Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование ассоциаций полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с развитием врожденных дефектов сердца

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Исследование ассоциаций полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с развитием врожденных дефектов сердца"

На правах рукописи

БРАИКО Ольга Павловна

ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИЙ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ С РАЗВИТИЕМ ВРОЖДЕННЫХ ДЕФЕКТОВ СЕРДЦА

03.02.07-генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

3 МАР 2015

005559824

Белгород — 2015

005559824

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Голубцов Виктор Иванович Официальные оппоненты:

Амелина Светлана Сергеевна

доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Южный федеральный университет" ¡Министерства образования и науки Российской Федерации, заведующая отделом прикладной биологии Научно-исследовательского института биологии Демикова Наталья Сергеевна

доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения Российской Федерации, руководитель центра мониторинга врожденных пороков развития обособленного структурного подразделения «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии» Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится « 201 ^ года в 1с? ¿Я^асов

на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 при ФГАО ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГАО ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки России и на сайте www.bsu.edu.ru

Автореферат разослан

И.о. ученого секретаря совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 доктор медицинских наук, доцент

С.П. Пахомов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Врождённые пороки развития системы кровообращения (ВПР СК) - это тяжелая патология сердечно-сосудистой системы (ССС) с высокой степенью летальности на первом году жизни, формирующаяся в эмбриональном периоде и являющаяся одной из главных причин детской смертности в целом [Brennan P., Yong I., 2001; Dehli R. et al., 2009]. Представленная комитетом экспертов ВОЗ частота ВПР флюктуирует в различных странах от 0,27% до 7,5% (в среднем около 2-3%) от всех живорожденных, а частота ВПР СК составляет 0,8-1%. В России среди врожденных пороков развития (ВПР), приводящих к инвалидности ВПР СК занимают ведущее место - 27,7% [Минайчева Л.И., 2008], 30% [Богачева Е.В., 2011; Квашевич В.А., 2013], 22% [Доронина Т.М., 2012], в зарубежных странах 25% [Masood N., 2010], 44% [Archer J. M., 2013], a лидирующее положение занимает ДМЖП - 30,4% [Криволапое О.В. и соавт., 2011], 33,3% [Masood N.,2010].

В России ежегодно рождается около 20-25 тыс. детей с ВПР СК. Известно, что около 10% ВПР СК являются проявлением синдромальной патологии [Минайчева Л.И., 2008]. В большинстве случаев основными причинами их развития являются комплексное воздействие генетических и средовых факторов на органогенез преимущественно в первом триместре беременности. Такие ВПР СК относятся к патологии мультифакториального генеза [Bajolle F. et al., 2009].

В выведении продуктов метаболизма из организма человека основную роль играет система естественной детоксикации, такая как ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК). Процесс детоксикации обычно включает две последовательные фазы. Инородные соединения (фармакологические препараты, поллютанты, токсины и пр.), попадающие в организм в результате первой фазы, активируются при участии ферментов семейства цитохромов Р450, образуя промежуточные электрофильные метаболиты, проявляющие генотоксический эффект. На этапе второй фазы детоксикации эти соединения с помощью ферментов семейств N-ацетилтрансфераз (NAT), УДФ-глюкуронсульфотрансфераз (UDF), глутатионтрансфераз (GSTM) инактивируются, переходя в водорастворимые соединения, не обладающие токсическим эффектом, и выводятся из организма [Баранов B.C. и соавт., 1999]. Следовательно, гены ферментов ФБК, эффект которых зависим от влияния внешнесредовых факторов, принимают участие в формировании изучаемых нозологий [Шабалдин А.В., 2007; Puga А., 2011]. Нарушения в функционировании этой системы лежат в основе многих известных сегодня мультифакториальных заболеваний, в том числе и ВПР.

К настоящему времени известно, что большое количество полиморфных ассоциаций генов участвуют в развитии мультифакториальной патологии. При популяционных исследованиях

актуальным остается определение специфических генов и средовых факторов, которые формируют норму реакции устойчивости человека к изменяющимся факторам внешней среды. Одними из таких генов являются гены ФБК, экспрессия которых зависима от средовых факторов. Указанные гены представляют собой основной объект для исследований этиологии мультифакториальных заболеваний, в том числе и распространенных ВПР [Полоников А.В., 2008].

При исследованиях различных авторов изучена роль полиморфных вариантов генов ФБК, таких как CYP1A1, ЕРНХ1, GSTP1, NATI, NAT2 [Zhu H. et al., 2009], CYP1A2, GSTM1 [Шабалдин A.B., 2007], Л ВС В! [Wang С. et al., 2013] с формированием врожденной патологии. Известно, что гены ФБК вносят существенный вклад в формирование ВПР. Остаются неизученными молекулярно-генетические механизмы регуляции экспрессии генов ФБК, принимающих участие в развитии изолированных ВПР СК. Имеются данные о вовлеченности генов ФБК в развитие таких мультифакториальных заболеваний как сахарный диабет [Sindhu R.K., 2006], рак молочной железы [Артамонов В.В. и соавт., 2004], гипертоническая болезнь [Пузырев В.П., 2003], коронарная болезнь сердца [Baoxia H. et al., 2010], врожденные пороки сердца [Wang С. et al., 2013], рак мужских репродуктивных органов [William D. F., 2010], бронхиальная астма [Макарова С.И. и соавт., 2000; Полоников А.В., 2008; Wang Y., et al., 2014], глаукома [Acton A.Q., 2012].

Ранее изучение генов ФБК с развитием ДМЖП и ДПП в России не проводилось. В связи с потенциальной вовлеченностью генов ФБК в этиологию и патогенез изучаемых ВПР СК очень важно осуществить поиск полиморфных ассоциаций генов ФБК с формированием предрасположенности к ДМЖП и ДПП среди населения Краснодарской популяции.

Цель исследования: определить варианты полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в генофонде населения Краснодарского края, установить их роль в генезе врождённых пороков системы кровообращения мультифакториальной природы.

Задачи исследования:

1 .Установить частоту ДМЖП и ДПП у новорожденных на территории Краснодарского края за период 1998-2012гт.

2. Изучить частоты аллелей и генотипов полиморфизмов генов ФБК, таких как Val432Leu CYP1B1, G590A NAT2, 3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9, Т664С CYP3A4, +6986G/A CYP3A5 в популяции русских жителей Краснодарского края.

3.Исследовать ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов ФБК с риском формирования ДМЖП и ДПП в анализируемой популяции.

4.Исследовать ассоциации аллелей и генотипов генов ФБК в группах больных и здоровых с учетом пола и частоты изучаемых ВПР СК в районах Краснодарского края.

5.Провести анализ ассоциаций сочетаний полиморфных вариантов генов ФБК с риском развития ДМЖП и ДПП.

6. Изучить связь полиморфных вариантов генов ФБК с клиническими признаками ДМЖП и ДПП.

Научная новизна. Впервые в Краснодарском крае проведен молекулярно-генетический анализ ассоциаций Уа1432Ьеи СУП В! (гз1056836) , в590А ЫАТ2 (гб1799930), С3435Т АВСВ1 (гз1045642), А1075С СУР2С9 (гз1057910), Т664С СУРЗА4 (ге2740574), +6986С/А СУРЗЛ5 (гв776746) с риском развития изолированных ДМЖП и ДПП. Впервые установлены полиморфные варианты генов ФБК и их сочетания в формировании ДМЖП и ДПП. Впервые охарактеризована связь полиморфных вариантов генов ФБК с клиническими признаками ДМЖП.

Научно-практическое значение. Полученные результаты могут быть использованы для последующих исследований значения генетической компоненты в формировании ДМЖП и ДПП. Данные исследования могут найти применение в практической деятельности врачей - генетиков - для обследования супружеских пар при планировании беременности и проведении преконцепционной профилактики; педиатров, кардиологов — для раннего выявления клинических особенностей с целью проведения профилактики осложнений ДМЖП и ДПП и прогнозирования их дальнейшего течения. Проведение отбора пациентов, нуждающихся в оперативной коррекции порока (как дополнительный метод определения топографической локализации порока). Полученные данные могут быть использованы для создания рекомендаций по следующим дисциплинам: генетика, педиатрия, биохимия в медицинских вузах и на курсах постдипломного обучения специалистов.

Апробация работы. Результаты исследования в программах конференции были доложены на 6-ом Всероссийском съезде общества медицинских генетиков, Ростов-на-Дону, 20 Юг, на Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Репродуктология: новые технологии, проблемы, перспективы» (Белгород, 2010), на IV Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2011» (Санкт-Петербург, 2011), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, «Медико-биологические аспекты мультифакториапьной патологии» (Курск, 2011), на IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье населения — основа процветания России» (Анапа, 2012), на I Международном Форуме «Молекулярная медицина - новая модель здравоохранения XXI века: технологии, экономика, образование» (Санкт-Петербург, 2013).

Личный вклад автора. Автором лично проведено клиническое обследование всех больных ДМЖП и ДПП, родившихся в Краснодарском крае за период 1998-2012гг., осуществлен сбор данных (подготовка анкеты и

анкетирование), выполнено молекулярно-генетическое исследование с последующей статистической обработкой, анализом полученных результатов и оформлением рукописи. Автором подготовлены материалы к публикации и проведена апробация результатов диссертационного исследования.

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков ассоциированы с риском развития изолированных дефектов межжелудочковой и межпредсердной перегородок.

2. Ассоциации сочетаний полиморфных вариантов генов ФБК отражают их совместную вовлеченность в молекулярные механизмы развития изолированных дефектов межжелудочковой и межпредсердной перегородок.

3. Ассоциации полиморфных варианты генов ФБК с риском развития изолированного дефекта межжелудочковой перегородки являются пол-специфическими.

4. Полиморфные варианты генов ФБК являются важными генетическими компонентами, оказывающими влияние на клинические проявления изолированного дефекта межжелудочковой перегородки.

Структура и объем диссертации. Диссертация включает в себя введение, литературный обзор, главу материалов и методов исследования, главу результатов собственных исследований, заключение в виде обсуждения полученных результатов, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложения. Результаты исследования представлены на 131 странице машинописного текста, в 32 таблицах, 5 рисунках. Список литературы содержит 174 источника, из них 52 отечественных, 122 зарубежных.

Материалы и методы исследования Медико-биологическая характериспшка обследованных больных Основным объектом исследования явились дети с врожденным изолированным дефектом межжелудочковой перегородки (100 человек) и врожденным изолированным дефектом предсердной перегородки (45 человек) из 6-ти городов и 38 районов Краснодарского края, русской национальности. Средний возраст детей с ДМЖП составил 3,11±0,81 лет (40 мальчиков - 40% и 60 девочек - 60%), средний возраст детей с ДПП составил 3,10±0,14 лет. Дизайн настоящего исследования предполагал, что в качестве группы сравнения был использован родительский контроль - родители детей с ДМЖП и ДПП (230 человек), со средним возрастом 27,96±0,80 лет, не имеющие врожденных пороков развития, также русской национальности и являющиеся коренными жителями Краснодарского края.

Критерии включения больных в исследуемые группы: русская национальность, неродственное происхождение, преимущественное рождение и проживание в Краснодарском крае, наличие изолированного ВПР СК. Критерием исключения служил факт наличие ВПР СК в составе хромосомного или генного заболевания, родственная связь. Период исследования составил 2009-2014 гг, сбор материала осуществлялся на базе Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации ККБ №1 им. профессора С.В. Очаповского (2009-2013 гг).

Молекулярно-генетические методы

Основным материалом для проведения работы являлась венозная кровь, забор которой осуществлялся в объеме 6-8 мл из локтевой вены всех исследуемых лиц в пластиковые пробирки (консервант 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0) с использованием одноразового инструментария.

Молекулярно-генетическое тестирование проведено в группах детей с изолированными ВПР СК мультифакториального генеза, из них 100 образцов - дети с изолированным дефектом межжелудочковой перегородки, 45 образцов - дети с изолированным дефектом предсердной перегородки; 230 образцов - группа популяционного контроля: 150 образцов - родители детей с ДМЖП, 80 образцов - родители детей с ДПП (всего 375 образцов крови).

В рамках работы проведено генотипирование 6 полиморфизмов 6 генов ферментов детоксикации ксенобиотиков: Val432Leu CYP1B1 (rsl056836), G590A NAT2 (rsl799930), С3435Т А ВС ВI (rsl045642), А1075С CYP2C9 (rsl057910), Т664С CYP3A4 (rs2740574), +6986G/A CYP3A5 (rs776746).

Анализ вариантов полиморфизмов аллелей генов ФБК в образцах крови детей с ДМЖП и ДПП и их родителей осуществлялся путем проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. Исследование выполнялось на амплификаторах CFX96 (Bio-rad) и Rotor Gene Q5 plex HRM (Qiaqen) в режиме Real time с использованием полимеразы Thermus aquaticus (Taq-полимераза) производства фирмы «СибЭнзим», олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол» с дальнейшим проведением ПЦР и анализированием полученных генотипов при помощи метода дискриминации аллелей.

Генетико-статиспшческие методы

Математические результаты исследования были получены в ходе использования пакетов программ «Microsoft Excel 2003» (для расчета средних значений и стандартных отклонений) и «STATISTICA for Windows 6.0» на персональном компьютере. Критерий х2 Пирсона применяли для вычисления соответствия распределений ожидаемых и наблюдаемых значений частот аллелей и генотипов в условиях равновесия Харди-Вайнберга в группе больных ВПР СК по сравнению с группой популяционного контроля. Наблюдаемый уровень гетерозиготности

рассчитывали по формуле: Н0 = N0 /N, ^о 7Ху ,где N,, - численность

>*J

людей в данной выборке с генотипом Л ¡ А] по 1-му локусу, N - объем выборки. Ожидаемую гетерозиготность вычисляли как теоретический процент гетерозигот, исходя из равновесия Харди-Вайнберга по формуле

Индекс фиксации Райта позволил оценить, насколько наблюдаемый уровень гетерозиготное™ отличается от ожидаемого D=1-(H0-HE), где Нс - среднее значение наблюдаемой гетерозиготности (observed heterozygosity), НЕ -ожидаемая гетерозиготность (expected heterozygosity).

Уровень значимости статистического критерия (принятия или отклонения гипотезы, на котором основан критерий) при всех использованных математических методах брался, как принято в биомедицинских исследованиях, р<0,05.

Анализ полиморфных ассоциаций генов ФБК с риском формирования врожденных дефектов межпредсердной и межжелудочковой перегородок.

Критерий х2 с поправкой Йетса на непрерывность применяли для сопоставления частот аллелей и генотипов между исследованными группами больных ВПР СК и здоровыми. Таблица сопряженности 2x2 (df=l) использовалась для последующего сравнения частот аллелей между группами больных и здоровых. По величине отношения шансов - odss ratio (OR) судили о риске формирования ВПР СК в зависимости от обнаруживаемых частот аллелей и генотипов. Методом В. Woolf оценивали границы 95%-го доверительного интервала (CI) для OR.

Анализ сравнения частот двойных сочетаний генотипов между исследуемыми группами проводили с целью поиска накоплений различных вариантов комбинаций генотипов ФБК среди больных ВПР СК и популяционным контролем.

Результаты собственных исследовапий

1. Установление частоты и распространенности ДМЖПи ДПП у новорожденных на территории Краснодарского края за период 1998-

Всего за 1998-2012 гг. на территории Краснодарского края родилось 794635 детей. По числу нозологий и количеству больных ВПР СК в структуре изолированных ВПР занимают одно из первых мест. ВПР СК были выявлены у 3984 новорожденных.

Основная доля в структуре ВПР СК приходится на дефект межжелудочковой перегородки (ДМЖП) (51,8%) и дефект предсердной перегородки (ДПП) (16,7%). Средний удельный вес имели 7 нозологий (1,6% - 9,3%): аномалия сердечных камер и соединений, транспозиция

т

' , где т - число аллелей, р, — частоты аллелей 1 локуса.

2012гг.

магистральных сосудов, стеноз легочной артерии, тетрада Фалло, врожденные аномалии сердечной перегородки, коарктация аорты, дефект предсердно-желудочковой перегородки. Стеноз аорты и стеноз легочной артерии имели низкий удельный вес по 0,9% соответственно.

Анализ распределения ВПР СК 44 административных территорий, в т.ч. 6 городов и 38 сельских районов Краснодарского края за 19982012гг. оказался достаточно отличимым с диапазоном колебаний от 1,15%о до 14,48%о. Низкая частота (менее 3,0%о) ВПР СК зарегистрирована в Белоглинском, Лабинском, Новопокровском, Отрадненском, а также в городах Армавир и Геленджик. Напротив, высокая частота (более 9,0%о) - в Брюховецком, Выселковском, Ейском, Красноармейском, Приморско-Ахтарском, Северском, Славянском, Тимашевском районах и в г.Краснодаре.

Гетерогенность природно-климатических и географических условий, социально-экономический уклад и плотность населения отдельных районов позволила нам условно разделить территорию Краснодарского края на 6 регионов: Приазовский, Северный, Центральный, Восточный, Причерноморский и Южный Предгорный. Это позволило рассматривать частоту изучаемых ВПР СК на статистически достаточно выраженных массивах как по общему числу живорождений, так и по доле в ней детей с ВПР. Анализируя частоту ВПР в этих регионах края, установлено, что в Центральном и Приазовском регионах чаще регистрируются ВПР СК (12,5%о и 9,5%о соответственно) по сравнению с другими регионами: Северный (5,30%о), Причерноморский (5,40%о), Южный Предгорный (6,32%о) и Восточный (3,69 %о).

В ходе исследования установлено что частота ВПР СК в Краснодарском крае за изучаемый промежуток (1998-2012 гг) в среднем составила 7,96 с амплитудой колебаний от 2,69 до 9,20 на 1000 новорожденных. Наибольший удельный вес в структуре ВПР СК имели дефект межжелудочковой перегородки (51,8%) и дефект предсердной перегородки (16,7%). ВПР СК имеют неравномерность распространения по территории Краснодарского края. Высокая частота ВПР СК зарегистрирована в Центральном и Приазовском регионах края (12,5%о и 9,46%о соответственно). Регистр ВПР СК имеет широкий нозологический спектр, выраженную диспропорцию на территории отдельных регионах края, а также в отдельные годы.

2.0пределение вариантов ассоциаций полиморфизмов генов ферменпюв биотрансформации ксенобиотиков у русских жителей Краснодарского края

Исследование ассоциаций полиморфных маркеров генов системы детоксикации Val432Leu CYP1B1, G590A NAT2, С3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9, Т664С CYP3A4, +6986G/A CYP3A5 у клинически здоровых (контроль) русских жителей Краснодарского края проводили на выборке из 230 индивидуумов, из которых 150 человек - родители детей с ДМЖП (100 матерей, 50 отцов); 80 человек - родители детей с ДПП (45 матерей, 35

отцов). Установлено, что распределение частот генотипов полиморфных генов Val432Leu CYP1B1, G590A NAT2, С3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9, Т664С CYP3A4, +6986G/A CYP3A5 в контрольной группе соответствовало популяционному равновесию Харди-Вайнберга. Полиморфизм исследуемых генов у русских жителей Краснодарского края представлен обширным диапазоном аллелей. Наблюдаемая гетерозиготность захватывает пределы колебаний от Но=0,13 для полиморфизмов Т664С CYP3A4 до Но =0,53 для полиморфизма С3435Т гена АВСВ1 у контрольной группы родителей детей с ДМЖП и от Но=0Д0 для полиморфизма +6986G/A CYP3A5 до Но =0,53 для полиморфизма С3435Т гена АВСВ1 у контрольной группы родителей детей с

дпп.

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов контрольной группы настоящего исследования и средних популяционных частот исследуемых полиморфизмов показал, что частота аллеля А1075С гена CYP2C9 среди русских жителей Краснодарского края, Санкт-Петербурга была практически одинаковой, а в популяциях британцев, итальянцев, испанцев, шведов, французов, бельгийцев и датчан была несколько выше. Частота таких аллелей, как Val432Leu CYP1B1, G590A NAT2, +6986G/A CYP3A5 среди немцев, шведов, шотландцев, португальцев соответствовала популяции русских жителей Краснодарского края.

Определено, что частоты аллелей и генотипов исследуемых генов русских жителей Краснодарского края, в целом, были сопоставимы с таковыми значениями в европеоидных популяциях, включающих европейцев северной и восточной Европы.

З.Определение вариантов полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков при формировании врожденных пороков развития системы кровообращения

Анализ распределения генотипов изучаемых полиморфизмов генов показал, что для всех рассмотренных генетических полиморфизмов в группе индивидуумов с ДМЖП и ДПП наблюдаемая частота генотипов отвечает ожидаемой, исходя из равновесия Харди-Вайнберга (>0,05). Только по локусу G590A NAT2 среди детей с ДМЖП определено отклонение от равновесия Харди-Вайнберга в виду низкой фактической гетерозиготности по сравнению с теоретической (р<0,05). Распределение аллелей по данным локусам для больных с ДМЖП составило Н0 =0,49 (для л о кус a Val432Leu CYP1B1), Но=0,35 (для локуса G590A NAT2), Н0= 0,45 (для локуса С3435Т АВСВ1), Но =0,49 (для локуса А1075С CYP2C9), Но=0,35 (для локуса Т664С CYP3A4), Но= 0,45 (для локуса +6986G/A CYP3A5), а для больных с ДПП Но=0,42, Но=0,42, Но=0,56, Но =0,16, Но=0,10, Но= 0,14 соответственно.

В таблице 1 представлены частоты аллелей исследуемых полиморфизмов в группах больных ДМЖП, ДПП и здоровых индивидов. Статистически значимых различий в частотах аллелей полиморфизмов Val432Leu CYPJBI, G590A NAT2, С3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9 +6986G/A CYP3A5 между группами больных ДМЖП, ДПП и здоровых не

установлено (р>0,05), но наблюдается протективное накоплению аллеля 664С СУРЗА4 в группе здоровых (0,070) в отличие от больных ДМЖП (0,030) (р=0,05, (Ж=0,41, 95% С1=0,16-1,04).

Таблица 1

Распределение частот аллелей исследуемых полиморфизмов в группах

больных ДМЖП, ДПП и здоровых индивидов_

Полиморфизм Аллели Частоты аллелей х2(р)

Больные ДМЖП (п=100) Здоровые (п=150)

VaI432Leu CYP1B1 432А 0,635 0,623 0,07 (0,79)

432G 0,365 0,377

G590A NAT2 590G 0,655 0,667 0,07 (0,79)

590А 0,345 0,333

С3435Т АВСВ1 3435С 0,505 0,530 0,30 (0,58)

3435Т 0,495 0,470

А1075С CYP2C9 1075А 0,900 0,917 0,41 (0,52)

1075С 0,100 0,083

Т664С CYP3A4 664Т 0,970 0,930 3,76 (0,05)*

664С 0,030 0,070

+6986G/A CYP3A5 6986G 0,040 0,070 1,98 (0,16)

6986А 0,960 0,930

Больные ДПП (п=45) Здоровые (п=80)

VaI432Leu CYP1B1 432А 0,500 0,569 1,10 (0,29)

432G 0,500 0,431

G590A NAT2 590G 0,633 0,669 0,32 (0,57)

590А 0,367 0,331

С3435Т АВСВ1 3435С 0,611 0,563 0,56 (0,45)

3435Т 0,389 0,438

A1075C CYP2C9 1075А 0,922 0,944 0,45 (0,50)

1075С 0,078 0,078

T664C CYP3A4 664Т 0,944 0,975 1,55 (0,21)

664С 0,056 0,025

+6986G/A CYP3A5 6986G 0,067 0,050 0,30 (0,58)

6986А 0,933 0,950

\ *- статистически достоверные различия

В таблице 2 представлен анализ распределения частот генотипов исследуемых полиморфизмов в группах больных ДМЖП, ДПП и здоровых индивидов.

Таблица 2

Распределение частот генотипов исследуемых полиморфизмов между

группами больных ДМЖП, ДПП и здоровых индивидов абс.,%

Полиморфизм Частоты генотипов

Аллели Больные ДМЖП (п=100) Здоровые (п=150) х2(р)

Val432Leu CYP1B1 432АА 39 (39,0) 56 (37,2) 0,07 (0,97)

432AG 49 (49,0) 75 (50,0) 0,02 (0,88)

432GG 12 (12,0) 19(12,8) 0,02 (0,88)

G590A NAT2 590GG 48 (48,0) 69 (46,0) 0,10(0,76)

590GA 35 (35,0) 62 (41,3) 1,01 (0,31)

590АА 17(17,0) 19(12,7) 0,90 (0,34)

С3435Т АВСВ1 3435СС 28 (28,0) 40 (26,7) 0,05 (0,82)

3435СТ 45 (45,0) 79 (52,7) 1,41 (0,23)

3435ТТ 27 (27,0) 31(20,7) 1,35 (0,25)

А1075С CYP2C9 1075АА 80 (80,0) 125 (83,3) 0,45 (0,50)

1075АС 20,0 (20,0) 25 (16,7) 0,45 (0,50)

1075СС - - _

Т664С CYP3A4 664ТТ 94 (94,0) 129 (86,0) 3,99 (0,05)*

664ТС 6(6,0) 21 (14,0) 3,99 (0,05)*

664СС - - -

+6986G/A CYP3A5 6986GG - - _

6986GA 8(8,0) 21 (14,0) 2,11(0,15)

6986АА 92 (92,0) 129 (86,0) 2,11(0,15)

Больные ДПП (п=45) Здоровые (п=80)

Val432Leu CYP1B1 432АА 13 (28,9) 26 (32,5) 0,17(0,68)

432AG 19 (42,2) 39 (48,8) 0,49 (0,48)

432GG 28,9(13) 15 (18,8) 1,70(0,19)

G590A NAT2 590GG 19(42,2) 35 (43,8) 0,03 (0,87)

590GA 19 (42,2) 37 (46,3) 0,19(0,66)

590АА 7 (15,6) 8 (10,0) 0,84 (0,36)

С3435Т АВСВ1 3435СС 15 (33,3) 24 (30,0) 0,15 (0,70)

3435СТ 25 (55,6) 42 (52,5) 0,11(0,74)

3435ТТ 5(11,1) 14(17,5) 0,91 (0,34)

A1075C CYP2C9 1075АА 38 (84,4) 71 (88,8) 0,48 (0,49)

1075АС 7(15,6) 9(11,3) 0,48 (0,49)

1075СС - - -

T664C 664ТТ 40 (88,9) 76 (95,0) 1,61 (0,20)

CYP3A4 664ТС 5(11,1) 4(5,0) 1,61 (0,20)

664СС - - _

+6986G/A 6986GG - - _

CYP3A5 6986GA 6 (13,3) 8 (10,0) 0,32 (0,57)

6986АА 39 (86,7) 72 (90,0) 0,32 (0,57)

*- статистически достоверные различия

При сравнительном анализе частот генотипов исследуемых полиморфизмов между группами больных ДПП и здоровых не было установлено статистически значимых различий (р>0,05). Генотипы 664ТТ СУРЗА4 и 664ТС СУРЗА4 показали статистически значимые различия в частотах генотипов (р<0,05), с выявленным протективным накоплением в отношении риска развития ДМЖП (у?=3,99, р=0,05, 011=0,39, 95% 0=0,15-1,01).

4.0пределение вариантов ассоциаций полиморфных генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в зависимости от пола больных и частоты изучаемых ВПР СК в районах Краснодарского края.

Проанализировано влияние полиморфных вариантов генов-кандидатов на риск формирования изолированных ДМЖП и ДПП раздельно у лиц мужского и женского пола. Стратифицированный анализ по полу ассоциаций полиморфных генов ФБК у больных ДМЖП, ДПП и здоровых проводился в группах, где мальчики с ДМЖП (п=40) сравнивались с отцами (п=50), девочки с ДМЖП (п=60) - с матерями (п=100), мальчики с ДПП (п=15) сравнивались с отцами (п=35), девочки с ДПП (п=30) - с матерями (п=45).

Проведена оценка различия в частотах аллелей полиморфных вариантов генов ФБК в группе больных ДМЖП, ДПП и популяционным контролем отдельно у лиц мужского и женского пола. В ходе сравнительного стратифицированного анализа по полу частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов ФБК у больных ДМЖП и популяционного контроля статистически достоверной значимости не выявлено р>0,05.

Ввиду неравномерности распространения по территории Краснодарского края изолированных ВПР СК мультифакториального генеза, с высокой частотой зарегистрированной в Центральном и Приазовском регионах края (12,5%о и 9,46%о соответственно), по сравнению с другими регионами: Северный (5,30%о), Причерноморский (5,40%о), Южный Предгорный (6,32%о) и Восточный (3,69%о), считаем необходимым проанализировать ассоциации генов ФБК у детей из районов, находящихся на этой территории Краснодарского края. При сравнительном анализе распределения частот генотипов исследуемых полиморфизмов в группе больных ДМЖП из районов с высокой частотой ВПР СК и здоровых индивидуумов определялось 3 статистически достоверных различия. Гомозиготный генотип по вариантному аллелю 3435ТТ гена АВСВ1 ассоциировался с повышенным риском формирования ДМЖП (р<0,05, (Ж=2,28 С1=1,14-4,55), в тоже время определялась тенденция к протективному накоплению гетерозиготного генотипа 3435СТ гена АВСВ1, однако статистической значимости достигнуто не было (р>0,05, (Ж=0,53 0=0,28-1,02). Отмечено протективное накопление генотипов 664ТТ и 664ТС гена СУРЗА4 (р<0,05,011=0,25 0=0,06-1,11) (таблица 3).

Таблица 3

Распределение частот генотипов исследуемых полиморфизмов в группе больных ДМЖП из районов с высокой частотой ВПР СК и здоровых

индивидов

Полиморфизм Генотип Частоты генотипов х(р)

Больные ДМЖП (п=51) Здоровые (п=150)

Уа1432Ьеи СУР1В1 432АА 19 (37,3) 56 (37,2) 0,0001 (0,99)

432Ав 27 (52,9) 75 (50,0) 0,13 (0,72)

432вО 5 (9,8) 19(12,8) 0,30 (0,59)

в590А ЫАТ2 59000 18(35,3) 69 (46,0) 1,78 (0,18)

590вА 22(43,1) 62 (41,3) 0,05 (0,82)

590А А 11(21,6) 19 (12,7) 2,38 (0,12)

С3435Т АВСВ1 3435СС 13 (25,5) 40 (26,7) 0,03 (0,87)

3435СТ 19 (37,3) 79 (52,7) 3,62 (0,06)

3435ТТ 19(37,3) 31 (20,7) 5,60 (0,02)*

А1075С СУР2С9 1075АА 42 (82,4) 125 (83,3) 0,03 (0,87)

1075АС 9 (17,6) 25 (16,7) 0,03 (0,87)

1075СС - - -

Т664С СУРЗА4 664ТТ 49(96,1) 129 (86,0) 3,82 (0,05)*

664ТС 2(3,9) 21 (14,0) 3,82 (0,05)*

664СС - - -

+6986в/А СУРЗА5 6986вС - - -

6986вА 5 (9,8) 21 (14,0) 0,60 (0,44)

6986АА 46 (90,2) 129 (86,0) 0,60 (0,44)

*- статистически достоверные различия

Сравнительный анализ аллелей и генотипов изучаемых полиморфизмов в группах больных ВПР СК (общие ВПР СК и с ДМЖП и ДПП) из районов с низкой частотой пороков системы кровообращения и здоровых индивидов не позволил выявить статистически достоверные различия (р>0,05).

Стратифицированный анализ по полу полиморфных вариантов генов ФБК, проводившийся в группах, где мальчики с ДМЖП и ДПП сравнивались с отцами, а девочки с ДМЖП и ДПП с матерями не определил значимых ассоциаций риска развития изолированных ДМЖП и ДПП.

Полученные результаты сравнительного анализа аллелей и генотипов детей, проживающих в районах Краснодарского края с выявленной высокой, средней и низкой частотой изолированных ВПР СК мультифакториального генеза, свидетельствуют об участии отдельных полиморфных вариантов генов ФБК в формировании изолированного ДМЖП мультифакториального генеза.

5.Установление ассоциаций сочетаний полиморфных вариантов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с риском развития ДМЖПиДПП

Проанализированы 270 комбинаций генотипов 6 полиморфизмов 6 генов ФБК, которые в той или иной степени были ассоциированы с риском формирования изолированных ДМЖП и ДПП, наиболее значимые из них представлены в таблице 4.

Таблица 4

Распределение частот комбинаций генотипов генов ФБК в группах больных

ДМЖП, ДПП и здоровых индивидов (абс, %)

Комбинации генотипов Больные ДМЖП (п=100) Контроль (п=150) Критерий различия 5С2(Р) OR (95% CI)

CYP1B1 432GG х NAT2 590GA 3 (3,0) 7(4,6) 4,66(0,03)* 2,81(1,06-7,39)

CYP1B1 432АА xABCBl 3435ТТ 16 (16,0) 11(7,3) 4,68(0,03)* 2,41(1,07-5,43)

CYP2C9 1075АА х CYP3A4 664ТС 2(2,0) 13(8,7) 4,73(0,03)* 0,22(0,05-0,97)

CYP3A4 664ТТ х CYP3A5 6986АА 91(91,0) 120(80,0) 5,51(0,02)* 2,53(1,14-5,59)

ДПП (п=45) (п=80)

CYP1B1 432GG х NAT2 590GG 8(17,8) 3(3,8) 7,06(0,01)* 5,55(1,39-22,14)

NAT2 590 GG xABCBl 3435ТТ 1 (2,2) 10(12,5) 3,79(0,05)* 0,16(0,02-1,29)

*- статистически достоверные ассоциации

При стратифицированном по полу анализе ассоциаций парных сочетаний генотипов выявлены 8 статистически значимых комбинаций генов ФБК (таблица 5).

Таблица 5

Распределение частот комбинаций генотипов генов ФБК в группах больных

ДМЖП и здоровых индивидов в зависимости от пола (абс, %)

Комбинации генотипов Больные ДМЖП Контроль Критерий различия OR (95% CI)

п % п % i (Р)

Муж. (п=40) Отцы ( п=50)

CYPIB1 432АА х NAT2 590GG 12 30,0 6 11,5 4,90 0,03* 3,29(1,11-9,74)

NAT2 590 GA xABCBl 3435СТ 9 22,5 22 44,0 4,55 0.03* 0,37 (0,15-0,94)

CYP1B1 432АА х CYP2C9W15AA 11 27,5 24 48,0 3,93 0,05* 0,40 (0,17-1,00)

CYP1B1 432GG х CYP3A4 664ТТ 9 22.5 1 2,0 9,46 0,002* 14,23 (1,72-117,86)

CYP3A4 664ТТ х CYP3A5 6986АА 38 95,0 40 80,0 4,33 0,04* 4,75 (0,98-23,10)

Жен. (п=60) Матери (п= 100)

CYP1B1 432AG х NAT2 590АА 10 16,7 7 7,0 3,69 0,05* 2,66 (0,95-7,41)

CYP2C9 1075АС х CYP3A4 664ТС 4 6,7 1 1,0 3,98 0,05* 7,07 (0,77-64,83)

CYP2C9 1075АСх CYP3A569S6AA 5 8,3 20 20,0 3,87 0,05* 0,36(0,13-1,03)

*- статистически достоверные различия

При анализе парных сочетаний генотипов полиморфных генов системы ФБК при ДМЖП выявлены 3 прогностически неблагоприятные комбинации CYP1B1 432GG х jV/1 72 590GA, CYP1B1 АЪ2ААхАВСВ1 3435ТТ, CYP3A4 664ТТ х CYP3A5 6986АА (0R>1) и 1 протективная CYP2C9 1075А А х CYP3A4 664ТС (0R<1); при ДПП 1 прогностически неблагоприятная CYP1B1 432GG х NAT2 590GG (OR>l) и 1 протективная комбинация NAT2 590GG х АВСВ1 3435ТТ (OR<l) как фактор устойчивости формирования изолированного ДПП. При стратифицированном анализе по полу определены 5 сочетаний генотипов полиморфных генов системы ФБК при ДМЖП для лиц мужского пола, из них 3 прогностически неблагоприятные NAT2 590GA х АВСВ1 3435СТ, CYP1B1 432АА х CYP2C9 1075АА, CYP2C9 1075АС х CYP3A5 6986АА (OR>l) и 2 устойчивые NAT2 590GA х АВСВ1 3435СТ, CYP1B1 432АА х CYP2C9 1075АА (OR<l). Сочетания генотипов CYP1B1 432AG х NAT2 590АА, CYP2C9 1075АС х CYP3A4 664ТС при ДМЖП увеличивают риск развития порока системы кровообращения для лиц женского пола (0R>1), а сочетание генотипов CYP2C9 1075АС х CYP3A5 6986АА следует расценивать как фактор устойчивости (OR<l). Стратифицированный анализ 270 комбинаций генотипов 6 полиморфизмов 6 генов системы ФБК раздельно у лиц мужского и женского пола при ДПП не позволил выявить статистически достоверных различий (р>0,05).

Сочетания генов Val432Leu CYP1B1 х С3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9 х Т664С CYP3A4, Т664С CYP3A4 х +6986G/A CYP3A5, ассоциированные с риском формирования ДМЖП при ДПП, не определялись, а сочетание генов Val432Leu CYP1B1 х G590A NAT2 вероятно является общим для риска формирования изучаемых нозологий, а также как для лиц мужского, так и для женского пола.

6. Оценка корреляция вариантов полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с клиническими признаками ВПР СК.

Представленный раздел работы отражает статистически значимые взаимосвязи полиморфных вариантов генов ФБК с клиническими показателями ДМЖП и ДПП. С практической стороны выявление генетических маркеров, ассоциированных с клиническими проявлениями и течением ДМЖП и ДПП, необходимо для прогнозирования характера их дальнейшего течения. При проведении анализа, направленного на поиск генов ФБК, ассоциированных с клиническими особенностями формирования данных пороков ВПР СК такими как одышка в покое, цианоз кожных покровов (чаще носогубного треугольника) при крике и психоэмоциональной нагрузке, а также топографической локализации ДМЖП (таблицы 6-7).

Таблица 6

Анализ взаимосвязи полиморфизмов генов ФБК с клиническими проявлениями и топографическим расположением ДМЖП

(логистический регрессионный анализ)

Полиморфизм Одышка в покое Цианоз кожных покровов при крике и психо-эмоциоиальпой пагрузке

X2 Вальда (р) OR (95% CI) X2 Вальда (р) OR (95% CI)

Val432Leu CYPIBI 5,75(0,02)* 0,17(0,04-0,73) 0,20*10"" (1,00) 1,00(0,49-2,02)

G590A NAT2 3,74 (0,05) 0,28(0,08-1,03) 0,39(0,53) 0.73(0,27-1,97)

С3435Т АВСВ1 2,59(0.11) 0,31(0,07-1,32) 1,63(0,20) 2,08(0,67-6,62)

А1075С CYP2C9 6,32(0,01)* 0,12(0,02-0,64) 0,11(0,73) 0,8(0,22-2,90)

Т664С CYP3A4 1,96(0,16) 0,20(0,02-1,94) 0,59(0,44) 0,48(0,07-3,21)

+6986G/A CYP3A5 0,15*10"4 (1,00) 1,00(0,47-2,13) 0,19*104(1,00) 0,96(0,002-442,25)

Перимембрапозиая локализация дефекта Мышечная локализация дефекта

Val432Leu CYPIBI 4,24(0,04)* 0,27(0,08-0,95) 2,47(0,12) 0,35(0,09-1,32)

G590A NAT2 3,17(0,08) 0,39(0,14-1,11) 5,60(0,02)* 0,23(0,07-0,79)

С3435Т АВСВ1 0,05(0,83) 0.87(0,25-3,04) 4,92(0,03)* 0,20(0,05-0,85)

A1075C CYP2C9 3,71(0,05) 0,25(0,06-1,04) 0,31(0,58) 1,89(0,19-18,57)

T664C CYP3A4 4,44(0,04) 0,14(0.02-0,89) - -

+6986G/A CYP3A5 0,03(0.87) 1,44(0,02-124,02) 1,13(0,29) 0,03(0,0001-20,10)

♦-статистически значимые ассоциации

Таблица 7

Анализ взаимосвязи полиморфизмов генов ФБК с клиническими проявлениями ДПП

(логистический регрессионный анализ)

Полиморфизм Одышка в покое Цианоз кожных покровов при крике и пспхо-эмоциопальпой нагрузке

X* Вальда (Р) OR (95% CI) ¿ Вальда (р) OR (95% CI)

Val432Leu CYPIBI 2,21(0,14) 3,85(0,62-23,99) 0,01(0,94) 1,06(0,22-5,16)

G590A NAT2 1,99(0,16) 3.33(0,60-18,53) 0,06(0,80) 1,20(0,27-5,47)

С3435Т АВСВ1 2,31(0,13) 4,40(0,62-31,40) 1,41(0,24) 2,84(0,48-16,67)

А1075С CYP2C9 0,22(0.64) 1,86(0,13-26,68) 1,01(0,31) 3,63(0,27-47,96)

Т664С CYP3A4 . - - -

+6986G/A CYP3A5 0,35(0,56) 0,13(0,0002-123,10) 0,07(0,79) 1,99(0,01-326,07)

Согласно полученным результатам, полиморфизмы Val432Leu гена CYP1B1 и А1075С гена CYP2C9 статистически значимо ассоциированы с риском формирования ДМЖП на фоне одышки в покое, полиморфизм Val432Leu гена CYP1B1 ассоциирован с перимембранозной локализацией дефекта, а полиморфизмы G590A гена NAT2 и С3435Т гена АВСВХс мышечной локализацией ДМЖП. Проведенный анализ взаимосвязи

полиморфизмов генов ФБК с клиническими проявлениями ДПП не выявил статистически значимых ассоциаций.

Таким образом, исследуемые нами гены ФБК в той или иной степени показали ассоциацию с клиническими особенностями и топографической локализацией изучаемого ВПР СК.

Выводы

1. Частота рождения детей с изолированными врожденными пороками развития системы кровообращения в Краснодарском крае с 1998 по 2012 гг составляет 7,96?/óo. Наибольший удельный вес в структуре ВПР СК связан с дефектами межжелудочковой (51,8%) и предсердной (16,7%) перегородок сердца.

2. Гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков у русских жителей Краснодарского края характеризуются широким аллельным разнообразием, а их частоты сопоставимы с другими европеоидными популяциями мира.

3. Генотипы 664ТТ и 664ТС гена CYP3A4 ассоциированы с пониженным риском развития изолированного дефекта межжелудочковой перегородки сердца (СЖ=0,39, 95% С1=0,15-1,01).

4. Генетический вариант 3435ТТ гена АВСВ1 связан с риском формирования ДМЖП у детей, проживающих в районах Краснодарского края с высокой частотой врожденных пороков развития системы кровообращения.

5. Выявлено 9 парных сочетаний генотипов ФБК, ассоциированных с риском развития изолированных дефектов межжелудочковой и межпредсердной перегородок, при этом 5 сочетаний генотипов полиморфизмов Val432Leu гена CYP1B1 и G590A гена NAT2 были общими для обоих исследованных ВПР СК.

6. Полиморфизмы Va!432Leu гена CYP1B1 и А1075С гена CYP2C9 ассоциированы с клиническими проявления ДМЖП (одышка в покое). Полиморфный локус Val432Leu гена CYP1B1 связан с перимембранозной локализацией дефекта, а полиморфизмы G590A гена NAT2 и С3435Т гена АВСВ1 - с мышечной локализацией ДМЖП.

Практические рекомендации

1. В медико-генетических консультациях рекомендовать внедрение в практику генотипирование полиморфизма генов ФБК (Val432Leu CYP1B1, G590A NAT2, С3435Т АВСВ1, А1075С CYP2C9, Т664С CYP3A4, +6986G/A CYP3A5) в обследование супружеских пар при планировании беременности с целью выявления лиц, имеющих риск рождения детей с изолированными дефектами межжелудочковой или межпредсердной перегородок, для усовершенствования подхода преконцепционной профилактики.

2. Результаты исследования внедрить в образовательный процесс в рамках преподавания медицинской генетики в медицинских вузах и на факультетах повышения квалификации и постдипломной подготовки специалистов медицинского профиля для расширенного представления о молекулярно-генетических механизмах формирования изолированных дефектов межжелудочковой и межпредсердной перегородок.

Список условных сокращений

ВПР - врожденные порки развития

ВПР СК - врожденные порой! развития системы кровообращения

ДМЖП - дефект межжелудочковой перегородки

ДПП - дефект межпредсердной перегородки

ФБК - ферменты биотрансформации ксенобиотиков

АВСВ1 - Р-гликопротеин, семейство В

СУР IВ1 - цитохром Р-450, семейство В, подсемейство I

СУР2С9 - цитохром Р-4502С9

СУРЗА4 - цитохром Р-4503А4

СУРЗА5 - цитохром Р-4503А5

ИАТ2 - Ы-ацетилтрансфераза 2

Список публикованных работ по теме диссертации

1. Структура врожденных пороков развития системы кровообращения у новорожденных Краснодаркого края / К.Ю. Лазарев, ...О.П. Брайко... // Медицинская генетика, материалы: 6-го всероссийского съезда генетиков. -

2010,- С.102-103.

2. Нозологический спектр врожденных пороков развития системы кровообращения (ВПР СК) в Краснодарском крае, зарегистрированных за период 1998-2009гг. / О.П. Брайко // Материалы Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Репродуктология: новые технологии, проблемы перспективы», Белгород. - 2010 (12-15 октября). - С. 118-120.

3. Оценка сезонной зависимости частоты врожденных пороков развития системы кровообращения мультифакториального генеза у новорожденных Краснодарского края / К.Ю. Лазарев, ... О.П. Брайко // Сборник материалов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии.

- 2011 (17-19 мая). - С.206-207.

4. Оценка средовых факторов формирования врожденных пороков развития системы кровообращения мультифакториального генеза в Краснодарском крае / О.П. Брайко, ... // Сборник материалов II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии. - 2011 (17-19 мая).

- С.146-147.

5. Анализ структуры и распространенности изолированных врожденных пороков развития системы кровообращения среди новорожденных Краснодарского края (по результатам мониторинга 1998-2009 гг.) / К.Ю. Лазарев, ... О.П. Брайко, ... И Кубанский научный медицинский вестник. -

2011. - №2(125).-С.95-100.

6. Клинико-генеалогический анализ при определении этиологического фактора ВПР сердца у детей / О.П. Брайко // Материалы IV Международного молодежного медицинского конгресса «Санкт-Петербургские научные чтения — 2011» - С.237.

7. Клинико-генеалогический анализ семей, отягощенных врожденными пороками сердца / О.П. Брайко, ... // Материалы IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье населения - основа процветания России» Анапа. - 2012. - С.42-43.

8. Частота генетических полиморфизмов ферментов детоксикации ксенобиотиков у детей с врожденным изолированным дефектом межпредсердной и межжелудочковой перегородок в Краснодарском крае / О.П. Брайко, ... // Материалы Международного Форума «Молекулярная медицина - новая модель здравоохранения XXI века: технологии, экономика, образование» Санкт-Петербург. - 2013. - С.203-207.

9. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма Val432Leu гена CYP1B1 и G590A гена NAT2 у детей с изолированным дефектом межжелудочковой перегородки в Краснодарском крае / О.П. Брайко, ... И Кубанский научный медицинский вестник. - 2013. - №5(140). - С.52-55.

10. Молекулярно-генетический анализ полиморфизма Val432Leu гена CYP1B1, G590A гена NAT2 и С3435Т гена АВСВ1 у детей с изолированным дефектом предсердной перегородки в Краснодарском крае / К.Ю. Лазарев, О.П. Брайко, ... // Научные ведомости БелГУ. Серия «Медицина. Фармация» - 2013. - №18(161). Выпуск 23. - С.148-153.

11. Анализ ассоциаций полиморфизмов G590A гена NAT2 и С3435Т гена АВСВ1 у детей с изолированным дефектом межжелудочковой перегородки в Краснодарском крае / О.П. Брайко, ... // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2013. - №4. - С.15-20.

12. Разработка и внедрение системы молекулярно-генетической профилактики врожденных пороков сердца мультифактори-ального генеза / К.Ю. Лазарев, О.П. Брайко, ... И Материалы мероприятия III Молодежного медицинского форума «MedWAYS-перспективные научные направления-2014» 4-5 декабря. - 2014 - С.99-100.

Подписано в печать 26.01.2015 г. Гарнитура Тайме. Печать ризография. Бумага офсетная. Заказ № 1035. Усл. печ. л. 1,25. Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии ООО «Копи-Принт». Краснодар, ул. Красная, 176, оф. 3. т/ф 279-10-40. E-mail: copyprint@mail.ru ТК «Центр города»