpatients with verified deep venous thrombosis. //Thromb Haemost. -1997.-78.-P.990-992.

65. Honda S, Honda Y, Bauer B, Ruan C, Kunicki TJ. The impact of three-dimensional structure on the expression of P1A alloanti-gens on human integrin рз.// Blood -1995.-86.-P.234-42.

66. Jacobsen DW. Homocysteine and vitamins in cardiovascular disease.// Clin Chem -1998.-44.-P. 1833^3.

67. Jenkins AL, Nannizzi-Alaimo L, Silver D, Sellers JR, Ginsberg MH, Law DA et.al. Tyrosin phosphorylation of the b3 cytoplasmic domain mediates integrin cytoskeletal interaction.// J.Biol.Chem. -1998. - V.273. - P. 13878 -13885.

68. Jin Y, Dietz HC; Nurden A; Bray PF. Single-strand conformation polymorphism analysis is a rapid and effective method for the identification of mutations and polymorphisms in the gene for glycoprotein Ilia. //Blood- 1993.82.- P.2281-88.

69. Joven J, Simo JM, Vilella E, et al. Lipoprotein(a) and the significance of the association between platelet glycoprotein Ilia polymorphisms and the risk of premature myocardial infarction.//Atherosclerosis- 1998.- 140.-P. 155-9.

70. Juul K, Tybjaerg-Hansen A, Steffensen R, Kofoed S, Jensen G, Nordestgaard BG. Factor V Leiden: The Copenhagen City Heart Study and 2 meta-analyses.// Blood- 2002.- 100.-P. 3-10.

71. Kang SS, Wong PWK, Susmano A, Sora J, Norusis M, Ruggie N. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase: an inherited risk factor for coronary artery disease.//Am J Hum Genet.-1991.-48.- P.536-545.

72. Kang SS, Zhou J, Wong PWK, Kowalisyn J, Strokosch G. Intermediate homocysteinemia: a thermolabile variant of methylenetetrahydrofolate reductase.// Am J Hum Genet.- 1988.- 43.- P.414-421.

73. Karhunen PJ, Penttila A. Vailidity of post-mortem alcohol reports.// Alcohol Alcohol -1990-25.-P.25-32.

74. Kawashiri M, Kaj inami K, Nohara A, et al. Effect of common methylenetetrahydrofolate reductase gene mutation on coronary artery disease in familial hypercholesterolemia.// Am J Cardiol -2000.-86(8).-P.840-5.

75. Kekomaki S, Hamalainen L, Kauppinen-Makelin R, Palomaki H, Kaste M, Kontula K. Genetic polymorphism of platelet glycoprotein Ilia in patients with acute myocardial infarction and acute ischemic stroke.// J Cardiovasc Risk- 1999.-6.-P. 13-7.

76. Kekomaki S, Partanen J, Kekomaki R. Platelet alloantigens HPA-1, -2, -3, -5 and -6 in Finns.//Transfus Med- 1995.-5.-P. 193-8.

77. Klerk M, Verhoef P, Clarke R, Blom HJ, Kok FJ, Schouten EG. MTHFR studies collaboration group. MTHFR 677C—>T polymorphism and risk of coronary heart disease: a meta-analysis. //JAMA -2002.-288.- P.2023-31.

78. Koster T, Rosendaal FR, de Ronde H, Briet E, Vandenbrouke JP, Bertina RM. Venous thrombosis due to poor anticoagulant response to activated protein C: Leiden Thrombophilia Study.// Lancet. -1993.-342.-P.1503-1506.

79. Lane DA, Grant PJ. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease. //Blood- 2000.- 95.-P. 1517-32.

80. Lang T, de Gaudemaris R, Chatellier G, Hamici L, Diene E. Prevalence and therapeutic control of hypertension in 30,000 subjects in the workplace.// Hypertension- 2001.- 38.- P.449-54.

81. Lansa F., Kieffer N., Phillips D.R. et al. Characterization of the human platelet glycoprotein Ilia gene. Comparison with fibropectin receptor beta-subunit gene.//J Biol Chem. 1994. - V. 61. - P.812-814.

82. Lasne D, Krenn M, Pingault V, Arnaud E, Fiessinger JN, Aiach M, Rendu F. Interdonor variability of platelet response to thrombin receptor activation: influence of Pl^ polymorphism. //Br J Haematol -1997.-99.-P.801-807.

83. Lefkovits J, Plow EF, Topol EJ. Platelet glycoprotein Ilb/IIIa receptors in cardiovascular medicine. //N Engl J Med -1995.- 332.- P. 1553- 59.

84. Legnani C, Cosmi B, Valdre L, Boggian O, Bernardi F, Coccheri S, Palareti G. Venous thromboembolism, oral contraceptives and high prothrombin levels.// J Thromb Haemost -2003.- 1,- P. 112-7.

85. Liao JK. Endothelium and acute coronary syndromes.// Clin Chem-1998.-44.- P.1799-808.

86. Malinow MR. Homocysteine and arterial occlusive diseases.//J Intern Med.- 1994.-236.- P.603-617.

87. Marques-Vidal P, Evans AE, Cambou JP, Arveiler D, Luc G, Bingham A, Cambien F. Awareness and control of hypertension and hypercholesterolaemia in France and Northern Ireland.// QJM -1997.-90.-P. 341-5.

88. McCully KS. Homocysteine and vascular disease.// Nat Med -1996.-2.-P.86-9.

89. Michelson AD, Furman MI, Goldschmidt-Clermont PJ, et al. Platelet GPIIIa P1A polymorphisms display different sensitivities to agonists.// Circulation- 2000.-101.-P. 1013-8.

90. Mikkelsson J, Perola M, Kauppila LI, et al. The GPIIIa P1A polymorphism in the progression of abdominal aortic atherosclerosis.//Atherosclerosis- 1999.-147.-P.55-60.

91. Mikkelsson J, Perola M, Laippala P, Penttila A, Karhunen PJ. Glycoprotein Ilia p^1/^ polymorphism and sudden cardiac death.// J Am Coll Cardiol -2000.-36.- P. 1317-23.

92. Miletich JP, Prescott SM, White R, Majerus PW, Bovill EG. Inherited predisposition to thrombosis.// Cell.- 1993.-72.- P.477- 480.

93. Miller JW, Nadeau MR, Smith D, Selhub J. Vitamin B6 deficiency vs folate deficiency: comparison of responses to methionine loading in rats.// Am J ClinNutr.- 1994.-59.- P. 1033-1039.

94. Miller SA, DykesDD, PoleskyHF.A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells.// Nucl Acids Res -1988.- 16.-P.1215-18.

95. Motti C, Gnasso A, Bernardini S, et al. Common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase. Correlation with homocysteine and other risk factors for vascular disease. //Atherosclerosis- 1998.-139.-P.377-83.

96. Motulsky AG. Nutritional ecogenetics: homocysteine-related arteriosclerotic vascular disease, neural tube defects, and folic acid.// Am J Hum Genet-1996.-58.-P. 17-20.

97. Mudd SH, Levy HL, Skovby F. Disorders of transsulfuration. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, editors. The metabolic basis of inherited disease. //7th ed. New York, NY: McGraw-Hill- 1995.- P. 1279-326.

98. Nicholls P, Young IS, Graham CA. Genotype/phenotype correlations in familial hypercholesterolemia.// Curr Opin Lipidol- 1998.-9.- P.313-7.

99. Nygard О, Vollset SE, Refsum H, et al. Total plasma homocysteine and cardiovascular risk profile. The Hordaland Homocysteine Study.// JAMA-1995.-274.-P. 1526-33.

100. O'Malley JP, Maslen CL, Illingworth DR. Angiotensin-converting enzyme DD genotype and cardiovascular disease in heterozygous familial hypercholesterolemia.//Circulation.- 1998.-97,- P. 1780-3.

101. Ohman EM, Kleiman NS, Talley JD, et al. Simultaneous platelet glycoprotein Ilb/Hla integrin blockade with accelerated tissue plasminogen activator in acute myocardial infarction.// Circulation-1994.-90.- P. 561-564.

102. Okazaki H, Majesky MW, Harker LA, Schwartz SM. Regulation of platelet-derived growth factor ligand and receptor gene expression by alpha-thrombin in vascular smooth muscle cells. //Circ Res- 1992.- 71.- P.1285-93.

103. Olszewski AJ, McCully KS. Homocysteine content of lipoproteins in hypercholesterolemia.// Atherosclerosis- 1991.-88.-P.61-8.

104. Ouriel K. Peripheral arterial disease.// Lancet- 2001.- 358.- P. 1257-64.

105. Owada M, Aizawa Y, Kurihara K, Tanabe N, Aizaki T, Izum'i T. Risk factors and triggers of sudden death in the working generation: an autopsy proven case-control study. //Tohoku J Exp Med- 1999.-189.-P.245-58.

106. Parise LV. Integrin aIIbf3IIIa signaling in platelet adhesion and agregation.//Curr.Opin.Cell Biol. -1999. -VI1. P. 597 - 601.

107. Pastinen T, Perola M, Niini P, et al. Array-based multiplex analysis of candidate genes reveals two independent and additive genetic risk factors for myocardial infarction in the Finnish population.//Hum Mol Genet -1998.-7.-P.1453-62.

108. Pastore A, Massoud R, Motti C, et al. Fully automated assay for total homocysteine, cysteine, cysteinylglycine, glutathione, cysteamine, and 2-mercaptopropionylglycine in plasma and urine. //Clin Chem -1998.-44.-P.825-832.

109. Pollak ES, Lam HS, Russell JE. The G20210A mutation does not affect the stability of prothrombin mRNA in vivo.//Blood- 2002.- 100.-P.359-62.

110. Price DT, Ridker PM. Factor V Leiden mutation and the risks for thromboembolic disease: a clinical perspective.//Ann Intern Med.- 1997-127.-P. 895-903.

111. Rees DC, Cox M, Clegg JB. World distribution of factor V Leiden. //Lancet.- 1995.-346,- P.1133-1134.

112. Reiner AP, Siscovick DS, Rosendaal FR. Hemostatic risk factors and arterial thrombotic disease.// Thromb Haemost -2001.- 85,- P.584-95.

113. Renner W, Koppel H, Brodmann M, Pabst E, SchallmoserK, Toplak H, Wascher TC, Pilger E. Factor II G20210A and factor V G1691A gene mutations and peripheral arterial occlusive disease.// Thromb Haemost.- 2000.- 83.- P.20-22.

114. Ridker P.M., Hennekens C.H. et al. PLA1/PLA2 polymorfism of platelet glycoprotein Ilia and risks of myocardial infarction, stroke and venous trombosis.// N. Engl. J. 1997. -V.349. - P.385-388.

115. Ridker PM, Miletich J, Goldhaber SZ, Stampfer MJ, Lindpaintner K, Hennekens CH. Factor V Leiden and risks of recurrent idiopathic venous thromboembolism.// Circulation.- 1995.-92.- P.2800 -2802.

116. Ridker PM, Miletich JP, Hennekens CH, Buring JE. Ethnic distribution of factor V Leiden in 4047 men and women: implications for venous thromboembolism screening.// JAMA. -1997.-277,- P. 1305-1307.

117. Rosenblatt DS, Erbe RW. Methylenetetrahydrofolate reductase in cultured human cells, I: growth and metabolic studies.//Pediatr Res.- 1977.-11.-P.1137-1141.

118. Rosenblatt DS. Inherited disorders of folate transport and metabolism. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, eds. //The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. 7th ed. New York, NY: McGraw-Hill.- 1995.- P. 3111-3128.

119. Rosendaal FR, Siscovick DS, Schwartz SM, Psaty BM, Raghunathan ТЕ, Vos FIL. A common prothrombin variant (20210 G to A) increases the risk of myocardial infarction in young women. //Blood 1997.- 90.- P.l747-50.

120. Sampram ES, Lindblad B,Dahlback B. Activated protein С resistance in patients with peripheral vascular disease.//JVasc Surg- 1998,- 28.- P. 624-9.

121. Scaglione L, Bergerone S, Gaschino G, et al. Lack of relationship between the P1A1/P1A2 polymorphism of platelet glycoprotein Ilia and premature myocardial infarction. //Eur J Clin Invest. -1998.-28.-P.385-8.

122. Schulman SP, Goldschmidt-Clennont PJ, Navetta FT, et al. Integrelin in unstable angina: a double-blind randomized trial.//Circulation.- 1993.-88.-P.601-608.

123. Schulz KF, Grimes DA. Case-control studies: research in reverse. //Lancet.- 2002.- 359.- P.431^1.

124. Seed M, Hoppichler F, Reaveley D, McCarthy S, Thompson GR. Relation of serum lipoprotein(a) concentration and apolipoprotein(a) phenotype to coronary heart disease in familial hypercholesterolemia.//N Engl J Med.- 1990.-322.-P. 1494-9.

125. Selhub J, Jacques PF, Wilson PWF, Rush D, Rosenberg IH. Vitamin status and intake as primary determinants of homocysteinemia in an elderly population.// JAMA.-1993.-270.-P. 2693-2698.

126. Senti M, Aubo C, Bosh M, Pavesi M, Pena A, Masia R, et al. Platelet glycoprotein Ilb/Iia genetic polymorphism is associated with plasma fibrinogen levels in miocardial infarction patients.// Clin. Biochem. 1998. - V.31. - P. 647 -651.

127. Simioni P, Prandoni P, Lensing AW, Scudeller A, Sardella C, Prins MH. The risk of recurrent venous thromboembolism in patients with an Arg506-Gln mutation in the gene for factor V (factor V Leiden).// N Engl J Med. -1997.336.- P.399^03.

128. Simoons ML, De Boer MJ, van den Brand MJ, et al. Randomized trial of a GPIIb/IIIa platelet receptor blocker in refractory unstable angina.// Circulation -1994.- 89.- P.596-603.

129. Simsek Sj Faber NM, Sleeker PM, et al. Determination of human platelet antigen frequencies in the Dutch population by immunophenotyping and DNA (allele-specific restriction enzyme) analysis.// Blood.- 1993.- SI.- P. 835-45.

130. Sperr WR, Huber K, Roden M, et al. Inherited platelet glycoprotein polymorphisms and a risk for coronary heart disease in young central Europeans.// Thromb Res.- 1998.-90.- P. 117-23.

131. Stampfer MJ, Malinow MG, Willett WC, Newcomer LM, Upson B, Ullmann D, Tishler PV, Hennekens CH. A prospective study of plasma homocysteine and risk of myocardial infarction in US physicians.// JAMA.-1992.-268,-P.877-881.

132. Stattil SJ. Signalingg through platelet integrin alpha lib beta 3A inside-out, outside-in, and sideways.// Thromb. Haemost. 1999. - V.82. — P. 318 -325.

133. Steering Committee of the Physicians' Health Study Research Group. Final report of the aspirin component of the ongoing Physicians' Health Study. //N Engl J Med. -1989.-321.- P.129 -135.

134. Stouffer GA, Hu Z, Sajid M, et al. P3 Integrins are upregulated after vascular injury and modulate thrombospondin- and thrombin-induced proliferation of cultured smooth muscle cells.//Circulation.- 1998.-97.-P.907-15.

135. Svensson PJ, Dahlback B. Resistance to activated protein С as a basis for venous thrombosis. //N Engl J Med.- 1994.-330.-P. 517-522.

136. Taddei S, Salvetti A. Endothelial dysfunction in hypertension. //Adv Exp Med Biol .-1997.-423.- P. 235-46.

137. The EPIC Investigators. Use of a monoclonal antibody directed against the platelet glycoprotein Ilb/Iila receptor in high-risk coronary angioplasty. N //EnglJMed.- 1994,- 330.- P. 956-61.

138. Thompson G.R., Handbook of Hyperlipidaemia.//G.B.: Current Science.-1994,- 258p.

139. Tonstad S, Joakimsen O, Stensland-Bugge E, et al. Risk factors related to carotid intima-media thickness and plaque in children with familial hypercholesterolemia and control subjects. //Arterioscler Thromb Vase Biol.-1996.-16.- P.984-91.

140. Tonstad S, Refsum H, Ueland PM. Association between plasma total homocysteine and parental history of cardiovascular disease in children with familial hypercholesterolemia.// Circulation.- 1997.-96.- P. 1803-8.

141. Topoi EJ, Califf KM, Weisman HF, et al. Randomized trial of coronary intervention with antibody against platelet GPIIIa integrin for reduction of clinical restenosis: result at six months.// Lancet.- 1994.-343.- P. 881-86.

142. Tracy RE, Malcom GT, Oalmann MC, Newman WP, 3rd, Guzman MA. Nephosclerosis, glycohemoglobin, cholesterol, and smoking in subjects dying of coronary heart disease.// Mod Pathol.- 1994.-7,- P.301-9.

143. Valentine RJ, Verstraete R, Clagett GP, Cohen JC. Premature cardiovascular disease is common in relatives of patients with premature peripheral atherosclerosis.// Arch Intern Med 2000.- 160.- P. 1343-8.

144. Verhaar MC, Wever RM, Kastelein JJ, et al. 5-Methyltetrahydrofolate, the active form of folic acid, restores endothelial function in familial hypercholesterolemia. //Circulation.- 1998.-97.- P.237^H.

145. Vijayan KV, Goldschmidt-Clermont PJ, Roos C, Bray PF. The PI*2 polymorphism of P3 integrin enhances outside-in signaling and adhesive functions.// J Clin Invest.- 2000.-105.- P.793-802.

146. Weiss EJ, Bray PF, Tayback M, et al. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis. //New Engl J Med.- 1996.-334.- P. 1090-4.

147. Weitz JI, Byrne J, Clagett GP, FarkouhME, Porter JM, Sackett DL, Strandness DE Jr, Taylor LM. Diagnosis and treatment of chronic arterial insufficiency of the lower extremities: a critical review.// Circulation.- 1996.94.- P. 3026-49.

148. Wilcox JN, Rodriguez J, Subramanian R, Ollerenshaw J, Zhong C, Hayzer DJ, Horaist C, Hanson SR, Lumsden A, Salam ТА. Characterization of thrombin receptor expression during vascular lesion formation.// Circ Res.-1994.- 15.- P. 1029-38.

149. Wu SC, Li CY, Ke DS. The agreement between self-reporting and clinical diagnosis for selected medical conditions among the elderly in Taiwan. //Public Health.- 2000,- 14.- P. 137-42.

150. Xhignesse M, Lussier-Cacan S, Sing CF, Kessling AM, Davignon J. Influences of common variants of apolipoprotein E on measures of lipid metabolism in a sample selected for health.//Arterioscler Thromb.-1991.-ll.-P.1100-1110.

151. Yee КО, Ikari Y, Schwartz SM. An update of the Grutzbalg hypothesis: the role of thrombosis and coagulation in atherosclerotic progression.// Thromb Haemost.- 2001.- 85.- P. 207-17.

152. Zoller В, Dahlback В. Linkage between inherited resistance to activated protein С and factor V gene mutation in venous thrombosis.//Lancet.- 1994.-343.-P.1536-1538.

153. Zotz RB, Deitenbeck R, Rehnfeld ISB. Increased platelet sensitivity related to the GPIIIa polymorphism (HPA-lb/PlA2).//Circulation.- 1997.-3717a. Abstract.