Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации в различных возрастных группах Санкт-Петербурга
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации в различных возрастных группах Санкт-Петербурга"
САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
На правах рукописи
ГЛОТОВ Олег Сергеевич
АНАЛИЗ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ И СИСТЕМЫ ДРТОКСИКАЦИИ В РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППАХ САНКТ-ПЕТЕРБУРГА
специальность 03 00 15 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Санкт-Петербург 2007
Работа выполнена в Лаборатории пренатальной диагностики наследственных и врожденных болезней человека ГУ Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им Д О Отта РАМН
Научные руководители
доктор медицинских наук профессор, член-корр РАМН, зав лаб Владислав Сергеевич Баранов
Официальные оппоненты
доктор биологических наук, профессор Виктория Николаевна Горбунова доктор медицинских наук профессор Владимир Николаевич Анисимов
Ведущее учреждение Институт экспериментальной медицины РАМН
Д 212 232 12 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при ¡'"-.Санкт-Петербургском Государственном университете по адресу 199034 Санкт-Петербург, Университетская наб 7/9, СПбГУ биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции, аудитория 1
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета
Й Защита состоится
часов на заседании Диссертационного совета
Автореферат разослан
Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук
Л А Мамон
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Итогом Международной программы «Геном человека» явилась идентификация практически всех генов, в том числе и тех, мутации которых приводят к наследственным болезням либо предрасполагают к мультифакториальным заболеваниям Появилась реальная возможность не только проводить точную мочекулярную диагностику но и с определенной вероятностью оценить предрасположенность человека к тому или иному заболеванию (Шварц, 1997 Nebert, 1997, Баранов и др , 2000)
Хорошо известно, что ранняя диагностика и своевременная профилактика различных заболеваний является актуальной проблемой современной медицины Как правило, пациент обращается к врачу, когда болезнь уже имеет клинические проявления и не редко серьезные осложнения При этом основная причина патологического процесса зачастую остается невыясненной (Баранов и др , 2000) В этом случае самое интенсивное лечение требует постоянного применения лекарственных препаратов и может лишь временно улучшить состояние пациента
Поиск генетических маркеров, отвечающих за наследственную предрасположенность к мультифакториальным заболеваниям, является главной целью современной предиктивной медицины На практике такая цель может быть достигнута путем мочекучярного тестирования генов, получивших название "генов предрасположенности' «suceptibility genes» (Collms 1999) Последние можно определить как гены настедствеяные варианты (полиморфизм) которых совместимы с жизнью но в сочетании с неблагоприятными внешними факторами Moryi быть причиной различных патологических состояний и заболеваний, в том числе и таких частых как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, остеопороз сахарный диабет, бронхиальная астма и прочих (Баранов и др 2000)
Выяснение составляющих генной сети каждого мутьтифакториального заботевания, идентификация в ней ключевых ("центральных") генов и генов-модификаторов (Колчанов и др 2003) анализ ассоциации их полиморфизма с конкретным заболеванием разработка на этой основе комплекса профилактических мероприятий для каждого конкретного пациента составляют стратегическую основу нового быстро развивающего направ тения - предиктивной (предсказательной) медицины Для более точной оценки роли генетического полиморфизма в этиологии заболевания особенно перспективным представляется изучение полиморфизма генов, контролирующих наиболее важные биохимически взаимосвязанные процессы метабо-шзма Особый интерес в этой связи представ!яет изучение полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации ксенобиотиков Результаты исстедований показали, что полиморфизм генов соответствующих систем существенно меняет их активность, и может быть основной причиной биохимических и функциональных нарушений приводящих к серьезным острым и хроническим заболеваниям (Пузырев 2003, Rupert et а! 2003 Zhu et al, 2003, Naber et al 2004a,b) Поэтому ранняя диагностика наследственной предрасположенности к этим заболеваниям имеет решающее значение для предиктивной медицины, как один из реальных путей в борьбе за активное долголетие против преждевременного старения (Schachter et al 1994, Varcasia et al 2001, Анисимов, 2003)
Число работ, посвященных изучению особенностей частот «функционально-значимого» потиморфизма в различных популяциях стремительно растет Подробно изучается полиморфизм генов, вовлеченных в этиологию и патогенез многих тяжелых хронических заболеваний, таких как сердечнососудистые, нейро-дегенеративные и онкологические (Baranov et al, 1996, Шварц, 1997, Пузырев, 2003) Важная информация о вкладе того или иного генетического полиморфизма в развитие мутьтифакториальных заболеваний, в процессы долголетия и старения может быть получена путем сравнения частот аллелей в разных возрастных группах, начиная от рождения и до глубокой старости В доступной литературе такие исследования нами не обнаружены Исключение составляют специальные исследования преимущественно последних лет посвященные сравнению аллельных частот некоторых генов у лиц среднего возраста и у столетних стариков с целью поиска генетического полиморфизма, положительно ассоциированного с долгожительством (Анисимов, 2003)
Работа была поддержана грантами Мэрии Санкт-Петербурга (М99-2 6Д-444, М00-2 6Д-744, МО 1-2 6Д-736, М02-2 6Д-629), Министерства Образования России (А03-2 12-14), CRDF (ST-012-0) Цель и задачи исследования Целью работы явился анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации в разных возрастных группах (новорожденные, лица среднего возраста и старше 69 лет) Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач
1 Исследовать полиморфизм генов сердечно-сосудистой системы {ACE, AGT, AGTR1 NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН),
2 Иссчедовать полиморфизм генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2),
3 Провести сравнительный анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и генов системы детоксикации в разных возрастных группах,
4 Проанализировать ассоциацию полиморфизма изученных генов с некоторыми частыми возрастными заболеваниями
Научная новизна работы. Впервые изучены особенности аллельного полиморфизма семи генов сердечно-сосудистой системы {ACE, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН) и трех генов системы детоксикации {GSTMJ, GSTT1, NAT2) в трех возрастных группах населения Северо-Западного региона РФ Проанализированы ассоциации полиморфных вариантов изученных генов с пятью различными заболеваниями у лиц старше 69 лет ишечическая болезнь сердца (ИБС), гипертоническая болезнь (ГБ) острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК), инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД), катаракта Впервые для трех возрастных групп показаны отличия в распределении частот генотипов по отдельным генам {NAT2 и GSTM1) и их сочетаниям (GPIIIa Al/Al + AGTR1 At- и GPIIIa Al/Al + GSTMl 0/0), установлены различия в распредетении частот сочетанных генотипов четырех генов системы «Давление», и трех генов системы детоксикации Впервые показано, что у тин мужского пола частоты А2 аллели гена GPIIIa и сочетанного генотипа GSTM1 (+) GSTT1 (+) }меньшаюгся в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 тет Впервые выявлены возрастные «рубежи» изменения частот генотипов 75 лет для генотипа А2/А2 (GPIIIa), 90 лет - для генотипа С/С (AGT) Для лиц старше 69 лет впервые уаановтена ассоциация сочетанных генотипов GSTM1 (0/0)+ MTHFR (CI-) + NAT2 (N/S) с ИБС GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с ИНСД AGT (Т/Т) - с ОНМК, AGTR1 (А/С) + РАН (4G'4G или 5G/5G)+ NOS3 (4/4 или 5/5) - с катарактой Для лиц старше 69 тет при комптексном анализе почиморфизма генов, продукты которых регутируют давление, впервые показано что «неблагоприятные» аллели и генотипы этой системы ассоциированы с ИНСД
Практическая значимость Анализ полиморфных вариантов генов сердечно-сосудистой системы (АСЕ AGT AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa РАН) и генов системы детоксикации (GSTMl GSTT1, NAT2) можно рассматривать как прогностический тест для оценки риска развития ИБС ГБ, ОНМК ИНСД и катаракты
Основные положения, выносимые на защиту
1 Распределение частот генотипов по отдельным генам (NAT2 и GSTMI) их сочетаниям (GPIIIa Al/Al + AGTR1 А/- и GPIIIa Al/Al + GSTMl 0/0), а также частот сочетанных генотипов 4 генов регулирующих давтение, и 3 генов системы детоксикации в трех возрастных группах отличается
2 Выявтено уменьшение частоты А2 алтели GPIIIa гена и сочетанного генотипа GSTMI (+) GSTT1 (+) у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет
3 Установлены возрастные «рубежи» изменения частот генотипов 75 лет дтя генотипов ACE (I/I) и GPIIIa (А2/А2), 90 лет - для генотипа AGT (С/С)
4 У лиц старше 69 лет выявлена ассоциация генотипов GSTMI (0/0)+ MTHFR (Cl-) + NAT2 (N/S) с ИБС. GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с ИНСД AGT (Т/Т) - с ОНМК, AGTR1 (А/С) + РАН (4G/4G или 5G/5G)+ NOS3 (4/4 или 5/5) - с катарактой Некоторые сочетанные генотипы по 4-м генам системы «Давление», ассоциированы с ИНСД у лиц старше 69 лет
5 Выявленные ассоциации полиморфизма изученных генов с долгожительством и мультифакториальными заболеваниями подтверждают предположение о том, что с возрастом происходит элиминация из популяции ряда генотипов и аллелей генов «предрасположенности»
6 Наличие «функционально неблагоприятных» аллелей следует учитывать при разработке индивидуальных программ профилактики заболеваний и «антистарения»
Апробация работы. Результаты работы были представлены на Европейских конгрессах по генетике человека (Бирмингем, Великобритания, 2003, Мюнхен, Германия, 2004, Прага, Чехия, 2005, Амстердам, Нидерланды, 2006), 3-ей Ежегодной Встречи Международного Общества Фармакогеномики (Санторини, Греция, 2004), Мировом конгрессе по медицине «антистарения» (Париж, Франция, 2006), II и III Международных конференциях «Медицина долголетия и качества жизни» (Москва, 2006, 2007). V Всероссийской медико-биологической конференции «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург 2002), 3-ем съезде ВОГиС "Генетика в XXI веке современное состояние и перспективы" (Москва 2004), Первой международной научно-практической конференции МЕДБИОТЕК-2005 "Биологические и
медицинские технологии от научных результатов к инновационным разработкам (Москва, 2005) Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (Санкт-Петербург, 2006) Международном конгрессе «Социальная адаптация, поддержка и здоровье пожилых людей в современном общее 1ве» (Санкт-Петербург, 2007)
Диссертация апробирована на научных семинарах Лаборатории пренатальной диагностики наспедственных и врожденных болезней человека ГУ Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им ДО Отта РАМН, Кафедры генетики и селекции СПбГУ Публикации. По материалам диссертации опубликовано 20 работ
Объем и структура диссертации Диссертационная работа состоит из введения обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, состоящего из 254 источников и приложения Работа изложена на 188 страницах машинописного текста и содержит 44 рисунка и 23 таблиц
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Характеристика исследуемых групп Обследовано 376 человека трех возрастных групп Первую группу (Н) составили 109 новорожденных (НИИ АГ им ДО Отта РАМН) вторую группу (П) - 119 человек в качестве популядионного контроля (мужчины и женщины) в возрасте 20-50 лет не являющиеся родственниками и проживающие в Северо-западном регионе России третью групп) (С) -148 лиц старше 69 лет (1-й Санкт-Петербургский городской дом престарелых) несколько поколений которых проживало в Северо-западном регионе России Группа лиц старше 69 лет была разделена по возрасту на три подгруппы 1 - лица пожилого возраста (69-74 лет) 2 - лица старческого возраста (75-89 лет), 3 - дочгожители (старше 90 тет) и по наличию заболеваний на имеющих в анамнезе ишемическую болезнь сердца (ИБС) ичсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД) острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК) катаракту и без таковых
Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови и к теток буккального эпителия. Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови и клеток буккального эпителия проводили в соответствии с методикой приведенной в руководстве Сэмбрука (Sambrook et al 1989), с некоторыми модификациями
Проведение полимеразной цепной реакции. Нуклеотидные последовательности искомых фрагментов генов выбирали из интернет-базы 'Nucleotide' ('NCBI , США) Праймеры необходимые дтя проведения ПЦР этих фрагментов, подбирали с использованием программы 'Oligo 6 (США) Специфичность праймеров проверяли в программе 'Nucleotide-nucleotide BLAST' ( NCBI' США)
Во всех группах изучены особенности генетического полиморфизма 3 генов фазы 2 системы детоксикации GSTM1 (детеция) GSTT1 (деления) NAT2 (С481Т G590A, G857A) и 7 генов сердечнососудистой системы AGT (Т704С) АСЕ (I/D) AGTR1 (А1166С) РАН (4G/5G), GPIIIa (С1565Т) MTHFR (С677Т) NOS3 (4/5) Характеристика изученных полиморфных вариантов представлена в таблице 1
Таблица 1 Характеристика исследованных генов и их полиморфных вариантов
Ген, локализация Название белового проду кта гена Полиморфизм
АСЕ (17q23) Ангиотензинпревращающий фермент del/ms287riH в интроне 16
ACT (Iq42-q43) Ангиотензиноген Т704С (М235Т)
AGTR1 (3q21-q23) Рецептор 1 к ангиотензину 2 AU66C
NOS3 (7q35-36) Эндотелиальная >Ю-синтаза 4/5 повторов 27 п н в интроне 4
MTHFR (lp36 3) Метилентетрогидрофолатредуктаза С677Т
GPUla/llb (17q21 32) Рецептор тромбоцитарного гликопротеина С1565Т (А1/А2 полиморфизм )
PAI-1 (7q21-22) Ингибитор активатора плазминогена 4 и 5 G в -675 положении
GSTM1 (lpl3) Глютатион-Б-трансферазы М1 Del
GSTT1 (22qll 23) Глютатион-Б-трансферазы Т1 Del
NAT2(8p22) ><-ацетил-трансфераза 2 С481Т, G590A, G857A (N,S1,S2,S3)
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили по стандартной схеме (Ба^, 1989) при помощи программируемого термоциклера МС-2 с использованием термофильной ДНК-полимеразы и специфических олигопраймеров Определение полиморфных вариантов генов N083, АСЕ, С8ТМ1, СБТИ проводили методом ПЦР Определение полиморфных вариантов генов АСТ АвТН!, РАН,
GPIHa, MTHFR проводили методом ПЦР с последующим рестрикционным анализом Определение полиморфных вариантов NAT2 гена проводили методом гибридизации на олигонуклеотидном биочипе Статистическая обработка данных При сравнении результатов использовали точный критерий Фишера (Животовский, 1991), пакеш программ "GraphPad InStat" (США) и STATISTIC А 5 5 (США)
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Генетические факторы являются тем фундаментом, на котором формируется физиологический статус метаболических систем организма, от функционального состояния которых зависит предрасположенность к заболеванию или, наоборот, устойчивость к нему Развитие большинства мультифакториальных заболеваний определяется мутациями многих генов (Шварц, 1997, Баранов и др , 2000, 2005, Пузырев, 2003) Для изучения комплексного влияния генетических факторов на предрасположенность к некоторым частым заболеваниям и продолжительности жизни нами были выбраны гены сердечно-сосудистои системы (ACE, AGT, AGTR1 NOS33, hlTHFR, GPIHa, PAII) и гены системы детоксикации (GSTM1 GSTTJ, NAT2) Данный набор генов определялся тем, что продукты изучаемых генов принимают непосредственное участие или являются регуляторами основных биохимических реакций, то есть входят в состав генной сети сердечно-сосудистой системы (например -ACE AGT, AGTR1 - ренин-ангиотензиновый каскад) и системы детоксикации
«Возрастные особенности полиморфизма» данных генов изучали на индивидуумах трех возрастных групп
1 Анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы (ACE, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, РАН) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет
В последние годы возрастает чисто работ посвященных изучению особенностей аллельных частот «функционально-значимого» полиморфизма в различных попутяциях Подробно изучен полиморфизм генов, играющий важную роль в процессах метастазирования злокачественных опухолей (Garte et al, 2001, Yoshimura et a!, 2003), в сердечно-сосудистых заболеваниях (ВОЗ 1994) Обязательным начальным этапом таких исследований является изучение популяционных частот «функционально значимых» аллелей соответствующих генов
Важность популяционных исследований заключается в том, что различия и сходства в частотах функционально-значимого полиморфизма в разных популяциях достаточно часто зависят от географических условий, региона проживания, особенностей пищевого рациона, расовой и этнической принадлежности и многих других факторов (Хуснутдинова и др, 1997 Nebert and Carvan, 1997, Степанов и Пузырев 2000, Степанов, 2002) Поэтому, не вызывает сомнения что удельный вклад одних и тех же генетических полиморфизмов в этиологию и патогенез тюбого мультифакториапьного заболевания в разных популяциях и этнических группах может различаться (Баранов и др 2002, Степанов, 2002, Глотов О С и др 2004)
1.1 Анализ соответствия распределения генотипов закону Харди-Вайнберга
Для анализа соответствия распределений закону Харди-Вайнберга нами проведено сопоставтение наблюдаемых и ожидаемых частот генотипов по генам ангиотензиногенаЛОГ(Т704С), ангиотензинпревращающего фермента ACE (I/D) рецептора 1 к ангиотензину II AGTR1 (1166А>С), эндоте "шальной NO-синтазы NOS3 (4/5), метилентетрагидрофолатредуктазы MTHFR (С677Т), фактора агрегации тромбоцитов GPIIIa (А1/А2), ингибитора активатора плазминогена 1 PAI-1 (4G/5G) у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет Для полиморфизма генов ЛОТ, GPIIIa, АСЕ PAI-1, MTHFR, NOS3 и AGTR1 анализ ожидаемых и наблюдаемых частот генотипов не выявил различий в исследованных группах (р>0 05)
1 2 Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН, GSTM1, GSTTI, NAT2) у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет
Мы провели сравнительный анализ частот генотипов и аллелей изученных генов между выборками новорожденных лиц среднего возраста и лиц старше 69 лет При сравнении групп учитывали различия по полу, если распределение генотипов для лиц женского и мужского пола было различно
Анализ частот аллелей и генотипов по генам АСЕ ACT, AGTR1 \<)Sj \iTHFR. QPUla, PAI-l не выявил статистически значимых различий между выборками новорожденных, лиц среднего возраста и лип старше 69 лет (p>Q.Q5) (см, рис. 1}.
Показано возрастание частоты t/D генотипа АСЕ гена а ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет (42.2%. 4?.4% и 5(1.7%, соответственно) (см. рис. I).
и - 83,2% 11-71.(1% 0-71.4% P-0.G0S. af : 'iИ. П. '
К
11-36.1% П - J't.iít. с -
JMI.1HÍ, [Ll-i чпкау ti i ii
asm о/о
а зги i а/о
epíii.i м
i>P. 1 С
. .- —-■ M,S.I 4
п
Рвс,1, Распределение частот генотипов fi аллелей по изучен Чьем генам у новорожденных (Н). лии среднего возраста {11} и у rtин старше ÍÍ9 лет (С)
' MTHFfl
Выявлено достоверное отличие частот генотипов по гену AGTRi у мужчин и женщин в группе лиц среднего возраста (p=0.ÍH9. df=2). Также, достоверно сличались частоты С и А аллелей
Данного гена \ ншпвндуу мов женского и мужского пода в группе новорожденных (С аллель: 17,8% и 30.9%, соответственно. р=0.033. у/=4.55. df=I). лип среднего возраста (С аллель: 31% и 17.2%. соответственно. p-0.lJ]3. х~=6.24. df=1), но не \ лиц старше б4 лет (С аллель: 28.6% и 23.9%). Для мужчин и женщин среднего возраста установлено достоверное отличие частоты С/- mioiKOa (р^Г/,014, ■¿2~6.06. df=2j (см. рис.21. Полученные факты, по-видимому. свидетельствуют о разном влиянии полиморфизма ттота тепа на «жизнеспособность./ у мужчин и женщин среднего нозраста. Учитывая ассоциацию С аллели гена AGTR1 с сердечно-сосу л истыми заболеваниями (Batalla et о;'.. 2000), можно, предположигь, что установленные тендерные различия связаны с более ранним проявлением сердечнососудистой патологии V мужнин.
новорожденные
лица среднего возраста
пине старше 63 лет
□ мужчины U женщины
Рис. 2. Еаслрел&ление частоты
С.'- генотипа AGTRÍ (1 I6(jA>G) гена у 1НДИЛ'.2>умоа разных полов в трех иоэрас! м:. \ групп а к
Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по гену l'Al-1 между новорожденными, лицами среднего возраста и старше 69 лет, гакже не выявил статистически значимых различий между группами. Наши данные подтверждают существующее мнение о том. ЧТО продукт данного гена не оказывает заметного влияния па продолжительность жизни (Bladbjerg et ai. 1999: Lotlermoser cl al., 2001) Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии ассоциации между продолжительностью жизни и аллелью 50.
Показано уменьшение частоты носительства А2 аллели гена вРИЩ у мужчин в ряду новорожденные - липа среднего возраста - лтша старше 69 лет (44.4%, 34.5%, 21.4%, соответственно) (см, рис.3). Различия достоверны при сравнении новорожденных и лип старше 69 лет (рЧ>,046. х'=3.99. di4),
я
I 1QIJW
i 80% 0
l 60Й
з 401»
73.5%
Рис.? Распределиhwc .-.ст,г: Л2- и А'А I Г£М0ТЛГ.;ЭЬ по гену GPlllo ГС1 565T) у мужчин трех возрастных групп
£
новорожденные. N^45
пицз среднего лица стврше 69 яазрэстэ, N~55 пет,
□ А21- ■ А1/А1
V индивидуумов женского пола частота А1/А2 генотипа максимальна у новорожденных ¡ 32.7%). потом уменьшается (18.3fj|) у лиц среднего возраста (р=0,076, y;=j.l5. d!'=l ] л возрастает до 34.5% у женщин старше 69 лет (р=0.025. jf-5.03. di=I. между лигами среднего возраста и старше 69 лет). Таким образом, полиморфизм GPIIIa (С1565Т) не ассоциирован е долгожительством. что соответствует наблюдениям других авторов (Bladbjerg et а].. 1999), Вместе с тем. наши датшые показывают, что существу roi тендерные различия в частотах аллелей и Генотипов данного гена в разных возрастных гр\ и пах.
Сравнительный анализ частот «нулевыми генотипов по гену OSTM1 в З-ч изученных возрастных группах выявил статистически значимые различия между новорожденными и лицами среднего возраста (Х =3.91. p~0.04S. df=l) (ем. рие.1), Подученные результаты подтверждают данные других авторов (Хавипеои и др.. 2002: Pesch ej al.. 2004: Christiansen et al. 2006). отмечавших возрастание частоты «нулевых» генотипов в группах лиц старшего возраста. Не исключено, что лица с подобными генотипами обладают определенными адаптивными преимуществами, В частности, можно предполагать, что у «кулевых)* гомозигот, для которых характерна медленная инактивации лекарств, эффективность медикаментозного терапии более высока, чем у носителей «функционально активных» аллелей (Хавннсон и др. 2002). Не исключено, однако, что такал особенность характерна только для лии среднего возраста, и не прослеживается после 70 дет
Важно отметить, ч го основной вклад в отмеченные возрастные особенности вносят различия частот GSTM1 генотипов у индивидуумов мужского пола. У индивидуумов женского пола частоты «нулевых» генотипов у новорожденных, лиц среднего возраста и лип старше 69 лет были практически одинаковыми (40.3%. 42.6%. 42%. соответственно), тогда как у мужчин: они составили 30,4%. 56.1%. 53.6%. соответственно. Между новорожденными мужского пола и мужчинами среднего возраста чги различия были статистически значимыми. ('¿"=6.80. p^O.OOl, df=)). Складывается впечатление, что [юдниорфизм (лютатно!i-S-трансферщы Mi ассоциирован с врошлжитедькдещо жнгни у лиц мужского пола.
Сравнительный анализ частот генотипов по гену GSTTI между новорожденными, липами среднего возраста и старше 64 лет, не выявил статистически значимых различий между группами (ем, рие.1). Однако, отмечена тенденция возрастания частоты нулевых генотипов в ряду новорожденные -лица среднего возраста - лица старше 69 лет (18.5%, 22% и 27.9%, соответственно). Полученные результаты чорошо согласуются с ранее известными данными, отмечавших увеличение частоты «нулевых» генотипов с возрастом (Tiliolt et al., 2001; Christiansen et al, 2006),
При анализе частот сочетанныч 1 енот иное по генам GSTTJ и GSTM! отмечено некоторое увеличение частоты «двойных нулевых гомозигот» у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет (6.5%. 19.3% и 21.4%. соответственно) и уменьшение частоты GSTT11 +J+ОЬТ.Ш) генотипов в ряду новорожденные - лица среднего возраста - липа старше 69 лет (56.5%, 40.4% и 28.6%, соответственно, /2=5.48. р=0.039, df=t между новорожденными и долгожителями) (см. рис.4). Частоты сочетай пыл генотипов по генам GSTT1 и GSTM1 у особей женского пола разных возрастных групп не отличались.
(j
g 70% ■
70% 50% 50% 4Ù% 30%
го% 10%
iñfí-
ш
Pi», рвспрелзлЕнне частот rtirantMi asm el GSTMI генов и рвздых RUipUCTUbTK Группах лиц мужского ПОЛЯ
новорожденные,
лица среднего возраста, N=57
пицз старше N-2S
OGSTM10/Q GSTT10/0 MGSTTfWO OSTWf» DGSTTft e&mia/o nssm» asmi*
Сравнительный анализ частот генотипов по гену NAT2 выявил статистически значимые различия межл\ новорожденными и лицами средней возраста 4S. р~Г).014. Л'^2). а шкже между
новорожденными и долгожителями (х =9.06, р^О.О I L df=2). Установлено гак же статистически достоверное увеличение частоты \ ал л е ЛИ в группе лиц старше 64 лет и у .¡ни Среднего во траста ко сравнению- с новорожденными (х^=8.45. р-0.038, df=l; ;(=8,13. p=ö,ö43, dW, соответственно! (см. табл.2).
Tar.'i пин 2. Частоты аллелей Л ! I - i ui. в ' рея воэрц*.1......* группа*.
Часто™, в %
Генотип,аллель Новордо&ен...... Лина с релин о возраста Лмна старше нет
IN I6.S 28,0 2S.fi
Si 51.0 43.2 45,1
: -, 23,6 26.7 24.1
¡ К J,6 2.1 1 ч
Bttto. л i ад 2JÍ 224
При объединении всех вариантов «медленных аллелей» в одну группу S. ними были получены следующие данные: частоты ал.,слей S н 1енотнпа S/S достоверно уменьшаясь и ряду новорожденные -лица среднего возраста -- лица старше лет (см, рис.! ). При разделении лип одного возраста по полу достоверных отличий выявлено не было [р>0.051. [ [слученный результат шщодяет предположить, что независимо oí пола \ «.медленных» знетиляторов продолжительность жизни в среднем меньше, чем у лиц С нормальной N аллслыо.
U, Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей генов в возрастных подгруппах .mit старше 69 лет
Гру ппа лиц старше 69 лет была разделена на три подгруппы: 1 - лица пожили о возраста (fi'J-74 лет). 2 - лица старческого возрасти (75-89 лет I, 3 - долгожители (старше 90 лет).
V лиц старше 69 лет установлено возрастание частоты С/С" генотипа по гену AGT (ассоциированного с сердечно-сосудистыми заболеваниями) в ряду: подгруппа 1 - подгруппа 2 -подгруппа 3 ( 13,5%. 14.6% и 34.6%. Соответствен но: р=0.О47. у--3.93, dt-l - между подгруппами 1 и 3: p=0.Û25. ;f=5.09, df=l - между подгруппами 2 и 3; р=0.049. /"=6.01. i.tt'=2 - между всеми подгруппами) (см. рис.5).
Распределение генотипов по гену АСЕ в подгруппе I составило 3/1 я 35.1%. I'D ~ 48.7%. D/D 16.2% и было близким к таковому у мужчин старгнс 69 лет - 1/1 = 32.1%, I/O = 50%, D/D - 17.9%. Важно ОТМЕТИТЬ низкую частоту D/D генотипа н чгих выборках. Можно предполагать. чго низкая продолжительность жизни у мужчин (до 75 лет), по-видимому, обусловлена, сердечно-сосудистыми заболеваниями, ассоциированными с D'D генотипом.
Выявлено достоверное уменьшение 1/1 генотипа н I аллели у лиц подгруппы 2 по сравнению с подгруппой 1 íp=0.029. х~~4.74 , dfM; р=0.026. х;=4.94. dfH. соответственно) (ем. рис.5). Полученные данные хорошо согласуются с ранее установленным фактом снижения частоты генотипа 1/1 по гену АСЕ у лиц после 70 лет (Хавинсон и др.. 2002). I аллель, как известно, ассоциирована с риском диабета 2 типа и ожирения. По-видимому, наличие I аллели является фактором риска этих заболеваний, как для мужчин, так и для женшин. после 75 лет. После 9(1 лет «негативное влияние» полиморфизма А СЕ гена на долголетие, по-видимому, нивелируется.
К)
i - J1,;"-»
г г4Щ з - к, j %
Авт m!
AC£'
1 - 4<..■>%
2 - 46,3% S-1SW
GS7M1 0/D
|_У
I -
2-43,9% i - 4j,m
p=1UJ2b
4tx I и 2
1 (69-74 neml
2 (75-89 fiem) 13 (старше
90 летI
Put.?. Рас ftp« деление часто! некоторый гемотилор и аллелей по изучений генам н [созрастных подгруппах старше 69
GF>i)a А'¿-'А?
В подгруппах лиц старше 69 лет установлено некоторое уменьшение частоты "1" аллели \!1'H1-R гена. ассоциированной с сердечно-сосудистыми заболеваниями, 8 ряду подгруппа 1 подгруппа 2 -подгруппа 3 (37,8%, 29.3% и 23.1. соответственно) (см. рис.5). Полученные результаты находятся в соответствии с данными других авторов, показавших отсутствие ассоциации гена MTHFR С продолжительностью жизни (Хавиисон И др.. 2002, Stessman et at. 2005). Вместе с тем. наши данные не подтверждают почти двукратное уменьшение частоты гомозиготы (Т/Т) у лиц старше 65 лет (8%), по сравнению с индивидуумами среднего возраста (Todesco el ai.. 1999). Нами так же не отмечено возрастного снижения частоты Т/Т гомозигот у мужчин (Heijmans el и!.. 1999). Не исключено, что. эти различия связаны с попу ля ни о н н ым и ^робенвостями,
Гакже бы Л о установлено изменение частот А2/Д2 генотипа по гену GPIIIa (ассоциированного с тромбозами) к ряду: подгруппа 1 - подгруппа 2 — подгруппа 3 (5.4%. 0% и 3.8%. ссответстенно; р- 0.035. )f=4,45, df=l между подгруппами 1 и 2) (см. рис.5). Складывается впечатление, что отот полиморфизм Является фактором риска сердечно-сосудистой патологии только до 90 лет. Данное предположение нуждается с дополнительной проверке.
Отмечено увеличение частоты «функционально активного» генотипа по гену GSTMl (GSTXII-) в подгруппе 3 по сравнению с подгруппой 1 (см, рис.5). На основании полученных данных можно предположить, что, как и в случае генов сердечно-сосудистой системы, «нулевой» генотип гена GSTMI (О/О) оказывает протективный эффект только в определенном возрастном диапазоне.
Любопытно отМЙТитЬ» что в подгруппах лиц старше 69 лет отмечается прогрессивное уменьшение доли N аллели NAT2 гена и соответственно нарастание числа медленных аллелей (см. рис.5).
2. Сравнительный ¡шали i частот генотипов и аллелей генов у лиц старше 69 дет с некоторыми Иультлфакторными заболеваниями
Проведен анализ частот генотипов и аллелей исследованных генов у лиц старше 69 лет с ишемической болезнью сердца (ИБС), инсулин независимым сахарным диабетом (ИИСД), острым нарушением мозгового кровообращения (ОНМК) и катарактой в анамнезе. Группу сравнения составили индивидуумы того же возраста и пола, но без соответствующей патологии. В качестве дополнительной, базовой группы сравнения, использована группа новорожденных.
Согласно полученным данным, частота гетерозиготного ШЩ генотипа но гену АСЕ у лип старше 69 лет с ИБС несколько выше, чем без ИБС (61,1%, 46.3%. соответственно) и достоверно выше, чем у новорожденных (^-3,84. p=€U')5, df=l) ( рис.6). Частота ¡JD генотипа по гену АСЕ у лиц старше 69 лет с ИНСД несколько выше, чем в группе сравнения (68.8%. 47.7%, соответственно) и достоверно выше, чем I в группе новорожденных (x,7=3.94, р=0,047, df=!), У лиц старше 69 лет с катарактой частота I/O генотипа по гену АСЕ также была выше, чем в группе сравнения (64% и 47.1%. соответственно), и достоверно выше, чем у новорожденных (х=3.85, р=0.05. df=l). У лип старше 69 лет с ОНМК частота генотипа L'D по гену АСЕ была выше, по сравнению с таковой н группе сравнения (64.3%, 46.6%, I соответственно), и достоверно выше, чем у новорожденных (¡г=4.32. р=0.038. df=l). Следует отметить. | что частота D/D генотипа по гену АСЕ. ассоциированного по некоторым данным с развитием
гипертонии (Шварц. 149?; \1omgomery ¿1 а1,, 1998]. у лиц старше 69 лет с ОНМК оказалась вдвое ниже, чем а ¡ругте сравнения (14.3%, 29.3%, соответственно), и так же достоверно ниже, чем у новорожденных (^ =3.85, р—0.05, ¿1=1). Выявленное увеличение частоты гетерозиготного (1/Э) генотипа по гену АСЕ в группах лиц старше 69 ле г с различными заболеваниями по сравнению с таковыми без соответствующих нозологии, по-видимому, можно, объясняется тем, что. носители данного генотипа обладают некоторыми преимуществами и. несмотря на наличие заболевания, живут дольше.
42% ' I ЗЖ . ■ --
glwfcTfrërÎ
Рас.6. РаспрелепЩй частот генотипов но ■а 7. у новорожденных, лни сролнсго во-jpacia и .иш старше {¡9 лет (с ИКС п бет ИБС)
новорожденные N=102
ллца среднего пица старше CS пиц^ -ГТЭОше 66 аоараегз. N=î19 лет с ИБС N=36 лет ИБС
N=ias
□ 1/1 ЖI/D ПО/С
Частота 0/0 генотипа по гену GSTM! у лип старше 69 лет с ИБС несколько превышала таковую в группе сравнения (55.6%. 39.8%, соответственно), и достоверно отличалась от таковой у новорожденных (;г=4.22. р=0.039. df-l). Сравнительный анализ частот генотипов по гену КАШ между лицами старше 69 лег с ИБС и «Icv ИБС аыявкт. повышение частоты N/S генотипа у лиц с ИБС {63%, 38.8%, соответственно. -^=4.83. p=().l)28. df=l), Установлено достоверное отличие частоты данного геногнпа между группами лип старше 69 .ici с ИБС по сравнению с новорожденными (63%. 31,6%, соответственно. х'=8.78. р=0.003. di=l). Более того, распределение частот генотипов по данному гену между группами лип старше 69 лет с ИБС и без ИБС (у;=5.9э. р^0.051. df=2) достоверно различалось.
Таким образом, в результате проведенного анализа установлено, что ИБС у лиц старше 69 лет в значительной степени ассоциирован с определенными генотипами по генам системы летоксикаиии. в частности с «нулевым» генотипом по гену GSTMJ, и N/S генотипом по гену ,\'ЛТ2. а зак же II) генотипом по гену АСЕ. Не исключено, что некоторые из изученных полиморфизмов (например, «нулевой» генотип по гену GSTMI) протективны в отношении ИБС у лип пожилого возраста.
Выявлены достоверные отличия в распределение частот генотипов по гену GPIIla между подгруппами лиц стг.рше 69 лет с ИПСД и без ИНСД Х~9.57. р'О.ООНЗ. df>2). Частота А2 'А2 гомозигот по гену GPIIla у лиц старше 69 лет с ИНСД достоверно выше, чем в группе сравнения (12.5%, 0.8%. соответственно. ¡£"=9,49. p=Q.0021. df=l : GR=!8. Cl: 2,86-1 13,2!) и значительно превысила таковую в группе новорожденных (x'-7.2i, p=0.(J(J71, df=I ) (см. рис. 7).
ксворожуБнныв лица среднего лица старше Ê9 лица ста Due
N=100 возраста N=<13 летсИНСД. гет5езИНСД.
______N=16 N=127
ПА1/А1 m'ÀvÀl ПА2/А2
Рис.7 Распределение частот генотипов GPIIla (А1/А2) гена >' Новорожденных, лиц среднего возраста и л ни старше лет сИНСД и бед ИНСД
Сравнительный анализ частот генотипов по гену ангиотензиногена ЛИГ выявил различия между лицами старше 69 лет с ОНМК и без ОНМК. Неожиданным, однако, оказался тот факт, что генотип ТТ. который рассматривается как протеггявный в отношении развития сердечно-сосудистых заболеваний, был в 2 раза чаше зарегистрирован у лиц старше 69 дет с ОНМК. чем без ОНМК" (42.9%. 22.4%, соответственно. у.;=4.86. р=0лШ, Л=Г|.
Отмечено некоторое различие в распредетение частот генотипов по гену NOS3 между подгруппами лиц старше 69 лет с катарактой и без таковой (х~=5 68, р=0 058 df=2), а также то, что частота 4/4 генотипа по гену NOS3 у диц старше 69 лет с катарактой была существенно выше, чем в группе сравнения (8%, 1 7%, соответственно), а частота гетерозигот 4/5 вдвое ниже (16% и 34 5%, соответственно)
Сравнительный анализ частот генотипов по гену PAI-1 также выявил статистически значимые различия между лицами старше 69 лет с катарактой и без таковой Установлено, что частота 4G/5G генотипа достоверно ниже у лиц старше 69 лет с катарактой по сравнению с контрольной группой (20 8%, 45 4%, соответственно, ¿=А 96 р=0 026, df=l) Выявлены достоверные отличия в частоте 4G/5G генотипа у лиц старше 69 лет с катарактой по сравнению с группой новорожденных (х"=5 36, р=0 02 dfH) Можно предполагать, что в возрасте старше 69 тет генотип 4G/5G гена РАН определяет «устойчивость» к катаракте Данный полиморфизм можно рекомендовать для оценки предрасположенности к этому заболеванию
3. Комплексный анализ генов сердечно-сосудистой системы у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет
Как известно генная сеть заболеваний сердечно-сосудистой системы как и системы детоксикации включает значительное число генов при этом вклад отдельных генов в конечный фенотипический эффект может быть либо независимым тибо может проявляться только при наличии определенных аллельных комбиьаций Нами проведен анализ сочетания изученных генов в разтичных возрастных группах
Статистически значимые различия были установлены для частоты сочетанного генотипа GPIIIa (Ai/Al) + AGTR1 (А/-) между группами новорожденных и лицами среднего возраста С57 1% 72 6%, соответственно хг=5 52 р=0 019 df=l) Выявленные различия по-видимому указывают на то что сочетание этих генотипов могут способствовать повышению выживаемости в детском возрасте но не оказывает заметного влияния на продолжительность жизни тиц среднего и пожилого возраста
Также установлены достоверные отличия частот генотипов GPIIIa (Al/Al) -1- GSTM1 (0/0) между новорожденными и лицами среднего возраста (17 2% 32 1% соответственно -¿=626 р=0 012 df=l) и между новорожденными и лицами старше 69 лет (17 2%, 28 1% соответственно 89 р=0 049 df=l) Полученные данные позволяют предполагать более высокую жизнеспособность у лиц с данным генотипом в раннем и в среднем возрасте
Дчя объективизации данных, касающихся оценки компчексного влияния генных сочетаний на предрасположенность к мультифакториальным заболеваниям нами апробирована система «балльного» подсчета данных Условные баллы по генотипам разных систем каждого индивидуума суммировали Для сравнения количества баллов с возрастом ити наличием заболеваний применили метод ранговой корреляции по Кендаллу (т) При этом допускалось, что количество баллов возрастные группы и наличие или отсутствие заболевания у лиц старше 69 лет являются качественными порядковыми признаками и удовлетворяют условиям применения данного метода (Реброва, 2003)
Рассмотрены комбинации генов 2х систем «Давление» (гены ренин-ангиотензинового каскада + NOS3), «Детоксо» (гены II фазы системы детоксикации,) При анализе «суммы баллов» для системы «Давление» генотипам 'повышающим давтение" присваивали значение - 0 генотипам 'со средним давлением» - 1, генотипам по понижающим давление' - 2, для системы «Детоксо» гомозиготам hAT2 с "нормальной детоксикацией" присваивали значение 2 гетерозиготам - 1, гомозиготам со ' сниженной детоксикацией' - 0, для GST- генов 0/0 генотипу присваивали значение 2, а n/n - 0 (см табч 3) 3.1. Анализ взаимодействия генов сердечно-сосудистой системы у новорожденных (Н), лиц среднего возраста (П) и у лиц старше 69 лет (С)
Системный корреляционный анализ позволил выявить ряд неслучайных ассоциаций между «суммарным баллом» системы и возрастными группами (см табт 4)
Для системы «Давление» максимальная «сумма баллов» соответствовала наибольшему «набору аллелей и генотипов» снижающих давление Установлено, что частота «суммы баллов» 7 и более в группе лиц среднего возраста составила 5 5%, тогда как в группе лиц старше 69 лет - 28 9% (¿=13 6 р=0 0002 df=l) (см табл 5) Для системы «Детоксо» установлено увеличение частоты «суммы баллов» 3 и более в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет (20 4%, 35 9% 38 4%, соответственно) Достоверные различия выявлены между группами новорожденных и лиц среднего
возраста (х df=l)
=5 50, р=0 019 df=l) между новорожденными и лицами старше 69 лет {¿=1 22, р=0 0072
«Давление» «Детоксо»
АСЕ NAT2
Т/1 2 N/N 2
I'D 1 N/S 1
D/D 0 S/S 0
AGT GSTT1
м/м 2 0/0 2
т/м 1 N/N 0
тт 0 GSTM1
AGTR1 0/0 2
А/А 2 N/N 0
А/С 0
С/С 0
NOS3
4/4 0
4/5 0
5/5 п
N Kendall Таи Z p-level
«Давление» & код (Н, С) 261 0,159532 3,840222 0 000123
«Детоксо» & кол (Н, П, С) 327 0 124643 3,362906 0,000771
«Давление» & код М (П, С) 85 0,262733 3,560007 0.00037
«Давление» & код Ж (П, С) 176 0 129267 2,54703 0,01086
«Детоксо» & код М (Н, П,С) 126 0,245132 4 070798 0,00005
Анализ «суммы баллов» позволил установить наличие определенных тендерных различий в распределении алтетей Так значимая корреляция между «суммой балов» и возрастом (дискретность возрастных групп) была выявлена только для лиц мужского пола В частности, для системы «Давление», у мужчин частота «суммы баллов» 7 и более в группе лиц среднего возраста составила 3 5%, тогда как в группе лиц старше 69 лет - 25% (х2=7 85 р=0 0051, df=l) Для системы «Детоксо» у мужчин выявлено увеличение частоты «суммы баллов» 3 и более в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет (19%, 41%, 60 7% соответственно, х2=4 41 р=0 036, с1Г=1 - между новорожденными и лицами среднего возраста х2=Ю95 р=0 0009, между новорожденными и лицами старше 69 лет) (см табл 5)
Таблица 5 Комплексный ана-шз 4х генов системы «Давления» и системы детоксикации у новорожденных
Система Генотип Частоты генотипов Х2, P.df
Новорож-е Лица среднего возраста Лица старше 69 лет
«Давление» сумма баллов 7 и более - 5 5% 28 9% /2=13 6 р=0 0002, df=l
«Детоксо» сумма баллов 3 и более 20 4% 36% 38 4% Х2=5 50, р=0 019, df~l между ri и П х2=7 22, р=0 0072, df= 1 между Н и С
сумма баллов 3 и более (мужчины) 19% 41% 60 7% 3(2=4 41, р=0 036, df=l между Н и П х2=10 95, р=0 0009, df=l между Н и С
Проведенный анализ позволил подтвердить известные факты и выявить некоторые новые закономерности
1 Для системы «Давление» частота «суммы баллов» 7 и более (снижающая давление) достоверно чаще встречается в группе лиц старше 69 лет по сравнению с группой лиц среднего возраста (х2=13 6, р=0 0002, df=l) Это соответствует представлениям о том, что генотипы обеспечивающие «суммарное» повышение давления ассоциированы с сердечно-сосудистыми заболеваниями и с возрастом элиминируются (Шварц, 1997, Montgomery et al, 1998) Такая закономерность была в большой степени характерна для лиц мужского пола
2 Для системы «Детоксо» выявлено статистически достоверное увеличение частоты «суммы баллов» 3 и более в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лег (20 4%, 35 9%, 38 4% соответственно, £2=5 50, р=0 019, df=l - между новорожденными и лицами среднего возраста, %2=7 22 р=0 0072, df=l между новорожденными и лицами старше 69 лет) Не исключено, что такое сочетание генотипов 3-х генов системы детоксикаиии предрасполагает к долгожительству Также как и в случае ранее рассмотренной системой «Давление» закономерность, выявленная для генов системы детоксикации в большой степени характерна для лиц мужского пола
3 Анализ «суммы баллов» систем «Давление» и «Детоксо» позволяет проводить комплексный подход в оценке факторов долголетия, особенно для мужчин
3.2. Анализ взаимодействия генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации у лиц старше 69 лет с хроническими заболеваниями в анамнезе
Для генов, ассоциация полиморфизма которых с рядом заболеваний была показана в разделе 2, мы провели комплексный анализ взаимодействия
Ишемическая болезнь сердца (ИБС) Сравнительный анализ частот генотипов между тицами старше 69 лет с ИБС по сравнению с таковыми без ИБС выявил статистически значимое увеличение частот генотипов GSTMl (О'О) - N4T2 (N/S) (33 3%, 11 8%, соответственно %г=6 77. р=0 0093 df=l, OR=3 75, CI 1 39-10 15) и MTHFR (С/-) + NAT2 (N/S) (33 3%, 10 6%, соответственно, -¿=1 86 р=0 0051, df=l, OR=4 22 Cí 1 54-11 56), и не выявил различий для генотипа MTHFR (С/-) - GSTM1 (0/0) (51 9%, 35 3% соответственно) по сравнению с остальными генотипами При комплексном анализе сразу 3-х генов установлено что частота генотипа GSTM1 (0/0) + MTHFR (С/-) - NAT2 (N/S) достоверно отличалась у лиц старше 69 лет с ИБС по сравнению с таковыми без ИБС (33 3%, 10 6% соответственно х2=7 86 р=0 0051 OR=4 22, С1 '54-11 56 по сравнению с остальными генотипами) Таким образом, сочетание у одного индивидуума определенных аллельных вариантов трех разных генов GSTM1 (0/0) MTHFR (С/) NAT2 (N/S) можно рассматривать как фактор риска развития ишемической болезни сердца после 69 лег
Инсушннезависимый сахарный диабет (ИНСД) Анализ частот генотипов GPIIIa (А2/А2) NOS3 (4/4 или 5/5) у лиц старше 69 лет с ИНСД и без ИНСД выявил статистически значимые различия (12 5%, 0 8% соответственно х2=9 49 р=0 0021 df=l, OR=18 0 CI 2 86-113 21, по сравнению с остальными генотипами) Основной вклад в отмеченные различия «вносит» полиморфизм гена GPIlla Для сочетаний генотипов NOS3 (4/4 или 5/5) - NAT2 (N/N) GPIIIa (MIM) + NAT2 (N/N) и NOS3 (4/4 или 5/5) - GPIIIa (А2/А2) NAT2 (N/N) статистически значимых различий у лиц старше 69 лет с ИНСД и без ИНСД выявлено не было На основании полученных данных можно сделать заключение что вклад всех трех генов в риск развития ИНСД независим
Корреляционный анализ выявил неслучайную ассоциацию между «суммой баллов» генов системы «Давление» и наличием ИНСД (z=2 275, р=0 023) Так, частота носительства 6 и 7 баллов генов системы «Давление» в группе лиц старше 69 лет с ИНСД составила 68 7% тогда как в группе лиц старше 69 лет без ИНСД - 40% (%2=5 1, р=0 0239, df=l) Полученные результаты позволяют предполагать что определенные аллели и генотипы системы «Давление» оказывают аддитивный эффект на риск развития ИНСД Применение «бального» метода позволяет более объективно интерпретировать результаты исследования генетического полиморфизма по прогнозу риска ИНСД Катаракта Анализ частот генотипов между выборками лиц старше 69 лет с катарактой по сравнению с таковыми без катаракты выявил статистически значимые различия для генотипа AGTRI (А/С) ■*■ NOS3 (4/4 или 5/5) (52 0% 22 7%, соответственно, х2=8 85, р=0 0029 df=l, OR=3 69, CI 1 56-8 73,) для генотипа AGTR1 (А/С) + РАН (4G/4G или 5G/5G) (45 8%, 23 5%, соответственно, %2=5 01, р=0 0252, df=l, OR=2 75, CI 1 13-6 67,), дтя генотипаNOS3 (4/4 или 5/5) + РАН (4G/4G или 5G/5G) (62 5%, 37 0%, соответственно, х2=5 37, df=l, р=0 0205, OR=2 84, С1 1 17-6 87) по сравнению с остальными генотипами Установлено совместное действие полиморфизма трех генов в риск развития катаракты Так, генотип AGTRI (А/С) т РАН (4G/4G или 5G/5G) + NOS3 (4/4 или 5/5) достоверно чаще встречался у лиц старше 69 лет с катарактой по сравнению с таковыми без катаракты (417%, 14 3%, соответственно, х2=9 78, р=0 0018, df=l, OR=4 29, CI 1 72-10 67, по сравнению с остальными генотипами) Полученные данные позволяют предположить аддитивный эффект полиморфизма генов AGTR1, РАН и NOS3 в развитие катаракты и рекомендовать их тестирование для выявления предрасположенности к этому заболеванию
Таким образом, полученные результаты подтверждают предположение о том, что с возрастом ряда генотипов и аллелей изученных генов подвергается элиминация Наличие функционально неблагоприятных аллелей таких генов счедует учитывать при разработке индивидуальных программ антистарения и профилактики заболеваний
ВЫВОДЫ
1 Распределение частот генотипов по единичным генам (NAT2 и GSTMI), их аллеяьным сочетаниям (GPIIIa (А1/А1) + AGTR1 (А/-) и GPUla (А1/А1) + GSTM1 (0/0)) а также частоты «суммы баллоЕ» >7 для системы «Давление» и «суммы баллов» > 3 для системы «Детоксо» достоверно отличаются между новорожденными, лицами среднего и старшего (после 69 лет) возраста,
2 Частоты А2 аллели GPIIIa гена и сочетанного генотипа GSTMI (+/'- и/или +/+) GSTTI (+/+ и/или -1-/-) у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 с возрастом уменьшаются,
3 Частота генотипов I/I (ген АСЕ) и А2/А2 (ген GPIIIa) у чиц 75-89 лет достоверно ниже по сравнению с лицами 69-74 лет, тогда как частота генотипа С/С (ген AGT) у лиц старше 90 лет достоверно возрастает по сравнению с таковой в группе более молодых индивидуумов,
4 В группе лиц старше 69 лет генотип GSTM1 (0/0)-г MTHFR (С/-) ~ NAT2 (N/S) ассоциирован с ишемической болезнью сердпа (ИБС), генотип GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с инсулиннезависимым сахарным диабетом (ИНСД) хенотип AGT (Т/Т) - с острой недостаточностью мозгового кровообращения (ОНМК), генотип AGTR1 (А/С) + PAI1 (4G/4G или 5G/5G) + A'OSi (4/4 ичи 5/5) - с катарактой, накопление «суммы баллов» >7 системы «Давление» характерно для лиц старше 69 лет с ИНСД
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Глотов О.С, Гтотов А С, Тарасенко О А Иващенко Т Э Баранов В С Исследование функционально-значимого полиморфизма АСЕ, AGTR1 ENOS, MTHFR MTRR и АРОЕ генов в популяции Северо-Западного региона России//Экологическая генетика 2004 В 3 Стр 32-35
2 Глотов А С , Глотов О С Москаленко М В Рогозкин В А , Иващенко Т Э , Баранов В С Анализ полиморфизма генов ренин-ангиотензиновой системы в популяции Северо-западного региона России, у атлетов и у долгожителей // Экологическая генетика 2004 В 4 Стр 40-43
3 Ковлен Д В Пономаренко Г Н Тишаков А Ю Глотов О С., Москаленко М В Демин Г С , Братова Н И, Иващенко Т Э Обрезан А Г Роль генных сетей в реализации лечебных эффектов климатотерапии у больных с хронической сердечной недостаточностью // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры - 2006 - 3 - Стр 5-9
4 Гтотов О.С Баранов В С Генетический полиморфизм, мучьтифакториальные болезни и долголетие // Мед Генетика -2007-Т 6 -№4(58) - С 17-30
5 Глотов О С , Потулова С В , Вахарловский В Г, Беспалова О Н , Иващенко Т Э , Баранов В С Анализ «возрастных» особенностей полиморфизма гена инсулиноподобного фактора роста - IGF-1 // Мед Генетика - 2007 - Т 6 - №4 (58) - С 52-55
6 Патентная заявка №2005131568 Глотов О.С., Глотов А С , Демин Г С , Баранов В С , Иващенко Т Э Способ диагностики сердечно-сосудистых заболеваний и диагностический набор для его осуществления
7 Glotov O.S., Vakharlovsky V G, Glotov A S , Ivashchenko T E, Shaposhnikov A M, Baranov V S Analysis of ACE, eNOS and MTHFR genes polymorphisms m the elderly people from the north-west region of Russia // European Journal of Human genetics - European Congress of Human Genetics Conference 2003 Birmingham, England May 3-6, 2003 P 254
8 Glotov O.S , Glotov A S , Tarasenko О A , Ivaschenko T E , Baranov V S Analysis of ACE, AT1R, eNOS MTHFR, MTRR and ApoE genes polymorphisms m the population of North-West of Russia // European Journal of Human genetics - European Congress of Human Genetics Conference 2004, Munich, Germany June 12 - 15,2004 P 307
9 O.S. Glotov, A S Glotov, M V Moskalenko.V A Rogozkm, T E Ivashchenko, V S Baranov Analysis of ACE, AGT AGTR1, ENOS MTHFR genes polymorphisms in the eldeily people, athletes and population of North-West region of Russia// Clin Chem and Lab Med, 2004 V42 N8 A47
10 O.S. Glotov, N Y Shved, G S Demm, V G Vakharlovsky, T E Ivashchenko, V S Baranov Analysis of GSTMI and GSTTI genes polymorphisms m newborn, middle age and in elderly people from the Northwest region of Russia // Eur J Hum Genetics, 2005 VI3 P 1242
11 Glotov O.S , Baranov V S Genetic polymorphisms of detoxyfication genes as basic predictive markers of agmg V Anti-Aging Medicine World Congress 2006, Pans March 23 -25
12 Baranov VS, Ivashchenko ТЕ, Glotov O.S Genetic aspects of anti-ageing // II International conference «Medicine of longevity and quality of life», 2006 Moscow April 21-22
13 Glotov O.S , Glotov A S , Demm G S , Moskalenko M V , Shved N Y Aseev M V Potulova S , Vakharlovsky V G , Ivashchenko T E , Baranov V S Genetic polymorphisms as basic perdictive markers of aging//European Journal of Human Genetics, 2006 V 14 P 337
14 Глотов O.C Анализ I/D полиморфизма гена ангиотензин-конвертирующего фермента у лиц пожилого возраста // Пятая Всероссийская медико-биологическая конференция мотодых исследователей 21 апреля 2002 г Стр51-52
15 Глотов О.С., Вахарловский В Г, Иващенко Т Э , Шапошников А М , Баранов В С Анализ полиморфизма генов АСЕ, ENOS и MTHFR у пожичых мужчин и женщин Северо-Западного региона России // Генетика в XXI веке современное состояние и перспективы III съезд ВОГиС 6-12 июня 200^ г Москва Т 2 Стр 126
16 Глогов О.С , Глотов А С , Тарасенко О А , Рогозкин В А , Иващенко Т Э, Баранов В С Анализ I/D полиморфизма гена ангиотензин-конверирующего фермента у лиц пожилого возраста, спортсменов и больных ИБС // Генетика в XXI веке современное состояние и перспективы III съезд ВОГиС 6-12 июня 2004 г Москва Т 2 Стр 62
17 Гтотов АС Глотов ОС, Москаленко MB Асеев MB, Иващенко ТЭ Баранов ВС Генетический паспорт // Первая международная научно-практическая конференция МЕДБИОТЕК-2005 Биологические и медицинские технологии от научных результатов к иннвационным разработкам 3-4 марта 2005г Президиум РАН Москва Стр 71-73
18 Гтотов О.С , Глотов А С Иващенко Т Э Баранов В С Новые генетические подходы для предупреждения частых болезней и продления активного долголетия человека // Всероссийская конференция «Перспективы фундаментальной геронтологии Санкт-Петербург 25-26 ноября 2006 Стр 30-31
19 Глотов О. С Глотов АС Баранов ВС Генетический полиморфизм, мультифакториальные болезни и долголетие И Международный конгресс «Социальная адаптация поддержка и здоровье пожилых людей в современном обществе», 21-24 марта 2007 Санкт-Петербург - Стр 58-59
20 Глотов О С , Глотов А С , Вахарловский В Г Москахенко М В , Демин Г С Швед Н Ю . Асеев М В, Иващенко Т Э, Баранов В С Новые генетические подходы предупреждения частых болезней и продления активного долголетия человека на основе изучения полиморфизма генов сердечнососудистой системы и системы детоксикации // III Международная anti-agemg конференция «Медицина долголетия и качества жизни» 20-21 апреля 2007 Москва - Стр 61
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Глотов, Олег Сергеевич
Оглавление
Список сокращений
Введение
Научная новизна работы
Практическая значимость
Основные положения, выносимые на защиту
Глава I 1. Обзор литературы
1.1. Определение генетического полиморфизма. 17 Значение генетического полиморфизма в современной медицинской генетике.
1.2. Мультифакториальные болезни и факторы их 18 развития
1.2.1. Генетические факторы
1.2.2. Факторы внешней среды
1.3. Генетическое тестирование мультифакториальных 24 заболеваний
1.3.1. .Основные задачи предиктивной медицины
1.3.2. Сердечно-сосудистые заболевания и гены 27 предрасположенности
1.3.3. Онкологические заболевания и гены 31 предрасположенности к онкологическим заболеваниям
1.4. Старение и долгожительство
1.4.1. История изучения старения и долгожительства
1.4.2. Проблема старения на современном этапе
1.4.3. Факторы и причины старения 38 1.4.3.1 Факторы, определяющие продолжительность 39 жизни
1.4.3,2. Основные теории старения и долгожительства
1.4.4. Гены, ассоциированные с долгожительством
1.4.4.1. Гены сердечно-сосудистой системы
1.4.4.1.1. Гены метаболизма липидов
1.4.4.1.2. Гены ренин-ангиотензиновой системы
1.4.4.1.3. Гены, контролирующие обмен оксида азота
1.4.4.1.4. Гены, регулирующие уровень гомоцистеина 59 в крови
1.4.4.1.5. Гены фибринолиза
1.4.4.2. Гены метаболизма (внешней среды)
1.4.4.2.1.1- я фаза детоксикации
1.4.4.2.2.2-я фаза детоксикации
1.4.4.3. Гены антиоксидантной защиты и ответа на 68 стресс
1.4.4.4. Гены митохондриальной ДНК
1.4.4.5. Гены воспаления и иммунного ответа
Глава II 2. Материалы и методы
2.1. Обследуемые группы
2.2. Использованные материалы, реактивы, и 75 оборудование
2.3. Выделение ДНК из лейкоцитов периферической 76 крови
2.4. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.4.1. Амплификация фрагментов ДНК для анализа 77 методом ПААГ
2.4.2. Амплификация фрагментов ДНК для анализа 79 методом гибридизации на олигонуклеотидном биочипе
2.5. Электрофорез в нативном ПААГ и визуализация 80 результатов
2.7. Гибридизацию меченого продукта на микрочипе 82 Регистрация изображения и его обработка
3.1. Анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой 85 системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, РАН) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет
3.1.1. Анализ соответствия распределения генотипов 86 закону Харди-Вайнберга
3.1.2. Сравнительный анализ частот генотипов и 87 аллелей генов (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, PAI1, GSTM1, GSTT1, NAT2) у новорожденных, лиц среднего возраста и у лиц старше 69 лет
3.1.3. Сравнительный анализ частот генотипов и 102 аллелей генов (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН, GSTM1, GSTT1, NAT2) в возрастных подгруппах лиц старше 69 лет.
3.2. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей 110 генов сердечно-сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, PAI1) и генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у лиц старше 69 лет с некоторыми мультифакторными заболеваниями
2.6. Гидролиз ПЦР-фрагментов
2.9. Статистические методы
Глава III 3. Результаты и обсуждение
3.3. Корреляционный анализ генетических и 126 возрастных показателей
3.3.1. Корреляционный анализ между генами 127 сердечно-сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, РАН), генами системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) и возрастом (для лиц старше 69 лет)
3.3.2. Корреляционный анализ взаимодействий между 128 генами сердечно-сосудистой системы (АСЕ, AGT,
AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, PAI1) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2)
3.4. Комплексный анализ генов сердечно-сосудистой 130 системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, РАН) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у новорожденных, лиц среднего возраста (популяция) и у лиц старше 69 лет
3.4.1. Анализ взаимодействия генов сердечно- 132 сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS33, MTHFR, GPIIIa, PAI1) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у новорожденных (Н), лиц среднего возраста (П) и у лиц старше 69 лет (С)
3.4.2. Анализ взаимодействия генов сердечно- 137 сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTRI, NOS33, MTHFR, GPIIIa, РАН) и системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) у лиц старше 69 лет с хроническими заболеваниями в анамнезе
Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации в различных возрастных группах Санкт-Петербурга"
Итогом Международной программы «Геном человека» явилась идентификация практически всех генов, в том числе и тех, мутации которых приводят к наследственным болезням либо предрасполагают к мультифакториальным заболеваниям. Появилась реальная возможность не только проводить точную молекулярную диагностику, но и с определенной вероятностью оценить предрасположенность человека к тому или иному заболеванию (Шварц, 1997; Nebert, 1997; Баранов и др., 2000).
Хорошо известно, что ранняя диагностика и своевременная профилактика различных заболеваний является актуальной проблемой современной медицины. Как правило, пациент обращается к врачу, когда болезнь уже имеет клинические проявления и не редко серьезные осложнения. При этом основная причина патологического процесса зачастую остается невыясненной (Баранов и др., 2000). В этом случае самое интенсивное лечение требует постоянного применения лекарственных препаратов и может лишь временно улучшить состояние пациента
Поиск генетических маркеров, отвечающих за наследственную предрасположенность к мультифакториальным заболеваниям, является главной целью современной предиктивной медицины. На практике такая цель может быть достигнута путем молекулярного тестирования генов, получивших название "генов предрасположенности" «suceptibility genes» (Collins, 1999). Последние можно определить как гены, наследственные варианты (полиморфизм) которых совместимы с жизнью, но в сочетании с неблагоприятными внешними факторами могут быть причиной различных патологических состояний и заболеваний, в том числе и таких частых как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, остеопороз, сахарный диабет, бронхиальная астма, и прочих (Баранов и др., 2000).
Выяснение составляющих генной сети каждого мультифакториального заболевания, идентификация в ней ключевых ("центральных") генов и генов-модификаторов (Колчанов и др., 2003), анализ ассоциации их полиморфизма с конкретным заболеванием, разработка на этой основе комплекса профилактических мероприятий для каждого конкретного пациента составляют стратегическую основу нового, быстро развивающего направления - предиктивной (предсказательной) медицины. Для более точной оценки роли генетического полиморфизма в этиологии заболевания особенно перспективным представляется изучение полиморфизма генов, контролирующих наиболее важные, биохимически взаимосвязанные процессы метаболизма. Особый интерес в этой связи представляет изучение полиморфизма генов сердечно-сосудистой системы и системы детоксикации ксенобиотиков. Результаты исследований показали, что полиморфизм генов соответствующих систем существенно меняет их активность, и может быть основной причиной биохимических и функциональных нарушений, приводящих к серьезным острым и хроническим заболеваниям (Пузырев, 2003; Rupert et al, 2003; Zhu et al, 2003; Naber et al, 2004a,b). Поэтому ранняя диагностика наследственной предрасположенности к этим заболеваниям имеет решающее значение для предиктивной медицины, как один из реальных путей в борьбе за активное долголетие, против преждевременного старения (Schachter et al, 1994; Varcasia et al., 2001; Анисимов, 2003).
Число работ, посвященных изучению особенностей частот "функционально-значимого" полиморфизма в различных популяциях стремительно растет. Подробно изучается полиморфизм генов, вовлеченных в этиологию и патогенез многих тяжелых хронических заболеваний, таких как сердечно-сосудистые, нейро-дегенеративные и онкологические (Baranov et al., 1996; Шварц, 1997; Пузырев, 2003).
Важная информация о вкладе того или иного генетического полиморфизма в развитие мультифакториальных заболеваний, в процессы долголетия и старения может быть получена путем сравнения частот аллелей в разных возрастных группах, начиная от рождения и до глубокой старости. В доступной литературе такие исследования нами не обнаружены. Исключение составляют специальные исследования преимущественно последних лет, посвященные сравнению аллельных частот некоторых генов у лиц среднего возраста и у столетних стариков с целью поиска генетического полиморфизма, положительно ассоциированного с долгожительством (Анисимов, 2003).
Цель настоящей работы - анализ полиморфизма генов сердечнососудистой системы и системы детоксикации в разных возрастных группах (новорожденные, лица среднего возраста и старше 69 лет)
Достижение поставленной цели предусматривает решение следующих задач:
1. Исследовать полиморфизм генов сердечно-сосудистой системы {АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, PAI1)-,
2. Исследовать полиморфизм генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2)\
3. Провести сравнительный анализ полиморфизма генов сердечнососудистой системы и генов системы детоксикации в разных возрастных группах;
4. Проанализировать ассоциацию полиморфизма изученных генов с некоторыми частыми возрастными заболеваниями.
Научная новизна работы:
S Впервые изучены особенности аллельного полиморфизма семи генов сердечно-сосудистой системы {АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН) и трех генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) в трех возрастных группах населения Северо-Западного региона РФ.
S Проанализированы ассоциации полиморфных вариантов изученных генов с пятью различными заболеваниями у лиц старше 69 лет: ишемическая болезнь сердца (ИБС), гипертоническая болезнь (ГБ), острое нарушение мозгового кровообращения (ОНМК), инсулиннезависимый сахарный диабет (ИНСД), катаракта.
S Впервые для трех возрастных групп показаны отличия в распределении частот генотипов по отдельным генам (NAT2 и GSTM1) и их сочетаниям (GPIIIa А1/А1 + AGTR1 А/- и GPIIIa А1/А1 + GSTM1 0/0), установлены различия в распределении частот сочетанных генотипов четырех генов системы «Давление», и трех генов системы детоксикации.
S Впервые показано, что у лиц мужского пола частоты А2 аллели гена GPIIIa и сочетанного генотипа GSTM1 (+) GSTT1 (+) уменьшаются в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет.
S Впервые выявлены возрастные «рубежи» изменения частот генотипов: 75 лет для генотипа А2/А2 (GPIIIa), 90 лет - для генотипа С/С (AGT).
S Для лиц старше 69 лет впервые установлена ассоциация сочетанных генотипов GSTM1 (0/0)+ MTHFR (С/-) + NAT2 (N/S) с ИБС, GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с ИНСД, AGT (Т/Т) - с ОНМК, AGTR1 (А/С) + PAI1 (4G/4G или 5G/5G)+ NOS3 (4/4 или 5/5) - с катарактой. Для лиц старше 69 лет при комплексном анализе полиморфизма генов, продукты которых регулируют давление, впервые показано, что «неблагоприятные» аллели и генотипы этой системы ассоциированы с ИНСД.
Практическая значимость:
Анализ полиморфных вариантов генов сердечно-сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН) и генов системы детоксикации (GSTM1, GSTT1, NAT2) можно рассматривать как прогностический тест для оценки риска развития ИБС, ГБ, ОНМК, ИНСД и катаракты.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Распределение частот генотипов по отдельным генам (NAT2 и GSTM1), их сочетаниям (GPIIIa А1/А1 + AGTR1 AJ- и GPIIIa А1/А1 + GSTM1 0/0), а также частот сочетанных генотипов 4 генов регулирующих давление, и 3 генов системы детоксикации в трех возрастных группах отличается.
2. Выявлено уменьшение частоты А2 аллели GPIIIa гена и сочетанного генотипа GSTM1 (+) GSTT1 (+) у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет.
3. Установлены возрастные «рубежи» изменения частот генотипов: 75 лет для генотипов АСЕ (I/I) и GPIIIa (А2/А2), 90 лет - для генотипа AGT (С/С).
4. У лиц старше 69 лет выявлена ассоциация генотипов: GSTM1 (0/0)+ MTHFR (С/-) + NAT2 (N/S) с ИБС, GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) -с ИНСД, AGT (Т/Т) - с ОНМК, AGTR1 (А/С) + PAI1 (4G/4G или 5G/5G)+ NOS3 (4/4 или 5/5) - с катарактой. Некоторые сочетанные генотипы по 4-м генам системы «Давление», ассоциированы с ИНСД у лиц старше 69 лет.
5. Выявленные ассоциации полиморфизма изученных генов с долгожительством и мультифакториальными заболеваниями подтверждают предположение о том, что с возрастом происходит элиминация из популяции ряда генотипов и аллелей генов «предрасположенности».
6. Наличие «функционально неблагоприятных» аллелей следует учитывать при разработке индивидуальных программ профилактики заболеваний и «антистарения».
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Глотов, Олег Сергеевич
Выводы
1. Распределение частот генотипов по единичным генам (NAT2 и GSTM1), их аллельным сочетаниям (GPIIIa А1/А1 + AGTR1 А/- и GPIIIa А1/А1 + GSTM1 0/0), а также частоты «суммы баллов» >7 для системы «Давление» и «суммы баллов» > 3 для системы «Детоксо» достоверно отличаются между новорожденными, лицами среднего и старшего (после 69 лет) возраста;
2. Частоты А2 аллели GPIIIa гена и сочетанного генотипа GSTM1 (+/-и/или +/+) GSTT1 (+/+ и/или +/-) у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 с возрастом уменьшаются;
3. Частота генотипов I/I (ген АСЕ) и А2/А2 (ген GPIIIa) у лиц 75-89 лет достоверно ниже по сравнению с лицами 69-74 лет, тогда как частота генотипа С/С (ген AGT) у лиц старше 90 лет достоверно возрастает по сравнению с таковой в группе более молодых индивидуумов;
4. В группе лиц старше 69 лет генотип GSTMI (0/0)+ MTHFR (С/-) + NAT2 (N/S) ассоциирован с ишемической болезнью сердца (ИБС); генотип GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с инсулиннезависимым сахарным диабетом (ИНСД); генотип AGT (Т/Т) - с острой недостаточностью мозгового кровообращения (ОНМК); генотип AGTR1 (А/С) + PAI1 (4G/4G или 5G/5G) + NOS3 (4/4 или 5/5) - с катарактой; накопление «суммы баллов» >7 системы «Давление» характерно для лиц старше 69 лет с ИНСД.
Заключение
В последние годы возрастает число работ, посвященных изучению особенностей частот функционально-значимого полиморфизма разных генов. Как показывает анализ мировой литературы, уже доступны для клинического применения более 300 генетических тестов, в том числе и для многих, наиболее частых мультифакториальных болезней. Идентификация всех генов человека, открытие новых генных сетей существенно увеличивают возможности генетического тестирования наследственной предрасположенности, что позволяет говорить о начале «эры персонифицированной (индивидуальной) медицины», основанной на понимании генетической уникальности каждого человека (Баранов и др., 2000, 2005; Черч, 2006). В недалеком будущем исследование генетических маркеров (наличие ассоциированных аллелей) позволит по-новому взглянуть и на процесс старения.
Тестирование аллельных вариантов генов Фазы 1 и 2 детоксикации позволяет идентифицировать индивидуумов с предрасположенностью к заболеваниям, провоцируемых неблагоприятными экзогенными факторами. Естественно, что выявление лиц группы высокого риска до появления признаков заболевания имеет принципиальное значение для правильного медико-генетического консультирования и своевременной и адекватной упреждающей терапии (Баранов и др., 2000; Сиделева, 2002). Комплексное тестирование генов "внешней среды" позволяет не только идентифицировать индивидуумов с "быстрым" и "медленным" типами метаболизма ксенобиотиков, но и определять индивидуальную чувствительность к различным фармакологическим препаратам (Motulsky, 1999). Более того, именно таким образом можно подобрать индивидуальную дозировку различных лекарств (Кукес, 2004). Тестирование генов, продукты которых играют ключевую роль в метаболических процессах, также имеет большое значение для оценки индивидуальной предрасположенности к различным мультифакториальным болезням. Анализ полиморфизма таких генов (р53, L-MYC, VDR3, CollAl, ER1 и др.) оправдан для оценки индивидуальной чувствительности к остеопорозу, эндометриозу, ВИЧ инфекции, к онкологическим заболеваниям. Аллельный полиморфизм многих других генных локусов обнаруживает ассоциацию с диабетом, атеросклерозом, гипертонией, ишемической болезнью сердца, некоторыми психическими болезнями (DQA1, DQB1, TNFA, АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, АРОЕ, APOCIII, GPIIIa, DRD и др.) (Баранов и др., 2000, Баранов и Хавинсон, 2002).
Таким образом, в настоящее время уже на основе имеющихся данных вполне оправдано тестирование генетических маркеров, отвечающих за наследственную предрасположенность к некоторым мультифакториальным заболеваниям - ведущим причинам сокращения периода активного долголетия. Важно, однако, отметить, что современный уровень наших знаний в области предиктивной медицины делает оправданным применение генетического тестирования только в семьях высокого риска, то есть там, где уже имеется больной с четко установленным мультифакториальным заболеванием, у которого известны особенности полиморфизма генов соответствующей генной сети. Рандоминезированное генетическое тестирование - задача будущей предиктивной медицины. Она может быть решена только при наличии масштабных проспективных исследований, доказывающих полезность соответствующего генетического тестирования для выявления лиц высокого риска и наличия эффективных путей профилактики конкретного мультифакториального заболевания.
Как известно, основными причинами смертности на сегодняшний день являются сердечно-сосудистая патология и онкологические заболевания. Несмотря на большой прогресс в лечении этих заболеваний, разработки ученых, направленные на их профилактику представляются наиболее актуальным и востребованным направлением современной медицины. Концептуальную основу этих разработок составляют исследования генетической предрасположенности.
Оценка вклада наследственного компонента в долгожительство основана на изучении разных метаболических систем и, соответственно, разных групп генов. Существуют различные варианты классификации генов «старения-долгожительства» (Butler et al., 2003).
Как упоминалось ранее (см. 1.4.) представляется целесообразным выделить две основные группы таких генов (Баранов и Баранова, 2007):
1. собственно гены долгожительства и старения ("age regulated genes" (Graham et al, 2004)).
2. гены «предрасположенности», аллельные варианты которых ответственны за возникновение хронических мультифакториальных болезней (Баранов и др., 2000)
Настоящее исследование было посвящено изучение возрастных особенностей аллельных частот генов второй группы - генов сердечнососудистой системы и системы детоксикации.
Стандартные исследования полиморфизма генов в разных возрастных группах обычно включали две группы сравнения: первая -либо группа лиц старше 60 лет (Brattstrom et al, 1999; Anisimov et al, 2001; Хавинсон и др., 2002;; Stessman et al, 2005) либо группа столетних (Bladbjerg et al, 1999; Blanche et al, 2001; Choi et al, 2003; Varcasia et al,
2001) и вторая - контрольная группа (популяция). Контрольная группа обычно включала школьников (6-17 лет) соответствующего региона (Anisimov et al., 2001) или лиц от 8 до 60 (Хавинсон и др., 2002).
Между тем, хорошо известно, что вследствие достаточно высокой перинатальной смертности и смерти детей в возрасте до 2-х лет значительная часть полиморфных аллелей, влияющих на выживаемость, должны подвергаться элиминации именно в раннем постнатальном периоде. Поэтому без анализа «особенностей» генетического полиморфизма у новорожденных спектр распределения функционально-значимых аллелей генов «предрасположенностей» остается явно неполной.
Попытки проанализировать взаимодействие между различными полиморфными вариантами генов «предрасположенностей» и долгожительством пока сравнительно немногочисленны (Хавинсон и др.,
2002). Анализ уже имеющихся литературных данных возрастных особенностей аллельных частот разных генов позволяет отметить следующие основные факты:
S частоты редких аллелей генов APOCIII и LP А достоверно снижаются после 60 лет (Хавинсон и др., 2002).
S снижение частоты генотипа I/I гена АСЕ, достигает достоверных значений после 70 лет (Хавинсон и др., 2002).
S установлена ассоциация с долгожительством определенных аллелей генов ренин-ангиотензиновой системы (REN) и генов Н гаплотипа митохондрий (Tan et al., 2002).
Несмотря на то, что, молекулярно-генетические основы старения и долгожительства активно изучаются, существует мало работ, посвященных комплексному анализу возрастных особенностей полиморфизма генов разных метаболических систем. Остаются открытыми вопросы взаимодействия продуктов генов между собой и с внешней средой. Не до конца понятны этнические и географические особенности ассоциации тех или иных полиморфных аллелей с долгожительством и старением.
Поэтому к вопросу о клинической интерпретации результатов генетического тестирования риска мультифакториальных заболеваний в настоящее время необходимо подходить с большой осторожностью. При этом следует использовать комплексный подход, включающий, наряду с анализом частот соответствующих полиморфных аллелей в популяции -изучение динамики возрастных изменений этих аллелей и анализ их межгенных взаимодействий (Хавинсон и др., 2002).
Для выяснения роли генетических факторов предрасположенности к долгожительству и к ряду частых мультифакториальных заболеваний в данной работе была предпринята попытка сравнительного анализа частот полиморфных вариантов генов сердечно-сосудистой системы (АСЕ, AGT, AGTR1, NOS3, MTHFR, GPIIIa, РАН) и генов системы детоксикации (GSTMI, GSTTI, NAT2). Исследования проводили на образцах ДНК пациентов трех возрастных групп, не являющихся родственниками и проживающих в Северо-западном регионе России (популяционный контроль). У части лиц старшей возрастной группы (> 69) лет на момент обследования или в анамнезе отмечались такие заболевания как ИБС, ГБ, ОНМК, ИНСД, катаракта.
Для оценки комплексного влияния полиморфизма изученных генов нами предложен подход на основе анализа «суммы баллов».
В результате проведенного исследования установлены следующие основные факты возрастных «особенностей» полиморфизма изученных генов:
1. достоверное уменьшение частоты I/I генотипа и I аллели гена ангиотензинпревращающего фермента (АСЕ) у лиц 75-89 лет по сравнению с таковой у лиц 69-74 лет; предполагается, что наличие I аллели является фактором риска диабета 2 типа и ожирения, у индивидуумов старше 75 лет. Неблагоприятный эффект данного полиморфизма нивелируется после 90 лет;
2. достоверное отличие частот генотипов и аллелей гена рецептора ангиотензиногена (.AGTR1) в группе лиц среднего возраста; достоверное отличие частот С и А аллелей между мужчинами и женщинами в группе новорожденных и лиц среднего возраста, достоверное отличие распределения С/- генотипа между мужчинами и женщинами среднего возраста;
3. уменьшение частоты А2 аллели гена активации агрегации тромбоцитов (GPIIIa) у лиц мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет, что позволяет предположить некоторое значение данного полиморфизма в детерминации продолжительности жизни у человека. Складывается впечатление, что этот полиморфизм является фактором риска сердечно-сосудистой патологии только до 90 лет;
4. статистически значимое различие между частотами генотипов глютатион-Б-трансферазы GSTMI в группах новорожденных и лиц среднего возраста; достоверные различия между новорожденными мужского пола и мужчинами среднего и старшего возраста; возможно, лица с генотипом GSTM1 (0/0) мужского пола имеют определенные адаптивные преимущества и как следствие большую продолжительность жизни;
5. возрастание частоты «двойных нулевых» генотипов GSTT1 (0/0) и GSTM1 (0/0) у индивидуумов мужского пола в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет при одновременном уменьшение частоты GSTT1 (+/+ или +/-) и GSTM1 (+/+ или +/-) генотипов;
6. статистически значимое различие в распределении частот генотипов N-ацетилтрансферазы (NAT2) между новорожденными и лицами среднего возраста, а также между новорожденными и долгожителями, что позволяет предполагать меньшую продолжительность жизни независимо от пола у «медленных» ацетиляторов по сравнению с носителями N аллели;
7. выявленное отличие частоты генотипа А1/А1 (GPIIIa) и А/- (.AGTR1) у новорожденных и лиц среднего возраста, по-видимому, указывают на то, что сочетание этих генотипов благоприятно для детей и может способствовать «повышению выживаемости» в детском возрасте, но не оказывает заметного влияния на продолжительность жизни лиц среднего и пожилого возраста;
8. достоверное отличие частоты генотипа Al/Al (GPIIIa) 0/0 (GSTMI) в группе новорожденных по сравнению с таковой у лиц среднего и пожилого (>69 лет) возраста, по-видимому, определяется действием отбора;
9. достоверное отличие частоты сочетанного генотипа, ассоциированного со сниженным давлением («сумма баллов» 7 и более) у лиц старше 69 лет по сравнению с лицами среднего возраста свидетельствующее о том, что генотипы, определяющие «суммарно» повышенное давление и ассоциированые с сердечно-сосудистыми заболеваниями и, по-видимому, неблагоприятны для увеличения продолжительности жизни, так как с возрастом они элиминируются из популяции, особенно у лиц мужского пола;
10. достоверное возрастание частоты сочетанного генотипа системы «Детоксо» («сумма баллов» 3 и более) в ряду новорожденные - лица среднего возраста - лица старше 69 лет; такое сочетание ассоциировано с долгожительством;
11. полиморфизм генов системы фибринолиза и обмена гомоцистеина не являются ключевыми в определении продолжительности жизни;
Естественно, что все приведенные факты и, конечно, высказанные на их основе предположения и гипотезы требуют дальнейшего тщательного изучения.
В результате сравнительного анализа частот аллелей и генотипов изученных генов у лиц старше 69 лет с заболеваниями и без таковых установлено:
1. увеличение частоты гетерозиготного (I/D) генотипа по гену АСЕ в группах лиц старше 69 лет с различными заболеваниями по сравнению с таковыми без соответствующих нозологий, возможно, объясняется тем, что, несмотря на наличие заболевания, носители данного генотипа живут дольше, чем лица с таковым заболеванием и другим генотипом;
2. достоверное увеличение частот N/S генотипа NAT2 и сочетанных генотипов: GSTM1 (0/0) + NAT2 (N/S), MTHFR(С/-) + NAT2 (N/S), GSTM1 (0/0) + MTHFR (C/-) + NAT2 (N/S) у лиц старше 69 лет с ишемической болезнью сердца (ИБС), чем без ИБС; достоверное увеличение частот А2/А2 генотипа GPIIIa и сочетанного генотипа GPIIIa (А2/А2) + NOS3 (4/4 или 5/5) у лиц старше 69 лет с инсулиннезависимым сахарным диабетом (ИНСД) и таковыми без ИНСД; частота носителей «суммы баллов» 6 и 7 баллов системы «Давление» (аллели и генотипы риска) в группе лиц старше 69 лет с ИНСД оказалась достоверно выше таковой у лиц старше 69 лет без ИНСД;
4. статистически значимое различие в распределении частот генотипов по AGT гену между лицами старше 69 лет с острым нарушением мозгового кровообращения (ОНМК) и без ОНМК;
5. достоверное понижение частоты 4G/5G генотипа гена PAI1 у лиц старше 69 лет с катарактой (К), позволяющее высказать предположение, что в возрасте старше 69 лет, генотип 4G/5G определяет «устойчивость» к катаракте и является маркером для тестирования возрастного риска этого заболевания; достоверное повышение сочетанных генотипов AGTR1 (А/С) + NOS3 (4/4 или 5/5) и AGTR1 (А/С) + РАН (4G/4G или 5G/5G) + NOS3 (4/4 или 5/5) у лиц старше 69 лет с К по сравнению с таковыми без К, что позволяет предполагать аддитивный эффект полиморфизма генов AGTR1,
PAI1 и N0S3 в развитии К и рекомендовать тестирование этих генов для выявления лиц высокого риска К.
Использованный в работе статистический метод подсчета, основанный на "анализе суммы баллов" позволяет проводить оценку суммарного вклада нескольких генов одной системы в развитие мультифакториального заболевания, что способствует большей объективизации результатов генетического тестирования и их адекватной интерпретации.
Необходимы дальнейшие углубленные исследования не только ретоспективного, но и проспективного плана для проверки данного подхода на других генных системах и других мультифакториальных заболеваниях. Однако, уже на основании полученных данных можно судить о том, что гены систем «Давление» и «Детоксо» принимают непосредственное участие в определении продолжительности жизни на разных возрастных рубежах.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Глотов, Олег Сергеевич, Санкт-Петербург
1. Александров А.А. Повышенное артериальное давление в детском и подростковом возрасте (ювенильная артериальная гипертония) // РМЖ. -1997.-Т. 9.-С. 559-565.
2. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. СПб: Наука, 2003.- 468 с.
3. Баранов B.C. Баранова Е.В. Иващенко Т.Э. Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности» (Введение в предиктивную медицину) // СПб. Издательство "Интермедика". 2000. - 272с.
4. Баранов B.C., Хавинсон В.Х. Определение генетической предрасположенности к наследственным и мультифакториальным заболеваниям. Генетический паспорт // Методические рекомендации. -СПб.: ИКФ "Фолиант".- 2001. -48с.
5. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э. Геном человека как научная основа предиктивной медицины. Геномика медицине // ред. Иванов В.И. и Киселев JI.JL, Москва, Академкнига. - 2005. - С. 361-380.
6. Баранов B.C., Баранова Е.В. Генетические аспекты старения // Успехи геронтол. 2007. - в печати.
7. Баранова Е. Код ДНК, или Как продлить молодость. М.: ACT; СПб.: Астрель-СПб. 2007. - 222с.
8. Беспалова О. Н., Аржанова О. Н., Иващенко Т. Э. и др. Генетические факторы предрасположенности к привычному невынашиванию беременности// Ж. акуш. и женских болезней. 2001. - T.XLX. - С. 8-13.
9. Бондаренко О.Н., Галстян Г.Р., Анцифиров М.Б., Кузнецова Т.В., Кобылянский А.Г. Биологическая роль оксида азота при сахарном диабете // Сахарный диабет.2002. В 2(15). - С. 56-63.
10. Вторая конференция "Biologie Prospective", Санторини, Греция, 2004.
11. Гаврилов Л.А., Гаврилова Н.С. Биология продолжительности жизни. -М.: Наука. 1991.-280 с.
12. Гинтер Е.К. Популяционная генетика и медицина // Вестник РАМН.-2001.-№ 10.-С. 25-31.
13. Гладышев Г.П., Курнакова Н.В. Движущая сила эволюций живой материи и термодинамическая теория старения // Успехи геронтол. 1998. -Т. 2.-С. 49-58.
14. Гладышев Г.П. Термодинамика старения // Изв. РАН. Сер. Биол. -1998.-№5. -С. 533-543.
15. Гладышев Г.П. Термодинамическая теория старения выявляет причины старения и смерти с позиций общих законов природы // Успехи геронтол. 2001. - Т. 7. - С. 42-45.
16. Глотов О.С., Глотов А.С., Тарасенко О.А., Иващенко Т.Э., Баранов B.C. Исследование функционально значимого полиморфизма АСЕ, AGTR1, ENOS, MTHFR, MTRR и АРОЕ генов в популяции Северо
17. Западного региона России // Экологическая генетика. 2004. - Т. 2. № 3. -С. 32-35.
18. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний // СПб., специальная литература. 1997. - 287с.
19. Грмек М.Д. Геронтология учение о старости и долголетии // М.: Наука. - 1964.- 132 с.
20. Дильман В.М. Черыре модели медицины // М.: Медицина. 1987. - 288 с.
21. Животовский J1.A. Популяционная биометрия // Наука. Москва. В-1991.-С. 70, 78-81.
22. Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г, Петрова М.А., Гембицкая Т.Е., Орлов А.В., Баранов B.C. Генетические факторы предрасположенности к бронхиальной астме // Генетика. 2001. - Т. 37, №1. - С. 107-111.
23. Колчанов Н.А., Ананько Е.А., Колпаков Ф.А., Подколодная О.А. и др. Генные сети // Молекулярная биология. 2000.
24. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия: Пер. с нем. // М.: Мир,-2000. 469 с.
25. Крутько В.Н., Подколзин А.А., Донцов В.И. Общие причины, механизмы и типы старения // Успехи геронтол. 1997. - Т. 1. - С. 34-40.
26. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты // М: Издательство «Реафарм». 2004. - 144с.
27. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков // Соросовский Образовательный журнал. - 1999. - В.1. - С. 8-12.
28. Леонтьева И.В. Атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда как педитрические проблемы: Лекция №29 // Москва. 1997.
29. Мечников И.И. Этюды оптимизма // М.: 1988. 328 с.
30. Пальцев М.А. Современные подходы к изучению патогенеза болезней // Вест. РАМН. 1999. В.9. - С. 22-25.
31. Пузырев В.П. Генетика артериальной гипертензии (современные исследовательские парадигмы) // Клиническая медицина. 2003. - Н. 1. - С. 12-18.
32. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTIC А // М. МедиаСфера. 2003. - 312 с.
33. Розельфельд С.В. Спонтанный мутагенез у мышей разных линий при старении // Успехи геронтол. 2001. - Т. 8. - С. 44-49.
34. Саприн А.Н. Ферменты метаболизма и детоксикации ксенобиотиков // Успехи биологической химии М."Наука". 1991. Т. 32. - С. 146-172.
35. Саприн А.Н., Калинина Е.В. Окислительный стресс и его роль в механизмах апоптоза и развития патологических процессов // Успехи биол. и химии.- 1999.- Т. 39.- С. 289-326.
36. Середенин С.Б. Лекции по фармакогенетике // М., Медицинское информационное агентство.- 2004.-303 е.: ил.
37. XVII (80) сессия Общего собрание Российской академии медицинских наук. Москва. 4 октября 2006г.
38. Сиделева О.Г. Полиморфные аллели генов, ассоциированные с патогенезом атопической формы бронхиальной астмы у жителей Северо-запада России: Автореф. дис. канд. биол. наук. // СПб.- 2002. 19 с.
39. Синклер Д.Г., Гайренте Л. Секрет генов долголетия // В мире науки. -2006. №6. - С. 23-29.
40. Степанов В.А. Этногеномика неселения Северной Евразии // Томск: Изд-во " Печатная мануфактура". 2002. - 244 с.
41. Степанов В.А., Пузырев В.П. Анализ аллельных частот семи микросателлитных локусов Y-хромосомы в трех популяциях тувинцев // Генетика. 2000. - Т.36. - С. 241-248.
42. Торчинов Е.А. Даосизм: опыт историко-религиозного описания // СПб.: Лань.- 1998.-448 с.
43. Худолей В.В. Канцерогены: характеристики, закономерности, механизмы действия // СПб.: НИИ Химии СПбГУ.- 1999. 419с.
44. Хуснутдинова Э.К., Фатхлисламова Р.И., Хидиятова И.М. и др. Рестрикционно-делеционный полиморфизм V-области митохондриальной ДНК в популяциях народов Волго-Уральского региона // Генетика. 1997. -Т. 33.-С. 996-1000.
45. Шварц Е.И. Современные возможности молекулярной генетики в клинической практике // Матер, симп. "Вопросы фармакотерапии в клинической практике: прошлое, настоящее, будущее". СПб. - 1997. - С. 3-6.
46. Шляхто Е.В., Конради А.О. Роль генетических факторов в ремоделировании сердечно-сосудистой системы при гипертонической болезни // Артериальная гипертензия. 2002. - Т. 4. - Н. 3.
47. Щербакова М.Ю. Группы риска детей по атеросклерозу (выявление, профилактика, лечение): Автореф. дис. д-ра мед. наук. Москва.-1999.
48. Чазов Е.И. Ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, атеросклероз // Москва. 1992. - 178 с.
49. Черных С.И. Новые аспекты в изучении роли гормона роста человека в регуляции процессов роста и развития// Научно-практический журнал "Медичний Всесвгг". 2003. - III. №2.
50. Черч Дж. Проект «Персональный геном» // В мире науки. 2006. -№4.-С. 30-39.
51. Эммануэль Н.М. Некоторые молекулярные механизмы и перспективы профилактики старения // Изв. АН СССР. Сер. Биол. 1975. - №4. - С. 785794.
52. Agerholm-Larsen В., Nordestgaard B.G., Steffensen R., Sorensen T.I., Jensen G., Tybjaerg-Hansen A. ACE Gene Polymorphism: Ischemic Heart Disease and Longevity in 10 150 Individuals // Circulation. 1997. - V 20;95(10).- P. 2358-67.
53. Arbustini E, Dal Bello B, Morbini P, Burke AP, Bocciarelli M, Specchia G, Virmani R. Plaque erosion is a major substrate for coronary thrombosis in acute myocardial infarction//Heart. 1999 Sep;82(3):269-72.
54. Assmann G., Schulte H., Funke H., von Eckardstein A. The emergence of triglycerides as a significant independent risk factor in coronary artery disease // Eur Heart J. 1998. - V. 19 Suppl M. - P. M8-14.
55. Autrup H. Genetic polymorphisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response // Mutat Res. 2000 - V.3.-№464(1)-P.65-76.
56. Balistreri C.R., Candore G., Colonna-Romano G., Lio D., Caruso M., Hoffmann E., Franceschi C., Caruso C. Role of Toll-like receptor 4 in acute myocardial infarction and longevity // JAMA. 2004. - V. 17;292(19). - P. 2339-40.
57. Barzilai N., Atzmon G., Schechter C., Schaefer E.J., Cupples A.L., Lipton R., Cheng S., Shuldiner A.R. Unique lipoprotein phenotype and genotypeassociated with exceptional longevity // JAMA. 2003. - V. 15;290(15). - P. 2030-40.
58. Bathum L., Christiansen L., Jeune В., Vaupel J., McGue M., Christensen K. Apolipoprotein e genotypes: relationship to cognitive functioning, cognitive decline, and survival in nonagenarians // J Am Geriatr Soc. 2006. - V. 54(4). -P. 654-8.
59. Becker D.M., Kwiterovich P.O. Coronary prone families: the clinical meaning of importance " family history" // Cardiovasc. Rev. 1988. - V. 9. -P.63-71.
60. Beisiegel U., Weber W., Ihrke G., Herz J., Stanley K.K. The LDL-receptor-related protein, LRP, is an apolipoprotein E-binding protein // Nature. 1989. -V. 14;341(6238). - P. 162-4.
61. Benetos A., Safar M.E. Aortic collagen, aortic stiffness, and ATI receptors in experimental and human hypertension // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1996. -V. 74(7). - P. 862-866.
62. Bernstein C., Bernstein H. Aging, Sex, and DNA Repair // San Diego: Acad. Press, Inc., 1991.
63. Bladbjerg E.M, Andersen-Ranberg K., de Maat M.P., Kristensen S.R., Jeune В., Gram J., Jespersen J. Longevity is independent of common variationsin genes associated with cardiovascular risk // Thromb Haemost. 1999. -V. 82(3).-P. 1100-5.
64. Blanche H., Cabanne L., Sahbatou M., Thomas G. A study of French centenarians: are ACE and APOE associated with longevity? // С R Acad Sci III. 2001. - V. 324(2). - P. 129-35.
65. Brattstrom L., Zhang Y., Hurtig M., Refsum H., Ostensson S., Fransson L., Jones K., Landgren F., Brudin L., Ueland P.M. A common methylenetetrahydrofolate reductase gene mutation and longevity // Atherosclerosis. 1998. -V. 141(2). - P. 315-9.
66. Brown-Borg H.M., Borg K.E., Meliska C.J., Bartke A. Dwarf mice and the ageing process // Nature. 1996. - V.7;384(6604). - P. 33.
67. Brown-Borg H.M., Rakoczy S.G. Catalase expression in delayed and premature aging mouse models // Exp Gerontol. 2000. - V. 35(2). - P. 199212.
68. Cappola A.R., Xue Q.L., Ferrucci L., Guralnik J.M., Volpato S., Fried L.P. Insulin-like growth factor I and interleukin-6 contribute synergistically to disability and mortality in older women // J Clin Endocrinol Metab. 2003. - V. 88(5).-P. 2019-25.
69. Capri M., Salvioli S., Sevini F., Valensin S., Celani L., Monti D., Pawelec G., De Benedictis G., Gonos E. S., and Franceschi C. The Genetics of Human Longevity // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2006. - V. 1067. - P. 252-263.
70. Cascorbi I., Brockmoller J., Mrozikiewicz P.M., Muller A., Roots I. Arylamine N-acetyltransferase activity in man // Drug Metab Rev.- 1999.- V. 31(2). P.489-502.
71. Choi Y.H., Kim J.H., Kim D.K., Kim J.W., Kim D.K., Lee M.S., Kim C.H., Park S.C. Distributions of ACE and APOE polymorphisms and their relations with dementia status in Korean centenarians // J Gerontol A Biol Sci Med Sci. -2003.-V. 58(3).-P. 225-6.
72. Christiansen L., Bathum L., Frederiksen H., Christensen K., 2004. Paraoxonase 1 polymorphisms and survival. Eur. J. Hum. Genet. 12, 843-7.
73. Christiansen L., Brasch-Andersen C., Bathum L., Kruse T.A., K. Christensen. A longitudinal study of the effect of GSTT1 and GSTMI gene copy number on survival // Mechanisms of Ageing and Development. 2006. -V. 127.-P. 597-9.
74. Collins F.S. Shattuck Lecture Medical and Societal Consequences of the Human Genome Project//New Engl. J. Med. - 1999. - V.341, N.l. - P. 28-37.
75. Cotton R.G., Scriver C.R. Proof of "disease causing" mutation // Hum Mutat.- 1998.-V. 12(1).-P. 1-3.
76. Cutler R.G. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species // Ann N Y Acad Sci. 1991. - V. 621. - P. 1-28.
77. Daly AK. Molecular basis of polymorphic drug metabolism // J Mol Med.-1995.-V.73(1 l)-P.539-53.
78. Dato S., Passarino G., Rose G., Altomare K., Bellizzi D., Mari V., Feraco E., Franceschi C., De Benedictis G. Association of the mitochondrial DNAhaplogroup J with longevity is population specific // Eur J Hum Genet. 2004. -V. 12(12).-P. 1080-2.
79. De Benedictis G., Carotenuto L., Carrieri G., De Luca M., Falcone E., Rose G., Yashin A.I., Bonafe M., Franceschi C. Age-related changes of the 3'APOB-VNTR genotype pool in ageing cohorts // Ann Hum Genet. 1998. - V. 62(Pt 2).-P. 115-22.
80. Dilman V.M., Anisimov V.N. Hypothalmic mechanisms of ageing and of specific age pathology~I. Sensitivity threshold of hypothalamo-pituitary complex to homeostatic stimuli in the reproductive system // Exp Gerontol. -1979.-V. 14(4).-P. 161-74.
81. Dix D., Cohen P. On the role of aging in carcinogenesis // Anticancer Res. 1999. -V. 19(1B). - P. 723-6.
82. Ershler W.B., Keller E.T. Age-associated increased interleukin-6 gene expression, late-life diseases, and frailty // Annu Rev Med. 2000. - V. 51. - P. 245-70.
83. Farmer J.A., Gotto A.M. Dyslipidemia and other risk factor for coronary artery disease // In: Braunwald E., ed. Heart Disease: A Text-book of Cardiovascular Medicine. Philadelphia: Saunders. 1997. - P. 1126-1160.
84. Ferns G.A., Stocks J., Ritchie C., Galton D.J. Genetic polymorphisms of apolipoprotein C-III and insulin in survivors of myocardial infarction // Lancet. -1985. V. 10;2(8450). - P. 300-3.
85. Finch C.E., Ruvkun G. The genetics of aging //Annu Rev Genomics Hum Genet. 2001. - V. 2. - P. 435-62.
86. Finch C.E. The biology of aging in model organisms // Alzheimer Dis Assoc Disord. 2003. - V. 17, Suppl 2. - P. 39-41.
87. Fox C.S., Heard-Costa N.L., Vasan R.S., Murabito J.M., D'Agostino R.B. Sr., Atwood L.D. Genomewide Linkage Analysis of Weight Change in the Framingham Heart Study // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2005. - V. 15. - P. 3197-3201.
88. Franceschi С., Monti D., Sansoni P., Cossarizza A. The immunology of exceptional individuals: the lesson of centenarians // Immunol Today. 1995. -V. 16(1).-P. 12-6.
89. Frossard P.M., Kane J.P., Malloy M.J., Bener A. Renin gene Mbol dimorphism is a discriminator for hypertension in hyperlipidaemic subjects // Hypertens Res. 1999. - V. 22(4). - P. 285-9.
90. Fryer A.A., Bianco A., Hepple M., Jones P.W., Strange R.C., Spiteri M.A. Polymorphism at the glutathione S-transferase. A new marker for bronchial hyperresponsiveness and asthma // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. -V.161.- P. 1437-1442.
91. D., Strange R.C., Stucker I., Sugimura H., To-Figueras J., Vineis P., Yu M.C., Taioli E. // Metabolic Gene Polymorphism Frequencies in Control Populations // Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention. 2001. - V 10. - P. 1239— 1248.
92. Gaspari L., Pedotti P., Bonafe M., Franceschi C., Marinelli D., Mari D., Garte S., Taioli E. Metabolic gene polymorphisms and p53 muta-tions in healthy centenarians and younger controls // Biomarkers. 2003. - V. 8. - P. 522-528.
93. Gems D., McElwee J.J. Broad spectrum detoxification: the major longevity assurance process regulated by insulin/IGF-1 signaling? // Mech Ageing Dev.2005.-V. 126(3).-P. 381-7.
94. Gershon D. The mitochondrial theory of aging: is the culprit a faulty disposal system rather than indigenous mitochondrial alterations? // Exp Gerontol. 1999. - V. 34. - P. 613-9.
95. Ginaldi L., De Martinis M., D'Ostilio A., Marini L., Loreto M.F., Martorelli V., Quaglino D. The immune system in the elderly: II. Specific cellular immunity // Immunol Res. 1999. - V. 20(2). - P. 109-15.
96. Giner V., Poch E., Bragulat E., Oriola J., Gonzalez D., Coca A., De La Sierra A. Renin-angiotensin system genetic polymorphisms and salt sensitivity in essential hypertension // Hypertension. 2000. - V. 35(1 Pt 2). - P. 512-517.
97. Glotov O.S., Baranov V.S. Genetic polymorphisms of detoxyfication genes as basic predictive markers of aging // Anti-Aging Medicine World Congress.2006. Paris, March 23 -25. - P. 116.
98. Greider C.W, Blackburn E.H. Identification of a specific telomere terminal transferase activity in Tetrahymena extracts // Cell. 1985. - V. 51. - P. 405413.
99. Harman D. Free-radical theory of aging. Increasing the functional life span // Ann N Y Acad Sci. 1994. - V.30;717. - P. 1-15.
100. Hayes J.D., Pulford D.J. The glutathione S-transferase supergene family: regulation of GST and the contribution of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug resistance // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1995. -V. 30.-P. 445-600.
101. Haywood G.A., Gullestad L., Katsuya Т., Hutchinson H.G., Pratt R.E., Horiuchi M., Fowler M.B. ATI and AT2 angiotensin receptor gene expression in human heart failure // Circulation. 1997. - V. 4;95(5). - P. 1201-1206.
102. Hilgers K.F., Langenfeld M.R., Schlaich M., Veelken R., Schmieder R.E. 1166 A/C polymorphism of the angiotensin II type 1 receptor gene and the response to short-term infusion of angiotensin II // Circulation. 1999. - V. 28;100(13). - P. 1394-1399.
103. Hubert C., Houot A.M., Corvol P., Soubrier F. Structure of the angiotensin I-converting enzyme gene. Two alternate promoters correspond to evolutionary steps of a duplicated gene // J. Biol. Chem. 1991. - V. 15;266(23). - P. 1537715383.
104. Hughes P.E., Pfaff M. Integrin affinity modulation // Trends Cell Biol. -1998.-V. 8(9).-P.359-64.
105. Humphries S.E., Talmud P.J., Hawe E., Bolla M., Day I.N., Miller G.J. Apolipoprotein E4 and coronary heart disease in middle-aged men who smoke: a prospective study // Lancet. 2001. - V. 14;3 58(9276). - P. 115-9.
106. Hurme M., Lehtimaki Т., Jylha M., Karhunen P.J., Hervonen A. Interleukin-6 -174G/C polymorphism and longevity: a follow-up study // Mech Ageing Dev. 2005. - V. 126(3). - P. 417-8.
107. Inoue I., Nakajima Т., Williams C.S. et al. A nucleotide substitution in the promoter of human angiotensinogen is assotiated with essential hypertensionand affect basal transport in vitro// J. Clin. Invest. 1997. - V. 99. - P. 17861797.
108. Ivaschenko Т. E., Sideleva O. G., Baranov V. S. Glutathione-S-transferase mu and theta genes polymorphysm as neew risk factors of atopic bronchial asthma // J. Mol. Med. 2002. - V. 80. - P. 39-43.
109. Jeunemaitre X., Inoue I., Williams C.S. et al. Haplotypes of angiotensinogen in essential hypertension//Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 60. -P. 1448-1460.
110. Joos L., Pare P., Sanford A. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease // Swiss med. Wkly. -2002.- V. 132. P. 27-37.
111. Juronen E., Tasa G., Uuskula M., Pooga M., Mikelsaar A.V. Purification, characterization and tissue distribution of human class theta glutathione S-transferase Tl-1 // Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. - V. 39. - P. 21-29.
112. Jouanny P., Guillemin F., Kuntz C., Jeandel C., Pourel J. Environmental and genetic factors affecting bone mass // Similarity of bone density among members of healthy families. Arthritis Rheum. 1995. - V. 38(1). - P. 61-7.
113. Kervinen K., Savolainen M.J., Salokannel J. Hynninen A., Heikkinen J., Ehnholm C., Koistinen M.J., Kesaniemi Y.A. Apolipoprotein E and В polymorphisms longevity factors assessed in nonagenarians // Atherosclerosis. -1994.-V. 105.-P. 89-95.
114. Kinirons M. T. & O'Mahony M. S. Drug metabolism and ageing // Br J Clin Pharmacol. 2004. - V. 57(5). - P. 540-4.
115. Knecht T.P., Glass C.K. The influence of molecular biology on our understanding of lipoprotein metabolism and the pathobiology of atherosclerosis // Adv Genet. 1995. - V. 32. - P. 141-98.
116. Kyvik K.O., Green A., Beck-Nielsen H. Concordance rates of insulin dependent diabetes mellitus: a population based study of young Danish twins // BMJ. 1995. - V. 311 (7010). - P. 913-917.
117. Lagaay A.M., D'Amaro J., Ligthart G.J., Schreuder G.M., van Rood J.J., Hijmans W. Longevity and heredity in humans. Association with the human leucocyte antigen phenotype // Ann N Y Acad Sci. 1991. - V. 621. - P. 78-89.
118. Laisney V., Gross M.S., Frezal J. Human genes for glutation-S-transferases // Hum. Genet. 1984. - V. 68. - P.221-227.
119. Lee J., Lauer R.M., Clarke W.R. Lipoprotein in the progeny of young men with coronary artery disease: children with increased risk // Pediatrics.- 1986. -V.78. P.330-337.
120. Lewis DF. Homology modelling of human cytochromes P450 involved in xenobiotic metabolism and rationalization of substrate selectivity // Exp Toxicol Pathol. 1999. - V.51(4-5). - P. 369-74.
121. Lifton R.P., Gharavi A.G., Geller D.S. Molecular mechanisms of human hypertension // Cell. 2001. - V. 23; 104(4). - P. 545-556.
122. Lio D., Scola L., Crivello A., Colonna-Romano G., Candore G., Bonafe M., Cavallone L., Francesch C. and Caruso C. Gender-specific association between 1082 IL-lOpromoter polymorphism and longevity // Genes and Immunity. -2002. -V. 3. P. 30-33.
123. Lottermoser K., Dusing R., Ervens P., Koch В., Burning Т., Sachinidis A., Vetter H., Ко Y. The plasminogen activator inhibitor 1 4G/5G polymorphism isnot associated with longevity: a study in octogenarians // J Mol Med. 2001. -V. 79(5-6).-P. 289-93.
124. Meyer U.A., Zanger U.M. Molecular mechanisms of genetic polymorphisms of drug metabolism //Annu Rev Pharmacol Toxicol.- 1997. V. 37.-P. 269-96.
125. Miller R.A. The aging immune system: primer and prospectus // Science. -1996. V. 5;273(5271). - P. 70-4.
126. Miller R.A. The aging immune system: subsets, signals, and survival // Aging (Milano). 1997.- V. 9(4 Suppl). - P. 23-4.
127. Moniek P., Bladbjerg E., Hjelmborg J., Bathum L., Jespersen J., Christensen K. Genetic Influence on Inflammation Variables in the Elderly //Arterioscler Thromb Vase Biol. 2004. - V. 24. - P. 2168-2173.
128. Morley A.A. The somatic mutation theory of ageing // Mutat Res. 1995. -V. 338(1-6).-P. 19-23.
129. Motulsky A.G. If I had a gene test, what would I have and who would I tell? // Lancet. 1999. - V. 354 Suppl 1. - P. SI35-7.
130. Muiras M.L., Verasdonck P., Cottet F., Schachter F. Lack of association between human longevity and genetic polymorphisms in drug-meta-bolizing enzymes at the NAT2, GSTM1 and CYP2D6 loci // Hum. Genet. 1998. -V 102.-P. 526-532.
131. Naber C.K., Siffert W. Genetics of human arterial hypertension // Minerva Med. 2004.- V. 95(5). - P. 347-56.
132. Naber C.K., Siffert W., Erbel R., Heusch G. Genetics of human coronary vasomotion // Arch Mai Coeur Vaiss. 2004. - V. 97(3). - P. 255-60.
133. Nebert D.W., Carvan M.J. Ecogenetics: from Biology to Health // Toxicol.Industr.Health. 1997. - V. 13.-P. 163-192.
134. Parkin D.M., Bray F.I., Devesa S.S. Cancer burden in the year 2000. The global picture // Eur J Cancer. 2001. - V. 37 Suppl 8. - P. S4-66.
135. Pastrakuljic A., Tang B.K., Roberts E.A., Kalow W. Distinction of CYP1A1 and CYP1A2 activity by selective inhibition using fluvoxamine and isosafrole // Biochem Pharmacol. 1997. - V. 21; 53(4). - P. 531-8.
136. Perls Т., Levenson R., Regan M., Puca A. What does it take to live to 100? // Mech Ageing Dev. 2002. - V. 123(2-3). - P. 231-42.
137. Pesch В., Dusing R., Rabstein S., Harth V., Grentrup D., Bruning Т., Landt O., Vetter H., Ко Y.D. Polymorphic metabolic susceptibility genes and longevity: a study in octogonarians // Toxicol. Lett. 2004. - V. 151. - P. 283290.
138. Peto R., Parish S.E., Gray R.G. There is no such thing as ageing, and cancer is not related to it // IARC Sci Publ. 1985. - V. 58. - P. 43-53.
139. Procopciuc L., Popescu Т., Jebeleanu G., Pop D., Zdrenghea D. Essential arterial hypertension and polymorphism of angiotensinogen M235T gene // J. Cell. Mol. Med. 2002. - V. 6(2). - P. 245-250.
140. Rahman I., MacNee W. Lung glutation and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease // Am. J. Physiol. 1999. - V. 277. - P. 1067-1088.
141. Ralston S.H. The genetics of osteoporosis // Bone. 1999. - V. 25(1). - P. 85-6.
142. Roberts-Thomson I.C., Ryan P., Khoo K.K., Hart W.J., McMichael A.J., Butler R.N. Diet, acetylator phenotype, and risk of colorectal neoplasia // Lancet.-1996. V. 18; 347(9012). - P. 13 72-4.
143. Ross R. Cellular and molecular studies of atherogenesis // Atherosclerosis. 1997. -V. 131 Suppl:S3-4.
144. Ross I.K. Mitochondria, sex, and mortality //Ann N Y Acad Sci. 2004. -V. 1019.-P. 581-4
145. Ross O.A., McCormack R., Curran M.D,. Duguid R.A., Barnett Y.A., Rea I.M., Middleton D. Mitochondrial DNA polymorphism: its role in longevity of the Irish population // Exp Gerontol. 2001. - V. 36(7). - P. 1161-78.
146. Ross O.A., Curran M.D., Meenagh A., Williams F., Barnett Y.A., Middleton D., Rea I.M. Study of age-association with cytokine gene polymorphisms in an aged Irish population // Mech Ageing Dev. 2003. - V. 124(2).-P. 199-206.
147. Rupert J.L., Kidd K.K., Norman L.E., Monsalve M.V., Hochachka P.W., Devine D.V. Genetic polymorphisms in the Renin-Angiotensin system in high-altitude and low-altitude Native American populations // Ann. Hum. Genet. -2003.-V. 67(Pt 1).-P. 17-25.
148. Salvioli S., Bonafe M., Capri M., Monti D., Franceschi C. Mitochondria, aging and longevity~a new perspective // FEBS Lett. 2001. - V. 492(1-2). - P. 9-13.
149. Sambrook J., Fritsch EP., Maniatis. Molecular cloning: a Laboratory Coldspring Harbour Lab // Coldspring Harbour, NY, 1989.
150. Saretzki G., Von Zglinicki T. Replicative aging, telomeres, and oxidative stress // Ann N Y Acad Sci. 2002. - V. 959. - P. 24-9.
151. Schachter F., Faure-Delanef L., Guenot F., Rouger H., Froguel P., Lesueur-Ginot L., Cohen D. Genetic associations with human longevity at the APOE and ACE loci // Nat Genet. 1994. - V. 6(1). - P. 29-32.
152. Schindowski K., Frohlich L., Maurer K., Muller W.E., Eckert A. Age-related impairment of human T lymphocytes' activation: specific differences between CD4 (+) and CD8 (+) subsets // Mech Ageing Dev. 2002. - V. 123(4).-P. 375-90.
153. Shigenaga M.K., Hagen T.M., Ames B.N. Oxidative damage and mitochondrial decay in aging // Proc Natl Acad Sci USA.- 1994. V. 8;91(23). - P. 10771-8.
154. Sing C.F., Davignon J. Role of the apolipoprotein E polymorphism in determining normal plasma lipid and lipoprotein variation // Am J Hum Genet.-1985.-V. 37(2).-P. 268-85.
155. Singh R., Kolvraa S., Bross P., Christensen K., Gregersen N., Tan Q., Jensen U.B., Eiberg H., Rattan S.I. Heat-shock protein 70 genes and human longevity: a view from Denmark // Ann N Y Acad Sci. 2006. - V. 1067. - P. 301-8.
156. Skulachev V.P. The programmed death phenomena, aging, and the Samurai law of biology // Exp Gerontol. 2001. - V. 36(7). - P. 995-1024.
157. Sorensen A.B., Weinert F.E., Sherrod L.R. Human Development and the Life Course: Multidisciplinary Perspectives. Hillsdale: Lawrence Erlbaum Assoc., 1986. 245.
158. Talmud P.J., Humphries S.E. Apolipoprotein C-III gene variation and dyslipidaemia // Curr Opin Lipidol. 1997. - V. 8(3). - P. 154-8.
159. Tan Q., De Benedictis G., Ukraintseva S.V., Franceschi C., Vaupel J.W., Yashin A.I. A centenarian-only approach for assessing gene-gene interaction in human longevity // Eur J Hum Genet. 2002. - V. 10(2). - P. 119-24.
160. Tanaka C., Kamide K., Takiuchi S., Miwa Y., Yoshii M., Kawano Y., Miyata T. An alternative fast and convenient genotyping method for the screening of angiotensin converting enzyme gene polymorphisms // Hypertens. Res. 2003. - V. 26(4). - P. 301-306.
161. Tiret L., Bonnardeaux A., Poirier O. et al. Synergistic effect of the angiotensin-converting enzyme and angiotensin II type receptor gene polymorphism on risk of myocardial infarction // Lancet. 1994. - V. 344. - P. 910-913.
162. Todd J.A. Genetics of type 1 diabetes // Pathol Biol. 1997. - V. 45. - P. 219-227.
163. Todesco L., Angst C., Litynski P., Loehrer F., Fowler В., Haefeli W.E. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism, plasma homocysteine and age // Eur J Clin Invest. 1999. - V. 29(12). - P. 1003-9.
164. Turyn D., Dominici F.P., Sotelo A.I., Bartke A. Specific interactions of growth hormone (GH) with GH-receptors and GH-binding proteins in vivo ingenetically GH-deficient Ames dwarf mice I I Growth Horm IGF Res. 1998. -V. 8(5).-P. 389-96.
165. Utermann G., Steinmetz A., Weber W. Genetic control of human apolipoprotein E polymorphism: comparison of one- and two-dimensional techniques of isoprotein analysis // Hum Genet. 1982. - V. 60(4). - P. 344-51.
166. Van Zandycke S.M., Sohier P.J., Smart K.A. The impact of catalase expression on the replicative lifespan of Saccharomyces cerevisiae // Mechanicms of Ageing and Development. 2002. - V.l 23 (4). - P. 365-373.
167. Verbeke P., B.F.C. CLARK & S.I.S. RATTAN. Reduced levels of oxidized and glycoxidized proteins in human fibroblasts exposed to repeated mild heat shock during serial passaging in vitro // Free Radic. Biol. Med. 2001. -V.31.-P. 1593-1602.
168. Vijg J. Somatic mutations and aging: a re-evaluation // Mutat Res. 2000. -V. 17; 447(1).-P. 117-35.
169. Von Zglinicki T. Oxidative stress shortens telomeres // Trends Biochem Sci. 2002. - V. 27(7). - P. 339-44.
170. Yamamura K., Hirose N., Arai Y. Contribution of glutathione S-transferase Ml to longevity // J. Am. Geriatr. Soc. 2001. - V. 49. - P. 338-339.
171. Zaman A.G., Helft G., Worthley S.G., Badimon J.J. The role of plaque rupture and thrombosis in coronary artery disease // Atherosclerosis. 2000. -V. 149(2).-P. 251-66.
172. Zhang Y., Herman B. Ageing and apoptosis // Mechanicms of Ageing and Development. 2002. - V. 123 (4). - P. 245-260.
-
Глотов, Олег Сергеевич
-
кандидата биологических наук
-
Санкт-Петербург, 2007
-
ВАК 03.00.15
- Исследование ассоциаций полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с развитием врожденных дефектов сердца
- Биохимические и генетические маркеры изменения активности антиоксидантной системы крови при ишемической болезни сердца
- Генетическая основа регуляции окислительного стресса: связь с продолжительностью жизни и ишемической болезнью сердца
- Вовлеченность полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в развитие гипертонической болезни и ее осложнений
- Структурно-функциональная организация наследственной компоненты подверженности гипертрофии миокарда у человека
